BR102023024431A2 - Composição cosmética para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal; processo de produção; método cosmético e uso - Google Patents

Abstract

A presente invenção descreve uma nova composição para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal incluindo a sua utilização para a prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo.

Description

Campo Técnico da Invenção

[0001] A presente invenção descreve uma nova composição para indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal incluindo a sua utilização para a prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo. A presente invenção se situa nos campos de tratamentos cosméticos, dermatológicos e/ou farmacêuticos.

Antecedentes da Invenção

[0002] A cor dos cabelos, assim como da pele, é resultado da quantidade e tipo de melanina, produzida pelos melanócitos e transferida para os queratinócitos. A pigmentação do folículo piloso envolve a atividade melanogênica dos melanócitos foliculares, a transferência dos grânulos de melanina para os queratinócitos corticais e medulares e a formação de hastes capilares pigmentadas (SLOMINSKI et al., 2005).

[0003] O cabelo grisalho é um dos mais visíveis indicadores de envelhecimento em humanos. A modulação do processo de grisalhamento decorre de inúmeros fatores, tais quais genéticos, oxidativos, psicoemocionais, metabólicos, endócrinos e nutricionais (O'SULLIVAN et al., 2021).

[0004] Mais especificamente, o surgimento de cabelos brancos é um fenômeno associado à diminuição da população de melanócitos foliculares e à diminuição do conteúdo de melanina (SARIN; ARTANDI, 2007). Quanto à densidade de melanócitos foliculares, diversos mecanismos interferem sobre esse fator: a perda de células-tronco dos melanócitos ou sua falha na diferenciação, defeitos na migração dos melanócitos, apoptose dos melanócitos e mau funcionamento da maquinaria pigmentar (TOBIN, 2011).

[0005] Da mesma forma que a densidade de melanócitos, é fundamental destacar que a modulação da síntese de melanina apresenta papel igualmente relevante. As melaninas da pele e do folículo capilar são produzidas no interior de organelas chamadas melanossomos, encontradas no citoplasma de melanócitos. Os melanócitos derivam de melanócitos imaturos. Durante a embriogênese, essas células migram da crista neural, um componente transitório da ectoderme localizado entre o tubo neural e a epiderme, alcançam a camada basal da epiderme e então entram nos folículos pilosos em desenvolvimento (SLOMINSKI et al., 2005; TOBIN, 2008). Os fatores que levam uma subpopulação dessas células da crista neural a se tornarem melanócitos permanecem pouco elucidados, porém sabe-se que vários fatores estão envolvidos, incluindo MITF (fator de transcrição associado à microftalmia), fator de transcrição SOX10, proteína Pax3, KIT, FGF-2 (fator de crescimento de fibroblastos-2), endotelina 3 e outros (TOBIN, 2008).

[0006] No folículo piloso, a melanina produzida é transferida dos melanócitos para os queratinócitos do bulbo capilar (SLOMINSKI et al., 2005). A melanina é produzida durante uma via complexa que envolve uma série de reações químicas e enzimáticas, conhecida como melanogênese. A cor que constitui o cabelo de um indivíduo é resultado da atividade da enzima tirosinase (TYR), de modo que sua regulação e atividade são cruciais durante o processo de síntese da melanina (TOBIN, 2008). Além da tirosinase, as enzimas, proteína relacionada à tirosinase 1 (TRP-1) e proteína relacionada a tirosinase 2 (TRP-2), também conhecida como dopacromo tautomerase (DCT), são importantes mediadores desse processo (PILLAIYAR et al., 2017).

[0007] A melanogênese se inicia com a oxidação da tirosina em dopa e desta em dopaquinona pela ação da TYR na presença de oxigênio molecular. Esse primeiro passo é limitante na síntese de melanina, já que o restante da reação pode acontecer espontaneamente em um valor de pH fisiológico (PILLAIYAR et al., 2017). A partir desse momento, a presença ou ausência de cisteína irá determinar qual pigmento, eumelanina ou feomelanina, será formado.

