BR112012029248B1

BR112012029248B1 - Análogo de glp-1 de fórmula i ou a sua composição, análogo de glp-1 de fórmula viii ou um sal farmaceuticamente aceitável ou a composição do mesmo, composição farmacêutica e uso de um composto

Info

Publication number: BR112012029248B1
Application number: BR112012029248-0A
Authority: BR
Inventors: Shaojing Hu; Fenlai Tan; Yanping Wang; Cunbo Ma; Yunyan Hu; Hong Cao; Xiangdong Zhao; Wei Long; Yinxiang Wang; Lieming Ding
Original assignee: Betta Pharmaceuticals Co., Ltd
Priority date: 2010-05-17
Filing date: 2010-05-17
Publication date: 2021-09-28
Also published as: ZA201209566B; AU2010353685A8; EP2571897A1; RU2557301C2; RU2012154322A; KR101609302B1; AU2010353685A1; BR112012029248A2; ES2528496T3; KR20130039740A; US20130203672A1; AU2010353685B2; EP2571897A4; WO2011143788A1; JP5819946B2; CA2802931C; EP2571897B1; CN103124739B; US9487570B2; JP2013527178A

Abstract

análogo de glp-1 de fórmula i ou sua composição, análogo de glp-1 de fórmula v ou sua composição, análogo de glp-1 de fórmula vi ou sua composição, análogo de glp-1 de fórmula vii ou sua composição, análogo de glp-1 de fórmula viii ou sua composição. análogo de glp-1 de fórmula ix ou sua composição, composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto a presente invenção se refere a novos análogos de peptídeo semelhante ao glucagon e composições que são úteis para supra-regular a expressão de insulina em mamíferos e para tratar diabetes. em particular, estes derivados de peptídeo têm um ligante mimético de peptídeo e proporciona longa duração de ação para o tratamento de diabetes e outras doenças relacionadas com peptídeo insulinotrópico, função gastrointestinal e atividades associadas a níveis de glucagon.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere a novos análogos de peptídeo semelhante a glucagon e composições que são úteis para supra-regular a expressão de insulina em mamíferos e para tratar diabetes. Em particular, estes derivados de peptídeo proporcionam longa duração de ação para o tratamento de diabetes e outras doenças relacionadas com peptídeo insulinotrópico, função gastrointestinal e atividades associadas a níveis de glucagon.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A secreção endócrina das ilhotas pancreáticas é regulada por um complexo mecanismo de controle guiado não somente por metabólitos transmitidos pelo sangue tais como glicose, aminoácidos, e catecolaminas, mas também por influência parácrina local. Os hormônios principais de ilhota pancreática, glucagon, insulina e somatostatina, interagem com tipos de células pancreáticas específicas (células A, B, e D, respectivamente) para modular a resposta secretora. Embora a secreção de insulina seja predominantemente controlada por níveis de glicose no sangue, somatostatina inibe a secreção de insulina mediada por glicose. Além de regulação parácrina inter-ilhotas de secreção de insulina, há evidência para suportar a existência de fatores insulinotrópicos no intestino. Este conceito de incretina origina da observação de que ingestão de alimentos ou administração enteral de glicose provocava uma maior estimulação de liberação de insulina em comparação com quantidades similares de energia (glicose) infundida intravenosamente (Elrick, H., et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 24,1076-1082, 1964; McIntyre, N. , et al. , J. Clin. Endocrinol. Metab., 25,1317-1324, 1965). Portanto, foi postulado que sinais derivados do intestino estimulados por ingestão oral de nutrientes representam potentes secretagogos de insulina responsáveis pelo aumento de liberação de insulina quando a energia é administrada por meio da via parenteral versus a intestinal (Dupre, J., et al. , Diabetes, 15, 555-559, 1966) . Embora diversos neurotransmissores e hormônios intestinais possuem atividade semelhante a incretina, uma evidência considerável a partir de estudos de imunização, antagonista, e silenciamento sugerem que o polipeptídeo insulinotrópico dependente de glicose (GIP) e peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1) representam os peptídeos dominantes responsáveis pela maioria da secreção de insulina estimulada por nutrientes. A observação de que os pacientes com diabetes tipo 2 exibem uma redução significativa na magnitude de liberação de secreção de insulina estimulada por refeição constitui a base do interesse na determinação de se liberação defeituosa de incretina ou resistência a ação de incretina contribui à patofisiologia de disfunção de célula β em indivíduos 2diabéticos.

Peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1) foi primeiro identificado em 1987 como um hormônio incretina, um peptídeo secretado pelo intestino após a ingestão de alimentos. GLP1 é secretado pela célula L do intestino após 30 ser proteoliticamente processado a partir da proteína precursora de aminoácido 160, pré-pró-glucagon. A divagem de pré-pró-glucagon primeiro produz GLP-1, um peptídeo de 37 aminoácidos, GLP-1(1-37)OH, que é pobremente ativo. Uma clivagem subsequente na posição 7 produz GLP-1(7-37)OH biologicamente ativo. Aproximadamente 80 % de GLP-1(7-37)OH que é sintetizado é amidado no C-terminal após a remoção do resíduo de glicina terminal na célula L. Os efeitos biológicos e renovação metabólica do ácido livre GLP-1(7- 37)OH e a amida, GLP-1(7-37)NH2, são indistinguíveis. É conhecido que GLP-1 estimula a secreção de insulina causando a absorção de glicose pelas células que diminuem níveis de glicose no soro (Mojsov, S., et al., J. Clin.Invest. ,79, 616-619, 1987; Kreymann, B., et al., Lancet ii, 1300-1304, 1987; Orskov, C.,et al. , Endocrinology,123, 2009-2013, 1988). A injeção intracerebroventricular aguda de GLP-1 ou agonistas de receptor de GLP-1 produz redução transiente em absorção de alimentos (Turton M.D., et al.,

Nature,379, 60-72, 1996), enquanto que a administração mais prolongada de agonistas de receptor de GLP-1 parenteral ou intracerebroventricular é associada a perda de peso em alguns estudos (Meeran, K., et al. , Endocrinology,140, 244-250, 1999; Davies, H.R.Jr., Obes. Res.,6, 147-156, 1998; Szayna, M., et al., Endocrinology,141, 1936-1941, 2000; Larsen, P.J., et al., Diabetes,50, 2530-2539, 2001). Numerosos análogos de GLP-1 que demonstram ação insulinotrópica são conhecidos na técnica. Estes análogos incluem, por exemplo, GLP-K7-36), Gln9-GLP-1 (7-37) , D-Gln9-GLP-1 (7-37) , acetil- 2Lys9-GLP-1(7-37) , Thrl6-Lysl8-GLP-1(7-37) e Lysl8-GLP-1(7- 37). Derivados de GLP-1 incluem, por exemplo, sais de adição de ácido, sais carboxilatos, ésteres de alquila de cadeia curta, e amidas (WO91/11457; EP0733644; Patente US 5512549).

A maioria da ação de GLP-1 delineada em 30 experimentos pré-clínicos foi também demonstrada em estudos em humanos. A infusão de GLP-1(7-36)NH2 em indivíduos humanos normais estimulou a secreção de insulina, glicose significativamente reduzida no sangue no estado em jejum após a carga de glicose ou ingestão de alimentos (Orskov, C., et al. , Diabetes,42, 658-661, 1993; Qualmann, C. , et al., Acta. Diabetol.,32, 13-16, 1995).

Os peptídeos à base de GLP-1 são uma grande promessa como alternativa a terapia com insulina para pacientes com diabetes que falharam no tratamento com sulfoniluréias (Nauck, M.A. ; et al., Diabetes Care,21, 1925- 1931, 1998). GLP-1 estimula a secreção de insulina, mas somente durante o período de hiperglicemia. A segurança de GLP-1 em comparação com insulina é aumentada por esta propriedade de GLP-1 e pela observação de que a quantidade de insulina secretada é proporcional à magnitude da hiperglicemia. Além disso, a terapia com GLP-1 terá como resultado liberação pancreática de insulina e ação de primeira passagem da insulina no fígado. Isto tem como resultado níveis mais baixos de circulação de insulina na periferia em comparação com injeções subcutâneas de insulina. GLP-1 desacelera o esvaziamento gástrico que é desejável em que espalha absorção de nutrientes ao longo de um período de tempo mais longo, diminuindo o pico de glicose pós-prandial. Diversos relatos podem sugerir que GLP-1 pode aumentar a sensibilidade de insulina em tecidos periféricos tais como tecido muscular, hepático, e adiposo. Finalmente, GLP-1 mostrou ser um potencial regulador de apetite.

O potencial terapêutico para GLP-1 e os seus análogos é aumentado ainda se for considerado o seu uso em pacientes com diabetes tipo 1. Um número de estudos tem demonstrado a eficácia de GLP-1 nativo no tratamento de pacientes com diabetes mellitus dependente de insulina (IDDM). Similar a diabetes mellitus não dependente de insulina (NIDDM), GLP-1 é eficaz na redução de hiperglicemia no jejum através das suas propriedades glucagonostáticas. Estudos adicionais têm indicado que GLP-1 também reduz a excursão glicêmica pós-prandial em IDDM, muito provavelmente através de um atraso no esvaziamento gástrico. Estas observações sugerem que GLP-1 pode ser útil como um tratamento para IDDM bem como para NIDDM.

No entanto, a meia-vida biológica de moléculas de GLP-1 nativo que são afetadas pela atividade de dipeptidil- peptidase IV (DPP IV) é bem curta. Por exemplo, a meia-vida biológica de GLP-1(7-37)OH são meros 3 a minutos (patente US 5118666). Redução sustentada de concentração de glicose no sangue é somente observada com infusão contínua, como demonstrado em estudos em que GLP-1 foi administrado por infusão intravenosa ao longo do curso de tempo de 24 h (Larsen, J. ; et al. Diabetes Care, 24, 1416-1421, 2001). Foi mostrado que a enzima DPP IV, uma serina protease que preferencialmente hidrolisou peptídeos após uma penúltima prolina NH2-terminal (Xaa-Pro-) ou alanina (Xaa-Ala-) (Mentlein, R, , Regul. Pept.,85, 9-25, 1999), rapidamente metaboliza GLP-1 in vitro. Portanto, peptídeos à base de GLP- 1 de ação prolongada que são resistentes a DPP IV podem ter um grande potencial terapêutico para o tratamento de diabetes mellitus.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção proporciona novos análogos de GLP-1 que têm ação prolongada em relação a GLP-1 nativo e são completamente resistentes a hidrólise de DPP IV.

A invenção inclui compostos da fórmula geral I: Xaa7-Q-Gly-Thr-Phe-Thr-Xaai4-Asp- Xaai6-Ser-Xaa18- Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Ala-Trp- Leu-Val-Xaa34 -Xaa35-Xaa36-B ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Xaa7 é um aminoácido natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, α-fluorometil- histidina, e α- metil-histidina;

em que, Ri é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi; R2é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Ci-Cg) alcoxi; R3é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou formam um anel de 5-8 membros com Ri ou R2; X é hidrogênio, flúor, hidroxi, trifluorometila, ou oxigênio; Y é hidrogênio, hidroxila, flúor, ou (Ci-Cg) alquila; Z é nitrogênio, carbono, oxigênio, ou enxofre;

Quando Z é nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, W não existe; Quando Z é carbono, W é hidrogênio, ou flúor. Xaa14 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaaig é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaai6 é lisina ligada com T-U. Xaaie é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa22 e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa27 é aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □'aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais 1grupos alquila. Xaa26, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □~aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos 20 de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa26 é lisina ligada com T-U.

B é selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, NH2 e OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal. ou quando Xaa26 é aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □'aminoisobutírico) e sem ligação com T-U, B é preferivelmente selecionado a partir dos segmentos de 30 peptídeo que consiste em dois a cinco aminoácidos naturais ou não naturais e um aminoácido precisa ser cisteína, como exemplo, mas sem limitação cisteína-serina-glicina ou cisteína-alanina, e monometoxipolietileno glicol maleimida é ligada a cisteína. T é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido y-glutâmico, β-alanina, ácido y-aminobutírico e HOOC (CH2) nCOOH ; n é 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,2 4,25,26, ou 27; T é selecionado a partir do grupo que consiste em

e em que k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10.

U somente existe quando T é um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em ácido y- glutâmico, β-alanina, ácido y-aminobutírico; ou quando T é selecionado a partir do grupo que consiste em

em que k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10.

U é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos;

Ainda outro composto preferido como mostrado pela Fórmula V:

Ri é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi. R2 é hidrogênio, (Cx-Cg) alquila, ou (Ci-Cs) alcoxi. R3 é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou formam um anel de 5-8 membros com Rj. ou R2. X é hidrogênio, flúor, hidroxi, trifluorometila, ou oxigênio.

D é Gly-Phe-Thr-Xaa14-Asp-Xaai6-Ser-Xaaig-Thr-Leu- Glu- Xaa22 - Xaa23 - Ala - Ala - Xaa26 - Xaa2 7 - Phe - Ile-Ala - Trp - Leu - Vai - Xaa34-Xaa35-Xaa3S-B. Xaa7 é um aminoácido natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, a-fluorometil-histidina, e a- metil-histidina; Xaaií é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaais θ um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaai6 é lisina ligada com T-U. 2Xaa18 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido ê opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. 3 0 Xaa22 e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa26, Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □ ’’aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa26 é lisina ligada com T-U.

B é selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, NH2 e OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal, ou quando Xaa26 é aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □'aminoisobutírico) e sem ligação com T-U, B é preferivelmente selecionado a partir dos segmentos de peptídeo que consiste em dois a cinco aminoácidos naturais ou não naturais e um aminoácido precisa ser cisteína, como exemplo, mas sem limitação cisteína-serina-glicina ou cisteína-alanina, e monometoxipolietileno glicol maleimida é ligada a cisteína. T é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido y-glutamico, β-alanina, ácido y-aminobutírico e HOOC (CH2) nCOOH; n é 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,2 4,25,26, OU 27; ou T é selecionado a partir do grupo que consiste em

em que k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou .

U é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos.

Como uma solução técnica preferida, R3 é 1hidrogênio, ou formam um anel de 5-8 membros com R3 ou R2.

Como uma solução técnica preferida, X é hidrogênio, flúor, ou trifluorometila.

Como uma solução técnica preferida, Ri, R2 e R3 são hidrogênio ou metila.

Como uma solução técnica preferida, Ri é metila, R2 e R3 é hidrogênio.

Como uma solução técnica preferida, Ri e R3 são hidrogênio e R2 é metila.

Como uma solução técnica preferida, R3 forma um 2anel de 5-8 membros com Ri e R2 é hidrogênio; ou R3 forma um anel de 5-8 membros com R2 e Rx é hidrogênio.

Compostos mais preferidos como mostrado na Fórmula VI,

em que Ri é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi. R2é hidrogênio, (Cx-Cs) alquila, ou (C3-C6) alcoxi. R3 é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou formam um anel de 5-8 membros com Rj. ou R2. Y é hidrogênio, hidroxila, flúor, ou (Ci-C6) alquila. D é Gly-Phe-Thr-Xaa14-Asp-Xaai6-Ser-Xaa18-Thr-Leu- Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val- Xaa34 - Xaa3-Xaa36 - B . Xaa7 é um aminoácido natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- 1histidina, homohistidina, α-fluorometil-histidina, e a- metil-histidina; Xaai4 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito 20 aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaai6 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do ' 2dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa36 é lisina ligada com T-U. Xaai8 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do í dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa22 e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa27 é aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □ 'aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa26, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são aminoácidos de origem 1natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □'aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa26 é lisina ligada com T-U.

B é selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, NH2 e OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal, ou

Quando Xaa26 é aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em 2glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □'aminoisobutírico) e sem ligação com T-U, B é preferivelmente selecionado a partir dos segmentos de peptídeo que consiste em dois a cinco aminoácidos naturais ou não naturais e um aminoácido precisa ser cisteína, como 30 exemplo, mas sem limitação cisteína-serina-glicina ou cisteína-alanina, e monometoxipolietileno glicol maleimida é ligada a cisteína. T é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido y-glutâmico, β-alanina, ácido y-aminobutírico e HOOC (CH2) nCOOH ; n é 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,2 4,25,26, ou 27; ou T é selecionado a partir do grupo que consiste em

em que, k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10.

