BR112013013659B1 - Compostos moduladores de enzimas epigenéticas, composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e usos da dita composição farmacêutica para tratar câncer, câncer hematológico ou leucemia - Google Patents

Compostos moduladores de enzimas epigenéticas, composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e usos da dita composição farmacêutica para tratar câncer, câncer hematológico ou leucemia Download PDF

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Richard Chesworth
Kevin Wayne Kuntz
Victoria Marie Richon
Roy Macfarlane Pollock
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Abstract

COMPOSTOS DE 7-DEAZAPURINA E PURINA SUBSTITUÍDA COMO MODULADORES DE ENZIMAS EPIGENÉTICAS. A presente invenção refere-se à purina substituída e a compostos de 7-desazapurina. A presente invenção também se relaciona a composições farmacêuticas contendo estes compostos e métodos para tratamento de distúrbios nos quais a metilação proteíca mediada por DOT1L desempenha um papel, como em câncer e desordens neurológicas, pela administração desses compostos e composições farmacêuticas a indivíduos em necessidade do mesmo.

Description

Referência Cruzada Ao Pedido Relacionado
[001]Este pedido reivindica prioridade ao, e o benefício do, Pedido Provisório U.S. No 61/419.661, depositado em 3 de Dezembro de 2010, o conteúdo do qual é integralmente incorporado neste relatório como referência.
Fundamentos da Invenção
[002]Em células eucarióticas, o DNA é empacotado com histonas para formar cromatina. Aproximadamente 150 pares de base de DNA são envoltos duas vezes em torno de um octâmero de histonas (duas de cada uma das histonas 2A, 2B, 3 e 4) para formar um nucleossoma, a unidade básica da cromatina. Mudanças na estrutura ordenada da cromatina podem levar às alterações na transcrição de genes associados. Este processo é altamente controlado, pois mudanças nos padrões de expressão do gene podem afetar profundamente os processos celulares fundamentais, tais como diferenciação, proliferação e apoptose. O controle das mudanças na estrutura da cromatina (e, consequentemente, da transcrição) é mediado pelas modificações covalentes em histonas, mais notavelmente de suas caudas N-terminais. Estas modificações são frequentemente referidas como epigenéticas, pois elas podem levar às mudanças hereditárias na expressão do gene, mas não afetam a sequência do DNA por si só. As modificações covalentes (por exemplo, metilação, ace- tilação, fosforilação e ubiquitinação) das cadeias laterais de aminoácidos são enzi- maticamente mediadas.
[003]A adição seletiva de grupos metila a sítios de aminoácidos específicos em histonas é controlada pela ação de uma família única de enzimas conhecida como metiltransferases (HMTs). O nível de expressão de um gene particular é influen- ciado pela presença ou ausência de um grupo metila em um sítio de histona relevante. O efeito específico de um grupo metila em um sítio de histona particular persiste até que o grupo metila seja removido por uma histona demetilase, ou até que a his- tona modificada seja substituída através do movimento do nucleossoma. De uma maneira semelhante, outras classes de enzimas podem decorar o DNA e histonas com outra espécie química e outras enzimas podem remover esta espécie para fornecer controle temporário da expressão do gene.
[004]A coleção orquestrada de sistemas bioquímicos após a regulação transcricional deve ser severamente controlada para que o crescimento e diferenciação celulares procedam em uma forma ideal. Os estados da doença resultam quando estes controles são rompidos pela expressão e/ou atividade anormais das enzimas responsáveis pela modificação de DNA e histona. Em cânceres humanos, por exemplo, existe um corpo crescente de evidência para sugerir que a atividade da enzima epigenética desregulada contribui para a proliferação celular descontrolada associada com câncer, assim como outros fenótipos relevantes do câncer, tais como migração e invasão celulares acentuadas. Além do câncer, existe evidência crescente quanto a um papel de enzimas epigenéticas em várias outras doenças humanas, incluindo doenças metabólicas (tais como diabetes), doenças inflamatórias (tais como doença de Crohn), doenças neurodegenerativas (tais como doença de Alzheimer) e doenças cardiovasculares. Portanto, a modulação seletiva da ação anormal de enzimas epigenéticas é uma grande promessa quanto ao tratamento de uma faixa de doenças.
[005]Existe uma necessidade contínua quanto a novos agentes que modulam a ação anormal de enzimas epigenéticas. A presente invenção fornece compostos que satisfazem esta necessidade.
Sumário da Invenção
[006]A invenção fornece compostos úteis para modular a ação anormal de enzimas epigenéticas. A presente invenção também fornece sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, e/ou N-óxidos destes compostos.
[007]Em um aspecto, a presente invenção caracteriza um composto de puri- na ou 7-deazapurina substituída da Fórmula (I) abaixo ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.
Figure img0001
[008]Nesta fórmula, A é O ou CH2; cada um entre G e J é, independentemente, H, halo, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6 ou ORa, Ra sendo H, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6, em que C(O)O- alquila C1-C6, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, ciano hidroxila, carboxila, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 e cicloalquila C3-C8; Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, Rb ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, in-dependentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carbo- xila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, ami no, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros; X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxi- la C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros; L1 é N(Y), S, SO ou SO2; L2 é CO ou ausente quando L1 é N(Y) ou L2 é ausente quando L1 é S, SO, ou SO2, em que Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd quando L2 é ausente, ou Y é H ou Rd quando L2 é CO, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros; cada um entre R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R7 é, independentemente, H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e hetero- arila de 5 a 6 membros; R8 é H, halo ou RS3, RS3 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e RS3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano amino, alco- xila C1-C6, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8; R9 é
Figure img0002
em que cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, Ri é H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, D é O, NRj, ou CRjRk, cada um entre Rj e Rk independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou Rj e Rk tomados juntos, com o átomo de carbono ao qual eles são ligados, formam um anel cicloalquila C3-C10, e E é-M3-T3, M3 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo ou ciano, T3 sendo cicloalquila C3-C10, arila C6-C10, heteroarila de 5 a 10 membros, ou heterocicloalquila de 4 a 10 membros, e T3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, haloalquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, haloalquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, halo, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ou alcoxila C1-C6; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; m é 0, 1, ou 2; e n é 0, 1, ou 2.
[009]Um subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da Fórmula (II):
Figure img0003
[0010]Um outro subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da
Figure img0004
[0011]Os compostos das Fórmulas (l), (ll), (llla), (lllb), (lllc) e (lV) podem incluir uma ou mais entre as características seguintes.
[0012]A soma de m e n é pelo menos 1.
[0013]m é 1 ou 2 e n é 0.
[0014]m é 2 e n é 0.
[0015]A é CH2.
[0016]A é O.
[0017]L1 é N(Y).
[0018]L1 é SO ou SO2.
[0019]Y é Rd.
[0020]Rd é alquila C1-C6.
[0021]L2 é ausente.
[0022]Pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo (tal como F, Cl, e Br), al- coxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como OCH3, OCH2CH3, O-iPr, e OCF3), alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como SO2CF3), ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como CH3, i-Pr, t-Bu, e CF3).
[0023]Ri é H ou alquila C1-C6.
[0024]R9 é H .
Figure img0005
[0025]D é O.
[0026]D é NRj, por exemplo, NH.
[0027]D é CRjRk, por exemplo, CH2, CHCH3 ou C(CH3)2.
[0028]E é -M3-T3, em que M3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, T3 é fe- nila, naftila, tienila, ciclopropila, ou ciclohexila, e T3 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxi- la C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros.
[0029]T3 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1- C6, arila C6-C10, e ariloxila C6-C10, e alquilarila C7-C14.
[0030]X é N.
[0031]X é CRx, por exemplo, CH.
[0032]Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é -M1-T1, M1 sendo uma ligação ou li- gante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[0033]Q é H.
[0034]R9 é
Figure img0006
[0035]Pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é selecionado a partir do grupo que consiste em F, Cl, CF3, OCF3, SO2CF3, alquila C1-C4, e alcoxila C1-C4.
[0036]R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, e R8 são H.
[0037]A invenção também se refere a um composto da Fórmula (IV) ou seu N-óxido ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0007
em que, A é O ou CH2;
[0038]Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, OH, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalqui- la C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam hetero- cicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alco- xila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir de alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hi- droxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[0039]X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, ci- cloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[0040]Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros;
[0041]cada um entre R1 e R2 independentemente, é H, halo, hidroxila, car- boxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[0042]cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloal- quila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, e
[0043]m é 0, 1, ou 2.
[0044]Por exemplo, A é O. Em certos compostos da Fórmula (IV), A é O e m é 2.
[0045]Em certos compostos da Fórmula (IV), X é N.
[0046]Por exemplo, em certos compostos, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é - M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[0047]Por exemplo, em certos compostos da Fórmula (IV), R1 e R2 são H.
[0048]Em certos compostos da Fórmula (IV), Y é Rd. Por exemplo, Rd é alquila C1-C6 opcionalmente substituído com cicloalquila C3-C8 ou halo. Por exemplo, Rd é cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com alquila C1-C6 ou halo.
[0049]A invenção também se refere a um composto da Formula (IV), em que pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo, alcoxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo; alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo; alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, cicloalquila C3-C8, hidróxi, e alcoxila C1-C6; ciclo- alquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais alquila C1-C6 ou CN; ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, hidróxi, alquila C1-C6 e alcoxila C1C6. Por exemplo, o composto da Fórmula (IV) tem pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh selecionado a partir de F; Cl; Br; CF3; OCF3; SO2CF3; oxetanila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, hidróxi, alquila C1-C6 e alcoxila C1-C6; cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de alquila C1-C4; e alquila C1-C4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, cicloalquila C3-C8, hidróxi e alcoxila C1-C6.
[0050]Por exemplo, a invenção se refere aos compostos da Fórmula (IV) onde pelo menos um entre Rf e Rg é alquila, opcionalmente substituído com hidroxila. Por exemplo, a invenção se refere aos compostos onde pelo menos um entre Rf e Rg é t-butila substituído com hidroxila.
[0051]A invenção se refere a um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um N-óxido do composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um sal de um N-óxido do composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. Por exemplo, a invenção se refere a um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 7, 9 a 109, e 111 a 140.
[0052]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV) e um portador farmaceuticamente aceitável.
[0053]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto da Fórmula (IV) e um portador farmaceuticamente aceitável.
[0054]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um hidrato de um composto da Fórmula (IV) e um portador farmaceuticamente aceitável.
[0055]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um N-óxido de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e um portador farmaceutica- mente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um N-óxido do sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um hidrato de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e um portador farmaceuticamente aceitável.
[0056]A presente invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo um ou mais compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV), e um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis.
[0057]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir câncer. A presente invenção fornece métodos para tratar câncer. A presente invenção também fornece métodos para prevenir câncer. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), ou (IIIc). O câncer pode ser um câncer hematológico. Preferivelmente, o câncer é leucemia. Mais preferivelmente, o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
[0058]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. A presente invenção fornece métodos para tratar uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. A presente invenção também fornece métodos para prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[0059]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. A presente invenção fornece métodos para tratar uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. A presente invenção também fornece métodos para prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[0060]A presente invenção fornece métodos para inibir a atividade de DOT1L em uma célula. O método inclui contatar a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais entre os compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[0061]Um outro aspecto da invenção se refere a um método para reduzir o nível de metilação do resíduo de Lisina 79 da Histona H3 (H3-K79) em uma célula. O método inclui contatar uma célula com um composto da presente invenção. Tal método pode ser usado para melhorar qualquer condição que é causada por ou potencializada pela atividade de DOT1 através da metilação de H3-K79.
[0062]A presente invenção se refere ao uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir câncer. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeuticamente eficaz. O câncer pode ser um câncer hematológico. Preferivelmente, o câncer é leucemia. Mais preferivelmente, o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia lin- focítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
[0063]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeuticamente eficaz.
[0064]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeu- ticamente eficaz.
[0065]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório para inibir a atividade de DOT1L em uma célula. O uso inclui contatar a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais entre os compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[0066]Um outro aspecto da invenção se refere a um uso dos compostos divulgados neste relatório para reduzir o nível de metilação de resíduo de Lisina 79 da Histona H3 (H3-K79) em uma célula. O uso inclui contatar uma célula com um composto da presente invenção. Tal uso pode melhorar qualquer condição que é causada por ou potencializada pela atividade de DOT1 através da metilação de H3- K79.
[0067]Nas fórmulas apresentadas neste relatório, as variáveis podem ser selecionadas a partir dos grupos respectivos de porções químicas mais tarde definidas na descrição detalhada.
[0068]Além disso, a invenção fornece métodos para sintetizar os compostos precedentes. Após a síntese, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais entre os compostos pode ser formulada com um portador farmaceuticamente aceitável para a administração a um mamífero, particularmente seres humanos, para o uso na modulação de uma enzima epigenética. Em certas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis para tratar, prevenir, ou reduzir o risco de câncer ou para a fabricação de um medicamento para tratar, prevenir, ou reduzir o risco de câncer. Consequentemente, os compostos ou as formulações podem ser administrados, por exemplo, por intermédio de vias orais, parenterais, auriculares, oftálmicas, nasais, ou tópicas, para fornecer uma quantidade eficaz do composto ao mamífero.
[0069]A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados neste relatório têm o mesmo significado conforme comumente entendido por aqueles de habilidade comum na técnica a qual esta invenção pertence. No relatório descritivo, as formas no singular também incluem o plural, a menos que o contexto claramente indique de outro modo. Embora os métodos e materiais similares ou equivalente àqueles descritos neste relatório possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências mencionadas neste relatório são incorporadas como referência. As referências citadas neste relatório não são admitidas à técnica anterior à invenção reivindicada. No caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, prevalecerá. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitantes.
[0070]Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição detalhada e reivindicações seguintes.
Descrição Das Figuras
[0071]As Figuras 1A e 1B são, respectivamente, uma tabela e um gráfico demonstrando a potência e seletividade da atividade antiproliferativa do Composto 2 usando um painel de linhagens celulares de leucemia humana rearranjadas com MLL e rearranjadas sem MLL. As linhagens celulares usadas no estudo são listadas na Figura 1A.
[0072]A Figura 2 é um gráfico que mostra o crescimento do tumor durante 21 dias de dosagem.
[0073]A Figura 3A é um gráfico que mostra as concentrações plasmáticas no estado estacionário estimadas do Composto 2 nos Grupos 4 e 5, conforme determinado pelas amostras sanguíneas médias tomadas nos dias 7, 14 e 21.
[0074]A Figura 3B é um gráfico que mostra as concentrações plasmáticas do Composto 2 plotadas contra o tempo depois da injeção ip.
Descrição Detalhada da Invenção
[0075]A presente invenção fornece uma família de compostos que podem ser usados para modular seletivamente a ação anormal de uma enzima epigenética. Além disso, os compostos podem ser usados para tratar ou prevenir um estado de doença em um mamífero causado ou mediado pela ação anormal de uma enzima epigenética. A presente invenção inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, tautômeros, e N-óxidos destes compostos.
[0076]A presente invenção fornece novos compostos de purina e 7- deazapurina substituídas, métodos sintéticos para fabricar os compostos, composições farmacêuticas contendo os mesmos e vários usos dos compostos.
1. Compostos de Purina Substituída e Compostos de 7-Deazapurina Substituída
[0077]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (I):
Figure img0008
Re R7 (I), ou um sal farmaceuticamen- te aceitável ou éster dos mesmos, em que: A é O ou CH2;
[0078]cada um entre G e J é, independentemente, H, halo, C(O)OH, C(O)O- alquila C1-C6 ou ORa, Ra sendo H, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6, em que C(O)O-alquila C1-C6, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, ciano hidroxila, carboxila, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8;
[0079]Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carbo- xila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[0080]X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, ci- cloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[0081]L1 é N(Y), S, SO, ou SO2;
[0082]L2 é CO ou ausente quando L1 é N(Y) ou L2 é ausente quando L1 é S, SO, ou SO2, em que Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd quando L2 é ausente, ou Y é H ou Rd quando L2 é CO, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros;
[0083]cada um entre R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R7 é, independentemente, H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e hetero- arila de 5 a 6 membros;
[0084]R8 é H, halo ou RS3, RS3 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou al-quinila C2-C6, e RS3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano ami-no, alcoxila C1-C6, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8;
[0085]R9 é
Figure img0009
em que cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, Ri é H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, D é O, NRj, ou CRjRk, cada um entre Rj e Rk independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou Rj e Rk tomados juntos, com o átomo de carbono ao qual eles são ligados, formam um anel cicloalquila C3-C10, e E é-M3-T3, M3 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo ou ciano, T3 sendo cicloalquila C3-C10, arila C6C10, heteroarila de 5 a 10 membros, ou heterocicloalquila de 4 a 10 membros, e T3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, haloalquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros op-cionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, haloalquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, halo, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmen- te substituído com halo, hidroxila, ou alcoxila C1-C6; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; m é 0, 1, ou 2; e n é 0, 1, ou 2.
[0086]Por exemplo, a soma de m e n é pelo menos 1.
[0087]Por exemplo, m é 1 ou 2 e n é 0.
[0088]Por exemplo, m é 2 e n é 0
[0089]Por exemplo, A é CH2.
[0090]Por exemplo, A é O.
[0091]Por exemplo, L1 é N(Y).
[0092]Por exemplo, L1 é SO ou SO2.
[0093]Por exemplo, Y é Rd.
[0094]Por exemplo, Rd é alquila C1-C6.
[0095]Por exemplo, L2 é ausente.
[0096]Por exemplo, cada um entre G e J é, independentemente, ORa.
[0097]Por exemplo, Ra é H.
[0098]Por exemplo, R9 é
Figure img0010
Por exemplo, R9 é
Figure img0011
[0099]Por exemplo, pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo (tal como F, Cl, e Br), alcoxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como OCH3, OCH2CH3, O-iPr, e OCF3), alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como SO2CF3), ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como CH3, i-propila, n-butila, e CF3).
[00100]Por exemplo, Ri é H ou alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila,n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila). Re
[00101]Por exemplo,
Figure img0012
é benzimidazolila não substituído ou um entre os grupos seguintes:
Figure img0013
[00102]Por exemplo, R9 é
Figure img0014
[00103]Por exemplo, D é O.
[00104]Por exemplo, D é NRj.
[00105]Por exemplo, Rj é H.
[00106]Por exemplo, D é CRjRk.
[00107]Por exemplo, cada um entre Rj e Rk é H.
[00108]Por exemplo, E é -M3-T3, em que M3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, T3 é fenila, naftila, tienila, ciclopropila, ou ciclohexila, e T3 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros.
[00109]Por exemplo, T3 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxi- la, ciano, nitro, alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila), alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, ha- loalcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, arila C6-C10 (por exemplo, fenila ou naftila), e ariloxila C6-C10, e alquilarila C7-C14.
[00110]Por exemplo, E é
Figure img0015
Figure img0016
[00111]Por exemplo, X é N.
[00112]Por exemplo, X é CRx.
[00113]Por exemplo, X é CH.
[00114]Por exemplo, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é -M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[00115]Por exemplo, Q é H.
[00116]Por exemplo, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, e R8 são H.
[00117]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme J, então J não é hidroxila.
[00118]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme G, então G não é hidroxila.
[00119]Por exemplo, T2 não é halo quando M2 é SO2, SO, S, CO ou O.
[00120]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um heteroátomo.
[00121]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de N.
[00122]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de C.
[00123]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (II):
Figure img0017
, ou um sal farmaceutica- mente aceitável ou éster dos mesmos, em que:A é O ou CH2; Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, in-dependentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila, ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carbo- xila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros; X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxi- la C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros; L1 é N(Y), S, SO, ou SO2; L2 é CO ou ausente quando L1 é N(Y) ou L2 é ausente quando L1 é S, SO, ou SO2, em que Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd quando L2 é ausente, ou Y é H ou Rd quando L2 é CO, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros; cada um entre R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R7 é, independentemente, H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e hetero- arila de 5 a 6 membros; R8 é H, halo ou RS3, RS3 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e RS3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano amino, alco- xila C1-C6, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8; R9 e
Figure img0018
em que cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, Ri é H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, D é O, NRj, ou CRjRk, cada um entre Rj e Rk independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou Rj e Rk tomados juntos, com o átomo de carbono ao qual eles são ligados, formam um anel cicloalquila C3-C10, e E é -M3-T3, M3 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo ou ciano, T3 sendo cicloalquila C3-C10, arila C6-C10, heteroarila de 5 a 10 membros, ou heterocicloalquila de 4 a 10 membros, e T3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, haloalquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, haloalquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, halo, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ou alcoxila C1-C6; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; m é 0, 1, ou 2; e n é 0, 1, ou 2.
[00124]Por exemplo, a soma de m e n é pelo menos 1.
[00125]Por exemplo, m é 1 ou 2 e n é 0.
[00126]Por exemplo, m é 2 e n é 0
[00127]Por exemplo, A é CH2.
[00128]Por exemplo, A é O.
[00129]Por exemplo, L1 é N(Y).
[00130]Por exemplo, L1 é SO ou SO2.
[00131]Por exemplo, Y é Rd.
[00132]Por exemplo, Rd é alquila C1-C6.
[00133]Por exemplo, L2 é ausente.
[00134]Por exemplo, R9 é
Figure img0019
Por exemplo, R9 é
Figure img0020
[00135]Por exemplo, pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo (tal como F, Cl, e Br), alcoxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como OCH3, OCH2CH3, O-iPr, e OCF3), alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como SO2CF3), ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como CH3, i-propila, n-butila, e CF3).
[00136]Por exemplo, Ri é H ou alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila ou n-hexila).
[00137]Por exemplo,
Figure img0021
é benzimidazolila não substituído ou um entre os grupos seguintes:
Figure img0022
[00138]Por exemplo, R9 é
Figure img0023
[00139]Por exemplo, D é O.
[00140]Por exemplo, D é NRj.
[00141]Por exemplo, Rj é H.
[00142]Por exemplo, D é CRjRk.
[00143]Por exemplo, cada um entre Rj e Rk é H.
[00144]Por exemplo, E é -M3-T3, em que M3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, T3 é fenila, naftila, tienila, ciclopropila, ou ciclohexila, e T3 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros.
[00145]Por exemplo, T3 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxi- la, ciano, nitro, alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila), alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, ha- loalcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, arila C6-C10 (por exemplo, fenila ou naftila), e ariloxila C6-C10, e alquilarila C7-C14.
[00146]Por exemplo, E é
Figure img0024
Figure img0025
Figure img0026
[00147]Por exemplo, X é N.
[00148]Por exemplo, X é CRx.
[00149]Por exemplo, X é CH.
[00150]Por exemplo, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é -M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[00151]Por exemplo, Q é H.
[00152]Por exemplo, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, e R8 são H.
[00153]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme J, então J não é hidroxila.
[00154]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme G, então G não é hidroxila.
[00155]Por exemplo, T2 não é halo quando M2 é SO2, SO, S, CO ou O.
[00156]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um heteroátomo.
[00157]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de N.
[00158]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de C.
[00159]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (IIIa) ou (IIIb):
Figure img0027
um sal farmaceuticamente aceitável ou éster dos mesmos, em que:
[00160]A é O ou CH2;
[00161]cada um entre G e J é, independentemente, H, halo, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6 ou ORa, Ra sendo H, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6, em que C(O)O-alquila C1-C6, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, ciano hidroxila, carboxila, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8;
[00162]Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam heteroci- cloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hi- droxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e ca-da um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00163]X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, cia- no, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00164]L1 é N(Y), S, SO, ou SO2;
[00165]L2 é CO ou ausente quando L1 é N(Y) ou L2 é ausente quando L1 é S, SO, ou SO2, em que Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd quando L2 é ausente, ou Y é H ou Rd quando L2 é CO, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros;
[00166]cada um entre R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R7 é, independentemente, H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e hetero- arila de 5 a 6 membros;
[00167]R8 é H, halo ou RS3, RS3 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou al- quinila C2-C6, e RS3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano amino, alcoxila C1-C6, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3C8;
[00168]cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante al- quila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxi- la C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros,
[00169]Ri é H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxi- la, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, ciclo- alquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00170]q é 0, 1, 2, 3, ou 4;
[00171]m é 0, 1, ou 2; e
[00172]n é 0, 1, ou 2.
[00173]Por exemplo, a soma de m e n é pelo menos 1.
[00174]Por exemplo, m é 1 ou 2 e n é 0.
[00175]Por exemplo, m é 2 e n é 0.
[00176]Por exemplo, A é CH2.
[00177]Por exemplo, A é O.
[00178]Por exemplo, L1 é N(Y).
[00179]Por exemplo, L1 é SO ou SO2.
[00180]Por exemplo, Y é Rd.
[00181]Por exemplo, Rd é alquila C1-C6.
[00182]Por exemplo, L2 é ausente.
[00183]Por exemplo, cada um entre G e J é, independentemente, ORa.
[00184]Por exemplo, Ra é H.
[00185]Por exemplo, pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo (tal como F, Cl, e Br), alcoxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como OCH3, OCH2CH3, O-iPr, e OCF3), alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como SO2CF3), ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo (tal como CH3, i-propila, n-butila, e CF3).
[00186]Por exemplo, Ri é H ou alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila).
[00187]Por exemplo,
Figure img0028
é benzimidazolila não substituído ou um entre os grupos seguintes:
Figure img0029
[00188]Por exemplo, X é N.
[00189]Por exemplo, X é CRx.
[00190]Por exemplo, X é CH.
[00191]Por exemplo, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é -M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[00192]Por exemplo, Q é H.
[00193]Por exemplo, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, e R8 são H.
[00194]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme J, então J não é hidroxila.
[00195]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme G, então G não é hidroxila.
[00196]Por exemplo, T2 não é halo quando M2 é SO2, SO, S, CO ou O.
[00197]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um heteroátomo.
[00198]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de N.
[00199]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é lig-ado a M2 por intermédio de um átomo de C.
[00200]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (IIIc):
Figure img0030
ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster dos mesmos, em que:
[00201]A é O ou CH2;
[00202]cada um entre G e J é, independentemente, H, halo, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6 ou ORa, Ra sendo H, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6, em que C(O)O-alquila C1-C6, alquila C1-C6 ou C(O)-alquila C1-C6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, ciano hidroxila, carboxila, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3-C8;
[00203]Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 mem bros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam heteroci- cloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hi- droxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00204]X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, cia- no, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00205]L1 é N(Y), S, SO, ou SO2;
[00206]L2 é CO ou ausente quando L1 é N(Y) ou L2 é ausente quando L1 é S, SO, ou SO2, em que Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd quando L2 é ausente, ou Y é H ou Rd quando L2 é CO, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros;
[00207]cada um entre R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R7 é, independentemente, H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidro- xila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e hetero- arila de 5 a 6 membros;
[00208]R8 é H, halo ou RS3, RS3 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou al- quinila C2-C6, e RS3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, ciano amino, alcoxila C1-C6, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, e cicloalquila C3C8;
[00209]D é O, NRj, ou CRjRk, cada um entre Rj e Rk independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou Rj e Rk tomados juntos, com o átomo de carbono ao qual eles são ligados, formam um anel cicloalquila C3-C10;
[00210]E é -M3-T3, M3 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcional- mente substituído com halo ou ciano, T3 sendo cicloalquila C3-C10, arila C6-C10, hete- roarila de 5 a 10 membros, ou heterocicloalquila de 4 a 10 membros, e T3 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, haloalquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxi- carbonila C1-C6, oxo, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloal- quila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, haloalquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com halo, alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, halo, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente adicionalmente substituído com halo, hidroxila, ou alcoxila C1-C6; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; m é 0, 1, ou 2; e n é 0, 1, ou 2.
[00211]Por exemplo, a soma de m e n é pelo menos 1.
[00212]Por exemplo, m é 1 ou 2 e n é 0.
[00213]Por exemplo, m é 2 e n é 0.
[00214]Por exemplo, A é CH2.
[00215]Por exemplo, A é O.
[00216]Por exemplo, L1 é N(Y).
[00217]Por exemplo, L1 é SO ou SO2.
[00218]Por exemplo, Y é Rd.
[00219]Por exemplo, Rd é alquila C1-C6.
[00220]Por exemplo, L2 é ausente.
[00221]Por exemplo, cada um entre G e J é, independentemente, ORa.
[00222]Por exemplo, Ra é H.
[00223]Por exemplo, D é O.
[00224]Por exemplo, D é NRj.
[00225]Por exemplo, Rjé H.
[00226]Por exemplo, D é CRjRk.
[00227]Por exemplo, cada um entre Rj e Rk é H.
[00228]Por exemplo, E é -M3-T3, em que M3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, T3 é fenila, naftila, tienila, ciclopropila, ou ciclohexila, e T3 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, tiol, carboxila, ciano, nitro, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, haloalcoxila C1-C6, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, alcoxicarbonila C1-C6, oxo, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, alquilcicloalquila C4-C12, arila C6-C10, ariloxila C6-C10, alquilarila C7-C14, aminoariloxila C6-C10, ariltio C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com alquila C1-C4, e alquila C1-C6 que é substituído com hidróxi, alcoxicarbonila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros.
[00229]Por exemplo, T3 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxi- la, ciano, nitro, alquila C1-C6 (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila), alcoxila C1-C6, haloalquila C1-C6, ha- loalcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, arila C6-C10 (por exemplo, fenila ou naftila), e ariloxila C6-C10, e alquilarila C7-C14.
[00230]Por exemplo, E é
Figure img0031
Figure img0032
Figure img0033
[00231]Por exemplo, X é N.
[00232]Por exemplo, X é CRx.
[00233]Por exemplo, X é CH.
[00234]Por exemplo, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é -M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[00235]Por exemplo, Q é H.
[00236]Por exemplo, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, e R8 são H.
[00237]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme J, então J não é hidroxila.
[00238]Por exemplo, quando R8 é halo e é ligado ao mesmo átomo de carbono, conforme G, então G não é hidroxila.
[00239]Por exemplo, T2 não é halo quando M2 é SO2, SO, S, CO ou O.
[00240]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um heteroátomo.
[00241]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de N.
[00242]Por exemplo, T2 é um heterocicloalquila de 4 a 8 membros que é ligado a M2 por intermédio de um átomo de C.
[00243]A invenção também se refere a um composto da Fórmula (IV) ou seu N-óxido ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
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, em que A é O ou CH2;
[00244]Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, OH, Rb, ou ORb, em que cada um entre Rb e Rc é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, ciclo- alquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 10 membros, ou -M1-T1 em que M1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcoxila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam hetero- cicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alco- xila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e cada um entre Rb, Rc, e T1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes selecionados a partir de alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hi- droxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00245]X é N ou CRx, em que Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou RS1, RS1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00246]Y é H, Rd, SO2Rd, ou CORd, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros, e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros e com cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros ainda opcionalmente substituído com alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, ou heteroarila de 5 a 6 membros;
[00247]cada um entre R1 e R2 independentemente, é H, halo, hidroxila, car- boxila, ciano, RS2, RS2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, ou alquinila C2-C6, e cada RS2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros;
[00248]cada um entre Re, Rf, Rg, e Rh, é, independentemente, -M2-T2, em que M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo, ou RS4, RS4 sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, hete- rocicloalquila de 4 a 8 membros, ou heteroarila de 5 a 10 membros, e cada um entre ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt, e RS4 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros, e heteroarila de 5 a 6 membros, e
[00249]m é 0, 1, ou 2.
[00250]Por exemplo, A é O. Em certos compostos da Fórmula (IV), A é O e m é 2.
[00251]Em certos compostos da Fórmula (IV), X é N.
[00252]Por exemplo, em certos compostos, Q é NH2 ou NHRb, em que Rb é - M1-T1, M1 sendo uma ligação ou ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
[00253]Por exemplo, em certos compostos da Fórmula (IV), R1 e R2 são H.
[00254]Em certos compostos da Fórmula (IV), Y é Rd. Por exemplo, Rd é alquila C1-C6 opcionalmente substituído com cicloalquila C3-C8 ou halo. Por exemplo, Rd é cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com alquila C1-C6 ou halo.
[00255]A invenção também se refere a um composto da Fórmula (IV), em que pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh é halo, alcoxila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo; alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais halo; alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, cicloalquila C3-C8, hidróxi, e alcoxila C1-C6; ciclo- alquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais alquila C1-C6 ou CN; ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, hidróxi, alquila C1-C6 e alcoxila C1C6. Por exemplo, o composto da Fórmula (IV) tem pelo menos um entre Re, Rf, Rg, e Rh selecionado a partir de F; Cl; Br; CF3; OCF3; SO2CF3; oxetanila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de CN, halo, hidróxi, alquila C1-C6 e alcoxila C1-C6; cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de alquila C1-C4; e alquila C1-C4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, cicloalquila C3-C8, hidróxi e alcoxila C1-C6.
[00256]Por exemplo, a invenção se refere aos compostos da Fórmula (IV) onde pelo menos um entre Rf e Rg é alquila, opcionalmente substituído com hidroxi- la. Por exemplo, a invenção se refere aos compostos onde pelo menos um entre Rf e Rg é t-butila substituído com hidroxila.
[00257]A invenção se refere a um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um N-óxido do composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. A invenção também se refere a um sal de um N-óxido do composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140. Por exemplo, a invenção se refere a um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 7, 9 a 109 e 111 a 140.
[00258]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV) e a um portador farmaceuticamente aceitável.
[00259]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto da Fórmula (IV) e a um portador farmaceuticamente aceitável.
[00260]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um hidrato de um composto da Fórmula (IV) e a um portador farmaceuticamente aceitável.
[00261]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e a um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e a um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um N- óxido de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e a um portador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um N-óxido do sal de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e a um portador farmaceuti- camente aceitável. A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um hidrato de um composto selecionado a partir dos Compostos 1 a 140 e a um portador farmaceuticamente aceitável.
[00262]A presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), ou (IIIc), e um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis.
[00263]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), ou (IIIc) e um portador farmaceuticamente aceitável.
[00264]A invenção também se refere a uma composição farmacêutica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um hidrato de um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), ou (IIIc) e um portador farmaceuticamente aceitável.
[00265]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir câncer. A presente invenção fornece métodos para tratar câncer. A presente invenção também fornece métodos para prevenir câncer. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), ou (IIIc). O câncer pode ser um câncer hematológico. Preferivelmente, o câncer é leucemia. Mais preferivelmente, o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
[00266]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. A presente invenção fornece métodos para tratar uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. A presente invenção também fornece métodos para prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[00267]A presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. A presente invenção fornece métodos para tratar uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. A presente invenção também fornece métodos para prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[00268]A presente invenção fornece métodos para inibir a atividade de DOT1L em uma célula. O método inclui contatar a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais entre os compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[00269]Um outro aspecto da invenção se refere a um método para reduzir o nível de metilação de resíduo de Lisina 79 da Histona H3 (H3-K79) em uma célula. O método inclui contatar uma célula com um composto da presente invenção. Tal método pode ser usado para melhorar qualquer condição que é causada por ou potencializada pela atividade de DOT1 através de metilação de H3-K79.
[00270]A presente invenção se refere ao uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir câncer. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeuti- camente eficaz. O câncer pode ser um câncer hematológico. Preferivelmente, o câncer é leucemia. Mais preferivelmente, o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
[00271]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeuticamente eficaz.
[00272]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1 desempenha uma parte ou uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1. O uso inclui um composto da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) para a administração a um sujeito em necessidade do mesmo em uma quantidade terapeu- ticamente eficaz.
[00273]A presente invenção fornece o uso dos compostos divulgados neste relatório para inibir a atividade de DOT1L em uma célula. O uso inclui contatar a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais entre os compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV).
[00274]Um outro aspecto da invenção se refere a um uso dos compostos divulgados neste relatório para reduzir o nível de metilação de resíduo de Lisina 79 da Histona H3 (H3-K79) em uma célula. O uso inclui contatar uma célula com um composto da presente invenção. Tal uso pode melhorar qualquer condição que é causada por ou potencializada pela atividade de DOT1 através de metilação de H3- K79.
[00275]Nas fórmulas apresentadas neste relatório, as variáveis podem ser selecionadas a partir dos grupos respectivos de porções químicas mais tarde definidas na descrição detalhada.
[00276]Além disso, a invenção fornece métodos para sintetizar os compostos precedentes. Após a síntese, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais entre os compostos pode ser formulada com um portador farmaceuticamente aceitável para a administração a um mamífero, particularmente seres humanos, para o uso na modulação de uma enzima epigenética. Em certas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis para tratar, prevenir, ou reduzir o risco de câncer ou para a fabricação de um medicamento para tratar, prevenir, ou reduzir o risco de câncer. Consequentemente, os compostos ou as formulações podem ser administrados, por exemplo, por intermédio de vias orais, parenterais, auriculares, oftálmicas, nasais, ou tópicas, para fornecer uma quantidade eficaz do composto ao mamífero.
[00277]Os compostos representativos da presente invenção incluem os compostos listados na Tabela 1.Tabela 1
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[00278]Conforme usado neste relatório, “alquila”, “alquila C1, C2, C3, C4, C5 ou C6” ou “alquila C1-C6” é intencionado a incluir C1, grupos hidrocarboneto alifáticos saturados de cadeia reta (linear) C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifáti- cos saturados de cadeia ramificada C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, alquila C1-C6 é intencionado a incluir grupos alquila C1, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de alquila incluem, porções tendo de um a seis átomo de carbonos, tais como, mas não limitadas a metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila ou n-hexila.
[00279]Em certas modalidades, um alquila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomo de carbonos (por exemplo, C1-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada), e em uma outra modalidade, um alquila de cadeia reta ou ramificada tem quatro ou menos átomo de carbonos.
[00280]Conforme usado neste relatório, o termo “cicloalquila” se refere a um sistema de mono ou múltiplos anéis de hidrocarboneto não aromático saturado ou insaturado tendo 3 a 30 átomo de carbonos (por exemplo, C3-C10). Exemplos de cicloalquila incluem, mas não são limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, ciclooctila, ciclopentenila, ciclohexenila, cicloheptenila, e ad- amantila. O termo “heterocicloalquila” se refere a um sistema de anel saturado ou insaturado não aromático de 5 a 8 membros monocíclico, de 8 a 12 membros bicícli- co, ou de 11 a 14 membros tricíclico tendo um ou mais heteroátomos (tal como O, N, S, ou Se). Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem, mas não são limitados a, piperazinila, pirrolidinila, dioxanila, morfolinila, e tetrahidrofuranila.
[00281]O termo “alquila opcionalmente substituído” se refere a alquila não substituído ou alquila tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais carbonos da estrutura de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hi- droxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxi- lato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocar- bonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfina- to, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarila- mino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[00282]Uma porção “arilalquila” ou “aralquila” é um alquila substituído com um arila (por exemplo, fenilmetila (benzila)). Uma porção “alquilarila” é um arila substituído com um alquila (por exemplo, metilfenila).
[00283]Conforme usado neste relatório, “ligante alquila” é intencionado a incluir grupos hidrocarboneto alifáticos divalentes saturados de cadeia reta (linear) C1, C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifáticos saturados de cadeia ramificada C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, ligante alquila C1-C6 é intencionado a incluir grupos ligante alquila C1, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de ligante alquila incluem porções tendo de um a seis átomos de carbono, tais como, mas não limitados a, metila (-CH2-), etila (-CH2CH2-), n-propila (-CH2CH2CH2-), i-propila (-CHCH3CH2-), n-butila (-CH2CH2CH2CH2-), s-butila (-CHCH3CH2CH2-), i-butila (-C(CH3) 2CH2-), n-pentila (- CH2CH2CH2CH2CH2-), s-pentila (-CHCH3CH2CH2CH2-) ou n-hexila (- CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
[00284]“Alquenila” inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e possível substituição aos alquilas descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla. Por exemplo, o termo “alquenila” inclui grupos alquenila de cadeia reta (por exemplo, etenila, propenila, butenila, pentenila, hexenila, hepteni- la, octenila, nonenila, decenila), e grupos alquenila de cadeia ramificada. Em certas modalidades, um grupo alquenila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono em sua estrutura (por exemplo, C2-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2-C6” inclui grupos alquenila contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui grupos alquenila contendo três a seis átomos de carbono.
[00285]O termo “alquenila opcionalmente substituído” se refere a alquenila não substituído ou alquenila tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono da estrutura de hidrocar- boneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarboni- lóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alqui- laminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfona- to, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e al- quilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfi- nila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, heterociclila, al- quilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[00286]“Alquinila” inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e possível substituição ao alquilas descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação tripla. Por exemplo, “alquinila” inclui grupos alquinila de cadeia reta (por exemplo, etinila, propinila, butinila, pentinila, hexinila, heptinila, octinila, noninila, decinila), e grupos alquinila de cadeia ramificada. Em certas modalidades, um grupo alquinila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono em sua estrutura (por exemplo, C2-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2-C6” inclui grupos alquinila contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui grupos alquinila contendo três a seis átomos de carbono.
[00287]O termo “alquinila opcionalmente substituído” se refere a alquinila não substituído ou alquinila tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono da estrutura de hidrocar- boneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarboni- lóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alqui- laminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfona- to, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e al- quilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfi- nila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterocicli- la, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[00288]Outras porções opcionalmente substituídas (tais como cicloalquila, heterocicloalquila, arila, ou heteroarila opcionalmente substituído) incluem as porções não substituídas e as porções tendo um ou mais entre os substituintes designados.
[00289]“Arila” inclui grupos com aromaticidade, incluindo sistemas “conjugados”, ou multicíclicos com pelo menos um anel aromático e não contêm qualquer heteroátomo na estrutura do anel. Exemplos incluem fenila, benzila, 1,2,3,4- tetrahidronaftalenila, etc.
[00290]Grupos “heteroarila” são grupos arila, conforme definido acima, exceto tendo de um a quatro heteroátomos na estrutura do anel, e também podem ser referidos como “aril heterociclos” ou “heteroaromáticos”. Conforme usado neste relatório, o termo “heteroarila” é intencionado a incluir um anel heterocíclico estável de 5 ou 6 membros monocíclico ou 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 membros bicíclico aromático que consiste em átomos de carbono e um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1 ou 1 a 2 ou 1 a 3 ou 1 a 4 ou 1 a 5 ou 1 a 6 heteroátomos, ou por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 heteroátomos, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre. O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR em que R é H ou outros substituintes, conforme definido). Os heteroátomos de nitrogênio e enxofre, opcionalmente, podem ser oxidados (isto é, N >O e S(O)p, onde p = 1 ou 2). Deve ser observado que o número total de átomos de S e O no heterociclo aromático não é mais do que 1.
[00291]Exemplos de grupos heteroarila incluem pirrol, furano, tiofeno, tiazol, isotiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oxazol, isoxazol, piridina, pirazina, pirida- zina, pirimidina e semelhantes.
[00292]Além disso, os termos “arila” e “heteroarila” incluem grupos arila e heteroarila multicíclicos, por exemplo, tricíclicos, bicíclicos, por exemplo, naftaleno, benzoxazol, benzodioxazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofeno, metilenodioxi- fenila, quinolina, isoquinolina, naftridina, indol, benzofurano, purina, benzofurano, deazapurina, indolizina.
[00293]No caso de anéis aromáticos multicíclicos, apenas um dos anéis precisa ser aromático (por exemplo, 2,3-dihidroindol), embora todos os anéis possam ser aromáticos (por exemplo, quinolina). O segundo anel também pode ser fundido ou ligado em ponte.
[00294]O anel aromático arila ou heteroarila pode ser substituído em uma ou mais posições do anel com tais substituintes, conforme descrito acima, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alcóxi, alquilcarbonilóxi, arilcarboni- lóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, alquilaminocar- bonila, aralquilaminocarbonila, alquenilaminocarbonila, alquilcarbonila, arilcarbonila, aralquilcarbonila, alquenilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquiltiocarboni- la, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilami- no, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbo- nilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxila- to, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática. Grupos arila também podem ser fundidos ou ligados em ponte com anéis alicíclicos ou heterocíclicos, que não são aromáticos, para formar um sistema multicíclico (por exemplo, tetralina, metilenodioxifenila).
[00295]Conforme usado neste relatório, “carbociclo” ou “anel carbocíclico” é intencionado a incluir qualquer estável anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo o número especificado de carbonos, qualquer um dos quais pode ser saturado, insatu- rado ou aromático. Por exemplo, um carbociclo C3-C14 é intencionado a incluir um anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Exemplos de carbociclos incluem, mas não são limitados a ci- clopropila, ciclobutila, ciclobutenila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclohexila, ciclohep- tenila, cicloheptila, cicloheptenila, adamantila, ciclooctila, ciclooctenila, ciclooctadieni- la, fluorenila, fenila, naftila, indanila, adamantila e tetrahidronaftila. Anéis ligados em ponte também são incluídos na definição de carbociclo, incluindo, por exemplo, [3,3,0]biciclooctano, [4,3,0]biciclononano, [4,4,0]biciclodecano e [2,2,2]biciclooctano. Um anel ligado em ponte ocorre quando um ou mais átomos de carbono se ligam a dois átomos de carbono não adjacentes. Em uma modalidade, anéis em ponte são um ou dois átomos de carbono. Deve ser observado que uma ponte sempre converte um anel monocíclico em um anel tricíclico. Quando um anel é ligado em ponte, os substituintes relatados para o anel também podem estar presentes na ponte. Anéis fundidos (por exemplo, naftila, tetrahidronaftila) e espiro também são incluídos.
[00296]Conforme usado neste relatório, “heterociclo” inclui qualquer estrutura do anel (saturada ou parcialmente insaturada) que contém pelo menos uma hete- roátomo no anel (por exemplo, N, O ou S). Exemplos de heterociclos incluem, mas não são limitados a morfolina, pirrolidina, tetrahidrotiofeno, piperidina, piperazina e tetra-hidrofurano.
[00297]Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não são limitados a, acridinila, azocinila, benzimidazolila, benzofuranila, benzotiofuranila, benzotiofenila, benzoxazolila, benzoxazolinila, benztiazolila, benztriazolila, benztetrazolila, benziso- xazolila, benzisotiazolila, benzimidazolinila, carbazolila, 4aH-carbazolila, carbolinila, cromanila, cromenila, cinolinila, decahidroquinolinila, 2H,6H-1,5,2-ditiazinila, dihidro- furo[2,3-b]tetra-hidrofurano, furanila, furazanila, imidazolidinila, imidazolinila, imi- dazolila, 1H-indazolila, indolenila, indolinila, indolizinila, indolila, 3H-indolila, isatinoi- la, isobenzofuranila, isocromanila, isoindazolila, isoindolinila, isoindolila, isoquinolini- la, isotiazolila, isoxazolila, metilenodioxifenila, morfolinila, naftiridinila, octahidroiso- quinolinila, oxadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazol5(4H)-ona, oxazolidinila, oxazolila, oxindolila, piri- midinila, fenantridinila, fenantrolinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxatinila, fenoxazini- la, ftalazinila, piperazinila, piperidinila, piperidonila, 4-piperidonila, piperonila, pteri- dinila, purinila, piranila, pirazinila, pirazolidinila, pirazolinila, pirazolila, piridazinila, piridooxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinila, piridila, pirimidinila, pirrolidinila, pirrolinila, 2H-pirrolila, pirrolila, quinazolinila, quinolinila, 4H-quinolizinila, quinoxalini- la, quinuclidinila, tetrahidrofuranila, tetrahidroisoquinolinila, tetrahidroquinolinila, tetrazolila, 6H-1,2,5-tiadiazinila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, tiantrenila, tiazolila, tienila, tienotiazolila, tienooxazolila, tienoimi- dazolila, tiofenila, triazinila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,5-triazolila, 1,3,4- triazolila e xantenila.
[00298]O termo “substituído”, conforme usado neste relatório, significa que qualquer um ou mais átomos de hidrogênio no átomo designado é substituído com uma seleção a partir dos grupos indicados, contanto que a valência normal do átomo designado não seja excedida, e que a substituição resulte em um composto estável. Quando um substituinte é oxo ou ceto (isto é, = O), então 2 átomos de hidrogênio no átomo são substituídos. Substituintes ceto não estão presentes nas porções aromáticas. Ligações duplas no anel, conforme usado neste relatório, são ligações duplas que são formadas entre dois átomos no anel adjacentes (por exemplo, C = C, C = N ou N = N). “Composto estável” e “estrutura estável” indicam um composto que é su-ficientemente robusto para sobreviver ao isolamento em um grau útil de pureza a partir de uma mistura de reação, e a formulação em um agente terapêutico eficaz.
[00299]Quando uma ligação a um substituinte é mostrada cruzar uma ligação que conecta dois átomos em um anel, depois tal substituinte pode ser ligado a qualquer átomo no anel. Quando um substituinte é listado sem indicar o átomo por intermédio do qual tal substituinte é ligado ao restante do composto de uma dada fórmula, depois tal substituinte pode ser ligado por intermédio de qualquer átomo em tal fórmula. Combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis, mas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis.
[00300]Quando qualquer variável (por exemplo, R1) ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou fórmula para um composto, sua definição em cada ocorrência é independente de sua definição a cada outra ocorrência. Assim, por exemplo, se um grupo é mostrado ser substituído com 0 a 2 porções R1, então o grupo, opcionalmente, pode ser substituído com até duas porções R1 e R1 em cada ocorrência é selecionado independentemente da definição de R1. Além disso, as combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis, mas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis.
[00301]O termo “hidróxi” ou “hidroxila” inclui grupos com um -OH ou -O-.
[00302]Conforme usado neste relatório, “halo” ou “halogênio” se refere a flúor, cloro, bromo e iodo. O termo “perhalogenado”, em geral, se refere a uma porção em que todos os átomos de hidrogênio são substituídos por átomos de halogênio. O termo “haloalquila” ou “haloalcoxila” se refere a um alquila ou alcoxila substituído com um ou mais átomos de halogênio.
[00303]O termo “carbonila” inclui compostos e porções que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de oxigênio. Exemplos de porções contendo um carbonila incluem, mas não são limitados a aldeídos, cetonas, ácidos carboxílicos, amidas, ésteres, anidridos, etc.
[00304]O termo “carboxila” se refere a -COOH ou seu éster alquílico C1-C6.
[00305]“Acila” inclui porções que contêm o radical acila (R-C(O)-) ou um grupo carbonila. “Acila substituído” inclui grupos acila onde um ou mais entre os átomos de hidrogênio são substituídos, por exemplo, por grupos alquila, grupos al- quinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ari- loxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfa- to, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diari- lamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[00306]“Aroila” inclui porções com uma arila ou porção heteroaromática ligada a um grupo carbonila. Exemplos de grupos aroila incluem fenilcarbóxi, naftil car- bóxi, etc.
[00307]“Alcoxialquila”, “alquilaminoalquila”, e “tioalcoxialquila” incluem grupos alquila, conforme descrito acima, em que os átomos de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre substituem um ou mais átomos de carbono da estrutura de hidrocarboneto.
[00308]O termo “alcóxi” ou “alcoxila” inclui grupos alquila, alquenila e alquini- la substituídos e não substituídos, covalentemente ligados a um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos alcóxi ou radicais alcoxila incluem, mas não são limitados a grupos metóxi, etóxi, isopropilóxi, propóxi, butóxi e pentóxi. Exemplos de grupos alcóxi substituídos incluem grupos alcóxi halogenados. Os grupos alcóxi podem ser substituídos com grupos, tais como alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquil- carbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcar- bonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialqui- laminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfa- moila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou porções aromáticas ou heteroaromáticas. Exemplos de grupos alcóxi substituídos com halogênio incluem, mas não são limitados a fluorometóxi, difluorometóxi, trifluo- rometóxi, clorometóxi, diclorometóxi e triclorometóxi.
[00309]O termo “éter” ou “alcóxi” inclui compostos ou porções que contêm um oxigênio ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Por exemplo, o termo inclui “alcoxialquila”, que se refere a um grupo alquila, alquenila, ou alquinila co- valentemente ligado a um átomo de oxigênio que é covalentemente ligado a um grupo alquila.
[00310]O termo “éster” inclui compostos ou porções que contêm um carbono ou um heteroátomo ligado a um átomo de oxigênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonila. O termo “éster” inclui grupos alcoxicarbóxi, tais como metoxicarbo- nila, etoxicarbonila, propoxicarbonila, butoxicarbonila, pentoxicarbonila, etc.
[00311]O termo “tioalquila” inclui compostos ou porções que contêm um grupo alquila conectado com um átomo de enxofre. Os grupos tioalquila podem ser substituídos com grupos, tais como alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, car- boxiácido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilamino- carbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, amino (incluindo alqui- lamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidri- la, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfo- namido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou porções aromáticas ou heteroaromáticas.
[00312]O termo “tiocarbonila” ou “tiocarbóxi” inclui compostos e porções que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de enxofre.
[00313]O termo “tioéter” inclui porções que contêm um átomo de enxofre ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Exemplos de tioéteres incluem, mas não são limitados a alqutioalquilas, alqutioalquenilas e alqutioalquinilas. O termo “alqutioalquilas” incluem porções com um grupo alquila, alquenila, ou alquinila ligado a um átomo de enxofre que é ligado a um grupo alquila. Similarmente, o ter mo “alqutioalquenilas” se refere às porções em que um grupo alquila, alquenila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um grupo alquenila; e “alqutioalquinilas” se refere às porções em que um grupo alquila, alque- nila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um grupo alquinila.
[00314]Conforme usado neste relatório, “amina” ou “amino” se refere a -NH2 não substituído ou substituído. “Alquilamino” inclui grupos dos compostos em que o nitrogênio de -NH2 é ligado a pelo menos uma grupo alquila. Exemplos de grupos alquilamino incluem benzilamino, metilamino, etilamino, fenotilamino, etc. “Dialquila- mino” inclui grupos em que o nitrogênio de -NH2 é ligado a pelo menos dois grupos alquila adicionais. Exemplos de grupos dialquilamino incluem, mas não são limitados a dimetilamino e dietilamino. “Arilamino” e “diarilamino” incluem grupos em que o nitrogênio é ligado a pelo menos um ou dois grupos arila, respectivamente. “Amino- arila” e “aminoarilóxi” se referem a arila e arilóxi substituído com amino. “Alquilarila- mino”, “alquilaminoarila” ou “arilaminoalquila” se refere a um grupo amino que é ligado a pelo menos uma grupo alquila e a pelo menos um grupo arila. “Alcaminoalquila” se refere a um grupo alquila, alquenila, ou alquinila ligado a um átomo de nitrogênio que também é ligado a um grupo alquila. “Acilamino” inclui grupos em que nitrogênio é ligado a um grupo acila. Exemplos de acilamino incluem, mas não são limitados a grupos alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido.
[00315]O termo “amida” ou “aminocarbóxi” inclui compostos ou porções que contêm um átomo de nitrogênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocarbonila. O termo inclui grupos “alcaminocarbóxi” que incluem grupos alquila, alquenila ou alquinila ligados a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocarbonila. Ele também inclui grupos “arilaminocarbóxi” que incluem porções arila ou heteroarila ligadas a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocarbonila. Os termos “alquilaminocarbóxi”, “alquenilami- nocarbóxi”, “alquinilaminocarbóxi” e “arilaminocarbóxi” incluem porções em que porções alquila, alquenila, alquinila e arila, respectivamente, são ligadas a um átomo de nitrogênio que é, por sua vez, ligado ao carbono de um grupo carbonila. As amidas podem ser substituídas com substituintes, tais como alquila de cadeia reta, alquila de cadeia ramificada, cicloalquila, arila, heteroarila ou heterociclo. Os substituintes em grupos amida podem ser adicionalmente substituídos.
[00316]Os compostos da presente invenção que contêm nitrogênios podem ser convertidos em N-óxidos através do tratamento com um agente oxidante (por exemplo, ácido 3-cloroperoxibenzoico (mCPBA) e/ou peróxidos de hidrogênio) para fornecer outros compostos da presente invenção. Assim, todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados são considerados, quando deixados por valência e estrutura, incluir tanto o composto mostrado e seu derivado de N-óxido (que pode ser designado como N >O ou N+-O-). Além disso, em outros exemplos, os nitrogênios nos compostos da presente invenção podem ser convertidos em compostos de N-hidróxi ou N-alcóxi. Por exemplo, compostos de N-hidróxi podem ser preparados através de oxidação da amina precursora através de um agente oxidante, tal como m-CPBA. Todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados também são considerados, quando deixados por valência e estrutura, cobrir o composto mostrado e seus derivados de N-hidróxi (isto é, N-OH) e N-alcóxi (isto é, N-OU, em que R é alquila C1-C6, alquenila C1-C6 , alquinila C1-C6 substituído ou não substituído, carbociclo de 3 a 14 membros ou heterociclo de 3 a 14 membros).
[00317]No presente relatório descritivo, a fórmula estrutural do composto representa um determinado isômero por conveniência, em alguns casos, mas a presente invenção inclui todos os isômeros, tais como isômeros geométricos, isômeros ópticos com base em um carbono assimétrico, estereoisômeros, tautômer- os, e semelhantes. Além disso, um polimorfismo de cristal pode estar presente para os compostos representados pelo fórmula. Deve ser observado que qualquer forma de cristal, mistura de forma de cristal, ou anidrido ou hidrato do mesmo é incluído no escopo da presente invenção. Além disso, o assim chamado metabólito que é produzido pela degradação do presente composto in vivo é incluído no escopo da presente invenção.
[00318]“Isomerismo” significa compostos que têm fórmulas moleculares idênticas, mas diferem na sequência de união de seus átomos ou no arranjo de seus átomos no espaço. Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos no espaço são denominados “estereoisômeros”. Os estereoisômeros que não são imagens de espelho são denominados “diastereoisômeros”, e estereoisômeros que são imagens de espelho não superponíveis são denominados “enantiômeros” ou, algumas vezes, isômeros ópticos. Uma mistura contendo quantidades iguais de formas enantioméri- cas individuais de quiralidade oposta é denominada uma “mistura racêmica”.
[00319]Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é denominado um “centro quiral”.
[00320]“Isômero quiral” significa um composto com pelo menos um centro quiral. Os compostos com mais do que um centro quiral podem existir como um dia- stereômero individual ou como uma mistura de diastereômeros, denominada “mistura diastereomérica”. Quando um centro quiral está presente, um estere- oisômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta (R ou S) de tal centro quiral. A configuração absoluta se refere ao arranjo no espaço dos substituintes ligados ao centro quiral. Os substituintes ligados ao centro quiral sob consideração são classificados de acordo com a Sequence Rule de Cahn, Ingold e Prelog. (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn e Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (Londres), 612; Cahn et al., Expe- rientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).
[00321]“Isômero geométrico” significa os diastereômeros que devem sua existência à rotação retardada sobre as ligações duplas ou um ligante cicloalquila (por exemplo, 1,3-ciclobutila). Estas configurações são diferenciadas em seus nomes pelos prefixos cis e trans, ou Z e E, que indicam que os grupos estão no mesmo lado ou lados opostos da ligação dupla na molécula, de acordo com as regras de Cahn-Ingold-Prelog.
[00322]Deve ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como isômeros quirais ou isômeros geométricos diferentes. Também deve ser entendido que quando os compostos têm formas isoméricas quirais ou isoméricas geométricas, todas as formas isoméricas são incluídas no escopo da presente invenção, e a nomenclatura do compostos não exclui quaisquer formas isoméricas.
[00323]Por exemplo, os compostos da Fórmula (I) incluem aqueles dos isômeros quirais e isômeros geométricos seguintes.
Figure img0071
[00324]Além disso, as estruturas e outros compostos debatidos nesta inven- ção incluem todos os isômeros atrópicos dos mesmos. “Isômeros atrópicos” são um tipo de estereoisômero em que os átomos de dois isômeros são arranjados diferentemente no espaço. Os isômeros atrópicos devem sua existência a uma rotação restrita causada por bloqueio de rotação de grupos grandes sobre uma ligação central. Tais isômeros atrópicos tipicamente existem como uma mistura, entretanto, como um resultado de avanços recentes em técnicas de cromatografia, foi possível separar misturas de dois isômeros atrópicos em casos selecionados.
[00325]“Tautômero” é um de dois ou mais isômeros estruturais que existem em equilíbrio e é facilmente convertido a partir de uma forma isomérica em uma outra. Esta conversão resulta na migração formal de um átomo de hidrogênio acompanhada por uma troca de ligações duplas conjugadas adjacentes. Os tautômeros existem como uma mistura de um grupo tautomérico em solução. Em soluções onde a tautomerização é possível, um equilíbrio químico dos tautômeros será obtido. A razão exata dos tautômeros depende de vários fatores, incluindo temperatura, solvente e pH. O conceito de tautômeros que são interconversíveis por tau- tomerizações é chamado tautomerismo.
[00326]Entre os vários tipos de tautomerismo que são possíveis, dois são comumente observados. No tautomerismo de ceto-enol, ocorre uma troca simultânea de elétrons e um átomo de hidrogênio. O tautomerismo da cadeia do anel surge como um resultado do grupo aldeído (-CHO) em uma molécula da cadeia de açúcar reagindo com um entre os grupos hidróxi (-OH) na mesma molécula para fornecer à mesma uma forma cíclica (na forma de anel), conforme exibido por glicose.
[00327]Os pares tautoméricos comuns são: tautomerismo de cetona-enol, amida-nitrila, lactama-lactima, amida-ácido imídico em anéis heterocíclicos (por exemplo, em nucleobases, tais como guanina, timina e citosina), amina-enamina e enamina-enamina. Os benzimidazóis também exibem tautomerismo, quando o ben- zimidazol contém um ou mais substituintes nas posições 4, 5, 6 ou 7, surge a possi- bilidade de isômeros diferentes. Por exemplo, 2,5-dimetil-1H-benzo[d]imidazol pode existir em equilíbrio com seu isômero 2,6-dimetil-1H-benzo[d]imidazol por intermédio de tautomerização.
Figure img0072
2,5-dimetil-1 H-bezo[d]imidazol 2,6-dimetil-1 H-bezo[d]imidazol
[00328]Um outro exemplo de tautomerismo é mostrado abaixo.
Figure img0073
[00329]Deve ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como tautômeros diferente. Também deve ser entendido que, quando compostos têm formas tautoméricas, todas as formas tautoméricas são incluídas no escopo da presente invenção, e a nomenclatura dos compostos não exclui qualquer forma tautomérica.
[00330]O termo “polimorfos de cristal”, “polimorfos” ou “formas de cristal” significa estruturas cristalinas em que um composto (ou um sal ou solvato do mesmo) pode ser cristalizado em arranjos de empacotamento de cristal diferentes, todos os quais têm a mesma composição elementar. As formas de cristal diferentes usualmente têm padrões de difração de raios X, espectros de infravermelho, pontos de fusão, dureza em densidade, forma de cristal, propriedades ópticas e elétricas, estabilidade e solubilidade diferentes. O solvente de recristalização, taxa de cristalização, temperatura de armazenagem, e outros fatores podem fazer com que uma forma de cristal domine. Os polimorfos de cristal dos compostos podem ser preparados através de cristalização sob condições diferentes.
[00331]Os compostos da invenção podem ser cristalinos, semicristalinos, não cristalinos, amorfos, mesomorfos, etc.
