BR112012024676B1

BR112012024676B1 - Peptídeo, composição, e, substrato

Info

Publication number: BR112012024676B1
Application number: BR112012024676-3A
Authority: BR
Inventors: Deborah O'Neil; Derry Mercer; Cedric Charrier
Original assignee: Novabiotics Limited
Priority date: 2010-03-31
Filing date: 2011-03-30
Publication date: 2022-05-03
Also published as: WO2011121289A3; KR20130043625A; CN102906105A; AU2016208308B2; ZA201208173B; AU2018202201B2; AU2011234252B2; AU2018202201A1; DK2552434T3; HUE044549T2; EP2552434B9; CN102906105B; EP3578193A2; EP3578193B1; AU2016208308A1; NZ603200A; PL2552434T3; AU2011234252A1; CA2797437C; UA118167C2

Abstract

PEPTÍDEO, MÉTODO PARA TRATAR, COMPOSIÇÃO, E, SUBSTRATO. A presente invenção refere-se aos peptídeos e ao seu uso no tratamento de infecções microbianas, em especial infecções bacterianas. Em especial, a invenção refere-se aos peptídeos nos quais pelo menos 75% dos aminoácidos do peptídeo são aminoácidos arginina e fenil-alanina, pelo menos 50% dos aminoácidos sendo aminoácidos arginina e pelo menos 15% dos aminoácidos sendo aminoácidos fenil-alanina.

Description

Campo da invenção

[0001] A presente invenção refere-se aos peptídeos e ao seu uso no tratamento de infecções microbianas, em especial infecções bacterianas. Também é fornecido um método de tratamento médico.

Fundamentos da invenção

[0002] Peptídeos antimicrobianos são moléculas efetoras principais do sistema imune inato e componentes integrais da primeira linha de defesa contra infecções bacterianas de todos os organismos eucarióticos. Numerosos organismos procarióticos também utilizam peptídeos antimicrobianos como meio para competir contra o desafio de outros microorganismos. Muitos peptídeos antimicrobianos são caracterizados por propriedades catiônicas que facilitam as interações com os fosfolipídeos negativamente carregados da membrana microbiana que então causa a lise microbiana e a morte microbiana após a permeabilização da membrana. Por exemplo, tem sido demonstrado que moléculas de peptídeo antimicrobiano podem se agregar para formarem canais dependentes de voltagem na bicamada lipídica resultando na permeabilização de ambas as membranas interna e externa do microorganismo (Lehrer, R. I., J. Clin. Investigation, 84:553 (1989)). A natureza anfifílica destas moléculas também pode facilitar a inserção do resíduo hidrofóbico para dentro da bicamada lipídica por atração eletrostática enquanto que os resíduos polares projetam-se para dentro e para acima da membrana.

[0003] Microorganismos resistentes às drogas, especialmente bactérias, estão se tornando cada vez mais problemáticos porque as taxas de infecção continuam a aumentar e métodos efetivos de controlar tornam-se mais e mais limitados. O uso prolífico de antibióticos no decorrer dos últimos aproximadamente 50 anos, junto com a prescrição médica indiscriminada de antibióticos, tem selecionado microorganismos que têm desenvolvido ou adquirido meio de suplantar os efeitos de antibióticos. A transmissão e o controle de organismos resistentes às drogas estão se tornando um dos problemas mais significativos dentro do cuidado da saúde.

[0004] Todos os gêneros Gram-positivos, incluindo Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Listeria spp., Clostridium spp., Corynebacterium spp., Nocardia spp., Bacillus spp. e Streptococcus spp., incluindo aqueles que têm desenvolvido ou obtido níveis variados de resistência a antibióticos tal como meticilina, são de interesse específico do mesmo modo que os gêneros Gram-negativos Escherichia spp., Pseudomonas spp., Klebsiella spp. e Acetinobacter spp. Outros patógenos Gram- negativos de interesse incluem os Enterobacteriaceae (especialmente aqueles produzindo carbapenemase ou β- lactamase (ESBL) de espetro estendido). Staphylococci coagulase-negativos, tal como S. epidermidis, também têm emergido como importantes patógenos nosocomiais resistentes às drogas. As opções de tratamento para infecções ocasionadas ou causadas por bactérias resistentes à meticilina ou às múltiplas drogas são agora limitadas e há uma necessidade urgente para descobrir novas terapias quer inibem ou matam tais organismos. Outros patógenos bacterianos de interesse específico incluem Mycobacterium spp., por ex., Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Helicobacter spp., por ex., Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ex., Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdorferi; Shigella spp., por ex., Shigella flexnerii; Haemophilus spp., por ex., Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ex., Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella tularensis; Yersinia spp., por ex., Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ex., Burkholderia mallei e B. pseudomallei.

[0005] Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista que causa infecções no trato respiratório, infecções no trato urinário, dermatite, infecções em tecido mole, bacteremia e uma variedade de infecções sistêmicas, especialmente em pacientes com queimaduras severas e pacientes com AIDS que estão imunossuprimidos. Infecções respiratórias causadas por Pseudomonas aeruginosa ocorrem quase exclusivamente em indivíduos com um trato respiratório inferior comprometido ou um mecanismo defesa sistêmico comprometido (por exemplo em pacientes com fibrose cística ou doença pulmonar obstrutiva crônica). Pneumonia primária ocorre em pacientes com doença pulmonar crônica e insuficiência cardíaca congestiva. Pneumonia bacterêmica comumente ocorre em pacientes com câncer neutropênico submetidos à quimioterapia. Colonização do trato respiratório inferior de pacientes com fibrose cística por cepas mucoides de Pseudomonas aeruginosa é comum e difícil de tratar. Há uma necessidade de desenvolver um meio efetivo de tratar infecções de Pseudomonas aeruginosa.

[0006] Staphylococcus aureus é um patógeno oportunista que é normalmente encontrado sobre a pele e dentro do nariz de muitas pessoas saudáveis onde ele vive completamente inofensivamente. S. aureus pode, contudo, causar problemas se for capaz de entrar no corpo causando abscessos, leicenços, pústulas, impetigo e infecções de ferimento, quer acidentais quer cirúrgicas. Se a infecção penetra na corrente sanguínea e atravessa diferentes partes do corpo ela pode causar envenenamento do sangue (septicemia), infecção óssea (osteomielite), infecção de válvula cardíaca (endocardite) e infecção pulmonar (pneumonia). MRSA é um tipo de S. aureus que é resistente aos muitos antibióticos comumente medicamente receitados, incluindo meticilina (~40% das infecções de S. aureus no Reino Unido são resistentes à meticilina e a outros antibióticos), e é comumente chamada na imprensa popular como um “superbug”. MRSA é um dos micróbios mais prevalecentes envolvidos com infecções associadas com o cuidado da saúde. Infecções estão normalmente confinadas em hospitais, e em especial em pacientes vulneráveis e/ou debilitados, incluindo pacientes em unidades de tratamento intensivo, unidades de queimados e alas hospitalares de ortopedia. MRSA é mais difícil de tratar porque muitos antibióticos são ineficazes, e aqueles que são efetivos frequentemente necessitam ser dados em doses muito mais altas, intravenosamente, durante períodos de tempo prolongados (várias semanas) realçando deste modo a necessidade de desenvolver terapias antimicrobianas alternativas.

[0007] Visto que patógenos microbianos não adquirem prontamente resistência aos peptídeos catiônicos, apesar a pressão evolucionária de milhões de anos de coexistência, permanecem alvos terapêuticos atrativos. Em nossos pedidos copendentes, WO 2006/018652 e WO 2008/093058, descrevemos a identificação de peptídeos que podem ser usados para tratar infecções microbianas, incluindo infecções bacterianas.

[0008] Um biofilme microbiano é uma comunidade de células microbianas embebidas em uma matriz extracelular de substâncias poliméricas e aderentes em uma superfície biológica ou uma superfície não biótica. Uma variedade de microorganismos (bactérias, fungos, e/ou protozoários, com bacteriófagos e outros vírus associados) pode ser encontrada nestes biofilmes. Biofilmes são ubíquos em natureza e são comumente encontrados em uma ampla variedade de ambientes. Biofilmes estão sendo cada vez mais reconhecidos pela comunidade médica e científica como estando implicados em muitas infecções, e especialmente sua contribuição para a recalcitrância de tratamento de infecção.

[0009] Formação de biofilme não é limitada apenas à capacidade de micróbios se fixarem em uma superfície. Micróbios crescendo em um biofilme são capazes de interagir mais entre si do que com o substrato físico real sobre o qual o biofilme inicialmente se desenvolveu. Por exemplo, este fenômeno favorece a transferência de gene conjugativa, que ocorre em uma taxa maior entre células em biofilmes do que entre células planctônicas. Isto representa uma oportunidade aumentada para transferência de gene horizontal entre bactérias, e é importante porque isto pode facilitar a transferência de genes de resistência a antibiótico ou determinantes de virulência dos micróbios resistentes para os suscetíveis. Bactérias podem se comunicas umas com as outras por um sistema conhecido como detecção de quórum, através do qual moléculas sinalizadoras são liberadas para dentro do ambiente e sua concentração pode ser detectada pelos micróbios circundantes. Detecção de quórum permite que bactérias coordenem seu comportamento, intensificando deste modo a sua capacidade de sobrevivência. Respostas à detecção de quórum incluem adaptação à disponibilidade de nutrientes, defesa contra outros microorganismos que podem competir pelos menos nutrientes e a evitação de compostos tóxicos potencialmente perigosos para as bactérias. É muito importante que as bactérias patogênicas durante a infecção de um hospedeiro (por ex., humanos, outros animais ou plantas) coordenem sua virulência com o propósito de escaparem da resposta imune do hospedeiro com o objetivo de serem capazes de estabelecerem uma infecção bem sucedida.

[00010] A formação de biofilme desempenha uma função importante em muitas doenças infecciosas, tais como fibrose cística e periodontite, em infecções na corrente sanguínea e no trato urinário e como uma consequência da presença de dispositivos médicos fixados dentro do corpo de uma pessoa por longo período de tempo. Os mecanismos sugeridos pelos quais os microorganismos associados com biofilme provocam doenças em seu hospedeiro incluem os seguintes: (i) penetração retardada do agente antimicrobiano através da matriz de biofilme, (ii) separação de células ou de agregados celulares dos biofilmes de dispositivo médico fixado dentro do corpo de uma pessoa por longo período de tempo, (iii) produção de endotoxinas, (iv) resistência ao sistema imune do hospedeiro, (v) obtenção de um nicho para a geração de organismos resistentes por meio de transferência de gene horizontal de genes determinantes de virulência e/ou de resistência antimicrobiana, e (vi) taxa de crescimento alterada (.i.e. dormência metabólica) (Donlan e Costerton, Clin. Microbiol. Rev. 15: 167-193, 2002; Parsek e Singh, Annu. Rev. Microbiol. 57: 677-701, 2003; Costerton JW, “Resistance of biofilms to stress”, em 'The biofilm primer', (Springer Berlin Heidelberg), pp. 56-64, 2007).