U é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos

Como uma solução técnica preferida, R3 é hidrogênio.

Como uma solução técnica preferida, Y é hidrogênio, ou (Ci-C6) alquila.

Ainda outros compostos preferidos como mostrado pela Fórmula VII

em que Ri é hidrogênio, (Ci~Ce) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi. R2éhidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Cx-Cg) alcoxi. R3é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou formam um anel de 5-8 membros com Rx ou R2. Y é hidrogênio, hidroxila, flúor, ou (C].-Ce) alquila. W é hidrogênio, ou flúor. D é Gly-Phe-Thr-Xaai4-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Thr-Leu- Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val- Xaa34 - Xaa3-Xaa36 -B . Xaa7 é um aminoácido natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, α-fluorometil-histidina, e a- metil-histidina; Xaai4 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa16 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa3g é lisina ligada com T-U. Xaaia é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa2z e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa26, Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido ETaminoisobutírico); em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Ou Xaa26 é lisina 1ligada com T-U.

B é selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, NH2 e OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal, ou quando Xaa26 é aminoácido de origem natural ou não 20 natural selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □ aminoisobuti rico) e sem ligação com T-U, B é preferivelmente selecionado a partir dos segmentos de peptídeo que consiste em dois a cinco aminoácidos naturais ou 2não naturais e um aminoácido precisa ser cisteína, como exemplo, mas sem limitação cisteína-serina-glicina ou cisteína-alanina, e monometoxipolietileno glicol maleimida é ligada a cisteína.

T é selecionado a partir do grupo que consiste em 30 ácido y-glutâmico, β-alanina, ácido y-aminobutírico e HOOC (CH2) nCOOH ; n θ 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,2 4,25,26, ou 27; ou T é selecionado a partir do grupo que consiste em

em que k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;

em que k é selecionado a partir do grupo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, emé selecionado a partir de 1, 12, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;

U é um ácido graxo com comprimento de 8 a 2 0 carbonos.

Como uma solução técnica preferida, R3 é hidrogênio, ou formam um anel de 5-8 membros com Rj ou R2;

Como uma solução técnica preferida, Y é hidrogênio, ou flúor;

Como uma solução técnica preferida, W é hidrogênio, ou flúor.

Ainda outros compostos preferidos como mostrado pela Fórmula VIII

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em Xaa7é um aminoácido natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, α-f luorometil-histidina, e cx- met il-histidina;

Q é selecionado a partir dos seguintes ligantes (II), (III), OU (IV):

de 5-8 membros com R3 ou R2. em que R, é hidrogênio, (C1-C6) R, é hidrogênio, (C,-C6) R, é hidrogênio, (Cj -cd de 5- 8 membros com R1 ou R2. X é hidrogênio, flúor, hidroxi, trifluorometila, ou oxigênio. 2 0 Y é hidrogênio, hidroxi la, flúor, ou (Ci-Ce) alquila.

Z é nitrogênio, carbono, oxigênio, ou enxofre.

Quando Z é nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, W não existe. Quando Z é carbono, W é hidrogênio, flúor. . 2 XaaX4 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila.

Xaaiβ é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila.

Xaa18 é um aminoácido dé origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila

Xaa22 e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila.

Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa3S são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido □“aminoisobutírico) ; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila.

B é selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, NH2 e OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal.

T é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido y-glutâmico, β-alanina, ácido y-aminobutírico e HOOC (CH2) nCOOH; n é 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,2 4,25,26, OU 27; ou T é selecionado a partir do grupo que consiste em

U é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos;

Ainda outros compostos preferidos como mostrado pela Fórmula IX

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

Xaa7 é um aminoácido natural ou não natural 2selecionado a partir do grupo que consiste em L-His, D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, a-fluorometil-histidina, e a- metil-histidina;

Q é selecionado a partir dos seguintes ligantes (II) , (III) , ou (IV) :

em que Ri é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi. R2 é hidrogênio, (Cx-Cg) alquila, ou (Ci-C6) alcoxi. R3 é hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ou formam um anel de 5-8 membros com Rx ou R2. X é hidrogênio, flúor, hidroxi, trifluorometila, ou oxigênio. Y é hidrogênio, hidroxila, flúor, ou (Ci-C6) alquila. Z é nitrogênio, carbono, oxigênio, ou enxofre.

Quando Z é nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, W não existe. Quando Z é carbono, W é hidrogênio, flúor. Xaa14 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, e histidina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa16 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em valina, lisina e leucina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaai8 é um aminoácido de origem natural ou não natural selecionado a partir do grupo que consiste em serina, arginina e lisina; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa22 e Xaa23 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, Aib e ácido glutâmico; em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa26, Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são aminoácidos de origem natural ou não natural selecionados a partir do grupo que consiste em glicina, lisina, arginina, leucina e asparagina, Aib (ácido ETaminoisobutírico); em que um ou mais dos átomos de carbono do dito aminoácido é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa11, Xaa11*1, Xaan+2, Xaan+3, Xaa11*4, Xaa"1, Xaam+1, Xaa™*2, Xaa™*3, Xaam*4 todos juntos poderiam ser um, ou dois, ou 1três ou quatro aminoácidos selecionados a partir de aminoácidos naturais ou não naturais. Em outras palavras, Xaa11, Xaa11*1, Xaan+2, Xaa11*3, Xaa11*4, Xaam, Xaa™*1, Xaa™*2, Xaa™*3, Xaa™*4 todos juntamente com cisteína formarão dois a cinco segmentos de aminoácidos e cisteína ligada a 20 monometoxipolietileno glicol maleimida.

Os seguintes compostos da invenção são proporcionados para dar ao leitor um entendimento dos compostos abrangidos pela invenção:

•

Chave à presente invenção é substituir a ligação amida de Ala8 do amino terminal de GLP-1, que é o sítio de reconhecimento para DPP-IV, com os ligantes miméticos de ligação peptídica. Os ligantes miméticos de ligação peptídica são uma abordagem clássica na descoberta de fármacos por ligação peptídica mimética natural e que retêm a capacidade de interagir com os alvos biológicos e produzem os mesmos efeitos biológicos (Curr Chem Bio, 12, 292-296, 2008). Com base no mesmo princípio, os análogos de GLP-1 modificados de ligantes miméticos de ligação peptídica devem reter a mesma atividade biológica e ter uma longa duração de ação como agentes insulinotrópicos.

Os compostos da invenção podem ter um ou mais centros assimétricos, tais como ligante A na Fórmula I. Tais compostos podem estar presentes em uma ou mais formas estereoisoméricas. Estes compostos podem ser, por exemplo, racematos, formas opticamente ativas, ou misturas enantiomericamente enriquecidas de estereoisômeros. Onde desejado, os enantiômeros individuais, isto é, formas opticamente ativas, podem ser obtidos por meio de procedimentos conhecidos, por exemplo, por meio de síntese assimétrica, por meio de síntese a partir de materiais de partida opticamente ativos, ou por meio de resolução dos racematos. A resolução dos racematos pode ser conseguida por meio de métodos convencionais tais como, por exemplo, cristalização na presença de um agente de resolução; derivatização com um reagente enantiomericamente puro ou de resolução enriquecido seguido por isolamento do isômero desejado; ou cromatografia, usando, por exemplo, uma coluna de HPLC quiral.

O termo "polipeptídeo" e "peptídeo" como usado no presente documento significa um composto constituído por pelo menos cinco aminoácidos constituintes conectados por ligações peptídicas. Os aminoácidos constituintes podem ser do grupo dos aminoácidos codificados pelo código genético e podem ser aminoácidos naturais que não são codificados pelo código genético, bem como aminoácidos sintéticos. Aminoácidos naturais que não são codificados pelo código genético são, por exemplo, v- carboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, D- alanina e D-glutamina. Aminoácidos sintéticos compreendem aminoácidos preparados por meio de síntese química, isto é, D-isômeros dos aminoácidos codificados pelo código genético tal como D-alanina e D-leucina, Aib (ácido a- aminoisobutírico), Abu (ácido α-aminobutirico), Tie (terc- butilglicina) , β-alanina, ácido 3-aminometil benzóico, ácido antranílico.

Os 22 aminoácidos proteogênicos são: Alanina, Arginina, Asparagina, Ácido aspártico, Cisteína, Cistina, Glutamina, Ácido glutâmico, Glicina, Histidina, Hidroxiprolina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Fenilalanina, Prolina, Serina, Treonina, Triptofano, Tirosina, Valina.

Assim um aminoácido não proteogênico é uma fração que pode ser incorporada em um peptídeo via ligações peptídicas, mas não é um aminoácido proteogênico. Exemplos são Y~carboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, os D- aminoácidos tais como D-alanina e D-glutamina, Aminoácidos não proteogênicos sintéticos compreendem aminoácidos preparados por meio de síntese química, isto é, D-isômeros dos aminoácidos codificados pelo código genético tal como D- alanina e D-leucina,

Aib (ácido a-aminoisobutírico), Abu (ácido OÍ- aminobutírico), Tie (terc-butilglicina), ácido 3- aminometil benzóico, ácido antranílico, des-amino-Histidina, os análogos beta de aminoácidos tais como β-alanina etc. D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi- histidina, homohistidina, N“-acetil-histidina, a-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3- pyridilalanina, 2-piridilalanina ou 4- piridilalanina, ácido (1-amino-ciclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1- aminociclopentil) carboxílico, ácido carboxílico (1- aminociclohexil) , ácido (1-aminocicloheptil) carboxílico, ou ácido (1-aminociclooctil) carboxílico;

A sequência de aminoácidos para GLP foi relatada por diversos pesquisadores (Lopez, L. C. et al., Proc. Nat'1, Acad.Sci., USA 80, 5485-5489, 1983; Bell, G.I., et al. , Nature 302:716-718 (1983); Heinrich, G. , et al, Endocrinol, 115:2176-2181(1984). A estrutura do mRNA de pré-pró-glucagon e a sua correspondente sequência de aminoácidos é bem conhecida. O processamento de proteólise do produto de gene precursor, pró-glucagon, em glucagons e os dois peptídeos insulinotrópicos foi caracterizado. Como usado no presente documento, a notação de GLP-1 (1-37) se refere a um polipeptídeo GLP-1 que tem todos os aminoácidos desde 1 (N- . terminal) até 37 (C-terminal). De maneira similar, GLP-1 (7- 37) se refere a um polipeptídeo GLP-1 que tem todos os aminoácidos desde 7 (N-terminal) até 37 (C-terminal). De maneira similar, GLP-1(7-36) se refere a um polipeptídeo GLP- 1 que tem todos os aminoácidos desde o número 7 (N-terminal) até o número 36 (C-terminal).

Também proporcionado pela presente invenção são composições farmacêuticas compreendendo um composto da 1presente invenção em combinação com um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, ou excipientes.

O princípio da síntese em fase sólida de polipeptídeos é bem conhecido na técnica e pode ser 20 encontrado em textos gerais na área tais como Dugas, H. e Penney, C., Bioorganic Chemistry(1981) Springer-Verlag, Nova Iorque, página 54-92; Merrifield, J.M., Chem. Soc.,85, 2149, 1962, e Stewart e Young, Solid Phase Peptide Synthesis, página 24-66, Freeman (San Francisco, 1969).

Por exemplo, um fragmento de peptídeo da invenção pode ser sintetizado by metodologia de fase sólida utilizando • um sintetizador de peptídeos Applied Biosystems 430 (Applied

Biosystems, Inc., 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, CA 94404) e ciclos de síntese fornecidos por Applied Biosystems. aminoácidos protegidos por Boc e outros reagentes estão comercialmente disponíveis de Applied Biosystems e outros vendedores de produtos químicos. A química de Boc sequencial usando protocolos de duplo acoplamento é aplicada às resinas de p-metil benzidril amina de partida para a produção de carboxamidas C-terminais. para a produção de ácidos C- terminais, a correspondente resina PAM pode ser usada. Asp, Gin e Arg são acopladas usando ésteres de hidroxil benzotriazol pré-formados.

Outro objeto da presente invenção é proporcionar uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a presente invenção que está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml a 2mg/ml, e em que a dita formulação tem um pH de 3,0 a 9,0. A formulação pode compreender ainda um sistema tampão, conservante(s), agente(s) de tonicidade, agente(s) quelante(s), estabilizantes e tensoativos. Em uma modalidade da invenção a formulação farmacêutica é uma formulação aquosa, isto é, 1formulação compreendendo água. Tal formulação é tipicamente uma solução ou uma suspensão. Em uma modalidade adicional da invenção a formulação farmacêutica é uma solução aquosa. O termo "formulação aquosa" é definido como uma formulação compreendendo pelo menos 50 % p/p de água. Igualmente, o 20 termo "solução aquosa" é definido como uma solução compreendendo pelo menos 50 % p/p de água, e o termo "aquoso suspensão" é definido como uma suspensão compreendendo pelo menos 50 % p/p de água.

Em outra modalidade a formulação farmacêutica é uma 2formulação seca por congelamento, à qual o médico ou o paciente adiciona solventes e/ou diluentes antes de uso.

Em outra modalidade a formulação farmacêutica é uma formulação seca (por exemplo, seca por congelamento ou seca por pulverização) pronta para uso sem qualquer prior 30 dissolução.

Em um aspecto adicional a invenção se refere a uma formulação farmacêutica compreendendo uma solução aquosa de um composto de acordo com a presente invenção, e um tampão, em que o dito composto está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml ou superior, e em que a dita formulação tem um pH de cerca de 3,0 a cerca de 9,0. Em outra modalidade da invenção o pH da formulação ê de cerca de 7,0 a cerca de 9,5.

Em outra modalidade da invenção o pH da formulação é de cerca de 3,0 a cerca de 7,0. Em outra modalidade da invenção o pH da formulação é de cerca de 5,0 a cerca de 7,5. Em outra modalidade da invenção o pH da formulação é de cerca de 7,a cerca de 9,0. Em outra modalidade da invenção o pH da formulação ê de cerca de 7,a cerca de 8,5. Em outra modalidade da invenção o pH da formulação é de cerca de 6,0 a cerca de 7,5.

Em outra modalidade da invenção o pH da formulação é de cerca de 6,0 a cerca de 7,0. Em outra modalidade a 1formulação farmacêutica é de 8,0 a 8,5.

Em uma modalidade adicional da invenção o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste em sódio acetato, sódio carbonato, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrogenofosfato sódico, hidrogenofosfato 20 dissódico, fosfato de sódio, e tris(hidroximetil)- aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico ou misturas dos mesmos. Cada um destes tampões específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção.

Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um conservante farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade adicional da invenção o conservante é selecionado a partir do grupo que consiste em fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de 30 metila, p-hidroxibenzoato de propila, 2-fenoxietanol, p- hidroxibenzoato de butila, 2-feniletanol, álcool benzílico, clorobutanol, e tiomerosal, bronopol, ácido benzóico, imiduréia, clorohexidina, dehidroacetato de sódio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etila, cloreto de benzetônio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropano-l,2-diol) ou misturas dos mesmos. Em uma modalidade o conservante é fenol ou m-cresol. Em uma modalidade adicional da invenção o conservante está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o conservante está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml a mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o conservante está presente em uma concentração de mg/ml a mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o conservante está presente em uma concentração de mg/ml a 20 mg/ml. Cada um destes conservantes específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção. O uso de um conservante em composições farmacêuticas é bem conhecido ao técnico no 1assunto. Para conveniência, referência é feita a Remington:

The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.

Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um agente isotônico. Em uma modalidade adicional da invenção o agente isotônico é 20 selecionado a partir do grupo que consiste em um sal (por exemplo, cloreto de sódio), um açúcar ou álcool de açúcar, um aminoácido (por exemplo, L- glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina), um alditol (por exemplo, glicerol (glicerina), 1,2- 2propanodiol (propilenoglicol), 1,3-propanodiol, 1,3- butanodiol) polietilenoglicol (por exemplo, PEG400), ou misturas dos mesmos. Em uma modalidade o agente de isotonicidade é propilenoglicol. Qualquer açúcar tal como mono-, di-, ou polissacarídeos, ou glucanos solúveis em água, 30 incluindo, por exemplo, frutose, glicose, manose, sorbose, xilose, maltose, lactose, sacarose, trehalose, dextrana, pululana, dextrina, ciclodextrina, amido solúvel, amido de hidroxietila e carboximetil-celulose-Na podem ser usados. Em uma modalidade o aditivo de açúcar é sacarose. Álcool de açúcar é definido como um hidrocarboneto C4-C8 que tem pelo menos um grupo -OH e inclui, por exemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol, e arabitol. Em uma modalidade o aditivo de álcool de açúcar é manitol. Os açúcares ou álcoois de açúcar mencionados acima podem ser usados individualmente ou em combinação. Não existe limite fixo à quantidade usada, contanto que o açúcar ou álcool de açúcar é solúvel na preparação líquida e não afeta adversamente os efeitos estabilizantes alcançados usando os métodos da invenção. Em uma modalidade, o açúcar ou álcool de açúcar concentração está entre cerca de 1 mg/ml e cerca de 150 mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente isotônico está presente em uma concentração de 1 mg/ml a 0 1mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente isotônico está presente em uma concentração de 1 mg/ml a 7 mg/ml. Em uma modalidade da invenção o agente isotônico está presente em uma concentração de mg/ml a 7 mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente isotônico está 2 0 presente em uma concentração de 8 mg/ml a 24 mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente isotônico está presente em uma concentração de 2mg/ml a 50 mg/ml. Cada um destes agentes isotônicos específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção. O uso de um agente 2isotônico em composições farmacêuticas é bem conhecido ao técnico no assunto. Para conveniência, referência é feita a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 199.

Em uma modalidade adicional da invenção a 30 formulação compreende ainda um agente quelante. Em uma modalidade adicional da invenção o agente quelante é selecionado a partir de sais de ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), ácido cítrico, e ácido aspártico, e misturas dos mesmos. Em uma modalidade adicional da invenção o agente quelante está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml a mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente quelante está presente em uma concentração de 0,1 mg/ml a 2 mg/ml. Em uma modalidade adicional da invenção o agente quelante está presente em uma concentração de 2 mg/ml a mg/ml. Cada um destes agentes quelantes específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção. 0 uso de um agente quelante em composições farmacêuticas é bem conhecido ao técnico no assunto. Para conveniência, referência é feita a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.

Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um estabilizante. O uso de um estabilizante em composições farmacêuticas é bem conhecido ao técnico no assunto. Para conveniência, referência é feita a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 199.

Mais particularmente, as composições da invenção são composições farmacêuticas líquidas estabilizadas cujos componentes terapeuticamente ativos incluem um polipeptídeo que possivelmente exibe formação de agregados durante o armazenamento em formulações farmacêuticas líquidas. Por "formação de agregados" se pretende uma interação física entre as moléculas de polipeptídeo que tenha como resultado a formação de oligômeros, que podem permanecer solúveis, ou grandes agregados visíveis que precipitam da solução. Por "durante o armazenamento" se pretende uma composição ou formulação farmacêutica líquida que uma vez preparada, não seja imediatamente administrada a um indivíduo. Ao invés disso, em seguida à preparação, é embalada para armazenamento, em uma forma líquida, em um estado congelado, ou em uma forma seca para reconstituição posterior em uma forma líquida ou outra forma adequada para administração a um indivíduo. Por "forma seca" se pretende a composição ou formulação farmacêutica líquida que é seca por meio de secagem por congelamento (isto é, liofilização; ver, por exemplo, Williams e PoIIi (1984) J. Parenteral Sei. Technol. 38:48-59), secagem por pulverização (ver Masters (1991) em Spray-Drying Handbook (5a ed; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp. 491 - 676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1 169-1206; e Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 1 1 :12-20), ou secagem ao ar (Carpenter e Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; e Roser (1991) Biopharm. 4:47-53). Formação de agregados por um polipeptídeo durante o armazenamento de uma composição farmacêutica líquida pode afetar adversamente a atividade 1biológica desse polipeptídeo, tendo como resultado a perda de eficácia terapêutica da composição farmacêutica. Além disso, a formação de agregados pode causar outros problemas tais como bloqueio de tubulação, membranas, ou bombas quando a composição farmacêutica contendo polipeptídeos é administrada 20 usando um sistema de infusão.

As composições farmacêuticas da invenção podem compreender ainda uma quantidade de um aminoácido básico suficiente para diminuir a formação de agregados pelo polipeptídeo durante o armazenamento da composição. Por 2"aminoácido básico" se pretende um aminoácido ou uma combinação de aminoácidos, onde qualquer dado aminoácido está presente na sua forma de base livre ou na sua forma de sal. Onde uma combinação de aminoácidos for usada, todos os aminoácidos podem estar presentes nas suas formas de base 30 livre, todos podem estar presentes nas suas formas de sal, ou alguns podem estar presentes nas suas formas de base livre enquanto outros estão presentes nas suas formas de sal. Em uma modalidade, aminoácidos para usar na preparação das composições da invenção são aqueles que portam uma cadeia lateral carregada, tal como arginina, lisina, ácido aspártico, e ácido glutâmico. Qualquer estereoisômero (isto é, L, D, ou um mistura do mesmo) de um aminoácido particular (por exemplo, metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina e misturas dos mesmos) ou combinações destes estereoisômeros, pode estar presente nas composições farmacêuticas da invenção contanto que o aminoácido particular esteja presente na sua forma de base livre ou sua forma de sal. Em uma modalidade o L-estereoisômero é usado. As composições da invenção podem também ser formuladas com análogos destes aminoácidos. Por "análogo de aminoácido" se pretende um derivado do aminoácido de origem natural que causa o efeito desejado de diminuir a 1formação de agregados pelo polipeptídeo durante o armazenamento das composições farmacêuticas líquidas da invenção. Análogos de arginina adequados incluem, por exemplo, aminoguanidina, ornitina e N-monoetil L-arginina, análogos de metionina adequados incluem etionina e butionina 20 e análogos de cisteína adequados incluem S- metil-L cisteína.

Como com os outros aminoácidos, os análogos de aminoácido são incorporados nas composições na sua forma de base livre ou sua forma de sal. Em uma modalidade adicional da invenção os aminoácidos ou análogos de aminoácido são usados em uma 2concentração, que é suficiente para prevenir ou retardar a agregação da proteína. Em uma modalidade adicional da invenção metionina (ou outros aminoácidos sulfúricos ou análogos de aminoácido) podem ser adicionados para inibir a oxidação de resíduos de metionina a sulfóxido de metionina 30 quando o polipeptídeo que age como o agente terapêutico é um polipeptídeo compreendendo pelo menos um resíduo de metionina susceptível a tal oxidação. Por "inibir" se pretende uma acumulação mínima de espécies oxidadas por metionina ao longo do tempo. Inibir a oxidação de metionina tem como resultado uma maior retenção do polipeptídeo na sua forma molecular apropriada. Qualquer estereoisômero de metionina (L ou D) ou combinações do mesmo pode ser usado. A quantidade a ser adicionada deveria ser uma quantidade suficiente para inibir a oxidação dos resíduos de metionina tal que a quantidade de sulfóxido de metionina seja aceitável a agências reguladoras. Tipicamente, isto significa que a composição contém não mais de cerca de % a cerca de 30 % sulfóxido de metionina.

Geralmente, isto pode ser alcançado por meio da adição de metionina tal que a razão de metionina adicionada a faixas de resíduos de metionina de cerca de 1 :1a cerca de 1000:1, tal como 10:1 a cerca de 100:1.

Em uma modalidade adicional da invenção a 1formulação compreende ainda um estabilizante selecionado a partir do grupo de polímeros de alto peso molecular ou compostos de baixo peso molecular. Em uma modalidade adicional da invenção o estabilizante é selecionado a partir de polietileno glicol (por exemplo, PEG 3350), álcool 20 polivinílico (PVA), polivinilpirrolidona, carboxi- /hidroxicelulose ou derivados dos mesmos (por exemplo, HPC, HPC-SL, HPC-L e HPMC), ciclodextrinas, substâncias contendo enxofre como monotioglicerol, ácido tioglicólico e 2- metiltioetanol, e sais diferentes (por exemplo, cloreto de 2sódio). Cada um destes estabilizantes específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção.

As composições farmacêuticas podem também compreender agentes estabilizantes adicionais, que aumentam ainda mais a estabilidade de um polipeptídeo terapeuticamente 30 ativo nas mesmas. Os agentes estabilizantes de particular interesse à presente invenção incluem, mas não são limitados a, metionina e EDTA, que protegem o polipeptídeo contra oxidação de metionina, e um tensoativo não iônico, que I protege o polipeptídeo contra a agregação associada a congelamento-descongelamento ou cisalhamento mecânico.

Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um tensoativo. Em outra modalidade da invenção a composição farmacêutica compreende dois tensoativos diferentes. O termo "Tensoativo" como usado no presente documento se refere a quaisquer moléculas ou íons que estão compreendidos de uma parte solúvel em água (hidrofílica), a cabeça, e um segmento solúvel em gordura (lipofílica). Tensoativos acumulam preferivelmente nas interfaces, que a parte hidrofílica é orientada em direção à água (fase hidrofílica) e a parte lipofílica em direção à fase oleosa ou hidrofóbica (isto é, vidro, ar, óleo etc.). A concentração na qual os tensoativos começam a formar micelas 1é conhecida como a concentração de micela crítica ou CMC. Além disso, tensoativos diminuir a tensão superficial de um líquido. Tensoativos são também conhecidos como compostos anfipáticos. O termo "Detergente" é um sinônimo usado para tensoativos em geral.

Tensoativos aniônicos podem ser selecionados a partir do grupo de: ácido quenodesoxicólico, sal sódico de ácido quenodesoxicólico, ácido cólico, ácido desidrocólico, ácido desoxicólico, éster metílico de ácido desoxicólico, digitonina, digitoxigenina, N-óxido de N,N- 2dimetildodecilamina, docusato de sódio, ácido glicoquenodesoxicólico de sódio, hidrato de ácido glicocólico, monohidrato de ácido glicodesoxicólico, sal sódico de ácido glicodesoxicólico, sal sódico de ácido glicodesoxicólico, sal dissódico de 3-sulfato de ácido glicolitocólico, éster etílico de ácido glicolitocólico, sal sódico de n-lauroilsarcosina, sal sódico de n- lauroilsarcosina, n-lauroilsarcosina, n-lauroilsarcosina, dodecil sulfato de lítio, lugol, sal sódico de ácido 1 - octanossulfônico, sal sódico de ácido 1 - octanossulfônico, 1 -butanossulfonato de sódio, 1 -decanossulfonato de sódio, 1 - dodecanossulfonato de sódio, 1 -heptanossulfonato de sódio, 1 -heptanossulfonato de sódio, 1 -nonanossulfonato de sódio, monohidrato de 1 -propanosulfonato de sódio, 2- bromoetanossulfonato de sódio, hidrato de colato de sódio, bílis de boi ou ovelha, hidrato de colato de sódio, coleato de sódio, desoxicolato de sódio, dodecil sulfato de sódio, dodecil sulfato de sódio, hexanossulfonato de sódio, octil sulfato de sódio, pentanossulfonato de sódio, taurocolato de sódio, sal sódico de ácido tauroquenodesoxicólico, monohidrato de sal sódico de ácido taurodesoxicólico, sal dissódico de 3-sulfato de ácido taurolitocólico, sal sódico de ácido tauroursodesoxicólico, Trizma dodecil sulfato, DSS 1(docusato de sódio, n° de registro CAS [577-1 1 -7] ) , docusato de cálcio, n° de registro CAS [128-49-4]), docusato de potássio, n° de registro CAS [7491 - 09-0]), SDS (dodecil sulfato de sódio ou lauril sulfato de sódio),

Dodecilfosfocolina (FOS- Colina-12), Decilfosfocolina (FOS- Colina-10), Nonilfosfocolina (FOS-Colina- 9) , ácido dipalmitoil fosfatídico, caprilato de sódio, e/ou ácido ursodesoxicólico.

Tensoativos catiônicos podem ser selecionados a partir do grupo de: cloreto de benzalcônio de brometo 2alquiltrimetilamônio, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzildimetilhexadecilamônio, cloreto de benzildimetiltetradecilamônio, tetracloroiodato de benziltrimetilamônio, brometo de dimetildioctadecilamônio, brometo de dodeciletildimetilamônio, brometo de 30 dodeciltrimetilamônio, brometo de dodeciltrimetilamônio, brometo de etilhexadecildimetilamônio, brometo de hexadeciltrimetilamônio, brometo de hexadeciltrimetilamônio, polioxietileno(10)-n-sebo-1,3-diaminopropano, brometo de tonzônio, e/ou brometo de trimetil(tetradecil)amónio.

Tensoativos não iônicos podem ser selecionados a partir do grupo de: BigCHAP, Bis(polietileno glicol bispmidazoil carbonil]), copolímeros em bloco como copolímeros em bloco de óxido de polietileno/óxido de polipropileno tais como poloxâmeros, poloxâmero 188 e poloxâmero 407, Brij 35, Brij 56, Brij 72, Brij 76, Brij 92V, Brij 97, Brij 58P, Cremophor EL, Decaetileno glicol monododecil éter, N-Decanoil-N-metil-glucamina, n-Dodecanoil- N-metilglucamida, alquil-poliglicosídeos, óleo de rícino etoxilado, monodecil éter de Heptaetileno glicol, monododecil éter de Heptaetileno glicol, monotetradecil éter de Heptaetileno glicol, monododecil éter de Hexaetileno glicol, monohexadecil éter de Hexaetileno glicol, monooctadecil éter 1de Hexaetileno glicol, monotetradecil éter de Hexaetileno glicol, Igepal CA-630, Igepal CA-630, Metil-6-0-(N- heptilcarbamoil)-beta-D-glucopiranosídeo, monododecil éter de Nonaetileno glicol, N- Nonanoil-N-metilglucamina, N-Nonanoil- N-metilglucamina, monodecil éter de Octaetileno glicol, 20 monododecil éter de Octaetileno glicol, monohexadecil éter de Octaetileno glicol, monooctadecil éter de Octaetileno glicol, monotetradecil éter de Octaetileno glicol, Octil-β-D- glucopiranosídeo, monodecil éter de Pentaetileno glicol, monododecil éter de Pentaetileno glicol, monohexadecil éter 2de Pentaetileno glicol, monohexil éter de Pentaetileno glicol, monooctadecil éter de Pentaetileno glicol, monooctil éter de Pentaetileno glicol, diglicidil éter de Polietileno glicol, éter de Polietileno glicol W-l, tridecil éter de Polioxietileno 10, estearato de Polioxietileno 100, 30 isohexadecil éter de Polioxietileno 20, oleil éter de

