BR112012014017B1 - Uso de conjugados proteína-polímero - Google Patents

Uso de conjugados proteína-polímero Download PDF

Info

Publication number
BR112012014017B1
BR112012014017B1 BR112012014017-5A BR112012014017A BR112012014017B1 BR 112012014017 B1 BR112012014017 B1 BR 112012014017B1 BR 112012014017 A BR112012014017 A BR 112012014017A BR 112012014017 B1 BR112012014017 B1 BR 112012014017B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
protein
interferon
conjugate
polymer
polymer conjugates
Prior art date
Application number
BR112012014017-5A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112012014017A2 (pt
Inventor
Ko-Chung Lin
Rudolf Dr. Widmann
Original Assignee
Pharmaessentia Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmaessentia Corp filed Critical Pharmaessentia Corp
Publication of BR112012014017A2 publication Critical patent/BR112012014017A2/pt
Publication of BR112012014017B1 publication Critical patent/BR112012014017B1/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

uso terapêutico de conjugados proteína-polímero. esta invenção relaciona-se ao uso de conjugado proteína-polímeros descrito na especificação para tratar várias doenças, que incluem mielofibrose idiopática, policitemia vera e tromobocitemia essencial.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO
Este pedido reivindica o benefício de Pedido Provisório U.S. No. 61/285.411 depositado em 10 de dezembro de 2009, cujo conteúdo é aqui incorporado em sua totalidade por referência. FUNDAMENTO
Avanços em biologia celular e tecnologias de proteína recombinante têm levado ao desenvolvimento de terapêutica com proteína.
No entanto, ainda existem grandes obstáculos. A maior parte das proteínas é suscetível a degradação proteolítica e portanto, possui uma meia-vida curta no sistema circulatório. Outras desvantagens incluem a baixa solubilidade em água e indução de anticorpos de neutralização.
A anexação de um polímero, por exemplo, polietileno glicol (PEG), a uma proteína impede o acesso de enzimas proteolíticas à estrutura da proteína, resultando em estabilidade aumentada da proteína. Além disso, ela também aumenta a solubilidade em água e minimiza a imunogenicidade. Há uma necessidade por métodos eficazes de anexação de um polímero a uma proteína.
SUMÁRIO
Um aspecto desta invenção relaciona-se ao uso de um conjugado proteína-polímero para tratar várias doenças. O conjugado contém pelo menos uma fração de polímero, uma fração de interferon-α, e um ligante. No conjugado, o peso molecular total é 2-200 kD (preferivelmente 40 kD) e o número de frações de polímero no conjugado não é mais que 10. A fração ou frações de polímero é anexada ao ligante; o átomo de nitrogênio do terminal N da fração de interferon-α é ligado ao ligante; e o ligante é uma ligação covalente, C1-10 alquileno, C2-10 alquenileno, ou C2-10 alquinileno. Preferivelmente, o conjugado é substancialmente puro, por exemplo, tendo uma pureza maior que 70%, 80%, ou 90%. As doenças que podem ser tratadas pelo conjugado incluem esclerose múltipla, infecção viral crônica (como infecção por vírus da hepatite B, infecção por vírus da hepatite C, e infecção por vírus da papiloma humano), câncer, mielofibrose idiopática, policitemia vera, e tromobocitemia essencial.
Outro aspecto da presente invenção está relacionado ao uso de um conjugado proteína-polímero de fórmula I mostrado abaixo para tratar as doenças acima mencionadas:
Figure img0001
fórmula Iem que cada um de R1, R2, R3, R4, e R5,independentemente, é H, C1-5 alquil, C2-5 alquenil, C2-5alquinil, aril, heteroaril, C3-8 cicloalquil, ou C3-8 heterocicloalquil; cada um de A1 e A2, independentemente, é uma fração de polímero; cada um de G1, G2, e G3, independentemente, é uma ligação ou um grupo funcional de ligação; P é uma fração de interferon-α; m é 0 ou um número inteiro de 1-10; e n é um número inteiro de 1-10.
Em referência à fórmula acima, o conjugado proteína- polímero pode ter uma ou mais das seguintes características: G3 é uma ligação e P é uma fração de interferon-α em que o grupo amino no terminal N é anexado a G3; A1 e A2 são porções de óxido de polialquileno que possuem um peso molecular de 2-100 kD (preferivelmente 103 0 kD), cada um de Gi e G2 é
Figure img0002