[00011] Evidência experimental recente tem indicado a existência dentro de biofilmes de uma subpopulação pequena de células persistentes não metabolizadoras especializadas (células dormentes). Pensa-se que estas células podem ser responsáveis pela tolerância / resistência alta de biofilme aos agentes antimicrobianos. Células persistentes tolerantes a múltiplas drogas estão presentes em ambas as populações de biofilme e planctônica e parece que leveduras e bactérias têm desenvolvido estratégias análogas que determinam a função de sobrevivência para este tipo de subpopulação. A proteção oferecida pela matriz polimérica permite que as células persistentes esquivem-se da eliminação e sirvam como uma fonte para repopulação. Há evidência que as células persistentes podem ser em grande parte responsáveis pela tolerância às múltiplas drogas dos biofilmes microbianos (LaFleur et al., Antimicrob. Agents Chemother. 50: 3839-46, 2006; Lewis, Nature Reviews Microbiology 5, 48-56 2007).

[00012] Portanto, há uma exigência, de outros agentes que possam ser usados para tratar infecções microbianas. Em especial, permanece uma necessidade premente de outros agentes ativos antimicrobianos que possam ser usados no tratamento de infecções bacterianas tais como aquelas causadas por Staphylococci, Streptococci, Acinetobacter spp., Klebsiella spp., E. coli e Pseudomonas spp. Também há uma exigência urgente de terapias melhores para prevenir a formação de biofilme e tratar condições associadas com biofilmes microbianos.

[00013] Os presentes inventores têm identificado peptídeos que, surpreendentemente, têm melhorado a atividade antimicrobiana em comparação com os peptídeos antimicrobianos naturais, tais como as defensinas, catelicidinas, etc. Os compostos reivindicados têm propriedades antimicrobianas potentes, simultaneamente exibindo toxicidade baixa in vitro e in vivo para animais e humanos.

Enunciados da invenção

[00014] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção é obtido um peptídeo no qual pelo menos 75% dos aminoácidos do peptídeo são aminoácidos arginina e fenil-alanina, pelo menos 50% dos aminoácidos sendo aminoácidos arginina e pelo menos 15% dos aminoácidos sendo aminoácidos fenil-alanina.

[00015] Os peptídeos da invenção são úteis, inter alia, no tratamento ou na prevenção de infecções bacterianas, em especial infecções bacterianas tais como, mas não limitadas, àquelas causadas por Staphylococcus spp. e Pseudomonas spp. Os peptídeos da presente invenção também são úteis na prevenção e no tratamento de infecções de biofilme causadas por estas e outras bactérias.

[00016] Geralmente pelo menos 80% dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos arginina e fenil-alanina, adequadamente pelo menos 90%, mais adequadamente pelo menos 95%, tipicamente ao redor de 99% dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos arginina e fenil-alanina. De acordo com uma modalidade, todos os aminoácidos no peptídeo são arginina e fenil- alanina.

[00017] Geralmente pelo menos 55% dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos arginina, adequadamente pelo menos 60% (por exemplo 61%), mais adequadamente pelo menos 65%, tipicamente ao redor de 70% dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos arginina.

[00018] Geralmente pelo menos 20% dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos fenil-alanina, adequadamente pelo menos 25%, mais adequadamente pelo menos 30%, tipicamente ao redor de 30% a 40% (por exemplo 38%) dos aminoácidos no peptídeo são aminoácidos fenil-alanina.

[00019] Os aminoácidos do peptídeo da presente invenção podem ser D- ou L-aminoácidos. Os aminoácidos podem ser isômeros ópticos de um aminoácido catiônico como aqui definido por exemplo D- ou L-aminoácidos. Os aminoácidos podem ser naturalmente existentes ou sintéticos. A invenção também. A invenção também inclui isômeros conhecidos (isômeros estruturais, estereoisômeros, conformacionais e configuracionais) e análogos estruturais dos aminoácidos acima, e aqueles modificados quer naturalmente (por ex., modificação pós-tradução) quer quimicamente, incluindo, mas não exclusivamente, fosforilação, glicosilação, sulfonilação e/ou hidroxilação.

[00020] De acordo com uma modalidade da presente invenção, o peptídeo consiste de aminoácidos arginina e fenil-alanina opcionalmente com até cinco substituições de não arginina e de não-fenil-alanina. Geralmente o peptídeo consiste de aminoácidos arginina e fenil-alanina com zero, uma, duas ou três substituições de não arginina e de não-fenil-alanina, tipicamente zero, uma ou duas substituições; vantajosamente zero ou uma substituição.

[00021] De acordo com uma modalidade, o peptídeo consiste de aminoácidos arginina e fenil-alanina.

[00022] Tipicamente o peptídeo da presente invenção pode compreender 1 a 5 substituições, adequadamente 1 a 3 substituições, geralmente uma substituição. A(s) substituição(ões) pode(m) ser terminal(ais) ou não terminal(ais).

[00023] As substituições podem consistir de aminoácidos ou de não aminoácidos. As substituições podem estar carregadas ou não carregadas. Tipicamente, uma ou mais das substituições são aminoácidos não carregados. Alternativamente ou adicionalmente uma ou mais das substituições podem ser aminoácidos carregados, em especial aminoácidos catiônicos. Uma ou mais das substituições de aminoácido podem ser hidrofóbicas.

[00024] Se uma ou mais das substituições forem substituições de aminoácido, elas poderão ser aminoácidos carregados ou não carregados. As substituições de aminoácido podem ser substituições de aminoácidos naturalmente existentes, ou não naturalmente existentes, sintetizados.

[00025] Geralmente as substituições consistem de um ou mais aminoácidos hidrofóbicos, e/ou um ou mais aminoácidos catiônicos.

[00026] Como aqui usado, o termo “hidrofóbico” refere-se a um aminoácido tendo uma cadeia lateral que está não carregada no pH fisiológico, que é não polar e que é geralmente repelida por solução aquosa.

[00027] Geralmente um resíduo de aminoácido hidrofóbico tem uma hidrofobicidade maior do que ou igual a -1,10 e uma carga menor do que ou igual a 0.

[00028] Como aqui usado, o termo “catiônico” refere-se aos aminoácidos tendo uma carga efetiva que é maior do que ou igual a 0. Geralmente o termo “catiônico” refere-se aos aminoácidos tendo uma carga efetiva que é maior do que zero.

[00029] Substituições de aminoácidos hidrofóbicos típicas incluem glicina, leucina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina e treonina.

[00030] Substituições de aminoácidos catiônicos típicas incluem ornitina, histidina e lisina.

[00031] De acordo com uma modalidade, o peptídeo compreende um ou mais aminoácidos cisteína, em especial um ou dois resíduos cisteína terminais

[00032] De acordo com uma modalidade, o peptídeo compreende uma ou mais substituições selecionadas do grupo lisina, prolina, glicina e histidina.

[00033] Vantajosamente, o peptídeo consiste de arginina, fenil-alanina e um do grupo consistindo de lisina, prolina, glicina e histidina. Vantajosamente o grupo consiste de prolina e glicina.

[00034] Geralmente o peptídeo não compreende os aminoácidos ácido aspártico, ácido glutâmico, asparaginas, glutamina ou serina, mas alguns peptídeos da invenção podem ter atividade mesmo que estes aminoácido estejam presentes.

[00035] Em adição, a sequência de aminoácidos de um peptídeo pode ser modificada de modo a resultar em uma variante de peptídeo que inclui a substituição de pelo menos um resíduo de aminoácido no peptídeo no lugar de outro resíduo de aminoácido, incluindo substituições que utilizam a forma D em vez de a forma L.

[00036] Um ou mais dos resíduos do peptídeo podem ser trocados por outro para alterar, intensificar ou preservar a atividade biológica do peptídeo. Uma tal variante pode ter, por exemplo, pelo menos aproximadamente 10% da atividade biológica do peptídeo não variante correspondente. Aminoácidos conservativos são frequentemente utilizados, i.e. substituições de aminoácidos com propriedades químicas e físicas similares como descrito acima.

[00037] Consequentemente, por exemplo, substituições de aminoácido conservativo podem envolver a troca de um aminoácido catiônico por outro, por exemplo troca de arginina por lisina, ornitina ou histidina. Alternativamente ou adicionalmente, fenil-alanina pode ser trocada por glicina, leucina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina ou treonina. Após a introdução das substituições, as variantes são selecionadas para atividade biológica.

[00038] O peptídeo da presente invenção pode compreender de 2 a 200 aminoácidos, por exemplo 3, 4, 5, 6, ou 7 até 100 aminoácidos, incluindo 3, 4, 5, 6, ou 7 até 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 aminoácidos. De acordo com uma modalidade, o peptídeo antimicrobiano compreende 3 ou 4 a 50 aminoácidos.

[00039] O peptídeo pode compreender 100 a 200 aminoácidos, 20 a 100, 20 e 45 aminoácidos por exemplo 25, 30, 35, 40, 42 ou 45 aminoácidos. O peptídeo pode compreender entre 3 e 15 aminoácidos, por exemplo 5 a 15 aminoácidos por exemplo 13 a 15 aminoácidos.

[00040] Tipicamente, o peptídeo compreende 5 a 20 aminoácidos; adequadamente 5 a 15, mais adequadamente 7 a 15, geralmente 10 a 15 aminoácidos, incluindo 11 a 13 aminoácidos.

[00041] De acordo com uma modalidade, o peptídeo consiste de 10 a 15 aminoácidos, em especial 11 a 13 aminoácidos.

[00042] O peptídeo pode tipicamente compreender 5 a 50 aminoácidos arginina, adequadamente 5 a 30, mais adequadamente 5 a 20, geralmente 7 a 10 aminoácidos arginina.

[00043] O peptídeo pode compreender 1 a 20 aminoácidos fenil- alanina, tipicamente 1 a 15, adequadamente 2 a 10, mais adequadamente 2 a 5 aminoácidos fenil-alanina.

[00044] Geralmente o peptídeo compreende uma cadeia principal (backbone) com substituições de fenil-alanina na mesma.

[00045] Geralmente o peptídeo compreende pelo menos uma porção de 3 a 20 aminoácidos arginina contíguos, tipicamente pelo menos uma porção de 3 a 10 aminoácidos arginina contíguos, adequadamente pelo menos uma porção de 3 a 5 aminoácidos arginina contíguos. Alternativamente ou adicionalmente o peptídeo pode compreender pelo menos uma porção de 5 a 10 aminoácidos arginina contíguos.

