BR112013020359B1

BR112013020359B1 - colágeno gelificável e meios para a sua provisão

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Publication number: BR112013020359B1
Application number: BR112013020359A
Authority: BR
Inventors: Graeve Thomas
Original assignee: Amedrix Gmbh
Priority date: 2011-02-09
Filing date: 2012-01-26
Publication date: 2019-09-10
Also published as: BR112013020359B8; ES2626206T3; JP2014509229A; WO2012107174A1; EP2673013A1; CA2826628A1; JP5805791B2; AU2012216199A1; BR112013020359A2; RU2613716C2; RU2013141169A; CY1118912T1; CA2826628C; EP2673013B1; DE102011011092A1; CL2013002332A1; AU2012216199B2; US20130324473A1; PT2673013T

Abstract

colágeno gelificável e meios para a sua provisão a presente invenção se refere a produção e provisão de uma composição de colágeno gelificável que forma imediatamente uma matriz de colágeno, assim com a meios para a preparação e uso dos mesmos, em particular, como parte de um tratamento terapêutico.

Description

A presente invenção se refere à preparação e fornecimento de uma composição de colágeno gelificável que instantaneamente forma uma matriz de colágeno, e meios para a preparação e uso do mesmo, em particular, como parte de um tratamento terapêutico.

Em conjunto com doenças degenerativas ou traumáticas das articulações do corpo humano ou animal, defeitos da cartilagem ocorrem na forma de ausente por ter sido desgastado material cartilaginoso

A cartilagem articular lesada apresenta uma capacidade muito limitada de regeneração espontânea. O tratamento requer o preenchimento do defeito de cartilagem para substituir o material cartilaginoso que falta. Isto é alcançado por meio de medidas cirúrgicas invasivas. Um conhecido tratamento de defeito da cartilagem é o transplante de células formadoras de cartilagem tais como condrócitos, especialmente por condrócitos autólogos, na cartilagem defeituosa com o propósito de desencadear a formação de nova cartilagem hialina (transplantes de cartilagem). Outros processos, tais como processos isentos de células, empregam determinados materiais e composições de materiais que podem servir como cartilagem artificial (implante cartilaginoso). Os implantes cartilaginosos conhecidos formam uma matriz ou estrutura, para a qual podem migrar células cartilaginosas do tecido cartilaginoso circundante intacto, para assim produzir uma nova estrutura cartilaginosa.

Conhece-se de DE 10 026 789 Al uma matriz biológica à base de colágeno e métodos para a preparação do mesmo. Uma matriz biológica de colágeno é preparada a partir do colágeno que foi extraído de tendões de caudas de ratos. Para tal fim, a solução de colágeno ácida obtida depois da extração é neutralizada com solução tampão contendo soro fria, e é moldada, eventualmente na presença de células, para formar um gel de colágeno, que mais tarde é gelificado ou reticulado, isto é endurecido, para formar uma matriz biológica contendo colágeno, que pode ser obtida desta maneira como um implante de colágeno isento de células pronto para uso ou um transplante de colágeno contendo células com condrócitos incrustados.

Em processos terapêuticos cirúrgicos conhecidos os defeitos de cartilagem são inicialmente dissecados, com qualquer tecido cartilaginoso danificado sendo seletivamente retirado no processo. Fica assim produzida uma cavidade, que então deve ser preenchida com precisão com um implante cartilaginoso. Um contato íntimo entre o β

s_r implante cartilaginoso e o tecido circundante permite a infiltração de células cartilaginosas, permitindo, assim a regeneração da cartilagem. Para que isso ocorra, os implantes cartilaginosos conhecidos que são providos

prontos para	uso, durante a operação, devem ainda ser
adequadamente	recortados para serem ajustados à cavidade
preparatória.	Em particular, as bordas do implante
cartilaginoso	devem estar tão engatadas com as bordas da

cavidade, que possa ser obtida uma ancoragem estável do implante na cartilagem da articulação. O ajuste do implante pronto para uso à cavidade é complexo e demorado. Como resultado destas medidas complexas, o risco de contaminação ou de complicações durante a operação é aumentado. Além disso, não é possível com essas medidas alcançar um ajuste completo com esforço cirúrgico mínimo, ocorrendo o risco de complicações pós-operatórias ou então o insucesso da operação. Os processos e recursos até agora empregados para a terapia de defeitos da cartilagem precisam, portanto, de melhoramentos.

