WO2025249477A1 - 金コロイド標識抗体懸濁液及びその製造方法、並びに検査器具 - Google Patents

金コロイド標識抗体懸濁液及びその製造方法、並びに検査器具

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labeled antibody
solution
antibody
suspension
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いつみ 高野
泰史 落合
洋行 大野
大毅 小林
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Sekisui Medical Co Ltd
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Sekisui Medical Co Ltd
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a gold colloid-labeled antibody suspension using lactalbumin, a method for producing the same, and a testing device.
  • immunochromatography a type of immunological measurement method, is well known as a method for qualitatively or quantitatively measuring the presence of a test substance in biological samples such as urine or blood (see, for example, Patent Document 1).
  • Gold colloids are generally gold nanoparticles with an average particle size of less than 1 ⁇ m, and when they are dispersed in a solution and irradiated with white light, the solution appears colored.
  • gold colloids and antibodies are mixed in the solution, they undergo a physicochemical reaction, causing the antibody to adsorb to the gold colloid.
  • the antibody is labeled with gold colloid and colored.
  • a blocking process is performed in which the antibody is brought into contact with bovine serum albumin (BSA) or similar to prevent the gold colloid-labeled antibody from nonspecifically adsorbing to other substances.
  • BSA bovine serum albumin
  • colloidal gold-labeled antibodies In the production of colloidal gold-labeled antibodies, to separate the labeled antibody adsorbed to the colloidal gold from the unlabeled antibody, a solution containing both is centrifuged to precipitate the colloidal gold-labeled antibody, and the supernatant containing the unlabeled antibody is removed. The precipitated colloidal gold-labeled antibody is then resuspended in the desired solution to obtain the desired colloidal gold-labeled antibody suspension.
  • colloidal gold-labeled antibody does not disperse even after resuspension, and instead forms aggregates. Since the aggregates cannot be used in subsequent processes, this reduces the production yield of colloidal gold-labeled antibodies.
  • the present invention provides a highly dispersible gold colloid-labeled antibody suspension, a method for producing the same, and a test device using gold colloid-labeled antibodies.
  • a method for producing a colloidal gold-labeled antibody suspension comprising: a labeling step of mixing a colloidal gold solution with an antibody solution to obtain a mixed solution and obtaining a colloidal gold-labeled antibody in the mixed solution; a centrifugation step of centrifuging the mixed solution to obtain a precipitate of the colloidal gold-labeled antibody and removing a supernatant containing antibody not adsorbed to the gold colloid; and a suspension step of suspending the colloidal gold-labeled antibody precipitate in a suspension solution containing lactalbumin to obtain a colloidal gold-labeled antibody suspension.
  • [2] The method for producing a colloidal gold-labeled antibody suspension according to [1], wherein after the labeling step and before the centrifugation step, a solution containing BSA is added to the mixture to perform a blocking treatment on the colloidal gold-labeled antibody.
  • [3] The method for producing a gold colloid-labeled antibody suspension according to [1] or [2], wherein the suspension solution does not contain BSA, or even if it contains BSA, the concentration of BSA is less than 1 mg/mL.
  • [4] The method for producing a colloidal gold-labeled antibody suspension according to any one of [1] to [3], wherein the concentration of lactalbumin contained in the suspension solution is 0.01 mg/mL or more.
  • a colloidal gold-labeled antibody suspension comprising a colloidal gold-labeled antibody and 0.01 mg/mL or more of lactalbumin.
  • a test device having a pad for absorbing a test solution, wherein a dried form of a gold colloid-labeled antibody suspension containing a gold colloid-labeled antibody and 0.1 ⁇ g or more of lactalbumin is held in the pad.
  • the test device according to [6] wherein the pad is supported on an elongated support and is used to perform immunochromatography on the test solution.
  • the manufacturing method of the present invention allows for the production of colloidal gold-labeled antibodies with high yield.
  • the colloidal gold-labeled antibody suspension of the present invention the dispersibility of the colloidal gold-labeled antibody is good, and specificity for the antigen is fully maintained.
  • the specificity of the colloidal gold-labeled antibody is fully maintained, and detection sensitivity is comparable to that of conventional devices.
  • a first aspect of the present invention is a method for producing a gold colloid-labeled antibody suspension, which comprises a labeling step, a centrifugation step, and a suspension step, which will be described below.
  • the labeling step is a step of obtaining a mixed solution by mixing a colloidal gold solution with an antibody solution, and obtaining a colloidal gold-labeled antibody in the mixed solution. This step can be performed in the same manner as conventional methods for obtaining colloidal gold-labeled antibodies.
  • the colloidal gold solution used in this step is not particularly limited, and any desired one can be selected and used.
  • Colloidal gold solutions for antibody labeling are commercially available, and examples include those with an average particle size of 5 to 500 nm as measured from TEM images using an electron microscope.
  • the concentration of the gold colloid in the mixed solution can be defined by the absorbance at its maximum absorption wavelength, and the absorbance ranges, for example, from 0.1 to 5, preferably from 0.5 to 1.5.
  • the antibody solution used in this step is not particularly limited, and any desired one can be selected and used.
  • the antibody may be either a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • the antibody subtype is also not particularly limited, and examples include IgG, IgA, IgM, IgD, and IgE.
  • the animal species from which the antibody is derived is also not particularly limited.
  • the antibody may be a full-length antibody or a fragment containing the antigen-binding site.
  • the concentration of the antibody in the mixture is, for example, in the range of 0.01 to 100 ⁇ g/mL, preferably 0.1 to 10 ⁇ g/mL, and more preferably 0.5 to 5 ⁇ g/mL.
  • the dispersion medium for the gold colloid solution, antibody solution, and mixed solution may be any medium that allows the antibody to be stably dispersed, and examples include those containing various commonly used pH buffers and inorganic salts.
  • the pH of the mixed solution is preferably in a range that allows the antibody's three-dimensional structure to be stably maintained, for example, 6.5 to 7.5.
  • the antibody and gold colloid come into physical contact and interact with each other, causing the gold colloid to naturally adsorb to the antibody, resulting in a gold colloid-labeled antibody.