[00332]Os compostos da Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV) incluem os compostos por si só, assim como seus N-óxidos, sais, seus solvatos, e seus pró- fármacos, se aplicáveis. Um sal, por exemplo, pode ser formado entre um ânion e um grupo positivamente carregado (por exemplo, amino) em um composto de purina ou 7-deazapurina substituída. Os ânions adequados incluem cloreto, brometo, iode- to, sulfato, bissulfato, sulfamato, nitrato, fosfato, citrato, metanossulfonato, trifluoroa- cetato, glutamato, glicuronato, glutarato, malato, maleato, succinato, fumarato, tartra- to, tosilato, salicilato, lactato, naftalenossulfonato e acetato. Do mesmo modo, um sal também pode ser formado entre um cátion e um grupo negativamente carregado (por exemplo, carboxilato) em um composto de purina ou 7-deazapurina substituída. Os cátions adequados incluem íon sódio, íon potássio, íon magnésio, íon cálcio, e um cátion amônio, tal como íon tetrametilamônio. Os compostos de purina ou 7- deazapurina substituída também incluem aqueles sais contendo átomos de nitrogênio quaternários. Exemplos de pró-fármacos incluem ésteres e outros derivados far- maceuticamente aceitáveis, que, sob a administração a um sujeito, são capazes de fornecer compostos de purina ou 7-deazapurina substituída ativos.
[00333]Adicionalmente, os compostos da presente invenção, por exemplo, os sais dos compostos, podem existir na forma hidratada ou desidratada (o anidro) ou como solvatos com outras moléculas de solvente. Os exemplos não limitantes de hidratos incluem hemi-hidratos, mono-hidratos, di-hidratos, tri-hidratos, etc. Os exemplos não limitantes de solvatos incluem solvatos de etanol, solvatos de acetona, etc.
[00334]“Solvato” significa formas de adição de solvente que contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de solvente. Alguns compostos têm uma tendência a capturar uma razão molar fixa de moléculas de solvente no estado sólido cristalino, assim, formando um solvato. Se o solvente é água, o solvato formado é um hidrato; e se o solvente é álcool, o solvato formado é um alcoolato. Os hidratos são formados pela combinação de uma ou mais moléculas de água com uma molécula da substância em que a água retém seu estado molecular como H2O. Um hemi-hidrato é formado pela combinação de uma molécula de água com mais do que uma molécula da substância em que a água retém seu estado molecular como H2O.
[00335]Conforme usado neste relatório, o termo “análogo” se refere a um composto químico que é estruturalmente similar a um outro, mas difere levemente na composição (como na substituição de um átomo por um átomo de um elemento diferente ou na presença de um grupo funcional particular, ou a substituição de um grupo funcional por um outro grupo funcional). Assim, um análogo é um composto que é similar ou comparável em função e aparência, mas não em estrutura ou origem ao composto de referência.
[00336]Conforme definido neste relatório, o termo “derivado” se refere a compostos que têm uma estrutura nuclear comum, e são substituídos com vários grupos, conforme descrito neste relatório. Por exemplo, todos os compostos representados pela Fórmula (I) são compostos de purina substituída ou compostos de 7- deazapurina substituída, e têm a Fórmula (I) como um núcleo comum.
[00337]O termo “bioisóstero” se refere a um composto resultante da troca de um átomo ou de um grupo de átomos com um outro átomo ou grupo de átomos amplamente similar. O objetivo de uma substituição bioisostérica é criar um novo composto com propriedades biológicas similares ao composto precursor. A substituição bioisostérica pode ser com base fisicoquímica ou topológica. Exemplos de bioisós- teros de ácido carboxílico incluem, mas não são limitados a, acil sulfonimidas, te- trazóis, sulfonatos e fosfonatos. Veja, por exemplo, Patani e LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147 - 3176, 1996.
[00338]A presente invenção é intencionada a incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos presentes compostos. Os isótopos incluem aqueles átomos tendo o mesmo número atômico, mas números de massa diferentes. Por via de exemplo geral e sem limitação, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério, e isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.
2. Síntese de Compostos de Purina Substituída e Compostos de 7- Deazapurina Substituída
[00339]A presente invenção fornece métodos para a síntese dos compostos das Fórmulas (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) e (IV). A presente invenção também fornece métodos detalhados para a síntese de vários compostos da presente invenção divulgados, de acordo com os esquemas seguintes mostrados nos Exemplos.
[00340]Por toda a descrição, onde as composições são descritas por apresentar, incluir ou compreender componentes específicos, é considerado que as composições também consistem essencialmente de, ou consistem dos componentes citados. Similarmente, onde os métodos ou processos são descritos por apresentar, incluir, ou compreender etapas de processo específicas, os processos também consistem essencialmente de, ou consistem das etapas de processamento citadas. Além disso, deve ser entendido que a ordem das etapas ou ordem para realizar certas ações é imaterial, contanto que a invenção permaneça operável. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser simultaneamente conduzidas.
[00341]Os processos sintéticos da invenção podem tolerar uma ampla variedade de grupos funcionais, portanto, vários materiais de partida substituídos podem ser usados. Os processos, em geral, fornecem o composto final desejado no ou perto do fim do processo global, embora possa ser desejável, em certos exemplos, converter adicionalmente o composto em um sal farmaceuticamente aceitável, éster, ou pró-fármaco do mesmo.
[00342]Os compostos da presente invenção podem ser preparados em uma variedade de maneiras usando materiais de partida comercialmente disponíveis, compostos conhecidos na literatura, ou a partir de intermediários facilmente preparados, utilizando métodos sintéticos e procedimentos padrão conhecidos àqueles habilitados na técnica, ou que serão evidentes ao técnico habilitado na luz dos ensinamentos neste relatório. Os métodos sintéticos e procedimentos padrão para a preparação de moléculas orgânicas e transformações e manipulações de grupo funcional podem ser obtidos a partir da literatura científica relevante ou a partir de textos padrão no campo. Embora não limitados a qualquer uma ou várias fontes, textos clássicos, tais como Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser e M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley e Sons (1994); e L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley e Sons (1995), incorporados como referência neste relatório, são textos de referência úteis e reconhecidos de síntese orgânica conhecida àqueles habilitados na técnica. As descrições seguintes de métodos sintéticos são designadas para ilustrar, mas não limitar, os procedimentos gerais para a preparação dos compostos da presente invenção.
[00343]Os compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por uma variedade de métodos familiares àqueles habilitados na técnica. Os compostos desta invenção com as Fórmulas (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) e (IV) podem ser preparados, de acordo com os procedimentos ilustrados nos Esquemas A a W abaixo, a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis ou materiais de partida que podem ser preparados usando procedimentos da literatura. Os grupos R (tais como R, R’, e Ra) nos Esquemas A a P podem corresponder às variáveis (isto é, R1, R2, Rb, e Rc), conforme definido na Fórmula (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IV), a menos que de outro modo especificado. “PG” nos esquemas se refere a um grupo de proteção.
[00344]Uma pessoa de habilidade comum na técnica observará que, durante as sequências de reação e esquemas sintéticos descritos neste relatório, a ordem de certas etapas pode ser modificada, tal como a introdução e remoção de grupos de proteção.
[00345]Uma pessoa de habilidade comum na técnica reconhecerá que certos grupos podem exigir a proteção a partir das condições de reação por intermédio do uso de grupos de proteção. Os grupos de proteção também podem ser usados para diferenciar grupos funcionais similares em moléculas. Uma lista de grupos de proteção e como introduzir e remover estes grupos pode ser encontrada em Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1999.
[00346]Os grupos de proteção preferidos incluem, mas não são limitados a: Para a porção hidroxila: TBS, benzila, THP, Ac Para ácidos carboxílicos: éster benzílico, éster metílico, éster etílico, éster alílico Para aminas: Cbz, BOC, DMB Para dióis: Ac (x2) TBS (x2), ou quando tomados juntos acetonidas Para tióis: Ac Para benzimidazóis: SEM, benzila, PMB, DMB Para aldeídos: di-alquil acetais, tais como dimetóxi acetal ou dietil acetila.
[00347]Nos esquemas de reação descritos neste relatório, múltiplos estere- oisômeros podem ser produzidos. Quando nenhum estereoisômero particular é indicado, significa todos os estereoisômeros possíveis que podem ser produzidos a partir da reação. Uma pessoa de habilidade comum na técnica reconhecerá que as reações podem ser otimizadas para fornecer um isômero preferencialmente, ou novos esquemas podem ser desenvolvidos para produzir um isômero único. Se as misturas são produzidas, técnicas, tais como cromatografia de camada delgada preparativa, HPLC preparativa, HPLC quiral preparativa, ou SFC preparativa, podem ser usadas para separar os isômeros.
[00348]As abreviações seguintes são usadas por todo o relatório descritivo e são definidas abaixo: AA acetato de amônio Ac acetila ACN acetonitrila AcOH ácido acético atm atmosfera Bn benzila BOC terc-butóxi carbonila BOP hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-ilóxi)tris(dimetilamino)fosfônio Cbz benziloxicarbonila COMU hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etóxi-2-oxoetilidenamino- óxi)dimetilamino-morfolino-carbênio d dias DBU 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno DCE 1,2 dicloroetano DCM diclorometano DEA dietilamina DEAD azodicarboxilato de dietila DIAD azodicarboxilato de di-isopropila DiBAL-H hidreto de di-isobutilaluminínio DIPEA N,N-di-isopropiletilamina (base de Hunig) DMAP N,N-dimetil-4-aminopiridina DMB 2,4 dimetoxibenzila DMF dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido DPPA difenilfosforil azida EA ou EtOAc acetato de etila EDC ou EDCI N-(3-dimetilaminopropil)-N‘-etilcarbodi-imida ELS Dispersão de Luz Evaporativa ESI- Modo eletrospray negativo ESI+ Modo eletrospray positivo Et2O éter dietílico Et3N ou TEA trietilamina EtOH etanol FA ácido fórmico FC cromatografia instantânea h horas H2O água HATU hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N‘,N‘- tetrametilurônio HCl ácido clorídrico HOAT 1-hidróxi-7-azabenzotriazol HOBt 1-hidroxibenzotriazol HOSu N-hidroxisuccinimida HPLC cromatografia líquida de alto desempenho Inj. Vol. Volume de injeção I.V. ou IV intravenoso KHMDs hexametildisilazida de potássio LC/MS ou LC-MS cromatografia líquida espectro de massas LDA lítio diisopropilamida LG grupo de partida LiHMs lítio hexametildisilazida M Molar m/z razão massa/carga m-CPBA ácido meta-cloroperbenzoico MeCN acetonitrila MeODd4-metanol MeOHmetanol MgSO4 sulfato de magnésio min minutos MS espectrometria de massas ou espectro de massas Ms mesila MsCl cloreto de metanossulfonila MsO mesilato MWI irradiação por microondas Na2CO3 carbonato de sódio NaHCO3 bicarbonato de sódio NaHMDs sódio hexametildisilazida NaOH hidróxido de sódio NIS N-iodosuccinimida RMN Ressonância magnética nuclear o/n ou O/N durante a noite PE éter de petróleo PG grupo de proteção PMB para-metoxibenzila PPAA anidrido cíclico de ácido 1-propanofosfônico ppm partes por milhão prep HPLC cromatografia líquida de alto desempenho preparativa prep TLC cromatografia de camada delgada preparativa p-TsOH ácido para-toluenossulfônico rt ou RT temperatura ambiente SEM 2-(trimetilsilil)etoximetila SEMCl cloreto de (trimetilsilil)etoximetila SFC cromatografia supercrítica SGC cromatografia em gel de sílica STAB triacetoxiboro-hidreto de sódio TBAF fluoreto de tetra-n-butilamônio TFA ácido trifluoroacético TfO triflato THF tetra-hidrofurano THP tetrahidropirano TLC cromatografia de camada delgada Ts tosila TsOH ácido tósico UV ultravioleta
[00349]A invenção fornece métodos para fabricar os compostos da invenção. Os esquemas seguintes representam químicas exemplares disponíveis para sintetizar os compostos da invenção.Esquema A: Síntese de 5’-Amino Purina Ribose (A-V)
Figure img0074
[00350]Os intermediários de 5’-amino purina-ribose (A-V) podem ser sintetizados, conforme representado no Esquema A acima. Um derivado de 6-Cl adenosi- na protegido adequado (A-I) é convertido em um derivado de 6-amino (A-II) através do tratamento com a amina apropriada (incluindo amônia) na presença de uma base, tal como Et3N, K2CO3 ou base de Hunig em solvente, tal como MeCN ou DMF, THF, iPrOH ou uma mistura dos mesmos. Se necessário, a reação pode ser aquecida a 100 °C (se a temperatura exigida for maior do que o ponto de ebulição de um ou mais entre os componentes na mistura, a reação pode ser realizada em um tubo vedado). Os grupos R no esquema podem representar os grupos de proteção alquila (por exemplo, 2,4 dimetoxibenzila). O produto de 6-amino (A-II) pode ser transformado no intermediário 5’-azido (A-III) através da conversão do grupo 5’-hidroxila em um grupo de partida, tal como MsO (isto é, CH3S(O)2O) através do tratamento com cloreto de metanossulfonila (MsCl) na presença de uma base, tal como Et3N, piridina ou K2CO3 em um solvente inerte, tal como CH2Cl2, THF, MeCN, DMF ou uma mistura dos mesmos. O grupo de partida 5’ depois é deslocado com ânion azida a partir de NaN3 em um solvente inerte, tal como DMF. Alternativamente, (A-II) pode ser diretamente transformado em (A-III) através do tratamento com DPPA, Ph3P, e DIAD em um solvente, tal como THF. O grupo azido de (A-III) pode ser reduzido na amina primária (A-IV) através da redução com H2 na presença de um catalisador de metal (por exemplo, Pd/C, PtO2) ou através de uma reação de Staudinger com uma fosfi- na, tal como Ph3P ou PMe3. A amina primária (A-IV) pode ser convertida na amina secundária (A-V) através do tratamento com a cetona ou aldeído apropriada na presença de um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3 ou NaCNBH3. Reagentes adicionais, tais como Ti(OiPr)4, podem ser adicionados.
[00351]Alternativamente, o intermediário 5’-hidróxi (A-II) pode ser tratado com a sulfonamida (A-VI), DEAD e Ph3P em um solvente inerte, tal como THF. O produto de sulfonamida resultante depois pode ser tratado com benzenotiol na presença de uma base, tal como K2CO3, Cs2CO3, para fornecer a amina secundária (A-V).
[00352]Estas sequências de reação acima também podem ser aplicadas aos derivados de lixose partindo de (A-VII) para fornecer o diastereômero com configu-ração oposta na posição 5’.
Figure img0075
[00353]Um conjunto similar de sequências de reação pode ser utilizado para 2’-deóxi, ou 3’-deóxi, ou ribose ou lixose substituída (A-VIII) acima para obter intermediários de 5’-amino purina-ribose/lixose.
[00354]Um método alternativo para a introdução de um grupo 6-NH2, con- forme mostrado abaixo, é por intermédio do tratamento de derivados de (A-IX) com NaN3 para produzir um intermediário de 6-azido, seguido por redução à porção NH2 (A-X) com uma trialquil fosfina, tal como PMe3 ou PPh3.
Figure img0076
Esquema B: 5’ Síntese de Amino 7-Deazapurina Ribose
Figure img0077
[00355]Os intermediários de 5’-amino-7-deazapurina-ribose (B-V) podem ser sintetizados, conforme representado no Esquema B acima. Um intermediário de 7- deazapurina-ribose protegida adequado contendo um substituinte 6-cloro (B-I) pode ser convertido no derivado de 6-amino correspondente (B-II) por intermédio do tratamento com a amina apropriada (incluindo amônia) na presença de uma base, tal como Et3N, K2CO3 ou base de Hunig em solvente, tal como MeCN ou DMF, THF, iPrOH ou uma mistura dos mesmos. Se necessário, a reação pode ser aquecida a 100 °C (se a temperatura exigida for maior do que o ponto de ebulição de um ou mais entre os componentes na mistura, a reação pode ser realizada em um tubo vedado). Os grupos R no esquema podem representar grupos de proteção alquila (por exemplo, 2, 4 dimetoxibenzila). O produto de 6-amino (B-II) pode ser transformado no intermediário de 5’-azido (B-III) através da conversão do grupo 5’-hidroxila em um grupo de partida, tal como MsO através do tratamento com MsCl na presença de uma base, tal como Et3N, piridina ou K2CO3 em um solvente inerte, tal como CH2Cl2, THF, MeCN, DMF ou uma mistura dos mesmos. O grupo de partida 5’ depois é deslocado com ânion azida a partir de uma fonte de azida, tal como NaN3 em um solvente inerte, tal como DMF. Alternativamente, (B-II) pode ser diretamente transformado em (B-III) através do tratamento com DPPA, Ph3P e DIAD em um solvente, tal como THF. O grupo azido de (B-III) pode ser reduzido à amina primária (B-IV) através da redução com H2 na presença de um catalisador de metal (por exemplo, Pd/C, PtO2) ou através de uma reação de Staudinger com uma fosfina, tal como Ph3P ou PMe3. A amina primária (B-IV) pode ser convertido na amina secundária (B-V) através do tratamento com a cetona ou aldeído apropriada na presença de um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3 ou NaCNBH3. Reagentes adicionais, tais como Ti(OiPr)4, podem ser adicionados. Alternativamente, o intermediário de 5’- hidróxi (B-II) pode ser tratado com a sulfonamida (B-VI), DEAD e Ph3P em um solvente inerte, tal como THF. O produto de sulfonamida resultante depois pode ser tratado com benzenotiol na presença de uma base, tal como K2CO3, Cs2CO3 para fornecer a amina secundária (B-V). Estas sequências de reação também podem ser aplicadas a derivados de lixose partindo de (B-VII) para fornecer o diastereoisômero com configuração oposta na posição 5’.
Figure img0078
[00356]Um conjunto similar de sequências de reação pode ser utilizado para 2’-deóxi, ou 3’-deóxi, ou ribose ou lixose substituída (B-VIII) acima para obter intermediários de 5’-amino 7-deazapurina-ribose/lixose.
[00357]Um método alternativo para a introdução de um grupo 6-NH2, conforme mostrado abaixo, é através do tratamento de derivados de (B-IX) com NaN3 para produzir um intermediário de 6-azido, seguido por redução à porção NH2 (B-X) com uma trialquil fosfina, tal como PMe3 ou PPh3.
Figure img0079
Esquema C: Síntese de Intermediários de Purina-Carbocíclicos
Figure img0080
[00358]Os intermediários carbocíclicos de 5’-amino purina (C-X) podem ser preparados, conforme representado no Esquema C. O ciclopentano (C-I) é opcionalmente protegido por métodos conhecidos àqueles de habilidade comum na técnica para fornecer (C-II). (C-II) é tratado com a 4,6-dicloropirimidina-5-amina apropriada na presença de uma base, tal como Et3N, em um solvente prótico, tal como n- butanol. A reação é aquecida ou submetida às condições de micro-ondas para fornecer o intermediário (C-III). O intermediário de purina (C-V) é produzido através do tratamento de (C-III) com o ortoéster (C-IV) na presença de um ácido, tal como AcOH. Usualmente, a reação é aquecida. O substituinte 6-amino pode ser introduzido através do tratamento com a amina apropriada (incluindo amônia) na presença de uma base, tal como Et3N, K2CO3 ou base de Hunig em solvente, tal como MeCN ou DMF, THF, iPrOH, ou uma mistura dos mesmos. Se necessário, a reação pode ser aquecida a 100 °C (se a temperatura exigida for maior do que o ponto de ebulição de um ou mais entre os componentes na mistura, a reação pode ser real- izada em um tubo vedado). Os grupos R no esquema podem representar grupos de proteção alquila (por exemplo, 2, 4 dimetoxibenzila). O produto de 6-amino (C-VI) pode ser transformado no intermediário de 5’-azido (C-VII) através da conversão de o grupo 5’-hidroxila em um grupo de partida, tal como MsO, através do tratamento com MsCl na presença de uma base, tal como Et3N, piridina ou K2CO3 em um solvente inerte, tal como CH2Cl2, THF, MeCN, DMF ou uma mistura dos mesmos. O grupo de partida 5’ depois é deslocado com ânion azida a partir de NaN3 em um solvente inerte, tal como DMF. Alternativamente (C-VI) pode ser diretamente transformado em (C-VII) através do tratamento com DPPA, Ph3P e DIAD em um solvente, tal como THF. O grupo azido de (C-VII) pode ser reduzido à amina primária (C-VIII) através da redução com H2 na presença de um catalisador de metal (por exemplo, Pd/C, PtO2) ou através de uma reação de Staudinger com uma fosfina, tal como Ph3P ou PMe3. A amina primária (C-VIII) pode ser convertida na amina secundária (C-X) através do tratamento com a cetona ou aldeído apropriada na presença de um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3 ou NaCNBH3. Reagentes adicionais, tais como Ti(OiPr)4, podem ser adicionados. Alternativamente, o intermediário de 5’-hidróxi (C-VI) pode ser tratado com a sulfonamida (C-IX), DEAD e Ph3P em um solvente inerte, tal como THF. O produto de sulfonamida resultante depois pode ser tratado com benzenotiol na presença de uma base, tal como K2CO3, Cs2CO3 para fornecer a amina secundária (C-X).Esquema D: Síntese de Intermediários de 7-Deazapurina-Carbocíclicos
Figure img0081
[00359]Os intermediários carbocíclicos de 5’-amino 7-deazapurina (D-X) podem ser preparados, conforme representado no Esquema D. O ciclopentano (D-I) é opcionalmente protegido através de métodos conhecidos àqueles de habilidade comum na técnica para fornecer (D-II). (D-II) é tratado com a 4,6-dicloropirimidina (DIII) apropriada na presença de uma base, tal como Et3N em um solvente prótico, tal como EtOH, n-butanol. A reação é aquecida para fornecer o intermediário (D-IV). O intermediário (D-V) é produzido através do tratamento de (D-IV) com um ácido, tal como HCl ou AcOH.
[00360]O 5’-hidroxila de (D-V) pode ser transformado no intermediário de 5’- azido (D-VI) através da conversão inicial do grupo 5’-hidroxila em um grupo de partida, tal como MsO, através do tratamento com MsCl na presença de uma base, tal como Et3N, piridina ou K2CO3 em um solvente inerte, tal como CH2Cl2, THF, MeCN, DMF ou uma mistura dos mesmos e depois deslocamento do grupo de partida com ânion azida a partir de NaN3 em um solvente inerte, tal como DMF. Alternativamente, (D-V) pode ser diretamente transformado em (D-VI) através do tratamento com DPPA, Ph3P e DIAD em um solvente, tal como THF.
[00361]O substituinte 6-amino pode ser introduzido através do tratamento de (D-VI) com a amina apropriada (incluindo amônia) na presença de uma base, tal como Et3N, K2CO3 ou base de Hunig em solvente, tal como MeCN ou DMF, THF, iPrOH ou uma mistura dos mesmos. Se necessário, a reação pode ser aquecida a 100 °C (se a temperatura exigida for maior do que o ponto de ebulição de um ou mais entre os componentes na mistura, a reação pode ser realizada em um tubo vedado). Os grupos R no esquema podem representar grupos de proteção alquila (por exemplo, 2,4 dimetoxibenzila). O grupo azido de (D-VII) pode ser reduzido à amina primária (D-VIII) através da redução com H2 na presença de um catalisador de metal (por exemplo, Pd/C, PtO2) ou através de uma reação de Staudinger com uma fosfina, tal como Ph3P ou PMe3. A amina primária (D-VIII) pode ser convertida na amina secundária (D-X) através do tratamento com a cetona ou aldeído apropriada na presença de um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3 ou NaCNBH3. Reagentes adicionais, tais como Ti(OiPr)4, podem ser adicionados. Alternativamente, o intermediário de 5’-hidróxi (D-V) pode ser tratado com a sulfonamida (D-IX), DEAD e Ph3P em um solvente inerte, tal como THF. O grupo 6-amino depois pode ser introduzido usando condições similares àquelas usadas para converter (D-VI) em (DVII). O produto de sulfonamida resultante depois pode ser tratado com benzenotiol na presença de uma base, tal como K2CO3, Cs2CO3, para fornecer a amina secundária (D-X).
[00362]Uma pessoa de habilidade comum reconhecerá que ter uma dicloro- pirimidina apropriadamente substituído (D-III) incluirá a substituição na porção 7- deazapurina.Esquema E: Inversão de Estereoquímica na Posição 5’
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[00363]Para gerar os intermediários apropriados de estereoquímica oposta na posição 5’, uma sequência de reação representada no Esquema E acima pode ser seguida. O ciclopentano (E-I) é opcionalmente protegido, sob o qual o 5’- hidroxila é convertido em um grupo de partida por intermédio do tratamento com MsCl na presença de Et3N em um solvente, tal como um CH2Cl2. O grupo de partida 5’ é deslocado com Me2NH, através do tratamento com Me2NH como uma solução 2,0 M em THF em um tubo vedado. A reação é aquecida entre 40 a 80 °C. A amina terciária resultante é oxidada com um oxidante, tal como mCPBA, em um solvente, tal como um CH2Cl2, para fornecer o N-óxido correspondente. O N-óxido depois é submetido ao calor, 50 a 120 °C em um solvente inerte, tal como N,N- dimetilacetamida para fornecer o alceno (E-III). O alceno é submetido à hi- droboração/processamento oxidativo para produzir o estereoisômero 5’ invertido (E- IV). Os reagentes de hidroboração adequados incluem BH3-THF e condições de processamento oxidativas adequadas incluem H2O2/NaOH. O intermediário (E-IV) depois pode ser submetido às sequências de reação representadas nos esquemas C e D para fornecer os intermediários (E-V) e (E-VI).Esquema F: 2’ e 3’ Deoxiciclopentanos e Riboses
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[00364]O uso dos intermediários (F-I) e (F-III) nos procedimentos esboçados nos Esquemas C e D permite a síntese de derivados carbocíclicos deóxi purina e 7- deazapurina. Os intermediários com base em ribose (F-V), (F-VI), (F-VIII) e (F-IX) podem ser usados em procedimentos de reação similares àqueles descritos nos Esquemas A e B acima.Esquema G: Síntese de Ciclobutano
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[00365]Os ciclobutanos das fórmulas (G-VIII), (G-XV) e (G-XXI) podem ser sintetizados, conforme representado no Esquema G. Os ésteres alquenílicos (G-I) podem ser submetidos a uma cicloadição [2+2] com cloreto de tricloroacetila na presença do par Zn/Cu em um solvente inerte, tal como Et2O, DME, THF ou uma mistura dos mesmos. Alternativamente, a reação de cicloadição [2+2] pode ser realizada usando pó de Zn sob condições de sonicação. Os dicloretos (G-II) são reduzidos por intermédio do tratamento com pó de Zn na presença de um doador de prótons, tal como NH4Cl, em um solvente, tal como MeOH. As ciclobutanonas (G-IV) (que incluem (G-III)) podem ser adicionalmente elaboradas através do tratamento com um fosfonato (G-V) para fornecer os ésteres α, β insaturados (G-VI). O ácido (VI) é convertido na amida de Weinreb (G-VII) sob condições padrão (por exemplo, cloroformiato de iso-butila, base de Hunig, N,O-dimetil hidroxilamina). A ligação dupla depois pode ser reduzida por intermédio de hidrogenação usando H2 na presença de um catalisador de metal, tal como Pd/C, PtO2 ou Pd(OH)2, para fornecer os intermediários de ciclobutano (G-VIII).
[00366]As ciclobutanonas (G-IX) podem ser tratadas com o reagente de Wittig (G-X) para fornecer o éter de ciclobutano enol (G-XI) que sob desproteção fornece o ácido correspondente (G-XII).
[00367]As ciclobutanonas (G-IX) também podem ser tratadas com o fosfona- to estabilizado (G-V) na presença de uma base, tal como KOtBu, LDA, NaHMDS, KHMDS ou LiHMDS ou com Et3N na presença de LiCl em um solvente inerte para fornecer o éster α, β insaturado (G-XIII) que pode ser reduzido ao (G-XIV) através do tratamento com H2 na presença de um catalisador de metal, tal como Pd/C, Pd(OH)2 ou PtO2 em um solvente inerte. A funcionalidade ácido de (G-XIV) pode ser convertida na amida de Weinreb correspondente através do tratamento com N,O-dimetil- hidroxilamina na presença de um agente de ligação adequado, tal como iso- butilcloroformiato, e uma base, tal como base de Hunig, para fornecer (G-XV).
[00368]As ciclobutanonas (G-XVI) também podem ser tratadas com N,O- dimetil-hidroxilamina na presença de um agente de ligação adequado, tal como iso- butilcloroformiato e uma base, tal como base de Hunig, para fornecer a amida de Weinreb (G-XVII) correspondente que após a aminação redutiva com um equivalen te de amônia, seguido por desproteção, conforme necessário, fornece a amina (G- XVIII). Equivalentes de amônia adequados incluem benzidril amina, NH3, NH4Cl, BnNH2, PMB-NH2, 2,4 DMB-NH2 que pode ser tratado com a cetona (G-XVII) e um agente redutor adequado, tal como NaCN(BH3) ou Na(OAc)3BH, na presença de um ácido, se necessário, tal como HCl ou AcOH. Os grupos de proteção nos produtos de aminação redutiva podem ser removidos através de métodos conhecidos àqueles de habilidade comum na técnica. Alternativamente, a cetona (G-XVII) pode ser tratada com hidroxil amina para formar a oxima correspondente que depois pode ser reduzida com H2 na presença de um catalisador de metal, tal como Pd/C, PtO2 ou Pd(OH)2, para fornecer o intermediário (G-XVIII).
[00369]O ciclobutano (G-IV) pode ser convertido na amina (G-XXI) por intermédio de uma sequência de múltiplas etapas que envolve o tratamento (G-IV) com o fosforano (G-V) para produzir o enol éter (G-XIX). O tratamento de (G-XIX) com o qual depois é N,O-dimetilhidroxilamina na presença de um agente de ligação adequado, tal como cloroformiato de iso-butila e uma base, tal como base de Hunig, para fornecer a amida de Weinreb (G-XX) correspondente que depois da hidrólise aquosa do enol éter (por exemplo, TsOH/H2O, HCl/H2O) e aminação redutiva com um equivalente de amônia, seguido por desproteção, conforme necessário, fornece a amina (G-XXI). Os equivalentes de amônia adequados incluem benzidril amina, NH3, NH4Cl, BnNH2, PMB-NH2, 2,4 DMB-NH2. Agentes de redução adequados para a aminação redutiva incluem NaCN(BH3) ou Na(OAc)3BH usado na presença de um ácido, se necessário, tal como HCl ou AcOH. Grupos de proteção nos produtos de aminação redutiva podem ser removidos através de métodos conhecido àqueles de habilidade comum na técnica.Esquema H: Elaboração de Ciclobutanos
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[00370]As ciclobutanonas (H-I) podem ser convertidas nos benzimidazóis (H-III), ureias (H-IV) e amidas (H-V) por intermédio das sequências de reação representadas no Esquema H. Os benzimidazóis (H-III) podem ser formados através do tratamento dos ácidos (H-I) com a benzeno diamina (H-II) apropriada na presença de um agente de ligação adequado (por exemplo, HATU, PPAA, COMU, EDC, EDCI), na presença de uma base (por exemplo, Et3N, base de Hunig, K2CO3). Os reagentes adicionais, tais como HOAT, HOBt ou HOSu, podem ser adicionados, se necessário. As amino-amidas resultantes depois são ciclizadas nos benzimidazóis na presença de ácido, por exemplo, AcOH, que também pode servir como o sol-vente. A reação é normalmente realizada em uma temperatura que varia da TEMPERATURA AMBIENTE a 80 °C. As ureias (H-IV) podem ser preparadas através da conversão dos ácidos (H-I), como segue. O ácido é reduzido ao álcool primário correspondente usando um reagente, tal como LiAlH4 ou BH3.THF. Se necessário, a funcionalidade cetona pode ser primeiro protegida (por exemplo, como um cetal) antes da redução e, subsequentemente, desprotegida. O álcool primário depois é convertido em um grupo de partida, tal como um mesilato. O grupo de partida resultante é deslocado com azida a partir de uma fonte, tal como NaN3. O composto do produto de azido é reduzido ao composto de amino correspondente usando H2 na presença de um catalisador de metal, tal como Pd/C ou por intermédio de uma reação de Staudinger com uma fosfina, tal como PMe3 ou PPh3. A ureia (H-IV) depois é formada através do tratamento da amina primária com o isocianato apropriado, R-C = N = O na presença de uma base, tal como Et3N ou K2CO3 em um solvente inerte, tal como CH2Cl2. As amidas (H-V) são formadas através do tratamento dos ácidos (H-I) com a amina apropriada R-NH2 é a presença de um agente de ligação adequado (por exemplo, HATU, PPAA, COMU, EDC, EDCI), na presença de uma base (por exemplo, Et3N, base de Hunig, K2CO3). Os reagentes adicionais, tais como HOAT, HOBt ou HOSu, podem ser adicionados, se necessário.Esquema I: Elaboração de Ciclobutano Amidas de Weinreb
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[00371]Conforme mostrado no Esquema I acima, as amidas de Weinreb (I-I) e (I-V) podem ser transformadas nos benzimidazol aldeídos (I-III), ureia aldeídos (IIV) e (I-VI) e amida aldeídos (I-V) usando procedimentos similares, conforme descri- to no Esquema H, seguido por redução da amida de Weinreb. A redução da amida de Weinreb pode ser realizada usando DiBAL-H em um solvente inerte, tal como CH2Cl2, THF em uma temperatura de 10 a -78 °C. A amino amida de Weinreb (I-V) também podem ser convertida na ureia (I-VI) por intermédio do tratamento com o isocianato apropriado, seguido por redução com DiBAL-H.
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[00372]Os intermediários de benzimidazol (J-V), ureia (J-VI) e amida (J-VII) podem ser sintetizados, conforme representado no Esquema J. As ciclobutanonas (J-I) podem ser submetidas a uma reação de Wittig com o fosforano (J-II) para produzir o enol éter (J-III). O ácido de enol éter depois é submetido às condições de reações similares àquelas descritas no esquema H para produzir os enol éter ben- zimidazóis, ureias e amidas correspondentes, que após o tratamento com ácido aquoso, tal como TsOH/H2O, HCl gera os intermediários de aldeído correspondentes (J-V), (J-VI) e (J-VII), respectivamente. Esquema K: Ligação de Ciclobutanos às Aminas
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[00373]A fórmula (K-V) no Esquema K acima representa os intermediários (K-I a K-IV) abaixo e seus intermediários 2’- ou 3’-deóxi correspondentes, cujas sínteses são descritas nos Esquemas A a F.
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[00374]Conforme mostrado no Esquema K, as cetonas (K-VI), (K-VII) e (K- VIII) e os aldeídos (K-XII), (K-XIII) e (K-XIV) são convertidos nos benzimidazóis (K-IX) e (K-XV), ureias (K-X) e (K-XVI) e amidas (K-XI) e (K-XVII) correspondentes por intermédio da aminação redutiva com (K-V). A aminação redutiva pode ser realizada com um agente redutor adequado, tal como NaCN(BH3) ou Na(OAc)3BH, na presença de um ácido, se necessário, tal como HCl ou AcOH, ou um ácido de Lewis/agente desidratante, tal como Ti(OiPr)4 ou MgSO4.Esquema L: Ligação Alternativa
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[00375]Em uma sequência de reação alternativa, os benzimidazóis (L-V), ureias (L-VI) e amidas (L-VII) alvo podem ser preparados pela sequência de reação representada no Esquema L. As aminas (L-I), onde Q e RC têm as mesmas definições, conforme no Esquema K, são tratadas com os ciclobutanos (L-II) sob condições de aminação redutiva usando um agente redutor, tal como NaCNBH3 ou Na(OAc)3BH na presença de um ácido, tal como HCl ou AcOH ou um ácido de Lewis, tal como Ti(OiPr)4, para fornecer o ácido (L-III). O ácido pode ser convertido nos benzimidazóis (L-V), ureias (L-VI) e amidas (L-VII) alvo correspondentes usando condições de reação similares àquelas no esquema H. Esquema M: Ligação Alternativa
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[00376]Os enol éteres (M-1) podem ser hidrolisados sob condições ácidas (por exemplo, TsOH/H2O, HCl/H2O) para fornecer os aldeídos (M-II). A aminação redutiva de (M-II) é conduzida com as aminas (M-III) onde Q e RC têm o mesmo significado, conforme no esquema K, usando um agente redutor, tal como NaCNBH3 ou Na(OAc)3BH, na presença de um ácido, tal como HCl ou AcOH ou um ácido de Lew- is/agente desidratante tal como Ti(OiPr)4 ou MgSO4. A remoção do grupo de proteção éster subsequente depois é realizada para fornecer o ácido (M-IV). Os ácidos (M-V) (que incluem os ácidos (M-IV)) podem ser transformados nos benzimidaz- óis (M-VII), ureias (M-VIII) e amidas (M-IX) alvo correspondentes usando condições de reação similares àquelas descritas no esquema H. Esquema N: Síntese de Amidas
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[00377]Os benzimidazóis, ureias e amidas da fórmula (N-XIII) podem ser sin-tetizados, conforme representado no Esquema N. O aldeído (N-I), onde X representa uma funcionalidade benzimidazol, ureia ou amida, pode ser convertido no ácido correspondente por intermédio da oxidação com um reagente, tal como NaClO2. As ciclobutanonas da fórmula (N-III) podem ser tratadas com fosfonatos da fórmula (N- IV) e uma base adequada, tal como LiHMDS, NaHMDS, KHMDS, KOtBu, LDA ou Et3N/LiCl, em um solvente inerte para fornecer os ciclobutanos (N-V), que após a redução por intermédio do tratamento com H2 na presença de catalisador de metal adequado, tal como Pd/C, PtO2 ou Pd(OH)2, fornece o ácido (N-VI).
[00378]Os ácidos da fórmula (N-VII) que incluem os ácidos da fórmula (N-VI) podem ser convertidos nos benzimidazóis (N-IX), ureias (N-X) e amidas (N-XI) cor-respondentes por intermédio de uma série de reações similares àquelas representadas no esquema H. Os benzimidazóis, ureias e amidas da fórmula (N-II) depois podem ser convertidos nos benzimidazóis, ureias e amidas da fórmula (N-XIII) por in- termédio de uma reação de ligação amida com a amina (N-XIII) onde Rc e Q têm as mesmas definições, conforme no Esquema K, usando um agente de ligação adequado (por exemplo, HATU, PPAA, COMU, EDC, EDCI), na presença de uma base (por exemplo, Et3N, base de Hunig, K2CO3). Os reagentes adicionais, tais como HOAT, HOBt ou HOSu, podem ser adicionados, se necessário. Esquema O: Análogos Contendo 5’-Enxofre
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[00379]Os tioéteres (O-XIII), sulfóxidos (O-XIV) e sulfonas (O-XV) podem ser sintetizados, conforme representado no Esquema O. As ciclobutanonas (O-I), onde X representa funcionalidade benzimidazol, ureia ou amida, podem ser reduzidas com um reagente de redução, tal como NaBH4, para fornecer o álcool correspondente, que por sua vez, pode ser convertido em um grupo de partida, tal um MsO, através do tratamento com MsCl com uma base, tal como K2CO3, em um solvente inerte. O ciclobutano (O-II) depois é convertido no tiol correspondente (O-III) primeiro através do tratamento com um nucleófilo com base em enxofre, tal como KSAc, seguido por hidrólise do tioéster sob condições básicas, por exemplo, Li- OH/H2O/MeOH.
[00380]Os aldeídos (O-IV) podem ser convertidos nos tióis correspondentes por intermédio de uma sequência de reação similar àquela descrita para converter (O-I) em (O-III).
[00381]As ciclobutanonas (O-VII) podem ser convertidas em ácidos (O-IX) através do tratamento com um fosfonato da fórmula (O-VIII) na presença de uma base adequada (Cs2CO3, K2CO3, LiHMDS, NaHMDS, KHMDS, KOtBu, LDA), seguido por redução usando H2 na presença de um catalisador de metal adequado, tal como Pd/C, PtO2 ou Pd(OH)2. O ácido é seletivamente reduzido ao álcool primário usando um reagente, tal como BH3:THF ou através da reação com carbonildi- imidazol, Et3N, seguido por NaBH4. O álcool primário é convertido no tiol correspondente usando reações similares àquelas usadas para a síntese de (O-III) e (O- VI) a partir de seus intermediários de álcool secundário.
[00382]Os tióis (O-XI) depois podem ser tratados com os intermediários (O- XII) onde Q’ representa os intermediários (O-XVI), (O-XVII), (O-XVIII) e (O-XIX) representados abaixo (e, também, os intermediários 2’-ou 3’-deóxi correspondentes) e LG representa um grupo de partida, tal como Cl, TfO ou MsO. A reação pode ser realizada na presença de uma base adequada, tal como K2CO3, Cs2CO3, Et3N ou base de Hunig para fornecer os tioéteres (O-XIII) que podem ser convertidos nos sulfóxidos (O-XIV) ou sulfonas (O-XV) correspondentes por intermédio do tratamento com agentes oxidantes adequados, tais como H2O2 ou mCPBA.
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Esquema P: Tampas de Amina, Amida e Sulfonamida
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[00383]As moléculas alvo de amina, amida e sulfonamida podem ser sintetizadas a partir das aminas (P-I), (P-II) e (P-III) usando condições de reação padrão. As moléculas alvo de amida podem ser produzidas através do tratamento das aminas com o ácido carboxílico apropriado na presença de um agente de ligação adequado (por exemplo, HATU, PPAA, COMU, EDC, EDCI), na presença de uma base (por exemplo, Et3N, base de Hunig, K2CO3). Reagentes adicionais, tais como HOAt, HOBt ou HOSu, podem ser adicionados, se necessário. As moléculas alvo de sulfonamida podem ser produzidas através do tratamento das aminas com o cloreto de sulfonila apropriado na presença de uma base, tal como K2CO3, ou Et3N. As moléculas alvo de amina podem ser formadas por intermédio de uma reação de aminação redutiva com o aldeído ou cetona apropriado na presença de um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3 ou NaCNBH3. Reagentes adicionais, tais como ácidos AcOH ou HCl ou o ácido de Lewis/agentes desidratantes Ti(OiPr)4 ou MgSO4 podem ser adicionados. Esquema Q: Preparação de 4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)benzeno-1,2-diamina
Figure img0100
Esquema R: Preparação de 4-ciclobutilbenzeno-1,2-diamina
Figure img0101
Esquema S: Preparação de 1-(3,4-diaminofenil)ciclobutanocarbonitrila
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Esquema T: Preparação de 4-ciclopropilbenzeno-1,2-diamina
Figure img0103
Esquema U: Prepara NaNs 1-(3,4-diaminofenil)ciclopropanocarbonitrila
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Esquema V: Preparação de 4-(2,2,2-trifluoroetil)benzeno-1,2-diamina
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Esquema W: Prepara "Prolina 2-(3,4-diaminofenil)-2-metilpropanonitrila
Figure img0106
[00384]Por toda a descrição, onde as composições são descritas por apresentar, incluir, ou compreender componentes específicos, ou onde os processos são descritos por apresentar, incluir, ou compreender etapas de processo específicas, é considerado que as composições da presente invenção também consistem essencialmente de, ou consistem dos componentes citados, e que os processos da presente invenção também consistem essencialmente de, ou consistem das etapas de processamento citadas. Além disso, deve ser entendido que a ordem das etapas ou a ordem para realizar certas ações é imaterial, contanto que a invenção permaneça operável. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser simultaneamente conduzidas.
[00385]Os compostos designados, selecionados e/ou otimizados pelos métodos descritos acima, uma vez produzidos, podem ser caracterizados através do uso de uma variedade de ensaios conhecidos àqueles habilitados na técnica para determinar se os compostos têm atividade biológica. Por exemplo, as moléculas podem ser caracterizadas por ensaios convencionais, incluindo, mas não limitados àqueles ensaios descritos abaixo, para determinar se elas têm uma atividade, atividade de ligação e/ou especificidade de ligação prognosticada.
[00386]Além disso, a triagem de alta produção pode ser usada para acelerar a análise usando tais ensaios. Como um resultado, pode ser possível triar rapidamente as moléculas descritas neste relatório quanto à atividade, usando técnicas conhecidas no ramo. Metodologias gerais para a realização da triagem de alta produção são descritas, por exemplo, em Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; e Patente U.S. No 5.763.263. Os ensaios de alta produção podem usar uma ou mais técnicas de ensaio diferentes, incluindo, mas não limitadas àquelas descritas neste relatório.
[00387]Para avaliar adicionalmente as propriedades de fármaco do composto, medições de inibição das enzimas do citocromo P450 e atividade da enzima me- tabolizante de fase II também podem ser medidas usando sistemas de enzima humana recombinante ou sistemas mais complexos, tais como microssomas do fígado humano. Além disso, os compostos podem ser avaliados como substratos destas atividades da enzima metabólica. Estas atividades são úteis em determinar se o potencial de um composto causa interações entre fármacos ou gera metabólitos que retêm ou não têm atividade antimicrobiana útil.
[00388]Para obter uma estimativa de o potencial do composto ser oralmente biodisponível, uma pessoa habilitada também pode realizar os ensaios de solubilidade e Caco-2. A última é uma linhagem celular a partir do epitélio humano que permite a medição da absorção e passagem do fármaco através de uma monoca- mada de células Caco-2 que frequentemente cresce dentro dos poços de uma placa microtituladora de 24 poços equipada com uma membrana de 1 mícron. As concentrações de fármaco livre podem ser medidas no lado basolateral da monocamada, avaliando a quantidade de fármaco que pode passar através da monocamada intestinal. Os controles apropriados para garantir a integridade da monocamada e tensão das junções comunicantes são necessários. Usando este mesmo sistema, uma pessoa habilitada pode obter uma estimativa do efluxo mediado por P-glicoproteína. A P-glicoproteína é uma bomba que se localiza à membrana apical das células, formando monocamadas polarizadas. Esta bomba pode anular a absorção ativa ou passiva através da membrana de células Caco-2, resultante em menos fármaco que passa através da camada epitelial intestinal. Estes resultados são frequentemente feitos em combinação com as medições de solubilidade e estes fatores são conhecidos contribuir para a biodisponibilidade oral em mamíferos. As medições de biodis- ponibilidade oral em animais e, basicamente, no homem, usando experimentos far- macocinéticos tradicionais, determinará a biodisponibilidade oral absoluta.
[00389]Os resultados experimentais também podem ser usados para construir modelos que ajudam a prognosticar parâmetros fisicoquímicos que contribuem para as propriedades do fármaco. Quando tal modelo é verificado, metodologia experimental pode ser reduzida, com confiança aumentada na previsibilidade do modelo.
3. Métodos de Tratamento
[00390]A leucemia de linhagem mista (MLL) é uma forma geneticamente distinta de leucemia aguda que constitui mais do que 70 % de leucemias infantis e aproximadamente 10 % de leucemias mieloides agudas em adultos (AML) (Hess, J. L. (2004), Trends Mol Med 10, 500 - 507; Krivtsov, A. V., e Armstrong, S. A. (2007), Nat Rev Cancer 7, 823 - 833). MLL representa uma forma particularmente agressiva de leucemia e pacientes com esta doença, em geral, têm prognóstico deficiente; estes pacientes frequentemente sofrem de recaída precoce depois do tratamento com quimioterapias atuais. Assim, existe uma grande e presente necessidade quanto a novas modalidades de tratamento para pacientes que sofrem com MLL.
[00391]Uma característica universal da doença MLL é uma translocação cromossômica que afeta o gene de MLL no cromossomo 11q23 (Hess, 2004; Krivtsov e Armstrong, 2007). Normalmente, o gene de MLL codifica uma histona metil- transferase SET-domínio que catalisa a metilação de lisina 4 da histona H3 (H3K4) no loco do gene específico (Milne et al. (2002) Mol Cell 10, 1107 - 1117; Nakamura et al. (2002), Mol Cell 10, 1119 - 1128). A localização do gene é conferida por interações específicas com os elementos de reconhecimento na MLL, externos ao SET-domínio (Ayton et al. (2004) Mol Cell Biol 24, 10470 - 10478; Slany et al., (1998) Mol Cell Biol 18, 122 - 129; Zeleznik-Le et al. (1994) Proc Natl Acad Sci U S A 91, 10610 - 10614). Nas translocações ligadas à doença, o SET-domínio catalítico é perdido e a proteína de MLL remanescente é fundida a uma variedade de pares, incluindo membros da família AF e ENL de proteínas, tais como AF4, AF9, AF10 e ENL (Hess, 2004; Krivtsov e Armstrong, 2007; Slany (2009) Haematologica 94, 984 - 993). Estas pares de fusão são capazes de interagir direta ou indiretamente, com uma outra histona metiltransferase, DOT1L (Bitoun et al. (2007) Hum Mol Genet 16, 92 - 106; Mohan et al. (2010) Genes Dev. 24, 574 - 589; Mueller et al. (2007) Blood 110, 4445 - 4454; Mueller et al. (2009) PLoS Biol 7, e1000249; Okada et al. (2005) Cell 121, 167 - 178; Park et al. (2010) Protein J 29, 213 - 223; Yokoyama et al. (2010) Cancer Cell 17, 198 - 212; Zhang et al. (2006) J Biol Chem 281, 18059 - 18068). Como um resultado, produtos de translocação conservam elementos de reconhecimento específicos do gene dentro do restante da proteína de MLL, mas também ganham a capacidade de recrutar DOT1L, para estas localizações (Monroe et al. (2010) Exp Hematol. 2010 Sep18. [Epub ahead of print] Pubmed PMID: 20854876; Mueller et al., 2007; Mueller et al., 2009; Okada et al., 2005). DOT1L catalisa a metilação de H3K79, uma modificação de cromatina associada com genes ativamente transcritos (Feng et al. (2002) Curr Biol 12, 1052 - 1058; Steger et al. (2008) Mol Cell Biol 28, 2825 - 2839). A metilação de H3K79 ectópico que resulta do recrutamento da proteína de fusão de MLL de DOT1L leva à expressão acentuada de genes leucemogênicos, incluindo HOXA9 e MEIS1 (Guenther et al. (2008) Genes & Development 22, 3403 - 3408; Krivtsov et al. (2008) Nat Rev Cancer 7, 823 - 833; Milne et al. (2005) Cancer Res 65, 11367 - 11374; Monroe et al., 2010; Mueller et al., 2009; Okada et al., 2005; Thiel et al.(2010) Cancer Cell 17, 148 - 159). Conse-quentemente, embora DOT1L não seja geneticamente alterado na doença per se, sua atividade enzimática mislocalizada é uma consequência direta da translocação cromossômica que afeta pacientes com MLL; assim, foi proposto que DOT1L deve ser um acionador catalítico de leucemogênese nesta doença (Krivtsov et al., 2008; Monroe et al., 2010; Okada et al., 2005; Yokoyama et al. (2010) Cancer Cell 17, 198 - 212). Outro suporte para um papel patogênico de DOT1L em MLL surge a partir de estudos em sistemas de modelo que demonstram uma exigência para DOT1L em propagar a atividade transformante das proteínas de fusão de MLL (Mueller et al., 2007; Okada et al., 2005).
[00392]Evidência indica que a atividade enzimática de DOT1L é crítica à pa- togênese em MLL e a inibição de DOT1L pode fornecer uma base farmacológica para a intervenção terapêutica nesta doença. O tratamento com o composto resulta em morte seletiva e dependente da concentração de células de leucemia portadoras da translocação de MLL sem efeito sobre as células transformadas sem MLL. A análise da expressão do gene das células tratadas com o inibidor mostra a infrarreg- ulação dos genes superexpressados de maneira anormal em leucemias rearranja- das com MLL e similaridades com as mudanças de expressão do gene causadas por nocaute genético do gene Dot1L em um modelo de camundongo de leucemia MLL-AF9.
[00393]A presente invenção fornece métodos para o tratamento de um transtorno celular proliferativo em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração a um sujeito em necessidade de tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. O transtorno celular proliferativo pode ser câncer ou uma condição pré-cancerosa. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de um transtorno celular proliferativo.
[00394]A presente invenção fornece métodos para o tratamento do câncer hematológico ou tumores hematológicos em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração a um sujeito em necessidade de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento do câncer hematológico ou tumores hematológicos.
[00395]A presente invenção fornece métodos para o tratamento de leucemia em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração a um sujeito em necessidade de tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. A leucemia pode ser leucemia aguda ou crônica. Preferivelmente, a leucemia é leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de leucemia.
[00396]A presente invenção fornece métodos para o tratamento de uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23 em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração a um sujeito em necessidade de tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. O gene pode ser o gene de MLL. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de uma doença ou transtorno mediado pela translocação de um gene no cromossomo 11q23.
[00397]A presente invenção fornece métodos para o tratamento de uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1 (por exemplo, DOT1L) em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração a um sujeito em necessidade de tal tratamento, de uma quantidade terapeuti- camente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamen- te aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal far- maceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de uma doença ou transtorno mediado pela metilação da proteína mediada por DOT1L.
[00398]A presente invenção fornece métodos para o tratamento de um transtorno, o curso do qual é influenciado pela modulação do estado de metilação de his- tonas ou outras proteínas, em que o dito estado de metilação é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de DOT1L. A modulação do estado de metilação de histonas, por sua vez, pode influenciar o nível de expressão de genes alvo ativados pela metilação, e/ou genes alvo suprimidos pela metilação. O método inclui administrar a um sujeito em necessidade de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamen- te eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo, solvato, ou estereoisômero do mesmo.
[00399]O transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1L desempenha uma parte pode ser câncer ou uma condição pré-cancerosa ou uma doença neurológica. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento do câncer ou uma doença neurológica.
[00400]A presente invenção também fornece métodos para a proteção contra um transtorno em que a metilação da proteína mediada por DOT1L desempenha uma parte em um sujeito em necessidade dos mesmos através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a um sujeito em necessidade de tal tratamento. O transtorno pode ser câncer ou uma doença neurológica. A presente invenção também fornece o uso do composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo, solvato, ou estereoisômero do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para a prevenção de um transtorno celular proliferati- vo.
[00401]Os compostos desta invenção podem ser usados para modular a me- tilação da proteína (por exemplo, histona), por exemplo, para modular a atividade da enzima histona metiltransferase ou histona demetilase. A metilação da histona foi relatada estar envolvida na expressão anormal de certos genes em cânceres, e no silenciamento de genes neuronais em células não neuronais. Os compostos descritos neste relatório podem ser usados para tratar estas doenças, isto é, diminuir a metilação ou restaurar a metilação aproximadamente em seu nível em células de contraparte normais.
[00402]Em geral, os compostos que são moduladores de metilação podem ser usados para modular a proliferação celular. Por exemplo, em alguns casos, a proliferação excessiva pode ser reduzida com agentes que diminuem a metilação, ao passo que a proliferação insuficiente pode ser estimulada com agentes que aumentam a metilação. Consequentemente, as doenças que podem ser tratadas pelos compostos da invenção incluem doenças hiperproliferativas, tais como crescimento celular benigno e crescimento celular maligno.
[00403]Conforme usado neste relatório, um “sujeito em necessidade do mesmo” é um sujeito que apresenta um transtorno celular proliferativo, ou um sujeito que apresenta um risco aumentado de desenvolver um transtorno celular proliferati- vo em relação à população em geral. O sujeito pode ter câncer ou pré-câncer. Preferivelmente, um sujeito em necessidade do mesmo tem câncer. Mais preferivelmente, um câncer hematológico ou leucemia. Um “sujeito” inclui um mamífero. O mamífero pode ser por exemplo, qualquer mamífero, por exemplo, um ser humano, primata, ave, camundongo, rato, galinha, cão, gato, vaca, cavalo, cabra, camelo, ovelha ou um porco. Preferivelmente, o mamífero é um ser humano.
[00404]Conforme usado neste relatório, o termo “transtorno celular prolifera- tivo” se refere às condições em que o crescimento desregulado ou anormal, ou ambos, de células, pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indese- jada, que pode ser ou não cancerosa. Os transtornos celulares proliferativos exemplares da invenção abrangem uma variedade de condições em que a divisão celular é desregulada. Os transtornos celulares proliferativos exemplares incluem, mas não são limitados a neoplasmas, tumores benignos, tumores malignos, condições pré- cancerosas, tumores in situ, tumores encapsulados, tumores metastáticos, tumores líquidos, tumores sólidos, tumores imunológicos, tumores hematológicos, cânceres, carcinomas, leucemias, linfomas, sarcomas, e células que se dividem rapidamente. O termo “célula que se divide rapidamente”, conforme usado neste relatório, é definido como qualquer célula que se divide em uma taxa que excede ou é maior do que o que é esperado ou observado entre células vizinhas ou justapostas no mesmo tecido. Um transtorno celular proliferativo inclui um pré-cancer ou uma condição pré- cancerosa. Um transtorno celular proliferativo inclui câncer. Preferivelmente, os métodos fornecidos neste relatório são usados para tratar ou aliviar um sintoma de câncer. O termo “câncer” inclui tumores sólidos, assim como, tumores hematológicos e/ou malignidades. Uma “célula de pré-cancer” ou “célula pré-cancerosa” é uma célula que manifesta um transtorno celular proliferativo que é um pré-cancer ou uma condição pré-cancerosa. Uma “célula de câncer” ou “célula cancerosa” é uma célula que manifesta um transtorno celular proliferativo que é um câncer. Quaisquer meios reproduzíveis de medição podem ser usados para identificar células de câncer ou células pré-cancerosas. Células de câncer ou células pré-cancerosas podem ser identificadas por tipificação ou classificação histológica de uma amostra de tecido (por exemplo, uma amostra de biópsia). Células de câncer ou células pré- cancerosas podem ser identificadas através do uso de marcadores moleculares apropriados.
[00405]Condições ou transtornos não cancerosas exemplares incluem, mas não são limitadas a, artrite reumatoide; inflamação; doença autoimune; condições linfoproliferativas; acromegalia; espondilite reumatoide; osteoartrite; gota, outras condições artríticas; sepsia; choque séptico; choque endotóxico; sepsia gram- negativa; síndrome do choque tóxico; asma; síndrome da angústia respiratória do adulto; doença pulmonar obstrutiva crônica; inflamação pulmonar crônica; doença inflamatória intestinal; doença de Crohn; psoríase; eczema; colite ulcerativa; fibrose pancreática; fibrose hepática; doença renal aguda e crônica; síndrome do intestino irritável; piresia; restenose; malária cerebral; acidente vascular cerebral e lesão is- quêmica; trauma neural; doença de Alzheimer; doença de Huntington; doença de Parkinson; dor aguda e crônica; rinite alérgica; conjuntivite alérgica; insuficiência cardíaca crônica; síndrome coronária aguda; caquexia; malária; hanseníase; leishmaniose; doença de Lyme; síndrome de Reiter; sinovite aguda; degeneração muscular, bursite; tendinite; tenossinovite; síndrome do disco intervertebral herniado, rupturas, ou que sofreu prolapso; osteopetrose; trombose; restenose; silicose; sarcose pulmonar; doenças de reabsorsão óssea, tais como osteoporose; reação enxerto contra hospedeiro; esclerose múltipla; lúpus; fibromialgia; AIDS e outras doenças virais, tais como Herpes Zoster, Herpes Simples I ou II, vírus influenza e citomegalo- vírus; e diabetes mellitus.
[00406]Cânceres exemplares incluem, mas não são limitados a, carcinoma adrenocortical, cânceres relacionados à AIDS, linfoma relacionado à AIDS, câncer anal, câncer anorretal, câncer do canal anal, câncer de apêndice, astrocitoma cere- belar infantil, astrocitoma cerebral infantil, carcinoma de células basais, câncer de pele (não melanoma), câncer biliar, câncer do tubo bílico extra-hepático, câncer do tubo bílico intra-hepático, câncer de bexiga, câncer de bexiga urinária, câncer de ossos e articulações, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, câncer cerebral, tumor cerebral, glioma de tronco cerebral, astrocitoma cerebelar, astrocitoma cere- bral/glioma maligno, ependimoma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, glioma visual do caminho e hipotalâmico, câncer de mama, adenomas/carcinoides brônquicos, tumor carcinoide, gastrointestinal, câncer do sistema nervoso, linfoma do sistema nervoso, câncer do sistema nervoso central, linfoma do sistema nervoso central, câncer cervical, cânceres infantis, leucemia lin- focítica crônica, leucemia mielógena crônica, transtornos mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer colorretal, linfoma cutâneo de células T, neoplasma linfoide, micose fungoide, síndrome de Seziary, câncer do endométrio, câncer esofágico, tumor de células germinativas extracranianas, tumor de células germinativas extrago- nadais, câncer do tubo bílico extra-hepático, câncer de olho, melanoma intraocular, retinoblastoma, câncer da vesícula biliar, câncer gástrico (estômago), tumor carci- noide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal (GIST), tumor de célula germi- nativa, tumor de células germinativas ovarianas, tumor trofoblástico gestacional glioma, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular (fígado), linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, melanoma intraocular, câncer ocular, tumores de células das ilhotas (pâncreas endócrino), sarcoma de Kaposi, câncer renal, câncer de laringe, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielógena crônica, leucemia de células pilosas, câncer de lábio e cavidade oral, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células pequenas, linfo- ma relacionado à AIDS, linfoma não Hodgkin, linfoma do sistema nervoso central primário, macroglobulinemia de Waldenstram, meduloblastoma, melanoma, melanoma intraocular (olho), carcinoma de células de Merkel, mesotelioma maligno, me- sotelioma, câncer de pescoço escamoso metastático, câncer de boca, câncer da língua, síndrome das neoplasias endócrinas múltiplas, micose fungoide, síndromes mielodisplásicas, doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas, leucemia mielógena crônica, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo, transtornos mieloproliferativos crônicos, câncer de nasofaríngeo, neuroblastoma, câncer oral, câncer da cavidade oral, câncer de orofaríngeo, câncer ovariano, câncer epitelial ovariano, tumor de ovário de baixo potencial maligno, câncer pancreático, câncer de células das ilhotas pancreáticas, câncer do seio paranasal e cavidade nasal, câncer da paratireoide, câncer de pênis, câncer de faringe, feocromocitoma, pineoblastoma e tumores neu- roectodérmicos primitivos supratentoriais, tumor pituitário, neoplasma de células plasmáticas/mieloma múltiplo, blastoma pleuropulmonar, câncer de próstata, câncer de reto, pelve renal e uréter, câncer de células transicionais, retinoblastoma, rabdo- miossarcoma, câncer de glândulas salivares, família Ewing de tumores sarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma de tecidos moles, câncer uterino, sarcoma uterino, câncer de pele (não melanoma), câncer de pele (melanoma), carcinoma de células de Merkel da pele, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecidos moles, carcinoma de células escamosas, câncer de estômago (gástrico), tumores neuroectodérmi- cos primitivos supratentoriais, câncer testicular, câncer de garganta, timoma, timoma e carcinoma tímico, câncer da tireoide, câncer de células transicionais de pelve renal e uréter e outros órgãos urinários, tumor trofoblástico gestacional, câncer de uretra, câncer uterino endometrial, sarcoma uterino, câncer de corpo uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e tumor de Wilm.
