WO2025259045A1 - 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진용 조성물 - Google Patents

람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진용 조성물

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WO2025259045A1
WO2025259045A1 PCT/KR2025/008105 KR2025008105W WO2025259045A1 WO 2025259045 A1 WO2025259045 A1 WO 2025259045A1 KR 2025008105 W KR2025008105 W KR 2025008105W WO 2025259045 A1 WO2025259045 A1 WO 2025259045A1
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WO
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rambutan
alopecia
fraction
leaf extract
hair
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PCT/KR2025/008105
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English (en)
French (fr)
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정성근
류형원
최상호
백진협
안종민
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Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Original Assignee
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
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Publication date
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth

Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing hair loss, promoting hair growth, improving hair health, and preventing or treating hair loss, comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof, wherein the fraction comprises a tannin compound.
  • Hair loss refers to the absence of hair in areas where hair normally exists. It typically refers to the loss of terminal hair (coarse, dark hair) on the scalp. Unlike colorless, fine vellus hair, terminal hair can cause cosmetic problems if lost. Koreans, who have a lower hair density than Westerners, have approximately 50,000-70,000 hairs, and it's normal for them to lose about 500-70 hairs per day. Therefore, if more than 100 hairs fall out after sleeping or washing your hair, hair loss may be ongoing.
  • AGA Androgenic alopecia
  • Treatments used to treat hair loss such as finasteride, dutasteride, and minoxidil, have been reported to affect hair growth and are currently commonly used. However, these medications cannot be taken by women, hair loss may recur upon discontinuation, and side effects such as breast cancer and itching are also present. Therefore, various research and development of health functional foods to maintain hair health are actively being conducted worldwide.
  • the pathogenesis of AGA is a phenomenon that occurs through changes in dermal papilla cells (DPCs) according to the cell cycle, and it is known that cell proliferation is inhibited in the AGA-like model and the expression of proteins involved in the cell cycle, such as Cyclin D1 and C-Myc, decreases.
  • DPCs dermal papilla cells
  • hair growth stimulating factors such as EGF, IGF-1, and VEGF
  • hair growth inhibitory factors such as DKK-1 and TGF- ⁇ 1 increases.
  • AGA-like preclinical model it is known that when testosterone is injected after establishing AGA-like conditions through hair removal, the mouse hair growth rate is inhibited and the number and size of hair follicles decrease.
  • conventional treatments for hair loss include topical medications like minoxidil for male- or female-pattern baldness, oral medications like finasteride, and hair transplants.
  • Topical and systemic steroids, as well as immunotherapy are used for alopecia areata. Since hair growth in telogen effluvium occurs when the underlying cause is removed, identifying and treating the underlying cause is crucial.
  • these conventional treatments rely on medications or steroids, leading to side effects and slow, prolonged treatment times.
  • medications or hair transplants significantly increase treatment costs.
  • Minoxidil and finasteride are the most commonly used medications to promote hair growth. Minoxidil, manufactured by Upjohn, can cause side effects such as swelling, arrhythmia, and hair growth in unwanted areas with long-term use.
  • Minoxidil's effectiveness is known to peak within six months to one year of use, with the effects gradually diminishing thereafter.
  • Finasteride developed by Merck, is known to inhibit the activity of 5-alpha-reductase, an enzyme involved in the metabolism of the male hormone testosterone in hair follicles.
  • 5-alpha-reductase an enzyme involved in the metabolism of the male hormone testosterone in hair follicles.
  • it has been reported to cause sexual dysfunction, depression, and an increase in suicidal thoughts.
  • both drugs are known to cause hair loss to recur when discontinued.
  • Valproic acid is also known to significantly impair the cognitive development of children when taken during pregnancy.
  • One object of the present invention is to provide a food composition for preventing hair loss or promoting hair growth, which comprises a rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or improving hair loss, comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating hair loss comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a tannin-based compound or the same as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a tannin-based compound or the same as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a tannin-based compound or the same as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or improving hair loss, comprising a tannin-based compound or the same as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating hair loss, comprising a tannin-based compound or the same as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a method for producing a rambutan leaf extract or a fraction thereof.
  • the description of redundant content will be omitted below.
  • the content of the invention is not limited to the content described below, and the content of the invention should be interpreted based on the overall content of the invention.
  • the present invention provides a food composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • a rambutan Nephelium lappaceum L.
  • the present invention provides a health functional food composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • a rambutan Nephelium lappaceum L.
  • Nephelium lappaceum L. is a fruit belonging to the genus Nephelium and widely distributed in Southeast Asia.
  • Rambutan is a commercially important crop in Asia, and in Malaysia, the dried fruit peel is used in local medicine, and the fruit is consumed worldwide as a food.
  • Rambutan's rind contains tannin and saponin, which are used in herbal medicine.
  • the root is used as a remedy for colds, the leaves are used as a poultice, and the bark is used as a muscle-relaxing treatment for tongue diseases.
  • rambutan leaf extracts being used for the purposes of preventing hair loss, promoting hair growth, or promoting hair growth.
  • extract refers to a result obtained by immersing a target substance in various solvents and then extracting it for a certain period of time at room temperature or at a temperature, such as a liquid component, or a solid component obtained by removing the solvent from the liquid component.
  • a temperature such as a liquid component, or a solid component obtained by removing the solvent from the liquid component.
  • it may include a dilution of the result, a concentrate thereof, a controlled agent thereof, a purified product thereof, and all formulations that can be manufactured using the extract.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention may be an extract extracted using a solvent containing water, C1-C4 alcohol or a combination thereof, preferably an extract using a solvent containing water or water and C1-C4 alcohol, and more preferably an extract using an ethanol aqueous solution containing water or water and ethanol as a solvent.
  • the above rambutan leaf extract or fraction thereof may be an extract extracted using water or a 5 to 80% (v/v) ethanol aqueous solution, preferably an extract extracted using water or a 7 to 75% (v/v) ethanol aqueous solution, more preferably an extract extracted using an 8 to 70% (v/v) ethanol aqueous solution, and even more preferably an extract extracted using a 9 to 60% (v/v) ethanol aqueous solution. Most preferably, it may be an extract extracted using water, a 10% (v/v) ethanol aqueous solution, a 30% (v/v) ethanol aqueous solution, or a 50% (v/v) ethanol aqueous solution.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof can be obtained by performing an extraction process including a step of extracting rambutan leaves with water or a 5 to 80% (v/v) ethanol aqueous solution as an extraction solvent (primary extraction solvent).
  • the extraction process can be performed by extracting with about 1 to 20 times, preferably about 3 to 10 times, the weight of the rambutan leaves using the primary extraction solvent, preferably a mixed solvent of water and ethanol.
  • the mixed solvent can preferably be water or an about 10 to 50% ethanol aqueous solution.
  • the extraction can be performed by an extraction method known in the art, such as, but not limited to, cold steeping, hot water extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, etc.
  • the extraction temperature may be selected from a variety of temperature ranges appropriate to the extraction method by those skilled in the art, for example, but not limited to, a temperature range of 10 to 100°C, preferably 15 to 80°C, and more preferably 18 to 70°C.
  • the extraction time varies depending on the extraction method, and a person skilled in the art may select an appropriate extraction time, but is not limited to, a range of about 1 hour to 10 days, preferably 1 to 8 hours, and may be performed once or multiple times.
  • Conditions such as temperature and extraction time during the production of the rambutan leaf extract of the present invention may vary depending on the type of extraction solvent and the amount of rambutan leaves.
  • the extract obtained by performing extraction with the primary extraction solvent may be obtained in a liquid form by filtering according to a conventional method to remove impurities, or the obtained liquid form may be obtained in a powder form by concentrating under reduced pressure and/or drying according to a conventional method.
  • the above extraction process may further include a step of obtaining a fraction with a high content of the active ingredient, if necessary. That is, by performing a step of dispersing the extract obtained by extraction with the first extraction solvent in water and then extracting with an appropriate second extraction solvent, such as a saturated C 4 alcohol, the content of the active ingredient in the resulting extract can be further increased.
  • an appropriate second extraction solvent such as a saturated C 4 alcohol
  • the mass ratio of the rambutan leaves and the extraction solvent may be 1:20 to 20:1, preferably 1:15 to 15:1, more preferably 1:12 to 12:1, even more preferably 1:1 to 1:12, and most preferably 1:10.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof may include at least one selected from the group consisting of corilagin, chebulagic acid, methyl gallate, and cinmtannin B1.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof may include, but is not limited to, a compound corilagin having an m/z of 633.0734 C 27 H 21 O 18 at 8.64 min, a compound methyl gallate having an m/z of 183.0321 at 5.07 min, a compound cintannin B1 having an m/z of 863.1832 at 9.28 min, and a compound chebulagic acid having an m/z of 953.0909 at 11.91 min.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention may contain 1 to 45 wt% of corilagin based on a total of 100 wt%.
  • the lower limit of the corilagin may be 3 wt% or more, 5 wt% or more, 7 wt% or more, 9 wt% or more, 12 wt% or more, 14 wt% or more, or 15 wt% or more
  • the upper limit may be 44 wt% or less, 43 wt% or less, 42 wt% or less, 41 wt% or less, or 40 wt% or less.
  • the present invention may include 1 to 20 wt% of chebulagic acid based on 100 wt% of the total of the rambutan leaf extract or fraction thereof.
  • the lower limit of the chebulagic acid may be 2 wt% or more, 3 wt% or more, 4 wt% or more, or 5 wt% or more
  • the upper limit may be 19 wt% or less, 18 wt% or less, 17 wt% or less, 16 wt% or less, or 15 wt% or less.
  • composition of the present invention can exhibit an effect of preventing or improving hair loss or promoting hair growth by including corilagin and kebulagic acid in the weight % range described above based on the total weight of the rambutan leaf extract or fraction thereof.
  • fraction means a result obtained by performing fractionation to separate a specific component or a specific group of components from a mixture containing various components.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof may contain tannins.
  • the tannin compound may be included in an appropriate amount selected within the range of 0.0001 wt% to 10 wt% based on the total weight of the food composition or health functional food composition.
  • tannin is a variety of polyphenol compounds having various polymer structures and containing sufficient hydroxyl groups and other appropriate functional groups for forming highly reactive complexes, and may be phenol compounds that impart astringent and bitter tastes. These are not specific compounds having a specific single chemical structure, but rather a collection of compounds with similar properties and functions, and have a molecular weight of 500 to 20,000 g/mol and may be called tannins.
  • the above tannin compound may be a polyphenol tannin in which compounds such as gallic acid, phloroglucinol, and flavan-3-ol are complexly combined, and specifically, may be at least one selected from the group consisting of geranin, chebulagic acid, chebulinic acid, punicalagin, 1,3,6-tri-O-galloyl-beta-D-glucose, and corilagin.
  • the above geranine may be a type of proanthocyanidin and can be found in plants such as Geranium niveum.
  • the above kebulagic acid may be a benzopyran tannin, may have antioxidant activity, and may be found in plants such as Terminalia chebula , Terminalia citrina , or Terminalia catappa .
  • the above kebulic acid may be an ellagitannin, may have antioxidant activity, and may be found in plants such as Terminalia chebula or Terminalia macroptera .
  • the above punicalagin may be a type of ellagitannin and can be found in plants such as pomegranate ( Punica granatum ), Terminalia catappa , Terminalia myriocarp or Combretum mole .
  • 1,3,6-tri-O-galloyl-beta-D-glucose may be a type of gallotannins and can be found in plants such as Paeonia lactiflor and Terminalia chebula .
  • the above corilagin may be a type of ellagitannin and can be found in plants such as Dividivi , Caesalpinia coriaria , Alchornea glandulosa, and Punica granatum .
  • the food composition or health functional food composition for preventing hair loss or promoting hair growth may include at least one selected from the group consisting of geranin, chebulagic acid, chebulinic acid, punicalagin, 1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose, and corilagin as the tannin-based compound. More preferably, in one embodiment of the present invention, the food composition or health functional food composition for preventing hair loss or promoting hair growth may include chebulagic acid or corilagin as the tannin-based compound.
  • active ingredient may be an active ingredient that is expected to have an effect on the efficacy of the preparation, either directly or indirectly.
  • rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention can be prepared by the following method:
  • step (b) a step of separating the rambutan leaf extract or a fraction thereof extracted in step (a);
  • a drying step may be further included, and the drying may be freeze drying.
  • the rambutan leaf extract or fraction thereof may contain tannin compounds, including gallotannins derivatives.
  • Gallotannins are a type of tannin found in plants and are known to have antioxidant and anti-inflammatory effects. However, their effects on improving or preventing hair loss or promoting hair growth have not been reported. However, the inventors of the present invention have confirmed that a rambutan leaf extract or fraction thereof containing gallotannins derivatives is related to the effects on improving or preventing hair loss and promoting hair growth.
  • the concentration of the rambutan leaf extract or its fraction in the above food composition or health functional food composition may be 3 to 300 ⁇ g/mL, for example, the lower limit may be 3, 3.5, 4, 4.5 or 5 ⁇ g/mL or more, and the upper limit may be 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70 or 60 ⁇ g/mL or less, but is not limited thereto, and the concentration may be appropriately adjusted so as to exhibit the desired effect.
  • the fractionation method for obtaining the above fraction is not particularly limited and can be performed according to a method commonly used in the art.
  • Non-limiting examples of the fractionation method include a fractionation method performed by treating various solvents, an ultrafiltration fractionation method performed by passing the fraction through an ultrafiltration membrane having a certain molecular weight cut-off value, a chromatographic fractionation method performed by performing various chromatographies (designed for separation according to size, charge, hydrophobicity, or affinity), and combinations thereof.
  • a method of obtaining a fraction from an extract obtained by extracting the rambutan leaves of the present invention by treating the extract with a predetermined solvent can be exemplified.
  • the type of fractionation solvent used to obtain the fraction is not particularly limited, and any solvent known in the art can be used.
  • the fractionation solvent include polar solvents such as water and alcohols having 1 to 6 carbon atoms; non-polar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, butanol, dichloromethane; or mixed solvents thereof. These may be used alone or in combination of one or more, but are not limited thereto.
  • fraction of the present invention it can be specifically obtained by fractionating a rambutan leaf extract using chromatography, but is not limited thereto.
  • the type of chromatography method is not particularly limited, and any method used in the art to separate or purify a desired component may be used without limitation.
  • the chromatography method may be column chromatography, and more preferably, it may be medium pressure liquid chromatography (MPLC), high performance liquid chromatography (HPLC), or ultra high performance liquid chromatography (UHPLC).
  • MPLC medium pressure liquid chromatography
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • UHPLC ultra high performance liquid chromatography
  • the above chromatography method may be performed 1 to 5 times, taking into account yield and purity, but is not limited thereto.
  • the mobile phase or developing solvent may be water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof, and preferably, a mixed solvent of water and a non-polar solvent may be used.
  • the above non-polar solvent is not particularly limited in type, but may preferably be methanol or acetonitrile, and most preferably methanol.
  • the above chromatography method can be performed by sequentially developing water and a non-polar solvent as mobile phases according to a concentration gradient, and at this time, the chromatography method can be performed by sequentially changing the ratio of the water and the non-polar solvent from 100:0 to 0:100.
  • hair refers to a thread-like structure made of keratinized epithelial cells that protrudes from the skin surface, and includes both body hair and scalp hair.
  • hair loss means a condition in which hair is absent in an area where hair should normally exist due to abnormal hair loss, or the number of hairs is reduced or thinner than normal, and may be used interchangeably with a hair loss symptom.
  • the hair loss includes, but is not necessarily limited to, nutritional alopecia, endocrine alopecia, vascular alopecia, premature alopecia, alopecia areata, neurogenic alopecia, alopecia pityroides, trichotillomania, alopecia maligna, female pattern alopecia, male pattern alopecia, androgenetic alopecia, telogen effluvium, tinea capitis, alopecia totalis, hypotrichosis, hereditary hypotrichosis simplex, alopecia universalis, drug-induced alopecia, mechanical alopecia, traumatic alopecia, compression alopecia, anagen alopecia, syphilitic alopecia
  • the hair loss may preferably be androgenic alopecia.
  • hair loss prevention means any act of suppressing or delaying the occurrence or onset of one or more symptoms associated with hair loss, and is not necessarily limited to complete suppression of the onset of hair loss.
  • promotion of hair growth or “promotion of hair growth” means all phenomena that directly or indirectly contribute to the production or growth of hair.
  • the rambutan leaf extract or a fraction thereof can promote the proliferation of hair follicle dermal papilla cells (HFDPC).
  • the hair follicle dermal papilla cells of the present invention may be dermal papilla cells associated with androgenetic alopecia symptoms.
  • a food composition comprising the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof as an active ingredient has a hair health improvement effect, and specifically, can exhibit at least one hair health improvement effect selected from the group consisting of increasing hair thickness, enhancing hair elasticity, enhancing hair volume, and increasing hair count.
  • a food composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair production and growth in a state where hair has fallen out.
  • a food composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair production and growth in a state where hair is thinning.
  • a food composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair production and growth in a state where hair is thinning.
  • a food composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may maintain hair growth and prevent hair thinning from the perspective of preventing or improving hair loss.
  • health functional food refers to a food manufactured and processed using raw materials or ingredients with functionality useful to the human body as defined in Act No. 6727 on Health Functional Foods, and “functionality” refers to consumption for the purpose of obtaining a useful effect for health purposes such as regulating nutrients for the structure and function of the human body or physiological effects.
  • the food composition of the present invention may include conventional food additives, and its suitability as a food additive is determined by the specifications and standards for the relevant item in accordance with the general provisions and general test methods of the Food Additive Code approved by the Ministry of Food and Drug Safety, unless otherwise specified.
  • the items listed in the above food additive code include, for example, chemical compounds such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid, and cinnamic acid; natural additives such as persimmon pigment, licorice extract, crystalline cellulose, high-molecular-weight pigment, and guar gum; and mixed preparations such as sodium L-glutamate preparations, alkaline agents added to noodles, preservative preparations, and tar color preparations.
  • chemical compounds such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid, and cinnamic acid
  • natural additives such as persimmon pigment, licorice extract, crystalline cellulose, high-molecular-weight pigment, and guar gum
  • mixed preparations such as sodium L-glutamate preparations, alkaline agents added to noodles, preservative preparations, and tar color preparations.
  • the food composition of the present invention can be formulated into various forms such as tablets, pills, granules, capsules, liquid preparations, and beverages and added to foods.
  • foods to which the rambutan leaf extract of the present invention or its fraction can be added include drinks, meat, sausages, bread, biscuits, rice cakes, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, beverages, alcoholic beverages, vitamin complexes, dairy products, and dairy products, and the like, and include both food compositions and health functional food compositions in the conventional sense.