(em que O é anexado a A1 ou A2, e NH é anexado a um átomo de carbono como mostrado na fórmula I), ou cada um de G1 e G2 é uréia, sulfonamida, ou amida, (em que N é anexado a um átomo de carbono como mostrado na formula I); m é 4, n é 2, e cada um de R1, R2, R3, R4, e R5 é H; e P é uma porção modificada de interferon-α que contém 1-4 resíduos adicionais de aminoácido.
O termo “alquil” refere-se a um radical hidrocarbono monovalente de cadeia linear ou ramificada. Exemplos de grupos alquil incluem metil, etil, n-propil, isopropil, terc-butil, e n-pentil. De modo similar, o termo “alquenil” ou “alquinil” refere-se a um radical hidrocarbono monovalente de cadeia linear ou ramificada que contém uma ou mais ligações duplas C=C ou uma ou mais ligações triplas C=C.
O termo “alquileno” refere-se a um radical hidrocarbono bivalente de cadeia linear ou ramificada. De modo similar, o termo “alquenileno” ou “alquinileno” refere-se a um radical hidrocarbono bivalente de cadeia linear ou ramificada que contém uma ou mais ligações duplas C=C ou uma ou mais ligações triplas C=C.
O termo “aril” refere-se a um sistema de anel de hidrocarbono (monocíclico ou bicíclico) que possui pelo menos um anel aromático. Exemplos de porções aril incluem, sem limitação, fenil, naftil, e pirenil.
O termo “heteroaril” refere-se a um sistema de anel de hidrocarbono (monocíclico ou bicíclico) que possui pelo menos um anel aromático que contém pelo menos um heteroátomo como O, N, ou S como parte do sistema de anel e o restante sendo carbono. Exemplos de porções heteroaril incluem, sem limitação, furil, pirrolil, tienil, oxazolil, imidazolil, tiazolil, piridinil, pirimidinil, quinazolinil, e indolil.
O termo “cicloalquil” refere-se a um sistema de anel monocíclico ou bicíclico parcialmente ou totalmente saturado que possui apenas átomos de anel de carbono. Exemplos incluem, sem limitação, ciclopropanil, ciclopentanil, e ciclohexanil.
O termo “heterocicloalquil” refere-se a um sistema de anel monocíclico ou bicíclico parcialmente ou totalmente saturado que possui, além de carbono, um ou mais heteroátomos (por exemplo, O, N, ou S), como átomos do anel. Exemplos incluem, sem limitação, piperidina, piperazina, morfolino, tiomordolino, e 1,4-oxazepano.
Alquil, alquenil, alquinil, aril, heteroaril, cicloalquil, e heterocicloalquil aqui mencionados incluem porções substituídas e não substituídas. Exemplos de substituintes incluem C1—C10 alquil, C2—C10 alquenil, C2—C10 alquinil, C3—c8 cicloalquil, C5—c8 cicloalquenil, C1—C10 alcoxi, aril, ariloxi, heteroaril, heteroariloxi, amino, C1—C10 alquilamino, C1—C20 dialquilamino, arilamino, diarilamino, hidroxiamino, alcoxiamino, C1—C10 alquilsulfonamida, arilsulfonamida, hidroxi, halogênio, tio, C1—C10 alquiltio, ariltio, ciano, nitro, acil, aciloxi, carboxil, e éster carboxílico.
O termo “porção de óxido de polialquileno” refere-se a um radical monovalente derivado de óxido de polialquileno linear, ramificado ou em forma de estrela. O peso molecular de uma porção de óxido de polialquileno pode ter 2-100 kD. A porção de óxido de polialquileno é saturada ou insaturada. Exemplos de uma porçãod e óxido de polialquileno incluem, sem limitação, óxido de polietileno, polietileno glicol, óxido de poliisopropileno, óxido de polibutenileno, e copolímeros desses. Outros polímeros como dextrano, alcoóis polivinílicos, poliacrilamidas, ou polímeros à base de carboidratos também podem ser usados para substituir a porção de óxido de polialquileno, desde que eles não sejam antigênicos, tóxicos, ou despertem resposta imune. A porção de óxido de polialquileno é substituída ou não substituída. Por exemplo, ela pode ser metoxi-capped polietileno glicol (mPEG).
O termo “fração de interferon-α” refere-se a um radical monovalente derivado de interferon-α. “Interferon- α” refere-se a uma família de proteínas altamente homólogas específicas para espécie que inibem a replicação viral e proliferação celular e modulam resposta imune. Veja, Bonnem e cols., J. Biol. Response Mod., 1984, 3(6):580-598; e Finter, J. Hepatol., 1986, 3 Suppl 2:S157-160. Ela pode estar em uma forma de ocorrência natural ou em uma forma modificada. O interferon-α modificado pode ser, por exemplo, uma proteína que contém interferon-α e 1-4 resíduos adicionais de aminoácido no terminal N do interferon. Um exemplo de tal interferon modificado é
Figure img0003