[00407]Um “transtorno celular proliferativo do sistema hematológico” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do sistema hematológico. Um transtorno celular proliferativo do sistema hematológico pode incluir linfoma, leucemia, neoplasmas mieloides, neoplasmas de mastócitos, mielodisplasia, gamopatia monoclonal benigna, granulomatose linfomatoide, papulose linfomatoide, policitemia vera, leucemia mielocítica crônica, metaplasia mieloide agnogênica e trombocitemia essencial. Um transtorno celular proliferativo do sistema hematológico pode incluir hiperplasia, displasia, e metaplasia de células do sistema hematológico. Preferivelmente, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em um câncer hematológico da presente invenção ou um transtorno celular proliferativo hematológico da presente invenção. Um câncer hematológico da presente invenção pode incluir mieloma múltiplo, linfoma (incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, linfomas infantis, e linfomas de origem linfocítica e cutânea), leucemia (incluindo leucemia infantil, tricoleucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, leucemia mielógena crônica e leucemia de mastócitos), neoplasmas mieloides e neoplasmas de mastócitos.
[00408]Um “transtorno celular proliferativo do pulmão” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do pulmão. Os transtornos celulares proliferati- vos do pulmão podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células do pulmão. Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir câncer de pulmão, um pré-cancer ou condição pré-cancerosa do pulmão, crescimentos benignos ou lesões do pulmão, e crescimentos malignos ou lesões do pulmão, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos no corpo, exceto o pulmão. Preferivelmente, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de pulmão ou transtornos celulares proliferativos do pulmão. O câncer de pulmão pode incluir todas as formas de câncer do pulmão. O câncer de pulmão pode incluir neoplasmas pulmonares malignos, carcinoma in situ, carcinoides de tumor típicos, e carcinoides de tumor atípicos. O câncer de pulmão pode incluir câncer de pulmão de células pequenas (“SCLC”), câncer de pulmão de células não pequenas (“NSCLC”), carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de células pequenas, carcinoma de células grandes, adenocarcinoma de células es- camosas, e mesotelioma. O câncer de pulmão pode incluir “carcinoma cicatricial”, carcinoma bronquioalveolar, carcinoma de células gigantes, carcinoma de células fusiformes, e carcinoma neuroendócrino de células grandes. O câncer de pulmão pode incluir neoplasmas do pulmão que apresentam heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[00409]Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células do pulmão. Os transtorno celulares proliferativos do pulmão podem incluir câncer de pulmão e condições pré-cancerosas do pulmão. Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia do pulmão. Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir hiperplasia induzida por asbesto, metaplasia escamosa, e metaplasia mesotelial reativa benigna. Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir substituição do epitélio colunar com epi- télio escamosos estratificado e displasia mucosal. Os indivíduos expostos aos agentes ambientais prejudiciais inalados, tais como o tabagismo e asbestos podem estar em risco aumentado quanto ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferati- vos do pulmão. Doenças pulmonares anteriores que podem predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir doença pulmonar intersticial crônica, doença pulmonar necrosante, esclerodermia, doença reumatoide, sarcoidose, pneumonite intersticial, tuberculose, pneumonias repetidas, fibrose pulmonar idiopática, granulomata, asbestose, alveolite fibrosante e doença de Hodgkin.
[00410]Um “transtorno celular proliferativo do cólon” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do cólon. Preferivelmente, o transtorno celular proli- ferativo do cólon é câncer de cólon. Preferivelmente, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de cólon ou transtornos celulares pro- liferativos do cólon. O câncer de cólon pode incluir todas as formas de câncer do cólon. O câncer de cólon pode incluir cânceres de cólon esporádicos e hereditários. O câncer de cólon pode incluir neoplasmas de cólon malignos, carcinoma in situ, tumores carcinoides típicos, e tumores carcinoides atípicos. O câncer de cólon pode incluir adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, e adenocarcinoma de células escamosas. O câncer de cólon pode estar associado com uma síndrome hereditária selecionada a partir do grupo que consiste em câncer colorretal não poliposo hereditário, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil. O câncer de cólon pode ser causado por uma síndrome hereditária selecionada a partir do grupo que consiste em câncer colorretal não poliposo hereditário, polipose adenomatosa familiar, sín- drome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil.
[00411]Transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células do cólon. Transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir câncer de cólon, condições pré- cancerosas do cólon, pólipos adenomatosos do cólon e lesões metacrônicas do cólon. Um transtorno celular proliferativo do cólon pode incluir adenoma. Os transtornos celulares proliferativos do cólon podem ser caracterizados por hiperplasia, metaplasia, e displasia do cólon. Doenças do cólon anteriores que podem predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir câncer anterior de cólon. A doença corrente que pode predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do cólon pode incluir doença de Crohn e colite ulcerativa. Um transtorno celular proliferativo do cólon pode estar associado com uma mutação em um gene selecionado a partir do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC. Um indivíduo pode ter um risco elevado de desenvolver um transtorno celular proliferativo do cólon devido à presença de uma mutação em um gene selecionado a partir do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC.
[00412]Um “transtorno celular proliferativo do pâncreas” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do pâncreas. Os transtornos celulares prolife- rativos do pâncreas podem incluir todas as formas de transtornos celulares prolifera- tivos que afetam as células pancreáticas. Transtornos celulares proliferativos do pâncreas podem incluir câncer de pâncreas, um pré-cancer ou condição pré- cancerosa do pâncreas, hiperplasia do pâncreas, e displasia do pâncreas, crescimentos benignos ou lesões do pâncreas, e crescimentos malignos ou lesões do pâncreas, e lesões metastáticas em tecido e órgãos no corpo, exceto o pâncreas. O câncer pancreático inclui todas as formas de câncer do pâncreas. O câncer pancreá- tico pode incluir adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células gigantes pleomórfico, adenocarcinoma mucoso, carcinoma de células gigantes do tipo osteoclasto, cistoadenocarcinoma mucoso, carcinoma acinar, carcinoma de células grandes não classificado, carcinoma de células pequenas, pancreatoblas- toma, neoplasma papilar, cistadenoma mucoso, neoplasma cístico papilar, e cistadenoma seroso. O câncer pancreático também pode incluir neoplasmas pancreáti- cos que apresentam heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[00413]Um “transtorno celular proliferativo da próstata” é um transtorno celular proliferativo que envolve células da próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células da próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir câncer de próstata, um pré-cancer ou condição pré-cancerosa da próstata, crescimentos benignos ou lesões da próstata, e crescimentos malignos ou lesões da próstata, e lesões metastáticas em tecido e órgãos no corpo, exceto a próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia da próstata.
[00414]Um “transtorno celular proliferativo da pele” é um transtorno celular proliferativo que envolve células da pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células da pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir um pré- cancer ou condição pré-cancerosa da pele, crescimentos benignos ou lesões da pele, melanoma, melanoma maligno e outros crescimentos malignos ou lesões da pele, e lesões metastáticas em tecido e órgãos no corpo, exceto a pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia da pele.
[00415]Um “transtorno celular proliferativo do ovário” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do ovário. Transtornos celulares proliferativos do ovário podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células do ovário. Transtornos celulares proliferativos do ovário podem incluir um pré-cancer ou condição pré-cancerosa do ovário, crescimentos benignos ou lesões do ovário, câncer ovariano, crescimentos malignos ou lesões do ovário, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto o ovário. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia de células do ovário.
[00416]Um “transtorno celular proliferativo da mama” é um transtorno celular proliferativo que envolve as células da mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células da mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir câncer de mama, um pré-cancer ou condição pré-cancerosa da mama, crescimentos benignos ou lesões da mama, e crescimentos malignos ou lesões da mama, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto a mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia da mama.
[00417]Um transtorno celular proliferativo da mama pode ser uma condição pré-cancerosa da mama. Composições da presente invenção podem ser usadas para tratar uma condição pré-cancerosa da mama. Uma condição pré-cancerosa da mama pode incluir hiperplasia da mama atípica, carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, e crescimento ou lesão estágio 0 ou grau 0 da mama (por exemplo, câncer de mama estágio 0 ou grau 0, ou carcinoma in situ). Uma condição pré-cancerosa da mama pode ser gradual, de acordo com o esquema de classificação TNM, conforme aceito pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC), onde o tumor primário (T) foi determinado um estágio de T0 ou Tis; e onde os linfonodos regionais (N) foram determinados um estágio de N0; e onde metástase distante (M) foi determinada um estágio de M0.
[00418]O transtorno celular proliferativo da mama pode ser câncer de mama. Preferivelmente, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de mama. O câncer de mama inclui todas as formas de câncer da mama. O câncer de mama pode incluir cânceres de mama epiteliais primários. O câncer de mama pode incluir cânceres em que a mama está envolvida por outros tumores, tais como linfoma, sarcoma ou melanoma. O câncer de mama pode incluir carcinoma da mama, carcinoma da mama ductal, carcinoma da mama lobular, carcinoma da mama não diferenciado, cistosarcoma filódio da mama, angiossarcoma da mama, e lin- foma primário da mama. O câncer de mama pode incluir câncer de mama Estágio I, II, IIIA, IIIB, IIIC e IV. O carcinoma da mama ductal pode incluir carcinoma invasivo, carcinoma invasivo in situ com componente intraductal predominante, câncer de mama inflamatório, e um carcinoma da mama ductal com um tipo histológico selecionado a partir do grupo que consiste em pústula, muco (coloide), medular, medular com infiltrado linfocítico, papilar, fibroso, e tubular. Carcinoma da mama lobular pode incluir carcinoma lobular invasivo com componente predominante in situ, carcinoma lobular invasivo, e carcinoma lobular infiltrante. O câncer de mama pode incluir doença de Paget, doença de Paget com carcinoma intraductal, e doença de Paget com carcinoma ductal invasivo. O câncer de mama pode incluir neoplasmas da mama que apresentam heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[00419]Preferivelmente, composto da presente invenção, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo, ou solvato do mesmo, pode ser usado para tratar câncer de mama. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir câncer de mama familiar. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir câncer de mama esporádico. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um macho. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em uma fêmea. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em uma fêmea que se encontra na pré-menopausa ou uma fêmea que se encontra na pós-menopausa. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um sujei-to que apresenta 30 anos de idade ou mais, ou um sujeito que apresenta menos de 30 anos de idade. Um câncer de mama que deve ser tratado surgiu em um sujeito com 50 anos de idade ou mais, ou um sujeito que apresenta menos do que 50 anos de idade. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um sujeito com 70 anos de idade ou mais, ou um sujeito que apresenta menos do que 70 anos de idade.
[00420]Um câncer de mama que é deve ser tratado pode ser tipificado para identificar uma mutação familiar ou espontânea em BRCA1, BRCA2 ou p53. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado por apresentar uma amplificação do gene HER2/neu, por superexpressar HER2/neu, ou por apresentar um nível baixo, intermediário ou alto de expressão de HER2/neu. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado para um marcador selecionado a partir do grupo que consiste em receptor de estrogênio (ER), receptor de progesterona (PR), receptor de fator de crescimento epidérmico humano-2, Ki-67, CA15 - 3, CA 27 - 29, e c-Met. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado como ER- desconhecido, ER-rico ou ER-deficiente. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado como ER-negativo ou ER-positivo. ER-tipagem de um câncer de mama pode ser realizada por quaisquer meios reproduzíveis. ER-tipagem de um câncer de mama pode ser realizada, conforme apresentado em Onkologie 27: 175 - 179 (2004). Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado como PR- desconhecido, PR-rico, ou PR-deficiente. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado como PR-negativo ou PR-positivo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado como receptor positivo ou receptor negativo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser tipificado por estar associado com níveis sanguíneos elevados de CA 15 - 3, ou CA 27 - 29, ou ambos.
[00421]Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor localizado da mama. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que é associado com uma biópsia de linfonodo sentinela negativo (SLN). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado com uma biópsia de linfonodo sentinela positivo (SLN). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado com um ou mais linfonodos axilares positivos, onde os linfonodos axilares foram apresentados por qualquer método aplicável. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que foi tipificado por apresentar estado negativo nodal (por exemplo, nodo-negativo) ou estado positivo nodal (por exemplo, nodo-positivo). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que sofreu metástase em outras localizações no corpo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar metástase em uma localização selecionada a partir do grupo que consiste em osso, pulmão, fígado ou cérebro. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado, de acordo com uma característica selecionada a partir do grupo que consiste em metastático, localizado, regional, local-regional, localmente avançado, distante, multicêntrico, bilateral, ipsilateral, con- tralateral, recém diagnosticado, recorrente e inoperável.
[00422]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode ser usado para tratar ou prevenir um transtorno celular proliferativo da mama, ou para tratar ou prevenir câncer de mama, em um sujeito que apresenta um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma fêmea com um histórico familiar ou histórico pessoal de câncer de mama. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma fêmea que apresenta uma linhagem germinativa ou mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um sujeito com um risco aumen-tado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma fêmea com um histórico familiar de câncer de mama e uma linhagem germinativa ou mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma fêmea que apresenta mais do que 30 anos de idade, mais do que 40 anos de idade, mais do que 50 anos de idade, mais do que 60 anos de idade, mais do que 70 anos de idade, mais do que 80 anos de idade, ou mais do que 90 anos de idade. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à po-pulação em geral é um sujeito com hiperplasia da mama atípica, carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, ou um crescimento ou lesão da mama estágio 0 (por exemplo, câncer de mama estágio 0 ou grau 0, ou carcinoma in situ).
[00423]Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser histologicamente classificado, de acordo com o sistema de Scarff-Bloom-Richardson, em que um tumor da mama foi avaliado como um escore de contagem de mitose de 1, 2, ou 3; um escore de pleiomorfismo nuclear de 1, 2, ou 3; um escore de formação de túbulo de 1, 2, ou 3; e um escore de Scarff-Bloom-Richardson total entre 3 e 9. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser avaliado como um grau de tumor, de acordo com o International Consensus Panel on the Treatment of Breast Cancer selecionado a partir do grupo que consiste em grau 1, grau 1 a 2, grau 2, grau 2 a 3, ou grau 3.
[00424]Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado, de acordo com o sistema de classificação American Joint Committee on Cancer (AJCC) TNM, onde o tumor (T) foi avaliado como um estágio de TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c, ou T4d; e onde os linfonodos regionais (N) foram avaliados como um estágio de NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b, ou N3c; e onde me- tástase distante (M) pode ser avaliada como um estágio de MX, M0, ou M1. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado, de acordo com uma classificação American Joint Committee on Cancer (AJCC) como Estágio I, Estágio IIA, Estágio IIB, Estágio IIIA, Estágio IIIB, Estágio IIIC, ou Estágio IV. Um câncer que deve ser tratado pode ser avaliado como um grau, de acordo com uma classificação AJCC como Grau GX (por exemplo, o grau não pode ser avaliado), Grau 1, Grau 2, Grau 3 ou Grau 4. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado, de acordo com uma classificação patológica AJCC (pN) de pNX, pN0, PN0 (I-), PN0 (I+), PN0 (mol), PN0 (mol+), PN1, PN1(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, ou pN3c.
[00425]Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado ser menor do que ou igual a cerca de 2 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado apresentar de cerca de 2 a cerca de 5 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado ser maior do que ou igual a cerca de 3 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado ser maior do que 5 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica, como bem diferenciado, moderadamente diferenciado, deficientemente diferenciado, ou não diferenciado. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica com respeito à contagem de mitose (por exemplo, quantidade de divisão celular) ou pleiomorfismo nuclear (por exemplo, mudança nas células). Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica por estar associado com áreas de necrose (por exemplo, áreas de células mortas ou em recuperação). Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar um cariótipo anormal, apresentar um número anormal de cromossomos, ou apresentar um ou mais cromossomos que são anormais na aparência. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por ser aneuploide, triploide, tetraploide, ou por apresentar um ploidia alterada. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar uma translocação cromossômica, ou uma deleção ou duplicação de um cromossomo total, ou uma região de deleção, duplicação ou amplificação de uma porção de um cromossomo.
[00426]Um câncer que deve ser tratado pode ser avaliado por citometria de DNA, citometria de fluxo, ou citometria de imagem. Um câncer que deve ser tratado pode ser tipificado por apresentar 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, ou 90 % de células no estágio de síntese de divisão celular (por exemplo, na fase S da divisão celular). Um câncer que deve ser tratado pode ser tipificado por apresentar uma baixa fração de fase S ou uma alta fração de fase S.
[00427]Conforme usado neste relatório, uma “célula normal” é uma células que não pode ser classificada como parte de um “transtorno celular proliferativo”. Uma célula normal carece de crescimento desregulado ou anormal, ou ambos, o que pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença não desejada. Preferivelmente, uma célula normal possui mecanismos de controle de pontos de verificação de ciclo celular que funcionam normalmente.
[00428]Conforme usado neste relatório, “contatar uma célula” se refere a uma condição em que um composto ou outra composição de matéria está em contato direto com uma célula, ou está perto o suficiente para induzir um efeito biológico desejado em uma célula.
[00429]Conforme usado neste relatório, “composto candidato” se refere a um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, que foi ou será testado em um ou mais ensaios biológicos in vitro ou in vivo, de modo a determinar se tal composto induzirá uma resposta biológica ou médica desejada em uma célula, tecido, sistema, animal ou ser humano que está sendo procurado por um pesquisador ou clínico. Um composto candidato é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento do câncer. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo. Ensaios biológicos in vitro ou in vivo podem incluir, mas não são limitados a ensaios de atividade enzimática, ensaios de troca de mobilidade eletroforética, ensaios de gene repórter, ensaios de viabilidade celular in vitro, e os ensaios descritos neste relatório.
[00430]Conforme usado neste relatório, “monoterapia” se refere à administração de um composto ativo ou terapêutico único a um sujeito em necessidade do mesmo. Preferivelmente, a monoterapia envolverá a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ativo único. Por exemplo, a monoterapia contra o câncer com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo, a um sujeito em necessidade de tratamento para câncer. Em um aspecto, o composto ativo único é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo.
[00431]Conforme usado neste relatório, “tratamento” ou “tratar” descreve o supervisão e cuidado de um paciente para o propósito de combater uma doença, condição, ou transtorno e inclui a administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para aliviar os sintomas ou complicações de uma doença, condição ou transtorno, ou para eliminar a doença, condição ou transtorno.
[00432]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, também pode ser usado para prevenir uma doença, condição ou transtorno. Conforme usado neste relatório, “prevenção” ou “prevenir” descreve a redução ou eliminação do início dos sintomas ou complicações da doença, condição ou transtorno.
[00433]Conforme usado neste relatório, o termo “aliviar” descreve um processo pelo qual a severidade de um sinal ou sintoma de um transtorno é diminuído. De maneira importante, um sinal ou sintoma pode ser aliviado sem ser eliminado. Em uma modalidade preferida, a administração das composições farmacêuticas da invenção leva à eliminação de um sinal ou sintoma, entretanto, a eliminação não é exigida. Dosagens eficazes são esperadas diminuir a severidade de um sinal ou sintoma. Por exemplo, um sinal ou sintoma de um transtorno, tal como câncer, que pode ocorrer em múltiplas localizações, é aliviado, se a severidade do câncer for diminuída dentro de pelo menos uma entre múltiplas localizações.
[00434]Conforme usado neste relatório, o termo “severidade” descreve o potencial de o câncer se transformar a partir de um estado pré-canceroso ou benigno, em um estado maligno. Alternativamente, ou além disso, a severidade descreve um estágio de câncer, por exemplo, de acordo com o sistema TNM (aceito pelo International Union Against Cancer (UICC) e o American Joint Committee on Cancer (AJCC)) ou por outros métodos reconhecidos na técnica. O estágio do câncer se refere à extensão ou severidade do câncer, com base em fatores, tais como a locali- zação do tumor primário, tamanho do tumor, número de tumores, e envolvimento do linfonodo (difusão do câncer nos linfonodos). Alternativamente, ou além disso, a severidade descreve o grau do tumor através de métodos reconhecidos na técnica (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov). O grau do tumor é um sistema usado para classificar células de câncer em termos de quanto anormal parecem sob um microscópio e a rapidez que o tumor tende a crescer e se espalhar. Muitos fatores são considerados quando se determina o grau do tumor, incluindo a estrutura e padrão de crescimento das células. Os fatores específicos usados para determinar o grau do tumor podem variar com cada tipo de câncer. A severidade também descreve um grau histológico, também chamado diferenciação, que se refere a quantidade de células tumorais que se assemelham a células normais do mesmo tipo de tecido (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov). Além disso, a severidade descreve um grau nuclear, que se refere ao tamanho e forma do núcleo em células de tumor e a porcentagem de células de tumor que são divididas (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov).
[00435]Em um outro aspecto da invenção, a severidade descreve o grau em que um tumor secretou fatores de crescimento, degradou a matriz extracelular, se tornou vascularizado, perdeu adesão aos tecidos justapostos, ou sofreu metástase. Além disso, a severidade descreve o número de localizações em que um tumor primário sofreu metástase. Finalmente, a severidade inclui a dificuldade de tratar tumores de tipos e localizações variados. Por exemplo, tumores inoperáveis, aqueles cânceres que têm maior acesso a múltiplos sistemas do corpo (tumores hematológicos e imunológicos), e aqueles que são os mais resistentes aos tratamentos tradici-onais são considerados mais severos. Nestas situações, o prolongamento da expectativa de vida do sujeito e/ou a redução da dor, diminuição da proporção de células cancerosas ou restrição das células a um sistema, e melhora do estágio do cân- cer/grau do tumor/grau histológico/grau nuclear são considerados aliviar um sinal ou sintoma do câncer.
[00436]Conforme usado neste relatório, o termo “sintoma” é definido como uma indicação de doença, enfermidade, lesão, ou que alguma coisa não está certa no corpo. Os sintomas são sentidos ou observados pela experiência individual do sintoma, mas podem não ser facilmente observados por outros. Outros são definidos como não profissionais de cuidados de saúde.
[00437]Conforme usado neste relatório o termo “sinal” também é definido como uma indicação de que alguma coisa não está certa no corpo. Sinais são definidos como coisas que podem ser observadas por um médico, enfermeiro, ou outro profissional de saúde.
[00438]Câncer é um grupo de doenças que podem causar quase qualquer sinal ou sintoma. Os sinais e sintomas dependerão de onde está o câncer, do tamanho do câncer, e quanto ele afeta os órgãos ou estruturas vizinhos. Se um câncer se espalha (sofre metástase), depois os sintomas podem aparecer em partes diferentes do corpo.
[00439]Conforme um câncer cresce, ele começa a empurrar órgãos vizinhos, vasos sanguíneos e nervos. Esta pressão cria alguns dos sinais e sintomas do câncer. Se o câncer está em uma área crítica, tal como certas partes do cérebro, mesmo o menor tumor pode causar sintomas iniciais.
[00440]Mas algumas vezes os cânceres começam em lugares onde eles não causam quaisquer sintomas até que o câncer se torne muito grande. Cânceres de pâncreas, por exemplo, não se tornam usualmente grandes o suficiente para serem sentidos do lado externo do corpo. Alguns cânceres pancreáticos não causam sintomas até que comecem a crescer em torno dos nervos vizinhos (isto causa um dor nas costas). Outros crescem em torno do duto biliar, que bloqueia o fluxo de bile e leva a uma cor amarelada da pele conhecida como icterícia. No momento em que um câncer pancreático causa estes sinais ou sintomas, ele usualmente atingiu um estágio avançado.
[00441]Um câncer também pode causar sintomas, tais como febre, fadiga, ou perda de peso. Isto pode ocorrer porque as células de câncer utilizam muito fornecimento de energia do corpo ou liberam substâncias que mudam o metabolismo do corpo. Ou o câncer pode fazer com que o sistema imune reaja em maneiras que produzem estes sintomas.
[00442]Algumas vezes, as células de câncer liberam substâncias na corrente sanguínea que causam sintomas não usualmente pensados resultar de cânceres. Por exemplo, alguns cânceres do pâncreas podem liberar substâncias que fazem com que coágulos de sangue se desenvolvam nas veias das pernas. Alguns cânceres de pulmão produzem substâncias do tipo hormônio que afetam os níveis de cálcio no sangue, afetando nervos e músculos e causando fraqueza e vertigem.
[00443]O câncer apresenta vários sinais ou sintomas gerais que ocorrem quando uma variedade de subtipos de células de câncer está presente. A maioria das pessoas com câncer perderão peso em algum momento com sua doença. Uma perda de peso de (involuntária) inexplicada de 4,5 kg (10 libras) ou mais pode ser o primeiro sinal de câncer, particularmente, cânceres do pâncreas, estômago, esôfago ou pulmão.
[00444]Febre é muito comum ao câncer, mas é mais frequentemente observada na doença avançada. Quase todos os pacientes com câncer terão febre em algum momento, especialmente se o câncer ou seu tratamento afeta o sistema imune e torna mais difícil para o corpo combater a infecção. Menos frequentemente, a febre pode ser um sinal inicial de câncer, tal como leucemia ou linfoma.
[00445]A fadiga pode ser um sintoma importante conforme o câncer progride. Pode acontecer mais cedo, no entanto, em cânceres, tais como com leucemia, ou se o câncer é causador de uma perda contínua de sangue, como em alguns cânceres de cólon ou estômago.
[00446]Dor pode ser um sintoma inicial em alguns cânceres, tais como cânceres ósseos ou câncer testicular. Mas a maioria das dores é um sintoma de doença avançada.
[00447]Juntamente com cânceres da pele (veja próxima seção), alguns cânceres internos podem causar sinais na pele que podem ser observados. Estas mudanças incluem a pele com aspecto mais escuro (hiperpigmentação), amarelo (icterícia), ou vermelho (eritema); coceira; ou crescimento de cabelo excessivo.
[00448]Alternativamente, ou além disso, subtipos de câncer apresentam sinais ou sintomas específicos. Mudanças nos hábitos intestinais ou função da bexiga podem indicar câncer. Constipação a longo prazo, diarreia, ou uma mudança no tamanho das fezes pode ser um sinal de câncer de cólon. Dor ao urinar, sangue na urina, ou uma mudança na função da bexiga (tal como urinação mais frequente ou menos frequente) podem estar relacionados ao câncer de bexiga ou próstata.
[00449]Mudanças na condição ou aparência da pele de uma nova condição da pele pode indicar câncer. Cânceres de pele podem sangrar e parecem feridas que não cicatrizam. Uma ferida duradoura na boca pode ser um câncer oral, especialmente em pacientes que fumam, mastigam tabaco, ou frequentemente bebem álcool. As feridas no pênis ou vagina podem ser sinais de infecção ou um câncer inicial.
[00450]Hemorragia ou descarga incomum pode indicar câncer. Hemorragia incomum pode acontecer em câncer inicial ou avançado. Sangue na saliva (muco) pode ser um sinal de câncer de pulmão. Sangue nas fezes (ou fezes escuras ou pretas) pode ser um sinal de câncer de cólon ou reto. Câncer do cérvice ou do endomé- trio (revestimento do útero) pode causar hemorragia vaginal. Sangue na urina pode ser um sinal de câncer de bexiga ou rim. Uma descarga hemorrágica a partir do mamilo pode ser um sinal de câncer de mama.
[00451]Um espessamento ou nódulo na mama ou em outras partes do corpo pode indicar a presença de um câncer. Muitos cânceres podem ser sentidos através da pele, principalmente na mama, testículos, linfonodos (glândulas), e os tecidos moles do corpo. Um nódulo ou espessamento pode ser um sinal inicial ou tardio de câncer. Qualquer nódulo ou espessamento pode ser indicativo de câncer, especialmente quando a formação é nova ou cresceu em tamanho.
[00452]Indigestão ou dificuldade para engolir pode indicar câncer. Embora estes sintomas comumente tenham outras causas, indigestão ou problemas para engolir podem ser um sinal de câncer do esôfago, estômago ou faringe (garganta).
[00453]Mudanças recentes em uma verruga ou mancha podem ser indicativas de câncer. Qualquer verruga, mancha, ou sarda que muda de cor, tamanho, ou forma, ou perde suas bordas definidas indica o desenvolvimento potencial de câncer. Por exemplo, a lesão na pele pode ser um melanoma.
[00454]Uma tosse persistente ou rouquidão pode ser indicativo de câncer. Uma tosse que não cessa pode ser um sinal de câncer de pulmão. Rouquidão pode ser um sinal de câncer da laringe (caixa vocal) ou tireoide.
[00455]Embora os sinais e sintomas listados acima sejam os mais comuns observados no câncer, existem muitos outros que são menos comuns e não são listados neste relatório. Entretanto, todos os sinais e sintomas reconhecidos na técnica de câncer são considerados e abrangidos pela presente invenção.
[00456]O tratamento do câncer podem resultar em uma redução em tamanho de um tumor. Uma redução em tamanho de um tumor também pode ser referida como “regressão de tumor”. Preferivelmente, depois do tratamento, o tamanho do tumor é reduzido em 5 % ou mais em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o tamanho do tumor é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 % ou mais. O tamanho de um tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O tamanho de um tumor pode ser medido como um diâmetro do tumor.
[00457]O tratamento do câncer pode resultar em uma redução no volume do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o volume do tumor é reduzido em 5 % ou mais em relação ao seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o volume do tumor é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 % ou mais. O volume do tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição.
[00458]O tratamento do câncer resulta em uma diminuição no número de tumores. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de tumores é reduzido em 5 % ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número de tumores é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 %. O número de tumores pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O número de tumores pode ser medido através da contagem de tumores visíveis a olho nu ou em uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x ou 50x.
[00459]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no número de lesões metastáticas em outros tecidos ou órgãos distantes do sítio primário do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de lesões metastáticas é reduzido em 5 % ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número de lesões metastáticas é reduzido em 10 % ou mais; mais pre- ferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 %. O número de lesões metastáticas pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O número de lesões metastáticas pode ser medido através da contagem de lesões metastáticas visíveis a olho nu ou em uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x ou 50x.
[00460]O tratamento do câncer pode resultar em um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe portador sozinho. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio é aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevi-vência médio de uma população também podem ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada de tratamento com um composto ativo.
[00461]O tratamento do câncer pode resultar em um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população de pacientes não tratados. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio é aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e, mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido através de quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população também pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada de tratamento com um composto ativo.
[00462]O tratamento do câncer pode resultar no aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio é aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e, mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população também pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população do tempo médio de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada do tratamento com um composto ativo.
[00463]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe o portador sozinho. O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população não tratada. O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a um população que recebe monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo. Preferivelmente, a taxa de mortalidade é diminuída em mais do que 2 %; mais preferivelmente, em mais do que 5 %; mais preferivelmente, em mais do que 10 %; e, mais preferivelmente, em mais do que 25 %. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população pode ser medida, por exemplo, através do cálculo para uma população do número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população também podem ser medida, por exemplo, através do cálculo para uma população do número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após a conclusão de uma primeira rodada do tratamento com um composto ativo.
[00464]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no crescimento da taxa de tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, a taxa de crescimento do tumor é reduzida em pelo menos 5 % em relação a número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, a taxa de crescimento do tumor é reduzida em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 75 %. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida, de acordo com uma mudança no diâmetro do tumor por unidade de tempo.
[00465]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no novo crescimento do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o novo crescimento do tumor é menor do que 5 %; mais preferivelmente, o novo crescimento do tumor é menor do que 10 %; mais preferivelmente, menor do que 20 %; mais preferivelmente, menor do que 30 %; mais preferivelmente, menor do que 40 %; mais preferivelmente, menor do que 50 %; ainda mais preferivelmente, menor do que 50 %; e, mais preferivelmente, menor do que 75 %. O novo crescimento do tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O novo crescimento do tumor é medido, por exemplo, através da medição de um aumento no diâmetro de um tumor depois de uma redução do tumor anterior que segue o tratamento. Uma diminuição no novo crescimento do tumor é indicada por falha da nova ocorrência dos tumores depois que o tratamento foi interrompido.
[00466]O tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma redução na taxa de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, a taxa of proliferação celular é reduzido em pelo menos 5 %; mais preferivelmente, em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, em pelo menos 75 %. A taxa de proliferação celular pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. A taxa de proliferação celular é medida, por exemplo, através da medição do número de células que se dividem em uma amostra de tecido por unidade de tempo.
[00467]O tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em um redução na proporção de células proliferativas. Preferivelmente, depois do tratamento, a proporção de células proliferativas é reduzido em pelo menos 5 %; mais preferivelmente, em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, em pelo menos 75 %. A proporção de células proliferativas pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. Preferivelmente, a proporção de células proliferativas é medida, por exemplo, através da quantificação do número de células que se dividem em relação ao número de células que não se dividem em uma amostra de tecido. A proporção de células proliferativas pode ser equivalente ao índice mitótico.
[00468]O tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma diminuição no tamanho de uma área ou zona de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular é reduzido em pelo menos 5 % em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 75 %. O tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido por quaisquer meios re-produzíveis de medição. O tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido como um diâmetro ou largura de uma área ou zona de proliferação celular.
[00469]O tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma diminuição no número ou proporção de células que apresentam uma aparência ou morfologia anormal. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de células que apresentam uma morfologia anormal é reduzido em pelo menos 5 % em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 75 %. Uma aparência ou morfologia celular anormal pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. Uma morfologia celular anormal pode ser medida por microscopia, por exemplo, usando um microscópio de cultura de tecido invertido. Uma morfologia celular anormal pode tomar a forma de pleiomor- fismo nuclear.
[00470]Conforme usado neste relatório, o termo “seletivamente” significa uma tendência a ocorrer em uma frequência mais alta em uma população em relação a uma outra população. As populações comparadas podem ser populações celulares. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, atua seletivamente em um câncer ou célula pré-cancerosa, mas não em uma célula normal. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, atua seletivamente para modular um alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransfe- rase alvo) mas não modular significantemente um outro alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransferase não alvo). A invenção também fornece um método para inibir seletivamente a atividade de uma enzima, tal como uma proteína metil- transferase. Preferivelmente, um evento ocorre seletivamente na população A em relação à população B se ocorrer mais do que duas vezes mais frequentemente na população A em comparação à população B. Um evento ocorre seletivamente se ocorrer mais do que cinco vezes mais frequentemente na população A. Um evento ocorre seletivamente se ocorrer mais do que dez vezes mais frequentemente na população A; mais preferivelmente, mais do que cinquenta vezes; ainda mais preferivelmente, mais do que 100 vezes; e, mais preferivelmente, mais do que 1000 vezes mais frequentemente na população A em comparação à população B. Por exemplo, a morte celular ocorreria seletivamente em células de câncer se ocorrer mais do que duas vezes como frequentemente em células de câncer em comparação às células normais.
[00471]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode modular a atividade de um alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransferase alvo). A modulação se refere ao estímulo ou inibição de uma atividade de um alvo molecular. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular se ele estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 2 vezes em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto. Mais preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular se ele estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto. A atividade de um alvo molecular pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis. A atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro ou in vivo. Por exemplo, a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro por um ensaio de atividade enzimática ou um ensaio de ligação ao DNA, ou a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vivo através da avaliação quanto à expressão de um gene repórter.
[00472]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, não modula sig- nificantemente a atividade de um alvo molecular se a adição do composto não estimular ou inibir a atividade do alvo molecular em mais do que 10 % em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto.
[00473]Conforme usado neste relatório, o termo “isozima seletiva” significa inibição ou estímulo preferencial de uma primeira isoforma de uma enzima em comparação a uma segunda isoforma de uma enzima (por exemplo, inibição ou estímulo preferencial de uma isozima alfa de proteína metiltransferase em comparação a um isozima beta de proteína metiltransferase). Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, demonstra um mínimo de um diferencial de quatro vezes, preferivelmente, um diferencial de dez vezes, mais preferivelmente, um diferencial de cinquenta vezes, na dosagem exigida para obter um efeito biológico. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, demonstra este diferencial através da faixa de inibição, e o diferencial é exemplificado na IC50, isto é, uma inibição de 50 %, para um alvo molecular de interesse.
[00474]A administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a uma célula ou um sujeito em necessidade do mesmo pode resultar na modulação (isto é, estímulo ou inibição) de uma atividade de uma proteína metiltransfera- se de interesse.
[00475]A presente invenção fornece métodos para avaliar a atividade biológica de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo ou métodos para identificar um composto de teste como um modulador (por exemplo, um inibidor) de DOT1L. Polipeptídeos e ácidos nucleicos de DOT1L podem ser usados para triar compostos que se ligam a e/ou modulam (por exemplo, aumentam ou diminuem) uma ou mais atividades biológicas de DOT1L, incluindo mas não limitadas à atividade de H3K79 HMTase, atividade de ligação a SAM, atividade de ligação à histona e/ou nucleos- soma, atividade de ligação a AF10, AF10-MLL ou outra atividade de ligação à prote- ína de fusão de MLL, e/ou qualquer outra atividade biológica de interesse. Um poli- peptídeo de DOT1L pode ser um fragmento funcional de um polipeptídeo de DOT1L de comprimento total ou equivalente funcional do mesmo, e pode compreender qualquer domínio de DOT1 de interesse, incluindo, mas não limitado ao domínio catalítico, ao domínio de ligação a SAM e/ou ao domínio positivamente carregado, ao domínio de interação a AF10 e/ou um sinal de exportação nuclear.
[00476]Métodos para avaliar a ligação de DOT1L às histonas, nucleosso- mas, ácidos nucleicos ou polipeptídeos podem ser realizados usando técnicas padrão que serão evidentes àqueles habilitados na técnica (veja a Exemplificação para métodos exemplares). Tais métodos incluem ensaios híbrido duplo de levedura e mamífero e técnicas de coimunoprecipitação.
[00477]Por exemplo, um composto que modula a atividade de DOT1L H3K79 HMTase pode ser verificado por: contato de um polipeptídeo de DOT1L com uma histona ou substrato de peptídeo compreendendo H3 na presença de um composto de teste; detecção do nível da metilação de H3K79 da histona ou substrato de peptídeo sob condições suficientes para fornecer a metilação de H3K79, em que uma elevação ou redução na metilação de H3K79 na presença do composto de teste em comparação ao nível de metilação da histona H3K79 na ausência do composto de teste indica que o composto de teste modula a atividade de DOT1L H3K79 HMTase.
[00478]Os métodos de triagem da invenção podem ser realizados em um sistema com base em células ou livre de células. Como uma outra alternativa, o ensaio pode ser realizada em um animal total (incluindo animais transgênicos não humanos). Além disso, com respeito aos sistemas com base em células, o polipeptídeo de DOT1L (ou qualquer outro polipeptídeo usado no ensaio) pode ser adicionado diretamente à célula ou pode ser produzido a partir de um ácido nucleico na célula. O ácido nucleico pode ser endógeno à célula ou pode ser estranho (por exemplo, uma célula geneticamente modificada).
[00479]Em alguns ensaios, reagentes imunológicos, por exemplo, anticorpos e antígenos, são utilizados. A fluorescência pode ser utilizada na medição da atividade enzimática em alguns ensaios. Conforme usado neste relatório, “fluorescência” se refere a um processo através do qual uma molécula emite um fóton como um resultado da absorção de um fóton entrante de maior energia pela mesma molécula. Métodos específicos para avaliar a atividade biológica dos compostos divulgados são descritos nos exemplos.
[00480]A administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a uma célula ou um sujeito em necessidade do mesmo resulta na modulação (isto é, estímulo ou inibição) de uma atividade de um alvo intracelular (por exemplo, substrato). Vários alvos intracelulares podem ser modulados com os compostos da presente invenção, incluindo, mas não limitados à proteína metiltrasferase.
[00481]A ativação se refere à colocação de uma composição de matéria (por exemplo, proteína ou ácido nucleico) em um estado adequado para realizar uma função biológica desejada. Uma composição de matéria capaz de ser ativada também tem um estado não ativado. Uma composição ativada de matéria pode ter uma função biológica inibitória e/ou estimulante.
[00482]Elevação se refere a um aumento em uma atividade biológica desejada de uma composição de matéria (por exemplo, uma proteína ou um ácido nu- cleico). A elevação pode ocorrer através de um aumento na concentração de uma composição de matéria.
[00483]Conforme usado neste relatório, “uma via de controle de ciclo celular” se refere a uma via bioquímica que está envolvida na modulação de um controle de ciclo celular. Uma via de controle de ciclo celular pode ter efeitos estimulantes e/ou inibitórios sobre uma ou mais funções compreendendo um controle de ciclo celular. Uma via de controle de ciclo celular é compreendida de pelo menos duas composições de matéria, preferivelmente proteínas, ambas as quais contribuem para a modulação de um controle de ciclo celular. Uma via de controle de ciclo celular pode ser ativada através de uma ativação de um ou mais membros da via de controle de ciclo celular. Preferivelmente, uma via de controle de ciclo celular é uma via de sinalização bioquímica.
[00484]Conforme usado neste relatório, “regulador de controle de ciclo celular” se refere a uma composição de matéria que pode funcionar, pelo menos em parte, na modulação de um controle de ciclo celular. Um regulador de controle de ciclo celular pode ter efeitos estimulantes e/ou inibitórios, em uma ou mais funções compreendendo um controle de ciclo celular. Um regulador de controle de ciclo celular pode ser ou não uma proteína.
[00485]O tratamento do câncer ou um transtorno celular proliferativo pode resultar em morte celular, e preferivelmente, a morte celular resulta em uma diminuição de pelo menos 10 % no número de células em uma população. Mais preferivelmente, a morte celular significa uma diminuição de pelo menos 20 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 30 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 40 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 50 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 75 %. O número de células em uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Várias células em uma população podem ser medidas por separador celular ativado por fluo-rescência (FACS), imunomicroscopia de fluorescência e microscopia de luz. Os métodos para medir a morte celular são mostrados em Li et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(5): 2674 - 8, 2003. Em um aspecto, a morte celular ocorrer através de apop- tose.
[00486]Preferivelmente, uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, não é significantemente citotóxica às células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não é significantemente citotó- xica às células normais se a administração do composto em uma quantidade tera- peuticamente eficaz não induzir a morte celular em mais do que 10 % de células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não afeta signi- ficantemente a viabilidade das células normais se administração do composto em uma quantidade terapeuticamente eficaz não induz a morte celular em mais do que 10 % de células normais. Em um aspecto, a morte celular ocorre através de apopto- se.
[00487]O contato de uma célula com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente em células de câncer. A administração a um sujeito em necessidade de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente em células de câncer. O contato de uma célula com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um transtorno celular proliferativo. Preferivelmente, a administração a um sujeito em necessidade de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, induz a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um transtorno celular proliferativo.
[00488]A presente invenção se refere a um método para tratar ou prevenir câncer através da administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a um sujeito em necessidade do mesmo, onde a administração do composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, resulta em um ou mais entre os seguintes: acúmulo de células em G1 e/ou fase S do ciclo celular, citotoxicidade via morte celular em células de câncer sem uma quantidade significante de morte celular em células normais, a atividade antitumor em animais com um índice terapêutico de pelo menos 2, e a ativação de um controle de ciclo celular. Conforme usado neste relatório, “índice terapêutico” é a dose máxima tolerada dividida pela dose eficaz.
[00489]Uma pessoa habilitada na técnica pode se referir a textos de referência geral para descrições detalhadas de técnicas conhecidas debatidas neste relatório ou técnicas equivalentes. Estes textos incluem Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley e Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3a edição), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, Nova Iorque (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18a edição (1990). Estes textos, certamente, também podem ser referidos na preparação ou uso de um aspecto da invenção.
[00490]Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados para tratar ou prevenir doenças ou transtornos neurológicos. Doenças ou transtornos neurológicos que podem ser tratados com os compostos desta invenção incluem epilepsia, esquizofrenia, transtorno bipolar ou outros transtornos psicológicos e/ou psiquiátricos, neuropatias, atrofia muscular esquelética, e doenças neurodegenerati- vas, por exemplo, uma doença neurodegenerativa. Doenças neurodegenerativas exemplares incluem: doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), e doença de Parkinson. Uma outra classe de doenças neurodegenerativas inclui doenças causadas, pelo menos em parte, pela agregação de poli-glutamina. Doen ças desta classe incluem: Doenças de Huntington, Atrofia Muscular espinhalbulbar (SBMA ou Doença de Kennedy) Atrofia Dentatorubropalidoluisiana (DRPLA), Ataxia Espinocerebelar 1 (SCA1), Ataxia Espinocerebelar 2 (SCA2), Doença de Machado- Joseph (MJD; SCA3), Ataxia Espinocerebelar 6 (SCA6), Ataxia Espinocerebelar 7 (SCA7), e Ataxia Espinocerebelar 12 (SCA12).
[00491]Qualquer outra doença em que a metilação epigenética, que é mediada por DOT1, desempenha um papel, pode ser tratada ou prevenida usando os compostos e métodos descritos neste relatório.
4. Composições Farmacêuticas
[00492]A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto das Fórmulas (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IIIc) e (IV) em combinação com pelo menos um excipiente ou portador farmaceuticamente aceitável.
[00493]Uma “composição farmacêutica” é uma formulação contendo os compostos da presente invenção em uma forma adequada para a administração a um sujeito. Em uma modalidade, a composição farmacêutica está na forma de dosagem em massa ou na forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária é qualquer uma entre uma variedade de formas, incluindo, por exemplo, uma cápsula, uma bolsa IV, um tablete, uma bomba única em um inalador aerossol ou um frasco. A quantidade de ingrediente ativo (por exemplo, uma formulação do composto divulgado ou sal, hidrato, solvato ou isômero do mesmo) em uma dose unitária da composição é uma quantidade eficaz e é variada, de acordo com o tratamento particular envolvido. Uma pessoa habilitada na técnica avaliará que, algumas vezes, é necessário fazer variações de rotina à dosagem dependendo da idade e condição do paciente. A dosagem também dependerá da via de administração. Uma variedade de vias é considerada, incluindo oral, pulmonar, retal, parenteral, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, inalação, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal, e semelhantes. As formas de dosagem para a ad- ministração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, pulverizadores, unguentos, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. Em uma modalidade, o composto ativo é misturado sob condições estéreis com um portador farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer preservantes, tampões, ou propelentes que são exigidos.
[00494]Conforme usado neste relatório, a frase “farmaceuticamente aceitável” se refere àqueles compostos, materiais, composições, portadores, e/ou formas de dosagem que são no escopo da avaliação médica adequados para o uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação excessivo, proporcional a uma razão benefício/risco razoável.
[00495]“Excipiente farmaceuticamente aceitável” significa um excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é, em geral, segura, não tóxica e nem biologicamente nem de outro modo indesejável, e inclui excipiente que é aceitável para uso veterinário, assim como uso farmacêutico humano. Um “excipi- ente farmaceuticamente aceitável”, conforme usado no relatório descritivo e reivindicações, inclui um e mais do que um tal excipiente.
[00496]Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com sua via intencionada de administração. Exemplos de vias de administração incluem parenteral, por exemplo, administração intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral (por exemplo, inalação), transdérmica (tópica), e transmucosa. Soluções ou suspensões usadas para aplicação parenteral, intradérmica, ou subcutânea podem incluir os componentes seguintes: um diluente estéril, tal como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tais como álcool benzílico ou metil parabenos; antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes, tais como ácido etilenodiaminotetraacético; tampões, tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste de tonicidade, tal como cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parenteral pode ser fechada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de múltiplas doses fabricados de vidro ou plástico.
[00497]Um composto ou composição farmacêutica da invenção pode ser administrado a um sujeito em qualquer um dos métodos correntemente bem conhecidos usados para o tratamento quimioterápico. Por exemplo, para o tratamento de cânceres, um composto da invenção pode ser injetado diretamente em tumores, injetado na corrente sanguínea ou cavidades do corpo ou tomado oralmente ou aplicado através da pele com emplastros. A dose escolhida deve ser suficiente para constituir o tratamento eficaz, mas não tão alta para não causar efeitos colaterais inaceitáveis. O estado da condição da doença (por exemplo, câncer, pré-cancer, e semelhantes) e a saúde do paciente devem, preferivelmente, ser monitorados durante um período de tempo razoável depois do tratamento.
[00498]O termo “quantidade terapeuticamente eficaz”, conforme usado neste relatório, se refere a uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar, ou prevenir uma doença ou condição identificada, ou para exibir um efeito terapêutico ou inibitório detectável. O efeito pode ser detectado por qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz precisa para um sujeito dependerá do peso corpóreo do sujeito, tamanho e saúde; da natureza e extensão da condição; e do produto terapêutico selecionado para a administração. Quantidades terapeuti- camente eficazes para uma dada situação podem ser determinadas por experimentação de rotina que constitui a habilidade e julgamento do clínico. Em um aspecto preferido, a doença ou condição a ser tratada é câncer. Em um outro aspecto, a doença ou condição a ser tratada é um transtorno celular proliferativo.
[00499]Para qualquer composto, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente em ensaios de cultura celular, por exemplo, de células ne- oplásicas, ou em modelos animais, usualmente, ratos, camundongos, coelhos, cães ou porcos. O modelo animal também pode ser usado para determinar a faixa de concentração apropriada e via de administração. Tal informação depois pode ser usada para determinar doses e vias úteis para a administração em seres humanos. Eficácia terapêutica/profilática e toxicidade podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50 % da população) e LD50 (a dose letal a 50 % da população). A razão de dose entre efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e ela pode ser expressa como a razão, LD50/ED50. As composições farmacêuticas que exibem grandes índices terapêuticos são preferidas. A dosagem pode variar dentro de sua faixa dependendo da forma de dosagem utilizada, sensibilidade do paciente e a via de administração.
[00500]Dosagem e administração são ajustadas para fornecer níveis suficientes do(s) agente(s) ativo(s) ou para manter o efeito desejado. Fatores que pode ser levados em conta incluem a severidade do estado da doença, saúde geral do sujeito, idade, peso, e sexo do sujeito, dieta, tempo e frequência de administração, interações medicamentosas, sensibilidades de reação, e tolerância/resposta à terapia. As composições farmacêuticas de ação prolongada podem ser administradas a cada 3 a 4 dias, a cada semana, ou uma a cada duas semanas dependendo da meia-vida e taxa de clearance da formulação particular.
[00501]As composições farmacêuticas contendo compostos ativos da presente invenção podem ser preparadas em uma maneira que é, em geral, conhecida, por exemplo, por meio de processos de mistura, dissolução, granulação, dragea- mento, levigação, emulsificação, encapsulamento, captura, ou liofilização convencionais. Composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma maneira convencional usando um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis compreendendo excipientes e/ou auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser farmaceuticamente usadas. Certamente, a formulação apropriada é dependente da via de administração escolhida.
[00502]As composições farmacêuticas adequadas para o uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersão. Para a administração intravenosa, portadores adequados incluem solução salina fisiológica, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em todos os casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida à medida que existe fácil seringabilidade. Deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenagem e deve ser preservada contra a ação con- taminante de micro-organismos, tais como bactérias e fungos. O portador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, e polietilenoglicol líquido, e semelhantes), e misturas adequadas do mesmo. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula exigido no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser obtida através de vários agentes antibacterianos e anti- fúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcools, tais como manitol e sorbitol, e cloreto de sódio na compo-sição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser realizada, incluindo na composição, um agente que retarda a absorção, por exemplo, monoesteara- to de alumínio e gelatina.
[00503]As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas através da incorporação do composto ativo na quantidade necessária em um solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme neces sário, seguido por esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas através da incorporação do composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação são secagem a vácuo e liofilização que fornece um pó do ativo ingrediente mais qualquer ingrediente adicional desejado de uma solução filtrada previamente estéril do mesmo.
[00504]As composições orais geralmente incluem um diluente inerte ou um portador farmaceuticamente aceitável comestível. Elas podem ser revestidas em cápsulas de gelatina ou comprimidas em tabletes. Para o propósito de administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e usados na forma de tabletes, pastilhas ou cápsulas. As composições orais também pode ser preparadas usando um fluido portador para o uso como um líquido para higiene bucal, em que o composto no portador fluido é aplicado oralmente e swished e expec- torado ou engolido. Os agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis, e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição. Os tabletes, pílulas, cápsulas, pastilhas e semelhantes podem conter qualquer um dos ingredientes seguintes, ou compostos de um natureza similar: um aglutinante, tal como celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente, tal como amido ou lactose, um agente desintegrante, tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante, tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um deslizante, tal como dióxido de silício coloidal; um agente adoçante, tal como sacarose ou sacarina; ou um agente flavorizante, tal como hortelã-pimenta, salicilato de metila, ou flavorizante de laranja.
[00505]Para a administração por inalação, os compostos são liberados na forma de uma pulverização por aerossol de recipiente ou dispensador de compressão, que contém um gás propelente adequado, por exemplo, um gás, tal como dió- xido de carbono, ou um nebulizador.
[00506]A administração sistêmica também pode ser por via transmucosa ou transdérmica. Para a administração por via transmucosa ou transdérmica, os penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, para administração transmucosa, detergentes, sais biliares, e derivados de ácido fusídico. A administração transmucosa pode ser realizada através do uso de pulverizadores nasais ou supositórios. Para a administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em unguentos, pomadas, géis, ou cremes conforme, geralmente, conhecidos na técnica.
[00507]Os compostos ativos podem ser preparados com portadores farma- ceuticamente aceitáveis que protegerão o composto contra a eliminação rápida a partir do corpo, tais como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de liberação microencapsulados. Os polímeros biodegradáveis e bio- compatíveis podem ser usados, tais como vinil acetato de etileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação de tais formulações serão evidentes àqueles habilitados na técnica. Os materiais também podem ser comercialmente obtidos pela Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. As suspensões lipossômicas (incluindo lipossomas alvejados às células infectadas com anticorpos monoclonais aos antígenos virais) também podem ser usados como portadores farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos àqueles habilitados na técnica, por exemplo, conforme descrito na Pat. U.S. No 4.522.811.
[00508]É especialmente vantajoso formular composições orais ou parente- rais em forma unitária de dosagem para a facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma unitária de dosagem, conforme usado neste relatório, se refere a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para o sujeito a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade pré determinada de composto ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o portador farmacêutico necessário. O relatório descritivo para as formas unitárias de dosagem da invenção são ditadas por e diretamente dependentes das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico particular a ser obtido.
[00509]Em aplicações terapêuticas, as dosagens das composições farmacêuticas usadas, de acordo com a invenção, variam dependendo do agente, da idade, peso, e condição clínica do paciente destinatário, e a experiência e julgamento do clínico ou profissional que administra a terapia, entre outros fatores que afetam a dosagem selecionada. Geralmente, a dose deve ser suficiente para resultar em retardamento, e preferivelmente regressando o crescimento dos tumores e também preferivelmente causando regressão completa do câncer. As dosagens podem variar de cerca de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 5000 mg/kg por dia. Em aspectos preferidos, as dosagens podem variar de cerca de 1 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Em um aspecto, a dose estará na faixa de cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 50 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 25 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 10 g/dia; cerca de 0,1 mg a cerca de 3 g/dia; ou cerca de 0,1 mg a cerca de 1 g/dia, em doses únicas, divididas, ou contínuas (a dose pode ser ajustada para o peso do paciente em kg, área superficial do corpo em m2, e idade em anos). Uma quantidade eficaz de um agente farmacêutico é aquela que fornece uma melhoria objetivamente identificável conforme observado pelo clínico ou outro observador qualificado. Por exemplo, a regressão de um tumor em um paciente pode ser medido com referência ao diâmetro de um tumor. A diminuição do diâmetro de um tumor indica regressão. A regressão também é indicada pela deficiência de tumores reaparecerem depois do tratamento ser interrompido. Conforme usado neste relatório, o termo “maneira de dosagem eficaz” se refere a quantidade de um composto ativo para produzir o efeito biológico desejado em um sujeito ou célula.
[00510]As composições farmacêuticas podem ser incluídas em um recipiente, empacotamento, ou dispensador juntamente com instruções para a administração.
[00511]Os compostos da presente invenção são capazes de formar sais. Todas destas formas também estão consideradas dentro do escopo da invenção reivindicada.
[00512]Conforme usado neste relatório, “sais farmaceuticamente aceitáveis” se referem a derivados dos compostos da presente invenção, em que o composto precursor é modificado tornando ácido ou sais de base do mesmo. Os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a sais minerais ou de ácido orgânico de resíduos básicos, tais como aminas, álcali ou sais orgânicos de resíduos de ácidos, tais como ácidos carboxílicos, e semelhantes. Os sais farma- ceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternários do composto precursor formado, por exemplo, de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem, mas não são limitados a, aqueles derivados de ácidos inorgânicos e orgânicos selecionados a partir de 2-acetoxibenzoico, 2-hidroxietanossulfônico, acético, ascórbico, benzeno sulfônico, benzoico, bicarbônico, carbônico, cítrico, edético, eta- no dissulfônico, 1,2-etano sulfônico, fumárico, gluco-heptônico, glicônico, glutâmico, glicólico, glicoliarsanílico, hexilresorcínico, hidrabâmico, bromídrico, clorídrico, hi- droiódico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetiônico, láctico, lactobiônico, lauril sulfô- nico, maleico, málico, mandélico, metano sulfônico, napsílico, nítrico, oxálico, pamoi- co, pantotênico, fenilacético, fosfórico, poligalacturônico, propiônico, salicíclico, esteárico, subacético, succínico, sulfâmico, sulfanílico, sulfúrico, tânico, tartárico, tolue- no sulfônico, e os ácidos de amina que ocorrem comumente, por exemplo, glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.
[00513]Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido hexanoico, ácido ciclopentano propiônico, ácido pirúvico, ácido malônico, ácido 3-(4- hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido 4-clorobenzenossulfônico, ácido 2- naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 4- metilbiciclo-[2,2,2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetila- cético, ácido butilacético terciário, ácido mucônico, e semelhantes. A presente invenção também abrange sais formados quando um próton de ácido presente no composto precursor é substituído por um íon de metal, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon de alcalino terroso, ou um íon de alumínio; ou coordena com uma base orgânica, tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N- metilglucamina e semelhantes.
[00514]Deve ser entendido que todas as referências de sais farmaceutica- mente aceitáveis incluem formas de adição de solvente (solvatos) ou formas de cristal (polimorfos) conforme definido neste relatório, do mesmo sal.
[00515]Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como ésteres, por exemplo, ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, um grupo de função de ácido carboxílico em um composto pode ser convertido em seu éster correspondente, por exemplo, um metila, etila ou outro éster. Além disso, um grupo de álcool em um composto pode ser convertido em seu éster correspondente, por exemplo, acetato, propionato ou outro éster.
[00516]As compostos da presente invenção também podem ser preparadas como pró-fármacos, por exemplo, pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. O termo “pró-fármaco” é usado permutavelmente neste relatório e se refere a qualquer composto que libera um fármaco precursor ativo in vivo. Visto que os pró-fármacos são conhecidos como realçadores de numerosas qualidades desejáveis de produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabricação, etc.), os compostos da presente invenção podem ser liberados na forma de pró-fármaco. Assim, a presente invenção é intencionada a revestir pró-fármacos dos compostos presentemente reivindicados, métodos de liberação dos mesmos e composições contendo os mesmos. Os “pró-fármacos” são intencionados a incluir qualquer portadores covalentemente ligados que liberam um fármaco precursor ativo da presente invenção in vivo quando tal pró-fármaco é administrado a um sujeito. Os pró- fármacos da presente invenção são preparados através da modificação de grupos funcionais presentes no composto em um tal modo que as modificações são clivadas, em manipulação de rotina ou in vivo, ao composto precursor. Os pró-fármacos incluem os compostos da presente invenção, em que um grupo hidróxi, amino, sul- fidrila, carbóxi ou carbonila é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para formar um grupo hidroxila livre, amino livre, sulfidrila livre, carbóxi livre ou carbonila livre, respectivamente.
[00517]Os exemplos de pró-fármacos incluem, mas não são limitados a, ésteres (por exemplo, derivados de acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfa- tos, sulfatos e benzoato) e carbamatos (por exemplo, N,N-dimetilaminocarbonila) de grupos funcionais hidróxi, ésteres (por exemplo, ésteres etílicos, ésteres de morfoli- noetanol) de grupos funcionais carboxila, derivados de N-acila (por exemplo, N- acetila), bases de N-Mannich, bases de Schiff e enaminonas de grupos funcionais amino, oximas, acetais, cetais e ésteres de enol de grupos funcionais cetona e aldeído em compostos da invenção, e semelhantes, Veja Bundegaard, H., Design of Prodrugs, páginas 1 - 92, Elesevier, Nova Iorque - Oxford (1985).
[00518]Os compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres ou pró- fármacos dos mesmos, são administrados de forma oral, nasal, transdérmica, pulmonar, inalante, bucal, sublingual, intraperintoneal, subcutânea, intramuscular, intravenosa, retal, intrapleural, intratecal e parenteral. Em uma modalidade, o composto é administrado oralmente. Uma pessoa habilitada na técnica reconhecerão as vantagens de certas vias de administração.
[00519]O regime de dosagem que utiliza os compostos é selecionado de acordo com uma variedade de fatores incluindo tipo, espécie, idade, peso, sexo e condição clínica do paciente; a severidade da condição a ser tratada; a via de administração; a função renal e hepática do paciente; e o composto particular ou sal do mesmo utilizado. Um médico ou veterinário comumente habilitado pode facilmente determinar e prescrever a quantidade eficaz do fármaco necessário para prevenir, contra-atacar, ou impedir o progresso da condição.
[00520]As técnicas para a formulação e administração dos compostos divulgados da invenção podem ser encontradas em Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). Em uma modalidade, os compostos descritos neste relatório, e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são usados em preparações farmacêuticas em combinação com um portador farmaceuticamente aceitável ou diluente. Os portadores farmaceu- ticamente aceitáveis adequados incluem enchedores sólidos inertes ou diluentes e soluções aquosas estéreis ou orgânicas. Os compostos estarão presentes em tais composições farmacêuticas em quantidades suficientes para fornecer a quantidade de dosagem desejada na faixa descrita neste relatório.
[00521]Todas as porcentagens e razões usadas neste relatório, a menos que de outro modo indicado, são em peso. Outras características e vantagens da presente invenção são evidentes a partir dos exemplos diferentes. Os exemplos fornecidos ilustram diferentes componentes e metodologias úteis na prática da presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente divulgação, o técnico habilitado pode identificar e utilizar outros componentes e metodologias úteis para a prática a presente invenção.
[00522]Nos esquemas sintéticos descritos neste relatório, os compostos podem ser desenhados com uma configuração particular para a simplificação. Tais configurações particulares não devem ser interpretados como limitantes da invenção a um ou um outro isômero, tautômero, regioisômero ou estereoisômero, nem exclu- em misturas de isômeros, tautômeros, regioisômeros ou estereoisômeros.
[00523]Os compostos descritos neste relatório são avaliados para a modulação de atividade, por exemplo, metilação de histona, modulação de crescimento celular e/ou IC50, descritos nos exemplos abaixo. Os valores da IC50 são apresentados como A = <0,1 μM; B = > 0,1 μM e <1 μM; C = > 1 μM e < 10 μM; e D = > 10 μM e < 50 μM.
Figure img0107
[00524]Todas as publicações e documentos de patente citados neste relatório são incorporados no mesmo como referência conforme cada publicação ou documento foi específico e individualmente indicado a ser incorporado neste relatório como referência. A citação de publicações e documentos de patente não é intencionada como uma admissão de que qualquer técnica é, antes pertinente, não constitui qualquer admissão como aos teores ou dados dos mesmos. A invenção não tendo sido já descrita a título de descrição escrita, aqueles habilitados na técnica reconhecerão que a invenção pode ser praticada em uma variedade de modalidades e que a descrição precedente e os exemplos abaixo são para propósitos de ilustração e não limitantes das reivindicações que seguem.
