BR102014031869A2

BR102014031869A2 - multi-dose pipettor bottle and its use

Info

Publication number: BR102014031869A2
Application number: BR102014031869A
Authority: BR
Inventors: Alessandra Aparecida Vireque; Anderson Soares Da Silva
Original assignee: Invitra Tecnologia Da Reprodução Assistida Ltda
Priority date: 2014-12-18
Filing date: 2014-12-18
Publication date: 2016-06-21
Also published as: WO2016094984A1

Abstract

frasco pipetador multidoses e seu uso. a presente invenção se refere de um frasco pipetador multidoses (1) que é consistido de um corpo (2), uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) e, opcionalmente um elemento filtrante de proteção (5), que serve para a dispensação de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (tra) que envolva a manipulação in vitro; e seu uso para procedimentos in vitro de cultivo e vitrificação de células-tronco de mamíferos em sistema de microgotas.Multidose pipettor bottle and its use. The present invention relates to a multi-dose pipettor vial (1) consisting of a body (2), a nozzle (3) and a reuse cap (4) and optionally a protective filter element (5) which serves for the dispensing of fluids useful in assisted reproduction (tra) technologies involving in vitro manipulation; and its use for in vitro procedures for culturing and vitrifying mammalian stem cells in a micro droplet system.

Description

FRASCO PIPETADOR MULTIDOSES E SEU USOMulti-dose PIPE BOTTLE AND ITS USE

CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF INVENTION

[001] A presente invenção pertence ao campo dos recipientes especialmente adaptados para finalidades médicas, especialmente, ao campo dos recipientes para armazenar e administrar fluidos, mais especificamente ainda, ao campo das ampolas.The present invention belongs to the field of containers specially adapted for medical purposes, especially to the field of containers for storing and administering fluids, more specifically to the field of ampoules.

ESTADO DA TÉCNICATECHNICAL STATE

[002] Os meios de cultura e soluções crioprotetoras para uso em. Tecnologia da Reprodução Assistida (TRA), em procedimentos de cultivo e congelamento de óvulos e embriões, são acondicionados e comercializados em containers para várias doses, como garrafas plásticas de poliestireno em volumes de meios de cultura que variam de 20 a 1.00 ml, ou em mícrotubos com capacidade de 0,5 a 3 mL contendo meios crioprotetores, Estes containers apresentam tampas rosqueadas e a retirada do produto é feita com o auxílio de uma ponteira acoplada a. um micropipetador e implica em vários procedimentos ou etapas que demandam tempo e aumentam o risco de contaminação do produto remanescente no frasco e das células que passam, por manipulação in vxtro, [003] Durantes estes procedimentos, o contato da ponteira com. qualquer objeto não estéril dentro da capela de fluxo laminar ou com o manipulador pode potencialmente introduzir contaminação no frasco de meio cultura e/ou nas células que estão sendo manipuladas. Todos os procedimentos ín vitro de manipulação de óvulos, embriões, células-tronco e células somáticas de um modo geral implicam em perda de viabilidade celular devido a alterações de temperatura, suscetibilidade à contaminação pelo ar atmosférico, pH e osmolalídade de soluções e meios de cultura. Dessa forma, o tempo de exposição da célula, particularmente óvulos e embriões, a estes fatores externos pode potencialmente afetar as taxas de sucesso do desenvolvimento embrionário e gestação em um serviço de reprodução humana assistida. Em especial, alterações de osmolalídade (medida da concentração de saiotes) nos meios de cultivo que podem ocorrer durante a confecção das microgotas devido à alta relação superfície; volume e são tempo-dependentes, [004] O aumento da taxa de evaporação das microgotas expostas às superfícies aquecidas a 37°C e ao fluxo laminar de ar do ambiente laboratorial pode induzir aumentos significativos na osmolalídade nas microgotas de até 40 mOsm/kg em intervalos de tempo tão curtos quanto 5 minutos e tem impacto negativo no desenvolvimento embrionário, podendo induzir apoptose e alterar os padrões de expressão gênica de óvulos e embriões cultivados in vítro. Alguns estudos recentes têm relatado o aumento de risco de alterações epigenéticas e complicações futuras como dislipidemias, diabetes, doenças cardiovaseulares, etc. em bebês concebidos por meio de técnica de reprodução assistida devido ao ambiente in vítro.[002] Culture media and cryoprotective solutions for use in. Assisted Reproduction Technology (ART), in the cultivation and freezing procedures of eggs and embryos, are packaged and marketed in multi-dose containers such as polystyrene plastic bottles in culture media volumes ranging from 20 to 1.00 ml, or in 0.5 to 3 mL microtubes containing cryoprotectant media. These containers have threaded lids and the product is removed with the help of a tip attached to. It is a micropipettor and involves a number of time-consuming procedures or steps that increase the risk of contamination of the product remaining in the vial and the cells that pass through in vxtro handling. Any non-sterile object inside the laminar flow hood or with the manipulator could potentially introduce contamination into the culture medium vial and / or cells being manipulated. All in vitro procedures for handling eggs, embryos, stem cells and somatic cells generally result in loss of cell viability due to temperature changes, susceptibility to atmospheric contamination, pH and osmolality of solutions and culture media. . Thus, the exposure time of the cell, particularly eggs and embryos, to these external factors can potentially affect embryonic development and pregnancy success rates in an assisted human reproduction service. In particular, changes in osmolality (measured by the concentration of petticoats) in the culture media that may occur during the preparation of the micro droplets due to the high surface ratio; Increased evaporation rate of micro-droplets exposed to surfaces heated to 37 ° C and laminar airflow from the laboratory environment may induce significant increases in micro-droplet osmolality up to 40 mOsm / kg in time intervals as short as 5 minutes and have a negative impact on embryonic development and may induce apoptosis and alter gene expression patterns of in vitro cultured eggs and embryos. Some recent studies have reported an increased risk of epigenetic changes and future complications such as dyslipidemia, diabetes, cardiovascular disease, etc. in babies conceived through assisted reproduction technique due to the in vitro environment.