[00046] Geralmente o peptídeo compreende pelo menos uma porção de 1 a 5 aminoácidos fenil-alanina contíguos, tipicamente pelo menos uma porção de 3 a 5 aminoácidos fenil-alanina contíguos, adequadamente o peptídeo compreende pelo menos uma porção de 3 aminoácidos fenil-alanina contíguos.

[00047] De acordo com uma modalidade, o peptídeo compreende mais do que uma porção fenil-alanina; onde cada porção fenil-alanina compreende um ou mais aminoácidos fenil-alanina. Geralmente o peptídeo compreende duas ou três porções fenil-alanina.

[00048] De acordo com uma modalidade o peptídeo não compreende aminoácidos fenil-alanina terminais.

[00049] De acordo com uma modalidade o peptídeo compreende apenas um aminoácido fenil-alanina terminal por exemplo uma fenil-alanina N-terminal. Preferivelmente o peptídeo não compreende aminoácidos fenil- alanina terminais em ambas as extremidades do peptídeo.

[00050] Tipicamente o peptídeo compreende porções de aminoácido arginina em uma ou ambas extremidades, adequadamente porções de aminoácido arginina tendo 1 a 5 aminoácidos arginina. Alternativamente, o peptídeo pode compreender uma ou duas substituições terminais de não arginina e de não-fenil-alanina. Substituições terminais adequadas incluem as substituições descritas acima, em especial histidina, cisteamina e lisina.

[00051] O peptídeo pode compreender um aminoácido fenil-alanina na terminação-C ou na terminação-N e um aminoácido arginina na respectiva terminação-N ou terminação-C.

[00052] De acordo com uma modalidade o peptídeo compreende um aminoácido arginina C-terminal e um aminoácido fenil-alanina N-terminal.

[00053] De acordo com uma modalidade o peptídeo does não compreende uma sequência (por exemplo 2 ou mais) aminoácidos fenil- alanina na terminação-N.

[00054] O peptídeo da presente invenção pode ser simétrico ou não simétrico.

[00055] Preferivelmente o peptídeo é acíclico. O peptídeo pode ser de cadeia linear i.e. linear ou ramificada. O termo “peptídeo” como aqui usado significa, em termos gerais, uma pluralidade de resíduos de aminoácido ligados juntos por ligações peptídicas. É utilizado intercambiavelmente e significa o mesmo que polipeptídeo e proteína.

[00056] De acordo com uma modalidade da presente invenção, o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR, RRRFRFPFRFRRR,RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR, RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR,RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG,RRRFFFFFFFRRR e RRRFRFFFRFRRR-cisteamina. Os peptídeos podem consistir essencialmente destas sequências de aminoácidos.

[00057] De acordo com uma modalidade da presente invenção, o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo RRRFRFFFRFRRR (NP432), FRRRRFFFRFRRR (NP490),RRRRFFFFFRRRR (NP493) e RRRFRRRRRFFFF (NP497).

[00058] De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, o peptídeo compreende uma mistura de aminoácidos hidrofóbicos e catiônicos. Em especial, os aminoácidos hidrofóbicos são selecionados do grupo consistindo de glicina, leucina, fenil-alanina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina e treonina.

[00059] O peptídeo desta modalidade geralmente compreende aminoácidos arginina mas não necessariamente compreende aminoácidos fenil-alanina.

[00060] Tipicamente os aminoácidos hidrofóbicos são selecionados do grupo consistindo de fenil-alanina, triptofano, tirosina e glicina.

[00061] Em especial, os aminoácidos catiônicos são selecionados do grupo consistindo de ornitina, histidina, arginina e lisina. Tipicamente os aminoácidos catiônicos são selecionados do grupo consistindo de arginina e lisina.

[00062] De acordo com uma modalidade, o peptídeo compreende lisina, fenil-alanina e aminoácidos arginina.

[00063] De acordo com uma outra modalidade, o peptídeo compreende lisina, arginina, fenil-alanina, prolina, triptofano, tirosina e glicina aminoácidos. Embora os peptídeos da presente invenção geralmente não incluam aminoácidos glutamina, alguns tais peptídeos podem exibir atividade. Este peptídeo pode incluir um ou mais aminoácidos glutamina.

[00064] De acordo com uma modalidade, os peptídeos descritos acima podem consistir dos aminoácidos especificados com zero, uma ou duas substituições. Geralmente os peptídeos da presente invenção consistem dos aminoácidos especificados. Alternativamente, os peptídeos desta modalidade da presente invenção podem compreender substituições como detalhadas acima.

[00065] Os peptídeos da segunda modalidade podem compreender uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo de KKPRRKPRRPKRKK (NP449) e KKFPWRLRLRYGRR (NP445).

[00066] Os peptídeos da invenção são geralmente peptídeos sintéticos. Os peptídeos podem ser peptídeos isolados, purificados ou suas variantes, que podem ser sintetizadas in vitro, por exemplo, por um método de síntese de peptídeo em fase sólida, por síntese de peptídeo catalisada por enzima ou com o auxílio de tecnologia de DNA recombinante.

[00067] Para identificar os peptídeos ativos que têm pouca ou nenhuma toxicidade indesejada para células de mamífero, peptídeos individuais, ou bibliotecas de peptídeos, podem ser preparados(as) e os peptídeos individuais ou peptídeos daquelas bibliotecas podem ser selecionados para toxicidade e atividade antimicrobianas, incluindo, mas não limitadas a, toxicidade e atividade antifúngicas, antibacterianas, antivirais, antiprotozoárias, antiparasíticas.

[00068] Os peptídeos da invenção podem existir em formas diferentes, por exemplo ácidos livres, bases livres, ésteres e outras pró-drogas, sais e tautômeros, por exemplo, e a invenção inclui todas as formas variantes dos compostos.

[00069] Assim, a invenção inclui o sal ou a pró-droga de um peptídeo ou de uma variante de peptídeo da invenção.

Composição

[00070] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é obtida uma composição compreendendo um ou mais dos peptídeos como descritos acima, juntamente com um ou mais adjuvantes ou excipientes.

[00071] De acordo com uma modalidade, a composição pode compreender dois ou mais peptídeos da presente invenção. Vantajosamente, a composição compreende um, dois ou três peptídeos da presente invenção.

[00072] Os agentes da invenção podem ser administrados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto parental que contém um grupo básico ou ácido por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados pela reação das formas de ácido livre ou de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada ou do ácido apropriado em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois; geralmente, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol, ou acetonitrila são preferidos. Listas de sais adequados são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., EUA, 1985, p. 1418, cuja descrição é por meio desta aqui incorporada como referência; veja também Stahl et al., Eds, “Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use”, Verlag Helvetica Chimica Acta & Wiley-VCH, 2002. A frase “farmaceuticamente aceitável” é aqui utilizada para se referir àqueles compostos, materiais, e/ou àquelas formas de dosagem que são, dentro do escopo do julgamento médico legítimo, adequados(as) para uso em contato com os tecidos de seres humanos ou, conforme for, um animal sem excessivas toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou outra complicação, de acordo com uma proporção de benefício / risco razoável.

[00073] Esta invenção, portanto, inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos revelados nos quais o composto parental é modificado pela preparação de seus sais de ácido ou de base por exemplo os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternário que são formados, por ex., a partir de ácidos ou bases inorgânicos(as) ou orgânicos(as). Exemplos de tais sais de adição de ácido incluem acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzeno-sulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclo-pentano-propionato, digliconato, dodecil-sulfato, etano-sulfonato, fumarato, glico-heptanoato, glicero-fosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2- hidróxi-etano-sulfonato, lactato, maleato, metano-sulfonato, 2-naftaleno- sulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenil- propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, tosilato, e undecanoato. Sais de base incluem sais de amônio, sais de metal alcalino, por exemplo sais de sódio e de potássio, sais de metal alcalino- terroso por exemplo sais de cálcio e de magnésio, sais com bases orgânicas por exemplo sais de diciclo-hexil-amina, N-metil-D-glicamina, e sais com aminoácidos por exemplo arginina, lisina, e assim por diante. Também, os compostos contendo nitrogênio básico podem ser quaternizados com tais agentes como haletos de alquila inferior, por exemplo cloretos, brometos e iodetos de metila, de etila, de propila, e de butila; dialquil-sulfatos como dimetil-, dietil-, dibutil- e diamil-sulfatos, haletos de cadeia longa por exemplo cloretos, brometos e iodetos de decila, de laurila, de miristila e estearila, haletos de aralquila como brometos de benzila e de fenetila e outros.

[00074] Sais de grupos carboxila de um peptídeo ou de uma variante de peptídeo da invenção podem ser preparados na maneira habitual pelo contato do peptídeo com um ou mais equivalentes de uma base desejada tal como, por exemplo, uma base de hidróxido de metal, por ex., hidróxido de sódio; um carbonato de metal ou um bicarbonato de metal tal como, por exemplo, carbonato de sódio ou bicarbonato de sódio; ou uma base de amina tal como, por exemplo, trietil-amina, trietanol-amina e semelhantes.

[00075] Derivados N-acilados de um grupo amino do peptídeo ou de variantes de peptídeo da invenção podem ser preparados pela utilização de um aminoácido N-acil-protegido para a condensação final, ou pela acilação de um aminoácido protegido ou não-protegido. Derivados O-acilados podem ser preparados, por exemplo, pela acilação de um hidróxi-peptídeo livre ou de uma resina de peptídeo. Qualquer acilação pode ser realizada usando reagentes de acilação padrão tais como haletos de acila, acil-anidridos, acil- imidazois, e semelhantes.

[00076] A invenção inclui pró-drogas para as espécies farmaceuticamente ativas dos peptídeos descritos, por exemplo em que um ou mais grupos funcionais são protegidos ou derivados mas podem ser convertidos in vivo para o grupo funcional, como é o caso de ésteres de ácidos carboxílicos conversíveis in vivo para o ácido livre, ou no caso de aminas protegidas, para o grupo amino livre. O termo “pró-droga”, como aqui usado, representa estruturas específicas que são rapidamente transformadas in vivo na estrutura parental, por exemplo, por hidrólise em sangue. Uma discussão completa é fornecida em T. Higuchi e V. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”, Vol. 14 do A.C.S. Symposium Series, Edward B. Roche, ed., “Bioreversible Carriers in Drug Design”, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; H Bundgaard, ed, “Design of Prodrugs”, Elsevier, 1985; e Judkins, et al. Synthetic Communications, 26(23), 4351-4367 (1996), cada uma das quais é aqui incorporada como referência.

