BE1029796A9 - Composition rodonticide - Google Patents

Abstract

L’invention concerne une composition rodonticide sous forme d’appât, comprenant un support et, à titre de principe actif, l’association (i) d'au moins un agent anticoagulant choisi parmi le coumatétralyl, la chlorophacinone, le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone et (ii) d'au moins un synergiste choisi parmi les anti-inflammatoires non stéroïdiens et les antiagrégants plaquettaires, ladite composition comprend une quantité en poids d’agent anti-coagulant inférieure ou égale à 25 ppm et un rapport en poids synergiste:agent anti-coagulant compris entre 100 et 2500. Cette composition permet d'obtenir de bons résultats de destruction de rongeurs avec un taux de résidus d’anticoagulant dans les animaux cibles diminué et un phénomène de contamination secondaire limité.

Description

COMPOSITION RODONTICIDE

La présente invention concerne le domaine de la lutte contre les animaux nuisibles et a, plus particulièrement, pour objet une composition rodonticide efficace pour la destruction des rongeurs.

La réglementation européenne des pesticides applique une distinction entre (i) les produits biocides (protection à l'intérieur et aux alentours des bâtiments) régulés par l'ECHA et (ii) les produits de protection des plantes ou PPP (protection des jardins et terrains agricoles) régulés par l'EFSA. Les principaux rongeurs nuisibles nécessitant une lutte sont les rats et les souris (cibles biocides) et les campagnols, mulois et taupes (cibles PPP).

Deux stratégies sont actuellement employées dans la lutte contre les rongeurs nuisibles : les poisons dits « violents » et les poisons dits «lents ».

Les poisons violents entraînent la mort de l'animal cible dès son ingestion ou son inhalation. Actuellement, cinq matières actives de ce type sont autorisées en Europe, que ce soit sous la législation biocide ou phytosanitaire : le phosphure d'aluminium, le phosphure de zinc, le phosphure de magnésium, le cyanure d'hydrogène et l'alohachloralose.

Les principaux désavantages de ces poisons violents sont qu'ils permettent uniquement un traitement choc, qu'ils nécessitent un nouveau traitement dés réapparition des nuisibles et qu'ils engendrent également une certaine méfiance des rongeurs.

Les poisons lents, quant à eux, entraînent la mort de l'animal cible dans un délai généralement compris entre trois et huit jours après l'ingestion et nécessitent parfois plusieurs ingestions de la matière active.

Actuellement, la majorité des raticides ou compositions rodonticides de type « poisons lents» sont à base d'anticoagulants, appelés également antivitamines K ou antagonistes de la vitamine K (ou encore « AVK») car ils s'opposent à l'action de cette vitamine et ralentissent ou annihilent ainsi Ia coagulation.

La vitamine K joue en effet un rôle clé dans la production d'une série de protéines essentielles pour la coagulation sanguine, selon

UN processus cyclique. Dans un premier temps, la vitamine K subit une réduction vers une forme active appelée vitamine K hydroquinone, catalysée par l'enzyme vitamine K quinone-réductase. Cette forme réduite intervient ensuite dans le processus d'activation des protéines essentielles à la coagulation, processus durant lequel la vitamine K hydroquinone est transformée en vitamine K époxyde. Enfin, l'enzyme vitamine K époxyde-réductase permet de reformer la vitamine K. Une déficience en vitamine K est relativement rare, celle-ci étant recyclée presque continuellement chez un individu sain.

Les anticoagulants sont des inhibiteurs des enzymes vitamine

K quinone-réductase et vitamine K époxyde-réductase. Ceux-ci cassent donc le cycle de la vitamine K et après épuisement du stock de cette dernière, apparaît une forte diminution de la coagulation du sang et finalement la mort qui survient par anémie aiguë, provoquée par une hémorragie (le plus souvent interne) survenant quelques jours après l'ingestion.

Les principaux avantages des anticoagulants, qui font d'eux des substances actives de choix dans les rodonticides, sont : - Une grande efficacité à faible dose chez les rongeurs, du fait notamment de leur faible volume sanguin et d'un rythme cardiaque élevé,

- UN délai de quelques jours entre l'ingestion du poison et la mort, ce qui limite fortement la méfiance des individus cibles par rapport aux appâts (la mort étant d'apparence naturelle sans symptôme alarmant pour les autres rongeurs), - l'existence d'un antidote efficace (la vitamine K), et - UN faible impact sur l'appétence des appâts.

Les anticoagulants sont classés en deux générations en fonction de leur efficacité : - les anticoagulants de première génération dont la warfarine, le coumatétralyl et la chlorophacinone, autorisés par l'Agence européenne des produits chimiques (ECHA) : ils nécessitent plusieurs ingestions consécutives pour être efficaces, car ils montrent une persistance plus faible dans l'individu ; et - les anticoagulants de seconde génération dont le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone, autorisés par /ECHA : ils ne nécessitent généralement qu'une seule ingestion du fait de leur forte persistance dans l'individu (jusqu'à plusieurs mois, même après une seule prise alimentaire) et leur dose létale médiane est bien plus faible que celle des anticoagulants de première generation.

Malheureusement, les anticoagulants présentent un désavantage majeur lorsqu'ils sont utilisés comme substances actives dans des appâts rodonticides : leur très forte affinité pour les enzymes cibles et, dès lors, leur grande persistance dans les individus contaminés.