  • the reaction (adsorption) between the antibody and the gold colloid in the mixed solution is completed within, for example, several minutes to several tens of minutes at room temperature.
  • Blocking process After the labeling step, in order to prevent nonspecific adsorption of the colloidal gold-labeled antibody formed in the mixture, it is preferable to carry out a blocking treatment in which a blocking agent is brought into contact with the colloidal gold-labeled antibody and the blocking agent is adsorbed to sites where nonspecific adsorption may occur.
  • Blocking agents include, for example, proteins such as bovine serum albumin (BSA), gelatin, casein, ovalbumin, lactalbumin, sericin, and fetuin, as well as peptides, polyethylene glycol, polyanions, N,N-dialkylamides, lower alkyl sulfoxides, alkylcelluloses, and carboxyalkylcelluloses.
  • BSA bovine serum albumin
  • gelatin casein
  • ovalbumin lactalbumin
  • lactalbumin lactalbumin
  • sericin and fetuin
  • peptides polyethylene glycol, polyanions, N,N-dialkylamides, lower alkyl sulfoxides, alkylcelluloses, and carboxyalkylcelluloses.
  • the blocking treatment is preferably carried out by adding a solution containing a blocking agent, such as a solution containing BSA (BSA solution), to the mixture.
  • a solution containing a blocking agent such as a solution containing BSA (BSA solution)
  • BSA solution a solution containing BSA
  • the dispersion medium constituting the BSA solution may be any dispersion medium that allows BSA to be stably dispersed, and examples of such dispersion medium include those containing various commonly used pH buffers and inorganic salts.
  • the pH of the BSA solution is preferably in a range in which the three-dimensional structures of BSA and the antibody are stably maintained, for example, 6.5 to 7.5.
  • the concentration of BSA in the mixture in the blocking treatment is, for example, in the range of 1 to 100 mg/mL, preferably 5 to 20 mg/mL. Blocking agents other than BSA can also be used under similar conditions.
  • the blocking agent When the colloidal gold-labeled antibody and a blocking agent such as BSA come into contact and interact in the mixture, the blocking agent naturally adsorbs to the colloidal gold-labeled antibody, completing the blocking process.
  • the blocking process is completed at room temperature in, for example, a few minutes to a few tens of minutes.
  • the centrifugation step is a step in which the mixture is centrifuged to obtain a precipitate of the colloidal gold-conjugated antibody, and the supernatant containing the antibody not adsorbed to the colloidal gold is removed. This step can be performed in the same manner as in conventional methods for obtaining colloidal gold-conjugated antibodies.
  • Centrifugation conditions are not particularly limited, as long as they are sufficient to precipitate the colloidal gold-labeled antibody without precipitating the unlabeled antibody.
  • Examples of centrifugal force include a range of 1,300 g to 15,000 g, and preferably 5,000 g to 15,000 g.
  • the rotation speed can be, for example, 5,000 to 20,000 rpm, and preferably 8,000 to 12,000 rpm.
  • the colloidal gold-labeled antibody can be precipitated by centrifugation for approximately 0.5 to 2 hours. It is common to cool the mixture to approximately 4 to 10°C during centrifugation.
  • the supernatant can be removed by conventional methods, such as decantation or aspirator suction.
  • the suspending step is a step of suspending the colloidal gold-labeled antibody precipitate in a suspending solution containing lactalbumin to obtain a colloidal gold-labeled antibody suspension.
  • the lactalbumin may be either ⁇ -lactalbumin or ⁇ -lactalbumin, but ⁇ -lactalbumin is preferred from the viewpoint of improving the yield by suspension.
  • the animal species from which the lactalbumin is derived is not particularly limited, and bovine-derived lactalbumin is preferred because it is commercially available at low cost.
  • the lactalbumin concentration in suspension solution is preferably, for example, 0.01mg/mL or more, more preferably 0.10mg/mL or more, and even more preferably 0.50mg/mL or more.More preferably, it can be 1.0mg/mL or more, 2.0mg/mL or more, or 4.0mg/mL or more.
  • the upper limit of lactalbumin concentration is not particularly limited, and can be, for example, 100mg/mL or less, 50mg/mL or less, 25mg/mL or less, 20mg/mL or less, etc. as a guideline. Since lactalbumin has an extremely high suspending power for colloidal gold-labeled antibodies, a concentration equal to or greater than the above lower limit is sufficient, and there is no need to use it at a high concentration.
  • the dispersion medium constituting the suspension solution may be any medium in which lactalbumin can be stably dispersed, and examples thereof include various commonly used pH buffers.
  • the dispersion medium may contain an inorganic salt. NaCl is preferred as the inorganic salt.
  • the concentration of the inorganic salt may be, for example, in the range of 1 to 400 mM, 10 to 300 mM, or 100 to 200 mM.
  • the pH of the suspension solution is preferably within a range in which the three-dimensional structure of lactalbumin is stably maintained, for example, 5.5 to 10.0, preferably 6.5 to 9.5, more preferably 7.0 to 9.0, and even more preferably 7.2 to 9.0.
  • the amount of precipitate of the colloidal gold-conjugated antibody obtained in the centrifugation step can be converted into the amount of colloidal gold, because it is believed that almost all of the colloidal gold used in the labeling step is contained in the precipitate.
  • the volume ratio represented by V1/V2 can be, for example, 1 to 100, preferably 10 to 80, and more preferably 15 to 80.
  • the volume V2 of the suspension solution may be adjusted so that the absorbance of the colloidal gold-labeled antibody suspension solution at the maximum absorption wavelength of the colloidal gold is, for example, 1 to 100, preferably 10 to 50, more preferably 15 to 40, and even more preferably 20 to 30.
  • the colloidal gold-labeled antibody and lactalbumin come into contact with each other and interact with each other, resulting in a colloidal gold-labeled antibody suspension in a well-dispersed state in which aggregation of the colloidal gold-labeled antibody is suppressed.
  • the suspension of the precipitate in the suspending solution is completed within, for example, a few minutes at room temperature.
  • the desired colloidal gold-labeled antibody suspension containing colloidal gold-labeled antibody and lactalbumin is obtained.
