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Procédé d'isolement de nouveaux composés.
La présente invention a pour objet un procédé de prépara- tion de nouveaux dérivés de la verrucarine A, antibiotique prove- nant du Myrothecium. La verrucarine A, corps neutre liposoluble de constitution encore inconnue et de formule brute probable C27H34O9, possède un groupe hydroxylique et elle peut être trans- formée, par réaction avec des dérivés réactifs d'acides carboxyli- ques contenant au moins 3 atomes de carbone, en composés acylés correspondants. Les dérivés réactifs que l'on peut utiliser seront par exemple des halogénures ou des anhydrides d'acides contenant au moins 3 atomes de carbone.
Les acides correspondant à ces déri- vés réactifs seront surtout des acides physiologiquement tolérés, car les dérivés acylés de la verrucarine A sont des antibiotiques
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très efficaces qui peuvent être utilisés comme médicaments pour le traitement de maladies infectieuses. De plus, les nouveaux com- posés ont une activité antimitotique qui les rend tout à fait aptes à être utilisés en thérapeutique pour combattre les tumeurs. L'ac- tion cytostatique des nouveaux composés a été déterminée in vitro, sur le mastocytome P 815 de la souris, par l'inhibition de la multi- plication des cellules tumorales.
En outre, les nouveaux composés se distinguent par leur activité insecticide et c'est pourquoi ils peuvent également trou- ver des applications comme pesticides.
Les nouveaux composés peuvent être utilisés comme médica- ments, par exemple sous forme de )réparations pharmaceutiques con- tenant les composés en question en mélange avec un excipient orga- nique ou minéral approprié pour l'administration par la voie en- térale, parentérale ou locale. On peut envisager comme excipients les corps qui ne réagissent pas avec les nouveaux composés, comme par exemple la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de ma- gnésium, le talc, des huiles végétales, l'alcool benzylique, la tomme arabique, les polyalkylène-glycols, la vaseline, le cholesté- rol ou d'autres matières supports pour médicaments.
Les produits pharmaceutiques peuvent être présentés par exemple sous forme de comprimés, de dragées, de poudres, de crèmes ou de suppositoires, ou à l'état liquide sous forme de solutions, de suspensions ou d'émulsions. S'il y a lieu on les stérilise et/ou on leur adjoint des corps auxiliaires, tels que des agents de conservation, des sta- bilisants, des mouillants ou des émulsionnants. Ils peuvent égale- ment contenir d'autres substances douées d'activités thérapeutiques.
Le composé de départ, c'est-à-dire la verrucarine A, peut être obtenu à partir des liquides de culture et/ou des mycéliums de souches des mycètes Myrothecium verrucaria (Albertini et Schweinitz) Ditmar ex Pries et Myrothecium roridum Tode ex Friea.
On obtient un mélange de plusieurs antibiotiques, mélange que l'on ! peut séparer en ses composantes par précipitation, répartition,
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chromatographie d'adsorption, chromatographie de partage ou réparti- tion à contre courant (répartition fractionnée). Comme matière de départ on peut cependant utiliser non seulement le liquide de cul- ture et/ou le mycélium de souches des deux mycètes, mentionnés ci- dessus, mais également le liquide de culture et le mucélium de n'importe ':uels variants de ces organismes. On a isolé des colonies des inycètes Myrothecium verrucaria et Myrothecium roridum d'échan- tillons de sols de provenances très diverses.
Du point de vue mor- phologique toutes ces souches correspondent aux descriptions des espèces, telles qu'elles ont été données par exemple dans Gilman, J.C, 1957, A Manual of Soil Fungi, 2ème édition, The Iowa State Collège Press, Ames. Iowa, E. U.A. Elles peuvent être cultivées sur des milieux nutritifs de divers types avec les autres mycètes.
Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Les points de fusion sont don- ns non corrigés, EXEMPLE 1.-- Mono-0-benzoyl-verrucarine A.
Une solution de 101 mg de verrucarine A cristallisée et 1 ml de chlorure de benzoyle dans 3 ml de pyridine est abandonnée pendant 15 heures à 22 C, puis elle est additionnéeà 0 C, de 0,5 ml de méthanol, elle est abandonnée encore une fois à 22 C pendant 30 minutes, puis elle est évaporée sous :ression réduite. On re- prend le résidu dans du chloroforme. On lave l'extrait chlorofor- inique avec de l'acide chlorhydrique binormal, avec une solution binor:nale de carbonate de sodium et avec de l'eau, on le sèche sar sulfate de sodium et on l'évapore sous pression réduite. On chro- matographie le résidu sur 5 g d'alumine d'activité I.
Les fractions éluées avec de l'éther et du chloroforme fournissent, après re- cristallisation dans un mélange 1 :1 debenzène et d'éther, le mo- nobenzoate (C34H38O10) cristallisé pur sous forme d'aiguilles inco- lores fondant à 217-221 C [a]D21 = +80 ¯2 (c = 1,261 dans le chloroforme)
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EXMEPLE 2.-
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Mono-4-succ3noyl..verrucarine A.
A une solution de 200 mg de verrucarine A cristalline dans 5 ml de pyridine ori ajoute 800 mg d'anhydride succinique et on abandonne le tout à 37 C pendant 20 heures. Après évaporation sous pression réduite on reprend le résidu dans du chloroforme, on lave la solution d'abord avec de l'acide chlorhydrique binormal puis plusieurs fois avec une solution binormale de carbonate de sodium. On mélange les extraits obtenus par extraction au carbonate de sodium,,on ajoute à la solution, à 0 C, de l'acide chlorhydrique concentré jusqu'à réaction acide au congo et on extrait au chloro- forme.
Le résidu obtenu après séchage sur sulfate de sodium et éva- poration du chloroforme sous pression réduite fournit, après re- cristallisation dans du méthanol, le monosuccinate acide (Ce 38012) cristallisé pur sous forme d'aiguilles incolores fondant à 188-193 C
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/"<=L7 pl= + 127 t 2 (c = 1,002 dans le chloroforme). pK = 6,95 (méthylcellosolve à 80%). Poids équivalent s 570 (calculé : 602).
EXEMPLE 3.-
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ldono-0-phtaloyl-verrucarine A.
On chauffe à 100 C pendant 2 heures, à l'abri de l'humi- dité, 104 ml de verrucarine A, 304 mg d'anhydride phtalique et 3 ml de pyridine. Après quoi on évapore sous pression réduite, on re- prend le résidu dans du chloroforme, on lave la solution d'abord avec de l'acide chorhydrique binormal et ensuite plusieurs fois avec une solution binormale de carbonate de sodium. La solution obte nue en mélangeant les extraits de carbonate de sodium est rendue acide au congo et est extraite au chloroforme. Après lavage de la solution avec de l'eau, séchage sur sulfate de sodium et évapora- tion du solvant sous pression réduite on obtient la mono-O-phtaloyl-
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verrucarine A acide (C35 H38u12) pure et amorphe. Z""a-7n s +9>0 +2 (c =. 0,937 dans le chloroforme). pK = 6,07 (méthylcellosolve à 80%).
Poids équivalent : 712 (calculé : 650).
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EXEMPLE 4.-
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Mona-4-propionyl-verrucarire A.
On laisse reposer à 24 C pendant 26 heures une solution de 102 mg de verrucarine A cristallisée dans 2 ml de pyridine et 2 ml d'anhydride propionique, on la dilue avec du chloroforme, on la lave d'abord avec de l'acide chlorhydrique binormal, puis avec une solution binormale de carbonate de sodium et enfin avec de l'eau/ on la sèche sur sulfate de sodium et on évapore le solvant sous pression réduite.
Après addition d'éther de pétrole on obtient le mono-propionate (C30H38O10) cristallisé pur sous forme d'ai- guilles incolores présentant un double point de fusion à 150 et 185 C. Après recristallisation dans un mélange d'acétone et d'é- ther de pétrole on obtient le corps sous forme d'aiguilles fondant à 151-155 C. [a]D23= +126 +2 (c = 1,112 dans l'éthanol). Spectre ultraviolet: max = 260 m/u (log± 4,4). Spectre infrarouge
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dans le chlorure de méthylène: bandes à 5,77 lU, 5,87 /u. 6'14 lU et 6,32 zou.