Cette persistance entraîne un phénomène appelé «contamination secondaire », c'est-à-dire Ia contamination, par remontée de la chaîne alimentaire, des prédateurs naturels des rongeurs nuisibles visés. Il a effectivement été constaté que la consommation répétée de rongeurs contaminés aux anticoagulants provoque l'intoxication mortelle, par accumulation dans les tissus du foie, de rapaces et renards, par exemple.

En conséquence, depuis de nombreuses années, beaucoup d'efforts ont été déployés afin de rendre le principe actif dans les rodonticides plus efficaces à moindre dose, afin de diminuer notamment le phénomène de contamination secondaire et également la toxicité vis- 0-vis des autres espèces, par exemple l'homme et les animaux domestiques.

A cet effet, il est connu d'associer une molécule raticide de type anticoagulant avec une autre molécule (non-raticide seule) appelée alors “synergiste”.

Par exemple, FR2265273 décrit une composition rodonticide permettant d'accélérer ou d'aggraver l'apparition des phénomènes hémorragiques et de diminuer les doses d'absorption d'anticoagulants parle rongeur nécessaires pour obtenir l'hémorragie fatale. En particulier, cette composition contient Un principe actif composé de l'association d'un anticoagulant et d'un synergiste de type dérivé salicylé, le principe actif comprenant de 2 à 10 parties en poids de dérivé salicylé pour 1 partie en poids d'anticoagulant. | est également connu de la demande de brevet

CN10135691A Un raticide à base de coumatétralyl associé à l'acide salicylique en quantité équivalente (rapport en poids proche de 1). Cette association particulière est décrite comme permettant d'augmenter la vitesse de mortalité des rongeurs et aussi de diviser par deux environ la quantité d'anticoagulant des rodonticides traditionnels (passant ainsi de 250 ppm à 125 ppm).

Toutefois, malgré tous les efforts afin de développer des rodonticides faiblement dosés en anticoagulant, les normes et exigences sanitaires, en particulier au niveau européen, deviennent de plus en plus exigeantes. Par exemple, la forte persistance des AVK a notamment mené à la diminution de leur teneur maximale autorisée dans les appâts utilisés par les amateurs (circuit lilore) et à leur disparition en protection des 5 plantes (PPP).

Cette tendance à la réduction de la teneur maximale en AVK dans les rodonticides risque de s'accentuer dans le futur et il existe donc une forte demande dans le domaine pour une composition rodonticide plus faiblement dosée que les compositions actuelles (comprenant généralement 50 ppm d’AVK dans le circuit dit « restreint »).

Un objectif de la présente invention est de pallier les inconvénients de l'état de la technique décrits ci-dessus et de suivre la tendance des normes européennes.

En particulier, un objectif de l'invention est de fournir une composition rodonticide à base d'anticoagulant permettant d'obtenir de bons résultats de destruction de rongeurs (comparables aux compositions utilisées actuellement), avec un taux de résidus d'anticoagulant dans les animaux cibles diminué et ainsi, un phénomène de contamination secondaire réduit.

Un autre objectif de la présente invention est de fournir une composition rodonticide à base d'anticoagulant avec de bons résultats de destruction de rongeurs et une toxicité pour les autres espèces, y compris l'homme, qui est diminuée.

Un autre objectif de la présente invention est de fournir une composition rodonticide à base d'anticoagulant avec de bons résultats de destruction de rongeurs et une bonne appétence pour les rongeurs.

Pour atteindre ces objectifs, il est prévu suivant l'invention une composition rodonticide sous forme d'appât, comprenant un support et,

à titre de principe actif, l'association (i) d'au moins un agent anticoagulant choisi parmi le coumatétralyl, la chlorophacinone, le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone et (ii) d'au moins un synergiste choisi parmi les anti- inflammatoires non stéroïdiens et les antiagrégants plaquettaires.

En particulier, Ia composition de l'invention comprend : - une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 25 ppm ; et - Un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant compris entre 100 et 2500.

L'invention est ainsi basée sur une approche nouvelle et inventive. En particulier, les inventeurs ont constaté, de manière surprenante, qu'avec une augmentation très significative, par rapport à l'état de la technique, de la teneur en synergiste, combinée à une diminution de la teneur en AVK (et donc considérant un rapport en poids élevé entre les deux constituants), il était possible de maintenir l'efficacité de la composition rodonticide en comparaison avec les compositions actuellement sur le marché, mais en diminuant la teneur en résidus dans l'animal cible (en particulier, dans le foie) et en conséquence réduit le phénomène de contamination secondaire.

D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non limitatif.

Dans la présente description et les revendications, il est bien entendu que, tels qu'utilisés ici, les termes « UN », « une » ou «le » signifient «au moins UN » et ne doivent pas être limités à « UN seul », sauf indication contraire explicite, De plus, lorsqu'une plage de valeur est indiquée, les extrémités sont incluses. Finalement, toutes les valeurs intégrales et de sous-domaine dans la plage numérique sont expressément incluses comme si explicitement écrites.

Selon l'invention, la composition rodonticide comprend l'association (i) d'au moins un agent anticoagulant choisi parmi le coumatétralyl, la chlorophacinone, le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone et (ii) d'au moins un synergiste choisi parmi les anti-inflammatoires non stéroïdiens et les antiagrégants plaquettaires.