Polioxietileno 20, estearato de Polioxietileno 40, estearato de Polioxietileno 50, estearato de Polioxietileno 8, Polioxietileno bis(imidazolila carbonil), Polioxietileno 2 estearato de propileno glicol, Saponina de Quillaja bark, ® ® © ® _ Span 20, Span 40, Span 60, Span 65, Span 80, Span 85, Tergitol, Tipo 15-S-12, Tergitol, Tipo 15-S-30, Tergitol, Tipo 15-S-5, Tergitol, Tipo 15-S-7, Tergitol, Tipo 15-S-9, Tergitol, Tipo NP-10, Tergitol, Tipo NP-4, Tergitol, Tipo NP- 40, Tergitol, Tipo NP-7, Tergitol, Tipo NP-9, Tetradecil-β-D- maltosideo, monodecil éter de Tetraetileno glicol, monododecil éter de Tetraetileno glicol, monotetradecil éter de Tetraetileno glicol, monodecil éter de Trietileno glicol, monododecil éter de Trietileno glicol, monohexadecil éter de Trietileno glicol, monooctil éter de Trietileno glicol, monotetradecil éter de Trietileno glicol, Triton CF-21, Triton CF-32, Triton DF-12, Triton DF-16, Triton GR-5M, Triton QS-15, Triton QS-44, Triton X-100, Triton X-102, Triton X-15, Triton X-151, Triton X-200, Triton X- 207, ® ® -■ ,,, .1 , ® Triton X-100, Triton X-114, Triton X-16solução, Triton ® ® ® _ X-30solução, Triton X- 405, Triton X-45, Triton X-705-70, TWEEN® 20, TWEEN® 40, TWEEN® 60, TWEEN® 6, TWEEN® 65, TWEEN® 80, TWEEN® 81, TWEEN® 85, Tiloxapol, sphingofosfolipids (esfingomielina), e esfingoglicolipidios (ceramidas, gangliosideos), fosfolipidios, e/ou n- Undecil β-D- glucopiranosideo, Tensoativos zwiteriônicos podem ser selecionados a partir do grupo de: CHAPS, CHAPSO, sal interno de 3- (Decildimetilamônio)propanosulfonato, sal interno de 3- (Dodecildimetilamonio)- propanosulfonato, sal interno de 3- (Dodecildimetilamônio)propanosulfonato, 3- (N,N-Dimetilmyristilamônio)propanosulfonato, 3-(N,N-Dimetiloctadecil-amônio)- propanosulfonato, sal interno de 3- (N, N-Dimetiloctilamônio)propanosulfonato, 3-(N, N-

Dimetilpalmitilamônio)propanosulfonato, N-alquil-N, N- dimetilamônio-1 - propanosulfonatos, 3-colamido-l propildimetilamônio-1 -propanosulfonato, Dodecilfosfocolina, miristoil lisofosfatidilcolina, Zwitergente 3-12 (N-dodecil- N,N-dimetil-3-amônio-l -propanosulfonato), Zwitergente 3-(sal interno de 3 -(Decildimetilamônio)- propanosulfonato) , Zwitergente 3-08 (3-(Octildimetilamônio)pro-panossulfonato), glicerofosfolipidios (lecitinas, quefalinas, fosfatidil serina), gliceroglicolipidios (galactopiranosídeo), alquila, alcoxila (éster alquilico), alcoxi (alquil éter)-derivados de lisofosfatidila e fosfatidilcolinas, por exemplo, derivados lauroila e miristoila de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina, e modificações do grupo de cabeça polar, que são colinas, etanolaminas, ácido fosfatidico, serinas, treoninas, glicerol, inositol, lisofosfatidilserina e lisofosfatidiltreonina, acilcarnitinas e derivados, derivados Nbeta-acilados de lisina, arginina ou 1histidina, ou derivados acilados de cadeia lateral de lisina ou arginina, derivados Nbeta-acilados de dipeptideos compreendendo qualquer combinação de lisina, arginina ou histidina e um neutral ou acidic aminoácido, derivados Nbeta- acilados de um tripeptideo compreendendo qualquer combinação 20 de um aminoácido neutro e dois aminoácidos carregados, ou o tensoativo pode ser selecionado a partir do grupo de derivados de imidazolina, ácidos graxos de cadeia longa e sais dos mesmos C6-Ci2 (por exemplo, ácido oleico e ácido caprílico), N-Hexadecil-N,N-dimetil-3-amônio-l 2propanosulfonato, tensoativos monovalentes aniônicos (alquil- aril-sulfonatos), palmitoil lisofosfatidil-L-serina, lisofosfolipídios (por exemplo, ésteres l-acil-sn-glicero-3- fosfato de etanolamina, colina, serina ou treonina), ou misturas dos mesmos.

O termo "alquil-poliglicosídeos" como usado no presente documento se refere a uma cadeia C5_2o-alquila, alquenila ou -alquinila linear ou ramificada que é substituída por um ou mais frações glicosídicas tais como maltosídeo, sacarídeo etc. Modalidades destes alquil- poliglicosídeos incluem Cg-ie- alquil-poliglicosídeos. Modalidades específicas destes alquil-poliglicosídeos inclui as cadeias de carbono de número par tal como cadeia de C6, C8, Cio, Ci2, Ci4, Ci6, Cio e C2o alquila. Modalidades específicas das frações glicosídicas incluem piranosídeo, glicopiranosídeo, maltosídeo, maltotriosídeo e sacarose. Em modalidades da invenção menos de 6 frações glicosídicas são unidas ao grupo alquila. Em modalidades da invenção menos de frações glicosídicas são unidas ao grupo alquila. Em modalidades da invenção menos de 4 frações glicosídicas são unidas ao grupo alquila. Em modalidades da invenção menos de frações glicosídicas são unidas ao grupo alquila. Em modalidades da invenção menos de 2 frações glicosídicas são 1unidas ao grupo alquila. Modalidades específicas de alquil- poliglicosídeos são alquil glicosídeos tais como n-decil β-D- glicopiranosídeo, decil β-D- maltopiranosídeo, dodecil β-D- glicopiranosídeo, n-dodecil β-D-maltosideo, n-dodecil β-D- maltosídeo, n-dodecil β-D-maltosideo, tetradecil β-D- 20 glicopiranosídeo, decil β-D-maltosideo, hexadecil β-D- maltosideo, decil β-D-maltotriosideo, dodecil β-D- maltotriosídeo, tetradecil β-D- maltotriosídeo, hexadecil β- D-maltotriosídeo, n-dodecil-sacarose, n-decil-sacarose, monocaprato de sacarose, monolaurato de sacarose, 2monomiristato de sacarose, e monopalmitato de sacarose. O uso de um tensoativo em composições farmacêuticas é bem conhecido ao técnico no assunto. Para conveniência, referência é feita a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.

Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda inibidores de protease tais como EDTA (ácido etilenodiamina tetraacético) e benzamidina HCI, mas outros inibidores de protease comercialmente disponíveis podem também ser usados. O uso de um inibidor de protease é particularmente útil em composições farmacêuticas compreendendo zimogênios de proteases com a finalidade de inibir autocatálise.

É possível que outros ingredientes possam estar presentes na formulação farmacêutica peptídica da presente invenção. Tais ingredientes adicionais podem incluir agentes molhantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de volume, modificadores de tonicidade, agentes quelantes, íons metálicos, veículos oleosos, proteínas (por exemplo, albumina de soro humano, gelatina ou proteínas) e um zwitterion (por exemplo, um aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina). Tais ingredientes adicionais, claro, não deveriam afetar adversamente a estabilidade global 1da formulação farmacêutica da presente invenção.

Composições farmacêuticas contendo um composto de acordo com a presente invenção pode ser administrado a um paciente em necessidade de tal tratamento em diversos sítios, por exemplo, em sítios tópicos, por exemplo, pele e sítios da 20 mucosa, em sítios que desviam da absorção, por exemplo, administração em uma artéria, em uma veia, no coração, e em sítios que envolvem a absorção, por exemplo, administração na pele, sob a pele, em um músculo ou no abdômen.

A administração de composições farmacêuticas de 2acordo com a invenção pode ser através de diversas vias de administração, por exemplo, lingual, sublingual, bucal, na boca, oral, no estômago e intestino, nasal, pulmonar, por exemplo, através dos bronquíolos e alvéolos ou uma combinação das mesmas, epidérmica, dérmica, transdérmica, vaginal, 30 retal, ocular, por exemplo, através da conjuntiva, uretra, e parenteral a pacientes em necessidade de tal tratamento.

As composições da presente invenção podem ser administradas em diversas formas farmacêuticas, por exemplo, como soluções, suspensões, emulsões, microemulsões, emulsão múltipla, espumas, unguentos, pastas, emplastros, pomadas, comprimidos, comprimidos revestidos, soluções de enxágüe, cápsulas, por exemplo, cápsulas de gelatina dura e cápsulas de gelatina mole, supositórios, cápsulas retais, gotas, géis, sprays, pó, aerossóis, inalantes, colírios, pomadas oftálmicas, soluções de enxágüe oftálmicas, pessários vaginais, anéis vaginais, pomadas vaginais, solução para injeção, soluções de transformação in situ,por exemplo, gelificação in situ,ajuste in situ,precipitação in situ, cristalização in situ,solução para infusão, e implantes. As composições da invenção podem ser constituídas ainda por, ou unidas a, por exemplo, através de interações covalentes, hidrofóbicas e eletrostáticas, um transportador de fármaco, 1sistema de administração de fármaco e sistema de administração de fármaco avançado com a finalidade de aumentar ainda mais a estabilidade do composto da presente invenção, aumentar a biodisponibilidade, aumentar a solubilidade, diminuir os efeitos adversos, alcançar a 20 cronoterapia bem conhecido a técnicos no assunto, e aumentar a adesão do paciente ou qualquer combinação dos mesmos. Exemplos de transportadores, sistemas de administração de fármaco e sistemas de administração de fármaco avançados incluem, mas não são limitados a, polímeros, por exemplo, 2celulose e derivados, polissacarídeos, por exemplo, dextrana e derivados, amido e derivados, álcool polivinílico) , acrilato e metacrilato polímeros, ácido poliláctico e poliglicólico e co-polímeros em bloco dos mesmos, polietileno glicóis, proteínas transportadoras, por exemplo, albumina, 30 géis, por exemplo, sistemas de termogelificação, por exemplo, sistemas co-poliméricos em bloco bem conhecidos aos técnicos no assunto, micelas, lipossomas, microesferas, nanoparticulados, cristais líquidos e dispersões dos mesmos, fase L2 e dispersões dos mesmos, bem conhecidos aos técnicos no assunto de comportamento de fase em sistemas lipídio-água, micelas poliméricas, emulsões múltiplas, auto-emulsionante, auto-microemulsionante, ciclodextrinas e derivados dos mesmos, e dendrímeros.

As composições da presente invenção são úteis na formulação de sólidos, semi-sólidos, pó e soluções para a administração pulmonar de compostos da presente invenção, usando, por exemplo, um inalador de dose medida, inalador de pó seco e um nebulizador, todos sendo dispositivos bem conhecidos aos técnicos no assunto. As composições da presente invenção são especificamente úteis na formulação de sistemas de administração de fármaco de liberação controlada, sustentada, prolongada, retardada, e lenta. Mais 1especificamente, mas sem se limitar a isso, as composições são úteis na formulação de sistemas de liberação controlada parenteral e liberação sustentada (ambos os sistemas levando a uma redução de muitas vezes em número de administrações), bem conhecidos aos técnicos no assunto. Ainda mais 20 preferivelmente, são sistemas de liberação controlada e liberação sustentada administrados subcutaneamente. Sem limitar o escopo da invenção, exemplos de sistema de liberação controlada e composições úteis são hidrogéis, géis oleosos, cristais líquidos, micelas poliméricas, 2microesferas, nanopartículas, Métodos para produzir sistemas de liberação controlada úteis para composições da presente invenção incluem, mas não são limitados a, cristalização, condensação, co-cristalização, precipitação, co-precipitação, emulsificação, dispersão, homogeneização a alta pressão, 30 encapsulação, secagem por pulverização, microencapsulação, coacervação, separação de fases, evaporação de solvente para produzir microesferas, extrusão e processos de fluido supercrítico. Referência geral é feita a Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D. L., ed. Marcel Dekker, Nova Iorque, 2000) e Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, Nova Iorque, 2000). A administração parenteral pode ser realizada por injeção subcutânea, intramuscular, intraperitoneal ou intravenosa por meio de uma seringa, opcionalmente uma seringa semelhante a caneta. Alternativamente, a administração parenteral pode ser realizada por meio de uma bomba de infusão. Uma opção adicional é uma composição que pode ser uma solução ou suspensão ou um pó para a administração do composto da presente invenção na forma de um líquido nasal ou pulmonar ou spray em pó. Como uma opção ainda adicional, as composições farmacêuticas contendo o composto da invenção podem também 1ser adaptadas à administração transdérmica, por exemplo, por injeção livre de agulha ou de um emplastro, opcionalmente um emplastro iontoforético, ou transmucosal, por exemplo, administração bucal. Os compostos da presente invenção podem ser administrados por meio da via pulmonar em um veículo, 2 0 como uma solução, suspensão ou pó seco usando quaisquer dos tipos conhecidos de dispositivos adequados para administração pulmonar de fármaco. Exemplos destes compreendem, mas não são limitados a, os três tipos gerais de geração de aerossol para administração pulmonar de fármaco, e podem incluir 2nebulizadores de jato ou ultrassónicos, inaladores de dose medida, ou inaladores de pó seco (Cf. Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery: Physiologic and mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4) (1997) 395-453) .

Com base em metodologia de testagem padronizada, o 30 diâmetro aerodinâmico (da) de uma partícula é definido como o diâmetro equivalente geométrico de uma partícula esférica padrão de referência de densidade de unidade (1 g/cm3). No caso mais simples, para partículas esféricas, da está relacionado com um diâmetro de referência (d) como uma função da raiz quadrada da razão de densidade como descrito por:

Modificações a esta relação ocorrem para partículas não esféricas (cf. Edwards DA, Ben- Jebria A, Langer R.

Recent advances in pulmonary drug delivery using large, * porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379- 385). Os termos "MMAD" e "MMEAD"são bem descritos e conhecidos na técnica (cf . Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R e representa uma medição do valor médio de uma distribuição de tamanho de partícula aerodinâmica. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). Diâmetro aerodinâmico de massa média (MMAD) e diâmetro aerodinâmico eficaz de massa média (MMEAD) são usados intercambiavelmente, 1são parâmetros estatísticos, e empiricamente descrevem o tamanho de partículas de aerossol em relação ao seu potencial para depositar nos pulmões, independente de forma real, tamanho, ou densidade (cf. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, 20 porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379- 385). MMAD é normalmente calculado a partir da medição feita com impactadores, um instrumento que mede o comportamento inercial de partícula no ar. Em uma modalidade adicional, a formulação poderia ser aerossolizada por qualquer tecnologia 2de aerossolização conhecida, tal como nebulização, para alcançar um MMAD de partículas de aerossol de menos de μm, . mais preferivelmente entre 1 -μm, e mais preferivelmente entre 1 -3 μm. 0 tamanho de partícula preferido é com base no tamanho mais eficaz para a administração de fármaco no fundo do pulmão, onde proteína é otimamente absorvido (cf. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer A, Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385).

A deposição no fundo do pulmão das formulações pulmonares compreendendo o composto da presente invenção pode opcionalmente ser otimizada adicionalmente usando modificações das técnicas de inalação, por exemplo, mas não limitado a: fluxo de inalação lenta (por exemplo, 30 L/min), segurar a respiração e cronometrar a atuação.

O termo "formulação estabilizada" se refere a uma formulação com estabilidade física aumentada, estabilidade química aumentada ou estabilidade física e química aumentada.

O termo "estabilidade física" da formulação de proteína como usado no presente documento se refere ã tendência da proteína para formar agregados biologicamente inativos e/ou insolúveis da proteína como um resultado de exposição da proteína a stresses termo-mecânicos e/ou 1interação com interfaces e superfícies que são desestabilizantes, tal como superfícies hidrofóbicas e interfaces. A estabilidade física das formulações de proteína aquosas é avaliada por meio de inspeção visual e/ou medições de turbidez após expor a formulação preenchida em recipientes 20 adequados (por exemplo, cartuchos ou viais) a stress mecânico/físico (por exemplo, agitação) a diferentes temperaturas por vários períodos de tempo. Inspeção visual das formulações é realizada em uma luz enfocada nitidamente com um fundo escuro. A turbidez da formulação é caracterizada 2por uma pontuação visual classificando o grau de turbidez, por exemplo, em uma escala de 0 a 3 (uma formulação não mostrando nenhuma turbidez corresponde a uma pontuação visual 0, e uma formulação mostrando turbidez visual na luz do dia corresponde à pontuação visual 3) . Uma formulação é 30 classificada instável física com respeito a agregação de proteínas, quando mostra turbidez visual na luz do dia. Alternativamente, a turbidez da formulação pode ser avaliada por medições simples de turbidez bem conhecidas ao técnico no assunto. A estabilidade física das formulações de proteína aquosas pode também ser avaliada usando um agente espectroscópico ou sonda do estado conformacional da proteína. A sonda é preferivelmente uma molécula pequena que se liga preferencialmente a um conformador não nativo da proteína. Um exemplo de uma sonda espectroscõpica molecular pequena de estrutura de proteína é Tioflavina T. Tioflavina T é um corante fluorescente que foi amplamente usado para a detecção de fibrilas amilóides. Na presença de fibrilas, e talvez outras configurações de proteína também, Tioflavina T ocasiona a uma nova excitação máxima a cerca de 4 50 nm e emissão aumentada a cerca de 482 nm quando ligada a uma forma de proteína fibrila. Tioflavina T não ligada é essencialmente não fluorescente nos comprimentos de onda.