[0008] Na ausência da cisteína, a dopaquinona é convertida em leucodopacromo e em seguida em dopacromo por auto-oxidação. O dopacromo pode então, por descarboxilação espontânea, gerar o 5, 6-di-hidroxiindole (DHI) que rapidamente se oxida e polimeriza para formar polímeros insolúveis de alto peso molecular de tom marrom-preto escuro, pertencentes ao grupo das eumelaninas. No entanto, se o TRP-2/DCT estiver disponível, o dopacromo pode sofrer ação dessa enzima e originar o ácido 5,6-dihidroxi-2-carboxílico (DHICA), que por ação da TRP-1 também formará a eumelanina. Já na presença de cisteína, a dopaquinona reage com essa molécula, formando a cistenildopa que depois se oxida e polimeriza, dando origem a pigmentos solúveis de tom vermelho-amarelo, conhecidos coletivamente como feomelaninas (PILLAIYAR et al., 2017).

[0009] A melanogênese pode ser regulada por diversas vias. É relevante destacar que a estimulação desse processo se dá principalmente pelo peptídeo pró-opiomelanocortina (POMC) nos queratinócitos. Após a produção e subsequente clivagem dessa molécula, diferentes produtos são originados, entre eles o hormônio estimulador de melanócitos (α-MSH), o hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), β-lipotrofina (β-LPH), β-endorfina (β-END), além de β-MSH e Y-MSH. ACTH e α-MSH são considerados alguns dos principais estimuladores da melanogênese (PILLAIYAR et al., 2017; SCHERER et al., 2010).

[0010] Diferentes estratégias têm sido desenvolvidas com objetivo de reverter o processo de grisalhamento.

[0011] A reversão da hipopigmentação do folículo capilar associada a algumas deficiências nutricionais, por meio da suplementação de ferro em pacientes com anemia, já foi relatada (BHAT et al., 2013). A nível tópico, tratamentos têm sido comercializados e podem conter uma variedade de compostos (ácido para-aminobenzóico, ácido fítico, capixil, pantotenato de cálcio etc.), mas os resultados são muitas vezes inconsistentes e apenas temporários (SEHRAWAT et al., 2017). A base do tratamento é muitas vezes camuflar os cabelos brancos com corantes, com alguns estudos mostrando que os corantes capilares protegem o cabelo contra os fotodanos (SEHRAWAT et al., 2017). Abordagens de tratamento mais promissoras envolvem compostos antienvelhecimento ou antioxidantes, a terapia com hormônio de crescimento humano recombinante e o uso do agonista do hormônio estimulante de α- melanócitos (α-MSH), como faz o Greyverse™ (Glycerin (and) Water (and) Palmitoyl Tetrapeptide-20 Amide - IFF Lucas Meyer) - Documento Patentário AU2008271875A1. Como consequência da ativação do receptor MC1R, GreyverseTM eleva a síntese do próprio receptor, indicando o mecanismo de ação central da atividade.

[0012] Outro exemplo de produto consiste na associação Taxifolina Glucosideo e Acetil Tirosina (DarkenylTM - Givaudan) - Documento patentário WO2020089216A1. De acordo com resultados apresentados, o produto induz de forma estatisticamente significativa a expressão gênica, entre outros genes, de MC1R e POMC. Ainda pode ser citado como exemplo de produto de aplicação tópica cosmética comercialmente disponível e destinado para o combate do grisalhamento o EUK-134 (Ethylbisiminomethylguaiacol Manganese Chloride - Lucas Meyer Cosmetics). Este último consiste em um mimético de duas enzimas naturais da pele, a superóxido dismutase e catalase, que exercem importante papel antioxidante e, dessa forma, atuam mais precisamente no combate ao estresse oxidativo, mas não exatamente na estimulação da síntese de melanina.

[0013] Outros documentos patentários podem ser citados por descrever invenções destinadas a reverter o grisalhamento.

[0014] CN102988235 descreve a associação de chifre de cervo, Radix Ginseng Rubra Radix Polygoni Multiflori, Semen sojae atricolor, e óleo de Brassica campestris capaz de promover a repigmentação natural do cabelo.

[0015] KR102265875 descreve uma composição destinada a escurecimento dos fios e prevenção do grisalhamento a partir de exossomos derivados de células tronco.

[0016] WO2014096086 descreve o uso tópico do micro-organismo Bifidobacterium longum, na forma de lisado, para ação pró-pigmentante.

[0017] PI0916690 (WO2010013182) revela o uso cosmético oral de um microorganismo probiótico (ou seja, um micro-organismo vivo) de Lactobacillus paracasei ou seu lisado para tratamento cosmético de distúrbios de um couro cabeludo oleoso, particularmente de caspa do couro cabeludo.

