WO2024053191A1 - 検査容器及び核酸検査方法 - Google Patents

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WO2024053191A1
WO2024053191A1 PCT/JP2023/021254 JP2023021254W WO2024053191A1 WO 2024053191 A1 WO2024053191 A1 WO 2024053191A1 JP 2023021254 W JP2023021254 W JP 2023021254W WO 2024053191 A1 WO2024053191 A1 WO 2024053191A1
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WO
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liquid
liquid storage
storage section
state
reaction chamber
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Application number
PCT/JP2023/021254
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English (en)
French (fr)
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威史 濱
裕康 石井
大亮 衛藤
和興 込山
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富士フイルム株式会社
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Publication date
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    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813Hybridisation assays
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844Nucleic acid amplification reactions
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/08Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N37/00Details not covered by any other group of this subclass

Definitions

  • the present invention relates to a test container and a nucleic acid testing method.
  • test containers such as test cartridges or analysis chips that are used to perform various analyzes on specimens extracted from biological samples are known.
  • the test container includes a plurality of chambers (liquid storage portions) that contain liquid, and a flow path that connects the chambers.
  • a sample liquid is transferred from chamber to chamber using an external force such as electromagnetic force, centrifugal force, or pressure.
  • the test container is equipped with a switching valve that switches the connection state between a plurality of chambers, so that liquid can be sent from a desired chamber to another desired chamber.
  • the switching valve is a rotary valve that has a connection port connected to a flow path on the bottom surface, and which switches the flow path connected to the connection port by rotating it. It has been known.
  • JP-A-2010-78493 discloses a device comprising a plurality of chambers, a rotary valve disposed between them, a cylinder disposed within the rotary valve, and a plunger disposed vertically slidably within the cylinder.
  • a reaction vessel plate (corresponding to a test vessel) with a syringe is disclosed.
  • the test container disclosed in Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2010-78493 sucks and discharges liquid or gas using a syringe while the cylinder and chamber are connected by a rotary valve, thereby transferring liquid from the chamber to the cylinder or from the cylinder to the chamber. It is configured to be able to send liquid.
  • a sample liquid is sucked into a cylinder provided in a rotary valve and temporarily stored, and the sample liquid in the cylinder is diluted by being sent to a reagent container holding a diluent.
  • the liquid and the sample liquid are mixed, the mixed liquid is sucked into the cylinder again and contained, and then the mixed liquid is sent to the reaction container.
  • the sample liquid before pretreatment and the sample liquid before pretreatment are used. If contamination occurs with the processed sample fluid, the test accuracy will decrease, which is undesirable. In order to perform highly accurate inspection, it is necessary to suppress contamination in the liquid storage section.
  • the present disclosure aims to provide a test container and a nucleic acid testing method that can suppress contamination in a liquid storage part provided in a valve in a test container that transfers a specimen to a chamber via a liquid storage part provided in a valve. purpose.
  • the test container of the present disclosure is a test container that is removably loaded into a test device while containing a sample liquid to be tested, and includes: an input port into which the sample liquid is input; a liquid reservoir for storing the sample liquid input from the input port; a pretreatment chamber that accommodates the sample liquid sent from the liquid reservoir; A first liquid storage section that temporarily accommodates the sample liquid sent from the liquid reservoir before sending it to the pretreatment chamber, and a second liquid that temporarily accommodates the sample liquid sent from the pretreatment chamber.
  • valve having a housing section provided therein; a reaction chamber that accommodates the sample liquid sent from the second liquid storage section; a first connection port that communicates with the first liquid storage unit and connects a first pressure adjustment mechanism that adjusts the pressure within the first liquid storage unit to transfer the sample liquid; a second connection port that communicates with the second liquid storage section and connects a second pressure adjustment mechanism that adjusts the pressure within the second liquid storage section to transfer the sample liquid;
  • the valve has a first state in which the liquid reservoir portion and the first liquid storage portion are in communication with each other, and a pretreatment chamber or the reaction chamber and the first liquid storage portion are in communication with each other, and the liquid reservoir portion and the first liquid storage portion are in communication with each other.
  • the reaction chamber may also serve as a pretreatment chamber, and in that case, the second state is a state in which the reaction chamber and the first liquid storage part are in communication, and the liquid reservoir part and the first liquid storage part are not in communication with each other. .
  • the reaction chamber and the pretreatment chamber may be provided separately, and in that case, the second state is such that the pretreatment chamber and the first liquid storage section are in communication with each other, and the liquid reservoir and the first liquid storage section are in communication with each other.
  • the valve can also be switched to a fifth state in which the pretreatment chamber and the second liquid storage section are in communication with each other.
  • the first connection port may also serve as the second connection port, and the first pressure adjustment mechanism may also serve as the second pressure adjustment mechanism.
  • first liquid storage part and the second liquid storage part have a common suction and exhaust passage that communicates the first liquid storage part and the second liquid storage part with the first connection port.
  • an air buffer is provided on the downstream side of the reaction chamber to temporarily store pressurized gas flowing from the reaction chamber.
  • an air buffer is provided on the downstream side of the reaction chamber to temporarily store pressurized gas flowing from the reaction chamber.
  • the second liquid storage section contains a reagent to be mixed with the sample liquid.
  • the reagent may include an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • a nucleic acid testing method includes a test container in which a first pressure adjustment mechanism is connected to a first connection port, and a second pressure adjustment mechanism is connected to a second connection port, either directly or indirectly through piping.
  • a nucleic acid testing method using a test container in which a reaction chamber also serves as a pretreatment chamber Inject the sample liquid from the input port of the test container and store the sample liquid in the liquid reservoir, The valve remains in the first state or is switched to the first state, and the first pressure adjustment mechanism decompresses the inside of the first liquid storage part to send the sample liquid from the liquid reservoir to the first liquid storage part, Switch the valve to the second state, Sending the sample liquid from the first liquid storage part to the reaction chamber by pressurizing the inside of the first liquid storage part by the first pressure adjustment mechanism; Switch the valve to the third state, In the reaction chamber, the sample liquid is heat-treated, Switch the valve to the fourth state, By the operation of reducing the pressure inside the second liquid storage section by the second pressure adjustment mechanism, the sample
  • a first pressure adjustment mechanism is connected to a first connection port
  • a second pressure adjustment mechanism is connected to a second connection port, respectively, directly or indirectly through piping.
  • a nucleic acid testing method using a test container in which a reaction chamber and a pretreatment chamber are separately provided Inject the sample liquid from the input port of the test container and store the sample liquid in the liquid reservoir, The valve remains in the first state or is switched to the first state, and the first pressure adjustment mechanism decompresses the inside of the first liquid storage part to send the sample liquid from the liquid reservoir to the first liquid storage part, Switch the valve to the second state, Sending the sample liquid from the liquid storage part to the pretreatment chamber by pressurizing the inside of the first liquid storage part by the first pressure adjustment mechanism; Switch the valve to the third state, In the pretreatment chamber, the sample liquid is heat-treated, Switch the valve to the fifth state, By reducing the pressure inside the second liquid storage section using the second pressure adjustment mechanism, the sample liquid is sent from
  • Switch the valve to the fourth state By pressurizing the inside of the second liquid storage section by the second pressure adjustment mechanism, a mixed solution of the sample liquid and the reagent is sent from the second liquid storage section to the reaction chamber; Switch the valve to the third state, In the reaction chamber, by controlling the temperature of the mixed liquid, a specific nucleic acid sequence in the mixed liquid is amplified, Irradiate the mixture with excitation light, detect the fluorescence generated from the fluorescent probe, Determine the presence or concentration of a specific nucleic acid sequence.
  • FIG. 1 is a perspective view showing a schematic configuration of a test container according to a first embodiment.
  • 2 is an end view taken along line AB of the test container shown in FIG. 1.
  • FIG. FIG. 2 is a partially exploded perspective view of the test container shown in FIG. 1.
  • FIG. It is a perspective view of a main body member.
  • FIG. 3 is an exploded perspective view of the rotating member.
  • FIG. 6A is a perspective view of the rotating member main body viewed from the top side
  • FIG. 6B is a perspective view of the rotating member main body viewed from the bottom side.
  • It is a flow path structure of the test container of a 1st embodiment, and is a figure showing typically the flow path structure where a valve is in a 1st state.
  • FIG. 7 is a schematic plan view showing a flow path structure of a modified example of a test container.
  • FIG. 12A is a schematic plan view showing a flow path structure of a modified example of the test container, and FIG.
  • FIG. 12B is a schematic plan view showing a modified example of the air buffer.
  • FIG. 7 is a schematic plan view showing a flow path structure of a modified example of a test container. It is a flow path structure of the test container of 2nd Embodiment, Comprising: It is a figure which shows typically the flow path structure with a valve in a 1st state. It is a top view of the main body member of the test container of 2nd Embodiment. It is a flow path structure of the test container of 2nd Embodiment, Comprising: It is a figure which shows typically the flow path structure with a valve in a 2nd state.
  • FIG. 1 is a diagram showing a schematic configuration of an inspection device. It is a figure showing the process of nucleic acid testing using the test container of a 1st embodiment (part 1).
  • FIG. 2 is a diagram showing the steps of nucleic acid testing using the test container of the first embodiment (part 2).
  • FIG. 1 is a diagram showing a schematic configuration of an inspection device. It is a figure showing the process of nucleic acid testing using the test container of a 1st embodiment (part 1).
  • FIG. 2 is a diagram showing the steps of nucleic acid testing using the test container of the first embodiment (part 2).
  • FIG. 1 is a diagram showing a schematic configuration of an inspection device. It is a figure showing the process of nucleic acid testing using the test container of a 1st embodiment (part 1).
  • FIG. 2 is a diagram showing the steps of nucleic acid testing using the test container of the first embodiment (part 2).
  • FIG. 1 is a diagram showing a schematic configuration of an inspection device. It is
  • Part 3 is a diagram showing the steps of nucleic acid testing using the test container of the first embodiment (Part 3). It is a figure which shows the process of a nucleic acid test using the test container of a modification (part 1). It is a figure which shows the process of a nucleic acid test using the test container of a modification (part 2). It is a figure which shows the process of a nucleic acid test using the test container of a modification (part 3). container It is a figure which shows the process of a nucleic acid test using the test container of a modification (part 4).
  • FIG. 1 is a perspective view showing a test container 10 according to one embodiment
  • FIG. 2 is a schematic diagram showing an end surface of a cut section taken along line AB of the test container 10 shown in FIG.
  • FIG. 3 is a partially exploded perspective view of the test container 10, in which the flow path structure 11 inside the test container 10 is shown by broken lines.
  • FIG. 4 is a perspective view of the main body member 10A of the test container 10.
  • the test container 10 is a microchannel device that has a channel structure 11 (see FIG. 3) that includes a plurality of chambers and channels that connect the chambers.
  • the test container 10 is a test container that is removably loaded into the test device 200 (see FIG. 19) while containing a sample liquid from the test sample, and is used for testing.
  • the test container 10 is composed of a main body member 10A in which recesses, holes, etc. are formed, which constitute a part of a flow path structure 11 including a flow path and a chamber, and a bottom member 10B, which constitutes the bottom surface of the flow path structure 11. has been done.
  • the main body member 10A can be made of any known resin-molded plastic material without particular limitation, but from the viewpoint of heat resistance and transparency, polycarbonate, polypropylene, cycloolefin, or silicone resin is preferable.
  • the bottom member 10B is formed of, for example, a thin plate or a film.