IFN representando uma porção de interferon-α2b, o grupo amino no terminal N do qual é ligado ao grupo carbonil.
Vários tipos de proteínas de interferon-α são comercialmente disponíveis, incluindo Intron-A interferon fornecido por Schering Corporation, Kenilworth, N.J., Roferon interferon fornecido por Hoffmann-La Roche, Nutley,N.J., Berofor alfa 2 interferon fornecido por Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, Conn., Sumiferon fornecido por Sumitomo, Japan, e Wellferon interferon alfa-nl (INS) fornecido por Glaxo-Wellcome Ltd., Londres, Reino Unido.
São listados abaixo seqüências de aminoácidos de cinco proteínas de interferon-α humano de exemplo, em forma precursora ou em forma madura:maltfallva llvlsckssc svgcdlpqth slgsrrtlml laqmrrislf sclkdrhdfg fpqeefgnqf qkaetipvlh emiqqifnlf stkdssaawd etlldkfyte lyqqlndlea cviqgvgvte tplmkedsil avrkyfqrit lylkekkysp cawewraei mrsfslstnl qeslrskeId. de Seq. N°: 1(veja Krasagakis e cols., Cancer Invest. 26 (6), 562-568, 2008) cdlpqthslg srrtlmllaq mrkislfscl kdrhdfgfpq eefgnqfqka etipvlhemi qqifnlfstk dssaawdetl Idkfytelyq qlndleacvi qgvgvtetpl mkedsilavr kyfqritlyl kekkyspcaw evvraeimrs fslstnlqes IrskeId. de Seq. N°: 2 (veja Klaus, e cols., J. Mol. Biol. 274 (4), 661-675, 1997)mcdlpqthsl gsrrtlmlla qtnrrislfsc Ikdrhdfgfp qeefgnqfqk aetipvlhem iqqifnlfst kdssaawdet lldkfytely qqlndleacv iqgvgvtetp Imkedsilav rkyfqritly Ikekkyspca wevvraeimr sfslstnlqe slrskeId. de Seq. N°: 3mallfpllaa Ivmtsyspvg slgcdlpqnh gllsrntlvlIhqmrrispf Iclkdrrdfr fpqemvkgsq lqkahvmsvl hemlqqifsl fhterssaaw nmtlldqlht elhqqlqhle tcllqvvgeg esagaisspa Itlrryfqgi rvylkekkys dcawevvrme imkslflstn mqerlrskdrIdlgss , , „ n Id. de Seq. N°: 4(veja, Capon e cols., J. Mol. Cell. Biol. 5 (4):768-779, 1985)Isyksicslg cdlpqthslg nrralillaq mgrispfscl kdrhdfglpq eefdgnqfqk tqaisvlhem iqqtfnlfst edssaaweqs llekfstely qqlnnleacv iqevgmeetp Imnedsilav rkyfqritly Itekkyspca wevvraeimr slsfstnlqk rlrrkdId. de Seq. N°: 5(veja Lund e cols., J. Interferon Res. 5 (2), 229-238, 1985)
Em um exemplo, a proteína de interferon-α usada para a confecção do conjugado desta invenção tem uma seqüência de aminoácidos pelo menos 80% (por exemplo, 85%, 90%, 95%, ou 99%) idêntica a uma das seqüências de aminoácidos acima listadas, ou ao fragmento desta que corresponde a um interferon alfa maduro.
O “percentual de identidade” de duas seqüências de aminoácidos é determinado com o uso do algoritmo de Karlin e Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2.264-68, 1990, modificado como em Karlin e Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993. Tal algoritmo é incorporado nos programas NBLAST e XBLAST (versão 2.0) de Altschul, e cols. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990. As pesquisas de proteína com BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, ponutação=50, comprimento de palavra=3 para obter homólogos de seqüência de aminoácidos para as moléculas de proteína da invenção. Quando existem gaps entre duas seqüências, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul e cols., Nucleic Acids Res. 25(17):3.389-3.402, 1997. Quando da utilização de programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros padrão dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser usados.
O termo “grupo funcional de ligação” refere-se a um grupo funcional bivalente, uma extremidade sendo conectada à fração de polímero e a outra extremidade sendo conectada À porção de proteína. Exemplos incluem, sem limitação, -O-, -S-, éster carboxílico, carbonil, carbonato, amida, carbamato, uréia, sulfonil, sulfinil, amino, imino, hidroxiamino, fosfonato, ou grupo fosfato.
O conjugado proteína-polímero acima descrito podem estar na forma livre ou na forma de sal, se aplicável. Um sal, por exemplo, pode ser formado entre um ânion e um grupo positivamente carregado (por exemplo, amino) em um conjugado proteína-polímero desta invenção. Anions adequados incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, nitrato, fosfato, citrato, metanossulfonato, trifluoracetato, e acetato. Do mesmo modo, um sal também pode ser formado entre um cátion e um grupo negativamente carregado (por exemplo, carboxilato) em um conjugado proteína-polímero desta invenção. Cations adequados incluem íon de sódio, íon de potássio, íon de magnésio, íon de cálcio, e um cátion de amônio como íon de tetrametilamônio.