Le coumatétralyl, la chlorophacinone, le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone sont des noms ISO utilisés de manière connues dans le domaine des rodonticides mais, par soucis de clarté, les agents anticoagulants selon l'invention sont repris ci-dessous avec la correspondance de leur nom ISO, de leur identification chimique internationale et de leur numéro CAS : po ere hinaus Iemallonale ns coumatétralyl 4-hydroxy-3-(1,2,3,4-tétrahydro-1-naphihyl) 5836-29-3

EN chlorophacinone | 2-[(4-chlorphényl)phénylacétyl]-1H-indène1l,3(2H)- | 3691-35-8 ae difénacoum 3-(3-biphényl-4-yl-1,2,3,4-tétrahydro-1-naphtyl)-4- 56073-07-5

PT ee LE bromadiolone 3-[3-(4'-bromobiphényl4-yl}-3-hydroxy-1- 28772-56-7

FN brodifacoum 4-hydroxy-3-(3-{4'- bromo-4-biphénylyl}-1,2,3,4- 56073-10-0 a flocoumafen masse de réaction de cis-4-hydroxy-3-(1,2,3,4- 90035-08-8 tétrahydro-3- (4-(4- trifluorométhylbenzyloxy)phényl)-1- naphtyl)coumarine et de trans-4-hydroxy-3-{1,2,3,4- tétrahydro-3-(4-(4-trifliuorométhylbenzyloxy) phényl)- ee)

hydronaphthalèn-1-yl]- 4-hydroxy-2H-1-benzo thiopyran-2-0ne

De manière préférée, l'agent anticoagulant de l'invention est choisi parmi le bromadiolone, le difénacoum, le brodifacoum et la chlorophacinone. Ces agents anticoagulants ont montré des résultats particulièrement satisfaisants dans le cadre de l'invention.

Selon l'invention, la composition rodonticide comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 25 ppm.

De préférence, ele comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 24 ppm, 23 ppm, 22 ppm, 21 ppm, 20 ppm, 19 ppm, 18 ppm, 17 ppm, 16 ppm, 15 ppm. De manière plus préférée, elle comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 14 ppm, 13 ppm, 12 ppm, 11 ppm, 10 ppm, 9 ppm, 8 ppm, 7 ppm, 6 ppm. De manière toute préférée, elle comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 5 ppm, 4 ppm et même inférieure à 3 ppm. Cette diminution de la teneur en agent anticoagulant présente un avantage indéniable sur le phénomène de contamination secondaire et la toxicité de la composition, comme expliqué ci-dessus.

Selon un mode de réalisation particulier, la composition rodonticide comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant supérieure ou égale à 2 ppm.

Selon l'invention, le synergiste est choisi parmi les anli- inflammatoires non stéroïdiens et les antiagrégants plaquettaires.

A titre d’anti-inflammatoire non stéroïdien utilisable dans la composition de l'invention et d'intérêt pour sa capacité à entraîner des saignements gastriques et intestinaux, on citera notamment :

- les dérivés salicyliés (acide salicylique et ses sels, acide acétylsalicylique et ses sels) ; - les dérivés arylacétiques (diclofénac et ses sels, acéclofénac, sulindac, kétorolac, …) ; - les acides 2-arylpropioniques ou profènes (ibuprofène, kétoprofène, dexkétoprofène, naproxène, oxaprozine, flubiprofène, …) ; - les dérivés indoliques (indométhacine, proglumétacine, acide tiaprofénique, …) ; - les oxicams (méloxicam, piroxicam, ténoxicam, …) ; - les inhibiteurs de cyclooxygénase à libération de monoxyde d'azote (naproxcinod, …) ; - les sulfonanilides ; - les coxibs (célécoxib, étoricoxib, rofécoxib, valdécoxib, ...) ; - la phénylbutazone ; - l'acide niflumique ; - les acides N-arylanthraniliques ou acide phénamiques.

A Titre d'antiagrégant plaquettaire utilisable dans la composition de l'invention et d'intérêt pour son action sur un autre paramètre important de la coagulation du sang lors d'évènements hémoragiques, on citera notamment : - les dérivés salicyliés (acide salicylique et ses sels, acide acétylsalicylique et ses sels) ; - les inhibiteurs des récepteurs de l'adénosine diphosphate (clopidogrel, ticlopidine, prasugrel, …) ;

- les inhibiteurs de la phosphodiestérase (dipyridamole, cilostazol, …) ; - les analogues de l'adénosine triphosphate (Ticagrelor,

Elinogrel, …).

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le synergiste est un dérivé salicylé choisi parmi l'acide salicylique et ses sels et l'acide acétylsalicylique et ses sels. Ces synergistes ont montré des résultats particulièrement satisfaisants. De manière toute préférée, le synergiste est choisi parmi l'acide salicylique et l'acide acétylsalicylique.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant supérieur ou égal à 150, ou même supérieur ou égal à 200.