  • any known resin-molded plastic material can be used without particular limitation, but from the viewpoint of adhesion to the main body member 10A, the same material as the main body member 10A is preferable.
  • the bottom member 10B is preferably made of a film from the viewpoint of increasing close contact with the heating means and enabling efficient heating. .
  • the test container 10 is arranged between an input port 12, a liquid reservoir 13, a reaction chamber 15 which also serves as a pre-treatment chamber, and between the liquid reservoir 13 and the reaction chamber 15.
  • a connecting port 17 for connecting a pressure adjustment mechanism, and first to third flow paths 18a to 18c connecting these are provided.
  • the plurality of chambers included in the test container 10 are a liquid reservoir 13, a reaction chamber 15, a first liquid storage part 31, and a second liquid storage part 32, which will be described later. In the following, when there is no need to distinguish between the liquid reservoir 13, the reaction chamber 15, the first liquid storage section 31, and the second liquid storage section 32, they may be collectively referred to as chambers.
  • the input port 12 is an opening for inputting the sample liquid S.
  • the test container 10 may include a lid portion 12A that covers the input port 12 and is removably attached to the opening of the input port 12.
  • the lid portion 12A is formed to be able to be fitted into the input port 12.
  • the lid portion 12A may be attached/detached to/from the input port 12 using a snap-type cap structure or an adhesive.
  • the lid part 12A opens the input port 12 when the sample liquid is input, but closes the input port 12 except when the sample liquid is input to eliminate contamination of impurities from the outside and prevent evaporation of the sample liquid S from inside. do.
  • the sample fluid S is, for example, a liquid obtained by extracting nucleic acids from a sample collected from a subject's nasal cavity, pharynx, oral cavity, or affected area.
  • the surface where the input port 12 is provided will be referred to as the top surface of the test container 10, and the bottom member 10B side will be referred to as the bottom surface of the test container 10.
  • the top surface of the main body member 10A is the same as the top surface of the test container 10
  • the bottom surface of the main body member 10A is a surface in contact with the top surface of the bottom member 10B
  • the bottom surface of the bottom member 10B is the same as the bottom surface of the test container 10. be.
  • the liquid reservoir section 13 is a liquid storage section having the input port 12 as an opening, and stores the sample liquid S dropped from the input port 12.
  • the shape of the liquid reservoir 13 is not particularly limited, and can be arbitrarily selected from a columnar shape, a conical shape, a truncated cone shape, and the like.
  • the input port 12 is configured by the opening on the upper surface side of the first cylindrical part 22 that penetrates the main body member 10A in the thickness direction.
  • a liquid reservoir 13 is formed by the inner portion and the bottom member 10B. The liquid reservoir 13 is a space in which the sample liquid S input from the input port 12 is stored in front of the valve 16 .
  • the reaction chamber 15 is a chamber that can accommodate a liquid, and accommodates a sample liquid S fed from a second liquid storage section 32 of the valve 16, which will be described later. Furthermore, in this example, the reaction chamber 15 also serves as a pretreatment chamber in which the sample liquid S fed from the liquid reservoir 13 via the valve 16 is accommodated.
  • the reaction chamber 15 is formed by a recess 25 provided on the lower surface of the main body member 10A and a bottom member 10B.
  • the reaction chamber 15 is, for example, a chamber in which preprocessing in testing, reaction for testing, and detection processing are performed, and in the testing apparatus 200 (see FIG. 19) described later, heat processing by heating section 210 and detection processing are performed. Detection processing according to H.240 is performed. Therefore, the reaction chamber 15 is a region (heating region 68 (see FIG. 7)) in the test container 10 that is heated by the heating section 210 in the test device, and is capable of optical measurement by the detection section 240. The sensor is located in the detection area.
  • a substantially rectangular recess 26 (hereinafter referred to as rectangular recess 26) is provided on the upper surface opposite to the recess 25 of the reaction chamber 15 provided on the lower surface.
  • the rectangular recess 26 is arranged at a position facing the detection section 240 of the test device 200.
  • the bottom surface of the rectangular recess 26 functions as a light incident surface when light is made to enter the sample liquid S in the reaction chamber 15 from the detection section 240 and as a light exit surface from which light generated from the sample liquid S is emitted.
  • the rectangular recess 26 is provided to reduce the heat capacity of the test container. Due to the presence of the rectangular recess 26, heat from the heating section 210 in the inspection device is appropriately applied to the reaction chamber 15, and the temperature of the liquid in the reaction chamber 15 is appropriately adjusted.
  • a pressure adjustment mechanism 60 is connected to the connection port 17. As shown in FIG. 3, a pressure adjustment mechanism 60 is connected to the connection port 17 directly or via piping or the like.
  • the pressure adjustment mechanism 60 is a syringe.
  • the connection port 17 is an opening on the upper surface side of the second cylindrical portion 27 that penetrates from the upper surface to the lower surface of the main body member 10A.
  • a connection port 65 to which the tip of the cylinder 61 is connected is fitted into the connection port 17, and the connection port 65 is configured so that the tip of the cylinder 61 is connected.
  • a second cylindrical portion 27 whose one end is constituted by the connection port 17, and a gas storage portion 29 in which gas is contained are constituted by the bottom member 10B.
  • the gas storage section 29 communicates with the flow path 18c.
  • a pressure gauge (not shown) is provided in the pipe connecting the connection port 17 and the pressure adjustment mechanism 60, and is configured to be able to control the internal pressure.
  • the pressure adjustment mechanism 60 is not limited to a syringe, and various pumps can be used.
  • the connection port 17 is configured to be connected to a pressure adjustment mechanism 60 provided externally.
  • at least a portion of the pressure adjustment mechanism 60 may be provided in the test container 10.
  • a syringe cylinder 61 may be incorporated into the test container 10. In such a case, the portion to which the tip of the cylinder 61 assembled in the test container 10 is connected becomes the connection port.
  • a rubber plug like that provided at the tip of a plunger is disposed inside the cylinder 61. It is only necessary that the inspection device side is provided with a mechanism for moving the rubber stopper within the cylinder 61.
  • the valve 16 includes a first liquid storage section 31 and a second liquid storage section 32 inside.
  • the first liquid storage section 31 temporarily stores the sample liquid S sent from the liquid reservoir 13 before sending it to the reaction chamber 15 which also serves as a pretreatment chamber.
  • the second liquid storage section 32 temporarily stores the sample liquid S sent from the reaction chamber 15 .
  • the valve 16 changes the connection state between the liquid reservoir 13 and the reaction chamber 15 and the first liquid storage part 31 and the second liquid storage part 32 into the following first state, second state, and third state.
  • This is a valve that switches between the fourth state and the fourth state.
  • the first state is a state in which the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 are communicated with each other. Note that in the first state of this example, the reaction chamber 15 and the first liquid storage section 31 do not communicate with each other.
  • the second state is a state in which the reaction chamber 15, which also serves as a pretreatment chamber, and the first liquid storage section 31 are in communication with each other, and the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 are not in communication with each other.
  • the third state is a state in which both the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are not in communication with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15.
  • the fourth state is a state in which the reaction chamber 15 and the second liquid storage section 32 are in communication with each other, and the reaction chamber 15 and the first liquid storage section 31 are not in communication with each other.
  • the valve 16 in the present test container 10 has a rotating member 40 disposed in a cylindrical recess 24 (hereinafter referred to as cylindrical recess 24) provided on the upper surface of the main body member 10A. .
  • the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are provided inside the rotating member 40 .
  • FIG. 5 is an exploded perspective view of the rotating member 40.
  • the rotating member 40 is composed of a rotating member main body 41 and a lid body 42.
  • FIG. 6A is a perspective view showing the top side of the rotating member main body 41
  • FIG. 6B is a perspective view showing the bottom side of the rotating member main body 41.
  • the rotating member main body 41 includes a cylindrical part 43 having an outer diameter slightly smaller than the diameter of the cylindrical recess 24 of the main body member 10A, and a flange part 44 extending on the upper end surface of the cylindrical part 43 so as to surround the cylindrical part 43. have The collar portion 44 has an outer diameter larger than the diameter of the cylindrical recess 24 .
  • the rotating member main body 41 is rotatably installed within the cylindrical recess 24 .
  • the collar portion 44 of the rotating member main body 41 is provided with four holes 44a that are used when rotating the rotating member 40.
  • the four holes 44a are arranged four-fold symmetrically about the central axis of the cylindrical portion 43.
  • the rotating member 40 is rotated by driving and rotating a claw 222 of a valve rotating mechanism 220 provided in an inspection device (see FIG. 21), which will be described later, while being inserted into the hole 44a.
  • the cylindrical portion 43 has two recesses 45 and 46 (hereinafter referred to as half-moon recesses 45 and 46) that open in a half-moon shape on one end surface thereof.
  • the two semicircular recesses 45 and 46 are arranged symmetrically across a separation wall 47 that includes the center of the cylindrical portion 43 and extends in the radial direction.
  • a through hole 47a is provided that penetrates from the upper surface to the lower surface of the cylindrical portion 43.
  • a groove 47b extending from the through hole 47a along one side of the radial direction is provided on the upper surface of the separation wall 47, and one end of the groove 47b is connected to a groove 47c provided perpendicularly to the direction in which the groove 47b extends. It is connected to the.
  • the groove 47c is a groove that communicates with the two semicircular recesses 45 and 46, respectively.
  • the lid body 42 is formed to be able to be fitted into the openings of the semicircular recesses 45 and 46 so as to cover them.
  • the first liquid storage portion 31 is formed by the inner wall surface of the semicircular recess 45 and the lid 42 .
  • the second liquid storage portion 32 is formed by the inner wall surface of the semicircular recess 46 and the lid 42 .
  • the lid body 42 has a shape that does not obstruct the flow of gas between the first liquid storage part 31 and the groove 47c and between the second liquid storage part 32 and the groove 47c, and the lid body A flow path is formed by 42.
  • One hole 45a that communicates with the first liquid storage section 31 is provided on the bottom surface of the half-moon-shaped recess 45 of the rotating member main body 41.
  • one hole 46a communicating with the second liquid storage section 32 is provided on the bottom surface of the half-moon-shaped recess 46 of the rotating member main body 41.
  • the bottom surface of the cylindrical recess 24 of the main body member 10A has a hole 24a communicating with the first flow path 18a, a hole 24b communicating with the second flow path 18b, and a hole 24b communicating with the third flow path 18c. It has a hole 24c.
  • the hole 24c is provided at the center of the bottom surface of the cylindrical recess 24.
  • One end of the first channel 18a is connected to the liquid reservoir 13 (see FIG. 3). Therefore, the hole 24a communicates with the liquid reservoir 13 via the first flow path 18a.
  • the second flow path 18b is connected to the reaction chamber 15 at one end. Therefore, the hole 24b communicates with the reaction chamber 15 via the second flow path 18b.
  • One end of the third flow path 18c is connected to the connection port 17 via the gas storage section 29. Therefore, the hole 24c communicates with the connection port 17 via the third flow path 18c.
  • the hole 24c provided at the center of the bottom of the cylindrical recess 24 coincides with the through hole 47a provided at the center of the cylindrical portion 43 of the rotating member main body 41. do.
  • the through hole 47a and the hole 24c are kept aligned regardless of the rotational state of the rotating member 40. Therefore, the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are always connected via the flow path formed by the grooves 47c and 47b, the through hole 47a, the third flow path 18c, and the gas storage section 29. It is in communication with the mouth 17.
  • the flow path formed by the groove 47c and the groove 47b, the through hole 47a, the third flow path 18c, and the gas storage section 29 connect the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 to the connection port 17, respectively.
