BE1010651A3

BE1010651A3 - Werkwijze voor het zuiveren van cefalexine.

Info

Publication number: BE1010651A3
Application number: BE9600813A
Authority: BE
Inventors: Dooren Theodorus Johannes Van; Wilhelmus Hubertus Jos Boesten
Original assignee: Dsm Nv
Priority date: 1996-09-27
Filing date: 1996-09-27
Publication date: 1998-11-03
Also published as: EP0832892A1; IN183390B

Abstract

Werkwijze voor het verwijderen van D-fenylglycineamide en 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur uit D-fenylglycineamide en 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur bevattende, vaste cefalexine, waarbij de D-fenylglycineamide en 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur bevattende, vaste cefalexine in oplossing wordt gebracht en wordt onderworpen aan een behandeling met aktieve kool. Bij voorkeur is de oplossing van cefalexine die wordt onderworpen aan de behandeling met aktieve kook, en verzadigde oplossing van cefalexine, en vindt de behandeling met aktieve kool plaats bij een pH tussen 6,5 en 9 en bij een temperatuur tussen 5 en 25 graden C.

Description

WERKWIJZE VOOR HET ZUIVEREN VAN CEFALEXINE
De uitvinding betreft een werkwijze voor het verwijderen van D-fenylglycinamide en 7-ADCA uit Dfenylglycine amide bevattende, vaste cefalexine.

Het is bekend om cefalexine te bereiden via (enzymatische) acylering van 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur (7-ADCA) met D-fenylglycineamide (PGA). Een dergelijke werkwijze is bijvoorbeeld beschreven in WO-A-93/12250. Gebleken is echter dat de cefalexine die, na precipitatie, wordt verkregen in de regel een relatief grote hoeveelheid PGA en 7-ADCA bevat. In de praktijk bevat de verkregen cefalexine vaak tussen de 0, 1 en 3, 0 gew. % PGA berekend ten opzichte van de hoeveelheid cefalexine. De aanwezigheid van dergelijke hoeveelheden verontreinigingen in het antibioticum cefalexine is ongewenst.

Het doel van de uitvinding is een werkwijze te verschaffen waarmee het in cefalexine aanwezige PGA en 7-ADCA in essentie kan worden verwijderd.

Dit wordt volgens de uitvinding bereikt door de PGA en 7-ADCA bevattende vaste cefalexine in oplossing te brengen en te onderwerpen aan een behandeling met aktieve kool.

Verrassenderwijze is namelijk gebleken dat tijdens de koolbehandeling PGA en 7-ADCA uit de oplossing wordt verwijderd, terwijl toevoegen van aktieve kool aan het reaktiemengsel verkregen na de acyleringsreaktie van 7-ADCA met PGA, geen significante verlaging van het PGA en 7-ADCA gehalte in de na precipitatie verkregen, vaste cefalexine tot gevolg heeft.

Het is weliswaar bekend om aktieve kool als zuiveringsmiddel toe te passen, met name wanneer het gaat om de verwijdering van geconjugeerde stoffen, bijvoorbeeld polyaromaten. Verrassenderwijze is nu gebleken dat PGA nagenoeg kwantitatief en zeer

selectief ten opzichte van cefalexine wordt verwijderd zonder, significante verliezen van cefalexine. Ook een groot deel van de nog aanwezige 7-ADCA kan op deze wijze worden verwijderd. Bij voorkeur wordt om verliezen van cefalexine te voorkomen cefalexine zodanig opgelost dat een verzadigde oplossing van cefalexine ontstaat.

In de werkwijze volgens de uitvinding kan in principe elk type aktieve kool worden toegepast.

Geschikte typen aktieve kool zijn ondermeer standaard op de markt verkrijgbaar. Voorbeelden van geschikte aktieve kolen zijn stoomgeaktiveerde kool, bijvoorbeeld Brilloniet, Norit SX en Norit. SA, ehemiseh geaktiveerde kool, bijvoorbeeld Norit. CA en Norit. CX.

De PGA en 7-ADCA bevattende aktieve kool kan op bekende wijze uit de oplossing worden verwijderd, bijvoorbeeld door filtratie over een G4-filter (= ca.

10 pm poriegrootte). De kool kan ook gebruikt worden als kolommateriaal, waarbij de te behandelen oplossing over de kolom wordt geleid.

De temperatuur waarbij de behandeling met aktieve kool plaatsvindt is niet bijzonder kritisch en ligt bijvoorbeeld tussen 0 en 35OC, bij voorkeur tussen 5 en 25OC, in het bijzonder tussen 15 en 25 C. De pH waarbij de behandeling met aktieve kool bij voorkeur wordt uitgevoerd, wordt in hoofdzaak bepaald door de stabiliteit en oplosbaarheid van de cefalexine. De behandeling kan zowel in zuur als in basisch milieu plaatsvinden. De pH zal in de praktijk meestal ofwel tussen 5, 5 en 10, bij voorkeur tussen 6, 0 en 9, ofwel in het pH-gebied tussen 0 en 3, bij voorkeur tussen 0, 5 en 2, 5 liggen.

De cefalexine kan na de behandeling met aktieve kool, op algemeen bekende wijzen worden gewonnen bijvoorbeeld door indampen, temperatuur verlaging, of pH-shifts.