  • the food composition and health functional food composition containing the rambutan leaf extract or fraction thereof according to the present invention can be added directly to food or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to a conventional method.
  • the amount of the rambutan leaf extract mixed can be appropriately determined depending on its purpose of use (prevention or improvement).
  • the amount of the food composition or health functional food composition can be added in an amount of 0.1 to 90 parts by weight based on the total food weight.
  • the amount can be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient can also be used in an amount above the above range.
  • the food composition and health functional food composition of the present invention may comprise a food-related effective amount of the rambutan leaf extract or a fraction thereof and a food-related acceptable carrier.
  • the food composition and health functional food composition of the present invention contain the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention as an essential ingredient in the indicated proportions, and there are no particular limitations on the other ingredients, and may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like conventional beverages, and may include, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, seasonings, and flavoring agents.
  • Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, etc.; disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides, etc.; and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, etc., and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • sweetitol e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the proportion of the above natural carbohydrates may generally be about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g, per 100 g of the health functional food composition of the present invention, but is not limited thereto.
  • the health food and food composition containing the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention may contain various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavoring agents and natural flavoring agents, coloring agents and thickening agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonating agents used in carbonated beverages, etc.
  • the health food and food composition of the present invention may contain fruit pulp for producing natural fruit juice and fruit juice drinks and vegetable drinks.
  • ingredients can be used independently or in combination.
  • the proportion of these additives is not particularly critical, but is typically selected within the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the health food and food composition containing the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • the above food composition can be manufactured into a food-related acceptable formulation according to a method that can be easily performed by a person having ordinary skill in the art to which the present invention pertains, and can be manufactured into a formulation of, for example, powder, granules, pills, tablets, capsules, candy, syrup or beverage.
  • Cosmetic composition comprising rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the above rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof may contain tannins, and preferably, the tannins may contain gallotannins derivatives.
  • rambutan leaf extract In the cosmetic composition of the present invention, “rambutan leaf extract”, “fraction”, “tannin compound”, “hair loss prevention”, “hair growth promotion” or “hair growth promotion” are the same as those described in detail for the food composition comprising the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • the cosmetic composition comprising the rambutan leaf extract or a fraction thereof of the present invention exhibits excellent effects in preventing or improving hair loss by promoting hair growth and development.
  • the composition may exhibit one or more hair health-improving effects selected from the group consisting of increased hair thickness, enhanced hair elasticity, enhanced hair volume, and increased hair count.
  • a cosmetic composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair has fallen out.
  • a cosmetic composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair is thinning.
  • a cosmetic composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair is thinning.
  • a cosmetic composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may maintain hair growth and prevent hair thinning from the perspective of preventing or improving hair loss.
  • the “cosmetic composition” of the present invention can be prepared by including a cosmetically effective amount of the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof described above and a cosmetically acceptable carrier.
  • cosmetically effective amount means an amount sufficient to achieve the hair loss prevention, hair growth promotion, or hair health promotion effects of the composition of the present invention described above.
  • the cosmetic composition may be in any form suitable for topical application, including solutions, gels, solids, pastes, anhydrous products, emulsions obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules, or vesicular dispersions of ionic (liposomes) and non-ionic types, or in the form of creams, toners, lotions, powders, ointments, sprays, or concealer sticks.
  • These compositions may be prepared according to methods conventional in the art.
  • the composition according to the present invention may also be used in the form of foams or aerosol compositions further containing compressed propellants.
  • the cosmetic composition according to one embodiment of the present invention is not particularly limited in its formulation, and may be formulated as, for example, a solution such as a softening toner, an astringent toner, a nourishing toner, a lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, an eye essence, a pack, a foundation, a color cosmetic, a sunscreen, a compact, a powder, an eye shadow, a spray, a hair tonic, a hair cream, a hair lotion, a hair conditioner, a hair spray, a hair aerosol, a pomade, a gel, a sol-gel, an emulsion, an oil, a wax, a body lotion, a body cream, a body oil, a body essence, a lipstick, a lip gloss, a lip fix, an eyebrow pencil, or a cosmetic such as a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a hair shampoo, and a hair rinse, but is not limited thereto.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a paste, cream or gel, animal fiber, plant fiber, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component.
  • the cosmetic composition of the present invention is in the form of a powder or spray
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and particularly in the case of a spray, a propellant such as chlorofluorohydrocarbon, propane/butane or dimethyl ether may be additionally included.
  • a solvent, solvating agent or emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a suspension
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tragacanth, etc.
  • a carrier component such as water, ethanol or propylene glycol
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester
  • microcrystalline cellulose aluminum metahydroxide
  • bentonite agar or tragacanth, etc.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent
  • aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, linolenic derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester may be used as a carrier component.
  • base ingredients for forming a shampoo such as a thickener, a surfactant, a viscosity modifier, a moisturizer, a pH modifier, a preservative, and essential oils
  • a thickener such as a thickener, a surfactant, a viscosity modifier, a moisturizer, a pH modifier, a preservative, and essential oils
  • CDE may be used as the thickener
  • LES which is an anionic surfactant
  • coco betaine which is an amphoteric surfactant
  • polyquaternary may be used as the viscosity modifier
  • glycerin may be used as the moisturizer
  • citric acid or sodium hydroxide may be used as the pH modifier.
  • Grapefruit extract or the like may be used as the preservative, and in addition, essential oils such as cedarwood, peppermint, and rosemary, as well as silk amino acids, pentaol, or vitamin E may be added.
  • a cosmetic composition according to one embodiment of the present invention may further comprise, in addition to the rambutan extract or fraction thereof, a functional additive and an ingredient included in a general cosmetic composition.
  • the functional additive may comprise an ingredient selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, high molecular weight peptides, high molecular weight polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extract.
  • the cosmetic composition of the present invention may also contain, as necessary, ingredients included in general cosmetic compositions in addition to the functional additives described above.
  • ingredients included in general cosmetic compositions include fat components, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, fragrances, blood circulation promoters, cooling agents, antiperspirants, purified water, and the like.
  • a pharmaceutical composition comprising rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or improving hair loss, comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • a rambutan Nephelium lappaceum L.
  • the above rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof may contain tannins, and preferably, the tannins may contain gallotannins derivatives.
  • rambutan leaf extract In the pharmaceutical composition of the present invention, “rambutan leaf extract”, “fraction”, “tannin compound”, “hair loss”, “hair loss prevention”, “hair growth promotion” or “hair growth promotion” are the same as those described in detail for the food composition containing the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • the pharmaceutical composition comprising the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof has a hair health improvement effect, and specifically, can exhibit at least one hair health improvement effect selected from the group consisting of increasing hair thickness, enhancing hair elasticity, enhancing hair volume, and increasing hair count.
  • a quasi-drug composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair has fallen out.
  • a quasi-drug composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair is thinning.
  • a quasi-drug composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state where hair is thinning.
  • a quasi-drug composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may maintain hair growth and prevent hair thinning from the perspective of preventing or improving hair loss.
  • “improvement” means any act in which the degree of one or more symptoms associated with hair loss is reduced, improved, or the progression thereof is delayed by the composition of the present invention.
  • prevention refers to any action that reduces the frequency or severity of a pathological phenomenon. Prevention may be complete or partial. In this case, it refers to a reduction in hair loss symptoms within an individual compared to when the above-mentioned over-the-counter composition is not used.
  • quasi-drug means a product that has a milder effect than a pharmaceutical product among products used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, managing or preventing diseases of humans or animals.
  • a quasi-drug is a product excluding products used for the purpose of pharmaceutical products, and includes products used for treating or preventing diseases of humans or animals, products that have a mild effect on the human body or do not act directly, etc.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition may be a skin external preparation, and may further contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients commonly used in skin external preparations, such as fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic emulsifiers, nonionic emulsifiers, fillers, sequestering agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, humectants, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic active agents, lipophilic active agents, or lipid vesicles.
  • the above-mentioned ingredients may be introduced in amounts commonly used in the field of dermatology.
  • the pharmaceutical composition of the present invention when provided as an external skin preparation, it may be in the form of an ointment, patch, gel, cream, or spray, but is not limited thereto.
  • composition comprising rambutan leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hair loss, comprising a rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • a rambutan Nephelium lappaceum L.
  • the above rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof may contain tannins, and preferably, the tannins may contain gallotannins derivatives.
  • rambutan leaf extract In the pharmaceutical composition of the present invention, “rambutan leaf extract”, “fraction”, “tannin compound”, “hair loss prevention”, “hair loss”, “hair growth promotion” or “hair growth promotion” are the same as those described in detail above for the food composition comprising the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • hair refers to a thread-like structure made of keratinized epithelial cells that protrudes from the skin surface, and includes both body hair and scalp hair.
  • hair loss refers to a phenomenon in which hair falls out from the skin or a state in which hair becomes thick or thin, and may be used interchangeably with a symptom of hair loss.
  • the hair loss includes, but is not necessarily limited to, nutritional alopecia, endocrine alopecia, vascular alopecia, premature alopecia, alopecia areata, neurogenic alopecia, alopecia pityroides, trichotillomania, alopecia maligna, female pattern alopecia, male pattern alopecia, androgenetic alopecia, telogen effluvium, tinea capitis, alopecia totalis, hypotrichosis, hereditary hypotrichosis simplex, alopecia universalis, drug-induced alopecia, mechanical alopecia, traumatic alopecia, compression alopecia, anagen alopecia, syphilitic alopecia, seborrheic alope
  • the hair loss may preferably be androgenic alopecia.
  • treatment refers to any clinical intervention intended to alter the natural processes of the target or cells to be treated, and may be performed during or to prevent the progression of a clinical pathological condition.
  • the desired therapeutic effect may include preventing the occurrence or recurrence of a disease, alleviating symptoms, reducing any direct or indirect pathological consequences of the disease, preventing metastasis, slowing the progression of the disease, alleviating or temporarily alleviating the disease state, or improving the prognosis.
  • promotion of hair growth or “promotion of hair growth” means all phenomena that directly or indirectly contribute to the production or growth of hair.
  • the pharmaceutical composition comprising the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof has a hair health improvement effect, and specifically, can exhibit at least one hair health improvement effect selected from the group consisting of increasing hair thickness, enhancing hair elasticity, enhancing hair volume, and increasing hair count.
  • a pharmaceutical composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state of hair loss.
  • a pharmaceutical composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state of hair thinning.
  • a pharmaceutical composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may promote hair growth and production in a state of hair thinning.
  • a pharmaceutical composition comprising a rambutan leaf extract or a fraction thereof may maintain hair growth and prevent hair thinning from the perspective of prevention or improvement.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment and not causing side effects.
  • the effective dosage level may be determined based on factors including the patient's health condition, the type and severity of the disease, the activity and sensitivity of the drug, the method of administration, the time of administration, the route and excretion rate, the duration of treatment, drugs used in combination or simultaneously, and other factors well known in the medical field.
  • the composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or in multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by those skilled in the art.
  • the term "subject” means any animal that has developed or may develop hair loss, and may typically be an animal that can show a beneficial effect by treatment with a rambutan leaf extract or a fraction thereof, but is not particularly limited to an animal that has symptoms of hair loss or is likely to have such symptoms, and refers to mammals including animals including humans, for example, non-primates (for example, cows, pigs, horses, cats, dogs, rats, and mice) and primates (for example, monkeys, for example, cynomolgous monkeys and chimpanzees).
  • non-primates for example, cows, pigs, horses, cats, dogs, rats, and mice
  • primates for example, monkeys, for example, cynomolgous monkeys and chimpanzees.
  • composition according to the present invention comprises a pharmaceutically effective amount of a rambutan leaf extract or a fraction thereof, and may include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent.
  • pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, improve, and treat hair loss symptoms.
  • pharmaceutically acceptable herein refers to a composition that is physiologically acceptable and, when administered to humans, typically does not cause allergic reactions, such as gastrointestinal upset or dizziness, or similar reactions.
  • compositions containing pharmaceutically acceptable carriers may be administered orally or parenterally in various dosage forms. When formulated, they may be prepared using commonly used diluents or excipients, such as fillers, bulking agents, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • the carrier, excipient and diluent may be at least one selected from the group consisting of lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, saline solution, methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxy benzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, dextrin, calcium carbonate, propylene glycol and liquid paraffin, but is not limited thereto, and all conventional carriers, excipients or diluents may be used.
  • the above components may be independently added to the active ingredient, rambutan leaf extract or a fraction thereof.
  • composition of the present invention can be administered in various oral and parenteral dosage forms during clinical administration, and when formulated, it is manufactured using diluents or excipients such as commonly used fillers, bulking agents, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • diluents or excipients such as commonly used fillers, bulking agents, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, tablets, powders, granules, capsules, troches, etc., and these solid preparations are prepared by mixing one or more rambutan leaf extracts of the present invention or fractions thereof with at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, oral solutions, emulsions, or syrups, and in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, flavoring agents, and preservatives may be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solutions and suspensions can include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • Suppository bases include witepsol, macrogol, Tween 61, cocoa butter, laurin, glycerol, and gelatin.
  • the effective dosage for the human body of the rambutan leaf extract of the present invention or its fraction may vary depending on the patient's age, body weight, sex, dosage form, health condition, and disease severity, and is generally about 0.001 to 100 mg/kg/day, and preferably 0.01 to 35 mg/kg/day.
  • the dosage is generally 0.07 to 7000 mg/day, and preferably 0.7 to 2500 mg/day.
  • it may be administered once or several times a day at regular intervals.
  • composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, or biological response modifiers.
  • the present invention provides a method for preventing or treating hair loss, comprising administering to a subject in need thereof a rambutan leaf extract or a fraction thereof.
  • the present invention provides a method for preventing or treating hair loss, comprising administering a tannin compound to a subject in need thereof.
  • the present invention provides the use of a rambutan leaf extract or a fraction thereof in a medicament for preventing or treating hair loss.
  • the present invention provides the use of a tannin compound in a medicament for preventing or treating hair loss.
  • the above rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaf extract or a fraction thereof may contain tannins, and preferably, the tannins may contain gallotannins derivatives.
  • rambutan leaf extract In the treatment method of the present invention, “rambutan leaf extract”, “fraction”, “tannin compound”, “hair loss prevention”, “hair loss”, “hair growth promotion” or “hair growth promotion” are the same as those described in detail above for the food composition comprising the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered as a separate treatment agent or in combination with existing hair loss treatments, and can be administered sequentially or simultaneously with existing treatments.
  • administration means introducing a predetermined substance into a patient by an appropriate method, and the route of administration of the pharmaceutical composition may be through any general route as long as it can reach the target tissue.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with another therapeutic agent, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. Taking all of the above factors into account, the pharmaceutical composition may be administered in an amount that achieves maximum efficacy with minimal side effects, as can be readily determined by those skilled in the art.
  • the present invention provides a composition for preventing hair loss or promoting hair growth, which comprises tannins as an active ingredient.
  • composition according to the present invention can be used for food, cosmetics, over-the-counter drugs and/or pharmaceutical purposes.
  • rambutan leaf extract In the composition of the present invention, “rambutan leaf extract”, “fraction”, “tannin compound”, “hair loss prevention”, “hair growth promotion” or “hair growth promotion” are the same as those described in detail above for the food composition comprising the rambutan leaf extract or fraction thereof of the present invention.
  • the tannin compound may include at least one selected from the group consisting of geranin, chebulagic acid, chebulinic acid, punicalagin, 1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose, and corilagin.
  • composition may promote proliferation of hair follicle dermal papilla cells (HFDPC).
  • HFDPC hair follicle dermal papilla cells
  • the tannin compound of the present invention can promote cell division of the above-described hair papilla cells, and specifically, can increase the ratio of the G2/M phase in the cell cycle of the above-described hair papilla cells.
  • the above hair papilla cells are located at the base of the hair follicle, induce blood vessel formation, and supply oxygen and nutrients to the cells that make up the surrounding hair follicle. If the proliferation of hair papilla cells is promoted, the hair becomes healthy and hair growth can be promoted.
  • the tannin-based compound was applied to human-derived hair follicle papilla cells, and the proliferation rate of the hair papilla cells was measured compared to the control group that was not treated with the tannin-based compound. As a result, it was confirmed that the proliferation rate increased by approximately 50% or more after application of the tannin-based compound of the present invention. Therefore, it was found that the tannin-based compound of the present invention can promote hair growth and prevent hair loss by promoting the proliferation of hair papilla cells.
  • the cell cycle of hair papilla cells was analyzed after treatment with the tannin-based compound. As a result, it was confirmed that corilagin treatment increased the G2/M phase ratio in a concentration-dependent manner, thereby promoting hair papilla cell division and enhancing hair follicle cell proliferation and hair growth.
  • the tannin compound of the present invention has the activity of promoting hair growth or preventing hair loss even when hair growth ability is suppressed or weakened.
  • a tannin-based compound was orally administered to the mice, and changes in hair length in the mice were observed. As a result, it was confirmed that when hair growth in mice was suppressed by testosterone, hair growth was superior in the case of tannin-based compound treatment compared to the control group that was not treated with the tannin-based compound.
  • the tannin compound of the present invention described above can exhibit the effect of promoting hair growth or preventing hair loss by having the above-described activity.
  • the tannin compound of the present invention can be included in the above-described composition at a concentration of 0.01 ⁇ M to 1000 ⁇ M, specifically, the tannin compound of the present invention can be included in the above-described composition at a concentration of 0.01 ⁇ M to 1000 ⁇ M; 0.05 ⁇ M to 800 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 700 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 600 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 500 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 300 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 200 ⁇ M; 0.1 ⁇ M to 800 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 700 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 600 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 500 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 300 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 200 ⁇ M; It may be included at a concentration of 1 ⁇ M to 800 ⁇ M, 1 ⁇ M to 700 ⁇ M, 1 ⁇ M to 600 ⁇ M, 1 ⁇ M to 500 ⁇ M, 1 ⁇ M to
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth, which contains tannins as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for preventing hair loss or promoting hair growth, which contains tannins as an active ingredient.
  • the present invention provides an over-the-counter pharmaceutical composition for preventing or improving hair loss, which comprises tannins as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hair loss, which comprises tannins as an active ingredient.
  • the above tannin compound may include a gallotannins derivative.
  • the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof promotes the proliferation of human dermal papilla cells, thereby preventing hair loss, promoting hair growth, or enhancing hair health. Therefore, the rambutan leaf extract of the present invention or a fraction thereof can be usefully utilized as cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, or health functional foods for preventing hair loss, promoting hair growth, or enhancing hair health.
  • Figure 1 shows the results of measuring the cell proliferation rate of human hair dermal papilla cells (hDPC) using rambutan leaf, seed, and peel extracts.