  • the hole 45a on the bottom surface of the first liquid storage section 31 of the rotating member 40 is aligned with the hole 24a on the bottom surface of the cylindrical recess 24, and the hole 45a and A state where the hole 46a on the bottom surface of the second liquid storage part 32 and the hole 24b match, a state where the hole 45a does not match with either of the holes 24a and 24b, and a state where the hole 46a matches the hole 24a and the hole 24b.
  • 24b may be in a state where none of them match.
  • Each of the holes 24a to 24c is provided with an O-ring 36 (see FIG. 2).
  • the O-ring 36 prevents leakage from the connection between the holes when the hole 45a is aligned with the hole 24a or 24b, the hole 46a is aligned with the hole 24b, and the through hole 47a is aligned with the hole 24c.
  • any known sealing member such as a packing or a gasket can be used as a sealing means for preventing leakage without particular limitation.
  • the material of the sealing means for example, rubber materials such as nitrile rubber, urethane rubber, silicone rubber, and fluororubber, or known elastomers such as olefin and urethane can be used.
  • the sealing means may be integrally formed in the cylindrical recess 24 of the rotating member 40 or the main body member 10A.
  • the rotating member 40 is disposed in the cylindrical recess 24 of the main body member 10A, and is used with the collar 44 urged against the main body member 10A by the restraining plate 50.
  • the restraining plate 50 has a circular center hole 50a having a diameter smaller than the outer diameter of the collar portion 44 at the center (see FIG. 3).
  • the restraining plate 50 is arranged so as to overlap the edge of the flange 44, and the holes 50b provided at the four corners are aligned with the screw holes 20 provided on the top surface of the main body member 10A. It is screwed to 10A.
  • the hole 44a provided in the collar portion 44 is exposed from the center hole 50a of the restraining plate 50. This allows the pawl 222 of the valve rotation mechanism 220 to access the hole 44a when rotating the valve.
  • the restraining plate 50 is fixed to the main body member 10A with screws.
  • the method of fixing the restraining plate 50 is not limited to this, and may include a method of fixing the restraining plate 50 with a fixing claw fixed in advance to the main body member 10A, a method of welding the restraining plate 50 to the main body member 10A, etc. It may be.
  • the first flow path 18a to the third flow path 18c are all formed by recesses 28a to 28c provided on the lower surface of the main body member 10A and the bottom member 10B.
  • the first flow path 18a is a flow path that communicates with the hole 24a on the bottom surface of the cylindrical recess 24 of the valve 16 and connects the liquid reservoir 13 and the first liquid storage portion 31 of the valve 16.
  • the second flow path 18b is a flow path that communicates with the hole 24b on the bottom surface of the cylindrical recess 24 of the valve 16 and connects the reaction chamber 15 and the first liquid storage portion 31 or the second liquid storage portion 32 of the valve 16. be.
  • the third flow path 18c communicates with a hole 24c provided at the center of the bottom of the cylindrical recess 24 of the valve 16, and connects the first liquid storage section 31, the second liquid storage section 32, and the gas storage section 29. It is a flow path where The cross-sectional size of the first to third channels 18a to 18c is, for example, approximately 0.5 mm to 1 mm wide and 0.5 mm deep.
  • 7 to 10 are schematic plan views of the channel structure 11 in the test container 10. 7 to 10 are diagrams for explaining the first to fourth states switched by the valve 16.
  • the hole 45a on the bottom surface of the first liquid storage portion 31 of the rotating member 40 is connected to the first flow path 18a. At this time, the hole 45a coincides with the hole 24a on the bottom surface of the cylindrical recess 24 (see FIG. 2).
  • the first liquid storage section 31 and the reaction chamber 15 are not in communication with each other.
  • the hole 46a on the bottom surface of the second liquid storage section 32 of the rotating member 40 is not connected to either the first flow path 18a or the second flow path 18b. That is, the reaction chamber 15 does not communicate with either the first liquid storage section 31 or the second liquid storage section 32.
  • the hole 45a at the bottom of the first liquid storage portion 31 of the rotating member 40 is connected to the second flow path 18b. At this time, the hole 45a coincides with the hole 24b on the bottom surface of the cylindrical recess 24.
  • the hole 46a on the bottom surface of the rotating member 40 is not connected to either the first flow path 18a or the second flow path 18b. That is, the second liquid storage section 32 does not communicate with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15.
  • the hole 45a on the bottom surface of the first liquid storage portion 31 of the rotating member 40 is in a state where it is not connected to either the first flow path 18a or the second flow path 18b. That is, the first liquid storage section 31 does not communicate with either the liquid reservoir 13 or the reaction chamber 15, and the second liquid storage section 32 does not communicate with either the liquid reservoir 13 or the reaction chamber 15. state.
  • the third state may be a state in which both the liquid reservoir section 13 and the reaction chamber 15 are not in communication with either the first liquid storage section 31 or the second liquid storage section 32, and the rotational position of the rotation member 40 is
  • the present invention is not limited to the embodiment 9.
  • the valve 16 is a rotary valve that can switch between the first state, the second state, the third state, and the fourth state by rotating the rotary member 40 within the cylindrical recess 24 of the main body member 10A.
  • the valve 16 is not limited to the rotary valve having the above structure as long as it can realize the first to fourth states.
  • the sample liquid S is transferred by connecting the chamber containing the sample liquid S with the chamber containing the sample liquid S by the valve 16, and then connecting the chamber containing the sample liquid S to the chamber to which the sample liquid S is transferred. This is carried out by increasing or decreasing the pressure within the liquid storage section 31 and/or the second liquid storage section 32.
  • the sample liquid S input from the input port 12 is sent to the liquid reservoir 13, the first liquid storage part 31, and a reaction chamber (or a pretreatment chamber in the case of a configuration including a pretreatment chamber). 15, the second liquid storage section 32, and the reaction chamber 15 in this order.
  • Liquid feeding from the liquid reservoir 13 to the first liquid storage section 31 is realized by setting the valve 16 to the first state (see FIG. 7) and reducing the internal pressure of the first liquid storage section 31 by the pressure adjustment mechanism 60. Ru.
  • the plunger 62 inside the cylinder 61 is pulled outward to draw the air inside the first liquid storage section 31 into the cylinder 61, thereby reducing the pressure inside the first liquid storage section 31.
  • the sample liquid S in the liquid reservoir 13 is drawn into the first liquid storage part 31 through the first flow path 18a. Note that the sample liquid S enters the first liquid storage section 31 through the hole 45a provided on the bottom surface of the first liquid storage section 31.
  • a flow path for discharging air from inside the first liquid storage section 31 is constituted by a groove 47c provided in the separation wall 47 and a lid 42 that constitutes the top surface of the first liquid storage section 31. Therefore, the sample liquid S is stored in the first liquid storage section 31 without entering the groove 47c.
  • the upper part of the liquid reservoir 13 is provided with an air intake port (not shown), so that air can be sucked into the liquid reservoir 13. ing.
  • the intake port is equipped with a filter to remove dust.
  • Liquid feeding from the first liquid storage section 31 to the reaction chamber 15 is achieved by setting the valve 16 to the second state (see FIG. 8) and pressurizing the internal pressure of the first liquid storage section 31 using the pressure adjustment mechanism 60. .
  • the plunger 62 into the cylinder 61 and pushing the air inside the cylinder 61 into the first liquid storage section 31 the inside of the first liquid storage section 31 is pressurized.
  • the sample liquid S in the first liquid storage section 31 is pushed out to the reaction chamber 15 through the second flow path 18b, and is sent to the reaction chamber 15.
  • Liquid feeding from the reaction chamber 15 to the second liquid storage section 32 is achieved by setting the valve 16 to the fourth state (see FIG. 10) and reducing the internal pressure of the second liquid storage section 32 by the pressure adjustment mechanism 60. .
  • the inside of the second liquid storage section 32 is depressurized.
  • the sample liquid S in the reaction chamber 15 is drawn into the second liquid storage section 32 through the second flow path 18b.
  • the sample liquid S enters the second liquid storage section 32 through the hole 46a provided on the bottom surface of the second liquid storage section 32.
  • a flow path for discharging air from inside the second liquid storage section 32 is constituted by a groove 47c provided in the separation wall 47 and a lid 42 that constitutes the top surface of the second liquid storage section 32. Therefore, the sample liquid S is stored in the second liquid storage section 32 without entering the groove 47c.
  • Liquid feeding from the second liquid storage section 32 to the reaction chamber 15 is achieved by setting the valve 16 to the fourth state (see FIG. 10) and pressurizing the internal pressure of the second liquid storage section 32 by the pressure adjustment mechanism 60. .
  • the plunger 62 into the cylinder 61 and pushing the air inside the cylinder 61 into the second liquid storage section 32 the inside of the second liquid storage section 32 is pressurized. Thereby, the sample liquid S in the second liquid storage section 32 is pushed out to the reaction chamber 15 through the second flow path 18b, and is sent to the reaction chamber 15.
  • the heat treatment of the reaction chamber 15 is performed with the reaction chamber 15 filled with the sample liquid S, the valve 16 set to the third state (see FIG. 9), and the reaction chamber 15 closed. .
  • the valve 16 is connected to the first liquid storage section 31 that temporarily accommodates the sample liquid S sent from the liquid reservoir 13 before the sample liquid S is sent to the reaction chamber 15, which also serves as a preprocessing chamber.
  • a second liquid storage section is provided inside to temporarily store the sample liquid S sent from the reaction chamber 15 which also serves as a chamber.
  • the reaction chamber 15 can be easily sealed. At this time, the inside of the reaction chamber 15 is sealed in a state where the pressure is higher than atmospheric pressure.
  • heating the reaction chamber 15 is done with the reaction chamber 15 sealed, thereby preventing evaporation of the sample liquid S and generation of bubbles in the sample liquid S. can be suppressed. Since the inside of the reaction chamber 15 is heated while being pressurized, the temperature raising and cooling properties of the sample liquid S can be improved. Therefore, it is possible to improve inspection accuracy and inspection speed.
  • the volume of the liquid reservoir 13 when the volume of the liquid reservoir 13 is V1, the volume of the first liquid storage part 31 is V2, the volume of the second liquid storage part is V3, and the volume of the reaction chamber 15 is V4, V1> It is preferable that the relationship is V2>V3>V4. That is, in the testing process, it is preferable that the chamber to which the sample liquid S is sent later has a smaller volume.
  • the reaction chamber 15 also serves as a pretreatment chamber, since it is the last chamber to which the liquid is fed, it is regarded as the most downstream chamber in the feeding of the sample liquid S in the testing process.
  • the volume V1 of the liquid reservoir 13 is 50 ⁇ L to 300 ⁇ L
  • the volume V2 of the first liquid storage portion 31 is 50 ⁇ L
  • the volume V3 of the second liquid storage portion 32 is 20 ⁇ L to 40 ⁇ L
  • the volume V4 of the reaction chamber 15 is 10 ⁇ L. ⁇ 30 ⁇ L, etc.
  • volume V1 of the liquid reservoir 13 is larger than the volume V2 of the first liquid storage part 31, more sample liquid S can be stored in the liquid reservoir 13 than the volume V2 of the first liquid storage part 31. Then, if the relationship between the volumes of the plurality of chambers arranged from the upstream side to the downstream side when sending the sample liquid S in the testing process is V1>V2>V3>V4, the sample liquid S was sent. In this case, the downstream chamber can be filled with the sample liquid S. Therefore, it is possible to prevent the specimen liquid S from running out in the reaction chamber that will ultimately be used for detection.