[0018] KR102570587, por sua vez, descreve o uso de um produto resultante do fermentado de um microrganismo do gênero Lactobacillus, ou seja, uma mistura obtida a partir da fermentação de um meio de cultura contendo uma fonte de energia como pó de leite desnatado com Lactobacillus para prevenir cabelos grisalhos ou melhorar cabelos grisalhos. O referido documento em nenhum momento descreve qual a espécie do microrganismo testado e que gerou os resultados experimentais, contentando-se em dizer que é uma cultura de Lactobacillus selecionada entre um total de 4.000 espécies (exemplo 1). Ainda, descreve genericamente que a cepa pode ser uma entre Lactobacillus pentosus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei e Lactobacillus acidophilus. De acordo com a publicação, o produto fermentado deve conter uma grande quantidade de grupos carboxila, que reagem com o aminoácido dentro do fio de cabelo para mudar a cor do fio através de uma reação externa à fibra à temperatura ambiente. Trata-se, portanto, não somente de um produto de natureza distinta à presente invenção, como um agente que atua quimicamente junto ao fio, de forma externa.

[0019] Ainda, de acordo com a busca ao estado da técnica aqui realizada, são diversos os exemplos de produtos com ação antimelanogênica produzidos composições e/ou extratos de Lactobacillus, tais como os descritos em Lim, H. Y. et al. “Antiwrinkle and Antimelanogenesis Effects of Tyndallized Lactobacillus acidophilus KCCM12625P”. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1620 que utiliza Lactobacillus acidophilus. Choi, W. S et al. “Whitening Effects of Lactobacillus rhamnosus Associated with Its Antioxidative Activities” Korean J. Microbiol. Biotechnol. (2013), 41(2), 183-189, que utilizam Lactobacillus rhamnosus e/ou Lactobacillus casei. Bajpai, V. K. et al. “Partially Purified Exo-Polysaccharide from Lactobacillus Sakei Probio 65 with Antioxidant, α-Glucosidase and Tyrosinase Inhibitory Potential” J. Food Biochemistry, 40 issue 3, (2016), p. 264-274 que utiliza Lactobacillus sakei. Kim H. R., et al. “Lipoteichoic acid isolated from Lactobacillus plantarum inhibits melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells. Mol Cells”. 2015 ;38(2): 163-70 que utiliza Lactobacillus plantarum.

[0020] Demonstra-se assim que o campo técnico possuí uma alta imprevisibilidade inerente e que produtos que possam parecer similares, não serão necessariamente igualmente eficazes.

[0021] Assim, o presente pedido de patente visa apresentar novas formas de solução dos problemas constantes no estado da técnica. Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção.

Sumário da Invenção

[0022] Dessa forma, a presente invenção tem por objetivo resolver os problemas constantes no estado da técnica a partir de uma nova composição que surpreendente possui efeito pro-melanogênese.

[0023] A composição da presente invenção apresentou resultados de inibição da expressão gênica de POM, além de diminuir a expressão de MC1R, ambos biomarcadores importantes no processo de melanogênese e, consequentemente, da pigmentação do cabelo. Ainda, a composição da presente invenção mostrou-se capaz de modular positivamente a expressão de outros genes (e.g. TYR, DCT, TYRP-1, MITF, MYO5A, PMEL, MLPH), sugerindo um mecanismo de ação diferenciado em relação ao que se apresenta no estado da arte.

[0024] Desta forma é apresentada uma nova composição cosmética para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal compreendendo pelo menos 0,0001% em peso de lisado de microrganismos da espécie Lacticaseibacillus paracasei.

[0025] Em uma realização da invenção, a composição compreende entre 0,001% e 20% em peso de lisado.

[0026] Em uma realização da invenção, a composição compreende entre 0,001% e 5% em peso de lisado.

[0027] Em uma realização da invenção, a composição é para prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo.

[0028] Em uma realização da invenção, a composição é para a indução da síntese de melanina ser em folículos capilares.

[0029] Em uma realização da invenção, a composição é uma composição cosmética tópica capilar.

[0030] É também apresentado um novo processo de produção de uma composição conforme definida anteriormente compreendendo: - cultivo anaeróbico de microrganismos da espécie Lacticaseibacillus paracasei em meio de cultura até a fase estacionária; - inativação e lise total ou parcial dos microrganismos por submissão do meio a temperatura entre 55°C e 80°C por pelo menos 30 minutos; - filtragem e centrifugação; - mistura do lisado resultante com pelo menos um veículo cosmético adequado.