Outras moléculas pequenas podem ser usadas como sondas das mudanças em estrutura de proteína dos estados nativo e não nativo. Por exemplo, as sondas de "emplastro hidrofóbico" que se ligam preferencialmente a emplastros hidrofóbicos expostos de uma proteína. Os emplastros 20 hidrofóbicos são geralmente enterrados dentro da estrutura terciária de uma proteína no seu estado nativo, mas se torna exposto à medida que uma proteína começa a se desdobrar ou desnaturar. Exemplos destas sondas espectroscópicas moleculares pequenas são corantes aromáticos e hidrofóbicos, 2tais como antraceno, acridina, fenantrolina ou similares.

Outras sondas espectroscópicas são complexos de metal- aminoácido, tais como complexos de metal cobalto de aminoácidos hidrofóbicos, tais como fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina, e valina, ou similares.

O termo "estabilidade química'' da formulação de proteína como usado no presente documento se refere a mudanças covalentes químicas na estrutura de proteína levando à formação de produtos de degradação química com potencial menos potência biológica e/ou potenciais propriedades imunogênicas aumentadas em comparação com a estrutura de proteína nativa. Vários produtos de degradação química podem ser formados dependendo do tipo e natureza da proteína nativa e o ambiente ao qual a proteína é exposta. A eliminação da degradação química pode muito provavelmente não ser completamente evitada e aumentar quantidades de produtos de degradação química é com freqüência visto durante o armazenamento e uso da formulação de proteína como bem conhecido pelo técnico no assunto. A maioria das proteínas é propensa à desamidação, um processo em que o grupo amida de cadeia lateral em resíduos de glutaminila ou asparaginila é hidrolisado para formar um ácido carboxílico livre. Outras vias de degradações envolve a formação de produtos de 1transformação de alto peso molecular onde duas ou mais moléculas de proteína são covalentemente ligadas uma a outra através de transamidação e/ou interações dissulfeto levando à formação de produtos de degradação de dímero, oligômero e polímero covalentemente ligado (Stability of Protein

Pharmaceuticals, Ahem. T.J. & Maning M. C, Plenum Press, Nova Iorque 1992). Oxidação (de, por exemplo, resíduos de metionina) pode ser mencionada como outra variante de degradação química. A estabilidade química da formulação de proteína pode ser avaliada por meio da medição da quantidade dos produtos de degradação química em vários pontos no tempo após a exposição a diferentes condições ambientais (a formação de produtos de degradação pode com freqüência ser acelerada por meio de, por exemplo, aumento da temperatura). A quantidade de cada produto de degradação individual é com freqüência determinada por meio de separação dos produtos de degradação dependendo de tamanho de molécula e/ou carga usando várias técnicas de cromatografia (por exemplo, SEC- HPLC e/ou RP-HPLC).

Portanto, como delineado acima, uma "formulação estabilizada" se refere a uma formulação com estabilidade física aumentada, estabilidade química aumentada ou estabilidade física e química aumentada. Em geral, uma formulação precisa ser estável durante uso e armazenamento (em adesão com uso recomendado e condições de armazenamento) até a data de vencimento se alcançada.

Em uma modalidade da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o composto da presente invenção é estável por mais de 6 semanas de uso e por mais de 3 anos de armazenamento.

Em outra modalidade da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o composto da presente invenção é estável por mais de 4 semanas de uso e por mais de 3 anos de armazenamento. Em uma modalidade adicional da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o composto da presente invenção é estável por mais de 4 semanas de uso e por mais de dois anos de armazenamento.

Em uma modalidade ainda adicional da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o composto da presente invenção é estável por mais de 2 semanas de uso e por mais de dois anos de armazenamento.

Em outro aspecto a presente invenção se refere ao uso de um composto de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento.

A presente invenção também inclui a forma de sal de análogos de GLP-1. Um análogo de GLP-1 da invenção pode ser suficientemente ácido ou suficientemente básico para reagir com qualquer de um número de bases inorgânicas, e ácidos inorgânicos, para formar um sal. Ácidos comumente utilizados para formar sais de adição de ácido são ácido inorgânico tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, e similares, e ácidos orgânicos tais como ácido p-toluenossulfônico, ácido metanossulfônico, ácido oxálico, ácido p-bromofenil- sulfônico, ácido carbônico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido acético, e similares. Exemplos de tais sais incluem o sulfato, hidrosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfato, fosfato, monohidrogenfosfato, dihidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butino-1, 4-dioato, hexino-1, 6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibezoato, ftalato, sulfonato, xilenesulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, gama-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftaleno-l-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato, e similares. Sais de adição de ácido preferidos são aqueles formados com ácidos minerais tais como ácido clorídrico e ácido bromídrico, e, especialmente, ácido clorídrico.

Sais de adição de base incluem aqueles derivados de bases inorgânicas, tais como amónio ou hidróxidos de metal alcali ou alcalino terroso, carbonatos, bicarbonatos, e similares. Tais bases úteis na preparação dos sais desta invenção assim incluem hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de amónio, carbonato de potássio, e similares. Formas de sal de análogos de GLP-1 são particularmente preferidas. Claro, quando os compostos desta invenção são usados para propósitos terapêuticos, aqueles compostos podem também ser na forma de um sal, mas o sal precisa ser farmaceuticamente aceitável.

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção encontram múltiplos usos incluindo uso como um tratamento para diabetes, um sedativo, um tratamento de transtornos do sistema nervoso, uso para induzir um efeito ansiolítico no CNS, uso para ativar o CNS, uso para tratamento pós-cirurgia e como um tratamento para resistência a insulina.

A. Tratamentos da Diabetes

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção geralmente normalizarão a hiperglicemia embora mecanismos dependentes de glicose. Como tal, os análogos de GLP-1 modificados são úteis como agentes primários para o tratamento de diabetes mellitus do tipo II e como agentes adjuvantes para o tratamento de diabetes mellitus do tipo I.

O uso de uma quantidade eficaz dos análogos de GLP- 1 modificados como um tratamento para diabetes mellitus tem a vantagem de ser mais potente que GLP-1 não modificado. Uma vez que os análogos de GLP-1 modificados são mais estáveis in vivo, uma quantidade menor da molécula pode ser administrada para tratamento eficaz. A presente invenção é especialmente adequada para o tratamento de pacientes com diabetes, ambos de tipo I e tipo II, em que a ação do peptídeo é dependente da concentração de glicose do sangue, e assim o risco de efeitos colaterais hipoglicêmicos são enormemente reduzidos sobre os riscos de usar os presentes métodos de tratamento.

A presente invenção também trata de um método para tratar diabetes mellitus em um indivíduo, em que o dito método compreende proporcionar uma quantidade dos análogos de GLP-1 modificados suficiente para tratar diabetes,- onde a composição contém um análogo de GLP-1 modificado.

B. Tratamento De Transtornos Do Sistema Nervoso

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção também encontram uso como um sedativo. Em um aspecto da invenção, proporciona-se um método de sedação de um indivíduo mamífero com uma anormalidade tendo como resultado ativação aumentada do sistema nervoso periférico ou central usando os análogos de GLP-1 modificados ao indivíduo em uma quantidade suficiente para produzir um efeito sedante ou ansiolítico no indivíduo. Os análogos de GLP-1 modificados podem ser administrados intracerebroventricularmente, oralmente, subcutaneamente, intramuscularmente, ou intravenosamente.

Tais métodos são úteis para tratar ou melhorar as condições do sistema nervoso tais como ansiedade, transtorno do movimento, agressão, psicose, convulsões, ataques de pânico, histeria e transtornos do sono.

Em um aspecto relacionado, a invenção abrange um método de aumento da atividade de um indivíduo mamífero, compreendendo administrar análogos de GLP-1 modificados ao indivíduo em uma quantidade suficiente para produzir e ativar o efeito no indivíduo. Preferivelmente, o indivíduo tem uma 1condição resultante da ativação diminuída do sistema nervoso central ou periférico. Os análogos de GLP-1 modificados encontram particular uso no tratamento ou melhora de depressão, transtornos esquizoafetivos, apnéia do sono, síndrome de défice de atenção com concentração baixa, perda 20 de memória, esquecimento, e narcolepsia, para nomear umas poucas condições em que a excitação do sistema nervoso central pode ser vantajosa.

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção podem ser usados para induzir a excitação para o tratamento ou 2melhora de depressão, transtornos esquizoafetivos, apnéia do sono, e síndromes de défice de atenção com concentração baixa, perda de memória, esquecimento, e narcolepsia. A eficácia terapêutica do tratamento com análogos de GLP-1 modificados pode ser monitorada pela entrevista do paciente 3 0 para avaliar a sua condição, por testagem psicológica/neurológica, ou por melhora dos sintomas associados a estas condições. Por exemplo, o monitoramento da ocorrência de ataques narcolépticos pode avaliar o tratamento de narcolepsia. Como outro exemplo, os efeitos de análogos de GLP-1 modificados na capacidade de um indivíduo de se concentrar, ou na capacidade de memória, podem ser testados usando qualquer de um número de teste de diagnóstico bem conhecido aos técnicos no assunto.

C. Tratamento Pós-Cirurgia

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção podem ser utilizados para tratamento pós-cirurgia. É realizado em um paciente em necessidade dos análogos de GLP-1 modificados da presente invenção por cerca de 1-16 horas antes da cirurgia no paciente, durante cirurgia no paciente, e após a cirurgia do paciente por um período de não mais de cerca de dias.

Os análogos de GLP-1 modificados da presente 1invenção são administrados cerca de dezesseis horas a cerca de uma hora antes da cirurgia começar. O comprimento de tempo antes da cirurgia quando os compostos usados na presente invenção deveriam ser administrados com a finalidade de reduzir efeitos catabólicos e resistência a insulina é 20 dependente em um número de fatores. Estes fatores são geralmente conhecidos ao médico com habilidade ordinária, e incluem, de maneira mais importante, se o paciente está em jejum ou se foi fornecida uma infusão ou bebida de glicose, ou alguma outra forma de alimento durante o período 2preparatório antes de cirurgia. Outros fatores importantes incluem o peso, sexo e idade do paciente, a gravidade de qualquer incapacidade para regular glicose no sangue, as causas subjacentes de qualquer incapacidade para regular • glicose no sangue, a gravidade esperada do traumatismo 30 causado pela cirurgia, a via de administração e biodisponibilidade, a persistência no corpo, a formulação, e a potência dos compostos. Um intervalo de tempo preferido dentro do qual começar a administração dos análogos de GLP-1 f modificados usado na presente invenção é de cerca de uma hora a cerca de dez horas antes da cirurgia começar. O intervalo mais preferido para começar a administração é entre duas horas e oito horas antes da cirurgia começar.

Resistência a insulina em seguida a um tipo particular de cirurgia, cirurgia abdominal eletiva, é mais profunda no primeiro dia após a operação, dura pelo menos cinco dias e pode levar até três semanas para normalizar. Assim, o paciente em pós-operatório pode estar em necessidade de administração dos análogos de GLP-1 modificados usados na presente invenção por um período de tempo em seguida ao traumatismo da cirurgia que dependerá dos fatores se o paciente estiver em jejum ou alimentado com uma infusão ou bebida de glicose, ou alguma outra forma de alimento em 1seguida à cirurgia, e também, sem limitação, o peso, sexo e idade do paciente, a gravidade de qualquer incapacidade para regular glicose no sangue, as causas subjacentes de qualquer incapacidade para regular glicose no sangue, as causas subjacentes de qualquer incapacidade para regular glicose no 20 sangue, a gravidade real do traumatismo causado pela cirurgia, a via de administração e biodisponibilidade, a persistência no corpo, a formulação, e a potência do composto administrado. A duração preferida de administração dos compostos usados na presente invenção não é mais que cinco 2dias em seguida à cirurgia.

D. Tratamento de Resistência a Insulina

Os análogos de GLP-1 modificados da invenção podem ser utilizados para tratar a resistência a insulina independentemente do seu uso em tratamento pós-cirurgia. A 30 resistência a insulina pode ser devido ã diminuição na ligação de insulina a receptores de superfície da célula, ou alterações em metabolismo intracelular. O primeiro tipo, caracterizado como uma diminuição em sensibilidade de insulina, pode tipicamente ser superado por meio do aumento da concentração de insulina. O segundo tipo, caracterizado como uma diminuição em sensibilidade a insulina, não pode ser superado por grandes quantidades de insulina. A resistência a insulina em seguida ao traumatismo pode ser superada por doses de insulina que são proporcionais ao grau de resistência a insulina, e assim é aparentemente causado por uma diminuição em sensibilidade de insulina.

A dose de análogos de GLP-1 modificados eficaz para normalizar um nível de glicose no sangue do paciente dependerá de um número de fatores, quantidade que incluem, sem limitação, o peso, sexo e idade do paciente, a gravidade de incapacidade para regular glicose no sangue, as causas subjacentes de incapacidade para regular glicose, se glicose, ou outra fonte de carboidrato, for simultaneamente administrada, a via de administração e biodisponibilidade, a persistência no corpo, a formulação, e a potência.

A capacidade de um análogo de GLP-1 para estimular a secreção de insulina pode ser determinada proporcionando um análogo de GLP-1 a células animais cultivadas, tais como a linhagem de célula de insulinoma de rato RIN-38, e monitoramento da liberação de insulina imunorreativa (IRI) nos meios. Alternativamente pode ser injetado um análogo de GLP-1 em um animal e monitorado os níveis plasmáticos de insulina imunorreativa (IRI).

A presença de IRI é detectada através do uso de um radioimunoensaio, que pode detectar especificamente insulina. Qualquer ensaio de radioimunologia capaz de detectar a presença de IRI pode ser utilizado; um tal ensaio é uma modificação do método de Albano, J.D.M. et al., Acta Endocrinol.70: 487-509 (1972). Nesta modificação, um tampão fosfato/albumina com um pH de 7,4 é utilizado. A incubação é preparada com adição consecutiva de 500 μL de tampão fosfato, 0 μL de amostra de perfusato ou Insulina de rato padrão em perfusato, 100 μL de anti-soro anti-insulina (Wellcome Laboratories; diluição 1:40.000), e 100 μL de [125I] insulina, dando urn volume total de 750 μL em um 10x75mm tubo de vidro descartável. Após incubação por 2-3 dias a 4 °C, insulina livre é separada da insulina ligada a anticorpo por separação com carvão. A sensibilidade de ensaio é 1-2 uU/ml. Com a finalidade de medir a liberação de IRI no meio de cultura celular de células crescidas em cultura de tecido, incorpora preferivelmente marcador radioativo em pró-insulina. Embora qualquer marcador radioativo capaz de marcar o polipeptídeo possa ser usado, é preferível usar 3H leucina com a finalidade de obter pró-insulina marcada.