[005] Neste cenário, é possível mensurar o quão importante é o controle de qualidade e biossegurança dos procedimentos de reprodução humana assistida. Na reprodução assistida animal, incluindo bovinos, equinos e outros animais domésticos, os óvulos e embriões são manipulados em condições semelhantes à humana e a perda de eficiência das técnicas ín vitro e as ocorrências de contaminação são muito comuns, causando grandes prejuízos às empresas prestadoras de serviço em biotecnologia da reprodução e no avanço dos programas de melhoramento genético de rebanho bovino. As gotas de meio de cultura ou meios crioprotetores usados em TRA fornecem um microambíente bem definido e potencialmente estéril no qual as células podem ser cultivadas individualmente ou em pools, de forma controlada. Além disso, permitem que a escala dos procedimentos de cultivo sejam reduzidos potencialmente de volumes da ordem de mL para pL, com uma redução concomitante na utilização de reagentes e células.[005] In this scenario, it is possible to measure how important quality control and biosecurity are in assisted human reproduction procedures. In animal assisted reproduction, including cattle, horses and other domestic animals, eggs and embryos are handled under human-like conditions and the loss of efficiency of in vitro techniques and occurrences of contamination are very common, causing major damage to the companies providing reproductive biotechnology service and the advancement of cattle breeding programs. Drops of culture medium or cryoprotectant media used in TRA provide a well-defined and potentially sterile microenvironment in which cells can be cultured individually or in pools in a controlled manner. In addition, they allow the scale of cultivation procedures to be potentially reduced from mL to pL volumes, with a concomitant reduction in reagent and cell utilization.

[006] Atualmente, há uma grande variedade de embalagens multidoses para díspensação de fluídos ou líquidos comercialmente disponíveis, em que estas apresentam variados formatos. Entretanto, nenhum dos documentos do estado da técnica descreve embalagens delineadas para aplicação de microgotas em. técnicas de fertilização in vitro.[006] There are currently a wide variety of commercially available multi-dose fluid or liquid dispensing packages in a variety of shapes. However, none of the state-of-the-art documents describe outlined packages for microtrop application on. in vitro fertilization techniques.