[0031] É também apresentado um método cosmético de indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal para prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo, compreendendo a administração tópica sobre os folículos capilares de uma composição conforme anteriormente, em uma quantidade cosmeticamente adequada para permitir a referida indução em um indivíduo ou animal.

[0032] É também apresentado o uso da composição, conforme definida anteriomente, para a produção de uma composição cosmética para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal para prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo.

[0033] Em uma realização da invenção, a composição é para aplicação sobre uma região de pele compreendendo folículos capilares.

[0034] Estes e outros objetos da invenção poderão ser imediatamente reconhecidos pelos versados na área e a seguir serão providas descrições em detalhes suficientes para sua reprodução por um técnico no assunto.

Breve Descrição das Figuras

[0035] Com o intuito de melhor definir e esclarecer o conteúdo do presente pedido de patente, é apresentada a figura a seguir:

[0036] Figura 1: Imagens representativas do efeito do lisado de Lacticaseibacillus paracasei na síntese de melanina em folículos pilosos ex vivo - coloração Warthin Starry (lente objetiva x40), comparativamente a mesma formulação sem a adição do lisado (placebo) e uma composição benchmark.

Descrição Detalhada da Invenção

[0037] A presente descrição detalhada da invenção vem estabelecer algumas definições, não limitativas, das principais terminologias e características técnicas empregadas ao longo deste pedido de patente, bem como, fornecer exemplos de algumas das formas de realização da presente invenção a fim de que possa ser reproduzida por um técnico no assunto.

[0038] Assim, inesperadamente, os inventores observaram que certos microrganismos, em particular do tipo Lacticaseibacillus paracasei, podem ser particularmente eficazes para evitar o processo de grisalhamento dos fios, bem como, reverter seus efeitos.

[0039] Assim, como decorre dos dados apresentados nos exemplos, os inventores caracterizaram a capacidade do lisado de Lacticaseibacillus paracasei para estimular a expressão de um número surpreendente de genes relacionados a produção de melanina no folículo capilar, além de ser demonstrado diretamente o estímulo da produção de melanina em cultura de folículos.

[0040] Em particular, os inventores demonstraram que o lisado de Lacticaseibacillus paracasei foi capaz de estimular a expressão gênica de Tirosinase (TYR), Dopacromo tautomerase (DCT), Proteina-1 relacionada à Tirosinase (TYRP-1), Fator de transcrição Melanogenese-associada (MITF), Miosina 5A (MYO5A), Proteína Premelanosoma (PMEL), Melanofilina (MLPH), todos genes relacionados ao processo de pigmentação no folículo capilar e na pele. Além disso, em teste de cultura de folículos capilares, os inventores demonstraram que o lisado de Lacticaseibacillus paracasei foi capaz de aumentar significativamente a produção de melanina no bulbo capilar.

[0041] Assim, a aplicação das composições cosméticas ou dermatológicas ou farmacêuticas da invenção promove a prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios.

[0042] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção refere- se à utilização de um lisado de Lacticaseibacillus paracasei ou uma fração do mesmo para a preparação de uma composição farmacêutica e/ou dermatológica, destinada à prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios.

[0043] No contexto da presente invenção, o termo “prevenir” significa reduzir o risco de manifestação do fenômeno em questão.

[0044] De acordo com outro aspecto da invenção, esta refere-se a um método cosmético para tratar e/ou prevenir o processo de grisalhamento, compreendendo pelo menos uma etapa de administração de um lisado de Lacticaseibacillus paracasei ou uma fração do mesmo a um indivíduo em quantidade eficaz para o tratamento e/ou prevenção em questão.

[0045] De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, o referido lisado é aplicado topicamente sobre uma região compreendendo folículos capilares.

[0046] Microrganismo(s)

[0047] Como referido anteriormente, o microrganismo da espécie Lacticaseibacillus paracasei, também conhecido como Lactobacillus paracasei (definição taxonômica anterior do microrganismo e atualizada conforme descrita por Zheng et al. 2020 na nova classificação taxonômica do gênero Lactobacillus na revista especializada “International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology”), utilizado como composição ativa apresentado no presente pedido de patente é utilizado na forma de um lisado.

[0048] Um lisado comumente denota um material obtido após a destruição ou dissolução de células biológicas por um fenômeno chamado lise celular, causando assim a liberação dos constituintes biológicos intracelulares naturalmente contidos nas células do microrganismo em questão.

