BR112014014975B1 - Produto de tecido, e método para produzir uma composição de tecido - Google Patents
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Abstract
resumo produto de tecido; método para produzir uma composição de tecido; e método para tratar um local de tecido trata-se de preenchimentos de tecido. os preenchimentos de tecido podem incluir uma pluralidade de partículas de tecido formados a partir de fragmentos acelulares de matriz de tecido. os preenchimentos de tecido podem ser usados para preencher locais de tecido, como espaços vazios formados após resseção de tecido.
Description
PRODUTO DE TECIDO, E MÉTODO PARA PRODUZIR UMA COMPOSIÇÃO DE TECIDO
[001] Este pedido reivindica a prioridade sob 35 U.S.C. § 119 do Pedido Provisório n° U.S. 61/577.729, o qual foi depositado em 20 de dezembro de 2011.
[002] A presente revelação refere-se a produtos de tecido e, mais particularmente, a produtos particulados de tecido para uso como preenchimentos de tecido.
[003] Vários produtos de tecido têm sido produzidos para substituir, aumentar ou tratar defeitos de tecido. Por exemplo, para substituir ou aumentar defeitos de tecido mole, matrizes dérmicas acelulares particuladas que formam um material similar à pasta ou massa podem ser usadas. Tais produtos incluem, por exemplo, CYMETRA®, que é uma matriz de tecido acelular dérmico disponível junto à LIFECELL® Corporation (Branchburg, NJ).
[004] Apesar de adequados para certas aplicações, aprimoramentos adicionais na habilidade dos produtos de tecido para tratamento de tecido mole ou duro são desejáveis. A presente revelação descreve produtos de tecido aprimorados produzidos a partir de matrizes particuladas de tecido.
SUMÁRIO
[005] De acordo com certas modalidades, um produto de tecido é fornecido. O produto pode incluir uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco que compreendem uma dimensão mais ampla entre aproximadamente 1 mm e 5 mm. As partículas de matriz de tecido podem, cada uma, compreender uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, em que os fragmentos de matriz de tecido são formados em partículas de matriz de tecido.
[006] De acordo com certas modalidades, um método para produzir uma composição de tratamento de tecido é fornecido. O método pode incluir selecionar uma matriz de tecido e tratar a matriz de tecido para produzir fragmentos que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm. O método pode incluir adicionalmente transformar os fragmentos em uma pluralidade de partículas que têm uma dimensão mais ampla entre aproximadamente 1 mm e aproximadamente 5 mm; e tratar as partículas para unir os fragmentos entre si, formando cada partícula. Em algumas modalidades, a presente revelação inclui produtos de tecido produzidos de acordo com os métodos revelados.
[007] De acordo com certas modalidades, um método de tratar um local de tecido é fornecido. 0 método pode compreender selecionar um local de tecido e selecionar um produto de tecido, o qual compreende uma pluralidade de partículas de tecido seco, em que cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, e em que os fragmentos de matriz de tecido são unidos uns aos outros para formar as partículas de matriz de tecido. O método pode compreender adicionalmente colocar a pluralidade de partículas de tecido em ou sobre o local de tecido.
[008] De acordo com certas modalidades, um produto de tecido é fornecido. O produto de tecido pode incluir uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco que forma uma massa fluidizável que pode ser espargida em um local de tecido e irá fluir para preencher e se conformar a um local de tecido. As partículas são substancialmente esféricas e têm um raio entre aproximadamente 1 mm e 5 mm. Cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que tem um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, e os fragmentos são unidos uns aos outros para formar as partículas de matriz de tecido.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[009] A Figura 1 ilustra um processo para produzir um produto de tecido de acordo com várias modalidades.
DESCRIÇÃO DE CERTAS MODALIDADES EXEMPLIFICATIVAS
[010] Será feita agora referência em detalhes a certas modalidades exemplificativas de acordo com a presente revelação, cujos exemplos serão ilustrados nos desenhos anexos. Sempre que possível, os mesmos numerais de referência serão usados no decorrer dos desenhos para se referir a partes similares ou iguais.
[011] Neste pedido, o uso do singular inclui o plural a menos que seja especificamente declarado o contrário. Neste pedido, o uso de "ou" significa "e/ou" a menos que seja declarado o contrário. Ademais, o uso da expressão "que inclui", bem como outras formas, como "inclui" e "incluído", não é limitante. Qualquer faixa descrita no presente documento será compreendida de modo a incluir os pontos finais e todos os valores entre os pontos finais.
[012] Os cabeçalhos de seção usados no presente documento são somente para propósitos organizacionais e não devem ser interpretados como limitantes da matéria descrita.