[007] 0 documento de anterioridade 0S2004010242 descreve uma embalagem para várias doses de um líquido estéril e a mesma possui um. filtro de filtraçâo. Ê importante ressaltar que este invento se refere a métodos para administração de agentes terapêuticos e o dispositivo de filtraçâo associado com solução bacteriostática consiste em um sistema fechado e complexo para doseamento de fármacos para uso humano díferentemente da invenção presente.Prior document 0S2004010242 describes a multi-dose package of a sterile liquid and it has one. filtration filter. Importantly, this invention relates to methods for administering therapeutic agents and the filtration device associated with bacteriostatic solution consists of a closed and complex human drug dosing system differing from the present invention.

[008] Os documentos W00050066 (Al), BR0306181 (A) e BRPI0806302 (A2) citam kits farmacêuticos para a realização de técnicas de fertilização ín vitro, entretanto nenhum dos documentos relata embalagens raultidoses delineadas para técnicas de fertilização in vitro.[008] Documents W00050066 (Al), BR0306181 (A) and BRPI0806302 (A2) cite pharmaceutical kits for performing in vitro fertilization techniques, however none of the documents report delineated packaging designed for in vitro fertilization techniques.

[009] Portanto considerando que o ganho de tempo nos procedimentos in vitro, sobretudo durante a confecção de placas contendo raicrogotas de meios de cultura e de meios crioprotetores, pode potencialmente contribuir para evitar alterações de osmolaridade, pH e contaminação nos líquidos utilizados em TRA e melhorar o desenvolvimento embrionário, o estado da técnica não resolve o problema proposto.Therefore, considering that the gain in time in in vitro procedures, especially during the preparation of plates containing rootstocks of culture media and cryoprotectant media, can potentially contribute to avoid changes in osmolarity, pH and contamination in liquids used in TRA and improve embryonic development, the state of the art does not solve the proposed problem.

OBJETIVO DA INVENÇÃOPURPOSE OF THE INVENTION

[010] Um. objetivo da presente invenção é propor um frasco pipetador raultidoses delineado para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA).[010] One object of the present invention is to propose an outlined raultidosis pipettor bottle for fluid dispensing in assisted reproduction (TRA) techniques.

[011] Outro objetivo da presente invenção é propor o uso do frasco pipetador raultidoses para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA).[011] Another object of the present invention is to propose the use of the raultidoses pipettor bottle for fluid dispensing in assisted reproduction (TRA) techniques.

SUMÁRIO DA. INVENÇÃOSUMMARY OF. INVENTION

[012] A presente invenção trata de um frasco pipetador raultidoses consistido de um corpo acoplado a uma. ponteira alongada e, uma tampa de reuso que serve para a dispensação de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA) dispensando o uso de micropipetadores e prolongando a validade do fluído armazenado.[012] The present invention relates to a multi-dose pipettor flask consisting of a body coupled to one. elongated nozzle and a reuse cap that serves to dispense fluids useful in assisted reproduction (TRA) technologies by dispensing with the use of micropipetators and extending the validity of the stored fluid.

[013] A invenção trata ainda do uso do frasco pipetador raultidoses para a dispensação de fluidos era técnicas de reprodução assistida (TRA), tais como, procedimentos in vitro de lavagem, manipulação e cultivo de oócitos e embriões de animais, melhorando assim, o controle de qualidade das técnicas laboratoriais e a qualidade dos embriões produzidos.[013] The invention further relates to the use of the raultidosis pipettor bottle for fluid dispensing in assisted reproduction (TRA) techniques such as in vitro washing, manipulation and culture procedures of oocytes and animal embryos, thereby improving the quality control of laboratory techniques and the quality of the embryos produced.

