BE635251A

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Info

Publication number: BE635251A
Authority: BE

Description

       

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  Procédé d'isolement d'un nouveau composé. 



   La présente invention a pour objet un nouveau dérivé de la verrucarine A, à savoir l'hexahydro-verrucarine   A.   



   L'invention concerne également un procédé de préparation de ce composé jusque présent inconnu, procédé selon lequel on réduit la verrucarine A en   hexahydro-verrucarine   A. La réduction se fait par hydrogénation catalytique- Comme catalyseurs convena- bles on peut utiliser des métaux du huitième groupe de la   classi-   fication périodique, par exemple le platine, le palladium ou le nickel. Cette hydrogénation catalytique est de préférence effectuée en présence d'oxyde de platine, quoique l'on puisse aussi opérer avec le nickel de Raney. 



   L'hydrogénation peut se faire à la température ambiante ou à température élevée, sous la pression atmo&phérique ou sous une 

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 pression plus élevée. 



   Le corps de départ, c'est-à-dire la verrucarine A, peut être obtenue à partir des liquides de culture et/ou des mycéliums de souches des   mycètes   Myrothecium verrucaria   (Albertini   et Schweinitz)   Di tmar     x   Fries et Myrothecium roridum Tode ex Pries. 



  Par extraction on obtient un mélange de plusieurs antibiotiques, mélange que   l'on   peut séparer en ses composantes par précipitation, répartition, chromatographie d'adsorption, chromatographie de par- tage ou répartition à contre-courant (répartition   fractionnée).   



  Comme matière de départ on peut toutefois utiliser non seulement le      liquide de culture   et/ou   le mycélium de souches des deux mycètes mentionnés   ci-.dessus;   mais également le liquide de culture et le mycélium de variante :quelconques de ces organismes. 



  On a isolé des colonies des   mycètes   Myrothecium verrucaris et Myrothecium roridum à partir d'échantillons de sols d'origines très diverses. Au point de vue morphologique, toutes ces souches      correspondent aux descriptions des espèces, telles qu'elles sont données par exemple dans   Gilman,     J.C.,   A Manual ofSoil   Fungi,   2ème éd., (1957), The Iowa State Collège Press, Ames, Iowa,   E.U.A.   Elles peuvent être cultivées sur des milieux nutritifs très variés avec les autres mycètes. 



   L'hexahydro-verrucarine A a une forte activité   antimito-   tique et elle peut donc être utilisée en thérapeutique pour com- battre les tumeurs.' t'action cytostatique de   l'hexahydro-verrucarine   A a été déterminée in vitro, sur le   mastocytome   P 815 de la sourie, par l'inhibition qu'elle exerce sur la multiplication des cellules   tumorales.

   On a obtenu les résultats indiqués ci-dessous :   
Dans une solution nutritive appropriée, ces cellules tumorales se multiplient en   40   heures jusqu'à atteindre   4   à 5 fois leur nombre de départe La   DE-50   (concentration qui inhibe de 50% cette multiplication) de   l'hexahydro-verrucarine   A, par rapport à ces cellules, est de 0,05   /ug/ml.   Sur la souris blanche, par voie intraveineuse, la toxicité aiguë de l'hexahydro-verrucarine A, exprimée par la   DL-50.,   est de 17 mg/kg. 

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  En outre, 1$herahydroé-verrucarine A ne signale par son action insecticide et c'est pourquoi elle peut également trouver des applications comme pesticide.   .     @     @   
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 L'hexahydro-verrucar1ne A peut être utilisée comme médi- cament, par exemple sous forme de préparations pharmaceutiques. 



  Celles-ci contiennent le composé mentionné en mélange avec un exci- pient minéral ou organique   approprié   pour l'administration par voie   entérale,   parentérale ou locale. Comme excipients on peut envisager des corps qui ne réagissent pas avec le nouveau composé, par   exem-   ple la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, des huiles végétales, l'alcool benzylique, la gomme arabique, des   polyalkylèneglycols,   la vaseline, le cholestérol ou d'autres matières supports connues pour médicaments.