Todos os documentos, ou porções de documentos, citados neste pedido, incluem, mas não se limitam a patentes, pedidos de patente, artigos, livros e pesquisas, e se encontram doravante expressamente incorporados em sua totalidade a título de referência para quaisquer propósitos.
[013] Conforme usado no presente documento, "produto de tecido" irá se referir a qualquer tecido humano ou animal que contenha proteínas de matriz extracelular. "Produtos de tecido" podem incluir matrizes de tecido intacto, matrizes de tecido acelulares ou parcialmente descelurizados, matrizes de tecido descelurizado que tenham sido repopuladas com células exógenas e/ou tecidos celulares que tenham sido processados para mudar a orientação de pelo menos algumas das fibras de colágeno dentro da matriz extracelular de tecido.
[014] Vários produtos de tecido estão disponíveis para tratamento de tecidos duros e moles. Tais produtos de tecido podem incluir tecidos processados, os quais tenham sido tratados para remover alguns ou todos os componentes e/ou outros materiais celulares (por exemplo, antígenos e lipídios). Tais produtos de tecido podem ser usados para tratamento, reparo, regeneração e/ou aumento de uma variedade de diferentes tecidos. Por exemplo, matrizes de tecido acelular podem ser usadas para substituir tecido mole perdido ou danificado devido a, por exemplo, cirurgia, trauma, doença e/ou atrofia.
[015] Matrizes de tecido atuais ou outros andaimes de tecido ou materiais de substituição (por exemplo, colágeno processado ou materiais sintéticos) estão disponíveis em uma variedade de formas diferentes. Por exemplo, STRATTICE™ e ALLODERM® (LIFECELL® Corporation, Branchburg, NJ) são dois produtos de matrizes acelulares dérmicas que são vendidos como folhas. Além disso, CYMETRA® (também da LIFECELL®) é a matriz dérmica acelular seca particulada, a qual é produzida ao criofraturar dermes acelulares. Cada um desses materiais pode ser usado para tratar vários locais anatômicos. STRATTICE™ e ALLODERM® podem ser usados para aumento de tecido mole, por exemplo, para tratar defeitos de parede abdominal; e CYMETRA® pode ser injetado para aumento de tecido mole.
[016] Apesar de algumas matrizes atualmente disponíveis de tecido são adequadas para tratamento de certos locais anatômicos, tais materiais podem não ser bem adequados para algumas aplicações. Por exemplo, ao tratar defeitos de tecido de tamanho e geometria variáveis, por exemplo, após excisão cirúrgica de tecido doente, folhas podem não ser bem adequadas para permitir completo preenchimento de um local de tecido. Além disso, materiais particulados podem ser acumulados ou colocados em um local de tecido (por exemplo, na forma de uma pasta ou massa), mas tais materiais podem não fluir adequadamente para preencher pequenos defeitos, e podem não manter porosidade ou espaço suficiente para rápida infiltração celular e formação de estruturas vasculares. Em conformidade, a presente revelação fornece produtos de tecido que podem ser usados para preencher defeitos de tecido que têm geometrias variáveis e/ou irregulares. Além disso, os produtos de tecido da presente revelação podem fornecer configurações adequadas para permitir ingresso celular e formação vascular.
[017] Em várias modalidades, um produto de tecido é fornecido. 0 produto de tecido pode incluir uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco. As partículas podem ser formadas de fragmentos de tecido que são unidos uns aos outros para produzir o tamanho e formato desejado de partícula. Em várias modalidades, as partículas compreendem uma dimensão mais longa possível entre aproximadamente 1 mm e 5 mm e os fragmentos de matriz de tecido que formam as partículas compreendem um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm.
[018] Em várias modalidades, um método para produzir uma composição de tratamento de tecido é fornecido. O método pode incluir selecionar uma matriz de tecido e tratar a matriz de tecido para produzir fragmentos que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm. O método pode compreender adicionalmente formar os fragmentos em uma pluralidade de partículas que tem uma dimensão mais longa possível entre aproximadamente 1 mm e aproximadamente 5 mm.
[019] Em várias modalidades, métodos para tratar um local de tecido são fornecidos. Os métodos podem compreender selecionar um local de tecido e selecionar um produto de tecido que compreenda uma pluralidade de partículas de tecido seco, em que cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido, que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, e em que os fragmentos de matriz de tecido são unidos uns aos outros para formar as partículas de matriz de tecido; e colocar a pluralidade de partículas de tecido em ou no local de tecido.