A presente invenção tem por objetivo fornecer processos e meios para a preparação de uma matriz à base de colágeno que podem ser empregados, por exemplo, para o tratamento de defeitos da cartilagem em um corpo humano ou animal, podendo através deles evitar os inconvenientes

conhecidos do estado da técnica.

Para este propósito, a presente invenção propõe um processo por meio de que é obtida uma solução de colágeno de gelificação instantânea a partir de uma solução de colágeno líquida concentrada em conjunto com uma solução tampão liquida. Esta composição de colágeno pode ser, de preferência, diretamente injetada na cavidade de um defeito de cartilagem, onde ela endurece, formando imediatamente uma matriz de colágeno, que assim constitui diretamente in si tu o implante cartilaginoso. A introdução da composição liquida de colágeno gelificável na cavidade permite uma melhor adaptação ao formato da cavidade, podendo a composição de colágeno entrar em contato direto com as bordas da cavidade e com o seu fundo ainda no estado liquido.

De acordo com a presente invenção, o processo compreende pelo menos as seguintes etapas: a solução concentrada de colágeno liquida e a solução tampão liquida fornecidas separadamente entre si, e que foram previamente conservadas no frio, por exemplo, são aquecidas simultaneamente a uma temperatura de 20°C a aproximadamente

37°C, de preferência até aproximadamente 30°C; a solução de colágeno aquecida e a solução tampão aquecida são, de preferência, misturadas imediatamente a seguir, sendo então obtida uma composição de colágeno gelificável, que começa a gelificar imediatamente e pode endurecer formando uma matriz biológica de colágeno.

É previsto, especialmente, que a solução de colágeno e a solução tampão somente sejam misturadas no momento da aplicação, isto é, especialmente durante a aplicação da composição de colágeno, sendo a composição de colágeno gelificável formada somente durante a aplicação, quando ela ainda se encontra inicialmente no estado líquido. De acordo 10 com a presente invenção, portanto, a composição de colágeno gelificável mas ainda líquida é aplicada in statu nascendi, podendo ela então endurecer no local de aplicação.

É provida uma solução concentrada de colágeno e uma solução tampão que podem ser armazenadas sem se misturar, 15 mas que se encontram em um recipiente comum, e isso como se sabe, a frio, especialmente a temperaturas de aproximadamente 0°C a aproximadamente 4°C. Dentro do âmbito do processo da presente invenção, a solução de colágeno e a solução tampão são levadas à temperatura desejável, tal 20 como até a temperatura ambiente, isto é, especialmente até 20°C ou mais, ou até a temperatura corporal, isto é, especialmente de aproximadamente 30°C, não ultrapassando a temperatura de desnaturação de mais de 37°C, pouco antes do seu uso para a produção da matriz biológica de colágeno.

Em particular, a solução de colágeno e a solução tampão, são levadas à temperatura desejada simultaneamente, e, em particular, somente imediatamente antes da mistura e aplicação de acordo com a presente invenção. Isto pode ser produzido por uma permanência de curta duração em uma estufa ou eventualmente por aquecimento na mão. A presente invenção prevê especialmente que se evite uma temperatura da composição de colágeno acima de 37°C.

De acordo com a presente invenção, as soluções à temperatura desejada são misturadas somente na hora de ou para a aplicação na cavidade ou em outro local de aplicação para então formar a composição de colágeno, que começa imediatamente durante a aplicação a gelificar e completa a gelificação no local de aplicação, isto é, ali endurece.