  • the test container 10 may include a reagent 70 that is reacted with the sample liquid S in the second liquid storage section 32.
  • the reagent 70 is a reagent containing an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • the reaction chamber 15 also serves as a pretreatment chamber.
  • a pretreatment chamber 66 may be provided separately from the reaction chamber 15, as in a modified example of a test container 110 shown in FIG.
  • the bottom surface of the cylindrical recess 24 of the main body member 10A is further provided with a hole 24d that communicates with the fourth flow path 18d connected to the pretreatment chamber 66.
  • the sample liquid S is sent, for example, from the liquid reservoir 13 to the first liquid storage section 31 , the pretreatment chamber 66 , the second liquid storage section 32 , and the reaction chamber 15 in this order. .
  • the hole 45a of the rotating member 40 is aligned with the hole 24d provided on the bottom surface of the cylindrical recess 24. That is, the second state in this case is a state in which the pretreatment chamber 66 and the first liquid storage section 31 are in communication with each other, and the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 are not in communication with each other. Note that the first state, the third state, and the fourth state are the same as those described above. Further, when the pretreatment chamber 66 is provided, the valve 16 can be switched not only from the first state to the fourth state but also to a fifth state in which the pretreatment chamber 66 and the second liquid storage section 32 are communicated with each other. .
  • the pretreatment chamber 66 and the second liquid storage section 32 communicate with each other, but the pretreatment chamber and the first liquid storage section 31 do not communicate with each other.
  • the valve 16 switched to the fifth state by reducing the pressure inside the second liquid storage section 32, the pretreated sample liquid S in the pretreatment chamber 66 is transferred from the pretreatment chamber 66 to the second liquid storage section 32. It is possible to send liquid to
  • the reaction chamber 15 and the pretreatment chamber 66 may be provided separately, but as explained in the above embodiment, the reaction chamber 15 also serves as the pretreatment chamber 66, resulting in a simpler configuration. be able to. If the pretreatment and reaction treatment are processes that each require heating, if the reaction chamber 15 and pretreatment chamber 66 are separately provided, a heating section corresponding to each will be required in the inspection device that loads the test container. . However, if the reaction chamber 15 is configured to also serve as a pretreatment chamber, only one heating section is required in the inspection apparatus. Further, from the viewpoint of controlling the rotation of the rotating member 40, it is preferable that the number of holes to be matched is small because it can be implemented easily.
  • an air buffer is provided on the downstream side of the reaction chamber 15.
  • 19 may be provided.
  • Air buffer 19 is a space located downstream of reaction chamber 15. It is preferable that the air buffer 19 be placed outside the heating region 68 that is heated by the heating unit 210 (see FIG. 19) in the inspection device 200 when the air buffer 19 is loaded into the inspection device 200.
  • the air buffer 19 temporarily stores pressurized gas flowing from the reaction chamber 15.
  • the air buffer 19 includes a flow path 19a provided downstream of the reaction chamber 15 and an air chamber 19b.
  • the air buffer 19 may be composed of only a flow path 19c, as shown in FIG. 12B.
  • Providing the air buffer 19 makes it easier to transfer the sample liquid S from the first liquid storage section 31 to the reaction chamber 15 or from the second liquid storage section 32 to the reaction chamber 15. Further, by pushing gas from the reaction chamber 15 into the air buffer 19 side, it becomes possible to fill the inside of the reaction chamber 15 with the sample liquid S. Since the detection process can be performed while the reaction chamber 15 is filled with the sample liquid S, it is possible to suppress inspection errors caused by irradiating measurement light onto a location where the sample liquid S does not exist.
  • a plurality of reaction chambers 15A to 15C may be provided.
  • air buffers 19A to 19C are further provided downstream of each of the reaction chambers 15A to 15C.
  • the same test can be performed on one specimen in the plurality of reaction chambers 15A to 15C, and the test accuracy can be improved.
  • the example shown in FIG. 13 includes three reaction chambers 15A to 15C, there is no limit to the number of reaction chambers.
  • connection port 17 provided in the test container 10 of the above embodiment communicates with the first liquid storage section 31, and has a first pressure that adjusts the pressure inside the first liquid storage section 31 in order to transfer the sample liquid S. It is a first connection port that connects an adjustment mechanism (in this case, pressure adjustment mechanism 60), communicates with the second liquid storage section 32, and adjusts the pressure inside the second liquid storage section 32 in order to transfer the sample liquid S. This is a second connection port for connecting a second pressure adjustment mechanism (in this case, pressure adjustment mechanism 60).
  • the test container 10 may be provided with a first connection port and a second connection port, and may be configured to be connectable to the first pressure adjustment mechanism and the second pressure adjustment mechanism, respectively.
  • the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 have a common suction port that communicates the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 with the connection port 17.
  • An exhaust path 35 is provided. Therefore, a simple flow path configuration having only one connection port 17 can be achieved. If there is one connection port 17, only one pressure adjustment mechanism is required, so the configuration of the inspection device can be simplified.
  • the test container of the present disclosure is not limited to this form, and may be configured so that the pressure in the first liquid storage part and the second liquid storage part can be increased and decreased independently. Next, such an example of the test container 113 will be explained.
  • Test container of second embodiment In the test container 113 of the second embodiment shown in FIG. 14, the structure of the valve 116 is different from the valve 16 of the test container 10 of the first embodiment.
  • FIG. 14 schematically shows the flow path structure of the test container 113.
  • FIG. 15 shows a plan view of the main body member 113A of the test container 113.
  • the same members as those in the test container 10 of the first embodiment are given the same reference numerals. Note that the same applies to FIGS. 16 to 18.
  • the separation wall 147 that separates the semicircular recess 145 that constitutes the first liquid storage section 131 and the semicircular recess 146 that constitutes the second liquid storage section 132 deviates from the diameter of 143 of the rotation member cylindrical section. It is located in the same position.
  • a half-moon-shaped recess 145 forming the second liquid storage section 132 is formed larger than a half-moon-shaped recess 146 forming the first liquid storage section 131 .
  • first hole 145a Three holes, a first hole 145a, a second hole 145b, and a third hole 145c, are provided in the bottom surface of the half-moon-shaped recess 145.
  • the first hole 145a and the third hole 145c are arranged at a corner between the straight part and the arc of the semicircular recess 145, facing each other.
  • the second hole 145b is arranged between the first hole 145a and the third hole 145c at a position rotated by 90 degrees with respect to the rotation center of the rotating member 40.
  • a partition plate 145d is provided between the first hole 145a and the second hole 145b.
  • the partition plate 145d surrounds the second hole 145b from two directions, and has an arc-shaped wall portion extending from the second hole 145b to the third hole 145c. This wall plays the role of preventing liquid entering from the first hole 145a from reaching the second hole 145b.
  • Two holes a first hole 146a and a second hole 146b, are provided in the bottom surface of the half-moon-shaped recess 146.
  • the first hole 146a is located at a corner between the straight part of the semicircular recess 146 and the hole, and is located adjacent to the first hole 145a with the separation wall 147 in between.
  • the second hole 146b is arranged at a position rotated by 90 degrees with respect to the rotation center of the rotating member 40 from the first hole 146a.
  • the main body member 113A has substantially the same structure as the main body member 10A of the first embodiment, but the position of the hole provided in the bottom surface of the cylindrical recess 124 in which the rotating member 140 is arranged is different from that of the cylindrical recess 24.
  • the position of the holes is different.
  • the bottom of the cylindrical recess 124 has a hole 124a connected to the first flow path 18a, a hole 124b connected to the second flow path 18b, and a hole connected to the third flow path 18c. 124c.
  • a hole 124b is provided at a position rotated 90 degrees from the center of the cylindrical recess 124 with respect to the position of the hole 124a, and a hole 124c is provided at a position further rotated 90 degrees.
  • the valve 116 composed of the rotating member 140 and the cylindrical recess 124 configured as described above can be switched between the first state, the second state, the third state, and the fourth state, similarly to the valve 16 of the first embodiment.
  • the state shown in FIG. 14 is the first state.
  • the first hole 145a on the bottom surface of the first liquid storage portion 131 of the rotating member 140 is connected to the first flow path 18a
  • the second hole 145b is connected to the second flow path 18b
  • the third hole 145c is connected to the third flow path 18c.
  • the first hole 145a coincides with the hole 124a on the bottom surface of the cylindrical recess 24.
  • the second hole 145b coincides with the hole 124b on the bottom surface of the cylindrical recess 24.
  • the first hole 146a and the second hole 146b on the bottom surface of the second liquid storage section 132 of the rotating member 140 are not connected to any flow path. That is, the second liquid storage section 132 does not communicate with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15. Since the third hole 145c is connected to the third flow path 18c, the first liquid storage section 131 is connected to the pressure adjustment mechanism 60 via the third hole 145c and the third flow path 18c. Thereby, the pressure adjustment mechanism 60 can adjust the pressure inside the first liquid storage section 131.
  • the sample liquid S stored in the liquid reservoir 13 , if the valve 116 is set to the first state and the pressure in the first liquid containing part 131 is reduced by the pressure adjustment mechanism 60 , the sample liquid S is transferred from the liquid reservoir 13 to the first liquid reservoir 13 . 1 liquid storage section 131.
  • the first liquid storage section 131 and the reaction chamber 15 are connected, but by providing the partition plate 145d, the liquid can enter the first liquid storage section 131 from the first hole 145a.
  • the sample liquid S is prevented from reaching the second hole 145b and entering the reaction chamber 15.
  • the first hole 145a on the bottom surface of the first liquid storage portion 131 of the rotating member 140 is connected to the second flow path 18b, and the second hole 145b is connected to the third flow path 18c.
  • the first hole 145a matches the hole 124b on the bottom surface of the cylindrical recess 124
  • the second hole 145b matches the hole 124c.
  • the first hole 146a and the second hole 146b on the bottom surface of the second liquid storage portion 132 of the rotating member 140 are not connected to any flow path. That is, the second liquid storage section 132 does not communicate with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15. Since the second hole 145b is connected to the third flow path 18c, the first liquid storage section 131 is connected to the pressure adjustment mechanism 60 via the third hole 145c and the third flow path 18c. Thereby, the pressure adjustment mechanism 60 can adjust the pressure inside the first liquid storage section 131.
  • the valve 116 is set to the second state, and the inside of the first liquid storage section 131 is pressurized by the pressure adjustment mechanism 60. It can be transferred from the storage section 131 to the reaction chamber 15.
  • none of the first hole 145a to third hole 145c on the bottom surface of the first liquid storage portion 131 of the rotating member 140 is connected to any of the first flow path 18a, the second flow path 18b, and the third flow path 18c. It is not connected. Furthermore, neither the first hole 146a nor the second hole 146b on the bottom surface of the second liquid storage section 132 is connected to any of the channels 18a to 18c. That is, the first liquid storage section 131 does not communicate with either the liquid reservoir 13 or the reaction chamber 15, and the second liquid storage section 132 does not communicate with either the liquid reservoir 13 or the reaction chamber 15. state.
  • the third state may be a state in which both the liquid reservoir section 13 and the reaction chamber 15 are not in communication with either the first liquid storage section 131 or the second liquid storage section 132, and the rotational position of the rotation member 40 is
  • the present invention is not limited to the 17 aspects.
  • the reaction chamber 15 is in a closed state. With the sample liquid S contained in the reaction chamber 15, the valve 116 is set to the third state and the reaction chamber 15 is heated to perform pretreatment, nucleic acid amplification treatment, or the like.