[0049] No contexto da presente invenção, o termo lisado é usado para denotar todo o lisado obtido pela lise do microrganismo em questão ou apenas uma fração do mesmo. Assim, a invenção refere-se à aplicação de um lisado da espécie Lacticaseibacillus paracasei e/ou uma fração do mesmo para as finalidades aqui especificadas.

[0050] O lisado utilizado é, portanto, formado total ou parcialmente a partir dos constituintes biológicos intracelulares e/ou dos constituintes das paredes e membranas celulares. Esta lise celular pode ser realizada por várias tecnologias, por exemplo choque osmótico, choque térmico, com ultrassom, ou sob estresse mecânico como centrifugação.

[0051] De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, o lisado é obtido por lise celular entre 55 °C e 80 °C, sendo ao final do processo realizado centrifugação.

[0052] Em um exemplo, microrganismos da espécie Lacticaseibacillus paracasei são cultivados anaerobicamente em um meio de cultura adequado. Quando a fase estacionária de desenvolvimento é atingida, o meio de cultura é inativado e lisado, por exemplo por aquecimento a uma temperatura entre 55°C e 80°C, opcionalmente entre 60°C e 65°C durante 30 min por processo de pasteurização. Os microrganismos são então removidos por uma técnica de separação convencional, por exemplo filtração por membrana, centrifugados e posteriormente o sobrenadante é utilizado como produto.

[0053] O ativo formando o lisado e pertencente à espécie Lacticaseibacillus paracasei pode ser formulado em uma composição a uma concentração de pelo menos 0,0001% (expressa em peso seco), em particular a uma concentração de 0,001 a 20% e mais particularmente a uma concentração de 0,01 a 5% do peso seco da substância ativa em relação ao peso total do veículo ou da composição que o contém.

[0054] As composições de acordo com a invenção podem apresentar-se em todas as formas galênicas normalmente disponíveis para o método de administração adotado.

[0055] O transportador/veículo pode ser de natureza variada dependendo do tipo de composição considerada.

[0056] Mais particularmente no que diz respeito às composições destinadas à administração tópica, estas podem ser uma solução aquosa, aquoso-alcoólica ou oleosa, uma dispersão do tipo solução ou dispersão do tipo loção ou soro, uma emulsão de consistência líquida ou semilíquida, obtido por dispersão de uma fase oleosa em uma fase aquosa (O/A) ou vice-versa (A/O), ou uma suspensão ou emulsão de consistência mole, semi-sólida ou sólida, do tipo creme, aquosa ou gel anidro, ou microemulsões, microcápsulas, micropartículas ou dispersões vesiculares do tipo iônico e/ou não iônico.

[0057] Em uma concretização da presente invenção a formulação do produto pode ser Álcool benzílico: 0,80%; Etilhexilglicerina: 0,20% e lisado de Lacticaseibacillus paracasei: q.s.p 100%.

[0058] Estas composições podem nomeadamente constituir cremes para limpeza, proteção, tratamento ou cuidado, loções, géis ou mousses para o cuidado do couro cabeludo, como loções para limpeza ou desinfecção ou composições para o banho. Podem ser usados também para o couro cabeludo na forma de soluções, cremes, géis, emulsões, mousses ou na forma de composições em aerossol contendo também um propulsor sob pressão. Especificamente, podem ser na forma de tônicos capilares, condicionadores, leave on, xampus, entre outros.

[0059] O referido ingrediente com ação antigrisalhamento apresenta características que permite ser adaptada em diversos tipos de produtos com diferentes composições para os cuidados dos cabelos, como por exemplo:

[0060] Tônico capilar sem álcool, por meio de composições compreendendo 0,10% de sesquicaprilato de xilitil, 2% de PPG-5-Ceteth 20, 10% de lisado de Lacticaseibacillus paracasei e água q.s.p. 100%.

[0061] Tônico capilar com álcool, por meio de composições compreendendo 0,10% sesquicaprilato de xilitil, 20% de álcool etílico 96%, 2% de PPG-5-Ceteth 20, 10% de lisado de Lacticaseibacillus paracasei e água q.s.p. 100%.

[0062] Condicionador, por meio de composições compreendendo 0,10% de EDTA dissódico, 1% de glicerina, 0,50% de cloreto de cetil trimetil amônio, 0,22% de ácido lático 85%, 3,00 % de álcool ceto-estearílico 30/70, 1,00% de álcool cetílico, 0,20% de estearamido propil dimetil amina, 0,50% de sesquicaprilato de xilitil, 2% de lisado de Lacticaseibacillus paracasei e água q.s.p. 100%.