Além disso, o conjugado proteína-polímero pode ter uma ou mais ligações duplas, ou um ou mais centros assimétricos. Tal conjugado pode ocorrer como racematos, misturas racêmicas, enantiômeros únicos, diastereômeros individuais, misturas diastereoméricas, e formas isoméricas de ligação dupla cis- ou trans- ou E- ou Z-.
Um exemplo do conjugado proteína-polímero dessa invenção é mostrado abaixo:
Figure img0004
em que mPEG tem um peso molecular de 20 kD e IFN é uma porção de interferon-α.
Também dentro do escopo desta invenção é o uso do conjugado para a manufatura de um medicamento para o tratamento de um dos distúrbios acima mencionados.
Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção são apresentados na descrição abaixo. Outras características, objetivos, e vantagens da invenção estarão aparentes a partir da descrição e das reivindicações.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Conjugados proteína-polímeros usados para praticara presente invenção podem ser preparados por métodos sintéticos bem conhecidos na técnica química, por exemplo, os métodos descritos em U.S. No. de Série 12/192.485. O esquema 1 mostra um exemplo de preparação do conjugado proteína-polímeros desta invenção. Composto de diamina 1, que contém um grupo acetal, reage com N- hidroxissuccinimidil carbonato mPEG (ou seja, composto 2) para formar composto 3 di-PEGuilado, que é subseqüentemente convertido ao aldeído 4. Este composto de aldeído reage com proteína que possui um grupo amino livre por meio de alquilação redutora para gerar um conjugado proteína- polímero desta invenção.
Figure img0005
ESQUEMA 1
Um conjugado proteína-polímero assim sintetizado podeser também purificado por um método como cromatografia detroca iônica, cromatografia de filtração a gel, eletroforese, diálise, ultrafiltração, ou ultracentrifugação.
As reações quimicas acima descritas incluem o uso de solventes, reagentes, catalisadores, reagentes de grupo de proteção e grupo de desproteção, e certas condições de reação. Elas podem incluir adicionalmente etapas, antes ou depois das etapas aqui descritas especificamente, oara adicionar ou remover grupos de proteção adequados para permitir a síntese de um conjugado proteína-polímero. Além disso, várias etapas sintéticas pode, ser realizadas em uma seqüência ou ordem alternativa para gerar os conjugados proteína-polímero desejados. Transformações químicas sintéticas e metodologias de grupo de proteção (proteção e desproteção) úteis na síntese de conjugados proteína- polímero aplicáveis são conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, aquelas descritas em R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Enciclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) e subseqüentes edições destes.
O conjugado da invenção pode ter uma pureza muito alta. Ou seja, 60% ou mais (por exemplo, 70%, 80%, ou 90%) das moléculas do conjugado são idênticas em todos os aspectos, incluindo a seqüência da porção de proteína e sua posição de ligação à fração de polímero.
O conjugado dessa invenção pode ser farmaceuticamente ativo na forma de conjugado. Alternativamente, ele pode liberar um interferon-α farmaceuticamente ativo in vivo (por exemplo, através de hidrólise) por clivagem enzimática da ligação entre a porção de proteína e a fração de polímero. Exemplos de enzimas envolvidas em ligações de clivagem in vivo incluem enzimas oxidativa (por exemplo, peroxidases, amina oxidases, or desidrogenases), enzimas redutoras (por exemplo, ceto redutases), e enzimas hidrolíticas (por exemplo, proteases, esterases, sulfatases, ou fosfatases).
O conjugado desta invenção pode ser usado para tratar esclerose múltipla, infecção viral crônica (como infecção por vírus da hepatite B, infecção por vírus da hepatite C, e infecção por vírus papiloma humano), câncer, mielofibrose idiopática, policitemia vera, e tromobocitemia essencial. Ele possui uma meia-vida in vivo inesperadamente longa, uma dose de fármaco reduzida, e/ou um intervalo de dosagem prolongado.