  • the lactalbumin concentration in the gold colloid-labeled antibody suspension depends on the volume V2 of the suspending solution used and the volume of the precipitate, but is approximately the same as the lactalbumin concentration in the suspending solution or slightly diluted, and can be, for example, 0.1 mg/mL or more.
  • the concentration of the colloidal gold-labeled antibody in the colloidal gold-labeled antibody suspension can be defined by the absorbance at the maximum absorption wavelength of the colloidal gold, and can be, for example, 1 to 100, preferably 10 to 80, and more preferably 15 to 80.
  • the suspending power of lactalbumin is much higher than that of BSA, so the suspending solution does not need to contain BSA.
  • the suspending solution may contain BSA, for example, at a concentration of less than 1 mg/mL, 0.1 mg/mL or less, or 0.01 mg/mL or less. If a blocking treatment with BSA is performed before the centrifugation step, a small amount of BSA will be contained in the precipitate of the colloidal gold-labeled antibody obtained in the centrifugation step, and therefore a small amount of BSA may be contained in the colloidal gold-labeled antibody suspension.
  • a second aspect of the present invention is a colloidal gold-labeled antibody suspension comprising a colloidal gold-labeled antibody and 0.1 mg/mL or more of lactalbumin.
  • the composition of the colloidal gold-labeled antibody suspension of this embodiment may be the same as the composition of the colloidal gold-labeled antibody suspension obtained by the production method of the first embodiment, and a duplicated description will be omitted.
  • a third aspect of the present invention is a testing device provided with a pad for absorbing a test solution containing an analyte.
  • a dried form of a gold colloid-labeled antibody suspension containing a gold colloid-labeled antibody that binds to the analyte and lactalbumin is held in the pad.
  • a pad that holds the gold colloid-labeled antibody suspension and then dries to obtain a dried form is called a conjugate pad.
  • the amount of lactalbumin contained in the conjugate pad is preferably 0.1 ⁇ g or more, more preferably 0.5 ⁇ g or more.
  • the amount may be 1.0 ⁇ g or more, 2.0 ⁇ g or more, or 4.0 ⁇ g or more.
  • the material of the conjugate pad is not particularly limited as long as it can absorb and retain water, such as a glass fiber pad, filter paper, cotton, or nonwoven fabric.
  • the composition of the colloidal gold-labeled antibody suspension may be the same as the composition of the colloidal gold-labeled antibody suspension obtained by the production method of the first embodiment, and a duplicated description will be omitted.
  • the test device of this embodiment preferably has a structure in which a conjugate pad, an antibody-immobilized membrane, and an absorbent pad are arranged in this order on a support such as a plastic adhesive sheet, and may also include other components.
  • the antibody-immobilized membrane includes a test line on which an antibody that binds to the substance to be detected is immobilized, and optionally a control line for confirming that the test has progressed appropriately.
  • the conjugate pad already contains a colloidal gold-labeled antibody. If the test solution contains an antigen of the colloidal gold-labeled antibody, the colloidal gold-labeled antibody and the antigen will bind to each other through an antigen-antibody reaction to form a complex when the test solution soaks into the conjugate pad. When the complex binds to the antibody on the antibody-immobilized membrane, a color develops on the test line, allowing detection of a signal corresponding to the amount of antigen present in the test solution. Other agents may be used to obtain or enhance the detection signal. In the test device, the test solution permeates through the conjugate pad, the antibody-immobilized membrane, and the absorbent pad in that order. The absorbent pad is provided to finally receive and hold the test solution.
  • An example of an embodiment of this aspect is a strip for testing based on immunochromatography (immunochromatographic test strip).
  • This strip includes the conjugate pad and an elongated support that supports the conjugate pad. The entire or partial strip is capable of absorbing the test solution. By immersing one end of the strip in the test solution or by dropping the test solution onto the strip, the test solution permeates the strip from one end to the other. Since the conjugate pad is provided along the way, if the test solution reacts with the gold colloid-labeled antibody, a signal can be detected, as described above.
  • This test is typically performed with an antibody-immobilized membrane provided downstream adjacent to the conjugate pad, and an absorbent pad provided further downstream. This series of testing methods is generally known as immunochromatography.
  • the conjugate pad contains the colloidal gold-labeled antibody and lactalbumin, so that the colloidal gold-labeled antibody is supported in a well-dispersed state on the conjugate pad, resulting in good detection sensitivity reflecting the well-dispersed state.
  • anti-SARS-CoV-2 antibodies used in the following tests were obtained by immunizing mice with recombinant SARS-CoV-2 nucleoprotein as an antigen using a method commonly used by those skilled in the art to produce monoclonal antibodies.
  • colloidal gold-labeled antibody remaining as a precipitate was suspended in 0.8 mL of a colloidal gold-labeled antibody suspension solution (20 mM Tris, 150 mM NaCl, 20 mg/mL lactalbumin (Sigma-Aldrich), pH 7.4) to obtain the colloidal gold-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solution of Example 1.
  • a colloidal gold-labeled antibody suspension solution (20 mM Tris, 150 mM NaCl, 20 mg/mL lactalbumin (Sigma-Aldrich), pH 7.4
  • the 20 mg/mL lactalbumin (Example 1) in the colloidal gold-labeled antibody suspension solution was changed to 10 mg/mL lactalbumin (Example 2), 5 mg/mL lactalbumin (Example 3), 1 mg/mL lactalbumin (Example 4), 20 mg/mL BSA (Comparative Example 1), 10 mg/mL BSA (Comparative Example 2), 5 mg/mL BSA (Comparative Example 3), or 1 mg/mL BSA (Comparative Example 4), to obtain the colloidal gold-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solutions of Examples 2 to 4 and Comparative Examples 1 to 4.
  • the theoretical value of absorbance at the maximum absorption wavelength derived from the gold colloid used to prepare the gold colloid-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solution is 25, and the absorbance at the maximum wavelength of the gold colloid-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solution is the sum of the absorbance derived from the gold colloid and the absorbance derived from the protein.