5. Exemplos
[00525]Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) foram obtidos em um Bruker Avance 400 operando em uma intensidade de campo de 400,130 MHz ou um Bruker DRX 500 MHz, os espectros de RMN ou RMN de H foram obtidos em um espectrômetro Bruker AVANCE III 500 MHz. Os solventes de reação comuns foram classificados por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou classificados pela American Chemical Society (ACS), e anidro conforme obtido a partir do fabricante, salvo indicação em contrário. LCMS foi realizada em um Waters Micromass ZMD com um Módulo de Separações Waters 2795 e detector de arranjo de diodos Waters 996 e um Waters Micromass ZQ com um Módulo de Separações Waters 2695 e detector de arranjo de diodos Waters 996 ou um espectrômetro de massa de único quadrupolo Waters Micromass Platform LCZ com um módulo de liberação de solvente Waters 600, bombas auxiliares Waters 515, detector UV Waters 2487 e um autoamostrador e coletor de frações Gilson 215. Ou, a análise de LCMS foi realizada usando espectrômetro de massa SQ ligado a AGILENT 1200 Series HPLC. Os dados de LCMS, quando disponíveis, são fornecidos nos exemplos abaixo assim como na Tabela 1. Os dados de MS são fornecidos usando a convenção para m/z no formato, [M + H]+.
[00526]Os compostos da presente invenção podem ser preparados usando transformações químicas conhecidas adaptadas à situação particular disponível.Exemplo Preparativo 1: Materiais de partida ou intermediaries Etapa 1: (1R,2S,3R,5R)-3-((5-amino-6-cloropirimidin-4-il)amino)-5-(hidroximetil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0108
[00527]Uma mistura de cloridreto de (1R,2S,3R,5R)-3-amino-5- (hidroximetil)ciclopentano-1,2-diol (16,9 g, 45,1 mmols) e 4,6-dicloropirimidin-5- amina (5,7 g, 35 mmols) em etanol (45 mL) foi uniformemente distribuída entre três tubos e submetida a condições de micro-ondas (aparelho CEM, 300 W máx, 150 °C máx, 250 psi máx, 3 min de salto, 30 min de retenção) para fornecer soluções marrons; HPLC/LC MS indicou a conversão ao produto desejado. As três misturas de reação foram combinadas e concentradas a vácuo para fornecer o composto do título bruto como um óleo marrom escuro, que foi concentrado a partir de tolueno (2 x 30 mL) e conduzido sem purificação: MS (ESI+) para C10H15ClN4O3 m/z 275,0 (M + H)+; MS (ESI-) para C10H15ClN4O3 m/z 273,0 (M - H)-.Etapa 2: ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2-etoxitetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)methanol
Figure img0109
[00528]O (1R,2S,3R,5R)-3-((5-amino-6-cloropirimidin-4-il)amino)-5-(hidroximetil) ciclopentano-1,2-diol bruto acima foi tratado com ortoformiato de etila (120 mL, 720 mmols) e ácido 10-canforsulfônico (8,11 g, 34,9 mmols). A mistura marrom heterogênea foi vigorosamente agitada para fornecer uma solução marrom quase homogênea depois de 10 min. Em 5 h, LC MS indicou o produto desejado como o produto principal e a reação foi interrompida com NaHCO3 aquoso saturado (120 mL). A mistura foi diluída com água (75 mL), extraída com CH2Cl2 (3 x 200 mL), e os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer o composto do título bruto como um líquido marrom escuro, que foi conduzido sem manipulação adicional: MS (ESI+) para C14H17ClN4O4 m/z 341,0 (M + H)+.Etapa 3: ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)methanol
Figure img0110
[00529]O ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2-etoxitetra-hidro-3aH- ciclopenta[d] [1,3]dioxol-4-il)metanol bruto acima foi absorvido em 2,2- dimetoxipropano (214 mL, 1740 mmols) e tratado com ácido p-toluenossulfônico mono-hidratado (13,2 g, 69,5 mmols) para fornecer um óleo marrom parcialmente colocado em suspensão em uma solução turva, que foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h 20 min; HPLC/LC MS indicou a conversão completa ao produto desejado. A reação foi interrompida pela adição cuidadosa de bicarbonato de sódio (8,76 g, 104 mmols) e uma quantidade mínima de água. Os voláteis foram removidos a vácuo e a camada aquosa remanescente foi diluída com água (100 mL) e extraída com CH2Cl2 (3 x 400 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer um óleo marrom. A purificação por cromato- grafia em coluna (7 x 16 cm sílica; MeOH entre 0-5 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (8,30 g, 74 % durante 3 etapas) como uma espuma amarela: MS (ESI+) para C14H17ClN4O3 m/z 325,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H17ClN4O3 m/z 369,0 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % de área.Etapa 4: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-6-cloro-9H-purina
Figure img0111
[00530]Uma mistura de ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metanol (7,9 g, 24 mmols) e trifenilfosfina sustentada por polímero (3 mmols/g de carga; 11 g, 34 mmols) em THF (100 mL) foi esfriada a 0 °C (banho de gelo/salmoura) e tratada, às gotas, com azodicarboxilato de di-isopropila (6,7 mL, 34 mmols). A pasta fluida castanha foi agitada durante 15 min, e tratada, às gotas, com uma solução de difenilfosfônico az- ida (7,3 mL, 34 mmols) em THF (24 mL). A mistura de reação marrom foi agitada durante 18,5 h como o banho de gelo expirado; HPLC indicou a conversão ao produto desejado. Em 21,5 h, a mistura de reação foi filtrada, os sólidos foram lavados com CH2Cl2, e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo vermelho-marrom foi absorvido em CH2Cl2 (300 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado (1 x 100 mL), água (1 x 100 mL), e salmoura (1 x 150 mL). A camada orgânica separada foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer um óleo vermelho-laranja. A purificação por cromatografia em coluna (7 x 16 cm sílica; acetona entre 0-10 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (4,82 g, 57 %) como um óleo ama- relo/espuma: MS (ESI+) para C14H16ClN7O2 m/z 350,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H16ClN7O2 m/z 394,1 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % de área.Etapa 5: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina
Figure img0112
[00531]Uma solução de 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-6-cloro-9H-purina (1,29 g, 3,69 mmols) e (2,4- dimetoxifenil)metanamina (0,71 mL, 4,7 mmols) em 1-butanol (10 mL) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,93 mL, 5,3 mmols) e aquecida a 80 °C durante 16,5 h; HPLC/LC MS indicou a conversão ao produto desejado. A mistura de reação foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e os voláteis foram removidos sob o fluxo de ar para fornecer uma pasta marrom-laranja. A purificação por cromatografia em coluna (2 x 8 cm sílica; acetona entre 0-10 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (1,72 g, 97 %) como uma espuma/óleo amarela-alaranjada: MS (ESI+) para C23H28N8O4 m/z 481,2 (M + H)+; HPLC pureza >95 % de área.Etapa 6: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina
Figure img0113
[00532]Uma solução de 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina (1,72 g, 3,58 mmols) em THF (16 mL) foi esfriada a 0 °C (banho de gelo/salmoura) e tratada, às gotas, com uma solução 1,0 M de trimetilfosfina em THF (6,30 mL, 6,30 mmols). O banho frio foi removido depois de 30 min e a mistura de reação foi agitada durante 1,5 h; HPLC/LC MS indicou o consumo completo da azida de partida. Água (2,84 mL, 157 mmols) foi adicionada à solução laranja (evolução gasosa observada) e a mistura de reação foi agitada durante 2,75 h na temperatura ambiente; HPLC indicou a conversão completa à amina desejada. A mistura de reação foi concentrada a vácuo para fornecer um óleo laranja. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (150 mL) e lavado com água (2 x 50 mL) e salmoura (1 x 75 mL). A camada orgânica separada foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer o composto do título (1,6 g, 98 %) como uma espuma amarela clara: MS (ESI+) para C23H30N6O4 m/z 455,2 (M + H)+; HPLC pureza >95 % de área.Etapa 1: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H-purin- 9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0114
[00533]Triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,839 g, 3,96 mmols) foi adicionado a uma solução de 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina (1,5 g, 3,3 mmols), 3-(3-oxociclobutil)propanoato de etila (0,562 g, 3,30 mmols) e ácido acético (0,188 mL, 3,30 mmols) em 1,2-dicloroetano (26,0 mL, 3,30E2 mmols) e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. Na manhã seguinte, o material de partida foi consumido por HPLC assim NaHCO3 foi adicionado e o aquoso extraído 3x com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e purificados por FC (DCM/NH3 7N em MeOH 95:5) para fornecer 3-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,5 g; 75 %) como uma resina amarela espessa/espuma. MS (ESI+) para C32H44N6O6 m/z 609,3 [M + H]+.Etapa 2: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H-purin- 9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0115
[00534]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9- il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,06 g, 0,1 mmol) foi absorvido em ace- tonitrila (2,6 mL, 50 mmols) e iodeto de isopropila (0,098 mL, 0,98 mmol) e trietilami- na (0,21 mL, 1,5 mmol) foram adicionados. A reação foi aquecida a 80 °C durante 12 horas, ponto no qual a reação parecia parar. Uma outra trietilamina de 15 equivalentes e um outro iodeto de isopropila de 15 equivalentes foram adicionados e a reação continuou 8 horas mais. A reação pareceu ter estagnada novamente assim outros 15 equivalentes, cada um de iodeto de isopropila e trietilamina foram adicionados. Após o consumo do material de partida, a reação foi concentrada e Na2CO3 saturado (20 ml) e DCM (20 ml) foram adicionados. O resíduo foi particionado entre a camada orgânica e a camada aquosa. A camada aquosa foi extraída 3 vezes com DCM, depois os orgânicos combinados foram secos e purificados por FC (DCM/NH3 7N em MeOH 97:3). O produto foi ainda contaminado com TEA-H+I-, assim, a uma solução (30 ml) do produto em DCM foram adicionados NaHCO3 saturado (20 ml) e NaOH 1N (10 ml). A mistura foi agitada durante 15 minutos, depois o aquoso foi extraído 3 vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e solvente removido para fornecer 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila puro (0,045 g; 70 %) como uma espuma marrom/sólido sem nenhum sal de amina presente por RMN. MS (ESI+) para C35H50N6O6 m/z 651,3 [M + H]+
Figure img0116
[00535]Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,838 g, 20,0 mmols) foi adicionado a uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,3 g, 2,0 mmols) em tetra- hidrofurano (30 mL, 300 mmols) e metanol (6,5 mL, 160 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e pela manhã seguinte, o material de partida foi consumido e foi transformado no ácido. A reação foi acidificada com HCl 1N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e água remanescente removida por destilação azeotrópica com etanol seguido por 24 horas de liofilização. O sólido marrom resultante foi usado sem purificação adicional.
[00536]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0117
[00537]O 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de etil amina (1,8 g, 3,0 mmols) foi absorvido em metanol (20 mL, 600 mmols) e cianoboro-hidreto de sódio (0,19 g, 3,0 mmols) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em MeOH, depois formalina (0,29 mL, 3,9 mmols) foi adicionada em uma porção. A reação foi deixada proceder durante 3 horas, tempo no qual a MS indicou o consumo completo do material de partida. NaHCO3 (saturado) adicionado à mistura de reação que depois foi extraída 3 vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados a uma resina amarela. Este resíduo foi purificado por FC (DCM/NH3 7N em MeOH 93:7) para fornecer 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)- 6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,6 g; 87 %) como uma espuma incolor. MS (ESI+) para C34H47N5O6 m/z 622,3 [M + H]+.
[00538]RMN de 1H (400 MHz, d3-clorofórmio) δH 8,282 (s, 1 H), 7,203 - 7,168 (m, 1 H), 6,877 - 6,865 (m, 1 H), 6,399 - 6,334 (m, 2 H), 6,242 - 6,236 (m, 1 H), 5,330 (s, 1 H), 4,890 - 4,835 (m, 2 H), 4,664 - 4,650 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 4,391 - 4,354 (m, 1 H), 4,067 - 4,000 (m, 2 H), 3,757 (s, 3 H), 3,710 (s, 3 H), 2,864 - 2,784 (m, 0,5 H (me- tina de isômero trans)), 2,553 - 2,474 (m, 0,5 H (metina de isômero cis), 2,432 - 2,370 (m, 1 H), 2,322 - 2,278 (m, 2 H), 2,212 - 2,089 (m, 4 H), 2,022 & 2,018 (s, 3H (singletos sobrepostos devido a N-metila de isômeros cis e trans), 1,964 - 1,908 (m, 3 H), 1,778 - 1,584 (m, 4 H), 1,486 (s, 3 H), 1,363 - 1,296 (m, 1 H), 1,219 (s, 3 H), 1,182 - 1,146 (m, 3 H).
[00539]((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-Cloro-9H-purin-9-il)-2-etoxitetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)methanol
Figure img0118
[00540]O (1R,2S,3R,5R)-3-((5-amino-6-cloropirimidin-4-il)amino)-5-(hidroximetil) ciclopentano-1,2-diol bruto acima foi tratado com ortoformiato de etila (120 mL, 720 mmols) e ácido 10-canforsulfônico (8,11 g, 34,9 mmols). A mistura marrom heterogênea foi vigorosamente agitada para fornecer uma solução marrom quase homogênea depois de 10 min. Em 5 h, LC MS indicou o produto desejado como o produto principal e a reação foi interrompida com NaHCO3 aquoso saturado (120 mL). A mistura foi diluída com água (75 mL), extraída com CH2Cl2 (3 x 200 mL), e os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer o composto do título bruto como um líquido marrom escuro, que foi conduzido sem manipulação adicional: MS (ESI+) para C14H17ClN4O4 m/z 341,0 (M + H)+.Etapa 3: ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)methanol
Figure img0119
[00541]O ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2-etoxitetra-hidro-3aH- ciclopenta[d] [1,3]dioxol-4-il)metanol bruto acima foi absorvido em 2,2- dimetoxipropano (214 mL, 1740 mmols) e tratado com ácido p-toluenossulfônico mono-hidratado (13,2 g, 69,5 mmols) para fornecer um óleo marrom parcialmente colocado em suspensão em uma solução turva, que foi agitado na temperatura ambiente durante 1 h 20 min; HPLC/LC MS indicou a conversão completa ao produto desejado. A reação foi interrompida pela adição cuidadosa de bicarbonato de sódio (8,76 g, 104 mmols) e uma quantidade mínima de água. Os voláteis foram removidos a vácuo e a camada aquosa remanescente foi diluída com água (100 mL) e extraída com CH2Cl2 (3 x 400 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrado a vácuo para fornecer um óleo marrom. A purificação por cromato- grafia em coluna (7 x 16 cm sílica; MeOH entre 0-5 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (8,30 g, 74 % durante 3 etapas) como uma espuma amarela: MS (ESI+) para C14H17ClN4O3 m/z 325,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H17ClN4O3 m/z 369,0 (M + HCO2)-.Etapa 4: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-6-cloro-9H-purina
Figure img0120
[00542]Uma mistura de ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-cloro-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metanol (7,9 g, 24 mmols) e trifenilfosfina sustentada por polímero (3 mmols/g de carga; 11 g, 34 mmols) em THF (100 mL) foi esfriada a 0 °C (banho de gelo/salmoura) e tratada, às gotas, com azodicarboxilato de di-isopropila (6,7 mL, 34 mmols). A pasta fluida castanha foi agitada durante 15 min, e tratada, às gotas, com uma solução de difenilfosfônico az- ida (7,3 mL, 34 mmols) em THF (24 mL). A mistura de reação marrom foi agitada durante 18,5 h como o banho de gelo expirou; HPLC indicou a conversão ao produto desejado. Em 21,5 h, a mistura de reação foi filtrada, os sólidos foram lavados com CH2Cl2, e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo vermelho-marrom foi absorvido em CH2Cl2 (300 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado (1 x 100 mL), água (1 x 100 mL), e salmoura (1 x 150 mL). A camada orgânica separada foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer um óleo vermelho-laranja. A purificação por cromatografia em coluna (7 x 16 cm sílica; acetona entre 0-10 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (4,82 g, 57 %) como um óleo amarelo/espuma: MS (ESI+) para C14H16ClN7O2 m/z 350,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H16ClN7O2 m/z 394,1 (M + HCO2)-.Etapa 5: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina
Figure img0121
[00543]Uma solução de 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-6-cloro-9H-purina (1,29 g, 3,69 mmols) e (2,4- dimetoxifenil)metanamina (0,71 mL, 4,7 mmols) em 1-butanol (10 mL) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,93 mL, 5,3 mmols) e aquecida a 80 °C durante 16,5 h; HPLC/LC MS indicou a conversão ao produto desejado. A mistura de reação foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e os voláteis foram removidos sob o fluxo de ar para fornecer uma pasta marrom-laranja. A purificação por cromatografia em coluna (2 x 8 cm sílica; acetona entre 0-10 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (1,72 g, 97 %) como uma espuma amarela-alaranjada/óleo: MS (ESI+) para C23H28N8O4 m/z 481,2 (M + H)+.Etapa 6: 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina
Figure img0122
[00544]Uma solução de 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina (1,72 g, 3,58 mmols) em THF (16 mL) foi esfriada a 0 °C (banho de gelo/salmoura) e tratada, às gotas, com uma solução 1,0 M de trimetilfosfina em THF (6,30 mL, 6,30 mmols). O banho frio foi removido depois de 30 min e a mistura de reação foi agitada durante 1,5 h; HPLC/LC MS indicou o consumo completo da azida de partida. Água (2,84 mL, 157 mmols) foi adicionada à solução laranja (evolução gasosa observada) e a mistura de reação foi agitada durante 2,75 h na temperatura ambiente; HPLC indicou a conversão completa à amina desejada. A mistura de reação foi concentrada a vácuo para fornecer um óleo laranja. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (150 mL) e lavado com água (2 x 50 mL) e salmoura (1 x 75 mL). A camada orgânica separada foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer o composto do título (1,6 g, 98 %) como uma espuma amarela clara: MS (ESI+) para C23H30N6O4 m/z 455,2 (M + H)+.Etapa 1: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0123
[00545]Uma mistura de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (0,50 g, 1,6 mmol) e 3-(3- oxociclobutil)propanoato de etila (0,27 g, 1,6 mmol) em metanol (10 mL) foi tratada com ácido acético (0,09 mL, 2 mmols) na temperatura ambiente e o frasco foi evacuado e fluxado com nitrogênio (x3). A mistura de reação foi tratada na temperatura ambiente com cianoboro-hidreto de sódio (0,26 g, 4,1 mmols), que forneceu evolução gasosa imediata e uma solução clara quase incolor em poucos minutos. A mistura de reação foi agitada durante 1 h na temperatura ambiente; HPLC/LC MS indicou uma mistura ~2:1 de produto para a amina de partida. Em 1,5 h adicional, 3- (3-oxociclobutil)propanoato de etila (66 mg, 0,39 mmol) em MeOH (1,0 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min; HPLC/LC MS indicou conversão ~70 % e alguma dialquilação. Em 2 h e 15 min, água (4,0 mL) foi adicionada e a mistura foi concentrada a vácuo. A camada aquosa residual foi diluída com bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL, pH 9) e extraída com CH2Cl2 (3 x 15 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer o produto de aminação redutiva como uma espuma branca, que foi conduzida sem purificação adicional: MS (ESI+) para C22H32N6O5 m/z 461,1 (M + H)+, 483,1 (M + Na)+.Etapa 2: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila ,
Figure img0124
[00546]A amina secundária bruta acima foi absorvida em metanol (10 mL) e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,30 g, 4,8 mmols). Uma solução de ácido acético a 10 % (v/v) em metanol foi adicionada para ajustar o pH a ~6, seguido pela adição, às gotas, de formaldeído aquoso a 37 % (0,65 mL, 6,3 mmols), que forneceu a evolução gasosa. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h; HPLC/LC MS indicou a conversão completa ao produto desejado. Em 1,5 h, água (5,0 mL) foi adicionada e a mistura de reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi diluído com NaHCO3 aquoso saturado (10 mL, pH ~9) e extraído com CH2Cl2 (3 x 15 mL). Os orgânicos combinados foram diluídos com uma quantidade pequena de EtOH para fornecer uma solução clara, secos (Na2SO4), e concentrados a vácuo para fornecer um óleo quase incolor. A purificação por cromatografia em coluna (4 x 17 cm sílica; NH3 metanólico 7 N entre 0-5 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (0,50 g, 60 %) como uma espuma branca/óleo incolor: MS (ESI+) para C23H34N6O5 m/z 475,1 (M + H)+, 497,1 (M + Na)+.Etapa 1: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0125
[00547]Uma mistura de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (2,04 g, 6,66 mmols) e 3-(3- oxociclobutil)propanoato de etila (1,2 g, 7,0 mmols) em metanol (41 mL) foi tratada com ácido acético (0,37 mL, 6,5 mmols) na temperatura ambiente e o frasco foi evacuado e fluxado com nitrogênio (x3). A mistura de reação foi tratada na temperatura ambiente com cianoboro-hidreto de sódio (1,0 g, 16 mmols), que forneceu evolução gasosa imediata e uma solução clara quase incolor em poucos minutos. A mistura de reação foi agitada durante 1 h na temperatura ambiente; HPLC/LC MS indicou que o material de partida permaneceu. Em 1 h e 20 min adicional, 3-(3- oxociclobutil)propanoato de etila (0,50 g, 2,93 mmols) em MeOH (3 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante 30 min e tratada com água (12 mL). A mistura foi concentrada a vácuo e a camada aquosa residual foi diluída com bicar bonato de sódio aquoso saturado (40 mL, pH 9) e extraída com CH2Cl2 (3 x 60 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer o composto do título bruto como uma espuma branca/óleo amarelo muito claro, que foi conduzida sem purificação adicional: MS (ESI+) para C22H32N6O5 m/z 461,2 (M + H)+ e 483,1 (M + Na)+.Etapa 2: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0126
[00548]Uma solução da 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila bruto acima em acetonitrila (30 mL) foi tratada com carbonato de potássio (6,3 g, 46 mmols) e iodeto de isopropila (3,9 mL, 39 mmols). A mistura de reação em um tubo vedado foi aquecida a 90 °C durante 6,5 h; HPLC indicou uma mistura 4:1 de produto para material de partida. A mistura de reação foi agitada durante a noite (17,5 H) na temperatura ambiente, tratada com iodeto de isopropila adicional (2,0 mL, 20 mmols), e aquecida a 90 °C durante 3 h; HPLC/LC MS indicou conversão quase completa. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e os sólidos foram removidos por filtração a vácuo, enxaguando com CH3CN, e o filtrado foi concentrado a vácuo para fornecer um óleo laranja escuro com precipitado. A purificação por cromatografia em coluna (5 x 14,5 cm sílica; NH3 metanólico 7 N entre 0-10 %/CH2Cl2) forneceu o composto do título (0,49 g, 15 %) como uma espuma branca/óleo incolor. As frações mistas contendo o produto foram novamente purificadas por cromatografia em coluna (4 x 10,5 cm sílica; NH3 metanólico 7 N entre 0-5 %/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (1,66 g, 40 %) como uma espuma branca/óleo incolor contaminada com o subproduto de aminação bisredutiva a partir da Etapa 1: MS (ESI+) para C25H38N6O5 m/z 503,2 (M + H)+.
[00549]3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidroxiciclopentil)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0127
[00550]Triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,43 g, 11,5 mmols) foi adicionado a uma solução de (1S,2R,3R,5R)-3-(aminometil)-5-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)ciclopentano-1,2-diol (2,6 g, 5,7 mmols) e 3-(3- oxociclobutil)propanoato de etila (0,976 g, 5,73 mmols) e ácido acético (0,326 ml, 5,73 mmols) em 1,2-dicloroetano (20 ml) e reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. NaHCO3 foi adicionado e a camada aquosa foi extraída 3x com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados, concentrados e purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 90:10) para fornecer o composto desejado (1,8 g) como uma resina amarela espessa.
[00551]N-(2,4-Dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((isopropilamino)metil)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0128
[00552]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (7,50 g, 16,5 mmols) em 1,2-dicloroetano (140 mL, 1800 mmols) foi tratada com acetona (1,34 mL, 18,2 mmols) e ácido acético (0,94 mL, 16 mmols), às gotas, seguido por triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,20 g, 19,8 mmols) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 4 h. A análise de HPLC indicou que a reação foi concluída. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (200 mL) e lavada com NaHCO3 sat (150 mL). A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (100 mL) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um óleo que produziu uma espuma rígida quando colocada sob alto vácuo. O material bruto (9,3 g) foi diretamente conduzido à etapa seguinte.
[00553]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0129
[00554]Uma solução de N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6- ((isopropilamino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (9,50 g, 15,3 mmols) em 1,2-dicloroetano (75 mL, 950 mmols) foi tratada com 3-(3-oxociclobutil)propanoato de etila (3,92 g, 23,0 mmols) e ácido acético (1,0 mL, 18 mmols), às gotas, seguido por triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,58 g, 21,6 mmols) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 6 dias. A mistura de reação foi diluída com 150 mL CH2Cl2 e lavada com NaHCO3 sat (100 mL). A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (100 mL) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro viscoso marrom claro.
[00555]O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2 eluindo com NH3 7N entre 2 a 3 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer um vi- dro/espuma rígida (7,10 g).
[00556]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0130
[00557]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (8,00 g, 15,2 mmols) em 1,2-dicloroetano (119,5 mL, 1517 mmols) foi tratada com 3-(3-oxociclobutil)propanoato de etila (2,58 g, 15,2 mmols) e ácido acético (0,86 mL, 15 mmols), às gotas, seguido por triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,86 g, 18,2 mmols) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 19 h. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (150 mL) e lavada com NaHCO3 sat (150 mL). A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (70 mL) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro bege que produziu uma espuma pegajosa quando colocado sob alto vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2 eluindo com NH3 7N entre 3 a 4 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer um óleo viscoso amarelo claro que produziu uma espuma pegajosa sob alto vácuo (5,03 g). MS 608,3 (M + H).Exemplo 1: Síntese de 1-((3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,4- di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metil)-3-(4-(terc- butil)fenil)ureia (Composto 110) Etapa 1: Síntese de 3-oxociclobutanocarboxilato de metila
Figure img0131
[00558]A uma solução de DCC (5,96 g, 28,95 mmols) em DCM (20 ml) foi adicionado, às gotas, uma mistura de ácido 3-oxociclobutanocarboxílico (3,0 g, 26,31 mmols), MeOH (1,68 g, 52,62 mmols) e DMAP (2,57 g, 21,05 mmols) em DCM (30 ml). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada. O filtrado foi lavado com solução de HCl 0,5 M (50 ml). A camada orgânica foi seca em Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi purificado por SGC (PE : EA = 5 : 1) para obter o composto do título (4,0 g). 1H N.R (500 MHz, CDCl3): δ 3,77 (s, 3 H), 3,42 - 3,26 (m, 5 H) ppm.Etapa 2: Síntese de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutanocarboxilato de metila
Figure img0132
[00559]Uma solução de 3-oxociclobutanocarboxilato de metila (1,28 g bruto), 9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metilamino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol- 4-il)-9H-purin-6-amina (2,0 g, 6,25 mmols) (Townsend et al. Org Lett 2009, 11, 2976 - 2679) e Ti(iPrO)4 (1,78 g, 6,25 mmols) em MeOH (50 mL) foi agitada a 45 °C durante 2 h, depois NaCNBH3 (0,79 g, 12,50 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A reação foi interrompida com NaHCO3 aq. sat. (40 mL), filtrada, extraída com DCM (40 mL x 3), seca em Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi purificado por SGC (DCM : MeOH = 12 : 1) para obter o composto do título (1,7 g, rendimento de 63 %). RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 - 8,27 (m, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 6,20 - 6,18 (m, 1 H), 5,52 (dd, J = 1,5, 6,0 Hz, 1 H), 5,00 (dd, J = 3,0, 6,0 Hz, 1 H), 5,33 (brs, 1 H), 3,65 - 3,63 (m, 3 H), 2,77 - 2,55 (m, 4 H), 2,19 - 2,11 (m, 5 H), 2,00 - 1,82 (m, 2 H), 1,59 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 433,2 [M + 1]+.Etapa 3: Síntese de (3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)methanol
Figure img0133
[00560]A uma solução de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutanocarboxilato de metila (1,0 g, 2,31 mmols) em THF (40 ml) foi adicionado LiAlH4 (0,53 g, 13,89 mmols) a 0 °C e a mistura foi agitada durante a noite. Água (1,0 g) e solução de NaOH a 15 % (3,0 g) foram lentamente adicionados à mistura e sob agitação durante 15 min, a mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado para obter o composto do título bruto que foi diretamente usado na etapa seguinte.Etapa 4: Síntese de metanossulfonato de (3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metila
Figure img0134
[00561]A uma solução de (3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metanol tomada diretamente a partir da etapa anterior em DCM (25 ml) foi adicionado Et3N (467 mg, 4,62 mmols) e MsCl (264 mg, 2,31 mmols) como uma solução em DCM (5 ml). A mistura foi agitada durante 2 h. Água (20 ml) e DCM (30 ml x 2) foram adicionados. A camada orgânica foi seca em Na2SO4 e concentrada, purificada com TLC prep (DCM : MeOH = 10 : 1) para fornecer o composto do título (390 mg, Rendimento de 35 % em duas etapas). RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 6,203 - 6,200 (m, 1 H), 5,529 (dd, J = 2,0, 7,0 Hz, 1 H), 5,010 (dd, J = 3,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,354 (dd, J = 3,5, 8,0 Hz, 1 H), 4,197 - 4,182 (m, 2 H), 3,585 (brs, 1 H), 3,073 - 2,948 (m, 5 H), 2,595 - 2,513 (m, 2 H), 2,394 (brs, 1 H), 2,207 (brs, 1 H), 2,107 (s, 3 H), 2,030 - 1,989 (m, 1 H), 1,840 - 1,811 (m, 2 H), 1,586 (s, 3 H), 1,390 (brs, 1 H), 1,329 - 1,280 (m, 6 H), 0,905 - 0,878 (m, 1 H) ppm; ESI-MS (m/z): 483,3 [M + 1]+.Etapa 5: Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(azidometil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)-9H-purin-6-amina
Figure img0135
[00562]A uma solução de metano sulfonato de (3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6- amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metila (150 mg, 0,31 mmol) em DMF (3 ml) foi adicionado NaN3 (81 mg, 1,24 mmol). A mistura foi aquecida a 70 °C durante 3 h. Água (30 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por TLC prep (DCM : MeOH = 30 : 1) para obter o composto do título (90 mg, rendimento de 67 %). ESI-MS (m/z): 430,2 [M + 1]+.Etapa 6 Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(aminometil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)-9H-purin-6-amina
Figure img0136
[00563]Pd/C (10 mg) foi adicionado a uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)- 6-(((3-(azidometil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (90 mg, 0,21 mmol) em MeOH (6 ml). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de H2. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para obter o composto do título que foi diretamente usado na etapa seguinte.Etapa 7: Síntese de 1-((3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metil)-3-(4- (terc-butil)fenil)ureia
Figure img0137
[00564]A uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3- (aminometil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)-9H-purin-6-amina em DCM (4 ml) foi adicionado 1-terc-butil-4-isocianatobenzeno (37 mg). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi concentrada e purificada por intermédio de TLC preparativa (DCM : MeOH = 10 : 1) para fornecer o composto do título (55 mg, rendimento de 45 % em duas etapas). ESI-MS (m/z): 578,3 [M + 1]+.
Etapa 8: Síntese do Composto 110
[00565]Uma solução de 1-((3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)metil)-3-(4- (terc-butil)fenil)ureia (55 mg) em HCl/MeOH (2,5 mols/L) (2 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h e depois concentrada à secura. K2CO3 (52 mg) em água (0,5 mL) e MeOH (5 mL) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada durante 10 min adicionais na temperatura ambiente, filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o Composto 110 (10 mg, rendimento: 25 %) como um sólido branco. RMN de H (500 MHz, MeOD): δH 8,26 (s, 1 H), 8,18 (s, 1 H), 7,26 - 7,19 (m, 4 H), 5,96 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,674 - 4,655 (m, 1 H), 4,24 - 4,16 (m, 2 H), 3,15 (d, J = 5,0 Hz, 2 H), 2,83 - 2,73 (m, 3 H), 2,20 - 1,59 (m, 8 H), 1,26 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 539,3 [M + 1]+.Exemplo 2: Síntese de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((((1r,3S)- 3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol (Composto 2)Etapa 1: Síntese de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutanocarboxilato de cis e trans metila
Figure img0138
[00566]Uma solução de 3-oxociclobutanocarboxilato de metila (4,60 g, 35,94 mmols), 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (11,0 g, 35,94 mmols) e Ti(iPrO)4 (4,0 g, 14,08mmols) em MeOH (80 mL) foi agitada a 45 °C durante 2 h, depois NaCNBH3 (4,5 g, 71,87 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A reação foi interrompida com NaHCO3 aq. sat. (40 mL) e filtrada, extraída com DCM (80 mL x 3), seco em Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para obter o composto do título (6,2 g, rendimento de 41 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,38 - 8,34 (m, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 5,98 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 5,75 (br s, 2 H), 5,48 - 5,46 (m, 1 H), 5,03 - 5,01 (m, 1 H), 4,35 - 4,33 (m, 1 H), 3,69 - 3,66 (m, 3 H), 3,50 - 3,17 (m, 1 H), 3,05 - 2,73 (m, 3 H), 2,48 - 2,44 (m, 2 H), 1,95 - 1,91 (m, 2 H), 1,62 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 419,2 [M + 1]+.
[00567]A mistura de cis/trans de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin- 9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutanocarboxilato de metila (6,2g) foi separada por intermédio de HPLC quiral (CHIRALCEL AD-H 20*250 mm, 5 μm (Daicel), temperatura da coluna: 35 °C, fase móvel: CO2/Metanol (DEA a 0,1 %) = 70/30, taxa de fluxo: 50 g/min) para fornecer o produto de cis puro (3,5 g) e produto de trans puro (1,7 g).Etapa 2: Síntese de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarboxilato de (1S,3s)-metila
Figure img0139
[00568]A uma solução de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutanocarboxilato de cis metila (2,0 g, 4,78 mmols) em CH3CN (15 ml) foram adicionados 2-iodopropano (4,0 g, 23,92 mmols) e K2CO3 (1,0 g, 7,18 mmols). A reação foi aquecida a 95 °C durante a noite em um tubo vedado. A mistura foi filtrada, o filtrado foi concentrado e purificado por SGC (DCM : MeOH = 12 : 1) para obter o composto do título (1,9 g, rendimento de 86 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,37 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 6,03 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,53 - 5,48 (m, 3 H), 5,00 (br s, 1 H), 4,25 (brs, 1 H), 3,66 (s, 3 H), 3,19 - 3,18 (m, 1 H), 2,96 (brs, 1 H), 2,80 - 2,78 (m, 1 H), 2,67 - 2,58 (m, 2 H), 2,20 - 2,12 (m, 4 H), 1,62 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,00 (d, J = 6,0 Hz, 3 H), 0,84 (d, J = 6,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 461,4 [M + 1]+.Etapa 3: Síntese de (1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarbaldeído
Figure img0140
[00569]A uma solução de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarboxilato de (1S,3s)-metila (1,2 g, 2,60 mmols) em DCM (50 ml) foi adicionado DIBAL-H, às gotas, a -78 °C até que todo o material de partida fosse consumido conforme determinado por TLC. MeOH (2 ml) foi adicionado e a mistura foi agitada até a temperatura ambiente durante 30 min, nos quais a água (50 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (50 ml x 2). A camada orgânica foi seca em Na2SO4 e concentrada para obter o composto do título bruto (1,0 g que foi usado) diretamente na etapa seguinte. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 9,56 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 6,03 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,66 (br s, 2 H), 5,50 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1 H), 5,01 (dd, J = 3,5, 6,5 Hz, 1 H), 3,331 - 3,337 (m, 1 H), 2,96 - 2,97 (m, 1 H), 2,77 - 2,59 (m, 3 H), 2,14 - 2,05 (m, 4 H), 1,60 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,01 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,85 (d, J = 6,0 Hz, 3 H) ppm. Etapa 4: Síntese de 3-((1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)acrilato de (E)-etila
Figure img0141
[00570]A uma solução de carbaldeído de (1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6- amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutano (930 mg, 2,16 mmols) em CH3CN : DCM = 5 : 1 (50 ml) foi adicionado 2-(dietoxifosforil)acetato de etila (484 mg, 2,16 mmols), DBU (328 mg, 2,16 mmols) e LiCl (91 mg, 2,16 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h e depois concentrada. Água (20 ml) foi adicionada e a mistura extraída com DCM (25 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, concentradas e o resíduo foi purificado por SGC (DCM : MeOH = 30 : 1) para obter o composto do título (900 mg, rendimento de 83 %), RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 6,94 - 6,90 (m, 1 H), 6,03 (s, 1 H), 5,72 - 5,89 (m, 1 H), 5,57 (s, 2 H), 5,52 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 5,00 (dd, J = 3,5, 6,0 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 4,21 - 4,17 (m, 2 H), 3,14 (brs, 1 H), 2,961 - 2,936 (m, 1 H), 2,74 - 2,52 (m, 3 H), 2,22 - 2,14 (m, 2 H), 1,79 - 1,76 (m, 2 H), 1,60 (s, 3 H), 1,40 (s, 3 H), 1,30 - 1,27 (m, 3 H), 1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 501,4 [M + 1]+.Etapa 5: Síntese de 3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9- il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0142
[00571]A uma solução de 3-((1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)acrilato de (E)-etila (900 mg, 1,8 mmol) em MeOH (50 ml) foi adicionado Pd/C (20 mg). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de hidrogênio. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para obter o composto do título (700 mg, rendimento de 78 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 6,03 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,69 (s, 2 H), 5,51 (dd, J = 2,5, 8,0 Hz, 1 H), 4,99 (dd, J = 4,0, 7,5 Hz, 1 H), 4,26 (brs, 1 H), 4,13 - 4,08 (m, 2 H), 2,99 - 2,92 (m, 2 H), 2,706 - 2,655 (m, 1 H), 2,539 - 2,486 (m, 1 H), 2,18 - 2,02 (m, 4 H), 1,76 (brs, 1 H), 1,65 - 1,60 (m, 5 H), 1,43 - 1,37 (m, 5 H), 1,26 - 1,23 (m, 2 H), 0,97 (d, J = 9,0 Hz, 3 H), 0,79 (d, J = 8,5 Hz, 3 H) ppm; ESIMS (m/z): 503,4 [M + 1]+.Etapa 6: Síntese de ácido 3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0143
[00572]A uma solução de 3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (650 mg, 1,29 mmol) em THF : MeOH = 5 : 1 (30 ml) foi adicionado LiOH.H2O (543 mg, 1,29 mmol). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite, concentrada e depois absorvida em MeOH (10 ml). A solução de HCl 1M foi adicionada, às gotas, a 0 °C até o pH = 7. A mistura foi concentrada e purificada com HPLC preparativa para fornecer composto do título (170 mg).Etapa 7: Síntese de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1S,3r)-3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0144
[00573]A uma solução de ácido 3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (170 mg, 0,36 mmol) em DCM (15 ml) foram adicionados 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (117 mg, 0,72 mmol), EDCI (137 mg, 0,72 mmol), HOBT (97 mg, 0,72 mmol) e TEA (217 mg, 2,15 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite e concentrada. A solução saturado de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas foram secas em Na2SO4 e concentradas. O material bruto foi purificado com TLC preparativa (DCM : MeOH = 12 : 1) para fornecer o composto do título (110 mg bruto).Etapa 8: Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0145
[00574]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1S,3r)-3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (110 mg) em AcOH (10 ml) foi aquecida a 65 °C durante a noite. A mistura foi concentrada, solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas para fornecer o composto do título (105 mg bruto). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 7,48 - 7,24 (m, 3 H), 6,01 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,60 - 5,53 (m, 3 H), 4,98 (dd, J = 3,0, 6,5 Hz, 1 H), 4,22 (brs, 1 H), 2,97 (brs, 1 H), 2,874 - 2,847 (m, 1 H), 2,56 - 2,50 (m, 3 H), 1,87 - 1,78 (m, 2 H), 1,70 - 1,54 (m, 7 H), 1,35 - 1,17 (m, 14 H), 0,90 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,80 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 603,5 [M + 1]+.
Etapa 9: Síntese do Composto 2
[00575]Uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (105 mg) em HCl/MeOH (2,5 mols/L) (10 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h, depois concentrada à secura. K2CO3 (96 mg) em água (0,5 mL) e MeOH (5 mL) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante 10 min adicionais na temperatura ambiente e depois filtrada. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (xbridge 30 mm*150 mm, fase móvel: A: água (NH4HCO3 10 mM) B: CAN, Gradiente: B entre 35 a 45 % em 10 min, B entre 45 a 45 % em 6 min, parada a 20 min, taxa de fluxo: 50 ml/min) para fornecer o Composto 2 (50 mg, rendimento: 51 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,47 - 7,39 (m, 3 H), 5,96 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,70 - 4,75 (m, 1 H), 4,26 - 4,27 (m, 1 H), 4,05 - 4,06 (m, 1 H), 3,140 - 3,155 (m, 1 H), 3,00 - 2,76 (m, 5 H), 2,18 - 2,16 (m, 2 H), 1,87 - 1,85 (m, 2 H), 1,57 - 1,55 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H), 1,01 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 563,4 [M + 1]+.Exemplo 3: Síntese de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((((1s,3R)- 3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol (Composto 3) Etapa 1: Síntese de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarboxilato de (1R,3r)-metila
Figure img0146
[00576]A uma solução de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutanocarboxilato de (1R,3r)-metila (1,7 g, 4,07 mmols) em CH3CN (15 ml) foi adicionado 2-iodopropano (3,5 g, 20,3 mmols) e K2CO3 (0,84 g, 6,10 mmols). A reação foi aquecida a 95 °C durante a noite em um tubo vedado. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado e purificado por SGC (DCM : MeOH = 12 : 1) para obter o composto do título (1,35 g, rendimento de 72 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 6,03 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,55 (m, 2 H), 5,49 (dd, J = 1,5, 6,0 Hz, 1 H), 5,01 (dd, J = 3,5, 6,0 Hz, 1 H), 4,254 - 4,247 (m, 1 H), 3,68 (s, 3 H), 3,60 - 3,50 (m, 1 H), 2,930 - 2,917 (m, 1 H), 2,79 - 2,74 (m, 2 H), 2,59 - 2,57 (m, 1 H), 2,25 - 2,12 (m, 4 H), 1,60 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,00 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,83 (d, J = 7,0 Hz, 3 H) ppm; ESIMS (m/z): 461,3 [M + 1]+. Etapa 2: Síntese de (1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarbaldeído
Figure img0147
[00577]A uma solução de 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarboxilato de (1R,3r)-metila (1,35 g, 2,93 mmols) em DCM (50 ml) a -78 °C foi adicionado DiBAL-H, às gotas, até que o material de partida fosse completamente consumido conforme determinado por TLC. MeOH (2 ml) foi adicionado e a mistura foi agitada na temperatura ambiente (RT) para 30 min. Água (50 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas para obter o composto do título bruto (1,1 g) que foi diretamente usado na etapa seguinte. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 9,80 (s, 1 H), 8,35 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 6,04 (s, 1 H), 5,56 (s, 2 H), 5,50 (d, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,028 - 5,026 (m, 1 H), 4,26 (brs, 1 H), 3,33 - 3,30 (m, 1 H), 2,956 - 2,930 (m, 1 H), 2,80 - 2,55 (m, 3 H), 2,27 - 2,07 (m, 4 H), 1,60 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm.Etapa 3: Síntese de 3-((1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9- il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)acrilato de (E)-etila
Figure img0148
[00578]A uma solução de (1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutanocarbaldeído (1,1 g, 2,56 mmols) em CH3CN : DCM = 5 : 1 (50 ml) foi adicionado 2-(dietoxifosforil)acetato de etila (573 mg, 2,56 mmols), DBU (389 mg, 2,56 mmols) e LiCl (107 mg, 2,56 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h e concentrada, na qual a água (20 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (25 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por SGC (DCM : MeOH = 30 : 1) para obter o composto do título (1,0 g, rendimento de 78 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,35 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 7,16 - 7,11 (m, 1 H), 6,03 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,79 - 5,76 (m, 1 H), 5,56 (s, 2 H), 5,51 (dd, J = 1,5, 6,0 Hz, 1 H), 5,02 (dd, J = 3,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,22 - 4,17 (m, 2 H), 3,44 (brs, 1 H), 2,93 (brs, 1 H), 2,78 - 2,56 (m, 3 H), 2,27 - 2,16 (m, 2 H), 1,93 - 1,91 (m, 2 H), 1,60 (s, 3 H), 1,40 (s, 3 H), 1,31 - 1,27 (m, 3 H), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 501,4 [M + 1]+.Etapa 4: Síntese de 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9- il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0149
[00579]A uma mistura de 3-((1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)acrilato de (E)-etila (1,0 g, 2,0 mmols) e Pd a 10 %/C (30 mg) em MeOH (50 ml) foi adicionado Pd/C (30 mg). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de hidrogênio. A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi concentrado para obter o composto do título (1,0 g, rendimento de 100 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 6,03 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,58 (s, 2 H), 5,51 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1 H), 5,00 (dd, J = 3,5, 6,0 Hz, 1 H), 4,276 - 4,269 (m, 1 H), 4,13 - 4,09 (m, 2 H), 3,38 - 3,37 (m, 1 H), 2,94 - 2,54 (m, 3 H), 2,22 - 1,97 (m, 5 H), 1,79 - 1,62 (m, 4 H), 1,60 (s, 3 H), 1,40 (s, 3 H), 1,28 - 1,23 (m, 2 H), 0,97 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,79 (d, J = 7,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 503,4 [M + 1]+.Etapa 5: Síntese de ácido 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0150
[00580]A uma solução de 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (360 mg, 0,72 mmol) em THF : MeOH = 5 : 1 (30 ml) foi adicionado LiOH.H2O (301 mg, 7,20 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite, concentrada e depois dissolvida em MeOH (10 ml). A solução HCl 1 M foi adicionada, às gotas, a 0 °C até o pH = 7. A mistura foi concentrada para fornecer o composto do título bruto e foi diretamente usado na etapa seguinte.Etapa 6: Síntese de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-
Figure img0151
[00581]A uma solução de ácido 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico em DMF (5 ml) foi adicionado 4-(terc- butil)benzeno-1,2-diamina (235 mg, 1,43 mmol), EDCI (274 mg, 1,43 mmol), HOBT (193 mg, 1,43 mmol) e TEA (435 mg, 4,30 mmols). A mistura foi aquecida a 45 °C durante a noite e concentrada. A solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas foram secas em Na2SO4 e concentradas. O material bruto foi purificado com TLC preparativa (DCM : MeOH = 12 : 1) para fornecer o composto do título (110 mg), que foi carregado adiante na etapa seguinte sem purificação adicional.Etapa 7: Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0152
[00582]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (110 mg) em AcOH (15 ml) foi aquecida a 65 °C durante a noite. A mistura foi concentrada, solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas para fornecer o composto do título (100 mg bruto). RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δH 8,36 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,48 - 7,27 (m, 3 H), 6,07 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,64 - 5,58 (m, 3 H), 5,02 (dd, J = 3,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,30 (brs, 1 H), 3,38 - 3,37 (m, 1 H), 2,97 - 2,95 (m, 1 H), 2,76 - 2,55 (m, 3 H), 1,97 - 1,74 (m, 5 H), 1,67 - 1,57 (m, 5 H), 1,45 - 1,40 (m, 12 H), 0,99 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 603,5 [M + 1]+.
Etapa 8: Síntese do Composto 3
[00583]Uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (190 mg) em HCl/MeOH (2,5 mols/L) (15 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h e concentrada à secura. K2CO3 (161 mg) em água (0,5 mL) e MeOH (5 mL) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada durante 10 min adicionais na temperatura ambiente e depois filtrada. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (xbridge 30 mm*150 mm, fase móvel: A: água (NH4HCO3 10 mM) B: CAN, Gradiente: B entre 35 a 45 % em 10 min, B entre 45 a 45 % em 6 min, parada em 20 min, taxa de fluxo: 50 ml/min) para fornecer o Composto 3 (65 mg, rendimento: 70 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,47 - 7,28 (m, 3 H), 5,95 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,744 - 4,724 (m, 1 H), 4,27 - 4,26 (m, 1 H), 4,07 - 4,06 (m, 1 H), 3,56 (brs, 1 H), 3,01 - 2,78 (m, 5 H), 2,17 (brs, 2 H), 2,00 - 1,93 (m, 2 H), 1,80 - 1,79 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H), 1,02 (d, J = 5,5 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 563,5 [M + 1]+.Exemplo 4: Síntese de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-cloro-6-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol (Composto 4)Etapa 1: Síntese de N-(2-amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0153
[00584]A uma solução de ácido 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (250 mg, 0,53 mmol) em DCM (30 ml) foi adicionada 4-cloro-5-(trifluorometil)benzeno-1,2-diamina (221 mg, 1,05 mmol), EDCI (201 mg, 1,05 mmol), HOBT (142 mg, 1,05 mmol) e TEA (320 mg, 3,15 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite, em solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado por intermédio de TLC preparativa (DCM : MeOH = 12 : 1) para fornecer o composto do título (250 mg bruto).Etapa 2: Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-cloro-6- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0154
[00585]Uma solução de N-(2-amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-((1R,3s)- 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (250 mg) em AcOH (15 ml) foi aquecida a 65 °C durante a noite. A mistura foi concentrada, solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas para fornecer o composto do título (200 mg bruto).
Etapa 3: Síntese do Composto 4
[00586]Uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-cloro-6- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (200 mg) em HCl/MeOH (2,5 mols/L) (15 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h, nas quais ela foi concentrada à secura. K2CO3 (166 mg) em água (0,5 mL) e MeOH (5 mL) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante 10 min adicionais na temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o Composto 4 (80 mg, rendimento: 43 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 5,96 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,748 - 4,730 (m, 1 H), 4,284 - 4,263 (m, 1 H), 4,09 (br s, 1 H), 3,65 - 3,50 (m, 1 H), 3,03 - 2,85 (m, 5 H), 2,191 - 2,176 (m, 2 H), 2,03 - 2,00 (m, 2 H), 1,80 (brs, 2 H), 1,02 (d, J = 6,0 Hz, 3 H), 0,96 (d, J = 6,6 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 609,2 [M + 1]+.Exemplo 5: Síntese de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((((1r,3S)- 3-(2-(5-cloro-6-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol (Composto 5)Etapa 1: Síntese de N-(2-amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0155
[00587]A uma solução de ácido 3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico em DCM : DMF = 15 : 1 (30 ml) foram adicionados 4-cloro-5-(trifluorometil)benzeno-1,2-diamina (334 mg, 1,60 mmol), EDCI (304 mg, 1,60 mmol), HOBT (215 mg, 1,60 mmol) e TEA (483 mg, 4,80 mmols). A mistura foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. A mistura foi concentrada, solução saturada de NaHCO3 (20 ml) foi adicionada e a mistura resultante foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas. O resíduo bruto foi purificado por intermédio de TLC preparativa (DCM : MeOH = 12 : 1) para fornecer o composto do título (220 mg).Etapa 2: Síntese de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-cloro-6- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0156
[00588]Uma solução de N-(2-amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-((1S,3r)- 3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (220 mg) em AcOH (15 ml) foi aquecida a 65 °C durante a noite. A mistura foi concentrada, solução saturada de NaHCO3 (20ml) foi adicionada, e a mistura foi extraída com DCM (20 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e concentradas para fornecer o composto do título (190 mg).
Etapa 3: Síntese do Composto 5
[00589]Uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-cloro-6- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (190 mg) em HCl/MeOH (2,5 mols/L) (15 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h e depois concentrada à secura. K2CO3 (161 mg) em água (0,5 mL) e MeOH (5 mL) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante 10 min adicionais na temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o Composto 5 (90 mg, rendimento: 51 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 7,67 (s, 1 H), 5,95 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,736 - 4,716 (m, 1 H), 4,268 - 4,246 (m, 1 H), 4,070 - 4,051 (m, 1 H), 3,15 (brs, 1 H), 3,00 - 2,71 (m, 5 H), 2,17 (brs, 2 H), 1,93 - 1,88 (m, 2 H), 1,58 - 1,56 (m, 2 H), 1,01 (d, J = 5,5 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 609,2 [M + 1]+.Exemplo 6: Síntese de (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 7-il)-5-(((3-((5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)metil)ciclobutil)(metil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol (Composto 6)Etapa 1: Síntese de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0157
[00590]Uma solução de ((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metanol (2,83 g, 6,20 mmols) e trifenilfosfina (2,28 g, 8,68 mmols) em tetra-hidrofurano seco (32 mL) foi esfriada a 0 °C em um banho de gelo/água. Azodicarboxilato de di- isopropila (1,71 mL, 8,68 mmols) foi adicionado às gotas, seguido por uma solução de difenilfosfônico azida (1,87 mL, 8,68 mmols) em tetra-hidrofurano (5,3 mL, 66 mmols). Após a adição da solução de DPPA, um precipitado leitoso branco se formou. Depois de cerca de 30 minutos, a mistura de reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitar durante a noite. Depois de 24 h, HPLC indicou que todo o material de partida tinha sido consumido. A mistura de reação foi concentrada a cerca de 1/2 do volume original e purificada por cromatografia instantânea (175 g gel de sílica, EA entre 10 a 55 %/hept) para fornecer o composto do título (2,49 g, 83 %) como uma espuma rígida levemente amarelada: MS (ESI+) para C23H27N7O5 m/z 482,2 (M + H)+; (ESI-) para C23H27N7O5 m/z 480,1 (M + H)-, m/z 526,1 (M + CO2 H)-; HPLC pureza 97 %.Etapa 2: Síntese de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0158
[00591]Uma solução de ((3aR,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina (2,49 g, 5,17 mmols) em tetra-hidrofurano (50 mL, 600 mmols) foi tratada, às gotas, com uma solução de 1,0 M de trimetilfosfina em tetra-hidrofurano (7,24 mL, 7,24 mmols) e a mistura foi agitada durante 20 h. A mistura de reação foi tratada com água (1,80 mL, 99,9 mmols) e agitada na temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada, o material bruto foi absorvido em CH2Cl2 (90 mL) e lavada com quatro porções (30 mL) de H2O e salmoura (15 mL). A solução foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (120 g gel de sílica, NH3 7N entre 3 a 10 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (1,76 g, 75 %) como uma espuma: MS (ESI+) para C23H29N5O5 m/z 456,2 (M + H)+; (ESI-) para C26H35N5O5 m/z 454,1 (M - H)-; HPLC pureza 92 % (tempo de retenção, 2,65 min).Etapa 3: Síntese de 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)acetato de metila
Figure img0159
[00592]Uma solução de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina (400 mg, 0,88 mmol) e 2-(3-oxociclobutil)acetato de metila (100 mg, 0,70 mmol) [preparado usando o procedimento encontrado na Publicação de Pedido de Patente US 2009/0118287] em 1,2-dicloroetano (12 mL) foi tratada, às gotas, com ácido acético (50 μL, 0,88 mmol). A solução foi tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (260 mg, 1,2 mmol) em uma porção e deixada agitar na temperatura ambiente até concluir por HPLC. Depois de 4 h, HPLC indicou que a reação foi cerca de 80 % concluída. Um adicional de 20 mg de cetona foi adicionado e agitação foi continuada durante 2,5 h. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (30 mL) e lavada com Na- HCO3 sat (15 mL). A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (15 mL) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4. A fase orgânica foi filtrada e concentrada para fornecer um vidro amarelo claro que foi purificado por cromatografia instantânea (70 g gel de sílica; NH3 7N a 2 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (270 mg, 66 %) como um vidro incolor: MS (ESI+) para C30H39N5O7 m/z 582,2 (M + H)+; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,88 min).Etapa 4: Síntese de 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acetato de metila
Figure img0160
[00593]Uma solução de 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)acetato de metila (267 mg, 0,459 mmol) em metanol (12 mL) foi tratada com cianoboro-hidreto de sódio (380 mg, 6,1 mmols). O pH da solução foi ajustado a ~6 pela adição, às gotas, de uma solução a 10 % (v/v) de ácido acético glacial em metanol. A mistura foi tratada com formaldeído a 37 % (0,57 mL, 7,6 mmols), às gotas, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h, tempo no qual, HPLC indicou que o material de partida foi consumido. A mistura de reação foi concentrada para remover o metanol. A solução aquosa que permaneceu foi diluída com NaHCO3 (25 mL) e a fase aquosa foi extraída com três porções (20 mL) de CH2Cl2. A fase orgânica foi lavada com NaHCO3 sat (20 mL), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o composto do título (272 mg, 100 %) como uma espuma rígida incolor que foi encontrada ser de pureza suficiente para o uso na etapa seguinte: MS (ESI+) para C31H41N5O7 m/z 596,5 (M + H)+; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,89 min).Etapa 5: Síntese de ácido 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acético
Figure img0161
[00594]Uma solução de 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acetato de metila (270 mg, 0,453 mmol) em metanol (8,6 mL) foi tratada, às gotas, com uma solução de hidróxido de sódio (36 mg, 0,91 mmol) em água (0,9 mL, 50 mmols) e a mistura foi aquecida a 50 °C. Depois de 17 h, HPLC indicou que a reação foi concluída. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e tratada com HCl 1,0N (0,91 mL) para ajustar o pH a ~7. A solução foi concentrada para remover o metanol e a suspensão aquosa resultante foi liofilizada para fornecer um sólido branco. O material foi usado na etapa seguinte, assumindo uma recuperação quantitativa: MS (ESI+) para C30H39N5O7 m/z 582,4 (M + H)+; MS (ESI-) para C30H39N5O7 m/z 580,4 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,72 min).Etapa 6: Síntese de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)- 6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acetamida
Figure img0162
[00595]Uma solução de ácido 2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acético e 4-terc-butilbenzeno-1,2- diamina (89,4 mg, 0,545 mmol) em N,N-dimetilformamida (4,5 mL) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,261 mL, 1,50 mmol), às gotas, seguido por hexafluo- rofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)urônio (259 mg, 0,681 mmol). A solução foi deixada agitar na temperatura ambiente durante 18 h, tempo no qual LCMS indicou que o material de partida tinha sido consumido. A mistura de reação foi concentrada sob alto vácuo. O resíduo foi absorvido em acetato de etila (30 mL) e H2O/solução sat de NaHCO3 1/1 (20 mL). A mistura foi extraída e a fase aquosa foi lavada com acetato de etila (35 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com duas porções (20 mL) de H2O, e salmoura (20 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro marrom claro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (35 g gel de sílica; NH3 7N a 4 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (272 mg, 82 %) como um vidro castanho claro/espuma rígida que foi uma mistura de amidas re- gioisoméricas: MS (ESI+) para C41H53N7O6 m/z 728,8 (M + H)+; MS (ESI-) para C41H53N7O6 m/z 726,9 (M - H)-; HPLC pureza >95 %, (tempo de retenção, 3,14, 3,17 min) dois picos observados devido aos regioisômeros de amida.Etapa 7: Síntese de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-((5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)metil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0163
[00596]N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)acetamida (272 mg, 0,374 mmol) foi absorvido em ácido acético (7,2 mL) e a solução foi aquecida a 65 °C. Depois de 1,5 h, HPLC indicou que a reação foi concluída. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e o solvente removido sob alto vácuo. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (35 mL) e a fase orgânica foi lavada com solução sat de NaHCO3 (25 mL) e solução de Na2CO3 a 2 % (20 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro castanho claro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (30 g gel de sílica; NH3 7N a 4 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (224 mg, 84 %) como um vidro castanho claro que foi uma mistura de diastereômeros cis e trans a cerca do anel de ciclobutila: MS (ESI+) para C40H51N7O5 m/z 710,6 (M + H)+; MS (ESI-) para C41H51N7O5 m/z 708,7 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 3,29, 3,33 min), dois picos observados devido aos diastereômeros a cerca do anel de ciclobu- tila.