Como aqui usado, o termo “tratar” ou “tratamento” é definido como a aplicação ou administração de uma composição que inclui um conjugado proteína-polímero a um indivíduo (humano ou animal), que possui um distúrbio, um sintoma do distúrbio, uma doença ou distúrbio secundário ao distúrbio, ou uma predisposição para o distúrbio, com o objetivo de curar, aliviar, remediar ou melhorar o distúrbio, o sintoma do distúrbio, a doença ou distúrbio secundário ao distúrbio, ou a predisposição para o distúrbio. “Uma quantidade eficaz” refere-se a uma quantidade de um conjugado proteína-polímero que confere um efeito terapêutico sobre o indivíduo tratado. O efeito terapeutico pode ser objetivo (ou seja, mensurável por alguns testes ou marcadores) ou subjetivo (ou seja, um indivíduo gera um indicação ou sente um efeito).
Também dentro do escopo desta invenção é uma composição farmacêutica que contém uma quantidade eficaz de pelo menos um dos conjugados proteína-polímero acima descritos e um carreador farmacêutico aceitável. Além disso, esta invenção inclui um método de administração de uma quantidade eficaz de um ou mais dos conjugados proteína-polímero a um paciente com uma ou mais doenças. As doses eficazes irão variar, como reconhecido por aqueles habilitados na técnica, dependendo, por exemplo, da taxa de hidrólise de um conjugado proteína-polímero, dos tipos de doenças a serem tratadas, da via de administração, do uso do excipiente, e da possibilidade de co-uso com outro tratamento terapêutico.
Para praticar o método da presente invenção, uma composição que possui um ou mais dos compostos acima mencionados pode ser administrada por via parenteral, oral, nasally, retal, tópica, ou bucal. O termo “parenteral” como aqui usado refere-se a injeção subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intraarterial, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intralesional, intraperitoneal, intratraqueal ou intracraniana, bem como qualquer técnica adequada de infusão.
Uma composição injetável estéril pode ser uma solução ou suspensão em um diluente ou solvente não tóxico parenteralmente aceitável, como uma solução em 1,3— butanodiol. Entre os veículos adequados e solventes que podem ser empregados estão manitol, água, solução de Ringer, e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixados são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão (por exemplo, mono- ou diglicerídeos sintéticos). Ácido graxo, como ácido oleico e seus derivados de glicerídeo são úteis na preparação de injetáveis, assim como são os óleos naturais farmaceuticamente aceitáveis, como óleo de oliva ou óleo de rícino, especialmente em suas versões polioxietiladas. Essas soluções ou suspensões oleosas também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de cadeia longa, ou carboximetil celulose ou agentes de dispersão similares. Outros tensoativos comumente usados como Tweens ou Spans ou outros agentes emulsificantes similares ou intensificadores de biodisponibilidade que são comumente usados na fabricação de sólidos, líquidos farmaceuticamente aceitáveis ou outras formas de dosagem também podem ser usados para o objetivo de formulação.
Uma composição para administração oral pode ser qualquer forma de dosagem oralmente aceitável que incluem cápsulas, comprimidos, emulsões, e suspensões aquosas, dispersões, e soluções. No caso de comprimidos, os carreadores comumente usados incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, como estearato de magnésio são também tipicamente adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando suspensões ou emulsões aquosas são administradas por via oral, o ingrediente ativo pode ser suspenso ou dissolvido em uma fase oleosa combinada com agentes de emulsificação ou suspensão. Se desejado, certos agentes adoçantes, flavorizantes, ou colorantes podem ser adicionados.
Um aerossol nasal ou composição de inalação pode ser preparado de acordo com técnicas bem conhecidas na técnica de formulação farmacêutica. Por exemplo, tal composição pode ser preparada como uma solução em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para aumentar a biodisponibilidade, fluorcarbonos, e/ou outros agentes de solubilização ou de dispersão conhecidos na técnica. Uma composição que possui um ou mais dos compostos acima descritos também pode ser administrada na forma de supositórios para administração retal.
