BG99153A - Метод за изолиране и пречистване на ловастатин - Google Patents

Abstract

Ловастатинът намира приложение в хуманната медицина като хипохолестеролемично и хиполепемнчно средство. С метода се намаляват броят на технологичните операции и времетраенето им, като се повишава доби вът от краен продукт. Културалният бульон се разрежда с питейна вода в съотношение от 1,2:1 до 1,8:1, за предпочитане 1,5:1. Разреденият бульон се обработва с мек алкализиращ агент до рн 7,6-8 и се на грява при разбъркване до температура от 60 до 650с за 1 1/2 до 2 1/2 часа. Мицелът се филтрира и филтратът се подкислява до рн 5,5-5,9. Следва екстракция на подкисления филтрат с хлороформ в сьотношен ие от 50:2,5 до 50:3,5, за предпочитане 50:3. Лактонизирането на ловастатинхидроксикарбоновата киселина протича в присъствие на сушител и при нагряване. Получената суспензия се охлажда до стайна темпе ратура и се подлага на алкална промивка с разтвор на амониева или калиева основа. При разслояване на получената емулсия хлороформеният слой се концентрира за отделяне на разтворителя. Полученият остат ък се разтваря в н-бутанол, етилацетат, бутилацетат или етанол, при което ловастагинлактонът изкристализира и накрая се прекристализпра из същите разтворители.

Description

Георгиев

ι. ones

България

НА ЮВАСТЛТРШ • ПД дпуд

Изобретението ое отнася до метод за изолиране и пречистване на ловастатин, който намира приложение в хуманната медицина като хипохолестеролемично и хиполепемично средство.

ъ г ’ 4'

ГХШ-Г

Известно е, но ловастатянът биологичен пролучт, предящи— рак от poBo/ovHL' цг.мовс катс напр. Aspltfitfas kllltus MCCλΰο4ί. Химически той представлява ?’-метил-бутелолона киселина 1 ,8 , 7,8, ;.>а-хекоахгдр0-3,7-ди»«етил-8-/^-тетрехидро-·i-хидрокси—

с-сксо-ГН пиуан-	-ил/“ет!<л-л-на;:-тоа мил естер/^-бста, 6-ал8а-диме·
тил—«3— е— -метял— 1 ·	•оксобутокси/лактся е 'Гормул--·' /1/:

Χζ

Известни са методи за изолиране и пречиствано на ловаста тин /1,2 / при които ловатс? т: еът се изолира от ферментационния разтвор чрез подкисляване до рП 5 и екстракция с етилацетат, след което се използват някои от възможните три варианта:

а/ Колонна хроматография и гелхроматография, последвани от двукратно прекристалязиране;

б/ Гелхроматография, комбинирана с препаративна хроматография за разделяне на ловастатин лактон от съответната му киселина;

в/ Получаване на амониева сол и последващо лактонизиране.

Етилацетатният екстракт, съдържащ ловастатин се подлага първоначално на алкална хидролиза при pH 9. Следва кисела реекстракция на водния разтвор със смес хексан:етилацетат в съотношен-е 2:1, както и втора екстракция на водния слой със същите органични разтворители. Отделената органична фаза се суши върху безводен магнезиев сулфат и филтрува. През органичния разтвор се пропуска газообразен амоняк, при което се получава амониева сол» Тя се промива с ацетон и суши на въздух. Прекристализира се из смес хлороформ:метанол:амониева основа 80:20:2. Суспендира ое в толуол и се нагрява при температура 106°С за 2 1/2 часа на обратен хладник. Филтрува се на горещо и филтратът се оставя да престои една нощ при -20°С, за да изкристализира ловастатин лактон. Кристалният продукт се филтрува, промива се със студен толуол и петролев етер и се суши на въздух. Чрез тези методи от 4ии л културална течност се получават 128 г амониева сол, а от тях - 84 г ловастатин лактон.

Недостатък на известните методи е получаване на краен продукт със сравнително невисок добив.

Задача на изобретението е да се разработи метод за изолиране и пречистване на ловастатин е повишен добив на краен продукт.

• * • ·

МШЧШ СЪЯШАСТ ЕД 1<30БР’'Т’ТРЕ70

Методът Съгласно изобретението съдържа следните операции!

