WO2024248019A1 - 乖離波形の解析による血液凝固異常の要因の推定方法 - Google Patents

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由紀夫 小田
真理 遠見
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Sekisui Medical Co Ltd
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • G01N33/4905—Determining clotting time of blood

Definitions

  • the present invention relates to a method for estimating the causes of blood coagulation disorders.
  • Blood coagulation tests are tests to diagnose a patient's blood clotting ability by adding a specific reagent to a patient's blood sample and measuring the blood clotting time, etc.
  • Typical examples of blood clotting times include prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), and thrombin time.
  • Abnormalities in blood clotting ability cause an extension of the clotting time.
  • Factors that cause abnormalities in blood clotting ability include the effects of anticoagulants, a decrease in components involved in clotting, a congenital deficiency of blood clotting factors, and the acquired appearance of autoantibodies that inhibit the clotting reaction.
  • a cross-mixing test is performed to determine the cause of the extension of the clotting time.
  • a mixed sample of the test sample and a normal sample is prepared, and the APTT (immediate reaction) immediately after mixing and the APTT (delayed reaction) after incubation at 37°C for 2 hours are measured.
  • the cause of the extension of the APTT of the test sample is a coagulation factor inhibitor (anticoagulant), lupus anticoagulant (LA), or a coagulation factor deficiency such as hemophilia.
  • anticoagulant a coagulation factor inhibitor
  • LA lupus anticoagulant
  • a coagulation factor deficiency such as hemophilia.
  • DOACs Directly Acting Oral Anticoagulants
  • DOACs are oral anticoagulants that inhibit thrombin or activated factor X and are administered prophylactically to patients at risk of thrombosis.
  • Blood samples taken from patients administered DOACs usually have an extended clotting time, but there are cases where the clotting time is within the normal range, which may pose a serious risk to the patient. For example, if a patient administered DOACs is rushed to the hospital after a traffic accident or other reason and undergoes surgery, and an extended clotting time is not observed in the usual preoperative coagulation test, a doctor who does not know that the patient is administered DOACs will not notice that there is an abnormality in the patient's coagulation ability and will not be able to administer appropriate treatment.
  • Patent documents 1 to 4 describe the calculation of parameters such as weighted average time, weighted average height, peak width, and baseline length of a coagulation rate curve of a blood sample, and the use of these parameters for estimating factors that extend blood coagulation time, evaluating coagulation factor deficiency, and calculating blood coagulation time.
  • Patent document 5 describes the calculation of points p k and q k at which the coagulation rate curve is S% of the maximum value before and after the point at which the coagulation rate curve reaches the maximum value, and the calculation of parameters for estimating factors of blood coagulation abnormality using p k and q k .
  • Patent document 6 describes the estimation of factors that extend blood coagulation time based on the shape of a function T(X) that represents the time at which the coagulation reaction curve P(i) of a blood sample reaches X% of the coagulation reaction end point Pe.
  • the present invention provides a new method for estimating the causes of coagulation abnormalities in blood samples.
  • the parameter reflecting the shape of D(i) is at least one selected from the group consisting of gT(S), gH(S), gB(S), gAB(S), and RgB(S1/S2);
  • gB(S) represents the time or the number of measurement points between t1 and t2 that satisfies D(i) ⁇ Dmax ⁇ S(%);
  • test blood sample is presumed to be heparin positive;
  • S1 ⁇ S2 and RgB (S1/S2) is a threshold or less, or if S1>S2 and RgB (S1/S2) is a threshold or greater, the test blood sample is presumed to be heparin positive;
  • gB(S) for Ds(i) represents the time or the number of measurement points that satisfy Ds(i) ⁇ [maximum value of Ds(i) ⁇ S (%)] between t1 and t2;
  • the method described in [8]. [10] The method described in [9], comprising: presuming that the test blood sample is lupus anticoagulant positive when R(S) is a threshold value or greater; or presuming that the test blood sample is coagulation factor deficient when R(S) is a threshold value or less. [11] The method described in [1], further comprising calculating the coagulation time of the test blood sample.
  • the present invention when the clotting time of a test blood sample is prolonged, it is possible to estimate the cause of the clotting abnormality that caused the prolongation of the clotting time. Furthermore, according to the present invention, it is possible to detect blood samples administered DOACs from among test blood samples that do not have a prolonged clotting time and in which clotting abnormalities cannot be detected using conventional clotting tests.
  • gAB05 for samples with positive coagulation factor inhibitors (Inh) and other factors that prolong the APTT.
  • gB05/gB90 in heparin positive (Hep) specimens and specimens with other factors prolonging the APTT.
  • coagulation reaction In blood coagulation tests, a specific reagent is added to a test blood sample, the blood coagulation reaction is measured, and the blood coagulation time is measured from the coagulation reaction.
  • the blood coagulation reaction, blood coagulation time, and blood sample may be referred to simply as “coagulation reaction,” “coagulation time,” and “sample,” respectively.
  • Coagulation reactions are measured using common means, such as optical means for measuring the amount of scattered light, transmittance, and absorbance, or mechanical means for measuring the viscosity of plasma.
  • the coagulation reaction curve of a normal sample basically shows a sigmoid shape, depending on the measurement means.
  • the coagulation reaction curve based on the amount of scattered light of a normal sample usually rises sharply due to the progress of coagulation after a certain amount of time has passed since the addition of the reagent, and then reaches a plateau as the coagulation reaction approaches completion.
  • the coagulation reaction curve of an abnormal sample with abnormal blood coagulation shows various shapes depending on the cause of the abnormality, such as a delayed rise time of the curve or a gradual rise.
  • the coagulation time is often extended in abnormal samples compared to normal samples. Prolongation of clotting time is an indicator of the presence or absence of coagulation abnormality factors.
  • the type of coagulation abnormality factor factor that prolongs clotting time
  • the first suspected cause is heparin contamination (e.g. administration of heparin, drawing blood from a heparin-locked infusion line, drawing blood after dialysis, etc.).
  • Blood samples contaminated with heparin can be confirmed by the fact that the clotting time is shortened by protamine sulfate, which has a heparin-neutralizing effect.
  • the administration of DOACs or warfarin is confirmed if possible, and then a cross-mixing test is performed to determine the cause of the prolongation of the clotting time (hereinafter also referred to simply as the "prolongation cause").
  • the prolongation of the APTT is due to a clotting factor inhibitor (anticoagulant), lupus anticoagulant (LA), or a clotting factor deficiency such as hemophilia.
  • the APTT (immediate reaction) immediately after mixing and the APTT (delayed reaction) after 2 hours of incubation at 37°C are measured for normal samples, test samples, and mixed samples of test samples and normal samples.
  • the cause of APTT prolongation is determined based on the patterns of these immediate and delayed reactions. With conventional methods, the cause of prolongation cannot be determined unless the cross-mixing test is performed separately from the clotting time measurement. However, the cross-mixing test is time-consuming and laborious, as it requires measurement of the immediate reaction of the mixed sample and the delayed reaction after 2 hours of incubation.
  • Patent Documents 1 to 5 methods have been proposed for obtaining data on prolongation factors without relying on cross-mixing tests.
  • the evaluation of prolongation factors utilizes the derivative curve of the coagulation reaction curve, i.e., the coagulation rate (first derivative) and coagulation acceleration (second derivative).
  • information on prolongation factors is extracted using a function T(X) calculated based on the coagulation reaction curve, without using the above-mentioned derivative curve.
  • T(X) the coagulation rate
  • second derivative coagulation acceleration
  • the present invention relates to a method for estimating the cause of coagulation abnormality in a blood sample.
  • the cause of coagulation abnormality is estimated by analyzing the difference between the coagulation reaction curves of a test sample and a reference sample.
  • Clotting reaction measurement In the clotting reaction measurement, the clotting reaction of a test sample is measured. A clotting reaction curve can be obtained from the time series data of the clotting reaction obtained by this measurement.
  • the clotting reaction measurement can be performed according to the procedure of a general clotting reaction measurement performed in clotting time measurement such as prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT), or fibrinogen concentration (Fbg) measurement.
  • PT prothrombin time
  • APTT activated partial thromboplastin time
  • Fbg fibrinogen concentration
  • the subject's plasma is preferably used as the test blood sample.
  • An anticoagulant that is typically used in coagulation tests can be added to the sample.
  • blood is collected using a blood collection tube containing sodium citrate, and then centrifuged to obtain plasma.
  • a coagulation time measuring reagent is added to the test specimen to initiate the blood coagulation reaction.
  • the coagulation reaction of the mixture after the addition of the reagent can be measured.
  • the reagent used can be selected arbitrarily according to the purpose of the measurement.
  • Reagents for various coagulation time measurements are commercially available (for example, APTT reagent Coagpia APTT-N; manufactured by Sekisui Medical Co., Ltd.).
  • general means such as optical means for measuring the amount of scattered light, transmittance, absorbance, etc., or mechanical means for measuring the viscosity of plasma, may be used.
  • the start time of the coagulation reaction can typically be defined as the time when the coagulation reaction is initiated by mixing the reagent with the specimen, but other timings may also be defined as the reaction start time.
  • the measurement time of the coagulation reaction can be arbitrarily determined, and can be, for example, several tens of seconds to about 7 minutes from the time when the specimen and the reagent are mixed.
  • the progress of the coagulation reaction can be repeatedly measured at predetermined intervals (photometry in the case of optical detection). For example, the measurement can be performed at intervals of 0.1 seconds.
  • the temperature of the mixture during the measurement is usually set to, for example, 30°C or higher and 40°C or lower, preferably 35°C or higher and 39°C or lower.