Um carreador farmaceuticamente aceitável é rotineiramente usado com um ou mais compostos ativos acima mencionados. O carreador na composição farmacêutica deve ser “aceitável no sentido em que ele deve ser compatível com o ingrediente ativo da composição (e preferivelmente, capaz de estabilizar o ingrediente ativo) e não prejudicial ao indivíduo sendo tratado. Um ou mais agentes de solubilização podem ser utilizados como excipientes farmacêuticos para a liberação de um composto acima mencionado. Exemplos de outros carreadores incluem óxido de silício coloidal, estearato de magnésio, celulose, lauril sulfato de sódio, e D&C Yellow # 10.
Ensaios adequados podem ser usados para avaliar preliminarmente a eficácia dos conjugados acima descritos no tratamento de várias doenças. Por exemplo, uma pessoa pode avaliar a eficácia do conjugado no tratamento de policitemia vera e tromobocitemia essencial seguindo os métodos descritos em Kiladjian e cols., Blood 2008; 112(8): 3065-72 and Langer e cols., Haetatologica 2005; 90: 1.333- 1.338, respectivamente.
O exemplo abaixo deve ser interpretado como apenas ilustrativo, e nao limitante do restante da revelação de qualquer modo. Sem elaboração adicional, acredita-se que uma pessoa habilitada na técnica pode, baseada na descrição desta, utilizar4 a presente invenção em sua extensão mais ampla. Todas as publicações aqui citadas são aqui incorporadas em sua totalidade por referência. Preparação de di-PEG aldeído
Figure img0006
20 kD PEGO(C=O)OSu foram preparados a partir de 20 kD mPEGOH adquirido de (SunBio Inc., CA, USA) de acordo com o método descrito em Bioconjugate Chem. 1993, 4, 568-569.
Uma solução de 6-(1,3-dioxolan-2-il)hexano-1,5-diamina em diclorometano (11,97 g da solução contendo 9,03 mg de diamina, 47,8 μmol) foi adicionada a um frasco contendo 20 kD PEGO(C=O)OSu (1,72 g, 86,0 μmol). Depois de PEGO(C=O)OSu ter sido completamente dissolvido, N,N-diisopropiletilamina (79 μl, 478 μmol) foi adicionada.
A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 24 h, e então metil t-butil éter (200 ml) foi adicionado em gotas com agitação. O precipitado resultante foi coletado e seco sob vácuo para gerar di-PEG acetal (1,69 g, 98%) como um sólido branco.1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ 7,16 (t, J= 5,2 Hz, 1 H), 7,06 (d, J= 8,8 Hz, 1 H), 4,76 (t, J= 4,8 Hz, 1 H), 4,10-3,95 (m, 4 H), 1,80-1,65 (m, 1 H), 1,65-1,50 (m, 1 H), 1,48-1,10 (m, 6 H).
Figure img0007
Di-PEG acetal (4,0 g, 0,2 mmol) foi suspenso em tampão com pH 2,0 (ácido crítico, 40 mL). A mistura da reação foi agitada a 35°C por 24 horas e então extraída com diclorometano (3 x 50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, concentradas e então re-dissolvidas em diclorometano (20 ml). A solução foi adicionada em gotas a metil t-butil éter (400 ml) com agitação. O precipitado resultante foi coletado e seco em pressão reduzida para gerar di-PEG aldeído (3,8 g, 95%) como um sólido branco.1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,60 (s, 1 H), 7,24 (d, J= 8,4 Hz, 1 H), 7,16 (t, J= 5,2 Hz, 1 H), 4,10-3,95 (m, 4 H), 3,95-3,80 (m, 1 H), 3,00-2,85 (m, 2 H), 2,58-2,36 (m, 2 H), 1,46-1,15 (m, 6 H).Preparação de interferon modificado
Figure img0008
Um interferon—α2b humano recombinante modificado foi clonado por um método de PCR com o uso de DNA genômico humano como um modelo. Os oligonucleotídeos foram sintetizados baseado nas seqüências de flanqueamento de interferon—α2b humano (GenBank Acesso # J00207, 8 dejaneiro de 2008). Os produtos de PCR derivados foram subclonados em vetor pGEM—T (Promega). A variante de IFN foi amplificada por PCR novamente através dos clones de pGEM—T e subseqüentemente subclonadas em vetor de expressão de proteína pET-24a (Novagen), um vetor dirigido por promotor de T7 RNA polimerase, com o uso de NdeI/BamHI como os sítios de clonagem. O vetor pET-24a foi então transformado em E. coli cepa BL21—CodonPlus (DE 3)-RIL (Stratagene). Os clones de alta expressão foram selecionados por manutenção de E. coli BL21—CodonPlus (DE 3)—RIL transformado na presença de kanamicina (50 μg/ml) e cloranfenicol (50 μg/ml).