Etapa 8: Síntese do Composto 6
[00597]7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-((5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)metil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N- (2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (170 mg, 0,24 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (5,0 mL) e água (0,5 mL) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, e aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 5 h, na temperatura ambiente, a mistura de reação muito rosa foi concentrada. O resíduo foi absorvido em MeOH (10 mL) e concentrado. Este procedimento foi repetido duas vezes e o resíduo colocado em alto vácuo durante 1 h. O material foi absorvido em MeOH (7 mL) e foi tratado com K2CO3 (130 mg) e cinco gotas de água. A mistura foi deixada agitar durante 1 h, tempo no qual a solução foi encontrada ser básico. A mistura foi filtrada através de uma frita fina, os sólidos foram lavados com MeOH (10 mL) e o filtrado foi concentrado para fornecer um sólido quase incolor. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (30 g gel de sílica; NH3 7N 12 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o Composto 6 (81 mg, 65 %) como um vidro incol- or/espuma rígida: MS (ESI+) para C28H37N7O3 m/z 520,4 (M + H)+; MS (ESI-) para C28H37N7O3 m/z 518,5 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,51 min); RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH ppm 8,08 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (d, J = 8,50 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J = 8,40, 4,87 Hz, 1 H), 6,63 (m, 1 H), 6,12 (d, J = 4,15 Hz, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,09 (m, 2 H), 3,15 (m, 0,5 H), 3,02 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 2,92 (d, J = 7,26 Hz, 1 H), 2,84 (m, 0,5 H), 2,65 (m, 2 H), 2,43 (m, 1 H), 2,29 (m, 1 H), 2,20 (d, J = 5,80 Hz, 3 H), 2,13 (m, 1 H), 1,99 (br. s., 1 H), 1,67 (m, 1 H), 1,37 (d, J = 3,94 Hz, 9 H), 1,30 (dd, J = 13,99, 4,66 Hz, 1 H).Exemplo 7: Síntese de (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 7-il)-5-(((3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol (Composto 7)Etapa 1: Síntese de 4,6-dicloro-5-(2,2-dietoxietil)pirimidina
Figure img0164
[00598]Composto do título foi preparado pelo método de Montgomery, veja:Montgomery, J. A.; Hewson, K. J. Med. Chem. 10, 665 (1967).Etapa 2: Síntese de (1R,2S,3R,5R)-3-((6-cloro-5-(2,2-dietoxietil)pirimidin-4-il)amino)-5-(hidroximetil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0165
[00599]Uma mistura de 4,6-dicloro-5-(2,2-dietoxietil)pirimidina (5,35 g, 20,2 mmols) e cloreto de (1R,2S,3R,4R)-2,3-di-hidróxi-4-(hidroximetil)ciclopentanamínio (9,29 g, 24,3 mmols) foi absorvido em etanol (236 mL), tratada com Et3N (11,2 mL, 80,8 mmols) e aquecida em refluxo durante 23 h; HPLC/LC MS indicou que o consumo de materiais de partida e a presença de produto. A mistura de reação foi concentrada para fornecer uma pasta fluida castanha, que foi conduzido bruto: MS (ESI+) para C16H26ClN3O5 m/z 376,2 (M + H)+; MS (ESI-) para C16H26ClN3O5 m/z 374,2 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,436 min). Variation on route from J. Med. Chem. 10, 665 (1967).Etapa 3: Síntese de (1R,2S,3R,5R)-3-(4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 5-(hidroximetil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0166
[00600]Uma suspensão de (1R,2S,3R,5R)-3-((6-cioro-5-(2,2-dietoxietii)pirimidin-4-ii)amino)-5-(hidroximetii)ciciopentano-1,2-dioi bruto em 1,4- dioxano (160 mL) foi tratada com uma soiução aquosa 1 M de HCi (30 mL, 30 mmois) e agitada na temperatura ambiente durante 69,5 h; HPLC indicou conversão pura a um produto, LC MS mostrou a massa para o produto desejado. A mistura de reação foi neutraiizada com nH4OH aquoso concentrado (pH 7) e os voiáteis foram removidos a vácuo para fornecer uma pasta fiuida marrom, a quai foi conduzida sem purificação adicionai: MS (ESI+) para C12H14Cin3O3 m/z 284,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C12H14Cin3O3 m/z 282,2 (M - H)-, 328,2 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 1,947 min). Variation on route from J. Med. Chem. 10, 665 (1967). Etapa 4: Síntese de ((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)methanol
Figure img0167
[00601]Uma mistura de (1R,2S,3R,5R)-3-(4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 7-il)-5-(hidroximetil)ciclopentano-1,2-diol bruto (10 g, ~20 mmols, 54 % puro por RMN) e 2,2-dimetoxipropano (100 mL, 800 mmols) foi tratada com ácido p- toluenossulfônico mono-hidratado (7,28 g, 38,3 mmols) e a mistura de reação amarela-marrom foi agitada vigorosamente durante 1,25 h, tempo no qual, apenas os sólidos foram um precipitado bege fino. HPLC indicou consumo quase completo do material de partida. A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e neutralizada com NaHCO3 sólido (4,80 g, 57,1 mmols). Os voláteis foram cuidadosamente removidos a vácuo e a solução aquosa marrom resultante foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer uma pasta bege. A purificação por cromatografia em coluna (4 x 22 cm sílica; EtOAc entre 0 a 66 %/Hex) forneceu o composto do título (4,38 g, 70 %, uma etapa) como uma espuma incolor/vidro: MS (ESI+) para C15H18ClN3O3 m/z 324,2 (M + H)+; MS (ESI-) para C15H18ClN3O3 m/z 368,2 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 3,034 min).Etapa 5: Síntese de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina
Figure img0168
[00602]((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-Cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metanol (2,68 g, 8,28 mmols) foi dissolvido em THF (32 mL), tratado com PPh3 (3,05 g, 11,6 mmols), e o vaso de rea- ção foi esfriado em um banho de gelo-salmoura. Azodicarboxilato de di-isopropila [DIAD] (2,3 mL, 12 mmols) foi adicionado, às gotas, por intermédio de uma seringa e a mistura foi agitada durante 10 min. Uma solução de difenilfosfônico azida [DPPA] (2,50 mL, 11,6 mmols) em THF (7,8 mL) foi adicionada, às gotas, por intermédio de uma seringa para fornecer uma mistura branca amarelada, que foi agitada durante 21 h, permitindo o banho de gelo aquecer até a temperatura ambiente; HPLC/LC MS indicou o consumo completo do material de partida e a formação do produto. Em 22,5 h, a mistura de reação foi concentrada a vácuo e purificada por cromatografia em coluna (4 x 22 cm sílica; EtOAc entre 0 a 25 %/Hex) para fornecer o composto do título (2,27 g, 78 %) como um óleo incolor: MS (ESI+) para C15H17ClN6O2 m/z 349,2 (M + H)+; MS (ESI-) para C15H17ClN6O2 m/z 393,2 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 4,169 min).Etapa 6: Síntese de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0169
[00603]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina e 2,4- dimetoxibenzilamina (1,2 mL, 7,8 mmols) em 1-butanol (18,6 mL) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (1,4 mL, 7,8 mmols) e aquecida a 80 °C durante 22 h; HPLC/LC MS indicou conversão a ~90 % ao produto desejado. Os voláteis foram removidos e a pasta amarela-marrom foi absorvida em CH2Cl2 (90 mL) e lavada com água (2 x 30 mL) e salmoura (1 x 45 mL). A camada orgânica separada foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer um óleo laranja. A purificação por cromatografia em coluna (2 x 22 cm sílica; EtOAc 0 a 50 %/Hex) forneceu o com- posto do título (2,23 g, 72 %) como um vidro amarelo claro/espuma: MS (ESI+) para C24H29N7O4 m/z 480,5 (M + H)+; MS (ESI-) para C24H29N7O4 m/z 524,3 (M + HCO2)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 3,551 min).Etapa 7: Síntese de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0170
[00604]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(azidometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (2,23 g, 4,65 mmols) em THF (33 mL, 410 mmols) foi esfriada a 0 °C e tratada, às gotas, com uma solução 1,0 M de trimetilfosfina em THF (9,3 mL, 9,3 mmols). O banho frio foi removido e a mistura de reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente com agitação durante 1 h; nenhum material de partida permaneceu por HPLC. Em 1,5 h, água (4,3 mL, 240 mmols) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada durante 1 h 15 min; TLC indicou um produto. A mistura de reação foi concentrada a vácuo para fornecer uma pasta laranja clara. O resíduo foi diluído com CH2Cl2 (120 mL) e lavado com água (2 x 40 mL) e salmoura (1 x 40 mL). A camada orgânica foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo para fornecer um óleo laranja. A purificação por cromatografia em coluna (2 x 22 cm sílica; NH3 7 N 0 a 5 % em CH3OH/CH2Cl2) forneceu o composto do título (1,97 g, 53 % durante 3 etapas) como uma espuma incolor: MS (ESI+) para C24H31N5O4 m/z 454,3 (M + H)+; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,541 min).Etapa 8: Síntese de 3-(2,2-dicloro-3-oxociclobutil)propanoato de etila
Figure img0171
[00605]Uma mistura de éster etílico de ácido 4-pentenoico (7,07 g, 55,2 mmols) e par de zinco-cobre (10,2 g, 140 mmols) em éter dietílico (170 mL) e 1,2- dimetoxietano (25 mL) foi tratada, às gotas, com cloreto de tricloroacetila (25 g, 140 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 3 dias. A mistura de reação heterogênea avermelhada foi filtrada através de uma almofada de celite e a almofada foi lavada com Et2O (300 mL). O filtrado foi concentrado a cerca da metade do volume original e a fase orgânica foi lavada com duas porções (150 mL) de H2O e uma porção (150 mL) de NaHCO3 sat. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer um líquido marrom. O material foi purificado por destilação a vácuo (90 a 100 °C @ 0,044 torr) para fornecer o composto do título (10,49 g, 80 %) como um líquido amarelo claro: GC pureza 95,8 % (tempo de retenção, 4,92 min).Etapa 9: Síntese de 3-(3-oxociclobutil)propanoato de etila
Figure img0172
[00606]Uma solução de 3-(2,2-dicloro-3-oxociclobutil)propanoato de etila (10,49 g, 43,87 mmols) e cloreto de amônio (12 g, 220 mmols) em metanol (310 mL, 7600 mmols) foi tratada em porções pequenas com pó de zinco (14 g, 220 mmols). A mistura de reação foi aquecida em refluxo durante 3 h depois que o tempo de GC indicou a reação foi concluída. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e foi filtrada através de Celite, lavando a almofada com Et2O. O filtrado foi concentrado a vácuo para fornecer solução amarela clara. A solução foi diluída com Et2O (200 mL) e lavada com água (100 mL). A camada aquosa separada foi retro extraída com Et2O (100 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com água/salmoura 1:1 (100 mL), água (50 mL), e NaHCO3 aquoso saturado (150 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o composto do título (4,49 g, 60 %) como um óleo amarelo claro que foi de pureza suficiente para o uso na etapa seguinte: GC pureza >95 % (tempo de retenção, 4,24 min).Etapa 10: Síntese de ácido 3-(3-oxociclobutil)propanoico
Figure img0173
[00607]Uma solução de 3-(3-oxociclobutil)propanoato de etila (200 mg, 1,18 mmol) em metanol (4 mL) foi tratada com água (0,75 mL) e uma solução 2N de hidróxido de sódio (0,75 mL, 1,41 mmol) e a solução foi aquecida a 55 °C até que o material de partida fosse consumido por TLC (EA a 25 %/hept). Depois de 1 h, o material de partida foi consumido. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada para remover o MeOH. A fase aquosa foi diluída com H2O (2 mL) e tornada ácida ao pH ~2 com HCl 1 N. A solução foi saturada com NaCl e extraída com três porções (10 mL) de acetato de etila. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o composto do título (157 mg, 94 %) como um óleo viscoso laranja claro que foi usado na etapa seguinte: GC pureza 63,2 % (tempo de retenção, 4,27 min).Etapa 11: Síntese de N-(2-amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-(3- oxociclobutil)propanamida
Figure img0174
[00608]Uma solução de ácido 3-(3-oxociclobutil)propanoico (157 mg, 0,696 mmol) e 4-cloro-5-(trifluorometil)benzeno-1,2-diamina (146 mg, 0,696 mmol) em N,N- dimetilformamida (2,5 mL) foi esfriada a 0 °C. A solução foi tratada com N,N-di- isopropiletilamina (0,364 mL, 2,09 mmol), às gotas, seguido por hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)urônio (291 mg, 0,765 mmol) em uma porção. A solução foi deixada agitar e lentamente aquecer até a temperatura ambiente. Depois de 40 h, a mistura de reação foi parcialmente concentrada sob alto vácuo. O líquido marrom remanescente foi absorvido em EA (25 mL) e NaHCO3 sat/H2O 1/1 (15 mL) e extraído. A fase aquosa foi lavada com duas porções (15 mL) de acetato de etila e a fase orgânica combinada foi lavada com porções (30 mL) de H2O e salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer um óleo viscoso marrom claro/vidro. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (40 g gel de sílica, EA 50 a 80 %/hept) para fornecer o composto do título (72 mg, 31 %) como um vidro levemente bege/espuma rígida: MS (ESI+) para C14H14ClF3N2O2 m/z 335,2 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H14ClF3N2O2 m/z 333,3 (M - H)-; HPLC pureza 78,2 % (tempo de retenção, 3,56 min).Etapa 12: Síntese de 3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutanona
Figure img0175
[00609]N-(2-Amino-4-cloro-5-(trifluorometil)fenil)-3-(3-oxociclobutil)propanamida (72 mg, mmol) foi absorvida em ácido acético (3,2 mL) e a solução foi aquecida a 65 °C durante 26 h, nas quais a HPLC indicou que o material de partida foi consumido e um novo produto foi formado. A mistura de reação foi esfriada e o solvente foi removido sob alto vácuo. O resíduo marrom claro foi absorvido em acetato de etila (20 mL) e a fase orgânica foi lavada com porções (10 mL) de NaHCO3 sat e H2O. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro marrom claro. O material bruto foi purificado por TLC prep (placa de TLC prep 2°Cm x 2°Cm x 1,0 mm, MeOH a 3 %/EA) para fornecer o composto do título (45 mg, 66 %) como um vidro bege: MS (ESI+) para C14H12ClF3N2O m/z 317,2 (M + H)+; MS (ESI-) para C14H12ClF3N2O m/z 315,2 (M - H)-; HPLC pureza 84,1 % (tempo de retenção, 2,98 min).Etapa 13: Síntese de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0176
[00610]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (80 mg, 0,18 mmol) e 3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutanona (45 mg, 0,14 mmol) em 1,2-dicloroetano (2,4 mL) foi tratada, às gotas, com ácido acético (10 μL, 0,18 mmol). A solução foi tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (53 mg, 0,25 mmol) em uma porção e deixada agitar na temperatura ambiente até concluir por HPLC. Depois de 4 h, a mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (10 mL) e lavada com NaHCO3 sat (10 mL). A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (10 mL) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4. A solução foi filtrada e concentrada para fornecer um vidro castanho cla- ro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (25 g gel de sílica; NH3 7N 5 % em CH3OH/CHCl3) para fornecer o composto do título (76 mg, 71 %) como um vidro incolor/espuma rígida: MS (ESI+) para C38H43ClF3N7O4 m/z 754,3 (M + H)+; MS (ESI-) para C38H43ClF3N7O4 m/z 752,3 (M - H)-; HPLC pureza 90,5 % (tempo de retenção, 3,24 min).Etapa 14: Síntese de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0177
[00611]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-cloro-5- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (76 mg, 0,10 mmol) em metanol (2,5 mL) foi tratada com ciano- boro-hidreto de sódio (84 mg, 1,3 mmol). O pH da solução foi ajustado a ~6 pela adição, às gotas, de uma solução a 10 % (v/v) de ácido acético glacial em metanol. A mistura foi tratada com formaldeído aquoso a 37 % (0,12 mL, 1,7 mmol), às gotas, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente até concluir por LCMS. Depois de 2 h, a reação foi concluída e a mistura de reação foi concentrada para remover o metanol. A solução aquosa que permaneceu foi diluída com NaHCO3 7 mL e a fase aquosa foi extraída com três porções (10 mL) de CH2Cl2. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada, e concentrada para fornecer uma espuma rígida incolor/vidro. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (20 g gel de sílica; NH3 7N a 4 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto do título (62 mg, 80 %) como um vidro incolor: MS (ESI+) para C39H45ClF3N7O4 m/z 768,0 (M + H)+; MS (ESI-) para C39H45ClF3N7O4 m/z 766,3 (M - H)-; HPLC pureza 92,1 % (tempo de retenção, 3,29 min).
Etapa 15: Síntese do Composto 7
[00612]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-Cloro-5-(trifluorometil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,078 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (3,6 mL) e água (0,4 mL) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, e depois aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 3 h na temperatura ambiente, HPLC indicou que a reação foi concluída. A mistura de reação muito rosa foi concentrada. O resíduo foi absorvido em MeOH (10 mL) e concentrado. Este procedimento foi repetido duas vezes e o resíduo colocado em alto vácuo durante 1 h. O material foi absorvido em MeOH (7 mL) e foi tratado com K2CO3 (120 mg) e dez gotas de água. A mistura foi deixada agitar durante 1 h. A mistura foi filtrada através de uma frita fina, os sólidos foram lavados com MeOH (10 mL) e o filtrado foi concentrado para fornecer um sólido quase incolor. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (30 g gel de sílica; NH3 7N 10 a 15 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o Composto 7 (31 mg, 69 %) como um vidro incolor/espuma rígida: MS (ESI+) para C27H31ClF3N7O2 m/z 578,3 (M + H)+; MS (ESI-) para C27H31ClF3N7O2 m/z 576,4 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 2,57 min); RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOD) δH 8,06 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 2,07 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 2,28 Hz, 1 H), 7,21 (dd, J = 3,42, 1,76 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,33 (t, J = 6,84 Hz, 1 H), 3,89 (q, J = 5,25 Hz, 1 H), 3,03 (m, 0,5 H), 2,89 (m, 2 H), 2,70 (m, 0,5 H), 2,49 (m, 1 H), 2,40 (m, 2 H), 2,27 (br. s., 2 H), 2,16 (d, J = 7,26 Hz, 4 H), 2,06 (m, 2 H), 1,91 (m, 2 H), 1,62 (m, 1 H), 1,52 (m, 1 H).
Exemplo 8: Síntese dos Compostos 8 a 140
[00613]Os Compostos 8 a 140 foram sintetizados pelos métodos similares àqueles descritos para os Exemplos 1 a 7 ou pelos esquemas de reação representados nos esquemas gerais. As descrições detalhadas de como alguns deles foram preparadas são fornecidas abaixo. Os dados de MS e RMN dos Compostos 2 a 140 são fornecidos na Tabela 1 ou nos Exemplos fornecidos neste relatório. Composto 8: 1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,4-di- hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)-3-(4-(terc-butil)fenil)ureia (3-Oxociclobutil)carbamato de benzila
[00614]A uma solução de ácido 3-oxociclobutanocarboxílico (1,0 g, 8,77 mmols) e DIEA (1,92 g, 14,92 mmols) em tolueno (8 mL) foi adicionado DPPA (2,89 g, 10,52 mmols) na temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 60 °C sob ar- gônio durante 3 h, depois álcool benzílico (1,14 g, 10,52 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada a 60 °C durante a noite. A reação foi concentrada, o resíduo foi purificado por SGC (PE : EA = 8 : 1) para fornecer o composto desejado (240 mg, rendimento de 50 %). RMN de 1H (500MHz, CDCl3): δH 7,38 - 7,33 (m, 5 H), 5,12 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 4,34 - 4,33 (brs, 1 H), 3,44 - 3,39 (m, 2 H), 3,10 - 3,07 (brs, 2 H) ppm; ESI-MS (m/z): 220,2 [M + 1]+.(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)carbamato de benzila
[00615]A uma solução de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6- ((metilamino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (190 mg, 0,59 mmol) e (3-oxociclobutil)carbamato de benzila (240 mg, 1,37 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado Ti[OCH(CH3)2]4 (216 mg, 0,59 mmol). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Depois, NaCNBH3 (95 mg, 1,52 mmol) foi adicionado, a reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A reação foi filtrada e evaporada, o resíduo foi purificado por TLC prep (DCM : MeOH = 20 : 1) para obter o composto desejado (90 mg, rendimento de 29 %).
[00616]RMN de 1H (500MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,33 - 7,28 (m, 5 H), 6,19 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,52 - 5,51 (m, 1 H), 5,03 (s, 1 H), 5,00 - 4,98 (m, 1 H), 4,34 (t, J = 3,5 Hz, 1 H), 3,70 (m, 1 H), 2,58 - 2,47 (m, 4 H), 2,38 - 2,26 (m, 2 H), 2,09 (s, 3 H), 1,69 - 1,67 (m, 1 H), 1,58 (s, 3 H), 1,37 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 524,3 [M + 1]+.N1-(((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)-N1-metilciclobutano-1,3-diamina
[00617]A uma solução de (3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)carbamato de benzila (190 mg, 0,17 mmol) e Pd(OH)2 (14 mg, 0,1 mmol) em MeOH (5 mL) foi carregado com H2. A reação foi agitada a 35 °C durante 5 h. A reação foi filtrada com Celite e concentrada à secura. O resíduo foi purificado por TLC prep (DCM : MeOH = 10 : 1) ao composto desejado (28 mg, rendimento de 42 %). RMN de 1H (500MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 6,19 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,51 (dd, J = 6,5 e 2,0 Hz, 1 H), 5,00 (dd, J = 6,0 e 3,5 Hz, 1 H), 4,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 3,14 - 3,11 (m, 1 H), 2,60 - 2,57 (m, 1 H), 2,52 - 2,48 (m, 2 H), 2,34 - 2,31 (m, 2 H), 2,10 (s, 3 H), 1,66 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,58 (s, 3 H), 1,48 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,37 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 390,2 [M + 1]+.1-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)-3-(4-(terc-butil)fenil)ureia
[00618]Uma solução de N1-(((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)-N1-metilciclobutano-1,3-diamina (28 mg, 0,072 mmol) e TEA (22 mg, 0,22 mmol) em THF (3 mL) foi adicionada, às gotas, 1-terc-butil-4-isocianatobenzeno (18 mg, 0,11 mmol) em DCM (0,5 mL). A reação foi agitada durante 1 hora na temperatura ambiente. A reação foi concentrada e purificada por TLC prep (duas vezes, DCM : MeOH : NH4OH = 300 : 30 : 8, V/V) para obter o composto desejado (28 mg, rendimento: 88 %) como um sólido branco claro. RMN de 1H (500MHz, MeOD): δH 8. 29 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,28 - 7,22 (m, 4 H), 6,25 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,52 - 5,50 (m, 1 H), 5,07 - 5,05 (m, 1 H), 4,46 - 4,44 (m, 1 H), 3,88 - 3,85 (m, 1 H), 2,97 (brs, 1 H), 2,80 - 2,78 (m, 2 H), 2,48 - 2,42 (m, 2 H), 2,30 (s, 3 H), 1,84 - 1,82 (m, 1 H), 1,60 (s, 3 H), 1,58 - 1,56 (m, 1 H), 1,39 (s, 3 H), 1,28 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 565,3 [M + 1]+.1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-Amino-9H-purin-9-il)-3,4-di-hidroxitetra- hidrofuran-2-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)-3-(4-(terc-butil)fenil)ureia
Figure img0178
[00619]Uma solução de 1-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)-3-(4-(terc- butil)fenil)ureia (125 mg, 0. 23 mmol) em TFA (0,90 mL) e 0,10 mL de água foram agitados durante 1 hora na temperatura ambiente. A reação foi concentrada à secura, dissolvida em MeOH (5 mL) e K2CO3 (60 mg) em 0,5 mL de água foi adicionado às gotas. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 0,5 h e concentrada para obter o resíduo que foi purificado por TLC prep (DCM : MeOH : NH4OH = 300 : 30 : 8, V/V) para obter o composto desejado (75 mg, rendimento: 65 %) como um sólido branco claro. RMN de 1H (500MHz, MeOD): δH 8. 27 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,28 - 7,20 (m, 4 H), 6,00 - 5,99 (m, 1 H), 4,77 - 4,75 (m, 1 H), 4,28 - 4,23 (m, 2 H), 3,92 - 3,88 (m, 1 H), 2,92 (brs, 1 H), 2,83 - 2,81 (m, 2 H), 2,59 - 2,56 (m, 2 H), 2,32 (s, 3 H), 1,74 - 1,64 (m, 2 H), 1,27 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 525,3 [M + 1]+.Compostos 9 e 12
Figure img0179
[00620]Composto 9: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol:RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,07 (s, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,69 (s, 1 H), 7,22 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,34 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 3,89 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 2,88 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,74 - 2,68 (m, 1 H), 2,55 - 2,49 (m, 1 H), 2,46 - 2,35 (m, 2 H), 2,32 - 2,22 (m, 3 H), 2,17 (s, 3 H), 2,00 - 1,90 (m, 3 H), 1,68 - 1,60 (m, 1 H), 1,58 - 1,48 (m, 2 H) ppm; LC-MS (m/z): 578,3 [M + 1]+.
[00621]Composto 12: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol:RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,07 (s, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 7,22 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,34 (dd, J = 7,0 e 6,0 Hz, 1 H), 3,90 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 3,05 - 3,00 (m, 1 H), 2,92 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,55 - 2,49 (m, 1 H), 2,47 - 2,35 (m, 2 H), 2,32 - 2,22 (m, 1 H), 2,20 - 2,02 (m, 8 H), 1,93 - 1,86 (m, 2 H), 1,70 - 1,60 (m, 1 H) ppm; LC-MS (m/z): 578,3 [M + 1]+.
Figure img0180
[00622]Composto 10: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((metil((1r,3S)-3-(2-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,06 (s, 1 H), 7,79 (s, 1 H), 7,62 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,20 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 4,33 - 4,30 (m, 1 H), 3,88 - 3,86 (m, 1 H), 3,32 - 3,31 (m, 1 H), 2,89 - 2,86 (m, 2 H), 2,67 - 2,66 (m, 1 H), 2,48 - 2,26 (m, 6 H), 2,14 (s, 3 H), 1,95 - 1,93 (m, 3 H), 1,62 - 1,48 (m, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 544,3 [M + 1]+.
[00623]Composto 11: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((metil((1s,3R)-3-(2-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol:RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,06 (s, 1 H), 7,79 (s, 1 H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,20 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,33 - 4,31 (m, 1 H), 3,90 - 3,87 (m, 1 H), 3,01 - 3,0 (m, 1 H), 2,92 - 2,89 (m, 2 H), 2,48 - 2,03 (m, 13 H), 1,93 - 1,89 (m, 2 H), 1,63 - 1,61 (m, 1 H) ppm; LC-MS (m/z): 544,3 [M + 1]+.
[00624]Composto 13: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((metil(3-(2-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00625]N-(2-amino-4-(trifluorometil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0181
[00626]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,44 g, 1,2 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (460 mg, 0. 77 mmol), N,N-di- isopropiletilamina (0,44 mL, 2,6 mmols) em N,N-dimetilformamida (5 mL). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A camada aquosa foi extraída 3x com EtOAc e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados, concentrados e purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 95:5) para fornecer o composto desejado (0,34 g) como um sólido.
[00627]N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2- (5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0182
[00628]N-(2-Amino-4-(trifluorometil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,38 g, 0,50 mmol) e ácido acético (5 ml) foram agitados durante a noite a 65 °C. Os voláteis foram removidos a vácuo e água remanescente foi removida por destilação azeotró- pica com etanol seguido por 1 hora em alto vácuo. O resíduo resultante foi particionado entre NaHCO3 (saturado) e DCM. A camada aquosa foi extraída (3x) e orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados, concentrados e depois purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 93:7) para fornecer uma espuma branca amarelada.
[00629](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((metil(3- (2-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano- 1,2-diol
Figure img0183
[00630]Ácido trifluoroacético (5 ml) foi adicionado a uma mistura de água (0,5 ml), N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5- (trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,31 g, 0,42 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi deixada proceder durante a noite quando ela foi interrompida com trietilsilano (0,13 ml, 0,84 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi particionado entre NaHCO3 saturado e DCM/MeOH (10:1). A camada aquosa foi extraída (3x) com DCM/MeOH (10:1) e os orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 87:13) para fornecer o composto desejado (0,12 g) como uma espuma branca amarelada/goma. MS (ESI+) para C27H32F3N7O2 m/z 544,5 [M + H]+; MS (ESI-) para C27H32F3N7O2 m/z 542,3 [M - H]-; HPLC pureza >85 % (tempo de retenção, 2,418 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4- MeOH) δH 8,078 (s, 1 H), 7,812 (s, 1 H), 7,654 - 7,634 (m, 1 H), 7,507 - 7,487 (m, 1 H), 7,229 - 7,214 (m, 1 H), 6,617 - 6,608 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,361 - 4,322 (m, 1 H), 3,927 - 3,887 (m, 1 H), 3,062 - 3,024 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 2,944 - 2,873 (m, 2 H), 2,758 - 2,554 (m, 0,5 H (metina de isômero cis)), 2,554 - 2,507 (m, 1 H), 2,447 - 2,351 (m, 2 H), 2,291 - 2,263 (m, 2 H), 2,194 - 2,054 (m, 6 H), 1,960 - 1,887 (m, 3 H), 1,686 - 1,480 (m, 2 H). Tempo de retenção: 2,418. Condições de HPLC: coluna Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18, 4,6 X 50 mm (empacotamento 1,8 um), Solvente A: Água (TFA a 0,1 %), Solvente B: Acetonitrila (TFA a 0,07 %), 6 min gradiente de 5 a 95 % B; 1 min de retenção; depois reciclar.
[00631]Composto 14: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00632]N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0184
[00633]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il}urônio (0,44 g, 1,2 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (460 mg, 0,77 mmol) e N,N-di- isopropiletilamina (0,44 mL, 2,6 mmols) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,15 g, 0,93 mmol) em N,N-dimetilformamida (5 mL, 60 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados. Purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 95:5) para fornecer um sólido (0,24 g).
[00634]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0185
[00635]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,24 g, 0,32 mmol) em ácido acético (5 ml, 90 mmols) foi agitada durante a noite a 60 °C. Os voláteis foram removidos a vácuo e resíduo remanescente particionado entre Na2CO3 (2N) e DCM. A camada aquosa foi extraída 3x com DCM e os orgânicos combinados secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 94:6) para fornecer o composto desejado (0,20 g) como um sólido.
[00636](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0186
[00637]Ácido trifluoroacético (5 ml) foi adicionado a uma mistura de água (0,5 ml) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,20 g, 0,28 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi deixada proceder durante a noite, na qual ela foi interrompida com trietilsilano (0,088 ml, 0,55 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi particionado entre NaHCO3 saturado e DCM/MeOH (10:1). O aquoso extraído 3x com DCM/MeOH (10:1) e os orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados, concentrados e purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 87:13) para fornecer o produto desejado como uma espuma branca amarelada (0,060 g). MS (ESI+) para C30H41N7O2 m/z 532,3 [M + H]+; MS (ESI-) para C30H41N7O2 m/z 530,4 [M - H]-; HPLC pureza >94 % (tempo de retenção, 2,723 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,079 (s, 1 H), 7,500 (s, 1 H), 7,418 - 7,398 (m, 1 H), 7,310 - 7,307 (m, 1 H), 7,230 - 7,216 (m, 1 H), 6,619 - 6,610 (m, 1 H), 4,355 - 4,316 (m, 1 H), 3,926 - 3,887 (m, 1 H), 3,088 - 3,017 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 2,879 - 2,809 (m, 2 H), 2,745 - 2,685 (m, 0,5 H (metina de isômero cis), 2,532 - 2,512 (m, 1 H), 2,446 - 2,373 (m, 2 H), 2,294 - 2,276 (m, 2 H), 2,202 - 2,012 (m, 5 H), 1,685 - 1,603 (m, 1 H), 1,545 - 1,504 (m, 1 H), 1,383 (s, 1 H). Tempo de retenção: 2,723 min. Condições de HPLC: coluna Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18, 4,6 X 50 mm (empacotamento 1,8 um), Solvente A: água (0,1 % TFA), Solvente B: acetonitrila (TFA a 0,07 %) 6 min gradiente de 5 a 95 % B; 1 min de retenção; depois reciclar.
[00638]Composto 15: (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il}-5-{[propan-2-il({4-[5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]butil})amino]metil}ciclopentano-1,2-diol Etapa 1: 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-{[propan-2-il({4-[5-(trifluorometil)- 1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]butil})amino]metil}-hexa- hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0187
[00639]Uma solução de 3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H- 1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carbaldeído (243 mg, 0,59 mmol), 7- [(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-[(propan-2-ilamino)metil]-hexa- hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (170 mg, 0,49 mmol) e MgSO4 (710 mg, 5,90 mmol) em DCE (10 ml) foi agitada durante 15 min. STAB (175 mg, 0,83 mmol) depois foi adicionado à mistura de reação e agitada durante 1 h na temperatura ambiente. A reação foi monitorada por LCMS, nenhuma amina foi observada depois de 1 h. NaHCO3 sat. (20 ml) foi adicionado à mistura de reação e agitado durante 5 min. Salmoura (10 ml) depois foi adicionada à mistura de reação. O produto foi extraído com DCM (2 x 30 ml), seco em Na2SO4, filtrado e evaporado. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (1:99 - 4:96) forneceu o produto desejado (170 mg, 47 %) como um óleo; MS (ESI+) para C38H54F3N7O3Si m/z 742,40 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,78 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm -0,25 - 0,11 (9 H, m), 0,66 - 1,04 (8 H, m), 1,17 - 1,48 (5 H, m), 1,49 - 1,61 (3 H, m), 1,77 - 2,04 (2 H, m), 2,19 - 2,37 (5 H, m), 2,37 - 2,51 (2 H, m), 2,52 - 2,80 (2 H, m), 2,81 - 2,91 (1 H, m), 2,91 - 3,22 (2 H, m), 3,34 - 3,79 (2 H, m), 4,29 - 4,52 (1 H, m), 4,78 - 5,12 (2 H, m), 5,28 - 5,70 (4 H, m), 6,34 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 6,80 - 7,16 (1 H, m), 7,29 - 7,71 (2 H, m), 7,71 - 8,11 (1 H, m), 8,11 - 8,46 (1 H, m) Etapa 2. (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5- {[propan-2-il({4-[5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]butil})amino]metil}ciclopentano-1,2-diol
Figure img0188
[00640]HCl 12N (3 ml) foi lentamente adicionado a uma solução de 7- [(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-({propan-2-il[(3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (170 mg, 0,23 mmol) em MeOH (3 ml) e agitada a 40 °C durante 2,5 h. A reação foi monitorada por LCMS, nenhum material de partida foi observado depois de 2,5 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo, depois basificada com NH3 7N em MeOH. Este depois foi evaporado à secura. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (1:9) forneceu o produto desejado (100 mg, 76 %) como um sólido branco; MS (ESI+) para C29H36F3N7O3 m/z 572,40 [M + H]+; HPLC pureza 99 % (tempo de retenção, 2,17 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 0,78 - 1,19 (6 H, m), 1,35 - 1,69 (2 H, m), 1,80 - 2,04 (1 H, m), 2,11 - 2,87 (10 H, m), 2,88 - 3,18 (3 H, m), 3,79 - 4,06 (1 H, m), 4,15 - 4,47 (1 H, m), 4,82 - 5,12 (1 H, m), 6,43 - 6,77 (1 H, m), 7,19 (1 H, d, J = 3,47 Hz), 7,47 (1 H, d, J = 8,35 Hz), 7,63 (1 H, d, J = 8,51 Hz), 7,79 (1 H, s), 7,95 - 8,24 (1 H, m).
[00641]Composto 18: (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il}-5-({metil[(3-{[5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)ciclopentano-1,2-diolEtapa 1: ácido 3-[2-(benzilóxi)-2-oxoetilideno]ciclobutano-1-carboxílico
Figure img0189
[00642]Uma mistura de ácido ciclobutano-ona-3-carboxílico (5 g, 43,82 mmols), benzil-2-(dimetoxifosforil)acetato (13,58 g, 52,59 mmols), LiOH (4,20 g, 23,95 mmols) e peneiras moleculares ativadas 3A (25 g, forma de pó) em THF (250 ml) foi aquecida em refluxo sob nitrogênio durante 4 h. A reação foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e EtOAc (100 ml) seguido por HCl (1N, 100 ml) foram adicionados. Esta mistura foi filtrada através de celite. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (4 x 50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer um óleo incolor. A cromatografia instantânea seca sob SiO2, eluindo com Hept:EtOAc de 7:3 a 1:1 forneceu o produto desejado como um óleo incolor (5,2 g, 39 %); MS (ESI+) para C14H14O4 m/z 269,05 [M + Na]+; MS (ESI-) para C14H14O4 m/z 245,15 [M - H]-; HPLC pureza 81 % (tempo de retenção, 1,85 min); RMN de 1H (250 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 2,95 - 3,62 (5 H, m), 4,96 - 5,31 (2 H, m), 5,75 (1 H, t, J = 2,21 Hz), 7,27 - 7,45 (5 H, m).Etapa 2. 2-{3-[metóxi(metil)carbamoil]ciclobutilideno}acetato de benzila
Figure img0190
[00643]A uma solução esfriada em gelo de ácido 3-[2-(benzilóxi)-2- oxoetilideno]ciclobutano-1-carboxílico (2,0 g, 8,12 mmols), N-metil-morfolina (2,70 ml, 24,36 mmols) em DCM (50 ml) foi adicionado cloroformiato de isobutila (1,70 ml, 12,99 mmols), às gotas, durante 5 min. Depois de 5 min adicionais, cloridreto de me- tóxi(metil)amina (1,58 g, 16,24 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada durante a noite permitindo aquecer até a temperatura ambiente. A mistura de reação depois foi diluída com DCM (30 ml), lavada com HCl 0,1N (50 ml) e depois NaHCO3 sat. (50 ml), seca em Na2SO4, filtrada e evaporada. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com EtOAc:heptanos de 1:9 a 3:7 forneceu o produto desejado (1,54 g, 65 %); MS (ESI+) para C16H19NO4 m/z 290,10 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,86 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 2,96 (1 H, ddd, J = 16,98, 8,79, 1,81 Hz), 3,17 - 3,30 (4 H, m), 3,30 - 3,48 (2 H, m), 3,51 - 3,63 (1 H, m), 3,64 - 3,75 (3 H, m), 5,15 (2 H, s), 5,73 (1 H, quin, J = 2,25 Hz), 7,29 - 7,42 (5 H, m).Etapa 3. ácido 2-{3-[metóxi(metil)carbamoil]ciclobutil}acético
Figure img0191
[00644]Paládio sobre carvão (10 %, 0,1 g) foi adicionado a uma solução de 2-{3-[metóxi(metil)carbamoil]ciclobutilideno}acetato de benzila (1,54 g, 5,32 mmols) em EtOH (20 ml) e agitada sob uma atmosfera de hidrogênio na temperatura ambiente durante 6 h. A mistura de reação foi filtrada através de celite e evaporada à secura para fornecer um óleo incolor (1,04 g, 89 %); MS (ESI+) para C9H15NO4 m/z 202,00 [M + H]+; MS (ESI)- para C9H15NO4 m/z 200,05 [M - H]-; HPLC pureza 92 % (tempo de retenção, 1,10 min); RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δH ppm 1,84 - 2,08 (2 H, m), 2,28 - 2,53 (4 H, m), 2,56 - 2,72 (1 H, m), 3,06 - 3,22 (3 H, m), 3,38 - 3,56 (1 H, m), 3,68 (3 H, d, J = 8,04 Hz).Etapa 4i. 3-({[2-amino-5-(trifluorometil)fenil]carbamoil}metil)-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida
Figure img0192
[00645]TEA (1,49 ml, 10,70 mmols) foi adicionada a uma suspensão de ácido 2-{3-[metóxi(metil)carbamoil]ciclobutil}acético, EDC.HCl 1,18 g, 6,20 mmols), HOBt.xH2O (0,77 g, 5,69 mmols) em DCM (20 ml) a 0 °C e agitado durante 5 min antes da adição de 4-(trifluorometil)benzeno-1,2-diamina (1,04 g, 10,34 mmols). Esta foi agitada durante 20 min adicionais a 0 °C e depois deixado aquecer até a temperatura ambiente. A reação foi monitorada por LC MS, depois de 2 horas, a mistura de reação foi lavada com HCl 1N (50 ml) e depois NaHCO3 sat. (50 ml). Este foi seco em Na2SO4, filtrado e evaporado à secura. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com EtOAc forneceu o produto desejado (0,83 g, 44 %) como um sólido bege; MS (ESI+) para C16H20N3O3m/z 360,00 [M + H]+; HPLC pureza 90 % (tempo de retenção, 1,64 min); RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δH ppm 2,02 - 2,16 (2 H, m), 2,31 - 2,68 (4 H, m), 2,69 - 2,88 (1 H, m), 3,18 (3 H, d, J = 4,41 Hz), 3,36 - 3,59 (1 H, m), 3,65 - 3,76 (3 H, m), 6,81 - 6,97 (1 H, m), 7,02 - 7,27 (1 H, m), 7,28 - 7,48 (1 H, m).Etapa 4ii. N-metóxi-N-metil-3-{[5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}-ciclobutano-1-carboxamida
Figure img0193
[00646]Uma solução de 3-({[2-amino-5-(trifluorometil)fenil]carbamoil}metil)-N- metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida (0,82 g, 2,29 mmols) em AcOH (10 ml) foi aquecida em refluxo (~125 °C) enquanto foi agitada durante 2,5 h. A reação foi moni- torada por LC MS. A mistura de reação foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e depois evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (30 ml) e lavado com NaHCO3 sat. (50 ml), seco em Na2SO4, filtrado e evaporado. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com MeOH:DCM (2:98 - 5:95) para fornecer um óleo amarelo-marrom (0,75 g, 94 %); MS (ESI+) para C16H18F3N3O2 m/z 342,10 [M + H]+; HPLC pureza 97 % (tempo de retenção, 1,40 min); RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δH ppm 1,96 - 2,17 (2 H, m), 2,27 - 2,55 (2 H, m), 2,66 - 2,92 (1 H, m), 2,97 - 3,15 (2 H, m), 3,15 - 3,22 (3 H, m), 3,32 - 3,62 (1 H, m), 3,63 - 3,73 (3 H, m), 7,37 - 7,53 (1 H, m), 7,53 - 8,00 (2 H, m).Etapa 5. N-metóxi-N-metil-3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carboxamida
Figure img0194
[00647]K2CO3 (381 mg, 2,76 mmols), seguido por SEM-Cl (430 μl, 2,43 mmols) foi adicionado a uma solução de N-metóxi-N-metil-3-{[5-(trifluorometil)-1H- 1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carboxamida (754 mg, 2,21 mmols) em DMF (10 ml) na temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com água (3 ml), salmoura (30 ml) e depois extraída com EtOAc (2 x 50ml). Este foi seco em Na2SO4, filtrado e evaporado para fornecer um óleo laranja claro. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com EtOAc:heptanos (1:1 - 1) forneceu o produto desejados como óleos beges como um único regioisômero (217 mg, 21 %); MS (ESI+) para C22H32F3N3O3Si m/z 472,55 [M + H]+; HPLC pureza 99 % (tempo de retenção, 2,37 min); RMN de 1H (250 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm -0,31 - 0,22 (9 H, m), 0,83 - 1,00 (2 H, m), 2,03 - 2,25 (2 H, m), 2,30 - 2,74 (2 H, m), 2,85 - 3,14 (3 H, m), 3,18 (3 H, s), 3,32 - 3,60 (3 H, m), 3,61 - 3,72 (3 H, m), 5,52 (2 H, s), 7,51 (1 H, dd, J = 8,38, 1,22 Hz), 7,70 (1 H, s), 7,79 (1 H, d, J = 8,53 Hz) e como uma mistura de regioisô- meros (280 mg, 27 %); C22H32F3N3O3Si m/z 472,55 [M + H]+; HPLC pureza 72 % & 21 % (tempo de retenção, 2,39 & 2,36 min); RMN de 1H (250 MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ ppm -0,08 - 0,01 (9 H, m), 0,81 - 0,99 (2 H, m), 1,94 - 2,24 (2 H, m), 2,38 - 2,74 (2 H, m), 2,90 - 3,14 (3 H, m), 3,14 - 3,22 (3 H, m), 3,33 - 3,63 (3 H, m), 3,63 - 3,70 (3 H, m), 5,40 - 5,64 (2 H, m), 7,40 - 7,74 (2 H, m), 7,75 - 8,14 (1 H, m).Etapa 6. 3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carbaldeído
Figure img0195
[00648]DIBAL (0,69 ml, 0,69 mmol, 1M em THF) foi adicionado, às gotas, a uma solução de N-metóxi-N-metil-3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}- 1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carboxamida em THF a -10 °C enquanto foi agitada. A reação foi continuada durante 3 horas a -10 °C. A mistura de reação foi vertida em sal de Rochelle aq. sat. (20 ml), diluída com Et2O (50 ml) e agitada durante 30 min. Esta depois foi separada e a camada orgânica foi lavada com sal de Rochelle (30 ml), NaHCO3 sat. (30 ml) e salmoura (30 ml). Esta foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada para fornecer uma goma incolor (190 mg, 87 %); MS (ESI+) para C20H27F3N2O2Si m/z 413,6 [M + H]+; HPLC pureza 87 % (tempo de retenção, 2,25 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm -0,10 - 0,09 (9 H, m), 0,88 -1,00 (4 H, m), 1,63 - 1,97 (2 H, m), 2,07 - 2,23 (2 H, m), 2,24 - 2,37 (0 H, m), 2,37 - 2,42 (1 H, m), 2,43 - 2,66 (2 H, m), 2,93 - 3,34 (4 H, m), 5,49 - 5,61 (2 H, m), 7,16 - 7,31 (2 H, m), 7,32 - 7,32 (2 H, m), 7,49 - 7,61 (1 H, m), 7,73 (1 H, s), 7,83 (1 H, d, J = 8,35 Hz). Etapa 7. 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-({[(3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0196
[00649]Uma solução de 3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H- 1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carbaldeído (190 mg, 0,46 mmol), (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5-(aminometil)ciclopentano- 1,2-diol (140 mg, 0,46 mmol) e MgSO4 (554 mg, 4,61 mmols) em DCE (10 ml) foi agitada durante 15 min. STAB (137 mg, 0,645 mmol) depois foi adicionado à mistura de reação e agitado. A reação foi monitorada por LCMS, depois de que nenhuma amina foi observada. NaHCO3 sat. (20 ml) foi adicionado à mistura de reação e agitada durante 5 min. Salmoura (10 ml) foi adicionada à mistura de reação e o produto foi extraído com DCM (2 x 30 ml), seco em Na2SO4, filtrado e evaporado. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (1:99 - 5:95) forneceu o produto desejado como um sólido espumante rosa. As frações mistas foram combinadas e purificados em uma placa TLC prep. eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (2 x 4:96) para fornecer um total de 170 mg, 53 %. MS (ESI+) para C35H48F3N7O3Si m/z 700 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,79 min); RMN de 1H (250 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm -0,26 - 0,16 (9 H, m), 0,72 - 0,97 (2 H, m), 1,30 (3 H, s), 1,38 - 1,60 (5 H, m), 1,91 - 2,59 (8 H, m), 2,60 - 3,27 (6 H, m), 3,35 - 3,70 (2 H, m), 4,52 (1 H, t, J = 5,94 Hz), 4,78 - 5,20 (4 H, m), 5,39 - 5,66 (2 H, m), 6,36 (1 H, d, J = 3,65 Hz), 7,03 (1 H, d, J = 3,65 Hz), 7,42 - 7,59 (1 H, m), 7,69 (1 H, s), 7,79 (1 H, d, J = 8,53 Hz), 8,32 (1 H, s).Etapa 8. 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-({metil[(3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0197
[00650]Formaldeído (36 μl, 0,49 mmol, 37 %(aq)) foi adicionado a uma solução de 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-({[(3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina em MeOH (5 ml) e THF (5 ml), e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min. NaCNBH3 (18 mg, 0,29 mmol) foi adicionado às porções, e a reação agitada durante 2 horas adicionais na temperatura ambiente depois que LC MS mostrou a reação ser concluída. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo, e o resíduo particionado entre água (20 ml) e DCM (20 ml) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 ml), os orgânicos combinados depois foram secos em Na2SO4, e concentrados. Purificação por TLC prep., eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (5:95) forneceu o produto desejado (114 mg, 66 %) como um óleo incolor; MS (ESI+) para C36H50F3N7O3Si m/z 714,45 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,77 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm -0,14 - 0,05 (9 H, m), 0,85 - 0,99 (2 H, m), 1,18 - 1,35 (3 H, m), 1,37 - 1,53 (2 H, m), 1,52 - 1,64 (3 H, m), 1,89 - 2,15 (3 H, m), 2,18 - 2,28 (2 H, m), 2,29 - 2,70 (6 H, m), 2,72 - 2,96 (1 H, m), 2,97 - 3,20 (2 H, m), 3,48 (3 H, s), 3,50 - 3,58 (2 H, m), 4,37 - 4,58 (1 H, m), 4,85 - 5,05 (2 H, m), 5,11 - 5,38 (2 H, m), 5,41 - 5,57 (2 H, m), 6,35 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 6,84 - 7,19 (1 H, m), 7,50 (1 H, d, J = 8,35 Hz), 7,68 (1 H, s), 7,78 (1 H, d, J = 8,35 Hz), 8,13 - 8,52 (1 H, m) Etapa 9. (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5-({metil[(3-{[5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0198
[00651]Uma solução de HCl em MeOH (1:1, 3 ml) foi adicionada a 7- [(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-({metil[(3-{[5-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil]amino}metil)- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina a 0 °C e agitada. Esta depois foi imediatamente agitada a 40 °C durante 4 h (reação monitorada por LCMS). A reação foi continuada durante 1 h adicional. LCMS ainda mostrou SM desprotegido por acetal a 30 %. Um adicional de 1 ml de HCl (36 % aq) foi adicionado à mistura de reação e continuado a 40 °C durante 1 h adicional. A mistura de reação depois foi evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (100 ml) + MeOH (1 ml) e lavado com NaHCO3 sat. (2 x 50 ml), seco em Na2SO4, filtrado e evaporado. Purificação por TLC prep., eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (1:9); MS (ESI+) para C27H32F3N7O2 m/z 544 [M + H]+; HPLC pureza 96 % (tempo de retenção, 2,03 min); RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δH ppm 1,47 - 1,58 (1 H, m), 1,58 - 1,69 (1 H, m), 1,87 - 2,12 (1 H, m), 2,12 - 2,54 (10 H, m), 2,53 - 2,91 (3 H, m), 2,93 - 3,15 (2 H, m), 3,88 - 4,08 (1 H, m), 4,32 (1 H, dd, J = 7,57, 6,15 Hz), 4,88 - 5,01 (1 H, m), 6,59 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 7,20 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 7,42 - 7,53 (1 H, m), 7,63 (1 H, d, J = 8,20 Hz), 7,79 (1 H, s), 7,95 - 8,22 (1 H, m).Composto 19: 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
[00652]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (490 mg, 0,79 mmol) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (155 mg, 0,946 mmol) em N,N- dimetilformamida (8,1 ml) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,453 ml, 2,60 mmols), às gotas, seguido por hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (449 mg, 1,18 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada sob alto vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc (50 ml) e H2O/NaHCO3 sat 1/1 (50 ml). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (30 ml) e a fase orgânica combinada foi lavada com porções (30 ml) de H2O e salmoura. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N a 4 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o intermediário desejado como uma mistura de regioisômeros de amida (400 mg). Uma solução de intermediário (0,40 g) em ácido acético (15 ml) foi aquecida a 65 °C durante 2,5 h, a mistura de reação foi esfriada e colocada sob alto vácuo para remover o ácido acético. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (60 ml) e lavado com porções (40 ml) de NaHCO3 sat e solução de Na2CO3 a 2 %. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro/espuma rígida. O material foi colocado em alto vácuo e usado diretamente na etapa seguinte (380 mg)
[00653](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano- 1,2-diol
Figure img0199
[00654]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (390 mg, 0,52 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (7,2 ml) e água (0,8 ml) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, depois aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 2,5 na temperatura ambiente o resíduo foi absorvido em MeOH (15 ml) e concentrado. Este procedimento foi repetido duas vezes e o resíduo colocado em alto vácuo. O material foi absorvido em MeOH (15 ml) (forneceu uma pasta fluida) e foi tratado com K2CO3 (500 mg) e 8 gotas de água. A mistura foi deixada agitar durante 1 h, tempo no qual a solução foi encontrada ser básica. A mistura foi filtrada através de uma frita fina, os sólidos foram lavados com MeOH (10 mL) e o filtrado foi concentrado para fornecer um sólido branco amarelado. O material foi deixado em alto vácuo durante a noite. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N 8 a 10 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer um vidro/espuma rígida (0,22 g). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (m, 1 H), 7,27 (m, 1 H), 7,20 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (m, 1 H), 4,32 (t, J = 6,43 Hz, 1 H), 3,93 (t, J = 5,29 Hz, 1 H), 3,54 (m, 0,2 H), 3,11 (t, J = 9,33 Hz, 1 H), 3,02 (m, 1 H), 2,82 (m, 2 H), 2,66 (dd, J = 1 3,68, 8,09 Hz, 1 H), 2,46 (m, 1 H), 2,36 (m, 1 H), 2,23 (m, 3 H), 2,05 (m, 1 H), 1,91 (m, 3 H), 1,59 (m, 3 H), 1,36 (s, 9 H), 1,02 (m, 6 H). Composto 20: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00655]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-Cloro-5-(trifluorometil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0200
[00656]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (78,5 mg, 0,126 mmol) e 4-cloro-5-(trifluorometil)benzeno-1,2-diamina (31,9 mg, 0,151 mmol) em N,N-dimetilformamida (1,3 ml) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (72,5 μl, 0,416 mmol, às gotas, seguido por hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (72,0 mg, 0,189 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 7,5 h. A mistura de reação foi colocada na geladeira durante a noite. A mistura de reação foi concentrada sob alto vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc (20 ml) e H2O/NaHCO3 sat 1/1 (20 ml). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (10 ml) e a fase orgânica combinada foi lavada com porções (10 ml) de H2O e salmoura. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia in-stantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N a 3 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o intermediário desejado como um vidro/espuma rígida (amidas regiosoméricas e dia- stereômeros cis/trans, 87 mg). O intermediário (0,087 g) foi absorvido em ácido acético (4,5 ml,) foi aquecido a 65 °C durante 6 h, foi esfriado até a temperatura ambiente e agitada na temperatura ambiente durante 48 h. A reação foi aquecida a 65 °C durante 8 h, depois na temperatura ambiente e depois a 65 °C durante 6,5 h adicionais. A mistura foi esfriada e colocada sob alto vácuo para remover o ácido acético. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (15 ml) e lavado com porções (10 ml) de Na- HCO3 sat. e solução de Na2CO3 a 2 %. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um vidro/espuma rígida. O material foi colocado em alto vácuo durante a noite. O material bruto foi purificado por TLC prep em uma placa de TLC prep 2°Cm x 2°Cm x 1,0 mm eluindo duas vezes com NH3 7N a 4 % em CH3OH/CH2Cl2. O produto foi isolado para fornecer o produto como um sólido branco (48 mg).
[00657](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(6- cloro-5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0201
[00658]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-Cloro-5-(trifluorometil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (525 mg, 0,683 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (9 ml) e água (1 ml) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, depois aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 4 h na temperatura ambiente, a mistura foi concentrada. O resíduo foi absorvido em MeOH (20 ml) e concentrado. Este procedimento foi repetido duas vezes e o resíduo colocado em alto vácuo. O material foi absorvido em MeOH (15 ml) (forneceu uma pasta fluida) e foi tratado com K2CO3 (500 mg) e 15 gotas de água. A mistura foi deixada agitar durante 1 h, tempo no qual a solução foi encontrada ser básica. A mistura foi filtrada através de uma frita fina, os sólidos foram lavados com MeOH (10 mL) e o filtrado foi concentrado para fornecer um sólido branco amarelado. O material foi deixado em alto vácuo durante a noite. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N a 12 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer um vidro incolor/espuma rígida. RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 2,07 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 2,28 Hz, 1 H), 7,21 (dd, J = 3,42, 1,76 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,33 (t, J = 6,84 Hz, 1 H), 3,89 (q, J = 5,25 Hz, 1 H), 3,03 (m, 0,5 H), 2,89 (m, 2 H), 2,70 (m, 0,5 H), 2,49 (m, 1 H), 2,40 (m, 2 H), 2,27 (br. s., 2 H), 2,16 (d, J = 7,26 Hz, 4 H), 2,06 (m, 2 H), 1,91 (m, 2 H), 1,62 (m, 1 H), 1,52 (m, 1 H).
[00659]Composto 21: (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il}-5-({[(3-{[6-cloro-5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]metil}ciclobutil)metil](propan-2-il)amino}metil)ciclopentano-1,2-diol Etapa 1: 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-({[(3-{[6-cloro-5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil](propan-2- il)amino}metil)-2,2-dimetil-hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina
Figure img0202
[00660]Uma solução de 3-{[6-cloro-5-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutano-1-carbaldeído (223 mg, 0,50 mmol), 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-[(propan-2-ilamino)metil]-hexa- hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (172 mg, 0,50 mmol) e MgSO4 (600 mg, 5,00 mmols) em DCE (10 ml) foi agitada durante 15 min. STAB (148 mg, 0,70 mmol) depois foi adicionado à mistura de reação e agitada durante 1 h na temperatura ambiente. A reação foi monitorada por LCMS, nenhuma amina foi observada depois de 2,5 h. NaHCO3 sat. (20 ml) foi adicionado à mistura de reação e agitada durante 5 min. Salmoura (20 ml) depois foi adicionada à mistura de reação. O produto foi extraído com DCM (2 x 30 ml), seco em Na2SO4, filtrado e evaporado. Purificação por HPLC prep. forneceu o produto desejado (174 mg, 45 %) como um sólido branco; MS (ESI+) para C38H53ClF3N7O3Si m/z 776,30 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,68 min); RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δH ppm -0,25 - 0,11 (9 H, m), 0,90 (2 H, td, J = 7,88, 3,47 Hz), 1,30 (3 H, s), 1,37 (6 H, t, J = 7,49 Hz), 1,55 (3 H, s), 1,63 - 1,84 (1 H, m), 1,99 - 2,37 (2 H, m), 2,37 - 3,03 (6 H, m), 3,04 - 3,28 (3 H, m), 3,34 - 3,50 (1 H, m), 3,61 (2 H, td, J = 7,92, 2,29 Hz), 3,79 (1 H, br. s.), 4,68 (1 H, t, J = 6,70 Hz), 4,95 - 5,27 (2 H, m), 5,55 - 5,81 (1 H, m), 6,88 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 7,06 - 7,62 (2 H, m), 7,61 - 7,94 (1 H, m), 7,94 - 8,16 (1 H, m), 8,22 (1 H, s)Etapa 2. (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5-({[(3-{[6- cloro-5-(trifluorometil)-1H-1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil](propan-2- il)amino}metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0203
[00661]HCl 12N (1,5 ml) foi lentamente adicionado a uma solução de 7- [(3aS,4R,6R,6aR)-6-({[(3-{[6-cloro-5-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H- 1,3-benzodiazol-2-il]metil}ciclobutil)metil](propan-2-il)amino}metil)-2,2-dimetil-hexa- hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (174 mg, 0,22 mmol) em MeOH (1,5 ml) e agitada a 40 °C durante 6 h. A reação foi monitorada por LCMS, nenhum material de partida foi observado depois de 2,5 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo, depois basificada com NH3 7N em MeOH (5 ml). Esta depois foi evaporada à secura. Purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluindo com NH3 7N em MeOH:DCM (1:9) forneceu o produto desejado (36 mg, 27 %) como um sólido branco; MS (ESI+) para C29H35ClF3N7O2 m/z 606,30 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 2,59 min); RMN de 1H (500 MHz, Me- OD) δH ppm 0,93 - 1,09 (6 H, m), 1,41 - 1,64 (2 H, m), 1,76 - 2,06 (1 H, m), 2,15 - 2,65 (9 H, m), 2,65 - 2,88 (1 H, m), 2,91 - 3,13 (3 H, m), 3,80 - 4,09 (1 H, m), 4,19 - 4,46 (1 H, m), 4,88 - 4,94 (1 H, m), 6,46 - 6,77 (1 H, m), 7,19 (1 H, d, J = 3,63 Hz), 7,69 (1 H, s), 7,89 (1 H, s), 8,06 (1 H, s) Composto 22: (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5- {[({3-[(5-terc-butil-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]ciclobutil}metil)(propan-2- il)amino]metil}ciclopentano-1,2-diol Estágio 1: 3-{[(2-amino-4-terc-butilfenil)carbamoil]metil}-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida
Figure img0204
[00662]N,N-Di-isopropiletilamina (5,19 ml, 29,82 mmols) foi adicionada a uma suspensão de ácido 2-{3-[metóxi(metil)carbamoil]ciclobutil}acético (3 g, 14,91 mmols), 4-tBu fenileno diamina (2,69 g, 16,4 mmols) e hexafluorofosfato de (1-ciano- 2-etóxi-2-oxoetilidenamino-óxi)dimetilamino-morfolino-carbênio (7,02 g, 16,4 mmols) em diclorometano (60 ml) a 0 °C e agitada durante 20 min antes de ser deixada aquecer até a temperatura ambiente. A reação foi deixada na temperatura ambiente durante 4 h. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo dissolvido novamente em EtOAc (60 ml). A solução foi lavada com água (3 x 60 ml), depois salmoura (60 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea seca, eluindo com EtOAc a 100 % para fornecer o composto do título (3,74 g, 46 %) como um óleo marrom: MS (ESI+) para C19H29N3O3 m/z 348,5 [M + H]+; LC pureza 26 % e 44 % (UV), 18 % e 68 % (ELS), (tempo de retenção, 1,65 e 1,71 min).Estágio 2: 3-[(5-terc-butil-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]-N-metóxi-N- metilciclobutano-1-carboxamida
Figure img0205
[00663]Uma solução agitada de 3-{[(2-amino-4-terc- butilfenil)carbamoil]metil}-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida (70 %, 2,62 g, 5,28 mmols) em ácido acético (25 ml) foi aquecida em refluxo durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi particionado entre NaHCO3 (aq) sat. (25 ml) e EtOAc (25 ml), e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 25 ml), os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml), secos (MgSO4) e concentrados. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica, eluindo com NH3 2M 1 a 10 % em MeOH em DCM para fornecer o composto do título (2,02 g, 93 %) como uma goma amarela: MS (ESI+) para C19H27N3O2 m/z 330,5 [M + H]+; LC pureza 80 % (UV), 100 % (ELS), (tempo de retenção, 1,51 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 7,56 (br. s., 1 H), 7,48 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,30 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H), 3,80 - 3,90 (m, 1 H), 3,65 (s, 3 H), 3,47 - 3,57 (m, 1 H), 3,20 (s, 3 H), 2,94 - 3,13 (m, 2 H), 2,88 (dt, J = 16,1, 8,1 Hz, 1 H), 2,32 - 2,60 (m, 2 H), 2,01 - 2,17 (m, 2 H), 1,38 (s, 9 H).Estágio 3: 3-[(5-terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2- il)metil]-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida
Figure img0206
[00664]A uma solução de 3-[(5-terc-butil-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida (80 %, 2,02 g, 4,91 mmols) em N,N- dimetilformamida (40 ml) sob N2 foi adicionado carbonato de potássio (1,36 g, 9,81 mmols) e a reação foi agitada durante 1 h. Cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetila (1,31 ml, 7,36 mmols) foi lentamente adicionado, e agitação mantida durante 20 h. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em EtOAc (50 ml) e lavado com água (3 x 50 ml), depois salmoura (50 ml) antes de ser seco (MgSO4) e concentrado. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica, eluindo com EtOAc 50 a 100 % em heptano para fornecer o composto do título (1,21 g, 54 %) como uma goma incolor: MS (ESI+) para C25H41N3O3Si m/z 461,0 [M + H]+; LC pureza 97 % (UV), 100 % (ELS), (tempo de retenção, 1,98 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,58 - 7,89 (m, 1 H), 7,33 (s, 2 H), 5,39 - 5,53 (m, 2 H), 3,65 (s, 3 H), 3,49 - 3,58 (m, 2 H), 3,41 (br. s., 1 H), 3,10 - 3,23 (m, 3 H), 3,03 (s, 3 H), 2,32 - 2,63 (m, 2 H), 2,00 - 2,18 (m, 2 H), 1,32 - 1,45 (m, 9 H), 0,91 (td, J = 8,1, 4,9 Hz, 2 H), -0,13 - 0,07 (m, 9 H).Estágio 4: 3-[(5-terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida
Figure img0207
[00665]A uma solução de 3-[(5-terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3- benzodiazol-2-il)metil]-N-metóxi-N-metilciclobutano-1-carboxamida (0,61 g, 1,32 mmol) em tetra-hidrofurano (15 ml) foi adicionada, às gotas, solução de hidreto de di-isobutilalumínio 1M em tolueno (3,29 ml) sob N2 a -10 °C. A reação foi agitada nesta temperatura durante 2,5 h antes de ser interrompida pela adição de metanol (2 ml) e agitada durante 5 min. A solução foi vertida em sal de Rochelle aq. saturado (20 ml), diluída com Et2O (30 ml) e agitada durante 30 min. Esta depois foi separada e a camada orgânica foi lavada com sal de Rochelle (30 ml), NaHCO3 sat. (30 ml), e salmoura (30 ml). Esta foi seca (MgSO4) e concentrada para fornecer o composto do título (0,69 g, 130 %) como uma goma incolor que foi usada bruta na reação seguinte.Estágio 5: 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-{[({3-[(5-terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]ciclobutil}metil)(propan-2- il)amino]metil}-2,2-dimetil-hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina
Figure img0208
[00666]3-[(5-Terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-1,3-benzodiazol-2- il)metil]ciclobutano-1-carbaldeído (282,3 mg, 0,7 mmol), 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2- dimetil-6-[(propan-2-ilamino)metil]-hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (243,41 mg, 0,7 mmol) e sulfato de magnésio (127,22 mg, 1,06 mmol) foram agitados em 1,2-dicloroetano (10 ml) para 15 min. Triacetoxi- boro-hidreto de sódio (179,21 mg, 0,85 mmol) foi adicionado, e a reação agitada durante a noite. A reação foi interrompida pela adição de Na2CO3 sat. (10 ml), e a solução foi extraída com DCM (3 x 10 ml). Os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e concentrados. O material bruto foi purificado por HPLC prep dirigida por massa (método ácido). Depois de combinar as frações, uma quantidade pequena de NH3 7M em MeOH foi adicionada para basificar a solução. Depois da concentração, o resíduo foi particionado entre água (5 ml) e DCM (5 ml), e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 3 ml) e os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e concentrados para fornecer o composto do título (58,7 mg, 11 %) como uma goma incolor: MS (ESI+) para C41H63N7O3Si m/z 730,2 [M + H]+; LC pureza 95 % (UV), 100 % (ELS), (tempo de retenção, 1,65 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH 8,30 (s, 1 H), 7,75 (s, 1 H), 7,32 (s, 2 H), 7,04 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,40 - 5,50 (m, 2 H), 5,24 (br. s., 2 H), 4,89 - 5,04 (m, 2 H), 4,45 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 3,50 (s, 3 H), 2,11 - 3,09 (m, 13 H), 2,01 (s, 6 H), 1,34 - 1,49 (m, 6 H), 1,29 (s, 3 H), 0,85 - 1,02 (m, 8 H), -0,11 - 0,05 (m, 9 H).Estágio 6: (1R,2S,3R,5R)-3-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-5-{[({3- [(5-terc-butil-1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]ciclobutil}metil)(propan-2- il)amino]metil}ciclopentano-1,2-diol
Figure img0209
[00667]7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-{[({3-[(5-Terc-butil-1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}- 1H-1,3-benzodiazol-2-il)metil]ciclobutil}metil)(propan-2-il)amino]metil}-2,2-dimetil- hexa-hidrociclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (58,7 mg, 0,08 mmol) foi dissolvida em solução conc. de HCl (5 ml) e metanol (5 ml) e aquecida a 40 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi particionado entre NaHCO3 (aq) sat. (10 ml) e EtOAc (10 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 ml), os orgânicos combinados depois foram secos (MgSO4) e concentrados. O material bruto foi purificado por TLC prep, eluindo com NH3 2M 10 % em MeOH em DCM para fornecer o composto do título (24,7 mg, 55 %) como uma goma incolor: MS (ESI+) para C32H45N7O2 m/z 560,4 [M + H]+; LC pureza 100 % (UV), (tempo de retenção, 5,10 min); RMN de 1H (500 MHz, Acetona) δH 8,12 (s, 1 H), 7,30 - 7,60 (m, 2 H), 7,13 - 7,28 (m, 2 H), 6,54 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,33 (br. s., 1 H), 4,85 - 5,07 (m, 1 H), 4,36 (t, J = 6,2 Hz, 1 H), 4,08 (t, J = 5,2 Hz, 1 H), 3,01 (d, J = 7,7 Hz, 1 H), 2,93 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,78 (br. s., 2 H), 2,59 - 2,73 (m, 2 H), 2,15 - 2,56 (m, 7 H), 1,68 (dt, J = 12,4, 9,7 Hz, 1 H), 1,44 - 1,62 (m, 2 H), 1,35 (s, 9 H), 0,90 - 1,07 (m, 6 H).Composto 23: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00668]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5,6-Dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0210
[00669]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (450 mg, 0,76 mmol) e 4,5-dicloro-1,2-fenilenodiamina (161 mg, 0,910 mmol) em N,N- dimetilformamida (7,8 ml) foi tratada com N,N-Di-isopropiletilamina (0,44 ml, 2,5 mmols), às gotas, seguido por N,N,N’,N’- hexafluorofosfato de tetrametil-0-(7- azabenzotriazol-1-il}urônio (432 mg, 1,14 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente 5,5 h. A mistura de reação foi concentrada sob alto vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAC (50 ml) e H2O/NaHCO3 sat 1/1 (50 ml). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (30 ml) e a fase orgânica combinada foi lavada com porções (30 ml) de H2O e salmoura. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada a uma espuma. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2 eluindo com NH3 7N 5 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer a amida intermediária (como uma mistura de regioisômeros de amida, 520 mg).