Tanto a solução de colágeno como também a solução tampão se encontram antes da utilização ou aplicação no estado líquido. A sua baixa viscosidade permite de modo vantajoso a sua mistura imediata sem se recorrer a medidas adicionais desnaturantes tais como aquecimento.

viscosidade dinâmica da solução tampão se encontra, de preferência, na região da viscosidade da água ou de soluções aquosas de livre movimento, isto é, tendo aproximadamente de 1 a 5 mPa.s. A viscosidade dinâmica da solução de colágeno concentrada é, de preferência, da ordem

de magnitude de aproximadamente 10¹ a 10⁵ mPa.s.

A solução de colágeno e a solução tampão são fornecidas inicialmente separadas entre si, de preferência em uma seringa de câmaras múltiplas. Elas são levadas à temperatura desejada, de preferência, separadamente no interior da seringa e imediatamente misturada durante a saída da seringa. Em particular, é previsto que a combinação e mistura da solução de colágeno e solução tampão é efetuada pela extração das soluções das câmaras da seringa e pela combinação das duas correntes de soluções no interior da seringa em um aparato de mistura associado com a seringa, de modo que a composição de colágeno recémproduzida saia da saída do dispositivo de mistura.

A presente invenção permite a produção de uma matriz biológica contendo colágeno ou um implante de colágeno tendo uma proporção elevada de colágeno não desnaturado, reticulável de estrutura nativa. Foi demonstrado que as células cartilaginosas se proliferam muito bem em uma matriz biológica de colágeno, e apresentam simultaneamente uma síntese de colágeno própria com uma taxa mais elevada, quando na matriz biológicas está presente uma proporção elevada de colágeno nativo. A presente invenção evita, portanto, medidas que possam desnaturar o colágeno.

A presente invenção prevê, de preferência, que a solução concentrada de colágeno que é provida em conexão com o processo de acordo com a presente invenção, seja obtida imediatamente e sem etapas desnaturantes a partir de tecidos contendo colágeno. Um tecido contendo colágeno 5 preferido consiste em preparações de tendões de cauda de rato. Deles o colágeno é obtido, de preferência, por extração por ácido, especialmente por ácido acético. A solução de colágeno concentrada usada é uma solução de colágeno acidica contendo um teor de colágeno (concentração 10 de colágeno) de mais de 8 mg/mL, especialmente de aproximadamente 9 mg/mL ou mais, ou de preferência, até aproximadamente 16 mg/mL. A solução de colágeno concentrada é, principalmente ácida, para ser mantida a sua viscosidade. Neste caso o valor de pH da solução 15 concentrada de colágeno (calculada a uma temperatura de 21°C) é de 6 ou menos, preferencialmente, de pH 5 a pH 3,5.

Em uma modalidade especial a solução concentrada de colágeno não contém outros aditivos ou adjuvantes, tais como células, componentes celulares, fatores de 20 crescimento, tais citocinas, estimuladores imunes, antibióticos ou estabilizantes, tais como polissacarideos. Em uma modalidade alternativa a solução de colágeno contém pelo menos um destes aditivos ou adjuvantes.

Para se obter a composição de colágeno gelificável, a solução de colágeno concentrada ácida é misturada com uma solução tampão neutralizante. A solução tampão neutralizante é, no caso mais simples, uma solução tampão salina conhecida, através da qual se atinge um valor de pH 5 da composição de colágeno dentro de limites neutros, tal como de pH 7,0 a pH 7,5 (calculado à temperatura de 21°C). É preferível se empregar uma solução salina tamponada com HEPES tendo um pH de 8,3 que pode ser produzida de modo conhecido. A solução tampão serve, de acordo com a presente 10 invenção, adicionamente, para diluir a solução de colágeno concentrada para obter a concentração final na composição de colágeno gelificável. A composição do tampão é, preferencialmente, concentrada pelo menos duas vezes (a 1+1) e, preferencialmente, concentrada no máximo dez vezes 15 (a 9+1), dependendo da razão de mistura desejada com a solução de colágeno concentrada.