[020] Em várias modalidades, um produto de tecido é fornecido. O produto de tecido pode compreender uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco que forma uma massa fluidizável que pode ser espargida em um local de tecido e irá fluir para preencher e conformar ao local de tecido. As partículas são substancialmente esféricas e têm um raio entre aproximadamente 1 mm e 5 mm. Cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que tem um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, em que os fragmentos de matriz de tecido são unidos uns aos outros para formar as partículas de matriz de tecido.
[021] Em certas modalidades, os produtos de tecido produzidos, conforme descrito no presente documento, fornecem propriedades aprimoradas quando implantados ou durante armazenamento. Por exemplo, os produtos descritos no presente documento podem ser menos suscetíveis a danos causados durante congelamento do que outras matrizes acelulares de tecido. Além disso, as matrizes podem ter uma habilidade aprimorada para permitir ingresso celular e vascularização.
[022] A Figura 1 ilustra um processo para produzir um produto de tecido de acordo com várias modalidades. Conforme mostrado na etapa 101, o processo começa com a seleção de uma matriz de tecido 100. Matrizes adequadas de tecido são discutidas adicionalmente abaixo, mas as matrizes de tecido podem incluir qualquer matriz de tecido substancialmente acelular produzida a partir de tecido humano ou animal, que retêm a habilidade de sustentar ingresso celular e regeneração de tecido sem inflamação excessiva. Certas matrizes de tecido exemplificativas que podem ser usadas incluem STRATTICE™ e ALLODERM® (LIFECELL® Corporation, Branchburg, NJ) , que são uma matriz dérmica acelular suína e uma humana, respectivamente. Entretanto, outras matrizes de tecido adequadas podem ser usadas, o que inclui, por exemplo, submucosa de intestino delgado. Além disso, as matrizes de tecido podem incluir tecidos intactos (não descelurizados) e/ou tecidos que tenham sido particularmente descelurizados e/ou populados com células exógenas.
[023] A seguir, conforme mostrado na etapa 111, a matriz 100 é processada para produzir fragmentos 110. Os fragmentos de tecido 110 podem ser formados com o uso de uma faixa de tamanhos e diferentes morfologias. Por exemplo, em algumas modalidades, os fragmentos de tecido 110 estão na forma de pequenos filamentos ou fibras de matriz de tecido que tenham sido tratados para produzir uma distribuição de tamanho e/ou formato. Em várias modalidades, os filamentos ou fibras têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, entre aproximadamente 50 pm e 200 pm, entre aproximadamente 50 pm e 300 pm, ou quaisquer valores entre esses. Em certas modalidades, os filamentos são de aproximadamente 40 mícrons X 140 mícrons a 100 mícrons por 350 mícrons.
[024] Os fragmentos de tecido 110 podem ser produzidos com o uso de uma variedade de processos. Por exemplo, qualquer processo de corte, trituração, moagem, mistura, cisalhamento adequado ou outro processo mecânico pode ser usado, desde que produza o tamanho e formato desejado e não cause danos ou mudança inadequados à matriz de tecido. Em certas modalidades, os fragmentos de tecido 110 são processados com o uso de um moinho como um moinho de alimentos SYMPAK® ou um Moinho Atritor QUADRO (Quadro, Canada). Em algumas modalidades, a matriz de tecido 100 é cortada em pequenos pedaços (por exemplo, 4 cm x 4 cm) e, então, É moída. Além disso, a matriz pode ser misturada brevemente em uma solução (por exemplo, PBS) antes da moagem.
[025] Em alguns casos, as matrizes de tecido 100 podem ser processadas para produzir os fragmentos 110 quando molhadas ou submersas em um líquido. Por exemplo, as matrizes de tecido 100 podem ser moídas ou de outra forma processadas quando submersas em um tampão como PBS ou qualquer outro tampão adequado. Ademais, após processamento, o tampão pode ser pelo menos parcialmente removido ao centrifugar ou filtrar para remover uma parte ou o todo do componente líquido. Por exemplo, um protocolo de centrifugação adequado pode incluir centrifugar a 4.500 rpm por aproximadamente 60 minutos.
[026] Após processamento para produzir fragmentos de tecido 110, grupos dos fragmentos 120 são formados para produzir partículas 120 que tenham um formato desejado, conforme mostrado na Etapa 121. Os formatos e tamanhos específicos das partículas 120 podem variar com base no local destinado de implantação, para controlar o espaço entre as partículas para fornecer canais para ingresso celular e vascular, ou para controlar a habilidade das partículas de fluir para dentro de um local desejado de tratamento. As partículas de tecido 120 podem ser formadas com o uso de uma variedade processos de moldagem ou formação. Por exemplo, os fragmentos 110 podem ser colocados em um molde e/ou comprimidos, enrolados em um formato desejado, ou de outra forma manualmente manipulados para produzir o formato desejado.