Meio de caldo “Terrific” (BD, 200 ml) foi empregado para a propagação de BL21—CodonPlus (DE 3)—RIL com gene Pro—IFN em um frasco de 1.000 ml. O frasco foi agitado a 37°C em 230 rpm por 16 horas. Fermentações em batelada e em batelada alimentada foram realizadas em um fermentador de recipiente de 5 litros (Bioflo 3000; New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ). A fermentação em batelada usou 150 ml de um inóculo de pré-cultura de um dia para o outro e 3 l do meio de caldo “Terrific” com kanamicina (50 μg/ml), cloranfenicol (50 ug/ml), 0,4% glicerol, e 0,5% (v/v) de elementos de traço (10 g/l de FeSO4.7H2O, 2,25 g/l de ZnSO4.7H2O, 1 g/l de CuSO4.5H2O, 0,5 g/l de MnSO4. H2O, 0,3 g/l de H3BO3, 2 g/l de CaCl2.2H2O, 0,1 g/l de(NH4)6MO7O24, 0,84 g/l EDTA, 50 ml/l HCl). A concentração de oxigênio dissolvido foi controlada a 35% e o pH foi mantido a 7,2 por adição de 5 N de solução aquosa de NaOH. Uma solução de alimentação contendo 600 g/l de glicose e 20 g/l de MgSO4.7H2O foi preparada. Quando o pH se elevou a um valor maior que o ponto determinado, um volume adequado da solução de alimentação foi adicionado para aumentar a concentração de glicose no caldo de cultura. A expressão do gene Pro-IFN foi induzida por adição de IPTG a uma concentração final de 1 mM e o caldo de cultura foi coletado depois de incubação por 3 horas.
O pélete de célula coletado foi ressuspenso com tampão TEN (50 mM Tris—HCl (pH 8,0), 1 mM EDTA, 100 mM NaCl) em uma proporção aproximada de 1:10 (peso líquido g/ml) e rompido por um microfluidificador, e então centrifugado a 10.000 rpm por 20 minutos. O pélete que contém corpo de inclusão (IB) foi lavado duas vezes com tampão TEN e centrifugado como acima descrito. O pélete que contém IB foi então suspenso em 150 ml, de uma solução aquosa a 4 M de guanidínio HCl (GuHCl) e centrifugado a 20.000 rpm por 15 minutos. O IB foi entao solubilizado em 50 ml de 6 M de solução de GuHCl. O material solubilizado de GuHCl foi centrifugado a 20.000 rpm por 20 minutos. Reenovelamento foi iniciado por diluição de IB desnaturado em 1,5 l de um tampão de reenovelamento recém preparado (100 mM Tris—HCl (pH 8,0), 0,5 M L—Arginina, 2 mM EDTA) que foi agitado apenas durante a adição. A mistura da reação de reenovelamento foi incubada por 48 horas sem agitação. O interferon—α2b humano recombinante reenovelado (ou seja, Pro—IFN) foi dialisado contra 20 mM tampão Tris (com 2 mM EDTA e 0,1M uréia, pH 7,0) para purificação adicional por cromatografia em coluna de Q—Sepharose.
A proteína Pro—IFN humana recombinante reenovelada foi carregada em uma coluna de Q-Sepharose (GE Amersham Pharmacia, Pittsburgh, PA). A coluna foi pré—equilibrada e lavada com 20 mM de tampão Tris—HCl (pH 7,0). O produto foi eluído com uma mistura de 20 mM tampão Tris—HCl (pH 7,0) e 200 mM NaCl. As frações contendo Pro—IFN foram coletadascom base em sua absorvência a 280 nm. A concentração de Pro—IFN foi determinada por um kit de ensaio de proteína com o uso do método de Bradford (Pierce, Rockford, IL). PREPARAR CONJUGADO PROTEÍNA-POLÍMERO
Figure img0009
A uma solução de di-PEG aldeído acima preparada (1,2 g, 0,03 mmol) em água (72 ml) foi adicionado 2 M de tampão de fosfato de sódio (pH 4,0, 5 ml) e Pro—IFN (200 mg em 22,2 ml de tampão pH 7,0 contendo 20 mM Tris-HCl e 0,2M NaCl, 0,01 mmol). A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos; então solução aquosa de cianoborohidreto de sódio (400 mM, 1,25 ml, 0,5 mmol) foi adicionada. A mistura da reação foi agitada no escuro por 16 horas e purificada por cromatografia SP XL Sepharose. As frações contendo o conjugado polímero— proteína desejado foram coletadas com base em seu tempo de retenção e absorvência a 280 nm. A concentração do conjugado foi determinada por um kit de ensaio de proteína com o uso do método de Bradford (Pierce, Rockford, IL). O rendimento isolado do conjugado foi aproximadamente 40% ou maior.
OUTRAS MODALIDADES
Todas as características reveladas nesta especificação podem ser combinadas em qualquer combinação. Cada característica revelada nesta especificação pode ser substituída por uma característica alternativa que serve ao mesmo equivalente, ou objetivo similar. Portanto, a menos que expressamente determinado em contrário, cada característica revelada é apenas um exemplo de uma série genérica de características equivalentes ou similares.
A partir da descrição acima, uma pessoa habilitada natécnica pode verificar facilmente as características essenciais da presente invenção, e sem fugir do espirito e escopo desta, pode realizar várias alterações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos econdições. Portanto, outras modalidades estão dentro do escopo das reivindicações a seguir.