[0063] Leave on, por meio de composições compreendendo 0,10% de EDTA dissódico, 1% de glicerina, 0,80% de cloreto de cetil trimetil amônio, 0,10% de ácido cítrico 50%, 0,22% de ácido lático 85%, 3,00 % de álcool ceto- estearílico 30/70, 0,70% de álcool cetílico, 0,30% de álcool ceto-estearílico eyoxilado 20 OE, 0,50% de sesquicaprilato de xilitil, 2% de lisado de Lacticaseibacillus paracasei e água q.s.p. 100%.

[0064] Xampu, por meio de composições compreendendo 4% de cocoamidopropilbetáina, 27% de lauril éter sulfato de sódio, 3% de lauroil sarcosinato de sódio, 1% de laurel glucosídeo, 4% de cocoamida DEA, 0,50% de sesquicaprilato de xilitil, cloreto de sódio q.s.p , solução de ácido cítrico 50% q.s.p. pH 6,00 - 7,00, 2% de lisado de Lacticaseibacillus paracasei eágua q.s.p. 100%.

[0065] Como se sabe, as formas galênicas destinadas à administração tópica podem conter também aditivos usuais no campo cosmético, farmacêutico e/ou dermatológico, como agentes gelificantes hidrofílicos ou lipofílicos, ativos hidrofílicos ou lipofílicos, conservantes, antioxidantes, solventes, perfumes, enchimentos, filtros, absorventes de odor e corantes. As quantidades destes vários aditivos são as classicamente utilizadas no campo em questão, por exemplo de 0,01 a 20% do peso total da composição. Dependendo de sua natureza, esses aditivos podem ser introduzidos na fase gordurosa/oleosa e/ou na fase aquosa.

[0066] Os produtos podem ser utilizados como composições cosméticas, dermatológicas ou farmacêuticas de uso tópico capazes de modular a produção de melanina no folículo capilar. Estas composições podem nomeadamente constituir cremes para limpeza, proteção, tratamento ou cuidado, loções, géis, xampus, condicionadores ou mousses para o cuidado do couro cabeludo, como loções para limpeza ou desinfecção ou composições para o banho.

[0067] Eles também podem ser usados para o couro cabeludo na forma de soluções, cremes, géis, emulsões, mousses ou na forma de composições em aerossol contendo também um propulsor sob pressão.

[0068] Exemplo 1: Avaliação da modulação da expressão gênica em fragmentos de pele humana

[0069] Material e métodos

[0070] Explantes de pele (n=6), obtidos de procedimento cirúrgico realizado por clínica oftalmológica de cirurgia plástica, foram submetidos a cortes de 0,4 cm2. Os fragmentos obtidos foram transferidos para uma placa de cultura de células contendo um meio de cultura para tratamento com formulação contendo o lisado de Lacticaseibacillus paracasei (3% p/p) e a mesma formulação sem a adição do lisado (placebo). Após o tratamento, os fragmentos foram mantidos em ambiente úmido, 37 °C, 5% CO2 por 24 horas, e posteriormente foram coletados em solução de RNAlaterTM (Qiagen).

[0071] Após 24 horas de incubação com as formulações e armazenamento em solução de RNAlaterTM (Qiagen), o tecido ex vivo foi macerado mecanicamente e, em seguida, o RNA foi extraído com um kit comercialmente disponível, quantificado, e analisado quanto à sua integridade.

[0072] A síntese de cDNA foi realizada com o kit High-Capacity cDNA Reverse Transcription® (Applied Biosystems) e conduzida no dispositivo StepOnePlus (Applied Biosystems). Posteriormente, o cDNA foi quantificado em um aparelho Nanodrop Lite (Thermo Scientific)

[0073] A RT-qPCR de alto rendimento foi realizada utilizando o Sistema Biomark™ HD (Fluidigm, San Francisco, CA), associado ao IFC Controller HX, que suporta o IFC 96.96 Dynamic Array™. Ao final, o limiar do ciclo foi determinado especificamente para cada ensaio utilizando o Software Fluidigm e os resultados de expressão foram analisados empregando o método de delta-delta Ct.