[027] Em algumas modalidades, as partículas podem ser formadas por imersão em um líquido frio. Por exemplo, fragmentos que contenham um tampão, como PBS, podem ser extrudados a partir de uma seringa e lentamente soltos em nitrogênio líquido. 0 material quando solto em nitrogênio líquido irá formar pequenas partículas, e as dimensões relativas das partículas podem ser controladas ao controlar a velocidade de extrusão e teor de água dos materiais.
[028] Em alguns casos, após extrusão, os materiais podem ser adicionalmente processados para produzir um formato e/ou estrutura desejados. Por exemplo, em alguns casos, os materiais congelados são colocados em um dispositivo de mistura, como um revirador. Um revirador é um anexo de cozimento de um misturador, que age como um tambor de pedras ou um misturador de cimento; o mesmo gira a uma dada velocidade e vira quaisquer objetos que estejam dentro para atingir um revestimento de qualquer pó ou líquido que seja adicionado. Entretanto, outros dispositivos de mistura similares podem ser usados. Após colocação no dispositivo de mistura, filamentos secos adicionais, produzidos conforme discutido acima, podem ser adicionados ao dispositivo de mistura (por exemplo, a aproximadamente uma razão de 1:1 de partículas e filamentos secos) . Os materiais com ou sem os filamentos secos adicionais podem ser processados no revirador ou em um dispositivo de mistura similar para produzir um formato mais esférico, e/ou mudar o tamanho das partículas. Opcionalmente, as partículas podem ser pelo menos parcialmente secas enquanto no revirador. Por exemplo, as partículas congeladas no dispositivo de mistura podem ser expostas a baixos níveis de ar quente (por exemplo, a aproximadamente 4 8 °C com uma velocidade que não sopre as partículas para fora do dispositivo de processamento). Conforme as partículas no dispositivo de mistura são lentamente aquecidas e secas, fragmentos de tecido acionais na forma de pó seco podem ser adicionados para manter as partículas revestidas. Adicionar o pó seco, dessa forma, pode ajudar em puxar umidade residual para a superfície das partículas para secar o interior. Opcionalmente, as partículas podem ser adicionalmente secas dentro do dispositivo de mistura para remover mais umidade.
[029] Uma variedade de formatos pode ser usada para as partículas de tecido 120. Por exemplo, as partículas de tecido 120 podem ser formadas em formatos substancialmente esféricos ou oblongos (por exemplo, ovoide), em cubos, retângulos, em tubos, em pirâmides, ou em qualquer outro formato desejado. Em algumas modalidades, o formato é selecionado para controlar a fluidez quando implantado. Por exemplo, formatos esféricos podem ser selecionados para permitir um alto grau de fluidez. Alternativamente, formatos mais oblongos podem ser selecionados para permitir preenchimento de um espaço enquanto evitam migração para fora de uma localização desejada. Além disso, o formato específico pode ser selecionado para controlar o espaço entre as partículas. Por exemplo, um formato e tamanho esféricos podem ser selecionados para produzir certa quantidade de porosidade para permitir ingresso celular e/ou formação de estruturas vasculares ou extracelulares.
[030] Além disso, o tamanho das partículas pode ser variado com base na aplicação desejada. Por exemplo, as partículas podem ter uma dimensão mais ampla entre aproximadamente 1 mm e aproximadamente 5 mm. Portanto, se as partículas são esféricas, as partículas irão ter um diâmetro entre aproximadamente 1 mm e 5 mm, e se as partículas são ovoides, as partículas irão ter um longo eixo geométrico com um comprimento entre aproximadamente 1 mm e 5 mm.
[031] Em várias modalidades, as partículas são processadas de forma que os fragmentos que constituem as partículas sejam unidos uns aos outros para formar estruturas estáveis, conforme mostrado na Etapa 131. Em certas modalidades, os fragmentos são unidos sem o uso de quantidades substanciais de ligante ou adesivos. Além disso, em algumas modalidades, os fragmentos são secos com o uso de um processo que acredita-se unir os fragmentos sem reticulação significativa. Por exemplo, em alguns casos, os fragmentos podem ter extremidades esfiadas que engatem uma com a outra. Ademais, em algumas modalidades, os fragmentos pode se ligar um ao outro por ligação não covalente. Conforme discutido em outro lugar, as partículas podem ser secas com o uso de um processo como secagem convectiva, e tais processos podem produzir partículas que têm fragmentos que são unidos uns aos outros.