  • various measurement conditions can be set appropriately depending on the test sample, reagent, measurement means, etc.
  • the series of operations in the coagulation reaction measurement described above can be performed using an automatic analyzer.
  • an automatic analyzer is the CP3000 automatic blood coagulation analyzer (manufactured by Sekisui Medical Co., Ltd.).
  • some of the operations may be performed manually.
  • the preparation of the test sample can be performed manually, and the subsequent operations can be performed by the automatic analyzer.
  • Clotting reaction curve Measurement data of the test specimen is obtained by clotting reaction measurement. This data reflects the clotting reaction process of the test specimen. For example, data (hereinafter referred to as reaction data C(i)) showing the time change in the progress of the clotting reaction (e.g., the amount of scattered light) after calcium chloride solution is added from a mixture containing the test specimen and a clotting time measurement reagent is obtained.
  • reaction data C(i) showing the time change in the progress of the clotting reaction (e.g., the amount of scattered light) after calcium chloride solution is added from a mixture containing the test specimen and a clotting time measurement reagent is obtained.
  • the reaction data C(i) is pre-processed.
  • the pre-processing may include a smoothing process to remove noise, or a zero-point adjustment. Any of the known noise removal methods may be used for the smoothing process.
  • the amount of scattered light in the mixture containing the test specimen at the start of the reaction (time 0) is greater than 0.
  • the amount of scattered light at time 0 can be adjusted to 0 by the zero-point adjustment.
  • the zero-point adjustment is preferably performed after the smoothing process.
  • the reaction data C(i) is converted into a relative value to obtain the coagulation reaction curve P(i) used in the present invention.
  • P(i) is calculated from C(i) according to the following formula (1).
  • Cmax and Cmin respectively represent the maximum and minimum values of C(i)
  • Crange represents the range of change of C(i) (i.e., Cmax-Cmin)
  • A is an arbitrary value and corresponds to the maximum value of P(i).
  • i represents the time from the start of the coagulation reaction of the sample (hereinafter also simply referred to as "time") or the number of measurement points from the start of the coagulation reaction of the sample (hereinafter also simply referred to as "measurement points").
  • P(i) based on the amount of scattered light is usually sigmoidal.
  • P(i) based on the amount of transmitted light is usually inverted sigmoidal.
  • the procedure of the method of the present invention will be explained using P(i) based on the amount of scattered light.
  • the reference curve Pn(i) is created based on P(i) (hereinafter referred to as P'(i)) from a reference sample.
  • the reference sample can be a blood sample from a person without a blood coagulation abnormality, such as a blood sample taken from a healthy person, preferably plasma, a pooled sample thereof, or commercially available normal plasma (hereinafter collectively referred to as "normal sample”).
  • the reference sample is a sample with a clotting time (APTT) of 24 to 39 seconds, more preferably 24 to 30 seconds.
  • APTT clotting time
  • P(i) from the sample with the shortest clotting time among blood samples from a person without a blood coagulation abnormality or the average value of P(i) from blood samples from a person without a blood coagulation abnormality, can be used as P'(i).
  • Pn(i) is a curve obtained by shifting P'(i) so that its rising point (time or the number of measurement points corresponding thereto) coincides with a predetermined point X.
  • the rising point of P'(i) can be detected as the time or the number of measurement points at which P(i) reaches 1 to 5%, for example 2%, of its maximum value.
  • Pn(i) is expressed by the following formula (3).
  • parameters that reflect the shape of the deviation curve D(i) of the test sample obtained above can be calculated.
  • Such parameters include weighted average time, weighted average height, peak width, etc.
  • the calculated parameters are the weighted average time and/or the weighted average height in a predetermined calculation range of the deviation curve D(i) of the test specimen.
  • the calculation range is defined as a region in D(i) that satisfies D(i) ⁇ Dmax ⁇ S (%), where Dmax represents the maximum value of D(i) and 0 ⁇ S ⁇ 100.
  • Dmax represents the maximum value of D(i) and 0 ⁇ S ⁇ 100.
  • 1 ⁇ S ⁇ 99 and more preferably, 5 ⁇ S ⁇ 95.
  • the calculation range and its weighted average time and weighted average height vary depending on S.
  • a plurality of weighted average times and weighted average heights according to S can be calculated.
  • the weighted average time and weighted average height according to S are represented as gT(S) and gH(S), respectively.
  • gT(S) and gH(S) are expressed by the following formulas (4) and (5), respectively.
  • the calculated parameter is the peak width in a predetermined calculation range of the deviation curve D(i) of the test specimen, which represents the time or number of measurement points between t1 and t2 that satisfy D(i) ⁇ Dmax x S (%). Therefore, the peak width varies depending on S. Multiple peak widths corresponding to S can be calculated. In this specification, the peak width corresponding to S is represented as gB(S).
  • the calculated parameter is the ratio of two gB(S) for different S, specifically expressed as gB(S1)/gB(S2), hereinafter also referred to as RgB(S1/S2).
  • S1 and S2 are defined similarly to S described above, except that S1 ⁇ S2.
  • ⁇ 20, e.g., 5 ⁇ S1 ⁇ 40 and 60 ⁇ S2 ⁇ 90, or 60 ⁇ S1 ⁇ 90 and 5 ⁇ S2 ⁇ 40.
  • the calculated parameter is the ratio of gB(S) to gH(S), specifically expressed as gH(S)/gB(S), where 5 ⁇ S ⁇ 90 is preferable.
  • gH(S)/gB(S) is also referred to as the sharpness ratio gAB(S).
  • the cause of coagulation abnormality in a test sample can be estimated.
  • the present invention makes it possible to estimate, for a test sample that does not have a prolonged coagulation time, whether the sample is normal or is receiving DOACs (DOACs positive).
  • the present invention can estimate the cause of coagulation abnormality that caused the prolongation of the coagulation time of a test sample with a prolonged coagulation time.
  • Examples of the cause of coagulation abnormality that can be estimated by the present invention include coagulation factor deficiency, lupus anticoagulant positivity, coagulation factor inhibitor positivity, and heparin positivity.
  • the clotting time of the test sample is calculated before estimating the cause of the clotting abnormality.
  • the calculation of the clotting time can be performed according to any method. Examples of the method for calculating the clotting time include a method of calculating the clotting time when P(i) reaches N% of its maximum value; a method of calculating the clotting time when the first derivative curve of P reaches N% of its maximum value; a method of calculating the clotting time when P(i) reaches N% of P(Te), with the ratio of the integrated value of P(i) in a small time period reaching a predetermined value as the calculation starting point Te (JP Patent Publication No.
  • the sample is inferred to be normal or positive for DOACs based on the parameters reflecting the shape of D(i).
  • the parameter is gB(S).
  • the gB(S) of a DOACs-positive sample tends to be larger than that of a normal sample. Therefore, if the gB(S) of a test sample is a predetermined threshold or larger, the sample can be presumed to be DOACs-positive.
  • the threshold can be determined based on gB(S) obtained from a group of known DOACs-positive samples.
  • the parameter is gAB(S).
  • the gAB(S) of a DOACs-positive sample tends to be smaller than that of a normal sample. Therefore, if the gAB(S) of a test sample is a predetermined threshold or smaller, the sample can be presumed to be DOACs-positive.
  • the threshold can be determined based on the gAB(S) obtained from a group of known DOACs-positive samples.
  • the gAB(S) of a test sample is a predetermined threshold or larger, the sample can be presumed not to be DOACs-positive (or normal).
  • the parameter is RgB(S1/S2).
  • RgB(S1/S2) of a heparin-positive sample tends to be smaller than samples with other coagulation abnormalities. Therefore, if the RgB(S1/S2) of a test sample is equal to or smaller than a predetermined threshold, the sample can be estimated to be heparin-positive (Hep).
  • the threshold can be determined based on RgB(S1/S2) obtained from a group of known heparin-positive samples.
  • S1>S2 if the RgB(S1/S2) of the test sample is equal to or greater than a predetermined threshold, the sample can be estimated to be heparin positive (Hep).
  • the parameter is gAB(S).
  • the gAB(S) of a coagulation factor inhibitor positive sample tends to be smaller than that of samples with other coagulation abnormalities. Therefore, if the gAB(S) of a test sample is equal to or smaller than a predetermined threshold, the sample can be estimated to be coagulation factor inhibitor positive (Inh).
  • the cause of coagulation abnormality of a test specimen that was not determined to be heparin positive (Hep) or coagulation factor inhibitor positive (Inh) by the above procedure is determined, specifically, whether the specimen is lupus anticoagulant positive (LA) or has coagulation factor deficiency (Def).
  • a mixed sample of a test sample and a normal sample is prepared, and a deviation curve D(i) for the mixed sample is obtained. Separately, D(i) is obtained for the test sample and the normal sample. gAB(S) is calculated for each D(i). The procedure for calculating gAB(S) for the test sample is as explained above.
  • a test specimen and a normal specimen are mixed in a predetermined ratio.
  • a normal specimen as described above, for example, a blood specimen collected from a healthy person, preferably plasma, a pooled specimen thereof, commercially available normal plasma, etc. can be used.
  • the coagulation reaction of the mixed specimen is measured to obtain P(i) of the mixed specimen.
  • P(i) of the mixed specimen is also called Pm(i).
  • D(i) of the mixed specimen is calculated from Pm(i).
  • D(i) of the mixed specimen is also called Dm(i).
  • gAB(S) is calculated from Dm(i).
  • the coagulation reaction of the normal specimen is measured to obtain P(i) of the normal specimen.