[014] O frasco pipetador foi delineado para impedir a entrada da ponteira de micropipetadores em seu interior e dessa forma potênciaImente garantir o uso asséptico de seu conteúdo multidoses, atendendo às normas de bíossegurança nacionais e internacionais quanto à contaminação dos meios de cultura e outras soluções usadas em. TRA humana por partículas suspensas no ar ambiente ou microorganismos, tal como, por exemplo, a norma RDC n°33/2006 da An.visa. Além disso, o reduzido diâmetro de abertura do bico do frasco e adicionalmente o uso do elemento filtrante de proteção eliminam a interface do produto com o ar ambiente, evitando riscos de contaminação pela entrada de partículas ou microorganismos em suspensão, bem como reações de oxidação promovidas pelo oxigênio do ar, BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS[014] The pipettor bottle has been designed to prevent the micropipetator tip from entering the pipette and thereby ensuring aseptic use of its multi-dose content, meeting national and international biosafety standards for contamination of culture media and other solutions. used in. Human TRA by particles suspended in ambient air or microorganisms, such as, for example, An.visa RDC Standard No. 33/2006. In addition, the small opening diameter of the bottle nozzle and additionally the use of the protective filter element eliminates the interface of the product with ambient air, avoiding risks of contamination by the entry of suspended particles or microorganisms, as well as promoted oxidation reactions. by air oxygen, BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS

[001] Para se obter uma total e completa visualização do objeto desta patente de invenção, são apresentados os desenhos aos quais se faz referências, conforme abaixo.In order to obtain a complete and complete view of the subject matter of this patent, the drawings to which reference is made are given, as below.

[002 ] A Figura 1 mostra a vista frontal do frasco pipetador multidoses com formato cilíndrico vedado.Figure 1 shows the front view of the sealed cylindrical shaped multi-dose pipettor vial.

[003] A Figura 2 mostra o frasco pipetador multidoses com a tampa, de reus-o removida.Figure 2 shows the multi-dose pipettor vial with the cap removed for reuse.

[004.] A Figura 3 apresenta o elemento filtrante de proteção.[004.] Figure 3 shows the protective filter element.

[005] A Figura 4 mostra a tampa de ultra filtração acoplada ao frasco pipetador multidoses para. uso durante os procedimentos ín vit.ro.Figure 4 shows the ultra filtration cap attached to the multi-dose pipettor vial for. use during vitrine procedures.

[006] A Figura 5 representa um exemplo do uso do frasco pipetador multidoses para produção de microgotas esféricas (ME) de fluídos em placas de cultura (PC).[006] Figure 5 is an example of the use of the multi-dose pipettor flask for producing spherical microglet (ME) fluid in culture plates (PC).

[007] A Figura 6 representa um exemplo do uso do frasco pípetador muitidoses para dlspensação (D) rápida de fluidos.Figure 6 is an example of the use of the multipeptide vial for rapid fluid dispensing (D).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃODETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[008] Ά presente invenção se refere a. um frasco pipetador multidoses (1) consistido de um corpo (2) , uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) que serve para a dlspensação de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA). Opcionalmente, o frasco pipetador (1) pode conter ura elemento filtrante (5) de proteção que evita o contato e contaminação da ponteira (3) durante o uso e impede o fluxo retrógrado de soluções pípetadas pelo frasco < 1) .[008] The present invention relates to. a multi-dose pipettor vial (1) consisting of a body (2), a nozzle (3) and a reuse cap (4) for dispensing fluids useful in assisted reproduction (TRA) technologies. Optionally, the pipettor bottle (1) may contain a protective filter element (5) which prevents contact and contamination of the tip (3) during use and prevents the backward flow of solutions poured into the bottle <1).

[009] Para fins desta invenção, tecnologia de reprodução assistida (TRA) é qualquer tecnologia que envolva a manipulação in vitro d.e óvulos e embriões de animais pertencentes ao grupo consistido de humanos roedores, bovinos, caprinos, equinos, suínos e outros animais domésticos. Ainda para fins desta invenção, fluídos úteis nas tecnologias da reprodução assistida são líquidos utilizados em TRA, tais como, meios de cultura, óleo mineral, soluções e outros.For purposes of this invention, assisted reproduction technology (TRA) is any technology that involves in vitro manipulation of ova and embryos of animals belonging to the group consisting of rodent humans, cattle, goats, horses, pigs and other domestic animals. Still for purposes of this invention, fluids useful in assisted reproduction technologies are liquids used in TRA, such as culture media, mineral oil, solutions and the like.