[032] Em algumas modalidades, os fragmentos são unidos uns aos outros por reticulação. Reticulação pode ser atingida com o uso de uma quantidade de processos como reticulação desidrotérmica, exposição à luz UV, e/ou reticulação química. Em algumas modalidades, um processo de reticulação desidrotérmica é usado para permitir reticulação enquanto simultaneamente seca as partículas. Além disso, com o uso de qualquer um dos processos de reticulação, as partículas podem ser adicionalmente secas (por exemplo, por criodessecação ou secagem a ar) para remover umidade adicional.
[033] Em várias modalidades, os produtos de tecido podem ser selecionados para ter certas propriedades que facilitam implante e preenchimento de tecido e/ou regeneração. Por exemplo, em certas modalidades, as partículas de tecido são secas antes do implante. As partículas secas podem formar uma massa fluidizável que irá preencher um vazio ou bolso em um local de tecido. As partículas de tecido podem ser secas por criodessecação e/ou concomitantemente com um processo de reticulação desidrotérmica. Além disso, as partículas podem ser selecionadas de forma que intumesçam quando em contato com um ambiente aquoso, já que pode estar presente em um local de tecido. Sendo assim, as partículas podem se expandir quando implantadas para preencher um local de tecido selecionado.
[034] Em algumas modalidades, as partículas são secas por aquecimento convectivo. Por exemplo, partículas congeladas podem ser colocadas em um secador convectivo (por exemplo, HARVEST Brand Kitchen Convection Dryer). A secagem pode ser executada a aproximadamente 45 °C. Entretanto, temperaturas mais baixas ou mais altas podem ser usadas, desde que as temperaturas que causam desnaturação inaceitável ou outro dano de tecido não sejam usadas. Além disso, deve ser notado que, mesmo quando seco parcialmente ou em sua maioria, conforme descrito acima, com o uso de um revirador, as partículas podem ser adicionalmente secas para remover umidade em excesso.
[035] Após secagem, as partículas são empacotadas e esterilizadas para formar um produto final 140, conforme mostrado na Etapa 141. 0 produto pode ser embalado em uma variedade de receptores médicos conhecidos e pode ser esterilizado com o uso de processos convencionais, desde que esses processos não danifiquem o produto (por exemplo, por reticulação excessiva) de uma maneira inaceitável. Em algumas modalidades, o produto pode ser embalado em bolsas com separação folha a folha e irradiado. Em algumas modalidades, o produto pode ser irradiado com uma radiação por feixe de elétrons. Doses adequadas de feixes de elétrons podem incluir uma faixa de 15 a 22 kGy ou faixas dentro disso.
[036] Os produtos de tecido da presente revelação podem ser usados para tratar uma variedade de diferentes locais de tecido mole ou tecido duro. Por exemplo, os produtos podem ser usados para substituir, reparar, regenerar ou aumentar tecido perdido ou destruído devido à cirurgia, trauma e/ou qualquer processo patológico. Em algumas modalidades, os produtos de tecido podem ser implantados em um local de tecido mole como um local de lumpectomia. Em outras modalidades, os produtos podem ser usados para tratar ou aumentar tecido ósseo, muscular e subcutâneo e/ou tecido adiposo.
[037] Em certas modalidades, uma pressão interna negativa pode ser aplicada dentro do produto de tecido. Em certas modalidades, uma pressão negativa pode servir para atrair células a partir de tecido circundante para o produto de tecido acelular implantado, o que aumenta a taxa na qual células nativas migram para dentro do produto de tecido e acentua a velocidade e/ou eficácia geral de aproximação de tecido.
[038] Em certas modalidades exemplificativas, uma pressão negativa interna é entregue à matriz acelular de tecido por um dispositivo de terapia de pressão reduzida. 0 dispositivo de terapia de pressão reduzida pode incluir uma bomba conectada de forma fluida, por exemplo, através de uma passagem de fluido ou tubagem, até a matriz de tecido acelular, e o qual entrega pressão reduzida ou negativa à matriz de tecido acelular. Uma variedade de dispositivos de terapia de pressão reduzida pode ser usada. Por exemplo, dispositivos de terapia de pressão reduzida adequados incluem dispositivos de terapia V.A.C.® produzidos por KCI (San Antonio, Texas).
