BG105246A - Метод за получаване на растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съединения - Google Patents

Метод за получаване на растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съединения Download PDF

Info

Publication number
BG105246A
BG105246A BG105246A BG10524601A BG105246A BG 105246 A BG105246 A BG 105246A BG 105246 A BG105246 A BG 105246A BG 10524601 A BG10524601 A BG 10524601A BG 105246 A BG105246 A BG 105246A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
plants
plant
flavonoids
flavanone
activity
Prior art date
Application number
BG105246A
Other languages
English (en)
Inventor
Wilhelm Rademacher
Klaus Kraemer
Juergen Schweden
Karin Herbers
Original Assignee
Basf Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US1999/013658 external-priority patent/WO2000078900A1/en
Application filed by Basf Aktiengesellschaft filed Critical Basf Aktiengesellschaft
Publication of BG105246A publication Critical patent/BG105246A/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9771—Ginkgophyta, e.g. Ginkgoaceae [Ginkgo family]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/825—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving pigment biosynthesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/86—Products or compounds obtained by genetic engineering

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до метод за повишаване насъдържанието на флавоноиди в растения, при който с помощта на молекулната генетика се получава растение, в което е понижена активността на ензима флаванон-3-хидроксилаза.

Description

Област на техниката
Настоящето изобретение се отнася до метод за повишаване на съдържанието на флавоноиди и фенолни вещества в растения, характеризиращ се с това, че по метод на молекулната генетика се получава растение, в което е понижена активността на ензима флаванон-3-хидроксилаза.
Освен това методът съгласно изобретението се характеризира с това, че активността на ензима флаванон-3-хидроксилаза се понижава чрез молекулно биологичен метод (напр. Anti-SenseKonstrukt, съсупресия, експресия на специфични антитела или експресия на специфични инхибитори) напълно или частично, за продължително време или за кратко време, в цялото растение или в части от растението.
Друг обект на изобретението са растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съставни вещества, характеризиращи се с това, че е понижена ензимната активност на ензима флаванон-3-хидроксилаза в тях.
Освен това обект на изобретението е използване на растения, получени по метода съгласно изобретението ,· ·.· на части от тези растения, като хранителни средства, кат»? .. ·ώβκη в храните или за получаване на лечебни, подобряващи здс словното състояние или подсилващи средства (сокове, чай, екстракти, /203/02-ПБ ····
ферментационни продукти), за хората или за животни, както и за получаване на козметични продукти.
Предшествуващо състояние на техниката
В растенията са налични различни фенолни вещества, напр. кафеена киселина, ферулова киселина, хлорогенова киселина, галова киселина, евгенол, лигнан, кумарин, лигнин, стилбен, (полидатин, ресвератрол), флавоноиди (флавони, катехини, флаванони, антоцианидини, изофлавони), полиметоксилирани флавони. Съответно феноли са също и основните съставки на много хранителни и вкусови средства. Определени фенолни вещества са от особено значение, тъй като при приемането им с храната те могат да упражняват антиоксидантно действие при човешкия или животинския обмен на веществата (Baum, В.О.; Perun, A.L. Antioxidant efficiency versus structure, Soc. Plast. Engrs Trans 2: 250-257, (1962); Gardner, P.T., McPhail, D.B., Duthie, G.G. Electron spin resonance spectroscopic assessment of the antioxidant potential of teas in aqueous and organic media, J. Sci. Food Agric. 76: 257-262, (1997); Rice-Evans, C.A., Miller, N.J., Pananga, G. Structure-antioxidant activity relationship of flavonoides and phenolic acids, Free Radio. Biol. Med. 20: 933-956, (1996); Salah, N.. Miller, N.J., Paganga, G., Tijburg, L., Bolwell, G.P., RiceEvans, C. Polyphenolic flavonoids as scavenger of aqueous phase radicals and as chain-breaking antioxidants, Arch Biochem Biophys, 322: 339-346, (1995); Stryer, L., Biochemistry S. Francisco: Freeman, (1975); Vieira, 0., Escargueil-Blanc, I., Meilhac, 0., Basile, J.P., Laranjinha, J., Almeida, L., Salvayre, R., Negre-Salvayre, A. Effect of dietary phenolic compounds on apoptosis of human cultured endothelial cells induced by oxidized LDL, Br. J. Pharmacol. 123: 565-573, (1998)). Освен това полифенолите имат многостранно
01/203/02-ПБ • · · ·
действие върху обменните процеси в клетката. Между другото ензимите на сигналтрансдукцията, като протеинкиназа С, тирозин-протеинкиназа и фосфатидилинозитол-3-киназа се модулират (Agullo, G., Gamet-payrastre, L.; Manenti, S., Viala. C., Remesy, C., Chap, H., Payrastre, B., Relationship between flavonoid structure and inhibition of phosphatidilinositol 3-kinase: a comparison with tyrosine kinase and protein Kinase C inhibition, Biochem. Pharmacol. 53: 1649-1657, (1997); Ferriola, P.C., Cody, V., Middleton, E., Protein kinase C inhibition by plant flavonoids. Kinetic mechanisms and structure activity relationship, Biochem Pharmacol. 38: 1 61 7-1 624, (1989); Cushman, M., Nagarathman, D., Burg, D.L., Geahlen, R.L. Synthesis and protein-tyrosine kinase inhibitory activity of flavonoids analogues, J. Meed Chem 34: 798806, (1991), Hagiwara, M., Inoue, S., Tanaka, T., Nunoki K., Ito, M., Hidaka, H., Differential effects of flavonoids as inhibitors of tyrosine protein kinases and serine/'threonin protein kinases, Biochem. Pharmacol. 37: 2987-2992, (1988)), регулират в посока към понижаване способната да се индуцира NO-синтаза (Kobuchi, Н., Droy-Lefaix, М.Т., Christen, Y., Packer, L., Ginkgo biloba extract (EGb761), Inhibitory effect on nitric oxide production in the macrophage cell line RAW 264.7. Biochrem. Pharmacol. 53: 897-903, (1997); и редуцират ген-експрасията напр. на интерлевкини и адхезионни морекули (ICAM-1, VCAM-1) (Kobuchi, Н., Droy-Lefaix,
М.Т., Christen, Y., Packer, L., Ginkgo biloba extract (EGb761), Inhibitory effect on nitric oxide production in the macrophage cell line RAW 264.7. Biochrem. Pharmacol. 53: 897-903, (1997), Wolle, J., Hill, R.R., Ferguson, E., Devall, L.J., Travedi, B.K., Newton, R.S., Saxena, U..Selective inhibition of Tumor necrosis Factor-induced vascular cell adhesion molecule-1 gene expression by a novel
01/203/02-ПБ
