BE1024210A1 - Particules pour l'administration de medicaments - Google Patents

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BE1024210A1 BE20175134A BE201705134A BE1024210A1 BE 1024210 A1 BE1024210 A1 BE 1024210A1 BE 20175134 A BE20175134 A BE 20175134A BE 201705134 A BE201705134 A BE 201705134A BE 1024210 A1 BE1024210 A1 BE 1024210A1
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Laurent Strodiot
Ashley Galloway
Jin Lee
Michele R Stone
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Abstract

La présente invention concerne des particules pour l'administration de médicaments qui peuvent empêcher l'interaction entre une cargaison biologiquement active comprise au sein des particules et les composants d'un environnement aqueux dans lequel lesdites particules sont présentes. Les particules sont sensibles au pH de telle façon qu'au-dessus d'un taux de pH seuil la cargaison biologiquement active devient accessible à l'environnement immédiat. Par conséquent, de telles particules sont utiles pour le stockage de façon stable d'une cargaison biologiquement active dans une composition aqueuse contenant des composants qui autrement interagissent de façon délétère avec la cargaison, et la libération de la cargaison pour médier un effet biologique dans le corps d'un animal, tel qu'un être humain, auquel la composition est administrée. Il est également fourni des compositions comprenant de telles particules, ainsi que des procédés de fabrication et d'utilisation de ces particules et compositions.

Description

d'hydroxyde d'aluminium (comme l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique et les antigènes pertussiques acellulaires, « DTPa ») , l'antigène Hib est lyophilisé et conditionné séparément de la formulation liquide aqueuse contenant le DTPa/hydroxyde d'aluminium - ceci est le cas, par exemple, dans Infanrix™ Hexa (GSK Vaccines). Il y a deux raisons pour ceci : la première, parce que la partie du polysaccharide dérivé du Hib (polyribosylribitol, « PRP »), de l'antigène Hib conjugué est labile à la dégradation par hydrolyse lorsqu'il est dans une formulation aqueuse (c'est-à-dire que le Hib subit une interaction physique/biochimique avec les molécules d'eau, réduisant sa stabilité) ; et la seconde, parce que le PRP peut interagir avec 1'hydroxyde d'aluminium pour former un réseau de particules (« floculation ») qui l'on pense masque les épitopes au système immunitaire du receveur (c'est-à-dire que le Hib présente une interférence immunologique lorsqu'il est formulé en présence d'hydroxyde d'aluminium). Dans le cas des vaccins tels que Infanrix™ Hexa, le partitionnement des composants vaccinaux entre un composant liquide aqueux et un composant lyophilisé, qui sont reconstitués de façon extemporanée au moment de l'administration, résout les problèmes ci-dessus. Toutefois, cela conduit à un vaccin en deux parties nécessitant la réalisation d'une étape de reconstitution par le personnel médical administrant le vaccin. Un vaccin liquide en une partie avec tous les composants dans un seul récipient offrirait des avantages comme la simplification du remplissage/ conditionnement, du transport/stockage, et de l'administration.
Par conséquent, il existe un désir de solutions au problème de comment combiner physiquement, biochimiquement, et/ou immunologiquement des constituants incompatibles de compositions médicinales combinées (« multivalentes ») en des compositions liquides aqueuses en une partie qui peuvent être conditionnées et stockées dans des récipients uniques, tout en évitant les conséquences délétères de telles incompatibilités. Résumé de 1'invention L'invention est basée sur la découverte des inventeurs que des particules pour l'administration de médicaments peuvent être fabriquées, lesquelles particules contiennent une « cargaison » (par exemple, un constituant biologiquement actif d'une composition médicinale). Dans le contexte d'une composition comprenant de telles particules, les particules peuvent protéger la cargaison contenue à l'intérieur d'interactions potentiellement délétères avec les substances constituant la composition externe à la particule durant le stockage. En outre, les particules peuvent « libérer » ladite cargaison en réponse à l'administration de telle façon que la cargaison est ensuite libre d'exercer son effet au sein du corps du sujet receveur. En particulier, les particules sont créées pour être sensibles au pH, de telle façon que la matrice des particules est insoluble au pH de la composition médicinale finale au sein de laquelle les particules sont stockées, mais soluble au pH relativement élevé du tissu du site d'injection du sujet.
Ainsi, dans un aspect, l'invention fournit une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, lesdites particules étant déclenchées pour libérer ladite cargaison lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux ayant un pH supérieur par rapport au pH d'un environnement aqueux dans lequel lesdites particules sont présentes (c'est-à-dire, stockées) avant d'être ainsi déclenchées.
Dans un autre aspect, l'invention fournit une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans laquelle la quantité de cargaison libérée à partir de ladite pluralité de particules lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux pendant au moins 6 mois à un pH sub-physiologique n'est pas supérieure à 30 % en poids de la quantité totale de la cargaison, et dans laquelle lors de la soumission desdites particules à un pH physiologique déclencheur (supérieur à un pH seuil) la quantité de cargaison libérée en 24 heures ou moins n'est pas inférieure à 50 % en poids de la quantité totale de la cargaison.
Dans un autre aspect, l'invention fournit une composition, une composition immunogène ou un vaccin comprenant une telle pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH. Dans un autre aspect, l'invention fournit un flacon ou un dispositif d'administration parentérale contenant une telle composition (immunogène) ou un vaccin ou une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH.
Dans un autre aspect, l'invention fournit l'utilisation en médecine d'une telle composition, d'une telle composition immunogène ou d'un tel vaccin ou de telles particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH, en particulier pour le traitement ou la prévention d'une infection provoquée directement ou indirectement par un pathogène, ou d'une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes comme le cancer. Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de déclenchement d'une réponse immunitaire contre un pathogène ou un allergène provoquant une infection ou une pathologie, ou des cellules hôtes immunologiquement distinctes responsables d'une pathologie comme le cancer, comprenant l'étape d'administration à un sujet d'une quantité efficace d'une telle pluralité de particules ou d'une composition, d'une composition immunogène ou d'un vaccin.
Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de prévention ou de réduction de 1'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant : la formation de telles particules pour l'administration de médicaments sensibles au pH comprenant ladite cargaison ; et la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux, comprenant tout ajustement nécessaire pour rendre ledit environnement de pH subphysiologique .
Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de prévention ou de réduction de 1'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux de pH subphysiologique dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant : la formation d'une telle pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant ladite cargaison ; et la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux.
Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant l'étape de fabrication d'une solution de ladite cargaison et d'un polymère de la matrice et/ou l'utilisation d'une solution comprenant un polymère et une cargaison. Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant les étapes suivantes : la déprotonation au moins partielle d'un polymère, qui est insoluble dans son état protoné, dans un environnement aqueux de telle façon que le polymère a une charge nette négative et est soluble dans ledit environnement aqueux ; la combinaison dudit polymère avec ladite cargaison pour produire une solution mère ; et la formation des particules par moulage de ladite solution mère et l'élimination de l'environnement aqueux.
Dans un autre aspect, l'invention fournit une pluralité de particules pour l'administration de médicaments pouvant être obtenue ou étant obtenue par de tels procédés de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments.
Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de fabrication d'une composition, comprenant de tels procédés de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments et la formulation desdites particules dans un environnement aqueux. Dans un autre aspect, l'invention fournit un procédé de fabrication d'une composition comprenant une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, la matrice comprenant un polymère, comprenant les étapes suivantes : l'introduction d'une pluralité de particules, fabriquées selon de tels procédés de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments dans un environnement aqueux acide de telle façon que l'environnement acide protone le polymère de la matrice rendant le polymère insoluble dans ledit environnement ; l'élévation du pH de l'environnement aqueux acide à un pH sub-physiologique qui est acceptable pour une administration parentérale tout en conservant l'état insoluble du polymère de la matrice dans ledit environnement ; et la formulation éventuelle desdites particules dans un environnement aqueux de pH subphysiologique .
Dans un autre aspect, l'invention fournit une composition pouvant être obtenue ou étant obtenue par de tels procédés de fabrication d'une composition.
Brève description des dessins
Figure 1 - Proportion de Hib total (non conjugué et conjugué à la TT) dans la fraction du surnageant sous la forme d'un pourcentage (% en poids) de tout le Hib présent (surnageant + culot) dans l'échantillon contenant les particules 700-65 durant le stockage à 4 °C, détectée par HPAEC-PAD.
Figure 2 - Proportion de Hib « libre » (non conjugué) sous la forme d'un pourcentage (% en poids) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué à la TT + libre) présent dans l'échantillon contenant les particules 700-65 (culot + surnageant) détectée par HPAEC-PAD durant le stockage à 4 °C.
Figure 3 - Proportion de Hib total (non conjugué et conjugué à la TT) dans la fraction du surnageant sous la forme d'un pourcentage (% en poids) de tout le Hib présent (surnageant + culot) dans l'échantillon contenant les particules 841-57-1 durant le stockage à 4 °C, détectée par HPAEC-PAD.
Figure 4 - Proportion de Hib « libre » (non conjugué) sous la forme d'un pourcentage (% en poids) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué à la TT + libre) présent dans l'échantillon contenant les particules 841-57-1 (culot + surnageant) détectée par HPAEC-PAD durant le stockage à 4 °C.
Figure 5 - Hib total (non conjugué et conjugué à la TT) détectable par HPAEC-PAD (en yg/ml) dans les échantillons contenant les particules 841-57-2 et 841-57-25 (culot + surnageant) durant le stockage à 4 °C.
Figure 6 - Proportion du Hib total (non conjugué et conjugué à la TT) dans la fraction du surnageant sous la forme d'un pourcentage (% en poids) de tout le Hib présent (surnageant + culot) dans des aliguotes de l'échantillon contenant les particules 855-118-A stockées respectivement pendant approximativement quatre heures à pH 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,2, et 7,4, détectée par HPAEC-PAD.
Figure 7 - Proportion du Hib total (non conjugué et conjugué à la TT) dans la fraction du surnageant sous la forme d'un pourcentage (% en poids) de tout le Hib présent (surnageant + culot) à diverses concentrations des particules (2 mg/ml, 1 mg/ml et 0,5 mg/ml) de l'échantillon contenant les particules 855-14 stockées respectivement pendant approximativement quatre heures à pH 6,8, 7,4 et 8,0, détectée par HPAEC-PAD.
Figure 8 - (A) Microscopie optique montrant la dissolution des particules de l'échantillon 700-65 âgé d ' approximativement un an, des particules de l'échantillon 817-83-1 âgé d'approximativement une semaine, lorsque le pH est augmenté par incréments autour du pH seuil. (B) Microscopie optique montrant la dissolution des particules de l'échantillon 841-12-1 et de l'échantillon 841-12-3 sur 10 minutes à la suite d'une augmentation soudaine du pH de l'échantillon.
Figure 9 - Proportion de Hib « libre » (non conjugué) sous la forme d'un pourcentage (% en poids) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué à la TT + libre) présent dans les échantillons contenant les particules 855-72-2 et 855-72-4 (culot + surnageant) durant le stockage à 25, 37 et 45 °C (avec la valeur à T = 0 soustraite dans chaque cas), détectée par HPAEC-PAD aux jours 14, 68 et 86. L'échantillon témoin 855-72-5 contenait du Hib-TT mais pas de particules.
Figure 10 - Titres moyens en anticorps anti-Hib aux jours 21 (« PII ») et 35 (« PIII ») après la première immunisation de rats adultes. Les groupes d'animaux ont reçu, de gauche à droite sur la figure 10 : groupe 1 (témoin) - Infanrix Hexa (Infanrix Penta utilisé pour reconstituer de façon extemporanée le Hib-TT lyophilisé) ; groupe 2 (témoin) - Infanrix Penta et Hiberix (Hib-TT lyophilisé reconstitué dans du sérum physiologique) coadministrés au niveau de sites différents ; groupe 3 - échantillon de particules contenant le Hib-TT 841-57-1 coadministré au niveau d'un site différent de Infanrix Penta ; groupe 4 échantillon de particules contenant le Hib-TT 841-57-2 mélangé avec Infanrix Penta et administré après stockage à 4 °C pendant 4 semaines ; groupe 5 - échantillon de particules contenant le Hib-TT 700-66 mélangé avec Infanrix Penta et administré après stockage à 4 °C pendant 16 mois.
Abréviations
Hib-CRM : polysaccharide d'Haemophilus influenzae de type b conjugué à la protéine diphtérique CRM197 ; Hib-TT : polysaccharide d'Haemophilus influenzae de type b conjugué à l'anatoxine tétanique ; HPAEC-PAD : chromatographie d'échange d'anions haute pression avec détection ampérométrique pulsée ; kDa : kilodaltons ;
NaCl : chlorure de sodium ; NaOH : hydroxyde de sodium ; PBS : solution tampon phosphate ; PEG : polyéthylène glycol ; PET : polyéthylène téréphtalate ; PLGA : polymère poly(lactide-co-glycolide) ; PMAA : poly(acide méthacrylique) ; PMMA : poly(méthacrylate de méthyle) ; PMMA-co-PMAA : polymère poly(méthacrylate de méthyle)-co-poly(acide méthacrylique) ; PRP : polyribosyl-ribitol ; PVOH : poly(alcool vinylique) ; PVP : poly(vinylpyrrolidone) ; T : time ; THF : tétrahydrofurane ; TT : anatoxine tétanique ; PPI : eau pour préparation injectable.
Description détaillée de l'invention
La présente invention concerne le stockage stable et l'administration de compositions médicamenteuses qui contiennent, dans une composition liquide aqueuse en une partie, des substances (constituants) qui sont incompatibles telles que mutuellement physiquement ou biochimiquement réactives ou, si la composition est une composition immunogène ou un vaccin, enclines à interférer immunologiquement. Ceci est obtenu en séquestrant au moins l'une des substances incompatibles au sein de micro- ou nano-particules afin qu'elle ne soit pas exposée à l'environnement immédiat (c'est-à-dire, la composition aqueuse) contenant la substance avec laquelle elle est incompatible. La substance séquestrée au sein de telles particules est appelée ici la « cargaison biologiquement active ». Les particules sont créées pour être sensibles au pH, ce qui, comme il y est fait référence ici, signifie qu'elles sont sensibles à un pH « déclencheur » de telle façon qu'au- dessous d'un « pH seuil » prédéterminé, la cargaison demeure séquestrée au sein des particules tandis qu'au-dessus du pH seuil, la cargaison n'est plus séquestrée et est accessible à l'environnement immédiat. En réglant la matrice des particules pour quelle ait un pH seuil approprié par rapport au pH local du site d'administration de la cible du sujet prévu, la « délivrance » (accessibilité de la cargaison à la suite de la « libération » à partir des particules) survient uniquement après l'administration.
Particules
Par conséquent, dans un aspect, l'invention fournit une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans laquelle lesdites particules sont déclenchées pour libérer ladite cargaison lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux ayant un pH supérieur par rapport au pH d'un environnement aqueux dans lequel lesdites particules sont présentes avant d'être ainsi déclenchées. En d'autres termes, les particules sont induites à « céder » leur cargaison par une augmentation, au-delà d'un certain pH seuil, du pH de l'environnement local. Par exemple, les particules présentes comme composant d'une composition parentérale formulée de façon finale qui conservent un pH sub-physiologique durant le stockage sont déclenchées pour libérer leur cargaison par le taux de pH élevé rencontré lorsque la composition est injectée dans le tissu musculaire d'un sujet humain.
Dans certains modes de réalisation, la matrice de la particule, au sein de laquelle la cargaison biologiquement active est comprise, est insoluble dans un environnement aqueux à un pH sub-physiologique, mais soluble dans un environnement aqueux à un pH physiologique « déclencheur » (c'est-à-dire, à un pH supérieur au pH seuil). Comme telles, dans certains modes de réalisation, les particules sont intactes à un pH sub-physiologique, tandis que lors de la soumission desdites particules a un pH physiologique déclencheur, lesdites particules sont sensiblement ou complètement dégradées/dissoutes en 24 heures ou moins, par exemple sont dégradées/dissoutes à au moins 80, 85, 90, 95, 99 ou 100 %. Le degré auquel les particules sont intactes ou dégradées/dissoutes peut être déterminé in vitro par microscopie optique.
Dans un autre aspect, l'invention fournit plus particulièrement une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans laquelle la quantité de cargaison libérée à partir de ladite pluralité de particules lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux pendant au moins 6 mois à un pH sub-physiologique n'est pas supérieure à 30 % en poids de la quantité totale de la cargaison, et lors de la soumission desdites particules a un pH physiologique déclencheur (à ou supérieur à un pH seuil) la quantité de cargaison libérée en 24 heures ou moins n'est pas inférieure à 50 % en poids de la quantité totale de la cargaison.
Par « libérée » dans le contexte de l'aspect ci-dessus, il est signifié que la cargaison est détectable dans le surnageant, plutôt que le culot, d'un échantillon contenant les particules après séparation des particules pour l'administration de médicaments, par exemple, par centrifugation. (Par conséquent, la partie aqueuse d'une composition contenant les particules qui demeure lorsque les particules en sont séparées est appelée ici « l'environnement aqueux » ou le « tampon de stockage ». Celui-ci peut ou pas contenir un ou plusieurs constituants biologiquement actifs). Elle est exprimée comme la proportion de cargaison mesurée comme étant présente dans le surnageant par rapport à la quantité « totale » détectée au même point de temps, c'est-à-dire, la quantité du surnageant plus la quantité détectée comme étant associée à la fraction contenant les particules, par exemple, le culot de la centrifugation. La quantité de cargaison libérée peut être déterminée in vitro, comme par HPAEC-PAD. Toutefois, il faudra noter que plus généralement le concept des particules « libérant » la cargaison comme il est utilisé ici signifie que la cargaison n'est plus « séquestrée » par la particule, dans le sens que la cargaison est exposée ou est accessible à l'environnement aqueux. Ainsi, sauf comme il a été susmentionné dans le contexte spécifique de la quantification de l'association de la cargaison avec les particules, « libéré » n'est pas censé impliquer nécessairement une dissociation physique ou une séparation de la cargaison à partir de la matrice de la particule ; cela signifie plutôt que la structure ou l'intégrité de la particule a été modifiée par le changement de pH de telle façon que la cargaison devient accessible à l'environnement aqueux local.
La référence aux particules « comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice » comme il est utilisé ici est censée englober diverses façons selon lesquelles une telle cargaison et un tel matériau de matrice peuvent former ensemble une particule. Lorsqu'elle est « comprise au sein d'une matrice » dans ce sens, on peut dire que la cargaison est séquestrée, ce qui signifie qu'elle est grandement ou entièrement inaccessible à l'environnement externe, par exemple, l'environnement aqueux de la composition. Dans certains modes de réalisation, la cargaison est encapsulée au sein de la matrice. Dans des modes de réalisation préférés, la cargaison est sensiblement dispersée de façon homogène dans toute la matrice ou enchevêtrée avec la matrice de la particule.
Dans certains modes de réalisation, l'environnement aqueux à un pH sub-physiologique comprend un tampon, comme le sérum physiologique, ou un tampon phosphate, Tris, borate, succinate, histidine, citrate ou maléate.
Tel qu'utilisé ici, la signification de « pH subphysiologique » est par rapport à la physiologie locale du sujet receveur prévu des particules (formulées dans une composition administrable), c'est-à-dire, le pH du tissu du site d'injection du sujet. Dans des modes de réalisation préférés, « pH sub-physiologique » et « pH physiologique » signifient respectivement subphysiologique et physiologique par rapport au pH du tissu humain, en particulier le muscle humain et/ou le tissu de nourrisson. Dans certains modes de réalisation, le pH sub-physiologique diffère du pH physiologique d'au moins 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1.2, 1,3, 1,4 ou 1,5 unité de pH, c'est-à-dire que le pH physiologique est au moins de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4 ou 1,5 unité de pH supérieur au pH sub-physiologique. Ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1.2, 1,3, 1,4, 1,5, 2,0 ou 3,0. Dans certains modes de réalisation, le pH sub-physiologique est à ou au-dessous de 6,8, 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1 ou 6,0, ou comprend une plage avec ces valeurs respectives comme limite supérieure et une limite inférieure choisie parmi 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1, 6,0, 5,9, 5,8, 5,7, 5,6, 5,5, 5,4, 5,3, 5,2, 5,1 ou 5,0. Dans certains modes de réalisation, le pH physiologique est à ou au-dessus de 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6 ou 7,7, ou comprend une plage avec ces valeurs respectives comme limite inférieure et une limite supérieure choisie parmi 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4 ou 8,5.