MATRIZES DE TECIDO ACELULARES
[039] O termo "matriz de tecido acelular", conforme usado no presente documento, se refere de forma geral a qualquer matriz de tecido que seja substancialmente livre de células e/ou componentes celulares. Pele, partes de pele (por exemplo, derme) e outros tecidos, como vasos sanguíneos, válvulas cardíacas, fáscia, cartilagem, osso e tecido conjuntivo de nervo, podem ser usados para criar matrizes acelulares dentro do escopo da presente revelação. Matrizes de tecido acelulares podem ser testadas ou avaliadas para determinar se são substancialmente livres de célula e/ou componentes celulares de diversas formas. Por exemplo, tecidos processados podem ser inspecionados com microscopia ótica para determinar se há permanência de células (vivas ou mortas) e/ou componentes celulares. Além disso, certos ensaios podem ser usados para identificar a presença de células ou componentes celulares. Por exemplo, ensaios de DNA ou de outro ácido nucleico podem ser usados para quantificar materiais nucleares remanescentes dentro das matrizes de tecido. Geralmente, a ausência de DNA ou outros ácidos nucleicos será indicativa de descelurização (isto é, remoção de células e/ou componentes celulares) completa. Finalmente, outros ensaios que identifiquem componentes específicos por célula (por exemplo, antígenos de superfície) podem ser usados para determinar se as matrizes de tecido são acelulares.
[040] Em geral, as etapas envolvidas na produção de uma matriz de tecido acelular incluem coletar o tecido a partir de um doador (por exemplo, um cadáver humano ou fonte animal) e remover células sob condições que preservem a função biológica e a função estrutural. Em certas modalidades, o processo inclui um tratamento químico para estabilizar o tecido e evitar a degradação estrutural bioquímica junto com, ou antes da, remoção de célula. Em várias modalidades, a solução estabilizante detém e evita degradação osmótica, hipóxica, autolítica e proteolítica, protege contra contaminação microbiana e reduz dano mecânico que pode ocorrer com tecidos que contêm, por exemplo, componentes de músculo liso (por exemplo, vasos sanguíneos). A solução estabilizante pode conter um tampão apropriado, um ou mais antioxidantes, um ou mais agentes oncóticos, um ou mais antibióticos, um ou mais inibidores de protease, e/ou um ou mais relaxantes de músculo liso.
[041] O tecido é então colocado em uma solução de descelurização para remover células viáveis (por exemplo, células epiteliais, células endoteliais, células de músculo liso e fibroblastos) a partir da matriz estrutural, sem danificar a integridade biológica e estrutural da matriz de colágeno. A solução de descelurização pode conter um tampão apropriado, sal, um antibiótico, um ou mais detergentes (por exemplo, TRITON X-100™, deoxicolato de sódio, polioxietileno (20) monooleato de sorbitano), um ou mais agentes para evitar reticulação, um ou mais inibidores de protease e/ou uma ou mais enzimas. Em algumas modalidades, a solução de descelurização compreende 1% de TRITON X-100™ em meio RPMI com Gentamicina e EDTA 25 mM (ácido etilenodiaminotetraacético). Em algumas modalidades, o tecido é incubado na solução de descelurização durante a noite a 37 °C com agitação suave a 90 rpm. Em certas modalidades, detergentes adicionais podem ser usados para remover gordura a partir da amostra de tecido. Por exemplo, em algumas modalidades, 2% de deoxicolato de sódio é adicionado à solução de descelurização.
[042] Após o processo de descelurização, a amostra de tecido é totalmente lavada com salina. Em algumas modalidades exemplificativas, por exemplo, quando material xenogênico é usado, o tecido descelurizado é, então, tratado durante a noite em temperatura ambiente com uma solução desoxiribonuclease (DNase). Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tratada com uma solução de DNase preparada em tampão de DNase (HEPES 20 mM (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazineetanosulfônico) , CaCl2 20 mM e MgCl2 20 mM) . Opcionalmente, uma solução antibiótica (por exemplo, Gentamicina) pode ser adicionada à solução de DNase. Qualquer tampão adequado pode ser usado, desde que o tampão forneça atividade de DNase adequada.
[043] Embora uma matriz de tecido acelular possa ser feita a partir de um ou mais indivíduos da mesma espécie como o receptor de enxerto de matriz de tecido acelular, esse não é necessariamente o caso. Portanto, por exemplo, uma matriz de tecido acelular pode ser feita a partir de tecido suíno e implantada em um paciente humano. Espécies que podem servir como receptores de matriz de tecido acelular e como doares de tecidos ou órgãos para a produção da matriz de tecido acelular incluem, sem limitação, mamíferos, como humanos, primatas não humanos (por exemplo, macacos, babuínos ou chimpanzés), porcos, vacas, cavalos, cabras, ovelhas, cães, gatos, coelhos, porquinhos da índia, gerbos, hamsters, ratos ou camundongos.