  • the gold colloid-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solutions of Comparative Examples 1 to 4 which were suspended in a gold colloid-labeled antibody suspension solution containing BSA, had absorbances at the maximum absorption wavelength that were less than half the theoretical value, which was poor.
  • each labeled reagent solution was applied in a line at 10 ⁇ L/cm to a glass fiber pad, and the labeled reagent solution was dried to obtain a conjugate pad.
  • test strips A conjugate pad, antibody-immobilized membrane, and absorbent pad were attached to a plastic adhesive sheet, which was then cut to a width of 5 mm to obtain an immunochromatography test strip for measuring SARS-CoV-2.
  • the test strip was 5 mm wide and 70 mm long, with the conjugate pad, antibody-immobilized membrane (test line, control line), and absorbent pad arranged in that order from one end to the other.
  • the colloidal gold-labeled antibody remaining as a precipitate was divided into 30 equal portions and dispensed.
  • the dispensed colloidal gold-labeled antibody was suspended in a protein for suspending colloidal gold-labeled antibodies shown in Table 3, a pH-adjusted buffer, and a solution containing NaCl, and the maximum absorption wavelength and the absorbance at the maximum absorption wavelength were measured using the method described in (3).
  • the theoretical value of absorbance at the maximum absorption wavelength derived from the colloidal gold used to prepare the colloidal gold-labeled anti-SARS-CoV-2 antibody solution is 25.
  • the method for producing a colloidal gold-labeled antibody suspension according to the present invention uses a suspension solution containing lactalbumin when suspending the precipitate of antibodies adsorbed to colloidal gold, making it easier to prevent antibody aggregation and dramatically improving antibody recovery rates. It is also clear that the antigen-binding function of the resulting colloidal gold-labeled antibodies is fully maintained.
  • BSA which has traditionally been used as a common blocking agent to prevent nonspecific adsorption of proteins, is a type of albumin, and it has been believed that the blocking function of lactalbumin is equivalent to that of BSA.
  • lactalbumin exhibits particularly remarkable effects compared to known blocking agents such as BSA and casein.

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Abstract

金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法であって、金コロイド溶液と抗体溶液とを混合した混合液を得て、前記混合液中に金コロイド標識抗体を得る標識工程と、前記混合液を遠心分離して前記金コロイド標識抗体の沈殿を得て、金コロイドが吸着していない抗体を含む上清を除去する遠心分離工程と、ラクトアルブミンを含む懸濁用溶液で前記金コロイド標識抗体の沈殿を懸濁し、金コロイド標識抗体懸濁液を得る懸濁工程と、を含む、金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。

Description

金コロイド標識抗体懸濁液及びその製造方法、並びに検査器具
　本発明は、ラクトアルブミンを用いた金コロイド標識抗体懸濁液及びその製造方法、並びに検査器具に関する。本願は２０２４年５月２９日に日本国へ出願した特願２０２４－０８７３７０号について優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　従来、抗体を金コロイドで標識し、医学検査や学術研究に利用することが広く行われている。例えば、尿、血液等の生体試料中に存在する被検物質の存在を定性的にまたは定量的に測定する方法として、免疫学的測定方法の一種であるイムノクロマトグラフィーが周知である（例えば特許文献１）。
特開２００２－１４８２６６号公報
　金コロイドは一般的に平均粒子径１μｍ未満の金ナノ粒子であり、溶液中に分散された状態で白色光を照射すると、溶液が着色して見える。金コロイドと抗体を溶液中で混合すると、金コロイドと抗体とが物理化学的に反応し、抗体が金コロイドに吸着する。その結果、抗体を金コロイドで着色した標識状態とすることができる。その後、金コロイド標識した抗体が非特異的に他の物質へ吸着することを防ぐために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等と接触させるブロッキング処理が行われる。