  • Figure 2a shows the results of measuring the cell proliferation rate of human hair dermal papilla cells (hDPC) according to the concentration of rambutan leaf extract (NLE) alone without testosterone (Tes) treatment
  • Figure 2b shows the results of measuring the cell proliferation rate of human hair dermal papilla cells (hDPC) according to the concentration of rambutan leaf extract (NLE) treatment under testosterone (Tes) suppression conditions.
  • Figure 3a is an experimental design diagram showing an in vivo evaluation procedure according to oral administration of rambutan leaf extract and subcutaneous injection of testosterone
  • Figure 3b is a graph showing changes in animal body weight according to the non-drug administration control group (Cont), testosterone administration group (TS), NLE low-dose group, NLE high-dose group, and Finasteride administration group
  • Figure 3c is an actual image measuring the prostate size according to the non-drug administration control group (Cont), testosterone administration group (TS), NLE low-dose group, NLE high-dose group, and Finasteride administration group
  • Figure 3d is a graph showing the results according to Figure 3c in data format.
  • Figure 4a is an actual image for confirming the visual recovery of animal hair growth according to the non-drug administration control group (Cont), testosterone administration group (TS), NLE low-dose group, NLE high-dose group, and Finasteride administration group
  • Figure 4b is an image showing the results of staining (H&E staining) of animal skin tissue after the end of the experiment
  • Figure 4c is a graph showing the number of hair follicles in animals
  • Figure 4d is a graph showing the diameter of hair follicles in animals.
  • Figure 5a shows the results of Western blot analysis according to the concentration of rambutan leaf extract (NLE) treatment
  • Figure 5b shows the results of analyzing the expression level of Cyclin D1, a cell proliferation-related protein
  • Figure 5c shows the results of analyzing the expression level of PCNA, a cell proliferation-related protein
  • Figure 5d is an image visually showing the protein expression pattern by performing immunofluorescence staining for PCNA and Loricrin.
  • Figure 6a shows the results of content analysis of indicator components according to extraction conditions of rambutan leaf extract
  • Figure 6b shows the results of measuring cell proliferation rate of rambutan leaf extract according to extraction conditions of rambutan leaf extract
  • Figure 6c shows the results of column chromatography (gradient UPLC) analysis performed to obtain fractions from rambutan leaf extract
  • Figure 6d shows the results of showing cell proliferation rate in hair follicle cells for each fraction obtained through column separation (fractionation).
  • Figure 7a shows the results of UPLC-PDA analysis and QTOF-MS (ESI+/-) analysis for Fraction 4, which had the best effect on the proliferation of mammary papilla cells among the effective fractions of rambutan leaf extract (NLE), and
  • Figure 7b shows the results of high-resolution mass spectrometry (HRESIMS) for the main components separated from the effective fraction (Fraction 4) of rambutan leaf extract.
  • HRESIMS high-resolution mass spectrometry
  • FIG. 8a shows the results of 1 H-NMR and 13 C-NMR spectrum analysis performed to confirm the structure of Corilagin, a gallotannin compound isolated from the effective fraction (Fraction 4) of rambutan leaf extract
  • FIG. 8b shows the results of UV spectrum analysis performed to confirm the ultraviolet absorption characteristics of Corilagin, a gallotannin compound isolated from the effective fraction (Fraction 4) of rambutan leaf extract
  • FIG. 8c is a drawing showing the chemical structure (C 27 H 22 O 18 ) of Corilagin, a gallotannin compound isolated from the effective fraction (Fraction 4) of rambutan leaf extract.
  • Figure 9 shows the chemical structures of six standard tannin compounds. Specifically, the chemical structures of Geranin, Chebulagic acid, Chebulinic acid, Punicalagin, 1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose, and Corilagin are shown in order.
  • Figure 10 shows the results of the process of separating tannin-based compounds from rambutan leaves and the process of securing a standard product of tannin-based compounds.
  • Figure 11 shows the results of an experiment evaluating the proliferation-promoting activity of each of six tannin compounds on mammary papilla cells.
  • Figures 12a to 12c show the results of an experiment analyzing the effect of tannin compounds on the cell cycle of human breast papilla cells.
  • Figure 13a is an actual image of the results of an in vivo animal experiment conducted to confirm the activity of a tannin compound in promoting hair growth or preventing hair loss
  • Figure 13b is a graph that shows the results of the experiment in data format.
  • Figure 14a is an actual image of the results of an in vivo animal experiment conducted to confirm the activity of a tannin-based compound in promoting hair growth or preventing hair loss when hair growth is inhibited by testosterone administration
  • Figure 14b is a graph that shows the results of this experiment in data format.
  • Figure 15 is a graph showing the relative peak intensities of functional indicator components (corylagin and kebulagic acid) present in rambutan leaves.
  • testosterone is abbreviated as 'TS' or 'Tes' and is used with the same meaning hereinafter.
  • Rambutan leaves were provided from the Overseas Biological Materials Center of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, and rambutan leaf extract was prepared using a shaking water bath extraction device under the conditions of Table 1 below. Specifically, rambutan leaves and the extraction solvent according to Table 1 below were mixed at a mass ratio of 1:10 (2 g of rambutan leaves: 30 mL of extraction solvent) and extracted at the temperature and time of Table 1 below. Afterwards, the extract was filtered under reduced pressure, concentrated under reduced pressure, freeze-dried at -80°C for 72 hours, and dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) for use.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Example Extraction solvent Temperature (°C) time (h) 1-1 50% ethanol aqueous solution 60 2 1-2 30% ethanol aqueous solution 60 2 1-3 10% ethanol aqueous solution 60 2 1-4 Water (0% ethanol solution) 60 2 1-5 50% ethanol aqueous solution 60 4 1-6 30% ethanol aqueous solution 60 4 1-7 10% ethanol aqueous solution 60 4 1-8 Water (0% ethanol solution) 60 4 1-9 50% ethanol aqueous solution 60 6 1-10 30% ethanol aqueous solution 60 6 1-11 10% ethanol aqueous solution 60 6 1-12 Water (0% ethanol solution) 60 6 1-13 50% ethanol aqueous solution 40 2 1-14 30% ethanol aqueous solution 40 2 1-15 10% ethanol aqueous solution 40 2 1-16 Water (0% ethanol solution) 40 2 1-17 50% ethanol aqueous solution 40 4 1-18 30% ethanol aqueous solution 40 4 1-19 10% ethanol aqueous solution 40 4 1-20 Water (0% ethanol solution) 40 4 1-21 50% ethanol
  • Rambutan peel extract was prepared by mixing rambutan peel with 50% (v/v) ethanol aqueous solution in a ratio of 1:10 (15 g of raw material: 150 mL of 50% alcohol) in the same manner as in Example 1-5, except that rambutan peel was used instead of rambutan leaves in Example 1-5, and then extracting in a 50°C shaking water bath for 6 hours.
  • Rambutan seed extract was prepared by mixing rambutan seeds in a 50% (v/v) ethanol aqueous solution at a ratio of 1:10 (15 g of raw material: 150 mL of 50% alcohol) in the same manner as in Example 1-5, except that rambutan seeds were used instead of rambutan leaves in Example 1-5, and then extracting in a 50°C shaking water bath for 6 hours.
  • HHFDPC Human hair follicle dermal papilla cells
  • human follicle dermal papilla cells were pretreated with the rambutan extracts of Examples 1-5, Comparative Examples 1 and 2 at a concentration of 50 ⁇ g/mL each for 1 hour, and then treated with testosterone (Tes), which inhibits the proliferation of HFDPCs, at a concentration of 100 ⁇ M for 72 hours to induce inhibition of cell proliferation. Thereafter, the MTS (tetrazolium compound) reagent, which identifies the cell proliferation rate, was treated for 1 hour, and the cell proliferation rate was confirmed by the absorbance at 495 nm, and the results are shown in Table 2 and Fig. 1 below.
  • the rambutan leaf extract (NLE) of the present invention significantly restored the proliferation of cells reduced by testosterone (Tes) to a level equivalent to or greater than normal.
  • rambutan seed and peel extracts did not significantly restore the proliferation of cells reduced by testosterone.
  • rambutan seed and peel extracts do not have hair growth and hair growth promotion effects, and that the rambutan leaf extract according to the present invention promotes cell proliferation of dermal papilla cells, thereby promoting hair growth, hair growth, and healthy scalp growth, thereby alleviating the progression of hair loss and significantly increasing hair volume/hair growth and growth.
  • Example 3 Evaluation of the cell proliferation inhibition and recovery efficacy in human breast papilla cells according to the treatment concentration of rambutan leaf extract.
  • HFDPCs Human Follicle dermal papilla cells
  • the cell proliferation rate was similar to or slightly increased compared to the control group (Cont) at concentrations of 6.25, 12.5, and 25 ⁇ g/mL, and the 25 ⁇ g/mL treatment group showed a proliferation rate of about 107%, which was a statistically significant increase (p ⁇ 0.01).
  • the high concentration 50 ⁇ g/mL treatment group showed a proliferation rate of about 117% (p ⁇ 0.001), confirming that it significantly promotes cell proliferation without toxicity even under normal conditions.
  • HFDPCs Human Follicle dermal papilla cells
  • rambutan leaf extract of Example 1-5 were pretreated with the rambutan leaf extract of Example 1-5 at concentrations of 6.25 ⁇ g/mL, 12.5 ⁇ g/mL, 25 ⁇ g/mL, and 50 ⁇ g/mL for 1 hour, and then treated with 100 ⁇ M testosterone (Tes), which inhibits the proliferation of HFDPCs, for 72 hours to induce cell proliferation inhibition.
  • Tes 100 ⁇ M testosterone
  • the cell proliferation rate was confirmed by the absorbance at 495 nm by treating with a tetrazolium compound (MTS) reagent for 1 hour, and the results are shown in Table 4 and Fig. 2b below.
  • MFS tetrazolium compound
  • the rambutan leaf extract according to the present invention significantly increased the growth of human breast papilla cells and significantly restored the cell proliferation reduced by testosterone.
  • the human breast papilla cell proliferation rate of 50 ⁇ g/mL of rambutan leaf extract was 150.56%, which was confirmed to show excellent cell proliferation recovery ability by increasing the cell proliferation rate reduced by testosterone by more than 72%.
  • the higher the content concentration of rambutan leaf extract the more the cell proliferation recovery ability was enhanced.
  • NLE not only induces proliferation of hair follicle cells in the normal state, but also significantly restores cell proliferation inhibited by testosterone, confirming that NLE can be used as an effective ingredient for preventing hair loss and promoting hair growth.
  • rambutan leaf extract Nephelium lappaceum leaf extract, NLE
  • NLE Nephelium lappaceum leaf extract
  • 6-week-old male mice (C57BL/6) were randomly divided into 5 groups, including a non-drug-administered control group (Cont), a testosterone-administered group (TS 20 mg/kg/day, subcutaneous injection), an NLE low-dose group (10 mg/kg/day, oral administration), an NLE high-dose group (NLE 50 mg/kg/day, oral administration), and a finasteride-administered group (Fina, 20 mg/kg/day, oral administration).
  • a non-drug-administered control group Cont
  • TS 20 mg/kg/day testosterone-administered group
  • NLE high-dose group NLE 50 mg/kg/day, oral administration
  • Fina 20 mg/kg/day, oral administration
  • mice Six-week-old male mice (C57BL/6) were orally administered NLE or Fina for 13 days, and then subcutaneously injected with TS 5 days a week for 2 weeks, for a total of 10 days.
  • the body weights of the mice were measured on days 0, 3, 6, 10, 14, and 17, and the prostates were removed after the experiment and their weight and size (diameter) were measured.
  • the NLE 10 and 50 mg/kg treatment groups showed alleviated weight loss compared to the TS alone treatment group, and tended to maintain body weight at a level similar to that of the control group (Cont). This confirmed that NLE had no adverse effects on body weight maintenance.
  • the NLE low-concentration (10 mg/kg) treatment group showed an increase in the size of the prostate compared to the NLE high-concentration (50 mg/kg) treatment group, but the difference was minimal, and no significant difference was observed compared to the control group (cont) and the TS administration group, indicating that the composition of the present invention has no side effects on prostate hypertrophy.
  • rambutan leaf extract (NLE) can be administered stably without side effects such as weight loss or prostate enlargement during long-term oral administration, and has excellent biosafety along with hair growth or hair loss inhibition effects.
  • rambutan leaf extract Nephelium lappaceum leaf extract, NLE
  • TS testosterone
  • mice Six-week-old male mice (C57BL/6) were randomly divided into five groups: a non-drug-administered control group (Cont), a testosterone-only group (TS 20 mg/kg/day, subcutaneous injection), an NLE low-dose group (10 mg/kg/day, oral administration), an NLE high-dose group (NLE 50 mg/kg/day, oral administration), and a finasteride-administered group (Fina, 20 mg/kg/day, oral administration).
  • Cons non-drug-administered control group
  • TS 20 mg/kg/day, subcutaneous injection an NLE low-dose group (10 mg/kg/day, oral administration)
  • NLE high-dose group NLE 50 mg/kg/day, oral administration
  • finasteride-administered group Ina, 20 mg/kg/day, oral administration.
  • NLE or Finasteride was administered orally for 13 days, and then TS (20 mg/kg) was injected subcutaneously for 10 days, 5 days a week for 2 weeks, to induce a hair loss model. Hair recovery status was photographed on days 0, 3, 6, 11, 14, and 17 and shown in Fig. 4a.
  • skin tissue was extracted and tissue staining (H&E staining) was performed and the results are shown in Fig. 4b.
  • the number and diameter of hair follicles were quantitatively analyzed and shown in Fig. 4c and Fig. 4d, respectively.
  • the H&E staining results showed that the number and depth of hair follicles decreased in the TS administration group, but in the NLE treatment group, hair follicles were formed thicker and deeper, and the most prominent recovery trend was observed in the 50 mg/kg treatment.
  • the number of hair follicles reduced by TS treatment was significantly increased by administration of NLE 10 and 50 mg/kg, respectively, and in particular, the NLE 10 mg/kg administration group recovered to a level similar to that of the control group (cont), confirming that the hair follicle number recovery effect was excellent.
  • the hair follicles that were thinned by TS treatment showed a pattern of becoming thicker by both NLE 10 and 50 mg/kg administration, and the NLE 10 mg/kg administration group recovered to a thickness similar to the control group (cont), and the NLE 50 mg/kg administration group was confirmed to be thicker than the control group (cont) (p ⁇ 0.01).
  • rambutan leaf extract can significantly restore hair follicle development inhibited by testosterone and can be used as an effective ingredient for hair loss suppression and hair growth promotion by inducing an increase in the number and diameter of hair follicles.
  • Nephelium lappaceum leaf extract NLE restores the expression of proteins related to the proliferation of hair papilla cells and skin barrier proteins inhibited by testosterone (TS), Western blot analysis and immunofluorescence staining were performed.
  • a hair growth inhibition model was induced in 6-week-old male C57BL/6 mice using TS (20 mg/kg, subcutaneous injection) in the same manner as in Example 4, and NLE was administered orally at 10 mg/kg and 50 mg/kg for 10 days.
  • Comparative groups included a finasteride (20 mg/kg) treatment group and an untreated control group (Cont).
  • rambutan leaf extract restored the expression of cell proliferation proteins (Cyclin D1, PCNA) suppressed by testosterone, and also restored the epidermal differentiation protein (Loricrin) to normal levels. This confirmed that NLE can be utilized as an effective ingredient that simultaneously suppresses hair loss and promotes hair growth by promoting cell activity within hair follicles and contributing to the maintenance of the skin barrier.
  • the yield, index component content, and cell proliferation rate of rambutan leaf extract were analyzed according to the extraction solvent, extraction time, and temperature conditions according to Example 1.
  • the results of the yield analysis of rambutan leaf extract are shown in Table 5 below
  • the results of the index component (gallotannins) content analysis are shown in Table 6 and Figure 6a below
  • the results of the cell proliferation rate analysis are shown in Figure 6b.
  • Extraction yield (%) Extraction time Temperature (°C) extraction solvent Water (0%) ethanol) 10% ethanol aqueous solution 30% ethanol aqueous solution 50% ethanol aqueous solution 2 hours 20 7.1 7.4 9.3 6.8 40 8.8 12.3 12.3 10.1 60 12.4 14.6 13.3 11.2 4 hours 20 9.1 8.2 9.6 9.0 40 11.1 11.7 14.0 12.0 60 12.4 12.7 14.9 16.1
  • Example 1-3 10% ethanol aqueous solution, 60°C, 2 hours of extraction
  • Example 1-6 (30% ethanol aqueous solution, 60°C, 4 hours of extraction)
  • Example 1-18 (30% ethanol aqueous solution, 40°C, 4 hours of extraction)
  • Example 1-5 50% ethanol aqueous solution, 60°C, 4 hours of extraction
  • the present inventors extracted 600 g of dried rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaves provided by the Overseas Biological Materials Center in Indonesia with 30% ethanol at 40°C for 4 hours (84.3 g, yield 14.1%).
  • a k-prep LAB-300 (YMC, Japan) equipped with a DAD-50-700S column (50.0 ⁇ 700 mm) packed with YMC ODS AQ HG resin (YMC, 10 ⁇ m, 500 g) was used to perform fractionation of the rambutan leaf extract.
  • a gradient condition was applied for 300 minutes, increasing from 95% solvent A (water) and 5% solvent B (methanol) to 100% solvent B.
  • Fraction 1-10 A total of 10 fractions (Fraction 1-10) were separated and confirmed using UV detection at 254 nm. The conditions and yields of each fraction are shown in Tables 7 and 8 below. 20 ⁇ L of each fraction was treated to human hair follicle dermal papilla cells, and after 48 hours of culture, the cell proliferation rate was measured using the MTT assay.
  • Total sample volume 1.04g Amount of sample used 1.04g Number of injections 1 time Amount per injection 20ml
  • Fraction 4 a significant human hair follicle cell proliferation promotion effect was confirmed in Fraction 4, indicating that the effective ingredient of the present invention is abundantly present in the fraction, and Fraction 4 was identified as the optimal candidate as an effective ingredient for hair loss inhibition and hair growth promotion.
  • UPLC-PDA-QTOF/MS analysis was performed on rambutan leaves and fractions using a Waters Acquity UPLC-PDA system (Waters, Milford, MA, USA) equipped with an XEVO-G2 XS QTOF mass detector.
  • the QTOF-MS system equipped with an electrospray ionization (ESI) source was operated in negative mode, and the following operating parameters were used: capillary voltage: 300 V; cone voltage: 40 V; collision energy: 6, 15 eV; ion source temperature: 110°C; desolvation gas flow rate: 800 L/Hr; desolvation temperature: 500°C; scan time: 0.1 s; mass scan range: m/z 100–1500 Da.