   Les préparations pharma- ceutiques peuvent être présentées par exemple sous forme de compri-   més,   de dragées  de poudres, de crèmes ou de suppositoires, ou à l'état liquide sous forme de solutions, de suspensions ou   d'émul-   sions. S'il y a lieu on peut les stériliser et/ou leur adjoindre des corps auxiliaires, tels que des agents de conservation, des stabi- 
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 luisants, des mouillants ou des émulsionnant. Elles peuvent égale- ment contenir d'autres corps doués d'activités thérapeutiques. 



   L'exemple suivant illustre la présente invention sans aucunement en limiter la portée. 
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  E'X 1 -'l P L leel Hexahydn-verrucarine A, 
En présence de 240 mg de PtO2.H2O on hydrogène à 20 C, sous une légère surpression ou sous la pression normale, une solu- 
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 tion de 2,045 g de verrucarine A dans 100 ml d'acide acétique gla- cial:la quantité d'hydrogène absorbée correspond alors à 3,2 moles de H2 (par rapport à la verrucarine A). On élimine PtO2 par   filtra-   tion, on évapore le filtrat soua pression réduite, on reprend le résidu dans du chloroforme, on lave une première fois avec une solu- tion   binormale   de carbonate de sodium, puis avec de l'eau, on sèche sur sulfate de sodium et on chasse le solvant par évaporation sous pression réduite.

   Après recristallisation du résidu dans un 

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 mélange 1: 1: 1:   d'acétone,   d'éther et d'éther de pétrole on   ob-   
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 tient l'hexahydro-verrucar1ne A qui fond à 113-115.C. CoJ2 m + 2A* + 20 (o * 1#15 dans le chloroforme). Spectre infra- 
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 rouge (dans CH2C12 et KDr) 1 bandes à 2,73 lU; 2,S2 lUI 3,41 lU. gvo /u; 5,76 /u; 5080 /u; 8,00 lUI 8,24 /u; bzz ui z8 lU) 8,70 u; 8,85 u 9,16 /u; 9,71 /u; 10,31 /u et 10,58 a. De   
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 l'ultraviolet on n'observe pas d'absorption Bêlective,La détermina- tion thermoélectrique du poids moléculaire donne 510 ¯ 10 (dans le 
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 dichlorooéthane valeur calculée ï 508,6).



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  A method of isolating a new compound.



   The present invention relates to a new derivative of verrucarin A, namely hexahydro-verrucarin A.



   The invention also relates to a process for the preparation of this hitherto unknown compound, a process according to which verrucarin A is reduced to hexahydro-verrucarin A. The reduction takes place by catalytic hydrogenation. Suitable catalysts can be used as eighth metals. group of the periodic classification, for example platinum, palladium or nickel. This catalytic hydrogenation is preferably carried out in the presence of platinum oxide, although it is also possible to operate with Raney nickel.



   The hydrogenation can be carried out at room temperature or at elevated temperature, under atmospheric pressure or under a

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 higher pressure.



   The starting body, i.e. verrucarin A, can be obtained from culture fluids and / or mycelia of strains of the fungi Myrothecium verrucaria (Albertini and Schweinitz) Di tmar x Fries and Myrothecium roridum Tode ex Pries.



  By extraction, a mixture of several antibiotics is obtained, a mixture which can be separated into its components by precipitation, distribution, adsorption chromatography, partition chromatography or countercurrent distribution (fractional distribution).



  As starting material, however, it is not only possible to use the culture liquid and / or the mycelium of strains of the two fungi mentioned above; but also the culture fluid and the variant mycelium: any of these organisms.



  Colonies of the fungi Myrothecium verrucaris and Myrothecium roridum have been isolated from soil samples of a wide variety of origins. Morphologically, all these strains correspond to the descriptions of the species, as given for example in Gilman, JC, A Manual of Soil Fungi, 2nd ed., (1957), The Iowa State College Press, Ames, Iowa , EUA They can be grown on a wide variety of nutrient media with other fungi.