　金コロイド標識抗体の製造において、金コロイドに吸着した標識抗体と、未標識の抗体とを分離するために、両者を含む溶液を遠心分離して金コロイド標識抗体を沈殿させ、未標識抗体を含む上清を除去する処理を行う。その後、沈殿した金コロイド標識抗体を所望の溶液で再懸濁することで、目的の金コロイド標識抗体懸濁液が得られる。ところが、再懸濁しても分散されずに凝集物となってしまう金コロイド標識抗体が少なからず生じる問題があった。凝集物はその後の工程に使用できないので、金コロイド標識抗体の製造歩留まりを悪化させる。
　本発明は、分散性に優れた金コロイド標識抗体懸濁液及びその製造方法、並びに金コロイド標識抗体を用いた検査器具を提供する。
［１］　金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法であって、金コロイド溶液と抗体溶液とを混合した混合液を得て、前記混合液中に金コロイド標識抗体を得る標識工程と、前記混合液を遠心分離して前記金コロイド標識抗体の沈殿を得て、金コロイドが吸着していない抗体を含む上清を除去する遠心分離工程と、ラクトアルブミンを含む懸濁用溶液で前記金コロイド標識抗体の沈殿を懸濁し、金コロイド標識抗体懸濁液を得る懸濁工程と、を含む、金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
［２］　前記標識工程の後、前記遠心分離工程の前に、前記混合液にＢＳＡを含む溶液を添加し、前記金コロイド標識抗体をブロッキング処理する、［１］に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
［３］　前記懸濁用溶液に、ＢＳＡが含まれないか、又は、ＢＳＡが含まれるとしてもその濃度が１ｍｇ／ｍＬ未満である、［１］又は［２］に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
［４］　前記懸濁用溶液に含まれるラクトアルブミンの濃度が、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上である、［１］～［３］のいずれか一項に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
［５］　金コロイド標識抗体と、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上のラクトアルブミンとを含む、金コロイド標識抗体懸濁液。
［６］　検査対象溶液を吸収するパッドを備えた検査器具であって、金コロイド標識抗体と０．１μｇ以上のラクトアルブミンとを含む金コロイド標識抗体懸濁液の乾燥体が前記パッドに保持された、検査器具。
［７］　前記パッドが細長い支持体に支持され、前記検査対象溶液のイムノクロマトグラフィーを行う用途で使用される、［６］に記載の検査器具。
　本発明の製造方法によれば、金コロイド標識抗体を歩留まり良く製造することができる。本発明の金コロイド標識抗体懸濁液にあっては、金コロイド標識抗体の分散性が良好であり、抗原に対する特異性が充分に維持されている。本発明の検査器具にあっては金コロイド標識抗体の特異性が充分に維持されており、従来と比べて遜色ない検出感度を有する。
≪金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法≫
　本発明の第一態様は、以下に説明する標識工程と、遠心分離工程と、懸濁工程とを有する、金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法である。
［標識工程］
　標識工程は、金コロイド溶液と抗体溶液とを混合した混合液を得て、前記混合液中に金コロイド標識抗体を得る工程である。本工程は従来の金コロイド標識抗体を得る方法と同様に行うことができる。
　本工程で使用する金コロイド溶液は特に制限されず、所望のものを選択して使用できる。抗体標識用の金コロイド溶液は市販されており、電子顕微鏡のＴＥＭ画像から測定される平均粒子径が例えば５～５００ｎｍのものが挙げられる。
　前記混合液中の金コロイドの濃度はその最大吸収波長における吸光度で定義することができ、その吸光度としては、例えば０．１～５、好ましくは０．５～１．５の範囲が挙げられる。
　本工程で使用する抗体溶液は特に制限されず、所望のものを選択して使用できる。抗体はモノクローナル抗体とポリクローナル抗体のいずれであってもよい。抗体のサブタイプも特に制限されず、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥが挙げられる。抗体が由来する動物種も特に制限されない。抗体は全長でもよいし、抗原結合部位を含む断片であってもよい。
　前記混合液中の抗体の濃度としては、例えば０．０１～１００μｇ／ｍＬ、好ましくは０．１～１０μｇ／ｍＬ、より好ましくは０．５～５μｇ／ｍＬの範囲が挙げられる。
　金コロイド溶液、抗体溶液及び前記混合液の分散媒は抗体が安定に分散されるものであればよく、一般に使用される種々のｐＨ緩衝剤や無機塩類を含むものが挙げられる。前記混合液のｐＨは、抗体の立体構造が安定に保たれる範囲が好ましく、例えば６．５～７．５が挙げられる。
　前記混合液中で抗体と金コロイドが物理的に接触して相互作用することにより、金コロイドが抗体に自然に吸着し、金コロイド標識抗体となる。
　前記混合液中における抗体と金コロイドの反応（吸着）は、室温で例えば数分～数十分で完了する。
［ブロッキング処理］
　標識工程の後で、前記混合液中で形成された金コロイド標識抗体の非特異的吸着を防ぐために、金コロイド標識抗体にブロッキング剤を接触させ、非特異的吸着が起こりうる部位にブロッキング剤を吸着させるブロッキング処理を行うことが好ましい。
　ブロッキング剤としては、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ゼラチン、カゼイン、オボアルブミン、ラクトアルブミン、セリシン、フェツイン等のタンパク質や、ペプチド、ポリエチレングリコール、ポリアニオン類等、Ｎ，Ｎ－ジアルキルアミドや低級アルキルスルホキシド、アルキルセルロース及びカルボキシアルキルセルロース等が挙げられる。これらの中でも、抗体の特異性を阻害せず、金コロイド標識抗体の性能に干渉しない観点からＢＳＡが好ましい。
　ブロッキング処理は、前記混合液にブロッキング剤を含む溶液、例えばＢＳＡを含む溶液（ＢＳＡ溶液）を添加する方法が好ましい。ＢＳＡ溶液を構成する分散媒はＢＳＡが安定に分散されるものであればよく、一般に使用される種々のｐＨ緩衝剤や無機塩類を含むものが挙げられる。
　ＢＳＡ溶液のｐＨは、ＢＳＡや抗体の立体構造が安定に保たれる範囲が好ましく、例えば６．５～７．５が挙げられる。
　ブロッキング処理における前記混合液中のＢＳＡ濃度としては、例えば１～１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは５～２０ｍｇ／ｍＬの範囲が挙げられる。
　ＢＳＡ以外のブロッキング剤も同様の条件下で使用することができる。
　前記混合液中で金コロイド標識抗体とＢＳＡ等のブロッキング剤が接触して相互作用することにより、ブロッキング剤が金コロイド標識抗体に自然に吸着し、ブロッキングが完了する。ブロッキング処理は、室温で例えば数分～数十分で完了する。
［遠心分離工程］
　遠心分離工程は、前記混合液を遠心分離して前記金コロイド標識抗体の沈殿を得て、金コロイドが吸着していない抗体を含む上清を除去する工程である。本工程は従来の金コロイド標識抗体を得る方法と同様に行うことができる。