  • ESI electrospray ionization
  • Leucine enkephalin (m/z 554.2615 in negative ion mode) was used as an internal standard to obtain a reference mass. Chromatographic separation was performed using an ACQUITY BEH C18 (2.1 ⁇ 100 mm, 1.7 ⁇ m) column equipped with a 40°C column oven. Mobile phase A consisted of distilled water containing 0.1% formic acid, and mobile phase B consisted of acetonitrile containing 0.1% formic acid. The flow rate was set to 0.4 mL/min, the sample plate temperature was maintained at 10°C, and the injection volume was 1 ⁇ L. Linear elution gradient conditions were performed, and the data were processed using Waters MassLynx v4.2 SCN1033 and analyzed in DDA (Data-dependent acquisition) mode, and the analysis data are shown in Table 9 below.
  • Fr. 4 fractionated from rambutan leaf extract was the effective fraction with the best effect in promoting proliferation of hair follicle cells.
  • component 2 with a high content was purified and identified as Corilagin (C 27 H 22 O 18 , molecular weight 634) with a gallotannin structure.
  • Benzene ring (aromatic ring) proton signals were observed in the range of 6.5 to 7.3 ppm, and the presence of hydrogen signals (anomeric protons) connected to the anomeric carbon of glucose was confirmed in the range of 3.7 to 5.5 ppm.
  • carboxylic signals were observed in the 175–165 ppm range, oxygenated aromatic carbon in the 150–135 ppm range, aromatic carbon in the 105–130 ppm range, anomeric carbon in the 90–100 ppm range, and oxygenated methylene carbon in the 60–80 ppm range. This signal distribution is consistent with the NMR data of Corilagin.
  • Fraction 4 fractionated from the rambutan leaf extract of the present invention was Corilagin, a gallotannin structural compound with a molecular formula of C 27 H 22 O 18 and a molecular weight of 634.45 Da, and its chemical structure is shown in Fig. 8c.
  • the present inventors extracted 600 g of dried rambutan ( Nephelium lappaceum L.) leaves provided by the Overseas Biological Materials Center in Indonesia with 30% ethanol at 40°C for 4 hours (84.3 g, yield 14.1%).
  • a k-prep LAB 100S (YMC, Japan) equipped with a DAD-50-700S column (50.0 ⁇ 700 mm) packed with YMC ODS AQ HG resin (YMC, 10 ⁇ m, 500 g) was used to perform fractionation of the rambutan leaf extract.
  • a gradient condition was applied for 300 minutes, increasing from 95% solvent A (water) and 5% solvent B (methanol) to 100% solvent B.
  • NLE.1-NLE.10 A total of 10 fractions (NLE.1-NLE.10) were isolated and identified using UV detection at 254 nm. Subsequently, the active fraction NLE.4 (5.2 g) was further separated into 32 fractions (NLE.4.1-NLE.4.32) using MPLC (Biotage® Selekt systems, Biotage® Uppsala, Sweden) with a reversed-phase flash column (C18, 220 g). During the further separation, water was used as solvent A and methanol was used as solvent B, and a stepwise gradient was performed increasing the solvent B from 5% to 20% at a flow rate of 45 mL/min. In addition, additional purification steps were performed to isolate the compound in a highly purified form.
  • MPLC Biotage® Selekt systems, Biotage® Uppsala, Sweden
  • Prep LC LC Prep 150, Waters TM , MA, USA
  • a reversed-phase column Xbridge Prep C18, 5 ⁇ m, OBD TM 19 Y 250 mm
  • the solvent system of the reversed-phase column consisted of water containing 0.1% formic acid as solvent A and methanol containing 0.1% formic acid as solvent B.
  • Corilagin (NLE.4.26, 543.3 mg) was identified as a single corilagin compound with 98.3% purity from NLE.4.26 (543.3 mg) without further purification, as confirmed by ultra-performance liquid chromatography (UPLC).
  • Kebulagic acid (NLE.4.22.1, 15.6 mg) was separated from NLE.4.22 (212.8 mg), and the separation of chebulagic acid was performed under isocratic conditions in 13% solvent B, to obtain 15.6 mg of chebulagic acid compound with 98.6% purity (see Figure 10).
  • Dermal papilla cells are located at the base of the hair follicle, inducing blood vessel formation and supplying oxygen and nutrients to the cells that make up the surrounding hair follicle. Promoting the proliferation of dermal papilla cells can promote healthy hair and hair growth. Therefore, to evaluate the efficacy of tannin compounds in promoting hair growth or preventing hair loss, human-derived dermal papilla cells were treated with the tannin compounds, and the proliferation rate (% of control) was analyzed compared to the untreated control group.
  • tannin compounds which are standards, namely geranin, chebulagic acid, chebulinic acid, punicalagin, 1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose, and corilagin, were treated at concentrations of 5 ⁇ M, 10 ⁇ M, and 20 ⁇ M, respectively, to human-derived dermal papilla cells.
  • the proliferation rate (%) of the dermal papilla cells was calculated compared to the control group that was not treated with any substance, and the results are shown in Fig. 11.
  • the proliferation rate of hair papilla cells increased compared to the control group, and in particular, it was confirmed that corilagin (20 ⁇ M) showed a proliferation rate of about 195.5% compared to the control group, and kebulic acid (20 ⁇ M) showed a proliferation rate of about 208.7% compared to the control group. From these experimental results, it was found that the tannin compound of the present invention can promote hair growth and prevent hair loss by promoting the proliferation of hair papilla cells.
  • the effects of tannin compounds on the cell cycle of human dermal papilla cells were analyzed. Specifically, the dermal papilla cells were treated with corylagin isolated in Example 11 at a concentration of 12.5 ⁇ g/mL or 25 ⁇ g/mL, and the cells were stained with propidium iodide (PI) staining reagent. The cycle of the dermal papilla cells was divided into G1, S, and G2/M phases using a flow cytometer, and the proportion of cells in each phase was analyzed. At this time, a group not treated with tannin compounds was used as a control group.
  • PI propidium iodide
  • the G2/M phase ratio in the 12.5 ⁇ g/mL corillargin treatment group increased by approximately 1.27% compared to the control group, and in the 25 ⁇ g/mL treatment group increased by approximately 2.25% compared to the control group. Therefore, it was found that corillargin treatment increases the G2/M phase ratio in a concentration-dependent manner, thereby promoting the division of hair papilla cells and improving hair follicle cell proliferation and hair growth.
  • the efficacy of tannin compounds in promoting hair growth or preventing hair loss was evaluated through in vivo animal experiments. Specifically, after removing the dorsal hair of 6-week-old C57BL/6 mice, corilagin was orally administered at doses of 1 mg/kg and 5 mg/kg, and changes in hair length in the mice were analyzed for 15 days. The negative control group was not administered corilagin, and the positive control group was orally administered minoxidil at a dose of 1 mg/kg.
  • testosterone was administered at a dose of 20 mg/kg to the 6-week-old C57BL/6 mice to suppress the hair growth ability of the mice, and then corilagin was orally administered at doses of 1 mg/kg and 5 mg/kg, and the hair length change of the mice was analyzed for 18 days.
  • the group administered only testosterone was used as the control group, and the group orally administered minoxidil at a dose of 1 mg/kg after the testosterone administration was used as the positive control group.
  • the tannin compound of the present invention can promote hair growth and prevent hair loss.
  • Example 15 Comparative analysis of the content of indicator components (corilagin and chebulagic acid) by rambutan composition
  • This example was conducted to quantitatively compare the distribution of functional indicator components (Corilagin and Chebulagic acid) present in the leaves of rambutan ( Nephelium lappaceum L) and to identify the part where the effective components are most abundant.
  • functional indicator components Corilagin and Chebulagic acid
  • rambutan leaf extract as a major natural source of corilagin, can be utilized as a high value-added biomaterial applicable to functional cosmetics or hair loss improvement compositions, and it was confirmed to have excellent efficacy and economic feasibility.
  • the above ingredients were mixed and filled into a sealed bag to prepare a powder.
  • tablets were manufactured by pressing them according to a conventional tablet manufacturing method.
  • the mixture was filled into a gelatin capsule according to a conventional capsule manufacturing method to produce a capsule.
  • Vitamin mixture appropriate amount
  • Vitamin A acetate 70 mg
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the above vitamin and mineral mixture is a preferred example of a mixture of ingredients suitable for relatively healthy foods, but the mixing ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients may be mixed according to a conventional health food manufacturing method, and then powder or granules may be manufactured and used to manufacture a health food composition according to a conventional method.
  • Vitamin mixture appropriate amount
  • Vitamin A acetate 70 mg
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the above vitamin and mineral mixture is a preferred example of a mixture of ingredients suitable for relatively healthy foods, but the mixing ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients or their powders may be mixed according to a conventional health food manufacturing method, and then the powder of the mixture may be manufactured and used to manufacture a health food composition according to a conventional method.
  • the above ingredients were mixed according to the usual method for manufacturing a health drink, stirred and heated at 85°C for about 1 hour, and the resulting solution was filtered, placed in a sterilized container, sealed and sterilized, and then stored in a refrigerator before being used to manufacture a health drink composition.

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Abstract

본 발명은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 모발의 생성 및 성장을 촉진하므로, 탈모의 예방, 개선, 치료에 우수한 효과를 나타낼 뿐만 아니라 발모 촉진을 위해서 사용될 수 있다.

Description

람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진용 조성물
본 발명은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하고, 상기 분획물이 탄닌계 화합물을 포함하는 탈모 방지, 모발 성장 촉진, 모발 건강 증진 및 탈모 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
탈모는 정상적으로 모발이 존재하는 부위에 모발이 없는 상태를 말하며, 일반적으로 두피의 성모(굵고 검은 머리털)가 빠지는 것을 의미한다. 성모는 색깔이 없고 굵기가 가는 연모와는 달리 빠질 경우 미용상 문제를 일으킬 수 있다. 서양인에 비해 모발 밀도가 낮은 우리나라 사람의 경우 5-7만개 정도의 머리카락이 있으며, 하루에 약 50-70개까지의 머리카락이 빠지는 것은 정상적인 현상이다. 따라서 자고 나서나 머리를 감을 때 빠지는 머리카락의 수가 100개가 넘으면 탈모가 진행 중일 가능성이 있다
안드로겐성 탈모(Androgenic alopecia, AGA)는 안드로겐인 테스토스테론이 모낭에 도달하여 전환된 디하이드로테스토스테론으로 발생하는 남성형 탈모증을 일컫는다. 현재까지 탈모인구가 급격하게 증가하고 있는 추세이며, 기존의 남성형 탈모뿐만 아니라 여성형 탈모환자 또한 증가하고 있다. 탈모 치료에 사용되고 있는 치료제인 Finasteride, Dutasteride, Minoxidil 등은 모발생성에 영향을 준다고 보고된 바 있어 현재 치료제로 흔히 사용되고 있지만, 여성은 복용할 수 없다는 점과 복용 중단 시 탈모가 재진행될 수 있다는 한계점 및 유방암, 가려움증과 같은 부작용이 존재한다. 따라서 현재 전세계적으로 모발건강유지를 위한 다양한 연구 및 건강기능식품 개발이 활발하게 이루어지고 있다.
AGA의 발생기전에는 진피유두세포(Dermal papilla cells, DPC)가 세포 주기에 따른 변화를 통해 발생하는 현상으로, AGA 유사 모델 내 세포의 증식 억제 및 세포주기에 관여하는 Cyclin D1, C-Myc과 같은 단백질의 발현이 감소하는 것으로 알려져있다. 그 뿐만 아니라 모발 성장자극인자인 EGF, IGF-1, VEGF 등의 발현이 감소하며 모발 성장저해인자인 DKK-1, TGF-α1의 발현이 증가하는 것으로 알려져있다. AGA 유사 전임상 모델에서는 제모를 통한 AGA 유사조건 확립 후 테스토스테론(Testosterone) 주입 시 마우스 모발 성장률이 저해되며, 모낭의 수와 크기가 감소하는 것으로 알려져있다.
한편 이러한 탈모에 대한 종래 치료방법으로는 남성형 또는 여성형 탈모의 경우에는 미녹시딜 등의 바르는 약, 피나스테라이드 등의 먹는 약, 모발 이식술 등이 이용되고 있다. 또한 원형 탈모증의 치료를 위해서는 국소 스테로이드 제제나 전신 스테로이드 제제, 면역 요법 등이 이용되고 있다. 휴지기 탈모증은 원인이 제거되면 모발이 회복되므로 원인을 확인하고 치료하는 것이 중요하다. 하지만, 이러한 종래 방법에 의해 탈모를 치료하는 경우 약물 요법이나 스테로이드 제제 등에 의존하기 때문에 부작용의 문제가 있고, 치료의 속도도 빠르지 않아 장기간이라는 문제점이 있었다. 또한 약물 또는 모발 이식 등을 이용하여 치료하게 되면 치료 비용도 크게 상승한다는 문제점이 있다. 미녹시딜과 피나스테라이드는 모발 성장 촉진을 위해 쓰이고 있는 대표적인 약물들이다. 미국 업존사의 미녹시딜(minoxidil)은 장기 적용 시 부종, 부정맥과 원하지 않는 부위에 털이 나는 등의 부작용을 초래할 수 있으며, 미녹시딜의 효과는 사용으로부터 6개월에서 1년 사이에 가장 큰 효과를 보이고 이후에는 서서히 그 효과가 줄어드는 것으로 알려져 있다. 또한 머크사에서 개발한 피나스테라이드(finasteride)는 모낭에서 남성호르몬 테스토스테론 대사에 작용하는 효소인 5-α-리덕테이즈(5-α-reductase)의 활성을 억제하는 물질로 알려져 있으나 성기능 장애와 우울증 및 자살충동의 증가가 보고된 바 있다. 또한 기형아 출산의 가능성을 높이기 때문에 가임기의 여성이나 임신 중의 여성에게는 적용이 불가능하다. 게다가, 두 약물 모두 적용을 중단할 경우 다시 탈모가 진행되는 것으로 알려져 있다. 이 외에도 발프로산이 있지만, 임신 중 복용할 경우 아이의 인지발달 능력이 크게 떨어진다고 알려져 있다.
이처럼 종래의 여러 종류의 발모제는 일반적으로 두피의 혈행 촉진과 모근의 영양공급을 목적으로 하여 모발의 성장에 도움을 주도록 하는 방법이 시도되었으나 이 역시 독성과 부작용이 심하고 그 효과 또한 미흡한 실정이다.
본 발명의 하나의 목적은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탄닌계 화합물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탄닌계 화합물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탄닌계 화합물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탄닌계 화합물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탄닌계 화합물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 또 하나의 목적은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 통상의 기술자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로써, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.
하기에서는 중복되는 내용의 혼잡을 방지하기 위하여, 중복되는 내용의 기재를 생략하고자 한다. 즉, 하기의 내용만으로 발명의 내용이 한정되는 것은 아니고, 전체적인 발명의 내용에 따라 발명의 내용이 해석되어야 할 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물
본 발명은 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
보다 구체적으로, 본 발명은 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 "람부탄"으로 알려진 Nephelium lappaceum L.은 Nephelium 속에 속하며 동남아시아에 널리 분포되어 있는 과실이다. 람부탄은 아시아에서 상업적으로 중요한 작물이며 말레이시아에서는 말린 과일 껍질이 지역 의학에 사용되며, 과실은 전 세계적으로 식용으로 섭취된다. 람부탄의 과피에는 tannin과 saponin이 함유되어 있어 한약제로 사용되며, 이 밖에 뿌리는 감기를 치료하기 위한 약제로 사용되고 잎은 찜질약으로, 나무껍질은 혀에 병이 생겼을 때 근육을 완화시키는 치료제로도 사용한다. 그러나 이러한 람부탄의 잎 추출물을 탈모 방지, 발모 촉진, 모발 생성 촉진을 목적으로 사용한 예는 없다.
본 발명에서 용어 "추출물"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 제조 가능한 모든 제형의 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 물, C1-C4 알코올 또는 이들의 조합을 포함하는 용매를 이용하여 추출한 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 물 또는, 물 및 C1-C4 알코올을 포함하는 용매를 이용한 추출물일 수 있으며, 더 바람직하게는 물 또는 물 및 에탄올을 포함하는 에탄올 수용액을 용매로 이용한 추출물일 수 있다.
상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 물 또는 5 내지 80%(v/v) 에탄올 수용액을 이용하여 추출한 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 물 또는 7 내지 75%(v/v) 에탄올 수용액, 더 바람직하게는 8 내지 70%(v/v) 에탄올 수용액, 더욱 더 바람직하게는 9 내지 60%(v/v) 에탄올 수용액을 이용하여 추출한 추출물일 수 있다. 가장 바람직하게는 물, 10%(v/v) 에탄올 수용액, 30%(v/v) 에탄올 수용액 또는 50%(v/v) 에탄올 수용액을 이용하여 추출한 추출물일 수 있다.
예를 들어, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 람부탄 잎을 물 또는 5 내지 80%(v/v) 에탄올 수용액을 추출용매(1차 추출용매)로 추출하는 단계를 포함하는 추출공정을 수행하여 얻어질 수 있다. 상기 추출공정은 람부탄 잎의 무게에 대하여 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 10배의 상기 1차 추출 용매, 바람직하게는 물과 에탄올의 혼합용매로 추출함으로써 수행할 수 있다. 상기 혼합용매는 바람직하게는 물 또는 약 10 내지 50% 에탄올 수용액을 사용할 수 있다. 추출은 당 분야에 알려진 추출방법, 예컨대, 냉침, 열수추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등의 방법으로 수행될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다. 추출 온도는 당업자가 추출 방법에 적절한 다양한 온도 범위를 채택할 수 있으며, 예를 들어, 10 내지 100 ℃의 온도 범위에서, 바람직하게는 15 내지 80 ℃의 온도, 더 바람직하게는 18 내지 70 ℃의 온도에서 수행될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다. 또한, 추출시간은 추출방법에 따라 상이하며, 당업자가 적절한 추출시간을 채택할 수 있으며, 이에 국한되지 않으나, 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 1 내지 8시간의 범위에서 단회 또는 복수회로 수행될 수 있다. 본 발명의 람부탄 잎 추출물의 제조 시 온도, 추출 시간 등의 조건은 추출 용매의 종류 및 람부탄 잎의 양에 따라 달라질 수 있다. 상기 1차 추출용매로 추출을 수행하여 얻어진 추출물은 통상의 방법에 따라 여과하여 불순물을 제거한 액상 형태로 얻거나, 얻어진 액상 형태의 추출물을 통상의 방법에 따라 감압농축 및/또는 건조하여 분말 형태로 얻을 수 있다.