[0103 O corpo (.2) tem formato oval ou cilíndrico e um fundo plano que permite o melhor manuseio do frasco (1) evitando o derramamento de fluidos e contaminação da superfície de trabalho.[0103] The body (.2) has an oval or cylindrical shape and a flat bottom that allows for the best handling of the bottle (1) avoiding fluid spillage and contamination of the work surface.

[011] O corpo comporta um volume de fluidos de entre 0,5 a 20 ml; é feito de material polímérico e, se liga à ponteira (3) em sua porção superior.The body has a volume of fluids of between 0.5 to 20 ml; It is made of polymeric material and attaches to the tip (3) in its upper portion.

[0;12] Preferencialmente, o material polímérico é o pol.ietile.no, pois este material pcliinéríco possui um grau de deformação especifico para atender a funcionalidade desejada do frasco (1), ou seja, favorecer a dispensação de fluidos úteis em TRA.[0; 12] Preferably, the polymeric material is polyethylene, as this polymeric material has a specific degree of deformation to meet the desired functionality of the vial (1), ie, to dispense useful fluids in TRA .

[013] A ponteira (3.) é unida ao corpo [2} e tem um formato de um cilindro alongado com a abertura de salda arredondada tendo um diâmetro entre 0,5 a 3 mm, A mesma serve para facilitar a dispensação do fluido útil em TRA, por exemplo, dentro de placas de cultura, [014.] A ponteira (3) facilita o manuseio do frasco (1) dentro das placas de cultura e possibilita a confecção de microgotas idealmente de conformação esférica e sem espalhamento. Estas propriedades são importantes para a estabilidade da rrlcrogota e sua composição química. Assim, como a forma da microgota controla a relação superfície: volume e a taxa de evaporação, estas tem implicação direta nas propriedades osm.6ti.cas dos meios de cultura, em especial., os meios de cultura utilizados em TRA.[013] The ferrule (3.) is attached to the body [2} and is shaped like an elongated cylinder with a rounded outlet opening having a diameter of 0.5 to 3 mm. It serves to facilitate fluid dispensing. useful in TRA, for example, inside culture plates, [014.] Tip (3) facilitates the handling of the vial (1) within culture plates and allows for the making of optimally spherical, non-sputtering microdroplets. These properties are important for the stability of the macrogot and its chemical composition. Thus, as the shape of the micro droplet controls the surface to volume ratio and the evaporation rate, these have a direct implication on the osmotic properties of the culture media, in particular the culture media used in TRA.

[.015 ] Esta ponteira. (3) torna possível. a transferência direta do meio de cultura e outras soluções para placas de cultura sem uso de dispositivos, tal como, raicropipetas, e seis etapas intermediárias, [0.16.] Na .modalidade preferida da. invenção, a ponteira (3) favorece a geração de microgotas, Deve ser evidente para os especialistas na área da reprodução assistida, que o período de tempo para. a preparação das microgotas antes de ser adicionada a cobertura de óleo é responsável por alterações nas características do meio de cultura e, portanto, é considerada uma variável importante.[.015] This tip. (3) makes it possible. direct transfer of culture medium and other solutions to culture plates without the use of devices such as ricropipettes, and six intermediate steps, [0.16.]. In this invention, the nozzle (3) favors the generation of micro drops. It should be apparent to those skilled in the field of assisted reproduction that the time period stops. The preparation of micro drops before being added to the oil cover is responsible for changes in the characteristics of the culture medium and is therefore considered an important variable.

[017] Assim, a modalidade preferida da presente invenção é adequada para o preparo de microgotas pelo método "wash-drop" no qual as microgotas são pípetadas r.a placa, cobertas com óleo mineral, removidas e substituídas por meio de cultura fresco.Thus, the preferred embodiment of the present invention is suitable for the preparation of microtropes by the wash-drop method in which the microtropes are spiked onto the plate, covered with mineral oil, removed and replaced with fresh culture.