De manière préférée, elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant supérieur ou égal à 250, supérieur ou égal à 300, superieur ou égale à 350, ou même supérieur ou égale à 400. Ceci a l'avantage, combiné à la faible teneur en anticoagulant selon l'invention, d'améliorer encore les effets recherchés, à savoir maintenir l'efficacité de la composition rodonticide en diminuant la teneur résiduelle en AVK dans l'animal cible.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant inférieur ou égal à 2000, ou même inférieur ou égal à 1750. De manière préférée, elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant inférieur ou égal à 1500, inférieur ou égal à 1250, ou même inférieur ou égale à 1000. Ceci a l'avantage, combiné à la faible teneur en anticoagulant selon l'invention, d'obotenir les effets recherchés, à savoir maintenir l'efficacité de la composition rodonticide en diminuant l'effet de persisiance de l'AVK Tout en contrôlant le coût de fabrication de la composition (optimisation du rapport efficacité/coût).

Selon l'invention, la composition rodonticide est sous forme d'appât et comprend Un support, hôte du principe actif.

En fonction de l'utilisation, des animaux cibles et d'autres paramètres comme le lieu de traitement et l'appétence recherchée, le support selon l'invention peut comprendre, à titre d'exemples : - une ou plusieurs céréale(s) ; et/ou - une ou plusieurs farine(s) d’origine végétale ou animale ; et/ou - une ou plusieurs matière(s) grasse(s) ou huile(s) d'origine végétale ou animale ; et/ou - Une ou plusieurs paraffine(s) ; et/ou - UN OU plusieurs(s) glucides ; et/ou - une ou plusieurs protéines ; et/ou - de la poudre de lait ; et/ou - UN OU plusieurs matières inertes, comme par exemple, le talc ou le kaolin.

En particulier, les aopâts à base de céréales sont avantageux car probablement les plus appétés par les souris et campagnols ; les mélanges de farine et de matières grasses sont les plus appétés par les rats ; et les Mélanges de céréales et matières grasses noyées dans de la paraffine (blocs paraffinés) sont idéaux pour atteindre les animaux cibles en milieux humides, comme les égouts par exemple, bien qu'ils soient moins attractifs en général.

La composition rodonticide selon l'invention peut avantageusement également comprendre un ou plusieurs additif(s)

comme, par exemple, des colorants, des arômes, des agents conservateurs et/ou des anti-oxydants.

Selon un mode de réalisation préféré, la composition de l'invention comprend également un agent sédatif choisi parmi les benzodiazépines.

La composition rodonticide selon l'invention est, de manière préférée, sous forme de granulés, de boulettes, de comprimés, d'aliments agglomérés, de céréales imprégnées ou enrobées, de poudres (destinée à être répandue sur le passage des rongeurs et dans leurs terriers, « poudre de piste » ou « poudre de contact »).

Elle peut également être sous forme d'appât frais ou déshydraté de viandes ou de poissons ; sous forme de fruits ou légumes frais ou déshydratés, sous forme de solution ou suspension aqueuse OU huileuse ou tout autre liquide alcoolisé ou non (par exemple, du lait).

Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications. Il est en outre entendu que l'invention englobe également toutes les combinaisons possibles de caractéristiques et de caractéristiques préférées, décrites ici et citées dans les revendications.

De plus, les exemples suivants sont fournis à des fins d'illustration et ne sont pas destinés à limiter la portée de cette invention.

Exemples

Pour montrer l'efficacité de la composition rodonticide de l'invention, le résultat d'essais comparatifs de destruction effectués sur des rongeurs par ingestion d'appâts rodonticides sont exposés ci-après.

Les essais ont été réalisés, en particulier, suivant le document «Guidance on the Biocidal Products Regulation Vol Il, Efficacy,

Assessment and Evaluation, Version 3.0, April 2018, Appendix 13

Laboratory studies for rodenticides: bait choice test ».

Exemple 1

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur la souris (Mus musculus) d'un appât selon l'invention comprenant 2,5 ppm de brodifacoum et 4000 ppm d'acide salicylique, comparativement à 3 appâts comprenant respectivement 4000, 8000 and 12000 ppm d'acide salicylique seul (appâts en grain).

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes : (morédionts (Sven (9) | Quantité (g) | Quantité (g) | Quantité (g)

Protocole :

Des tests ont été menés sur 40 souris, 10 par type d'appât (5 mâles et 5 femelles).

L'essai a été divisé en trois périodes : période de pré-tests, période de tests et période post-tests : - Lors de la période pré-tests, les animaux ont été placés dans des cages expérimentales contenant de la litière, 4 jours au moins avant le début du test. Pendant cette période d'acclimatation, des granulés alimentaires standard (référence SAFE A04) et de l'eau potable ont été donnés ad libitum. Chaque cage était équipée d'une trémie.

Avant le début de la période de tests, il a été nécessaire de s'assurer que les animaux s'aimentaient normalement. Après acclimatation, deux pots de nourriture (contenant chacun environ 10 9.) ont été remplis d'aliment standard. Tous les autres aliments ont été retirés, mais l'eau est restée librement disponible. La quantité de nourriture placée dans chaque pot était suffisante pour répondre aux besoins quotidiens de chaque animal. L'absorption de nourriture a été déterminée, donc toute la nourriture inutilisée (c'est-à-dire la nourriture laissée dans le pot) et la nourriture dispersée ont été collectées et prises en compte par pesée pour déterminer la quantité de nourriture qui n'a pas été mangée. Tous les aliments non utilisés ont été jetés et le pot a été rempli avec un approvisionnement frais, pour assurer sa sapidité. Cette procédure a été répétée pendant 3 jours supplémentaires et le dernier jour (de cette période de pré-traitement). La quantité totale de nourriture consommée par chaque rongeur a ainsi été calculée chaque jour. Tous les rongeurs mangeaient normalement, donc aucun animal préalablement sélectionné n'a été rejeté.