  • P(i) of the normal sample is also called Ps(i).
  • D(i) of the normal sample is calculated from Ps(i).
  • D(i) of the normal sample is also called Ds(i).
  • gAB(S) is calculated from Ds(i).
  • the procedures for measuring the coagulation reaction of the mixed sample and normal sample, obtaining Pm(i) and Ps(i), and calculating Dm(i) and Ds(i) follow the procedures described above for the test sample.
  • the procedures for calculating gAB(S) from Dm(i) and Ds(i) follow the procedures described above for the gAB(S) of the test sample.
  • a parameter R(S) is calculated from gAB(S) for Dm(i) of the mixed sample, D(i) of the test sample, and Ds(i) of the normal sample according to the following equation (6).
  • R(S) ⁇ (gAB(S) for Ds(i)) + (gAB(S) for D(i)) ⁇ / 2 - (gAB(S) for Dm(i)) (6)
  • R(S) of LA specimens tends to be larger than that of Def specimens. Therefore, if the R(S) of a test specimen is larger than a predetermined threshold, the specimen can be presumed to be LA, whereas if the R(S) is smaller than the predetermined threshold, the specimen can be presumed to be Def.
  • the estimated results of the causes of the coagulation abnormality of the test sample obtained by the above procedure can be output in any format. For example, they can be output in the form of electronic data, printout, display on a display, etc.
  • the estimated results include information on whether the test sample is normal, or whether it is DOACs positive, coagulation factor deficient, lupus anticoagulant positive, coagulation factor inhibitor positive, or heparin positive.
  • the coagulation time of the test sample, and further parameters reflecting the P(i), D(i) or the shape of the D(i) of the test sample, or the value of the parameter R(S) may be output together with the estimated results.
  • the present invention has been described above by taking the case of using a coagulation reaction curve obtained based on the amount of scattered light as an example.
  • a person skilled in the art can apply the method of the present invention to a method using a coagulation reaction curve obtained from another coagulation reaction measurement method (for example, a coagulation reaction measurement method based on transmittance, absorbance, viscosity, etc.).
  • a coagulation reaction measurement method based on transmittance, absorbance, viscosity, etc. for example, an inverse sigmoid coagulation reaction curve based on the amount of transmitted light has a positive and negative opposite to that based on the amount of scattered light described above.
  • test sample is DOACs positive and the APTT are output.
  • test sample is Inh and the APTT are output.
  • test sample is Hep and the APTT are output.
  • test sample is LA and the APTT are output.
  • test sample is Def and the APTT are output.
  • DOACs positive samples DOACs
  • the APTT measurement reagent used was Coagpia APTT-N (manufactured by Sekisui Medical Co., Ltd.) as the first reagent, and Coagpia APTT-N calcium chloride solution (25 mM calcium chloride solution, manufactured by Sekisui Medical Co., Ltd.) as the second reagent.
  • the clotting reaction measurement was performed using a blood clotting automatic analyzer CP3000 (manufactured by Sekisui Medical Co., Ltd.). 50 ⁇ L of the sample was heated in a cuvette at 37° C. for 45 seconds, and then 50 ⁇ L of the first reagent at about 37° C.
  • the reaction was performed at 37° C.
  • the clotting reaction was measured by irradiating the cuvette with light having a wavelength of 660 nm using an LED as a light source, and measuring the amount of scattered light at 90 degrees side at 0.1 second intervals. The measurement time was 360 seconds.
  • gT(S), gH(S), gB(S), gAB(S), and R(S) may be expressed as gTS, gHS, gBS, gABS, and RS, respectively, without parentheses.

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Abstract

血液検体の凝固異常の要因の推定方法であって、被検血液検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）を算出すること、該Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータを算出すること、該パラメータに基づいて、該被検血液検体の凝固異常の要因を推定すること、を含み、ここで、Ｄ（ｉ）＝Ｐ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；ｉは計測点数又は時間を表し；Ｐ（ｉ）は、該被検血液検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；Ｐｎ（ｉ）は、Ｐ'（ｉ）を、その立ち上がり点を所定点Ｘに合わせるようにシフトさせた曲線であり、該Ｐ'（ｉ）は、基準検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；Ａ＞０であり；Ｘは５～１５秒、又はそれに対応する計測点数である、方法。

Description

乖離波形の解析による血液凝固異常の要因の推定方法
　本発明は、血液凝固異常の要因の推定方法に関する。
　血液凝固検査は、患者の血液検体に所定の試薬を添加して血液凝固時間等を測定することにより、患者の血液凝固能を診断するための検査である。血液凝固時間の典型的な例としては、プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、トロンビン時間などがある。血液凝固能の異常は、凝固時間の延長を引き起こす。血液凝固能の異常が生じる要因としては、抗凝固薬の影響、凝固関与成分の減少、先天的な血液凝固因子の欠乏、凝固反応を阻害する自己抗体の後天的な出現などが挙げられる。