[00670]A amida intermediária (0,52 g) em ácido acético (16 ml) foi aquecida a 65 °C durante 5,5 h, a mistura de reação foi esfriada e colocada sob alto vácuo para remover o ácido acético. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2 (70 ml) e lavado com porções (50 ml) de NaHCO3 sat e solução de Na2CO3 a 2 %. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer uma espuma. O material foi colocado em alto vácuo durante a noite e o resíduo foi purificado duas vezes por cromatografia instantânea (SÍO2, eluindo com NH3 7NH a 4 % em CH3OH/CH2CI2, 2a coluna eluindo com EtOH sat 2 a 6 % w/NH3/CH2Cl2) para fornecer o composto desejado (377 mg) RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,10 (s, 1 H), 7,63 (d, J = 1,66 Hz, 2 H), 7,21 (m, 1 H), 7,13 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 3,32 Hz, 1 H), 6,54 (d, J = 2,07 Hz, 1 H), 6,43 (dd, J = 8,40, 2,38 Hz, 1 H), 4,96(m, 2 H), 4,65 (s, 2 H), 4,51 (m, 1 H), 3,84 (d, J = 1,04 Hz, 3 H), 3,76 (s, 3 H), 2,99 (m, 0,5 H), 2,83 (m, 2 H), 2,66 (m, 0,5 H), 2,38 (m, 4 H), 2,22 (m, 1 H), 2,15 (d, J = 7,67 Hz, 3 H), 2,08 (m, 2 H), 2,00 (m, 2 H), 1,90 (m, 1 H), 1,84 (m, 1 H), 1,53 (s, 3 H), 1,46 (m, 1 H), 1,29 (s, 3 H)
[00671](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2- (5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano- 1,2-diol
Figure img0211
[00672]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5,6-Dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (377 mg, 0,513 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (7,1 ml) e água (0,8 ml) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, depois aquecida e agitação foi continuada durante 3 h na temperatura ambiente. A suspensão foi concentrada e o resíduo foi absorvido em MeOH (15 ml) e concentrado. Este procedimento foi repetido duas vezes e o resíduo colocado em alto vácuo. O material foi absorvido em MeOH (10 mL) (forneceu uma pasta fluida) e foi tratado com K2CO3 (500 mg) e água (0,2 ml). A mistura foi deixada agitar durante 1,5 h, tempo no qual o pH da solução foi ~9. A mistura foi filtrada através de uma frita fina, os sólidos foram lavados com MeOH (20 ml) e o filtrado foi concentrado para fornecer um sólido branco amarelado. O material foi deixado em alto vácuo durante a noite e purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N 10 a 12 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o produto desejado (227 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,63 (m, 2 H), 7,21 (dd, J = 3,63, 2,38 Hz, 1 H), 6,59 (d,J = 3,52 Hz, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 3,88 (m, 1 H), 3,01 (m, 0,5 H), 2,84 (m, 2 H), 2,70 (m, 0,5 H), 2,51 (m, 1 H), 2,40 (m, 2 H), 2,26 (m, 2 H), 2,17 (d, J = 7,05 Hz, 3 H), 2,11 (m, 2 H), 2,02 (m, 1 H), 1,90 (m, 3 H), 1,62 (m, 1 H), 1,49 (m, 1 H).Composto 24: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00673]N-(2-Amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4- ((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0212
[00674]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (1,2 g, 3,2 mmols) adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3] dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (1,25 g, 2,10 mmols) e N,N-di- isopropiletilamina (1,2 mL, 6,9 mmols) e 4-(trifluorometóxi)benzeno-1,2-diamina (0,48 g, 2,5 mmols) em N,N-dimetilformamida (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 95:5) para fornecer o composto desejado (2 g) como um óleo.
[00675]N-(2,4-Dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2- (5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0213
[00676]Uma solução de N-(2-amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (2 g, 2 mmols) em ácido acético (4 ml) foi agitada durante a noite a 60 °C. Os voláteis removidos a vácuo e o resíduo remanescente purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 92:8) para fornecer o composto desejado (1 g) como um sólido.(1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((metil(3-(2-(5- (trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0214
[00677]Ácido trifluoroacético (20 ml) foi adicionado a uma mistura de água (2 ml) e N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5- (trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1 g, 1 mmol) na temperatura ambiente.
[00678]A reação foi agitada durante 1,5 horas e depois interrompida com trietilsilano (0,43 ml, 2,7 mmols). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi purificado duas vezes por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 87:13) para fornecer o produto desejado (0,28 g) como uma espuma. MS (ESI+) para C27H32F3N7O3 m/z 560,2 [M + H]+; MS (ESI-) para C27H32F3N7O3 m/z 558,2 [M - H]-; HPLC pureza >93 % (tempo de retenção, 2,504 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,081 (s, 1 H), 7,551 - 7,530 (m, 1 H), 7,414 (s, 1 H), 7,230 - 7,216 (m, 1 H), 7,156 - 7,134 m, 1 H), 6,621 - 6,613 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 4,362 - 4,326 (m, 1 H), 3,952 - 3,915 (m, 1 H), 3,237 - 3,182 (m, 0,5 H (metina de isômero trans), 2,927 - 2,857 (m, 2,5 H (contém metina de isômero cis)), 2,697 - 2,646 (m, 1 H), 2,590 - 2,515 (m, 1 H), 2,479 - 2,408 (m, 1 H), 2,343 - 2,305 (m, 5 H), 2,210 - 2,174 (m, 2 H), 2,086 - 1,949 (m, 4 H), 1,721 - 1,545 (m, 2 H). Tempo de retenção: 2,52 min, Condições de 1HPLC: coluna Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18, 4,6 X 50 mm (empacotamento 1,8 μm), Solvente A: Água (TFA a 0,1 %), Solvente B: Acetoni- trila (TFA a 0,07 %) 6 min gradiente de 5 a 95 % B; 1 min de retenção; depois reciclar. Composto 25: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00679]N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0215
[00680]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,84 g, 2,2 mmols) adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanoico (0,89 g, 1,5 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,84 ml, 4,8 mmols) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,29 g, 1,8 mmol) em N,N- dimetilformamida (9 ml). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambi- ente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 94:6) para fornecer o composto desejado (0,88 g) como um sólido incolor. Tempo de retenção C: 3,363 minutos.
[00681]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0216
[00682]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanamida (0,88 g, 1,2 mmol) em ácido acético (3 mL) foi agitada durante a noite a 60 °C, os voláteis removidos a vácuo e o resíduo remanescente purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 93:7) para fornecer o composto desejado (0,85 g) como uma espuma.
[00683](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0217
[00684]Ácido trifluoroacético (20 mL) foi adicionado a uma mistura de água (2 mL) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,85 g, 1,2 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi deixada proceder durante uma hora, tempo no qual trietilsilano (0,37 mL, 2,3 mmols) foi adicionado. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (3 ml), 1 ml de K2CO3 (saturado) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi particionada entre H2O e DCM/MeOH (9:1). A camada aquosa foi extraída (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 90:10) para fornecer o produto desejado (0,150 g) como uma espuma branca amarelada. MS (ESI+) para C31H43N7O2 m/z 546,3 [M + H]+; MS (ESI-) para C31H43N7O2 m/z 544,3 [M - H]-; HPLC pureza >91 % (tempo de retenção, 2,734 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,081 (s, 1 H), 7,493 (s, 1 H), 7,414 - 7,393 (m, 1 H), 7,291 - 7,266 (m, 1 H), 7,215 - 7,202 (m, 1 H), 6,619 - 6,609 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,345 - 4,312 (m, 1 H), 3,923 - 3,885 (m, 1 H), 2,994 - 2,915 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 2,860 - 2,793 (m, 2 H), 2,701 - 2,578 (m, 3 H), 2,501 - 2,380 (m, 2 H), 2,259 - 2,234 (m, 2 H), 2,109- 2,008 (m, 3 H), 1,920 - 1,880 (m, 3 H), 1,658 - 1,499 (m, 2 H), 1,364 (s, 9 H), 1,036 - 0,991 (m, 3 H). Tempo de retenção: 2,734 minutos. Condições de HPLC: coluna Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18, 4,6 X 50 mm (empacotamento 1,8 μm), Solvente A: Água (0,1 % TFA), Solvente B: Acetonitrila (TFA a 0,07 %). 6 min gradiente de 5 a 95 % B; 1 min de retenção; depois reciclar. Composto 26: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00685]N-(2-Amino-4-bromofenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0218
[00686]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (1,20 g, 3,16 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (1,25 g, 2,10 mmols) e N,N-di- isopropiletilamina (1,21 ml, 6,95 mmols) e 4-bromobenzeno-1,2-diamina (0,472 g, 2,53 mmols) em N,N-dimetilformamida (13,0 ml). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 95:5) para fornecer o composto desejado (1,2 g) como um sólido.
[00687]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-Bromo-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0219
[00688]Uma solução de N-(2-amino-4-bromofenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)- 6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (1,2 g, 1,6 mmol) em ácido acético (4 ml, 70 mmols) foi agitada durante a noite a 60 °C, os voláteis foram removidos a vácuo e resíduo remanescente purificado diretamente por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 91:9) para fornecer (0,9 g) como uma espuma.
[00689](1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0220
[00690]Ácido trifluoroacético (20 ml) foi adicionado a uma mistura de água (2 ml) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,9 g, 1 mmol) na temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada durante uma hora, trietilsilano (0,39 ml, 2,4 mmols) foi adicionado. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi purificado duas vezes por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 87:13). O resíduo foi absorvido em MeOH/H2O (5:0,5 ml) e K2CO3 (100 mg) adicionado. A mistura foi agitada durante 1 hora, depois concentrada e purificada por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 87:13) para fornecer o produto desejado (0,15 g) como uma espuma branca amarelada/goma. (Ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol (0,15 g; 20 %) como uma espuma branca amarelada/goma. MS (ESI+) para C26H32BrN7O2 m/z 554,1 [M + H]+; MS (ESI- ) para C26H32BrN7O2 m/z 552,1 [M - H]-; HPLC pureza >90 % (tempo de retenção, 2,298 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,080 (s, 1 H), 7,652 (s, 1 H), 7,425 - 7,403 (m, 1 H), 7,342 - 7,7,312 (m, 1 H), 7,232 - 7,217 (m, 1 H), 6,620 - 6,611 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,358 - 4,318 (m, 1 H), 3,928 - 3,888 (m, 1 H), 3,099 - 3,039 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 2,898 - 2,829 (m, 2 H), 2,777 - 2,726 (m, 0,5 H (metina de isômero cis)), 2,580 - 2,529 (m, 1 H), 2,453 - 2,397 (m, 2 H), 2,307 - 2,141 (7 H), 2,068 - 2,017 (m, 1 H), 1,955 - 1,891 (m, 3 H), 1,695 - 1,506 (m, 2 H). Composto 27: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((isopropil(3-(2-(5- (1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
[00691]9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((Isopropil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0221
[00692]Uma solução de 5’-{[3-(2-carboxietil)ciclobutil](isopropil)amino}-5’- desóxi-2’,3’-0-isopropilidenoadenosina (0,463 g, 0,976 mmol) e 4-(1- metilciclobutil)benzeno-1,2-diamina (0,184 g, 1,04 mmol) em N,N-dimetilformamida (10 ml) foi esfriada a 0 °C. A solução foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,462 ml, 2,65 mmols), às gotas, seguido por Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0- (7-azabenzotriazol-1-il)urônio (0,367 g, 0,965 mmol) em uma porção. A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h e depois lentamente aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 5 h na temperatura ambiente, a mistura de reação foi armazenada no refrigerador durante a noite, a mistura de reação foi colocada sob alto vácuo. O vidro resultante foi absorvido em H2O (30 ml) e extraído com uma porção (30 ml) de MeOH a 10 %/EtOAc. A fase aquosa foi ainda extraída com uma porção (30 ml) de EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com porções (25 ml) de Na- HCO3 sat e salmoura e secas em Na2SO4. A mistura foi filtrada e concentrada para fornecer um vidro/espuma (700 mg). O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, NH3 7N entre 4 a 5 % em MeOH/CH2C12) para fornecer a amida intermediária (~80 % pureza, 390 mg).
[00693]A amida intermediária (110 mg, 0,174 mmol) foi absorvida em ácido acético (4 ml) e a solução foi aquecida a 65 °C. A mistura de reação foi esfriada e os voláteis foram removidos sob alto vácuo para fornecer um vidro. O material bruto foi absorvido em CH2Cl2 (25 ml) e lavado com NaHCO3 sat (20 ml) e solução de Na2CO3 a 2 %, seco em Na2SO4, filtrado e concentrado para fornecer um vi dro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por TLC prep (SiO2, eluindo com NH3 7N a 7 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o produto desejado como uma espuma rígida (54 mg). Este procedimento acima foi repetido (exceto a purificação que foi por cromatografia instantânea, SiO2 eluindo com NH3 7N entre 4 a 5 % em CH3OH/CH2Cl2) em um outro lote da amida intermediária (389 mg) para fornecer 368 mg do composto desejado que foi combinado com o benzimidazol acima.
[00694](2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-((isopropil(3-(2-(5-(1- metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0222
[00695]9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((Isopropil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (422 mg, 0,686 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (6,3 ml, 82 mmols) e água (0,7 ml, 40 mmols) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, nos quais o banho de gelo foi removido e a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2,5 h nas quais o resíduo foi absorvido em MeOH (12 ml), concentrado à secura. Isto foi repetido duas vezes, o vidro resultante foi colocado sob alto vácuo. O resíduo bruto foi diluído com MeOH (11 ml), tratado com K2CO3 (600 mg) e H2O (0,5 ml) e deixada agitar na temperatura ambiente até que a solução foi básica conforme de-terminado pelo papel de pH. A mistura foi filtrada e os sólidos foram lavados com MeOH (20 ml). A solução foi concentrada a um resíduo que foi colocado sob alto vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N entre (10 a 12 %) em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto desejado como uma espuma rígida/vidro (256 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,30 (m, 1 H), 8,20 (d, J = 1,04 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 7,22 (br. s., 1 H), 6,98 (dd, J = 8,50, 1,66 Hz, 1 H), 5,96 (m, 1 H), 4,74 (t, J = 4,87 Hz, 1 H), 4,27 (d. J = 3,11 Hz, 1 H), 4,08 (m, 1 H), 3,56 (m, 1 H), 3,13 (m, 1 H), 3,00 (m, 1 H), 2,90 (dd, J = 14,51, 4,35 Hz, 1 H), 2,75 (m, 3 H), 2,41 (m, 2 H), 2,12 (m, 5 H), 2,00 (m, 1 H), 1,84 (m, 3 H), 1,58 (m, 1 H), 1,46 (s, 3 H), 1,02 (m, 3 H), 0,95 (d, J = 6,63 Hz, 3 H). Composto 28: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((isopropil((1r,3S)- 3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
[00696]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco (132 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) d ppm 8,30 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 7,22 (s, 1 H), 6,99 (dd, J = 8,40, 1,55 Hz, 1 H), 5,96 (d, J = 4,56 Hz, 1 H), 4,73 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 5,29 Hz, 1 H), 4,07 (m, 1 H), 3,13 (m, 1 H), 3,00 (m, 1 H), 2,90 (dd, J = 14,41, 4,46 Hz, 1 H), 2,76 (t, J = 7,15 Hz, 2 H), 2,70 (m, 1 H), 2,42 (m, 2 H), 2,18 (m, 2 H), 2,11 (m, 3 H), 1,85 (m, 4 H), 1,57 (q, J = 8,85 Hz, 2 H), 1,47 (s, 3 H), 1,02 (d, J = 6,84 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,63 Hz, 3 H). Composto 29: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol (1-Metilciclobutil)benzene
Figure img0223
[00697]Uma mistura agitada de benzeno (5,0 ml, 56 mmols) e ácido sulfúrico (1,17 ml, 21,9 mmols) foi esfriada a 0 °C e tratada, às gotas, com uma solução de metilenociclobutano (1,00 ml, 10,8 mmols) em benzeno (3,0 ml, 34 mmols) durante - 1 h. Na conclusão da adição, a mistura de reação foi agitada um adicional de 1 h enquanto foi aquecida até a temperatura ambiente. A mistura extraída com 15 ml de hexano. A fase orgânica foi lavada com H2O (10 ml) e NaHCO3 sat (10 ml), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um líquido incolor. O líquido foi purificado por destilação kugelrohr (5 a 10 torr) para fornecer o composto desejado como um líquido incolor. A primeira fração foi coletada entre 75 a 85 °C como um líquido incolor (330 mg) de produto como um líquido incolor.1-(1-Metilciclobutil)-4-nitrobenzeno
Figure img0224
[00698]Ácido nítrico a 70 % (7:3, Ácido nítrico:Água, 0,375 ml, 5,92 mmols) foi adicionado, às gotas, durante 60 minutos a uma solução de (1- metilciclobutil)benzeno (346 mg. 2,37 mmols) em anidrido acético (1,4 mL, 15 mmols) esfriado a 0 °C. A temperatura da solução foi mantida abaixo de 5 °C durante a adição. Após a conclusão da adição, a reação foi agitada durante 60 minutos com resfriamento. A mistura de reação foi vertida em água gelada (40 ml) e o gelo foi deixado derreter. A fase aquosa foi extraída com três porções (20 ml) de Et2O e a fase orgânica combinada foi lavada com H2O (25 ml) seguido por duas porções (20 ml) de solução sat de NaHCO3. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um produto claro como um óleo (418 mg) que foi usado na etapa seguinte. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 8,16 (d. J = 8,71 Hz, 2 H), 7,29 (d, J = 8,71 Hz, 2 H), 2,41 {m, 2 H), 2,15 (m, 3 H), 1,88 (m, 1 H). 1,48 (s, 3 H).4-(1-Metilciclobutil)aniline
Figure img0225
[00699]Uma solução de 1-(1-metilciclobutil)-4-nitrobenzeno (708 mg, 3,70 mmols) em etanol (24 mL, 410 mmols) foi cuidadosamente tratada com Pd a 5 % em carbono (87 mg, 0,041 mmol). O frasco de reação foi evacuado e enchido com gás hidrogênio três vezes e a mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio durante 19 h. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de solka floc® e a almofada foi lavada com EtOH (25 mL). O solvente foi removido para fornecer um óleo que foi brevemente colocado sob alto vácuo para fornecer o composto desejado (609 mg) que foi diretamente usado na etapa seguinte. RMN de 1H (400 MHZ, CDCI3) o ppm 6,99 (m, 2 H), 6,66 (m, 2 H), 3,39 (br. s., 2 H), 2,35 (m, 2 H), 2,05 (m, 3 H), 1,82 (m, 1 H), 1,42 (s, 3 H).2,2,2-Trifluoro-N-(4-(1-metilciclobutil)-2-nitrofenil)acetamida
Figure img0226
[00700]4-(1-Metilciclobutil)anilina (500 mg, 2,79 mmols) e nitrato de amônio (220 mg, 2,8 mmols) foram tratados com anidrido trifluoroacético (1,97 mL, 14,0 mmols) seguido por clorofórmio (10 mL, 120 mmols). A mistura de reação foi deixada agitar na temperatura ambiente até 5 h, nas quais todos os sólidos foram dissolvidos. A mistura de reação foi vertida em H2O (50 ml) e extraída com três porções (25 ml) de CH2Cl2. A fase orgânica combinada foi lavada com NaHCO3 sat. (10 mL), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada a um óleo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com éter etílico entre 2,5 a 3,5 %/hex.) para fornecer o composto desejado (800 mg). 4-(1-Metilciclobutil)-2-nitroanilina
Figure img0227
[00701]Uma solução de 2,2,2-trifluoro-N-[4-(1-metilciclobutil)-2- nitrofenil]acetamida (580 mg. 1,9 mmols) em metanol (18 ml, 440 mmols) foi tratada com uma solução de carbonato de potássio (788 mg, 5,70 mmols) em água (4,5 ml, 250 mmols) e a mistura foi aquecida a 45 °C durante 50 minutos. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e o metanol foi removido a vácuo. A fase aquosa remanescente foi diluída com H2O (10 ml) e extraída com três porções (20 ml) de EtOAc. A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer um óleo. O material foi colocado em alto vácuo onde solidificou fornecendo o composto desejado (400 mg). O material foi diretamente usado na etapa seguinte. RMN de 1H (400 MHz. CDCI3) d ppm 7,90 (d, J = 2,07 Hz, 1 H), 7,23 (dd, J = 8,50, 2,28 Hz, 1 H), 6,77 (d, J = 8,71 Hz, 1 H), 5,96 (br. s., 2 H), 2,33 (m, 2 H), 2,13 (m, 1 H), 2,04 (m, 2 H), 1,84 (m, 1 H), 1,43 (s, 3 H).4-(1-Metilciclobutil)benzeno-1,2-diamina
Figure img0228
[00702]Uma solução de 4-(1-metilciclobutil)-2-nitroanilina (138 mg. 0,668 mmol) em etanol (8,5 mL, 140 mmols) foi cuidadosamente tratada com paládio a 10 % em carbono (14,2 mg, 0,0134 mmol) como uma pasta fluida em etanol. O frasco de reação foi evacuado e enchido, três vezes, com gás hidrogênio e a mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio durante 4 h. A mistura de reação foi filtrada através de um almofada de solka floc® e a almofada foi lavada com MeOH (20 ml). O filtrado foi concentrado para fornecer um óleo que foi colocado sob alto vácuo fornecendo o composto desejado como um sólido (119 mg) que foi diretamente usado na etapa seguinte. RMN de 1H (400 MHZ. CDCl3) δH ppm 6,66 (m, 1 H), 6,53 (m, 2 H), 3,34 (br. s., 4 H), 2,33 (m, 2 H), 2,08 (m, 1 H), 1,99 (m, 2 H). 1,80 (m, 1 H), 1,42 (s, 3 H).N-(2,4-Dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(1- metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0229
[00703]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (387 mg, 0,652 mmol) e [8]4-(1-metilciclobutil)benzeno-1,2-diamina (120 mg, 0,68 mmol) em N,N- dimetilformamida (6,7 ml, 87 mmols) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,38 ml, 2,2 mmols), às gotas, seguido por hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (372 mg, 0,978 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2,5 h, a mistura de reação depois foi concentrada sob alto vácuo. O resíduo foi particionado entre EtOAc (40 ml) (algum CH2Cl2 foi adicionado para auxiliar na solubilização do produto) e H2O/NaHCO3 sat 1/1 (40 ml). A fase aquosa foi extraída com EA/CH2Cl2 1/1 (30 ml) e a fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N entre 5 a 6 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o intermediário desejado como uma mistura de regioisômeros de amida.
[00704]O intermediário foi absorvido em ácido acético (5,4 ml, 95 mmols) e a solução foi aquecida a 65 °C durante 3 horas. O ácido acético foi removido sob alto vácuo com o auxílio de um banho de água quente. O material bruto foi absorvido em CH2Cl2 (30 ml) e a fase orgânica foi lavada com porções (10 ml) de NaHCO3 sat e soluções de K2CO3 a 2 %, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada a um vidro que produziu uma espuma sob alto vácuo. O material bruto foi purificado por cromato- grafia instantânea (SiO2 eluindo com NH3 7N a 5 % em CH3OH/CH2Cl2 para fornecer o produto desejado (140 mg).(1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((metil(3-(2-(5-(1- metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0230
[00705]N-(2,4-Dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2- (5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (128 mg, 0,174 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (3,60 ml, 46,7 mmols) e água (0,4 ml, 20 mmols) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, depois o banho de gelo foi removido e a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente em que esta temperatura foi mantida durante 2,5 horas adicionais. A mistura de reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi absorvido em MeOH (3 ml) e concentrado e o processo foi repetido duas vezes. O resíduo branco resultante foi colocado em alto vácuo. O resíduo bruto foi combinado com um outro lote de material bruto (identicamente preparado, ~ 1/3 da quantidade usada nesta reação), diluído com MeOH (5 mL), tratado com K2CO3 (140 mg), 10 gotas de H2O e deixado agitar na temperatura ambiente até que a solução foi básica pelo papel de pH. A mistura foi filtrada e os sólidos foram lavados com MeOH (15 ml). A solução foi concentrada a um óleo que foi colocado em alto vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N entre 10 a 15 % em CH3OH/CH2Cl2 para fornecer o produto desejado como vidro/espuma rígida (68 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8 06 (s, 1 H), 7,39 (d, J = 7,88 Hz, 1 H), 7,23 (s, 1 H), 7,21 (dd, J = 3,63, 1,76 Hz, 1 H), 6,99 (m, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,93 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 3,89 (m, 1 H), 3,03 (m, 1 H), 2,83 (m, 2 H), 2,70 (q, J = 8,15 Hz, 1 H), 2,52 (m, 1 H), 2,40 (m, 4 H), 2,27 (m, 2 H), 2,18 (d, J = 6,22 Hz, 3 H), 2,11 (m, 4 H), 2,03 (m, 1 H), 1,86 (m, 4 H), 1,62 (m, 1 H), 1,51 (m, 1 H), 1,47 (s, 3 H). Composto 30: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1r,3S)-3-(2- (5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
Figure img0231
[00706]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco (67 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,27 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,22 (br. s., 1 H), 6,99 (dd, J = 8,40, 1,55 Hz, 1 H), 5,97 (d, J = 4,15 Hz, 1 H), 4,69 (dd, J = 5,18, 4,15 Hz, 1 H), 4,22 (t, J = 5,60 Hz, 1 H), 4,16 (m, 1 H), 2,77 (m, 2 H), 2,72 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 2,67 (m, 2 H), 2,42 (m, 2 H), 2,21 (m, 2 H), 2,15 (s, 3 H), 2,10 (m, 3 H), 1,85 (m, 4 H), 1,47 (s, 3 H), 1,46 (m, 2 H). Composto 31: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((isopropil((1s,3R)- 3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
Figure img0232
[00707]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi encontrado ser o diastereômero trans por RMN. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco. (63 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,31 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,22 (s, 1 H), 6,99 (dd, J = 8,29, 1,66 Hz, 1 H), 5,97 (d, J = 4,56 Hz, 1 H), 4,74 (m, 1 H), 4,27 (t, J = 5,39 Hz, 1 H), 4,09 (m, 1 H), 3,53 (m, 1 H), 3,01 (m, 1 H), 2,93 (dd, J = 14,72, 4,35 Hz, 1 H),2,80 (t, J = 7,46 Hz, 2 H), 2,73 (dd, J = 1 4,51, 7,46 Hz, 1 H), 2,42 (m, 2 H), 2,13 (m, 5 H), 2,01 (m, 3 H), 1,82 (m, 3 H), 1,47 (s, 3 H), 1,02 (d, J = 6,63 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,63 Hz, 3 H).Composto 32: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0233
[00708]Os diastereosisômeros foram separados por SFC. (condições lista- das abaixo) forneceu 120 mg. Método Preparativo: IC (2 x 15 cm), isopropanol a 35 % (DEA a 0,2 %)/CO2, 100 bar, 60 mL/min, 220 nm., vol. inj: 0,75 mL, Pico 1 metanol (4 mg/mL): 5,27 minutos. RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,080 (s, 1 H), 7,495 (s, 1 H), 7,417 - 7,395 (m, 1 H), 7,303 - 7,281 (m, 1 H), 7,220 - 7,212 (m, 1 H), 6,619 - 6,610 (m, 1 H), 4,349 - 4,315 (m, 1 H), 2,837 - 2,802 (m, 2 H), 2,718 - 2,641 (m, 1 H), 2,508 - 2,365 (m, 3 H), 2,284 - 2,258 (m, 3 H), 2,156 (s, 3 H), 1,954 - 1,906 (m, 1 H), 1,549 - 1,460 (m, 2 H), 1,375 (s, 9 H).Composto 33: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil(3-(2-(5-(1- metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0234
9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-Dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d] imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina
Figure img0235
[00709]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (0,461 g, 1,03 mmol) e 4-(1- metilciclobutil)benzeno-1,2-diamina (0,150 g, 0,851 mmol) em N,N-dimetilformamida (11 ml, 140 mmols) foi esfriada a 0 °C. A solução foi tratada com N,N-di- isopropiletilamina (0,489 ml, 2,81 mmols), às gotas, seguido por hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)urônio (0,388 g, 1,02 mmol) em uma porção. A mistura foi agitada a 0 °C durante 30 minutos e depois lentamente aquecida até a temperatura ambiente, agitação foi continuada na temperatura ambiente durante 6 h. A mistura de reação foi diluída com H2O (30 ml) e extraída com porções (25 ml) de MeOH a 10 %/EtOAc. A fase aquosa foi ainda extraída com duas porções (20 ml) de EtOAc. A fases orgânicas combinadas foram lavadas com porções (25 ml) de NaHCO3 sat., salmoura e secas em Na2SO4. A solução foi filtrada e concentrada para fornecer um vidro. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N a 5 % em MeOH/CH2Cl2.
[00710]A amida intermediária foi absorvida em ácido acético (7,0 ml, 120 mmols) e a solução foi aquecida a 65 °C durante 2,5 h, a mistura de reação foi esfriada e o ácido acético foi removido sob alto vácuo para fornecer um vidro. O material bruto foi absorvido em CH2Cl2 (25 ml) e lavado com NaHCO3 sat (20 ml), solução de Na2CO3 a 2 %, seco em Na2SO4, filtrado e concentrado a vácuo para fornecer um vidro/espuma rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N 5 a 7 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto desejado (214 mg).(2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-((metil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0236
[00711]9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-Dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(1-metilciclobutil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)-9H-purin-6-amina (188 mg, 0,320 mmol) foi dissolvida em uma mistura de ácido trifluoroacético (4,00 ml, 51,9 mmols) e água (0,4 ml, 20 mmols) que tinha sido pré esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C. A reação foi agitada durante 30 minutos a 0 °C, depois o banho de gelo foi removido e a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente onde agitação foi continuada durante 2 h adicionais. A mistura de reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi absorvido em MeOH (10 mL) e concentrado e o processo foi repetido duas vezes. O vidro resultante foi colocado sob alto vácuo durante 1 h. O resíduo bruto foi diluído com MeOH (7 ml), tratado com K2CO3 (150 mg) e 10 gotas de H2O e deixado agitar na temperatura ambiente até que a solução foi básica pelo papel de pH. A mistura foi filtrada e os sólidos foram lavados com MeOH (10 ml). A solução foi concentrada a um resíduo que foi colocado sob alto vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com NH3 7N entre 10 a 15 % em CH3OH/CH2Cl2) para fornecer o composto desejado como um vidro/espuma rígida (66 %). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,28 (m, 1 H), 8,20 (m, 1 H), 7,38 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,23 (s, 1 H), 7,00 (dd, J = 8,40, 1,55 Hz, 1 H), 5,98 (t, J = 3,21 Hz, 1 H), 4,70 (m, 1 H), 4,24 (q, J = 5,18 Hz, 1 H), 4,17 (m, 1 H), 3,10 (m, 0,4 H), 2,80 (m, 3 H), 2,71 (d, J = 5,60 Hz, 2 H), 2,43 (m, 2 H), 2,23 (dd, J = 11,71, 6,12 Hz, 1 H), 2,19 (m, 3 H), 2,12 (m, 4 H), 1,99 (m, 1 H), 1,85 (m, 4 H), 1,48 (s, 3 H), 1,48 (m, 1 H).Composto 34: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1s,3R)-3- (2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
Figure img0237
[00712]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco (30 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,28 (s, 1 H), 8,19 (s, J = 4,15 Hz, 1 H), 4,69 (m, 1 H), 4,23 (t, J = 5,49 Hz, 1 H), 4,17 (m, 1 H), 3,07 (m, 1 H), 2,81 (t, J = 7,57 Hz, 2 H), 2,68 (m, 2 H), 2,42 (m, 2 H), 2,17 (s, 3 H), 2,09 (m, 6 H), 1,97 (m, 2 H), 1,84 (m, 3 H), 1,47 (s, 3 H).35: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1s,3R)-3- (2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0238
Os diastereoisômeros foram separados por SFC. A separação seguinte por SFC (120 mg).
[00713]Método Preparativo: IC (2 x 15 cm), isopropanol a 35 % (DEA a 0,2 %))/CO2, 100 bar, 60 mL/min, 220 nm., vol. de inj.: 0,75 mL, 4 mg/mL de metanol. Pico 2: 6,24 minutos. RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,078 (s, 1 H), 7,501 (s, 1 H), 7,422 - 7,401 (m, 1 H), 7,310 - 7,285 (m, 1 H), 7,228 - 7,219 (m, 1 H), 6,618 - 6,609 (m, 1 H), 4,355 - 4,320 (m, 1 H), 3,053 - 2,977 (m, 1 H), 2,874 - 2,836 (m, 2 H), 2,535 - 2,268 (m, 4 H), 2,177 - 2,003 (m, 8 H), 1,909 - 1,869 (m, 2 H), 1,677 - 1,595 (m, 1 H), 1,381 (s, 9 H).Composto 36: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil((1r,3S)-3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0239
[00714]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um sólido branco (15 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 7,23 (br. s., 1 H), 7,20 (d, J = 3,32 Hz, 1 H), 6,99 (m, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,95 (m, 1 H), 4,31 (t, J = 6,74 Hz, 1 H), 3,88 (m, 1 H), 2,81 (m, 2 H), 2,66 (m, 1 H), 2,40 (m, 5 H), 2,25 (m, 3 H), 2,14 (br. s., 3 H), 2,11 (m, 3 H), 1,91 (m, 2 H), 1,83 (m, 1 H), 1,61 (m, 1 H), 1,51 (m, 1 H), 1,47 (s, 3 H).Composto 37: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil((1r,3S)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil) ciclopentano-1,2-diol
Figure img0240
[00715]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. A liofilização forneceu o produto desejado como um sólido incolor (0,060 g). RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,079 (s, 1 H), 7,546 - 7,524 (m, 1 H), 7,409 (s, 1 H), 7,226 - 7,217 (m, 1 H), 7,150 - 7,124 (m, 1 H), 6,619 - 6,610 (m, 1 H), 4,355 - 4,320 (m, 1 H), 3,912 - 3,885 (m, 1 H), 2,881 - 2,845 (m, 2 H), 2,727 - 2,674 (m, 1 H), 2,538 - 2,262 (m, 6 H), 2,172 (s, 3 H), 1,955 - 1,916 (m, 3 H), 1,670 - 1,492 (m, 3 H). Composto 38: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0241
[00716]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. Depois da liofil- ização, o produto desejado foi recuperado como um sólido incolor (32 mg).
[00717]Método Preparativo: Lux-3 (2 x 15 cm), etanol a 30 % (DEA a 0,2 %))/CO2, 100 bar, 65 mL/min, 220 nm., vol. de inj.: 0,4 mL, 6,2 mg/mL metanol. RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,082 (s, 1 H), 7,493 (s, 1 H), 7,415 - 7,393 (m, 1 H), 7,295 - 7,270 (m, 1 H), 7,215 - 7,206 (m, 1 H), 6,621 - 6,612 (m, 1 H), 4,343 - 4,309 (m, 1 H), 3,924 - 3,897 (m, 1 H), 3,044 - 2,962 (m, 1 H), 2,834 - 2,798 (m, 2 H), 2,728 - 2,695 (m, 1 H), 2,660 - 2,607 (m, 2 H), 2,543 - 2,380 (m, 2 H), 2,281 - 2,257 (m, 3 H), 1,932 - 1,906 (m, 3 H), 1,660 - 1,523 (m, 3 H), 1,368 (s, 9 H), 1,050 - 1,014 (t, J = 7,2 Hz, 3 H).Composto 39: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil((1s,3R)-3-(2-(5-(1-metilciclobutil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0242
[00718]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi ab- sorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco (19 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8 06 (s, 1 H), 7,39 (d. J = 8,50 Hz, 1 H), 7,21 (m, 2 H), 6,99 (dd, J = 8,29, 1,45 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,94 (m, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,77, 5,91 Hz, 1 H), 3,89 (m,1 H), 3,00 (m, 1 H), 2,83 (t, J = 7,57 Hz, 2 H), 2,49 (m, 1 H), 2,38 (m, 4 H), 2,23 (m, 1 H), 2,16 (s. 3 H), 2,11 (m, 5 H), 2 01 (m, 2 H), 1,84 (m. 3 H), 1,61 (m, 1 H), 1,46 (s, 3 H). Composto 40: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0243
[00719]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó branco (45 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,27 (m, 1 H), 7,20 (d, J = 3,73 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,36, 6,12 Hz, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 3,06 (m, 1 H), 2,81 (t, J = 6,84 Hz, 2 H), 2,74 (m, 1 H), 2,55 (dd, J = 12,75, 7,77 Hz, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,37 (d, J = 6,84 Hz, 2 H), 2,29 (m, 3 H), 1,91 (m, 3 H), 1,60 (m, 1 H), 1,50 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H), 0,87 (m, 1 H), 0,48 (d, J = 8,09 Hz, 2 H), 0,10 (m, 2 H).Composto 41: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00720]Os diastereoisômeros foram separados por SFC, seguido por liofil- ização a partir de H2O/MeOH/CH3CN para fornecer um pó branco (100 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (m, 1 H), 7,27 (m, 1 H), 7,20 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (m, 1 H), 4,32 (t, J = 6,43 Hz, 1 H), 3,93 (t, J = 5,29 Hz, 1 H), 3,54 (m, 0,2 H), 3,1 1 (t, J = 9,33 Hz, 1 H), 3,02 (m, 1 H), 2,82 (m, 2 H), 2,66 (dd, J = 13,68, 8,09 Hz, 1 H), 2,46 (m, 1 H), 2,36 (m, 1 H), 2,23 (m, 3 H), 2,05 (m, 1 H), 1,91 (m, 3 H), 1,59 (m, 3 H), 1,36 (s, 9 H), 1,02 (m, 6 H). Composto 42: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol Etapa 1: 3-((1S,3r)-3-((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0244
[00721]O 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de amina etila (1,8 g, 3,0 mmols) foi absorvido em metanol (20 mL, 600 mmols) e cianoboro-hidreto de sódio (0,37 g, 5,9 mmol) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em metanol, depois ciclobutanocarboxaldeído (0,32 g, 3,8 mmols) foi adicionado em uma porção. A reação foi deixada proceder durante 5 horas, tempo no qual HPLC indicou que a reação foi estagnada. Outro 1,3 equivalente de ciclobutanocar- boxaldeído foi adicionado e a reação continuou durante a noite. NaHCO3 (saturado) foi adicionado à mistura de reação que depois foi extraída 3 vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados a uma resina amarela. Isômeros cis e trans foram separáveis em sílica. Purificação por FC (DCM/7N NH3 em MeOH 96:4) produziu 2 lotes separados do produto, cada um enriquecido em um isômero respectivo a cerca de 90 %. Isômero do topo: 0,38 g (mistura 11:1, cis) isômero do fundo: 0,31 g (mistura 6:1, trans). MS (ESI+) para C35H49N5O6 m/z 676,7 [M + H]+; HPLC pureza > 69 % (tempo de retenção, 3,791). Etapa 2: N-(2-amino-5-(terc-butil)fenil)-3-((1S,3r)-3-((ciclobutilmetil) (((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0245
[00722]Isômero de Topo (cis): Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,236 g, 5,62 mmols) foi adicionado a uma solução de 3-((1S,3r)-3- ((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (6 mL, 70 mmols) e metanol (1,5 mL, 37 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido e foi transformado no ácido. A reação foi acidificada com HCl 1 N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e a água remanescente foi removida por destilação azeotrópica com etanol seguido por 72 horas no liofilizador. O sólido branco amarelado resultante foi usado sem purificação adicional. Tempo de retenção: 3,330 minutos MS (ESI+) para C36H49N5O6 m/z 648,4 [M + H]+; MS (ESI-) para C36H49N5O6 m/z 646,4 [M - H]-; HPLC pureza > 97 % (tempo de retenção, 3,329).
[00723]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,334 g, 0,880 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 3-{cis-3- [(ciclobutilmetil){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-7H-pirrolo[2,3-d] pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il]metil}amino]ciclobutil} propanoico (0,38 g, 0,59 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,337 mL, 1,94 mmol) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,116 g, 0,704 mmol) em N,N-dimetilformamida (3,63 mL, 46,9 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido. A reação foi parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc 3 vezes e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados. O resíduo resultante foi purificado por FC (DCM/7N NH3 em MeOH 95:5) para fornecer N-(2-amino-5-(terc- butil)fenil)-3-((1S,3r)-3-((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,30 g; 64 %) como um sólido amorfo roxo-marrom. HPLC pureza >19 % (tempo de retenção, 3,574 min.) Etapa 3: 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0246
[00724]Uma solução de N-(2-amino-4-terc-butilfenil)-3-{cis-3- [(ciclobutilmetil){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il]metil}amino]ciclobutil}propanamida (0,3 g, 0,4 mmol) em ácido acético (1,0 mL, 20 mmols) foi agitada durante a noite a 65 °C e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido. Os voláteis foram removidos a vácuo e os resíduos resultantes purificados por FC (DCM/7N NH3 em MeOH 93:7) para fornecer 7- ((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina como um sólido branco amarelado. MS (ESI+) para C46H61N7O4 m/z 777,7 [M + H]+; HPLC pureza >64 % (tempo de retenção, 3,690 min.).Etapa 4: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0247
[00725]Ácido trifluoroacético (5 mL, 60 mmols) foi adicionado a uma mistura de água (0,5 mL, 20 mmols) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (0,2 g, 0,2 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi deixada proceder durante a noite, tempo no qual a suspensão rosa brilhante foi interrompido com trietilsilano (0,082 mL, 0,52 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em metanol (15 ml). 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de H2O foram adicionados e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro lavada com 10 ml de metanol. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi purificado por FC (DCM/7N NH3 em MeOH 90:10) para fornecer (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol (0,037 g; 20 %) como um sólido incolor. MS (ESI+) para C34H47N7O2 m/z 586,3 [M + H]+; HPLC pureza >89 % (tempo de retenção, 2,970 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,083 (s, 1 H), 7,498 (s, 1 H), 7,417 - 7,396 (m, 1 H), 7,302 - 7,277 (m, 1 H), 7,206 - 7,197 (m, 1 H), 6,621 - 6,612 (m, 1 H), 4,347 - 4,314 (m, 1 H), 3,912 - 3,885 (m, 1 H), 2,973 - 2,922 (m, 1 H), 2,836 - 2,800 (m, 2 H), 2,662 - 2,366 (m, 6 H), 2,282 - 2,241 (m, 3 H), 2,061 - 2,034 (m, 2 H), 1,912 - 1,494 (m, 10 H), 1,374 (s, 9 H).Composto 43: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0248
[00726]3-(3-(ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0249
[00727]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,84 g, 1,4 mmol) foi absorvido em metanol (10 ml) e cianoboro-hidreto de sódio (0,087g, 1,4 mmol) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em MeOH, depois ciclobutanona (0,15 ml, 2,1 mmols) adicionada em uma porção. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 3 dias. NaHCO3 (sat.) foi adicionado à mistura de reação que depois foi extraída (3x) com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O material foi usado sem purificação adicional.
[00728]ácido 3-(3-(ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0250
[00729]Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,58 g, 14 mmols) adicionado a uma solução de 3-(3-(ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,91 g, 1,4 mmol) em Tetra-hidrofurano (12 ml, 150 mmols) e Metanol (3 ml, 60 mmols). A mistura de reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, em seguida, foi acidificada com HCI 1 N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e a água remanescente removida por destilação azeotrópica com etanol seguido por 18 horas em liofilizador. O sólido branco amarelado resultante foi usado sem purificação adicional.
[00730]N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-(ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4- ((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0251
[00731]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,783 g, 2,06 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- (ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoico (0,87 g, 1,4 mmol) e N,N-Di-isopropiletilamina (0,789 ml, 4,53 mmols) e [8)4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,270 g, 1,65 mmol) em N,N-Dimetilformamida (8,50 ml). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, em seguida, a mistura foi parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/7NNH3 em MeOH 95:5) para fornecer o composto desejado (0. 76 g) como um sólido.
[00732]7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0252
[00733]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- (ciclobutil(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,76 g, 0,97 mmol) em Ácido acético (2 ml) foi agitada durante a noite a 60 °C. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo remanescente purificado diretamente por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 91:9) para fornecer o composto desejado (0,61 g) como uma espuma.(1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5-(terc- butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0253
[00734]Ácido trifluoroacético (10 ml, 200 mmols) foi adicionado a uma mistura de Água (1 ml, 80 mmols) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,61 g, 0,80 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e foi interrompida pela adição de Trietilsilano (0,26 ml, 1,6 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml), 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de água foram adicionados e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro foi lavada com MeOH (10 ml). The filtrado foi concentrado e o resíduo resultante purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 90:10) para fornecer o produto desejado (0,13 g) como uma espuma incolor. MS (ESI+) para C33H45N7O2 m/z 572,2 [M + H]+; MS (ESI-) para C33H45N7O2 m/z 570,2 [M - H]-; HPLC pureza >90 % (tempo de retenção, 2,850 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,083 (s, 1 H), 7,492 (s, 1 H), 7,412 - 7,392 (m, 1 H), 7,309 - 7,286 (m, 1 H), 7,220 - 7,205 (m, 1 H), 6,620 - 6,610 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,321 - 4,283 (m, 1 H), 3,888 - 3,848 (m, 1 H), 3,505 - 3,417 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 3,231 - 3,147 (m, 0,5 H) (metina de isômero cis)), 3,051 - 2,953 (m, 1 H), 2,871 - 2,732 (m, 3 H), 2,583 - 2,501 (m, 1 H), 2,441 - 2,368 (m, 1 H), 2,244 - 2,205 (m, 3 H), 2,170 - 1,833 (m, 9 H), 1,695 - 1,560 (m, 4 H), 1,384 (s, 9 H). Composto 44: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- (((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00735]3-(3-((Ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0254
[00736]O amina 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,90 g, 1,5 mmol) foi absorvido em Metanol (10 mL) e Cianoboro-hidreto de sódio (0,093 g, 1,5 mmol) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em MeOH. A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. NaHCO3 (sat.) foi adicionado à mistura de rxn que depois foi extraída (3x) com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O material foi usado sem purificação adicional.
[00737]Ácido 3-(3-((ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0255
[00738]Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,62 g, 15 mmols) foi adicionado a uma solução de 3-(3-((ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,98 g, 1,5 mmol) em Tetra-hidrofurano (13 ml) e Metanol (3 ml). A reação foi agitada durante 24 horas na temperatura ambiente, acidificada com HCl 1 N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e água remanescente removida por destilação azeotrópica com etanol seguido por 18 horas em liofilizador. O sólido branco amarelado resultante foi usado sem purificação adicional.
[00739]N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0256
[00740]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,846 g, 2,22 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoico (0,94 g, 1,5 mmol) e N,N-Di-isopropiletilamina (0,852 mL, 4,89 mmols) e [8]4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,292 g, 1,78 mmol) em N,N-Dimetilformamida (9,19 mL, 119 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 95:5) para fornecer o composto desejado (0,92 g) como um sólido.7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0257
[00741]N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((ciclopropilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanamida (1,1 g, 1,4 mmol) em Ácido acético (5 ml) foi aquecida a 60 °C durante a noite. A solução foi concentrada e purificada por croma- tografia instantânea (DCM/NH3 7 N íon MeOH 93:7) para fornecer o composto desejado (0,57 g) como uma espuma incolor.(1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0258
[00742]Ácido trifluoroacético (10 mL) foi adicionado a uma mistura de Água (1 mL) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,52 g, 0,68 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e Trietilsilano (0,22 mL, 1,4 mmol) foi adicionado. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml), 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de H2O foram adicionados e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro lavada com 10 ml de MeOH. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante purificado por cromatografia instantânea (DCM I NH3 7 N em MeOH 90:1 0) para fornecer o produto desejado (0,196 g) como uma espuma branca amarelada. MS (ESI+) para C33H45N7O2 m/z 572,6 [M + H]+; MS (ESI-) para C33H45N7O2 m/z 570,3 [M - H]-; HPLC pureza >90 % (tempo de retenção, 2,850 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 7,944 (s, 1 H), 7,361 (s, 1 H), 7,280 - 7,259 (m, 1 H), 7,172 - 7,150 (m, 1 H), 7,092 - 7,078 (m, 1 H), 6,484 - 6,475 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,222 - 4,185 (m, 1 H), 3,815 - 3,779 (m, 1 H), 3,329 (m, 0,5 H (metina de isômero trans)), 2,961 (m, 0,5 H (metina de isômero cis), 2,745 - 2,627 (m, 3 H), 2,503 - 2,450 (m, 1 H), 2,301 - 2,187 (m, 5 H), 2,036 - 1,890 (m, 2 H), 1,793 - 1,776 (m, 3 H), 1,529 - 1,385 (m, 2 H), 1,246 (s, 9 H), 0,808 - 0,739 (m, 1 H), 0,394 - 0,362 (m, 2 H), 0,012 - 0,013 (m, 2 H). Tempo de retenção: 2,850 minutos. HPLC Condições: coluna Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18, 4,6 X 50 mm (empacotamento 1,8 urn), Solvente A- Água (TFA a 0,1 %),Solvente B- Acetonitrila (TFA a 0,07 %) 6 min gradiente a partir de 5 a 95 % de B; 1 min de manutenção; depois reciclar. Composto 45: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
[00743]O amina 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,7 g, 2,8 mmols) foi absorvido em Metanol (20 ml) e Cianoboro-hidreto de sódio (0,35 g, 5,6 mmols) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em MeOH, depois isobutiraldeído (0,33 ml, 3,6 mmols) foi adicionado em uma porção. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 3 horas. 1,3 eq. de isobutir- aldeído foi adicionado e a agitação foi continuada durante a noite. NaHCO3 (sat.) foi adicionado à mistura de reação que depois foi extraída (3x) com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 97:3) para fornecer o composto desejado (1,75 g) como uma espuma incolor. ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0259
[00744]Hidróxido de lítio mono-hidratado (1,11 g, 26,4 mmols) foi adicionado a uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,75 g, 2,64 mmols) em Tetra- hidrofurano (13 ml, 160 mmols) e Metanol (3 ml, 70 mmols). A reação foi agitada durante 24 horas na temperatura ambiente, acidificada com HCI 1 N ao pH = 6, os voláteis removidos a vácuo e água remanescente removida por destilação azeotró- pica com etanol seguido por 18 horas em liofilizador. O sólido branco amarelado resultante foi usado sem purificação adicional.N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0260
[00745]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (1,52 g, 4,01 mmols) adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d] [1,3]dioxol-4- il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanoico (1,7 g, 2,7 mmols) e N,N-Di- isopropiletilamina (1,54 ml, 8,82 mmols) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,527 g, 3,21 mmols) em N,N-Dimetilformamida (16,6 ml). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) adicionado. Em seguida, a mistura foi extraída com EtOAc 3x e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados, concentrados e purificados por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 95:5) para fornecer a amida desejada (1,71 g) como um sólido. 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0261
[00746]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isobutil)amino)ciclobutil)propanamida (1,71 g, 2,19 mmols) em Ácido acético (6 ml) foi agitada durante a noite a 60 °C, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo remanescente foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, DCM I NH3 7 N em MeOH 94:6) para fornecer o composto desejado (0,9 g) como uma espuma. (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(((3-(2-(5-(terc- butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol
Figure img0262
[00747]Ácido trifluoroacético (20 ml, 300 mmols) foi adicionado a uma mistura de Água (2 ml, 100 mmols) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,9 g, 1 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite e Trie- tilsilano (0,38 ml, 2,4 mmols) foi adicionado. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml), 500 mg de K2CO3 e 8 gotas H2O foram adicionados e a reação agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro lavada com 10 ml de MeOH. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 90:10) para fornecer o produto desejado (0,274 g) como uma espuma branca amarelada. MS (ESI+) para C33H47N7O2 m/z 574,6 [M + H]+; MS (ESI-) para C33H45N7O2 m/z 572,4 [M - H]-; HPLC pureza >86 % (tempo de retenção, 2,918 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,078 (s, 1 H), 7,497 (s, 1 H), 7,416 - 7,396 (m, 1 H), 7,305 - 7,284 (m, 1 H), 7,216 - 7,200 (m, 1 H), 6,621 - 6,612 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,368 - 4,334 (m, 1 H), 3,930 - 3,894 (m, 1 H), 2,934 - 2,918 (m, 1 H), 2,866 - 2,797 (m, 2 H), 2,652 - 2,583 (m, 1 H), 2,444 - 2,361 (m, 2 H), 2,287 - 2,199 (m, 2 H), 2,166 - 2,119 (m, 3,5 H (contém metina de isômero trans)), 2,048 - 2,012 (m, 1 H), 1,921 - 1,748 (m, 3,5 H (contém metina de isômero cis)), 1,622 - 1,494 (m, 2 H), 1,380 (s, 9 H), 1,269 - 1,252 (m, 1 H), 0,932 - 0,879 (m, 6 H). Composto 46: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00748]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó branco (23,7 mg). RMN de 1H (400 MHZ, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (d. J = 8,71 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 8,60, 1,76 Hz, 1 H), 7,19 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (d. J = 3,52 Hz, 1 H), 4,84 (m, 1 H), 4,28 (dd, J = 7,26, 6,22 Hz, 1 H), 3,84 (t, J = 5,70 Hz, 1 H), 3,16 (m, 1 H), 2,99 (m,1 H), 2,80 (t, J = 7,15 Hz, 2 H), 2,73 (dd, J = 13,68, 6,22 Hz, 1 H), 2,49 (dd, J = 13,68, 7,67 Hz, 1 H), 2,38 (m, 1 H), 2,22 (m, 3 H), 2,00 (m, 4 H), 1,91 (m, 3 H), 1,60 (m, 5 H), 1,36 (s, 9 H).Composto 47: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00749]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó branco (21 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s. 1 H), 7,63 (br. s., 1 H), 7,39 (m, 1 H), 7,30 (dd, J = 8,50, 1,66 Hz, 1 H), 7,20 (d. J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,67, 6,01 Hz, 1 H). 3,88(m, 1 H), 2,82 (t, J = 7,15 Hz, 2 H), 2,71 (m, 1 H), 2,52 (m, 1 H), 2,41 (m, 2 H), 2,25 (m, 2 H), 2,18 (s, 3 H), 2,03 (m, 1 H), 1,92 (m, 3 H), 1,62 (m, 1 H), 1,51 (m, 2 H).Composto 48: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00750]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. Depois da liofil- ização (78 mg) obtida de um sólido incolor.Composto 49: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00751]Os diastereoisômeros foram separados por SFC.
[00752]Lux-3 (2 x 15 cm), etanol a 30 % (DEA a 0,2 %))/CO2, 100 bar, 65 mL/min, 220 nm. Vol. de inj.: 0,4 mL, 6,2 mg/mL metanol. RMN de 1H (400 MHz, d4- MeOH) δH 8,081 (s, 1 H), 7,499 (s, 1 H), 7,416 - 7,395 (m, 1 H), 7,308 - 7,282 (m, 1 H), 7,226 - 7,216 (m, 1 H), 6,619 - 6,610 (m, 1 H), 4,344 - 4,310 (m, 1 H), 3,922 - 3,895 (m, 1 H), 3,410 - 3,329 (m, 1 H), 2,875 - 2,837 (m, 2 H), 2,738 - 2,689 (m, 1 H), 2,659 - 2,607 (m, 2 H), 2,535 - 2,483 (m, 1 H), 2,452 - 2,380 (m, 1 H), 2,311 - 2,224 (m, 1 H), 2,158 - 2,121 (m, 3 H), 2,061 - 2,030 (m, 2 H), 1,913 - 1,863 (m, 2 H), 1,674 - 1,590 (m, 1 H), 1,381 (s, 9 H), 1,056 - 1,020 (t, J = 7,2 Hz, 3 H). Composto 50: (1R,2S,3R,5R)-3-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-(((3-(2-(5-(terc- butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano-1,2- diol 3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,3-di- hidroxiciclopentil)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0263
[00753]O amina 3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H- purin-9-il)-2,3-di-hidroxiciclopentil)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (1,5 g, 2,5 mmols) foi absorvido em Acetonitrila (66 mL) e Iodeto de isopropila (2,5 mL, 25 mmols) e Trietilamina (5,2 mL, 37 mmols) foram adicionados. A reação foi aquecida a 80 °C durante 12 horas. Mais TEA 15 eq. e iPrI15 eq foram adicionados e a reação foi continuada durante um adicional de 8 horas. Mais iPrI e TEA 15 equivalentes foram adicionados e o aquecimento foi continuado durante a noite. A reação foi concentrada e Na2CO3 saturado (20 ml) e DCM (20ml) foram adicionados. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi ainda extraída mais 3 vezes, os orgânicos combinados foram secos e purificados por cromatografia instantânea (SiO2, DCM/NH3 7 N em MeOH 97:3).