　遠心分離の条件は金コロイド標識抗体を沈殿させることができ、未標識の抗体が沈殿しない程度の遠心力をかける条件であれば特に制限されない。遠心力として、例えば１３００ｇ～１５０００ｇ、好ましくは５０００ｇ～１５０００ｇの範囲が挙げられる。半径５ｃｍ～３０ｃｍ程度のローターを備えた遠心分離機を用いる場合、その回転数として、例えば５０００～２００００ｒｐｍ、好ましくは８０００～１２０００ｒｐｍの範囲が挙げられる。この回転数において、０．５～２時間程度の遠心処理で金コロイド標識抗体を沈殿させることができる。遠心分離時には４～１０℃程度に冷却することが一般的である。
　遠心分離後の上清の除去は常法で行うことができ、例えばデカンテーションやアスピレーター吸引が挙げられる。
［懸濁工程］
　懸濁工程は、ラクトアルブミンを含む懸濁用溶液で前記金コロイド標識抗体の沈殿を懸濁し、金コロイド標識抗体懸濁液を得る工程である。
　ラクトアルブミンはα－ラクトアルブミンであってもよく、β－ラクトアルブミンであってもよいが、懸濁による歩留まり向上の観点から、α－ラクトアルブミンが好ましい。ラクトアルブミンの由来する動物種は特に制限されず、市販品を安価に入手できることから牛由来のラクトアルブミンが好ましい。
　懸濁用溶液中のラクトアルブミン濃度としては、例えば０．０１ｍｇ／ｍＬ以上が好ましく、０．１０ｍｇ／ｍＬ以上がより好ましく、０．５０ｍｇ／ｍＬ以上がさらに好ましい。さらに好ましい範囲において、１．０ｍｇ／ｍＬ以上、２．０ｍｇ／ｍＬ以上、４．０ｍｇ／ｍＬ以上であってもよい。ラクトアルブミン濃度の上限値は特に制限されず、例えば１００ｍｇ／ｍＬ以下、５０ｍｇ／ｍＬ以下、２５ｍｇ／ｍＬ以下、２０ｍｇ／ｍＬ以下等が目安として挙げられる。
　金コロイド標識抗体に対するラクトアルブミンの懸濁力は極めて高いので、上記下限値以上であれば充分であり、高濃度で使用する必要はない。
　懸濁用溶液を構成する分散媒はラクトアルブミンが安定に分散されるものであればよく、一般に使用される種々のｐＨ緩衝剤が挙げられる。
　分散媒は無機塩を含んでいてもよい。無機塩類としてはＮａＣｌが好ましい。無機塩類の濃度としては例えば、１～４００ｍＭ、１０～３００ｍＭ、１００～２００ｍＭの範囲が挙げられる。
　懸濁用溶液のｐＨは、ラクトアルブミンの立体構造が安定に保たれる範囲が好ましく、例えば５．５～１０．０、好ましくは６．５～９．５、より好ましくは７．０～９．０、さらに好ましくは７．２～９．０の範囲が挙げられる。
　遠心分離工程で得た金コロイド標識抗体の沈殿の量は、標識工程で用いた金コロイドのほぼ全てが沈殿に含まれると考えられるので、金コロイドの量に換算することができる。標識工程で使用した前記混合液中の金コロイドの最大吸収波長における吸光度が１となる前記混合液の体積がＶ１であり、懸濁用溶液の体積がＶ２あるとき、Ｖ１／Ｖ２で表される体積比は、例えば１～１００、好ましくは１０～８０、より好ましくは１５～８０とすることができる。
　つまり、金コロイド標識抗体懸濁溶液について、金コロイドの最大吸収波長における吸光度が、例えば１～１００、好ましくは１０～５０、より好ましくは１５～４０、さらに好ましくは２０～３０となるように、懸濁用溶液の体積Ｖ２を調整するとよい。
　前記沈殿に懸濁用溶液を混合し、懸濁すると、金コロイド標識抗体とラクトアルブミンが接触して相互作用するため、金コロイド標識抗体の凝集が抑制された、充分な分散状態の金コロイド標識抗体懸濁液が得られる。
　懸濁用溶液による前記沈殿の懸濁は、室温で例えば数分で完了する。
　以上の各工程により、金コロイド標識抗体とラクトアルブミンを含む、目的の金コロイド標識抗体懸濁液が得られる。
　金コロイド標識抗体懸濁液中のラクトアルブミン濃度は、使用した懸濁用溶液の体積Ｖ２と沈殿の体積にもよるが、凡そ懸濁用溶液中のラクトアルブミン濃度と同じか少し希釈された程度であり、例えば０．１ｍｇ／ｍＬ以上でありうる。
　金コロイド標識抗体懸濁液中の金コロイド標識抗体の濃度は、金コロイドの最大吸収波長の吸光度で定義することができ、例えば１～１００、好ましくは１０～８０、より好ましくは１５～８０、とすることができる。
　後述の実施例で示すように、ＢＳＡの懸濁力よりもラクトアルブミンの懸濁力の方が極めて高いので、懸濁用溶液にはＢＳＡが含まれる必要はない。懸濁用溶液にＢＳＡが含まれていても構わず、例えば１ｍｇ／ｍＬ未満、０．１ｍｇ／ｍＬ以下、０．０１ｍｇ／ｍＬ以下が挙げられる。
　遠心分離工程の前にＢＳＡでブロッキング処理を行った場合には、遠心分離工程で得た金コロイド標識抗体の沈殿中にＢＳＡが若干含まれているので、金コロイド標識抗体懸濁液中に少量のＢＳＡが含まれてもよい。
≪金コロイド標識抗体懸濁液≫
　本発明の第二態様は、金コロイド標識抗体と、０．１ｍｇ／ｍＬ以上のラクトアルブミンとを含む、金コロイド標識抗体懸濁液である。
　本態様の金コロイド標識抗体懸濁液の組成は、第一態様の製造方法で得られた金コロイド標識抗体懸濁液の組成と同じでよく、重複する説明は省略する。
≪検査器具≫
　本発明の第三態様は、被検出物質を含む検査対象溶液を吸収するパッドを備えた検査器具である。
　本態様の検査器具において、被検出物質に結合する金コロイド標識抗体とラクトアルブミンとを含む金コロイド標識抗体懸濁液の乾燥体が前記パッドに保持されている。金コロイド標識抗体懸濁液を保持させ、その後乾燥して乾燥体としたパッドをコンジュゲートパッドと称する。一例の検査器具における前記コンジュゲートパッド中に含まれるラクトアルブミンの量は、０．１μｇ以上が好ましく、０．５μｇ以上がさらに好ましい。さらに好ましい範囲において、１．０μｇ以上、２．０μｇ以上、４．０μｇ以上であってもよい。
　前記コンジュゲートパッドの材料としては、グラスファイバーパッド、ろ紙、綿、不織布等の水を吸収・保持可能なものであれば特に制限されない。
　前記金コロイド標識抗体懸濁液の組成は、第一態様の製造方法で得られた金コロイド標識抗体懸濁液の組成と同じでよく、重複する説明は省略する。
　本態様の検査器具は、プラスチック製粘着シート等の支持体上に、コンジュゲートパッド、抗体固相化メンブレン、吸収パッドが順に並んだ構造を有することが好ましく、これらの構成要素以外の部材を含んでいてもよい。 抗体固相化メンブレンは、被検出物質に結合する抗体を固定化したテストラインと、任意で、検査が適切に進行したことを確認するためのコントロールラインとを含む。
　前記コンジュゲートパッドには予め金コロイド標識抗体が含まれているので、検査対象溶液中に金コロイド標識抗体の抗原が存在していた場合、前記コンジュゲートパッドに検査対象溶液が浸み込むと、金コロイド標識抗体と抗原とが抗原抗体反応により結合し複合体を形成する。前記複合体が抗体固相化メンブレン上の抗体と結合するとテストラインが発色するため、検査対象溶液中の抗原の存在量に応じたシグナルを検出することができる。検出シグナルを得るため、又は増強するために他の薬剤を使用してもよい。
　前記検査器具において、検査対象溶液は、コンジュゲートパッド、抗体固相化メンブレン、吸収パッドの順に浸透する。吸収パッドは検査対象溶液を最終的に受け止めて保持するために設けられる。
　本態様の実施形態の一例として、イムノクロマトグラフィー法に基づいた試験用のストリップ（イムノクロマトグラフィーテストストリップ）が挙げられる。
　このストリップは、前記コンジュゲートパッドと、前記コンジュゲートパッドを支持する細長い支持体を備える。ストリップの全体又は一部が検査対象溶液を吸収可能とされており、ストリップの一端を検査対象溶液に浸す、またはストリップに検査対象溶液を滴下することにより、検査対象溶液がストリップの一端から他端へ向けて浸み込みながら進行する。この途上に前記コンジュゲートパッドを設けてあるので、検査対象溶液が金コロイド標識抗体と反応すれば、上述の通り、シグナルを検出することができる。通常、コンジュゲートパッドに隣接する下流側に抗体固相化メンブレンを設け、更に下流側に吸収パッドを設けた構成で実施される。この一連の試験方法は一般にイムノクロマトグラフィーと呼ばれ、公知である。