또한, 상기 추출공정은 필요에 따라, 유효성분의 함량이 높은 분획을 얻는 단계를 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 1차 추출용매로 추출하여 얻어진 추출물을 물에 분산시킨 후, 적절한 2차 추출용매, 예컨대, 수포화 C4의 알콜로 추출하는 단계를 수행함으로써, 생성되는 추출물 중의 유효성분 함량을 더욱 높일 수 있다.
상기 람부탄 잎과 추출용매의 질량비는 1:20 내지 20:1일 수 있으며, 바람직하게는 1:15 내지 15:1, 더욱 바람직하게는 1:12 내지 12:1일 수 있으며, 더욱더 바람직하게는 1:1 내지 1:12일 있으며, 가장 바람직하게는 1:10일 수 있다.
또한 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 코릴라긴(corilagin), 케불라그산(chebulagic acid), 메틸 갈레이트 (Methyl gallate) 및 신탄닌 B1 (Cinmtannin B1)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물이 8.64 min의 m/z 633.0734 C27H21O18 화합물인 코릴라긴(corilagin), 5.07 min의 m/z 183.0321 메틸 갈레이트 (Methyl gallate), 9.28 min의 m/z 863.1832 신탄닌 B1 (Cinmtannin B1) 및 11.91 min의 m/z 953.0909 케불라그산 (Chebulagic acid) 화합물 등을 포함할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
구체적으로, 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 총 100 중량%에 대하여 코릴라긴(corilagin)을 1 내지 45 중량% 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 코릴라긴의 하한은 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 7 중량% 이상, 9 중량% 이상, 12 중량% 이상, 14 중량% 이상, 15 중량% 이상일 수 있고, 상한은 44 중량% 이하, 43 중량% 이하, 42 중량% 이하, 41 중량% 이하, 40 중량% 이하일 수 있다.
또한, 본 발명은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물 총 100 중량%에 대하여 케불라그산(chebulagic acid)을 1 내지 20 중량% 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 케불라그산의 하한은 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 4 중량% 이상, 5중량% 이상일 수 있고, 상한은 19 중량% 이하, 18 중량% 이하, 17 중량% 이하, 16 중량% 이하, 15 중량% 이하일 수 있다.
본 발명의 조성물은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 총 중량에 대하여 코릴라긴, 케불라그산을 각각 상기 기재된 중량% 범위만큼 포함함으로써 탈모 방지, 개선 또는 모발 성장 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명에서 "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로 부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
또한, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물(tannins)을 포함할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물에서 상기 탄닌계 화합물은 전체 식품 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물 중량에 대해 0.0001 중량% 내지 10 중량%의 범위내에서 적절한 양을 선택하여 포함될 수 있다.
상기 "탄닌"은 다양한 고분자 구조를 가지고 있고, 반응성이 강한 복합체 형성을 위해 충분한 하이드록실기와 다른 적절한 작용기를 포함하는 다양한 폴리페놀 화합물로서, 떫은 맛과 쓴맛을 주는 페놀 화합물일 수 있고, 이들은 어떤 특정한 단일 화학 구조로 되어 있는 특정 화합물이 아니고 비슷한 성질, 기능을 가진 화합물들의 집합체이고, 분자량은 500~20,000 g/mol이며 타닌류(tannoid)라고 불릴 수도 있다. 상기 탄닌계 화합물은 예를 들어, 갈산(gallic acid), 플로로글루시놀(phloroglucinol), 플라반-3-올(flavan-3-ol)과 같은 화합물들이 복잡하게 결합한 폴리페놀 타닌일 수 있고, 구체적으로, 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-베타-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-beta-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
상기 게라닌은 프로안토시아니딘의 한 종류일 수 있고, 제라늄 니베움(Geranium niveum) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
상기 케불라그산은 벤조피란 탄닌일 수 있고, 항산화 활성을 가질 수 있으며, 테르말리아 케불라(Terminalia chebula), 테르말리아 시트리나(Terminalia citrina) 또는 테르말리아 카타파(Terminalia catappa) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
상기 케불린산은 엘라기탄닌일 수 있고, 항산화 활성을 가질 수 있으며, 테르말리아 케불라(Terminalia chebula) 또는 테르말리아 마크로페라(Terminalia macroptera) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
상기 푸니칼라진은 엘라기탄닌의 한 종류일 수 있고, 석류(푸니카 그래나툼, Punica granatum), 터미니아 카타파(Terminalia catappa), 터미니아 미리카르파(Terminalia myriocarp) 또는 콤레툼 몰레(Combretum mole) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
상기 1,3,6-트리-O-갈로일-베타-D-글루코스는 갈로탄닌(Gallotannins)의 한 종류일 수 있고, 파에오니아 락티플로라(Paeonia lactiflor)와 테르미니아 케불라(Terminalia chebula) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
상기 코릴라긴은 엘라기탄닌의 한 종류일 수 있고, 디비디비(Dividivi) 또는 시살피니아 코리아리아(Caesalpinia coriaria), 알코르네아 글랜듈로사(Alchornea glandulosa), 푸니카 그래나툼(Punica granatum) 등의 식물에서 발견될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물은 탄닌계 화합물로 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나를 포함할 수 있다. 더 바람직하게는 본 발명의 일 구현예에서, 상기 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물은 탄닌계 화합물로 케불라그산(chebulagic acid) 또는 코릴라긴(corilagin)을 포함할 수 있다.
상기 "유효성분"은 직접 또는 간접으로 그 성분 자체가 가지고 있는 활성이 제제의 효능 효과로 기대되는 것일 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 다음과 같은 방법으로 제조할 수 있다:
(a) 람부탄 잎과 추출 용매를 이용하여, 10 내지 100℃에서 1 내지 8시간 동안 람부탄 잎을 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계에서 추출된 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 분리하는 단계; 및
(c) 상기 분리된 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 농축하는 단계.
상기 단계 (c) 이후, 건조하는 단계를 더 포함할 수 있으며, 상기 건조는 동결 건조일 수 있다.
상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 탄닌계 화합물을 포함할 수 있다. 갈로탄닌 유도체는 식물에 존재하는 탄닌의 일종으로, 항산화 및 항염 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 그러나, 탈모의 개선 또는 예방, 발모 효과에 대해서는 알려진 바가 없으나, 본 발명의 발명자들은 갈로탄닌 유도체가 함유된 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물이 탈모의 개선 또는 예방, 발모 효능에 관련성이 있음을 확인하였다.
상기 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물에서 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 농도는 3 내지 300 μg/mL일 수 있으며, 예를 들어 하한은 3, 3.5, 4, 4.5 또는 5 μg/mL 이상일 수 있으며, 상한은 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70 또는 60 μg/mL 이하일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 목적하는 효과가 나타나도록 농도를 적절히 조절할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 다양한 용매를 처리하여 수행하는 분획법, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법 및 이들의 조합 등이 있다. 구체적으로, 본 발명의 람부탄 잎을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 분획물을 얻는데 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 부탄올(Buthanol), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매; 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 분획물에 있어서, 구체적으로 람부탄 잎 추출물을 크로마토그래피법으로 분획하여 수득할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 크로마토그래피법은 그 종류가 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 성분을 분리 또는 정제하기 위하여 당업계에서 사용되는 방법이라면 모두 제한없이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 크로마토그래피법은 칼럼 크로마토그래피일 수 있고, 보다 더 바람직하게는 중압액체크로마토그래피(MPLC) 또는 고성능 액체크로마토그래피(HPLC), 또는 초고성능 액체크로마토그래피(UHPLC)일 수 있다.
상기 크로마토그래피법은 수율 및 순도를 고려하여 1회 내지 5회 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 람부탄 잎 추출물을 크로마토그래피법으로 분획 시 이동상 또는 전개 용매는 물, 유기 용매 또는 이의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물과 비극성 용매의 혼합용매를 사용할 수 있다.
상기 비극성 용매는 그 종류가 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 메탄올 또는 아세토니트릴일 수 있고, 가장 바람직하게는 메탄올일 수 있다.
상기 크로마토그래피법은 물과 비극성 용매를 이동상으로 하여 농도구배에 따라 순차적으로 전개하여 수행될 수 있으며, 이때 상기 물과 비극성 용매의 비율을 100:0으로부터 0:100까지 순차적으로 변화시켜가며 크로마토그래피법이 수행될 수 있다.
본 발명에서 “모발”은 각질화된 상피세포로 이루어져 피부 표면으로 나오는 실 모양으로 된 구조물을 지칭하며, 체모와 두발을 모두 포함한다.
본 발명에서 “탈모”는 비정상적인 모발의 유실로 인해 정상적으로 모발이 존재해야할 부위에 모발이 존재하지 않거나 정상적인 상태 보다 모발의 수가 감소하거나 가늘어지는 상태(condition)를 의미하며, 탈모 증상과 혼용되어 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 탈모는 영양장애성 탈모증, 내분비장애성 탈모증, 혈관장애성 탈모증, 장년성 탈모증, 결발성 탈모증, 원형 탈모증, 신경성 탈모증, 비강성 탈모증, 트리코틸로 마니아, 악성탈모증, 여성형 탈모증, 남성형 탈모증, 안드로겐성 탈모증, 휴지기 탈모증, 두부 백선, 전두 탈모증, 감모증, 유전성 단순 감모증, 전신 탈모증, 약제성 탈모증, 기계적 탈모증, 외상성 탈모증, 압박성 탈모증, 생장기 탈모증, 매독성 탈모증, 지루 탈모증, 증후성 탈모증, 반흔성 탈모증 또는 선천성 탈모증을 포함하나 반드시 이에 제한되지 않는다. 탈모는 발생의 직간접적인 원인을 불문하고 탈모로 분류될 수 있는 모든 증상을 포함하는 의미로서 이해되어야 한다.
본 발명에서 상기 탈모는 바람직하게는 안드로겐성 탈모(Androgenic alopecia)일 수 있다.
본 발명에서, "탈모 방지"는 탈모와 연관된 하나 이상의 증상의 발생 또는 발병이 억제되거나 지연되는 모든 행위를 의미하며, 반드시 탈모의 완전한 발병 억제에 국한되지 않는다.
본 발명에서, "발모 촉진" 또는 "모발 성장 촉진"은 모발의 생성 또는 성장에 직간접적으로 기여하는 모든 현상을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 모낭 모유두 세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDPC)의 증식을 촉진할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 모낭 모유두 세포는 안드로겐성 탈모증 증상과 관련된 모유두세포일 수 있다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물은 모발 건강 개선 효과를 가지며, 구체적으로 모발 굵기 증가, 모발 탄력 강화, 모발 볼륨감 강화 및 모발 수 증가로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 모발 건강 개선 효과를 나타낼 수 있다.
구체적으로, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물은 모발이 탈락한 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물은 모발이 성겨지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물은 모발이 가늘어지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물은 탈모방지 또는 개선의 관점에서 모발의 성장을 유지하고 모발이 가늘어지는 현상을 방지하는 것일 수 있다.
상기 "건강기능식품"이란, 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안정청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 액상제제, 음료 등 다양한 형태로 제제화되어 식품에 첨가할 수 있다. 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품 조성물 및 건강기능식품 조성물을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 식품 조성물 및 건강기능식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 람부탄 잎 추출물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 상기 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 식품 조성물 및 건강기능식품 조성물은 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 식품학적 유효량 및 식품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물 및 건강기능식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 예를 들어 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제 등을 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제, 타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능성 식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 외에 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 건강식품 및 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품 및 식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 건강식품 및 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
상기 식품 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 식품학적으로 허용되는 제형으로 제조될 수 있고, 예를 들어, 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 또는 음료의 제형으로 제조될 수 있다.
람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
본 발명은 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물(tannins)을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 상기 탄닌계 화합물이 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서, "람부탄 잎 추출물", "분획물", "탄닌계 화합물", "탈모 방지", "모발 성장 촉진" 또는 "발모 촉진" 등은 앞서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물에 대해 상세하게 기재한 바와 동일하다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 모발의 생성 및 성장을 촉진하여, 탈모 방지 또는 개선에 우수한 효과를 나타낸다. 구체적으로 모발 굵기 증가, 모발 탄력 강화, 모발 볼륨감 강화 및 모발 수 증가로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 모발 건강 개선 효과를 나타낼 수 있다.
구체적으로, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 모발이 탈락한 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 모발이 성겨지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 모발이 가늘어지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 탈모방지 또는 개선의 관점에서 모발의 성장을 유지하고 모발이 가늘어지는 현상을 방지하는 것일 수 있다.
본 발명의 “화장료 조성물”은 상술한 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 화장품학적 유효량(Cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.
본 명세서에서 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 탈모장비, 발모촉진 또는 모발 건강 증진 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(Foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 콤팩트, 파우더, 아이쉐도우, 스프레이, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드, 젤, 등과 같은 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 립스틱, 립글로스, 립픽스 및 아이브로우 펜슬 등의 화장품, 또는 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 헤어샴푸 및 헤어린스 등의 세정제로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알콜 설페이트, 지방족 알콜 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알콜, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 헤어샴푸인 경우에는 본 발명의 발명의 탄닌계 화합물에 증점제, 계면활성제, 점도 조절제, 보습제, pH 조절제, 방부제, 에센셜 오일 등과 같이 샴푸를 조성하기 위한 베이스 성분들이 혼합될 수 있다. 상기 증점제로는 CDE가 사용될 수 있고, 상기 계면활성제로는 음이온 계면활성제인 LES와, 양쪽성 계면활성제인 코코 베타인이 사용될 수 있고, 상기 점도조절제로는 폴리 쿼터가 사용될 수 있으며, 상기 보습제로는 글리세린이 사용될 수 있고, 상기 pH 조절제로는 구연산, 수산화나트륨이 사용될 수 있다. 상기 방부제로는 자몽 추출물 등이 사용될 수 있고, 이 외에도 시더우드, 페퍼민트, 로즈마리 등의 에센셜 오일과 실크 아미노산, 펜타올 또는 비타민 E가 첨가될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 람부탄 추출물 또는 이의 분획물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 의약외품 조성물
본 발명은 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물(tannins)을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 상기 탄닌계 화합물이 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물에서, "람부탄 잎 추출물", "분획물", "탄닌계 화합물", "탈모", 탈모 방지", "모발 성장 촉진" 또는 "발모 촉진" 등은 앞서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물에 대해 상세하게 기재한 바와 동일하다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 의약외품 조성물은 모발 건강 개선 효과를 가지며, 구체적으로 모발 굵기 증가, 모발 탄력 강화, 모발 볼륨감 강화 및 모발 수 증가로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 모발 건강 개선 효과를 나타낼 수 있다.
구체적으로, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 의약외품 조성물은 모발이 탈락한 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 의약외품 조성물은 모발이 성겨지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 의약외품 조성물은 모발이 가늘어지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 의약외품 조성물은 탈모 방지 또는 개선의 관점에서 모발의 성장을 유지하고 모발이 가늘어지는 현상을 방지하는 것일 수 있다.
본 발명에서, "개선"은 본 발명의 조성물에 의해 탈모와 연관된 하나 이상의 증상의 정도가 감소되거나 호전되거나 진행이 지연되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서, "예방"은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 탈모 증상이 상기 의약외품 조성물을 사용하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.
본 발명에서, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람 또는 동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
상기 의약외품 조성물은 피부외용제일 수 있으며, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물
본 발명은 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물(tannins)을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 상기 탄닌계 화합물이 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에서, "람부탄 잎 추출물", "분획물", "탄닌계 화합물", "탈모 방지", "탈모", "모발 성장 촉진" 또는 "발모 촉진" 등은 앞서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물에 대해 상세하게 기재한 바와 동일하다.
본 발명에서 “모발”은 각질화된 상피세포로 이루어져 피부 표면으로 나오는 실 모양으로 된 구조물을 지칭하며, 체모와 두발을 모두 포함한다.
본 발명에서 “탈모”는 피부로부터 모발이 탈락하는 현상 또는 모발이 성기거나 가늘어지는 상태를 지칭하며, 탈모 증상과 혼용되어 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 탈모는 영양장애성 탈모증, 내분비장애성 탈모증, 혈관장애성 탈모증, 장년성 탈모증, 결발성 탈모증, 원형 탈모증, 신경성 탈모증, 비강성 탈모증, 트리코틸로 마니아, 악성탈모증, 여성형 탈모증, 남성형 탈모증, 안드로겐성 탈모증, 휴지기 탈모증, 두부 백선, 전두 탈모증, 감모증, 유전성 단순 감모증, 전신 탈모증, 약제성 탈모증, 기계적 탈모증, 외상성 탈모증, 압박성 탈모증, 생장기 탈모증, 매독성 탈모증, 지루 탈모증, 증후성 탈모증, 반흔성 탈모증 또는 선천성 탈모증을 포함하나 반드시 이에 제한되지 않는다. 탈모는 발생의 직간접적인 원인을 불문하고 탈모로 분류될 수 있는 모든 증상을 포함하는 의미로서 이해되어야 한다.
본 발명에서 상기 탈모는 바람직하게는 안드로겐성 탈모(Androgenic alopecia)일 수 있다.
상기 "치료"는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
본 발명에서, "발모 촉진" 또는 "모발 성장 촉진"은 모발의 생성 또는 성장에 직간접적으로 기여하는 모든 현상을 의미한다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학 조성물은 모발 건강 개선 효과를 가지며, 구체적으로 모발 굵기 증가, 모발 탄력 강화, 모발 볼륨감 강화 및 모발 수 증가로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 모발 건강 개선 효과를 나타낼 수 있다.
구체적으로, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학 조성물은 모발이 탈락한 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학 조성물은 모발이 성겨지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학 조성물은 모발이 가늘어지는 현상이 나타나는 상태에서 모발의 생성 및 성장을 촉진하는 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학 조성물은 예방 또는 개선의 관점에서 모발의 성장을 유지하고 모발이 가늘어지는 현상을 방지하는 것일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 "개체"는 탈모가 발병하였거나 발병할 수 있는 모든 동물을 의미하며, 전형적으로 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 이용한 치료로 유익한 효과를 나타낼 수 있는 동물일 수 있으나, 탈모의 증상을 갖거나 이러한 증상을 가질 가능성이 있는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 인간을 포함하는 동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류 (예를 들면, 원숭이, 예를 들어 사이노몰구스 (cynomolgous) 원숭이 및 침팬지)를 비롯한 포유동물을 나타낸다.
본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하고 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 탈모 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
또한, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 생리식염수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜 및 리퀴드 파라핀으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물에 독립적으로 추가될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001~100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01~35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07~7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7~2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 이용한 탈모 치료방법, 이의 용도
본 발명은 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 탈모의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 탄닌계 화합물을 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 탈모의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 탈모의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제에 있어 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물의 용도를 제공한다.
본 발명은 탈모의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제에 있어 탄닌계 화합물의 용도를 제공한다.