Claims (4)

1. Uso de um conjugado:
Figure img0010
em queo conjugado é
Figure img0011
no qual mPEG tem um peso molecular de 20 kD e IFN é uma porção de interferon-α2b;caracterizado por ser para a manufatura de um medicamento para o tratamento de uma doença, a doença sendo mielofibrose idiopática, policitemia vera, ou tromobocitemia essencial.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a doença é mielofibrose idiopática.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a doença é policitemia vera.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a doença é tromobocitemia essencial.
BR112012014017-5A 2009-12-10 2010-12-09 Uso de conjugados proteína-polímero BR112012014017B1 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28541109P 2009-12-10 2009-12-10
US61/285,411 2009-12-10
PCT/US2010/059714 WO2011072138A2 (en) 2009-12-10 2010-12-09 Therapeutic use of protein-polymer conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112012014017A2 BR112012014017A2 (pt) 2016-04-12
BR112012014017B1 true BR112012014017B1 (pt) 2021-10-26

Family

ID=44146181

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112012014017-5A BR112012014017B1 (pt) 2009-12-10 2010-12-09 Uso de conjugados proteína-polímero

Country Status (32)

Country Link
US (1) US8617532B2 (pt)
EP (1) EP2509593B1 (pt)
JP (1) JP5547816B2 (pt)
KR (1) KR101782084B1 (pt)
CN (1) CN102724980B (pt)
AR (1) AR079369A1 (pt)
AU (1) AU2010328067B2 (pt)
BR (1) BR112012014017B1 (pt)
CA (1) CA2782624C (pt)
CL (1) CL2012001503A1 (pt)
CY (1) CY1122901T1 (pt)
DK (1) DK2509593T3 (pt)
EA (1) EA022354B9 (pt)
ES (1) ES2786025T3 (pt)
HK (1) HK1176015A1 (pt)
HR (1) HRP20200678T1 (pt)
HU (1) HUE049051T2 (pt)
IL (1) IL220249A0 (pt)
LT (1) LT2509593T (pt)
MA (1) MA33913B1 (pt)
MX (1) MX337705B (pt)
MY (1) MY169961A (pt)
NZ (1) NZ600528A (pt)
PL (1) PL2509593T3 (pt)
PT (1) PT2509593T (pt)
RS (1) RS60336B1 (pt)
SG (1) SG181084A1 (pt)
SI (1) SI2509593T1 (pt)
TN (1) TN2012000256A1 (pt)
UA (1) UA109646C2 (pt)
WO (1) WO2011072138A2 (pt)
ZA (1) ZA201205056B (pt)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2017005244A (es) * 2014-11-06 2017-08-18 Pharmaessentia Corp Regimen de dosificacion para interferon pegilado.

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE028163T2 (en) * 2002-01-18 2016-11-28 Biogen Ma Inc Polyalkylene polymer compounds and their use
US7563810B2 (en) * 2002-11-06 2009-07-21 Celgene Corporation Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
CN101636414B (zh) * 2007-09-04 2012-02-15 厦门伯赛基因转录技术有限公司 聚乙二醇修饰的干扰素α2b及其制备方法和应用
GB0908393D0 (en) * 2009-05-15 2009-06-24 Almac Sciences Scotland Ltd Labelling method

Also Published As

Publication number Publication date
CA2782624C (en) 2016-11-01
KR101782084B1 (ko) 2017-09-26
EA201200865A1 (ru) 2012-11-30
HK1176015A1 (en) 2013-07-19
MX2012006132A (es) 2012-06-19
TN2012000256A1 (en) 2013-12-12
CN102724980B (zh) 2014-10-15
JP2013513611A (ja) 2013-04-22
BR112012014017A2 (pt) 2016-04-12
HRP20200678T1 (hr) 2020-10-02
CN102724980A (zh) 2012-10-10
PT2509593T (pt) 2020-04-21
CL2012001503A1 (es) 2012-11-09
AR079369A1 (es) 2012-01-18
LT2509593T (lt) 2020-05-25
KR20120110105A (ko) 2012-10-09
ZA201205056B (en) 2013-03-27
IL220249A0 (en) 2012-07-31
RS60336B1 (sr) 2020-07-31
EP2509593A4 (en) 2016-01-13
WO2011072138A9 (en) 2011-10-06
EA022354B1 (ru) 2015-12-30
MA33913B1 (fr) 2013-01-02
EP2509593B1 (en) 2020-02-12
MY169961A (en) 2019-06-19
AU2010328067B2 (en) 2014-10-02
UA109646C2 (uk) 2015-09-25
SI2509593T1 (sl) 2020-07-31
MX337705B (es) 2016-03-15
SG181084A1 (en) 2012-07-30
PL2509593T3 (pl) 2020-08-24
CA2782624A1 (en) 2011-06-16
AU2010328067A1 (en) 2012-07-05
US8617532B2 (en) 2013-12-31
JP5547816B2 (ja) 2014-07-16
CY1122901T1 (el) 2021-05-05
ES2786025T3 (es) 2020-10-08
NZ600528A (en) 2014-01-31
WO2011072138A2 (en) 2011-06-16
HUE049051T2 (hu) 2020-09-28
EA022354B9 (ru) 2016-02-29
EP2509593A2 (en) 2012-10-17
DK2509593T3 (da) 2020-05-11
US20110262380A1 (en) 2011-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2205281B1 (en) Protein-polymer conjugates
US20070185135A1 (en) Drug-Polymer Conjugates
BR112012014017B1 (pt) Uso de conjugados proteína-polímero
JP5798628B2 (ja) ウシ顆粒球コロニー刺激因子のための製剤およびその変異体
JP5639585B2 (ja) ペプチド−ポリマー共役体

Legal Events

Date Code Title Description
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]

Free format text: NOTIFICACAO DE ANUENCIA RELACIONADA COM O ART 229 DA LPI

B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 09/12/2010, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO.