BR102017010610B1 - Composição cosmética, método para o cuidado da pele, uso cosmético e produto cosmético para o cuidado da pele - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a composições cosméticas, na forma de loção, que compreendem (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada, (b) ácido glicólico livre e /ou em solução e (c) excipientes cosmeticamente aceitáveis. As composições são destinadas para os cuidados da pele, particularmente para renovação celular e hidratação.

Description

Campo da Invenção

[1] A presente invenção refere-se a composições cosméticas, na forma de loção, que compreendem (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada, (b) ácido glicólico livre e /ou em solução e (c) excipientes cosmeticamente aceitáveis. As composições são destinadas para os cuidados da pele, particularmente para renovação celular e hidratação. Antecedentes da Invenção

[2] A pele humana está sujeita a uma diversidade de agressões, por fatores tanto extrínsecos como intrínsecos. Os fatores extrínsecos incluem radiação ultravioleta, poluição ambiental, vento, calor, radiação infravermelha, baixa umidade, tensoativos fortes, abrasivos, etc. Os fatores intrínsecos, por outro lado, incluem o envelhecimento cronológico e outras alterações biológicas internas à pele. Sejam extrínsecos ou intrínsecos, estes fatores resultam em sinais visíveis de danos à pele.

[3] A pele humana, que é o maior órgão do corpo, é feita de duas camadas principais, a derme e a epiderme.

[4] A epiderme, que constitui a camada superior da pele que protege o corpo contra o meio ambiente, está em um estado de constante regeneração. A epiderme é feita de várias camadas de células, a mais profunda que é a camada basal é formada a partir de células não diferenciadas. Durante o tempo, estas células se diferenciam e migram em direção à superfície da epiderme, constituindo as várias camadas desta, até elas formarem na superfície da epiderme os corneócitos, que são células mortas que são removidas por escamação. Essa perda de superfície é compensada pela migração de células da camada basal para a superfície de uma epiderme. Isso é o fenômeno de renovação perpétua da pele.

[5] A derme provê à epiderme um suporte sólido. É também seu elemento nutricional. Ela é feita de principalmente de fibroblastos e uma matriz extracelular composta principalmente de colágeno, elastina e uma substância conhecida como sustância de base. Estes componentes são sintetizados pelos fibroblastos. A coesão entre epiderme derme é provida pela junção dermo- epidérmica. Esta é uma região complexa com cerca de 100 nanômetros de espessura, que compreende o polo basal dos queratinócitos basais, a membrana epidérmica e a zona sub- basal da derme superficial.

[6] A pele exerce diferentes funções no organismo humano, dentre elas a de proteção à radiação ultravioleta, proteção mecânica contra agentes químicos e físicos e controle de temperatura.

[7] Para realização adequada destas funções, a água desempenha um papel fundamental, especialmente no controle da lubrificação e da temperatura corpórea. A água encontrada na superfície cutânea (estrato córneo - stratum corneum) chega por embebição, provinda das camadas mais profundas da epiderme e da derme.

[8] O estrato córneo (EC) compreende o estágio final de diferenciação celular epidérmica, possuindo de 10 a 15 camadas de células, apresentando espessura média de 10 mm. Esta fina membrana, representada especificamente por células queratinizadas mortas e anucleadas embebidas em uma matriz lipídica, permite a sobrevivência de grande parte dos mamíferos frente aos mais agressivos fatores ambientais. A barreira natural formada pelo EC depende criticamente de sua composição, representada por proteínas (75-80%), lipídeos (5-15%) e demais constituintes (5-10%). Do total de proteínas presentes no EC, aproximadamente 5% corresponde a uma porção estrutural denominada envelope cornificado epidérmico (ECE), o qual é formado por um conjunto de proteínas altamente insolúveis e resistentes, que envolvem externamente os queratinócitos e desempenham um papel fundamental na estruturação e organização dos lipídeos intracelulares.

[9] Muitos constituintes do ECE têm sido identificados, dentre eles, as proteínas pro-filagrina, filagrina, involucrina e loricrina, além de diversos subtipos de queratina, como a 10 e 14.

[10] Alguns fatores podem comprometer a barreira cutânea, tais como doenças da pele (psoríase, dermatite atópicas, etc.), envelhecimento e dietas pobres em nutrientes. Devido a este comprometimento, a pele perde sua hidratação, resultando em opacidade e perda da elasticidade. Alguns produtos cosméticos têm o intuito de restaurar a barreira cutânea, evitando a perda de água e consequentemente mantendo a hidratação e integridade da barreira.

[11] Outro fator importante para renovar e manter a barreira dérmica é a renovação epidérmica através da proliferação de queratinócitos, que permite que novas células do EC se concretizem, melhorando o aspecto da pele e deixando-a com uma aparência mais saudável.

[12] Adicionalmente, um fator que desempenha um papel crucial na hidratação cutânea e integridade do ECE é a presença das aquaporinas (AQPs). As AQPs são proteínas que favorecem o transporte de água e glicerol através da membrana plasmática. Dentre as AQPs, a AQP-3 é expressa na camada basal da epiderme e é responsável pelo transporte de glicerol da camada basal para o EC. A deficiência de AQP-3 está relacionada com xerose, redução da hidratação no EC e diminuição de elasticidade cutânea.

[13] A mensuração de parâmetros, tais como proliferação celular, aquaporina-3, filagrina, involucrina, loricrina, queratina 10 e queratina 14 em culturas de queratinócitos ou de pele humana pode ser uma ferramenta útil para avaliação da eficácia de produtos e ativos cosméticos com apelo de hidratação e proteção de barreira.

[14] A queratina forma uma camada que envolve as células da epiderme evitando perdas desnecessárias de água e, também, protegendo o organismo contra agressões externas, tais como choques mecânicos, radiação solar, ventos e chuvas.

[15] A queratina possui capacidade de se regenerar e reconstituir, esse processo contínuo de renovação natural é denominado queratogênese, que ocorre aproximadamente a cada 28 dias e envolve uma alteração permanente do tecido epidérmico para compensar a perda permanente de células do estrato córneo, causada por pequenas queimaduras de sol entre outras causas.

[16] No entanto, a eliminação destas células é sensível a vários fatores internos ou externos, podendo causar alterações tais como hiperqueratose, o que retarda a regeneração celular, resultando num acúmulo de queratina, espessando o estrato córneo, que afeta a aparência da pele, tornando-a áspera, com matiz amarelada, opaca, e até mesmo comprometendo a sua limpeza e funções secretoras.

[17] Este acúmulo excessivo de queratina nas camadas externas da pele que produz espessamento ocorre como uma resposta normal a fatores, tais como: • atrito constante; inflamação crônica; pressão persistente; eczema; exposição frequente ou excessiva à luz solar; manipulação de irritantes químicos e / ou estimulantes; e obesidade.

[18] Abaixo seguem os sinais mais comuns de hiperqueratose em algumas áreas corporais:

[19] Pés: Calos e calosidades devido ao atrito contínuo pelo uso de sapatos apertados, sapatos de salto, ou sapatos abertos. Estas malformações ocorrem geralmente nos dedos dos pés e sola. Além disso, sobre a pele mais grossa do calcanhar podem surgir rachaduras que podem estar associada à obesidade devido à sobrecarga de peso. Também podem ser mencionados os joanetes que podem ser atribuídos à desidratação.

[20] Mãos: Calos podem surgir devido à pele mais espessa e áspera nas palmas das mãos e dedos devido à pressão e/ou fricção para manipular objetos pesados ou se estiver exposta a irritantes químicos constantemente. É comum em estudantes devido à escrita e em fumantes devido aos produtos químicos no cigarro que causam espessamento na camada exterior da pele dos dedos. As drogas também têm efeitos sobre a superfície da pele, especialmente a cocaína.

[21] Cotovelos e joelhos: Neste caso, a epiderme fica mais escura e mais espessa do que o normal. Embora a pele que reveste essas partes seja mais resistente para proteger as articulações dos choques e do movimento e atrito constante com diferentes superfícies e texturas, este tecido é vulnerável a hiperqueratose devido à distensão excessiva de joelhos e cotovelos.

[22] A queratose pilar também é um exemplo de hiperqueratose, trata de uma dermatose geneticamente determinada, com distúrbio na queratinização folicular. Seus mecanismos de desenvolvimento etiopatogênico não estão estabelecidos, mas acredita-se que exista um distúrbio no turn-over celular nos folículos pilossebáceos. Clinicamente se manifesta por pápulas queratósicas foliculares distribuídas principalmente nos membros superiores (face extensora), glúteos e eventualmente na face. Em alguns pacientes associa-se a vasodilatação superficial manifesta por eritema transitório, principalmente após stress ou variação de temperatura. O quadro é mais comum na infância e adolescência e tende a desaparecer ou reduzir após a puberdade.

[23] Geralmente, o regime de cuidados da pele para alterações cutâneas causadas por acumulação excessiva de queratina depende do tipo, localização, gravidade e da causa.

[24] Existe atualmente, à disposição dos consumidores, um grande número de produtos para cuidados pessoais destinados a promover hidratação, melhorar a saúde e a aparência física dos tecidos queratinosos, como a pele.

[25] No entanto, a maioria destina-se a diminuir a aparência grosseira e áspera da pele, consistindo na aplicação tópica de cremes especiais, emolientes, hidratantes e esfoliantes feitos a partir de ingredientes queratolíticos que dissolvem a queratina. No caso da queratose pilar, os cuidados propostos atualmente se referem ao uso de agentes queratolíticos, para redução da obstrução folicular e redução da sensação de aspereza provocada pelas lesões.

[26] O ácido glicólico é um dos ácidos mais utilizados em termos de cuidados da pele, ele auxilia na remoção do excesso de células mortas, facilitando a eliminação da camada queratinizada. No entanto, o uso do ácido glicólico apresenta alguns inconvenientes, entre eles podem ser citados o alto grau de irritação à pele e dificuldades na manipulação para preparo de formulações contendo o mesmo, assim como dificuldades para estabilização.

[27] Ao buscar soluções para os problemas relatados acima, os inventores verificaram, de modo surpreendente e inesperado, que composições compreendendo ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada, em combinação com ácido glicólico livre e /ou em solução, apresentam ótimos resultados na renovação celular e hidratação da pele, particularmente podendo ser úteis como adjuvantes ao tratamento de pele com queratose pilar. As composições da presente invenção também são eficazes no cuidado cosmético da pele ressecada, particularmente pele dos joelhos, cotovelos e calcanhares. Descrição Resumida da Invenção

[28] A presente invenção se refere a uma composição cosmética na forma de loção compreendendo: (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada; (b) ácido glicólico livre e /ou em solução; e (c) excipientes cosmeticamente aceitáveis para o preparo de loções cosméticas, como emulsionantes, estabilizadores de emulsão, formadores de filme, antioxidantes, corretores de pH, veículos, dentre outros conhecidos do técnico no assunto.