Dans certains modes de réalisation, la quantité de cargaison libérée à partir de ladite pluralité de particules lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux pendant au moins 6 mois à un pH sub-physiologique est inférieure ou égale à 30 % en poids de la quantité totale de la cargaison, comme pas plus de 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 % en poids. Ces valeurs peuvent représenter la limite supérieure d'une plage qui est liée à l'extrémité inférieure par une valeur choisie parmi 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1. Un tel taux de libération de la cargaison (inversement, un tel taux de séquestration au sein des particules) lorsqu'elle est présente dans un environnement aqueux à un pH subphysiologique peut être, dans certains modes de réalisation, obtenu sur une durée plus longue, comme au moins 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois. Ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 48 ou 60 mois.
La quantité de la cargaison libérée à partir desdites particules en 24 heures ou moins de soumission desdites particules a un pH physiologique déclencheur est, dans certains modes de réalisation, supérieure ou égale à 50 % en poids de la quantité totale de la cargaison, telle que pas inférieure à 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100 % en poids. Ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100. Un tel taux de libération de la cargaison en réponse à un pH physiologique déclencheur peut être, dans certains modes de réalisation, obtenu sur une durée plus courte, comme en 20, 16, 12, 10, 8, 6, 4, 2 ou 1 heure (s) ou 45, 30, 15, 10 ou 5 minutes.
Ces valeurs peuvent représenter la limite supérieure d'une plage qui est liée à l'extrémité inférieure par une valeur choisie parmi 16, 12, 10, 8, 6, 4, 2 ou 1 heure(s) ou 45, 30, 15, 10, 5 ou 1 minute(s).
Dans certains modes de réalisation, l'environnement aqueux de pH sub-physiologique dans lequel les particules sont présentes pendant au moins 6 mois est maintenu à une température située entre 2 et 8 °C, par exemple, à environ 4 °C. Toutefois, dans certains modes de réalisation, les particules de l'invention sont thermostables. Ceci signifie que tout en étant présentes dans l'environnement aqueux de pH sub-physiologique à une température située dans la plage de 2 à 8 °C (c'est-à-dire, ne dépassant pas 2, 3, 5, 6, 7, 8 ou, de préférence, 4 °C), les particules peuvent être soumises à une excursion de température (c'est-à-dire, une température dépassant 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 °C) ne dépassant pas environ 25 °C ou 37 °C pendant une période allant jusqu'à 12 semaines, comme pour une durée située entre 1 jour et 2, 4, 6, 8, 10 ou 12 semaines.
Dans certains modes de réalisation, la soumission des particules à un pH physiologique déclencheur survient à une température autour de la température corporelle du receveur, en particulier autour de la température du tissu du site d'injection du receveur, comme à ou environ 37 °C dans le cas d'un être humain.
Dans certains modes de réalisation, les particules sont hautement uniformes en ce qui concerne la forme, la taille et/ou la composition, par exemple comme conséquence du moulage. Une façon selon laquelle de telles particules peuvent être fabriquées consiste à utiliser la Technologie PRINT™ (Liquidia Technologies,
Inc.), qui est un procédé capable de former des (micro-et/ou nano-) particules qui : (i) sont monodispersées en taille et forme uniforme ; (ii) peuvent être moulées sous toute forme ; (iii) peuvent être composées essentiellement de tout matériau de matrice ; (iv) peuvent être formées dans des conditions douces (compatibles avec des cargaisons délicates) ; (v) peuvent faire l'objet d'une chimie post- fonctionnalisation (par exemple, une bioconjugaison d'agents actifs et/ou de composants de ciblage) ; et (vi) qui fabrique initialement des particules dans un réseau bidimensionnel adressable (qui ouvre des approches combinatoires puisque les particules peuvent être munies d'un « code-barres »). Les procédés et les matériaux pour la fabrication des particules de la présente invention sont en outre décrits et divulgués dans les brevets émis et les demandes de brevet en coattente des codemandeurs, dont chacun est incorporé ici en référence dans son intégralité : brevets U.S. No. 8 518 316 ; 8 444 907 ; 8 420 124 ; 8 268 446 ; 8 263 129 ; 8 158 728 ; 8 128 393 ; 7 976 759 ; publications de demande de brevet U.S. No. 2013-209564 ; 2013-0249138, 20130241107, 2013-0228950, 2013-0202729, 2013-0011618, 2013-0256354, 2012-0189728, 2011-151015, 2010-0003291, 2009-0165320, 2008-0131692 ; publication PCT No. WO2015/073831 ; et demandes en attente 13/852 683 déposée le 28 mars 2013 et 13/950 447 déposée le 25 juillet 2013.
Les particules produites en utilisant la Technologie PRINT™ sont fabriquées par moulage des matériaux prévus pour fabriquer les particules dans des cavités de moule. La Technologie PRINT™ utilise généralement des moules à faible énergie de surface fabriqués à partir de matériaux tels que des silicones, des élastomères à base de perfluoro-polyéthers (PFPE) ou d'autres matériaux à base d'hydrocarbures pour répliquer des structures de la taille du micron ou du nanomètre sur un modèle de référence. Les polymères utilisés dans les moules sont souvent liquides à la température ambiante et ils peuvent être réticulés par photochimie en solides élastomères qui permettent une réplication à haute résolution de structures de la taille du micron ou du nanomètre. Le polymère liquide se « solidifie » lorsqu'il est en contact avec un modèle de référence, formant de cette façon une image réplique des structures sur le modèle de référence. La solidification du moule en contact avec le modèle de référence peut prendre place par durcissement (thermiquement ou photochimiquement), par refroidissement par vitrification, et/ou par cristallisation. Après retrait du moule polymère du modèle de référence, le polymère forme un modèle calqué qui comprend des cavités ou des répliques de renfoncements des caractéristiques de la taille du micron ou du nanomètre du modèle de référence. Les cavités de la taille du micron ou du nanomètre dans le modèle calqué peuvent être utilisées pour une fabrication à haute résolution de particules. La Technologie PRINT™ permet la fabrication de particules organiques et inorganiques monodispersées avec un contrôle simultané sur la structure (par exemple, la forme, la taille et la composition) et la fonction (par exemple, la structure à la surface) . La nature monodispersée des particules en termes de constitution physique et de composition fournit des propriétés de particules hautement uniformes et prédéterminables telles que les taux de dégradation/dissolution des particules et, de cette façon, les taux de libération de la cargaison et les plages posologiques.
Les aspects techniques à prendre en considération lors de la conception d'un système de support des particules en utilisant la Technologie PRINT™ comprennent, entre autres : (i) la compatibilité de la cargaison des particules ou des matériaux de la matrice avec les matériaux du moule polymère PRINT™ ; (ii) le profil souhaité de dégradation/dissolution des particules pour la libération de la cargaison, (iii) la fonctionnalisation de la surface pour le ciblage des particules ou la compatibilité des particules, (iv) le module des particules ; et (v) la combinaison des points (i) à (iv) dans la formation d'une solution précurseur des particules qui peut être soumise au processus de moulage. La compatibilité de la cargaison au sein d'une matrice de particules peut être adressée, par exemple, en ajustant 1'hydrophilicité de la matrice pour correspondre à celle de la cargaison par le choix judicieux des matériaux de la matrice. La dégradation/ dissolution des particules est discutée ici. Le module des particules peut être ajusté en changeant, par exemple, les constituants de la particule. Finalement, le précurseur de la particule peut être optimisé pour la fabrication de particules, le cas échéant, par l'addition de comonomères ou de cosolvants pour modifier les propriétés physiques de la solution précurseur des particules.
Dans des modes de réalisation de l'invention dans lesquels les particules sont moulées, les particules produites de cette façon auront une taille et une forme qui miment sensiblement la forme et la taille de la cavité du moule dans lequel chaque particule a été formée. Selon la dimension d'une cavité de moule, les particules peuvent être des microparticules ou des nanoparticules. En choisissant un moule de dimensions appropriées, la taille et la forme des particules peuvent être ajustées pour satisfaire des besoins d'administration spécifique tels que, par exemple, le chargement de la cargaison, le taux de dégradation/ dissolution, etc. Dans certains modes de réalisation, les microparticules selon la présente invention peuvent avoir la plus grande dimension inférieure à environ 1000 pm, inférieure à environ 900 pm, inférieure à environ 800 pm, inférieure à environ 700 pm, inférieure à environ 600 pm, inférieure à environ 500 pm, inférieure à environ 400 pm, inférieure à environ 300 pm, inférieure à environ 200 pm, inférieure à environ 100 pm, inférieure à environ 50 pm, inférieure à environ 10 pm, inférieure à environ 5 pm, ou environ 1 pm. Dans d'autres modes de réalisation, les particules sont des nanoparticules et peuvent avoir la plus grande dimension inférieure à environ 1000 nm, inférieure à environ 900 nm, inférieure à environ 800 nm, inférieure à environ 700 nm, inférieure à environ 600 nm, inférieure à environ 500 nm, inférieure à environ 400 nm, inférieure à environ 300 nm, inférieure à environ 200 nm, inférieure à environ 100 nm, ou inférieure à environ 50 nm. Une personne de compétence moyenne dans le domaine comprendra que les cavités du moule et les particules correspondantes produites à partir de ces moules peuvent avoir une dimension située entre les tailles explicitement mentionnées ci-dessus. En outre, la dimension peut être une longueur, une largeur, ou un diamètre de la particule.
Dans certains modes de réalisation, l'axe le plus long des particules se situe entre environ 1 et 10 pm, en particulier entre 5 et 7 pm, comme 6 pm. Dans certains modes de réalisation, les particules ont au moins un axe qui est inférieur à 200 nm, et elles peuvent être éventuellement stérilisées par filtration.
Une personne de compétence moyenne dans le domaine comprendra également que les particules peuvent être dimensionnées pour avoir les rapports d'aspect choisis. Tel que défini ici, « rapport d'aspect » décrit le rapport de l'axe le plus long sur l'axe le plus court d'une particule. Dans certains modes de réalisation, le rapport d'aspect est d'au moins 1/1, d'au moins 2/1, d'au moins 5/1, d'au moins 10/1, d'au moins 50/1, ou d'au moins 100/1. Dans des modes de réalisation particuliers, le rapport d'aspect se situe entre environ 1/1 et environ 5/1, entre environ 5/1 et environ 10/1, ou entre environ 10/1 et 100/1. Les particules peuvent être moulées en toute forme souhaitée. Dans certains modes de réalisation, les particules sont en forme d'anneau ou en forme de bâtonnet. Dans certains modes de réalisation, les particules sont destinées à une administration parentérale, comme une administration intradermique ou sous-cutanée ou, de préférence, intramusculaire.
Matrice des particules
Les particules de la présente invention comprennent une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice. La matrice fournit un substrat structural pour former les particules et influence la stabilité des particules et la cinétique de leur dégradation/dissolution en réponse à un pH déclencheur. Par conséquent, les particules de l'invention ont des profils de libération de la cargaison réglables, en partie par 1'intermédiaire du choix des matériaux de la matrice et de leurs proportions relatives, etc. La matrice des particules peut être fabriquée en utilisant divers matériaux y compris des protéines de synthèse, des protéines naturelles, des protéines recombinantes, des peptides, des polymères de synthèse, des polymères bioabsorbables, des polysaccharides, des acides nucléiques, des petites molécules, ou l'une quelconque de leurs combinaisons. Les polymères bioabsorbables appropriés comprennent un poly(alcool vinylique) (PVOH), un polyéthylène glycol (PEG), un polyacide acrylique, un polyacrylamide, une poly(vinylpyrrolidone) (PVP), des polyacides aminés synthétiques ou naturels, et des PMMA-co-PMAA. Les polysaccharides appropriés comprennent le dextrane, des dérivés de dextrane, le chitosane, des dérivés de chitosane, l'acide hyaluronique, l'acide alginique, l'agarose, la pectine, la cellulose, des dérivés cellulosiques, des éthers de cellulose, la gomme xanthane, le carraghénane, la gomme guar, l'amidon, et l'inuline. La gélatine est également appropriée pour la matrice de la particule.
Ainsi, dans certains modes de réalisation, la matrice est polymère, c'est-à-dire qu'elle est composée d'un ou de plusieurs polymères. Le polymère peut être un homopolymère, ou un hétéro- ou co-polymère, comme un polymère alterné ou séquencé. De préférence, une telle matrice polymère est biocompatible, biodégradable, biorésorbable et/ou excrétable dans et à partir du corps humain. Dans certains modes de réalisation, le polymère de la matrice polymère, lorsqu'elle est dans l'environnement aqueux à pH sub-physiologique, est dans un état au moins partiellement protoné et/ou peut avoir une charge approximativement ou exactement neutre et être insoluble.
Dans certains modes de réalisation, la matrice polymère comprend un polymère ayant un pKa inférieur au pH physiologique seuil.
Dans certains modes de réalisation, la matrice polymère comprend un copolymère (poly(méthacrylate de méthyle)-co-poly(acide méthacrylique) (copolymère ΡΜΜΆ-co-PMAA) ; poly(acide glutamique)-co-poly(lysine) ; des hétéro- ou homo-poly(acides aminés) zwittérioniques ; le carboxyméthyl-chitosane ; le phtalate d'hypromellose ; 1'acétosuccinate d'hypromellose ; ou un copolymère d'acrylate représenté par la formule générale (1) : (1)
dans laquelle : RI représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et R3 représente un groupe méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, n-butyle, iso-butyle, tert-butyle, sec-butyle, phényle, ou benzyle. Le copolymère PMMA-co-PMAA peut avoir une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) située dans la plage de 1 à 200 kDa, comme dans la plage de 50 à 60 kDa ou 35 à 45 kDa ou 22 à 28 kDa ou 8 à 12 kDa, comme une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) de 10, 25, 40, 55 ou 125 kDa.
Dans certains modes de réalisation, la matrice polymère comprend un copolymère PMMA-co-PMAA, dans lequel le rapport molaire du monomère de méthacrylate de méthyle (MMA) sur le monomère d'acide méthacrylique (MAA) dans le copolymère se situe dans la plage de 1/1 à 4/1, comme dans la plage de 1,5 à 2/1. Dans d'autres modes de réalisation, la matrice polymère comprend du poly(acide glutamique)-co-poly(lysine), dans lequel le rapport molaire du monomère d'acide glutamique sur le monomère de lysine est approximativement ou exactement de 1/1.
Cargaisons
Les particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH de la présente invention comprennent, en plus de la matrice discutée ci-dessus, une cargaison biologiquement active. Une telle cargaison est séquestrée au sein des particules, permettant un stockage au sein d'un environnement aqueux tout en empêchant toutes les interactions indésirables entre la cargaison et les composants de l'environnement aqueux. Par « biologiquement active » tel qu'utilisé ici en relation avec la cargaison, il est signifié que la cargaison n'est pas inerte par rapport au fonctionnement biologique (par exemple, physiologique, immunologique, etc.) du corps du receveur auquel les particules sont administrées. En d'autres termes, une telle cargaison biologiquement active est capable d'interagir avec le corps du receveur pour médier d'une certaine façon l'effet biologique. L'effet biologique peut être un effet thérapeutique ou prophylactique et, par conséquent, la cargaison peut être un « médicament », qui en rapport avec les particules de l'invention est utilisé ici dans son sens le plus large. Par conséquent, la cargaison peut être un agent actif, un agent pharmaceutique, un agent thérapeutique, ou un agent vaccinal. Dans certains modes de réalisation, les particules peuvent comprendre chacune plus d'une cargaison biologiquement active, comme une, deux, trois ou quatre cargaisons différentes ou plus. Dans certains modes de réalisation, les particules peuvent comprendre chacune plus d'une cargaison biologiquement active qui sont du même type, comme deux, trois ou quatre médicaments ou plus ou deux, trois ou quatre agents thérapeutiques ou plus. Dans certains modes de réalisation, les particules peuvent comprendre chacune plus d'une cargaison biologiquement active qui sont de types différents, comme un, deux, trois ou quatre médicaments ou plus et un, deux, trois ou quatre agents vaccinaux ou plus.
La cargaison biologiquement active peut comprendre plus particulièrement un antigène, un anticorps, un composé médicamenteux à petite molécule, une immunoglobuline, une protéine, un polysaccharide, un conjugué protéine-polysaccharide, un acide nucléique ou un adjuvant (agent immunomodulateur non spécifique). La cargaison biologiquement active peut, dans certains modes de réalisation, être sensible à l'hydrolyse signifiant que, sujette aux paramètres prévalents tels que le pH, la température, la force ionique, etc., la cargaison est sensible à un degré matériel de dégradation par hydrolyse lorsqu'elle est en contact avec un environnement aqueux. Par exemple, un degré « matériel » de dégradation par hydrolyse pourrait être, dans le contexte d'une cargaison d'antigène, un degré de dégradation qui provoque une réduction détectable de l'immunogénicité ou de l'antigénicité. Dans certains modes de réalisation, la cargaison biologiquement active a un point isoélectrique bas (pi), comme un pi de 4 ou inférieur, en particulier de 3 ou 2 ou inférieur. Dans certains modes de réalisation, la cargaison biologiquement active comprend des groupes phosphate, comme dans des liaisons phosphodiester.
Dans des modes de réalisation particuliers, la cargaison biologiquement active comprend un antigène. Le terme « antigène » est bien compris de l'homme du métier comme signifiant un agent capable de déclencher une réponse immunitaire dans un corps humain ou animal. Par conséquent, les antigènes sont les « principes actifs » dans les compositions immunogènes/vaccins. Un antigène peut comprendre ou être constitué, par exemple, d'une protéine ou d'un polypeptide, d'un saccharide tel qu'un oligo- ou poly-saccharide, un conjugué d'une protéine et d'un saccharide ou un acide nucléique. Les antigènes peuvent se présenter sous des formes diverses, comme des protéines purifiées ou recombinantes, des polysaccharides, des conjugués de ces protéines et polysaccharides, des vecteurs d'acide nucléique pour une production d'antigène in vivo, des bactéries ou des virus entiers inactivés, des fragments viraux, des particules pseudovirales, des bactéries vivantes atténuées, des virus atténués se répliquant ou des complexes de la membrane externe bactérienne. Les antigènes, étant la cargaison selon l'invention, peuvent être de tout type d'antigène tel que décrit ci-dessus, et peuvent être des antigènes dérivés de ou associés à un pathogène (comme une bactérie, un virus ou un autre pathogène), un cancer/une tumeur, une affection allergique ou auto-immune, une affection pathologique non infectieuse, une condition de dépendance, ou toute autre condition physiologique justifiable d'une intervention prophylactique ou thérapeutique par l'intermédiaire d'une immunisation.
Dans certains modes de réalisation dans lesquels la cargaison biologiquement active est un antigène, ladite cargaison comprend un saccharide tel qu'un oligo- ou poly-saccharide. L'expression « oligo/ polysaccharide » sera utilisée ici pour signifier un oligosaccharide ou un polysaccharide qui a été isolé d'un pathogène. Dans certains de ces modes de réalisation, 1'oligo/polysaccharide a un point isoélectrique (pi) bas, comme un pi de 4 ou inférieur, en particulier de 3 ou 2 ou inférieur. L'oligo/ polysaccharide peut être utilisé sous sa forme native isolée du pathogène, ou il peut être traité. Un tel traitement peut être, par exemple, une réduction des saccharides natifs, par exemple, par microfluidisation (d'autres technigues sont décrites dans le document EP 0497524).
Dans certains modes de réalisation, l'oligo/ polysaccharide est dérivé d'un pathogène bactérien et en particulier peut être dérivé d'un saccharide capsulaire bactérien ou d'un lipooligosaccharide (LOS) ou d'un lipopolysaccharide (LPS). Par exemple, 1'oligo/polysaccharide peut être dérivé d'un pathogène bactérien choisi dans le groupe constitué de : Haemophilus influenzae type b (« Hib ») ; Neisseria meningitidis (en particulier des sérotypes A, C, W et/ou Y) ; Streptococcus pneumoniae (en particulier des sérotypes 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F et/ou 33F) ; Staphylococcus aureus ; Bordetella pertussis ; et
Salmonella typhi.