RESUME.
La présente invention comprend notamment
1 ) A titre de produits industriels nouveaux, les déri- vés acylés de la verrucarine A dont le reste acyle contient au moins 3 atomes de carbone, et en particulier : a) la mono-0-propionyl-verrucaTine A;
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b) la mono-0-b4-nzoyl-verrucarine A; c) la mono-0-succinoyl-verrucarine A; d) la mono-0-phtaloyl-verrucarine A.
2 ) Un procédé de préparation des nouveaux composés spé- cifiés sous 1 , selon lequel on acyle la verrucarine A au moyen d'acides mono- ou poly-carboxyliques aliphatiques ou aromatiques contenant au moins 3 atomes de carbone, ou de dérivés réactifs de tels acides.
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3 ) Produits et procédé en substance comme ci-dessus aécrit avec référence aux exemples cités.
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Method for the isolation of new compounds.
The subject of the present invention is a process for the preparation of novel derivatives of verrucarin A, an antibiotic obtained from Myrothecium. Verrucarin A, a fat-soluble neutral substance of still unknown constitution and probable crude formula C27H34O9, possesses a hydroxylic group and it can be transformed, by reaction with reactive derivatives of carboxylic acids containing at least 3 carbon atoms, into corresponding acyl compounds. The reactive derivatives which can be used will, for example, be halides or anhydrides of acids containing at least 3 carbon atoms.
The acids corresponding to these reactive derivatives will above all be physiologically tolerated acids, since the acylated derivatives of verrucarin A are antibiotics.
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very effective which can be used as drugs for the treatment of infectious diseases. In addition, the new compounds have antimitotic activity which makes them quite suitable for use in therapy to combat tumors. The cytostatic action of the new compounds was determined in vitro, on the P 815 mastocytoma of the mouse, by inhibiting the multiplication of tumor cells.
In addition, the new compounds are distinguished by their insecticidal activity and therefore they can also find applications as pesticides.
The novel compounds can be used as medicaments, for example in the form of pharmaceutical repairs containing the compounds in question in admixture with an organic or inorganic excipient suitable for administration by the enteral, parenteral or oral route. local. One can consider as excipients the bodies which do not react with the new compounds, such as for example gelatin, lactose, starch, magnesium stearate, talc, vegetable oils, benzyl alcohol, tomme arabic, polyalkylene glycols, petrolatum, cholesterol or other carrier materials for drugs.
Pharmaceutical products can be presented, for example, in the form of tablets, dragees, powders, creams or suppositories, or in the liquid state in the form of solutions, suspensions or emulsions. If necessary, they are sterilized and / or auxiliary substances, such as preservatives, stabilizers, wetting agents or emulsifiers, are added to them. They may also contain other substances endowed with therapeutic activities.
The starting compound, i.e. verrucarin A, can be obtained from culture fluids and / or mycelia of strains of the fungi Myrothecium verrucaria (Albertini and Schweinitz) Ditmar ex Pries and Myrothecium roridum Tode ex Friea .
We get a mixture of several antibiotics, a mixture that we! can separate into its components by precipitation, distribution,
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adsorption chromatography, partition chromatography or countercurrent distribution (fractional distribution). As starting material, however, it is possible to use not only the culture liquid and / or the mycelium of strains of the two fungi, mentioned above, but also the culture liquid and the mucelium of any variant of. these organizations. Colonies of the myrothecium verrucaria and Myrothecium roridum were isolated from soil samples from a wide variety of sources.
Morphologically all these strains correspond to the descriptions of the species, as given for example in Gilman, J.C, 1957, A Manual of Soil Fungi, 2nd edition, The Iowa State College Press, Ames. Iowa, E. U.A. They can be grown on nutrient media of various types along with other fungi.
The following examples illustrate the present invention without in any way limiting its scope. Melting points are given uncorrected, EXAMPLE 1 - Mono-O-benzoyl-verrucarin A.