　本態様にあっては前記コンジュゲートパッドに金コロイド標識抗体とラクトアルブミンを含むので、前記コンジュゲートパッドに金コロイド標識抗体が良好な分散状態で担持されている。この結果、良好な分散状態を反映した、良好な検出感度を得られる。
　以下、「％」や「部」の単位は、特に明記しない限り、質量基準の「質量％」や「質量部」を意味する。
（１）抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の調製
　以下の試験に用いる抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、抗原としてリコンビナントＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質を用い、マウスに免疫し、当業者がモノクローナル抗体を製造するために通常行う方法を用いて得られた。
（２）金コロイド溶液の調製
　９３℃に加温した５００ｍＬの精製水に対し、７％（ｗ／ｖ）クエン酸三アンモニウム水溶液を１ｍＬ添加して攪拌混合した。続いて、５％（ｗ／ｖ）テトラクロロ金（ＩＩＩ）水溶液を１ｍＬ添加し、攪拌しながら１０分間反応させた後、反応液を沸騰させた。この後、氷水中で冷却し、平均粒子径が６０ｎｍの金コロイドの溶液を調製した。
（３）金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液の作製１
　精製水と１Ｎ　炭酸カリウム水溶液を用いて最大吸収波長における吸光度が１、ｐＨが７．０となるように調製した６０ｎｍ金コロイド溶液２０ｍＬに、２５μｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を含む２ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）１ｍＬを添加し、室温で１０分間攪拌した。続いて金コロイド溶液に１０％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）溶液２ｍＬを添加し、室温で５分間攪拌した。得られた溶液を、１０℃、１０，０００ｒｐｍで４５分間遠心し上清を除去した。
　沈殿として残った金コロイド標識抗体を金コロイド標識抗体懸濁用溶液（２０ｍＭ 　Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、２０ｍｇ／ｍＬ　ラクトアルブミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｃｈ社）、ｐＨ７．４）０．８ｍＬで懸濁し、実施例１の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液を得た。
　金コロイド標識抗体懸濁用溶液中の２０ｍｇ／ｍＬ　ラクトアルブミン（実施例１）を、１０ｍｇ／ｍＬ　ラクトアルブミン（実施例２）、５ｍｇ／ｍＬ　ラクトアルブミン（実施例３）、１ｍｇ／ｍＬ　ラクトアルブミン（実施例４）、２０ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡ（比較例１）、１０ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡ（比較例２）、５ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡ（比較例３）、１ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡ（比較例４）に変更して、実施例２～４及び比較例１～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液を得た。
（４）金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体回収量の確認
　金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液をそれぞれ４１倍希釈した。分光光度計Ｕ－３９００Ｈ（ＨＩＴＡＣＨＩ社）を用いて各溶液の４００ｎｍ～９００ｎｍにおける吸光度を測定し、最大吸収波長と最大吸収波長における吸光度を算出した。結果を表１に示す。
（結果）
　金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液の作製に用いた金コロイドに由来する最大吸収波長における吸光度の理論値は２５であり、金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液の最大波長における吸光度は、金コロイドに由来する吸光度に、タンパク質に由来する吸光度を加算したものとなる。ラクトアルブミンを含む金コロイド標識抗体懸濁用溶液で懸濁した実施例１～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液は、最大吸収波長における吸光度が理論値付近となり、良好であった。一方、ＢＳＡを含む金コロイド標識抗体懸濁用溶液で懸濁した比較例１～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液は、最大吸収波長における吸光度が理論値の１／２未満となり、不良であった。
（５）コンジュゲートパッドの作製
　上記（３）で調製した実施例１～４及び比較例１の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液を、それぞれの金コロイド標識抗体懸濁用溶液で最大吸収波長における吸光度が９となるよう希釈した。希釈後の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液を１．３３％カゼイン、４％スクロース溶液（ｐＨ７．５）で最大吸収波長における吸光度が３．４となるようにそれぞれ希釈しコンジュゲートパッド塗布溶液を調製した。イムノクロマト法用ディスペンサー（分注プラットホームＸＹＺ３０６０；ＢＩＯ　ＤＯＴ社）を用い、それぞれの標識試薬液をガラス繊維製パッドに１０μＬ／ｃｍでライン上に塗布し、標識試薬液を乾燥させてコンジュゲートパッドを得た。
（６）抗体固相化メンブレンの作製
　０．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を調製し、検出部塗布液を得た。１．０ｍｇ／ｍＬヤギ抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳを調製し、対照部塗布液を得た。イムノクロマト法用ディスペンサー（分注プラットホームＸＹＺ３０５０、ＢＩＯ　ＤＯＴ社）を用い、ニトロセルロースメンブレン上の２箇所に、検出部塗布液及び対照部塗布液をそれぞれ１．０μＬ／ｃｍで塗布し、乾燥させることで、抗体固相化メンブレンを得た。
（７）テストストリップの作製
　プラスチック製粘着シートにコンジュゲートパッド、抗体固相化メンブレン、吸収パッドを貼付し、５ｍｍ幅に裁断することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップを得た。テストストリップの形態は、幅５ｍｍ、長さ７０ｍｍであり、一方の端から他方の端へ、コンジュゲートパッド、抗体固相化メンブレン（テストライン、コントロールライン）、吸収パッドが順に並んでいる。
（８）試料の調製