flavonoid. Lack of effect on transcriptional factor NF-kB., Atherioscler. Tromb. Vase. Biol. 16: 1501-1508, (1996)). Смята се за потвърдено, че тези действия влияят позитивно за избягване и профилактика на инфаркти, на заболявания на сърцето и кръвоносните съдове, на диабет, на определени видове от различни ракови заболявания, видове тумори и на други хронични заболявания (Bertuglia, S., Malandrino, S., Colantuoni, A., Effects of the natural flavonoid delphiniden on diabetic microangiopathy, Arznei-Forsch./Drug Res., 45: 481-485, (1995); Griffiths, K., Adlercreutz, H., Boyle, P., Denis, L., Nicholson, R.I., Morton, M.S. Nutrition and Cancer, Oxford, Isis Medical Media, (1996); Hertog,
M.G.L., Fesrens, E.J.M., Hollman, P.C.K., Katan, M.B., Kromhout, D., Dietary antioxidant flavonoids and risk of coronary heart disease: the Zutphen elderly study, The Lancet 342: 1007-101 1, (1993); Kapiotis, S., Hermann, M., Held, I., Seelos, C., Ehringer, H., Gmeiner, B.M., Genistein, the dietary-derived angiogenesis inhibitor, prevents LDL oxidation and protects endothelial cells from damage by atherogenic LDL, Arterioscler. Tromb. Vase. Biol., 17: 2868-74, (1997); Stampfer, M.J., Hennekens, C.H., Manson, J.E., Colditz, G.A., Rosner, B., Willet, W.C., Vitamin E consumption and the risk of coronary disease in women, New Engl. J. Med. 328: 1444-1449, (1993); Tijburg, L.B.M., Mattern, T., Folts, J.D., Weisgerber, U.M., Katan, M.B., Tea flavonoids and cardiovascular diseases: a review, Crit Rev. Food Sci. Nutr. 37: 771 -785, (1 997); Kirk, E.A., Sutherland, P., Wang, S.A., Chait, A., LeBoeuf. R C., Dietary isoflavones reduce plasma chelesterol and atherosclerosis in C57BL/6 mice but not LDL receptor-deficient mice, J. Nutr 128: 954-9, (1998)- Zitate -). От подходящи растения са получени вече поредица от лекарствени, здравословни или засилващи организма
/203/02-ПБ средства, действието на които се основава на това, че съдържат фенолни съединения (Gerritsen, М.Е., Carley, W.W., Ranges, G.E.,
Shen, C.P., Phan, S.A., Ligon, G.F., Perry, C.A., Flavonoids inhibit cytokine-induced endothelial cell adhesion protein gene expression, of protein , Chen, Y.C., kinase C and
Huang, nuclear of cancer chemoprevention by apigenin and curcumin
J. Cell Biochem.
Suppl., 28-29: 39-48, 1997; Zi, X.,
Mukhtar, H., Agarval, R,,
Novel cancer chemoprevenctive effects of a flavonoid anti.oxidant promoter
TNF alpha, Biochem. Biophys. Res. Comm. 239: 334-339, 1997. Освен това е известно, че определени растителни храни или призведени от растения вкусови средства имат позитивно въздействие спрямо различни заболявания. Съдържащият се в бялото вино, а особено в червеното вино ресвератрол (заедно с други компоненти) действа например срещу инфаркти на сърдечно-съдовата система и срещу рак (Gehm, B.D., McAndrews, J.М., Chien, Ρ.-Υ, Jameson, J.L. Resveratrol, a polyphenolic compaund found in grapes and wine, is an agonist for estrogen receptor, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 94: 14138-14143 (1997); Jang,
M., Cai, L., Udeani, G.O., Slowing, K.V., Thomas, C.F., Beecher, C.W.W., Fong, H.H.S., Farnsworth, N.R., Kinghorn, A.D., Mehtha, R.G., Moon, R.C., Pezzuto, J.M., Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes, Science, 275:
218-220, (1997). Подобно действие имат вещества като катехин, епикатехин-3-галат, епигалокатехин, епигалокатехин-3-галат, които се намират в листата на чай (Camellia sinensis). Особено напитки, приготвени от неферментирали листа от чай (зелен чай)
·· /203/02-ПБ • ·
оказват положително влияние върху здравето. (Hu, G., Han, С., Chen, J. Inhibition of oncogene expression by green tea and (-)epigallocatechin gallate in mice, Nutr. Cancer 24: 203-209, (1995); Scholz, E., Bertram, B., Camellia sinensis (L.) O. Kuntze. Der Teestrauch. Z. Phytotherapie, 1 7: 235-250, (1995); Yu, R., Jiao, J.J., Duh, J.L., Gudehithlu, K., Tan, T.H., Kong, A.N. Activation of mitogen-activated protein kinases by green tea polyphenols: potential signaling pathways in the regulation of antioxidant responsive elements-mediated phase II enzyme gene expression, Carcinigenesis 18: 451-456, (1997); Jankun, J., Selman, S.H., Swiercz, R., Why drinking green tea could prevent cancer, Nature 387: 561, (1997). Освен това също полиметоксилираните флавони от цитрусовите плодове проявяват потенциална антитуморна активност (Chem. J., Montanari, A.М., Widmer, W.W., Two new polymethoxylierte flavone, a class of compounds with potential anticancer activity, isolated from cold pressed dancy tangerine peel oil solids, J. Agric Food Chem. 45: 364-368, (1997)).
Задача на настоящето изобретение е да се създаде прост за вещества.
изпълнение и икономически изгоден метод за повишаване на съдържанието на флавоноиди и фенолни съставки в културни растения.
Техническа същност на изобретението
На базата на физиологични изследвания при използване на регулатори на растежа от групата на ацилциклохексадиони сега по изненадващ начин е създаден генно-технологичен мет д с помощта на който се получават растения с повишено сь.г о-кание на лечебни, подобряващи здравето или засилващи органи ма ····
01/203/02-ПБ
Ацилциклохексадиони, като прохексадион-Са и тринексапакетил (по-старото наименование е цимектакарб) се използват като биорегулатори за забавяне на израстване на растенията (на дължина). Тяхното биорегулиращо действие се проявява чрез блокиране на биосинтеза на гиберилините, причиняващи израстване на дължина. При това те въз основа на тяхното структурно сродство с 2-оксоглутаровата киселина инхибират определени диоксигенази, които се нуждаят от 2-оксоглутарова киселина като Ко-субстрат (Rademacher, W., Biochemical effects of plant growth retardants, in: Plant Biochemical Regulators, Gausman, HW (ed.), Marcel Dekker, Inc., New York, стр. 169-200 (1991)). Известно е, че такива съединения играят роля също при обмена на феноли и така при много растения може да се въздейства за инхибиране на образуването на антоциани (Rademacher, W. et al., The mode of action of acylcyclohexanediones - a new type of growth retardant, in: Progress in Plant Growth Regulation, Karssen, CM, van Loon, LC, Vreugdenhil, D (eds.), Kluwer Academic Publishers, Dordrecht (1992)). Подобни ефекти на фенолните съставни вещества са посочени като причина за страничното действие на прохексадион-Са срещу главня (Rademacher, W et al., Prohexadione-Ca - a new plant growth regulator for apple with interesting biochemical features, Poster auf dem 25-th Annual Meeting of the Plant Growth Regulation Society of America, 7-10. Juli 1998, Chicago). A. Lux-Endrich (Dissertation Technische Universitaet Muenchen in Weihenstephan, 1998) установявя по време на своите изследвания относно механизма на действие на прохексадион-Са срещу главня, че в клетъчните култури на ябълка чрез прохексадион-Са се достига до многократно повишаване на съдържанието на фенолни вещества и че при това се установяват поредица от