Dans un mode de réalisation particulier, le saccharide dans ladite cargaison d'antigène comprenant un saccharide est un oligo/polysaccharide conjugué à une protéine de support, c'est-à-dire que la cargaison est un antigène conjugué d' oligo/polysaccharide-protéine . De tels conjugués sont bien connus dans l'art comme moyen pour conférer à l'antigène d'oligo/ polysaccharide le caractère dépendant des lymphocytes T de la réponse immunitaire déclenchée par la protéine de support. Par conséquent, les protéines de support sont choisies pour leur capacité à fournir une source d'épitopes de lymphocytes T auxiliaires. Dans un conjugué oligo/polysaccharide-protéine donné, la protéine de support peut être dérivée du même pathogène que 1 ' oligo/polysaccharide, ou d'un pathogène différent. Les protéines de support appropriées pour une utilisation dans les cargaisons d'antigènes conjugués d'oligo/ polysaccharide-protéine de 1'invention sont bien connues dans l'art, et comprennent : l'anatoxine tétanique, le fragment C de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197 ou un autre mutant non toxique de la toxine diphtérique, la protéine D d'Haemophilus influenzae non typable, un complexe de protéines de la membrane externe (OMPC) de Neisseria meningitidis, la PhtD pneumococcique, la pneumolysine pneumococcique, l'exotoxine A de Pseudomonas aeruginosa (EPA), 1'hémolysine détoxifiée de Staphylococcus aureus, l'adénylate cyclase détoxifiée de Bordetella sp., l'entérotoxine thermolabile détoxifiée d.' Escherichia coli, ou la sous-unité B de la toxine cholérique (CTB) ou la toxine cholérique détoxifiée.
Comme il a été discuté ci-dessus, la cargaison biologiquement active des particules de 1'invention peut être sensible à l'hydrolyse. Dans le cas d'un antigène conjugué d'oligo/polysaccharide-protéine, la sensibilité à l'hydrolyse peut se manifester comme un clivage par hydrolyse au sein de la chaîne saccharidique ou entre le saccharide et la protéine de support, dans un cas comme dans l'autre entraînant la production de saccharide « libre » (non conjugué), c'est-à-dire, un saccharide qui n'est pas conjugué à la protéine, ce qui n'est pas souhaitable. Du fait que la séquestration de l'antigène conjugué d'oligo/ polysaccharide-protéine au sein des particules de l'invention sert à protéger l'antigène conjugué contre des interactions hydrolytiques possibles avec un environnement aqueux (pH sub-physiologique) dans lequel les particules peuvent être présentes, la perte de l'intégrité du conjugué durant le stockage des particules dans un environnement aqueux est minimisée. Ainsi, dans certains modes de réalisation dans lesquels la cargaison biologiquement active est un antigène conjugué d ' oligo/polysaccharide-protéine, la quantité de saccharide libre (non conjugué), dérivé dudit conjugué d'oligo/polysaccharide, présent collectivement dans les particules pour l'administration de médicaments et l'environnement aqueux n'est pas supérieure à 30 ou 25 ou 20 ou 15 ou 10 % en poids de la quantité totale du saccharide conjugué et libre présent collectivement dans les particules et l'environnement aqueux durant au moins 6 mois dans un environnement aqueux à pH sub-physiologique. Ces valeurs peuvent représenter respectivement l'extrémité supérieure d'une plage qui est liée à l'extrémité inférieure par une valeur choisie parmi 25, 20, 15, 10 ou 5 % en poids.
Dans certains de ces modes de réalisation, un tel taux maximal d'augmentation du saccharide libre s'applique durant une période supérieure à 6 mois, comme d'au moins 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois. Ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 48 ou 60 mois. Dans certains de ces modes de réalisation, l'environnement aqueux de pH sub-physiologique dans lequel les particules sont présentes pendant au moins 6 mois est maintenu à une température située entre 2 et 8 °C. Dans des modes de réalisation particuliers, les particules peuvent être soumises à une seule excursion à une température dépassant cette plage, toutefois ne dépassant pas environ 37 °C pendant plus longtemps qu'environ 2 semaines. De préférence, l'excursion ne dépasse pas environ 25 °C.
Dans des modes de réalisation préférés, la cargaison biologiquement active comprend un oligo/ polysaccharide dérivé du saccharide capsulaire d'Haemophilus influenzae de type b (« Hib » ; phosphate de polyribosylribitol ou « PRP ») , éventuellement sous sa forme native pleine longueur, conjugué au CRM197 ou, de façon davantage préférée, l'anatoxine tétanique. Dans d'autres modes de réalisation préférés, 1'oligo/ polysaccharide est dérivé du saccharide capsulaire de Neisseria meningitidis, en particulier du sérotype A. Dans ces modes de réalisation préférés, les antigènes conjugués sont de préférence sensiblement dispersés de façon homogène dans toute la matrice de la particule.
Compositions
Les particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH de l'invention peuvent être stockées et administrées à un sujet, celui-ci étant un animal, en particulier un mammifère, plus particulièrement un être humain, dans une composition acceptable pour un usage parentéral. Par conséquent, dans un aspect de l'invention, il est fourni une composition comprenant une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH de l'invention dans un environnement aqueux, de préférence stérile. Une telle composition de l'invention peut être une composition immunogène, c'est-à-dire, une composition capable de déclencher chez un sujet une réponse immunitaire dirigée spécifiquement contre un ou plusieurs composants antigéniques présents dans la composition. Une telle composition immunogène peut être un vaccin. En d'autres termes, l'invention fournit un vaccin comprenant une composition (immunogène) de l'invention telle que décrite ici.
De préférence, de telles compositions conservent un pH inférieur au pH physiologique seuil des particules ou, en d'autres termes, sont de pH sub-physiologique. Un tel pH sub-physiologique de la composition ou de son environnement aqueux est déterminé par rapport au pH physiologique local du type de tissu/de la région anatomique en particulier (par exemple, intramusculaire, intraveineux) du type de sujet particulier (par exemple, animal, mammifère, être humain, adulte, nourrisson) auquel la composition est prévue être administrée directement. Dans certains modes de réalisation, la composition/1'environnement aqueux est ajusté pour avoir un pH à ou inférieur à 6,8, 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1 ou 6,0. Les valeurs peuvent définir respectivement l'extrémité supérieure d'une plage qui est définie à l'extrémité inférieure par une valeur choisie parmi 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1, 6,0, 5,9, 5,8, 5,1, 5,6, 5,5, 5,4, 5,3, 5,2, 5,1 ou 5,0. L'environnement aqueux peut contenir un ou plusieurs excipients physiologiquement acceptables et/ou un tampon tel que le sérum physiologique, ou un tampon phosphate, Tris, borate, succinate, histidine, citrate ou maléate.
La composition peut comprendre plus d'une population de particules sensibles au pH, chaque population contenant des cargaisons différentes et comprenant les mêmes matrices de particules ou des matrices de particules différentes. Ainsi, dans certains modes de réalisation, la composition comprend une première pluralité et une seconde pluralité de particules, dans laquelle ladite seconde pluralité de particules comprend une cargaison autre que la cargaison de la première pluralité de particules. En variante, la composition peut contenir une pluralité de populations de particules différant en caractéristiques physiques telles que le polymère de la matrice, la taille, et la forme ; de telles populations peuvent comprendre respectivement les mêmes cargaisons ou des cargaisons différentes.
Dans certains modes de réalisation, par exemple, lorsque la matrice polymère des particules comprend un copolymère PMMA-co-PMAA, les particules sont présentes dans la composition à une concentration de 0,1 à 15, 0,5 à 12,5, 1 à 10 ou 2 à 5 mg/ml, comme 0,5 à 3 mg/ml, en particulier 1,0 à 2,5 mg/ml. Dans de tels modes de réalisation, le copolymère PMMA-co-PMAA peut présenter, par exemple, un rapport molaire du monomère de méthacrylate de méthyle (MMA) sur le monomère d'acide méthacrylique (MAA) situé dans la plage de 1/1 à 4/1 (comme dans la plage de 1,5 à 2/1) et peut avoir une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) située dans la plage de 1 à 200 kDa, comme dans la plage de 50 à 60 kDa ou 35 à 45 kDa ou 22 à 28 kDa ou 8 à 12 kDa, comme une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) de 8,5, 10, 23,9, 25, 37, 40, 51, 55 ou 125 kDa.
Comme conséquence de la cargaison séquestrée au sein de la matrice des particules, l'accessibilité de la cargaison à l'environnement aqueux est altérée ou sensiblement empêchée. Par conséquent, la cargaison est sensiblement empêchée par la matrice d'interagir avec les composants de l'environnement aqueux, ou une telle interaction est au moins réduite par rapport à la situation en l'absence de la matrice des particules. Dans certains modes de réalisation, ladite interaction est empêchée ou réduite pendant au moins 6 mois, comme 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois (ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 48 ou 60 mois) ; dans certains de ces modes de réalisation, la composition est conservée à environ 4 °C.
Dans certains modes de réalisation, dans lesquels la composition est une composition immunogène, l'environnement aqueux (c'est-à-dire, ne comprenant pas les particules présentes à l'intérieur) comprend un ou plusieurs antigènes, et éventuellement des composants associés tels qu'un ou plusieurs adjuvants. Un tel adjuvant peut avoir un pi élevé, comme un pi de 8 ou supérieur, comme de 9 ou 10 ou supérieur, en particulier de 11 ou supérieur. Dans un mode de réalisation préféré, l'adjuvant est 1'hydroxyde d'aluminium.
Les un ou plusieurs antigènes compris dans l'environnement aqueux dans certains modes de réalisation de la composition immunogène peuvent, dans certains modes de réalisation, être choisis parmi : l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique, les antigènes pertussiques acellulaires (tels que l'anatoxine pertussique, 1'hémagglutinine filamenteuse, la pertactine), l'antigène de surface de l'hépatite B (Ag HBs) et le vaccin polio inactivé (IPV), l'antigène conjugué d'oligo/polysaccharide d'Haemophilus influenzae de type b, l'antigène conjugué d'oligo/ polysaccharide de N. meningitidis du sérotype C, l'antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de N. meningitidis du sérotype A, l'antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de N. meningitidis du sérotype W, l'antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de N. meningitidis du sérotype Y et l'antigène de N. meningitidis du sérotype B. En particulier, les combinaisons suivantes d'antigènes peuvent être comprises au sein de l'environnement aqueux des compositions immunogènes de l'invention : i. anatoxine diphtérique et anatoxine tétanique ; ii. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires ; iii. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires et Ag HBs ; iv. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires et IPV ; V. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antiqènes pertussiques acellulaires, Ag HBs et IPV ; vi. oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support et oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support ; vii. oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support, oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support et antigène dérivé de Neisseria meningitidis du sérotype B (MenB).
De préférence, lorsque l'environnement aqueux de la composition immunogène comprend l'une des combinaisons (i) à (v) ci-dessus, la cargaison est un antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de Hib. De façon également préférée, lorsque l'environnement aqueux de la composition immunogène comprend l'une des combinaisons (vi) et (vii) ci-dessus, la cargaison est un antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de MenA. Dans certains de ces modes de réalisation dans lesquels l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique, les antigènes pertussiques acellulaires et/ou l'Ag HBs sont présents dans l'environnement aqueux, l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique, les antigènes pertussiques acellulaires sont adsorbés sur de 1'hydroxyde d'aluminium et l'Ag HBs est adsorbé sur du phosphate d'aluminium. Dans certains de ces modes de réalisation, l'anatoxine diphtérique est présente à la quantité par dose de 1 à 10 unités internationales (UI) (par exemple, exactement ou approximativement 2 UI) ou de 10 à 40 UI (par exemple, exactement ou approximativement 20 ou 30 UI) ou de 1 à 10 unités de limite de floculation (Lf) (par exemple, exactement ou approximativement 2 ou 2,5 ou 9 Lf) ou de 10 à 30 Lf (par exemple, exactement ou approximativement 15 ou 25 Lf), et l'anatoxine tétanique est présente à la quantité par dose de 10 à 30 UI (par exemple, exactement ou approximativement 20 UI) ou de 30 à 50 UI (par exemple, les exactement ou approximativement 40 UI) ou de 1 à 15 Lf (par exemple, exactement ou approximativement 5 ou 10 Lf) .
Dans certains modes de réalisation, en plus de l'antigène conjugué d'oligo/polysaccharide de Hib associé aux particules, la composition immunogène comprend, dans son environnement aqueux, de l'anatoxine diphtérique et de l'anatoxine tétanique aux quantités exactes ou approximatives respectives par dose de : 30/40 UI ; 25/10 Lf ; 20/40 UI ; 15/5 Lf ; 2/20 UI ; 2,5/5 Lf ; 2/5 Lf ; 25/10 Lf ; 9/5 Lf. Les antigènes pertussiques acellulaires (Pa) y compris l'anatoxine pertussique (PT), 1'hémagglutinine filamenteuse (FHA) et la pertactine (PRN) peuvent être également présents, de telle façon que l'environnement aqueux comprend les antigènes DTPa dans les quantités suivantes : 20 à 30 pg, par exemple, exactement ou approximativement 25 pg de PT ; 25 à 30 yg, par exemple, exactement ou approximativement 25 yg de FHA ; 1 à 10 yg, par exemple, exactement ou approximativement 3 ou 8 yg de PRN ; 10 à 30 Lf, par exemple, exactement ou approximativement 15 ou 25 Lf de D ; et 1 à 15 Lf, par exemple, exactement ou approximativement 5 ou 10 Lf de T ; ou 2 à 10 yg, par exemple, exactement ou approximativement 2,5 ou 8 yg de PT ; 2 à 10 yg, par exemple, exactement ou approximativement 5 ou 8 yg de FHA ; 0,5 à 4 yg, par exemple, 2 à 3 yg comme exactement ou approximativement 2,5 ou 3 yg de PRN ; 1 à 10 Lf, par exemple, exactement ou approximativement 2 ou 2,5 ou 9 Lf de D ; et 1 à 15 Lf, par exemple, exactement ou approximativement 5 ou 10 Lf de T.
Comme il a été susmentionné, l'interaction entre la cargaison et les composants de l'environnement aqueux est réduite ou sensiblement empêchée par la matrice des particules. De cette façon, dans des modes de réalisation des compositions immunogènes de l'invention, la matrice des particules empêche ou réduit l'agrégation ou la floculation et/ou empêche ou réduit l'interférence immunologique et/ou empêche la dégradation par hydrolyse de la cargaison, par rapport à une composition équivalente dans laquelle la cargaison n'est pas séquestrée au sein des particules et est accessible à l'environnement aqueux. Dans certains modes de réalisation, ladite interaction, et en particulier ladite agrégation/floculation et/ou interférence immunologique et/ou dégradation par hydrolyse, est empêchée ou réduite pendant au moins 6 mois, comme 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois (ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 48 ou 60 mois), éventuellement dans lesquels ladite composition est maintenue à environ 4 °C.
Le phénomène d'agrégation ou de floculation, qui peut s'observer visuellement ou par microscopie optique, survient lorsque certaines cargaisons interagissent avec certains composants de l'environnement aqueux entraînant la formation d'un réseau de particules. Dans le cas d'une composition immunogène contenant une cargaison d'antigène, un tel réseau de particules peut masquer des épitopes et « interférer » négativement avec la réponse immunitaire déclenchée. Dans certains cas, 1'agrégation/floculation et l'interférence résultante peuvent être le résultat de la cargaison et du composant de l'environnement aqueux ayant respectivement des points isoélectriques (pi) bas et élevé (ou vice versa), de telle façon qu'ils sont attirés pour interagir l'un avec l'autre. On pense que c'est la raison de 1'agrégation/floculation/ interférence observée entre le saccharide PRP du vaccin conjugué Hib (pi bas) et l'adjuvant hydroxyde d'aluminium (pi élevé) utilisé pour adsorber d'autres antigènes dans certains vaccins combinés contenant le conjugué Hib. Ainsi, dans certains modes de réalisation, ladite cargaison a un pi bas comme un pi de 4 ou inférieur, en particulier de 3 ou 2 ou inférieur et/ou l'environnement aqueux comprend un composant ayant un pi élevé, comme un pi de 8 ou supérieur, comme de 9 ou 10 ou 11. Une telle cargaison de pi bas peut comprendre des groupes phosphate, par exemple, dans le contexte des liaisons phosphodiester. Toutefois, l'interférence immunologique réduite ou empêchée par les compositions immunogènes fournies ici n'est pas nécessairement associée à une floculation ou une agrégation. Dans des modes de réalisation dans lesquels l'environnement aqueux comprend un ou plusieurs antigènes, de préférence la matrice des particules n'interfère pas avec l'immunogénicité desdits un ou plusieurs antigènes.
Dans des modes de réalisation particuliers des compositions immunogènes de l'invention, la matrice des particules empêche ou réduit l'agrégation ou la floculation de Hib-TT ou Hib-CRM197 ou MenA-CRM197 et/ou empêche ou réduit 1'interférence immunologique sur Hib-TT ou Hib-CRMl97 ou MenA-CRMl97.
La dégradation par hydrolyse, comme un clivage, de la cargaison sensible à l'hydrolyse est discutée ci-dessus, et peut survenir par l'interaction de ladite cargaison avec les molécules d'eau dans la composition aqueuse. Par conséquent, la prévention ou la minimisation de l'exposition de la cargaison aux molécules d'eau peut réduire ou empêcher la survenue de l'hydrolyse. Par conséquent, les présentes compositions immunogènes y parviennent par l'intermédiaire de la séquestration de la cargaison d'antigène au sein de la particule. Certains antigènes à base de saccharides, tels que de Hib et MenA, peuvent être particulièrement enclins à une dégradation par hydrolyse, comme une dépolymérisation. Dans des modes de réalisation particuliers des compositions immunogènes de l'invention, la matrice des particules empêche ou réduit la dégradation par hydrolyse de Hib-TT ou Hib-CRM197 ou MenA-CRMl97.
Les compositions immunogènes de l'invention, dans certains modes de réalisation, sont appropriées pour une administration parentérale. L'homme du métier sait comment formuler des compositions thérapeutiques pour une compatibilité avec une voie d'administration parentérale donnée, par exemple, intramusculaire. En particulier, l'homme du métier sait comment formuler de telles compositions pour qu'elles aient un pH particulier, ceci étant une caractéristique clé des compositions immunogènes d'au moins certains modes de réalisation de l'invention dans lesquels l'environnement aqueux dans lequel les particules sont administrées (et éventuellement stockées) est de pH sub-physiologique. L'invention fournit en outre une pluralité de particules ou une composition de l'invention, conditionnée dans un récipient approprié pour un usage thérapeutique. Les particules ou la composition peuvent se présenter dans un flacon à partir duquel le contenu peut être extrait lorsque nécessaire, par exemple, en utilisant une aiguille et une seringue. En variante, les particules ou la composition peuvent être versées à l'avance dans un dispositif d'administration parentérale tel qu'une seringue. Une telle seringue peut être une seringue à chambre unique traditionnelle, ou elle peut être une seringue à chambre double. La seringue à chambre double peut être conçue pour délivrer les contenus respectifs des chambres de façon séquentielle, ou simultanée après le mélange extemporané au sein de la seringue.
Utilisation et administration des particules pour l'administration de médicaments
Dans un aspect de l'invention, il est fourni un procédé de prévention ou de réduction de 1'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant (i) la formation d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH telles que définies ici comprenant ladite cargaison, et (ii) la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux, comprenant tout ajustement nécessaire pour rendre ledit environnement de pH sub-physiologique. (Dans l'étape (ii) ci-dessus, ledit ajustement peut ne pas être nécessaire si l'environnement aqueux est déjà à pH sub-physiologique). Ainsi, dans un mode de réalisation de cet aspect de l'invention, il est fourni un procédé de prévention ou de réduction de 1'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux de pH subphysiologique dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant (i) la formation d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH telles que définies ici comprenant ladite cargaison, et (ii) la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux. Dans certains modes de réalisation, le résultat de la formulation selon les étapes (ii) ci-dessus est la production d'une composition, d'une composition immunogène, ou d'un vaccin tel que défini ici.
Comme il a été discuté ci-dessus, une telle prévention ou réduction de ladite interaction est avantageuse dans diverses circonstances. Par conséquent, dans certains modes de réalisation, les procédés ci-dessus sont des procédés pour le stockage d'une cargaison biologiquement active dans un environnement aqueux (dans lesquels le stockage est effectué par la prévention ou la réduction des interactions entre la cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux). De façon similaire, dans certains de ces modes de réalisation, ainsi que dans d'autres modes de réalisation, les procédés ci-dessus sont destinés à la prévention ou à la réduction de l'interaction entre ladite cargaison biologiquement active et les molécules d'eau dans ledit environnement aqueux, ou entre ladite cargaison biologiquement active et un composant de l'environnement aqueux autre que l'eau. Un tel composant peut être, par exemple, un adjuvant ou un antigène ou un principe actif biologique ou pharmaceutique, ou un excipient de formulation. En particulier, lesdits procédés peuvent être destinés à la prévention ou à la réduction de la dégradation, telle que la dégradation par hydrolyse (c'est-à-dire par l'interaction avec des molécules d'eau), de ladite cargaison dans ledit environnement aqueux.