[00077] Pró-drogas portanto incluem drogas tendo um grupo funcional que tem sido transformado em um seu derivado reversível. Tipicamente, tais pró-drogas são transformadas na droga ativa por hidrólise. Pró-drogas também incluem compostos conversíveis para a droga ativa por uma reação oxidativa ou redutiva. Como exemplos podem ser mencionados as seguintes: ativação oxidativa, N- e O-desalquilação, desaminação oxidativa, N-oxidação, epoxidação, ativação redutiva, azo-redução, redução de sulfóxido, redução por dissulfeto, alquilação biorredutiva e nitrorredução.

[00078] Também são mencionadas como ativações metabólicas de pró- drogas as ativação de nucleotídeo, ativação de fosforilação e ativação de descarboxilação.

[00079] O uso de grupos protetores é totalmente descrito em “Protective Groups in Organic Chemistry”, editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), e “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2a edição, T W Greene & P G M Wutz, Wiley-Interscience (1991).

[00080] Assim, será reconhecido por aquelas pessoas experientes na arte que, embora derivados protegidos dos peptídeos descritos possam não possuir como tais atividade farmacológica, eles podem ser administrados, por exemplo parenteralmente ou oralmente, e depois metabolizados no corpo para formar compostos que são farmacologicamente ativos. Tais derivados são portanto exemplos de “pró-drogas”. Todas as pró-drogas dos compostos descritos estão incluídas dentro do escopo da invenção.

[00081] A composição da presente invenção também inclui um ou mais carreadores, excipientes, adjuvantes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis . A frase “farmaceuticamente” é utilizada aqui para se referir àqueles(as) compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do julgamento médico legítimo, adequados(as) para uso em contato com os tecidos de seres humanos ou, conforme for, um animal sem excessivas toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou outra complicação, de acordo com uma proporção de benefício / risco razoável.

[00082] Quando os peptídeos terapêuticos da invenção são preparados para administração oral, eles são geralmente combinados com um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente para formar uma formulação farmacêutica, ou uma forma de dosagem unitária. Para administração oral, os peptídeos podem se apresentar como um pó, uma formulação granular, uma solução, uma suspensão, uma emulsão ou em um(a) resina ou polímero sintética(o) ou natural para ingestão dos ingredientes ativos a partir de uma goma de mascar. Os peptídeos ativos também podem se apresentar como um bolo, um electuário ou uma pasta. Peptídeos terapêuticos oralmente administrados da invenção também podem ser formulados para liberação prolongada, por ex., os peptídeos podem ser revestidos, microencapsulados, ou diferentemente posicionados dentro de um dispositivo de liberação prolongada. Os ingredientes ativos totais em tais formulações compreendem de 0,1% a 99,9% em peso da formulação.

[00083] Assim, uma ou mais formas de dosagem unitária adequadas compreendendo os peptídeos terapêuticos da invenção podem ser administradas por uma variedade de rotas incluindo rotas oral, parenteral (incluindo subcutânea, intravenosa, intramuscular e intraperitoneal), retal, dermal, transdermal, intratorácica, intrapulmonar, mucosal, intraocular e intranasal (respiratória). Os peptídeos terapêuticos também podem ser formulados em uma formulação de lipídeo ou para liberação prolongada (por exemplo, usando microencapsulação, veja WO 94/07529, e Patente U.S. de Número 4.962.091 aqui incorporadas como referências). As formulações pode, onde apropriado, ser convenientemente apresentadas em formas de dosagem unitária discretas e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na arte farmacêutica. Tais métodos podem incluir a etapa de misturar o agente terapêutico com carreadores líquidos, matrizes sólidas, carreadores semissólidos, carreadores sólidos finamente divididos ou suas combinações, e então, se necessário, introduzir ou moldar o produto no sistema de liberação desejado.

[00084] Formulações contendo os peptídeos terapêuticos da invenção podem ser preparadas por procedimentos conhecidos na arte usando ingredientes bem conhecidos e prontamente disponíveis. Por exemplo, o peptídeo pode ser formulado com excipientes, diluentes, ou carreadores comuns, e transformado em tabletes, cápsulas, soluções, suspensões, pós, aerossois e semelhantes. Exemplos de excipientes, diluentes, e carreadores que são adequados para tais formulações incluem agentes tampão, bem como cargas e extensores tais como amido, celulose, açúcares, manitol, e derivados de silício. Ingredientes aglutinantes também podem ser incluídos tais como carbóxi-metil-celulose, hidróxi-metil-celulose, hidróxi-propil-metil-celulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina, e poli(vinil-pirrolidona). Agentes umectantes podem ser incluídos tal como glicerol, agentes desintegrantes tais como carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio. Agentes para retardar a dissolução também podem ser incluídos tal como parafina. Aceleradores de reabsorção tais como compostos de amônio quaternário também podem ser incluídos. Agentes tensoativos tais como cetil-álcool e monoestearato de glicerila podem ser incluídos. Carreadores adsortivos tais como caulim e bentonita podem ser adicionados. Lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio e estearato de magnésio, e poli(etileno-glicois) sólidos também podem ser incluídos. Conservantes também podem ser adicionados. As composições da invenção também podem conter agentes espessantes tais como celulose e/ou derivados de celulose. Também podem conter gomas tais como xantana, goma guar ou carbo-goma ou goma arábica, ou alternativamente poli(etileno-glicois), bentonitas e montmorillonitas, e semelhantes.

[00085] Por exemplo, tabletes ou caplets contendo os peptídeos da invenção podem incluir agentes tampão tais como carbonato de cálcio, óxido de magnésio e carbonato de magnésio. Agentes tampão adequados também podem incluir ácido acético em um sal, ácido cítrico em um sal, ácido bórico em um sal e ácido fosfórico em um sal. Caplets e tabletes também podem incluir ingredientes inativos tais como celulose, amido pré-gelatinizado, dióxido de silício, hidróxi-propil-metil-celulose, estearato de magnésio, celulose microcristalina, amido, talco, dióxido de titânio, ácido benzoico, ácido cítrico, amido de milho, óleo mineral , poli(propileno-glicol), fosfato de sódio, estearato de zinco, e semelhantes. Cápsulas de gelatina moles e duras contendo pelo menos um peptídeo da invenção podem conter ingredientes inativos tais como gelatina, celulose microcristalina, lauril-sulfato de sódio, amido, talco e dióxido de titânio, e semelhantes, bem como veículos líquidos tais como poli(etileno-glicois) (PEGs) e óleo vegetal. Além disso, tabletes e caplets entericamente revestidos contendo um ou mais peptídeos da invenção são planejados para resistirem à desintegração dentro do estômago e para se dissolverem no ambiente mais neutro ou alcalino do duodeno.

[00086] Os peptídeos terapêuticos da invenção também podem ser formulados como elixires ou soluções para administração oral conveniente ou como soluções apropriadas para administração parenteral, por exemplo por rotas intramuscular, subcutânea, intraperitoneal ou intravenosa. As formulações farmacêuticas dos peptídeos terapêuticos da invenção também podem tomar a forma de uma dispersão ou solução anidra ou aquosa, ou alternativamente a forma de uma emulsão ou suspensão ou unguento.

[00087] Assim, os peptídeos terapêuticos podem ser formulados para administração parenteral (por ex., por injeção, por exemplo, injeção de bolo ou infusão contínua) e podem ser apresentados em forma de dosagem unitária em ampolas, seringas pré-cheias, recipientes de infusão de volume pequeno ou em recipientes de múltiplas doses. Como mencionado acima, conservantes podem ser adicionados para ajudar a manter o prazo de validade da forma de dosagem. Os peptídeos ativos e outros ingredientes podem formar suspensões, soluções, ou emulsões em veículos aquosos ou oleosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, de estabilização e/ou de dispersão. Alternativamente, os peptídeos ativos e outros ingredientes podem estar na forma de pó, obtida por isolamento asséptico de sólido estéril ou por liofilização da solução para reconstituição com um veículo adequado, por ex., água estéril, livre de pirogênio antes do uso.

[00088] É possível adicionar, se necessário, um adjuvante escolhido de antioxidantes, tensoativos, outros conservantes, agentes formadores de filme, agentes ceratolíticos ou comedolíticos, perfumes, aromatizantes e corantes. Antioxidantes tais com t-butil-hidroquinona, hidróxi-anisol butilado, hidróxi- tolueno butilado e [alfa]-tocoferol e seus derivados podem ser adicionados.

[00089] Estas formulações podem conter adjuvantes, carreadores e veículos farmaceuticamente aceitáveis que são bem conhecidos na arte. É possível, por exemplo, preparar soluções usando um ou mais solvente(s) orgânico(s) que é/são aceitável(eis) do ponto de vista fisiológico, escolhido(s), em adição à água, de solventes tais como acetona, ácido acético, etanol, isopropil-álcool, dimetil-sulfóxido, glicol-éteres tais como os produtos vendidos sob o nome “Dowanol”, poliglicois, poli(etileno-glicois), C1-C4 alquil-ésteres de ácidos de cadeia curta, lactato de etila ou lactato de isopropila, triglicerídeos de ácido graxo tais como os produtos comercializados sob o nome “Miglyol”, miristato de isopropila, óleos animais, minerais e vegetais e polissiloxanos.

[00090] Preferivelmente, a composição que está na forma de uma formulação farmacêutica dos peptídeos terapêuticos da invenção também pode tomar a forma de um solvente ou diluente compreendendo o peptídeo. Solventes ou diluentes podem incluir soluções ácidas, dimetil-sulfona, N-(2- mercapto-propionil)-glicina, 2-n-nonil-1,3-dioxolano e etil-álcool. Preferivelmente o solvente/diluente é um solvente ácido, por exemplo, ácido acético, ácido cítrico, ácido bórico, ácido lático, ácido propiônico, ácido fosfórico, ácido benzoico, ácido butírico, ácido málico, ácido malônico, ácido oxálico, ácido succínico ou ácido tartárico.

[00091] As formulações farmacêuticas da presente invenção podem incluir, como ingredientes opcionais, carreadores, diluentes agentes de solubilização ou de emulsificação, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos tipos que estão disponíveis na arte. Exemplos de tais substâncias incluem soluções salinas normais tais como soluções salinas fisiologicamente tamponadas e água. Exemplos não limitantes específicos dos carreadores e/ou diluentes que são úteis nas formulações farmacêuticas da presente invenção incluem água e soluções salinas tamponadas fisiologicamente aceitáveis tais como soluções salinas tamponadas com fosfato de pH 7,0-8,0.

[00092] Mais preferivelmente, o solvente é uma solução de ácido acético. O solvente, por exemplo solução de ácido acético, pode estar presente na composição em uma concentração menor do que 1%, 0,5%, 0,25%, 0,1%, 0,05% ou 0,01% de ácido, por exemplo ácido acético.

[00093] A composição da presente invenção pode compreender um ou mais agentes antimicrobianos adicionados. Em especial, a composição da presente invenção pode compreender um ou mais agentes antibacterianos adicionais.