Em uma modalidade especial a solução tampão não contém nenhum aditivo ou adjuvante, tais como células, componentes celulares, fatores de crescimento, tais como citocina, 20 imunoestimuladores ou estabilizantes, tais como polissacarídeos. Em uma modalidade alternativa a solução tampão contém células e, opcionalmente, pelo menos outro aditivo ou adjuvante adicional, quando misturados de acordo com a invenção com a solução de colágeno concentrada, a

composição de colágeno gelificável contendo, que endurece formando um transplante de colágeno contendo células. Em uma variante especial deste, as células são condrócitos, em particular, células autólogas ou células tronco.

De acordo com a invenção, é, de preferível que a solução de colágeno e a solução tampão sejam misturadas em uma relação volumétrica de 1+1 a 9 + 1 (solução de colágeno para solução tampão). São preferidas as relações de mistura de 4 + 1, isto é, de quatro partes de solução de colágeno para uma parte de solução tampão. Por este motivo, o teor de colágeno na composição de colágeno produzida é, de preferência, de pelo menos 6 mg/mL ou mais, especialmente de 6 a 12 mg/mL. Em uma modalidade preferida, o conteúdo de colágeno na composição de colágeno é de aproximadamente 8 mg/mL.

É preferível se empregar uma seringa de câmaras múltiplas. Esta seringa é, de preferência, uma seringa descartável conhecida. Em uma variante preferida, a seringa é equipada com um misturador estático conhecido, em forma de dispositivo de mistura. Os versados na técnica conhecem outros dispositivos de mistura integrados que permitem uma mistura de soluções separadas durante a aplicação. Em modalidades alternativas tais outras disposições também constituem um objeto da invenção.

Se a solução de colágeno e a solução tampão forem fornecidas em uma seringa de câmaras múltiplas, cada uma destas câmaras tem um volume de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mL. Neste caso o aquecimento das soluções 5 à temperatura desejada, de acordo com a presente invenção, ocorre no interior da seringa, ocorrendo ainda a mistura da solução de colágeno com a solução tampão durante a extração da solução da seringa. É preferido que o dispositivo de mistura da seringa seja um misturador estático que já e 10 conhecido. Os versados na técnica conhecem dispositivos de mistura alternativos que podem ser empregados em associação com seringas. O processo de aplicação deve durar, dependendo do volume da seringa e da velocidade de aplicação, entre aproximadamente 1 e 60 segundos. A duração 15 da mistura atinge, de acordo com a presente invenção, para cada uma das parcelas de volume infinitesimais que saem das duas câmaras de preferência de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 segundos.

A composição nascente começa imediatamente a gelificar dentro, especialmente, de 10 segundos depois da mistura, de preferência dentro de 5 segundos. A composição gelificável continua líquida e principalmente ainda fluida. O processo de gelificação é concluído, quando a composição de colágeno endurece formando uma matriz biológica sólida. O processo

de endurecimento para formar uma matriz biológica é concluído, de preferência, dentro de 2 a 4 minutos .

Por exemplo, desta maneira, o endurecimento da composição de colágeno fluida, que foi aplicada dentro da cavidade do defeito da cartilagem, propriamente dita, de modo ocorre somente na cavidade que ali se cria imediatamente um implante de cartilagem adaptado diretamente à cavidade.

Como o permite que transportada tal como necessárias em termos necessidade processo de acordo com a presente invenção a composição de colágeno produzida seja ainda na forma líquida ao local de aplicação, cavidade, portas de acesso menores são no de sítio de aplicação. Isto um acesso artroscópico prévia de transporte cartilagem conhecido pronto para uso de um acesso endoscópico ao local da

A presente invenção permite uma melhorada ou minimamente invasiva, de já auxilia a operação ou endoscópico. A um implante de endurecido através aplicação é eliminado.

cirurgia artroscópica e reduz, assim, os traumas causados pela intervenção cirúrgica.