Η
01/203/02-ПБ
феноли, които обичайно не са налични. В рамките на това изследване е установено също, че под влияние на прохексадион-Са се наблюдават относително високи количества от лутеолифлаван и ериодиктиол в тъкани на ябълка. Лутеолифлаван обичайно не се наблюдава във филизни тъкани от ябълка, а ериодиктолът е наличен в малки количества само като междинен продукт при обмяната на флавоноидни вещества. Очакваните флавоноиди катехин и цианидин обаче не са доказани в изследваните тъкани или са установени само в значително намалени количества. (S. Roemmelt et al, Vortrag 8-th International Work- shop on Fire Blight, Kusadasi, Tuerkei, 12-15 Oktober 1998).
Може да се смята за потвърдено, че прохексадион-Са, тринексапак-етил и други ацилциклохексадиони инхибират зависимите от 2-оксоглутаровата киселина хидроксилази, които са от значение при обмена на фенолни вещества. При това се касае основно до халконсинтетаза (CHS) и до флаванон-3-хидроксилаза (F3H) (W. Heller und G. Forkmann, Biosynthesis, in: The Flavonoides, Harborne, JB (ed.), Chapman and Hall, New York, 1 988). Bee пак не може да се изключи, че ацилциклохексадионите инхибират също и други, досега непознати хидроксилази, зависими от !
2-оксоглутаровата киселина. Би трябвало освен това да е близкоj
I до ума, че недостиг от катехин, цианидин или други крайни про-j дукти на флавоноидния синтез ще се регистрира от растението и| чрез механизъм на обратна връзка ще се повиши активността на| ключовия ензим фенилаланин-амониева лиаза (PAL). Чрез| следващо инхибиране на CHS и F3H тези флавоноидни крайни ί продукти могат да не се образуват, което ще доведе до едноI
I повишено получаване на лутеолифлаван, ериодиктиол и други феноли (Фиг. 1).|
01/203/02-ПБ
Чрез понижаване на ензимната активност на ензима флаванон-3-хидроксилаза (F3H) се образуват в повишени количества флавоноидите ериодиктиол, проантоцианидин, които са заместени при С-атома на 3-то място с водород, напр. лутеофорол, лутеолифлаван, апигенифлаван и трицетифлаван, както и хомогенни и хетерогенни олигомери и полимери на посочените и на структурно подобни вещества.
Установява се наличие на повишени концентрации на фенолните хидроксиканелена киселина (р-кумаринова, ферулова киселина, синапинова киселина), салицилова киселина или 4-хидроксикумарин, включително на получените от тях хомогенни и хетерогенни олигомери или полимери в растенията след понижаване на ензимната активност на ензима флаванон-3хидроксилаза (F3H). Също така се повишава концентрацията на халкони, като флоретин, и на стилбени, като напр. ресвератрол.
Чрез понижаване на ензимната активност на ензима флаванон-3-хидроксилаза се повишава също и концентрацията на гликозиди на фловоноидите, на фенолните съединения, на халкона и на стилбена.
На базата на тези установени изменения и на направените от тях хипотези се създават генетично променени културни растения, в които активността на флаванон-3-хидроксилазата е понижена частично или напълно, за постоянно или временно, в цялото растение или в отделни органи или тъкани на растението, чрез метода Anti-Sense-Konstrukte, така че в тях се подобрява количествено и качествено съставът на лечебни, здравословни и засилващи съставни вещества.
Методът съгласно изобретението за повишаване на съдържанието на флавоноиди и и фенолни съединения чрез експресия на
Itaaa·
01/203/02-ПБ
флаванон-3-хидроксилаза в Апйзепзе-ориентация може да се приложи успешно при следните растения: грозде, череша, домати, сливи, трънки, боровинки, ягоди, цитрусови плодове (като портокали, грейпфрут), папая, червено зеле, броколи, брюкселско зеле, какао, листно зеле, моркови, магданоз, целина, лук, чесън, чай, кафе, хмел, соя, рапица, овес, пшеница, ръж, Aronia melanocarpa, Ginko biloba, при което методът не трябва да се ограничава само до тях.
Обект на изобретението са освен това растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съставни вещества, получени по метода съгласно изобретението, характеризиращи се с това, че в тях е понижена ензимната активност на ензима флаванон-3-хидроксилаза.
Алтернативно, за получаването на растения, в които е понижена активността на флаванон-3-хидроксилаза с помощта на Anti-sense-технологите, могат да се използват и други известни от литературата методи на молекулната генетика, като съсупресия или експресия на специфични антитела, с цел да се постигне този ефект.
Освен това обект на изобретението е използване на растения, получени по метода съгласно изобретението, или на части от тези растения, като хранителни средства, хранителни добавки или за получаване на лечебни, здравословни или подсилващи средства (сокове, чайове, екстракти, ферментационни продукти) за човека и животните, както за получаване на козметика.
Сега е установено по изненадващ начин, че под влияние на получените по метода съгласно изобретението растения или на части от тези растения, или на произведени от тях продукти (чай, екстракти, ферментационни продукти, сокове и т.н.) се постига:
01/203/02-ПБ ·· ·
1) подобряване на антиокислителния капацитет in vitro (електронен спин-резонанс (ESR), LDL-окисление, тотален антиокислителен капацитет, NO-отстраняване);
2) появяване на модулиращо действие на ензими, преди всичко на ензимите на сигнално преобразуване (протеинкиназа С, тирозин-протеинкиназа, фосфатидилинозитол-3-киназа);
3) индуциране на модулация на редокси-сензитивните транскрипционни фактори (NF-кв, АР-1) в ендотелни клетки, лимфоцити и клетките на гладките мускули;
4) модулиране на регулацията на ген-експресията на определени гени, свързани с патогенезата на възпалителни заболявания (цитокин IL-1 и IL-8, macrophage chemoattractant protein 1 (МСР-1), адхезионните фактори ICAM-1 и VCAM-1);
5) индуциране на антиагрегационно действие;
6) инхибиране на синтеза на холестерин в хепатоцити;
7) проява на антипролифератйвни/антинеопластични ефекти.
Примери за изпълнение на изобретението
Пример 1
Клониране на ген на флаванон-3-хидроксилаза от
Lycopersicon esculentum Mill.cv. Moneymaker