상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물(tannins)을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 상기 탄닌계 화합물이 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 치료 방법에서, "람부탄 잎 추출물", "분획물", "탄닌계 화합물", "탈모 방지", "탈모", "모발 성장 촉진" 또는 "발모 촉진" 등은 앞서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물에 대해 상세하게 기재한 바와 동일하다.
본 발명의 약학 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 탈모를 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나, 기존의 탈모 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.
본 발명의 용어 "투여"란 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여는 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양으로 투여할 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
탄닌계 화합물을 포함하는 조성물
본 발명은 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 식품, 화장료, 의약외품 및/또는 약학적 용도로 활용 가능하다.
본 발명의 조성물에서, "람부탄 잎 추출물", "분획물", "탄닌계 화합물", "탈모 방지", "모발 성장 촉진" 또는 "발모 촉진" 등은 앞서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품 조성물에 대해 상세하게 기재한 바와 동일하다.
또한, 상기 탄닌계 화합물은 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 모낭 모유두 세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDPC)의 증식을 촉진하는 것일 수 있다.
본 발명의 탄닌계 화합물은 상기 모유두 세포의 세포 분열을 촉진할 수 있고, 구체적으로, 상기 모유두 세포의 세포사이클 중 G2/M기의 비율을 증가시킬 수 있다.
상기 모유두 세포는 모낭의 기저부에 위치하며, 혈관 형성 유도하고, 주변의 모낭을 구성하는 세포에 산소와 영양을 공급하는 것으로, 모유두 세포의 증식이 촉진되면 모발이 건강해지고 모발 성장이 촉진될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는, 상기 탄닌계 화합물을 인체유래의 모낭 모유두 세포에 처리한 뒤, 상기 탄닌계 화합물을 미처리한 대조군 대비 상기 모유두 세포의 증식률을 측정하였다. 그 결과, 본 발명의 탄닌계 화합물을 처리한 이후, 증식률이 약 50% 이상 증가하는 것으로 확인되었다. 이에, 본 발명의 탄닌계 화합물을 이용하면 모유두 세포의 증식을 촉진하여 발모를 촉진하고 탈모를 방지할 수 있음을 알 수 있었다.
또한, 본 발명의 구체적인 실시예에서는, 상기 탄닌계 화합물을 모유두 세포에 처리한 뒤, 상기 모유두 세포의 세포사이클을 분석하였다. 그 결과, 코릴라긴 처리가 G2/M기 비율을 농도 의존적으로 증가시켜, 모유두 세포의 분열을 촉진하고, 모낭세포 증식과 모발 성장을 향상시키는 것으로 확인되었다.
또한, 본 발명의 탄닌계 화합물은 모발성장능이 억제 또는 약화된 경우에도 발모 촉진 또는 탈모 방지의 활성을 갖는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는, 쥐에 테스토스테론을 처리하여 모발성장능을 억제시킨 후, 탄닌계 화합물을 쥐에 경구 투여하였고, 상기 쥐의 모발 길이 변화를 관찰하였다. 그 결과, 테스토스테론에 의하여 쥐의 모발성장능이 억제된 경우에, 탄닌계 화합물이 미처리된 대조군 대비, 탄닌계 화합물 처리시 모발 성장이 우수한 것으로 확인되었다.
상술한 본 발명의 탄닌계 화합물은 상기와 같은 활성을 가짐으로써 발모 촉진 또는 탈모를 방지하는 효능을 발휘할 수 있다.
본 발명의 탄닌계 화합물은 상술한 조성물 내에 0.01 μM 내지 1000 μM의 농도로 포함될 수 있으며, 구체적으로, 본 발명의 탄닌계 화합물은 0.01 μM 내지 1000 μM; 0.05 μM 내지 800 μM, 0.05 μM 내지 700 μM, 0.05 μM 내지 600 μM, 0.05 μM 내지 500 μM, 0.05 μM 내지 300 μM, 0.05 μM 내지 200 μM; 0.1 μM 내지 800 μM, 0.1 μM 내지 700 μM, 0.1 μM 내지 600 μM, 0.1 μM 내지 500 μM, 0.1 μM 내지 300 μM, 0.1 μM 내지 200 μM; 1 μM 내지 800 μM, 1 μM 내지 700 μM, 1 μM 내지 600 μM, 1 μM 내지 500 μM, 1 μM 내지 300 μM, 1 μM 내지 200 μM; 5 μM 내지 800 μM, 5 μM 내지 700 μM, 5 μM 내지 600 μM, 5 μM 내지 500 μM, 5 μM 내지 300 μM, 또는 5 μM 내지 200 μM의 농도, 특히 20 μM 내지 40 μM의 농도로 포함되는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 탄닌계 화합물은 갈로탄닌(gallotannins) 유도체를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 인간 모유두세포(Dermal papilla cell)의 증식을 촉진함으로써 탈모 방지, 발모 촉진 또는 모발 생장을 촉진하여 모발 건강을 향상시키는 효과가 있다. 따라서 본 발명의 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탈모방지, 발모촉진, 모발 건강증진을 위한 화장품, 의약품, 의약외품 또는 건강기능식품 등으로 유용하게 활용가능하다.
도 1은 람부탄 잎, 씨앗 및 껍질 추출물의 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 증식률 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 2a는 테스토스테론(Tes) 처리 없이 람부탄 잎 추출물(NLE)의 단독 처리 농도에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 증식률 측정 결과이고, 도 2b는 테스토스테론(Tes) 억제 조건에서의 람부탄 잎 추출물(NLE) 처리 농도에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 증식률 측정 결과이다.
도 3a는 람부탄 잎 추출물 경구 투여 및 테스토스테론 피하 주사에 따른 in vivo 평가 절차를 나타낸 실험 설계도이고, 도 3b는 약물 비투여 대조군(Cont), 테스토스테론 투여군(TS), NLE 저용량군, NLE 고용량군 및 Finasteride 투여군에 따른 동물의 체중 변화를 나타낸 그래프이고, 도 3c는 약물 비투여 대조군(Cont), 테스토스테론 투여군(TS), NLE 저용량군, NLE 고용량군 및 Finasteride 투여군에 따른 전립선 크기를 측정하는 실제 이미지이고, 도 3d는 도 3c에 따른 결과를 데이터화하여 나타낸 그래프이다.
도 4a는 약물 비투여 대조군(Cont), 테스토스테론 투여군(TS), NLE 저용량군, NLE 고용량군 및 Finasteride 투여군에 따른 동물의 모발 성장의 시각적 회복을 확인하기 위한 실제 이미지이며, 도 4b는 실험 종료 후 동물 피부 조직의 염색(H&E staining)을 수행한 결과를 나타낸 이미지이고, 도 4c는 동물의 모낭 수를 나타낸 그래프이고, 도 4d는 동물의 모낭 직경을 나타낸 그래프이다.
도 5a는 람부탄 잎 추출물(NLE) 처리 농도에 따른 Western blot 분석 결과이고, 도 5b는 세포 증식 관련 단백질인 Cyclin D1의 발현 수준을 분석한 결과이고, 도 5c는 세포 증식 관련 단백질인 PCNA의 발현 수준을 분석한 결과이고, 도 5d는 PCNA 및 Loricrin에 대한 면역형광염색을 실시하여 단백질 발현 양상을 시각적으로 나타낸 이미지이다.
도 6a는 람부탄 잎 추출물의 추출 조건에 따른 지표 성분의 함량 분석 결과이고, 도 6b는 람부탄 잎 추출물의 추출조건에 따른 람부탄 잎 추출물의 세포 증식률을 측정한 결과이고, 도 6c는 람부탄 잎 추출물로부터 분획물을 얻기 위해 수행한 컬럼 크로마토그래피(gradient UPLC) 분석 결과이고, 도 6d는 컬럼 분리(fractionation)를 통해 얻어진 각 분획물에 대해 모유두세포 내 세포 증식률을 나타낸 결과이다.
도 7a는 람부탄 잎 추출물(NLE)의 유효 분획 중 모유두세포 증식 효과가 가장 우수했던 Fraction 4에 대한 UPLC-PDA 분석 및 QTOF-MS(ESI+/-) 분석 결과이고, 도 7b는 람부탄 잎 추출물의 유효 분획(Fraction 4)으로부터 분리된 주요 성분에 대한 고분해능 질량 분석(HRESIMS) 결과이다.
도 8a는 람부탄 잎 추출물의 유효 분획(Fraction 4)으로부터 분리된 갈로탄닌계 화합물인 Corilagin의 구조 확인을 위해 수행된 1H-NMR 및 13C-NMR 스펙트럼 분석 결과이고, 도 8b는 람부탄 잎 추출물의 유효 분획(Fraction 4)으로부터 분리된 갈로탄닌계 화합물인 Corilagin의 자외선 흡수 특성을 확인하기 위해 수행된 UV 스펙트럼 분석 결과이고, 도 8c는 람부탄 잎 추출물의 유효 분획(Fraction 4)로부터 분리된 갈로탄닌계 화합물인 Corilagin의 화학 구조(C27H22O18)를 나타낸 도면이다.
도 9는 탄닌계 화합물의 표준품 6종의 화학구조를 나타낸 것이다. 구체적으로, 게라닌(Geranin), 케불라그산(Chebulagic acid), 케불린산(Chebulinic acid), 푸니칼라진(Punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(Corilagin)의 화학구조를 순서대로 나타낸 것이다.
도 10은 람부탄 잎으로부터 탄닌계 화합물 성분을 분리하는 과정 및 탄닌계 화합물의 표준품을 확보하는 과정을 나타낸 결과이다.
도 11은 탄닌계 화합물 6종 각각의 모유두 세포의 증식 촉진 활성을 평가한 실험결과이다.
도 12a 내지 도 12c는 탄닌계 화합물이 인간 모유두세포의 세포사이클에 미치는 영향을 분석한 실험 결과이다.
도 13a는 탄닌계 화합물의 발모 촉진 또는 탈모 방지의 활성을 확인하기 위해 수행한 in vivo 동물 실험 결과의 실제 이미지이고, 도 13b는 이에 대한 실험 결과를 데이터화하여 나타낸 그래프이다.
도 14a는 테스토스테론 투여에 의해 모발성장능이 억제된 경우에 탄닌계 화합물의 발모 촉진 또는 탈모 방지의 활성을 확인하기 위해 수행한 in vivo 동물 실험 결과의 실제 이미지이고, 도 14b는 이에 대한 실험 결과를 데이터화하여 나타낸 그래프이다.
도 15는 람부탄의 잎에 존재하는 기능성 지표 성분(코릴라긴 및 케불라그산)의 상대적 피크 강도를 산출하여 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 테스토스테론(Testosterone)은 'TS' 또는 'Tes'로 약기하며, 이하 동일한 의미로 사용된다.
[실시예 1] 람부탄 잎 추출물(NLE) 제조
람부탄 잎을 한국생명공학연구원 해외생물소재센터로부터 분양받아 하기 표 1에 따른 조건으로 추출장치 shaking water bath를 이용해 람부탄 잎 추출물을 제조하였다. 구체적으로 람부탄 잎과 하기 표 1에 따른 추출용매를 1:10 (람부탄 잎 2g: 추출용매 30mL)의 질량비로 혼합하여 하기 표 1의 온도 및 시간으로 추출하였다. 이후 추출물을 감압여과시켜 여과된 추출물을 감압농축시킨 후 -80℃에서 72시간 동안 동결 건조하여 dimethyl sulfoxide(DMSO)에 용해시켜 사용하였다.
실시예 추출용매 온도(℃) 시간(h)
1-1 50% 에탄올 수용액 60 2
1-2 30% 에탄올 수용액 60 2
1-3 10% 에탄올 수용액 60 2
1-4 물(0% 에탄올 수용액) 60 2
1-5 50% 에탄올 수용액 60 4
1-6 30% 에탄올 수용액 60 4
1-7 10% 에탄올 수용액 60 4
1-8 물(0% 에탄올 수용액) 60 4
1-9 50% 에탄올 수용액 60 6
1-10 30% 에탄올 수용액 60 6
1-11 10% 에탄올 수용액 60 6
1-12 물(0% 에탄올 수용액) 60 6
1-13 50% 에탄올 수용액 40 2
1-14 30% 에탄올 수용액 40 2
1-15 10% 에탄올 수용액 40 2
1-16 물(0% 에탄올 수용액) 40 2
1-17 50% 에탄올 수용액 40 4
1-18 30% 에탄올 수용액 40 4
1-19 10% 에탄올 수용액 40 4
1-20 물(0% 에탄올 수용액) 40 4
1-21 50% 에탄올 수용액 40 6
1-22 30% 에탄올 수용액 40 6
1-23 10% 에탄올 수용액 40 6
1-24 물(0% 에탄올 수용액) 40 6
1-25 50% 에탄올 수용액 20 2
1-26 30% 에탄올 수용액 20 2
1-27 10% 에탄올 수용액 20 2
1-28 물(0% 에탄올 수용액) 20 2
1-29 50% 에탄올 수용액 20 4
1-30 30% 에탄올 수용액 20 4
1-31 10% 에탄올 수용액 20 4
1-32 물(0% 에탄올 수용액) 20 4
1-33 50% 에탄올 수용액 20 6
1-34 30% 에탄올 수용액 20 6
1-35 10% 에탄올 수용액 20 6
1-36 물(0% 에탄올 수용액) 20 6
[비교예 1] 람부탄 껍질 추출물
실시예 1-5의 람부탄 잎 대신에 람부탄 껍질을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1-5와 동일한 방법으로 50%(v/v) 에탄올 수용액에 1:10 (원물 15g:50% 주정 150mL) 비율로 람부탄 껍질과 혼합한 후 50℃ shaking water bath에 6시간 동안 추출하여 람부탄 껍질 추출물을 제조하였다.
[비교예 2] 람부탄 씨앗 추출물
실시예 1-5의 람부탄 잎 대신에 람부탄 씨앗을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1-5와 동일한 방법으로 50%(v/v) 에탄올 수용액에 1:10 (원물 15g:50% 주정 150mL) 비율로 람부탄 씨앗과 혼합한 후 50℃ shaking water bath에 6시간 동안 추출하여 람부탄 씨앗 추출물을 제조하였다.
[실시예 2] 인간 모유두세포에서의 세포 증식 억제 회복 효능 평가
모유두 세포(human hair follicle dermal papilla cell, HHFDPC)는 모낭의 기저부에 위치하며, 혈관 형성 유도하고, 주변의 모낭을 구성하는 세포에 산소와 영양을 공급하는 것으로, 모유두 세포의 증식이 촉진되면 모발이 건강해지고 모발 성장이 촉진될 수 있다. 이에 람부탄 구성 성분(껍질, 씨앗)에 따른 추출물의 발모 촉진 또는 탈모 방지의 효능을 평가하기 위하여 람부탄 추출물 미처리한 대조군(Cont), 테스토스테론 처리군(Tes), 및 비교예 1 내지 2의 세포 증식률(proliferation rate, % of control)을 비교 분석하였다.
구체적으로, 인간 모유두세포인 HFDPCs(Human Follicle dermal papilla cells)에서 실시예 1-5, 비교예 1 및 비교예 2의 람부탄 추출물을 각각 50μg/mL 농도로 1시간 동안 전처리한 후, HFDPCs의 증식을 억제하는 테스토스테론(Tes)을 100μM 농도로 72시간동안 처리하여 세포증식 억제를 유도하였다. 이후 세포증식률을 식별하는 MTS(tetrazolium compound) 시약을 1시간 처리하여 495 nm 흡광도에서 세포 증식률을 확인하였으며, 그 결과는 하기 표 2 및 도 1에 나타내었다.
구분 세포 증식률
(% of control)
Cont 100.00
Tes 55.99
람부탄 잎 추출물(NLE) (실시예 1-5) 119.42
람부탄 껍질 추출물 (비교예 1) 59.25
람부탄 씨앗 추출물 (비교예 2) 60.29
표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 람부탄 잎 추출물(NLE)은 테스토스테론(Tes)에 의해 감소된 세포를 정상수준에 동등 또는 그 이상으로 유의적으로 회복시키는 효과를 나타내었다. 이에 반해 람부탄 씨앗 및 껍질 추출물은 테스토스테론에 의해 감소된 세포의 증식을 유의적으로 회복하지 못하였다.
이러한 결과로부터, 람부탄 씨앗, 껍질 추출물은 모발의 생장 및 발모 촉진 효능이 없으며, 본 발명에 따른 람부탄 잎 추출물이 모유두세포 (Dermal papilla cell)의 세포증식을 촉진하여 발모 촉진, 모발의 생장 및 건강한 두피 생육을 촉진함으로써 탈모의 진행을 완화시키고, 모발의 양모/육모, 성장을 현저히 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
[실시예 3] 람부탄 잎 추출물의 처리 농도에 따른 인간 모유두세포에서의 세포 증식 억제 회복효능 평가
(1) 람부탄 잎 추출물(NLE) 단독 처리 농도에 따른 세포 증식률 비교
인간 모유두세포인 HFDPCs(Human Follicle dermal papilla cells)에서 테스토스테론 처리 없이, 실시예 1-5의 람부탄 잎 추출물을 6.25 μg/mL, 12.5 μg/mL, 25 μg/mL 및 50 μg/mL 농도로 각각 1시간 동안 전처리한 후, 세포증식률을 식별하는 MTS(tetrazolium compound) 시약을 1시간 처리하여 495nm 흡광도에서 세포 증식률을 확인하였으며, 그 결과는 하기 표 3 및 도 2a에 나타내었다.
구분 농도(μg/mL) 세포 증식률(% of control)
대조군(Cont) - 100.00
람부탄 잎 추출물
(NLE, 실시예 1-5)		 6.25 99.26
12.5 102.97
25 106.69
50 117.39
표 3 및 도 2a에 따르면, 본 발명에 따른 람부탄 잎 추출물은 인간 모유두 세포(HFDPCs)에 대해 농도별(6.25, 12.5, 25 및 50 μg/mL)로 처리한 결과, 6.25, 12.5 및 25 μg/mL 농도에서는 대조군(Cont) 대비 세포 증식률이 유사하거나 소폭 증가하였고, 25 μg/mL 처리군에서는 약 107%의 증식률을 나타내어 통계적으로 유의한 증가(p<0.01)를 보였다. 또한, 고농도인 50 μg/mL 처리군에서는 약 117%의 증식률(p<0.001)을 나타내어, 정상 조건에서도 독성 없이 세포 증식을 유의하게 촉진함을 확인할 수 있었다.