[00094] Também são contemplados produtos de combinação que incluem um ou mais peptídeos da presente invenção e um ou mais outros agentes antimicrobianos, em especial um ou mais agentes antibacterianos. A composição da presente invenção pode compreender ou uma ou mais de cisteamina (NM001), poliarginina e polilisina, por exemplo bromidrato de poli-L-lisina de 10 a 20 kDa (NP108), cloridrato de poli-L-lisina de 15 a 30 kDa (NP101) e cloridrato de poli-L-arginina de 5 a 15 kDa (NP121).

[00095] Adicionalmente, os peptídeos são bem adequados para formulação como formas de dosagem de liberação prolongada e semelhantes. As formulações podem ser constituídas de modo a liberarem o peptídeo ativo, por exemplo, em uma parte específica do trato intestinal ou respiratório, possivelmente durante um período de tempo. Revestimentos, envelopes, e matrizes protetoras podem ser preparados(as), por exemplo, a partir de substâncias poliméricas, tais como poli(lactídeo-glicolatos), lipossomos, microemulsões, micropartículas, nanopartículas, ou ceras. Estes revestimentos, envelopes, matrizes protetoras são úteis para revestir dispositivos médicos fixados dentro do corpo de uma pessoa por longo período de tempo, por ex., stents, cateteres, tubulação de diálise peritoneal, dispositivos de drenagem e semelhantes.

[00096] Para administração tópica, os agentes ativos podem ser formulados como é conhecido na arte para aplicação direta em uma área alvo. Formas principalmente condicionadas para aplicação tópica tomam a forma, por exemplo, de cremes, leites, geles, pós, dispersão e microemulsões, loções espessadas em uma extensão maior ou menor, almofadas impregnadas, unguentos ou bastões, formulações de aerossol (por ex., borrifos ou espumas), sabões, detergentes, loções e bolos de sabão. Outras formas convencionais para este propósito incluem curativos de ferimento, bandagens revestidas ou outros revestimentos poliméricos, unguentos, cremes, loções, pastas, geleias, borrifos, e aerossois. Assim, os peptídeos terapêuticos da invenção podem ser liberados via emplastros bandagens para administração dermal. Alternativamente, o peptídeo pode ser formulado para ser parte de um polímero adesivo, por exemplo poliacrilato ou copolímero de acrilato / acetato de vinila. Para aplicações de longa duração poderia ser desejável usar laminados de suporte respiráveis, de modo que possa ser minimizada a hidratação ou maceração da pele. A camada de suporte pode ser de qualquer espessura apropriada que proporcionará funções de suporte e protetoras. Uma espessura adequada geralmente será de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros.

[00097] Formulações farmacêuticas para administração tópica podem compreender, por exemplo, uma solução salina fisiologicamente tamponada contendo entre cerca de 0,001 mg/mL e cerca de 100 mg/mL, por exemplo entre 0,1 mg/mL e 10 mg/mL, de um ou mais dos peptídeos da presente invenção específicos para a indicação ou a doença a ser tratada.

[00098] Unguentos e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes e/ou gelificantes adequados. Loções podem ser formuladas com uma base oleosa ou aquosa e geralmente também conterão um ou mais agentes emulsificadores, agentes estabilizadores, agentes de suspensão, agentes espessantes, ou agentes colorantes. Os peptídeos ativos também podem ser liberados via iontoforese, por ex.,, como revelado em Patentes U.S. de Números 4.140.122; 4.383.529; ou 4.051.842 que são aqui incorporadas como referências. A percentagem em peso de um agente terapêutico da invenção presente em uma formulação tópica dependerá de vários fatores, mas geralmente será d 0,01% a 95% do peso total da formulação, e tipicamente 0,1-85% em peso.

[00099] Gotas, tais como gotas oculares e gotas nasais, podem ser formuladas com um ou mais dos peptídeos terapêuticos em uma base aquosa ou não aquosa também compreendendo um ou mais agentes dispersantes, agentes de solubilização ou agentes de suspensão. Borrifos líquidos podem ser bombeados, e são convenientemente liberados dos recipientes pressurizados. Gotas podem ser liberadas via um frasco de tampa gotejadora ocular simples, via um fraco plástico adaptado para liberar conteúdo líquido em gotas, ou via um fecho especialmente moldado.

[000100] O peptídeo terapêutico pode ser adicionalmente formulado para administração tópica na boca ou na garganta. Por exemplo, os ingredientes ativos podem ser formulados como uma pastilha rômbica adicionalmente compreendendo uma base aromatizada, habitualmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo a composição em uma base inerte tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia; e enxaguatórios bucais compreendendo a composição da presente invenção em um carreador líquido adequado. Os peptídeos da invenção também podem ser administrados ao trato respiratório. Assim, a presente invenção também obtém formas de dosagem e formulações farmacêuticas de aerossol para uso nos métodos da invenção. Em geral, tais formas de dosagem compreendem uma quantidade de pelo menos um dos agentes da invenção efetiva para tratar ou prevenir os sintomas clínicos de uma infecção, indicação ou doença específica. Qualquer atenuação estatisticamente significativa de um ou mais sintomas de uma infecção, indicação ou doença que tem sido tratada de acordo com o método da presente invenção é considerada como sendo um tratamento de tal infecção, indicação ou doença dentro do escopo da invenção.

[000101] Alternativamente, para administração por inalação ou insuflação, a composição pode tomar a forma de um pó seco, por exemplo, uma mistura de pó do agente terapêutico e uma base de pó adequada tal como lactose ou amido. A composição de pó pode ser apresentada em uma forma de dosagem unitária em, por exemplo cápsulas ou cartuchos, ou, por ex., cartelas de blister ou gelatina dos quais o pó pode ser administrado com o auxílio de um inalador, insuflador, ou um inalador de dose medida (veja, por exemplo, o inalador de dose medida (MDI) pressurizado e o inalador de pó seco revelados em Newinan, S. P. em “Aerosols and the Lung”, Clarke, S. W. e Davia, D. eds., pp. 197-224, Butterworths, Londres, Inglaterra, 1984).

[000102] Peptídeos terapêuticos da presente invenção também podem ser administrados em uma solução aquosa quando administrados em uma forma de aerossol ou inalada. Assim, outras formulações farmacêuticas de aerossol podem compreender, por exemplo, uma solução salina tamponada fisiologicamente aceitável entre cerca de 0,001 mg/mL e cerca de 100 mg/mL de um ou mais dos peptídeos da presente invenção específicos para a indicação ou a doença a ser tratada. Aerossol seco na forma de partículas de ácido nucleico ou peptídeo finamente divididas que não estão dissolvidas ou suspensas em um líquido também são úteis na prática da presente invenção. Peptídeos da presente invenção podem ser formulados como pós polvilháveis e compreendem partículas finamente divididas tendo um tamanho de partícula médio de entre cerca de 1 μm e 5 μm, alternativamente entre 2 μm e 3 μm. Partículas finamente divididas podem ser preparadas por pulverização e filtração em tela usando técnicas bem conhecidas na arte. As partículas podem ser administradas por inalação de uma quantidade predeterminada do material finamente dividido, que pode estar na forma de um pó. Será reconhecido que o teor unitário de ingrediente ativo ou de ingredientes ativos contido em uma dose de aerossol individual de cada forma de dosagem não precisa em si mesmo constituir uma quantidade efetiva para tratar a infecção, indicação ou doença específica porque a quantidade efetiva necessária pode ser alcançada pela administração de uma pluralidade de unidades de dosagem. Além disso, a quantidade efetiva pode ser alcançada usando menos do que a dose na forma de dosagem, quer individualmente, quer em uma série de administrações.

[000103] Para administração ao trato respiratório superior (nasal) ou inferior por inalação, os peptídeos terapêuticos da invenção são convenientemente liberados de um nebulizador ou de um recipiente pressurizado ou outro meio conveniente de liberação de borrifo de aerossol. Recipientes pressurizados podem compreender um propelente adequado tal como dicloro-difluoro-metano, tricloro-fluoro-metano, dicloro-tetrafluoro- etano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada pela aplicação de uma válvula para liberar uma quantidade medida. Nebulizadores incluem, mas não são limitados, àqueles relevados em Patentes U.S. de Números 4.624.251; 3.703.173; 3.561.444; e 4.635.627 que são aqui incorporadas como referências . Sistemas de liberação de aerossol do tipo aqui revelado estão disponíveis em numerosas fontes comerciais incluindo Fisons Corporation (Bedford, Mass.), Schering Corp. (Kenilworth, NJ) e American Pharmoseal Co. (Valencia, CA). Para administração intranasal, o agente terapêutico também pode ser administrado via gotas nasais, um borrifo líquido, tal como via um atomizador de frasco plástico ou inalador de dose medida. Atomizadores típicos são o Mistometer (Wintrop) e o Medihaler (Riker).

[000104] Ademais, os ingredientes ativos também podem ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, agentes aliviadores de dor, agentes anti-inflamatórios, anti-histamínicos, broncodilatadores e semelhantes, quer para as condições descritas quer para alguma outra condição.

Uso antimicrobiano

[000105] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é obtido um peptídeo como descrito acima para uso em terapia ou profilaxia.

[000106] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é obtido um peptídeo como descrito acima para uso no tratamento ou na prevenção de uma condição ou infecção antimicrobiana. Geralmente o peptídeo da presente invenção é embalado ou apresentado para uso no tratamento ou na prevenção de uma condição ou infecção antimicrobiana.

[000107] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de tratamento ou de prevenção de uma condição ou infecção antimicrobiana compreendendo a etapa de administrar um peptídeo da presente invenção a um paciente em necessidade do mesmo.

[000108] Os peptídeos da invenção são úteis, inter alia, como peptídeos antimicrobianos, por exemplo, contra bactérias, fungos, leveduras, parasita, protozoários e vírus. O termo, “peptídeo antimicrobiano” pode ser aqui usado para definir qualquer peptídeo que tem atividade microbiocida e/ou microbiostática e inclui, não exclusivamente, qualquer peptídeo descrito como tendo propriedades antibacteriana, antifúngica, antimicótica, antiparasítica, antiprotozoária, antiviral, anti-infecciosa, anti-infectante e/ou germicida, algicida, amebicida, microbicida, bactericida, fungicida, parasiticida, protozoacida, protozoicida.

[000109] “Infecção microbiana” significa uma infecção causada por um patógeno bacteriano, protozoário, viral ou fúngico. Um “patógeno” é geralmente definido como qualquer organismo causador de doença. Em especial, os peptídeos da presente invenção são úteis como peptídeos antibacterianos.

[000110] Assim, a invenção adicionalmente obtém um peptídeo de acordo com a invenção para uso como um medicamento. Os peptídeos da invenção podem ter aplicação como agentes antimicrobianos tanto in vivo, in vitro quanto ex vivo.