  • the first hole 146a on the bottom surface of the second liquid storage portion 132 of the rotating member 140 is connected to the third flow path 18c, and the second hole 146b is connected to the second flow path 18b.
  • the first hole 146a coincides with the hole 124c on the bottom surface of the cylindrical recess 124
  • the second hole 146b coincides with the hole 124b.
  • the second liquid storage section 132 Since the first hole 146a of the second liquid storage section 132 is connected to the third flow path 18c, the second liquid storage section 132 is connected to the pressure adjustment mechanism 60 via the first hole 146a and the third flow path 18c. It is connected. Thereby, the pressure adjustment mechanism 60 can adjust the pressure inside the second liquid storage section 132. With the sample liquid S stored in the reaction chamber 15, if the valve 116 is set to the fourth state and the pressure inside the second liquid storage section 132 is reduced by the pressure adjustment mechanism 60, the sample liquid S is transferred from the reaction chamber 15 to the second liquid. It can be transferred to the storage section 132.
  • valve 116 is set to the fourth state with the sample liquid S stored in the second liquid storage section 132 and the inside of the second liquid storage section 132 is pressurized by the pressure adjustment mechanism 60, the sample liquid S is stored in the second liquid storage section 132. 2 can be transferred from the liquid storage section 132 to the reaction chamber 15.
  • FIG. 19 is a diagram showing a schematic configuration of the inspection device 200.
  • the testing device 200 is, for example, a nucleic acid testing device.
  • the inspection device 200 includes a heating section 210, a valve rotation mechanism 220, a pressure adjustment mechanism drive section 230, a detection section 240, and a processor (not shown) that controls each section.
  • the processor controls each part according to an inspection procedure according to an inspection program stored in a memory (not shown).
  • the heating unit 210 is provided at a position in contact with the bottom surface of the reaction chamber 15 of the test container 10.
  • the heating unit 210 heats the liquid contained in the reaction chamber 15.
  • the heating unit 210 heats the sample liquid S to a high temperature of, for example, 90° C. or higher for pretreatment. Further, the heating unit 210 heats the mixed liquid of the sample liquid S and the reagent 70 to promote nucleic acid amplification.
  • the heating unit 210 is equipped with a heater or a Peltier device, and is capable of temperature control, and performs temperature cycles in the nucleic acid amplification process.
  • a known heating mechanism can be used for the heating unit 210, and is not particularly limited.
  • the valve rotation mechanism 220 rotates the valve 16 to change the communication state of the liquid reservoir 13, the first liquid storage part 31, the second liquid storage part 32, and the reaction chamber 15 into a first state, a second state, and a third state. and a mechanism for switching to the fourth state.
  • the valve rotation mechanism 220 includes, for example, a pawl 222 that is inserted into the hole 44a of the rotating member 40, and a rotation mechanism that rotates the pawl with the pawl 222 inserted into the hole 44a.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 is connected to the pressure adjustment mechanism 60 and drives the pressure adjustment mechanism 60.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 is configured with a linear actuator or the like that pushes and pulls the plunger 62.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 is controlled by a processor. Since the volume of each chamber and flow path is known, the processor calculates the pressure in the chambers (here, the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32) connected to the connection port from a pressure gauge (not shown). is monitored, and the amount of pressurization and depressurization is calculated according to the desired amount of liquid fed. Then, the processor controls the pressure adjustment mechanism drive unit 230 according to the calculated pressure increase/decrease amount.
  • the detection unit 240 detects whether a detection target substance is contained in the sample liquid S in the reaction chamber 15.
  • the detection unit 240 includes a light source 242, a wavelength selection filter 244, and a photodetector 246, as shown in FIG.
  • the detection unit 240 is arranged above the reaction chamber 15 of the test container 10.
  • the light source 242 irradiates the reaction chamber 15 with excitation light L1 of a specific wavelength via the wavelength selection filter 244.
  • the photodetector 246 is excited by the excitation light L1 and detects fluorescence L2 generated from the fluorescent probe. Excitation light L1 is selected according to the excitation wavelength of the fluorescent probe.
  • a filter for adjusting the intensity and light amount a lens for converging the excitation light L1, a lens for condensing the fluorescence L2 derived from the detection probe onto the photodetector 246, or an optical system may be included. .
  • the wavelength selection filter 244 is a filter that transmits only the wavelength of the light emitted from the light source 242 that corresponds to the excitation wavelength of the probe.
  • a photodetector 246 for example, a photodiode or a photomultiplier tube is applied. Further, fluorescence from a detection probe may be photographed using a camera such as a CMOS (Complementary Metal Oxide Semiconductor) or a CCD (Charge Coupled Device), and the resulting image may be analyzed and detected.
  • CMOS Complementary Metal Oxide Semiconductor
  • CCD Charge Coupled Device
  • nucleic acid testing method An example of a nucleic acid testing method using the testing container 10 of the first embodiment will be described with reference to FIGS. 20 to 22.
  • a test container 10 is used in which the second liquid storage section 32 is equipped with a reagent 70 for nucleic acid testing.
  • the reagent 70 is a reagent containing an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • a specimen 81 collected from a living body using a collection tool 80 such as a swab is immersed in an extraction liquid 83 containing a surfactant and ProK (proteinase K) to extract nucleic acids. and dispose of foreign substances.
  • a liquid containing the sample 81 obtained by mixing the sample 81 with the extract liquid 83 and performing nucleic acid extraction in the extract liquid 83 will be referred to as a sample liquid S.
  • the specimen 81 is collected, for example, from the nasal cavity, pharynx, oral cavity, or affected area of the subject using the collection tool 80. or body fluids such as nasal, pharynx, or oral cavity cleaning fluids, saliva, urine, or blood.
  • any known nucleic acid extraction method can be used without particular limitation. Examples include a method using a surfactant or a chaotropic substance, and a method applying physical shear such as ultrasonic waves or a bead mill.
  • the valve 16 may be in any of the first to fourth states, but here, the liquid reservoir 13 and the first liquid storage part 31 are It is set to the first state of communication.
  • a dripping cap 86 equipped with a filter for removing coarse contaminants is attached to a container containing a sample liquid S containing a sample from which nucleic acid has been extracted in the extract liquid, and the sample liquid is filtered through the filter 84.
  • the sample liquid S is introduced into the test container 10 through the input port 12 (step ST11).
  • the sample liquid S is stored in the liquid reservoir 13.
  • the test container 10 is loaded into the test device 200 with the sample liquid S loaded therein and the inlet 12 closed by the lid 12A.
  • the following processing is performed within the inspection device 200.
  • the plunger 62 is moved by the pressure adjustment mechanism drive unit 230 while the valve 16 is maintained in the first state, that is, with the liquid reservoir 13 and the first liquid storage unit 31 communicating with each other. Then, the pressure inside the first liquid storage section 31 is reduced. As a result, the sample liquid S in the liquid reservoir 13 is transferred to the first liquid storage section 31 (step ST12). Note that if the valve 16 is in a state other than the first state in the initial state, the valve rotation mechanism 220 switches the valve 16 to the first state and the sample liquid S is sent.
  • valve 16 is switched to the second state by the valve rotation mechanism 220 (see FIG. 19) (step ST13). That is, the reaction chamber 15 and the first liquid storage section 31 are in communication with each other, and the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 are not in communication with each other.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 pushes the plunger 62 to pressurize the inside of the first liquid storage section 31.
  • the sample liquid S is transferred from the first liquid storage section 31 to the reaction chamber 15 (step ST14).
  • the valve rotation mechanism 220 switches the valve 16 to the third state (step ST15). That is, the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are in a state where they do not communicate with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15. Thereby, the reaction chamber 15 is in a closed state without communicating with any other chamber.
  • a pretreatment is performed on the sample liquid S in the reaction chamber 15 (step ST16).
  • the heating unit 210 heats to, for example, 90° C. or higher.
  • ProK in the sample liquid S is deactivated.
  • valve rotation mechanism 220 switches the valve 16 to the fourth state (step ST17). That is, the reaction chamber 15 and the second liquid storage section 32 are communicated with each other, and the reaction chamber 15 and the first liquid storage section 31 are not communicated with each other.
  • the plunger 62 is pulled by the pressure adjustment mechanism drive section 230 to reduce the pressure inside the second liquid storage section 32 .
  • the sample liquid S in the reaction chamber 15 is transferred to the second liquid storage section 32 (step ST18).
  • a reagent 70 is provided in the second liquid storage section 32, and the sample liquid S transferred to the second liquid storage section 32 and the reagent 70 are mixed (step ST19). Note that with the sample liquid S transferred to the second liquid storage section 32, the plunger 62 may be pushed and pulled several times to promote mixing of the sample liquid S and the reagent 70.
  • the plunger 62 is pushed in by the pressure adjustment mechanism drive section 230 to pressurize the inside of the second liquid storage section 32.
  • the mixed liquid 70S in which the reagent 70 and the sample liquid S are mixed in the second liquid storage section 32 is transferred to the reaction chamber 15 (step ST20).
  • step ST21 a state in which the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are not in communication with either the liquid reservoir section 13 or the reaction chamber 15. shall be. Thereby, the reaction chamber 15 is in a closed state without communicating with any other chamber.
  • step ST22 a nucleic acid amplification process and a fluorescence detection process are performed on the mixed liquid 70S in the reaction chamber 15 (step ST22).
  • the nucleic acid amplification process is a process in which the heating unit 210 heats the sample liquid S in the reaction chamber 15 to amplify a specific nucleic acid sequence.
  • the nucleic acid amplification treatment method is not limited, but for example, RT-PCR method or PCR method is used.
  • the PCR method there are a step of dissociating double-stranded DNA into single-stranded DNA at high temperature (thermal denaturation step), a step of lowering the temperature and binding the primer to the single-stranded DNA (annealing step), and Using the stranded DNA as a template, a polymerase repeats the step of newly synthesizing double-stranded DNA (elongation step).
  • one cycle is 94° C. for 1 minute, 50 to 60° C. for 1 minute, and 72° C. for 1 to 5 minutes, which is repeated 20 to 50 times. It will be done. Further, the heat denaturation step and the annealing step may be performed at one temperature.
  • An example of such a temperature cycle is, for example, one cycle consisting of 94° C. for 1 minute and 60° C. for 1 minute, which is repeated 20 to 50 times.
  • the temperature and time of the temperature cycle in the amplification step are not particularly limited and can be arbitrarily selected depending on the performance of the polymerase and primers.
  • the fluorescence detection process is carried out by the detection unit 240 arranged above the reaction chamber 15 (see FIG. 19). Excitation light L1 of a specific wavelength is emitted from the light source 242 through the wavelength selection filter 244 into the reaction chamber. 15. The photodetector 246 detects the fluorescence L2 excited by the excitation light L1 and generated from the fluorescent probe.For example, when the nucleic acid amplification process is the PCR method, the above temperature cycle Fluorescence detection is performed every cycle to monitor the amplification status in real time.
  • the nucleic acid sequence is amplified in the amplification step, and the fluorescent probe labeled with this specific nucleic acid sequence is irradiated with excitation light L1, whereby fluorescence L2 is detected. be done.
  • the specific nucleic acid sequence does not exist in the sample liquid S, no fluorescence L2 is detected even if the excitation light L1 is irradiated. This makes it possible to determine the presence or absence of a specific nucleic acid sequence.