(2) 테스토스테론(Tes) 억제 조건에서의 NLE 처리 농도에 따른 세포 증식률 비교
인간 모유두세포인 HFDPCs(Human Follicle dermal papilla cells)에서 실시예 1-5의 람부탄 잎 추출물을 6.25 μg/mL, 12.5 μg/mL, 25 μg/mL 및 50 μg/mL 농도로 각각 1시간 동안 전처리한 후, HFDPCs의 증식을 억제하는 테스토스테론(Tes)을 100μM 농도로 72시간동안 처리하여 세포증식 억제를 유도하였다. 이후 세포증식률을 식별하는 MTS(tetrazolium compound) 시약을 1시간 처리하여 495nm 흡광도에서 세포 증식률을 확인하였으며, 그 결과는 하기 표 4 및 도 2b와 같다.
구분 농도 세포 증식률(% of control)
미처리군(Cont) - 100.00
테스토스테론 처리군(Tes) 100μM 77.79
람부탄 잎 추출물(NLE, 실시예 1-5) 6.25 μg/mL 91.17
12.5 μg/mL 100.19
25 μg/mL 119.42
50 μg/mL 150.56
표 4 및 도 2b에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 람부탄 잎 추출물은 인간 모유두세포의 성장을 유의적으로 증가시켰고, 테스토스테론에 의해 감소된 세포의 증식을 유의적으로 회복하였다. 특히, 람부탄 잎 추출물 50μg/mL의 인간 모유두세포 증식률은 150.56%로 테스토스테론에 의해 감소된 세포증식률을 72% 이상 증가시켜 우수한 세포증식 회복능을 나타내는 것을 확인하였다. 또한, 람부탄 잎 추출물의 함량 농도가 높을수록 세포증식 회복능 또한 향상되는 것으로 나타났다.
따라서, NLE는 정상 상태에서도 모유두 세포 증식을 유도할 뿐만 아니라, 테스토스테론에 의해 억제된 세포 증식도 유의하게 회복시킬 수 있어, 이를 통해 NLE가 탈모 예방 및 발모 촉진을 위한 유효 성분으로 활용 가능함을 확인하였다.
[실시예 4] 람부탄 잎 추출물(NLE)에 따른 체중 변화 및 전립선 독성 평가( in vivo 안전성 평가)
람부탄 잎 추출물(Nephelium lappaceum leaf extract, NLE)의 장기 복용 시 생체에 미치는 영향을 확인하고, 특히 체중 변화 및 전립선 크기 변화 여부를 기반으로 in vivo 독성 가능성을 확인하였으며, 그 결과는 도 3a 내지 도 3d에 나타내었다.
도 3a를 참고하여, 6주령 수컷 생쥐(C57BL/6)를 무작위로 5개 군으로 나눈 후, 약물 비투여 대조군(Cont), 테스토스테론 투여군(TS 20 mg/kg/일, 피하주사), NLE 저용량군(10 mg/kg/일, 경구투여), NLE 고용량군(NLE 50 mg/kg/일, 경구투여) 및 Finasteride 투여군(Fina, 20 mg/kg/일, 경구투여)으로 구성하였다.
6주령 수컷 생쥐(C57BL/6)에 NLE 또는 Fina를 13일간 경구 투여하였고, 이후 TS를 2주간 주 5일, 총 10일 동안 피하 주사하였다. 0, 3, 6, 10, 14 및 17일째에 생쥐의 체중을 측정하고, 실험 종료 후 전립선을 적출하여 무게 및 크기(직경)를 측정하였다.
(1) 체중 변화 평가
도 3b에 따르면, NLE 10 및 50 mg/kg 처리군에서는 TS 단독 처리군 대비 체중 감소가 완화되었으며, 대조군(Cont)과 유사한 수준의 체중을 유지하는 경향을 보였다. 이를 통해 NLE가 체중 유지 측면에서 부작용이 없음을 확인하였다.
(2) 전립선 독성 여부
도 3c 및 도 3d에 따르면, NLE 저농도(10 mg/kg) 처리군은 NLE 고농도(50 mg/kg) 처리군에 비해 전립선의 크기가 증가한 것으로 나타났으나, 그 차이가 미미하였고, 대조군(cont) 및 TS 투여군과 비교하여도 유의한 차이가 관찰되지 않아, 본 발명의 조성물이 전립선 비대에 대한 부작용이 없음을 알 수 있었다.
따라서, 람부탄 잎 추출물(NLE)은 장기 경구투여 시 체중 감소나 전립선 비대와 같은 부작용 없이 안정적으로 투여가 가능하며, 모발 성장 또는 탈모 억제 효능과 병행하여 생체 안전성이 우수함을 확인하였다.
[실시예 5] 람부탄 잎 추출물의 테스토스테론 유도 탈모 억제 회복 효능 평가
람부탄 잎 추출물(Nephelium lappaceum leaf extract, NLE)이 테스토스테론(Testosterone, TS)에 의해 억제된 모발 성장 능력을 회복시키는 효과가 있는지 평가하였으며, in vivo 생쥐 모델에서의 발모 효과와 조직학적 분석을 포함하였다.
6주령 수컷 생쥐(C57BL/6)를 무작위로 5개 군으로 나눈 후, 약물 비투여 대조군(Cont), 테스토스테론 단독 투여군(TS 20 mg/kg/일, 피하주사), NLE 저용량군(10 mg/kg/일, 경구투여), NLE 고용량군(NLE 50 mg/kg/일, 경구투여) 및 Finasteride 투여군(Fina, 20 mg/kg/일, 경구투여)으로 구성하였다.
6주령 수컷 생쥐(C57BL/6)의 등 부위 털을 제모한 후, NLE 또는 Finasteride를 13일간 경구 투여하고, 이후 TS(20 mg/kg)를 2주간 주 5일, 총 10일동안 피하주사하여 탈모 모델을 유도하였다. 모발 회복 상태는 0, 3, 6, 11, 14, 17일째에 촬영하여 도 4a에 나타내었고, 실험 종료 후 피부 조직을 적출하여 조직 염색(H&E staining)을 수행한 결과를 도 4b에 나타내었고, 그에 따른 모낭 수 및 직경을 각각 정량 분석하여 도 4c 및 도 4d에 나타내었다.
(1) 모발 성장 시각적 회복 및 조직 염색(H&E staining) 분석
도 4a에 따르면, Day 17 기준으로 NLE 10 및 50 mg/kg 투여군에서는 모발이 TS 단독군 및 Fina 투여군 대비 현저히 두텁고 고르게 재생된 것을 확인하였다.
또한, 도 4b에 따르면, H&E 염색 결과, TS 투여군에서는 모낭 수와 깊이가 감소하였으나, NLE 처리군에서는 모낭이 보다 굵고 깊게 형성되었으며, 특히 50 mg/kg 처리 시 가장 뚜렷한 회복 경향을 나타냈다.
(2) 모낭 수 및 직경 정량 분석
도 4c에 따르면, TS 처리에 의해 감소된 모낭 수는 NLE 10 및 50 mg/kg 투여에 의해 각각 유의하게 증가하였으며, 특히 NLE 10 mg/kg 투여군은 대조군(cont)과 유사한 수준으로 회복되어 모낭 수 회복 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
또한, 도 4d에 따르면, TS 처리에 의해 얇아진 모낭이 NLE 10 및 50 mg/kg 투여에 의해 모두 굵어지는 양상을 보였으며, NLE 10 mg/kg 투여군은 대조군(cont)과 유사한 굵기로 회복되었고, NLE 50 mg/kg 투여군은 대조군(cont) 보다 더 굵어진 것을 확인하였다(p<0.01).
따라서, 람부탄 잎 추출물(NLE)은 테스토스테론에 의해 억제된 모낭 발달을 유의미하게 회복시킬 수 있으며, 모낭 수 및 직경 증가를 유도함으로써 탈모 억제 및 발모 촉진을 위한 유효 성분으로 활용 가능함을 확인하였다.
[실시예 6] 람부탄 잎 추출물의 테스토스테론 유도 모발성장 억제 회복 효과 분석 (단백질 발현 및 조직 면역염색)
람부탄 잎 추출물(Nephelium lappaceum leaf extract, NLE)이 테스토스테론(Testosterone, TS)에 의해 억제된 모유두 세포의 증식 관련 단백질 발현 및 피부장벽 단백질 발현을 회복시키는지를 확인하고자, Western blot 분석 및 면역형광조직염색(immunofluorescence staining)을 수행하였다.
6주령 수컷 C57BL/6 생쥐에 대해 앞선 실시예 4와 동일하게 TS(20 mg/kg, 피하 주사)로 모발 성장 억제 모델을 유도하였으며, NLE는 10 mg/kg 및 50 mg/kg로 10일간 경구 투여하였다. 비교군으로는 Finasteride(20 mg/kg) 처리군과 무처리 대조군(Cont)을 포함하였다.
(1) Western blot 분석: 단백질 발현 회복
피부 조직에서 단백질을 추출하여 세포 증식 관련 단백질인 Cyclin D1 및 PCNA의 발현 수준을 분석하였으며, β-actin을 내부 대조군으로 사용하였으며, 이에 대한 결과를 도 5a 내지 도 5c에 나타내었다.
도 5a 내지 도 5c에 따르면, Cyclin D1과 PCNA 발현은 TS 처리에 의해 현저히 감소되었으나, NLE 투여군에서 농도 의존적으로 회복되었다.
정량 분석 결과, Cyclin D1은 50 mg/kg NLE 투여군에서 p<0.05 수준으로 유의하게 증가하였고, PCNA 역시 유의하게 회복됨을 확인하였다.
(2) 면역형광조직염색
동일한 조건의 피부 절편을 대상으로 PCNA 및 Loricrin에 대한 면역형광 염색을 실시하였으며, 핵은 DAPI로 염색하고 병합(Merge) 이미지를 통해 단백질 발현 양상을 시각적으로 분석하였으며, 이에 대한 결과를 도 5d에 나타내었다.
도 5d에 따르면, PCNA(녹색)의 TS 처리군에서는 표피 하부의 모낭 부위에서 발현이 현저히 줄어들었으나, NLE 10 mg/kg 및 50 mg/kg 처리군에서는 유의하게 발현되며, 모낭 전반에 걸쳐 광범위하게 분포하는 것으로 나타났다. 또한, Loricrin(적색)은 표피 분화 마커로서, TS 처리군에서 발현이 약화된 반면, NLE 10 mg/kg 및 50 mg/kg 처리군과 Finasteride 처리군에서는 발현이 회복되어 표피층의 건강한 분화 상태를 반영하였다.
따라서, 람부탄 잎 추출물(NLE)은 테스토스테론에 의해 억제된 세포 증식 단백질(Cyclin D1, PCNA)의 발현을 회복시키며, 표피 분화 단백질(Loricrin) 또한 정상 수준으로 복구시키는 효과를 나타내었다. 이는 NLE가 모낭 내 세포 활성을 증진시키고, 피부장벽 유지에도 기여함으로써, 탈모 억제 및 발모 촉진 기능을 동시에 수행할 수 있는 유효 성분으로 활용 가능함을 확인하였다.
[실시예 7] 람부탄 잎 추출물 제조의 최적 조건 스크리닝
람부탄 잎 추출물을 제조하는 최적 조건을 스크리닝하기 위해 실시예 1에 따른 추출 용매, 추출 시간 및 온도 조건에 따른 람부탄 잎 추출물의 수율과 지표 성분 함량 및 세포증식률을 분석하였다. 람부탄 잎 추출물의 수율 분석 결과는 하기의 표 5에 나타내었으며, 지표 성분(gallotannins) 함량 분석 결과는 하기의 표 6 및 도 6a, 세포증식률을 분석한 결과는 도 6b에 나타내었다.
추출 수율(%)
추출 시간 온도(℃) 추출 용매
물(0%
에탄올)		 10%
에탄올 수용액		 30%
에탄올 수용액		 50%
에탄올 수용액
2시간 20 7.1 7.4 9.3 6.8
40 8.8 12.3 12.3 10.1
60 12.4 14.6 13.3 11.2
4시간 20 9.1 8.2 9.6 9.0
40 11.1 11.7 14.0 12.0
60 12.4 12.7 14.9 16.1
지표성분 갈로탄닌(gallotannins) 함량(Area)
추출 시간 온도(℃) 물(0%
에탄올)		 10%
에탄올 수용액		 30%
에탄올 수용액		 50%
에탄올 수용액
2시간 20 222416 164534 171243 144572
40 187801 171576 180508 262192
60 173790 345010 368227 293943
4시간 20 157421 154855 336498 259906
40 77287 101563 178226 232830
60 156072 183336 377224 330034
표 5, 표 6, 도 6a 및 도 6b의 분석 결과를 통해 실시예 1-3의 추출조건(10% 에탄올 수용액, 60℃, 2시간 추출), 실시예 1-6의 추출 조건(30% 에탄올 수용액, 60℃, 4시간 추출), 실시예 1-18의 추출 조건(30% 에탄올 수용액, 40℃, 4시간 추출), 실시예 1-5의 추출 조건(50% 에탄올 수용액, 60℃, 4시간 추출)이 높은 수율과 성분함량을 나타내는 최적 조건임을 확인하였다.
[실시예 8] 람부탄 잎 추출물의 분획별 모유두세포 내 세포증식능 평가
람부탄 잎 추출물(Nephelium lappaceum leaf extract, NLE)의 주요 유효 성분이 포함된 유효 분획을 도출하고자, 컬럼 분리(fractionation)를 통해 얻어진 각 분획물에 대해 모유두세포 내 세포증식능을 분석하였으며, 이에 따른 결과를 도 6c 및 6d에 나타내었다.
본 발명자는 해외생물소재센터에서 제공받은 인도네시아 상 건조된 람부탄 (Nephelium lappaceum L.) 잎 600 g을 30% 주정으로 40℃에서 4시간 동안 추출하였다(84.3g, 수율 14.1%). 상기 람부탄 잎 추출물 1.04 g을 분획하기 위해, YMC ODS AQ HG 수지(YMC, 10 μm, 500g)가 채워진 DAD-50-700S 컬럼(50.0×700 mm)이 장착된 k-prep LAB-300(YMC, 일본)를 사용하여, 상기 람부탄 잎 추출물의 분획을 수행하였다. 95% 용매 A(물)와 5% 용매 B(메탄올)에서 상기 100% 용매 B로 증가시키면서 300분 동안 기울기 조건을 적용하였다. 총 10개 분획(Fraction 1~10)으로 분리하였고, 254nm에서 UV 검출을 사용하여 확인하였다. 각 분획의 조건 및 각 분획의 수율은 하기 표 7 및 표 8에 나타내었다. 각 분획을 인간 모낭 유래 모유두세포(human hair follicle dermal papilla cell)에 20 μL씩 처리한 후, 48시간 배양 후 MTT assay를 통해 세포 증식률을 측정하였다.
총 시료 양 1.04g
사용 시료 양 1.04g
주입 횟수 1회
1회 주입 양 20ml
Fraction 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
(B)MeOH(%) 0 0-15 15-30 30-45 45-60 60-75 75-90 90-100 100 100
무게(mg) 309.7 50.3 58.9 124.0 180.7 98.1 55.2 72.5 57.6 30.6
표 7, 표 8, 도 6c 및 도 6d에 따르면, Fraction 4 처리군의 세포 증식률이 가장 우수하게 나타나 유의적인 증식 촉진 효과(p<0.01)를 나타냈으며, 나머지 분획물(Fraction 1~3 및 5~10)은 대조군과 유사하거나 감소된 수준의 증식률을 보였다.
따라서, 람부탄 잎 추출물을 분획한 결과, Fraction 4에서 유의적인 인간 모유두세포 증식 촉진 효과가 확인되었으며, 이는 본 발명의 유효 성분이 해당 분획에 풍부하게 존재함을 나타내며, Fraction 4는 탈모 억제 및 발모 촉진을 위한 유효 성분으로 최적 후보로 도출되었다.
[실시예 9] 람부탄 잎 추출물의 유효 분획 내 활성 성분 Corilagin의 동정
람부탄 잎 추출물(Nephelium lappaceum leaf extract)의 유효 분획에서 모유두세포 증식 효과가 가장 우수했던 Fraction 4 내에 존재하는 주요 활성 성분을 규명하고자, UPLC-PDA 및 QTOF-MS 분석을 수행하였으며, 이에 대한 결과를 도 7a 및 도 7b에 나타내었다.
상기 실시예 8에서 확보된 Fraction 4를 분석 대상으로 하여, 다음의 조건으로 분석을 진행하였다.
구체적으로 UPLC-PDA-QTof/MS 분석은, XEVO-G2 XS QTOF 질량 검출기를 장착한 Waters Acquity UPLC-PDA 시스템(Waters, Milford, MA, USA)을 사용하여 람부탄 잎 및 분획물들을 분석하였다. 전기분무 이온화(ESI) 광원을 장착한 QTOF-MS 시스템은 음성 모드로 작동시켰으며, 다음과 같은 작동 매개변수가 사용되었다. 모세관 전압: 300V; 콘 전압: 40V; 충돌 에너지: 6, 15eV; 이온 소스 온도: 110℃; 탈용매화 가스 유량: 800L/Hr; 탈용매화 온도: 500℃; 스캔 시간: 0.1초; 질량 스캔 범위: m/z 100-1500Da. 내부 표준 용액으로 leucine enkephalin (음이온 모드에서 m/z 554.2615)을 사용하여 기준 질량을 얻었다. 크로마토그래피 분리는 40℃ 컬럼 오븐을 갖춘 ACQUITY BEH C18(2.1 x 100 mm, 1.7 μm) 컬럼을 사용하여 수행하였다. 이동상 A는 0.1% 포름산을 함유한 증류수로 구성되었고, 이동상 B는 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴로 구성되었다. 유속은 0.4 mL/min으로 설정하였고, 샘플 플레이트 온도는 10℃로 유지하였으며, 주입량은 1 μL였다. linear elution gradient 조건에서 실시하였고 데이터는 Waters MassLynx v4.2 SCN1033을 사용하여 처리하였고, DDA(Data-dependent acquisition) 모드로 분석하였고, 이에 대한 분석 데이터를 하기 표 9에 나타내었다.
시간 (min) 유속 (mL/min) 용매 A (%) 용매 B (%)
0.0 0.4 98.0 2.0
13.0 85.0 15.0
15.0 60.0 40.0
25.0 40.0 60.0
25.1 0.0 100.0
27.3 0.0 100.0
27.4 98.0 2.0
30.0 98.0 2.0
상기 표 9에 따른 각 분석 데이터를 기반으로 화합물의 질량 스펙트럼과 조성식을 추정하였으며, 이에 대해 아래 표 10에 나타내었다.
mass Calc. Mass mDa PPM DBE Formula Fit conf% C H N O
633.0734 633.0728 0.6 0.9 17.5 C27H22O18 66.92 27 21 - 18
도 7a 및 도 7b에 따른 UPLC-PDA 및 QTOF-MS 분석 결과, Fr.4에서 5개의 주요 피크가 검출되었으며, 람부탄 잎 추출물에서 분획한 Fr.4는 모유두 세포 증식 촉진 효과가 가장 우수한 유효 분획으로, 해당 분획 내에서 함량이 높은 2번 성분에 대해 순수 분리정제하여 갈로탄닌 구조의 Corilagin(C27H22O18, 분자량 634)을 동정하였다.