A solution of 101 mg of crystallized verrucarin A and 1 ml of benzoyl chloride in 3 ml of pyridine is left for 15 hours at 22 C, then it is added at 0 C, 0.5 ml of methanol, it is left again a times at 22 ° C. for 30 minutes, then it is evaporated under: reduced ression. The residue is taken up in chloroform. The chloroform extract is washed with binormal hydrochloric acid, with binary sodium carbonate solution and with water, dried with sodium sulfate and evaporated under reduced pressure. The residue is chromatographed on 5 g of activity I alumina.
The fractions eluted with ether and chloroform give, after recrystallization from a 1: 1 mixture of benzene and ether, the pure crystallized monobenzoate (C34H38O10) in the form of colorless needles, melting at 217-. 221 C [a] D21 = +80 ¯2 (c = 1.261 in chloroform)
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EXAMPLE 2.-
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Mono-4-succ3noyl..verrucarin A.
800 mg of succinic anhydride are added to a solution of 200 mg of crystalline verrucarin A in 5 ml of pyridine and the whole is left at 37 ° C. for 20 hours. After evaporation under reduced pressure, the residue is taken up in chloroform, the solution is washed first with binormal hydrochloric acid and then several times with a binormal solution of sodium carbonate. The extracts obtained by extraction with sodium carbonate are mixed, concentrated hydrochloric acid is added to the solution at 0 C until an acid reaction in congo and extracted with chloroform.
The residue obtained after drying over sodium sulphate and evaporating off the chloroform under reduced pressure gives, after recrystallization from methanol, the pure acid monosuccinate (Ce 38012) crystallized in the form of colorless needles melting at 188-193 C
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/ "<= L7 µl = + 127 t 2 (c = 1.002 in chloroform). PK = 6.95 (80% methylcellosolve). Equivalent weight s 570 (calculated: 602).
EXAMPLE 3.-
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ldono-0-phthaloyl-verrucarin A.
104 ml of verrucarin A, 304 mg of phthalic anhydride and 3 ml of pyridine are heated at 100 ° C. for 2 hours, protected from humidity. Afterwards it is evaporated off under reduced pressure, the residue is taken up in chloroform, the solution is washed first with binormal hydrochloric acid and then several times with binormal sodium carbonate solution. The solution obtained by mixing the sodium carbonate extracts is made acidic with the congo and is extracted with chloroform. After washing the solution with water, drying over sodium sulfate and evaporating the solvent under reduced pressure, mono-O-phthaloyl- is obtained.
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Pure and amorphous acidic verrucarin A (C35 H38u12). Z "" a-7n s +9> 0 +2 (c =. 0.937 in chloroform). pK = 6.07 (80% methylcellosolve).
Equivalent weight: 712 (calculated: 650).
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EXAMPLE 4.-
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Mona-4-propionyl-verrucarire A.
A solution of 102 mg of verrucarin A crystallized in 2 ml of pyridine and 2 ml of propionic anhydride is left to stand at 24 ° C. for 26 hours, it is diluted with chloroform, it is first washed with hydrochloric acid. binormal, then with a binormal solution of sodium carbonate and finally with water / it is dried over sodium sulfate and the solvent is evaporated under reduced pressure.
After addition of petroleum ether, the pure crystallized mono-propionate (C30H38O10) is obtained in the form of colorless needles exhibiting a double melting point at 150 and 185 C. After recrystallization from a mixture of acetone and e. - petroleum ther is obtained the body in the form of needles melting at 151-155 C. [a] D23 = +126 +2 (c = 1.112 in ethanol). Ultraviolet spectrum: max = 260 m / u (log ± 4.4). Infrared spectrum
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in methylene chloride: bands at 5.77 lU, 5.87 / u. 6'14 lU and 6.32 zou.
ABSTRACT.
The present invention comprises in particular
1) As new industrial products, the acylated derivatives of verrucarin A, the acyl residue of which contains at least 3 carbon atoms, and in particular: a) mono-O-propionyl-verrucatin A;
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b) mono-0-b4-nzoyl-verrucarin A; c) mono-O-succinoyl-verrucarin A; d) mono-0-phthaloyl-verrucarin A.
2) A process for the preparation of the new compounds specified under 1, according to which verrucarin A is acylated by means of aliphatic or aromatic mono- or poly-carboxylic acids containing at least 3 carbon atoms, or of reactive derivatives of such acids.
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3) Products and process in substance as above written with reference to the examples cited.