Une observation clinique a été effectuée par une personne qualifiée pendant cette période de pré-test afin d'éviter tout comportement anormal ou observation qui pourrait compromettre l'étude. - La période de tests a duré 4 jours, de JO à J4.

Pour l'appât 1 (2,5 ppm brodifacoum ; 4000 ppm acide salicylique), à JO, la nourriture standard de laboratoire a été retirée et remplacée par 109 d'appât 1 (A) et 10g de nourriture standard de laboratoire (référence, B}, dans deux pots propres. Chaque jour, la trémie a été pesée, réajustée et tous les aiments/appâts inutilisés ont été jetés, et une nouvelle quantité de A et de B a été placée dans des pots propres.

Les pertes ont également été déterminées. La consommation quotidienne a été mesurée pour A et B, et les consommations respectives ont été déterminées en fonction du poids corporel des animaux. Cette procédure a été répétée tous les jours pendant la période de tests.

Après J4, les animaux ont été remis totalement au régime standard.

La consommation totale dans ce protocole est donnée par la somme des consommations de A et de B. Des valeurs d'appétence

A peuvent ainsi être déterminée suivante la formule A+Bx100, A étant la consommation journalière de l'appât A, et B la consommation journalière de la nourriture standard pour les 10 souris concernées.

Si l'appétence est inférieure à 40% alors A est moins appètent que B. Sil'appétence est entre 40 et 60%, A et B ont la même appétence.

Et, sil'appétence est supérieure ou égale à 60%, A est plus appétent que

B.

Pour chacun des appâts 2-3-4 (acide salicylique seul), à JO, Ia nourriture standard de laboratoire a été retirée et remplacée par 10g d'appât, dans un pot propre. Chaque jour, la trémie a été pesée, réajustée et tous les appâts inutilisés ont été jetés, et une nouvelle quantité d'appât a été placée dans un pot propre. Les pertes ont également été déterminées. - Durant la période post-tests (démarrée à 15), les animaux ont été observés au moins une fois par jour et tout signe de toxicité et de mortalité a été enregistré.

Résultats :

L'évaluation de l'appétence en période de tests a donné les résultats suivants :

Consommation journalière (g)

Appât 1 (A) Nourriture Rapport

BRODIFACOUM 2,5ppm + standard de d’appétence

Sal. Ac. 4000ppm reference (B) | de l'appât 1 (%)

Moyenne

Ceci montre que l'’appât 1 selon l'invention est plus appétent que la nourriture standard de référence. De plus, un appât est considéré comme rencontrant les conditions d'appétence selon les normes européennes en vigueur (Guidance on the BPR: Volume || Efficacy -

Assessment and Evaluation (Parts B+C) si le rapport d'appétence est supérieur ou égal à 20 %.

L'évaluation de la mortalité (&mort individuelle) en période de tests et post-tests a donné les résultats suivants : - 100% de mortalité pour l'appât 1 (brodifacoum 2,5ppm + acide salicylique 4000ppm) entre J5 et J7 pour les mâles et 100% de mortalité entre J4 et J6 pour les femelles, ce qui démontre une très bonne efficacité de l'appât selon l'invention présentant une quantité très faible en AVK (2,5 ppm) comparativement aux appâts actuellement utilisés sur le marché.

De plus, les résultats de perte de poids (maximum 13,9 % de perte) montrent qu'aucun animal n'a souffert (un animal est considéré comme souffrant si la perte de poids est supérieure à 15 %) et que, par conséquent, leur mort est attribuée à l'ingestion de l'appât 1. Ceci est confirmé par les résultats de dissection qui ont montré des signes d'empoisonnement tels que des hémorragies autour des articulations, des saignements de la bouche ou du nez et des appâts dans l'estomac. - 0% de mortalité pour les appâts 2, 3 et 4, ne comprenant que le synergiste en quantité variable et significative. Le synergiste n'a donc aucune activité mortelle lorsqu'il est utilisé seul, même en quantité très élevée.

Exemple 2

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur la souris (Mus musculus) d'un appât selon l'invention comprenant 2,5 ppm de brodifacoum et 4000 ppm d'acide salicylique, comparé à deux appâts comprenant respectivement 25 ppm et 2,5 ppm de brodifacoum seul (appâts sous forme de grains).

Le résidu de brodifacoum a également été mesuré dans les tissus du foie des souris afin d'évaluer la persistance et la contamination secondaire potentielle.

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) Appât 2 Appât 3

Ingrédients Quantité (g) Quantité (g) Quantité (g)

Acide salicylique 299% 4

Protocole :

Des tests ont été menés sur 60 souris, 20 par type d'appât (10 mâles et 10 femelles).