　従来、血液凝固検査で被検検体の凝固時間の延長が見られた場合、一般的には、該検体が抗凝固薬を含有する疑いがない場合には、クロスミキシング試験が行われて凝固時間延長要因が判定される。クロスミキシング試験では、被検検体と正常検体との混合検体を調製し、その混合直後のＡＰＴＴ（即時反応）と３７℃で２時間インキュベーションした後のＡＰＴＴ（遅延反応）が測定され、該即時反応及び遅延反応のパターンに基づいて、該被検検体のＡＰＴＴの延長要因が凝固因子インヒビター（抗凝固因子）、ループスアンチコアグラント（ＬＡ）又は血友病等の凝固因子欠乏のうちの何れに起因するかが判定される。しかし、従来のクロスミキシング試験は、上記のとおり非常に手間と時間がかかる。
　直接経口抗凝固剤（Ｄｉｒｅｃｔｌｙ　Ａｃｔｉｎｇ　Ｏｒａｌ　Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｓ；ＤＯＡＣｓ）は、トロンビン又は活性化第Ｘ因子を阻害する経口抗凝固薬であり、血栓症のリスクがある患者に予防投与される。ＤＯＡＣｓ投与患者から採取された血液検体は、通常は凝固時間が延長するが、凝固時間が正常時間内となることがあり、これは患者にとって重大な危険をもたらす恐れがある。例えば、ＤＯＡＣｓ投与患者が交通事故などで緊急搬送されて外科手術を受ける場合、通常の術前の凝固検査で凝固時間の延長が観察されないと、当該患者がＤＯＡＣｓ投与患者であることを知らない医師は、患者の凝固能に異常があることに気づけず、適切な処置を施すことができない。
　特許文献１～４には、血液検体の凝固速度曲線の加重平均時間、加重平均高さ、ピーク幅、基線長などのパラメータを算出すること、及びそれらのパラメータを、血液凝固時間の延長要因の推定や、凝固因子欠乏の評価、血液凝固時間の算出などに用いることが記載されている。特許文献５には、凝固速度曲線が最大値に達する点の前後で、該凝固速度曲線が該最大値のＳ％となる点ｐk及びｑkを算出し、該ｐk及びｑkを用いて血液凝固異常要因の推定のためのパラメータを算出することが記載されている。特許文献６には、血液検体の凝固反応曲線Ｐ（ｉ）が凝固反応終了点ＰｅのＸ％に達する時間を表す関数Ｔ（Ｘ）の形状に基づいて、血液凝固時間の延長要因を推定することが記載されている。
国際公開公報第２０２０／１０１０２５号 国際公開公報第２０２０／１５８９４８号 国際公開公報第２０２０／２１８４２５号 国際公開公報第２０２１／１７７４５２号 国際公開公報第２０２２／０５４８１９号 国際公開公報第２０２２／１８６３８１号
　本発明は、血液検体の凝固異常の要因を推定するための新たな方法を提供する。
　すなわち、本発明は、以下を提供する。
〔１〕血液検体の凝固異常の要因の推定方法であって、
　被検血液検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）を算出すること、
　該Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータを算出すること、
　該パラメータに基づいて、該被検血液検体の凝固異常の要因を推定すること、
を含み、
ここで、
　Ｄ（ｉ）＝Ｐ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
　ｉは計測点数又は時間を表し；
　Ｐ（ｉ）は、該被検血液検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
　Ｐｎ（ｉ）は、Ｐ’（ｉ）を、その立ち上がり点を所定点Ｘに合わせるようにシフトさせた曲線であり、該Ｐ’（ｉ）は、基準検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
　Ａ＞０であり；
　Ｘは５～１５秒、又はそれに対応する計測点数である、
方法。
〔２〕前記Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータが、ｇＴ（Ｓ）、ｇＨ（Ｓ）、ｇＢ（Ｓ）、ｇＡＢ（Ｓ）、及びＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）からなる群より選択される少なくとも１つであり、
ここで、
　ｇＴ（Ｓ）及びｇＨ（Ｓ）は、それぞれ下記式で表され、
　　式中、ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たすｉの最小値及び最大値であり、ここでＤｍａｘはＤ（ｉ）の最大値であり、０＜Ｓ＜１００であり、
　　ただし式中Ｄ（ｉ）＜Ｄｍａｘ×Ｓ（％）のときは、ｉ＝０かつＤ（ｉ）＝０とみなす；
　ｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たす時間又は計測点数を表し；
　ｇＡＢ（Ｓ）＝ｇＨ（Ｓ）／ｇＢ（Ｓ）であり；
　ＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）＝ｇＢ（Ｓ１）／ｇＢ（Ｓ２）であり、ここで０＜Ｓ１＜１００かつ０＜Ｓ２＜１００であり、ただしＳ１≠Ｓ２である、
〔１〕記載の方法。
〔３〕前記被検血液検体の凝固時間が延長していない場合に、ｇＢ（Ｓ）及びｇＡＢ（Ｓ）からなる群より選択される少なくとも１つを算出することを含む、〔２〕記載の方法。
〔４〕ｇＢ（Ｓ）が閾値又はそれより大きい場合、又はｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体がＤＯＡＣｓ陽性であると推定することを含む、〔３〕記載の方法。
〔５〕前記被検血液検体の凝固時間が延長している場合に、ｇＡＢ（Ｓ）及びＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）からなる群より選択される少なくとも１つを算出することを含む、〔２〕記載の方法。
〔６〕ｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子インヒビター陽性であると推定することを含む、〔５〕記載の方法。
〔７〕Ｓ１＜Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより小さい場合、又は、Ｓ１＞Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより大きい場合に、前記被検血液検体がヘパリン陽性であると推定することを含む、〔５〕記載の方法。
〔８〕ｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子インヒビター陽性であると推定すること、
　Ｓ１＜Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより小さい場合、又は、Ｓ１＞Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより大きい場合に、前記被検血液検体がヘパリン陽性であると推定すること、
　凝固因子インヒビター陽性又はヘパリン陽性と推定されなかった被検血液検体がループスアンチコアグラント陽性であるか又は凝固因子欠乏であるかを推定すること、
を含む、
〔５〕記載の方法。
〔９〕前記凝固因子インヒビター陽性又はヘパリン陽性と推定されなかった被検血液検体と、正常検体との混合検体を調製すること、
　該混合検体の乖離曲線Ｄｍ（ｉ）、及び該正常検体の乖離曲線Ｄｓ（ｉ）を算出すること、
　該Ｄｍ（ｉ）及びＤｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）を算出すること、
　パラメータＲ（Ｓ）を算出すること、
を含み、
　ここで、
　　Ｄｍ（ｉ）＝Ｐｍ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
　　Ｄｓ（ｉ）＝Ｐｓ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
　　Ｐｍ（ｉ）は、該混合検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
　　Ｐｓ（ｉ）は、該正常検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
　　Ｐｎ（ｉ）及びＡは前記で定義したとおりであり；
　　Ｄｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）が、下記式で表され、
　　Ds(i)についてのgAB(S) ＝ [Ds(i)についてのgH(S)] ÷ [Ds(i)についてのgB(S)]
　　ここで、
　　　　（式（I）中、
　　　ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄｓ（ｉ）≧［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たすｉの最小値及び最大値であり、
　　　０＜Ｓ＜１００であり、
　　　ただしＤｓ（ｉ）＜［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］のときは、ｉ＝０かつＤｓ（ｉ）＝０とみなす）、
　　　Ｄｓ（ｉ）についてのｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤｓ（ｉ）≧［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たす時間又は計測点数を表す；
　　Ｄｍ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）が、下記式で表され、
　　Dm(i)についてのgAB(S) ＝ [Dm(i)についてのgH(S)] ÷ [Dm(i)についてのgB(S)]
　　ここで、
　　（式（II）中、
　　　ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄｍ（ｉ）≧［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たすｉの最小値及び最大値であり、
　　　０＜Ｓ＜１００であり、
　　　ただしＤｍ（ｉ）＜［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］のときは、ｉ＝０かつＤｍ（ｉ）＝０とみなす）、
　　　Ｄｍ（ｉ）についてのｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤｍ（ｉ）≧［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たす時間又は計測点数を表す；
　　Ｒ（Ｓ）＝｛（Ｄｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））＋（Ｄ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））｝／２－（Ｄｍ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））である、
〔８〕記載の方法。