^ултуралният булъон/срела се разрежда 1,5 пъти с питейна вода, след което ее алкализипа до pH 7,6 - S е натриев карбонат, загрява ее до 60-05°С за £ паса при разбъркване, като рЕ ка средата се подържа в интервала 7,6 - S /при необходимост се коригира е натриев карбонат/. Филтрува ее и полученият филтрат ое подкиолява до ρΠ 5,5-5,9 о яоб’· оцетна кисел яка· Така обработеният филтрат се подлага на екстракция с хлороформ, като съотношението филтрат!екстрагеят е 5012,· · ⁷'ъм хлороформения екстракт 'се прибавя натриев сулфат /10·' спрямо обема иа хлороформения екстракт изчислено в кг/ и се нагрява 3 часа на обратен хладник при температура 60°- 61°C, при което лоаастатян киселината отделя молекула вода и се превръща в ловаетатин лехтон.

Превръщането се следи хроматографвкп.

Хлорофсрмения екстракт се охлажда до стайна температура и ее промива с амонячна вода /7 - 10·’ / за отстраняване на баластните вещества, след което се дестилира. при обикновено /атмосферно/ налягане до пълно отделяне па разтворителя· губовия остатък ое разтваря /при температура 30°-40°С / е н-бута йод, след което се оставя за кристализация при -5°0 за 24 часа.

Получените кристали ее филтруват и сушат под, вакуум и температура 50°С за 2 часа·

Изсушените кристали се прекристализират из н-бутаяол, след което отново се филтруват и сутет под вахуум при 60°С ва £ часа.

Предимствата на изобретението ее изразяват в повишаване добива на крайния биологичен продукт» зд РЯПЪЛНЖ”У Н/

Пример 1

100 л културална среда /бульон/, със съдържание на ловастатин « ·

6Θ0 гами/мл, изчислен като ловастатин лактон, се разреждат до 150 л с питейна вода. Алкализират с.е до рК 7,6 - 8 с натриев карбонат, след което се загряват до 60°-65°С при разбъркване за два часа, като pH на средата се поддържа в интервала 7,6-δ /с натриев карбонат/. След филтруване филтратът, с обем около 135 л се подкислява с 50$ на оцетна киселина до pH 5,5 - 5,9, след което същият се екстрахира с 6,75 л хлороформ при стайна температура и разбъркване 15 минути.

След отстояване 1 час, долният хлороформен слой се отделя и към него ое прибавят 600 г натриев сулфат. Суспензията се подлага на кипене при температура 60°- 61°0 на обратен хладник за 3 часа,при което ловастатин хидрокси-карбоновата киселина се лактонизира като се отделя молекула вода. Процесът се следи хроматографски.

След завършване на лактонизацията и охлаждане до 20°-25°С , суспензията се промива с амониева основа/7 '«10' / в съотношение 1:1 при разбъркване за 15 мин. За 1 час получената емулсия се разделя напълно и долният хлороформен слой се отделя и дестилира при обикновено налягане до пълно отстраняване на разтворителя. Полученият кубов остатък се разтваря в 100 мл н-бутанол и се оставя при температура -5°С за 2 часа за кристализация.

Получените кристали се филтруват и сушат под вакуум при темV. пература 50 С до постоянно тегло. Получават се около 41 гр ловастати

Допълнително от матерните луги след обработка се получават ое още2,3гр ловастатин-глактон.

Полученият ловастатин се прекристализира из н-бутанол.

Добивът на ловастатин лактон спрямо съдържанието в културалнат среда е 72 $.

Прекристализираният ловастатин лактон притежава следните физикохимични характеристики:

- Т.Т. - 170° - 171°0

- УВ спектър - макс. - 230 нм,

-1 2970см^

- ИЧ спектър - 3350cm*

237,5 нм, , 1.6 94см'*

246 нм ,

1220 см*^ • · ♦ · · • · ····*·» • · · ··· ·· ·

- Оптично въртене - ЛХ/ ' ° « 325,7

Claims (1)

1. ί. Метод за изолиране и пречистване на ловастатин, х&рактеризиращ се с това, ч* културалната ереда/булъон/ се разрежда е питейна вода пъти, алкалязира се до рй 7,6-8 с натриев каобонат, нагрява се при разбърквано до температура 60 - 65 С за два часа, фия трува се и филтратът се подкислява до pH 5,5- 5,9 с 5<Ж^:-на оаетна киселина.Следва екотракционно пречистване, като подкисленият филтрат се екстрахира с хлороформ в съотношение 5012,5. «Гактонизпрането протича в присъствие на сузител натриев сулфат и нагряване, провежда се алкална промивка/^ъс 7?-1(><· амониева основа/ п след концентриране на хдороформения екстракт се кристализира и прекристализира яз набутано л·