L'essai a été divisé en trois périodes : période de pré-tests, période de tests et période post-tests : - Lors de la période pré-tests, les animaux ont été placés dans des cages expérimentales contenant de la litière, 4 jours au moins avant le début du test. Pendant cette période d'acclimatation, des granulés alimentaires standard (référence SAFE A04) et de l'eau potable ont été donnés ad libitum. Chaque cage était équipée d'une trémie.

Avant le début de la période de tests, il a été nécessaire de s'assurer que les animaux s'aimentaient normalement. Après acclimatation, deux pots de nourriture (contenant chacun environ 10 g.) ont été remplis d'aliment standard. Tous les autres aliments ont été retirés, mais l'eau est restée librement disponible. La quantité de nourriture placée dans chaque pot était suffisante pour répondre aux besoins quotidiens de chaque animal. L'absorption de nouriture a été déterminée, donc toute la nourriture inutilisée (c'est-à-dire la nourriture laissée dans le pot) et la nourriture dispersée ont été collectées et prises en compte par pesée pour déterminer la quantité de nourriture qui n'a pas été mangée. Tous les aliments non utilisés ont été jetés et le pot a été rempli avec un approvisionnement frais, pour assurer sa sapidité. Cette procédure a été répétée pendant 3 jours supplémentaires et le dernier jour (de cette période de pré-traitement). La quantité totale de nourriture consommée par chaque rongeur a été calculée chaque jour. Tous les rongeurs mangeaient normalement, donc aucun animal préalablement sélectionné n'a été rejeté.

Une observation clinique a été effectuée par une personne qualifiée pendant cette période de pré-test afin d'éviter tout comportement anormal ou observation qui pourrait compromettre le démarrage de l'étude. - La période de tests a duré 4 jours, de JO à J4.

A JO, la nourriture standard de laboratoire a été retirée et remplacée par 10g d'appât (1, 2 ou 3), dans un pot propre. Chaque jour, la trémie a été pesée, réajustée et tous les appâts utilisés ont été jetés, et une nouvelle quantité d'appât a été placée dans un pot propre. Les pertes ont également été déterminées. La consommation quotidienne d'appâts a été mesurée, et les consommations respectives d'appâts ont été déterminées en fonction du poids corporel des animaux. Cette procédure a été répétée tous les jours pendant la période de tests.

Après J4, les animaux ont été remis au régime standard. - Durant la période post-tests (démarrée à J5), les animaux ont été observés au moins Une fois par jour et tout signe de toxicité et de mortalité a été enregistré. - De plus, à J4, 50% des animaux (5 mâles et 5 femelles) pour chaque type d'appât ont été euthanasiés et ensuite autopsiés afin de prélever leur foie pour analyse. Au moment de la mort des autres animaux, pour chaque type d'appât, une autopsie a également été effectuée afin de prélever leur foie pour analyse.

Résultats :

Les résultats de l'exemple 2 sont présentés dans le tableau ci- dessous qui reprend, pour chaque appât 1-2-3, la quantité absorbée de brodifacoum, le jour moyen de la mort et le résidu Moyen en brodifacoum dans le foie (pour les animaux non euthanasiés) :

Appât 1 = =

BRODIFACOUM Appäf 2 Appêt 3

BRODIFACOUM | BRODIFACOUM 2,5ppm + Ac. Sal 25ppm 2 5ppm 4000 ppm PP SPP

Quantité moyenne de

Brodifacoum absorbée 0,010 0,101 0,011 ma

Jour moyen de J6,3 J5,8 J6,6 mortalité

Quantité moyenne de résidus de brodifacoum 3,91 36,6 5,04 dans le foie (en mg/kg), jour de la mort

En conclusion, l'appât 1 selon l'invention montre une efficacité en termes de mortalité similaire à l'apopât 2 qui correspond à ce qui est utilisé actuellement sur le marché. De plus, le résidu moyen de brodifacoum dans le foie des rongeurs est plus faible pour l'appât 1 selon l'invention en comparaison avec l'appât 2 et aussi avec l'appât 3 (-22%) qui comprend la même teneur initiale en AVK et pour une même quantité absorbée d'AVK.

Exemple 3

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur le rat brun (Rattus Norvegicus) d'un appât selon l'invention comprenant 2,5 ppm de brodifacoum et 4000 ppm d'acide salicylique, comparé à deux appâts comprenant respectivement 25 ppm et 2,5 ppm de brodifacoum seul (appâts sous forme de grains).

Le résidu de brodifacoum a également été mesuré dans les tissus du foie des rats afin d'évaluer la persistance et la contamination secondaire potentielle.

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) Appât 2 Appât 3

Ingrédients Quantité (g) Quantité (g) Quantité (g)

Acide salicylique 299% 4

Protocole :

Des tests ont été menés sur 60 rats bruns, 20 par type d'appât (10 mâles et 10 femelles).

L'essai a été réalisé tel que décrit dans le protocole de l'exemple 2.

Résultats :

Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous qui reprend, pour chaque appât 1-23, la quantité absorbée de brodifacoum, le jour moyen de la mort et le résidu moyen en brodifacoum dans le foie (pour les animaux non euthanasiés) :

Appât 1 = =

Appât 2 Appât 3

BRODIFACOUM BRODIFACOUM | BRODIFACOUM 2,5ppm + Ac. Sal 2500m 2 5ppm 4000 ppm PP SPP

Quantité moyenne de

Brodifacoum absorbée 0,03 0,4 0,04 (mg)

Jour moyen de J7,2 J7,5 J8,0 mortalité

Quantité moyenne de résidus de brodifacoum dans le 3,06 37,5 4,83 foie (en mg/kg), jour de la mort

En conclusion, l'appât 1 selon l'invention montre une efficacité en termes de mortalité similaire, voire même meilleure, à l'appât 2 qui correspond à ce qui est utilisé actuellement sur le marché.