Neste contexto, a presente invenção propõe também uma seringa cheia pronta, tal como na forma de uma seringa descartável, em forma de kit, apresentando a seringa pelo menos duas câmaras separadas, que desembocam em um dispositivo de seringa atribuído à seringa, podendo através desde dispositivo ser liberado simultaneamente, de preferência, o conteúdo das duas câmaras. De acordo com a presente invenção, a seringa é caracterizada pelo fato de que pelo menos uma primeira câmara é cheia com a solução de 5 colágeno concentrada líquida e pelo menos uma segunda câmara, separada da primeira, cheia com a solução tampão.

Além disso, podem ser fornecidas outras câmaras adicionais na seringa que podem ser cheias com aditivos ou adjuvantes.

A seringa cheia com pelo menos a solução de colágeno de acordo com a presente invenção e a solução tampão, constitui um kit que pode ser empregado para a produção de uma composição de colágeno que se gelifica imediatamente.

Além disso, a presente invenção não é limitada ao emprego do processo dentro de uma seringa de câmaras 15 múltiplas cheias. Outras modalidades são concebidas que permitem um estocamento separado da solução de colágeno concentrada e da solução tampão e a mistura imediatamente subsequente destas soluções para a produção da composição de colágeno gelificável. Uma modalidade alternativa 20 consiste, por exemplo, em uma cápsula mista de câmaras múltiplas para utilização única e que pode ser empregada em conjunto com um misturador de cápsula conhecido.

Constitui também um objeto da invenção o emprego da seringa cheia de acordo com a presente invenção para uso em

tratamento médico. Uma aplicação especial consiste no tratamento profilático ou terapêutico de defeitos de cartilagem do corpo humano ou animal. Estes defeitos da cartilagem ocorrem especialmente nas articulações. O uso, no entanto, não é limitado a defeitos de cartilagem das articulações. A presente invenção pode ser ainda empregada para o tratamento de outros defeitos de cartilagem e a outros defeitos teciduais do corpo humano ou animal.

Outras aplicações médicas do processo de acordo com a presente invenção ou da seringa cheia de acordo com a presente invenção incluem o tratamento de perda tecidual no núcleo depois de um prolapso de disco vertebral e o tratamento de defeitos de partes moles na pele, de defeitos de ossos e tendões assim como a construção de defeitos da gengiva e outras aplicações em cirurgias dental e bucomaxilar, assim como aplicações na cirurgia plástica, especialmente quando se trata de preenchimento de defeitos ou cavidades.

Outro objeto da invenção é ainda o emprego -não médico do processo de acordo com a presente invenção e da seringa cheia de acordo com a presente invenção para a produção de uma matriz biológica contendo colágeno destinada à cultura tecidual. Em uma modalidade especial, uma matriz biológica de colágeno para cultura celular pode ser imediatamente produzida por meio do processo de acordo com a presente invenção. Ela é especialmente adequada para a produção de culturas em sanduíche, em que as células ou tecidos devem ser revestidos com uma matriz biológica contendo colágeno, 5 para que as células ou tecido se incrustem nela. Além de outras possibilidades de aplicação médicas existe uma multiplicidade de possibilidades não médicas em que é exigida uma produção simples e confiável de um gel de colágeno que se gelifica imediatamente.

A presente invenção será descrita com mais detalhes com referência às figuras a modalidades exemplares abaixo, sem que estas devam ser consideradas como limitantes.

A Figura 1 mostra uma ilustração esquemática de uma modalidade da seringa cheia, de acordo com a presente 15 invenção, como um meio para a implementação do processo de acordo com a presente invenção.