[000111] Um patógeno bacteriano pode ser selecionado de uma espécie bacteriana selecionada do grupo consistindo de: Staphylococcus spp., por ex., Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis; Enterococcus spp., por ex., Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus pyogenes; Listeria spp.; Pseudomonas spp. por ex., Pseudomonas aeruginosa; Mycobacterium spp., por ex., Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Klebsiella spp., por ex., Klebsiella pneumonia; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Streptococcus spp., por ex., Streptococcus Grupo A ou B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia; Helicobacter spp., por ex., Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ex., Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdorferi; Shigella spp., por ex., Shigella flexneri; Escherichia coli; Haemophilus spp., por ex., Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ex., Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella fularensis; Bacillus spp., por ex., Bacillus anthracis; Clostridia spp., por ex., Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; Yersinia spp., por ex., Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ex., Burkholderia mallei, B. cepacia, B. cepacia complex e B. pseudomallei, Acinetobacter spp. por ex., A. baumanii e A. calcoaceticus; Achromobacter spp., Achromobacter xylosoxidans.

[000112] O patógeno bacteriano pode ser uma bactéria Gram-negativa ou uma bactéria Gram-positiva A bactéria Gram-negativa pode ser selecionada do grupo consistindo de Pseudomonas spp. (em especial Pseudomonas aeruginosa); Burkholderia spp (em especial Burkholderia cepacia); Acinetobacter spp. por ex., A. baumanii e A. calcoaceticus; Streptococcus spp., por ex., Streptococcus Grupo A ou B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia e Achromobacter spp., por ex., Achromobacter xylosoxidans.

[000113] A bactéria Gram-positiva pode ser selecionada do grupo consistindo de Staphylococcus spp. (em especial Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis); Escherichia coli; Clostridia spp., por ex., Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; e Enterococcus spp., por ex., Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium.

[000114] O patógeno bacteriano pode ser selecionado do grupo consistindo de Staphylococcus spp. (em especial Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis); Pseudomonas spp. (em especial Pseudomonas aeruginosa); Burkholderia spp (em especial Burkholderia cepacia), Escherichia coli; Acinetobacter spp. por ex., A. baumanii e A. calcoaceticus; Clostridia spp., por ex., Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; Enterococcus spp., por ex., Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus spp., por ex., Streptococcus de Grupo A ou B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia e Achromobacter spp., Achromobacter xylosoxidans.

[000115] O patógeno bacteriano pode ser selecionado do grupo consistindo de Staphylococcus spp. (em especial Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis) e Pseudomonas spp. (em especial Pseudomonas aeruginosa).

[000116] A doença ou condição / infecção microbiana pode ser selecionada do grupo consistindo de leicenços, furúnculos, celulite, impetigo, infecções nosocomiais, bacteremia, pneumonia, osteomielite, endocardite, meningite, abscessos, fibrose cística (em especial infecções pulmonares em pacientes com fibrose cística), infecções gastrointestinais, infecções genitourinárias, septicemia, faringite, fasciite necrosante, glomerulonefrite aguda, otite média, feridas, antraz, encefalite, difteria, gangrena gasosa, botulismo e tétano.

[000117] Alternativamente, os peptídeos da presente invenção podem ser usados para tratar ou aliviar uma doença ou condição selecionada do grupo consistindo de gonorreia, meningite, pneumonia, otite média, osteomielite, fibrose cística (em especial infecções pulmonares em pacientes com fibrose cística), infecções genitourinárias, peritonite, conjuntivite, septicemia, doença venérea, bacteremia, infecções nosocomiais, disenteria, infecções gastrointestinais, febre tifoide, peste pneumônica, feridas, cólera, infecções renais, melioidose, conjuntivite, coqueluche, tularemia, brucelose, doença dos legionários, doença de úlcera péptica, tifo, faringite.

[000118] A doença ou condição a ser tratada pode ser ocasionada ou causada por uma infecção por bactéria oportunista, incluindo doenças ou condições selecionadas do grupo consistindo de infecções do trato urinário, infecções do trato respiratório, dermatite, infecções de tecido mole, bacteremia, infecções em articulação e osso, infecções gastrointestinais e infecções bacterianas sistêmicas em pacientes com queimaduras severas, câncer, fibrose cística ou AIDS.

[000119] Os peptídeos da presente invenção podem ter uma concentração inibitória mínima (MIC) de 32 μg/mL ou menor contra patógenos microbianos Gram-positivos, em especial patógenos bacterianos. Geralmente os peptídeos têm uma MIC de 20 μg/mL ou menor, tipicamente 16 μg/mL ou menor, adequadamente 10 μg/mL ou menor contra patógenos microbianos Gram-positivos. Vantajosamente, os peptídeos da presente invenção têm uma MIC de cerca de 8 μg/mL contra patógenos microbianos Gram-positivos, em especial patógenos bacterianos Gram-positivos.

[000120] Os peptídeos da presente invenção podem ter uma concentração inibitória mínima (MIC) de 70 μg/mL ou menor contra patógenos microbianos Gram-negativos, em especial patógenos bacterianos. Geralmente os peptídeos têm uma MIC de 50 μg/mL ou menor, tipicamente 40 μg/mL ou menor, adequadamente 30 μg/mL ou menor contra patógenos microbianos Gram-negativos. Vantajosamente, os peptídeos da presente invenção têm uma MIC de menor do que 30 μg/mL contra patógenos microbianos Gram-negativos, em especial patógenos bacterianos Gram- negativos.

[000121] A MIC é geralmente medida em um pH de cerca de 7.

[000122] Os peptídeos da presente invenção podem ter uma concentração bactericida mínima (MBC) de 250 μg/mL ou menor contra patógenos bacterianos Gram-positivos e Gram-negativos. Geralmente os peptídeos têm uma MIC de 125 μg/mL ou menor, tipicamente 100 μg/mL ou menor, adequadamente 60 μg/mL ou menor contra Patógenos bacterianos Gram-positivos e Gram-negativos. Vantajosamente, os peptídeos da presente invenção têm uma MIC de menor do que 40 μg/mL contra patógenos bacterianos Gram-positivos e Gram-negativos.

[000123] Um patógeno viral pode ser derivado de um vírus selecionado do grupo consistindo de: Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV); Vírus da Leucemia Humana de Células T (HTLV 1 & 2); Vírus Ebola; vírus do papiloma humano (por ex., HPV-2, HPV-5, HPV-8 HPV-16, HPV-18, HPV- 31, HPV-33, HPV-52, HPV-54 e HPV-56); papovavírus; rinovírus; poliovírus; herpesvírus; adenovírus; vírus Epstein Barr; vírus da Influenza, vírus das hepatites B e C, vírus da Varíola, rotavírus ou coronavírus SARS.

[000124] Um patógeno parasítico pode ser derivado de um patógeno parasítico selecionado do grupo consistindo de Trypanosoma spp. (Trypanosoma cruzi, Trypansosoma brucei), Leishmania spp., Giardia spp., Trichomonas spp., Entamoeba spp., Naegleria spp., Acanthamoeba spp., Schistosoma spp., Plasmodium spp., Crytosporidium spp., Isospora spp., Balantidium spp., Loa Loa, Ascaris lumbricoides, Dirofilaria immitis, Toxoplasma ssp., por ex., Toxoplasma gondii. Um patógeno fúngico pode ser derivado de um patógeno fúngico derivado que é do gênero Candida spp., (por ex., C. albicans), Epidermophyton spp., Exophiala spp., Microsporum spp., Trichophyton spp., (e.g T. rubrum e T. interdigitale), Tinea spp., Aspergillus spp., Blastomyces spp., Blastoschizomyces spp., Coccidioides spp., Cryptococcus spp., Histoplasma spp., Paracoccidiomyces spp., Sporothrix spp., Absidia spp., Cladophialophora spp., Fonsecaea spp., Phialophora spp., Lacazia spp., Arthrographis spp., Aeremonium spp., Actinomadura spp., Apophysomyces spp., Emmonsia spp., Basidiobolus spp., Beauveria spp., Chrysosporium spp., Conidiobolus spp., Cunninghamella spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Graphium spp., Leptosphaeria spp., Malassezia spp., Mucor spp., Neotestudina spp., Nocardia spp., Nocardiopsis spp., Paecilomyees spp., Phoma spp., Piedraia spp., Pneumocystis spp., Pseudallescheria spp., Pyrenochaeta spp., Rhizomucor spp., Rhizopus spp., Rhodotorula spp., Saccharomyces spp., Scedosporium spp., Scopulariopsis spp., Sporobolomyces spp., Syncephalastrum spp., Trichoderma spp., Trichosporon spp., Ulocladium spp., Ustilago spp., Verticillium spp., Wangiella spp.

[000125] A infecção microbiana pode ser uma infecção fúngica sistêmica, tópica, subcutânea, cutânea ou mucosal.

[000126] Infecções fúngicas podem ser classificadas como sistêmicas, significando que a infecção é profunda e afeta os órgãos internos ou é transportada pelo sangue ou tópica (dermatofítica), significando que a infecção é superficial e ocorre sobre a pele. Adicionalmente, infecções por levedura podem afetar as membranas mucosais do corpo. Infecções por levedura também podem ser sistêmicas (por ex., candidemia e outras condições frequentemente fatais). Infecções fúngicas sobre a pele são habitualmente tratadas com cremes ou pomadas (drogas antifúngicas tópicas). Contudo, infecções sistêmicas, infecções por leveduras ou infecções tópicas que não desaparecem após tratamento com cremes ou pomadas precisam ser tratadas com drogas antifúngicas sistêmicas (oral ou IV). Estas drogas são usadas, por exemplo, para tratar infecções fúngicas comuns tais como tinha (dermatomicose), que ocorre sobre a pele ou candidíase (uma infecção por levedura, também conhecida como sapinho), que ocorre na garganta, na vagina, ou em outras partes do corpo. Drogas antifúngicas sistêmicas também são usadas para tratar infecções fúngicas profundas tais como histoplasmose, blastomicose, e aspergilose, que podem afetar os pulmões e outros órgãos. São algumas vezes utilizadas para prevenir ou tratar infecções fúngicas em pessoas cujos sistemas imunes estão enfraquecidos, tais como pacientes que foram submetido ao transplante de medula óssea ou de órgão e pacientes com HIV-AIDS.

[000127] Infecções fúngicas tópicas ou dermatofíticas, embora tipicamente não causem a morte ou doença séria, são prevalecentes e economicamente importantes porque podem ser de tratamento caro. Infecções fúngicas tópicas ou superficiais podem incluir aquelas da pele, da pele, da lâmina, do, stratum corneum, das unhas e do cabelo. Infecções cutâneas são infecções da pele, das unhas dos dedos e das unhas dos pés.