De plus, l'efficacité de l’appät 1 est supérieure à celle de l'appât 3 qui présente une teneur initiale identique en AVK. Finalement, le résidu moyen de brodifacoum dans le foie des rongeurs est plus faible pour l'appât 1 selon l'invention en comparaison avec l'appât 2 et aussi avec l'appât 3 (-37%) qui comprend la même teneur initiale en AVK et pour une même quantité absorbée d'AVK.

Exemple 4

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur Ia souris (Mus musculus) d'un appât selon l'invention comprenant 10 ppm de bromadiolone et 4000 ppm d'acide salicylique, comparé à deux appâts comprenant respectivement 50 ppm et 10 ppm de bromadiolone seul (appâts sous forme de grains).

Le résidu de bromadiolone a également été mesuré dans les tissus du foie des souris afin d'évaluer la persistance et la contamination secondaire potentielle.

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) | Appât 2 Appât 3

Ingrédients Quantité (g) | Quantité (g) | Quantité (g)

Protocole :

Des tests ont été menés sur 18 souris, 6 par type d'appât (3 mâles et 3 femelles).

L'essai a été réalisé tel que décrit dans le protocole de l'exemple 2.

Résultats :

Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous qui reprend, pour chaque appât 1-23, la quantité absorbée de bromadiolone, le jour moyen de la mort et le résidu moyen en bromadiolone dans le foie (pour les animaux non euthanasiés) :

Appát 1 = =

Appât 2 Appât 3

BROMADIOLONE BROMADIOLONE | BROMADIOLONE 10ppm + Ac. Sal 50 pom 1000m 4000 ppm PP PP

Quantité moyenne de

Bromadiolone 0,12 0,87 0,14 absorbée (mg

Jour moyen de J6,0 J7,3 J6,0 mortalité

Quantité moyenne de résidus de bromadiolone dans le 4,27 25,0 9,7 foie (en mg/kg), jour de la mort

En conclusion, l'appât 1 selon l'invention montre une efficacité en termes de mortalité meilleure par rapport à l'appât 2 qui correspond à ce qui est utilisé actuellement sur le marché. De plus, le résidu moyen de bromadiolone dans le foie des rongeurs pour l'appât 1 selon l'invention est beaucoup plus faible que pour l'appât 2 et aussi beaucoup plus faible que pour l'appât 3 (-56%) qui comprend la même teneur initiale en AVK et pour une même quantité d'AVK absorbée par les rongeurs.

Exemple 5

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur le rat brun (Rattus Norvegicus) d'un appât selon l'invention comprenant 10 ppm de bromadiolone et 4000 ppm d'acide salicylique, comparé à deux appâts comprenant respectivement 50 ppm et 10 ppm de bromadiolone seul (appâts sous forme de grains).

Le résidu de bromadiolone a également été mesuré dans les tissus du foie des rats afin d'évaluer la persistance et la contamination secondaire potentielle.

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) | Appât 2 Appât 3

Ingrédients Quantité (g) | Quantité (g)| Quantité (g)

Protocole :

Des tests ont été menés sur 18 rats, 6 par type d'appât (3 mâles et 3 femelles).

L'essai a été réalisé tel que décrit dans le protocole de l'exemple 2.

Résultats :

Les résultats sont exposés dans le tableau ci-dessous qui reprend, pour chaque appât 1-23, la quantité absorbée de bromadiolone, le jour moyen de la mort et le résidu moyen en bromadiolone dans le foie (pour les animaux non euthanasiés) :

Appát 1 = =

Appât 2 Appât 3

BROMADIOLONE BROMADIOLONE | BROMADIOLONE 10ppm + Ac. Sal 50 pom 1000m 4000 ppm PP PP

Quantité moyenne de

Bromadiolone 0,56 2,79 0,55 absorbée (mg)

Jour moyen de J6,7 J7,0 J7,3 mortalité

Quantité moyenne de résidus de bromadiolone dans le 5,9 25,0 7,03 foie (en mg/kg). jour de la mort

En conclusion, l'appât 1 selon l'invention montre une efficacité en termes de mortalité légèrement meilleure par rapport à l'appât 2 qui correspond à ce qui est utilisé actuellement sur le marché.

De plus, le résidu Moyen de bromadiolone dans le foie des rongeurs pour l’appât 1 selon l'invention est beaucoup plus faible que pour l'appât 2 et aussi plus faible que pour l'appât 3 (-16%) qui comprend la même teneur initiale en AVK et pour une même quantité d'AVK absorbée par les rongeurs.

Exemple 6

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'efficacité sur le rat brun Rattus Norvegicus) d'un appât selon l'invention comprenant 10 ppm de difénacoum et 4000 ppm d'acide salicylique, comparé à deux appâts comprenant respectivement 50 ppm et 10 ppm de difénacoum seul (appâts sous forme de grains).