  • the sample liquid S before pretreatment is temporarily held in the first liquid storage section 31, and after pretreatment is performed in the reaction chamber 15, the pretreated sample liquid S is is transferred to a second liquid storage section 32 different from the first liquid storage section 31 and mixed with the reagent 70. Therefore, the sample liquid S that has not been pretreated and the sample liquid S that has been pretreated are not stored in the same chamber (here, the first liquid storage section 31). Therefore, since the untreated sample liquid S is not mixed into the sample liquid S after the pretreatment, uninactivated ProK is not mixed into the sample liquid S after the pretreatment. Therefore, good nucleic acid amplification can be achieved and test accuracy can be improved.
  • the chamber for performing pretreatment (reaction chamber 15 in this example) and the chamber for performing nucleic acid amplification treatment (reaction chamber 15 in this example) can be separated from other chambers by the valve 16.
  • a closed state with no communication can be easily achieved. Since the pretreatment and nucleic acid amplification treatment are performed with the reaction chamber 15 closed, the sample liquid S contained in the reaction chamber 15 is prevented from flowing out to other chambers, and the inside of the reaction chamber 15 is pressurized to some extent. can maintain the same state. Thereby, inspection accuracy can be further improved.
  • a test container 110 is used in which the second liquid storage section 32 is equipped with a reagent 70 for nucleic acid testing.
  • the reagent 70 is a reagent containing an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • the sample liquid S is introduced from the input port 12 of the test container 120 (step ST31).
  • the sample liquid S is stored in the liquid reservoir 13.
  • the valve 116 is in the first state.
  • the test container 110 is loaded into the test device 200 with the sample liquid S loaded therein and the inlet 12 closed by the lid 12A.
  • the following processing is performed within the inspection device 200.
  • the plunger 62 is moved by the pressure adjustment mechanism drive section 230 while the valve 116 is maintained in the first state, that is, with the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 communicating with each other. Then, the pressure inside the first liquid storage section 31 is reduced. As a result, the sample liquid S in the liquid reservoir 13 is transferred to the first liquid storage section 31 (step ST32).
  • valve 116 is switched to the second state by the valve rotation mechanism 220 (see FIG. 19) (step ST33). That is, in this example, the pretreatment chamber 66 and the first liquid storage section 31 communicate with each other, and the liquid reservoir section 13 and the first liquid storage section 31 do not communicate with each other.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 pushes the plunger 62 to pressurize the inside of the first liquid storage section 31.
  • the sample liquid S is transferred from the first liquid storage section 31 to the pretreatment chamber 66 (step ST34).
  • the valve rotation mechanism 220 switches the valve 116 to the third state (step ST35). That is, the first liquid storage section 31 and the second liquid storage section 32 are in a state where they do not communicate with any of the liquid reservoir section 13, the pretreatment chamber 66, and the reaction chamber 15. Thereby, the pretreatment chamber 66 is in a closed state without communicating with any other chamber.
  • a pretreatment is performed on the sample liquid S in the pretreatment chamber 66 (step ST36).
  • the heating unit 210 heats to, for example, 90° C. or higher.
  • ProK in the sample liquid S is deactivated.
  • valve rotation mechanism 220 switches the valve 116 to the fifth state (step ST37). That is, the pretreatment chamber 66 and the second liquid storage section 32 are placed in communication with each other.
  • the pressure adjustment mechanism drive section 230 pulls the plunger 62 to reduce the pressure inside the second liquid storage section 32 .
  • the sample liquid S in the pretreatment chamber 66 is transferred to the second liquid storage section 32 (step ST38).
  • a reagent 70 is provided in the second liquid storage section 32, and the sample liquid S transferred to the second liquid storage section 32 and the reagent 70 are mixed (step ST39). Note that with the sample liquid S transferred to the second liquid storage section 32, the plunger 62 may be pushed and pulled several times to promote mixing of the sample liquid S and the reagent 70.
  • valve rotation mechanism 220 switches the valve 116 to the fourth state (step ST40). That is, the reaction chamber 15 and the second liquid storage section 32 are brought into communication.
  • the plunger 62 With the second liquid storage section 32 communicating with the reaction chamber 15, the plunger 62 is pushed in by the pressure adjustment mechanism drive section 230 to pressurize the inside of the second liquid storage section 32. As a result, the mixed liquid 70S in which the reagent 70 and the sample liquid S are mixed in the second liquid storage section 32 is transferred to the reaction chamber 15 (step ST41).
  • valve rotation mechanism 220 switches the valve 16 to the third state (step ST42). There is no communication with any of them. Thereby, the reaction chamber 15 is in a closed state without communicating with any other chamber.
  • step ST43 a nucleic acid amplification process and a fluorescence detection process are performed on the mixed liquid 70S in the reaction chamber 15 (step ST43).
  • the presence or absence of nucleic acids is determined by a fluorescence method using a fluorescent probe.
  • Other detection methods such as , light scattering, sequence methods and electrochemical methods may also be used. These can be realized by appropriately changing the detection section, and the test container may be equipped with a reagent containing a probe corresponding to each detection method instead of the fluorescent probe.
  • the nucleic acid test was mentioned as a test using the test containers 10 and 110, but the test container 10 is applicable not only to nucleic acid tests but also to other genetic tests, microbial tests, etc.
  • a test container that is removably loaded into a test device while containing a sample liquid to be tested, an input port into which the sample liquid is input; a liquid reservoir for storing the sample liquid input from the input port; a pretreatment chamber that accommodates the sample liquid sent from the liquid reservoir; A first liquid storage section that temporarily stores the sample liquid sent from the liquid reservoir section before sending it to the pretreatment chamber; and a first liquid storage section that temporarily stores the sample liquid sent from the pretreatment chamber.
  • valve having a second liquid storage section therein; a reaction chamber that accommodates the sample liquid sent from the second liquid storage section; a first connection port that communicates with the first liquid storage section and connects a first pressure adjustment mechanism that adjusts the pressure within the first liquid storage section in order to transfer the sample liquid; a second connection port that communicates with the second liquid storage section and connects a second pressure adjustment mechanism that adjusts the pressure within the second liquid storage section in order to transfer the sample liquid;
  • the valve has a first state in which the liquid reservoir section and the first liquid storage section are in communication with each other, and a first state in which the pretreatment chamber or the reaction chamber is in communication with the first liquid storage section, and a first state in which the liquid reservoir section and the first liquid storage section are communicated with each other.
  • test container that is a valve capable of switching between three states and a fourth state that communicates the reaction chamber and the second liquid storage section.
  • the reaction chamber also serves as the pretreatment chamber,
  • the reaction chamber and the pretreatment chamber are provided separately,
  • the second state is a state in which the pretreatment chamber and the first liquid storage section are in communication with each other, and the liquid reservoir and the first liquid storage section are not in communication with each other,
  • the first liquid storage part and the second liquid storage part are provided with a common intake and exhaust passage that communicates the first liquid storage part and the second liquid storage part with the first connection port. inspection container.
  • test container (Appendix 7) When the valve is on the upstream side of the reaction chamber and the opposite side of the valve is on the downstream side, pressurized gas flowing from the reaction chamber is temporarily stored on the downstream side of the reaction chamber.
  • the test container according to any one of Supplementary Notes 1 to 6, comprising an air buffer.
  • Appendix 9 The test container according to appendix 8, wherein the reagent includes an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • appendix 10 According to appendix 9, which cites appendix 2, wherein the first pressure regulation mechanism is connected to the first connection port, and the second pressure regulation mechanism is connected to the second connection port, either directly or indirectly through piping.
  • a nucleic acid testing method using a test container Injecting the sample liquid from the input port of the test container to accommodate the sample liquid in the liquid reservoir, The sample is transferred from the liquid reservoir to the first liquid storage section by keeping the valve in the first state or switching it to the first state and reducing the pressure inside the first liquid storage section using the first pressure adjustment mechanism.
  • appendix 11 According to appendix 9, which cites appendix 3, wherein the first pressure regulation mechanism is connected to the first connection port, and the second pressure regulation mechanism is connected to the second connection port, either directly or indirectly through piping.
  • a nucleic acid testing method using a test container Injecting the sample liquid from the input port of the test container to accommodate the sample liquid in the liquid reservoir, The sample is transferred from the liquid reservoir to the first liquid storage section by keeping the valve in the first state or switching it to the first state and reducing the pressure inside the first liquid storage section using the first pressure adjustment mechanism.