[000128] Em um aspecto preferido da invenção, a infecção fúngica é onicomicose. Onicomicose pode ser causada por um fungo do, mas não limitado ao, gênero Trichophyton spp., por exemplo, o fungo pode ser Trichophyton interdigitale ou Trichophyton rubrum.

[000129] O termo “onicomicose” inclui, mas não é limitado aos, tipos de onicomicose subungual lateral distal, branca superficial, subungual branca proximal, distrófica secundária, distrófica primária, endonix, candidal (por ex., doença mucocutânea crônica e onicólise). Também tem sido mostrado que onicomicose é um fator de risco significativo para complicações clínicas mais sérias, por exemplo celulite bacteriana dos braços / das pernas e outras infecções bacterianas secundárias, por conseguinte a presente invenção inclui o tratamento destas infecções.

[000130] O termo “tratamento” refere-se aos efeitos dos peptídeos aqui descritos que concedem um benefício aos pacientes afligidos com uma doença (infecciosa), incluindo uma melhoria na condição do paciente ou um atraso na progressão da doença.

[000131] Os peptídeos da invenção, incluindo seus sais, são administrados de modo a se alcançar uma redução em pelo menos um sintoma associado com uma infecção, indicação, ou um decréscimo na quantidade de anticorpo associado com a indicação ou doença.

[000132] Os peptídeos da invenção também podem ser úteis no tratamento ou na prevenção de, inter alia, feridas, úlceras e lesões por exemplo, feridas cutâneas tais como cortes ou queimaduras, e condições associados com os(as) mesmos(as).

[000133] O termo “tratamento” refere-se aos efeitos dos peptídeos aqui descritos que concedem um benefício aos pacientes afligidos com uma doença (infecciosa), incluindo uma melhoria na condição do paciente ou um atraso na progressão da doença.

[000134] Como aqui usado o termo “tratamento de um ferimento” pode incluir cicatrização de ferimento e condições associadas e terapia que promove, aumenta, ou acelera a cicatrização de tecidos e inclui cicatrização após operação, queimaduras, psoríase, aceleração de remodelagem de tecido, após transplante de órgão e cirurgia cosmética.

[000135] Assim, em um outro aspecto da invenção é obtido um substrato no qual um peptídeo da invenção é aplicado ou fixado. Preferivelmente, o substrato é adequado para aplicação em feridas ou para liberação em local de ferimento. Preferivelmente, o substrato permite a transferência dos peptídeos da invenção do substrato para um leito de ferimento para alcançar seu efeito antibiótico. O substrato pode ser um curativo, por exemplo, curativo de ferimentos. O curativo pode compreender um material tecido ou pode ser um material semelhante a colágeno.

[000136] Os peptídeos da invenção também encontram aplicação como / em um desinfetante, neste contexto, o peptídeo ou composições farmacêuticas pode(m) ser aplicado(as), quer sozinho(as) quer em combinação com outros agentes desinfetantes, em uma superfície a ser tratada. Como aqui usada uma “superfície a ser tratada” pode ser um substrato como aqui definido ou um dispositivo médico. Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de tratamento ou de prevenção de uma infecção microbiana em um sujeito compreendendo administrar ao dito sujeito uma quantidade terapeuticamente efetiva de um peptídeo de acordo com a invenção.

[000137] Mamíferos, aves e outros animais podem ser tratados pelos(as), peptídeos, composições ou métodos aqui descritos(as). Tais mamíferos e aves incluem humanos, cães, gatos e animais de fazenda, tais como cavalos, gado bovino, ovelhas, cabras, galinhas e perus e semelhantes. Além disso, plantas também podem ser tratadas pelos(as) peptídeos, composições ou métodos da invenção.

[000138] Se o sujeito é um mamífero, os peptídeos da invenção podem ser administrados topicamente ou sistemicamente. Em especial, peptídeos podem ser aplicados na carne do animal ou atributos semelhantes à unha, incluindo, mas não exclusivos a, cascos, garras e pés de porco ou de carneiro.

[000139] Os peptídeos da presente invenção são geralmente não tóxicos, e são geralmente bem tolerados por mamíferos, aves, animais e plantas. Tipicamente os peptídeos da presente invenção são bem tolerados em doses de 2 a 10 mg/kg ou maior, adequadamente 2 a 6 mg/kg. Por exemplo, foi verificado que o peptídeo NP432 é não letal para camundongos em uma dose de cerca de 5 mg/kg.

[000140] Para alcançar o(s) efeito(s) desejado(s), o peptídeo, uma sua variante ou uma sua combinação, pode ser administrado(a) como do dosagem única ou dosagens dividida, por exemplo, de pelo menos cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 500 a 750 mg/kg, de pelo menos cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 300 a 500 mg/kg, pelo menos cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 a 300 mg/kg ou pelo menos cerca de 1 mg/kg a cerca de 50 a 100 mg/kg de peso corporal ou pelo menos cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg de peso corporal, embora outras dosagens possam fornecer resultados benéficos. A quantidade administrada variará dependendo de vários fatores incluindo, mas não limitados a, o peptídeo escolhido e seus efeitos clínicos, a doença, o peso, a condição física, a saúde, a idade do mamífero, se é para ser alcançada(o) prevenção ou tratamento, e se o peptídeo está quimicamente modificado. Tais fatores podem ser prontamente determinados pelo médico clínico examinando os dados empíricos dos destes clínicos e examinando os resultados de modelo animal pré-clínicos ou outros sistemas de teste que estão disponíveis na arte.

[000141] Administração dos agentes terapêuticos de acordo com presente invenção em uma dose única, em doses múltiplas, em uma maneira contínua ou descontínua, dependendo, por exemplo, da condição fisiológica do paciente recipiente, de se o propósito de administração é terapêutico ou profilático, e de outros fatores conhecidos pelos médicos experientes. A administração dos peptídeos da invenção pode ser essencialmente contínua durante um período de tempo selecionado ou pode ser em uma série de doses espaçadas. Ambas administrações local e sistêmica são contempladas.

[000142] Para preparar a composição, os peptídeos são sintetizados ou diferentemente obtidos, purificados se necessário ou desejado, e então geralmente liofilizados e estabilizados. O peptídeo pode ser então ajustado para a concentração apropriada e opcionalmente combinado com outros agentes. O peso absoluto de um determinado peptídeo incluído em uma dose unitária pode variar amplamente. Por exemplo, cerca de 0,01 a cerca de 2 g ou cerca de 0,01 a cerca de 500 mg, de pelo menos um peptídeo da invenção, ou uma pluralidade de peptídeos específicos para um tipo específico de célula pode ser administrado(a). Alternativamente, a dosagem unitária pode variar de cerca de 0,01 g a cerca de 50 g, de cerca de 0,01 g a cerca de 35 g, de cerca de 0,1 g a cerca de 25 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 12 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 8 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 4 g, ou de cerca de 0,5 g a cerca de 2 g.

[000143] Doses diárias dos peptídeos da invenção também podem variar. Tais doses diárias podem variar, por exemplo, de cerca de 0,001 g/dia a cerca de 100 ou 50 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 25g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 12 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 5 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 2,5 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 2 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 8 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 4 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 2 g/dia, e de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 1 g/dia.

Efeito sinérgico

[000144] Preferivelmente a composição inclui um ou mais agentes antimicrobianos que atuam sinergicamente como peptídeos da presente invenção. Tipicamente, o efeito sinérgico resulta em um efeito antimicrobiano aumentado. Geralmente os agentes combinados são associados com propriedades antimicrobianas pelo menos 10% mais elevadas do que as propriedades antimicrobianas aditivas dos dois ou mais agentes; tipicamente pelo menos 20% mais elevadas do que; adequadamente pelo menos 30% mais elevadas do que; vantajosamente pelo menos 50% mais elevadas do que as propriedades antimicrobianas aditivas dos dois ou mais agentes.

[000145] Geralmente o agente antimicrobiano é um agente antimicrobiano e a composição exibe um efeito antimicrobiano sinergicamente alto.

[000146] O efeito antimicrobiano sinergicamente alto pode ser evidente com respeito a e um do grupo consistindo de: Staphylococcus spp., por ex., Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis; Enterococcus spp., por ex., Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus pyogenes; Listeria spp.; Pseudomonas spp. por ex., Pseudomonas aeruginosa; Mycobacterium spp., por ex., Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Klebsiella spp., por ex., Klebsiella pneumonia; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Streptococcus spp., por ex., Streptococcus Grupo A ou B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia; Helicobacter spp., por ex., Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ex., Neisseria gonorreia, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdorferi; Shigella spp., por ex., Shigella flexneri; Escherichia coli; Haemophilus spp., por ex., Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ex., Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella fularensis; Bacillus spp., por ex., Bacillus anthracis; Clostridia spp., por ex., Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; Yersinia spp., por ex., Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ex., Burkholderia mallei, B. cepacia, B. cepacia complex e B. pseudomallei, Acinetobacter spp. por ex., A. baumanii e A. calcoaceticus; Achromobacter spp., Achromobacter xylosoxidans.

[000147] O efeito sinérgico pode ser especialmente evidente para bactérias P. aeruginosa, S. epidermidis e S. aureus; incluindo contra biofilmes bacterianos compreendendo tais patógenos bacterianos.

[000148] Alternativamente, o efeito sinérgico pode ser evidente devido a uma toxicidade surpreendentemente baixa sendo associada com os agentes combinados. Geralmente os agentes combinados são associados com uma toxicidade pelo menos 10% menor do que a toxicidade associada aditiva dos dois ou mais agentes; tipicamente pelo menos 20% menor; adequadamente pelo menos 30% menor; vantajosamente pelo menos 50% menor do que a toxicidade associada aditiva dos dois ou mais agentes.

[000149] Um efeito sinérgico pode ser exibido por meio de uma combinação de um ou mais dos peptídeos da presente invenção e um ou mais outros peptídeos antibacterianos.

[000150] De acordo com uma modalidade, os peptídeos antibacterianos pode ser de acordo com a Fórmula abaixo: ((X)l(Y)m)n na qual l e m não números inteiros de 1 a 10, por exemplo 0 a 5; n é um número inteiro de 1 a 10; X e Y, que podem ser iguais ou diferentes, são um aminoácido selecionado do grupo consistindo de aminoácidos hidrofóbicos e/ou aminoácidos catiônicos. Em um aspecto preferido da invenção, o peptídeo antibacteriano compreende de 3 a 200 aminoácidos, por exemplo 3, 4, 5, 6 ou 7 até 100 aminoácidos, incluindo 3, 4, 5, 6, ou 7 até 20, 25, 30, 35, 40 ou 42 aminoácidos. O peptídeo antibacteriano pode compreender 100 a 200 aminoácidos, 27 a 100 aminoácidos, 28 a 86 aminoácidos, 7 a 27 aminoácidos ou 3 a 14 aminoácidos. Tipicamente o peptídeo antibacteriano compreende 3 a 15 aminoácidos (por exemplo 13 a 15), por exemplo 3 a 7 aminoácidos. X e Y podem ser selecionados de fenil-alanina e arginina. X pode ser um aminoácido fenil-alanina e Y pode ser um aminoácido arginina.