Lorsque les procédés ci-dessus sont destinés au stockage d'une cargaison biologiquement active dans un environnement aqueux, ledit stockage peut être pendant au moins 6 mois, par exemple 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois. Ces valeurs peuvent représenter la limite inférieure d'une plage qui est liée à l'extrémité supérieure par une valeur choisie parmi 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 48 ou 60 mois.
Lorsque les procédés ci-dessus sont destinés à la prévention ou à la réduction de 1 ' interaction entre ladite cargaison biologiquement active et un composant adjuvant de l'environnement aqueux, dans certains modes de réalisation, ledit adjuvant est 1'hydroxyde d'aluminium. Dans certains modes de réalisation, la cargaison contient des groupes phosphate comme dans des radicaux phosphodiester et/ou a un pi bas. Dans certains modes de réalisation, la cargaison est Hib-TT ou Hib-CRMI 97 ou MenA-CRMl97.
Les procédés ci-dessus peuvent, en variante, être destinés à la prévention ou à la réduction de l'interaction entre ladite cargaison biologiquement active et une seconde cargaison. De tels modes de réalisation comprennent, en plus des étapes (i) et (ii) citées ci-dessus, une étape (iii) : la formation d'une seconde pluralité de particules comprenant ladite seconde cargaison au sein d'une matrice, dans laquelle ladite seconde pluralité de particule est telle que définie ici pour la pluralité de particules mais à condition que la cargaison ne soit pas identique à ladite cargaison biologiquement active, c'est-à-dire que la seconde pluralité de particules est telle que définie ici pour la pluralité de particules à l'exception de la cargaison, dans le sens que dans de tels modes de réalisation comprenant deux pluralités (populations) de particules, les deux pluralités comprennent des cargaisons différentes. Dans certaines variantes de modes de réalisation, les deux pluralités peuvent comprendre la même cargaison dans une matrice polymère différente.
La pluralité de particules et les compositions (immunogènes) et les vaccins de l'invention peuvent être utilisés en médecine, comme de façon prophylactique ou thérapeutique. Ils peuvent être administrés à un sujet en ayant besoin. Généralement, le sujet est un animal, tel qu'un mammifère, et il est de préférence un sujet humain. Dans certains modes de réalisation, le sujet est un nourrisson ou un enfant ou un adolescent ou un adulte ou un adulte âgé. Le sujet peut être une femme/femelle enceinte, éventuellement chez laquelle le nourrisson en gestation est le sujet en besoin. Le sujet peut être un individu immunodéprimé. Dans un mode de réalisation particulier, la pluralité de particules et les compositions immunogènes et les vaccins sont pour une utilisation dans l'immunisation, comme une immunisation pédiatrique.
Dans un aspect, l'invention fournit une pluralité de particules ou une composition/une composition immunogène/un vaccin tels que divulgués ici pour une utilisation en médecine, en particulier en médecine humaine. Plus particulièrement, l'invention fournit une pluralité de particules telles que définies ici, ou une composition/une composition immunogène/un vaccin tels que définis ici, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention, en particulier chez un être humain, de (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène ou un allergène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer. L'invention fournit en outre l'utilisation d'une pluralité de particules telles que définies ici, ou d'une composition/une composition immunogène/un vaccin tels que définis ici, dans la fabrication d'un médicament pour une utilisation dans le traitement ou la prévention, chez un animal, en particulier chez un être humain, de (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène ou un allergène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer.
Dans un autre aspect, il est fourni un procédé de traitement ou de prophylaxie contre (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène ou un allergène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer, comprenant l'étape d'administration à un sujet, en particulier un être humain, d'une quantité efficace d'une pluralité de particules ou d'une composition/une composition immunogène/un vaccin tels que divulgués ici. Un procédé, comprenant la même étape d'administration, est également fourni pour déclencher une réponse immunitaire contre un tel pathogène ou allergène ou de telles cellules hôtes immunologiquement distinctes.
La pluralité de particules ou la composition/la composition immunogène/le vaccin de l'invention peut être administré sous forme liquide, c'est-à-dire, sous la forme d'une suspension contenant les particules. Avant l'administration, les particules peuvent être stockées dans la composition liquide administrable, formulée de façon finale, comme la composition/la composition immunogène/le vaccin de l'invention dans lequel les particules sont dans l'environnement aqueux tel que défini ici. Toutefois, les particules peuvent être stockées sous forme lyophilisée, comme cryodesséchée, ou sous forme de poudre, à reconstituer sous forme liquide par l'intermédiaire du mélange avec l'environnement aqueux (tel que défini ici) de façon extemporanée avec l'administration à un sujet. En variante, les particules peuvent être stockées dans un milieu liquide autre que ledit environnement aqueux, de telle façon que le mélange avec ledit environnement aqueux, pour donner la composition/la composition immunogène/le vaccin de l'invention, prend place de façon extemporanée avec l'administration. Les particules de la composition/la composition immunogène/ le vaccin de l'invention peuvent se présenter dans des récipients scellés à dose unitaire ou doses multiples comme des flacons, ou elles peuvent être versées à l'avance dans des dispositifs d'administration comme des seringues.
La pluralité de particules ou la composition/la composition immunogène/le vaccin de l'invention peut être administré à un sujet par des voies diverses, comme par voie intramusculaire, intraveineuse, intrapéritonéale, intra- ou trans-dermique, sous-cutanée, intrapulmonaire (par exemple, inhalation), trans- ou sous-mucosale. Ainsi, dans certains modes de réalisation, l'administration est par une voie parentérale.
Une dose efficace appropriée de la cargaison biologiquement active, par exemple, un antigène (et par conséquent, des particules et de la composition dans laquelle elles sont présentes), peut être facilement déterminée par l'homme du métier. Une telle dose peut être calculée en se basant sur l'administration d'une masse spécifiée de particules. Dans ce cas, une masse spécifique de la composition contenant les particules est mesurée en poids ou en volume. En variante, la dose peut être basée sur l'administration d'une masse spécifiée de cargaison, en quel cas le chargement de la cargaison dans les particules peut être pris en compte.
Dans un mode de réalisation particulier de la pluralité de particules, des compositions/des compositions immunogènes/des vaccins ci-dessus ; de leur utilisation ; ou d'un procédé de traitement ou de déclenchement d'une réponse immunitaire, le pathogène est choisi dans la liste constituée de : Haemophilus influenzae de type b (Hib) ; Neisseria meningitidis (en particulier des sérotypes A, C, W et/ou Y) ;
Streptococcus pneumoniae ; Staphylococcus aureus ; Bordetella sp. ; et Salmonella typhi. Dans des modes de réalisation préférés, le pathogène est Haemophilus influenzae de type b (Hib) ou Neisseria meningitidis du sérotype A (MenA).
Fabrication et formulation des particules
Les particules de la présente invention comprennent une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice. La cargaison peut s'associer avec la matrice des particules de différentes manières de telle façon qu'elle est « comprise au sein de la matrice ». Par exemple, la cargaison peut être encapsulée au sein de la matrice, ou la cargaison peut être dispersée au sein de ou mélangée physiquement avec la matrice. La combinaison de la cargaison et de la matrice peut être décrite comme une association physique, telle qu'une association non covalente.
Dans des modes de réalisation particuliers, la cargaison est dispersée de façon sensiblement homogène dans toute la matrice de la particule. Ceci peut être obtenu en fabriquant des particules à partir d'un mélange homogène (une solution) comprenant la cargaison et le ou les polymères de la matrice.
Ainsi, dans un aspect, il est fourni un procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant l'étape de fabrication d'une solution (c'est-à-dire, un mélange homogène) comprenant ladite cargaison et un polymère de la matrice, éventuellement dans lequel ledit polymère est tel que défini ici pour la matrice polymère. Il est également fourni un procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, le procédé comprenant l'utilisation d'une solution comprenant un polymère tel que défini ici pour la matrice polymère, et une cargaison, dans lequel ladite cargaison est éventuellement telle que définie ici.
Dans certains modes de réalisation des procédés ci-dessus, ladite solution comprend ladite cargaison à une quantité ne dépassant pas 30 % en poids et un complément de copolymère PMMA-co-PMAA. Par exemple, la solution peut comprendre la cargaison à une quantité de 0,1 à 5 % en poids, comme 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5 ou 5 % en poids. Dans certains modes de réalisation, la solution comprend en outre un agent plastifiant. Dans certains modes de réalisation, l'agent plastifiant est la polyvinylpyrrolidone (PVP). Dans un mode de réalisation particulier, le polymère de la matrice est le PMMA-co-PMAA et la solution comprend en outre de la PVP, dans lequel le rapport en % en poids de PVP/PMMA-co-PMAA ne dépasse pas 1/1, par exemple, le rapport en % en poids de PVP/PMMA-co-PMAA se situe dans la plage de 0,1 à 1/1, comme 0,15/1, 0,2/1, 0,25/1, 0,3/1, 0,35/1, 0,4/1, 0,45/1, 0,5/1, 0,55/1, 0,6/1, 0,65/1,
0,7/1, 0,75/1, 0,8/1, 0,85/1, 0,9/1, ou 0,95/1. La PVP peut avoir, par exemple, une masse moléculaire (Mm) d'environ 2,5 kDa et une polydispersité d'approximativement 1,9. Dans d'autres modes de réalisation de ces procédés, la solution comprend un copolymère poly(acide glutamique)-co-poly(lysine) à la place du copolymère PMMA-co-PMAA et/ou du glycérol à la place de la PVP.
La cargaison peut être choisie, par exemple, parmi Hib-TT, Hib-CRM197 et MenA-CRMl97. Dans des modes de réalisation particuliers, ladite solution comprend 0,2 à 1,2, plus particulièrement 0,4 à 1 % en poids de Hib-TT ou Hib-CRM197 ou MenA-CRMl97 et un complément de PVP/PMMA-co-PMAA ou poly(acide glutamique)-co-poly(lysine)/glycérol, éventuellement dans un rapport en % en poids de 1/1.
Les particules de l'invention peuvent être fabriquées à partir de ces solutions par l'intermédiaire de techniques connues pour la fabrication de micro- ou nano-particules, par exemple, une homogénéisation (émulsification) , une extrusion et un séchage comme un séchage par pulvérisation. En particulier, les particules sont formées par moulage. Par conséquent, dans certains modes de réalisation, les procédés ci-dessus comprennent une autre étape de moulage de ladite solution pour former la pluralité de particules. La solution peut comprendre un agent plastifiant autre que la PVP (éventuellement en plus de la PVP) ; un tel agent plastifiant peut être un agent porogène. Dans certains modes de réalisation, les procédés comprennent l'élimination de sensiblement la totalité de ladite PVP ou de l'autre agent plastifiant et/ou porogène à partir de ladite particule. Par « élimination à partir de ladite particule » dans ce sens, il est signifié que l'agent plastifiant et/ou porogène peut être sensiblement absent des particules formées à partir de ladite solution (contenant un agent plastifiant et/ou porogène) comme résultat du procédé, c'est-à-dire que la particule résultante peut être sensiblement dépourvue de tout agent plastifiant et/ou porogène. Cela ne signifie pas nécessairement que les particules formées contiendront temporairement un tel agent plastifiant et/ou porogène (l'agent plastifiant et/ou porogène peut être perdu comme conséquence du procédé de fabrication des particules) , comme cela peut être le cas pour des particules qui sont recueillies dans un état sec, dans lesquel l'agent plastifiant et/ou porogène est perdu à partir de la particule durant une étape subséquente de « transition » des particules à un pH sub-physiologique acceptable pour une administration parentérale. De façon inévitable, la composition des particules, après la perte ou l'élimination de tout agent plastifiant et/ou porogène, différera de la composition de la solution utilisée dans leur fabrication.
Dans un autre aspect, la présente invention fournit un procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant les étapes suivantes : i. une déprotonation au moins partielle d'un polymère, qui est insoluble dans son état protoné, dans un environnement aqueux de telle façon que le polymère a une charge négative nette et est soluble dans ledit environnement aqueux ; ii. la combinaison dudit polymère avec ladite cargaison pour produire une solution ; iii. la formation des particules par moulage de ladite solution et l'élimination de l'environnement aqueux.
Dans un souci de clarté, il faut noter que « environnement aqueux » tel qu'utilisé dans le paragraphe ci-dessus ne doit pas être confondu avec l'utilisation de ce terme ailleurs dans ce document en relation avec les compositions de l'invention ou les propriétés des particules de l'invention lorsqu'elles sont présentes dans un environnement aqueux au-dessous du pH déclencheur.
Dans l'étape (i) ci-dessus, un polymère est solubilisé par l'intermédiaire d'une déprotonation (au moins partielle), par exemple par l'addition du polymère à un environnement aqueux de pH alcalin ou basique. Le polymère dissous est ensuite combiné avec la cargaison pour produire une solution, souvent appelée une « solution mère ». La solution est ensuite moulée comme il a été décrit ci-dessus en rapport avec la Technologie PRINT™ du codemandeur Liquidia Technologies et comme il est illustré dans les exemples ici, dont un résultat est l'élimination de l'environnement aqueux. Cette étape (iii) du procédé ci-dessus provoque l'association non covalente ou l'enchevêtrement physique des chaînes du polymère avec la cargaison. Dans des variantes de modes de réalisation, les particules peuvent être formées non par moulage mais par d'autres techniques connues de fabrication de micro- ou de nano-particules, par exemple le séchage par pulvérisation.
Après la formation des particules, elles peuvent être recueillies dans un état sec, ou dans un environnement de recueil liquide organique ou aqueux. Un tel environnement de recueil peut être acide, par exemple, avec un pH inférieur à 5. Dans certains modes de réalisation, le procédé ci-dessus peut comprendre en outre la protonation du polymère de la matrice des particules recueillies de telle façon que le polymère retourne à un état insoluble. Les particules peuvent être ensuite stockées à un pH sub-physiologique qui est acceptable pour une administration parentérale, par exemple, dans un environnement aqueux.
Dans un autre aspect, l'invention fournit une pluralité de particules pour l'administration de médicaments qui peut être obtenue ou qui est obtenue par les procédés précédents.
Dans un autre aspect, il est fourni un procédé de fabrication d'une composition, comprenant la fabrication d'une pluralité de particules selon un procédé tel que défini ici et la formulation desdites particules dans un environnement aqueux. Dans certains modes de réalisation, dans lesquels la composition est une composition immunogène, ledit environnement comprend un antigène et/ou un adjuvant. Ledit antigène et/ou ledit adjuvant peuvent, par exemple, être tels que définis ici en relation avec les compositions immunogènes de l'invention. L'invention fournit en outre, dans un autre aspect, un procédé de fabrication d'une composition, comme une composition immunogène, comprenant une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans lequel la matrice comprend un polymère, comprenant les étapes suivantes : i. l'introduction d'une pluralité de particules, fabriquées selon un procédé tel que défini ici, dans un environnement aqueux acide, de telle façon que l'environnement acide protone le polymère de la matrice rendant le polymère insoluble dans ledit environnement ; ii. l'élévation du pH de l'environnement aqueux acide à un pH sub-physiologique qui est acceptable pour une administration parentérale tout en conservant l'état insoluble du polymère de la matrice dans ledit environnement ; et éventuellement iii. la formulation desdites particules dans un environnement aqueux de pH sub-physiologique.
Dans l'étape (i) de ce procédé, appelée ici « stabilisation », les particules sont mises en contact avec une « solution de stabilisation » à pH acide, produisant la protonation du polymère de la matrice rendant le polymère insoluble. Par exemple, pour des particules comprenant un polymère de matrice contenant initialement des groupes COOH de façon prédominante sous la forme ionisée, chargée négativement (c'est-à-dire, C00-), une telle protonation modifie l'équilibre en faveur de la forme COOH de charge neutre. La protonation du polymère de la matrice provoque l'insolubilité des particules dans la solution de stabilisation. Le pH de la solution de stabilisation devra être tel que lorsque les particules sont mises en contact avec la solution de stabilisation, le taux de protonation dépasse le taux de dissolution. Dans certains modes de réalisation, la solution de stabilisation a un pH situé dans la plage de 1 à 5, comme environ ou exactement pH 3,5 ou 4,5. Une telle « mise en contact » peut être, par exemple, par aspersion des particules sèches dans la solution de stabilisation tout en continuant l'agitation de cette dernière. La durée d'un tel contact (c'est-à-dire, avant que l'étape (ii) débute) peut aller jusqu'à 60, 50, 40, 30, 20, 10 ou 5 minutes, ou ces valeurs peuvent délimiter respectivement l'extrémité supérieure d'une plage de temps qui est liée à l'extrémité inférieure par 1 minute.
Dans l'étape (ii) , connue ici comme la « neutralisation », l'environnement contenant les particules insolubles est ajusté à un pH qui est compatible avec une administration parentérale. Un tel pH doit clairement être inférieur au pH seuil au-dessus duquel les particules libéreront leur cargaison, c'est-à-dire que le pH doit être sub-physiologique. À la fois « sub-physiologique » et « acceptable pour une administration parentérale » dans ce sens doivent être par rapport au site d'administration cible particulier du/à la voie chez le sujet prévu particulier. Cet ajustement du pH est réalisé, par exemple, par une addition continue ou par étapes d'une solution de pH supérieur (par exemple, par addition d'un tampon qui est moins acide que la solution de stabilisation), doit être réalisé à un taux approprié qui maintient l'état insoluble du polymère de la matrice. Ainsi, dans certains modes de réalisation, l'étape (ii) comprend l'augmentation du pH de l'environnement aqueux vers un pH sub-physiologique de façon progressive. Dans certains modes de réalisation, le pH de l'environnement aqueux est augmenté de 0,1 à 10 unités de pH par minute, comme de 0,5, 1, 2 ou 5 unités de pH par minute, en particulier 0,5 unité de pH par minute. À des fins de clarification, ceci signifie qu'à chaque minute s'écoulant entre le premier ajustement et l'atteinte du pH sub-physiologique et acceptable pour un usage parentéral finalement ajusté, l'augmentation du pH de la solution se situe dans la plage de 0,1 à 10 unités de pH. Les étapes combinées de stabilisation et de neutralisation sont qualifiées ici de « transition ».
Dans l'étape (iii) éventuelle, les particules sont formulées dans un environnement aqueux de pH subphysiologique, c'est-à-dire que la solution contenant les particules à pH sub-physiologique est combinée avec les autres composants pour produire une composition, laquelle composition doit être également à pH subphysiologique afin que les particules conservent la cargaison durant le stockage. Ces « autres composants » présents au sein de la composition aqueuse de l'étape (iii) peuvent comprendre des excipients de formulation tels que des tampons, des modificateurs de la tonicité, des conservateurs, des adjuvants, etc., ainsi que des principes actifs tels que des composés médicamenteux ou des antigènes. En particulier, l'environnement aqueux de l'étape (iii) peut être tel que défini ici pour la composition de l'invention. Dans un autre aspect, l'invention fournit une composition, telle qu'une composition immunogène, pouvant être obtenue ou étant obtenue par les procédés précédents.
Les exemples suivants sont fournis pour illustrer certaines caractéristiques particulières et/ou certains modes de réalisation particuliers. Ces exemples ne devront pas être interprétés comme limitant l'invention aux caractéristiques ou aux modes de réalisation particuliers décrits.
Exemples
Exemple 1 - Préparation des particules et des formulations contenant les particules
Fabrication des particules : les particules pour l'administration de médicaments ont été fabriquées. D'abord, une série de solutions mères a été préparée. Une solution aqueuse homogène d'approximativement 10 % en poids de PMMA-co-PMAA (Mm ~125 kDa, rapport molaire de MMA/MAA = 2/1, Eudragit® S100, Evonik Industries) a été fabriquée par dissolution du polymère à un pH d ' approximativement 8. Une solution aqueuse homogène d' approximativement 15 % en poids de PVP (2,5 kDa, Polysciences, Inc.) a été préparée. La concentration de la solution du conjugué polysaccharide d'Haemophilus influenzae de type b-anatoxine tétanique (« Hib-TT ») était de 0,0946 % en poids dans l'eau.