이는 본 발명의 탈모 억제 및 발모 촉진 효능의 주요 약리 작용물질이 Corilagin임을 의미한다.
[실시예 10] 람부탄 유래 유효 성분 Corilagin의 구조 분석
상기 실시예 9에 따른 UPLC 및 QTOF-MS 분석을 통해 람부탄 잎 추출물의 유효 분획(Fraction 4)에서 주요 활성 성분으로 확인된 갈로탄닌계 화합물 Corilagin의 분자 구조를 명확히 규명하기 위하여, NMR(1H, 13C), HRESIMS, UV 스펙트럼 분석을 수행하여 도 8a 및 도 8b에 나타내었다.
질량 분석 (HRESIMS)
XEVO-G2 XS QTOF 장비를 사용하여 상기 실시예 9의 방법과 동일한 방법으로 분석하였다. [M-H]- 형태의 분자 이온 피크에서 m/z 633.0734가 검출되었으며, 이는 화학식 C27H22O18 (계산값 633.0728)에 해당하여, 분자량 634.45 Da를 갖는 Corilagin과 일치하는 것을 확인하였다.
NMR 구조분석
AVANCE Ⅱ 800 MHz 극저온 NMR 장비를 사용하여 샘플을 DMSO-d 6에 용해시키고 25℃에서 측정하여 구조를 1H-, 13C-, HSQC, 1H-1H COSY, HMBC를 이용하여 분석하였다. 도 8a에 따르면, 6.5~7.3 ppm 구간에서 벤젠 고리(aromatic ring) 프로톤 시그널이 관찰되었고, 3.7~5.5 ppm 구간에서는 글루코오스 기반의 아노머 탄소에 연결된 수소 신호(anomeric proton)가 존재함을 확인하였다. 또한, 175~165 ppm 구간에서 카복실기(carboxylic) 시그널이 관찰되었고, 150~135 ppm 구간에서는 산소 치환 방향족 탄소(oxygenated aromatic), 105~130 ppm 구간에서는 일반 방향족 탄소(aromatic), 90~100 ppm 구간에서는 아노머 탄소(anomeric) 및 60~80 ppm 구간에서는 산소 치환된 메틸렌 탄소(oxygenated methylene)가 존재함을 확인하였다. 이러한 신호 분포는 Corilagin의 NMR 데이터와 일치한다.
UV 스펙트럼
XEVO-G2 XS QTOF 장비에 결합된 PDA검출기를 사용하여 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 분석하였다. 도 8b에 따르면, 218 nm 및 266 nm 파장대에서 강한 흡광 피크를 나타내며, 이는 갈로탄닌류의 전형적인 흡광 특성에 부합한다.
따라서, UPLC, HRMS, NMR 및 UV 스펙트럼 데이터를 종합한 결과, 본 발명의 람부탄 잎 추출물로부터 분획한 Fraction 4는 분자식 C27H22O18, 분자량 634.45 Da의 갈로탄닌 구조 화합물인 Corilagin이 확인되었으며, 이에 대한 화학구조식을 도 8c에 나타내었다.
[실시예 11] 람부탄 잎에서 탄닌계 화합물 분리 및 탄닌계 화합물의 표준품 확보
본 발명자는 해외생물소재센터에서 제공받은 인도네시아 상 건조된 람부탄 (Nephelium lappaceum L.) 잎 600 g을 30% 주정으로 40℃에서 4시간 동안 추출하였다(84.3g, 수율 14.1%). 상기 람부탄 잎 추출물 50 g을 분획하기 위해, YMC ODS AQ HG 수지(YMC, 10μm, 500g)가 채워진 DAD-50-700S 컬럼(50.0×700mm)이 장착된 k-prep LAB 100S(YMC, 일본)를 사용하여, 상기 람부탄 잎 추출물의 분획을 수행하였다. 95% 용매 A(물)와 5% 용매 B(메탄올)에서 상기 100% 용매 B로 증가시키면서 300분 동안 기울기 조건을 적용하였다. 총 10개(NLE.1-NLE.10)의 분획을 분리하였고, 254nm에서 UV 검출을 사용하여 확인하였다. 이후, 활성 분획 NLE.4(5.2g)를 역상 플래시 컬럼(C18, 220g)이 있는 MPLC(Biotage® Selekt systems, Biotage® Uppsala, Sweden)를 사용하여 32 분획(NLE.4.1-NLE.4.32)으로 추가로 분리하였다. 상기 추가 분리 시, 용매 A로는 물을 사용하고 용매 B로는 메탄올을 사용하였고, 용매 B를 5%에서 20%로 증가시키는 단계적 구배를 수행하였으며 유속은 45mL/분이었다. 또한, 추가 정제 단계를 수행하여 화합물을 고도로 정제된 형태로 분리하였다. 모든 정제 공정은 Prep LC(LC Prep 150, WatersTM, MA, USA)를 사용하여 수행함으로써 화합물을 단일 정제된 개체로 확보하였다. 또한, 분해능을 높이기 위해 Prep LC에서 역상 컬럼(Xbridge Prep C18, 5 μm, OBDTM 19 Υ 250mm)을 활용하였다. 상기 역상 컬럼의 용매 시스템은 용매 A로 0.1% 포름산이 포함된 물과, 용매 B로 0.1% 포름산이 포함된 메탄올로 구성되었다.
코릴라긴(corilagin)(NLE.4.26, 543.3 mg)은 추가 정제 없이 NLE.4.26(543.3 mg)에서 98.3% 순도의 단일 코릴라긴 화합물로 확인되어 초고성능 액체 크로마토그래피(Ultra-Performance Liquid Chromatography, UPLC)로 확인하였다. 케불라그산(chebulagic acid) (NLE.4.22.1, 15.6mg)는 NLE.4.22(212.8 mg)에서 분리되었고, 상기 케불라그산의 분리는 용매 B 13%에서 등용매 조건에서 수행되어, 순도 98.6%의 케불라그산 화합물 15.6 mg을 얻었다(도 10 참고).
또한, 유사구조들에 대한 표준품을 확보하기 위해, 탄닌계 화합물 4종인 게라닌(geranin), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 및 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose)은 hemface 사(https:/www.chemfaces.com/)를 통해 구매하여 확보하였다. 이하 실험에서는, 상기와 같이 확보된 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)의 6종의 탄닌계 화합물의 표준품들을 이용하였으며, 이에 대한 화학구조를 도 9에 나타내었다.
[실시예 12] 탄닌계 화합물이 인간 모낭 모유두 세포(human hair follicle dermal papilla cell, HHFDPC)의 증식에 미치는 영향
모유두 세포는 모낭의 기저부에 위치하며, 혈관 형성 유도하고, 주변의 모낭을 구성하는 세포에 산소와 영양을 공급하는 것으로, 모유두 세포의 증식이 촉진되면 모발이 건강해지고 모발 성장이 촉진될 수 있다. 이에, 탄닌계 화합물의 발모 촉진 또는 탈모 방지의 효능을 평가하기 위하여, 상기 탄닌계 화합물을 인체유래 모유두 세포에 처리한 뒤, 탄닌계 화합물을 미처리한 대조군 대비 증식률(proliferation rate, % of control)을 분석하였다. 구체적으로, 탄닌계 화합물의 표준품인 6종인 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)을 각각 인체유래 모유두세포에 5 μM, 10 μM 및 20 μM 농도로 처리한 뒤, 아무런 물질도 처리하지 않은 대조군 대비 모유두세포의 증식률(%)을 계산하여, 그 결과를 도 11에 나타내었다.
그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, 상기 6종의 탄닌계 화합물들을 처리한 경우에는 모두 대조군 대비 모유두세포의 증식률이 증가하였고, 특히, 코릴라긴(20 μM)은 대조군 대비 약 195.5%의 증식율을, 케불린산(20 μM)은 대조군 대비 약 208.7%의 증식률을 보이는 것으로 확인되었다. 이러한 실험 결과로부터, 본 발명의 탄닌계 화합물을 이용하면 모유두 세포의 증식을 촉진하여, 발모를 촉진하고 탈모를 방지할 수 있음을 알 수 있었다.
[실시예 13] 탄닌계 화합물의 작용 기전 분석
탄닌계 화합물이 모발성장을 촉진시킬 수 있는 작용 기전을 파악하기 위해, 탄닌계 화합물이 인간 모유두세포의 세포사이클에 미치는 영향을 분석하였다. 구체적으로, 상기 모유두 세포에 상기 실시예 11에서 분리한 코릴라긴을 12.5 μg/mL 또는 25 μg/mL 농도로 처리하였고, 프로피듐 아이오다이드(Propidium Iodide, PI) 염색 시약으로 세포를 염색한 후, 유세포분석기를 통하여 상기 모유두 세포의 사이클을 각각, G1, S 및 G2/M기로 나누어 각 단계에 속한 세포 비율을 분석하였다. 이때, 대조군으로는 탄닌계 화합물을 미처리군을 이용하였다.
그 결과, 도 12a 내지 도 12c에 도시된 바와 같이, 코릴라긴 12.5 μg/mL 처리군에서 G2/M기 비율은 대조군 대비 약 1.27%, 25 μg/mL 처리군에서는 대조군 대비 약 2.25% 증가하였다. 이에, 코릴라긴 처리가 G2/M기 비율을 농도 의존적으로 증가시켜, 모유두 세포의 분열을 촉진하고, 모낭세포 증식과 모발 성장을 향상시키는 점을 알 수 있었다.
[실시예 14] 탄닌계 화합물의 in vivo 발모 촉진 또는 탈모 방지 활성
탄닌계 화합물의 발모 촉진 또는 탈모 방지의 효능을 in vivo 동물 실험을 통해 평가하였다. 구체적으로, 6주령 C57BL/6 쥐(mice)의 등 쪽 털을 제거한 후, 상기 쥐에 코릴라긴을 1 mg/kg 및 5 mg/kg의 투여 용량으로 경구 투여하였고, 15일 간 상기 쥐의 모발 길이 변화를 분석하였다. 이때, 음성 대조군으로는 코릴라긴 미투여한 군을, 양성 대조군으로는 Minoxidil을 1 mg/kg 용량으로 경구 투여한 군을 이용하였다.
그 결과, 도 13a 및 도 13b에 도시된 바와 같이, 코릴라긴 투여시 음성 대조군에 비해 농도 유의적으로 모발 성장능이 높은 것으로 확인되었다.
또한, 테스토스테론(Testosterone)에 의해 억제된 모발성장능이 코릴라긴 투여에 의해 완화될 수 있는지 확인하였다. 구체적으로, 상기 6주령 C57BL/6 쥐에 테스토스테론을 20 mg/kg 용량으로 투여하여 쥐의 모발성장능을 억제시킨 후, 코릴라긴을 1 mg/kg 및 5 mg/kg의 투여 용량으로 경구 투여하였고, 18일 간 상기 쥐의 모발 길이 변화를 분석하였다. 이때, 대조군으로는 테스토스테론만을 투여한 군을, 양성 대조군으로는 상기 테스토스테론 투여 이후 Minoxidil을 1 mg/kg 용량으로 경구 투여한 군을 이용하였다.
그 결과, 도 14a 및 도 14b에 도시된 바와 같이, 테스토스테론 투여에 의하여 상기 쥐의 모발성장능이 억제되었으나, 코릴라긴 투여시 대조군에 비해 농도 유의적으로 모발 성장능이 우수한 것으로 확인되었다.
이러한 실험 결과로부터, 본 발명의 탄닌계 화합물을 이용하면 발모를 촉진하고 탈모를 방지할 수 있음을 알 수 있었다.
[실시예 15] 람부탄 구성 성분별 지표 성분(코릴라긴(corilagin) 및 케불라그산(chebulagic acid))의 함량 비교 분석
본 실시예는 람부탄(Nephelium lappaceum L)의 잎에 존재하는 기능성 지표 성분(Corilagin 및 Chebulagic acid)의 분포를 정량적으로 비교하여, 유효 성분이 가장 풍부하게 존재하는 부위를 규명하고자 수행되었다.
람부탄의 잎(Leaf)을 동결건조 후 균질화하여 70% 에탄올로 추출하고, Corilagin 및 Chebulagic acid의 각 성분이 함량을 확인하기 위해 XEVO-G2 XS QTOF 장비를 이용하여 QTof-MS 분석을 수행하였으며, 이에 대한 결과를 도 15에 나타내었다.
도 15에 나타난 Corilagin 함량 분석 결과, 람부탄 잎(Leaf) 추출물에서 가장 높은 상대 강도(약 370 이상)가 관찰되었다. Chebulagic acid 또한 Corilagin과 유사하게 잎에서 비교적 높은 값을 나타냈으나, Corilagin 보다는 낮은 수준으로 검출되었다.
이에 따라, 람부탄 잎 추출물은 Corilagin의 주요 천연 공급원으로서, 기능성 화장품 또는 탈모 개선용 조성물에 적용 가능한 고부가가치 바이오소재로 활용될 수 있으며, 그에 대한 유효성과 경제성이 우수한 것으로 확인되었다.
[제조예 1] 약학적 조성물의 제조
1-1. 산제의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 환의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조하였다.
1-5. 과립의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
[제조예 2] 화장료 조성물의 제조
2-1. 크림의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 4.6 중량부
세토스테아릴알코올 2.8 중량부
밀납 2.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부
피이지-100 스테아레이트 1 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부
호호바오일 4 중량부
스쿠알란 3.8 중량부
폴리소르베이트 60 1.1 중량부
마카다이아오일 2 중량부
초산토코페롤 0.2 중량부
메칠폴리실록산 0.4 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
Euxyl K-400 0.1 중량부
1,2-부칠렌글리콜 7 중량부
메칠파라벤 0.05 중량부
글리세린 6 중량부
d-판데놀 0.2 중량부
트리에탄올아민 0.2 중량부
pt 41891 0.2 중량부
p-H2O 46.05 중량부
2-2. 로션의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 3.5 중량부
세토스테아릴알코올 1.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부
피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부
스쿠알렌 4.8 중량부
마카다이아오일 2 중량부
호호바오일 2 중량부
초산토코페롤 0.4 중량부
메칠폴리실록산 0.2 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
1,2-부칠렌글리콜 4 중량부
메칠파라벤 0.1 중량부
산탄검 0.1 중량부
글리세린 4 중량부
d-판데놀 0.15 중량부
알란토인 0.1 중량부
카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부
트리에탄올아민 0.15 중량부
에탄올 3 중량부
pt 41891 0.1 중량부
p-H20 48.3 중량부
2-3. 유연 화장수의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 0.2 중량%
에탄올 10.0 중량%
폴리라우린산폴리옥시에틸렌소르비탄 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
글리세린 5.0 중량%
1,2-부틸글리콜 6.0 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
2-4. 영양 화장수의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 0.1 중량%
와셀린 2.0 중량%
세스퀴올레인산소르비탄 0.8 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.2 중량%
파라옥시안식향산메틸 적량
프로필렌글리콜 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
카르복시비닐폴리머 18.0 중량%
색소 적량
향 적량
정제수 적량
총 100
2-5. 에센스의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 5.0 중량%
프로필렌글리콜 10.0 중량%
글리세린 10.0 중량%
히알루론산나트륨수용액(1%) 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.1 중량%
향 적량
정제수 적량
총 100
2-6. 팩의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 0.5 중량%
글리세린 5.0 중량%
프로필렌글리콜 4.0 중량%
폴리비닐알코올 15.0 중량%
에탄올 8.0 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
[제조예 3] 기능성 식품 조성물의 제조
3-1. 건강식품 과립의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 500 μg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 mg
비타민 E 1.0mg
비타민 D 0.13mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2mg
비타민 C 10mg
비오틴 10mg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50mg
판토텐산 칼슘 0.5mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 분말 또는 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
3-2. 건강식품 분말의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 500 μg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 mg
비타민 E 1.0mg
비타민 D 0.13mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2mg
비타민 C 10mg
비오틴 10mg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50mg
판토텐산 칼슘 0.5mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분 또는 이들의 분말을 혼합한 다음, 혼합물의 분말을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
3-3. 건강음료의 제조
본 발명의 탄닌계 화합물 500 μg
구연산 1000mg
올리고당 100g
매실농축액 2g
타우린 1g
정제수를 가하여 전체 900ml
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (20)

  1. 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 물, C1-C4 알코올 또는 이들의 조합을 포함하는 용매를 이용하여 추출한 추출물인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 물 또는 5 내지 80%(v/v) 에탄올 수용액을 이용하여 추출한 추출물인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 코릴라긴(corilagin), 케불라그산(chebulagic acid), 메틸 갈레이트 (Methyl gallate) 및 신탄닌 B1 (Cinmtannin B1)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물 총 100 중량%에 대하여, 코릴라긴(corilagin)을 1 내지 45 중량% 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물 총 100 중량%에 대하여, 케불라그산(chebulagic acid)을 1 내지 20 중량% 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 람부탄 잎 추출물 또는 이의 분획물은 탄닌계 화합물을 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 탄닌계 화합물은 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 탈모는 영양장애성 탈모증, 내분비장애성 탈모증, 혈관장애성 탈모증, 장년성 탈모증, 결발성 탈모증, 원형 탈모증, 신경성 탈모증, 비강성 탈모증, 트리코틸로 마니아, 악성탈모증, 여성형 탈모증, 남성형 탈모증, 안드로겐성 탈모증, 휴지기 탈모증, 두부 백선, 전두 탈모증, 감모증, 유전성 단순 감모증, 전신 탈모증, 약제성 탈모증, 기계적 탈모증, 외상성 탈모증, 압박성 탈모증, 생장기 탈모증, 매독성 탈모증, 지루 탈모증, 증후성 탈모증, 반흔성 탈모증 및 선천성 탈모증로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  10. 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 건강기능식품 조성물.
  11. 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
  12. 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
  13. 람부탄(Nephelium lappaceum L.) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  14. 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 탄닌계 화합물은 게라닌(geranin), 케불라그산(chebulagic acid), 케불린산(chebulinic acid), 푸니칼라진(punicalagin), 1,3,6-트리-O-갈로일-b-D-글루코스(1,3,6-tri-O-galloyl-b-D-glucose) 및 코릴라긴(corilagin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 탄닌계 화합물은 케불라그산(chebulagic acid) 또는 코릴라긴(corilagin)인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 식품 조성물.
  17. 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는 것인, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 건강기능식품 조성물.
  18. 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
  19. 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
  20. 탄닌계 화합물(tannins)을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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JP2013245172A (ja) * 2012-05-24 2013-12-09 Nippon Menaade Keshohin Kk 発毛促進剤
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