[000151] De acordo com uma modalidade, é obtida uma composição sinérgica incluindo um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR,RRRFRFPFRFRRR, RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR,RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR, RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR, RRRARAAARARRR,RRRFRRRRRFFFF, RRRFFFFFFFRRR e RRRFRFFFRFRRR-cisteamina junta com uma ou mais de cisteamina (NM001), poliarginina e polilisina, por exemplo bromidrato de poli-L-lisina de10 a 20 kDa (NP108).

[000152] De acordo com uma modalidade, a composição compreende um de RRRFRFFFRFRRR (NP432), RRRRRFFFRFRRR (NP 465), RRRFRFRFRFRRR (NP466) e RRRFRFPFRFRRR (NP467) e uma de cisteamina e polilisina, por exemplo bromidrato de poli-L-lisina de10 a 20 kDa (NP108).

[000153] De acordo com uma modalidade, a composição compreende um de RRRFRFFFRFRRR (NP432), FRRRRFFFRFRRR (NP490), RRRRFFFFFRRRR (NP493) e RRRFRRRRRFFFF (NP497) e uma de cisteamina e polilisina, por exemplo bromidrato de poli-L-lisina de10 a 20 kDa (NP108).

[000154] Em toda a descrição e nas reivindicações deste relatório descritivo, as palavras “compreende” e “contém” e variações das palavras, por exemplo “compreendendo” e “compreende”, significam “incluindo mas não limitado a”, e não é intencionado excluir (e não exclui) outros grupos, aditivos, componentes, números inteiros ou etapas.

[000155] Em toda a descrição e nas reivindicações deste relatório descritivo, o singular inclui o plural a não ser que o contexto exija ao contrário. Em especial, se o artigo indefinido é usado, o relatório descritivo é para ser entendido como contemplando também a singularidade, a não ser que o contexto indique ao contrário.

[000156] Feições, números inteiros, características, compostos, grupos ou agrupamentos químicos descritos conjuntamente com um aspecto, modalidade ou exemplo específico da invenção são para serem entendidos como aplicáveis a qualquer outro aspecto, modalidade ou exemplo aqui descrito a não ser se for incompatível com os mesmos.

[000157] A presente invenção será agora descrita por meio de exemplo apenas com referência às Figuras acompanhantes nas quais:

[000158] Figura 1 fornece uma tabela detalhando a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração bactericida mínima (MBC) de peptídeos de acordo com a presente invenção contra várias espécies de bactérias Gram-positivas (Figura 1) e espécies de bactérias Gram-negativas (Figuras 1a, 1b e 1c);

[000159] Figura 2 fornece uma tabela detalhando a concentração inibitória mínima (MIC) média de peptídeos de acordo com a presente invenção contra espécies microbianas Gram + e Gram - ;

[000160] Figura 3 detalha a MIC de NP432, NP432 e NM001 e NP432 e NP108 em concentrações variadas contra biofilme de P. aeruginosa;

[000161] Figura 4 detalha a MIC de NP445, NP445 e NM001 e NP445 e NP108 em concentrações variadas contra biofilme de P. aeruginosa;

[000162] Figura 5 detalha a MIC de NP432 e NM001 e NP432 e NP 108 em concentrações variadas contra biofilme de S. aureus;

[000163] Figura 6 detalha a MIC de NP445, NP445 e NM001 e NP445 e NP108 em concentrações variadas contra biofilme de S. aureus;

[000164] Figura 7 e Figura 7a fornecem uma tabela detalhando a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração bactericida mínima (MBC) de peptídeos de acordo com a presente invenção contra várias espécies antimicrobianas;

[000165] Figura 8 detalha a MBEC de colistina, NP 108 e NP432 em concentrações de 0 a 2.500 μg/mL contra biofilme bacteriano de P. aeruginosa;

[000166] Figura 9 detalha a MBEC de combinações de NP 108 - NM001, NP432 - NM001 e NP432-NP108 contra biofilme de P. aeruginosa em concentrações de 0 a 600 μg/mL;

[000167] Figura 10 detalha a MBEC de colistina, NP 108 e NP432 em concentrações de 0 a 2.500 μg/mL contra biofilme bacteriano de S. aureus;

[000168] Figura 11 detalha a MBEC de combinações de NP108 - NM001, NP432 - NM001 e NP432-NP108 contra biofilme de S. aureus em concentrações de 0 a 600 μg/mL.

Exemplos Exemplo 1

[000169] Biofilmes bacterianos de P. aeruginosa e biofilmes bacterianos de S. aureus foram crescidos em ágar de Mueller-Hinton em placa de microtitulação de 96 cavidades separadas por 21 horas a 37 graus Celsius. As células planctônicas e o meio foram então removidos e os biofilmes bacterianos foram lavados três vezes com solução tampão de fosfato em um pH de cerca de 7. Diluições duplas dos três agentes antimicrobianos diferentes em caldo de Mueller Hinton foram então adicionadas nos biofilmes bacterianos. As placas de microtitulação foram incubadas a 37 graus Celsius por 24 horas. O meio foi então transferido para uma placa de microtitulação nova e a densidade óptica do biofilme bacteriano foi medida a 625 nm em um leitor de placa de microtitulação (BioTek Powerwave, XS, Winooski, EUA).

[000170] Os agentes antimicrobianos testados foram Colistina, NP108 e NP432. Primeiramente, foi testada a atividade dos agentes antimicrobianos em concentrações de 0 a 2500 μg/mL, então foi testada a atividade dos agentes antimicrobianos em concentrações de 0 a 600 μg/mL. Os resultados são resumidos em Figuras 8 a 11. Estas Figuras evidenciam o efeito antimicrobiano de um peptídeo da presente invenção (NP432) contra biofilmes bacterianos de P. aeruginosa e contra biofilme bacteriano de S. aureus. O efeito antimicrobiano é comparável com os dos agentes antimicrobianos conhecidos.

Exemplo 2

[000171] Biofilmes bacterianos de P. aeruginosa e biofilmes bacterianos de S. aureus foram crescidos em ágar de Mueller-Hinton em placa de microtitulação de 96 cavidades separadas por 18 horas a 37 graus Celsius. As células planctônicas e o meio foram então removidos e os biofilmes bacterianos foram lavados três vezes com solução tampão de fosfato em um pH de cerca de 7. Diluições duplas dos três agentes antimicrobianos diferentes em caldo de Mueller Hinton foram então adicionadas nos biofilmes bacterianos. As placas de microtitulação foram incubadas a 37 graus Celsius por 24 horas. O meio foi então transferido para uma placa de microtitulação nova e a densidade óptica do biofilme bacteriano foi medida a 625 em um leitor de placa de microtitulação (BioTek Powerwave, XS, Winooski, USA). [000172] Os agentes antimicrobianos testados foram NP432 sozinho, uma combinação de NP432 e NM001 em concentração igual, uma combinação de NP432 e NP108 em concentração igual, NP445 sozinho, uma combinação de NP445 e NM001 em concentração igual, uma combinação de NP445 e NP108 em concentração igual. Os agentes antimicrobianos foram testados em concentrações de 0 a 1 mg/mL contra biofilmes bacterianos de P. aeruginosa e biofilmes bacterianos de S. aureus. Os resultados são resumidos em Figuras 3 a 6. Estas Figuras evidenciam o efeito antimicrobiano de um peptídeo da presente invenção (NP432 e NP445) contra biofilmes bacterianos de P. aeruginosa e contra biofilme bacteriano de S. aureus, sozinho e em combinação com NM001 e NP108.

Claims

1. Peptídeo, caracterizado pelo fato de consistir em uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo RRRFRFFFRFRRR (SEQ ID NO. 1), RRRRRFFFRFRRR (SEQ ID NO. 4), RRRFRFRFRFRRR (SEQ ID NO. 5), RRRFRFPFRFRRR (SEQ ID NO. 6), RRFRRFFFRRFRR (SEQ ID NO. 7), FRRRRFFFRFRRR (SEQ ID NO. 16), RRRRRFFFRRRRF (SEQ ID NO. 17), FFFFRRRRRFRRR (SEQ ID NO. 18), RRRRFFFFFRRRR (SEQ ID NO. 19), FRRRRFFFRRRRF (SEQ ID NO. 20), RRRFRRRRRFFFF (SEQ ID NO. 23).

2. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.

3. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de ser usado na fabricação de um medicamento para uso no tratamento ou no alívio de uma condição ou infecção antimicrobiana.

4. Peptídeo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a condição ou infecção antimicrobiana é ocasionada ou causada por um patógeno bacteriano.

5. Peptídeo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano é uma bactéria Gram-negativa.

6. Peptídeo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a bactéria Gram-negativa é selecionada do grupo consistindo em Pseudomonas spp., Pseudomonas aeruginosa; Burkholderia spp., Burkholderia cepacia; Acinetobacter spp., A. baumanii e A. calcoaceticus; Streptococcus spp., Streptococcus Grupo A ou B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia e Achromobacter spp., Achromobacter xylosoxidans.

7. Peptídeo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano é uma bactéria Gram-positiva.

8. Peptídeo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano é uma bactéria Gram-positiva selecionada do grupo consistindo em Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis; Escherichia coli; Clostridia spp., Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; e Enterococcus spp., Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium.

9. Peptídeo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano é do gênero Staphylococcus spp ou Pseudomonas spp.

10. Peptídeo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a condição ou infecção antimicrobiana é selecionada do grupo consistindo em leicenços, furúnculos, celulite, impetigo, infecções nosocomiais, bacteremia, pneumonia, osteomielite, endocardite, meningite, abscessos, fibrose cística, infecções gastrointestinais, infecções genitourinárias, septicemia, faringite, fasciite necrosante, glomerulonefrite aguda, otite média, feridas, antraz, encefalite, difteria, gangrena gasosa, botulismo e tétano.

11. Peptídeo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que é administrado via rotas tópica, oral, parenteral, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, retal, dermal, transdermal, intratorácica, intrapulmonar, mucosal, intranasal e respiratória.

12. Composição, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade terapeuticamente efetiva de pelo menos um peptídeo como definido na reivindicação 1 e um diluente, excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável.

13. Composição de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos dois peptídeos como definido na reivindicação 1 sendo que os peptídeos são diferentes.

14. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 e 13, caracterizada pelo fato de compreender cisteamina e/ou polilisina.

15. Substrato, caracterizado pelo fato de que no qual está fixado ou aplicado um peptídeo como definido na reivindicação 1 ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 12 a 14.