Les volumes suivants ont été combinés pour produire la solution mère des particules : 19,000 ml de PMMA-co-PMAA, 12,667 ml de PVP, 26,540 ml de Hib-TT, et 2,111 ml d'eau PPI. En se basant sur les composants solides, la solution mère des particules présentait le rapport en pourcentage en poids suivant : 49,67 % en poids de PMMA-co-PMAA, 49,67 % en poids de PVP, et 0,66 % en poids de Hib-TT. La solution mère résultante a été coulée à température ambiante sur un film de PET d'une épaisseur de 0,005 pouce (0,127 mm) en utilisant une barre de Mayer No. 10. Pour former les particules pour l'administration de médicaments, le film a été pré-laminé contre un moule en forme d'anneau de 6 ym PRINT® (Liquidia Technologies, Inc., Morrisville, NC). Le moule a été ensuite rempli par passage à travers un instrument de laminage à 290 °F (143 °C) à 2 pieds (60 cm) par minute. Les particules pour l'administration de médicaments ont été retirées du film par raclage mécanique dans des conditions sèches (c'est-à-dire, moins de 30 % d'humidité relative) en utilisant un racloir.
Transition des particules : Dans des conditions sèches (10 à 30 % d'humidité relative), approximativement 1,000 g de particules pour l'administration de médicaments a été aspergé sur 40 ml de 0,2 M de succinate de sodium pH 3,5/PEG400, 50/50 en volume sous agitation rapide. Les particules ont été agitées pendant environ 10 minutes. Après 10 minutes, des aliquotes de 4 x 20 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1 ont été ajoutées à la suspension, avec 1 à 2 minutes d'agitation entre chaque addition d'aliquote.
La suspension a été divisée dans quatre tubes de polycarbonate, approximativement 30 ml par tube. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 15 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1 et deux tubes ont été combinés en un tube. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 30 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 30 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension des particules a été diluée en combinant 15 ml de la suspension avec 30 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1.
La suspension des particules a été filtrée à travers un filet en nylon de 41 μιη dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. Le filtrat a été concentré par centrifugation de la suspension à 19 000 x g pendant approximativement 20 minutes à 4 °C. Le filtrat concentré a été aggloméré par centrifugation à 19 000 x pendant approximativement 20 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 40 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 pour un lavage. Les particules ont été lavées deux fois de plus pour un total de trois lavages. Les particules ont été à nouveau agglomérées et remises en suspension dans un petit volume (~ 3 ml par tube) de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1.
La teneur en particules a été déterminée par gravimétrie comme étant de 25,925 mg/ml. La teneur totale en Hib (conjugué + libre) a été déterminée par HPAEC-PAD comme étant de 37,750 yg/ml.
Formulation des particules - La suspension des particules ci-dessus a été formulée comme suit.
Pour produire un échantillon à coadministrer avec Infanrix™ Penta (GSK Vaccines), 700-65, 8 ml de 10 mM de maléate de sodium/300 mM de NaCl/0,02 % de thimérosal pH 6,1 ont été distribués dans un récipient. 8 ml de la suspension des particules décrite ci-dessus ont été ajoutés. 62,297 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM de NaCl/0,01 % de thimérosal, pH 6,1 ont été ajoutés produisant une concentration en particules d'approximativement 2,649 mg/ml.
Pour produire un échantillon contenant Infanrix™ Penta, 700-66, 6 ml de la suspension des particules décrite ci-dessus ont été agglomérés. Le culot a été remis en suspension dans 1,021 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 et 2,669 ml de 210 mM de maléate de sodium/0,22 % de thimérosal pH 6,1. 5 ml des particules remises en suspension ont été prélevés et 50 ml de Infanrix™ Penta ont été ajoutés aux 5 ml.
Pour produire un second échantillon contenant Infanrix™ Penta, [700-83-02], 5,0 ml de la suspension des particules décrite ci-dessus ont été agglomérés. Le culot a été remis en suspension dans 0,787 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 et 2,224 ml de 210 mM de maléate de sodium/0,22 % de thimérosal pH 6,1. 3 ml des particules remises en suspension ont été prélevés et 30 ml de Infanrix™ Penta ont été ajoutés aux 3 ml.
Les formulations ont été aliquotées dans des flacons et stockées à 4 °C jusqu'à utilisation. Tel qu'utilisé dans ces exemples, le milieu liquide dans lequel les particules des échantillons respectifs ont été remises en suspension sera appelé « tampon de stockage ».
Exemple 2 - Stabilité des particules formulées de l'exemple 1 HPAEC-PAD : la quantification par HPAEC-PAD a été conduite sur des échantillons contenant les particules pour l'administration de médicaments formulées dans du tampon de stockage selon l'exemple 1. Les échantillons ont été analysés pour 1'oligo/polysaccharide total, qui englobait 1'oligo/polysaccharide (« Hib ») à la fois conjugué (Hib-TT ou Hib-CRM) et non conjugué (« libre »).
Certains échantillons ont été également analysés pour le Hib libre.
Dans l'analyse des échantillons contenant les particules, particulièrement ceux ne contenant pas d'adjuvant d'aluminium, à la fois les particules pour l'administration de médicaments et le tampon de stockage ont été analysés pour le Hib total (conjugué + libre). Dans ces cas, les particules pour l'administration de médicaments ont été récupérées à partir du tampon de stockage en utilisant une centrifugation. Le tampon de stockage (surnageant) a été prélevé et conservé pour l'analyse. Les particules pour l'administration de médicaments (culot) ont été remises en suspension dans le même volume de tampon de stockage qui a été récupéré dans le surnageant. Les particules pour l'administration de médicaments remises en suspension ont été ensuite déclenchées pour « libérer » la cargaison par l'addition de base pour produire une suspension de particules de médicaments déclenchées. Avant l'analyse, à l'œil nu, l'échantillon était limpide. Ces échantillons ont été analysés pour le Hib à la fois total et libre pour à la fois le culot et le surnageant.
Par exemple, 500 μΐ d'un échantillon ayant une concentration en particules d'approximativement 2 mg/ml ont été centrifugés pour séparer les particules pour l'administration de médicaments du tampon de stockage. Le surnageant a été mesuré, prélevé, et conservé pour l'analyse. Un volume de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 égal au volume de surnageant prélevé a été ajouté au culot pour remettre en suspension les particules pour l'administration de médicaments. Pour déclencher/dissoudre les particules pour l'administration de médicaments, 4 à 7 μΐ d'hydroxyde de sodium 0,5 N ont été ajoutés aux particules remises en suspension pour élever le pH à approximativement 7,0 à 7,5, en ciblant approximativement 7,2. Le volume de base ajouté a été ajusté selon les besoins pour maintenir le rapport de la base sur les particules comme il est fourni dans cet exemple. Pour certains échantillons, particulièrement ceux contenant un adjuvant d'aluminium, le Hib total a été déterminé. Dans ces cas, les particules pour l'administration de médicaments n'ont pas été récupérées à partir du tampon de stockage en utilisant une centrifugation. L'échantillon a été déclenché par l'addition de base pour produire une suspension de particules de médicaments déclenchées. Avant l'analyse, à l'œil nu, l'échantillon était limpide. Ces échantillons ont été analysés pour le Hib total. Cette mesure du Hib total reflétait le Hib total contenu dans l'échantillon (à la fois les particules pour l'administration de médicaments et le tampon de stockage).
Par exemple, 500 μΐ d'un échantillon contenant une concentration en particules d'approximativement 2 mg/ml ont été déclenchés par l'addition de base. À l'échantillon, 4 à 7 μΐ d'hydroxyde de sodium 0,5 N ont été ajoutés pour élever le pH de l'échantillon à approximativement 7,0 à 7,5, en ciblant approximativement 7,2. Le volume de base ajouté a été ajusté selon les besoins pour maintenir le rapport de la base sur les particules comme il est fourni dans cet exemple.
Préparation des étalons/témoin - Etalons : des étalons de Hib ont été préparés dans la plage de concentrations d'intérêt. Par exemple, des étalons à 0,625 yg/ml, 1,25 yg/ml, 2,50 yg/ml, 5,00 yg/ml, 10,0 pg/ml, 15,0 pg/ml, 20,0 pg/ml, et 25,0 pg/ml ont été préparés par dilution d'une concentration connue de Hib en utilisant 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. Témoin : éventuellement, des échantillons témoins peuvent être inclus dans l'analyse. Par exemple, HIBERIX™ [vaccin conjugué pour Haemophilus b (conjugué à de l'anatoxine tétanigue)] ayant une concentration connue peut être inclus en tant qu'échantillon témoin. Si on utilise HIBERIX™, un premier échantillon témoin peut être produit en reconstituant le vaccin lyophilisé en utilisant 0,9 % de NaCl comme il est décrit dans les Informations de prescription. Pour produire un second échantillon témoin, une partie du vaccin reconstitué est ensuite diluée au dixième en utilisant davantage de 0,9 % de NaCl. Les deux échantillons témoins peuvent être analysés.
Analyse du polysaccharide libre : pour analyser 1'oligo/polysaccharide libre, du désoxycholate a été utilisé pour précipiter et prélever le polysaccharide conjugué de l'échantillon d'intérêt.
Une solution de désoxycholate (DOC) à 1 % (m/v) dans de l'eau désionisée a été préparée à l'avance et stockée à -20 °C en aliquotes pendant pas plus de six mois. Approximativement 1 g de désoxycholate a été ajouté à 90 ml d'eau désionisée avec agitation. Après la dissolution complète du désoxycholate, le pH de la solution a été augmenté lentement jusqu'à 6,8 par l'addition goutte à goutte de 1 M d'hydroxyde de sodium. Le précipité formé après l'addition de chaque goutte de base a été laissé se dissoudre avant l'addition d'une autre goutte de base. Après l'ajustement du pH, de l'eau désionisée a été ajoutée pour amener le volume final à 100 ml. Pour préparer un échantillon pour l'analyse, 100 μΐ de surnageant ou de la suspension des particules de médicaments déclenchées (provenant du culot qui a été remis en suspension) ont été placés dans un tube de microcentrifugeuse LoBind de 1,5 ml (Eppendorf) et 100 μΐ de la solution de DOC à 1 % ont été ajoutés et le tube a été passé au vortex pour assurer un mélange uniforme. L'échantillon a été refroidi sur de la glace pendant approximativement 30 minutes. Après 30 minutes, 10 μΐ de HCl 1 N ont été ajoutés et l'échantillon a été passé au vortex. L'oligo/polysaccharide conjugué, Hib-TT ou Hib-CRM, s'est lié au DOC créant un précipité. Le précipité a été prélevé en utilisant une centrifugation à 19 500 x g pendant 15 minutes à approximativement 4 °C et température ambiante. Le culot a été jeté et le surnageant a été conservé pour l'analyse du Hib libre.
Préparation des échantillons - Hydrolyse en ribitol ribose 5-phosphate : les échantillons ont été hydrolysés et ont produit du ribitol ribose 5-phosphate en tant qu'analyte d'intérêt.
Etalons/témoin : à 100 μΐ d'étalon ou de témoin, 150 μΐ d'hydroxyde de sodium 1 N ont été ajoutés. L'échantillon a été passé au vortex pour mélanger uniformément la base dans l'échantillon. L'échantillon a été hydrolysé à température ambiante pendant approximativement 12 heures.
Echantillons d'intérêt : à 100 μΐ d'échantillon (oligo/polysaccharide total de l'échantillon, polysaccharide total du culot, polysaccharide total du surnageant, polysaccharide libre du culot, ou polysaccharide libre du surnageant), 150 μΐ d'hydroxyde de sodium 1 N ont été ajoutés. L'échantillon a été passé au vortex pour mélanger uniformément la base dans l'échantillon. L'échantillon a été hydrolysé à température ambiante pendant approximativement 12 heures.
Paramètres de 1'instrument
Les concentrations des échantillons ont été calculées en comparant la surface du pic du ribitol ribose 5-phosphate dans l'échantillon d'intérêt à un ajustement des étalons à la régression linéaire par la méthode des moindres carrés. La concentration a été rapportée en yg/ml. Les flacons contenant l'échantillon 700-65 ont été stockés à 4 °C et la distribution (c'est-à-dire, associé aux particules ou pas) du conjugué Hib-TT et du Hib non conjugué (« libre ») a été évaluée dans le temps (T = 0, 1, 8, 15, 18, 28, 49, 64, 84, 242, 593, 649, et 663 jours) par HPAEC-PAD. Le tableau 1 montre la proportion (en % en poids) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué + libre) mesurée à chaque point de temps, qui se trouve dans la fraction du culot (c'est-à-dire, associé aux particules) et dans la fraction du surnageant, c'est-à-dire, non associé aux particules. La figure 1 représente la partie du Hib total (conjugué + libre) trouvée dans la fraction du surnageant, c'est-à-dire non associé aux particules.
Tableau 1
Le tableau 2 et la figure 2 montrent la proportion du Hib libre (non conjugué) (en % en poids) sous la forme d'un pourcentage du Hib total (c'est-à-dire, conjugué + libre) contenu dans l'échantillon (collectivement dans le culot et le surnageant), mesurée à chaque point de temps. À chaque point de temps, à la fois le Hib total (conjugué et non conjugué) et le Hib libre (non conjugué) ont été déterminés pour le culot (particules) et le surnageant.
Tableau 2
pH : le pH des échantillons 700-65 et 700-66 ont été également suivis dans le temps. Une aliquote de 200 à 300 μΐ de l'échantillon à tester a été distribuée dans un tube de 1,5 ml et le pH a été déterminé en utilisant un pH-mètre (Hach Corporation, Model IQ 150) avec une sonde ISFET (Hach Corporation, pH 17.SS). Avant la détermination du pH, le pH-mètre a été calibré en utilisant des étalons de pH 4,01 (Orion 910104) et pH 7,00 (Orion 910107). Le tableau 3 montre les valeurs de pH recueillies à plusieurs intervalles de temps (NA = échantillon non analysé).
Tableau 3
Exemple 3 - Préparation_d' autres_particules_et formulations contenant des particules
Fabrication des particules : des particules pour l'administration de médicaments ont été fabriquées comme pour l'exemple 1, sauf que la concentration de la solution mère de Hib-TT était de 0,0957 % en poids dans de l'eau.
Transition des particules : dans des conditions sèches (20 à 30 % d'humidité relative), approximativement 800 mq de particules pour l'administration de médicaments ont été aspergés sur 4 0 ml de tampon 0,1 M de succinate de sodium pH 4,5/PEG400, 50/50 en volume sous agitation rapide.
Les particules ont été agitées pendant environ 5 à 10 minutes. Après 5 à 10 minutes, des aliquotes de 4 x 20 ml de 0,2 M de maléate de sodium pH 6,1 ont été ajoutées à la suspension, avec 1 à 2 minutes d'agitation entre chaque addition d'aliquote.
La transition a été poursuivie comme pour l'exemple 1, avec des modifications mineures : après la division de la suspension dans quatre tubes de polycarbonate, elle a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant au moins 15 minutes à 4 °C, et la centrifugation suivante a été effectuée à 18 000 x g pendant 5 minutes.
La teneur en particules a été déterminée par gravimétrie comme étant de 14,12 mg/ml. La teneur en Hib total (conjugué + libre) a été déterminée comme étant de 39,595 yg/ml par HPAEC-PAD.
Formulation des particules : la suspension des particules ci-dessus a été formulée comme suit. L'échantillon 841-57-1 a été produit pour une coadministration avec Infanrix™ Penta. Pour produire l'échantillon 841-57-1, un volume de 7 ml de la suspension des particules décrite ci-dessus a été dilué en utilisant 7 ml de 10 mM de maléate de sodium/300 mM de chlorure de sodium/0,01 % de thimérosal, pH 6,1 et 25, 136 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 produisant une concentration en particules de 2,526 mg/ml. L'échantillon 841-57-2 a été produit. Pour produire l'échantillon 841-57-2, 11 ml de la suspension de particules décrite ci-dessus ont été agglomérés. Le culot a été remis en suspension dans 0,878 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 et 2,7 95 ml de 210 mM de maléate de sodium/0,21 % de thimérosal pH 6,1. 5 ml des particules remises en suspension ont été prélevés et 50 ml de Infanrix™ Penta ont été ajoutés aux 5 ml.
Les échantillons contenant les particules ont été aliquotés dans des flacons pour diverses études in vivo et des études de stabilité. L'échantillon 841-57-2S a été produit en aliquotant l'échantillon 841-57-2 dans des seringues pour une étude de la stabilité. Les formulations ont été stockées à 4 °C jusqu'à utilisation.
Exemple 4 - Stabilité des particules formulées de l'exemple 3 HPAEC-PAD : les flacons contenant les échantillons de l'exemple 3 ont été stockés à 4 °C et la distribution (c'est-à-dire, associé aux particules, ou pas) du conjugué Hib-TT et du Hib non conjugué (« libre ») a été évaluée dans le temps (T = 0, 14, 34, 67, 94, 124 et 199 jours) par HPAEC-PAD, comme il est décrit pour l'exemple 2. Pour l'échantillon 841-57-1 (particules contenant du Hib-TT stockées dans un tampon à pH 6,1). Le tableau 4 montre la proportion (en % en poids) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué + libre), mesurée à chaque point de temps, qui est trouvée dans la fraction du culot (c'est-à-dire associé aux particules) et dans la fraction du surnageant, c'est-à-dire, non associé aux particules. La figure 3 montre la partie du Hib total (conjugué + libre) trouvée dans la fraction du surnageant, c'est-à-dire, non associé aux particules.
Tableau 4
Le tableau 5 et la figure 4 montrent la proportion de Hib libre (non conjugué) (en % en poids) sous la forme d'un pourcentage du Hib total (c'est-à-dire, conjugué + libre) contenu dans l'échantillon (collectivement dans le culot et le surnageant), mesurée à chaque point de temps. À chaque point de temps, à la fois le Hib total (conjugué et non conjugué) et le Hib libre (non conjugué) ont été déterminés pour le culot (particules) et le surnageant.
Tableau 5
Pour les échantillons 841-57-2 et 841-57-2S (particules contenant du Hib-TT stockées dans Infanrix™ Penta, ce dernier dans une seringue), et 841-57-1 discuté ci-dessus, le tableau 6 et la figure 5 montrent la concentration (pg/ml) du Hib total (c'est-à-dire, conjugué + libre) mesurée par HPAEC-PAD aux mêmes points de temps. La concentration rapportée reflète le Hib total dans l'échantillon (particules ainsi qu'environnement aqueux).
Tableau 6
Exemple 5 - Sensibilité des particules au pH déclencheur Libération de la cargaison autour du pH seuil Fabrication des particules : des particules pour l'administration de médicaments ont été fabriquées. D'abord, une série de solutions mères a été préparée. Une solution aqueuse homogène de 10 % en poids de PMMA-co-PMAA (Mm ~125 kDa, rapport molaire de MMA/MAA = 2/1, Eudragit® S100, Evonik Industries) a été fabriquée par dissolution du polymère à un pH d' approximativement 8,0. Une solution aqueuse homogène de 15 % en poids de PVP (2,5 kDa, Polysciences, Inc.) a été préparée. La concentration de la solution de Hib-TT était de 0,0902 % en poids dans de l'eau.
Les volumes suivants ont été combinés pour produire la solution mère des particules : 17,325 ml de PMMA-co-PMAA, 11,550 ml de PVP, 25,575 ml de Hib-TT, et 0,550 ml d'eau PPI. En se basant sur les composants solides, la solution mère des particules présentait le rapport en pourcentage en poids suivant : 49,67 % en poids de PMMA-co-PMAA, 49,67 % en poids de PVP, et 0,66 % en poids de Hib-TT. La solution mère résultante a été coulée à température ambiante sur un film de PET d'une épaisseur de 0,004 pouce (0,102 mm) en utilisant une barre de Mayer No. 10. Pour former les particules pour l'administration de médicaments, le film a été laminé contre un moule en forme d'anneau de 6 pm PRINT® (Liquidia Technologies, Inc., Morrisville, NC) . Le film/moule a été passé à travers un instrument de laminage à 290 °F (143 °C) à 2 pieds (60 cm)/min. Le laminat a été refroidi lentement à l'air. Les particules, 855-51, ont été recueillies dans des conditions sèches (20 % d'humidité relative) en utilisant un racloir. Les particules pour l'administration de médicaments 855-51 ont été transitionnées dans divers véhicules pour produire une série de formulations en utilisant les procédures suivantes.