〔１０〕Ｒ（Ｓ）が閾値又はそれより大きい場合に、前記被検血液検体がループスアンチコアグラント陽性であると推定するか、又は、Ｒ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子欠乏であると推定することを含む、〔９〕記載の方法。
〔１１〕前記被検血液検体の凝固時間を算出することをさらに含む、〔１〕記載の方法。
　本発明によれば、被検血液検体の凝固時間が延長していたときに、該凝固時間の延長をもたらした凝固異常の要因を推定することができる。また本発明によれば、凝固時間の延長のない、従来の凝固検査では凝固異常を検出できない被検血液検体の中から、ＤＯＡＣｓを投与された血液検体を検出することができる。
基準検体（RP）のＰ（ｉ）とＰｎ（ｉ）。 凝固因子インヒビター陽性（Inh）検体（Ａ）、ヘパリン陽性（Hep）検体（Ｂ）、及びＤＯＡＣｓ陽性（DOACs）検体（Ｃ）から得たＰ（ｉ）とＤ（ｉ）。左：Ｐ（ｉ）とＰｎ（ｉ）、右：Ｄ（ｉ）。 ＤＯＡＣｓ陽性（DOACs）検体とその他のＡＰＴＴ正常検体の、ｇＢ５０（Ａ）、ｇＢ６０（Ｂ）、ｇＢ７０（Ｃ）、及びｇＡＢ６０（Ｄ）。 凝固因子インヒビター陽性（Inh）検体とその他のＡＰＴＴ延長要因のある検体のｇＡＢ０５。 ヘパリン陽性（Hep）検体とその他のＡＰＴＴ延長要因のある検体のｇＢ０５／ｇＢ９０。 ＬＡ陽性（LA）検体及び凝固因子欠乏（Def）検体由来の混合検体のＲ（Ｓ）（Ｓ＝５、１０、２０、３０、４０、及び５０）。 ＬＡ陽性（LA）検体及び凝固因子欠乏（Def）検体由来の混合検体のＲ（Ｓ）（Ｓ＝６０、７０、８０及び９０）。
　血液凝固検査では、被検血液検体に所定の試薬を添加し、その後の血液凝固反応を計測し、凝固反応から血液凝固時間を測定する。本明細書において、血液凝固反応、血液凝固時間、及び血液検体を、それぞれ単に「凝固反応」、「凝固時間」及び「検体」と称する場合がある。凝固反応の計測には、一般的な手段、例えば、散乱光量、透過度、吸光度等を計測する光学的な手段、又は血漿の粘度を計測する力学的な手段などが用いられる。正常検体の凝固反応曲線は、計測手段に依存するが、基本的にはシグモイド形状を示す。例えば、正常検体の散乱光量に基づく凝固反応曲線は、通常、試薬添加からある程度の時間が経過した時点で凝固の進行により急激に上昇し、その後、凝固反応が終了に近づくとともにプラトーに達する。一方で、血液凝固に異常を有する異常検体の凝固反応曲線は、曲線の立ち上がり時間の遅れ、緩やかな上昇など、異常原因に依存して様々な形状を示す。結果、異常検体では、多くの場合、正常検体と比べて凝固時間が延長する。凝固時間の延長は、凝固異常要因の有無の指標である。一方で、凝固異常要因のタイプ（凝固時間延長要因）を凝固時間から推定することはできない。
　血液凝固検査で凝固時間、例えばＡＰＴＴの延長が見られた場合、一般的には、その要因としてまずヘパリンの混入（例えば、ヘパリンの投与、ヘパリンロックされた点滴ラインからの採血、透析後の採血等）が疑われる。ヘパリンが混入した血液検体は、ヘパリン中和効果のある硫酸プロタミン等によって凝固時間が短縮することから確認できる。血液検体にヘパリン混入の疑いがない場合、可能な場合にはＤＯＡＣｓ又はワルファリンの投与の有無を確認し、その後クロスミキシング試験が行われ、凝固時間延長要因（以下、単に「延長要因」ともいう）が判定される。詳細には、ＡＰＴＴの延長が凝固因子インヒビター（抗凝固因子）、ループスアンチコアグラント（ＬＡ）、又は血友病等の凝固因子欠乏のうちの何れに起因するかが判定される。クロスミキシング試験では正常検体、被検検体、及び被検検体と正常検体との混合検体の、混合直後のＡＰＴＴ（即時反応）と３７℃で２時間インキュベーションした後のＡＰＴＴ（遅延反応）が測定される。これら即時反応及び遅延反応のパターンに基づいて、ＡＰＴＴ延長要因が判定される。従来の手法では、凝固時間測定とは別途にクロスミキシング試験を行わなければ、延長要因を判定することはできない。しかし、クロスミキシング試験は、混合検体についての即時反応、及び２時間インキュベーション後の遅延反応の測定を要するため、時間と手間がかかる。
　前述の特許文献１～５のように、クロスミキシング試験によらずに延長要因に関するデータを取得する方法が提案されている。これらの文献における延長要因の評価では、凝固反応曲線の微分曲線、つまり凝固速度（１次微分）や凝固加速度（２次微分）を利用する。特許文献６では、上記のような微分曲線を用いることなく、凝固反応曲線に基づいて算出した関数Ｔ（Ｘ）を用いて延長要因の情報を抽出する。しかし、凝固反応曲線に着目して延長要因の情報を抽出する試みはこれまでほとんどなされていない。
〔凝固時間の延長の要因の推定方法〕
　本発明は、血液検体の凝固異常の要因を推定する方法に関する。本発明の方法では、被検検体と基準検体の凝固反応曲線の差分を解析することで、凝固異常の要因を推定する。
１．凝固反応計測
　凝固反応計測では、被検検体の凝固反応を計測する。この計測で得られる凝固反応の時系列データから、凝固反応曲線を得ることができる。該凝固反応計測は、プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）等の凝固時間測定、又はフィブリノーゲン濃度（Ｆｂｇ）測定などで行われる一般的な凝固反応計測の手順に従って実施することができる。以下の本明細書においては、主に、ＡＰＴＴ測定での凝固反応計測に基づいて、本発明の方法を説明する。その他の計測法（例えばＰＴ測定での凝固反応計測）への本発明の方法の変更は、当業者であれば実施可能である。
　凝固反応計測において、被検血液検体としては、被検者の血漿が好ましく用いられる。該検体には、凝固検査に通常用いられる抗凝固剤が添加され得る。例えば、クエン酸ナトリウム入り採血管を用いて採血された後、遠心分離されることで血漿が得られる。
　凝固反応計測では、該被検検体に凝固時間測定試薬が添加され、血液凝固反応を開始させる。試薬添加後の混合液の凝固反応が計測され得る。使用される試薬は、測定目的に合わせて任意に選択することができる。各種凝固時間測定のための試薬は市販されている（例えば、ＡＰＴＴ試薬コアグピア　ＡＰＴＴ－Ｎ；積水メディカル株式会社製）。凝固反応の計測には、一般的な手段、例えば、散乱光量、透過度、吸光度等を計測する光学的な手段、又は血漿の粘度を計測する力学的な手段などを用いればよい。凝固反応の開始時点は、典型的には、検体に試薬を混合して凝固反応を開始させた時点として規定され得るが、他のタイミングが反応開始時点として規定されてもよい。凝固反応の計測時間は、任意に定めることができ、例えば、検体と試薬との混合の時点から数十秒～７分程度であり得る。該計測時間の間、所定の間隔で凝固反応の進行状況の計測（光学的に検出する場合は測光）が繰り返し行われ得る。例えば、０．１秒間隔で計測が行われればよい。該計測中の混合液の温度は、通常の条件、例えば３０℃以上４０℃以下、好ましくは３５℃以上３９℃以下である。また、計測の各種条件は、被検検体や試薬、計測手段等に応じて適宜設定され得る。
　前述の凝固反応計測における一連の操作は、自動分析装置を用いて行うことができる。自動分析装置の一例として、血液凝固自動分析装置ＣＰ３０００（積水メディカル株式会社製）が挙げられる。あるいは、一部の操作が用手法で行われてもよい。例えば、被検検体の調製を用手法で行い、それ以降の操作は自動分析装置で行うことができる。
２．凝固反応曲線
　凝固反応計測により被検検体の計測データが取得される。このデータは、被検検体の凝固反応過程を反映するデータである。例えば、被検検体と凝固時間測定試薬とを含む混合液からの、塩化カルシウム液添加後の凝固反応の進行量（例えば散乱光量）の時間変化を示すデータ（以下、反応データＣ（ｉ）という）が取得される。
　必要に応じて、反応データＣ（ｉ）には、前処理が施される。該前処理には、ノイズを除去するための平滑化処理、又はゼロ点調整が含まれ得る。該平滑化処理には、公知のノイズ除去方法の何れかが用いられ得る。また、被検検体を含む混合液は、反応開始時点（時間０）での散乱光量は０より大きい。該ゼロ点調整により、時間０での散乱光量が０に調整され得る。該ゼロ点調整は、好ましくは該平滑化処理後に行われる。
　次いで、該反応データＣ（ｉ）を相対値化し、本発明で用いる凝固反応曲線Ｐ（ｉ）を得る。好適には、下記式（１）に従って、Ｃ（ｉ）からＰ（ｉ）を求める。式（１）中、Ｃｍａｘ及びＣｍｉｎは、それぞれＣ（ｉ）の最大値及び最小値を表し、Ｃｒａｎｇｅは、Ｃ（ｉ）の変化幅（すなわちＣｍａｘ－Ｃｍｉｎ）を表し、Ａは、任意の値であり、Ｐ（ｉ）の最大値に相当する。ｉは、検体の凝固反応開始からの時間（以下、単に「時間」ともいう）又は検体の凝固反応開始からの計測点数（以下、単に「計測点数」ともいう）を表す。
　　Ｐ（ｉ）＝［（Ｃ（ｉ）－Ｃｍｉｎ）／Ｃｒａｎｇｅ］×Ａ　　（１）
　　（Ａは任意、ただしＡ＞０、例えばＡ＝１００）
　散乱光量に基づくＰ（ｉ）は、通常、シグモイド状である。一方、透過光量に基づくＰ（ｉ）は、通常、逆シグモイド状である。以下の本明細書では、散乱光量に基づくＰ（ｉ）を用いて、本発明の方法の手順について説明する。
３．乖離曲線
　本発明では、前記凝固反応曲線Ｐ（ｉ）から、被検検体についての乖離曲線を得る。該乖離曲線は、被検検体のＰ（ｉ）と、基準曲線Ｐｎ（ｉ）との差を表す。本明細書では、乖離曲線をＤ（ｉ）で表す。被検検体についてのＤ（ｉ）は、下記式（２）で表される。
　　Ｄ（ｉ）＝被検検体のＰ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）　　　（２）
　基準曲線Ｐｎ（ｉ）は、基準検体からのＰ（ｉ）（以下、Ｐ’（ｉ）という）に基づいて作成される。基準検体には、血液凝固異常のない者に由来する血液検体、例えば、健常者から採取した血液検体、好ましくは血漿、それらのプール検体、市販の正常血漿など（以下、まとめて「正常検体」という）を使用することができる。好ましくは、該基準検体は、凝固時間（ＡＰＴＴ）が、２４～３９秒、より好ましくは２４～３０秒である検体であることが好ましい。あるいは、血液凝固異常のない者に由来する血液検体のうち、凝固時間が最短の検体からのＰ（ｉ）、又は、血液凝固異常のない者に由来する血液検体からのＰ（ｉ）の平均値を、Ｐ’（ｉ）として用いることができる。
　Ｐｎ（ｉ）は、Ｐ’（ｉ）を、その立ち上がり点（時点又はそれに対応する計測点数）を所定点Ｘに合わせるようにシフトさせた曲線である。該所定点Ｘは、基本的には該立ち上がり点よりも早い点であり、好ましくはＸ＝５～１５秒、又はそれに対応する計測点数である。Ｐ’（ｉ）の立ち上がり点は、Ｐ（ｉ）がその最大値の１～５％、例えば２％に到達する時点又は計測点数として検出することができる。検出した立ち上がり点と、前記所定点Ｘとの差をｋとしたとき、Ｐｎ（ｉ）は以下の式（３）で表される。
　　Ｐｎ（ｉ）＝Ｐ’（ｉ＋ｋ）　　　（３）
　したがって、一実施形態においてＤ（ｉ）は、下記式（２）’で表され得る。
　　Ｄ（ｉ）＝Ｐ（ｉ）－Ｐ’（ｉ＋ｋ）　　　（２）’
４．乖離曲線の形状評価