[00754]O resíduo obtido foi dissolvido em 30 ml de DCM e lavado com 20 ml de NaHCO3 saturado e 10 ml de NaOH 1 N. O aquoso foi extraído com DCM 3 vezes, os orgânicos combinados foram secos em MgSO4 e o solvente removido para fornecer o produto desejado (1,3 g) como uma espuma/sólido.ácido (3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,3- di-hidroxiciclopentil)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0264
[00755]Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,838 g, 20,0 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido etil 3-(3 (3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,3-di- hidroxiciclopentil)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (1,3 g, 2,0 mmols) em Tetra-hidrofurano (30 ml, 300 mmols) e Metanol (6,5ml, 160 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, acidificada com HCl 1 N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e água remanescente removida por destilação azeotrópica com etanol seguido por liofilização. O sólido resultante foi usado sem purificação adicional. N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4- amino)-9H-purin-9-il)-2,3-di- hidroxiciclopentil)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0265
[00756]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (1,19 g, 3,13 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido 3-{3- [{[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{6-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-9H-purin-9-il}-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]metil}{isopropil)amino]ciclobutil}propanoico (1,30 g, 2,09 mmols) e N,N-Di-isopropiletilamina (1,20 ml, 6,89 mmols) e 4-terc- butilbenzeno-1,2-diamina (0,411 g, 2,50 mmols) em N,N-Dimetilformamida (12,9 ml). A reação foi agitada durante 2 horas, NaHCO3 (saturado) foi adicionado e a mistura extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos em MgSO4 filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM -> DCM/NH3 7 N em MeOH 95:5) para fornecer a amida desejada (1,4 g) como um sólido.9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina
Figure img0266
[00757]N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-9H-purin-9-il)-2,3-di- hidroxiciclopentil)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (1,4g, 1,8 mmol) em Ácido acético (5 ml, 90 mmols) foi agitada durante a noite a 60 °C. A reação foi concentrada e purificada por cromatografia instantânea (DCM -> DCM/NH3 7 N em MeOH 94:6) para fornecer o composto desejado (0,91 g) como uma espuma.(1R,2S,3R,5R)-3-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0267
[00758]Ácido trifluoroacético (10 ml, 100 mmols) foi adicionado a uma mistura de Água (1 ml, 60 mmols) e 9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-9H-purin-6-amina (0,91 g, 1,2 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. A reação depois foi aquecida a 35 °C e trietilsilano (0,39 ml, 2,4 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada a 35 °C durante um adicional de 2 dias. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml). 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de H2O foram adicionados e a reação agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro lavada com 10 ml de MeOH. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 90:1 0) para fornecer o produto desejado (0,142 g) como um sólido incolor depois de vários dias de liofilização.Composto 51: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00759]Os diastereoisômeros foram separados por SFC (25 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,38 (d, J = 7,88 Hz, 1 H), 7,27 (dd, J = 8,60, 1,55 Hz, 1 H), 7,19 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 3,73 Hz, 1 H), 4,85 (m, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 3,85 (t, J = 5,60 Hz, 1 H), 3,41 (m, 1 H), 3,17 (m, 1 H), 2,83 (t, J = 7,36 Hz, 2 H), 2,74 (dd, J = 13,68, 6,63 Hz, 1 H), 2,51 (dd, J = 13,79, 7,57 Hz, 1 H), 2,38 (m, 1 H), 2,18 (m, 3 H), 2,09 (m, 1 H), 2,02 (m, 5 H), 1 83 (m, 2 H), 1,60 (m, 3 H), 1,36 (s, 9 H).Composto 52: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00760]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um creme sólido colorido (64 mg), RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,63 (s, 2 H), 7,20 (d. J = 3,52 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,73 Hz, 1 H), 4,32 (dd. J = 7,88, 6,01 Hz. 1 H), 3,88 (dd, J = 5,60, 4,77 Hz, 1 H), 2,82 (t, J = 7,26 Hz, 2 H), 2,69 (m, 1 H), 2,48 (m, 1 H), 2,38 (m, 2 H), 2,24 (m, 3 H), 2,15 (s, 3 H),1,91 (m, 3 H), 1,61 (m, 1 H), 1,50 (m, 2 H).Composto 53: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00761]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. Depois da liofil- ização, um sólido incolor (85 mg) foi recuperado.Composto 54: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclopropilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00762]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó branco (53 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,48 (br. s., 1 H), 7,39 (d, J = 8,50 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 8,60, 1,76 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,67, 5,80 Hz,1 H), 3,91 (m, 1 H), 3,44 (m, 1 H), 2,84 (t, J = 7,57 Hz, 2 H), 2,78 (dd, J = 13,27, 7,05 Hz, 1 H), 2,58 (dd, J = 13,06, 7,67 Hz, 1 H), 2,40 (m, 3 H), 2,11 (t, J = 6,22 Hz, 3 H), 2,02 (m, 2 H). 1,87 (m, 2 H), 1,62 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 0,87 (m, 1 H), 0,49 (m, 2 H), 0,12 (m, 2 H).Composto 55: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00763]Os diastereoisômeros foram separado por SFC. RMN de 1H (400 MHZ, MeOD) δH ppm 8,05 (s, 1 H), 7,63 (s. 1 H), 7,39 (m, 1 H), 7,30 (dd, J = 8,50, 1,66 Hz, 1 H), 7,20 (d. J = 3,52 Hz. 1 H), 6,59 (d, J = 3,73 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,77, 5,91 Hz, 1 H), 3,88 (dd, J = 5,70, 4,66 Hz, 1 H), 2,99 (m. 1 H), 2,84 (t, J = 7,57 Hz, 2 H). 2,48 (m, 1 H), 2,41 (dd, J = 7,98, 4,87 Hz, 1 H), 2,34 (m, 1 H), 2,24 (m, 1 H), 2,15 (s, 3 H). 2,10 (m. 3 H), 2,01 (m, 2 H), 1,86 (t. J = 8,19 Hz, 2 H), 1,61 (m, 1 H).Composto 56: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((isopropil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00764]N-(2-amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4- ((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0268
[00765]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (1,19 g, 3,14 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido 3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (1,3 g, 2,1 mmols) e N,N-Di- isopropiletilamina (1,20 mL, 6,90 mmols) e 4-(trifluorometóxi)benzeno-1,2-diamina (0,482 g, 2,51 mmols) em N,N-Dimetilformamida (13,0 mL, 167 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e foi parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3x) e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7 N em MeOH 95:5) à amida desejada (1,4 g) como um sólido.N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((isopropil(3-(2-(5- (trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0269
[00766]N-(2-amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4- ((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (1,4 g, 1,8 mmol) foi aquecida em AcOH a 60 °C durante a noite. A mistura de reação foi concentrada a vácuo fornecendo o produto bruto.(1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((isopropil(3-(2- (5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano- 1,2-diol
Figure img0270
[00767]Ácido trifluoroacético (10 mL, 100 mmols) foi adicionado a uma mistura de Água (1 mL, 60 mmols) e N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6- ((isopropil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (0,91 g, 1,2 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente, depois interrompida pela adição de Trietilsilano (0,37 mL, 2,3 mmols). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml). 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de H2O foram adicionados e reação agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro lavada com 10 ml de MeOH. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante purificado por cromatografia instantânea (DCM/NH3 7N em MeOH 90:10) para fornecer o produto desejado (0,232g) como uma espuma branca amarelada. MS (ESI+) para C29H36F3N7O3 m/z 588,2 [M + H]+; MS (ESI-) para C29H36F3N7O3 m/z 586,2 [M - H]-; HPLC pureza >90 % (tempo de retenção, 2,570 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,082 & 8,079 (s, 1H, picos sobrepostos devido aos isômeros cis e trans), 7,554 - 7,524 (m, 1 H), 7,414 (s, 1 H), 7,225 - 7,209 (m, 1 H), 7,155 - 7,127 (m, 1 H), 6,618 - 6,609 (m, 1 H), 4,363 - 4,323 (m, 1 H), 3,976 - 3,932 (m, 1 H), 3,606 - 3,524 (m, 0,5 H (metina from isômero trans)), 3,156 - 3,110 (m, 0,5 H (metina a partir de isômero cis), 3,089 - 3,006 (m, 1 H), 2,731 - 2,679 (m, 1 H), 2,544 - 2,360 (m, 2 H), 2,256 - 2,239 (m, 3 H), 2,093 - 2,061 (m, 2 H), 1,987 - 1,861 (m, 3 H), 1,648 - 1,568 (m, 2 H), 1,072 - 1,006 (m, 6 H).Composto 57: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil((1s,3R)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00768]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi liofil- izado para fornecer um sólido (78 mg). RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,076 (s, 1 H), 7,548 - 7,527 (m, 1 H), 7,414 (s, 1 H), 7,227 - 7,218 (m, 1 H), 7,148 - 7,123 (m, 1 H), 6,616 - 6,607 (m, 1 H), 4,361 - 4,327 (m, 1 H), 3,926 - 3,899 (m, 1 H), 3,037 - 3,000 (m, 1 H), 2,907 - 2,870 (m, 2 H), 2,538 - 2,283 (m, 4 H), 2,178 - 2,013 (m, 8 H), 1,913 - 1,872 (m, 2 H), 1,680 - 1,599 (m, 1 H).Composto 58: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00769]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó castanho (73 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,64 (s, 2 H), 7,21 (d, J = 3,73 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 7,77, 6,12 Hz, 1 H), 3,89 (m, 1 H), 3,01 (m, 1 H), 2,86 (t, J = 7,67 Hz, 2 H), 2,51 (m, 1 H), 2,40 (m, 2 H), 2,27 (m, 1 H), 2,18 (s, 3 H), 2,11 (m, 3 H), 2,02 (q, J = 6,43 Hz. 2 H),1,88 (t, J = 8,19 Hz, 2 H), 1,63 (m, 1 H).Composto 59: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol Etapa 1: 3-((1R,3s)-3-((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila
Figure img0271
[00770]O amina 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de etila (1,8 g, 3,0 mmols) foi absorvido em metanol (20 mL, 600 mmols) e cianoboro-hidreto de sódio (0,37 g, 5,9 mmols) foi adicionado. O pH foi ajustado a aproximadamente 6 usando uma solução a 10 % de AcOH em metanol, depois ciclobutanocarboxaldeído (0,32 g, 3,8 mmols) foi adicionado em uma porção. A reação foi deixada proceder durante 5 horas, tempo no qual HPLC indicou que a reação foi estagnada. Mais 1,3 equivalentes de ciclobutanocar- boxaldeído foram adicionados e a reação continuada durante a noite. NaHCO3 (saturado) foi adicionado à mistura de reação que depois foi extraída 3 vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados a uma resina amarela. Isômeros cis e trans foram separáveis em sílica. A purificação por FC (DCM/NH3 7 N em MeOH 96:4) forneceu 2 lotes separados do produto, cada um enriquecido em um isômero respectivo a cerca de 90 %. Isômero de topo: 0,38 g (5:1 mistura, cis) Isômero de fundo: 0,31 g (mistura 7:1, trans). MS (ESI+) para C35H49N5O6 m/z 676,7 [M + H]+; HPLC pureza > 69 % (tempo de retenção, 3,791).Etapa 2: N-(2-amino-5-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3-((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0272
[00771]Isômero de fundo (trans): Hidróxido de lítio mono-hidratado (0,192 g, 4,59 mmols) foi adicionado a uma solução de 3-((1R,3s)-3- ((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,31 g, 0,46 mmol) em tetra-hidrofurano (6 mL, 70 mmols) e metanol (1,5 mL, 37 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido e transformado no ácido. A reação foi acidificada com HCl 1 N ao pH = 6. Os voláteis foram removidos a vácuo e a água remanescente removida por destilação azeotró- pica com etanol seguido por 24 horas de liofilização. O sólido branco amarelado resultante foi usado sem purificação adicional. HPLC pureza > 94 % (tempo de retenção, 3,344).
[00772]Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,273 g, 0,718 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 3-{trans-3- [(ciclobutilmetil){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-dimetoxibenzil)amino]-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il}-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino]ciclobutil}propanoico (0,31 g, 0,48 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,275 mL, 1,58 mmol) e 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (0,0943 g, 0,574 mmol) em N,N-dimetilformamida (2,96 mL, 38,3 mmols). A reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido. A reação foi parcialmente concentrada a aproximadamente 2 ml e depois NaHCO3 (saturado) foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc 3 vezes e os orgânicos combinados foram secos com MgSO4 e concentrados. O resíduo resultante foi purificado por FC (DCM/NH3 7 N em MeOH 95:5) para fornecer N-(2-amino-5-(terc- butil)fenil)-3-((1R,3s)-3-((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,29 g; 76 %) como um sólido amorfo roxo-marrom. HPLC pureza >20 % (tempo de retenção, 3,650 min.)Etapa 3: 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro- 3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina
Figure img0273
[00773]Uma solução de N-(2-amino-5-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3- ((ciclobutilmetil)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,3 g, 0,4 mmol) em ácido acético (1,0 mL, 20 mmols) foi agitada durante a noite a 65 °C e pela manhã seguinte o material de partida foi consumido. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante purificado por FC (DCM/NH3 7 N em MeOH 93:7) para fornecer 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina como um sólido branco amarelado. HPLC pureza >73 % (tempo de retenção, 3,709 min.). Etapa 4: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0274
[00774]Ácido trifluoroacético (5 mL, 70 mmols) foi adicionado a uma mistura de água (0,5 mL, 30 mmols) e 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (0,23 g, 0,30 mmol) na temperatura ambiente. A reação foi deixada proceder durante a noite, tempo no qual a suspensão rosa brilhante foi interrompida com trietilsilano (0,095 mL, 0,59 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi absorvido em MeOH (15 ml). 500 mg de K2CO3 e 8 gotas de H2O foram adicionados e reação agitada na temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e a torta do filtro foi lavada com 10 ml de metanol. O fil-trado foi concentrado e o resíduo resultante purificado por FC (DCM/NH3 7 N em MeOH 90:10) para fornecer (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(ciclobutilmetil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol (0,018 g, 10 %) como um sólido incolor. MS (ESI+) para C34H47N7O2 m/z 586,4 [M + H]+; HPLC pureza >93 % (tempo de retenção, 2,070 min.) RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) δH 8,083 (s, 1 H), 7,501 (s, 1 H), 7,421 - 7,400 (m, 1 H), 7,315 - 7,290 (m, 1 H), 7,218 - 7,209 (m, 1 H), 6,621 - 6,612 (m, 1 H), 4,350 - 4,317 (m, 1 H), 3,930 - 3,903 (m, 1 H), 3,403 - 3,367 (m, 1 H), 2,880 - 2,843 (m, 2 H), 2,722 - 2,360 (m, 6 H), 2,323 - 2,241 (m, 2 H), 2,173 - 1,606 (m, 13 H), 1,387 (s, 9 H).Composto 60: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((isopropil((1r,3S)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00775]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. Depois da liofil- ização, um sólido incolor (62 mg) foi recuperado.Composto 61: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((isopropil((1s,3R)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
[00776]Os diastereoisômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado para fornecer um pó branco amarelado (89 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,71 Hz, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,19 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 7,12 (m, 1 H), 6,59 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 4,88 (m, 1 H), 4,33 (m, 1 H), 3,94 (t, J = 5,39 Hz, 1 H), 3,52 (m, 1 H), 3,01 (m, 1 H), 2,87 (t, J = 7,15 Hz, 2 H), 2,68 (dd, J = 13,48, 7,88 Hz, 1 H), 2,47 (dd, J = 13,27, 7,46 Hz, 1 H), 2,37 (m, 1 H), 2,21 (m, 3 H), 2,04 (m, 3 H), 1,84 (m, 2 H), 1,58 (m, 1 H), 1,02 (d, J = 6,63 Hz, 3 H), 0,98 (d, J = 6,43 Hz, 3 H).Composto 62: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((metil(3-(2-(5-(oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diolN-(4-(oxetan-3-il)fenil)acetamida
Figure img0275
[00777]Ácido (4-acetamidofenil)borônico (670 mg, 3,7 mmols), iodeto de níquel (II) (35 mg, 0,11 mmol), trans-2-aminociclohexanol (17 mg, 0,11 mmol), e sódio hexametildisilazano (690 mg, 3,7 mmols) foram pesados em um frasco de reação de micro-ondas. Um septo foi colocado sobre a parte superior, nitrogênio foi purgado e álcool isopropílico (5,7 ml, 75 mmols) foi adicionado. O frasco foi purgado com nitrogênio durante 10 minutos e 3-iodooxetano (344 mg, 1,87 mmol) foi adicionado em 0,75 ml de álcool isopropílico. O septo foi substituído com uma tampa de frasco de micro-ondas e a mistura foi aquecida em um reator de micro-ondas (condições de micro-ondas: reator de micro-ondas CEM Discovery Explorer; tempo de rampa: 10 min; 80 °C durante 30 min; potência: 300 W). A mistura de reação bruta foi diluída com 8 ml de EtOH e a suspensão foi filtrada através de uma almofada de solka floc®. A almofada foi lavada com 35 ml de EtOH e o filtrado foi concentrado. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com 40 a 60 % de EtOAc/CH2Cl2) para fornecer o produto desejado como um óleo (200 mg).N-(2-nitro-4-(oxetan-3-il)fenil)acetamida
Figure img0276
[00778]Ácido sulfúrico (9,4 ml, 180 mmols) foi adicionado cuidadosamente ao ácido nítrico a 70 % (7:3, Ácido nítrico:Água, 11 ml, 170 mmols) que foi esfriado a 0 °C durante cerca de 5 a 10 minutos. A mistura foi agitada durante 10 minutos a 0 °C, depois deixada aquecer até a temperatura ambiente através da remoção do banho de gelo. A solução de ácido foi transferida para um funil de separação e cloreto de metileno (20 mL, 300 mmols) foi adicionado. O funil foi agitado durante 5 minutos, e as fases foram separadas.
[00779]A fase orgânica (fase superior) foi isolada e o processo foi repetido com um adicional de 20 ml de CH2Cl2. Os extratos orgânicos foram combinados, foi considerado que a fase orgânica continha cerca de 5 g (-80 mmols) de anidro HNO3. Usando um excesso de 50 vezes, isto exigiu cerca de 25 ml de solução. A solução de ácido nítrico foi esfriada em um banho de gelo. A N-(4-oxetan-3-ilfenil)acetamida (21 0 mg, 0,70 mmol) foi tratada com 25 ml da solução de HNO3/CH2Cl2 esfriada e foi deixada agitar cerca de 30 minutos. A mistura de reação foi cuidadosamente vertida em 45 ml de solução de NH4OH a 10 % e cuidadosamente agitada. As fases foram separadas e a fase aquosa foi lavada com 20 ml de CH2Cl2. A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purifica-do por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com 25 a 35 % de EtOAc/CH2Cl2) para fornecer o produto desejado como um sólido (170 mg).2-nitro-4-(oxetan-3-il)aniline
Figure img0277
[00780]Uma suspensão de N-(2-nitro-4-oxetan-3-ilfenil)acetamida (125 mg, 0,529 mmol) em hidrazina aquosa (8ml, 160 mmols) foi aquecida a 70 °C durante 2 h, a mistura de reação foi esfriada a 45 °C e a hidrazina foi removida a vácuo para fornecer um sólido. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com 20 % de EtOAc/CH2Cl2 para fornecer o produto desejado (71 mg).4-(oxetan-3-il)benzeno-1,2-diamina
Figure img0278
[00781]Uma solução de 2-nitro-4-oxetan-3-ilanilina (91 mg, 0,47 mmol) em Etanol (6,1 ml) foi cuidadosamente tratada com Paládio em carbono a 10 % (10 mg, 0,009 mmol) como uma pasta fluida em etanol. O frasco de reação foi evacuado e enchido com gás hidrogênio três vezes e a reação foi deixada agitar sob uma atmosfera de hidrogênio durante 2 h. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de solka floc® e a almofada foi lavada com 25 ml de MeOH. O filtrado foi concentrado para fornecer um óleo que solidificou sob alto vácuo durante a noite para fornecer o composto desejado (72 mg). O material foi usado na etapa seguinte. RMN de 1H (400 MHZ, CDC13) δH ppm 6,81 (d, J = 1,52 Hz, 1 H), 6,70 (m, 2 H), 5,02 (dd, J = 8,34, 5,81 Hz, 2 H), 4,74 (m, 2 H), 4,09 (m, 1 H),3,45 (br. s., 2 H), 3,37 (br. s., 2 H).N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5- (oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Figure img0279
[00782]Uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (250 mg, 0,42 mmol) e 4-oxetan-3-ilbenzeno-1,2-diamina (72 mg, 0,44 mmol) em N,N- Dimetilformamida (4,3 ml, 56 mmol) foi tratada com N,N-Di-isopropiletilamina (0,24 ml, 1,4 mmol), às gotas, seguido por Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-0-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (240 mg, 0,632 mmol) em uma porção. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 6 horas, até que a mistura de reação foi concentrada sob alto vácuo. O resíduo foi particionado entre 30 ml de EtOAc (algum MeOH foi adicionado para auxiliar na solublização do produto) e 30 ml de H2O/NaHCO3 sat. 1/1. A fase aquosa foi extraída com 30 mL de EtOAc e a fase or-gânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada a um espuma de vi- dro/rígida. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, elu- indo com 6 a 7 % de NH3 7 N em CH3OH/CH2Cl2. Dois grupos dos produtos foram descobertos, um par menos polar e um par mais polar correspondente aos 2 regio- isômeros de auxílio. Cada regio-isômero foi processado separadamente na etapa seguinte.
[00783]A amida (130 mg) foi absorvida em 5 ml de ácido acético glacial e aquecida a 65 °C durante 2,25 h, a reação foi esfriada e colocada no refrigerador durante a noite. O ácido acético foi removido sob alto vácuo com o auxílio de um banho de água quente. Os dois lotes do produto bruto foram absorvidos em 30 ml de CH2Cl2 e a fase orgânica foi lavada com porções (10 ml) de sat NaHCO3 e soluções de Na2CO3 a 2 %, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com 5,5 a 6,5 % de NH3 7 N em CH3OH/CH2Cl2 para fornecer o composto desejado (140 mg).(1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((metil(3-(2-(5- (oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0280
[00784]N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2- (5-(oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (115 mg, 0,159 mmol) foi dissolvida em uma mistura de Ácido trifluoroacético (4,00 ml, 51,9 mmols) e Água (0,40 ml, 22 mmols) que foi pré-esfriada a 0 °C em um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 °C durante 2 h, a mistura de reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente. Depois da reação, a mistura foi concentrada a vácuo. O resíduo foi absorvido em 6 ml de MeOH, concentrado e o processo foi repetido duas vezes. O resíduo resultante foi colocado em alto vácuo. O resíduo bruto foi diluído com 2 ml de MeOH, tratado com 140 mg de K2CO3 e 10 gotas de H2O e deixado agitar na temperatura ambiente até que a solução se tornou básica através do papel de pH. A solução foi filtrada através de uma frita fina e os sólidos lavados com MeOH. O filtrado foi concentrado a um sólido que foi colocado em alto vácuo durante a noite. O material bruto foi purificado por TLC prep em duas placas de TLC prep 2°Cm x 2°Cm x 1,0 mm, eluindo com 14 % de NH3 7 N em CH3OH/CH2Cl2 para fornecer o produto como um vidro incolor (37 mg) RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,06 (s, 1 H), 7,52 (br. s., 1 H), 7,48 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,28 (m, 1 H), 7,20 (t, J = 3,42 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 3,52 Hz, 1 H), 5,12 (m, 2 H), 4,80 (m, 2 H), 4,38 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 3,89 (q, J = 5,60 Hz, 1 H), 3,04 (m, 1 H), 2,85 (m, 2 H), 2,70 (m,1 H), 2,52 (m, 1 H), 2,41 (m. 2 H), 2,27 (dd, J = 10,99, 6,63 Hz, 2 H), 2,19 (s, 3 H), 2,17 (s, 3 H), 2,14 (m, 1 H), 2,03 (d, J = 7,88 Hz, 1 H), 1,91 (m, 3 H), 1,62 (m, 1 H), 1,51 (m, 1 H). Composto 63: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1r,3S)-3-(2- (5-(oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
[00785]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó castanho (58 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,26 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,51 (s, 1 H), 7,47 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,26 (dd, J = 8,29, 1,45 Hz, 1 H), 5,97 (d, J = 3,94 Hz, 1 H), 5,11 (dd, J = 8,29, 6,01 Hz, 2 H), 4,79 (t,J = 6,32 Hz, 2 H), 4,69 (m, 1 H), 4,36 (m, 1 H), 4,22 (t, J = 5,60 Hz, 1 H), 4,15 (m, 1 H), 2,79 (t, J = 7,15 Hz, 2 H), 2,72 (m, 1 H), 2,66 (m, 2 H), 2,21 (m, 2 H), 2,14 (s, 3 H), 1,88 (m, 3 H), 1,45 (m, 2 H). Composto 64: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil(3-(2-(5- (oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4- diol Etapa 1: ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico
Figure img0281
[00786]Uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de etila (0,39 g, 0,82 mmol) em metanol (14 mL) foi tratada com uma solução aquosa 1 M de hidróxido de sódio (1,56 mL, 1,56 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 50 °C com agitação durante 3,5 h; HPLC/LC MS indicou a conversão ao produto desejado. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e o resíduo aquoso foi diluído com água (10 mL) e extraído com CH2Cl2 (3 x 5 mL). A camada aquosa foi tratada com uma solução aquosa 1 M de cloreto de hidrogênio (1,44 mL, 1,44 mmol) para ajustar ao pH 7. A solução incolor foi liofilizada para fornecer o composto do título bruto (0,487 g, 110 %) como um sólido levemente branco amarelado, levando em conta 1,56 mmol de NaCl (91 mg): MS (ESI+) para C21H30N6O5 m/z 447,1 (M + H)+; MS (ESI-) para C21H30N6O5 m/z 445,2 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção, 1,949 min). Etapa 2: N-(2-amino-5-(oxetan-3-il)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6- amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
Figure img0282
[00787]Uma suspensão do ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico e 4-(oxetan-3-il)benzeno-1,2-diamina brutos acima (0,135 g, 0,822 mmol) em cloreto de metileno (8,0 mL) foi tratada com N,N-di-isopropiletilamina (0,716 mL, 4,11 mmols) e esfriada a -5 °C (gelo/salmoura). Hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)urônio [HATU] (0,469 g, 1,23 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 5,25 h, aquecendo a 15 °C; HPLC/LC MS indicou a conversão completa. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e diluída com CH2Cl2 (15 mL) e água (7,5 mL). A camada aquosa separada foi extraída com CH2Cl2 (2 x 10 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2SO4) e concentrados a vácuo para fornecer um óleo/espuma marrom-roxo semiopaco. A purificação por cromatografia em coluna (sílica 2 x 8 cm; 0 a 5 % de NH3 metanólico 7 N/CH2Cl2) forneceu os dois regioisômeros de amida do composto do título (0,45 g, 82 %) como uma espuma rosa semiopaca: MS (ESI+) para C30H40N8O5 m/z 593,3 (M + H)+; MS (ESI-) para C30H40N8O5 m/z 591,3 (M - H)- e 637,4 (M + HCO2)-; HPLC pureza 90 % (tempo de retenção, 2,097 min). Etapa 3: 9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(oxetan-3-il)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)- 9H-purin-6-amina
Figure img0283
[00788]N-(2-amino-5-(oxetan-3-il)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (0,446 g, 0,752 mmol) foi absorvida em ácido acético (7,7 mL, 140 mmols) e aquecida a 65 °C durante 3,5 h; HPLC/LC MS indicou a conversão completa. Em 3,75 h, o ácido acético foi removido por destilação com aquecimento mínimo para fornecer um óleo laranja, que foi absorvido em CH2Cl2 (45 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado (2 x 30 mL). A camada aquosa foi tratada com NaCl até que foi saturada e extraída com CH2Cl2 (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas a vácuo para fornecer um óleo laranja claro. A purificação por cromatografia em coluna (sílica 2 x 8 cm; 0 a 5 % de NH3 metanólico 7 N /CH2Cl2) forneceu o composto do título (0,28 g, 65 %) como uma espuma laranja clara: MS (ESI+) para C30H38N8O4 m/z 575,3 (M + H)+; MS (ESI-) para C30H38N8O4 m/z 573,3 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção 2,142 min).Etapa 4: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil(3-(2-(5-(oxetan-3- il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0284
[00789]A um frasco esfriado (banho de gelo) contendo 9-((3aR,4R,6R,6aR)- 2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (0,28 g, 0,42 mmol) foi adicionada uma solução pré-esfriada (banho de gelo) de ácido trifluoroacético (6,4 mL, 84 mmols) em água (0,75 mL, 42 mmols). A mistura de reação foi agitada durante 5,75 h a 0 °C; HPLC/LC MS indicou o consumo quase completo do material de partida. Em 6 h, o frasco foi removido do banho frio e os voláteis foram removidos por destilação na temperatura ambiente. O resíduo foi diluído com MeOH (15 mL) e tratado com carbonato de potássio (0,32 g, 2,3 mmols) e água (1 mL) e a mistura foi agitada durante 20 min na temperatura ambiente; pH 2. Carbonato de potássio adicional (0,20 g, 1,4 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 20 min; pH 8 a 9. A solução foi filtrada através de uma frita fina, enxaguando com MeOH, e o filtrado foi concentrado a vácuo para fornecer um semissóli- do castanho. A purificação por cromatografia em coluna (sílica 3 x 8 cm; 10 a 20 % de NH3 metanólico 7 N/CH2Cl2) forneceu o composto do título (123 mg, 55 %) como um vidro quase incolor: MS (ESI+) para C27H34N8O4 m/z 535,3 (M + H)+; MS (ESI-) para C27H34N8O4 m/z 533,3 (M - H)-; HPLC pureza >95 % (tempo de retenção 1,765 min); RMN de 1H (400 MHz, d4-MeOH) mistura de isômero cis/trans δH 8,29-8,25 (m, 1 H), 8,21-8,17 (m, 1 H), 7,51 (s, 1 H), 7,47 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,26 (dd, J = 1,6, 8,3 Hz, 1 H), 6,00-5,96 (m, 1 H), 5,11 (dd, J = 5,8, 8,3 Hz, 2 H), 4,81 - 4,76 (m, 2 H), 4,73 - 4,68 (m, 1 H), 4,40-4,31 (m, 1 H), 4,27 - 4,13 (series of m, 2 H), 3,13 - 3,03 (m, 0,4 H), 2,86 - 2,66 (série de m, 4,6 H), 2,30 - 1,80 (série de m, 8,6 H), 1,55 - 1,40 (m, 1,4 H). Composto 65: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1s,3R)-3- (2-(5-(oxetan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
[00790]Os diastereômeros foram separados por SFC. O material foi absorvido em MeOH/H2O e liofilizado a um pó branco (35 mg). RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δH ppm 8,28 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,51 (s, 1 H), 7,48 (d, J = 8,29 Hz, 1 H), 7,27 (dd, J = 8,29, 1,45 Hz, 1 H), 5,98 (d, J = 4,15 Hz, 1 H), 5,12 (dd, J = 8,40, 5,91 Hz, 2 H), 4,79 (t, J = 6,32 Hz, 2 H), 4,69 (dd, J = 5,39, 4,15 Hz, 1 H), 4,36 (m, 1 H), 4,23 (t, J = 5,60 Hz, 1 H), 4,17 (m,1 H), 3,05 (m. 1 H), 2,83 (t, J = 7,46 Hz, 2 H), 2,67 (m. 2 H), 2,16 (s, 3 H), 2,08 (m, 2 H), 1,98 (m, 3 H), 1,83 (m, 2 H). Composto 67: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-[({3-[2-(5-ciclobutil- 1H-1,3-benzodiazol-2-il)etil]ciclobutil}(propan-2-il)amino)metil]oxolano-3,4-diol Etapa 1: 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de benzila
Figure img0285
[00791]Uma suspensão da 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetil- tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina (1,45 g, 4,736 mmols), 3- (3-oxociclobutil)propanoato de benzila (1,21 g, 5,209 mmol) e ácido acético (246,45 μl, 4,31 mmols) em DCE:iPrOH (4:1, 50 ml) foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Uma alíquota adicional de DCE (40 ml) e iPrOH (5 ml) foi adicionada à mistura de reação e continuada durante 1 hora. STAB (1,28 g, 6,03 mmols) depois foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 18 horas. A mistura de reação foi interrompida com Na2CO3 1 N (10 ml), e o produto foi extraído com DCM (2 x 30 ml). Este foi seco em Na2SO4, filtrado e evaporado à secura. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica, eluindo com NH3 7 N em MeOH:DCM (1:99 a 3:97) forneceu o produto desejado como um óleo incolor, 1,51 g (58 %); MS (ESI+) para C27H34N6O5 m/z 523,65 [M + H]+; HPLC pureza 97 % (tempo de retenção, 1,43 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 8,35 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 7,87 (d, J = 33,8 Hz, 1 H), 7,40 - 7,29 (m, 5 H), 6,08 - 5,94 (m, 1 H), 5,59 - 5,42 (m, 3 H), 5,10 (d, J = 4,0 Hz, 2 H), 5,03 - 4,96 (m, 1 H), 4,33 (dq, J = 7,3, 3,9 Hz, 1 H), 3,12 (ddd, J = 23,0, 14,6, 7,5 Hz, 1 H), 2,85 - 2,77 (m, 1 H), 2,74 (dd, J = 12,5, 6,6 Hz, 1 H), 2,39 - 2,07 (m, 4 H), 1,90 - 1,64 (m, 5 H), 1,61 (s, 4 H), 1,38 (s, 3 H), 1,28 - 1,06 (m, 1 H). Etapa 2. 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2-il)amino)ciclobutil]propanoato de benzila
Figure img0286
[00792]K2CO3 (528,92 mg, 3,83 mmols) foi adicionado a uma solução de 3- [3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de benzila (1,00 g, 1,91 mmol) e 2-iodopropano (0,57 ml, 5,74 mmols) em MeCN e agitado a 95 °C em um tubo vedado durante 18 horas. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (20 ml), filtrada e evaporada à secura. A purificação por cromatografia em gel de sílica, eluindo com NH3 7 N em MeOH:DCM (1:99 a 5:95) forneceu o produto desejado como um óleo incolor, 700 mg (65 %); MS (ESI+) para C30H40N6O5 m/z 565,70 [M + H]+; HPLC pureza 96 % (tempo de retenção, 1,48 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 8,35 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,88 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 7,44 - 7,29 (m, 5 H), 6,03 (t, J = 2,2 Hz, 1 H), 5,62 - 5,42 (m, 3 H), 5,10 (d, J = 3,3 Hz, 2 H), 5,06 - 4,92 (m, 1 H), 4,26 (dt, J = 9,9, 3,4 Hz, 1 H), 3,46 - 2,84 (m, 2 H), 2,88 - 2,61 (m, 1 H), 2,51 (ddd, J = 14,0, 9,1, 7,5 Hz, 1 H), 2,33 - 2,15 (m, 2 H), 2,50 - 2,13 (m, 2 H), 2,16 - 1,74 (m, 4 H), 1,60 (s, 3 H), 1,43 - 1,35 (m, 4 H), 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,79 (d, J = 6,6 Hz, 3 H).Etapa 3. ácido 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil- tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2-il)amino)ciclobutil]propanoico
Figure img0287
[00793]Pd-C a 10 % (70 mg) foi adicionado a uma solução de 3-[3- ({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2-il)amino)ciclobutil]propanoato de benzila (790 mg, 1,40 mmol) em EtOH (20 ml) e agitado sob uma atmosfera de hidrogênio durante 18 horas na temperatura ambiente. Uma alíquota adicional de Pd-C a 10 % (70 mg) foi adicionada e a reação foi continuada com agitação sob hidrogênio durante 4 horas. Esta foi filtrada e evaporada a vácuo, e depois evaporada a partir de DCM (2 x 20 ml) para fornecer 680 mg (quant.) de um sólido espumoso branco; MS (ESI+) para C23H34N6O5 m/z 475,20 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,11 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 8,29 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 7,97 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,86 (s, 2 H), 6,05 (dd, J = 4,3, 1,7 Hz, 1 H), 5,66 - 5,43 (m, 1 H), 5,00 (ddd, J = 19,3, 6,3, 3,2 Hz, 1 H), 4,30 (s, 1 H), 3,47 - 2,85 (m, 2 H), 2,60 (ddd, J = 38,8, 24,1, 13,5 Hz, 2 H), 2,19 (ddd, J = 14,7, 11,9, 7,1 Hz, 2 H), 2,07 - 1,94 (m, 2 H), 1,81 (dd, J = 65,1, 6,9 Hz, 3 H), 1,66 - 1,46 (m, 5 H), 1,45 - 1,22 (m, 4 H), 1,00 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,89 (dd, J = 12,2, 6,6 Hz, 3 H).Etapa 4. 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2-il)amino)ciclobutil]-N-(2-amino-4/5- ciclobutilfenil)propanamida
Figure img0288
[00794]TEA (0,54 ml, 3,90 mmols) foi adicionada a uma solução de ácido 3- [3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2-il)amino)ciclobutil]propanoico (308,46 mg, 0,65 mmol), 4-ciclobutilbenzeno-1,2-diamina (210,90 mg, 1,30 mmol), (2E)- ciano(hidroxiimino)etanoato de etila (184,75 mg, 1,30 mmol), e EDC.HCl (249,21 mg, 1,30 mmol) em DCM (15 ml) na temperatura ambiente e agitada durante duas horas. A mistura de reação foi concentrada a vácuo, depois DCM (50 ml) foi adicionado. Este foi lavado com NaHCO3 sat. (2 x 30ml). O aquoso foi extraído com DCM (50 ml). Os orgânicos combinados foram secos em Na2SO4, filtrados e evaporados. O produto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica eluindo com EtOAc, e depois NH3 7 N em MeOH:DCM (5:95), para fornecer um óleo cinza, 468 mg (93 %); MS (ESI+) para C33H46N8O4 m/z 619,35 [M + H]+; HPLC pureza 80 % (tempo de retenção, 1,44 min).Etapa 5. 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-[({3-[2-(5-ciclobutil-1H-1,3-benzodiazol-2- il)etil]ciclobutil}(propan-2-il)amino)metil]-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina
Figure img0289
[00795]AcOH (10 ml) foi adicionado à 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino- 9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(propan-2- il)amino)ciclobutil]-N-(2-amino-4/5-ciclobutilfenil)propanamida (468 mg, 0,61 mmol) e aquecido a 65 °C, com agitação durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada a vácuo, depois dissolvida em DCM (100 ml) e lavada com NaHCO3 sat. (2 x 80 ml), seca em Na2SO4, filtrada e evaporada. A purificação por cromatografia em gel de sílica instantânea (Biotage, Isolera, cartucho de 25 g), eluindo com amônia 3N em MeOH:DCM (0 a 1:9) forneceu o produto desejado com pureza de aprox. 80 %. Além disso, a purificação por HPLC preparativa forneceu o produto desejado como um óleo cinza, 120 mg (27 %); MS (ESI+) para C33H44N8O3 m/z 601 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,43 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 8,62 (d, J = 53,1 Hz, 6 H), 8,57 (s, 2 H), 8,25 (d, J = 19,3 Hz, 1 H), 7,90 (d, J = 20,3 Hz, 1 H), 7,50 (dd, J = 8,3, 3,9 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,18 - 7,06 (m, 1 H), 6,52 (d, J = 96,3 Hz, 2 H), 6,07 (dd, J = 10,2, 1,3 Hz, 1 H), 5,52 - 5,39 (m, 1 H), 5,07 (dd, J = 6,2, 3,4 Hz, 1 H), 4,44 (td, J = 9,3, 5,1 Hz, 1 H), 3,59 (dq, J = 17,4, 8,7 Hz, 1 H), 3,36 - 3,10 (m, 2 H), 3,08 - 2,92 (m, 2 H), 2,87 - 2,72 (m, 2 H), 2,43 - 2,27 (m, 2 H), 2,24 - 1,65 (m, 10 H), 1,57 (s, 4 H), 1,37 (s, 3 H), 1,10 (d, J = 6,6 Hz, 3 H), 0,91 (dd, J = 8,9, 6,8 Hz, 3 H). Etapa 6. (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-[({3-[2-(5-ciclobutil-1H- 1,3-benzodiazol-2-il)etil]ciclobutil}(propan-2-il)amino)metil]oxolano-3,4-diol
Figure img0290
[00796]HCl 12 N (24 mmols, 2 ml) foi adicionado, às gotas, a uma solução de 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-[({3-[2-(5-ciclobutil-1H-1,3-benzodiazol-2- il)etil]ciclobutil}(propan-2-il)amino)metil]-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina (120 mg, 0,164 mmol) em MeOH (2 ml) a 0 °C durante a agitação. Isto depois foi deixado aquecer até a temperatura ambiente e continuado durante 6 horas. A mistura de reação foi esfriada a 0 °C e basificada com NH3 7 N em MeOH (10 ml). Isto depois foi evaporado a vácuo. O produto bruto foi absorvido em gel de sílica (1 ml), colocado em um cartucho de Si isolute flash (10 g) e purificado, eluindo com NH3 7 N em MeOH:DCM (1:9) para fornecer um sólido branco, 36 mg (38 %); MS (ESI+) para C30H40N8O3 m/z 561,45 [M + H]+; HPLC pureza 100 % (tempo de retenção, 1,13 min); RMN de 1H (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δH ppm 8,29 (d, J = 4,6 Hz, 1 H), 8,20 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,50 - 7,18 (m, 2 H), 7,06 (ddd, J = 8,3, 4,6, 1,3 Hz, 1 H), 6,01 - 5,90 (m, 1 H), 4,73 (dd, J = 9,8, 5,1 Hz, 1 H), 4,26 (q, J = 5,4 Hz, 1 H), 4,14 - 4,03 (m, 1 H), 3,60 - 3,15 (m, 2 H), 3,07 - 2,86 (m, 2 H), 2,84 - 2,67 (m, 3 H), 2,42 - 2,31 (m, 2 H), 2,25 - 2,11 (m, 4 H), 2,10 - 1,95 (m, 2 H), 1,92 - 1,74 (m, 4 H), 1,57 (dd, J = 12,2, 6,2 Hz, 1 H), 1,02 (dd, J = 6,6, 4,0 Hz, 3 H), 0,95 (dd, J = 6,6, 2,3 Hz, 3 H). Composto 68: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-{[(3-{2-[5-(1- metóxi-2-metilpropan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-2- il]etil}ciclobutil)(metil)amino]metil}oxolano-3,4-diol Etapa 1: 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetrahidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de benzila
Figure img0291
[00797]Uma suspensão de 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetil- tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina (5,00 g, 16,3 mmols), 3-(3- oxociclobutil)-propanoato de benzila (4,17 g, 18,0 mmols) e ácido acético (0,85 ml, 14,8 mmols) em DCE:iPrOH (7:2) (90 ml) foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,40 g, 20,8 mmols) foi adicionado em porções e a mistura agitada durante 18 h na temperatura ambiente. A mistura de reação foi interrompida com solução de Na2CO3 1 M (10 ml) e o produto foi extraído com DCM (3 x 30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e evaporadas à secura. A purificação por cromatografia instantânea em coluna em gel de sílica eluindo com NH3 7 M a 1 % em MeOH:99 % DCM forneceu o produto como um óleo amarelo (5,25 g, 55 %, 89 % puro): MS (ESI+) para C27H34N6O5 m/z 523,6 [M + H]+; LC pureza 89 % (tempo de retenção, 1,60 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 8,35 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,30 - 7,39 (m, 5 H), 6,01 (dd, J = 3,0 Hz, 1,6, 1 H), 5,72 (br. s., 2 H), 5,50 (dt, J = 6,4 Hz, 3,3, 1 H), 5,10 (d, J = 3,8 Hz, 2 H), 4,98 - 5,04 (m, 1 H), 4,31-4,38 (m, 1 H), 2,97 - 3,34 (m, 1 H), 2,72 - 2,85 (m, 2 H), 2,22 - 2,35 (m, 3 H), 2,14 (td, J = 8,3, 4,3 Hz, 1 H), 1,73 - 1,90 (m, 4 H), 1,64 - 1,71 (m, 1H,), 1,62 (d, J = 1,4 Hz, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,10 - 1,27 (m, 1 H). Etapa 2: 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]propanoato de benzila
Figure img0292
[00798]3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}amino)ciclobutil]propanoato de benzila (3,2 g, 6,12 mmols) foi dissolvido em metanol (32 ml). Formaldeído em água (37 %) (0,92 ml, 12,3 mmols) foi adicionado e agitado durante 45 min antes de adicionar cianobo- ro-hidreto de sódio (0,54 g, 8,57 mmol) às porções. A reação foi agitada durante 2 h na temperatura ambiente antes de adicionar água (1 ml) e evaporar o solvente na temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por cromatografia com amônia 7 M em metanol/DCM para fornecer o composto desejado como um óleo amarelo (mistura de diastereômeros) (2,05 g, 62 %, 82 % puro): MS (ESI+) para C28H36N6O5 m/z 537,6 [M + H]+; LC pureza 82 % (tempo de retenção, 1,60 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 8,32 - 8,38 (m, 1 H), 7,91 - 7,97 (m, 1 H), 7,32 - 7,39 (m, 5 H), 6,05 - 6,10 (m, 1 H), 5,61 (br. s., 2 H), 5,53 (ddd, J = 16,5, 6,4, 1,8 Hz, 1 H), 5,11 (m, 2 H), 4,93 - 5,00 (m, 1 H), 4,32 - 4,40 (m, 1 H), 2,50 - 2,88 (m, 1 H), 2,37 - 2,49 (m, 2 H), 2,21 - 2,30 (m, 2 H), 2,10 (m, 3 H), 1,91 - 2,04 (m, 1 H), 1,73 - 1,79 (m, 2 H), 1,64 - 1,72 (m, 2 H), 1,56 - 1,63 (m, 4 H), 1,41 (s, 3 H), 1,15 (q, J = 9,7 Hz, 1 H).Etapa 3: ácido 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil- tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]propanoico
Figure img0293
[00799]3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]propanoato de benzila (1,19 g, 2,22 mmols) foi dissolvido em etanol (24 ml) e paládio em carvão a 10 % (pasta úmida a 50 %) (0,24 g) adicionado. A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio durante 18 h. Ela depois foi filtrada e o sólido lavado com etanol (10 ml). Como a reação foi incompleta, m mais paládio em carvão (0,21 g) foi adicionado e a reação continuada sob hidrogênio durante um adicional de 24 h. O filtrado através da fibra de vidro dupla foi lavado com etanol e evaporado à secura para fornecer o composto desejado como uma espuma branca (mistura de dia- stereômeros) (0,85 g, 86 %): MS (ESI+) para C21H30N6O5 m/z 447,5 [M + H]+; LC pureza 86 % (tempo de retenção, 1,08 min); RMN de 1H (500 MHz, d4-MeOD) δH 8,18 - 8,35 (m, 2 H), 6,14 - 6,30 (m, 1 H), 5,25 - 5,56 (m, 1 H), 5,01 - 5,11 (m, 1 H), 4,35 - 4,52 (m, 1 H), 3,63 - 3,81 (m, 1 H), 3,24 - 3,30 (m, 1 H), 2,98 - 3,16 (m, 1 H), 2,89 (ddd, J = 17,2, 13,4, 3,7 Hz, 1 H), 2,36 (m, 2 H), 2,17 - 2,26 (m, 1 H), 1,98 - 2,17 (m, 3 H), 1,67 - 1,92 (m, 3 H), 1,49 - 1,64 (m, 4 H), 1,39 (s, 3 H), 1,20 - 1,33 (m, 1 H).Etapa 4: 2-(4-Fluorofenil)-2-metilpropanoato de metila
Figure img0294
[00800]Hidreto de sódio (suspensão a 60 % em óleo mineral) (2,64 g, 66 mmols) foi lavado com heptanos (2 x 20 ml) e colocado em suspensão em THF (40 ml). Uma solução de 2-(4-fluorofenil)acetato de metila (5,05 g, 30 mmols) em THF (10 ml) foi adicionada e agitada durante 30 min. Iodeto de metila (5,6 ml, 90 mmols) foi adicionado em porções de 1 ml durante 30 min, inicialmente com resfriamento a 10 °C, depois aquecendo suavemente a 50 °C conforme a evolução do gás foi interrompida. Depois de 4,5 h, água (50 ml) foi adicionada e a mistura extraída com EtO- Ac (2 x 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 ml) e secas em MgSO4 antes da filtragem e evaporação à secura para deixar um óleo laranja (5,08 g, 79 %, 91 % puro por RMN de 1H): MS (ESI+) para C11H13FO2 m/z 196,2 [M + H]+; LC pureza 80 % (tempo de retenção, 1,94 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 7,29 - 7,34 (m, 2 H), 6,98 - 7,05 (m, 2 H), 3,66 (s, 3 H), 1,58 (s, 6 H).Etapa 5: 2-(4-Fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol
Figure img0295
[00801]2-(4-Fluorofenil)-2-metilpropanoato de metila (5,08 g, 26,9 mmols) foi dissolvido em THF (51 ml) e esfriado a 0 °C antes de adicionar uma solução de hi- dreto de lítio e alumínio (1M em THF) (38,8 ml, 38,8 mmols), às gotas, durante 30 min. Quando a adição foi concluída, a reação foi aquecida na temperatura ambiente e agitada durante 3 h. Depois de reesfriamento em gelo, água (1,35 ml) foi cuidadosamente adicionada seguido por NaOH a 15 % em água (1,35 ml) e mais água (4,05 ml). A suspensão foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min antes de o sólido ser separado por filtração e lavado com THF (2 x 30 ml). O solvente foi evaporado e o produto purificado por cromatografia com EtOAc/heptanos para fornecer um óleo claro (3,48 g, 80 %): MS (ESI+) para C10H13FO m/z 168,2 [M + H]+; LC pureza 94 % (tempo de retenção, 1,76 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 7,41 - 7,32 (m, 2 H), 7,15 - 7,00 (m, 2 H), 3,62 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 1,35 (s, 6 H).Etapa 6: 1-Fluoro-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)benzene
Figure img0296
[00802]Hidreto de sódio (1,664 g, 41,6 mmols, dispersão a 60 % em óleo mineral) foi colocado em suspensão em THF seco (18 ml) sob N2 e 2-(4-fluorofenil)- 2-metilpropan-1-ol (3,500 g, 20,8 mmols) em THF seco (18 ml) foi lentamente adicionado à suspensão a 0 °C. Depois da conclusão da adição, a reação foi aquecida na temperatura ambiente e deixada durante 1 h. Iodometano (6,5 ml, 0,104 mmol) foi lentamente adicionado na temperatura ambiente e a reação deixada durante 3 h. A reação foi interrompida pela adição lenta de H2O (35 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 35 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica usando entre heptano a 100 % a EtOAc a 10 %:heptano a 90 % como eluente para fornecer o produto como um óleo incolor (2,991 g, 79 %): LC pureza 98 % (tempo de retenção, 2,16 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 7,40-7,32 (m, 2 H), 7,11-6,96 (m, 2 H), 3,39 (s, 2 H), 3,33 (s, 3 H), 1,33 (s, 6 H).Etapa 7: 1-Fluoro-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)-2-nitrobenzeno
Figure img0297
[00803]Fluoro-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)benzeno (2,987 g, 16,4 mmols) foi esfriado em um banho de água gelada salgada a -20 °C e ácido sulfúrico (27 ml) foi lentamente adicionado, às gotas, com agitação. Em adição de ácido sulfúrico, a solução se tornou um laranja brilhante. Ácido nítrico (3 ml) foi lentamente adicionado, às gotas, durante 15 a 20 min. Em adição de ácido nítrico, a solução se tornou amarela/marrom escura e algum sólido branco precipitado. A reação foi deixada durante 30 min, depois vertida em gelo (450 g). A mistura foi extraída com DCM (2 x 225 ml) e os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por croma- tografia instantânea em coluna de sílica usando entre 100 % de heptanos a 20 % de EtOAc:80 % de heptanos para fornecer o produto como um óleo amarelo (2,239 g, 60 %): LC pureza 96 % (tempo de retenção, 2,18 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 8,08 (dd, J = 7,1, 2,5 Hz, 1 H), 7,67 (ddd, J = 8,7, 4,1, 2,5 Hz, 1 H), 7,23 (dd, J = 10,6, 8,8 Hz, 1 H), 3,41 (s, 2 H), 3,33 (s, 3 H), 1,37 (s, 6 H).Etapa 8: 1-Azido-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)-2-nitrobenzeno
Figure img0298
[00804]Fluoro-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)-2-nitrobenzeno (2,227 g, 9,80 mmols) foi dissolvido em DMF (25 ml) e azida sódica (1,274 g, 19,6 mmols) foi adicionada na temperatura ambiente e a reação agitada durante a noite. A reação foi interrompida com água (75 ml) e a mistura foi extraída com TBME (3 x 75 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica usando entre 100 % de heptano a 15 % de EtOAc:85 % de heptano como eluente para fornecer o produto como um óleo amarelo (2,301 g, 75 %, 80 % puro): LC pureza 79 % (tempo de retenção, 2,15 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 7,97 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1 H), 7,33 - 7,22 (m, 1 H), 3,40 (s, 2 H), 3,33 (s, 3 H), 1,36 (s, 6 H).Etapa 9: 4-(1-Metóxi-2-metilpropan-2-il)benzeno-1,2-diamina
Figure img0299
[00805]Azido-4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)-2-nitrobenzeno (1,102 g, 3,52 mmols) foi dissolvido em EtOH (30 ml) e Pd/C (10 % em peso.) (0,110 g, 10 % em peso) foi adicionado. A reação foi purgada 3 vezes com N2, depois 3 vezes com H2 e a reação agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica usando entre 100 % de heptano a 100 % de EtOAc como eluente para fornecer o produto como um óleo marrom claro que se solidificou em um sólido laranja escuro (0,481 g, 63 %, 90 % puro): MS (ESI+) para C11H18N2O m/z 195,1 [M + H]+; LC pureza 87 % (tempo de retenção, 0,99 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 6,65 (dd, J = 11,2, 1,9 Hz, 2 H), 6,58 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 3,26 (s, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 1,20 (s, 6 H).Etapa 10: 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil- tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]-N-[2-amino-4-(1- metóxi-2-metilpropan-2-il)fenil]propanamida
Figure img0300
[00806]Ácido 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]propanoico (0,620 g, 1,39 mmol), 4-(1-metóxi-2-metilpropan-2-il)benzeno-1,2-diamina (0,466 g, 2,08 mmols, 87 % puro), EDC.HCl (0,532 g, 2,78 mmols) e OXIMA (etil- ciano(hidroxiimino)acetato) (0,395 g, 2,78 mmols) foram adicionados a um frasco com um agitador, depois purgados com N2. DCM seco (22 ml) e Et3N seco (1,2 ml, 8,33 mmols) foram adicionados na temperatura ambiente e a reação deixada durante a noite. A reação foi interrompida pela adição de solução de NaHCO3 sat. (25 ml) e a camada orgânica separada. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 25 ml) e as camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica usando primeiro 100 % de EtOAc para eluir a diani- lina, depois entre 100 % de DCM a 20 % de NH3 2 M em MeOH:80 % de DCM como eluente para fornecer o produto como um óleo marrom (1,081 g, quant.): MS (ESI+) para C32H46N8O5 m/z 623,4 [M + H]+; LC pureza 98 % (tempo de retenção, 1,36 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 8,39 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,99 (s, 1 H), 7,42 - 7,30 (m, 1 H), 7,24 - 7,00 (m, 1 H), 6,96 - 6,81 (m, 1 H), 6,12 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 5,77 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,63 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 5,14 - 4,93 (m, 1 H), 4,60 - 4,31 (m, 1 H), 4,28 - 3,69 (m, 2 H), 3,48 - 3,03 (m, 5 H), 2,65 - 2,48 (m, 1 H), 2,46 - 2,33 (m, 1 H), 2,34 - 2,10 (m, 7 H), 2,10 - 1,98 (m, 1 H), 2,00 - 1,66 (m, 4 H), 1,62 (d, J = 15,7 Hz, 13 H), 1,44 (d, J = 6,5 Hz, 4 H), 1,30 (t, J = 3,3 Hz, 7 H), 1,12 (d, J = 52,3 Hz, 1 H). Etapa 11: 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-{[(3-{2-[5-(1-Metóxi-2-metilpropan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-2-il]etil}ciclobutil)(metil)amino]metil}-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina
Figure img0301
[00807]3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetil-tetra- hidro-2H-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4-il]metil}(metil)amino)ciclobutil]-N-[2-amino-4-(1- metóxi-2-metilpropan-2-il)fenil]propanamida (1,036 g, 1,66 mmol) foi dissolvida em AcOH (17 ml) e aquecida a 50 °C durante 5 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvido em DCM (75 ml) e solução de NaHCO3 sat. (75 ml) foi adicionada. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 75 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o produto bruto como um óleo laranja escuro (0,850 g, 94 %). O produto foi purificado usando HPLC prep neutra para fornecer o produto como um óleo amarelo claro (0,485 g, 47 %, 88 % puro): MS (ESI+) para C32H44N8O4 m/z 605,4 [M + H]+; LC pureza 88 % (tempo de retenção, 1,25 min); RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) δH 10,44 (dd, J = 207,7, 22,9 Hz, 1 H), 8,41 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 8,16 (d, J = 13,8 Hz, 1 H), 7,89-7,58 (m, 1 H), 7,54 - 7,29 (m, 2 H), 6,15 (d, J = 10,9 Hz, 1 H), 5,92 - 5,56 (m, 3 H), 4,98 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 4,76 - 4,39 (m, 1 H), 3,47 (d, J = 6,2 Hz, 2 H), 3,33 (d, J = 4,8 Hz, 3 H), 2,98 - 2,43 (m, 4 H), 2,42 - 2,00 (m, 6 H), 1,99 - 1,88 (m, 2 H), 1,77 - 1,66 (m, 1 H), 1,64 (s, 3 H), 1,61 - 1,48 (m, 1 H), 1,44 (d, J = 8,1 Hz, 3 H), 1,40 (d, J = 7,9 Hz, 6 H), 1,28 (dd, J = 16,0, 9,0 Hz, 1 H). Etapa 12: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-{[(3-{2-[5-(1-metóxi-2- etilpropan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-2-il]etil}ciclobutil)(metil)amino]metil}oxolano-3,4- diol
Figure img0302
[00808]9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-{[(3-{2-[5-(1-Metóxi-2-metilpropan-2-il)-1H-1,3- benzodiazol-2-il]etil}ciclobutil)(metil)amino]metil}-2,2-dimetil-tetra-hidro-2H-furo[3,4- d][1,3]dioxol-4-il]-9H-purin-6-amina (0,485 g, 0,706 mmol, 88 % puro) foi dissolvida em MeOH (20 ml) e HCl conc. (4,9 ml, 10 vol) foi adicionado na temperatura ambiente e a reação deixada durante 2,5 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido na quantidade mínima de MeOH (~2 ml). A reação foi interrompida pela adição de solução de NaHCO3 sat. (10 ml) e EtOAc (30 ml). As camadas foram se- paradas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o produto bruto. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica usando entre 100 % de DCM e 20 % de NH3 2 M em MeOH:80 % de DCM como eluente para fornecer o produto como uma espuma branca (0,213 g, 53 %): MS (ESI+) para C29H40N8O4 m/z 565,4 [M + H]+; LC pureza 100 % (tempo de retenção, 2,11 min) (7 min); RMN de 1H (500 MHz, d4-MeOD) δH 8,28 (d, J = 4,1 Hz, 1 H), 8,22 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 7,51 (s, 1 H), 7,42 (dd, J = 8,5, 2,1 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 6,01 (t, J = 3,9 Hz, 1 H), 4,84 - 4,74 (m, 1 H), 4,41 - 4,29 (m, 1 H), 4,29-4,19 (m, 1 H), 3,48 (s, 2 H), 3,30 (s, 3 H), 3,14-2,98 (m, 1 H), 2,99 - 2,89 (m, 1 H), 2,90 - 2,73 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,37 - 2,30 (m, 1 H), 2,28 - 2,10 (m, 2 H), 2,08 - 1,86 (m, 4 H), 1,70 - 1,51 (m, 1 H), 1,38 (s, 6 H). Composto 69: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol.
Figure img0303
[00809](1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1r,3S)- 3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,06 (s, 1 H), 7,47 (brs, 1 H), 7,38 (d, J = 8,0 HZ, 1 H), 7,27 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,19 (s, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 4,32 (s, 1 H), 3,88 (s, 1 H), 2,80 (brs, 2 H), 2,68 (brs, 1 H), 2,49 - 2,10 (m, 9 H), 1,90 (brs, 2 H), 1,62 - 1,49 (m, 3 H), 1,35 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 532,3 [M + 1]+.
[00810]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00811]Uma solução de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4- amina (20 g, 43,91 mmols), 3-(3-oxociclobutil)propanoato de benzila (12,2 g, 52,69 mmols) e HOAc (15 mL) em DCE (200 mL) foi agitada a 30 °C durante 3 h. NaBH(OAc)3 (18,6 g, 87,81 mmols) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 30 °C durante um adicional de 1 h. A mistura foi lavada com água (100 mL x 2) e salmoura (100 mL), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica usando EA : DCM : MeOH = 10 : 10 : 1 como eluente para fornecer o composto desejado (21 g, rendimento: 65 %, cis/trans = 52/47) como um sólido amarelo. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,16 (brs, 1 H), 7,36 - 7,29 (m, 5 H), 7,22 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,15 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,66 (brs, 1 H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,43 (dd, J = 8,5 e 2,0 Hz, 1 H), 6,20 (brs, 1 H), 5,41 - 5,39 (m, 1 H), 5,08 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 4,99 - 4,95 (m, 1 H), 4,66 (s, 2 H), 4,30 - 4,25 (m, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,76 (s, 3 H), 3,38 - 3,35 (m, 0,5 H), 3,11 - 3,06 (m, 0,5 H), 2,92 - 2,82 (m, 2 H), 2,29 - 2,18 (m, 3 H), 2,12 - 2,05 (m, 0,5 H), 1,90 - 1,68 (m, 4 H), 1,63 - 1,61 (m, 1 H), 1,60 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H), 1,35 - 1,28 (m, 0,5 H), 1,25 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 1,15 - 1,12 (m, 0,5 H) ppm; ESI-MS (modo negativo, m/z): 670,3 [M-1]+. 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00812]Uma mistura de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (4 g, 5,95 mmols), 2- iodopropano (6 g, 35,72 mmols) e K2CO3 (2,5 g, 17,86 mmols) em CH3CN (50 mL) foi agitada em refluxo durante 2 dias. A mistura foi esfriada até a temperatura ambiente, filtrada e a torta filtrada foi lavada com CH3CN (20 mL). O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por Combi-Flash (80 g de gel de sílica, início EA : DCM : MeOH = 10 : 10 : 0 a 10 : 10 : 1 por gradiente, 60 mL/min, 40 min, 2,4 L volume total do solvente) para fornecer o composto desejado (3 g, rendimento: 71 %) como um sólido amarelo. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,15 (s, 1 H), 7,38 - 7,29 (m, 5 H), 7,19 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,53 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,41 (dd, J = 8,5 e 2,0 Hz, 1 H), 6,20 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,36 - 5,32 (m, 1 H), 5,09 (s, 1 H), 5,07 (s, 1 H), 4,94 - 4,89 (m, 3 H), 4,65 (s, 2 H), 4,17 - 4,14 (m, 1 H), 3,82 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,41 - 3,35 (m, 0,5 H), 3,04 - 2,95 (m, 0,5 H), 2,94 - 2,86 (m, 1 H), 2,72 - 2,52 (m, 2 H), 2,25 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 2,21 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,05 - 1,90 (m, 2 H), 1,90 - 1,82 (m, 0,5 H), 1,76 - 1,70 (m, 0,5 H), 1,65 - 1,55 (m, 5 H), 1,42 - 1,34 (m, 4 H), 0,95 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,83 - 0,80 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 714,4 [M + 1]+. ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico
[00813]A uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (2,7 g, 3,78 mmols) em THF/MeOH (15 mL/15 mL) foi adicionado uma solução de LiOH.H2O (1,6 g, 37,82 mmols) em água (5 mL). A mistura foi agitada a 30 °C durante 2 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água (10 mL) e extraído com EA (15 mL x 2). As camadas de água da suspensão foram ajustadas ao pH = 3 - 4 com solução de HCl 1 N e extraídas com EA (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o composto desejado como um sólido amarelo (2,9 g). RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,20 (s, 1 H), 7,92 (s, 0,5 H), 7,38 - 7,32 (m, 3 H), 7,28 - 7,23 (m, 1,5 H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,68 (brs, 1 H), 6,56 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,25 (s, 1 H), 5,51 - 5,47 (m, 1 H), 5,18 - 5,13 (m, 1 H), 4,66 (s, 2 H), 4,61 (s, 1 H), 4,43 - 4,40 (m, 1 H), 3,96 - 3,90 (m, 0,5 H), 3,85 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H), 3,65 - 3,58 (m, 0,5 H), 3,50 - 3,40 (m, 2 H), 2,46 - 2,36 (m, 1 H), 2,20 - 2,00 (m, 4 H), 1,98 - 1,70 (m, 2,5 H), 1,70 - 1,58 (m, 4,5 H), 1,40 (s, 3 H), 1,18 (d, J = 5,0 Hz, 3 H), 0,90 (t, J = 6,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 624,3 [M + 1]+.N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
[00814]A uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil) amino)ciclobutil)propanoico (2,7 g, 4,33 mmols), 4- (trifluorometóxi)benzeno-1,2-diamina (1,23 g, 6,49 mmols), HATU (2,5 g, 6,49 mmols) e HOAT (0,88 g, 6,49 mmols) em DCM (30 mL) foi adicionada TEA (1,8 mL, 12,99 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. À mistura foi adicionado DCM (70 mL) e lavada com água (20 mL x 2) e salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por Combi-Flash (gel de sílica 80 g, início EA : DCM : MeOH = 10 : 10 : 0 a 10 : 10 : 2 por gradiente, 60 mL/min, 40 min, volume total de solvente 2,4 L) para fornecer para fornecer o composto desejado (2,2 g, rendimento: 67 % (duas etapas) como um sólido marrom. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,21 (s, 1 H), 7,28 - 7,12 (m, 3 H), 6,73 (brs, 1 H), 6,69 (brs, 1 H), 6,56 - 6,52 (m, 2 H), 6,42 (dd, J = 8,0 e 2,5 Hz, 1 H), 6,26 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,48 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 5,20 - 5,16 (m, 1 H), 4,66 (s, 2 H), 4,46 - 4,42 (m, 1 H), 4,08 - 3,98 (m, 0,5 H), 3,84 (s, 3 H), 3,76 (s, 3 H), 3,75 - 3,69 (m, 0,5 H), 3,60 - 3,38 (m, 2 H), 2,60 - 2,30 (m, 3 H), 1,92 - 1,86 (m, 1 H), 1,80 - 1,70 (m, 1 H), 1,59 (d, J = 3,5 Hz, 3 H), 1,40 (s, 3 H), 1,25 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,00 - 0,80 (m, 2 H) ppm; ESI-MS (m/z): 798,3 [M + 1]+.N-(2,4-Dimetoxibenzil)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((isopropil(3-(2-(5- (trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
[00815]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (2,2 g, 2,5 mmols) em HOAc (20 mL) foi agitada a 65 °C durante 5 h. A mistura foi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada. O resíduo foi dissolvido em DCM (50 mL), lavado com solução de Na2CO3 a 15 % (20 mL x 2), água (20 mL) e salmoura (30 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por Combi-Flash (gel de sílica 80 g, início EA : DCM : MeOH = 10 : 10 : 0 a 10 : 10 : 2 por gradiente, 60 mL/min, 35 min, volume total de solvente 2,1 L) para fornecer o composto desejado (1,4 g) como um sólido marrom, que foi separado por HPLC quiral para fornecer cis-isômero (600 mg, rendimento: 28 %) e isômero trans (480 mg, rendimento: 22 %).