Transition des particules : l'échantillon 855-61-1 a été produit. Approximativement 0,95 g de 855-51 a été ajouté à un tube contenant 40 ml de 0,2 M de succinate de sodium pH 3,5/PEG400, 50/50 en volume sous agitation. Après agitation pendant approximativement 10 minutes, des aliquotes de 4 x 20 ml de 200 mM maléate de sodium pH 6,1 ont été ajoutées avec approximativement une minute d'agitation entre les additions. La suspension a été divisée dans 4 tubes (~30 ml par tube) et les particules ont été agglomérées par centrifugation à 18 000 x g à 4 °C pendant approximativement 20 minutes. Le surnageant a été jeté et les particules ont été remises en suspension en utilisant 15 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1 par tube. Quatre tubes ont été combinés en deux tubes et les particules ont été agglomérées. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 30 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 19 000 x g à 4 °C pendant approximativement 10 minutes. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 15 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 et la suspension a été diluée au tiers avec l'addition de 30 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 par tube.
La suspension des particules a été filtrée à travers un filet en nylon de 41 pm dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. Le filtrat a été concentré par centrifugation de la suspension à 19 000 x g à 4 °C pendant approximativement 15 minutes. Le filtrat concentré a été aggloméré par centrifugation à 20 000 x g à 4 °C pendant approximativement 20 minutes. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 40 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 pour un lavage. Les particules ont été lavées trois fois de plus pour un total de quatre lavages. Les particules ont été à nouveau agglomérées et remises en suspension dans un petit volume (~3 ml par tube) de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension a été analysée pour la concentration des particules et la teneur en polysaccharide par HPAEC-PAD. La concentration des particules de 855-61-1 était de 28,26 mg/ml, et elle contenait 16,802 pg/ml de Hib total (conjugué + libre).
Incubation à pH variable : une aliquote de l'échantillon 855-61-1, concentration des particules de 28,26 mg/ml dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1, a été diluée jusqu'à approximativement 2 mg/ml en utilisant 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 pour produire 855-118-A.
Quatorze aliquotes de 0,5 ml chacune ont été distribuées dans des tubes de 1,5 ml qui ont été ensuite centrifugés à 17 000 x g pendant approximativement 20 minutes à 4 °C pour agglomérer les particules pour l'administration de médicaments. Le surnageant a été prélevé et jeté. Les culots ont été remis en suspension dans une série de tampons de pH croissant. Les tampons ont été produits en utilisant du PBS IX aux valeurs de pH suivantes : 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,2, et 7,4. Les particules ont été maintenues dans les tampons respectifs à température ambiante sans agitation pendant environ quatre heures. Après quatre heures, les échantillons des particules ont été agglomérés à 17 000 x pendant approximativement 20 minutes à 4 °C. Le surnageant a été recueilli pour l'analyse et le culot a été remis en suspension dans du PBS IX pH 7,4, donnant une suspension limpide. Les échantillons (surnageant et culot) ont été analysés pour le Hib total (conjugué + libre) par HPAEC-PAD. Le tableau 7 et la figure 6 présentent les résultats, montrant une augmentation marquée de la libération de la cargaison (Hib total dans le surnageant) lorsque le pH augmente de 6,5 à 7,4.
Tableau 7
Libération de la cargaison déclenchée par le pH à diverses concentrations des particules Synthèse du polymère
Une série de polymères PMMA-co-PMAA a été synthétisée selon le schéma réactionnel ci-dessus. Un rapport molaire cible de 2/1 (MMA/MAA) a été maintenu. Le tableau 8 détaille les matières premières utilisées.
Tableau 8
Matières premières
Procédé de synthèse : les inhibiteurs ont été éliminés du monomère réactif de méthacrylate de méthyle (Aldrich M55909) en passant le monomère à travers une colonne remplie de billes pour l'élimination des inhibiteurs (Aldrich 306312) . La procédure a été répétée avec l'acide méthyl-acrylique (Aldrich 155721) en utilisant une colonne avec des billes fraîches. Les monomères avec les inhibiteurs éliminés ont été stockés dans l'obscurité avant utilisation.
Les volumes des divers réactifs et solvants ont été calculés et sont énumérés dans le tableau 9. Les matériaux ont été ajoutés à un flacon à fond arrondi de 25 ou 50 ml. Après l'addition des réactifs, le flacon a été scellé et balayé une seconde fois avec de l'azote sec pendant au moins cinq minutes. Un condenseur à reflux a été ajouté et le système a purgé avec de l'azote. Le flacon a été chauffé à 80 °C. La réaction s'est déroulée pendant une nuit à 80 °C avec l'azote dans des conditions de reflux sous agitation.
Le matin suivant, la réaction a été retirée de la chaleur et laissée refroidir. Le produit gélatineux a été dissous dans 15 ml de THF de qualité ACS. Le polymère a été précipité par égouttement dans 300 ml d'éther éthylique glacé sous agitation (anhydre, qualité ACS) . Le polymère précipité a été récupéré en utilisant une centrifugation (3 000 g x 3 minutes) . Le précipité a été transféré dans un flacon Erlenmeyer de 50 ml et dissous dans 20 ml de THF de qualité ACS. Le polymère a été précipité une seconde fois dans de l'éther éthylique glacé sous agitation (anhydre, qualité ACS) . Le polymère précipité a été récupéré en utilisant une centrifugation (3 000 g x 3 minutes) et lavé avec 4 x 50 ml d'éther éthylique (anhydre, qualité ACS) à température ambiante. Le culot du polymère a été ensuite transféré dans un verre d'observation et laissé sécher sous vide pendant vingt minutes.
Après séchage sous vide, le polymère a été broyé manuellement en une poudre fine en utilisant un mortier et un pilon. Le polymère a été transféré dans un flacon pré-pesé et placé dans un four sous vide à 60 °C pour sécher pendant une nuit. Le matin suivant, le four a été laissé refroidir à température ambiante tout en maintenant un vide. Le polymère résultant a été pesé pour déterminer le rendement, analysé par GPC pour déterminer la masse moléculaire, et analysé par RMN pour déterminer la teneur en MMA.
Tableau 9
Volumes/masses des matières premières
Analyse du polymère : GPC et RMN : les polymères résultants ont été analysés pour la masse moléculaire par GPC et la teneur en PMMA par RMN. Pour l'analyse de RMN, le pourcentage de PMMA a été déterminé en comparant l'intégration du signal du proton provenant du groupe méthyle sur le méthacrylate au signal du proton provenant du proton de l'acide sur l'acide méthacrylique. Le tableau 10 résume les résultats de l'analyse. Le rendement global est également inclus dans le tableau 10. L'utilisation d'un agent de transfert des chaînes a réduit la masse moléculaire du polymère résultant. L'augmentation de la quantité de l'agent de transfert des chaînes a encore réduit la masse moléculaire du polymère résultant.
Tableau 10
Résultats des masses moléculaires et de ΡΜΜΔ par RMN
Fabrication des particules : des particules pour l'administration de médicaments ont été fabriquées. D'abord, une série de solutions mères a été préparée. Une solution aqueuse homogène de 6 % en poids PMMA-co-PMAA (Lots 852-2-2, 852-4-3, 852-4-4, 852-9-6, 852-13-7, et 852-13-8) a été fabriquée par dissolution du polymère à un pH d'approximativement 8 à 12. Une solution aqueuse homogène de 15 % en poids de PVP (2,5 kDa, Polysciences, Inc.) a été préparée. La concentration de la solution de Hib-TT était de 0,0902 % en poids dans de l'eau.
Les volumes suivants ont été combinés pour produire la solution mère des particules : 52,560 ml de PMMA-co-PMAA, 21,024 ml de PVP, 46,200 ml de Hib-TT, et 0,216 ml d'eau PPI. En se basant sur les composants solides, la solution mère des particules présentait le rapport en pourcentage en poids suivant : 49,67 % en poids de PMMA-co-PMAA, 49,67 % en poids de PVP, et 0,66 % en poids de Hib-TT. La solution mère résultante a été coulée à température ambiante sur un film de PET brut d'une épaisseur de 0,005 pouce (0,127 mm) en utilisant une barre de Mayer No. 12. Pour former les particules pour l'administration de médicaments, le film a été laminé contre un moule en forme d'anneau de 6 μιη PRINT® (Liquidia Technologies, Inc., Morrisville, NC). Le film/moule a été passé à travers un instrument de laminage à 290 °F (143 °C) et une vitesse de ligne de 2 pieds (60 cm)/min. Le laminat a été refroidi lentement à l'air. Les particules ont été recueillies dans des conditions sèches (5 à 15 % d'humidité relative) en utilisant un racloir. Le numéro de lot des particules était 855-12.
Transition des particules : les particules récoltées ont été divisées en quatre échantillons. Dans des conditions sèches (10 à 20 % d'humidité relative, approximativement 900 mg de particules pour l'administration de médicaments ont été aspergés sur 40 ml de solution de stabilisation (tampon 0,2 M de succinate de sodium pH 3,5 /PEG400, 50/50 en volume) sous agitation. Les particules ont été agitées pendant environ 10 minutes. Après 10 minutes d'agitation, l'échantillon a été déplacé sous une hotte stérile et des aliquotes de 8 x 10 ml de 400 mM de maléate de sodium pH 6,1 ont été ajoutées à la suspension, avec 1 minute d'agitation entre chaque addition d'aliquote. La suspension a été divisée dans quatre tubes de polycarbonate, approximativement 30 ml par tube. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant approximativement 25 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 15 ml de 400 mM de maléate de sodium pH 6,1 et quatre tubes ont été combinés en deux tubes. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 18 000 x g pendant approximativement 25 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 30 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 19 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 15 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 et dilué avec encore 30 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension des particules a été filtrée à travers un filet en nylon de 41 μιη dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. Le filtrat a été concentré en divisant le matériau dans deux tubes et en centrifugeant la suspension à 19 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le filtrat concentré a été aggloméré par centrifugation à 19 000 x g pendant approximativement 10 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 40 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 pour un lavage. Les particules ont été lavées deux fois de plus pour un total de trois lavages. Les particules ont été remises en suspension dans approximativement 3 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 par tube. La concentration des particules de la suspension a été déterminée comme étant de 12,5 mg/ml. Une aliquote de la suspension a été testée pour la concentration en Hib total par HPAEC-PAD. Le résultat a été de 17,52 yg/ml. La concentration des particules de la suspension a été de 12,50 mg/ml. Le numéro de lot pour la suspension des particules était 855-14. L'échantillon a été stocké à 4 °C jusqu'à future utilisation.
Incubation à pH variable et concentration des particules : la formulation des particules 855-14, avec une concentration des particules de 12,5 mg/ml dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1, a été distribuée dans des flacons. Pour un échantillon avec une concentration en particules de 2 mg/ml, 80 μΐ ont été distribués dans le flacon ; pour 1 mg/ml, 40 μΐ ont été distribués ; et pour 0,5 mg/ml, 20 μΐ ont été distribués. L'aliquote distribuée a été agglomérée à 17 000 x g pendant approximativement 20 minutes à 4 °C pour reconstituer les particules pour l'administration de médicaments à chaque concentration de particules d'intérêt. Du PBS IX à pH 6, 8 et pH 8,0 a été préparé. Du PBS IX a été également utilisé tel quel avec un pH de 7,4. Les échantillons agglomérés à 2 mg/ml ont été remis en suspension dans du PBS IX à pH 6,8, 7,4, et 8,0. Le procédé a été aussi bien répété pour les échantillons à 1 mg/ml et 0,5 mg/ml. Après incubation pendant quatre heures avec agitation dans des conditions ambiantes, les échantillons ont été agglomérés à 17 000 x g pendant approximativement 20 minutes à 4 °C. Le surnageant a été recueilli pour l'analyse et le culot a été remis en suspension dans du PBS IX pH 7,4. Les échantillons (surnageant et culot) ont été analysés pour le Hib total par HPAEC-PAD. Le tableau 11 et la figure 7 présentent les résultats obtenus pour les échantillons aux diverses concentrations de particules et valeurs de pH.
Tableau 11
Les échantillons ont démontré une libération du Hib total dépendante à la fois de la concentration des particules et du pH ; pour une concentration en particules donnée, des taux de pH supérieurs ont conduit à un pourcentage supérieur de Hib dans le surnageant. Pour une valeur de pH donnée, une concentration en particules inférieure a conduit à un pourcentage supérieur de Hib dans le surnageant.
Dissolution des particules au pH seuil par microscopie électronique : après approximativement un an de stockage à 4 °C, 700 μΐ de l'échantillon 700-65 ont été distribués dans un flacon en dram. Du NaOH 0,01 N a été ajouté par incréments en utilisant une seringue Hamilton de 250 μΐ équipée d'une aiguille 27 gauge. Le pH a été suivi en utilisant un pH-mètre. Une petite aliquote a été prélevée périodiquement et elle a été analysée en utilisant un microscope optique. Le tableau 12 détaille les données recueillies dans l'étude. La figure 8A illustre les images optiques.
Tableau 12
Sur la figure 8A, les images optiques montrent qu'à pH 6,40, les particules pour l'administration de médicaments sont demeurées insolubles. À pH 6,64, les particules pour l'administration de médicaments ont commencé à gonfler et à se dissoudre. À pH 6,72, l'imagerie optique a montré que la majorité des particules étaient dissoutes et qu'une petite partie des particules gonflées demeurait. À pH 6,80, l'imagerie optique a montré en majeure partie des particules dissoutes et quelques gros agrégats constitués de particules gonflées et sans forme. Les agrégats ont semblé se dissoudre dans le temps, après approximativement 20 minutes à pH 6,80. Les études ont été répétées en utilisant des particules pour l'administration de médicaments qui avaient été récemment fabriquées. Après approximativement une semaine de stockaqe à 4 °C, 700 μΐ de l'échantillon 817-83-1 ont été distribués dans un flacon en dram. Du NaOH 0,02 N a été ajouté par incréments en utilisant une serinque Hamilton de 250 μΐ équipée d'une aiguille 27 qauqe. Les additions de NaOH ont été au moins espacées de 2 minutes. Du NaOH 0,02 N a été utilisé dans cette étude pour minimiser tout effet de dilution potentiel. Le tableau 13 détaille les données recueillies dans l'étude. La figure 8A représente les images optiques.
Tableau 13
Sur la figure 8A, les images optiques montrent qu'à pH 6,41, les particules pour l'administration de médicaments sont demeurées insolubles. À pH 6,56, les particules pour l'administration de médicaments gonflent. À pH 6,74, l'imagerie optique a montré que la majorité des particules étaient dissoutes. À pH 6,85, l'imagerie optique a montré en majeure partie des particules dissoutes et une petite quantité de débris de particules. En se basant sur les données expérimentales, il y a eu des petites différences entre les particules pour l'administration de médicaments fabriquées et stockées pendant approximativement une semaine et les particules pour l'administration de médicaments fabriquées et stockées pendant approximativement un an. Les particules pour l'administration de médicaments ont commencé à gonfler lorsqu'elles ont été exposées à pH 6,50 à 6,55. La majorité des particules pour l'administration de médicaments étaient dissoutes lorsqu'elles ont été exposées à pH 6,65 à 6,74. Les particules pour l'administration de médicaments étaient presque complètement dissoutes lorsqu'elles ont été exposées à PH 6, 85 ou supérieur.
Cinétique de la dissolution des particules par microscopie optique
Fabrication des particules : des particules pour l'administration de médicaments ont été fabriquées. D'abord, une série de solutions mères a été préparée. Une solution aqueuse homogène de 5 % en poids de PMMA-co-PMAA (-125 kDa, rapport molaire de MMA/MAA = 2/1. Eudragit® S100, Evonik Industries) a été fabriquée par dissolution du polymère à un pH d'approximativement 8. Une seconde solution aqueuse homogène de 5 % en poids de PMMA-co-PMAA (Lot 831-30, exemple 5) a été fabriquée de la même façon. Une solution aqueuse homogène de 15 % en poids de PVP (2,5 kDa, Polysciences, Inc.) a été préparée. La concentration de la solution de Hib-TT était de 897 pg/ml. Les volumes suivants ont été combinés pour produire une solution mère de particules : 1,932 ml de PMMA-co-PMAA, 0,644 ml de PVP, et 1,424 ml de Hib-TT. En se basant sur les composants solides, la solution mère des particules présentait le rapport en pourcentage en poids suivant : 49,67 % en poids de PMMA-co-PMAA, 49,67 % en poids de PVP, et 0,66 % en poids de Hib-TT. Une solution mère des particules a été produite avec chacun de Eudragit® S100 et [831-30] . Les solutions mères résultantes ont été coulées à température ambiante sur un film de PET brut en utilisant une barre de Mayer No. 13. Pour former les particules pour l'administration de médicaments, le film a été laminé contre un moule en forme d'anneau de 6 μιη PRINT® (Liquidia Technologies, Inc, Morrisville, NC) en utilisant un instrument de laminage de paillasse. Les particules pour l'administration de médicaments ont été retirées du film par un grattage mécanique dans des conditions sèches (c'est-à-dire, moins de 30 % d'humidité relative). Le procédé a été répété avec les deux solutions mères.
Transition des particules : pour chaque ensemble de particules, dans des conditions sèches (10 à 30 % d'humidité relative), approximativement 90 à 100 mg des particules pour l'administration de médicaments ont été aspergés sur 4 ml de 0,2 M de succinate de sodium pH 3,5/PEG400, 50/50 en volume sous agitation rapide.
Les particules ont été agitées pendant environ cinq minutes. Après environ cinq minutes, des aliquotes de 4 x 2 ml de 200 mM de maléate de sodium pH ont été ajoutées à la suspension, avec environ une minute d'agitation entre chaque addition d'aliquote. La suspension a été divisée dans six tubes, approximativement 2 ml par tube. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 17 000 x g pendant au moins 5 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Chaque culot a été remis en suspension dans 1 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1 et deux tubes ont été combinés en un tube. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 17 000 x g pendant au moins 5 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 2 ml de 200 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension a été agglomérée par centrifugation à 12 000 x g pendant approximativement 5 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 2 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. La suspension des particules a été diluée en combinant 1 ml de la suspension avec 1 ml de maléate de sodium pH 6,1.
La suspension des particules a été filtrée à travers un filet en nylon de 41 ym dans 10 mM de maléate de sodium pH 6,1. Le filtrat a été concentré par centrifugation de la suspension à 12 000 x g pendant au moins 3 minutes à 4 °C. Le filtrat concentré a été aggloméré par centrifugation à 12 000 x g pendant approximativement 3 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 2 ml de 10 mM de maléate de sodium pH 6,1 pour un lavage. Les particules ont été lavées deux fois de plus pour un total de trois lavages. Les particules ont été agglomérées à 12 000 x g pendant approximativement 3 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 2 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM de NaCl pH 6,1. Les particules ont été agglomérées à 12 000 x g pendant approximativement 3 minutes à 4 °C. Le surnageant a été prélevé et jeté. Le culot a été remis en suspension dans 1 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM de NaCl pH 6,1.
Les suspensions ont été analysées par gravimétrie pour la concentration des particules. La concentration pour l'échantillon 841-12-1 (Eudragit® S100 contenant les particules) était de 7,75 mg/ml. La concentration pour l'échantillon 841-12-3 (Lot [831-30] contenant les particules) était de 1,725 mg/ml. Les suspensions ont été diluées ou concentrées à une concentration en particules d'approximativement 2 mg/ml. 50 μΐ de l'échantillon 841-12-1 et de l'échantillon 841-12-3 ont été placés dans des flacons individuels et agités à approximativement 300 tr/min à température ambiante. Du NaOH 0,02 N a été ajouté à chaque échantillon, 10 μΐ à 841-12-1 et 18 μΐ à 841-12-3, et le temps a été démarré. À T = 2, 4, 6, 8, et 10 minutes, 2 μΐ de l'échantillon ont été prélevés et évalués en utilisant la microscopie optique. La figure 8B représente les images. Le tableau 14 résume les observations des particules en utilisant la microscopie.
Tableau 14
Exemple 6 - Thermostabilité des particules sensibles au pH
Une étude a été conduite pour évaluer la stabilité thermique, mesurée par le Hib libre (par HPAEC-PAD) dans le temps (T = 0, 14, 68, et 86 jours), pour des particules pour l'administration de médicaments stockées à diverses températures (25, 37, 45 °C).