[29] A composição de acordo com a presente invenção compreende adicionalmente agentes condicionantes que contribuem para os benefícios de renovação celular e hidratação prolongada.

[30] A composição de acordo com a presente invenção é particularmente útil para o cuidado da pele, particularmente para hidratação prolongada e/ou renovação celular. Por hidratação prolongada, observa-se a hidratação da pele por até 8 horas após aplicação.

[31] Em uma modalidade, a invenção se refere a um método para cuidado da pele, que compreende a aplicação tópica de uma quantidade cosmeticamente eficaz da composição da invenção à pele, bem como ao uso cosmético da composição.

[32] A presente invenção também trata de um produto cosmético para cuidado da pele.

Breve Descrição das Figuras

[33] A figura 1 apresenta a avaliação das concentrações não-citotóxicas do produto investigacional em fibroblastos humanos após 72 horas de incubação pelo método do XTT.

[34] A figura 2 apresente os efeitos do produto investigacional sobre a produção de queratina 10 em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni)

[35] A figura 3 apresenta os efeitos do produto investigacional sobre a produção de queratina 14 em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni).

[36] A figura 4 apresente os efeitos do produto investigacional sobre a produção de filagrina em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni.)

[37] A figura 5 apresenta os efeitos do produto investigacional sobre a produção de involucrina em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni.)

[38] A figura 6 apresenta os efeitos do produto investigacional sobre a produção de loricrina em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni.)

[39] A figura 7 apresenta os efeitos do produto investigacional sobre a produção de aquaporina em cultura de queratinócitos humanos. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni.)

[40] A figura 8 apresenta os efeitos do produto investigacional sobre a proliferação celular (BrdU) em cultura de queratinócitos humanos submetidos à radiação UV. Os dados representam a média ± desvio padrão de 3 replicatas (Anova, Bonferroni.)

[41] A figura 9 apresenta as médias dos índices corneométricos nas áreas tratada e controle, antes e após 1 (T1h), 2 (T2h), 3 (T3h) e 4 (T4h), 6 (T6h) e 8 (T8h) horas da aplicação do produto investigacional.

[42] A figura 10 apresenta as médias dos índices de perda de água transepidérmica nas áreas tratada e controle, antes e após 1 (T1h), 2 (T2h), 3 (T3h) e 4 (T4h), 6 (T6h) e 8 (T8h) após a aplicação do produto investigacional.

[43] A figura 11 apresenta a média das notas para os itens da avaliação clínica, realizadas no início do estudo e após 30 dias de utilização do produto investigacional.

[44] A figura 12 apresenta a média dos valores da contagem de lesões, realizadas no início do estudo e após 30 dias de utilização do produto investigacional.

[45] A figura 13 apresenta Média dos valores obtidos na avaliação de diferença de coloração da região afetada pelas lesões, realizadas no início do estudo e após 30 dias de utilização do produto investigacional. Descrição Detalhada da Invenção

[46] As composições da presente invenção compreendem componentes que proporcionam renovação celular e hidratação prolongada, promovendo melhora aparente no aspecto geral da pele seca, áspera, rugosa e/ou com áreas com maior queratinização (pele espessa). Por hidratação prolongada, observa-se a hidratação da pele por até 8 horas após aplicação.

[47] A presente invenção se refere a uma composição cosmética na forma de loção compreendendo: (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada; (b) ácido glicólico livre e /ou em solução; e (c) excipientes cosmeticamente aceitáveis para o preparo de loções cosméticas.

[48] No escopo da presente invenção entende-se por loção uma forma cosmética de emulsão, apropriada para uso tópico no cuidado na pele, conforme bem estabelecido no estado da técnica. Referida forma cosmética é de fácil aplicação e espalhabilidade.

[49] O componente (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas, com liberação controlada, trata de uma combinação dos seguintes compostos: ácido glicólico, glicerina, goma Caesalpinia spinosa, fenoxietanol, caprilil glicol e etilhexilglicerina.

[50] Cada um destes compostos desempenha uma função na composição: - ácido glicólico: esfoliante químico; - glicerina: umectante; - goma Caesalpinia spinosa: condicionante; - fenoxietanol: conservante; - caprilil glicol: emoliente; - etilhexilglicerina: condicionante.

[51] O ácido glicólico encontra-se veiculado dentro da matriz de liberação controlada. A dita matriz é composta de açúcares e, além de ajudar no processo de liberação do ácido, promove a hidratação da pele (poder umectante), diminuindo consideravelmente a irritabilidade que poderia ser causada pelo ácido então liberado ou pelo uso de quantidades excessivas de ácido livre conforme composições do estado técnica.

[52] Por liberação controlada entende-se que a matriz nano de galactomananas promove a liberação estendida do acido glicólico, contribuindo para uma melhor distribuição, deposição e desempenho do ácido glicólico na pele e minimizando efeitos adversos de irritabilidade cutânea.

[53] O ácido glicólico (ácido hidroxiacético) é um α-hidroxi ácido amplamente empregado como agentes químicos de esfoliação de superfície. Possuem também a propriedade de acelerar a renovação celular da epiderme.

[54] O componente (b) ácido glicólico livre e /ou em solução presente na composição de acordo com a presente invenção é um agente de renovação celular, promovendo a melhora na textura e auxiliando na uniformização da pele.

[55] De forma a superar os inconvenientes de formulação e aplicação presentes em composições conhecidas da técnica, a presente invenção surpreendentemente propõe um balanço entre os componentes (a) e (b). De modo preferencial, a composição cosmética da presente invenção compreende de cerca de 1,05% a cerca 2,45% de ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada, e cerca de 6,00 a cerca de 14,00% de ácido glicólico livre e /ou em solução. Assim, a razão entre os componentes (a) e (b) pode variar de cerca de 0,175 ou seja entre cerca de 1,05:6,00 e cerca de 2,45:14.

[56] Os excipientes cosmeticamente aceitáveis (c) de acordo com a presente invenção podem ser aqueles apropriados para o preparo de loções cosméticas conhecidos do técnico no assunto. Sem impor limitação, os excipientes cosmeticamente aceitáveis podem incluir emulsionantes, estabilizadores de emulsão, formadores de filme, antioxidantes, corretores de pH, veículos, dentre outros conhecidos do técnico no assunto.

[57] Sem impor qualquer limitação, de maneira preferencial, os excipientes cosmeticamente aceitáveis podem ser selecionados de EDTA dissódico, álcool cetearílico, gliceril estearato, cera alba, octildodecanol, acetato de tocoferol, poliacrilato-13, poliisobuteno, polisorbato 20, isostearato sorbitano, hidróxido de sódio, triglicerídeos de ácidos caprílico/cáprico, glicerina/perfume/fenoxietanol /caprilil glicol, glicerídeos de soja e/ou água.

[58] A composição da presente invenção pode compreender adicionalmente agentes condicionantes para conferir ao produto cosmético benefícios aprimorados ou para satisfazer as exigências de desempenho do produto. Entre estes podem ser citados, sem qualquer limitação, manteiga de karité (Butyrospermum parkii) ou manteiga da semente de mangostão (Garcinia indica), sozinhos ou em combinação.

[59] A manteiga de karité pode ser utilizada na composição da presente invenção na forma pura ou na forma “unsaponifiables”, ou seja, fazendo parte com glicerídeos de soja e a fração insaponificável (mais nobre / menos irritante / mais pura) do karité.

[60] Os excipientes cosmeticamente aceitáveis (c), assim como os agentes condicionantes podem ser incorporados nas composições da presente invenção em quantidades que fornecem suas funções pretendidas, como é de conhecimento dos versados na tecnologia de cosméticos.

[61] A composição de acordo com a invenção é particularmente destinada a ser aplicada às áreas do corpo e face que são secas, ásperas, rugosas e/ou que apresentam maior queratinização (pele espessa). Em particular, rosto, orelhas, nariz, bochecha, queixo, braços, cotovelos, mãos, dedos, joelhos, coxas, nádegas e calcanhares.

[62] A presente invenção também se refere ao uso cosmético da composição de acordo com a invenção para renovação celular e/ou hidratação da pele, particularmente para os cuidado de regiões da pele que apresentam áreas ásperas e/ou espessas, além de atuar como adjuvante ao tratamento de queratose pilar.

[63] A presente invenção também se refere a produtos cosméticos contendo as composições aqui descritas, particularmente a um produto sem enxague, preferencialmente uma loção hidratante.

[64] De acordo com uma forma de realização preferida, a presente invenção se refere a um hidratante indicado para renovação celular de áreas ásperas e/ou espessas do corpo, especificamente para áreas afetadas pela queratose pilar e áreas ásperas, como cotovelos, joelhos e calcanhares.

[65] O método para cuidado da pele compreende a aplicação tópica da composição de acordo com a invenção à pele, podendo ser aplicada varias vezes ao dia, preferencialmente pelo menos duas vezes ao dia, pela manhã e à noite, em todo corpo ou após banho, sobre a pele limpa, massageando-se suavemente até sua completa absorção.

[66] A composição de acordo com a presente invenção possibilita as seguintes vantagens cosméticas e dermatológicas resultantes de sua aplicação tópica sobre a pele: - Adjuvante na melhora da quantidade e tamanho das lesões da queratose pilar; - Melhora na homogeneização da cor da pele na região afetada; - Aumento da maciez e hidratação; - Cheiro e espalhabilidade agradáveis, fácil de aplicar (segundo pesquisa, 100% comprariam o produto); - Exerce um efeito na hidratação e renovação da pele através do aumento da produção de involucrina, loricrina, queratinas 10 e 14; - Alta capacidade hidratante; e - Hidratante e reparador de barreira de ação prolongada

[67] Exceto onde definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados na presente invenção têm o significado comumente compreendido por um técnico no assunto à qual pertence à invenção.

[68] Exceto onde indicado em contrário, porcentagem refere-se à porcentagem em peso (isto é, % peso/peso total da composição).

[69] Ditas vantagens ficarão mais evidentes pelos exemplos, não limitativos, apresentados a seguir. Nos exemplos, por produto investigacional entende-se a composição da presente invenção. EXEMPLOS Exemplo 1. Composições de acordo com a presente invenção

[70] Duas realizações de composição de acordo com a presente invenção foram preparadas conforme a seguir e testadas conforme exemplos seguintes. Tabela 1. Composições de acordo com a presente invenção

qsp: quantidade suficiente para 100% da formulação. Exemplo 2. Preparo de composição da invenção

[71] Sob resfriamento, preparou-se uma solução de hidróxido de sódio 29%. Iniciou-se o processo de neutralização do acido glicólico com a solução de hidróxido de sódio cuidadosamente.

[72] Preparou-se a fase aquosa no reator principal, adicionou-se água, EDTA dissódico, glicerina e poliacrilato-13 / poliisobuteno / polisorbato 20 / água / isoestearato de sorbitano. Homogeneizou-se e aqueceu-se a uma temperatura de 60-87°C.

[73] Preparou-se a fase oleosa, no reator auxiliar, adicionou-se manteiga de semente de Garcinia indica, manteiga de Butyrospermum parkii, triglicerídeo cáprico/caprílico, cera alba, octildodecanol, tocoferil acetato, gliceril estearato, cetearil álcool e glicerídeos de soja/ manteiga de Butyrospermum parkii unsaponifiables. Homogeneizou-se e aqueceu-se a uma temperatura de 60-87°C.

[74] Adicionou-se a fase oleosa sobre a aquosa. Homogeneizou-se e resfriou-se o lote para 65-80°C. Adicionou-se uma parte da solução neutralizada de ácido glicólico. Homogeneizou-se e resfriou-se para 25-45°C. Adicionou-se água / glicerina, ácido glicólico/ etilhexilglicerina/ fenoxietanol/ caprilil glicol e fragrância. Homogeneizou-se e adicionou-se o restante da solução neutralizada. Homogeneizou-se e completou-se o volume com água. Exemplo 2 — Estudo pré-clínico de eficácia in vitro na hidratação e renovação tecidual

[75] O objetivo do estudo foi de avaliar a eficácia pré-clínica do produto investigacional na hidratação e renovação tecidual em cultura de queratinócitos e fragmentos de pele humana.

[76] Queratinócitos humanos foram incubados com 3 concentrações não-citotóxicas da substância por 48 horas para posterior avaliação da proliferação celular e da produção das queratinas 10 e 14, filagrina, loricrina, involucrina e aquaporina 3. Paralelamente, foram realizadas culturas de pele humana ex vivo, tratadas com o produto investigacional por 48 horas para avaliação da síntese proteica de involucrina, queratina 10 e 14.

[77] Fibroblastos humanos HFF-1 (ATCC SCRC-1041) foram semeados em garrafas de 75 cm2 (Nunc, Denmark), cultivados e expandidos em incubadora a 37°C em presença de 5% de CO2, utilizando meio de cultura específico. Ao atingirem confluência, as células foram semeadas em placas de 96 poços (Nunc) para determinação das concentrações não citotóxicas da substância teste.

[78] A viabilidade celular foi determinada por um método colorimétrico que utiliza o corante XTT (2,3- bis [2-methoxy-4-nitro-5-sulfopheny]-2H-tetrazolium- 5-carboxyanilide inner salt), que é convertido em formazan laranja solúvel em água pela enzima succinato desidrogenase mitocondrial nas células viáveis (Xenometrix AG, Switzerland). Os fibroblastos foram semeados na densidade de 1x104 células por poço e incubados com a substância teste em 8 concentrações utilizando uma diluição geométrica decimal10. Após 72 horas de incubação o produto teste foi removido e o meio de cultura foi substituído. O XTT foi então adicionado à cultura e a placa incubada por mais 3 horas. A absorbância (densidade óptica - DO) de cada poço foi determinada a 480 nm em monocromador Multiskan GO (Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland). A porcentagem de viabilidade celular foi calculada conforme equação: % Viabilidade = (DOST / DOCN) x 100, onde DOST = densidade óptica da substância teste e DOCN = densidade óptica do controle negativo.

[79] Queratinócitos humanos (Hacat) foram semeados em garrafas de 75 cm2 (Nunc, Denmark), cultivados e expandidos em incubadora a 37°C em presença de 5% de CO2, utilizando meio de cultura específico. Ao atingirem confluência, as células foram semeadas em placas de 24 poços (Nunc) para posterior avaliação dos mediadores.

[80] As culturas celulares foram incubadas com 3 concentrações não-citotóxicas do produto investigacional determinadas de acordo com item 3. As concentrações do produto investigacional avaliadas neste estudo foram 1,00; 0,316 e 0,100mg/mL. As células foram mantidas em contato com a substância teste por 48 horas. Após esse período, o sobrenadante foi coletado para posterior quantificação dos mediadores.

[81] As concentrações de filagrina, involucrina, loricrina, aquaporina-3, K10 e K14 foram mensuradas no sobrenadante das culturas de queratinócitos, todas as avaliações foram realizadas por meio de ensaio de ELISA sanduiche, utilizando kit adquirido comercialmente (USCN, Houston, USA). A leitura da absorbância foi realizada a 450nm em monocromador Multiskan GO (Termo Scientific).

[82] Os fragmentos de pele foram fracionados em pedaços de aproximadamente 1,5 cm2 e incubados em meio de cultura. Em seguida, os fragmentos foram tratados com o produto investigacional na proporção de 25-30 mg/cm2, massageados por 30 segundos e mantidos em incubadora a 37°C em presença de 5% de CO2 por um período de 48 horas. Após esse período, os fragmentos foram coletados e submetidos aos procedimentos histológicos para realização do ensaio de imunofluorescência.

[83] Na avaliação estatística utilizou-se o teste ANOVA que permitiu mensurar a variação dos resultados, comparando os dados entre os grupos. Em seguida foi aplicado o pós-teste Bonferroni, que reforçou e tornou ainda mais preciso o resultado apresentado no teste ANOVA. Foi utilizado o nível de significância de 5% (GraphPad Prism v6).

[84] Conforme podemos observar na figura 1, o produto investigacional apresentou concentrações não citotóxicas a partir da diluição de 1,00mg/mL.

[85] A figura 2 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de queratina 10 em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional aumentou significativamente a produção de queratina 10 na concentração de 1,00mg/mL (P<0,05) quando comparado ao grupo controle.

[86] A figura 3 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de queratina 14 em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional não produziu alterações significativas na produção de queratina 14 quando comparado ao grupo controle.

[87] A figura 4 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de filagrina em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional não produziu alterações significativas na produção de filagrina quando comparado ao grupo controle.

[88] A figura 5 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de involucrina em cultura de queratinócitos humanos.

[89] Como podemos observar o produto investigacional aumentou significativamente a produção de involucrina nas 3 concentrações avaliadas quando comparado ao grupo controle.

[90] A figura 6 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de loricrina em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional aumentou significativamente a produção de loricrina nas 3 concentrações avaliadas (P<0,01) quando comparado ao grupo controle.

[91] A figura 7 representa os efeitos do produto investigacional sobre a produção de aquaporina-3 em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional não alterou significativamente a produção de aquaporina-3 quando comparado ao grupo controle.

[92] A figura 8 representa os efeitos do produto investigacional sobre a proliferação celular em cultura de queratinócitos humanos. Como podemos observar o produto investigacional não alterou significativamente a proliferação celular em nenhuma das concentrações avaliadas, quando comparado ao grupo controle.

[93] De acordo com os resultados apresentados, nas figuras 1 a 8, podemos concluir que o produto investigacional: - Apresentou concentrações não-citotóxicas a partir da diluição de 1,00mg/mL; - Promoveu aumento na produção de queratina 10 na concentração 1,00mg/mL; - Promoveu aumento na produção de involucrina nas concentrações de 1,00; 0,316 e 0,100mg/mL; - Promoveu aumento na produção de loricrina nas concentrações de 1,00; 0,316 e 0,100mg/mL; - Não alterou a produção de queratina 14, filagrina, aquaporina-3 e a proliferação celular; e - Aumentou a produção de queratina 10, queratina 14 e involucrina através da quantificação de imunofluorescência.

[94] Os resultados obtidos nos permitem inferir que o produto investigacional exerce um efeito na hidratação e renovação da pele através do aumento da produção de involucrina, loricrina, queratinas 10 e 14. Exemplo 3. Avaliação do potencial hidratante por corneometria e perda de água transepidérmica (TEWL) - teste agudo com cinética

[95] Foi avaliada a eficácia hidratante e perda de água transepidérmica da pele após aplicação um produto cosmético, por meio de medidas instrumentais de corneometria e TEWL.

[96] O estudo foi unicêntrico, randomizado, cego, com o objetivo de avaliar a eficácia de forma instrumental da hidratação, e perda de água da pele após aplicação única de um produto cosmético. Para as avaliações de corneometria e TEWL, as medidas foram realizadas antes da aplicação no antebraço (T0) (conforme aleatorização) e após T1h, T2h, T3h, T4h, T6h e T8 horas da aplicação.

[97] Foi utilizada uma área experimental chamada de área tratada, essa utilizada para as medidas corneométricas e de perda de agua transepidérmica (TEWL). Foi também demarcada uma área controle conforme aleatorização, onde foram realizadas as mesmas medidas que ocorreram na área tratada, porém sem aplicação do produto. Estas áreas de avaliação foram de 4,0 x 4,0 cm, iniciando a 03 cm do punho com os seguintes destinos: - Área 01 - aplicação produto- medidas de corneometria e TEWL; - Área 02 - área controle para corneometria e TEWL (sem aplicação do produto).

[98] Após medidas basais em (T0), o produto foi aplicado na área tratada correspondente, a quantidade padronizada é de 32mg do produto. Na sequência, o produto foi espalhado na área de modo mais uniforme possível, massageando suavemente com a dedeira até completa absorção.

[99] O equipamento Corneometer® MPA 580 (Courage & Khazaka) mediu a hidratação da pele por capacitância. Índices Corneométrico - unidade adimensional (u.a).

[100] O equipamento Tewameter® TM 300 (Courage & Khazaka) mediu a quantidade de água perdida pela pele em um determinado período de tempo. Os valores obtidos nas medidas do sistema são expressos em valores absolutos (g/m2/h), que quantificam a quantidade de água evaporada por unidade de tempo por área. Quanto mais elevada é a quantidade de água perdida pela pele, mais danificada está a barreira cutânea, portanto espera-se que os valores diminuam após a aplicação do produto.

[101] Avaliações clínicas foram realizadas no início (D0) e após o término das medidas caso seja necessário. Antes dos voluntários iniciarem a fase de cinética, eles foram submetidos a medidas instrumentais de triagem do índice corneométrico.

[102] No teste de corneometria, observou-se um aumento estatisticamente significativo dos índices corneométricos obtidos nos tempos experimentais 1, 2, 3, 4, 6 e 8 horas após a aplicação do produto investigacional, comparados ao tempo inicial. Na comparação entre as áreas, a área tratada apresentou resultados superiores à área controle. Assim, o produto pode ser considerado como hidratante com ação prolongada até 8 horas.

[103] O gráfico da figura 9 mostra as médias dos índices corneométricos dos voluntários antes da aplicação do produto (T0) e após 1 (T1h), 2 (T2h), 3(T3h), 4(T4h), 6(T6h) e 8 horas (T8h) da aplicação do mesmo. O aumento das médias indica um aumento da hidratação da pele.

[104] Observou-se um aumento estatisticamente significativo dos índices corneométricos obtidos nos tempos experimentais 1, 2, 3, 4, 6 e 8 horas após a aplicação do produto investigacional, comparados ao tempo inicial.

[105] Na comparação entre as áreas, a área tratada apresentou resultados superiores à área controle.

[106] O produto pode ser considerado como hidratante com ação prolongada até 8 horas.

[107] No teste de perda de água transepidérmica (TEWL), observou-se que o produto investigacional promoveu uma redução da perda de água transepidérmica da pele após 1, 2, 3, 4, 6 e 8 horas da aplicação do produto, sendo estatisticamente significante. O produto pode ser considerado como reparador de barreira com ação por até 8 horas.

[108] O gráfico da figura 10 mostra as médias dos índices de perda de água transepidérmica dos voluntários nas áreas antes da aplicação do produto (T0) e após 1 (T1h), 2 (T2h), 3(T3h), 4(T4h), 6(T6h) e 8 horas (T8h) da aplicação do mesmo. A redução das médias corresponde à melhora da barreira cutânea.

[109] Observou-se que o produto investigacional promoveu uma redução da perda de água transepidérmica da pele após 1, 2, 3, 4, 6 e 8 horas da aplicação do produto, sendo estatisticamente significante.

[110] O produto pode ser considerado como reparador de barreira com ação por até 8 horas. Exemplo 4 - Avaliação de aceitabilidade dérmica e eficácia na melhora da queratose pilar para produto cosmético.

[111] O objetivo do estudo foi comprovar a segurança e a eficácia na melhora da queratose pilar, em condições normais de uso.

[112] Estudo foi unicêntrico, randomizado, com o objetivo de avaliar a segurança e eficácia na melhora da queratose pilar através de avaliações clínicas e avaliações da severidade da queratose pilar através da contagem de lesões e sua diferença de cor em relação à pele adjacente através de registro fotográfico. As avaliações foram realizadas no inicio (D0) e após 30 dias de uso do produto (D30).

[113] A queratose pilar apresenta um aspecto caracterizado pela presença de pontos avermelhados na pele. Foi utilizada uma câmera fotográfica para captação de imagem.

[114] Câmera Canon 3Ti, com duas lâmpadas de luzes contínuas acopladas em um suporte fixo. O voluntário foi posicionado a 90° da estrutura de captação das imagens, expondo a região experimental de um dos braços acometidos pela queratose pilar. Foram realizadas duas captações, a primeira utilizou duas lâmpadas de luzes contínuas acionadas e a segunda com apenas uma lâmpada acionada. Permitindo analisar a superfície da pela de uma forma mais precisa.

[115] Após recorte e filtragem, o software de análise de imagens conta automaticamente o número de pontos escuros da imagem.

[116] Cada medida é formada pelo número de pontos escuros e a diferença de cor entre estes pontos e a pele adjacente. Um produto eficaz no tratamento da queratose pilar irá diminuir o número de pontos escuros e/ou a diferença de cor entre estes pontos e a pele adjacente.

[117] O produto foi aplicado pela manhã e a noite em todo o corpo com a pele limpa (ou após banho), massageando suavemente até completa absorção. Foi recomendado hidratar sempre a pele após o banho, com a pele ainda úmida.

[118] Observou-se que o produto investigacional promoveu uma melhora estatisticamente significativa (p<0,05) dos parâmetros quantidade e tamanho de lesões de queratose pilar além da hidratação e maciez da região afetada, após 30 dias de estudo.

[119] O gráfico da figura 11 apresenta as médias das notas obtidas nas avaliações clínicas, realizadas em D0 (antes da utilização do produto investigacional) e após 30 dias (D30) de estudo. A diminuição das médias das notas corresponde à melhora dos itens avaliados.

[120] Observou-se que o produto investigacional promoveu uma melhora estatisticamente significativa (p<0,05) de todos os parâmetros, após 30 dias de estudo.

[121] Também se observou que o produto investigacional promoveu diminuição estatisticamente significativa (p<0,05) na quantidade de lesões de queratose pilar, após 30 dias de uso do produto investigacional.

[122] Além disso, o produto investigacional promoveu homogeneização de coloração estatisticamente significativa (p<0,05) na região afetada pelas lesões de queratose pilar, após 30 dias de uso do produto investigacional.

[123] O gráfico da figura 12 apresenta as médias dos valores obtidos através da análise de contagem de lesões realizadas em D0 (antes da utilização do produto investigacional) e após 30 dias (D30) de estudo. A diminuição das médias das notas corresponde à diminuição de lesões de queratose pilar.

[124] Observou-se que o produto investigacional promoveu diminuição estatisticamente significativa (p<0,05) na quantidade de lesões de queratose pilar, apos 30 dias de uso do produto investigacional.