　ラピッドテスタ　ＦＬＵ・ＮＥＸＴ（積水メディカル社）に付属の検体希釈液に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２　Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｉｃｏｓａｇｅｎ社）を４５０　ＴＣＩＤ５０／ｍＬの濃度で添加したものを試料として用いた。
（９）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップ
　試料１２０μＬをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップに滴下し、２０分間静置した。デンシトメトリー分析装置（ラピッドテスタ（登録商標）リーダー、積水メディカル社）でテストラインにおける吸光度を測定した。結果を表２に示す。金コロイド標識抗体懸濁用溶液中のタンパク質種及びタンパク質濃度によらず、実施例１～４及び比較例１のすべてのテストストリップでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原を検出できた。一方、比較例２～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液中の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体濃度が低く、コンジュゲートパッドを作製できなかった。
　これらの結果は、実施例１～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液中の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体量はコンジュゲートパッドを作成するに当たって充分である一方、比較例２～４の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体量は不足しており、比較例１の金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体量は許容量の下限付近あることを示している。つまり、実施例１～４で用いたラクトアルブミンは、ＢＳＡと比べて、金コロイド標識抗体を懸濁する能力が格段に優れていることを示している。
（９）金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液の作製２
　最大吸収波長における吸光度が１となるように調製した６０ｎｍ金コロイド溶液７５０ｍＬに、６０μｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を含む２ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）１０ｍＬを添加し、室温で１０分間攪拌した。続いて金コロイド溶液に１０％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）溶液５６ｍＬを添加し、室温で５分間攪拌した。得られた溶液を、１０℃、１０，０００ｒｐｍで４５分間遠心し上清を除去した。
　沈殿として残った金コロイド標識抗体を３０等分して分注した。分注した金コロイド標識抗体を、表３の金コロイド標識抗体懸濁用のタンパク質と、ｐＨ調整したバッファーと、ＮａＣｌを含む溶液でそれぞれ懸濁し、（３）に記載の方法で最大吸収波長と最大吸収波長における吸光度を測定した。
　金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体液の作製に用いた金コロイドに由来する最大吸収波長における吸光度の理論値は２５である。ラクトアルブミンを含む金コロイド標識抗体懸濁用溶液で金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を懸濁した場合、理論吸光度の５０％以上を示し、良好な金コロイド標識抗体回収率であった。
　一方、カゼインを含む金コロイド標識抗体懸濁用溶液を用いた場合には、最大吸収波長の高波長シフトや金コロイド標識抗体回収率の不良を認めた。
　以上から、本発明に係る金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法にあっては、金コロイドを吸着させた抗体の沈殿を懸濁する際に、ラクトアルブミンを含む懸濁溶液を用いているので、抗体の凝集を防ぎやすく、抗体の回収率が格段に向上することが明らかである。また、得られた金コロイド標識抗体の抗原結合機能も充分に維持されることが明らかである。本発明の効果は驚くべきものである。なぜならば、従来からタンパク質の非特異的吸着を防ぐ一般的なブロッキング剤として使用されているＢＳＡは、アルブミンの一種であり、ラクトアルブミンのブロッキング機能はＢＳＡと同等であると信じられてきたからである。本発明者らの鋭意検討により、ラクトアルブミンは、ＢＳＡやカゼイン等の公知のブロッキング剤の中で格別顕著な効果を示すことが明らかになった。

Claims (7)

  1. 　金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法であって、
    　金コロイド溶液と抗体溶液とを混合した混合液を得て、前記混合液中に金コロイド標識抗体を得る標識工程と、
    　前記混合液を遠心分離して前記金コロイド標識抗体の沈殿を得て、金コロイドが吸着していない抗体を含む上清を除去する遠心分離工程と、
    　ラクトアルブミンを含む懸濁用溶液で前記金コロイド標識抗体の沈殿を懸濁し、金コロイド標識抗体懸濁液を得る懸濁工程と、を含む、金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
  2. 前記標識工程の後、前記遠心分離工程の前に、前記混合液にＢＳＡを含む溶液を添加し、前記金コロイド標識抗体をブロッキング処理する、請求項１に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
  3. 前記懸濁用溶液に、ＢＳＡが含まれないか、又は、ＢＳＡが含まれるとしてもその濃度が１ｍｇ／ｍＬ未満である、請求項２に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
  4. 前記懸濁用溶液に含まれるラクトアルブミンの濃度が、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上である、請求項１～３のいずれか一項に記載の金コロイド標識抗体懸濁液の製造方法。
  5. 金コロイド標識抗体と、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上のラクトアルブミンとを含む、金コロイド標識抗体懸濁液。
  6. 検査対象溶液を吸収するパッドを備えた検査器具であって、
    金コロイド標識抗体と０．１μｇ以上のラクトアルブミンとを含む金コロイド標識抗体懸濁液の乾燥体が前記パッドに保持された、検査器具。
  7. 前記パッドが細長い支持体に支持され、
    前記検査対象溶液のイムノクロマトグラフィーを行う用途で使用される、請求項６に記載の検査器具。
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SETO YASUYUKI: "Bovine Milk Proteins", OLEOSCIENCE, vol. 23, no. 8, 1 January 2023 (2023-01-01), JP , pages 415 - 421, XP093377238, ISSN: 1345-8949, DOI: 10.5650/oleoscience.23.415 *

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