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Abstract

検査容器及び検査容器を用いた核酸検査方法において、検体容器は、検体液が投入される投入口と、液溜め部と、前処理チャンバと、第1液体収容部及び第2液体収容部が内部に設けられたバルブと、反応チャンバと、第1液体収容部内の圧力を調整する第1圧力調整機構を接続する第1接続口と、第2液体収容部内の圧力を調整する第2圧力調整機構を接続する第2接続口と、を備え、バルブは、液溜め部と第1液体収容部とを連通する第1状態と、前処理チャンバ又は反応チャンバと第1液体収容部とを連通する第2状態と、液溜め部、前処理チャンバ及び反応チャンバのいずれとも第1液体収容部及び第2液体収容部の両方が連通しない第3状態と、反応チャンバと第2液体収容部とを連通ずる第4状態とを切り替え可能なバルブである。

Description

検査容器及び核酸検査方法
 本発明は、検査容器及び核酸検査方法に関する。
 生体試料から抽出された検体に対して各種分析を行うために用いられる検査用カートリッジあるいは分析チップなどの検査容器が知られている。例えば、検査容器は、液体を収容する複数のチャンバ(液体収容部)と、チャンバ間を接続する流路とを備えている。検査容器においては、電磁力、遠心力あるいは圧力などの外力を用いて、チャンバからチャンバへ検体液が送液される。検査容器としては、複数のチャンバ間の接続状態を切り替える切替バルブを備え、所望のチャンバから所望の他のチャンバへ液体を送液可能とする構成も知られている。
 切替バルブとしては、特開2020-020807号公報に記載のように、底面に流路と接続する接続ポートを備えたバルブであって、回転させることによって接続ポートに接続する流路を切り替える回転バルブが知られている。
 特開2010-78493号公報には、複数のチャンバとその間に配置された回転バルブと、回転バルブ内に配置されたシリンダと、シリンダ内に上下方向に摺動可能の配置されたプランジャを備えたシリンジを備えた反応容器プレート(検査容器に相当する)が開示されている。特開2010-78493号公報の検査容器は、回転バルブによりシリンダとチャンバが接続された状態でシリンジにより液体あるいは気体の吸引と吐出を行うことで、チャンバからシリンダ内あるいはシリンダ内からチャンバへ液体を送液可能に構成されている。
 特開2010-78493号公報では、回転バルブ内に備えられたシリンダに検体液を吸引して一時的に収容し、シリンダ内の検体液を、希釈液を保持した試薬容器に送液して希釈液と検体液の混合し、その混合液を再度シリンダ内に吸引して収容し、その後、反応容器に混合液を送液する。
 このように、シリンダが検体液を収容し、排出した後に、混合液を収容すると、シリンダ内に残留している先に収容した検体液が混合液に混入するコンタミネーションが生じ、混合液の希釈濃度が変化してしまうなどの問題が生じる恐れがある。
 このような回転バルブに備えられた液体収容部を介して液体を移送する検査容器を用いて、前処理後にさらに反応検出処理を実施する検査を実施する場合、前処理前の検体液と、前処理後の検体液との間でコンタミネーションが生じると、検査精度が低下し好ましくない。精度の高い検査を行うためには、液体収容部におけるコンタミネーションを抑制する必要がある。
 本開示は、バルブに設けられた液体収容部を介してチャンバへ検体を移送する検査容器において、バルブに設けられた液体収容部内におけるコンタミネーションを抑制できる検
査容器及び核酸検査方法を提供することを目的とする。
 本開示の検査容器は、検査対象の検体液を収容した状態で検査装置に着脱自在に装填される検査容器であって、
 検体液が投入される投入口と、
 投入口から投入された検体液を貯留する液溜め部と、
 液溜め部から送液される検体液を収容する前処理チャンバと、
 液溜め部から送液される検体液を前処理チャンバに送液する前に一時的に収容する第1液体収容部及び前処理チャンバから送液される検体液を一時的に収容する第2液体収容部が内部に設けられたバルブと、
 第2液体収容部から送液される検体液を収容する反応チャンバと、
 第1液体収容部に連通し、検体液を移送するために第1液体収容部内の圧力を調整する第1圧力調整機構を接続する第1接続口と、
 第2液体収容部に連通し、検体液を移送するために第2液体収容部内の圧力を調整する第2圧力調整機構を接続する第2接続口と、を備え、
 バルブは、液溜め部と第1液体収容部とを連通する第1状態と、前処理チャンバ又は反応チャンバと第1液体収容部とを連通し、かつ液溜め部と第1液体収容部とは連通しない第2状態と、液溜め部、前処理チャンバ及び反応チャンバのいずれとも第1液体収容部及び第2液体収容部の両方が連通しない第3状態と、反応チャンバと第2液体収容部とを連通する第4状態とを切り替え可能なバルブである。
 反応チャンバが前処理チャンバを兼ねてもよく、その場合、第2状態が、反応チャンバと第1液体収容部とを連通し、かつ液溜め部と第1液体収容部とは連通しない状態である。
 反応チャンバと、前処理チャンバとが個別に設けられていてもよく、その場合、第2状態が、前処理チャンバと第1液体収容部とを連通し、かつ液溜め部と第1液体収容部とは連通しない状態であり、バルブは、第1状態から第4状態に加え、前処理チャンバと第2液体収容部とを連通する第5状態にも切り替え可能である。
 液溜め部の容積をV1とし、第1液体収容部の容積をV2とし、第2液体収容部の容積をV3とし、反応チャンバの容積をV4とした場合に、
V1>V2>V3>V4
を満たすことが好ましい。
 第1接続口が第2接続口を兼ね、第1圧力調整機構が第2圧力調整機構を兼ねてもよい。
 第1液体収容部及び第2液体収容部と第1接続口とを連通する第1液体収容部及び第2液体収容部に共通の吸排気路を備えることが好ましい。
 反応チャンバに対してバルブを上流側、バルブの反対側を下流側とした場合において、反応チャンバの下流側に、反応チャンバから流入する加圧された気体を一時的に貯留するエアーバッファを備えていることが好ましい。
 第2液体収容部に、検体液と混合させる試薬が収容されていることが好ましい。
 試薬が、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含んでいてもよい。
 本開示の一態様の核酸検査方法は、第1接続口に第1圧力調整機構が、第2接続口に第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された検査容器であって、反応チャンバが前処理チャンバを兼ねた検査容器を用いた核酸検査方法であって、
 検査容器の投入口から、検体液を投入して、液溜め部に検体液を収容させ、
 バルブを第1状態のまま、もしくは第1状態に切り替え、第1圧力調整機構による第1液体収容部内を減圧する操作により液溜め部から第1液体収容部に検体液を送液させ、
 バルブを第2状態に切り替え、
 第1圧力調整機構による第1液体収容部内を加圧する操作により第1液体収容部から反応チャンバに検体液を送液させ、
 バルブを第3状態に切り替え、
 反応チャンバにおいて、検体液を加熱処理し、
 バルブを第4状態に切り替え、
 第2圧力調整機構による第2液体収容部内を減圧する操作により、反応チャンバから第2液体収容部に検体液を送液させて、第2液体収容部において、検体液と試薬とを混合し、
 第2圧力調整機構による第2液体収容部内を加圧する操作により、第2液体収容部から反応チャンバに、検体液及び試薬の混合液を送液し、
 バルブを第3状態に切り替え、
 反応チャンバにおいて、混合液を温調することにより、混合液中の特定の核酸配列を増幅し、
 励起光を混合液に照射し、蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
 特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する。
 本開示の他の一態様の核酸検査方法は、第1接続口に第1圧力調整機構が、第2接続口に第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された検査容器であって、反応チャンバと前処理チャンバとが個別に設けられた検査容器を用いた核酸検査方法であって、
 検査容器の投入口から、検体液を投入して、液溜め部に検体液を収容させ、
 バルブを第1状態のまま、もしくは第1状態に切り替え、第1圧力調整機構による第1液体収容部内を減圧する操作により液溜め部から第1液体収容部に検体液を送液させ、
 バルブを第2状態に切り替え、
 第1圧力調整機構による第1液体収容部内を加圧する操作により液体収容部から前処理チャンバに検体液を送液させ、
 バルブを第3状態に切り替え、
 前処理チャンバにおいて、検体液を加熱処理し、
 バルブを第5状態に切り替え、
 第2圧力調整機構による第2液体収容部内を減圧する操作により、前処理チャンバから第2液体収容部に検体液を送液させて、第2液体収容部において、検体液と試薬とを混合し、
 バルブを第4状態に切り替え、
 第2圧力調整機構による第2液体収容部内を加圧する操作により、第2液体収容部から反応チャンバに、検体液及び試薬の混合液を送液し、
 バルブを第3状態に切り替え、
 反応チャンバにおいて、混合液を温調することにより、混合液中の特定の核酸配列を増幅し、
 励起光を混合液に照射し、蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
 特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する。
 本開示の検査容器及び核酸検査方法によれば、バルブに設けられた液体収容部内におけるコンタミネーションを抑制できる。
第1実施形態の検査容器の概略構成示す斜視図である。 図1に示す検査容器のA-B線端面図である。 図1に示す検査容器の一部分解斜視図である。 本体部材の斜視図である。 回転部材の分解斜視図である。 図6Aは回転部材本体の上面側から見た斜視図であり、図6Bは回転部材本体の下面側から見た斜視図である。 第1実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第1状態である流路構造を模式的に示す図である。 第1実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第2状態である流路構造を模式的に示す図である。 第1実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第3状態である流路構造を模式的に示す図である。 第1実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第4状態である流路構造を模式的に示す図である。 変形例の検査容器の流路構造を示す平面模式図である。 図12Aは変形例の検査容器の流路構造を示す平面模式図であり、図12Bはエアーバッファの変形例を示す平面模式図である。 変形例の検査容器の流路構造を示す平面模式図である。 第2実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第1状態である流路構造を模式的に示す図である。 第2実施形態の検査容器の本体部材の平面図である。 第2実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第2状態である流路構造を模式的に示す図である。 第2実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第3状態である流路構造を模式的に示す図である。 第2実施形態の検査容器の流路構造であって、バルブが第4状態である流路構造を模式的に示す図である。 検査装置の概略構成を示す図である。 第1実施形態の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その1)。 第1実施形態の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その2)。 第1実施形態の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その3)。 変形例の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その1)。 変形例の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その2)。 変形例の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その3)。容器 変形例の検査容器を用いた核酸検査の工程を示す図である(その4)。
 以下、図面を参照して本開示の実施形態を詳細に説明する。なお、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜変更している。各図において、同一の構成要素には同一の符号を付している。
「第1実施形態の検査容器」
 図1は、一実施形態の検査容器10を示す斜視図であり、図2は、図1に示す検査容器10のA-B線で切断した切断部の端面を示す模式図である。図3は、検査容器10の一部分解斜視図であり、検査容器10内部の流路構造11を破線で示している。図4は、検査容器10の
本体部材10Aの斜視図である。
 検査容器10は、内部に複数のチャンバ及びチャンバ間を接続する流路を含む流路構造11(図3参照)を有するマイクロ流路デバイスである。検査容器10は、検査太陽の検体液を収容した状態で検査装置200(図19参照)に着脱自在に装填される検査容器であって、検査に供される検査容器である。
 検査容器10は、流路及びチャンバを含む流路構造11の一部を構成する凹部及び孔部等が形成された本体部材10Aと、流路構造11の底面を構成する底部材10Bとから構成されている。
 本体部材10Aは、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、耐熱性及び透明性の観点から、ポリカーボネート、ポリプロピレン、シクロオレフィンあるいはシリコーン樹脂が好ましい。
 底部材10Bは、例えば、薄板あるいはフィルムにより形成されている。底部材10Bとしては、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、本体部材10Aとの密着性の観点から、本体部材10Aと同じ材質が好ましい。なお、詳細は後述するが、反応チャンバ15を加熱する際において、加熱手段との密着を高め加熱を効率的に実施することができる観点から、底部材10Bはフィルムにより構成されていることが好ましい。