Para determinar se um análogo de GLP-1 tem propriedades insulinotrópicas a determinação pode também ser por infusão pancreática. 0 ensaio de pâncreas de rato perfusionado isolado in situé uma modificação do método de Penhos, J, C., et al., Diabetes,18: 733-738 (1969). Ratos machos albinos alimentados da raça Charles River, pesando 350-600 g, são anestesiados com uma injeção intraperitoneal de Amytal Sódico (Eli Lilly e Co, 160 ng/kg) . Vasos sanguíneos renal, adrenal, gástrico, e colônico inferior são ligados. É feita a resseção do intestino inteiro exceto por cerca de quatro cm de duodeno e o cólon descendente e reto. Portanto, somente uma pequena parte do intestino é perfusionada, minimizando a possível interferência por substâncias entéricas com imunoreatividade semelhante a glucagon. O perfusato é um tampão bicarbonato Kreba-Ringer modificado com 4 % de dextrana T70 e 0,2 % de albumina de soro bovino (fração V) , e é borbulhado com 9% de O2 e % de CO2. Um fluxo não pulsátil, bomba de rolamento de rolos de 4 canais (Buehler polistatic, Buehler Instruments Division, Nuclear-Chicago Corp) é usado, e um comutador de uma fonte de perfusato a outra é conseguido por meio da comutação de uma torneira de fechamento de 3 vias. A maneira em que a perfusão é realizada, monitorada, e analisada segue o método de Weir, G. C., et at. J. Clin. Investigate.54: 1403-1412 (1974), que é pelo presente documento incorporado por referência.

O tratamento com um composto de acordo com a presente invenção pode também ser combinado com uma segunda ou mais substâncias farmacologicamente ativas, por exemplo, selecionadas a partir de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade, agentes reguladores do apetite, agentes anti- hipertensivos, agentes para o tratamento e/ou prevenção de complicações resultantes de ou associadas a diabetes e agentes para o tratamento e/ou prevenção de complicações e 1transtornos resultantes de ou associadas a obesidade.

Exemplos destas substâncias farmacologicamente ativas são: Insulina, sulfoniluréias, biguanidas, meglitinidas, inibidores de glicosidase, antagonistas de glucagon, inibidores de DPP-IV (dipeptidil peptidase-IV), inibidores de 20 enzimas hepáticas envolvidas em estimulação de gliconeogênese e/ou glicogenose, moduladores de absorção de glicose, compostos que modificam o metabolismo de lipídios tal como agentes antihiperlipidêmicos como inibidores de HMG CoA (estatinas), Polipeptídeos Inibidores Gástricos (análogos de 2GIP), compostos que diminuem a absorção de alimentos, agonistas de RXR e agentes que agem sobre o canal de potássio dependente de ATP das células β; Colestiramina, colestipol, clofibrato, genfibrozil, lovastatina, pravastatina, sinvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinide; bloqueadores β tais como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol e metoprolol, inibidores de ACE (enzima conversora da angiotensina) tais como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril e ramipril, bloqueadores de canal de cálcio tais como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem e verapamil, e α-bloqueadores tais como doxazosina, urapidil, prazosina e terazosina; agonistas de CART (transcrito regulado por cocaína anfetamina), antagonistas de NPY (neuropeptídeo Y) , agonista de PYY, agonistas de PYY2, agonistas de PYY4, agonistas PPY2/PYY4 mistos, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas orexina, agonistas de TNF (fator de necrose tumoral), agonistas de CRF (fator de liberação de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteína de ligação a fator de liberação de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas β3, agonistas de MSH (hormônio de estimulação de melanócitos), antagonistas de MCH (hormônio de concentração 1de melanócitos), agonistas de CCK (colecistoquinina), inibidores de reabsorção de serotonina, inibidores de reabsorção de serotonina e noradrenalina, compostos noradrenérgicos e de serotonina mistos, agonistas 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, antagonistas de 20 galanina, hormônio de crescimento, compostos de liberação de hormônio de crescimento, agonistas de TRH (hormônio de liberação de tireotropina), moduladores de UCP 2 ou 3 (proteína de desacoplamento 2 ou 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inibidores de 2lipase/amilase, moduladores de RXR (receptor retinóide X) , agonistas de TR β; antagonistas de histamina H3, agonistas ou antagonistas de Polipeptídeo Inibidor Gástrico (análogos de GIP) , gastrina e análogos de gastrina. O tratamento com um composto de acordo com esta invenção pode também ser 30 combinado com cirurgia- uma cirurgia que influencia os níveis de glicose e/ou homeostase de lipídios tais como banda gástrica ou by-pass gástrico.

Deveria ser entendido que qualquer combinação adequada dos compostos de acordo com a invenção com um ou mais dos compostos mencionados acima e opcionalmente uma ou mais substâncias farmacologicamente ativas adicionais são consideradas como estando dentro do escopo da presente invenção.

A presente invenção é ilustrada ainda pelos seguintes exemplos que, no entanto, não são para serem interpretados como limitação ao escopo de proteção. As características reveladas na descrição precedente e nos seguintes exemplos podem, tanto separadamente e em qualquer combinação das mesmas, ser material para idealizar a invenção em diversas formas da mesma.

Por meio de ilustração, os seguintes exemplos são proporcionados para ajudar a descrever como fazer e praticar as várias modalidades da invenção. Estes exemplos não são de nenhuma maneira limitativos ao escopo da invenção.

EXEMPLOS

Abreviações usadas:

Síntese de Q

Q tal como aqueles de fórmula II está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de fórmula II em que X, Y e R3 são hidrogênio que foi relatado (S. Oishi etc., J. Chem. Soc., Perkin Trans.1, 2001, 2445) é ilustrada no Esquema 1.

Q tal como aqueles de fórmula II está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de fórmula II em que X é flúor, é ilustrada no Esquema 2. 0 material de partida chave 4 está comercialmente disponível, conhecido na literatura (T. Narumi et al., Tetrahedron,2008, 64, 4332)

Q tal como aqueles de fórmula Ilia está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de fórmula III em que X é trifulorometila, Z é nitrogênio, Y, Rx, R2 e R3 são hidrogênio é ilustrada no Esquema 3. 0 material de partida chave 3,3,3-trifluorol- nitropropeno 6 está comercialmente disponível, conhecido na literatura. Adição de Aza-Michael de diéster de ácido glutâmico a 3,3,3-trifluorol-nitropropeno 6 de uma maneira estereocontrolada (M. Molteni et al. , Org. Lett.,2003, 5, 3887) .

Q tal como aqueles de fórmula Illb está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de fórmula III em que X é trifulorometila; Z é nitrogênio; R2 é alquila; Y, R2 e R3 são hidrogênio é ilustrada no Esquema 4. O material de partida está comercialmente disponível, conhecido na literatura (J. Andre et al. , Eur. J. Org. Chem. 2004, 1558) . A etapa chave envolve o deslocamento de triflato SN2 estereoespecífico 11 com diéster de ácido glutâmico 7 (P. O'Shea et al., J. Org. Chem. 2009, 5, 1605).

Alternativamente, Q tal como aqueles de fórmula Illb é preparado por outra via de síntese em que X é trifulorometila; Z é nitrogênio; R2 é alquila; Y, R2 e R3 são hidrogênio é ilustrada no Esquema 5. O material de partida chave (J. Andre et al. , Eur. J. Org. Chem. 2004, 1558) é oxidado para dar trifluorometilcetona 13. A seguinte formação de imina é completada na existência de base. A etapa final envolve a redução estereoespecífica de imina 14 com borohidreto de sódio ou borohidreto de Zinco para dar 20 isômeros diastéricos esperados 12 e 1de A (G. Huges et al., Angew Chem. Int. Ed. 2007, 46, 1839).

Alternativamente, Q tal como aqueles de fórmula Illb é também preparadQ por outra via de síntese em que X é - trifulorometil-a; Z é nitrogênio; R2 é alquila; Y, R, e R,, são hidrogênio é ilustrada no Esquema 6. A condensação do material de partida conhecido diamina 16 (M. Mandal et al., j.Am Chein. Soc. 2002, 6538) com aldeído 17 produziu imina 18.

A seguinte reação diastereosseletiva do tipo Strecker de imina 18 com TMSCN ê completada na existência de quantidade catalítica de ácido de Lewis. hidrólise do intermediário ciano esperado 12 de A (F. Huguentt et 7075).

Q tal como aqueles de fórmula IV está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de compostos de fórmula IV em que X é oxigênio; Z é carbono; R2 é alquila; W, Y, Rx e R3 são hidrogênio é ilustrada no Esquema 7. O material de partida /?-cetoéster 19 está comercialmente disponível, conhecido na literatura (R. Hoffman et al. , J. Org. Chem. 1999, 64, 1558). Alquilação de /?-cetoéster 19 com triflato 20, seguido por descarboxilação e desproteção de R9 para proporcionar cetometileno isoéster 21 (R. Hoffman et al. , J. Org. Chem. 1999, 64, 1558; P. S. Dragovich et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 1203).

Q tal como aqueles de fórmula IV em que X é oxigênio; Z é carbono; R2 é alquila; W é flúor; Y, Ri e R3 são hidrogênio está comercialmente disponível, é conhecido na literatura ou pode ser convenientemente preparado por uma variedade de métodos familiares aos técnicos no assunto. Uma via comum para a síntese de aqueles de fórmula IV é ilustrada no Esquema 8. O material de partida //-cetoéster tritilado 22 está comercialmente disponível, ou preparado de acordo com a literatura (R. Hoffman et al., J. Org. Chem. 1999, 64, 1558). Alquilação de /?-cetoéster 22 com triflato 20 é seguida por descarboxilação para proporcionar cetometileno isoéster 23, então 23 é convertido ao correspondente Z-TMS enoléter e fluorado com Selectfluor e desproteção final para dar monofluoro cetometileno isoéster 2(R. Hoffman et al., J. Org. Chem. 1999, 64, 1558; P. S. Dragovich et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 1203).

Geral

O fragmento de peptídeo intermediário ligado na resina MBHA pode ser produzido por meio de química de peptídeo em fase sólida em um sintetizador de peptídeo Applied Biosystems (ABI) 460A usando uma resina MBHA (Applied Biosystems Inc. , lote # A1A023, 0,77 mmol/g). Todos os aminoácidos têm os seus grupos a-amino protegidos pelo grupo terc-butiloxicarbonila (t-Boc). Aqueles com cadeias laterais reativas foram protegidos como se segue: Arg (Tos); Lys (Cl- Z); Trp (CHO); Glu (CHex); Tir (Br-Z); Ser (Bzl); Asp (OBzl); Thr (Bzl).

Os aminoácidos protegidos são ativados em diclorometano (DCM) com uma metade de um equivalente de diciclohexilcarbodiimida (DCC) por equivalente de aminoácido para dar o anidrido simétrico do aminoácido. No entanto, resíduos de arginina, glutamina, e glicina são ativados por meio da formação dos ésteres de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) destes aminoácidos (1:1:1 equivalentes de aminoácido, HOBt, e DCC em dimetilformamida (DMF)).

Os resíduos são sequencialmente conectados desde a extremidade C-terminal em direção à N-terminal com uma série de ciclos de acoplamento e desproteção. Um ciclo de acoplamento consiste no aminoácido ativado passando por substituição nucleofílica pela amina primária livre do aminoácido anteriormente acoplado. A desproteção é a remoção do N-terminal que bloqueia grupo Boc com ácido trifluoroacético anidro (TFA). Isto gera um grupo amina livre após neutralização com diisopropiletilamina (DIEA).

A escala de síntese é 0,mmol. A concentração de sítios funcionais na resina MBHA foi 0,77 mmol/g, 649 mg de 1resina foram usados. Um excesso molar de duas vezes do anidrido simétrico é para todos os aminoácidos. A Arginina C- terminal é acoplada à resina MBHA via protocolos padrão. Todos os resíduos são acoplados duplamente. Isto quer dizer que cada resíduo é acoplado à resina duas vezes para 20 assegurar a reação completa do grupo NH2 na resina. 0 segundo acoplamento é realizado sem uma etapa de desproteção de Boc antes de re-adição do aminoácido. Isto ajuda a reagir completamente todos os três grupos amina da resina. O resíduo de triptofano é acoplado quatro vezes. Após a segunda etapa 2de acoplamento de cada ciclo de acoplamento duplo os grupos Boc terminal são removidos com TFA anidro e neutralizados com DIEA.

O grupo de bloqueio de cadeia lateral formila no * resíduo de triptofano é removido com piperidina em DMF antes da clivagem do peptídeo da resina. Após a resina peptidila ser transferida a um funil de vidro sinterizado de 50 ml, é lavado diversas vezes com DCM e DMF. Então 3-ml de uma solução 50/50 de piperidina/DMF são adicionados à resina de peptídeo de modo que é apenas coberta. Após minutos a piper idina /DMF é removida por vácuo e 3-ml de piperidina/DMF foram adicionados. Após minutos, a piperidina/DMF de novo é removida por filtração a vácuo e 15- 20 ml de piperidina/DMF são adicionados. Após 1minutos a piperidina/DMF é removida e a resina peptidila é lavada com DMF diversas vezes seguido por DCM. A resina de peptídeo é então colocada em um forno a vácuo (sem aquecimento) para completar a remoção de solvente.

Alternativamente, o fragmento de peptídeo ligado a polímero requerido pode também ser preparado usando Fmoc protegido. Resina MBHA de Amida Rink, aminoácidos protegidos por Fmoc, hexafluorofosfato de O-benzotriazol-l-il-N, N, N', N'-tetrametil-urônio (HBTU) em solução de N,N- dimetilformamida (DMF) e ativação com N-metil morfolina (NMM), e desproteção de piperidina de grupos Fmoc (Etapa 1). Quando requerido, a desproteção seletiva do grupo Lys (Aloc) foi realizada manualmente e conseguida por meio do tratamento da resina com uma solução de 3 eq. de Pd (PPh3)4 dissolvida em ml de CHC13: NMM: HOAc (18:1:0,5) por 2 h (Etapa 2). A resina foi então lavada com CHC13 (6xml) , 20 % HOAc em DCM (6Xml), DCM (6Xml), e DMF (6Xml). Em alguns casos, a síntese foi então re-automatizada para a adição de um grupo AEEA (aminoetoxietoxiacético ácido), a adição de acético ácido ou a adição de um ácido 3-maleimidopropiônico (MPA) (Etapa 3). A clivagem de resina e isolamento de produto foram realizados usando 8% TFA/% TIS/% tioanisol e % fenol, seguido por precipitação por Et2O frio em gelo seco (Etapa 4) . Os produtos foram purificados por meio de HPLC preparativa de fase reversa usando um sistema de HPLC preparativa binário Varian (Rainin): eluição em gradiente de 30-5%B (0,04% TFA em H20 (A) e 0,04% TFA em CH3CN (B) ) ao longo de 180 min a 9,ml/min usando uma coluna Fenomenex Luna lOμ fenil-hexila, 21mm x 25cm e detector de UV (Varian Dynamax UVD II) a 214 e 254 nm. A pureza foi determinada 9% por meio de espectrometria de massa RP-HPLC usando um espectrômetro Hewlett Packard LCMS - série 1100 equipado com um detector de arranjo de diodos e usando ionização por pulverização eletrônica.

Grupos protetores são frações químicas utilizadas para proteger derivados de peptídeo de reagir com si mesmos. Tais grupos protetores incluem acetila, fluorenilmetiloxicarbonila (FMOC), t-butiloxicarbonila (Boc), benziloxicarbonila (CBZ), e similares. Os aminoácidos protegidos específicos são representados na Tabela 1. TABELA 1

Q-ligante-a: preparação de éster 5- terc-butílico • do ácído 2S, 5R-2-(3-terc-butoxicarbonilamino-but-1-enil)- pentanodiôico

ÉSTER I-METÍLICO DE ÉSTER S-TERC-BUTÍLICO DO ÁCIDO ' 2S, 5R-2-(3-TERC-BUTOXICARBONILAMINO-BUT-1-ENIL)- PENTANODIÓICO (J. CHEM. SOC., PERKIN TRANS.L, 2001, 2445) " (370 MG, 1 MMOL) EM METANOL (2 ML) É TRATADO COM L1OH (IM, 2 RNL) A TEMPERATURA AMBIENTE POR 1 H. A MAIOR PARTE DO SOLVENTE É EVAPORADA POR VÁCUO, DILUÍDA COM ÁGUA (ML) E PH É AJUSTADO A 5, E A CAMADA AQUOSA É EXTRAÍDA COM ACETATO DE ETILA (3 X 30 ML) PARA PRODUZIR O PRODUTO DO TÍTULO COMO ESPUMA (320 MG, 90 %). 'H RMN Õ 5,43 (M, IH), 5,33 (DD, J = 15,5, 5,2 HZ, IH), 4,59 (D, J = 7,6 HZ, IH), 3,88 (M, IH), 2,91 (M, IH), • 2,2(M, 2H), 1,91-2,04 (M, IH), 1,67-1,80 (RRI, IH), 1,57 (S, 9H), 1,47 (S, 9H), 1,14 (D, J = 6,7 HZ, 3H). LCMS 358 (M"+L).