　本発明では、前記で得られた被検検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータを算出することができる。当該パラメータとしては、加重平均時間、加重平均高さ、ピーク幅、などが挙げられる。
　一実施形態において、算出されるパラメータは、被検検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）の所定の演算対象域における加重平均時間及び／又は加重平均高さである。該演算対象域は、Ｄ（ｉ）における、Ｄ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たす領域として定められ、ここでＤｍａｘは、Ｄ（ｉ）の最大値を表し、０＜Ｓ＜１００である。好ましくは１≦Ｓ≦９９、より好ましくは５≦Ｓ≦９５である。したがって、該演算対象域、及びその加重平均時間と加重平均高さは、Ｓに依存して変動する。Ｓに応じた複数の加重平均時間と加重平均高さを算出することができる。本明細書において、Ｓに応じた加重平均時間及び加重平均高さを、それぞれｇＴ（Ｓ）及びｇＨ（Ｓ）と表す。
　ｇＴ（Ｓ）及びｇＨ（Ｓ）は、それぞれ下記式（４）及び（５）で表される。
　式中、ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たすｉの最小値及び最大値であり、ただし式中、Ｄ（ｉ）＜Ｄｍａｘ×Ｓ（％）のときは、ｉ＝０かつＤ（ｉ）＝０とみなす。
　一実施形態において、算出されるパラメータは、被検検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）の所定の演算対象域におけるピーク幅であり、これは、前記ｔ１とｔ２の間でＤ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たす時間又は計測点数を表す。したがって、該ピーク幅は、Ｓに依存して変動する。Ｓに応じた複数のピーク幅を算出することができる。本明細書において、Ｓに応じたピーク幅をｇＢ（Ｓ）と表す。
　一実施形態において、算出されるパラメータは、異なるＳについての２つのｇＢ（Ｓ）の比であり、具体的にはｇＢ（Ｓ１）／ｇＢ（Ｓ２）で表され、以下ＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）とも称される。ここでＳ１とＳ２は、それぞれ前述したＳと同様に定義されるが、ただしＳ１≠Ｓ２である。好ましくは、｜Ｓ１－Ｓ２｜≧２０であり、例えば、５≦Ｓ１≦４０かつ６０≦Ｓ２≦９０であるか、又は６０≦Ｓ１≦９０かつ５≦Ｓ２≦４０である。
　一実施形態において、算出されるパラメータはｇＢ（Ｓ）とｇＨ（Ｓ）の比であり、具体的にはｇＨ（Ｓ）／ｇＢ（Ｓ）で表され、このとき、好ましくは５＜Ｓ＜９０である。本明細書において、ｇＨ（Ｓ）／ｇＢ（Ｓ）を尖鋭率ｇＡＢ（Ｓ）とも表す。
５．凝固異常の要因の推定
　前述したＤ（ｉ）の形状を反映するパラメータに基づいて、被検検体の凝固異常の要因を推定することができる。
　一実施形態において、本発明では、凝固時間の延長のない被検検体について、該検体が正常であるか、又はＤＯＡＣｓを投与されている（ＤＯＡＣｓ陽性）かを推定することができる。
　別の一実施形態において、本発明では、凝固時間の延長した被検検体について、該凝固時間の延長をもたらした凝固異常の要因を推定することができる。本発明で推定される凝固異常の要因としては、凝固因子欠乏、ループスアンチコアグラント陽性、凝固因子インヒビター陽性、及びヘパリン陽性が挙げられる。
（１．凝固時間の算出）
　したがって、本発明においては、前記凝固異常の要因の推定を行う前に、被検検体の凝固時間を算出する。凝固時間の算出は任意の方法に従って行うことができる。凝固時間の算出方法の例としては、Ｐ（ｉ）がその最大値のＮ％に達した時点を凝固時間として算出する方法；Ｐの１次微分曲線がその最大値のＮ％に達した時点を凝固時間として算出する方法；微小時間帯でのＰ（ｉ）の積算値の比が所定値に達したときを算出起点Ｔｅとして、Ｐ（ｉ）がＰ（Ｔｅ）のＮ％に達した時点を凝固時間として算出する方法（特開平６－２４９８５５号公報）；微小時間帯でのＰ（ｉ）の積算値の経時的変化に基づいて凝固時間を算出する方法（特願２０１９－２３７４２７参照）；Ｐの１次微分曲線の加重平均時間に基づいて凝固時間を算出する方法（特願２０２０－０３９３４４参照）；Ｐの１次微分曲線が最大値に達した後に所定値に達したときを算出起点Ｔｅとして、Ｐ（ｉ）がＰ（Ｔｅ）のＮ％に達した時点を凝固時間として算出する方法（特願２０２０－０６８８７７参照）、などが挙げられるが、これらに限定されない。
（２．ＤＯＡＣｓ陽性の推定）
　被検検体の凝固時間が延長していない場合、前記のＤ（ｉ）の形状を反映するパラメータに基づいて、該検体が正常であるか又はＤＯＡＣｓ陽性であるかを推定する。
　一実施形態において、該パラメータはｇＢ（Ｓ）である。ＤＯＡＣｓ陽性検体のｇＢ（Ｓ）は、正常検体と比べて大きくなる傾向がある。したがって、被検検体のｇＢ（Ｓ）が予め定めた閾値又はそれよりも大きければ、該検体をＤＯＡＣｓ陽性であると推定することができる。閾値は、既知のＤＯＡＣｓ陽性検体群から得たｇＢ（Ｓ）に基づいて決定することができる。例えば、閾値は、既知のＤＯＡＣｓ陽性検体群のｇＢ（Ｓ）の［平均値－ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝０．５～３）として設定することができる。一方、被検検体のｇＢ（Ｓ）が予め定めた閾値又はそれよりも小さければ、該検体をＤＯＡＣｓ陽性ではない（又は正常である）と推定することができる。
　別の一実施形態において、該パラメータはｇＡＢ（Ｓ）である。ＤＯＡＣｓ陽性検体のｇＡＢ（Ｓ）は、正常検体と比べて小さくなる傾向がある。したがって、被検検体のｇＡＢ（Ｓ）が予め定めた閾値又はそれよりも小さければ、該検体をＤＯＡＣｓ陽性であると推定することができる。閾値は、既知のＤＯＡＣｓ陽性検体群から得たｇＡＢ（Ｓ）に基づいて決定することができる。例えば、閾値は、既知のＤＯＡＣｓ陽性検体群のｇＡＢ（Ｓ）の［平均値＋ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝０．５～３）として設定することができる。一方、被検検体のｇＡＢ（Ｓ）が予め定めた閾値又はそれよりも大きければ、該検体をＤＯＡＣｓ陽性ではない（又は正常である）と推定することができる。
（３．凝固異常の要因の推定）
　被検検体の凝固時間が延長している場合、該検体は、凝固時間の延長をもたらす凝固異常を有する。前記のＤ（ｉ）の形状を反映するパラメータに基づいて、該被検検体の凝固異常の要因を推定する。
（３．１．ヘパリン陽性の推定）
　一実施形態において、前記パラメータはＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）である。Ｓ１＜Ｓ２のとき、ヘパリン陽性検体のＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）は、他の凝固異常を有する検体と比べて小さくなる傾向がある。したがって、被検検体のＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が予め定めた閾値又はそれよりも小さければ、該検体をヘパリン陽性（Hep）であると推定することができる。閾値は、既知のヘパリン陽性検体群から得たＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）に基づいて決定することができる。例えば、閾値は、既知のヘパリン陽性検体群のＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）の［平均値＋ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝０．５～３）として設定することができる。一方、Ｓ１＞Ｓ２のときは、被検検体のＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が予め定めた閾値又はそれよりも大きければ、該検体をヘパリン陽性（Hep）であると推定することができ、このときの閾値は、例えば、既知のヘパリン陽性検体群のＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）の［平均値－ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝０．５～３）として設定することができる。
（３．２．インヒビター陽性の推定）
　一実施形態において、前記パラメータはｇＡＢ（Ｓ）である。凝固因子インヒビター陽性検体のｇＡＢ（Ｓ）は、他の凝固異常を有する検体と比べて小さくなる傾向がある。したがって、被検検体のｇＡＢ（Ｓ）が予め定めた閾値又はそれよりも小さければ、該検体を凝固因子インヒビター陽性（Inh）であると推定することができる。閾値は、既知の凝固因子インヒビター陽性検体群から得たｇＡＢ（Ｓ）に基づいて決定することができる。例えば、閾値は、既知の凝固因子インヒビター陽性検体群のｇＡＢ（Ｓ）の［平均値＋ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝０．５～３）として設定することができる。
（３．３．ループスアンチコアグラント陽性及び凝固因子欠乏の推定）
　一実施形態においては、前記の手順でヘパリン陽性（Hep）又は凝固因子インヒビター陽性（Inh）と推定されなかった被検検体の凝固異常の要因を推定する。具体的には、該検体がループスアンチコアグラント陽性（LA）であるか又は凝固因子欠乏（Def）であるかを推定する。
　LA及びDefの推定においては、被検検体と正常検体との混合検体を調製し、該混合検体についての乖離曲線Ｄ（ｉ）を得る。別途、該被検検体及び該正常検体のＤ（ｉ）を得る。各々のＤ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）を算出する。被検検体のｇＡＢ（Ｓ）の算出の手順は、前記で説明したとおりである。
　混合検体の調製では、被検検体と正常検体とが所定の比率で混合される。正常検体としては、前述したとおりのもの、例えば、健常者から採取した血液検体、好ましくは血漿、それらのプール検体、市販の正常血漿などを使用することができる。該被検検体と該正常検体との混合比は、合計を１０容量とした容量比で、被検検体：正常検体＝１：９～９：１の範囲であればよく、好ましくは４：６～６：４の範囲、より好ましくは５：５である。混合検体の凝固反応を計測し、該混合検体のＰ（ｉ）を取得する。ここで、該混合検体のＰ（ｉ）をＰｍ（ｉ）ともいう。該Ｐｍ（ｉ）から該混合検体のＤ（ｉ）を算出する。ここで、該混合検体のＤ（ｉ）をＤｍ（ｉ）ともいう。次いで、該Ｄｍ（ｉ）からｇＡＢ（Ｓ）を算出する。一方で、該正常検体の凝固反応を計測し、該正常検体のＰ（ｉ）を取得する。ここで、該正常検体のＰ（ｉ）をＰｓ（ｉ）ともいう。該Ｐｓ（ｉ）から該正常検体のＤ（ｉ）を算出する。ここで、該正常検体のＤ（ｉ）をＤｓ（ｉ）ともいう。次いで、該Ｄｓ（ｉ）からｇＡＢ（Ｓ）を算出する。混合検体及び正常検体の凝固反応計測、Ｐｍ（ｉ）とＰｓ（ｉ）の取得、及びＤｍ（ｉ）とＤｓ（ｉ）の算出の手順は、被検検体に関して前記で説明した手順に従う。Ｄｍ（ｉ）及びＤｓ（ｉ）からのｇＡＢ（Ｓ）の算出の手順は、それぞれ被検検体のｇＡＢ（Ｓ）について前記で説明した手順に従う。