Зрели домати от сорта Lycopersicon esculentum Mill с.ν Moneymaker се измиват, подсушават и с помощта на стерилно острие перикарпът се освобождава от семената, средната носеща част и от твърдите части. Перикарпът (около 50 ; се замразява с течен азот. След това материалът се надробена с миксер. Надробеният материал се смесва в предварителн охладен хаван с 100 ml хомогенизираща среда и се разбърква. Получената суспензия се прехвърля в центрофуга, в която тя се
01/203/02-ПБ ♦··· ··♦
пресова чрез стерилни пропускащи платна. След това се прибавя 1/10 обемни части 10 % SDS и добре се размесва. След престой в продължение на 10 минути върху лед се прибавя 1 обем фенол/хлороформ, центрофугата се затваря и съдържанието й се размесва добре. След центрофугиране в продължение на 15 минути със скорост 4000 rpm остатъкът се прехвърля в нов реакционен съд. Провеждат се три следващи екстракции с фенол/хлороформ и една с хлороформ. След това се прибавя 1 обем 3 М NaAC и 2.5 обема етанол. Утаяването на нуклеинови киселини се провежда в продължение на една нощ при -20°С. На другата сутрин нуклеиновите киселини се гранулират в продължение на 15 минути при скорост 10000 rpm в центрофуга с охлаждане (4°С). Утайката се изважда и гранулите се ресуспендират в 5-10 ml студен 3 М NaAc. Този етап на пречистване се повтаря двукратно. Гранулите се промиват с 80 %-ен етанол. Напълно изсушените гранули се разреждат с около 0.5 ml стерилна DEPC вода и концентрацията на RNA се определя фотометрично.
цд обща RNA (рибонуклеинова киселина) се смесва първоначално с 3.3 μΙ ЗМ разтвор на натриев ацетат, 2 μΙ 1М разтвор на магнезиев сулфат и в съда се долива до краен обем 100 μΙ DEPC вода. Добавя се 1 микролитър от ензима Rnase, несъдържащ Dnase (произв. на Boehringer Mannheim) и пробата се инкубира в продължение на 45 минути при 37°С. След отстраняване на ензима чрез разклащане с фенол/хлороформ/изоамилалкохол се утаява RNA с етанол и гранулите се разреждат с 100 μΙ DEPC-вода. 2.5 μ g RNA от този разтвор чрез транскрипция с един cDNA-кит (Gibco BRL) се превръща в cDNA.
При използване на последователности от аминокиселини, които произхождат от кодирани за флаванон-3-хидроксилаза • · · · • ·
01/203/02-ПБ
cDNA клонове, могат да се идентифицират консервираните области в първичната последователност (Britsch et al., Eur. J. Biochem. 217, 745-754 (1993), които служат като основа за конституиране на дегенерирани PCR олигонуклеотиди. 5’-Олигонуклеотидът се установява при използване на пептидната последователност SRWPDK (аминокиселина 147-152 в последователност FL3H PETHY от Petunia hybrids) и има следната последователност:
5’-ТС1 (А/С) G (A/G) TGG CC(A/C/G) GA (С/Т) АА (А/G) СС-3.
Получената при използване на пептидната последователност DHQAVV (аминокиселина 276281 в последователността FL3H PETHY от Petunia hybrida) последователност на олигонуклеотиди има следния вид:
5‘-СТТ САС АСА (C/G/T) GC (С/Т) TG (A/G)TG (A/G)TC-3.
PCR-реакцията се провежда при използване на tTth-полимераза, производство на Perkin-Elmer, съгласно указанията на производителя. Като шаблон се въвежда 1/8 от cDNA (отговаря на
0.3 цд
RNA). PCR-програмата е следната:
цикъла степен степен степен степен секунди секунди минути минути
Фрагментът се клонира по указанията на производителя във вектор pGEM-T от Promega .
Точността на фрагментите се проверява чрез секвениране.
PCR-фрагментът се изолира при използване на намиращите се в полилинкера на вектора pGEM-T рестрикционни места на скъсвания Ncol и Rstl и получените крайни части се превръщат в равни краища при използване на Т4-полимераза. Този фрагмент • · · · • ·
/203/02-ПБ се клонира в тъп (blunt) нарязан вектор pBinAR (Hoefgen und Willmitzer, Plant Sci. 66: 221-230 (1990)) (вж. фиг. 2). Той съдържа Збв-промотор на CaMV (мозаечен вирус на цветното зеле) (Franck et al., Cell 21: 285-294 (1980) и терминационния сигнал на октопин-синтазния ген (Gielen et al., EMBO J. 3: 835-846 (1984)). Този вектор създава в растението резистентност спрямо антибиотика канамицин. Получените DNA-конструкти съдържат PCRфрагменти в sense- и antisense-ориентация. Методът antisensekonstrukt се използва за получаване на трансгенни растения.
фиг. 2: Фрагмент А (529 Ьр), съдържа Збв-промотор на CaMV (нуклеотиди 6909 до 7437 на мозаичен вирус на цветното зеле), фрагмент В е фрагмент на F3H ген в antisense-ориентация, фрагмент С (192 Вр) съдържа терминаторен сигнал на октопинсинтазен ген.
Клониране на един по-голям cDNA фрагмент на флаванон-3хидроксилаза от Lycopersicon esculentum Mill.cv. Moneymaker при използване на 5’ RACE-система
За да се изключи възможността, че получаването на растение с понижено количество mRNA равновесна течливост на F3H на базата на понижената големина на използваните F3H при метода antisense-konstrukt PCR-фрагменти не е успешно, се налага да се получи втори antisense-konstrukt при използване на по-голям F3H фрагмент.
За целите на клониране на по-голям фрагмент от F3H се използва методът 5‘RACE (System for Rapid amplification of cDNA ends).
• · · · • ·
01/203/02-ПБ
Удължаването на F3H PCR-фрагменти се провежда по метода 5’RACE, при използване на 5’ RACE System for Rapid amplification of cDNA ends, Version 2 ~ 0 von Life Tecgnologies™.
От зрели домати от сорта Lycopersicon esculentum Mill.cv. Moneymaker се изолира обща RNA (вж. по-горе).
Синтезът на първи клон на cDNA се провежда съгласно указанията на производителя при използване на GSP-1 (Gen spezifischer Primer) 5'-TTCACCACTGCCTGGTGGTCC-3’. При включване на Rnase Verdau получената cDNA се пречиства при използване на GlassMAX spin Systems von Life Tecgnologies™, съгласно указанията на производителя.
На 3’-края на пречистената едноклонирана F3H cDNA се присъединява един цитозин хомополимер при използване на терминална дезоксинуклеотидил-трансфераза съгласно указанията на производителя.
Прилагането на 5'-удължената F3H cDNA се провежда при използване на втора ген-специфична основа (GSP-2), която се свързва в областта 3’ преди GSP-1 разпознаващата последователност и по този начин дава възможност за вместена PCR. Като 5' основа се използва получена от производителя 5’RACE abrided anchor primer, която е допълнителна към хомополимерния dCкрай на cDNA.
Полученият по този начин и обозначен като F3Hexten(jed cDNA фрагмент се клонира съгласно указанията на производителя във вектора pGEM-T от Promega.
Идентичността на cDNA се потвърждава чрез секвениране. фрагментът F3HeX|encje(j cDNA се изолира при използване на намиращите се в полилинкера на вектора pGEM-T рестрикционни места на скъсване Ncol и Pstl и получените крайни части се
01/203/02-ПБ
превръщат в.равни краища при използване на Т4-полимераза.
Този фрагмент се клонира в тъп нарязан вектор pBinAR (Hoefgen