Echantillon 855-72-2 : 1, 1 ml de 855-61-1 a été combiné avec 1,1 ml de 10 mM de maléate de sodium/ 300 mM de NaCl/0,02 % de thimérosal pH 6,1 et 10,857 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM de NaCl/0,01 % de thimérosal pH 6, 1 pour produire une concentration en particules finale d'approximativement 2,381 mg/ml avec une teneur calculée en Hib total de 20 μg/ml. La production de 855-61-1 a été décrite dans l'exemple 5.
Echantillon 855-72-4 : 2,4 ml de 855-14 ont été combinés avec 2,4 ml de 10 mM de maléate de sodium/ 300 mM de NaCl/0,02 % de thimérosal pH 6,1 et 8,340 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM de NaCl/0,01 % de thimérosal pH 6, 1 pour produire une concentration en particules finale d' approximativement 2,283 mg/ml avec une teneur calculée en Hib total de 20 pg/ml. La production de 855-14 a été décrite dans l'exemple 5. Par rapport à 855-72-2 ci-dessus, 855-72-4 contient des particules fabriquées à partir d'une matrice de polymère PMMA-co-PMAA d'une origine différente, et qui ont été transitionnées dans 0,4 M, par opposition à 0,2 M, de maléate de sodium pH 6,1. 855-72-5 : en tant que témoin, un échantillon contenant du Hib soluble (c'est-à-dire, pas de particules) a été produit en combinant 0,27 ml de Hib-TT (902 pg/ml) avec 11,910 ml de 10 mM de maléate de sodium/150 mM NaCl/0,01 % de thimérosal pH 6,1.
Les échantillons ont été distribués dans des flacons en aliquotes de 0,65 ml et placés en stockage à trois températures : 25 °C, 37 °C, et 45 °C. Ils ont été retirés du stockage au jour 0, 14, 68, et 86 (approximativement 0, 2, 10, 12 semaines) et analysés pour le Hib total et le Hib libre dans à la fois les particules (culot) et l'environnement aqueux (surnageant) par HPAEC-PAD. Les tableaux 15 à 17 montrent la proportion de Hib sous forme libre (non conjugué) (culot + surnageant, pour les échantillons contenant les particules) à ces points de temps, après soustraction des quantités respectives de Hib libre présentes à T = 0. La figure 9 présente graphiquement les informations pour les points de temps 14, 68 et 86 jours à 25, 37 et 45 °C. Il semble y avoir un effet protecteur des particules sur l'intégrité du Hib-TT à 37 et 45 °C.
Tableau 15 855-72-2
Tableau 16 855-72-4
Tableau 17 855-72-5
Exemple 7 - Etude in vivo
Une étude in vivo a été effectuée pour démontrer la capacité des particules sensibles au pH à protéger la cargaison de Hib-TT contre l'interaction délétère avec la formulation Infanrix Penta durant le stockage, tout en permettant à la cargaison de déclencher une réponse immunitaire à la suite de l'administration. Un modèle de rat adulte a été utilisé.
Matériau et procédés : des particules contenant du Hib-TT ont été ajoutées à Infanrix Penta pour fabriguer une composition hexavalente DTPa-HepB-IPV-Hib. Après un minimum de stockage de 4 semaines à 4 °C, ces compositions ont été administrées aux rats dans les groupes 4 et 5, discutés ci-dessous. Des rats Sprague-Dawley femelles adultes âgés de 6 semaines (Ico : OFA-SD) ont été divisés en 5 groupes (voir ci-dessous ; n = 20 par groupe). L'immunisation avec un dixième de dose humaine, administrée par voie intramusculaire, est survenue aux jours 0, 14, et 28. Les animaux ont été saignés pour la sérologie aux jours 21 (« 7PII ») et 35 (« 7PI11 ») .
Groupe 1 : du Hib-TT lyophilisé (adsorbé sur du phosphate d'aluminium) a été reconstitué avec Infanrix Penta (= Infanrix Hexa) dans un volume final d'environ 625 μΐ. 50 μΐ (dose de Hib de 1 pg/ml) ont été administrés de façon extemporanée (c'est-à-dire, dans l'heure qui a suivi la reconstitution).
Groupe 2 : du Hib-TT lyophilisé (Hiberix) a été reconstitué avec 625 μΐ de NaCl 150 mM (dose de Hib de 1 pg/ml dans 50 μΐ) et coadministré (au niveau de sites différents) avec Infanrix Penta (50 μΐ).
Groupe 3 : les particules contenant du Hib-TT 841-57-1 ont été diluées dans du tampon NaCl 150 mM/10 mM de maléate pH 6,1 jusqu'à une concentration en Hib-TT de 20 pg/ml. 55 μΐ de l'échantillon dilué ont été administrés et Infanrix Penta (50 μΐ) a été coadministré (au niveau d'un site différent) .
Groupe 4 : 55 μΐ des particules contenant du Hib-TT dans Infanrix Penta 841-57-2 ont été administrées après stockage à 4 °C pendant 4 semaines.
Groupe 5 : 55 μΐ des particules contenant du Hib-TT dans Infanrix Penta 700-66 ont été administrées après stockage à 4 °C pendant 16 mois.
Analyse de la sérologie pour l'antigène de Hib (PRP) : les sérums de tous les rats ont été recueillis individuellement sept jours après la deuxième (7PII) ou troisième (7PIII) immunisation et testés pour la présence d'anticorps IgG spécifiques du polyribosyl-ribitol-phosphate (PRP) d'Haemophilus influenzae de type b selon le protocole suivant. Des plaques de 96 puits ont été sensibilisées avec du PRP tyraminé (1 pg/ml) dans un tampon carbonate-bicarbonate (50 mM) et incubées pendant une nuit à 4 °C. Les sérums des rats ont été dilués au 1/10 dans du PBS-Tween à 0,05 % et dilués en série dans les puits des plaques (12 dilutions, étape au V2) . Un anticorps polyclonal anti-IgG de rat (H+L) couplé à de la peroxydase a été ajouté (dilution au 1/5000). Une réaction colorimétrique a été observée après l'addition du substrat de la peroxydase (OPDA), et stoppée avec du HCl (1 M) avant la lecture par spectrophotométrie (longueurs d'onde : 490 à 620 nm) . Pour chaque sérum testé et étalon ajouté sur chaque plaque, une courbe logistique à 4 paramètres a été adaptée à la relation entre la DO et la dilution (Softmaxpro). Ceci a permis la dérivation du titre de chaque échantillon exprimé en titres STD. Le procédé statistique employé a été une analyse de la variance (ANOVA) sur les valeurs de loglO avec 2 facteurs (groupe et TP) en utilisant un modèle de variance hétérogène, c'est-à-dire que des variances identiques n'ont pas été supposées pour les différents taux du facteur. L'interaction entre les 2 facteurs a été testée ; les résultats sont fournis par le taux du second facteur puisque les interactions ont semblé être qualitatives en nature. Des estimations de la moyenne géométrique des rapports entre les groupes et leurs intervalles de confiance (IC) à 95 % ont été obtenues en utilisant une rétro-transformation sur les valeurs de loglO. L'ajustement pour la multiplicité a été effectué en utilisant le procédé de Tukey. Les intervalles de confiance à 95 % ajustés à la multiplicité ont été fournis. Résultats de la sérologie pour le Hib : les résultats de la sérologie pour le Hib sont présentés sur la figure 10. À la fois à 7PII et 7PIII, les groupes 1 et 2 ont été statistiquement significativement différents, validant la capacité de l'expérience à démontrer la survenue d'une interférence entre le Hib-TT et Infanrix Penta (apparent sous la forme d'une réponse immunitaire anti-Hib réduite). À 7PIII, le groupe 1 (reconstitution extemporanée du Hib-TT lyophilisé avec Infanrix Penta = Infanrix Hexa) a été statistiquement significativement différent des groupes 2 à 5 dans lesquels le Hib-TT a été coadministré (c'est-à-dire, au niveau de sites distincts, non mélangés ; groupes 2 et 3) avec Infanrix Penta et/ou a été présent au sein d'une particule pour l'administration de médicaments (groupes 3 à 5) . Par conséquent, en mélangeant des particules contenant du Hib-TT avec Infanrix Penta, il a été observé une réduction de l'interférence. Veuillez noter que la réponse immunitaire anti-Hib inférieure dans le groupe 1 se produit lors du mélange extemporané, c'est-à-dire, même en l'absence de stockage du mélange pour toute durée prolongée. À 7PIII, il n'a été détecté aucune différence significative entre la coadministration (pas de mélange) des particules contenant du Hib-TT avec Infanrix Penta (groupe 3) et l'administration de particules qui avaient été mélangées Infanrix Penta pendant 4 semaines (groupe 4). Ceci démontre que la particule empêche ou minimise l'interaction délétère entre le Hib-TT et Infanrix Penta durant le stockage, tout en permettant l'accès au Hib-TT du système immunitaire une fois administré.
Une équivalence statistique a été détectée entre les groupes 2 et 3 à 7PIII, montrant que la formulation du Hib-TT au sein d'une particule n'altère pas sa capacité à induire une réponse immunitaire une fois administrée. Il a été également montré que les groupes 4 et 5 sont équivalents à 7PIII, suggérant aucune perte ou une perte minime de l'immunogénicité du Hib-TT, et aucune perte ou une perte minime du Hib-TT provenant des particules, durant la période de stockage de 4 semaines à plus d'un an, c'est-à-dire que le Hib-TT dans les particules est stable dans une formulation aqueuse.
REVENDICATIONS 1. Pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans laquelle lesdites particules sont déclenchées pour libérer ladite cargaison en étant présente dans un environnement aqueux ayant un pH plus élevé par rapport au pH d'un environnement aqueux dans lequel lesdites particules sont formulées et maintenues avant d'être ainsi déclenchées. 2. Pluralité de particules selon la revendication 1, dans laquelle ladite matrice est insoluble dans un environnement aqueux à un pH sub-physiologique, et dans laquelle ladite matrice est soluble dans un environnement aqueux à un pH physiologique déclencheur. 3. Pluralité de particules selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans laquelle lesdites particules sont intactes à pH sub-physiologique, et dans laquelle lors de la soumission desdites particules à un pH physiologique déclencheur, lesdites particules sont sensiblement ou complètement dissoutes ou dégradées en 24 heures ou moins. 4. Pluralité de particules pour l'administration de médicaments, sensibles au pH comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans laquelle la quantité de cargaison libérée à partir de ladite pluralité de particules lorsqu'elle est présente dans un environnement aqueux pendant au moins 6 mois à un pH sub-physiologique n'est pas de plus de 30 % en poids de la quantité totale de la cargaison, et dans laquelle lors de la soumission desdites particules à un pH physiologique déclencheur, la quantité de cargaison libérée en 24 heures ou moins n'est pas inférieure à 50 % en poids de la quantité totale de la cargaison. 5. Pluralité de particules selon la revendication 4, dans laquelle lesdites particules sont en outre définies dans les revendications 1 ou 3 et/ou ladite matrice est en outre définie dans la revendication 2. 6. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, dans laquelle lesdits pH subphysiologique et pH physiologique sont définis par rapport au pH du tissu musculaire humain, en particulier de nourrisson. 7. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, dans laquelle lesdits pH subphysiologique et pH physiologique diffèrent l'un de l'autre d'au moins 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4 ou 1,5 unité de pH. 8. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, dans laquelle ledit pH subphysiologique est à ou inférieur à 6,8, 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1 ou 6,0. 9. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, dans laquelle ledit pH physiologique est à ou supérieur à 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6 ou 7,7. 10. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 9, dans laquelle lesdits pas plus de 30 % en poids de la quantité totale de la cargaison ne sont pas plus de 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21,

Claims (104)

  1. 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 % en poids.
  2. 11. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 10, dans laquelle lesdits pas moins de 50 % en poids de la quantité totale de la cargaison ne sont pas moins de 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100 % en poids.
  3. 12. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 11, dans laquelle lesdits au moins 6 mois sont 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois.
  4. 13. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 12, dans laquelle lesdits en 24 heures ou moins sont en 20, 16, 12, 10, 8, 6, 4, 2 ou 1 heure(s) ou 45, 30, 15, 10 ou 5 minutes.
  5. 14. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 13, dans laquelle la libération de la cargaison est telle que déterminée in vitro, comme par HPAEC-PAD ou un test ELISA.
  6. 15. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 14, dans laquelle durant lesdits au moins 6 mois à un pH sub-physiologique, ledit environnement aqueux est maintenu à une température située entre 2 et 8 °C, par exemple à environ 4 °C.
  7. 16. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 14, dans laquelle durant lesdits au moins 6 mois à un pH sub-physiologique, ledit environnement aqueux ne dépasse pas 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 °C, ou de préférence 4 °C, pendant plus longtemps qu'une excursion d'une durée située entre 1 jour et 12 semaines, laquelle excursion ne dépasse pas environ 37 °C, de préférence environ 25 °C.
  8. 17. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 16, dans laquelle ledit environnement aqueux de pH sub-physiologique comprend un tampon, comme le sérum physiologique, ou un tampon phosphate, Tris, borate, succinate, histidine, citrate ou maléate.
  9. 18. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 3 et 5 à 17, dans laquelle que la particule soit intacte ou sensiblement ou complètement dissoute ou dégradée est déterminé in vitro par microscopie optique.
  10. 19. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, dans laquelle ladite matrice est polymère.
  11. 20. Pluralité de particules selon la revendication 19, dans laquelle ladite matrice polymère est biocompatible ou biodégradable ou biorésorbable ou excrétable, dans ou à partir du corps humain.
  12. 21. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 ou 20, dans laquelle ladite matrice polymère comprend un polymère ayant un pKa inférieur au dit pH physiologique déclencheur.
  13. 22. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, dans laquelle ladite matrice polymère comprend un polymère qui est dans un état au moins partiellement protoné, et/ou a une charge approximativement ou exactement neutre, et est insoluble, lorsqu'elle est dans ledit environnement aqueux à un pH sub-physiologique.
  14. 23. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 à 22, dans laquelle ladite matrice polymère comprend un copolymère (poly(méthacrylate de méthyle)-co-poly(acide méthacrylique) (copolymère PMMA-co-PMAA) ; poly(acide glutamique)-co-poly(lysine) ; hétéro- ou homo-poly(acides aminés) zwittérioniques ; carboxyméthyl-chitosane ; phtalate d'hypromellose ; acétosuccinate d'hypromellose ; ou un copolymère d'acrylate représenté par la formule générale (1) :
    (D dans laquelle : RI représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et R3 représente un groupe méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, n-butyle, iso-butyle, tert-butyle, sec-butyle, phényle, ou benzyle.
  15. 24. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 à 23, dans laquelle ladite matrice polymère comprend le copolymère PMMA-co-PMAA, dans laquelle le rapport molaire du monomère de méthacrylate de méthyle (MMA) sur le monomère d'acide méthacrylique (MAA) dans le copolymère se situe dans la plage de 1/1 à 4/1, en particulier de 1,5 à 2/1.
  16. 25. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 a 24, dans laquelle ledit copolymère PMMA-co-PMAA a une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) située dans la plage de 1 à 200 kDa, comme dans la plage de 50 à 60 kDa ou de 35 à 45 kDa ou de 22 à 28 kDa ou de 8 à 12 kDa, comme une masse moléculaire moyenne en poids (Mm) de 10, 25, 40, 55 ou 125 kDa.
  17. 26. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 19 à 23, dans laquelle ladite matrice polymère comprend du poly(acide glutamique)-co-poly(lysine), dans lequel le rapport molaire du monomère d'acide glutamique sur le monomère de lysine est approximativement ou exactement de 1/1.
  18. 27. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 26, dans laquelle ladite cargaison est un médicament ou un antigène.
  19. 28. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, dans laquelle ladite cargaison comprend un antigène d'oligo/polysaccharide, éventuellement conjugué à une protéine de support telle que l'anatoxine tétanique, le fragment C de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197 ou un autre mutant non toxique de la toxine diphtérique, la protéine D d'Haemophilus influenzae non typable, un complexe des protéines de la membrane externe (OMPC) de Neisseria meningitidis, la PhtD pneumococcique, la pneumolysine pneumococcique, l'exotoxine A de Pseudomonas aeruginosa (EPA), 1'hémolysine détoxifiée de Staphylococcus aureus, 1 'adénylate cyclase détoxifiée de Bordetella sp., l'entérotoxine thermolabile détoxifiée d'Escherichia coli, ou la sous-unité B de la toxine cholérique (CTB) ou la toxine cholérique détoxifiée.
  20. 29. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 28, dans laquelle ladite cargaison est sensible à l'hydrolyse.
  21. 30. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 29, dans laquelle ladite cargaison a un point isoélectrique (pi) bas, comme un pi de 4 ou inférieur, en particulier de 3 ou 2 ou inférieur.
  22. 31. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 29, dans laquelle ladite cargaison est un antigène conjugué oligo/ polysaccharide-protéine et dans laquelle ladite fraction oligo/polysaccharide avant la conjugaison a un point isoélectrique (pi) bas, comme un pi de 4 ou inférieur, en particulier de 3 ou 2 ou inférieur.
  23. 32. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 27 à 31, dans laquelle ledit antigène comprend un oligo/polysaccharide dérivé d'un pathogène choisi dans le groupe constitué d'Haemophilus influenzae de type b (Hib) ; Neisseria meningitidis (en particulier des sérotypes A, C, W et/ou Y) ; Streptococcus pneumoniae ; Staphylococcus aureus ; Bordetella pertussis ; et Salmonella typhi.
  24. 33. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 27 à 32, dans laquelle ledit antigène comprend un oligo/polysaccharide dérivé d'un saccharide capsulaire bactérien ou d'un lipooligosaccharide (LOS) ou d'un lipopolysaccharide (LPS).
  25. 34. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 27 à 33, dans laquelle ledit antigène est l'antigène d'oligo/polysaccharide capsulaire (PRP) de Hib conjugué à l'anatoxine tétanique (TT) ou CRM197.
  26. 35. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 27 à 33, dans laquelle ledit antigène est 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype A (MenA) conjugué au CRM197.
  27. 36. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 35, dans laquelle ladite cargaison comprend des groupes phosphate ou des liaisons phosphodiester.
  28. 37. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 36, dans laquelle ladite cargaison est sensiblement dispersée de façon homogène dans toute la matrice.
  29. 38. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 36, dans laquelle ladite cargaison est encapsulée au sein de la matrice.
  30. 39. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 27 à 38, dans laquelle ledit antigène est un oligo/polysaccharide conjugué à une protéine de support, et dans laquelle durant lesdits au moins 6 mois dans un environnement aqueux à pH sub-physiologique, la quantité de saccharide libre (non conjugué), dérivé dudit conjugué d'oligo/ polysaccharide, présent collectivement dans les particules et l'environnement aqueux n'est pas de plus de 30 ou 25 ou 20 ou 15 ou 10 % en poids de la quantité totale du saccharide conjugué et libre présent collectivement dans les particules et l'environnement aqueux.
  31. 40. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 39, dans laquelle lesdites particules sont moulées aboutissant à une taille et une forme précisément prédéterminées, en particulier une forme d'anneau.
  32. 41. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 40, dans laquelle l'axe le plus long desdites particules se situe entre 1 et 10 ym, en particulier entre 5 et 7 ym comme 6 ym.
  33. 42. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 41, dans laquelle au moins un axe est inférieur à 200 nm, comme inférieur à 100 nm, et ladite particule peut être stérilisée par filtration.
  34. 43. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 42, dans laquelle lesdites particules sont pour une administration parentérale, comme une administration intradermique ou sous-cutanée, en particulier une administration intramusculaire.
  35. 44. Composition comprenant une pluralité de particules telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43 dans un environnement aqueux, éventuellement dans laquelle ledit environnement est stérile.
  36. 45. Composition selon la revendication 44, ladite composition ayant un pH inférieur au pH physiologique seuil des particules et/ou ladite composition étant de pH sub-physiologique.
  37. 46. Composition selon la revendication 44 ou la revendication 45, ladite composition ayant un pH à ou inférieur à 6,8, 6,7, 6,6, 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1 ou 6, 0.
  38. 47. Composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 46, dans laquelle lesdites particules sont présentes dans ladite composition à une concentration de 0,1 à 15, 0,5 à 12,5, 1 à 10 ou 2 à 5 mg/ml, comme de 0,5 à 3 mg/ml, éventuellement dans laguelle lesdites particules sont telles gue définies dans la revendication 25.