De koolbehandeling blijkt verrassenderwijs ook zeer nuttig te zijn als methode om aanwezige resten eiwit in de cefalexine te verwijderen. Aan de hand van eiwit-kleuringsmethoden zoals de Bradford-bepaling, Anal. Biochem. 1976, 72, 248-254, blijkt, bij behandeling met kool, een significante afname van het eiwitgehalte bewerkstelligd te worden. Voor de verwijdering van eiwit sorteert de behandeling al wél effect wanneer het reaktiemengsel, verkregen na de acyleringsreaktie van 7-ADCA met PGA, als zodanig behandeld wordt met kool.

De uitvinding wordt nu verder toegelicht aan de hand van de voorbeelden, zonder evenwel daartoe te worden beperkt.
EMI3.1

Voorbeeld I Selectieve verwiiderina van PGA en 7-ADCA uit cefalexine.

Voor dit experiment werd gebruik gemaakt van een samenstelling die de volgende componenten bevatte (PG=D-fenylglycine) : CEX 95, 7% 7-ADCA 0, 07% PG 0, 01% PGA 0, 16%
100 g cefalexine van bovengenoemde samenstelling (dus met 0, 16% PGA) werd gesuspendeerd in 900 g water. Hieraan werd 25% ammoniak-oplossing in water toegedruppeld tot de pH 8, 1 was ? daarbij ontstond een heldere oplossing. Aan deze oplossing werd 5 g Brilloniet toegevoegd. Vervolgens werd 1, 5 uur geroerd bij kamertemperatuur.

Het mengsel werd gefiltreerd over een G4glasfilter. Daarna werd het mengsel in 1 uur tijd gedoseerd aan een oplossing van 2 g zuivere cefalexine in 100 g water, die vantevoren met behulp van een 25% waterige ammoniak-oplossing op pH=7 gebracht was.

Tijdens het doseren van het mengsel werd de pH op 7 gehouden met behulp van 6N waterig zwavelzuur.

De ontstane slurry werd nog 0, 5 uur nageroerd en vervolgens gefiltreerd over een G3-glasfilter. De koek werd gewassen (3 x 100 ml aceton) en gedroogd, waardoor 76, 7 g vaste stof werd verkregen.

De samenstelling van de vaste stof was : CEX : 95, 2% ADCA : 0, 02% PG : 0, 01% PGA : 0, 006%
Het gehalte PGA t. o. v. cefalexine was hierdoor met een factor 27 afgenomen. In de moederlaag werd geen PGA teruggevonden (alles was derhalve geadsorbeerd aan het Brilloniet) ; wel bevatte de moederlaag ca. 20 g cefalexine.

Ook was het gehalte 7-ADCA ten opzichte van
EMI4.1
cefalexine afgenomen met een factor 3, Voorbeeld II Verwiiderina van eiwitresten uit een cefalexine- bevattende stroom
Een oplossing van de volgende samenstelling werd bereid : 50 g cefalexine 25 g 7-ADCA 7, 5 g PGA 2 g PG 440 g demi-water
De pH werd op 8,5 gesteld, hierbij ontstond een heldere oplossing. Met behulp van de Bradford bepaling werd de A600 bepaald : deze bedroeg 0, 609 (= blanco waarde). Vervolgens werd aan 100 g van deze oplossing 0, 4 ml acylase-eiwit toegevoegd.

A600/Bradford : 0, 905.

Vervolgens werd 1 g Brilloniet toegevoegd en

het mengsel werd 2 uur geroerd bij kamertemperatuur, waarna het gefiltreerd werd over een G-4 glasfilter. A600/Bradford : 0, 762. Dit getal wijst erop, dat ca. 50% van het toegevoegde eiwit verwijderd is.

Claims

CONCLUSIES 1. Werkwijze voor het verwijderen van D-fenylglycine- amide en 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur uit D-fenylglycineamide en 7-aminodesacetoxy- cefalosporinezuur bevattende, vaste cefalexine, met het kenmerk, dat de D-fenylglycineamide en 7-aminodesacetoxycefalosporinezuur bevattende, vaste cefalexine in oplossing wordt gebracht en wordt onderworpen aan een behandeling met aktieve kool.
2. Werkwijze volgens conclusie 1, waarbij de oplossing van cefalexine die wordt onderworpen aan de behandeling met aktieve kool, een verzadigde oplossing van cefalexine is.
3. Werkwijze volgens conclusie 1 of 2, waarin de cefalexine na de behandeling met aktieve kool in vaste vorm wordt gewonnen.
4. Werkwijze volgens een der conclusies 1-3, waarin de behandeling met aktieve kool plaatsvindt bij een pH tussen 6, 0 en 9.
5. Werkwijze volgens een der conclusies 1-3, waarin de behandeling met aktieve kool plaatsvindt bij een pH tussen 0, 5 en 2, 5.
6. Werkwijze volgens een der conclusies 1-5, waarin de behandeling met aktieve kool wordt uitgevoerd bij een temperatuur tussen 5 en 25 C.
7. Werkwijze voor het verwijderen van D-fenylglycine- amide en 7-aminodesacetoxycefalosporine uit cefalexine zoals beschreven en toegelicht aan de hand van de voorbeelden.