[00816]cis-isômero: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,17 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,20 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,68 (brs, 1 H), 6,49 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,39 (dd, J = 8,5 e 2,0 Hz, 1 H), 6,19 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,35 (dd, J = 6,0 e 2,0 Hz, 1 H), 4,68 - 4,60 (m, 2 H), 4,18 - 4,13 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 3,73 (s, 3 H), 3,10 - 3,02 (m, 1 H), 2,95 - 2,88 (m, 1 H), 2,78 - 2,72 (m, 2 H), 2,69 - 2,57 (m, 2 H), 2,12 - 2,02 (m, 2 H), 1,86 - 1,76 (m, 2 H), 1,57 (s, 3 H), 1,52 - 1,40 (m, 2 H), 1,37 (s, 3 H), 0,96 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 780,4 [M + 1]+.
[00817]trans-isômero: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,15 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,20 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,68 (brs, 1 H), 6,51 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,40 (dd, J = 8,0 e 2,5 Hz, 1 H), 6,20 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,35 (dd, J = 6,0 e 2,0 Hz, 1 H), 4,64 (s, 2 H), 4,20 - 4,16 (m, 1 H), 3,82 (s, 3 H), 3,73 (s, 3 H), 3,50 - 3,42 (m, 1 H), 2,95 - 2,90 (m, 1 H), 2,80 (t, J = 6,0 Hz, 2 H), 2,75 - 2,58 (m, 2 H), 2,12 - 1,95 (m, 4 H), 1,75 - 1,65 (m, 2 H), 1,58 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H), 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 780,4 [M + 1]+. Composto 70: (1R,2S,3R,5R)-3-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano-1,2-diol
Figure img0304
[00818]3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino) ciclobutil)propanoato de metila
[00819]Uma solução de 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de metila (1,85 g, 3,12 mmols) e NaBH3CN (590 mg, 9,36 mmols) em MeOH (25 mL) foi ajustado ao pH = 6 com AcOH, depois formaldeído (936 mg, 31,2 mmols) adicionado. A reação foi agitada a 25 °C durante a noite. A reação foi interrompida com NaHCO3 sat. (5 mL), evaporada, adicionada água (10 mL), extraída com DCM (150 mL x 3), lavada com salmoura (80 mL), seca e concentrada. O resíduo foi purificado por SGC para obter o composto desejado (1,85 g, rendimento: 97 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,12 (s, 1 H), 7,22 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,55 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,44 (dd, J = 8,5 e 2,5 Hz, 1 H), 5,01 - 4,98 (m, 2 H), 4,65 (s, 2 H), 4,60 - 4,58 (m, 1 H), 4,30 (s, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 3,76 (s, 3 H), 3,66 (s, 3 H), 3,44 - 3,38 (m, 1 H), 2,80 - 2,73 (m, 2 H), 2,48 - 2,43 (m, 4 H), 2,32 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,20 - 2,16 (m, 4 H), 1,95 - 1,94 (m, 2 H), 1,82 - 1,81 (m, 2 H), 1,56 (s, 3 H), 1,31 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 608,3 [M + 1]+.Ácido 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico
[00820]Uma solução de 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de metila (1,85 g, 3,04 mmols) e LiOH (382 mg, 15,24 mmols) em THF/MeOH/H2O (1:1:1, 30 mL) foram agitados a 50 °C durante 2 h. A reação foi concentrada para obter o composto desejado (2,25 g, sal, pureza: 85 %) como um sólido branco. O material bruto foi diretamente usado etapa seguinte sem purificação adicional. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,11 (s, 1 H), 7,92 (s, 1 H), 7,30 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,44 (dd, J = 10,0 e 2,5 Hz, 1 H), 5,05 - 5,03 (m, 2 H), 4,73 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,65 (s, 2 H), 3,90 - 3,85 (m, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H), 3,30 - 3,18 (m, 2 H), 2,82 (s, 3 H), 2,65 - 2,55 (m, 1 H), 2,53 - 2,46 (m, 3 H), 2,27 - 2,20 (m, 3 H), 2,12 - 2,11 (m, 2 H), 1,83 - 1,82 (m, 2 H), 1,57 (s, 3 H), 1,32 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 594,3 [M + 1]+.N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
[00821]Uma solução de ácido 3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d] [1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (2,25 g, 3,8 mmols) HOAt (680 mg, 5 mmols) e HATU (1,9 g, 5 mmols) em DCM (60 mL) foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h, depois 4-terc-butilbenzendiamina (656 mg, 4 mmols) e TEA (1,21 g, 12 mmols) em DCM (3 mL) foram adicionadas às gotas. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. À reação foram adicionados água (20 mL) e DCM (60 mL), extraída com DCM (60 mL x 2), lavada com salmoura (10 mL), seca e concentrada. O resíduo foi purificado por SGC para obter o composto desejado (1,1 g, rendimento: 46 %) como um sólido amarelado. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,11 (s, 1 H), 7,21 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,98 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,92 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,77 (dd, J = 8,0 e 1,5 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,43 (dd, J = 8,0 e 1,5 Hz, 1 H), 5,02 - 4,99 (m, 2 H), 4,65 - 4,61 (m, 3 H), 3,83 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,60 - 3,52 (m, 1 H), 2,97 - 2,83 (m, 2 H), 2,58 (s, 3 H), 2,54 - 2,38 (m, 4 H), 2,33 - 2,29 (m, 2 H), 2,18 - 2,04 (m, 3 H), 1,94 - 1,91 (m, 2 H), 1,55 (s, 3 H), 1,30 (s, 3 H), 1,25 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 740,5 [M + 1]+. 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol- 4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
[00822]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-((1R,3s)-3- ((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)- 2,2-dimetiltetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (1,1 g, 1,49 mmol) em AcOH (8 mL) foi aquecida a 65 °C durante 3 h. A reação foi evaporada, dissolvida em MeOH (5 mL) ajustada ao pH = 8 com solução saturada de NaHCO3, concentrada e purificada por TLC prep para obter o composto desejado (620 mg, 58 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,10 (s, 1 H), 7,48 (brs, 1 H), 7,38 (brs, 1 H), 7,28 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,62 (brs, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,98 - 4,90 (m, 2 H), 4,64 (s, 2 H), 4,50 (brs, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,01 - 2,98 (m, 1 H), 2,83 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 2,44 - 2,34 (m, 4 H), 2,16 (s, 3 H), 2,12 - 1,96 (m, 6 H), 1,84 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 1,53 (s, 3 H), 1,36 (s, 9 H), 1,28 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 722,4 [M + 1]+.(1R,2S,3R,5R)-3-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1s,3R)-3-(2- (5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)ciclopentano- 1,2-diol
[00823]Uma solução de 7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidro-3aH- ciclopenta[d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (620 mg, 0,86 mmol) em TFA (5 mL, 90 %) foi agitada a 25 °C durante 1 hora. A reação foi concentrada à secura, dissolvida em MeOH (5 mL) e ajustada ao pH = 8 com solução saturada de K2CO3. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 0,5 h. Depois, a reação foi concentrada para obter o resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep para obter o composto desejado (330 mg, rendimento de 73 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,07 (s, 1 H), 7,49 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,40 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J = 11,0 e 2,5 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,92 - 4,89 (m, 1 H), 4,33 (dd, J = 9,5 e 8,5 Hz, 1 H), 3,90 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 3,03 - 2,99 (m, 1 H), 2,85 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 2,50 - 2,22 (m, 4 H), 2,16 (s, 3 H), 2,15 - 1,98 (m, 5 H), 1,88 (t, J = 10,0 Hz, 2 H), 1,68 - 1,59 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 532,3 [M + 1]+. Composto 71: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0305
[00824]Uma mistura de cis-9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc- butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (920 mg, 1,60 mmol) em HCl 3 M/MeOH (20 mL) foi agitada a 35 °C durante 2 h e evaporada à secura. O resíduo foi dissolvido em MeOH (15 mL) e solução saturada de K2CO3 foi adicionada para ajustar a solução ao pH 8. Depois, a mistura foi agitada durante 5 min e filtrada. O filtrado foi concentrado e o material bruto foi purificado por HPLC prep para obter o alvo (400 mg, rendimento: 47 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,40 - 7,37 (m, 1 H), 7,29 - 7,26 (m, 1 H), 5,98 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,69 (t, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,24 - 4,20 (m, 1 H), 4,18 - 4,15 (m, 1 H), 2,81 - 2,76 (m, 2 H), 2,75 - 2,69 (m, 1 H), 2,67 - 2,62 (m, 2 H), 2,25 - 2,18 (m, 1 H), 2,14 (s, 3 H), 1,90 - 1,85 (m, 3 H), 1,49 - 1,41 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 535,3 [M + 1]+. Composto 72: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0306
[00825]Uma mistura de trans-9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc- butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3] dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (420 mg, 0,73 mmol) em HCl 3 M/MeOH (20 mL) foi agitada a 35 °C durante 2 h e evaporada à secura. O resíduo foi dissolvido em MeOH (15 mL) e solução saturada de K2CO3 foi adicionada para ajustar a solução ao pH 8. Depois, a mistura foi agitada durante 5 min e filtrada. O filtrado foi concentrado e o material bruto foi purificado por HPLC prep para obter o alvo (198 mg, rendimento: 51 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,28 - 7,26 (m, 1 H), 5,98 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,69 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,23 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,19 - 4,16 (m, 1 H), 3,06 - 3,03 (m, 1 H), 2,80 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,68 - 2,64 (m, 2 H), 2,16 (s, 3 H), 2,09 - 1,95 (m, 5 H), 1,85 - 1,80 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H) ppm; ESIMS (m/z): 535,3 [M + 1]+. 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00826]A uma mistura de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (3,76 g, 7,2 mmols) e NaBH3CN (5,9 g, 93,6 mmols) em MeOH (40 mL) foi adicionado AcOH para ajustar ao pH = 6. Depois, MeCHO a 40 % (8,7 mL, 122,5 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada a 30 °C durante 1,5 h. Água (15 mL) foi adicionada e a mistura foi concentrada a vácuo. Depois, a mistura foi extraída com DCM (30 mL x 3). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por SGC (DCM:MeOH = 100:1 - 20:1) para obter o alvo (2,6 g, rendimento: 66 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,26 (s, 1 H), 8,23 (m, 1 H), 7,37 - 7,28 (m, 5 H), 6,24 (s, 1 H), 5,52 - 5,49 (m, 1 H), 5,10 - 5,06 (m, 3 H), 4,41 - 4,40 (m, 1 H), 3,20 - 2,90 (m, 2 H), 2,80 - 2,60 (m, 2 H), 2,12 - 1,77 (m, 4 H), 1,74 - 1,60 (m, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,26 - 1,22 (m, 3 H), 0,94 - 0,89 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 551,3 [M + 1]+. Ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanoico
[00827]A uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (2,6 g, 4,73 mmols) em MeOH (40 mL) foi adicionado Pd a 10 %/C (2,3 g) e a mistura foi agitada sob atmosfera de H2 a 50 °C durante 20 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para obter o alvo (2 g, rendimento: 92 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27 (s, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 6,30 (s, 1 H), 5,52 - 5,49 (m, 1 H), 5,14 - 5,12 (m, 1 H), 4,51 - 4,47 (m, 1 H), 3,43 - 3,36 (m, 2 H), 3,22 - 3,15 (m, 1 H), 2,94 - 2,89 (m, 2 H), 2,28 - 2,05 (m, 4 H), 1,96 - 1,80 (m, 2 H), 1,74 - 1,69 (m, 1 H), 1,65 - 1,59 (m, 5 H), 1,41 - 1,36 (m, 4 H), 1,03 - 0,99 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 461,3 [M + 1]+. N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin- 9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanamida
[00828]A uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(etil)amino)ciclobutil)propanoico (2 g, 4,35 mmols), HOAT (768 mg, 5,65 mmols), HATU (2,2 g, 5,65 mmols) e TEA (3 mL, 21,3 mmols) em DCM (40 mL) foi adicionado 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (785 mg, 4,79 mmols) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Água (15 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (30 mL x 2). A fase orgânica combinada foi lavada com H2O (20 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado por SGC (DCM:MeOH = 70:1 - 20:1) para obter o alvo (1,6 g, rendimento: 61 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 - 8,27 (m, 1 H), 8,24 - 8,23 (m, 1 H), 7,10 - 6,92 (m, 2 H), 6,81 - 6,76 (m, 1 H), 6,22 (s, 1 H), 5,54 - 5,52 (m, 1 H), 5,03 (s, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 3,03 - 2,50 (m, 5 H), 2,32 - 2,26 (m, 2 H), 2,16 - 1,80 (m, 4 H), 1,73 - 1,69 (m, 2 H), 1,59 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,28 - 1,24 (m, 9 H), 0,94 - 0,85 (m, 3 H) ppm; ESIMS (m/z): 607,3 [M + 1]+.9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil) ci- clobutil)(etil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6- amina
[00829]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(etil)amino)ciclobutil) propanamida (1,6 g, 2,64 mmols) em AcOH (20 mL) foi agitada a 65 °C durante 15 h. A solução foi concentrada a vácuo e diluída com DCM (30 mL). A mistura foi lavada com solução saturada de NaHCO3 (20 mL x 2) e salmoura (20 mL x 1). A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para obter o alvo 1,5 g (rendimento: 97 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 - 8,26 (m, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,40 - 7,38 (m, 1 H), 7,30 - 7,27 (m, 1 H), 6,20 - 6,18 (m, 1 H), 5,52 - 5,49 (m, 1 H), 5,02 - 4,98 (m, 1 H), 4,34 - 4,31 (m, 1 H), 2,95 - 2,92 (m, 1 H), 2,79 - 2,68 (m, 4 H), 2,56 - 2,50 (m, 2 H), 2,09 - 1,81 (m, 5 H), 1,71 - 1,63 (m, 1 H), 1,58 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H), 1,36 (s, 9 H), 1,35 - 1,28 (m, 1 H), 0,89 - 0,85 (m, 3 H) ppm; ESIMS (m/z): 589,3 [M + 1]+.
[00830]Uma mistura de 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (1,35 g, 2,30 mmols) em HCl 3 M/MeOH (20 mL) foi agitada a 35 °C durante 2 h e evaporada à secura. O resíduo foi dissolvido em MeOH (15 mL) e solução saturada de K2CO3 foi adicionada para ajustar a solução ao pH 8. Depois, a mistura foi agitada durante 5 min e filtrada. O filtrado foi concentrado e o material bruto foi separado por HPLC quiral e purificado por HPLC prep para obter o produto cis (280 mg, rendimento total: 22 %) e produto trans (150 mg, rendimento total: 12 %) como sólidos brancos.Composto 73: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0307
[00831]Cis-isômero: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,39 - 7,37 (m, 1 H), 7,29 - 7,26 (m, 1 H), 5,97 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,67 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,24 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,18 - 4,14 (m, 1 H), 3,06 - 3,03 (m, 1 H), 2,91 - 2,81 (m, 2 H), 2,79 - 2,75 (m, 2 H), 2,64 - 2,58 (m, 2 H), 2,25 - 2,19 (m, 1 H), 1,89 - 1,86 (m, 3 H), 1,52 - 1,47 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H), 0,98 (t, J = 7,0 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 549,3 [M + 1]+.Composto 74: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-Amino-9H-purin-9-il)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5- (terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(etil)amino)metil)tetra-hidrofurano- 3,4-diol
Figure img0308
[00832]Isômero trans: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,39 - 7,37 (m, 1 H), 7,29 - 7,26 (m, 1 H), 5,97 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,67 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,24 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,18 - 4,14 (m, 1 H), 3,42 - 3,35 (m, 1 H), 2,91 - 2,78 (m, 4 H), 2,64 - 2,58 (m, 2 H), 2,10 - 2,07 (m, 3 H), 1,99 - 1,96 (m, 2 H), 1,85 - 1,79 (m, 2 H), 1,35 (m, 9 H), 0,98 (t, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 549,3 [M + 1]+.Composto 76: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((isopropil((1s,3R)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0309
[00833]Uma solução de trans-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6- ((isopropil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (480 mg, 0,62 mmol) em TFA a 90 % (5 mL) foi agitada a 30 °C durante 2 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado MeOH (6 mL) e ajustado ao pH = 9~10 com NH3.H2O. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (182 mg, rendimento: 50 %) como um sólido branco. RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δH 8,09 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,27 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 6,11 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,44 (t, J = 4,8 Hz, 1 H), 4,12 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,06 - 4,01 (m, 1 H), 3,62 - 3,53 (m, 1 H), 3,10 - 3,00 (m, 1 H), 2,92 - 2,65 (m, 4 H), 2,25 - 2,15 (m, 2 H), 2,10 - 1,98 (m, 3 H), 1,85 - 1,76 (m, 2 H), 1,03 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,98 (d, J = 6,4 Hz, 3 H) ppm; RMN de 19F (400 MHz, MeOD): δ -59,80 ppm; ESI-MS (m/z): 590,3 [M + 1]+.Compostos 77 e 78
Figure img0310
Composto 78: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(2,2,2-trifluoroetil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol:
Figure img0311
[00834]RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,09 (s, 1 H), 7,48 (brs, 1 H), 7,40 - 7,37 (m, 1 H), 7,28 (dd, J = 10,5 e 1,5 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,11 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,44 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,13 - 4,08 (m, 2 H), 3,30 - 3,15 (m, 3 H), 3,09 - 3,03 (m, 1 H), 2,97 - 2,90 (m, 1 H), 2,78 (t, J = 9,0 Hz, 2 H), 2,28 - 2,20 (m, 2 H), 1,92 - 1,78 (m, 3 H), 1,55 - 1,45 (m, 2 H), 1,37 (s, 9 H) ppm; LC-MS (m/z): 602,3 [M + 1]+.Composto 77: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(2,2,2- trifluoroetil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol:
Figure img0312
[00835]RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,09 (s, 1 H), 7,48 (brs, 1 H), 7,39 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 10,5 e 2,0 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,12 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,45 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,14 - 4,09 (m, 2 H), 3,68 - 3,60 (m, 1 H), 3,30 - 3,15 (m, 2 H), 3,11 - 3,04 (m, 1 H), 2,97 - 2,90 (m, 1 H), 2,80 (t, J = 9,5 Hz, 2 H), 2,12 - 2,03 (m, 3 H), 2,00 - 1,90 (m, 2 H), 1,90 - 1,80 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H) ppm; LC-MS (m/z): 602,3 [M + 1]+. 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-Amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00836]A uma mistura de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (3,76 g, 7,2 mmols) e NaBH3CN (5,9 g, 93,6 mmols) em MeOH (40 mL) foi adicionado AcOH para ajustar ao pH = 6. Depois, HCHO a 37 % (8,7 mL, 122,4 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada a 30 °C durante 1,5 h. Água (15 mL) foi adicionada e a mistura foi concentrada a vácuo. Depois, a mistura foi extraída com DCM (30 mL x 3). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por SGC (DCM:MeOH = 100:1 - 20:1) para obter o alvo (2,4 g, rendimento: 67 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27(s, 1 H), 8,22 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,35 - 7,30 (m, 5 H), 6,22 (s, 1 H), 5,55 - 5,52 (m, 1 H), 5,09 (s, 2 H), 5,04 - 5,01 (m, 1 H), 4,40 - 4,38 (m, 1 H), 2,76 - 2,65 (m, 3 H), 2,29 - 2,22 (m, 2 H), 2,18 (s, 3 H), 2,11 - 1,95 (m, 2 H), 1,78 - 1,71 (m, 2 H), 1,64 - 1,61 (m, 2 H), 1,59 (s, 3 H), 1,41 - 1,39 (m, 1 H), 1,38 (s, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 537,3 [M + 1]+. Ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico
[00837]A uma solução de 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (2,4 g, 4,48 mmols) em MeOH (40 mL) foi adicionado Pd a 10 %/C (2,3 g) e a mistura foi agitada sob atmosfera de H2 a 50 °C durante 15 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para obter o alvo (1,9 g, rendimento: 95 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27(s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 6,27 (s, 1 H), 5,54 - 5,52 (m, 1 H), 5,09 - 5,07 (m, 1 H), 4,50 - 4,47 (m, 1 H), 3,17 - 3,07 (m, 2 H), 3,02 - 2,90 (m, 1 H), 2,39 - 2,35 (m, 3 H), 2,31 - 2,05 (m, 4 H), 1,91 - 1,70 (m, 2 H), 1,64 - 1,51 (m, 5 H), 1,39 (s, 3 H), 1,23 - 1,15 (m, 1 H) ppm; ESI-MS (m/z): 447,2 [M + 1]+.N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin- 9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
[00838]A uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (1,9 g, 4,26 mmols), HOAT (753 mg, 5,54 mmols), HATU (2,1 g, 5,54 mmols) e TEA (3 mL, 21,3 mmols) em DCM (40 mL) foi adicionado 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (769 mg, 4,69 mmols) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Água (15 mL) foi adicionado e a mistura foi extraída com DCM (30 mL x 2). A fase orgânica combinada foi lavada com H2O (20 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado por SGC (DCM:MeOH = 70:1 - 20:1) para obter o alvo (1,8 g, rendimento: 72 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,23 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,10 - 6,92 (m, 2 H), 6,81 - 6,76 (m, 1 H), 6,21 (s, 1 H), 5,56 (s, 1 H), 5,49 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 5,01 (s, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 2,69 - 2,49 (m, 3 H), 2,31 - 2,27 (m, 2 H), 2,13 - 2,00 (m, 5 H), 1,88 - 1,81 (m, 2 H), 1,75 - 1,65 (m, 2 H), 1,60 (s, 3 H), 1,41 - 1,35 (m, 4 H), 1,28 - 1,25 (m, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 593,4 [M + 1]+. 9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(metil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H- purin-6-amina
[00839]Uma solução de N-(2-amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil) propanamida (1,8 g, 3,04 mmols) em AcOH (20 mL) foi agitada a 65 °C durante 15 h. A solução foi concentrada a vácuo e diluída com DCM (30 mL). A mistura foi lavada com solução saturada de NaHCO3 (20 mL x 2) e salmoura (20 mL x 1). A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para obter 1,7 g (rendimento: 97 %) do produto desejado.O produto foi separado por HPLC quiral para obter 920 mg de isômero cis e 420 mg de isômero trans.
[00840]Isômero cis: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,27 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,40 - 7,38 (m, 1 H), 7,29 - 7,26 (m, 1 H), 6,19 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,55 - 5,52 (m, 1 H), 4,99 - 4,97 (m, 1 H), 4,35 - 4,31 (m, 1 H), 2,77 - 2,73 (m, 2 H), 2,62 - 2,46 (m, 3 H), 2,10 - 2,01 (m, 4 H), 1,84 - 1,81 (m, 3 H), 1,58 (s, 3 H), 1,38 - 1,36 (m, 12 H), 1,19 - 1,14 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 575,3 [M + 1]+.
[00841]Isômero trans: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,40 - 7,38 (m, 1 H), 7,30 - 7,27 (m, 1 H), 6,19 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,55 - 5,52 (m, 1 H), 5,01 - 4,98 (m, 1 H), 4,36 - 4,34 (m, 1 H), 2,96 - 2,92 (m, 2 H), 2,77 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,58 - 2,50 (m, 2 H), 2,09 (s, 3 H), 2,04 - 1,90 (m, 4 H), 1,82 - 1,79 (m, 1 H), 1,70 - 1,66 (m, 2 H), 1,59 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H), 1,36 (s, 9 H) ppm; ESI-MS (m/z): 575,3 [M + 1]+.Composto 87: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((isopropil((1r,3S)-3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0313
[00842]Uma solução de cis-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6- ((isopropil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (600 mg, 0,77 mmol) em TFA a 90 % (5 mL) foi agitada a 30 °C durante 2 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado MeOH (6 mL) e ajustado ao pH = 9~10 com NH3.H2O. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (260 mg, rendimento: 57 %) como um sólido branco. RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δH 8,09 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,27 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,12 (dd, J = 8,4 e 0,8 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 6,12 (d, J = 4,4 Hz, 1 H), 4,43 (t, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,11 (t, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,05 - 4,01 (m, 1 H), 3,20 - 3,10 (m, 1 H), 3,08 - 3,00 (m, 1 H), 2,88 - 2,65 (m, 4 H), 2,25 - 2,15 (m, 2 H), 1,92 - 1,82 (m, 3 H), 1,65 - 1,55 (m, 2 H), 1,02 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,98 (d, J = 6,4 Hz, 3 H) ppm; RMN de 19F (400 MHz, MeOD): δ -59,80 ppm; ESI-MS (m/z): 590,3 [M + 1]+. Compostos 90 e 75: 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00843]A uma solução de 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(aminometil)-2,2- dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-amina (2,5 g, 5,49 mmols), 3-(3-oxociclobutil)propanoato de benzila (1,66 g, 7,14 mmols) e HOAc (329 mg, 5,49 mmols) em DCE (40 mL) foi adicionado NaB(OAc)3H (2,33 g, 11 mmols) em uma porção. Depois, a mistura de reação resultante foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. NaHCO3 aquoso saturado (40 mL) foi adicionado para extinguir a reação, depois foi extraído com DCM (50 mL x 3), seco em Na2SO4 anidro e concentrado. O material bruto foi purificado por SGC (DCM : MeOH = 100 : 1 a 50 : 1) para fornecer o composto desejado (2,3 g, rendimento: 64 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,14 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,35 - 7,28 (m, 5 H), 7,20 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,53 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,18 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,40 - 5,39 (m, 1 H), 5,08 - 5,07 (m, 2 H), 4,96 - 4,94 (m, 1 H), 4,64 (s, 2 H), 4,26 - 4,24 (m, 1 H), 3,82 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,10 - 3,05 (m, 0,55 H), 2,86 - 2,82 (m, 2 H), 2,26 - 2,20 (m, 3 H), 2,10 - 1,59 (m, 5 H), 1,58 (s, 3 H), 1,37 (s, 3 H), 1,35 - 1,25 (m, 0,6 H), 1,15 - 1,08 (m, 0,5 H) ppm; LC-MS (m/z): 672,4 [M + 1]+.3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila
[00844]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (2,3 g, 3,43 mmols) foi misturado com K2CO3 (3,3 g, 24 mmols) e 2-iodopropano (5,8 g, 34,3 mmols) em MeCN (25 mL) em um tubo vedado, depois aquecido a 95 °C com agitação durante 20 h. A mistura de reação foi filtrada e enxaguada com MeCN (30 mL), o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto desejado (2,1 g, rendimento: 88 %) como um sólido branco, que foi usado para a etapa seguinte sem purificação adicional. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,13 (s, 1 H), 7,35 - 7,29 (m, 5 H), 7,18 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,53 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,41 (dd, J = 8,5 e 2,5 Hz, 1 H), 6,18 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,33 - 5,32 (m, 1 H), 5,08 - 5,06 (m, 2 H), 4,90 - 4,89 (m, 1 H), 4,64 (s, 2 H), 4,15 - 4,14 (m, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,37 - 3,36 (m, 0,43 H), 3,01 - 2,98 (m, 0,59 H), 2,92 - 2,88 (m, 1 H), 2,70 - 2,40 (m, 3 H), 2,24 - 2,18 (m, 2 H), 2,10 - 1,80 (m, 3 H), 1,75 - 1,69 (m, 2 H), 1,61 - 1,52 (m, 5 H), 1,38 (s, 3 H), 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,81 - 0,79 (m, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 714,0 [M + 1]+.Ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico
[00845]3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-Dimetoxibenzil)amino)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoato de benzila (1,5 g, 2,1 mmols) foi dissolvido em MeOH (25 mL), Pd/C (10 % em carbono, água a 70 %, 742 mg) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada a 35 °C sob 1 atm de H2 durante a noite. A mistura depois foi filtrada e enxaguada com MeOH (15 mL x 3), o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto desejado (1,12 g, rendimento: 85 %) como um sólido branco, que foi usado para a etapa seguinte sem purificação adicional. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,18 (s, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,35 - 7,32 (m, 1 H), 7,23 - 7,22 (m, 1 H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,66 (brs, 1 H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,43 - 6,41 (m, 1 H), 6,24 - 6,23 (m, 1 H), 5,47 - 5,46 (m, 1 H), 5,13 - 5,12 (m, 2 H), 4,64 (s, 2 H), 4,41 - 4,37 (m, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,64 - 3,58 (0,6 H), 3,46 - 3,40 (m, 1,7 H), 2,45 - 1,60 (m, 9 H), 1,57 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H), 1,11 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,87 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 624,0 [M + 1]+.N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida
[00846]A uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanoico (1,1 g, 1,76 mmol), HATU (1 g, 2,64 mmols), HOAT (359 mg, 2,64 mmols) em DCM (30 mL) foi adicionada uma solução de 4-terc-butilbenzeno-1,2-diamina (433 mg, 2,64 mmols) e TEA (533 mg, 5,28 mmols) em DCM (10 mL) às gotas, depois a mistura resultante de reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. Depois de diluída com DCM (50 mL), a mistura foi lavada água (30 mL x 3), seca e concentrada. O material bruto foi purificado por SGC (DCM : MeOH = 100 : 1 a 40 : 1) para fornecer o composto desejado (680 mg, rendimento: 50 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,16 (s, 1 H), 7,19 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,14 - 7,10 (m, 1,7 H),6,99 - 6,97 (m, 0,6 H), 6,92 (s, 0,6 H), 6,77 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1 H), 6,66 - 6,65 (m, 1 H), 6,54 - 6,53 (m, 1 H), 6,42 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,20 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,36 - 5,35 (m, 1 H), 4,96 - 4,95 (m, 1 H), 4,65 (s, 2 H), 3,83 (s, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,17 - 2,73 (m, 4 H), 2,33 - 1,71 (m, 8 H), 1,58 (s, 3 H), 1,53 - 1,50 (m, 1 H), 1,38 (s, 3 H), 1,28 (s, 9 H), 1,0 (d, J = 5,5 Hz, 3 H), 0,84 (d, J = 5,0 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 770,0 [M + 1]+. 7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(Terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)- N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
[00847]N-(2-Amino-4-(terc-butil)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4- dimetoxibenzil)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(isopropil)amino)ciclobutil)propanamida (670 mg, 0,87 mmol) foi dissolvida em HOAc (8 mL) e depois aquecida a 65 °C com agitação durante a noite. Solvente foi removido a vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (60 mL), depois lavado com NaHCO3 (sat. 20 mL) e água (20 mL), a fase orgânica foi seca e concentrada. O material bruto foi purificado por TLC prep (DCM : MeOH = 10 : 1) para fornecer o composto desejado (470 mg, rendimento: 73 %) como um sólido branco, que depois foi separado por HPLC quiral para fornecer os isômeros cis (243 mg) e trans (180 mg) como sólidos brancos.
[00848]Isômero cis: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,15 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,38 - 7,37 (m, 1 H), 7,27 (dd, J = 8,5 e 1,5 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 6,49 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,38 (dd, J = 8,0 e 2,5 Hz, 1 H), 6,18 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,33 (dd, J = 6,5 e 2,5 Hz, 1 H), 4,92 - 4,91 (m, 1 H), 4,63 (s, 2 H), 4,16 - 4,15 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 3,72 (s, 3 H), 3,08 - 3,07 (m, 1 H), 2,97 - 2,96 (m, 1 H), 2,72 - 2,66 (m, 4 H), 2,09 - 2,03 (m, 2 H), 1,82 - 1,78 (m, 3 H), 1,56 (s, 3 H), 1,48 - 1,40 (m, 2 H), 1,38 (s, 3 H), 1,36 (s, 9 H), 0,95 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,81 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 752,0 [M + 1]+.
[00849]Isômero trans: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,14 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,38 - 7,37 (m, 1 H), 7,27 (dd, J = 8,5 e 1,5 Hz, 1 H), 7,18 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 6,50 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,39 - 6,37 (m, 1 H), 6,18 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,33 (dd, J = 6,0 e 2,5 Hz, 1 H), 4,90 (dd, J = 6,5 e 3,5 Hz, 1 H), 4,62 (s, 2 H), 4,17 - 4,15 (m, 1 H), 3,80 (s, 3 H), 3,71 (s, 3 H), 3,44 - 3,43 (m, 1 H), 2,93 - 2,90 (m, 1 H), 2,77 - 2,68 (m, 3 H), 2,62 - 2,60 (m, 1 H), 2,05 - 1,93 (m, 5 H), 1,68 - 1,67 (m, 2 H), 1,56 (s, 3 H), 1,36 (s, 12 H), 0,95 (d, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,81 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 752,0 [M + 1]+.Composto 90: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0314
[00850]A uma mistura de TFA (2,7 mL) e água (0,3 mL) foi adicionado isômero cis-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)- N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (235 mg, 0,31 mmol). A solução foi deixada repousar a 35 °C durante 2 h e evaporada à secura. O resíduo foi co-evaporado com metanol duas vezes. Depois, o resíduo foi dissolvido em MeOH (20 mL). A solução foi neutralizada por K2CO3 (124 mg, dissolvido em 1 mL de H2O) com agitação na temperatura ambiente durante 1 h. Solvente foi removido a vácuo, depois o material bruto foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (90 mg, rendimento: 51 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,08 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,39 - 7,37 (m, 1 H), 7,28 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,26 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,10 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,43 - 4,41 (m, 1 H), 4,12 - 4,09 (m, 1 H), 4,04 - 4,01 (m, 1 H), 3,15 - 3,13 (m, 1 H), 3,04 - 3,01 (m, 1 H), 2,86 - 2,68 (m, 4 H), 2,21 - 2,17 (m, 2 H), 1,88 - 1,85 (m, 3 H), 1,60 - 1,57 (m, 2 H), 1,36 (s, 9 H), 1,01 (d, J = 8,0 Hz, 3 H), 0,97 (d, J = 8,0 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 562,5 [M + 1]+. Composto 75: (2R,3R,4S,5R)-2-(4-Amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol
Figure img0315
[00851]A uma mistura de TFA (2,7 mL) e água (0,3 mL) foi adicionado isômero trans-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2- il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)- N-(2,4-dimetoxibenzil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (175 mg, 0,23 mmol). A solução foi deixada repousar a 35 °C durante 2 h e evaporada à secura. O resíduo foi co-evaporado com metanol duas vezes. Depois, o resíduo foi dissolvido em MeOH (20 mL). A solução foi neutralizada por K2CO3 (97 mg, dissolvido em 1 mL de H2O) com agitação na temperatura ambiente durante 1 h. Solvente foi removido a vácuo, depois o material bruto foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (95 mg, rendimento: 71 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,09 (s, 1 H), 7,49 (s, 1 H), 7,41 - 7,39 (m, 1 H), 7,30 - 7,27 (m, 2 H), 6,64 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 6,12 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,45 - 4,42 (m, 1 H), 4,13 - 4,11 (m, 1 H), 4,05 - 4,03 (m, 1 H), 3,58 - 3,54 (m, 1 H), 3,06 - 3,02 (m, 1 H), 2,89 - 2,80 (m, 3 H), 2,74 - 2,70 (m, 1 H), 2,20 - 2,17 (m, 2 H), 2,03 - 1,99 (m, 3 H), 1,84 - 1,81 (m, 3 H), 1,38 (s, 9 H), 1,03 (d, J = 8,5 Hz, 3 H), 0,98 (d, J = 8,0 Hz, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 562,5 [M + 1]+. Composto 96: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1r,3S)-3-(2- (5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
Figure img0316
[00852]N-(2-Amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6- amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida
[00853]A uma solução de ácido 3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H- purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanoico (1,2 g, 2,91 mmols), HATU (2,17 g, 5,83 mmols) e HOAT (0,91 g, 5,83 mmols) em DCM (17 mL) foram adicionadas 4- (trifluorometóxi)benzeno-1,2-diamina (1,1 g, 5,83 mmols) e TEA (2,05 mL, 14,56 mmols). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluída com DCM (50 mL) e lavada com água (15 mL x 3) e salmoura (30 mL). A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por Combi-Flash (gel de sílica 40 g, início EA : DCM : MeOH = 10 : 10 : 0 a 10 : 10 : 8 por gradiente, 40 mL/min, 50 min, volume total de solvente 2,0 L) para fornecer o composto desejado (1,0 g, rendimento: 60 %) como um sólido amarelo. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,25 - 8,24 (m, 1 H), 7,20 - 7,13 (m, 1 H), 6,95 - 6,85 (m, 0,4 H), 6,73 (brs, 0,8 H), 6,54 (d, J = 7,5 Hz, 0,8 H), 6,22 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,60 - 5,55 (m, 1 H), 5,03 - 5,00 (m, 1 H), 4,40 - 4,35 (m, 1 H), 3,40 - 3,35 (m, 0,3 H), 3,00 - 2,92 (m, 0,7 H), 2,70 - 2,47 (m, 3 H), 2,36 - 2,28 (m, 2 H), 2,20 - 1,80 (m, 6 H), 1,76 - 1,66 (m, 2 H), 1,60 (s, 3 H), 1,40 (s, 3 H), 1,26 - 1,16 (m, 1 H) ppm; ESIMS (m/z): 621,3 [M + 1]+.9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-Dimetil-6-((metil(3-(2-(5-(trifluorometóxi)-1H- benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)- 9H-purin-6-amina
[00854]Uma solução de N-(2-amino-4-(trifluorometóxi)fenil)-3-(3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4- d][1,3]dioxol-4-il)metil)(metil)amino)ciclobutil)propanamida (1,0 g, 1,61 mmol) em HOAc (10 mL) foi agitada a 65 °C durante a noite. A mistura foi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada. O resíduo foi dissolvido em DCM (50 mL), lavado com solução saturada de NaHCO3 (10 mL x 2), água (20 mL) e salmoura (30 mL). O resíduo foi separado por HPLC quiral para fornecer o isômero cis (460 mg, rendimento: 47 %) e o isômero trans (220 mg, rendimento: 23 %).
[00855]Isômero cis: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,53 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,13 (dd, J = 8,5 e 1,0 Hz, 1 H), 6,21 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,55 (dd, J = 6,5, 2,5 Hz, 1 H), 5,01 (q, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,33 - 4,37 (m, 1 H), 2,81 - 2,78 (m, 2 H), 2,66 - 2,58 (m, 2 H), 2,53 - 2,49 (m, 1 H), 2,13 - 2,03 (m, 5 H), 1,86 - 1,84 (m, 3 H), 1,59 (s, 3 H), 1,43 - 1,39 (m, 4 H), 1,22 - 1,17 (m, 1 H) ppm; LC-MS (m/z): 603,3 [M + 1]+.
[00856]Isômero trans: RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,52 (brs, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,13 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,21 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 5,55 (dd, J = 6,5 e 2,0 Hz, 1 H), 5,01 (q, J = 3,0 Hz, 1 H), 4,38 - 4,34 (m, 1 H), 2,96 - 2,92 (m, 1 H), 2,84 - 2,81 (m, 2 H), 2,59 - 2,49 (m, 2 H), 2,10 (s, 3 H), 2,05 - 1,91 (m, 4 H), 1,85 - 1,79 (m, 1 H), 1,73 - 1,66 (m, 2 H), 1,60 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H) ppm; LC-MS (m/z): 603,3 [M + 1]+.Composto 96
[00857]Uma solução de cis-9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2-(5- (trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (460 mg, 0,77 mmol) em HCl 1 N/MeOH (10 mL) foi agitada a 30 °C durante 4 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Ao o resíduo foi adicionado MeOH (10 mL) e ajustado ao pH = 10~11 com NH3.H2O. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (215 mg, rendimento: 43 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,28 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,12 (dd, J = 8,5 e 0,5 Hz, 1 H), 6,00 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,71 (t, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,24 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,18 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 2,84 - 2,81 (m, 2 H), 2,77 - 2,68 (m, 3 H), 2,25 - 2,22 (m, 2 H), 2,17 (s, 3 H), 1,91 - 1,89 (m, 3 H), 1,51 - 1,45 (m, 2 H) ppm; LC-MS (m/z): 563,3 [M + 1]+.Composto 97: (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metil((1s,3R)-3- (2-(5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofurano-3,4-diol
Figure img0317
[00858]Uma solução de trans-9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-((metil(3-(2- (5-(trifluorometóxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)amino)metil)tetra- hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-9H-purin-6-amina (220 mg, 0,37 mmol) em HCl 1 N/MeOH (5 mL) foi agitada a 30 °C durante 4 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado MeOH (10 mL) e ajustado ao pH = 10~11 com NH3.H2O. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 30 min e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto desejado (80 mg, rendimento: 39 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,29 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,00 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,72 (t, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,25 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,18 - 4,20 (m, 1 H), 3,04 - 3,08 (m, 1 H), 2,83 - 2,86 (m, 2 H), 2,64 - 2,72 (m, 2 H), 2,17 (s, 3 H), 1,97 - 2,10 (m, 5 H), 1,82 - 1,85 (m, 2 H) ppm; LC-MS (m/z): 563,3 [M + 1]+. Composto 106
Figure img0318
[00859]A uma solução de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol (300 mg, 0,53 mmol) em dioxano aquoso a 30 % (20 mL) foi adicionado MCPBA (91 mg, 0,53 mmol). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 3 h e depois foi concentrada. O material bruto foi purificado por HPLC prep para obter o produto desejado (160 mg, rendimento: 45 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,24 (s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,49 (brs, 1 H), 7,42 - 7,38 (m, 1 H), 7,31 - 7,29 (m, 1 H), 6,00 - 5,96 (m, 1 H), 4,68 - 4,65 (m, 2 H), 4,43 - 4,36 (m, 1 H), 4,05 - 4,00 (m, 1 H), 3,88 - 3,76 (m, 1 H), 3,68 - 3,49 (m, 1 H), 3,46 - 3,37 (m, 1 H), 2,84 - 2,81 (m, 2 H), 2,42 - 2,15 (m, 4 H), 1,95 - 1,89 (m, 3 H), 1,39 (s, 1 H), 1,35 - 1,27 (m, 3 H), 1,25 - 1,21 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 579,4 [M + 1]+.Composto 107
Figure img0319
[00860]A uma solução de (2R,3R,4S,5R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5- ((((1s,3R)-3-(2-(5-(terc-butil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)etil)ciclobutil)(isopropil)amino)metil)tetra-hidrofurano-3,4-diol (300 mg, 0,53 mmol) em dioxano aquoso a 30 % (20 mL) foi adicionado MCPBA (91 mg, 0,53 mmol). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 3 h e depois foi concentrada. O material bruto foi purificado por HPLC prep para obter o produto desejado (80 mg, rendimento: 26 %) como um sólido branco. RMN de 1H (500 MHz, MeOD): δH 8,25 - 8,22 (m,2 H), 7,49 (brs, 1 H), 7,42 - 7,38 (m, 1 H), 7,31 - 7,28 (m, 1 H), 6,02 - 5,97 (m, 1 H), 4,69 - 4,60 (m, 2 H), 4,47 - 4,32 (m, 2 H), 3,86 - 3,74 (m, 1 H), 3,70 - 3,54 (m, 1 H), 3,45 - 3,35 (m, 1 H), 2,97 - 2,72 (m, 4 H), 2,15 - 1,75 (m, 5 H), 1,39 (s, 1 H), 1,34 - 1,28 (m, 3 H), 1,26 - 1,22 (m, 3 H) ppm; ESI-MS (m/z): 579,7 [M + 1]+.
Exemplo 9: Cromatografia com Fluido Supercrítico
[00861]Os compostos foram purificados por Cromatografia com Fluido Su- percrítico (SFC) usando técnicas conhecidas. Tais como, os métodos utilizados por Lotus Separations, LLC, Princeton, NJ. Veja, por exemplo, http://www.lotussep.com. Veja também, http://www.greenchemistrygroup.org/Program2009.html.
[00862]As condições de separação por SFC para certos exemplos são listadas abaixo. Outros compostos descritos neste relatório podem ser separados através de métodos similares.
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Exemplo 10: Protocolo de Bioensaio e Métodos Gerais
[00863]Cultura Celular. As linhagens celulares de tumor hematológico humano THP-1, RS4;11 e MV4-11 foram obtidas a partir de ATCC, as células MOLM- 13 foram obtidas a partir de DSMZ. Todas as linhagens foram cultivadas em RPMI 1640 contendo FBS a 10 % e mantidas usando as densidades celulares recomendadas pelos fornecedores e condições ambientais. O meio foi suplementado sem nenhum aminoácido essencial e L-Glutamina. As células THP-1 também foram suplementadas com β-Mercaptoetanol 0,05 mM.
[00864]Análise de Metilação. As células foram semeadas a 5 x 105 célu- las/mL em uma placa de 12 poços em um volume final de 2 mL. As células foram dosadas com compostos à concentração apropriada a partir de uma solução de estoque de DMSO 50 mM. O composto e o meio foram refrescados a cada dois dias ao longo de setes dias de incubação por contagem de células usando exclusão de azul de tripano (Vicell), peletização a 200 g durante 5 minutos e ressuspensão em meio fresco contendo composto em uma concentração final de células de 5 x 105 células/mL. Após a incubação do composto, histonas foram extraídas de 1 x 106 células usando um kit de extração de histona comercial (Active Motif). As histonas purificadas foram quantificadas usando o ensaio de proteína BCA (Pierce) com uma curva padrão de BSA. 400 ng de histonas isoladas foram fracionadas por SDS- PAGE em um gel entre 4 a 20 % e transferidas às membranas de nitrocelulose. As membranas foram incubadas com vários anticorpos primários e secundários e visualmente representadas no sistema de imagem Licor (Odyssey). O anticorpo policlo- nal de coelho H3K79-Me2 foi adquirido a partir de Abcam. Outros anticorpos policlo- nais de coelho incluindo H3K4-Me3, H3K9-Me3, H3K27-Me2 e H3K27-Me3 foram adquiridos a partir de Tecnologias de Sinalização Celular (CST). Um anticorpo H3 total monoclonal de camundongo foi usado como um controle de carga (CST). Os anticorpos secundários fluorescentemente marcados foram adquiridos a partir de Odyssey.
[00865]Análise de Crescimento e Viabilidade Celular. As células foram colhidas a partir de culturas celulares exponencialmente crescentes e semeadas a 3 x 104 células por poço. As amostras foram mantidas em uma placa de fundo claro de parede preta de 96 poços (Corning). Uma concentração final de 50 uM composta em DMSO a 0,2 % foi adicionada aos poços apropriados no Dia 0. O tratamento de MV4-11 e MOLM-13 duraram 14 dias, enquanto as células THP-1 foram tratadas durante 18 dias. O composto e o meio foram substituídos a cada dois dias durante a incubação, transferindo as amostras a uma placa de fundo em V (Corning), girando a 200 g durante 5 minutos em um rotor na temperatura ambiente, ressuspensão em meio fresco contendo composto e transferindo de volta à placa de ensaio. As células foram contadas periodicamente usando o ensaio Guava Viacount e lidas no instrumento EasyCyte Plus (Millipore). As placas de ensaio foram divididas quando necessárias dentro das densidades celulares recomendadas. As contagens finais de células foram ajustadas para tornar a divisão celular em conta e relatar como células viáveis totais/poço.
[00866]HOXA9 (qPCR). As células foram tratadas com composto durante 7 dias similares ao ensaio de metilação. As células foram peletizadas a 200 g em um rotor na temperatura ambiente e RNA total isolado usando o kit Qiagen RNeasy. A concentração e qualidade de RNA foram determinadas usando o Nanovue (GE Healthcare). RNA total foi transcrito do forma inversa usando um kit de transcrição reversa de cDNA de alta capacidade (Applied Biosystems). Um conjunto de primer marcado pré-designado para HOXA9 foi adquirido a partir de Applied Biosystems. As reações de qPCR continham cDNA 50 ng, primer marcado 1X e misturador master PCR universal 1X Taqman (Applied Biosystems). As amostras foram conduzidas em uma máquina 7900 HT Fast Real Time PCR (Applied Biosystems) com condições de PCR de 2 min a 50 °C, 10 min a 95 °C, 40 ciclos a 15 segundos a 95 °C e 1 min a 60 °C. Os números de ciclo de HOXA9 foram normalizados à casa mantendo microglo- bulina B2 do gene (controle pré-designado de B2M a partir de Applied Biosystems). A porcentagem de DMSO controle foi calculada com a equação, a porcentagem controle = (2A-ΔΔCT)*100 onde ΔΔCT é a diferença entre amostra de HOXA9 normalizada e controle (ΔCT de amostra - ΔCT de controle = ΔΔCT).
[00867]A determinação de IC50. Os compostos de teste foram diluídas 3 vezes, em série, em DMSO para 10 pontos e 1 μl foi plaqueado em uma placa microti- tuladora de 384 poços. O controle positivo (padrão de inibição a 100 %) foi 2,5 uM de concentração final de S-adenosil-L-homocisteína e o controle negativo (padrão de inibição a 0 %) continha 1 μl de DMSO. O composto depois foi incubado durante 30 minutos com 40 μl por poço de DOT1L(1-416) (0,25 nM de concentração final em ensaio tampão: TRIS 20 mM, pH 8,0, NaCl 10 mM, Tween20 a 0,002 %, Gelatina de Pele Bovina a 0,005 %, KCl 100 mM e DTT 0,5 mM). 10 μl por poço de mistura de substrato (mesmo ensaio tampão com S-[metil-3H]-adenosil-L metionina 200 nM, 600 nM de S-[metil-3H]-adenosil-L metionina não marcada, e oligonucleossoma 20 nM) foram adicionados para iniciar a reação. A reação foi incubada durante 120 minutos na temperatura ambiente e interrompida com 10 μl por poço de S-metil-adenosil-L metionina 100 μM. Para a detecção, o substrato a partir de 50 μl de reação foi imobilizado em um Flashplate revestido estreptavidina de 384 poços (Perkin Elmer) (também revestido com polietilenoimina a 0,2 %) e lido em um contador de cintilação Top Count (Perkin Elmer). Os valores da IC50 são apresentados na tabela abaixo. Nesta tabela, “A” indica os valores da IC50 de <0,1 μM; “B” indica valores da IC50 de > 0,1 μM e <1 μM; “C” indica os valores da IC50 de > 1 μM e < 10 μM; e “D” indica os valores da IC50 de > 10 μM e < 50 μM.
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Exemplo 11: Ensaios de Anti-Proliferação de Tumor
[00868]Ensaio Anti-Proliferativo In Vitro. A potência e seletividade da atividade anti-proliferativa dos compostos da presente invenção foram avaliadas usando um painel de linhagens celulares de leucemia humana rearranjada MLL e rearranja- da sem MLL. As linhagens celulares usadas no estudo são listadas na Figura 1A. O painel de rearranjada MLL incluiu as linhagens celulares derivadas de ALL, AML e leucemias bifenotípicas que abrigam fusões de MLL-AF4, MLL-AF9 ou MLL-ENL. Estas linhagens celulares recrutam DOT1L. O painel também incluiu cinco linhagens celulares que não possuem um reagrupamento com MLL, e uma linhagem celular que carrega um tandem parcial duplicação do gene da MLL (MLL-PTD).
[00869]As células exponencialmente crescentes foram plaqueadas, em tripli- catas, em placas de 96 poços em uma densidade de 3 x 104 células/poço em um volume final de 150 μl. As células foram incubadas na presença de concentrações aumentadas de Composto 2. A atividade anti-proliferativa foi determinada por medições de viabilidade celular a cada 3 a 4 dias até 14 dias. Em dias de contagens de células, o meio de crescimento e o Composto 2 foram substituídos e as células dívidas do volta a uma densidade de 5 x 104 células/poço.
[00870]O resultado da metade da concentração inibitória máxima (IC50) na Figura 1 mostra que o Composto 2 demonstra atividade anti-proliferativa nanomolar potente contra três de quatro linhagens celulares de rearranjadas com MLL testadas (MV4;11 (MLL-AF4), MOLM-13 (MLL-AF9), e KOPN-8 (MLL-ENL). As células EOL-1 que expressam um MLL-PTD também foram altamente sensíveis ao Composto 2 (IC50 = 11 nM). As células RS4;11 e duas células rearranjadas sem MLL (Reh e Ka- sumi-1) foram 1 - 3 log de ordens menos sensíveis, e duas células rearranjadas sem MLL (Jurkat e HL-60) apresentou nenhuma atividade. Geralmente, os resultados indicam que o Composto 2 potente e seletivamente inibe a proliferação de linhagens celulares de leucemia rearranjadas com MLL e um subconjunto de linhagens celula- res de leucemia rearranjadas sem MLL.
[00871]Ensaio Anti-Proliferativo In Vivo. A atividade anti-tumor in vivo dos compostos da presente invenção foi avaliada em um modelo de xenoenxerto de camundongo de leucemia rearranjada com MLL.
[00872]Quatro grupos de 20 (Grupos 1, 3, 4 e 5), e um grupo de 8 (Grupo 2) camundongos sem pelos fêmeas (peso médio de 0,023 kg) que trazem tumores em xenoenxerto de MV4-11 de tamanhos variando de 80 a 120 mm3 foram implantados subcutaneamente com minibombas (Alzet Model 2001). O Grupo 1 recebeu veículo apenas a partir da bomba. O Grupo 2 recebeu veículo apenas a partir da bomba mais injeções ip três vezes ao dia (8 horas à parte) de veículo. O Grupo 3 recebeu 112 mg/kg/dia a partir da bomba mais injeções ip três vezes ao dia (8 horas à parte) de 20 mg/kg de Composto 2 para uma dose diária total de 172 mg/kg/dia. Os Grupos 4 e 5 receberam 112 e 56 mg/kg/dia de Composto 2 a partir das bombas, respecti-vamente. As bombas foram designadas para durar 7 dias e foram trocadas duas vezes para fornecer duração de infusão total de 21 dias de exposição.
[00873]Uma única amostra sanguínea foi tomada de todos os animais nos Grupos 4 e 5 nos dias 7, 14, e 21 e avaliada quanto aos níveis plasmáticos de Composto 2. As amostras sanguíneas foram tomadas do Grupo 3 nos dias 7 e 14 nos pontos no tempo seguintes (3 animais por ponto no tempo): 5 minutos de pré-dose ip, e 15 min, 30 min, 1, 2, e 4 horas pós-dose ip. No dia 21, três horas depois da última injeção ip, uma única amostra sanguínea foi tomada do Grupo 3. O tamanho do tumor foi medido a cada 4 dias. Depois de 21 dias, o estudo foi terminado, e TGI calculado.
[00874]A Figura 2 mostra o crescimento do tumor durante os 21 dias de dosagem. Não houve diferença no tamanho do tumor entre os dois grupos controle de veículo. O grupo de minibomba de alta dose suplementado com dosagem ip mostrou um TGI estatisticamente significante de >70 % comparado aos controles. Os grupos de 56 e 112 mg/kg/dia mostraram valores de TGI não estatisticamente significantes de 43 e 38 %, respectivamente, comparados aos controles. O Composto 2 é referido como Ex. 2 na Figura 2.
[00875]A Figura 3A mostrou as concentrações plasmáticas de estado estacionário estimadas de Composto 2 nos Grupos 4 e 5 conforme determinado pelas amostras sanguíneas médias tomadas nos dias 7, 14 e 21. Os dados sugeriram que o estado estacionário médio dos níveis plasmáticos do Composto 2 variou de 99 a 152 ng/ml por Grupo 4 e 52 a 238 ng/ml por Grupo 5. O nível plasmático médio a partir da última amostragem no dia 21 foi 99 ng/ml para o Grupo 4 e 52 ng/ml para o Grupo 5.
[00876]A Figura 3B mostra as concentrações plasmáticas de Composto 2 plotadas contra o tempo depois da injeção ip. As injeções ip produziram um aumento significante na exposição de plasma ao Composto 2 em termos da Cmax (4200 a 5000 ng/ml) depois de cada uma das injeções três vezes ao dia e das AUCs diárias sobre aquelas produzidas pelo nível plasmático de estado estacionário resultante a partir da infusão contínua. Geralmente, os resultados indicam que o Composto 2 demonstrou atividade anti-tumor significante em um modelo de xenoexerto de camundongo de leucemia rearranjada com MLL.
INCORPORAÇÃO COMO REFERÊNCIA
[00877]A divulgação completa de cada um dos documentos de patente e artigos científicos referidos neste relatório são incorporados como referência para todos os propósitos.
EQUIVALENTES
[00878]A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem divergir do espírito ou características essenciais da mesma. As modalidades precedentes são consideradas em todas as referências ilustrativas ao invés de limitar a invenção descrita neste relatório. O escopo da invenção é indicado pelas reivindica- ções anexas ao invés da descrição precedente, e todas as mudanças que entram dentro do significado e faixa de equivalência das reivindicações são intencionadas a serem adotadas neste relatório.

Claims (17)

1. Composto ou seu N-óxido ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta a Fórmula (IV):
Figure img0330
em que: A é O ou CH2; Q é H, NH2, NHRb, NRbRc, OH, Rb ou ORb, no qual cada Rb e Rc é independentemente alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, heteroarila de 5 a 10 membros tendo um ou mais hete- roátomos selecionados a partir de O, N ou S, ou -M1-T1 no qual M1 é uma ligação ou um ligante alquila C1-C6 opcionalmente substituído por halo, ciano, hidroxila ou alco- xila C1-C6 e T1 é cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6-membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S ou heteroarila de 5 a 10 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, ou Rb e Rc, juntos com o átomo de N no qual estão ligados, formam heterocicloalqui- la de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de O, N ou S ao átomo de N opcionalmente substituído por alquila C1-C6, alquenila C2C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)- alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, ou heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, e cada um de Rb, Rc e T1 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, aquinila C2- C6, halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e hete- roarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S; X é N ou CRX, no qual Rx é H, halo, hidroxila, carboxila, ciano, ou Rs1, Rs1 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloal- quila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais he- teroátomos selecionados a partir de O, N ou S, ou heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, e RS1 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono- alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterociclo- alquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S; Y é H, Rd, SO2Rd ou CORd, Rd sendo alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S ou heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e Rd sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxi- la, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, e he- teroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e cada um dos substituintes cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloal- quila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S em Rd é ainda opcionalmente substituído com alquila C1C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, halo, hidroxila, carboxila, C(O)OH, C(O)O-alquila C1-C6, OC(O)-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S ou he- teroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S; cada R1 e R2 é independentemente H, halo, hidroxila, carboxila, ciano ou Rs2, Rs2 sendo amino, alcoxila C1-C6, alquila C1-C6, alquenila C2-C6 ou alquinila C2-C6, e cada Rs2 sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S; cada um de Re, Rf, Rg e Rh, é independentemente -M2-T2, no qual M2 é uma ligação, SO2, SO, S, CO, CO2, O, ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, NH, ou N(Rt), Rt sendo alquila C1-C6, e T2 é H, halo ou Rs4, Rs4 sendo alquila C1-C6, al- quenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 8 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S ou heteroarila de 5 a 10 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, e cada ligante O-alquila C1-C4, ligante alquila C1-C4, Rt e RS4 são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em halo, hidroxila, carboxila, ciano, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, al- quinila C2-C6, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S e heteroarila de 5 a 6 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, e m é 0, 1 ou 2.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que A é O.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que A é O e m é 2.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que X é N.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Q é NH2 ou NHRb, no qual Rb é -M1-T1, Mi sendo uma ligação ou um ligante alquila C1-C6 e T1 sendo cicloalquila C3-C8.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 e R2 são cada um H.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Y é Rd.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que Rd é alquila C1-C6 opcionalmente substituída com cicloalquila C3-C8 ou halo, ou Rd é cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituída com alquila C1-C6 ou halo.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um de Re, Rf, Rg e Rh é halo, alcoxila C1-C6 opcionalmente substituída por um ou mais halo, alquilsulfonila C1-C6 opcionalmente substituída por um ou mais halo, alquila C1-C6 opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxila, e alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituída por um ou mais alquila C1-C6 ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros tendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de O, N ou S, opcional- mente substituída por um ou mais alquila C1-C6.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um de Re, Rf, Rg e Rh é selecionado a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, CF3, OCF3, SO2CF3, oxetanil, alcoxila C1-C4, cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de alquila C1-C4 e CN, e alquila C1-C4 opcionalmente substituída com um ou mais subs- tituintes selecionados a partir de CN, halo, cicloalquila C3-C8, hidróxi e alcoxila C1-C6.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fa-to de que o composto é selecionado a partir de:
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e N-óxidos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fa- to de que o composto é selecionado a partir de:
Figure img0364
e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.
13. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
14. Uso da composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para tratar câncer.
15. Uso da composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para tratar câncer hematológico ou leucemia.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que a leucemia é leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
17. Uso, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que a leucemia é leucemia rearranjada por MLL ou leucemia definida por uma duplicação em tandem parcial do gene MLL (MLL-PTD).
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