[044] A eliminação de epítopos α-gal a partir de material que contém colágeno pode diminuir a resposta imune contra o material que contêm colágeno. O epítopo a-gal é demonstrado em mamíferos não primatas e em macacos do Novo Mundo (macacos da América do Sul) , bem como em macromoléculas como proteoglicanas dos componentes extracelulares. U. Galili et al., J. Biol. Chem. 263: 17.755 (1988). Esse epítopo está ausente em primatas do Velho Mundo (macacos da Ásia e África e hominóideos) e em humanos, entretanto. Id. Anticorpos anti-gal são produzidos em humanos e primatas como resultado de uma resposta imune a estruturas de carboidrato de epítopo a-gal ou bactérias gastrointestinais. U. Galili et al., Infect. Immun. 56: 1.730 (1988); R. M. Hamadeh et al. , J. Clin. Invest. 89: 1.223 (1992).
[045] Já que mamíferos não primatas (por exemplo, porcos) produzem epítopos α-gal, o xenotransplante de material que contêm colágeno, desses mamíferos para primatas, comumente resulta em rejeição, nos primatas, devido à ligação anti-Gal a esses epítopos no material que contêm colágeno. Os resultados das ligações na destruição do material que contêm colágeno por fixação complementar e por citotoxicidade mediada por anticorpo. U. Galili et al., Immunology Today 14: 480 (1993); M. Sandrin et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 11391 (1993); H. Good et al. , Transplant. Proc. 24: 559 (1992); B. H. Collins et al. , J. Immunol. 154: 5.500 (1995). Ademais, o xenotransplante resulta em ativação forte do sistema imune para produzir quantidades aumentadas de anticorpos anti-gal de alta afinidade. Consequentemente, em algumas modalidades, quando animais que produzem epitopos α-gal são usados como fonte de tecido, a eliminação substancial de epitopos α-gal a partir de células e a partir de componentes extracelulares do material que contêm colágeno, e a prevenção de reexpressão de epitopos α-gal celulares, podem diminuir a resposta imune contra o material que contêm colágeno associado ao anticorpo anti-gal que se liga a epitopos a-gal.
[046] Para remover epitopos α-gal, após lavar o tecido totalmente com solução salina para remover a solução de DNase, a amostra de tecido pode ser submetida a um ou mais tratamentos enzimáticos para remover certos antigenos imunogênicos, caso presentes na amostra. Em algumas modalidades, a amostra de tecido pode ser tratada com uma enzima α-galactosidase para eliminar epitopos α-gal, caso presentes no tecido. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tratada com α-galactosidase em uma concentração de 300 U/L preparada em um tampão de fosfato 100 mM a um pH 6,0. Em outras modalidades, a concentração de α-galactosidase é aumentada para 400 U/L para remoção adequada de epitopos a-gal a partir do tecido coletado. Qualquer concentração enzimática e tampão adequados podem ser usados, desde que a remoção suficiente de antígenos seja atingida.
[047] Alternativamente, ao invés de tratar o tecido com enzimas, animais que tenham sido geneticamente modificados para não ter um ou mais epítopos antigênicos podem ser selecionados como a fonte de tecido. Por exemplo, animais (por exemplo, porcos) que tenham sido geneticamente modificados para não ter a porção terminal α-galactose podem ser selecionados como a fonte de tecido. Para descrições de animais apropriados, ver Pedido Copendente de número de série U.S. 10/896.594 e a Patente n2 U.S. 6.166.288, cujas revelações se encontram incorporadas em sua totalidade a título de referência no presente documento. Além disso, certos métodos exemplificativos de processar tecidos para produzir matrizes acelulares com ou sem quantidades reduzidas ou falta de porções alfa-1,3-galactose, são descritos em Xu, Hui. et al., "A Porcine-Derived Acellular Dermal Scaffold that Supports Soft Tissue Regeneration: Removal of Terminal Galactose-a-(1,3)-Galactose and Retention of Matrix Structure," Tissue Engineering, Volume 15, 1 a 13 (2009), a qual se encontra incorporada em sua totalidade a título de referência.
[048] Após a matriz de tecido acelular ser formada, células viáveis histocompatíveis podem opcionalmente ser semeadas na matriz de tecido acelular para produzir um enxerto que pode ser adicionalmente remodelado pelo hospedeiro. Em algumas modalidades, células viáveis histocompatíveis podem ser adicionadas às matrizes por técnicas padrão de cocultivo in vitro de célula antes do transplante, ou por repopulação in vivo posterior ao transplante. Repopulação in vivo pode se dar pela migração de células do próprio receptor para dentro da matriz de tecido acelular, ou por infusão ou injeção de células obtidas a partir do receptor, ou por células histocompatíveis de outro doador para dentro da matriz de tecido acelular in situ. Vários tipos de célula podem ser usados, o que inclui células-tronco embrionárias, células-tronco de adultos (por exemplo, células tronco mesenquimais) e/ou células neuronais. Em várias modalidades, as células podem ser diretamente aplicadas a uma porção interna da matriz de tecido acelular imediatamente antes ou após o implante. Em certas modalidades, as células podem ser colocadas dentro da matriz de tecido acelular para serem implantadas e podem ser cultivadas antes do implante.