und Willmitzer, 1990) (вж. Фиг. 3). Той съдържа 35в-промотор на CaMV (мозаечен вирус на цветното зеле) (Franck et al., 1980) и терминационния сигнал на октопин-синтазния ген (Gielen et al., 1984). Този вектор създава в растението резистентност спрямо антибиотика канамицин. Получените DNA-конструкти съдържат PCR-фрагменти в sense- и antisense-ориентация. Методът antisense-konstrukt се използва за получаване на трансгенни растения.
фиг. 3: фрагмент А (529 Ьр), съдържа 35Б-промотор на CaMV (нуклеотиди 6909 до 7437 на мозаичен вирус на цветното зеле), фрагмент В е фрагмент на F3H ген в antisense-ориентация, фрагмент С (192 Вр) съдържа терминаторен сигнал на октопинсинтазен ген.
Пример 2
Получаване на трансгенен сорт Lycopersicon esculentum
Mill.cv. Moneymaker, който експресира частичен фрагмент на флаванон-3-хидроксилаза в antisense-ориентация
Работи се по метода на Ling et al., Plant Cell Report
847 (1998). Култивирането се провежда при около 22°С часа светлина на 8 часа тъмнина.
7, 843при режим
Семена от домати maker) се инкубират в продължение на 10 минути в разтвор на натриев хипохлорит, след това се промиват 3 - 4 пъп ьс стерилна дестилирана вода и се поставят върху MS среди захароза при pH 6.1 да покълнат. След период на покълване от 7 до 10 дена котиледоните се влагат за трансформация.
/203/02-П Б
Ден 1: Петриеви стъкла със среда MSBN се наслояват с 1.5 ml от 10 дневна суспензионна култура от тютюн. Стъклата се покриват с фолио и се инкубират до следващия ден при стайна температура.
Ден 2: Върху наслоените със суспензионна тютюнева култура петриеви стъкла се поставя стерилна филтърна хартия, свободна от въздушни мехурчета. Отгоре се поставят напречно нарязаните покълнали листа с горната страна насочена надолу. Петриевите стъкла се инкубират 3 дни в културалното помещение.
Ден 5: Агробактерийната култура (LBA4404) се утаява чрез центрофугиране със скорост около 3000 g в продължение на 10 минути и се ресуспендира в MS-среда, така че OD да бъде 0.3. В тази суспензия се поставят късчетата от поникналите листенца, които се инкубират при леко разклащане в продължение на 30 минути при стайна температура. След това късчетата от поникнали листенца се подсушават леко със стерилна филтърна хартия и отново се връщат върху техните изходни съдчета, за да се продължи тяхното съкултивиране в продължение на още 3 дни в културалното помещение.
Ден 8: Съкултивираните късчета от поникнали листенца се поставят върху MSZ2K50 + B и в следващите 4 седмици се култивират в културалното помещение. След това се провежда субкултивиране.
Поникналите филизи се поставят върху среда, индуцираща корени.
След успешно вкореняване растенията могат да се изследват и да се прехвърлят във вегетационна къща.
01/203/02-ПБ
Пример 3
Инхибиране биосинтеза на холестерин в култури с първични хепатоцити от плъхове
Получаване на основните разтвори
От лиофилизат на зрели домати от сорта Moneymaker се получава:
A) само нативния флаванон-3-хидроксилазен ген (контрола) и
B) както е описано в Пример 2 допълнително един частичен фрагмент на флаванон-3-хидроксилаза в Antisense-ориентация се отмерва точно в количество между 10 и 20 mg и се смесва със същото количество диметилсулфоксид, така че се получава основен разтвор на 10 тМ общи флавоноиди. От този разтвор непосредствено преди започване на опита се правят разредени разтвори в културална среда. Разрежданията се правят на 10 стъпала между 10-4 и 10‘8 М.
Получаване на хепатоцитни култури
Първични хепатоцити се получават от дробчета на мъжки плъхове от вида Spraque-Dawley (240-290 g) чрез колагеназна перфузия (Gebhardt et al., Arzneimittel-Forschung/Drug Res. 41: 800-804 (1991/1990). Култивирането се провежда в наслоени с колаген петриеви стъкла (6-гнездови плочки, Greiner, Nuertingen) с гъстота на клетките 125.000 клетки/cm2 в среда от вида Williams Medium Е с 10 % телешки серум. Повече данни особено за културалната среда могат да се намерят в Gebhardt et al . Cell Biol. Toxicol. 6: 369-372 (1990) и в Mewes et al., Cancer Ras 53: 5135-5142 (1993). Културите се прехвърлят след 2 часа върху не съдържаща серум среда с добавяне на 0.1 μΜ инсулин. След още • ·
01/203/02-ПБ часа те се използват за опитите. Всяко от опитните вещества се изследва при три независими култури от 2-3 плъха.
Инкубация на клетъчни култури от дроб с опитните вещества А) и В)
За доказване на влиянието на опитните вещества А) и В) върху холестериновата биосинтеза, хепатоцитните култури се държат общо 22 часа. След това несъдържаща серум среда Williams Medium Е с добавка на 14С-ацетат (само индикаторни количества) се инкубира в продължение на 2 часа с изследваните вещества при дадените концентрации. При всяка серия се прави опит и с контрола. Използва се методиката, описана подробно от Gebhardt (1991) и Gebhardt, Lipids 28: 613-619 (1993). Индикаторните количества от белязан ^С-ацетат се размесват бързо с интрацелуларния ацетил-СоА Pool и дава възможност за точно определяне на вграждането на 14С-ацетат в стеролната фракция, която се състой до > 90 % от холестерин (Gebhardt, 1993).
Анализ за влиянието върху биосинтеза на холестерин Вграждането на 14С-ацетат в стеролната фракция (неосапуняеми липиди) се измерва по Gebhardt (1991). При използваните екстракционни средства Extrelut®-Saeulen (Merck, Darmstadt), 14С-ацетатът (и произхождащите от него малки количества от други нискомолекулни метаболити) се отделя до повече от 95 %. Чрез този тест могат да се получат сравнителни данни за отношението на синтезните продукти от холестерин и предхождащите стероли под влияние на опитните вещества (Gebhardt, 1993).
···· ·· ·· :· : :
• : .· · :
• · ·♦ ·· «
01/203/02-ПБ
Визуално и микробно изследване на качествата на хепатоцитните култури
Всички използвани култури се изследват визуално на микроскоп преди и след инкубацията за контаминация (сливане) с микроорганизми и за цялостност на клетъчния монослой. При нито една от пробите не се наблюдават различими изменения на клетъчната морфология (особено при по-високи концентрации). Това изключва влияние чрез цитотоксично действие на опитните вещества върху резултатите от опита.
Проведените рутинни тестове за стерилитет п.ри всички култури не дава указание за контаминация с микроорганизми.
Резултати
Пробите А) от генетично немодифицирани домати (контроли) не проявяват никакво действие върху биосинтеза на холестерин. За разлика от тях биосинтезът на холестерин е значително инхибиран в пробите В), от домати, които съдържат частичен фрагмент от флаванон-3-хидроксилаза в Antisens-ориентация.