[0074] Resultados

[0075] A análise da expressão dos genes relacionados à pigmentação selecionados em fragmentos de pele tratados com formulação contendo o lisado de Lacticaseibacillus paracasei (3% p/p) foi realizada comparativamente à expressão dos mesmos genes a partir de fragmentos de pele tratados somente com formulação sem o lisado (placebo).

[0076] A tabela 1 abaixo mostra o nível médio de modulação da expressão dos genes relacionados à pigmentação em fragmentos tratados com o lisado de Lacticaseibacillus paracasei, em relação ao grupo placebo. Tabela 1: Porcentagem de modulação da expressão gênica relativa em fragmentos de pele tratados com formulação com lisado de Lacticaseibacillus paracasei (3%), em relação ao grupo placebo.

[0077] Exemplo 2: Avaliação da indução da síntese de melanina em cultura de folículos

[0078] Material e métodos

[0079] Folículos capilares foram dissecados e semeados em placas de 24 poços (1 folículo/poço) em meio de cultura contendo ou não (controle) o lisado de Lacticaseibacillus paracasei (0,002% p/p) e uma composição de comparação (benchmark = Glicerina, Água e Palmitoil Tetrapeptideo-20 Amida - 0,002% p/p). Para cada condição de teste, um excesso de folículos pilosos foi preparado para atingir o valor-alvo de 12 folículos capilares de alta qualidade por condição no final do experimento. Os folículos pilosos foram incubados por 7 dias com renovação do tratamento removendo e substituindo o meio após 3 e 5 dias de incubação.

[0080] Ao final da incubação, os folículos pilosos foram fixados com solução de formaldeído. Os folículos foram então desidratados e depois embebido em parafina. Os cortes transversais foram realizados em micrótomo (5 μm de espessura).

[0081] Os cortes foram desparafinizados e em seguida submetidos ao método de coloração de Warthin Starry. Por fim, os cortes foram observados em microscópio (objetivas 40x) e foram registradas imagens. A quantidade de melanina foi avaliada medindo-se no bulbo a área marcada de melanina normalizada pela área do bulbo (método de análise de imagem semiquantitativa).

[0082] Resultados

[0083] Folículos capilares tratados com o lisado de Lacticaseibacillus paracasei elevaram em 43% os níveis de melanina em relação ao grupo controle (sem tratamento). O produto comparador, nas mesmas condições elevou em 14% os níveis de melanina nos folículos (Figura 1).

[0084] Conforme observado na Figura 1, o lisado de Lacticaseibacillus paracasei foi capaz de estimular intensamente a síntese de melanina no bulbo de folículos capilares. A quantificação da área pigmentada indica um aumento de 43% em relação ao grupo controle, enquanto o benchmark foi capaz de estimular a pigmentação em 14%, nas mesmas condições experimentais.

[0085] Os exemplos aqui revelados possuem o intuito de somente exemplificar algumas das inúmeras formas de realização e utilização da presente invenção, sem limitar a interpretação de seu escopo e amplitude, bem como, sobre eventuais formas alternativas e variações configuracionais da mesma que serão definidas a partir das reivindicações aqui apresentadas.

Claims (11)

1. Composição cosmética para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal caracterizada por compreender pelo menos 0,0001% em peso de lisado de microrganismos da espécie Lacticaseibacillus paracasei.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender entre 0,001% e 20% em peso de lisado.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender entre 0,001% e 5% em peso de lisado.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, caracterizado por ser para prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pela indução da síntese de melanina ser em folículos capilares.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por ser uma composição cosmética tópica.

7. Processo de produção de uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por compreender: - cultivo anaeróbico de microrganismos da espécie Lacticaseibacillus paracasei em meio de cultura até a fase estacionária; - inativação e lise total ou parcial dos microrganismos por submissão do meio a temperatura entre 55°C e 80°C por pelo menos 30 minutos; - filtragem e centrifugação; - mistura do lisado resultante com pelo menos um veículo cosmético adequado.

8. Método cosmético de indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal, caracterizado por compreender a administração tópica de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em uma quantidade cosmeticamente adequada para permitir a referida indução em um indivíduo ou animal.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por ser para a prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo e a referida administração tópica ser sobre os folículos capilares.

10. Uso da composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por ser para a produção de uma composição cosmética para a indução da síntese de melanina em um indivíduo ou animal.

11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pela composição ser para prevenção e/ou reversão do processo de grisalhamento dos fios de cabelo e para aplicação sobre uma região de pele compreendendo folículos capilares.