[018] Em uma modalidade alternativa, da invenção a ponteira (3) favorece a liberação de um. fluxo contínuo do fluido.[018] In an alternative embodiment of the invention the nozzle (3) favors the release of one. continuous flow of fluid.

[019] A tampa de reuso (4) tem. uma haste (4.1) de vedação do frasco pipetador (1). Em uma. modalidade opcional da invenção, o frasco pipetador (1) é consistido ainda de um elemento filtrante (5) de material polimérico dotado de uma membrana. (5.1) com poros de 0,2 μτη, posicionado na extremidade da ponteira (3).[019] The reuse cover (4) has. a sealing rod (4.1) from the pipettor bottle (1). In a. An optional embodiment of the invention, the pipettor bottle (1) is further comprised of a filter element (5) of polymeric material having a membrane. (5.1) with pores of 0.2 μτη, positioned at the tip end (3).

[020] A invenção trata ainda do uso do frasco pipetador muitidoses (1) consistido de um corpo (2), uma ponteira (3.) e, uma tampa de reuso (4) e opcionalmente, um elemento filtrante de proteção (5) para a dispensação de fluidos em. técnicas de reprodução assistida (TRA) que impede a contaminação da ponteira (3) e do conteúdo no interior do frasco (1) que pode ocorrer devido a refluxo de fluido durante o uso. P re f erencialmente o uso deste frasco é voltado para procedimentos ín vitro de cultivo e vitrifícação de oócitos, embriões e células-tronco de mamíferos em sistema, de microgotas.[020] The invention further relates to the use of the multi-dose pipettor bottle (1) consisting of a body (2), a nozzle (3.) and a reuse cap (4) and optionally a protective filter element (5). for fluid dispensing in. assisted reproduction (TRA) techniques that prevent contamination of the tip (3) and contents inside the vial (1) that may occur due to fluid reflux during use. Preferably, the use of this flask is intended for in vitro procedures for culturing and vitrifying oocytes, embryos and mammalian stem cells in a micro-droplet system.

[021] Embora a invenção tenha sido amplamente descrita, é óbvio pa.ra aqueles versados na técnica que várias alterações e modificações podem, ser feitas sem que as referidas alterações não estejam cobertas pelo escopo da. invenção. oi? Tt/TMn τη «sAlthough the invention has been widely described, it is obvious to those skilled in the art that various changes and modifications may be made without such changes being covered by the scope of the invention. invention. Hi? Tt / TMn τη «s

Claims

Multidose pipettor bottle (1) characterized in that it consists of a body (2), a tip (3) and a reuse cap (4) which serves to dispense fluids useful in assisted reproduction technologies (TRA5).

2 - Bottle, according to a. claim 1, characterized in that the body {2} has an oval shape and a flat bottom.

Bottle according to Claim 1, characterized in that the body (2) has a cylindrical shape and a flat bottom.

Bottle according to any one of claims 2 or 3, characterized in that the body has a volume of fluids of between 0.5 and 20 ml; be made of polymeric material and attach to the ferrule (3) at its upper portion.

Bottle according to Claim 4, characterized in that the polymeric material is polyethylene.

Bottle according to Claim 1, characterized in that the ferrule (3) is attached to the body (2) and has one. shape of an elongated cylinder with the rounded outlet opening having a diameter of 0.5 to 3 mm.

Fra-sco according to Claim 6, characterized in that the nozzle (3) favors the generation of micro drops.

Bottle according to claim 6, characterized in that the nozzle (3) favors the release of a continuous flow of fluid.

Bottle according to claim 1, characterized in that the reuse cap (4) has a sealing rod (4.1).

Bottle according to Claim 1, characterized in that it optionally contains a filter element (5) made of polyethylene or polypropylene having a membrane with 0.2 μιη pores, positioned at the end of the tip (3).

Use of the multi-dose pipettor bottle according to any one of claims 1 to 10, characterized in that it is for in vitro procedures for culturing and vitrifying mammalian stem cells in a micro-drop system.