  39. 48. Composition comprenant une pluralité de particules telle gue définie dans l'une guelcongue des revendications 1 à 43, dans laquelle ladite pluralité est une première pluralité par rapport à une autre seconde pluralité de particules, dans laquelle ladite seconde pluralité de particules comprend une cargaison autre que la cargaison de la première pluralité de particules.
  40. 49. Composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 48, dans laquelle ledit environnement aqueux comprend un ou plusieurs excipients physiologiquement acceptables.
  41. 50. Composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 49, dans laquelle ledit environnement aqueux comprend un tampon, comme le sérum physiologique, ou un tampon phosphate, Tris, borate, succinate, histidine, citrate ou maléate.
  42. 51. Composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 50, dans laquelle l'interaction de ladite cargaison avec les composants de l'environnement aqueux est empêchée ou réduite par la matrice de la particule.
  43. 52. Composition selon la revendication 51, dans laquelle ladite interaction est empêchée ou réduite pendant au moins 6 mois, comme 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois, ladite composition étant éventuellement maintenue à environ 4 °C.
  44. 53. Composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 52, ladite composition étant une composition immunoqène.
  45. 54. Composition immunoqène selon l'une quelconque des revendications 44 à 53, dans laquelle ledit environnement aqueux comprend un adjuvant.
  46. 55. Composition immunogène selon la revendication 54, dans laquelle ledit adjuvant a un pi élevé, comme un pi de 8 ou supérieur, comme de 9 ou 10 ou supérieur, en particulier de 11 ou supérieur.
  47. 56. Composition immunogène selon la revendication 54 ou 55, dans laquelle ledit adjuvant est 1'hydroxyde d'aluminium.
  48. 57. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 44 à 56, dans laquelle ledit environnement aqueux comprend un ou plusieurs antigènes choisis dans le groupe constitué de l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique, les antigènes pertussiques acellulaires (tels que l'anatoxine pertussique, 1'hémagglutinine filamenteuse, la pertactine), l'antigène de surface de l'hépatite B (Ag HBs), le vaccin polio inactivé (IPV), 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype A (MenA) conjugué à une protéine de support, 1 ' oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support, 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support et l'antigène dérivé de Neisseria meningitidis du sérotype B (MenB) , en particulier dans l'une des combinaisons suivantes : i. anatoxine diphtérique et anatoxine tétanique ; ii. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires ; iii. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires et Ag HBs ; iv. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires et IPV ; v. anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique, antigènes pertussiques acellulaires, Ag HBs et IPV ; vi. oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support et oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support ; vii. oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support et oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support et antigène dérivé de Neisseria meningitidis du sérotype B (MenB).
  49. 58. Composition immunogène selon la revendication 57, dans laquelle lesdits anatoxine diphtérique, anatoxine tétanique et antigènes pertussiques acellulaires sont adsorbées sur de 1'hydroxyde d'aluminium, et éventuellement ledit Ag HBs, si présent, est adsorbé sur du phosphate d'aluminium.
  50. 59. Composition immunogène comprenant une pluralité de particules telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43 dans un environnement aqueux, dans laquelle : i. lesdites particules comprennent une cargaison de Hib-TT ou de Hib-CRM197 dispersée de façon homogène au sein d'une matrice comprenant du PMMA-co-PMAA ; et ii. ledit environnement aqueux comprend l'anatoxine diphtérique, l'anatoxine tétanique et les antigènes pertussiques acellulaires adsorbés sur de 1'hydroxyde d'aluminium, et éventuellement l'Ag HBs et l'IPV.
  51. 60. Composition immunogène comprenant une pluralité de particules telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43 dans un environnement aqueux, dans laquelle : i. lesdites particules comprennent une cargaison de MenA-CRM dispersée de façon homogène au sein d'une matrice comprenant du PMMA-co-PMAA ; et ii. ledit environnement aqueux comprend 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype C (MenC) conjugué à une protéine de support, 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype W (MenW) conjugué à une protéine de support, 1'oligo/polysaccharide capsulaire de Neisseria meningitidis du sérotype Y (MenY) conjugué à une protéine de support, et éventuellement l'antigène dérivé de Neisseria meningitidis du sérotype B (MenB).
  52. 61. Composition immunogène selon la revendication 59 ou la revendication 60, dans laquelle la matrice des particules empêche ou réduit l'agrégation ou la floculation du Hib-TT ou du Hib-CRM197 ou du MenA-CRM197 et/ou empêche ou réduit l'interférence immunologique sur le Hib-TT ou le Hib-CRM197 ou le MenA-CRMI 97.
  53. 62. Composition immunogène selon la revendication 61, dans laquelle ladite agrégation ou floculation et/ou ladite interférence immunologique est empêchée ou réduite pendant au moins 6 mois, comme 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ou 36 mois, la composition étant éventuellement gardée à environ 4 °C.
  54. 63. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 53 à 61, dans laquelle la matrice des particules n'interfère pas avec l'immunogénicité desdits un ou plusieurs antigènes compris au sein de l'environnement aqueux.
  55. 64. Flacon contenant une pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou une composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63 .
  56. 65. Dispositif pour une administration parentérale, comme une seringue, contenant une pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou une composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63.
  57. 66. Dispositif selon la revendication 65, ledit dispositif étant une seringue à chambre double contenant dans une chambre une pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 et dans l'autre chambre un environnement aqueux tel que défini dans l'une quelconque des revendications 45, 46, 49, 50 et 54 à 58.
  58. 67. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63 pour une utilisation en médecine, en particulier en médecine humaine.
  59. 68. Pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63 pour une utilisation dans le traitement ou la prévention, en particulier chez un être humain, de (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer.
  60. 69. Utilisation de la pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou de la composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63 dans la fabrication d'un médicament pour une utilisation dans le traitement ou la prévention, en particulier chez un être humain, de (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer.
  61. 70. Pluralité de particules ou composition selon la revendication 68 ou utilisation selon la revendication 69, ladite pluralité de particules ou ladite composition étant pour une administration parentérale.
  62. 71. Procédé de déclenchement d'une réponse immunitaire contre (i) un pathogène ou un allergène provoquant une infection ou une pathologie, ou (ii) des cellules hôtes immunologiquement distinctes responsables d'une pathologie, comme le cancer, comprenant l'étape d'administration à un sujet, en particulier un être humain, d'une quantité efficace de la pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou de la composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63.
  63. 72. Procédé de traitement ou de prophylaxie contre (i) une infection ou une pathologie provoquée directement ou indirectement par un pathogène, ou (ii) une pathologie associée à des cellules hôtes immunologiquement distinctes, comme le cancer, comprenant l'étape d'administration à un sujet, en particulier un être humain, d'une quantité efficace de la pluralité de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 43 ou de la composition selon l'une quelconque des revendications 44 à 63.
  64. 73. Procédé selon la revendication 71 ou la revendication 72, dans lequel ladite étape d'administration est réalisée par une voie parentérale.
  65. 74. Pluralité de particules ou composition selon les revendications 68 ou 70, ou utilisation selon les revendications 69 ou 70, ou procédé selon l'une quelconque des revendications 71 à 73, dans lesquels ledit pathogène est choisi dans la liste constituée de : Haemophilus influenzae du type b (Hib) ; Neisseria meningitidis (en particulier des sérotypes A, C, W et/ou Y) ; Streptococcus pneumoniae ; Staphylococcus aureus ; Bordetella sp. ; et Salmonella typhi.
  66. 75. Composition ou composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 44 à 63, ladite composition ou composition immunogène étant un vaccin.
  67. 76. Vaccin comprenant la composition ou la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 44 à 63.
  68. 77. Procédé de prévention ou de réduction de l'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant : i. la formation d'une pluralité de particules sensibles au pH telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43, comprenant ladite cargaison ; et ii. la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux, comprenant tout ajustement nécessaire pour rendre ledit environnement de pH sub-physiologique.
  69. 78. Procédé de prévention ou de réduction de l'interaction entre une cargaison biologiquement active et les composants d'un environnement aqueux de pH subphysiologique dans lequel ladite cargaison est présente, comprenant : i. la formation d'une pluralité de particules sensibles au pH telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43, comprenant ladite cargaison ; et ii. la formulation de ladite pluralité de particules dans ledit environnement aqueux.
  70. 79. Procédé selon l'une quelconque des revendications 77 et 78, dans lequel ladite pluralité de particules formulée dans ledit environnement aqueux est la composition telle que définie dans l'une quelconque des revendications 44 à 63.
  71. 80. Procédé selon la revendication 77 ou la revendication 78, dans lequel ladite prévention ou réduction de l'interaction est pour : i. le stockage de ladite cargaison dans ledit environnement aqueux ; ou ii. la prévention ou la réduction de la dégradation, comme la dégradation par hydrolyse, de ladite cargaison dans ledit environnement aqueux.
  72. 81. Procédé selon la revendication 77 ou la revendication 78, ledit procédé étant destiné à la prévention ou à la réduction de 1'interaction entre ladite cargaison biologiquement active et les molécules d'eau dans ledit environnement aqueux, ou entre ladite cargaison biologiquement active et un composant de l'environnement aqueux autre que l'eau, comme un adj uvant.
  73. 82. Procédé selon la revendication 81, dans lequel ledit adjuvant est 1'hydroxyde d'aluminium, et éventuellement dans lequel ladite cargaison est le Hib-TT ou le Hib-CRMl97 ou le MenA-CRMl97.
  74. 83. Procédé selon la revendication 77 ou la revendication 78, ledit procédé étant destiné à la prévention ou à la réduction de 1 ' interaction entre ladite cargaison biologiquement active et une seconde cargaison présente dans ledit environnement aqueux, comprenant en outre : iii. la formation d'une seconde pluralité de particules comprenant ladite seconde cargaison au sein d'une matrice, ladite seconde pluralité de particules étant telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 43 à condition que ladite seconde cargaison ne soit pas identique à ladite cargaison biologiquement active.
  75. 84. Procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant l'étape de fabrication d'une solution de ladite cargaison et d'un polymère de la matrice, éventuellement dans lequel ledit polymère est tel que défini en référence à la matrice polymère ou au polymère selon l'une quelconque des revendications 20 à 26.
  76. 85. Procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, le procédé comprenant l'utilisation d'une solution comprenant un polymère tel que défini en référence à la matrice polymère ou au polymère selon l'une quelconque des revendications 20 à 26, et une cargaison éventuellement telle que définie dans l'une quelconque des revendications 27 à 36.
  77. 86. Procédé selon les revendications 84 ou 85, dans lequel ladite solution comprend ladite cargaison à une quantité ne dépassant pas 30 % en poids et un complément de copolymère PMMA-co-PMAA.
  78. 87. Procédé selon la revendication 86, dans lequel ladite solution comprend ladite cargaison à une quantité de 0,1 à 5 % en poids, comme 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5 ou 5 % en poids.
  79. 88. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 87, dans lequel ladite cargaison est le Hib-TT ou le Hib-CRM197 ou le MenA-CRMl97.
  80. 89. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 88, dans lequel ladite solution comprend en outre de la PVP, dans lequel le rapport en % en poids de PVP/PMMA-co-PMAA ne dépasse pas 1/1.
  81. 90. Procédé selon la revendication 89, dans lequel le rapport en % en poids de PVP/PMMA-co-PMAA se situe dans la plage de 0,1 à 1/1, comme 0,2/1, 0,3/1, 0,4/1, 0,5/1, 0,6/1, 0,7/1, 0,8/1 ou 0,9/1.
  82. 91. Procédé selon l'une quelconque des revendications 89 et 90, dans lequel ladite PVP a une masse moléculaire d'environ 2,5 kDa et une polydispersité d'environ 1,9.
  83. 92. Procédé selon les revendications 84 ou 85, dans lequel ladite solution comprend ladite cargaison à une quantité ne dépassant pas 30 % en poids et un complément de copolymère poly(acide glutamique)-co-poly(lysine).
  84. 93. Procédé selon la revendication 92, dans lequel ladite cargaison est le Hib-TT ou le Hib-CRM197 ou le MenA-CRMl97.
  85. 94. Procédé selon l'une quelconque des revendications 92 et 93, dans lequel ladite solution comprend en outre du glycérol, dans lequel le rapport en % en poids de glycérol/poly(acide glutamique)-co-poly(lysine) ne dépasse pas 1/1.
  86. 95. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 91, dans lequel ladite solution comprend 0,2 à 1,2, plus particulièrement 0,4 à 1, % en poids de Hib-TT ou de Hib-CRM197 ou de MenA-CRM197 et un complément de PMMA-co-PMAA et de PVP, éventuellement dans un rapport en % en poids de 1/1.
  87. 96. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84, 85 et 92 à 94, dans lequel ladite solution comprend 0,2 à 1,2, plus particulièrement 0,4 à 1, % en poids de Hib-TT ou de Hib-CRM197 ou de MenA-CRM197 et un complément de poly(acide glutamique)-co-poly(lysine) et de glycérol dans lequel le glycérol est présent à 30 % en poids.
  88. 97. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 96, comprenant en outre la formation de ladite pluralité de particules par moulage de ladite solution.
  89. 98. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 97, dans lequel ladite solution comprend en outre un agent plastifiant autre que la PVP, éventuellement où ledit agent plastifiant est un agent porogène.
  90. 99. Procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 98, dans lequel si ladite solution comprend de la PVP, un autre agent plastifiant et/ou un porogène, ledit procédé comprend en outre l'élimination de sensiblement la totalité de ladite PVP, de l'autre agent plastifiant et/ou porogène à partir de ladite particule.
  91. 100. Procédé de fabrication d'une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, comprenant les étapes suivantes : i. la déprotonation au moins partielle d'un polymère, qui est insoluble dans son état protoné, dans un environnement aqueux de telle façon que le polymère a une charge négative nette et est soluble dans ledit environnement aqueux ; ii. la combinaison dudit polymère avec ladite cargaison pour produire une solution ; iii. la formation des particules par moulage de ladite solution et élimination de l'environnement aqueux.
  92. 101. Procédé selon la revendication 100, comprenant en outre le recueil des particules dans un état sec ou dans un environnement de recueil liquide organique ou aqueux.
  93. 102. Procédé selon la revendication 101, dans lequel le liquide aqueux est acide.
  94. 103. Procédé selon la revendication 101 ou la revendication 102, dans lequel le liquide aqueux a un pH inférieur à 5.
  95. 104. Procédé selon la revendication 100, comprenant en outre la protonation du polymère des particules de telle façon que le polymère des particules retourne à un état insoluble.
  96. 105. Procédé selon la revendication 104, comprenant en outre le stockage des particules à un pH subphysiologique acceptable pour une administration parentérale.
  97. 106. Procédé selon la revendication 105, dans lequel ledit stockage est dans un environnement aqueux.
  98. 107. Pluralité de particules pour l'administration de médicaments pouvant être obtenue ou étant obtenue par le procédé selon l'une quelconque des revendications 84 à 106.
  99. 108. Procédé de fabrication d'une composition, telle qu'une composition immunogène, comprenant la fabrication d'une pluralité de particules selon un procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 84 à 106 et la formulation desdites particules dans un environnement aqueux, dans lequel ledit environnement comprend éventuellement un antigène et/ou un adjuvant, dans lequel ledit antigène et/ou adjuvant sont éventuellement tels que définis dans l'une quelconque des revendications 55 à 58.
  100. 109. Procédé de fabrication d'une composition, telle qu'une composition immunogène, comprenant une pluralité de particules pour l'administration de médicaments comprenant une cargaison biologiquement active au sein d'une matrice, dans lequel la matrice comprend un polymère, comprenant les étapes suivantes : i. l'introduction d'une pluralité de particules, fabriquée selon le procédé de l'une quelconque des revendications 84 à 101, dans un environnement aqueux acide de telle façon que l'environnement acide protone le polymère de la matrice rendant le polymère insoluble dans ledit environnement ; ii. l'élévation du pH de l'environnement aqueux acide à un pH sub-physiologique qui est acceptable pour une administration parentérale tout en conservant l'état insoluble du polymère de la matrice dans ledit environnement ; et éventuellement iii. la formulation desdites particules dans un environnement aqueux de pH sub-physiologique, éventuellement dans lequel ledit environnement aqueux est tel que défini dans l'une quelconque des revendications 45, 46, 49, 50 et 54 à 58.
  101. 110. Procédé selon la revendication 109, dans lequel dans l'étape (i) ladite introduction d'une pluralité de particules dans un environnement acide comprend 1'introduction desdites particules dans une solution de stabilisation à un pH situé dans la plage de 1 à 5, comme un pH de 3,5 ou 4,5, dans lequel les particules sont introduites dans la solution de stabilisation jusqu'à 60, 50, 40, 30, 20, 10 ou 5 minutes.
  102. 111. Procédé selon la revendication 109 ou la revendication 110, dans lequel dans l'étape (ii) ladite élévation du pH de l'environnement aqueux acide comprend l'augmentation du pH dudit environnement vers ledit pH sub-physiologique de façon progressive.
  103. 112. Procédé selon l'une quelconque des revendications 109 à 111, dans lequel dans l'étape (ii) le pH de la solution est augmenté de 0,1 à 10 unités de pH par minute, comme de 0,5, 1, 2 ou 5 unités de pH par minute, en particulier de 0,5 unité de pH par minute.
  104. 113. Composition, telle qu'une composition immunogène, pouvant être obtenue ou étant obtenue par le procédé selon l'une quelconque des revendications 108 à 112 .
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3890775A1 (fr) 2018-12-06 2021-10-13 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Compositions immunogènes
WO2024006539A1 (fr) * 2022-07-01 2024-01-04 Vitakey Inc. Particules nutraceutiques

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0533799B1 (fr) * 1990-06-20 1995-10-18 Advanced Polymer Systems, Inc. Compositions et procedes pour la liberation controlee de substances actives solubles
CA2059693C (fr) 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Antigenes polysaccharides de streptococcus pneumoniae
US5500161A (en) * 1993-09-21 1996-03-19 Massachusetts Institute Of Technology And Virus Research Institute Method for making hydrophobic polymeric microparticles
CN1997691B (zh) 2003-09-23 2011-07-20 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 光固化的全氟聚醚用作微流体器件中的新材料
ES2625345T3 (es) 2003-12-19 2017-07-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Métodos para fabricar micro- y nanoestructuras usando litografía blanda o de impresión
US9214590B2 (en) 2003-12-19 2015-12-15 The University Of North Carolina At Chapel Hill High fidelity nano-structures and arrays for photovoltaics and methods of making the same
EP2537657A3 (fr) 2005-08-09 2016-05-04 The University of North Carolina At Chapel Hill Procédés et matériaux permettant de fabriquer des dispositifs microfluidiques
WO2007133808A2 (fr) 2006-05-15 2007-11-22 Liquidia Technologies, Inc. Nanoparticules pour applications cosmétiques
US8128393B2 (en) 2006-12-04 2012-03-06 Liquidia Technologies, Inc. Methods and materials for fabricating laminate nanomolds and nanoparticles therefrom
CN103660089B (zh) 2007-10-12 2017-04-12 流体科技公司 用于生产颗粒和图案化膜的系统和方法
CN102014874A (zh) 2008-03-04 2011-04-13 流体科技公司 免疫调节剂颗粒和治疗方法
CN102301463B (zh) 2008-12-05 2015-12-02 流体科技公司 产生有图案的材料的方法
WO2011103588A1 (fr) 2010-02-22 2011-08-25 Liquidia Technologies, Inc. Vaccins particulaires polysaccharidiques
US9219799B2 (en) * 2011-12-09 2015-12-22 Bang & Olufsen A/S System and a method of operating it
US20130256354A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Michael Dane Clark Secure hanger
CA3008794C (fr) * 2012-03-29 2021-03-16 Therabiome, Llc Formulations de vaccination orale specifiques a un site gastro-intestinal actives sur l'ileon et l'appendice
DK2833914T3 (en) * 2012-04-04 2019-03-11 Vaxform Llc ADMINISTRATIVE SYSTEM FOR ORAL VACCINE ADMINISTRATION
WO2015073831A1 (fr) 2013-11-15 2015-05-21 Liquidia Technologies, Inc. Particules de type conjugué virtuel

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AR107813A1 (es) 2018-06-06
CA3016860A1 (fr) 2017-09-14
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JP2019513128A (ja) 2019-05-23
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EP3426290A1 (fr) 2019-01-16

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