Q-LIGANTE-KN PREPARAÇÃO DE ÉSTER 5-TERC-BUTÍLICO DO ÁCIDO 2S, 5R-2-(3-TERC-BUTOXICARBONILAMINO-2-£1UORO-BUT-1- ENI1)-PENTANODIÕICO

Etapa A: Preparação de ácido 1-(S) sultam 2S, 5R-2- (3 -1 ere-butoxi carbonilamino-2-fluoro-but-1-eni1)- pentanodióico

Ácido (S) sultam 5-terc-butoxicarbonilamino-4- fluoro-2-(3-hidroxi-propil)-hex-3-enóico (Tetrahedron,2008, 64, 4332) (502 mg, 1 mmol) em DMF (ml) é adicionado PDC (dicromato de piridínio, 2,mmol) e a solução resultante é agitada a ta por 64 h. A mistura de reação é diluída com salmoura (20 ml) e extraída com acetato de etila (3 X 20 ml).

Os extratos orgânicos combinados são secos em MgSO4 e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por meio de coluna flash para produzir o ácido como espuma (42mg, 79 %) , que foi usado sem purificação adicional.

Etapa B: Preparação de éster -terc-butílico do ácido 1-(S) sultam 2S, 5R-2-(3-terc-butoxicarbonilamino-2- fluoro-but-1-enil)-pentanodióico

Ácido 2-(S) sultam 2S, 5J?-2- (3-terc- butoxicarbonilamino-2-fluoro-but-l-enil)-pentanodióico da Etapa A (400 mg, 0,7mmol) em diclorometano (ml) é tratado com terc-butanol (0,ml, quive), DCC (1,mmol) e DMAP (1,mmol). A mistura de reação é agitada 24 h antes de ser diluída com salmoura (20 ml) , extraída com acetato de etila (3 X 20 ml). Os extratos orgânicos combinados são secos em MgSO4 e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O resíduo ê purificado por meio de coluna flash para produzir o éster terc-butílico como espuma (42mg, 79 %) . 1H RMN δ 5,33 (m, 1H) , 4,54 (m, 1H) , 3,88 (m, 1H) , 3,37 (s, 2H) , 3,23 (m, 1H), 2,2(m, 2H), 1,91-2,14 (m, 4H), 1,67-1,80 (m, 5H), 1,57 (s, 9H) , 1,47 (d, J = 7,6 Hz, 3H) , 1,18 (s, 3H) , 1,14 (s, 3H). LCMS 574 (M++l).

Etapa C: Preparação de éster 5-terc-butílico do ácido 2S, 5J?-2-(3-terc-butoxicarbonilamino-2-fluoro-but-l- enil)-pentanodióico

A uma solução do éster terc-butílico da Etapa B (4mg, 0,72 mmol) e 50 % H2O2 aquoso (260 ml, 3,6 mmol) em THF-H2O (5:1, 12 ml) a 0 °C é adicionado LiOH (IN, 1,44 ml), e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 2 h. Após o pH ser ajustado a 5, a mistura é extraída por acetato de etila (3 X 1ml) . Os extratos orgânicos combinados são lavados por salmoura e secos em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar a ácido correspondente como espuma (262 mg, 9%). 1H RMN δ 5,23 (m, 1H) , 4,4(m, 1H) , 3,11 (m, 1H), 2,4(m, 2H), 2,24 (m, 2H), 1,52 (s, 9H), 1,47 (S, 9H). LCMS 376 (M++l).

Q-ligante-c: Preparação de éster 5-terc-butílico do ácido 2R, 5R 2-[1-(terc-butoxicarbonilamino-metil)-2,2,2- trifluoro-etilamino]-pentanodióico

EtapaA: Preparação de éster 1-metílico de éster 5- terc-butílico do ácido 2R, 5R 2-[1-(terc-butoxicarbonilamino- metil) -2,2,2-trifluoro-etilamino]-pentanodióico

A uma solução de sal cloridrato de éster 1-metílico de éster 5-terc-butílico do ácido 2-(l-aminometil-2,2,2- 1trifluoro-etilamino)-pentanodióico (Org. Lett., 2003, 5, 3887) (364 mg, 1 mol) e Boc20 (260 mg, 1,2 mmol) em diclorometano (1ml) a 0 °C é adicionado uma solução de DIPEA (0,2 ml, 1,mmol) em diclorometano (1 ml), e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 6 h. A mistura é diluída 20 com acetato de etila (30 ml) . A mistura é lavada por 0,lN HCl, salmoura e seca em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida e seguido por FC para dar o correspondente di-éster como espuma (420 mg, 8%) . 1H RMN Ô 4,54 (m, 1H) , 4,12 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,4(m, 1H), 3,11 (m, 2H), 2,45 2(m, 2H) , 2,24 (m, 2H) , 1,52 (s, 9H) , 1,47 (s, 9H) . LCMS 430 (M++l), 330 (M+l-terc-Bu).

EtapaB: Preparação de 2R, 5R 2-[1-(terc- butoxicarbonilamino-metil) -2,2,2-trifluoro-etilamino]- pentanodióico éster 5-terc-butílico do ácido

A uma solução do éster terc-butílico da Etapa A (420 mg, 0,92 mmol) em THF-H2O (5:1, 12 ml) a 0 °C ê adicionado LiOH (IN, 1,44 ml), e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 2 h. Após o pH ser ajustado a 5, a mistura é extraída por acetato de etila (3 X 1ml) . Os extratos orgânicos combinados são lavados por salmoura e secos em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar a ácido correspondente como espuma (3 62 mg, 92 %) . XH RMN δ 4,50 (m, 1H) , 4,08 (m, 1H) , 3,4(m, 1H) , 3,11 (m, 2H), 2,4(m, 2H), 2,24 (m, 2H), 1,52 (s, 9H), 1,47 (s, 9H). LCMS 430 (M++l), 330 (M+l-terc-Bu).

Q-ligante-d: Preparação de éster 5-terc-butílico do ácido 2R-2-(lS, 2S-2-terc-butoxicarbonilamino-l-trifluoro- metil-propilamino)-pentanodióico

Etapa A: 2S, 3S-3-Dibenzi1amino-1, 1, 1- tríEluorobutano-2-trifluorometanossulfonato

A uma solução 2S, 3S-3-dibenzilamino-1,1,1- trifluoro-butan-2-ol (Eur. J. Org. Chem. 2004, 1558) (3,23 g, mmol) e 2,6-lutidina (1,7 g, 16 mmol) em c-hexano (2ml) a °C é adicionado anidrido tríflico (4,2 g, 1mmol) a um rato para manter a temperatura <°C e a reação é continuada por 1,h. A mistura de reação é diluída com água (2ml) e c-hexano (50 ml). A camada orgânica é lavada por IN HC1 (2 X 1ml) e salmoura (1ml). Após ser seco em MgSO4, o solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar o correspondente trifluorometanoslfonato (4,34 g, 96 %).

Etapa B: 5- éster terc-butílico de éster 1- benzílico do ácido 2S-2-[IS, 2S-2-Dibenzilamino-l- trifluorometil-propilamino)-pentanodióico

Carbonato de potássio (2,08 g, 1mmol) é adicionado a uma solução de triflato da Etapa A (4,5g, mmol), c-hexano (2ml) e . A mistura é aquecida até 65-70 °C por 24 h. A mistura é resfriada até temperatura ambiente e diluída com água (2ml) e c-hexano (50 ml), então a mistura agitada por min. As camadas são separadas, a camada orgânica é lavada por IN HC1 (2 X 1ml) e salmoura (1ml) . Após ser seco em MgSO4, o solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar o correspondente éster (5,88 g, 9%).

Etapa C: éster 5-terc-butílico do ácido 2R-2-(IS, 2S-2-terc-butoxicarbonilamino-l-trifluorometilpropilamino)- pentanodióico Hidrogenação de uma solução de éster 5-terc- butílico de éster 1-benzílico do ácido 2S-2-(lS, 2S-2- Dibenzilamino-l-trifluorometil-propilamino)-pentanodióico da 1Etapa B (5,4 g, 9 mmol) é completada em metanol (50 ml) e Pd/C (0,9 g) a 50 Psi por 24 h. Após filtração para remover catalisador, o filtrado é concentrado sob vácuo. O resíduo é dissolvido em diclorometano (50 ml) e tratado com Boc20 (2,60 g, 12 mmol) em diclorometano (2ml) a 0 °C, e seguido pela 20 adição de uma solução de DIPEA (2 ml, 1mmol) em diclorometano (ml) , e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 6 h. A mistura é diluída com acetato de etila (60 ml). A mistura é lavada por 0,lN HC1, salmoura e seca em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida e seguido 2por FC para dar o correspondente composto do título como espuma

Q-ligante-e: éster 5- terc-butílico do ácido 2S-2- (3S-3-terc-butoxicarbonilamino-2-oxo-butil)-pentanodióico

A uma solução de éster 1-metílico de éster 5- terc- butílico do ácido 2S-2-(3S-3-terc-butoxicarbonilamino-2-oxo- butil)-pentanodióico (J. Med. Chem. 1999, 42, 1203; Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 5240) (387 mg, 1 mmol) em THF-H2O (5:1, 12 ml) a 0 °C é adicionado LiOH (IN, 1,44 ml), e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 2 h. Após o pH ser ajustado a 5, a mistura é extraída por acetato de etila (3 X 1ml). Os extratos orgânicos combinados são lavados por salmoura e secos em MgSO4. 0 solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar a ácido correspondente como espuma (362 mg, 92 %). XH RMN δ 4,63 (m, 1H) , 4,38 (1, 1H) , 2,68 (d, J = 7,6 Hz, 2H) , 2,58 (m, 1H) , 2,2(dd, J =12,3, 7,6 Hz, 2H) , 1,92 (m, 2H) , 1,49 (S, 9H) , 1,47 (s, 9H) , 1,41 (d, J = 7,6 Hz, 3H). LCMS 374 (M++l), 274 (M+l-terc-Bu).

Q-ligante-f: éster 5-terc-butílico do ácido 2R-2- 1(IS, 3S-3-terc-butoxicarbonilamino-l-fluoro-2-oxo-butil)- pentanodióico

Etapa A: do ácido 2S-2-(IS, 20 oxo-butil)-pentanodióico Éster 1-metílico de éster 5-benzílico do ácido 2S- 2-[IS, 3S-fluoro-2-oxo-3-(tritil-amino)-butil]-pentanodióico (581 mg, 1 mmol) e % Pd/C (100 mg) em metanol (2ml) é hidrogenado em parr shaker SOPsi por 6 h. 0 catalisador é removido por meio de filtração através de Celite, O filtrado é concentrado. O resíduo é dissolvido em dioxano (2ml) e tratado com solução IN NaOH (1,2 ml) . Boc20 (238 mg, 1,1 mmol) em dioxano (2 ml) é adicionado a solução acima a 0 °C e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 6 h. A mistura é diluída com acetato de etila (30 ml) . A mistura é lavada por O,1N HC1, salmoura e seca em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida. O resíduo é dissolvido em diclorometano (ml) é tratado com terc-butanol (0,ml, quive), DCC (1,mmol) e DMAP (1,mmol). A mistura de reação é agitada 24 h antes de ser diluída com salmoura (20 ml) , extraída com acetato de etila (3 X 20 ml) . Os extratos orgânicos combinados são secos em MgSO4 e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por meio de coluna flash para produzir o éster terc-butílico como espuma (31mg, 66 %). RMN δ 4,81 (m, 1H) , 4,63 (m, 1H) , 4,38 (1, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,78 (m, 1H), 2,3(dd, J=12,3, 7,6 Hz, 2H) , 2,06 (m, 2H) , 1,49 (s, 9H) , 1,47 (s, 9H) , 1,41 (d, J = 7,6 Hz, 3H) . LCMS 406 (M++l) , 306 (M+l-terc-Bu).

Etapa B: 5- éster terc-butílico do ácido 2S-2-(IS, 3S-3-terc-butoxicarbonilamino-1-fluoro-2 -oxo-butil)- pentanodióico

Éster 1-metílico de éster 5- terc-butílico do ácido 2S-2-(IS, 3S-3-terc-butoxicarbonilamino-l-fluoro-2-oxo- butil)-pentanodióico da Etapa A (260 mg, 0,6mmol) em THF- H20 (5:1, 12 ml) a 0 °C é adicionado LiOH (IN, 1,0 ml), e a mistura é agitada a temperatura ambiente por 2 h. Após o pH ser ajustado a 5, a mistura é extraída por acetato de etila (3 X 1ml). Os extratos orgânicos combinados são lavados por salmoura e secos em MgSO4. O solvente é evaporado sob pressão reduzida para dar a ácido correspondente como espuma (238 mg, 9%). JH RMN δ 4,81 (m, 1H) , 4,63 (m, 1H) , 4,38 (1, 1H) , 2,78 (m, 1H) , 2,3(dd, J =12,3, 7,6 Hz, 2H) , 2,06 (m, 2H) , 1,49 (s, 9H) , 1,47 (s, 9H) , 1,41 (d, J = 7,6Hz, 3H) . LCMS 392 (M++l), 292 (M+l-terc-Bu).

Exemplo 1

Síntese de

Síntese de peptídeo em fase sólida do análogo em uma escala de 100 μmol é realizada usando síntese em fase sólida manual e um Sintetizador de peptídeo Symphony usando resina MBHA Amida Rink protegida por Fmoc, aminoácidos protegidos por Fmoc, O-benzotriazol-l-il-N, N, N', N'- tetrametil-urônio hexafluorofosfato (HBTU) em solução de N, N-dimetilformamida (DMF) e ativação com N-metil morfolina (NMM), e desproteção de piperidina de grupos Fmoc (Etapa 1) .

O grupo Boc no produto da Etapa 2 é clivado antes do acoplamento com Fmoc-His(Trt)-OH. A clivagem de resina e isolamento de produto são realizados usando 8% TFA/% TIS/% tioanisol e % fenol, seguido por precipitação por meio de Et2O frio em gelo seco (Etapa 2) . O produto é purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa usando um sistema de HPLC preparativa binário Varian (Rainin): eluição em gradiente de 30-5% B (0,04%TFA em H2O (A) e 0, 04% TFA em CH3CN (B) ao longo de 180 min a 9,ml/min usando uma coluna Fenomenex Luna μL fenil-hexila, 21 mmx2cm e detector de UV (Varian Dynamax UVD II) a À214 e 254 nm para propiciar o peptídeo desejado em >9% de pureza, como determinado por RP-HPLC. The Maldi-Tof MS: 3412. Calculado MS: 3412.

Exemplo 2

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 1. LCMS: 1113 (M+3H)3*. Calculado MS: 1113 (M+3H)3+.

Exemplo 3

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito, por exemplo, 1. LCMS: 1119 (M+3H)3+. Calculado MS: 1119 (M+3H)3+. Exemplo 4 Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 1. O Maldi-Tof MS: 3398. Calculado MS: 3398.

Exemplo 5

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 1. LCMS: 1118 (M+3H)3+. Calculado MS: 1118 (M+3H)3+.

Exemplo 6

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 1. LCMS: 1127 (M+3H)3+. Calculado MS: 1127 (M+3H)3+.