　混合検体のＤｍ（ｉ）、被検検体のＤ（ｉ）、及び正常検体のＤｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）から、以下の式（６）に従ってパラメータＲ（Ｓ）を算出する。
　Ｒ（Ｓ）＝｛（Ds(i)についてのgAB(S)）＋（D(i)についてのgAB(S)）｝／２－（Dm(i)についてのgAB(S)）　　　（６）
　LA検体のＲ（Ｓ）は、Def検体と比べて大きくなる傾向がある。したがって、被検検体のＲ（Ｓ）が予め定めた閾値よりも大きければ、該検体をLAであると推定することができ、他方、Ｒ（Ｓ）が予め定めた閾値よりも小さければ、該検体をDefであると推定することができる。閾値は、既知のLA検体群又はDef検体群から得たＲ（Ｓ）に基づいて決定することができる。例えば、閾値は、LA検体群から得たＲ（Ｓ）の最小値とDef検体群から得たＲ（Ｓ）の最大値との間に設定することができる。あるいは、閾値は、LA検体群のＲ（Ｓ）の［平均値－ｋ×ＳＤ］、又はDef検体群のＲ（Ｓ）の［平均値＋ｋ×ＳＤ］（好ましくはｋ＝２～５）として設定することができる。
　前記の凝固異常の要因の推定の手順において、異なる凝固異常の要因を区別して推定できる限り、「閾値より大きい」の代わりに「閾値以上」を使用してもよく、又は「閾値より小さい」の代わりに「閾値以下」を使用してもよいことは、当業者であれば理解できるであろう。
　以上の手順で得た被検検体の凝固異常の要因の推定結果は、任意の形式で出力することができる。例えば、電子データ、プリント、ディスプレイ上への表示などの形式で出力され得る。該推定結果は、被検検体が正常であるか、又は、ＤＯＡＣｓ陽性、凝固因子欠乏、ループスアンチコアグラント陽性、凝固因子インヒビター陽性、もしくはヘパリン陽性であるかの情報を含む。該推定結果とともに、被検検体の凝固時間や、さらに被検検体のＰ（ｉ）、Ｄ（ｉ）又は該Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータ、又は前記パラメータＲ（Ｓ）の値を出力してもよい。
６．他の凝固反応計測法への応用
　以上、散乱光量に基づいて取得した凝固反応曲線を用いる場合を例として、本発明を説明した。しかしながら、当業者であれば、本発明の方法を他の凝固反応計測法（例えば透過度、吸光度、粘度などに基づく凝固反応計測法）から得られた取得した凝固反応曲線を用いる方法に応用することが可能である。例えば、透過光量に基づくような逆シグモイド状の凝固反応曲線は、上述した散乱光量に基づくものに対して正負が逆になる。このような場合に、パラメータの計算においてＤ（ｉ）の符号が逆転すること、例えば、Ｄ（ｉ）の最大値Ｄｍａｘは最小値Ｄｍｉｎに置き換えられ、演算対象域はＤ（ｉ）≦Ｄｍｉｎ×Ｓ（％）を満たす領域に置き換えられること等は、当業者に明らかである。
　以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
参考例）
　凝固異常の要因の推定の手順のフローの例を以下に説明する。
（Ｓ１）被検検体の凝固反応曲線Ｐ（ｉ）、及び凝固時間（ＡＰＴＴ）を算出。
（Ｓ２）被検検体のＤ（ｉ）を算出。Ｄ（ｉ）＝Ｐ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）。
（Ｓ３）Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータを算出。
（Ｓ４）ＡＰＴＴを基準値と比較。
　　　　→ＡＰＴＴが延長していない場合は（Ｓ５）へ。
　　　　→ＡＰＴＴが延長している場合は（Ｓ６）へ。
（Ｓ５）被検検体についてのパラメータＡ［ｇＢ（Ｓ）］又はパラメータＢ［ｇＡＢ（Ｓ）］を算出し、閾値と比較。
　　　　→パラメータＡが閾値より大きい場合は（Ｓ１１）へ。
　　　　→パラメータＢが閾値より小さい場合は（Ｓ１１）へ。
　　　　→それ以外は（Ｓ１０）へ。
（Ｓ６）被検検体についてのパラメータ［ｇＡＢ（Ｓ）］を算出し、閾値と比較。
　　　　→パラメータが閾値より小さい場合は（Ｓ１２）へ。
　　　　→それ以外は（Ｓ７）へ。
（Ｓ７）被検検体についてのパラメータ［ＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）］（Ｓ１＜Ｓ２）を算出し、閾値と比較。
　　　　→パラメータが閾値より小さい場合は（Ｓ１３）へ。
　　　　→それ以外は（Ｓ８）へ。
（Ｓ８）混合検体及び正常検体のＤ（ｉ）を算出。混合検体、被検検体及び正常検体についてのｇＡＢ（Ｓ）から、下記パラメータＲ（Ｓ）を算出し、閾値と比較。
　　Ｒ（Ｓ）＝{（正常検体のgAB(S)）＋被検検体のgAB(S)）}/2－（混合検体のgAB(S)）
　　　　→パラメータが閾値より大きい場合は（Ｓ１４）へ。
　　　　→パラメータが閾値より小さい場合は（Ｓ１５）へ。
　上記のフローにおいて、（Ｓ６）と（Ｓ７）の順序は入れ換え可能である。また（Ｓ８）における混合検体及び正常検体のＤ（ｉ）の算出は、予め（例えば（Ｓ２）で）行われてもよい。
（Ｓ１０）被検検体が正常であるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
（Ｓ１１）被検検体がＤＯＡＣｓ陽性であるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
（Ｓ１２）被検検体がInhであるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
（Ｓ１３）被検検体がHepであるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
（Ｓ１４）被検検体がLAであるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
（Ｓ１５）被検検体がDefであるとの結果、及びＡＰＴＴを出力。
実施例１）
１）検体
基準検体（RP）：Precision BioLogic Inc.のPooled Normal Plasma。
正常検体（NP）：ＡＰＴＴが基準範囲内（２４～３９秒）である血漿（Ｎ＝２２）
異常検体：
・ＬＡ陽性検体（LA）：George King Biomedical Inc.のPositive Lupus Anticoagulant Plasma、及びLA患者血漿（計Ｎ＝１０）。
・凝固因子インヒビター陽性検体（Inh）：George King Biomedical Inc.のFactor VIII Deficient with Inhibitor、及びInh患者血漿（計Ｎ＝９）。
・凝固因子欠乏検体（Def）：第V因子欠乏血漿、第VIII因子欠乏血漿（HA）、第IX因子欠乏血漿（HB）、第X因子欠乏血漿、第XI因子欠乏血漿（George King Biomedical Inc.のFactor VIII Deficient、Factor IX Deficient、及び患者血漿；計Ｎ＝１９）。
・ＤＯＡＣｓ陽性検体（DOACs）：ＤＯＡＣｓ投与患者血漿（Ｎ＝５、うち４検体はＡＰＴＴが基準範囲内）。
・ヘパリン陽性検体（Hep）：Hep患者血漿、及びRPに未分画ヘパリンを添加したもの（計Ｎ＝１８）。
混合検体：前記LAとNPの１：１混合血漿（Ｎ＝８）、前記DefとNPの１：１混合血漿（Ｎ＝６、このうち５つがHAとNPの混合血漿、１つがHBとNPの混合血漿）。
２）凝固反応計測
　ＡＰＴＴ測定用試薬には、第１試薬として、コアグピア　ＡＰＴＴ－Ｎ（積水メディカル株式会社製）を、第２試薬として、コアグピア　ＡＰＴＴ－Ｎ　塩化カルシウム液（２５ｍＭ塩化カルシウム液、積水メディカル株式会社製）を用いた。凝固反応計測は、血液凝固自動分析装置ＣＰ３０００（積水メディカル株式会社製）を用いて行った。検体５０μＬをキュベット内にて３７℃で４５秒間加温した後、約３７℃の第１試薬５０μＬを添加し、さらに１７１秒経過後に第２試薬５０μＬを添加して凝固反応を開始させた。反応は３７℃で行った。凝固反応の計測は、キュベットにＬＥＤを光源とする波長６６０ｎｍの光を照射し、０．１秒間隔で９０度側方散乱光の散乱光量を測光した。計測時間は３６０秒間とした。
３）凝固反応曲線Ｐ（ｉ）の取得
　各検体からの測光データＣ（ｉ）に対してノイズ除去を含む平滑化処理を行った後、測光開始時点の散乱光量が０となるようにゼロ点調整した。調整後のＣ（ｉ）を、上記式（１）に従って最大値が１００になるように相対化して凝固反応曲線Ｐ（ｉ）を得た。
４）基準曲線Ｐｎ（ｉ）の取得
　RPからのＰ（ｉ）を、その立ち上がり時点が１０秒になるようにシフトさせ、Ｐｎ（ｉ）を取得した。Ｐ（ｉ）の立ち上がり時点は、Ｐ（ｉ）の最大値（最大散乱光量）の２％となる時点として検出した。RPのＰ（ｉ）とＰｎ（ｉ）を図１に示す。
５）乖離曲線Ｄ（ｉ）の取得
　各検体のＰ（ｉ）とＰｎ（ｉ）から、上記式（２）に従ってＤ（ｉ）を取得した。図２に、Inh（Ａ）、Hep（Ｂ）、及びDOACs（Ｃ）から得たＰ（ｉ）とＤ（ｉ）を示す。各図とも左は検体のＰ（ｉ）をＰｎ（ｉ）とともに示し、右はＤ（ｉ）を示す。InhのＰ（ｉ）は立ち上がりが遅く上昇が緩やかであり、そのためＤ（ｉ）はピークが幅広であり、かつ緩やかに下降した（図２Ａ）。HepのＰ（ｉ）は立ち上がりが遅いが上昇は急激であり、そのためＤ（ｉ）はピークが幅広であるが速やかに上昇及び下降した（図２Ｂ）。DOACｓのＰ（ｉ）は立ち上がりが早く上昇は急激であり、そのためＤ（ｉ）は鋭いピークを有した（図２Ｃ）。
６）パラメータの算出
　各検体のＤ（ｉ）についてｇＴ（Ｓ）、ｇＨ（Ｓ）、及びｇＢ（Ｓ）を算出した。Ｓを５～９０の範囲で変更し、各々のＳについてのｇＴ（Ｓ）及びｇＨ（Ｓ）を上記式（４）及び（５）に従って算出した。各々のＳに対応した式（４）のｔ１とｔ２の間で、Ｄ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たす時間又は計測点数をｇＢ（Ｓ）とした。さらにｇＡＢ（Ｓ）を算出した。混合検体と、それに含まれる異常検体及びRPのｇＡＢ（Ｓ）から、上記式（６）に従ってパラメータＲ（Ｓ）を算出した。以下、ｇＴ（Ｓ）、ｇＨ（Ｓ）、ｇＢ（Ｓ）、ｇＡＢ（Ｓ）、及びＲ（Ｓ）を、それぞれ括弧を外してｇＴＳ、ｇＨＳ、ｇＢＳ、ｇＡＢＳ、及びＲＳと表記することがある。
７）ＤＯＡＣｓ陽性検体の推定