REIVINDICAÇÕES
Claims (26)
1. PRODUTO DE TECIDO, caracterizado por compreender uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco que compreendem uma dimensão mais ampla entre aproximadamente 1 mm e 5 mm, em que cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, e em que os fragmentos de matriz de tecido são transformados nas partículas de matriz de tecido.
2. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por transformar os fragmentos em partículas incluir unir os fragmentos sem uso de um ligante ou adesivo.
3. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelos fragmentos serem unidos por secagem convectiva.
4. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelos fragmentos de tecido serem reticulados entre si.
5. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por cada uma das partículas de tecido ter um comprimento entre aproximadamente 2 mm e 3 mm.
6. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com uma das reivindicações 3 ou 4, caracterizado pelos fragmentos de tecido serem reticulados entre si com o uso de um processo de reticulação desidrotérmica.
7. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelas partículas serem substancialmente esféricas.
8. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelas partículas serem fluidizáveis quando secas.
9. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelos fragmentos de tecido serem filamentos alongados de matriz de tecido.
10. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelas partículas de matriz de tecido serem uma matriz de tecido dérmico.
11. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelas partículas de matriz de tecido serem partículas suínas de matriz de tecido.
12. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pela matriz de tecido ser uma matriz de tecido acelular.
13. MÉTODO PARA PRODUZIR UMA COMPOSIÇÃO DE TECIDO, caracterizado por compreender: selecionar uma matriz de tecido; tratar a matriz de tecido para produzir fragmentos que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm; transformar os fragmentos em partículas que têm uma dimensão mais ampla entre aproximadamente 1 mm e aproximadamente 5 mm.
14. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por compreender adicionalmente secar as partículas para formar uma pluralidade de partículas secas.
15. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por secar as partículas incluir submeter as partículas a um processo de secagem convectiva.
16. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado por incluir adicionalmente tratar as partículas com um processo de tratamento desidrotérmico.
17. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 16, caracterizado por transformar os fragmentos em uma pluralidade de partículas incluir comprimir grupos dos fragmentos.
18. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 16, caracterizado por transformar os fragmentos em uma pluralidade de partículas incluir colocar pequenos grupos dos fragmentos em um ambiente frio para congelar os grupos.
19. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por colocar pequenos grupos dos fragmentos em um ambiente frio para congelar os grupos incluir extrudar os grupos pequenos em um líquido criogênico.
20. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 19, caracterizado pela pluralidade de partículas incluir partículas substancialmente esféricas.
21. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 20, caracterizado pela matriz de tecido ser uma matriz de tecido dérmico.
22. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 21, caracterizado pela matriz de tecido ser uma matriz de tecido suíno.
23. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 22, caracterizado pela matriz de tecido ser uma matriz de tecido acelular.
24. PRODUTO DE TECIDO, caracterizado por compreender uma pluralidade de partículas de matriz de tecido seco que forma uma massa fluidizável que pode ser espargida em um local de tecido e irá fluir para preencher e se conformar ao local de tecido, em que as partículas são substancialmente esféricas e têm um raio entre aproximadamente 1 mm e 5 mm, em que cada uma das partículas de matriz de tecido compreende uma pluralidade de fragmentos de matriz de tecido que têm um comprimento entre aproximadamente 5 pm e 300 pm, em que os fragmentos de matriz de tecido são unidos uns aos outros para formar as partículas de matriz de tecido.
25. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelas partículas de matriz de tecido incluírem partículas de matriz de tecido dérmico.
26. PRODUTO DE TECIDO, de acordo com uma das reivindicações 24 ou 25, caracterizado pelas partículas de matriz de tecido incluírem partículas suínas de matriz de tecido.
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B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 18/12/2012, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. (CO) 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 18/12/2012, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS |
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B21F | Lapse acc. art. 78, item iv - on non-payment of the annual fees in time |
Free format text: REFERENTE A 11A ANUIDADE. |
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B24J | Lapse because of non-payment of annual fees (definitively: art 78 iv lpi, resolution 113/2013 art. 12) |
Free format text: EM VIRTUDE DA EXTINCAO PUBLICADA NA RPI 2753 DE 10-10-2023 E CONSIDERANDO AUSENCIA DE MANIFESTACAO DENTRO DOS PRAZOS LEGAIS, INFORMO QUE CABE SER MANTIDA A EXTINCAO DA PATENTE E SEUS CERTIFICADOS, CONFORME O DISPOSTO NO ARTIGO 12, DA RESOLUCAO 113/2013. |