Claims (5)

1. Метод за повишаване на съдържанието на флавоноиди и фенолни вещества в растения, характеризиращ се с това, че по метод на молекулната генетика се получава растение, в което е понижена активността на ензима флаванон-3-хидроксилаза.
2. Метод съгласно претенция 1, за повишаване на съдържанието на флавоноиди и фенолни вещества в растенията, характеризиращ се с това, че активността на ензима флаванон-3хидроксилаза се понижава чрез молекулно биологичен метод (напр. Anti-Sense-Konstrukt, съсупресия, експресия на специфични антитела или експресия на специфични инхибитори) напълно или частично, за постоянно или временно, в цялото растение или в части от растението.
3. Метод съгласно претенции 1 и 2, характеризиращ се с това, че растенията са грозде, череша, домати, сливи, трънки, боровинки, ягоди, цитрусови плодове (като портокали, грейпфрут), папая, червено зеле, броколи, брюкселско зеле, какао, листно зеле, моркови, магданоз, целина, лук, чесън, чай, кафе, хмел, соя, рапица, овес, пшеница, ръж, Aronia melanocarpa, Ginko biloba.
4. Растение c повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съставни вещества, получено по метод, съгласно претенции 1 до 3, характеризиращо се с това, че в него е понижена ензимната активност на ензима флаванон-3-хидроксилаза.
5. Използване на растения или на части от тези растения, получени по метода съгласно претенции 1 до 3, като хранителни средства, като добавки в храните или за получаване на лечебни, подобряващи здравословното състояние или подсилващи средства (сокове, чай, екстракти, ферментационни продукти), за хората или за животни, както и за получаване на козметични продукти.
BG105246A 1999-06-17 2001-02-13 Метод за получаване на растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съединения BG105246A (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19927574A DE19927574A1 (de) 1999-06-17 1999-06-17 Verfahren zur Herstellung von Pflanzen mit erhöhtem Gehalt an Flavonoiden und phenolischen Verbindungen
PCT/US1999/013658 WO2000078900A1 (en) 1998-05-11 1999-06-18 Soybean oil based electrically insulating fluid