Exemplo 7

Síntese de

Uma mistura de [A-ligante-c8,Arg34]GLP-l-OH (3 6 mg, 1 1 μmol) , EDPA (4,0 mg, 30,8 μmol), acetonitrila (260 μl) e água (260 μl) foi gentilmente sacudido por mm. a temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de 2\?“-hexadecanoil-Glu (ONSu) -OBufc, (1,8 mg, 3,3 μmol) em acetonitrila (44,2 μl), e a mistura de reação foi gentilmente sacudida por 1 h e 20 mm. a temperatura ambiente A reação foi extinta pela adição de uma solução de glicina (1,8 mg, 24 2 μmol) em 50 % de etanol aquoso (181 μl) . Uma solução aquosa a 0,% de amônio-acetato (12 ml) e NMP (300 μl) foram adicionados, e a mistura resultante eluída em um cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado foi lavado com % de acetonitrila aquosa (ml) , e finalmente liberada do cartucho por meio de eluição com TFA (6 ml) O eluato foi deixado em repouso por 2 h a temperatura ambiente e então concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna e um sistema padrão de acetonitrila/TFA. O composto do título (12 mg, 46 %) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. O valor m/z para o íon molecular protonado foi encontrado como sendo 3790 ±3. O peso molecular resultante é assim 3790 ± 3 amu (valor teórico 3751 amu).

Exemplo 8

Sintense de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7. LCMS: 1268 (M+3H)3+. Calculado MS: 1268 (M+3H)3+.

Exemplo 9

Síntese de

N-ε26-[y-L-glutamil (N-a-hexadecanoil) ] - [Q-ligante- e8-9,Arg34]GLP-1-(7-37)-peptídeo 0 análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7. LCMS: 1250 (M+3H)3+. Calculado MS: 1250 (M+3H)3+.

Exemplo 10

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7. LCMS: 1256 (M+3H)3+. Calculado MS: 1256 (M+3H)3+.

Exemplo 11

Sintese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7. LCMS: 1244 (M+3H)3+. Calculado MS: 1244 (M+3H)3+. 1Exemplo 12

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7. LCMS: 1250 (M+3H)3+. Calculado MS: 1250 (M+3H)3+.

Exemplo 13

Sintese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7 e éster 2,5-dioxopirrolidin-l-ílico do ácido co- 1carboxiheptadecanóico usado como material de partida ao invés de N“-hexadecanoil-Glu (ONSu)-OB^ . LCMS: 1239 (M+3H)3+. Calculado MS: 1239 (M+3H)3+.

Exemplo 14

Sintese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 7 e éster 2,5-dioxopirrolidin-l-ílico do ácido. <o- carboxinonadecanóico usado como material de partida ao invés de W“-hexadecanoil-Glu(ONSu)-OBuc . LCMS: 1249 (M+3H)3\ Calculado MS: 1249 (M+3H)3+.

Exemplo 15

Síntese de

Uma mistura de [A-ligante-d8] GLP-1-(7-37)-Cys-Ala- 1NH2 (3 6 mg, 1 1 μmol) em soluções tampão de 50 mmol/L (36 ml) foi reagida com 2 mol de excesso de 20KDa mPEG-SPA (pH ajustado de 7,a 9,0 com 50 mmol/L de tampão Tris-HCl) a temperatura ambiente por 3 h. Os conjugados de GLP-1 mono- PEGilado foram monitorados e purificados por meio de 20 cromatografia líquida de fase reversa a alta pressão (RP- HPLC) on X-tera C18 (4,6 X 250 mm, μm, Waters, Milford, MA) a temperatura ambiente. A fase móvel consistiu em 0,1 % TFA em água destilada (eluente A) e ACN contendo 0,1 % TFA (eluente B) . A fase móvel foi executada com um gradiente 2linear de 30 a 60 % eluente B por 20 min a um fluxo baixo de I' 1 ml/min e a absorvância de UV do eluente foi monitorada a 21nui. As frações de HPLC correspondentes a respectivos picos foram colhidas separadamente, purgadas com nitrogênio, e liofilizadas.

Exemplo 16

Síntese de

O análogo de GLP-1 desejado é sintetizado usando a mesma sequência e condições como descrito para o Exemplo 13 e é usado 20KDa mPEG-SPA.

Exemplo 17

Síntese de

Exemplo 18

Síntese de

Exemplo 19

Síntese de

Exemplo 20

Síntese de

Exemplo 21

Estabilidade to DPP-IV in vitro GLP-1 (100 μL,nmol/L) , uma quantidade equivalente de análogos de GLP-1 sintetizados purificados no local foi preparada em tampão trietilamina HCl (mmol/L; pH 7,4). DPP-IV (mU, 900 μL)foi adicionado, e as soluções foram incubadas a 37 °C. Nos pontos de tempo indicados, 100 μLforam removidos da mistura de reação, e reações foram terminadas pela adição de μLde % (v/v) TFA. Cada amostra foi analisada por MALDI-TOF MS e RP-HPLC como descrito.

Exemplo 22

Formação de CAMP em uma linhagem de células que expressam o receptor de GLP-l cIonado humano

Com a finalidade de demonstrar a eficácia dos derivados de GLP-1, foi testada a sua habilidade para estimular a formação de cAMP em uma linhagem de células que expressam o receptor de GLP-1 clonado humano. Um EC50 foi calculado a partir da curva dose-resposta.

Neste radioimunoensaio, NIT-1, uma linhagem de células beta pancreáticas estabelecida de um camundongo NOD/Lt transgênico é usada. 0 ensaio foi levado a cabo em placas de microtitulação de 96 poços em um volume total de 140 μl. 0 tampão usado foi 50 mmol/1 Tris-HCI, pH 7,4 com a adição de 1 mmol/1 EGTA, 1,mmol/1 MgS04i 1,7 mmol/1 ATP, 20 mM GTP, 2 mmol/1 3-isobutil-l-metilxantina, 0,01 % Tween-20 e 0,1 % albumina de soro humano. Compostos a serem testados para atividade agonista foram dissolvidos e diluídos em tampão, adicionados à preparação de membrana e a mistura foi incubada por 2 h a 37°C. A reação foi interrompida pela adição de 2μl de 0,0mol/1 HC1. As amostras foram diluídas vezes antes da análise para cAMP por um ensaio de proximidade de cintilação.

Exemplo 23

Atividade antihiperglicêmica de anâlogos de GLP-1 Camundongos db/db induzidos por diabetes foram divididos em 4 grupos (n=5) e deixados em jejum por 16 horas. Solução salina, 100 μg/kg de GLP-I (7-36) amida, 100 μg eq/kg de [Q-Iigante-C8, Glu22]GLP-1-(7-37)-peptídeo e 100 μg eq/kg de N-ε26- [y-L-glutamil (N-a-hexadecanoil) ] - [Q-ligante- d8,Arg34]GLP-1-(7-37)-peptídeo foram intraperitonealmente injetados e 1 g/kg de solução de glicose foi oralmente administrado após minutos. Após -10, 0, 10, 20, 30, 60, 90, 120 e 180 minutos, amostras de sangue foram tomadas e níveis de glicose no sangue foram medidos. Os efeitos da inibição do aumento de glicose no sangue de GLP-I (7-36) amida, [Q-ligante-c8 , Glu22] GLP-1-(7-37)-peptídeo e N-ε26- [y- L-glutamil(N-a-hexadecanoil)]-[Q-ligante-d8,Arg34]GLP-1-(7- 37)-peptídeo foram comparados por meio do cálculo da área sob o nível de glicose no sangue à curva de tempo (0-180 minutos). AUC de grupo GLP-1(7-36) amida foi 25165+4463 mg- min/dl, que é um valor diminuído em 27,8 %, em comparação com o grupo de solução salina (34864+4774 mg.min/dl). No entanto, [Q-ligante-c8, Glu22] GLP-1-(7-37)-peptídeo e N-ε26-[y-L- glutamil (AZ-α-hexadecanoil) ] - [Q-ligante-d8, Arg34] GLP-1- (7- 37)-peptídeo são 14470+5700 mg-min/dl e 17520+2484 mg-min/dl, respectivamente (isto é, 58,% e 49,7 % diminui cada um). Estes resultados mostram que [Q-ligante-c8, Glu22]GLP-1-(7- 37) -peptídeo e N-ε26- [y-L-glutamil (N-a-hexadecanoil) ] - [Q- ligante-d8,Arg34]GLP-1-(7-37)-peptídeo têm atividade muito aumentada para inibir o nível de glicose no sangue em comparação com GLP-I (7-36) amida.

Claims

1. ANÁLOGO DE GLP-1 DE FÓRMULA I OU A SUA COMPOSIÇÃO:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. caracterizado por: Xaa7 ser L-His, D-histidina, desamino-histidina, 2- amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, α- fluorometil-histidina ou α-metil-histidina;

em que, (C1-C6) alquila ou (C1-C6)alcoxi; (C1-C6) alquila ou (C1-C6)alcoxi; (C1-C6) alquila ou formam um anel de 5-8 membros com R1 ou R2; flúor, hidroxi, trifluorometila ou oxigênio; Y é hidrogênio, hidroxila, flúor ou (C1-C6) alquila; Z é nitrogênio, carbono, oxigênio ou enxofre; oxigênio ou enxofre, W não existe. Quando Z é carbono, W é hidrogênio ou flúor; Xaa14 é serina ou histidina; de carbono do Xaa14 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaa16 é valina, lisina ou leucina; e um ou mais dos átomos de carbono do Xaa16 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila ou Xaa16 é lisina ligada com T-U, em que T é ácido Y-glutâmico, β-alanina, ácido y— aminobutírico, HOOC(CH2)nCOOH ou

aonde, n é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27; k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; U existe e é um ácido graxo com comprimento de 8 a carbonos somente quando T é ácido Y-glutâmico, β-alanina, ácido Y-aminobutírico ou

aonde, k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; Xaa18 é serina, arginina ou lisina; e um ou mais dos átomos de carbono do Xaa18 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaa22 e Xaa23 são, cada um, independentemente glicina, Aib e ácido glutâmico; e um ou mais dos átomos de carbono de cada Xaa22 e Xaa23 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaa26, Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são, cada um, independentemente glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido α-aminoisobutirico); e um ou mais dos átomos de carbono de cada Xaa26, Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; ou Xaa26 é lisina ligada com T-U; em que, T é ácido Y—glutâmico, β-alanina, ácido y- aminobutírico, HOOC(CH2)nCOOH ou

aonde, n é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27; k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, ou m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; U existe e é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos somente quando T é ácido Y—glutâmico, β—alanina, ácido Y—aminobutírico ou

aonde, k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; B é glicina ou NH2 ou OH que representam a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal ou B é um segmento de peptídeo que consistem em cisteína e um a quatro aminoácidos sendo cada um independentemente serina, glicina, alanina ou monometoxipolietileno glicol maleimida, quando Xaa26 é glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido α-aminoisobutirico) e sem ligação com T-U, e onde, T é ácido Y-glutâmico, β-alanina, ácido y- aminobutírico e HOOC(CH2)nCOOH ou

aonde n é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27; k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; U existe e é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos somente quando T é ácido Y-glutâmico, β-alanina, ácido Y-aminobutírico ou

aonde k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.

2. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Xaa26 ser glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido a-aminoisobutírico) e sem ligação com T-U; B ser cisteína-serina-glicina, cisteína- alanina ou cisteína-monometoxipolietileno glicol maleimida.

3. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Q ser ligante (II) e Y ser hidrogênio

4. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por Xaa26 ser glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido a-aminoisobutírico) e sem ligação com T-U; B ser cisteína-serina-glicina, cisteína- alanina ou cisteína-monometoxipolietileno glicol maleimida.

5. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por X ser hidrogênio, flúor ou trifluorometila.

6. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R1, R2 e R3 serem, cada um, independentemente hidrogênio ou metila.

7. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R1 ser metila, R2 e R3 serem, cada um, independentemente hidrogênio.

8. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R1 e R3 serem, cada um, independentemente hidrogênio e R2 ser metila.

9. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R3 formar um anel de 5-8 membros com R1 e R2 sendo hidrogênio; ou R3 formar um anel de 5-8 membros com R2 e R1 sendo hidrogênio.

10. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Q ser ligante (III), X ser trifluorometila e Z ser nitrogênio.

11. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por Xaa26 ser glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido a-aminoisobutírico) e sem ligação com T-U; B ser cisteína-serina-glicina, cisteína- alanina ou cisteína-monometoxipolietileno glicol maleimida.

12. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por R3 ser hidrogênio.

13. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por Y ser hidrogênio ou (C1-C6) alquila.

14. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Q ser ligante (IV), X ser oxigênio e Z ser carbono.

15. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por Xaa26 ser glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido a-aminoisobutírico) e sem ligação com T-U; B ser cisteína-serina-glicina, cisteína- alanina ou cisteína-monometoxipolietileno glicol maleimida.

16. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por R3 ser hidrogênio ou formar um anel de 5-8 membros com R1 ou R2.

17. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por Y ser hidrogênio ou flúor.

18. ANÁLOGO DE GLP-1 DE FÓRMULA VIII OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL OU A COMPOSIÇÃO DO MESMO:

caracterizado por: Xaa7 ser L-His, D-histidina, desamino-histidina, 2- amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, α- fluorometil-histidina, ou α-metil-histidina; Q ser ligantes (II), (III) ou (IV):

em que, R1 é hidrogênio, (C1-C6) alquila ou (C1-C6)alcoxi; R2 é hidrogênio, (C1-C6) alquila ou (C1-C6)alcoxi; R3 é hidrogênio, (C1-C6) alquila ou forma um anel de 5-8 membros com R1 ou R2; X é hidrogênio, flúor, hidroxi, trifluorometila ou oxigênio; Y é hidrogênio, hidroxila, flúor ou (C1-C6) alquila; Z é nitrogênio, carbono, oxigênio ou enxofre; quando Z é nitrogênio, oxigênio ou enxofre, W não existe; ou quando Z é carbono, W é hidrogênio ou flúor. Xaa7 é L-His, D-histidina, desamino-histidina, 2- amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, α- 1fluorometil-histidina ou α-metil-histidina; Xaa14 é serina, ou histidina; e um ou mais dos átomos de carbono do Xaa14 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaa16 é valina, lisina ou leucina; e um ou mais dos 20 átomos de carbono do Xaa16 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila. Xaa18 é serina, arginina ou lisina; e um ou mais dos átomos de carbono do Xaa18 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; 2Xaa22 e Xaa23 são, cada um, independentemente glicina, Aib ou ácido glutâmico; e um ou mais dos átomos de carbono de cada Xaa22 e Xaa23 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 são, cada um, independentemente glicina, lisina, arginina, leucina, asparagina ou Aib (ácido α-aminoisobutírico); e um ou mais dos átomos de carbono de cada Xaa27, Xaa34, Xaa3e Xaa36 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila; T é ácido γ-glutâmico, β-alanina, ácido γ- aminobutírico, HOOC(CH2)nCOOH ou

aonde n é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27; k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; U existe e é um ácido graxo com comprimento de 8 a 20 carbonos somente quando T é ácido γ-glutâmico, β-alanina, ácido γ-aminobutírico, ou

aonde k é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e m é 20 selecionado a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; B é glicina ou NH2 ou OH que representam, respectivamente, a forma amida ou ácido livre do aminoácido terminal.

19. ANÁLOGO DE GLP-1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por:

, todos juntos, não existem ou são um segmento peptídeo de um, dois, três ou quatro aminoácidos; e Xaam, Xaam+1, Xaam+2, Xaam+3, Xaam+4, todos juntos não existem ou são um segmento peptídeo de um, dois, três ou quatro aminoácidos; com a condição de que o número total de aminoácidos proporcionados por todos os Xaan, Xaan+1, Xaan+2, Xaan+3, Xaan+4, Xaam, Xaam+1, Xaam+2, Xaam+3 e Xaam+4 é 1, 2, 3, ou 4 e cisteína ligada a monometoxipolietilenoglicol maleimida.

20. ANÁLOGO DE GLP-1, caracterizado por ser selecionado a partir de

21. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender um composto conforme definido qualquer uma das reivindicações 1 a 20, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

22. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada por ser adequada para administração parenteral.

23. USO DE UM COMPOSTO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou composição conforme definido na reivindicação 22, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento.

24. USO DE UM COMPOSTO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou composição conforme definido na reivindicação 22, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, transtornos cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença cardíaca coronária e outros transtornos cardiovasculares, acidente vascular cerebral, síndrome inflamatória do intestino, dispepsia e úlceras gástricas.

25. USO, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para retardar ou prevenir a progressão da doença em diabetes tipo 2.