   Hexahydro-verrucarin A has strong antimititic activity and therefore can be used therapeutically to fight tumors. the cytostatic action of hexahydro-verrucarin A was determined in vitro on mastocytoma P 815 of the mouse, by the inhibition it exerts on the multiplication of tumor cells.

   The results shown below were obtained:
In an appropriate nutrient solution, these tumor cells multiply in 40 hours until they reach 4 to 5 times their number depending on the DE-50 (concentration which inhibits this multiplication by 50%) of hexahydro-verrucarin A, compared to to these cells, is 0.05 µg / ml. In white mice, by the intravenous route, the acute toxicity of hexahydro-verrucarin A, expressed by the LD-50., Is 17 mg / kg.

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  In addition, 1 $ herahydroe-verrucarin A does not signal its insecticidal action and therefore it may also find applications as a pesticide. . @ @
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 Hexahydro-verrucarin A can be used as a medicament, for example in the form of pharmaceutical preparations.



  These contain the mentioned compound in admixture with an inorganic or organic excipient suitable for enteral, parenteral or local administration. As excipients, one can envisage bodies which do not react with the new compound, for example gelatin, lactose, starch, magnesium stearate, talc, vegetable oils, benzyl alcohol, gum arabic. , polyalkylene glycols, petrolatum, cholesterol or other known carrier materials for drugs.

   The pharmaceutical preparations can be presented, for example, in the form of tablets, dragees, powders, creams or suppositories, or in the liquid state in the form of solutions, suspensions or emulsions. If necessary, they can be sterilized and / or added to them with auxiliary substances, such as preservatives, stabilizers.
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 glitters, wetting agents or emulsifiers. They can also contain other bodies endowed with therapeutic activities.



   The following example illustrates the present invention without in any way limiting its scope.
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  E'X 1 -'l P L leel Hexahydn-verrucarin A,
In the presence of 240 mg of PtO2.H2O is hydrogenated at 20 C, under a slight overpressure or under normal pressure, a solution
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 tion of 2.045 g of verrucarin A in 100 ml of glacial acetic acid: the quantity of hydrogen absorbed then corresponds to 3.2 moles of H2 (relative to verrucarin A). PtO2 is removed by filtration, the filtrate is evaporated under reduced pressure, the residue is taken up in chloroform, washed a first time with a binormal solution of sodium carbonate, then with water and dried over. sodium sulfate and the solvent is removed by evaporation under reduced pressure.

   After recrystallization of the residue in a

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 1: 1: 1 mixture: acetone, ether and petroleum ether are obtained
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 holds hexahydro-verrucar1ne A which melts at 113-115.C. CoJ2 m + 2A * + 20 (o * 1 # 15 in chloroform). Infra- spectrum
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 red (in CH2C12 and KDr) 1 band at 2.73 lU; 2, S2 lUI 3.41 lU. gvo / u; 5.76 / u; 5080 / u; 8.00 lUI 8.24 / u; bzz ui z8 lU) 8.70 u; 8.85 u 9.16 / u; 9.71 / u; 10.31 / u and 10.58 a. Of
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 ultraviolet, no selective absorption is observed. The thermoelectric determination of the molecular weight gives 510 ¯ 10 (in the
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 dichloroethane calculated value (508.6).

Claims

ABSTRACT. EMI4.5 MW IwlMaraYYrwM11Yw1Y The present invention comprises in particular: EMI4.6 1.- As a new industrial product, hexahydro-verrucarin A.

2.- A process for the preparation of hexahydro-verrucarihe A, according to which verrucarin A is reduced by oatalytic hydrogenation to hexahydro-verrucarin A.

3.- An embodiment of the process specified under 2, according to which the catalytic hydrogenation is carried out in the presence of platinum oxide.

4. Product, process and embodiment in substance as described with reference to the example cited.