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG105246A true BG105246A (bg) 2001-10-31

Family

ID=7911499

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG105246A BG105246A (bg) 1999-06-17 2001-02-13 Метод за получаване на растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съединения

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP1102855A1 (bg)
JP (1) JP2003503032A (bg)
KR (1) KR20020068256A (bg)
CN (1) CN1314943A (bg)
AR (1) AR024381A1 (bg)
AU (1) AU5970400A (bg)
BG (1) BG105246A (bg)
BR (1) BR0006869A (bg)
CA (1) CA2340319A1 (bg)
CO (1) CO5280139A1 (bg)
DE (1) DE19927574A1 (bg)
HU (1) HUP0103307A2 (bg)
IL (1) IL141173A0 (bg)
PL (1) PL346059A1 (bg)
WO (1) WO2000078980A1 (bg)
ZA (1) ZA200101328B (bg)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100642939B1 (ko) * 2003-02-11 2006-11-10 학교법인 신천학원 자두추출물을 함유하는 화장비누 및 그 추출방법
WO2005074710A1 (en) * 2004-02-06 2005-08-18 Konkuk University Industrial Coorperation Corp Sprouted bean containing high concentration of isoflavone and the preparing method thereof
KR100553522B1 (ko) * 2004-02-06 2006-02-20 학교법인 건국대학교 이소플라본 강화 발아 녹두 및 그 제조방법
KR100663669B1 (ko) * 2005-05-18 2007-01-02 금호석유화학 주식회사 배유 내에 높은 농도의 플라보노이드를 생산하는 형질전환쌀
BRPI1006254A2 (pt) * 2009-04-21 2016-08-09 Haas John I método para melhorar o desempenho desejado de um animal ruminante, método para aprimorar a saúde e funcionalidade do rúmen de um grupo de animais ruminantes, método para melhorar o desempenho desejado de um animal ruminante que recebeu um antibiótico ionóforo poliéter ou antibiótico macrolídeo que contém um alimento animal
EP2286669A1 (en) * 2009-07-29 2011-02-23 Nestec S.A. Flavanones-containing food compositions
US20140072692A1 (en) * 2012-06-07 2014-03-13 Ichiro Yamada Garlic egg yolk composition
KR101415687B1 (ko) * 2012-09-19 2014-07-10 농업회사법인 호트팜 주식회사 조직배양기술을 이용한 아로니아의 줄기마디배양으로부터 유식물체의 대량 증식방법
WO2015140589A1 (en) * 2014-03-20 2015-09-24 Hongkong Chuanghui International Limited Method for preparation multifunctional liquid medicament from vegetable feedstock, and the product produced by the method
CN105985936A (zh) * 2015-02-02 2016-10-05 中国人民解放军第二军医大学 灯盏花黄烷酮-3-羟化酶及其编码基因与应用
CN111875689B (zh) * 2020-08-07 2022-02-01 山东玄康种业科技有限公司 一种利用番茄绿茎紧密连锁标记创制雄性不育系的方法
EP4206192A1 (en) 2020-08-25 2023-07-05 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Kaempferol aglycone-containing extract
CN112391362B (zh) * 2020-11-04 2022-07-05 江南大学 催化活性提高的黄酮3β-羟化酶突变体及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5432068A (en) * 1990-06-12 1995-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Control of male fertility using externally inducible promoter sequences
RO116095B1 (ro) * 1992-03-09 2000-10-30 Univ Washington Metoda de reglare a fertilitatii plantelor
GB9525459D0 (en) * 1995-12-13 1996-02-14 Zeneca Ltd Genetic control of fruit ripening
BR9909414A (pt) * 1998-02-25 2001-01-09 Du Pont Fragmento de ácido nucléico isolado codificador de toda ou uma parte substancial de uma flavanona-3-hidroxilase, gene quimérico, célula hospedeira transoformada, polipeptìdeo de flavanona-3-hidroxilase, método de alteração do nìvel de expressão de uma flavanona-3- hidroxilase em uma célula hospedeira, método de obtenção de um fragmento de ácido nucléico codificador de toda ou uma parte substancial da sequencia de aminoácidos codificadora de uma flavanona-3-hidroxilase, seu produto e método de avaliação da capacidade de pelo menos um composto em inibir a atividade de uma flavanona-3-hidroxilase
AU2687000A (en) * 1999-02-22 2000-09-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Transgenic plants and method for transforming carnations