Le résidu de difénacoum a également été mesuré dans les tissus du foie des rats afin d'évaluer la persistance et la contamination secondaire potentielle.

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) | Appât 2 Appât 3

Ingrédients Quantité (g) Quantité (g) | Quantité (g)

Protocole :

Des tests ont été menés sur 18 rats, 6 par type d'appât (3 mâles et 3 femelles).

L'essai a été réalisé tel que décrit dans le protocole de l'exemple 2.

Résultats :

Les résultats sont exposés dans le tableau ci-dessous reprenant, pour chaque appât 1-2-3, la quantité absorbée de difénacoum, le jour moyen de la mort et le résidu moyen en difénacoum dans le foie (pour les animaux non euthanasiés) :

Appát 1 = =

Appât 2 Appât 3

DIFENACOUM DIFENACOUM DIFENACOUM

10ppm + Ac. Sal 50 pom 1000m 4000 ppm PP PP

Quantité moyenne de

Difénacoum absorbée 0,64 0,75 4,62 (mg)

Jour moyen de J6,0 J7,0 J4,7 mortalité

Quantité moyenne de résidus de difénacourn 43 130 7,9 dans le foie (en mg/kg), jour de la mort

En conclusion, l'appât 1 selon l'invention montre une efficacité en termes de mortalité meilleure par rapport à l'appât 2 qui correspond à ce qui est utilisé actuellement sur le marché. De plus, le résidu moyen de difénacoum dans le foie des rongeurs pour l'appât 1 selon l'invention est beaucoup plus faible que pour l'appât 2 et aussi plus faible que pour l'appât 3 (-45%) qui comprend la même teneur initiale en

AVK et pour une même quantité d'AVK absorbée par les rongeurs.

Exemple 7

L'objectif de cet exemple est d'étudier l’efficacité sur la souris (Mus musculus) d'un appât selon l'invention comprenant 25 ppm de chlorophacinone et 4000 ppm d'acide salicylique, d'un autre appât selon l'invention comprenant 25 ppm de chlorophacinone et 4000 ppm d'acide acétylsalicylique, comparés à un appât comprenant 25 ppm de chlorophacinone seul (appâts sous forme de grains).

Appâts :

Les compositions des appâts préparés sont les suivantes :

Appât 1 (INV) | Appât 2 (INV) | Appât 3

Ingrédients Quantité (g) | Quantité (g) | Quantité (g)

Protocole :

Des tests ont été menés sur 15 souris, 5 par type d'appât.

L'essai a été réalisé tel que décrit dans le protocole de l'exemple 2.

Résultats :

Les résultats sont exposés dans le tableau ci-dessous qui reprend les données de mortalité pour chaque type d'appât :

Appät 1 Appât 2 Appât 3

Chlorophacinone 25ppm | Chlorophacinone 25ppm | Chlorophacinone + Ac. Sal. 2500ppm + Ac. actétylsal. 2500ppm 25 ppm nj No

DT. il | I MORT

EC amours fr

Cet exemple montre que seuls les appâts 1 et 2 selon l'invention permettent d'obtenir 100% de mortalité. Même après 15 jours, l'appât 3 sans synergiste et avec une même teneur en AVK ne mène pas une mortalité complète.

Claims (11)

REVENDICATIONS

1. Composition rodonticide sous forme d'appât, comprenant un support et, à titre de principe actif, l'association (i) d'au moins un agent anticoagulant choisi parmi le coumatétralyl, la chlorophacinone, le difénacoum, la bromadiolone, le brodifacoum, le flocoumafen et la diféthialone et (ii) d'au moins un synergiste choisi parmi les anti-inflammatoires non stéroïdiens et les antiagrégants plaquettaires, caractérisée en ce que ladite composition comprend : - une quantité en poids d'agent anti-coagulant inférieure ou égale à 25 ppm ; et - Un rapport en poids synergiste:agent anti-coagulant compris entre 100 et 2500.

2. Composition rodonticide selon la revendication 1, caractérisée en ce que le synergiste est un dérivé salicylé choisi parmi l'acide salicylique et ses sels et l'acide acétylsalicylique et ses sels.

3. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent anticoagulant est choisi parmi le bromadiolone, le difénacoum, le brodifacoum et la chlorophacinone.

4. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 20 ppm.

5. Composition rodonticide selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité en poids d'agent anticoagulant inférieure ou égale à 10 ppm.

6. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant supérieur ou égal à 200.

7. Composition rodonticide selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant supérieur ou égal à 400.

8. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant inférieur ou égal à 2000.

9. Composition rodonticide selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend un rapport en poids synergiste:agent anticoagulant supérieur ou égal à 1000.

10. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le support comprend : - une ou plusieurs céréale(s) ; et/ou - une ou plusieurs farine(s) d’origine végétale ou animale ; et/ou - une ou plusieurs matière(s) grasse(s) ou huile(s) d'origine végétale ou animale ; et/ou - Une ou plusieurs paraffine(s) ; et/ou - UN OU plusieurs(s) glucides ; et/ou - une ou plusieurs protéines ; et/ou - de la poudre de lait ; et/ou - UN OU plusieurs matières inertes.

11. Composition rodonticide selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un agent sédatif choisi parmi les benzodiazépines.