[125] O gráfico a seguir apresenta as médias dos valores obtidos através da avaliação de diferença de coloração da região afetada pelas lesões de queratose pilar realizadas em D0 (antes da utilização do produto investigacional) e após 30 dias (D30) de estudo. A diminuição das médias das notas corresponde à homogeneização da região.

[126] Observou-se que o produto investigacional promoveu homogeneização de coloração estatisticamente significativa (p<0,05) na região afetada pelas lesões de queratose pilar, após 30 dias de estudo. Exemplo 5 - Avaliação de Eficácia de um Produto Investigacional em Pele Ressecada - Estudo Clínico e Instrumental.

[127] Foi avaliada a eficácia de um produto investigacional no ressecamento de joelhos, cotovelos e calcanhares através de avaliações clínicas e instrumentais realizadas no inicio e final do estudo.

[128] Aplicou-se o produto pela manhã e a noite em todo o corpo com a pele limpa (ou após o banho), massageando suavemente até completa absorção. Hidratou-se sempre a pele após o banho, com a pele ainda úmida.

[129] O equipamento Corneometer® MPA 580 (Courage & Khazaka) mediu a hidratação da pele por capacitância. Quanto maior a quantidade de água presente na pele, mais elevado é o resultado obtido, portanto espera-se que os valores aumentem após a aplicação do produto. As medidas são indolores e não invasivas.

[130] O equipamento fotográfico CANON modelo T3i foi utilizado para a documentação fotográfica nos tempos experimentais T0 e T30. O registro foi de forma padronizada para posterior avaliação de tonalidade e aspecto geral dos joelhos, cotovelos e calcanhares através de comparação dos registros pelo médico investigador.

[131] O exame de ultrassom foi realizado a partir do equipamento Voluson E (GE Healthcare) multicanal com doppler colorido e com probe de frequência de até 15 MHz, que permite alta resolução, mas baixa penetração. Os exames foram realizados nos joelhos, cotovelos e calcanhares por uma médica ultrassonografista, que avaliou as características morfológicas e mediu a espessura da epiderme para comparação entre os diferentes tempos experimentais.

[132] Observou-se que o produto investigacional proporcionou melhora de todos os parâmetros avaliados, sendo estatisticamente significativa (p<0,05) para hidratação, maciez e uniformidade do tom da pele nas regiões dos cotovelos e joelho e na região dos calcanhares a melhora foi estatisticamente significativa (p<0,05) para hidratação, maciez e espessura da pele após 28 dias de uso.

[133] O produto investigacional proporcionou melhora da hidratação (conteúdo hídrico da camada córnea) nos cotovelos, joelhos e calcanhares estatisticamente significativa (p<0,05) após 28 dias de uso. O produto investigacional proporcionou um aumento estatisticamente significativo (p<0,05) da espessura da derme (medida ultrassonográfica) da região dos cotovelos, joelhos e calcanhares após 28 dias de uso contínuo do produto.

Claims (14)

1. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA caracterizada pelo fato de estar na forma de uma loção que compreende: (a) ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada; (b) ácido glicólico livre e /ou em solução; e (c) excipientes cosmeticamente aceitáveis.

2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo componente (a) compreender ácido glicólico, glicerina, goma Caesalpinia spinosa, fenoxietanol, caprilil glicol e etilhexilglicerina.

3. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada por compreender de cerca de 1,05% a cerca de 2,45% cerca de ácido glicólico em matriz nano de galactomananas com liberação controlada, e cerca de 6 a cerca de 14% de ácido glicólico livre e /ou em solução.

4. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo componente (c) compreender emulsionantes, estabilizadores de emulsão, formadores de filme, antioxidantes, corretores de pH, veículos, ou misturas destes.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo componente (c) compreender EDTA dissódico, álcool cetearílico, gliceril estearato, cera alba, octildodecanol, acetato de tocoferol, poliacrilato- 13, poliisobuteno, polisorbato 20, isostearato sorbitano, hidróxido de sódio, triglicerídeos de ácidos caprílico/cáprico, glicerídeos de soja, glicerina/perfume/fenoxietanol /caprilil glicol água, ou misturas destes.

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada por compreender adicionalmente agentes condicionantes selecionados de manteiga de Butyrospermum parkii ou manteiga de Garcinia indica, sozinhos ou em combinação.

7. MÉTODO PARA O CUIDADO DA PELE, caracterizado pelo fato de compreender a aplicação tópica à pele de uma quantidade cosmeticamente eficaz da composição conforme definida em uma das reivindicações 1 a 6.

8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato da aplicação ocorrer pelo menos duas vezes ao dia.

9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato da aplicação ser no rosto, orelhas, nariz, bochecha, queixo, braços, cotovelos, mãos, dedos, joelhos, coxas, nádegas e/ou calcanhares.

10. USO COSMÉTICO, da composição conforme definida em uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de ser para o cuidado da pele.

11. USO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de ser para hidratação da pele e/ou renovação celular.

12. USO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para os cuidados de regiões da pele que apresentam áreas ásperas e/ou espessas e/ou queratose pilar.

13. USO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser nos cotovelos, joelhos e/ou calcanhares.

14. PRODUTO COSMÉTICO PARA O CUIDADO DA PELE, caracterizado pelo fato de ser sem enxague, particularmente uma loção hidratante, que compreende a composição conforme definida em uma das reivindicações 1 a 6.

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