Also Published As

Publication number Publication date
PL346059A1 (en) 2002-01-14
CN1314943A (zh) 2001-09-26
AR024381A1 (es) 2002-10-02
ZA200101328B (en) 2002-02-18
JP2003503032A (ja) 2003-01-28
AU5970400A (en) 2001-01-09
CO5280139A1 (es) 2003-05-30
DE19927574A1 (de) 2000-12-21
WO2000078980A1 (de) 2000-12-28
CA2340319A1 (en) 2000-12-28
EP1102855A1 (de) 2001-05-30
BR0006869A (pt) 2001-08-07
HUP0103307A2 (hu) 2001-12-28
IL141173A0 (en) 2002-02-10
KR20020068256A (ko) 2002-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shi et al. Metabolomic and transcriptomic analyses of anthocyanin biosynthesis mechanisms in the color mutant Ziziphus jujuba cv. Tailihong
Liu et al. Ectopic expression of a BZR1‐1D transcription factor in brassinosteroid signalling enhances carotenoid accumulation and fruit quality attributes in tomato
Gosch et al. Phloridzin: biosynthesis, distribution and physiological relevance in plants
Valiñas et al. Chlorogenic acid, anthocyanin and flavan-3-ol biosynthesis in flesh and skin of Andean potato tubers (Solanum tuberosum subsp. andigena)
Kim et al. Analysis of eight phytohormone concentrations, expression levels of ABA biosynthesis genes, and ripening-related transcription factors during fruit development in strawberry
Halbwirth et al. Two-phase flavonoid formation in developing strawberry (Fragaria× ananassa) fruit
Akagi et al. Expression balances of structural genes in shikimate and flavonoid biosynthesis cause a difference in proanthocyanidin accumulation in persimmon (Diospyros kaki Thunb.) fruit
Fan et al. Cs-miR156 is involved in the nitrogen form regulation of catechins accumulation in tea plant (Camellia sinensis L.)
Li et al. Purple canola: Arabidopsis PAP1 increases antioxidants and phenolics in Brassica napus leaves
Wang et al. Expression of chalcone synthase and chalcone isomerase genes and accumulation of corresponding flavonoids during fruit maturation of Guoqing No. 4 satsuma mandarin (Citrus unshiu Marcow)
Gagné et al. Leucoanthocyanidin reductase and anthocyanidin reductase gene expression and activity in flowers, young berries and skins of Vitis vinifera L. cv. Cabernet-Sauvignon during development
BG105246A (bg) Метод за получаване на растения с повишено съдържание на флавоноиди и фенолни съединения
KR100697738B1 (ko) 식물 중의 플라보노이드 및 페놀 물질의 함량을증가시키는 방법
Boba et al. Methyl salicylate level increase in flax after Fusarium oxysporum infection is associated with phenylpropanoid pathway activation
Li et al. Development of marker-free transgenic potato tubers enriched in caffeoylquinic acids and flavonols
Moyo et al. Plant regeneration and biochemical accumulation of hydroxybenzoic and hydroxycinnamic acid derivatives in Hypoxis hemerocallidea organ and callus cultures
Zhao et al. Cold stress-induced glucosyltransferase CsUGT78A15 is involved in the formation of eugenol glucoside in Camellia sinensis
Zhang et al. Genome-wide analysis and metabolic profiling unveil the role of peroxidase CsGPX3 in theaflavin production in black tea processing
Gosch et al. Substrate specificity and contribution of the glycosyltransferase UGT71A15 to phloridzin biosynthesis
Siebeneichler et al. Changes in the abscisic acid, phenylpropanoids and ascorbic acid metabolism during strawberry fruit growth and ripening
Spring et al. Spatial and developmental synthesis of endogenous sesquiterpene lactones supports function in growth regulation of sunflower
Hata et al. Effect of photoperiod on growth of the plants, and sesamin content and CYP81Q1 gene expression in the leaves of sesame (Sesamum indicum L.)
Kim et al. Characterization of genes for a putative hydroxycinnamoyl-coenzyme A quinate transferase and p-coumarate 3′-hydroxylase and chlorogenic acid accumulation in tartary buckwheat
TW202302853A (zh) 自紅萵苣高量生產多酚之方法及其用途
Castrillón-Arbeláez et al. Secondary metabolism in Amaranthus spp.—a genomic approach to understand its diversity and responsiveness to stress in marginally studied crops with high agronomic potential