　８３検体中２６検体はＡＰＴＴが正常（基準範囲内、延長なし）であり（ＡＰＴＴ≦３９）、このうち２２検体がNP、４検体がDOACsであった。これらのＡＰＴＴが正常な検体のｇＢ５０、ｇＢ６０、ｇＢ７０、及びｇＡＢ６０を図３Ａ～Ｄに示す。DOACsのｇＢ５０～ｇＢ７０は、その他のＡＰＴＴ正常検体（すなわちNP）と比べて、大きい傾向があり異なる分布を示した。またDOACsのｇＡＢ６０は、その他のＡＰＴＴ正常検体（NP）と比べて、小さい傾向があり異なる分布を示した。ｇＢ（Ｓ）やｇＡＢ（Ｓ）に基づいて正常検体とＤＯＡＣｓ陽性検体を区別できることが示された。
８）凝固因子インヒビター陽性検体の推定
　５７検体がＡＰＴＴの延長があり（ＡＰＴＴ＞３９）、このうち９検体がInhであった。Inhと、その他のＡＰＴＴ延長要因のある検体のｇＡＢ０５を図４に示す。InhのｇＡＢ０５は、その他の検体よりも小さい傾向があった。ｇＡＢ（Ｓ）に基づいて、ＡＰＴＴ延長がある異常検体の中から凝固因子インヒビター陽性検体を区別できることが示された。
９）ヘパリン陽性検体の推定
　前記８）で用いた５７検体からInhの９検体を除いた４８検体について、ＲｇＢ（０５／９０）（ｇＢ０５／ｇＢ９０）を調べた。４８検体中１８検体がHepであった。Hepとその他のＡＰＴＴ延長要因のある検体のｇＢ０５／ｇＢ９０を図５に示す。HepのｇＢ０５／ｇＢ９０は、その他の検体よりも小さい傾向があった。ただし１個の第X因子欠乏検体がHepの分布と重なった。異なるＳについてのｇＢ（Ｓ）の比ＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）（ｇＢ（Ｓ１）／ｇＢ（Ｓ２））に基づいて、ＡＰＴＴ延長がある異常検体の中からヘパリン陽性検体を区別できることが示された。
１０）LA及びDefの推定
　１４の混合検体、及びその調製に用いた異常検体（LAが８検体、Defが６検体）とNPについて、Ｓが５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０のときのｇＡＢ（Ｓ）を算出し、次いでＲ（Ｓ）を調べた。LAとDefのＲ（Ｓ）（Ｓ＝５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０及び９０）を図６及び７に示す。LAのＲ（Ｓ）はDefよりも大きい傾向があった。Ｒ（Ｓ）に基づいて、ＬＡ陽性検体と凝固因子欠乏検体を区別できることが示された。 

Claims (11)

  1. 　血液検体の凝固異常の要因の推定方法であって、
    　被検血液検体の乖離曲線Ｄ（ｉ）を算出すること、
    　該Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータを算出すること、
    　該パラメータに基づいて、該被検血液検体の凝固異常の要因を推定すること、
    を含み、
    ここで、
    　Ｄ（ｉ）＝Ｐ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
    　ｉは計測点数又は時間を表し；
    　Ｐ（ｉ）は、該被検血液検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
    　Ｐｎ（ｉ）は、Ｐ’（ｉ）を、その立ち上がり点を所定点Ｘに合わせるようにシフトさせた曲線であり、該Ｐ’（ｉ）は、基準検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
    　Ａ＞０であり；
    　Ｘは５～１５秒、又はそれに対応する計測点数である、
    方法。
  2. 　前記Ｄ（ｉ）の形状を反映するパラメータが、ｇＴ（Ｓ）、ｇＨ（Ｓ）、ｇＢ（Ｓ）、ｇＡＢ（Ｓ）、及びＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）からなる群より選択される少なくとも１つであり、
    ここで、
    　ｇＴ（Ｓ）及びｇＨ（Ｓ）は、それぞれ下記式で表され、
    　　式中、ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たすｉの最小値及び最大値であり、ここでＤｍａｘはＤ（ｉ）の最大値であり、０＜Ｓ＜１００であり、
    　　ただし式中Ｄ（ｉ）＜Ｄｍａｘ×Ｓ（％）のときは、ｉ＝０かつＤ（ｉ）＝０とみなす；
    　ｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤ（ｉ）≧Ｄｍａｘ×Ｓ（％）を満たす時間又は計測点数を表し；
    　ｇＡＢ（Ｓ）＝ｇＨ（Ｓ）／ｇＢ（Ｓ）であり；
    　ＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）＝ｇＢ（Ｓ１）／ｇＢ（Ｓ２）であり、ここで０＜Ｓ１＜１００かつ０＜Ｓ２＜１００であり、ただしＳ１≠Ｓ２である、
    請求項１記載の方法。
  3. 　前記被検血液検体の凝固時間が延長していない場合に、ｇＢ（Ｓ）及びｇＡＢ（Ｓ）からなる群より選択される少なくとも１つを算出することを含む、請求項２記載の方法。
  4. 　ｇＢ（Ｓ）が閾値又はそれより大きい場合、又はｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体がＤＯＡＣｓ陽性であると推定することを含む、請求項３記載の方法。
  5. 　前記被検血液検体の凝固時間が延長している場合に、ｇＡＢ（Ｓ）及びＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）からなる群より選択される少なくとも１つを算出することを含む、請求項２記載の方法。
  6. 　ｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子インヒビター陽性であると推定することを含む、請求項５記載の方法。
  7. 　Ｓ１＜Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体がヘパリン陽性であると推定することを含む、請求項５記載の方法。
  8. 　ｇＡＢ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子インヒビター陽性であると推定すること、
    　Ｓ１＜Ｓ２かつＲｇＢ（Ｓ１／Ｓ２）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体がヘパリン陽性であると推定すること、
    　凝固因子インヒビター陽性又はヘパリン陽性と推定されなかった被検血液検体がループスアンチコアグラント陽性であるか又は凝固因子欠乏であるかを推定すること、
    を含む、
    請求項５記載の方法。
  9. 　前記凝固因子インヒビター陽性又はヘパリン陽性と推定されなかった被検血液検体と、正常検体との混合検体を調製すること、
    　該混合検体の乖離曲線Ｄｍ（ｉ）、及び該正常検体の乖離曲線Ｄｓ（ｉ）を算出すること、
    　該Ｄｍ（ｉ）及びＤｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）を算出すること、
    　パラメータＲ（Ｓ）を算出すること、
    を含み、
    　ここで、
    　　Ｄｍ（ｉ）＝Ｐｍ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
    　　Ｄｓ（ｉ）＝Ｐｓ（ｉ）－Ｐｎ（ｉ）；
    　　Ｐｍ（ｉ）は、該混合検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
    　　Ｐｓ（ｉ）は、該正常検体の凝固反応の計測データを最小値０、最大値Ａになるよう相対値化した曲線であり；
    　　Ｐｎ（ｉ）及びＡは前記で定義したとおりであり；
    　　Ｄｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）が、下記式で表され、
    　　Ds(i)についてのgAB(S) ＝ [Ds(i)についてのgH(S)] ÷ [Ds(i)についてのgB(S)]
    　　ここで、
    　　（式（I）中、
    　　　ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄｓ（ｉ）≧［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たすｉの最小値及び最大値であり、
    　　　０＜Ｓ＜１００であり、
    　　　ただしＤｓ（ｉ）＜［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］のときは、ｉ＝０かつＤｓ（ｉ）＝０とみなす）、
    　　　Ｄｓ（ｉ）についてのｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤｓ（ｉ）≧［Ｄｓ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たす時間又は計測点数を表す；
    　　Ｄｍ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ）が、下記式で表され、
    　　Dm(i)についてのgAB(S) ＝ [Dm(i)についてのgH(S)] ÷ [Dm(i)についてのgB(S)]
    　　ここで、
    　　（式（II）中、
    　　　ｔ１及びｔ２はそれぞれ、Ｄｍ（ｉ）≧［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たすｉの最小値及び最大値であり、
    　　　０＜Ｓ＜１００であり、
    　　　ただしＤｍ（ｉ）＜［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］のときは、ｉ＝０かつＤｍ（ｉ）＝０とみなす）、
    　　　Ｄｍ（ｉ）についてのｇＢ（Ｓ）は、ｔ１とｔ２の間でＤｍ（ｉ）≧［Ｄｍ（ｉ）の最大値×Ｓ（％）］を満たす時間又は計測点数を表す；
    　　Ｒ（Ｓ）＝｛（Ｄｓ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））＋（Ｄ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））｝／２－（Ｄｍ（ｉ）についてのｇＡＢ（Ｓ））である、
    請求項８記載の方法。
  10. 　Ｒ（Ｓ）が閾値又はそれより大きい場合に、前記被検血液検体がループスアンチコアグラント陽性であると推定するか、又は、Ｒ（Ｓ）が閾値又はそれより小さい場合に、前記被検血液検体が凝固因子欠乏であると推定することを含む、請求項９記載の方法。
  11. 　前記被検血液検体の凝固時間を算出することをさらに含む、請求項１記載の方法。 
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