Na modalidade ilustrada, duas câmaras cilíndricas paralelas separadas (11, 12) para acomodação da solução de colágeno por um lado e a solução tampão por outro são 20 formadas em um recipiente integrado. As duas câmaras desembocam na parte da frente de um canal de saída comum (18) que compreende um misturador estático (16) dotado com uma chicana de mistura. Êmbolos de seringa acoplados (14) são fornecidos para o esvaziamento das câmaras (11, 12) para a aplicação e preparação da composição de colágeno. Estes êmbolos de seringa formam o limite traseiro do volume das câmaras onde o conteúdo pode ser simultaneamente exprimido de ambas as câmaras (11, 12) de um modo já 5 conhecido por compressão dos êmbolos (14) . Dependendo da razão volumétrica das câmaras (11, 12) predeterminada pelo design do mesmo, a mistura homogênea dos líquidos contidos dentro das câmaras (11, 12) ocorre nesta razão de volume durante o processo de extração. Na modalidade ilustrada a 10 relação volumétrica das câmaras (11, 12) é de 1:1.

A Figura 2 mostra os resultados de testes reológicos conduzidos com os géis de colágeno: módulo elástico em função da frequência de teste (valores médios e desvios padrão) em seringas de duas câmaras diferentes previamente 15 aquecidas.

Exemplo 1: Produção de uma composição de colágeno imediatamente gelificável.

Para a preparação de uma solução de colágeno concentrada, caudas de ratos são armazenadas a aproximadamente -20°C, sendo em seguida superficialmente desinfetadas durante alguns minutos em solução de álcool a aproximadamente 70%. A pele é retirada e as fibras individuais de colágeno são dissolvidas. As fibras de colágeno são mais uma vez superficialmente desinfetadas em

álcool, sendo então lavadas com PBS e em seguida transferidos para uma solução de ácido acético a aproximadamente 0,1% (0,5 mol/L) e ali incubadas. As fibras de colágeno são agitadas na solução de ácido acético durante um período de pelo menos 7 dias a frio (a uma temperatura aproximadamente de 0 a 4°C). Depois da separação dos componentes não dissolvidos de colágeno no fim do período de incubação, o colágeno é filtrado e precipitado. O precipitado é enxaguado com solução tampão, congelado e em seguida liofilizado. O colágeno liofilizado é absorvido em ácido acético a 0,1%, como especificado, de modo que é obtido um conteúdo de colágeno de 9 a 16 mg/mL. O valor de pH da solução de colágeno concentrada é de aproximadamente 4,0.

Para se misturar quatro partes de solução de colágeno com uma parte de solução tampão neutralizante (4+1) é preparada uma solução tampão cinco vezes concentrada. Em particular, uma solução de 35,6 g de NaCl em 937,5 mL de água pura com 62,5 mL de solução de HEPES a 3 mol/L é preparada como uma solução tampão cinco vezes concentrada. O pH da solução tampão é ajustado para 8,3 com NaOH antes do uso.

Enchem-se as câmaras separadas de uma seringa de câmaras múltiplas, que apresentam uma relação volumétrica entre as câmaras de 1:4, com a solução de colágeno e a solução tampão e armazenam-se a frio, a aproximadamente -15 °C ou abaixo até o seu subsequente emprego.

Para a preparação de uma matriz biológica contendo colágeno coloca-se a seringa de câmaras múltiplas durante um período curto em uma estufa ou em banho-maria, sendo assim a solução tampão e a solução de colágeno aquecidas a uma temperatura de aproximadamente 30 °C. Para se misturar as duas soluções, comprimem-se os êmbolos de seringa 10 acoplados e. extraem-se as soluções da seringa de câmaras múltiplas. Neste caso as duas soluções são conduzidas através do dispositivo de mistura conectado às câmaras. A composição de colágeno gelificável imediatamente misturada sai da seringa. Esta composição é vertida ainda no estado 15 líquido em uma forma de molde. Depois da extração a composição de colágeno enche o molde completamente e dentro de alguns minutos ela endurece formando uma matriz biológica sólida contendo colágeno. Com um teor de colágeno de aproximadamente 8 mg/mL da composição de colágeno que 20 resulta da mistura a uma temperatura de aproximadamente

30°C esta composição endurece completamente dentro de 2 minutos.

Exemplo 2. Gelificação de uma composição de colágeno

As composições de colágeno preparadas de acordo com o

Exemplo 1 são submetidas a testes reológicos. Enchem-se seringas de duas câmaras (Firma Medmix Systems, CH, por exemplo) com a solução de colágeno (10 mg/mL) e com a solução tampão de acordo com o exemplo 1 (câmara para o 5 colágeno: 4 partes de solução de colágeno, 2 mL; câmara para a solução tampão: 1 parte de tampão cinco vezes concentrado, 0,5 mL), congelando-se em seguida.

Depois de se descongelar durante uma hora cuidadosamente à temperatura ambiente (20,5 °C) segue-se um 10 aquecimento de dez minutos das seringas em banho-maria com temperaturas diferentes na região de 20 a 40 °C (Tabela 1)

Tabela 1:

Temperatura Nominal [°C] (Temperatura real [°C])	Número das seringas testadas
20 (19-20)	3
30 (30-31)	4
37 (36,5 - 37)	4
38 (38 - 39)	3
40 (40 - 41)	4

Para misturar os dois componentes depois do aquecimento à temperatura desejada o fecho da seringa foi trocado por adaptador de mistura e o conteúdo foi transferido cuidadosamente em um poço de uma placa de cultura tecidual de 12 poços, sendo desprezadas as duas primeiras gotas que saem.

A gelificação completa da composição de colágeno (teor de colágeno de 8 mg/mL), isto é, o endurecimento em um gel sólido se produziu em 15 minutos a 20,5 °C. Em seguida se procedeu a uma avaliação visual da consistência (Tabela 2).

Em seguida são obtidos os módulos elásticos dos géis fora dos poços por processo de frequência (Bohlin CVO R150,

Fa. Malvern Instruments GmbH, DE) (Figura 2).

Tabela 2

Temperatura Nominal [°C] (Temperatura real [°C])	Consistência dos géis depois de 15 minutos
20 (19-20)	sólido
30 (30-31)	sólido
37 (36,5 - 37)	sólido
38 (38 - 39)	semi-sólido
40 (40 - 41)	líquido

A Figura 2 mostra que os valores médios mais elevados obtidos do módulo elástico se encontram entre limites de temperatura de 20 a 30°C. Enquanto a curva do colágeno aquecido a 37 °C é mais baixa, estes géis mostraram uma consistência sólida por observação visual. Quando aquecidos a 38°C os géis eram somente semi-sólidos e apresentaram valores muito baixos com grandes oscilações nas medidas de oscilação. O colágeno aquecido a 40 °C não gelificava mais.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Seringa cheia para uso no tratamento profilático ou terapêutico de defeitos da cartilagem nas articulações ou no corpo humano ou animal para introdução de uma composição de colágeno gelificante líquido dentro da cavidade de um defeito de cartilagem caracterizada pelo fato de que contém pelo menos duas câmaras separadas que desembocam em um dispositivo de mistura atribuído à seringa, através do qual o conteúdo de cada câmara pode ser dispensado simultaneamente, em que pelo menos uma primeira câmara é cheia com a solução de colágeno líquida que apresenta uma concentração acima de 8 mg/mL e em que o valor de pH (com base em 21°C) é 6 ou menos e, pelo menos, uma segunda câmara separada é cheia com solução tampão neutralizante.
2. Seringa, de acordo com a reivindicação 1,

caracterizada pelo fato de que o dispositivo de mistura é um misturador estático. 3. Seringa, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição de colágeno

preparada apresenta uma concentração de colágeno de 6 mg/mL ou mais. 4. Seringa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a

Petição 870190033843, de 08/04/2019, pág. 33/39

2/2 solução de colágeno tem uma viscosidade dinâmica de 101 a

105 mPa.s.