 図2及び図3に示すように、検査容器10は、投入口12と、液溜め部13と、前処理チャンバを兼ねた反応チャンバ15と、液溜め部13と反応チャンバ15との間に配置されたバルブ16と、圧力調整機構を接続する接続口17と、それらを接続する第1流路18a~第3流路18cとを備える。なお、検査容器10が備えた複数のチャンバとは、液溜め部13、反応チャンバ15、後述する第1液体収容部31及び第2液体収容部32である。以下において、液溜め部13、反応チャンバ15、第1液体収容部31及び第2液体収容部32を区別する必要がない場合には、総括的にチャンバと称する場合がある。
 投入口12は、検体液Sを投入するための開口である。なお、図2及び図3に示すように、検査容器10は、投入口12を覆い、投入口12の開口に着脱可能な蓋部12Aを備えていてもよい。本例においては、蓋部12Aは投入口12に嵌め込み可能に形成されている。着脱方法に関して特に制限はなく、例えば、スナップ式のキャップ構造や粘着剤を用いて蓋部12Aを投入口12に対して着脱してもよい。蓋部12Aは、検体液投入時には投入口12を開放するが、検体液投入時以外は、投入口12を閉じて外部からの不純物の混入を排除すると共に内部からの検体液Sの蒸発を防止する。検体液Sは、例えば、被検者の鼻腔、咽頭、口腔及び患部などから採取した検体から核酸を抽出した液体である。
 なお、以下において、投入口12が設けられている面を検査容器10の上面、底部材10B側を検査容器10の下面と称する。ここで、本体部材10Aの上面は検査容器10の上面と同一であり、本体部材10Aの下面は底部材10Bの上面と接する面であり、底部材10Bの下面は検査容器10の下面と同一である。
 液溜め部13は、投入口12を開口とする液体収容部であり、投入口12から滴下された検体液Sを収容する。液溜め部13の形状に特に制限はなく、柱状、錐状、錐台状など任意に選択することができる。
 本検査容器10においては、本体部材10Aを厚み方向に貫く第1の筒状部22の上面側の開口によって、投入口12が構成されており、第1の筒状部22の本体部材10Aの内部側部分と底部材10Bとによって、液溜め部13が形成されている。液溜め部13は、投入口12から投入された検体液Sをバルブ16の手前で貯留する空間である。
 反応チャンバ15は、液体を収容可能なチャンバであり、バルブ16の後述する第2液体収容部32から送液される検体液Sを収容する。また、本例において、反応チャンバ15は、液溜め部13からバルブ16を介して送液される検体液Sが収容される前処理チャンバを兼ねる。反応チャンバ15は本体部材10Aの下面に設けられた凹部25と、底部材10Bとによって形成されている。
 反応チャンバ15は、一例として、検査における前処理、検査のための反応及び検出処理が実施されるチャンバであり、後述する検査装置200(図19参照)において、加熱部210による加熱処理及び検出部240による検出処理が実施される。そのため、反応チャンバ15は、検査容器10内において、検査装置内の加熱部210により加熱される領域(加熱領域68(図7参照))であって、かつ、検出部240により光学的測定が可能な検出領域に配置されている。
 本体部材10Aにおいて、下面に設けられた反応チャンバ15の凹部25に対向する上面には、略矩形の凹部26(以下において矩形状凹部26という。)が設けられている。検査容器10が検査装置200に装填された場合、矩形状凹部26は検査装置200の検出部240に対向する位置に配置される。矩形状凹部26の底面は、検出部240から反応チャンバ15内の検体液Sに光を入射させる際の光入射面及び検体液Sから生じる光が出射する光出射面として機能する。矩形状凹部26は検査容器の熱容量を低下するために設けることが好ましい。矩形状凹部26があることで検査装置内の加熱部210による熱が適切に反応チャンバ15に印加され、反応チャンバ15内の液体温度が適切に調節される。
 接続口17には、圧力調整機構60が接続される。図3に示すように接続口17には、直接、あるいは配管等を介して圧力調整機構60が接続される。本例において圧力調整機構60はシリンジである。本例において、接続口17は、本体部材10Aの上面から下面に貫通する第2の筒状部27の上面側の開口である。一例として、接続口17にはシリンダ61の先端が接続される接続ポート65が嵌め込まれており、接続ポート65にシリンダ61の先端が接続されるように構成されている。シリンダ61内に挿入されたプランジャ62が押し引きされることにより、接続口17に連通する検査容器10内が加圧あるいは減圧される。本例においては、接続口17によって一端が構成されている第2の筒状部27と、底部材10Bによって気体が収容される気体収容部29が構成されている。気体収容部29は流路18cと連通している。なお、接続口17と圧力調整機構60とを接続する配管には、図示しない圧力計が設けられており、内部の圧力を制御することが可能に構成されている。
 圧力調整機構60はシリンジに限らず各種ポンプを用いることができる。本例においては、接続口17は外部に備えられた圧力調整機構60と接続されるように構成されている。一方、圧力調整機構60の少なくとも一部が検査容器10に備えられていてもよい。例えば、検査容器10にシリンジのシリンダ61が組み込まれていてもよい。このような場合、検査容器10に組み込まれたシリンダ61の先端が接続される部分が接続口となる。検査容器10にシリンダ61が組み込まれている場合、すなわち、本体部材10Aの一部にシリンダ形状が形成されている場合、シリンダ61内にはプランジャ先端に設けられているようなゴム栓が配置され、検査装置側にはゴム栓をシリンダ61内で移動させる機構を備えていればよい。
 図2に示すように、バルブ16は、内部に第1液体収容部31及び第2液体収容部32を備える。第1液体収容部31は、液溜め部13から送液される検体液Sを、前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15に送液する前に一時的に収容する。第2液体収容部32は、反応チャンバ15から送液される検体液Sを一時的に収容する。
 バルブ16は、液溜め部13及び反応チャンバ15と、第1液体収容部31及び第2液体収容部32との接続状態を、次の第1状態と、第2状態と、第3状態と、第4状態とのいずれかの状態に切り替えるバルブである。第1状態は、液溜め部13と第1液体収容部31とを連通する状態である。なお、本例の第1状態においては、反応チャンバ15と第1液体収容部31とは連通しない。第2状態は、前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15と第1液体収容部31とを連通し、かつ液溜め部13と第1液体収容部31とは連通しない状態である。第3状態は、液溜め部13及び反応チャンバ15のいずれとも第1液体収容部31及び第2液体収容部32の両方が連通しない状態である。第4状態は、反応チャンバ15と第2液体収容部32とを連通し、かつ、反応チャンバ15と第1液体収容部31とは連通しない状態である。
 図3に示すように、本検査容器10におけるバルブ16は、本体部材10Aの上面に設けられた筒状の凹部24(以下において筒状凹部24という。)中に配置される回転部材40を有する。第1液体収容部31及び第2液体収容部32は回転部材40内部に設けられている。図5は回転部材40の分解斜視図である。図5に示すように、回転部材40は回転部材本体41と蓋体42とから構成されている。図6Aは回転部材本体41の上面側を示す斜視図であり、図6Bは、回転部材本体41の下面側を示す斜視図である。
 回転部材本体41は、本体部材10Aの筒状凹部24の直径より若干小さい外径の円筒部43と、円筒部43の上端面に円筒部43を囲むように延設された鍔部44とを有する。鍔部44は、筒状凹部24の直径より大きい外径を有する。回転部材本体41は、筒状凹部24内において回転可能に設置される。回転部材本体41の鍔部44には、回転部材40を回転させる際に使用される孔44aが4つ備えられている。4つの孔44aは円筒部43の中心軸に4回転対称に配置されている。後述する検査装置(図21参照)に備えられているバルブ回転機構220の爪222が孔44aに挿し込まれた状態で駆動され回転されることにより、回転部材40が回転される。
 円筒部43には、その一端面に半月状に開口する2つの凹部45、46(以下において、半月状凹部45、46という。)が形成されている。2つの半月状凹部45、46は、円筒部43の中心を含んで径方向に延びる分離壁47を挟み対称に配置されている。
 分離壁47に位置する、円筒部43の中心には円筒部43の上面から下面に貫通する貫通孔47aが設けられている。また、分離壁47の上面には貫通孔47aから径方向の一方に沿って延びる溝47bが設けられており、溝47bの一端は、溝47bの延びる方向に直交して設けられている溝47cに接続されている。溝47cは、2つの半月状凹部45、46にそれぞれ連通する溝である。
 蓋体42は、半月状凹部45、46の開口を覆うように開口に嵌め込み可能に形成されている。第1液体収容部31は半月状凹部45の内壁面と蓋体42により形成される。同様に、第2液体収容部32は半月状凹部46の内壁面と蓋体42により形成される。蓋体42は、第1液体収容部31と溝47cとの間、第2液体収容部32と溝47cとの間の気体の行き来を阻害しない形状を有し、溝47b及び溝47cと蓋体42とによって流路が形成されている。
 回転部材本体41の半月状凹部45の底面には、第1液体収容部31と連通する1つの孔45aが設けられている。同様に、回転部材本体41の半月状凹部46の底面には、第2液体収容部32と連通する1つの孔46aが設けられている。
 図4に示すように、本体部材10Aの筒状凹部24の底面には第1流路18aと連通する孔24aと、第2流路18bと連通する孔24bと、第3流路18cと連通する孔24cとを有する。孔24cは、筒状凹部24の底面の中心に設けられている。第1流路18aは一端が液溜め部13と接続されている(図3参照)。したがって、孔24aは第1流路18aを介して液溜め部13と連通している。第2流路18bは一端が反応チャンバ15と接続されている。したがって、孔24bは第2流路18bを介して反応チャンバ15と連通している。第3流路18cは一端が気体収容部29を介して接続口17に接続されている。したがって、孔24cは第3流路18cを介して接続口17と連通している。
 筒状凹部24に回転部材40を配置した状態において、筒状凹部24の底面の中心に設けられている孔24cは回転部材本体41の円筒部43の中心に設けられている貫通孔47aと一致する。本構成により、回転部材40の回転状態にかかわらず、貫通孔47aと孔24cは一致した状態が保たれる。したがって、第1液体収容部31及び第2液体収容部32は、溝47c及び溝47bによって形成された流路、貫通孔47a、第3流路18c及び気体収容部29を介して、常時、接続口17と連通した状態にある。溝47c及び溝47bによって形成された流路、貫通孔47a、第3流路18c及び気体収容部29は、第1液体収容部31と第2液体収容部32をそれぞれ接続口17に連通させる、第1液体収容部31及び第2液体収容部32に共通の吸排気路35である。
 回転部材40を筒状凹部24内で回転させることで、回転部材40の第1液体収容部31の底面の孔45aと、筒状凹部24の底面の孔24aとが一致した状態、孔45aと孔24bとが一致した状態、第2液体収容部32の底面の孔46aと孔24bとが一致した状態、孔45aが孔24a及び24bのいずれとも一致せず、かつ、孔46aが孔24a及び24bのいずれも一致しない状態とすることができる。
 孔24a~24cにはそれぞれOリング36が備えられている(図2参照)。Oリング36は、孔45aと孔24a又は孔24bが一致した状態、孔46aが孔24bと一致した状態、貫通孔47aが孔24cと一致した状態において、孔同士の接続部からの漏れ防止の機能を奏する。漏れ防止のためのシール手段としては、Oリング36の他、パッキンやガスケットなど公知のシール部材を特に制限なく利用できる。シール手段の材料としては、例えばニトリルゴム、ウレタンゴム、シリコンゴム及びフッ素ゴムなどのゴム材料、あるいは、オレフィン及び、ウレタンなどの公知のエラストマーを用いることができる。また、シール手段が、回転部材40もしくは本体部材10Aの筒状凹部24に一体的に成形されていてもよい。
 回転部材40は、本体部材10Aの筒状凹部24に配置され、抑え板50によって鍔部44が本体部材10Aに付勢された状態で使用される。抑え板50は、中心に鍔部44の外径よりも小さい直径の円形の中心孔50aを有する(図3参照)。抑え板50は鍔部44の縁部と重なるように、かつ、四隅に設けられた孔50bが本体部材10Aの上面に設けられているネジ穴20と一致させて配置され、ネジ51で本体部材10Aにネジ止めされている。なお、回転部材40及び抑え板50が本体部材10Aにセットされた状態において、抑え板50の中心孔50aからは、鍔部44に設けられている孔44aが露出されている。これにより、バルブを回転する際にバルブ回転機構220の爪222が孔44aにアクセス可能とされている。
 本例では、上記の通り、抑え板50をネジで本体部材10Aに固定している。しかし、抑え板50の固定方法はこれに限らず、本体部材10Aにあらかじめ固定されている固定爪によって抑え板50を固定する方法、あるいは、抑え板50を本体部材10Aに対して溶着させる方法などであってもよい。
 第1流路18a~第3流路18cはいずれも、本体部材10Aの下面に設けられた凹部28a~28cと、底部材10Bとによって形成されている。既に述べた通り、第1流路18aは、バルブ16の筒状凹部24の底面の孔24aと連通し、液溜め部13とバルブ16の第1液体収容部31とを接続する流路である。第2流路18bは、バルブ16の筒状凹部24の底面の孔24bと連通し、反応チャンバ15とバルブ16の第1液体収容部31もしくは第2液体収容部32とを接続する流路である。第3流路18cは、バルブ16の筒状凹部24の底面の中心に設けられている孔24cと連通し、第1液体収容部31及び第2液体収容部32と気体収容部29とを接続する流路である。第1~第3流路18a~18cの断面サイズは一例として、0.5mm~1mm幅、深さ0.5mm程度である。
 図7~図10は、検査容器10における流路構造11の平面模式図である。図7~図10は、バルブ16により切り替えられる第1状態~第4状態を説明するための図である。
 図7では、回転部材40の第1液体収容部31の底面の孔45aが第1流路18aと接続した状態である。このとき、孔45aは、筒状凹部24の底面の孔24aと一致している(図2参照)。これは、液溜め部13と、第1液体収容部31とを連通した第1状態である。そして、本例において、第1液体収容部31と反応チャンバ15とは連通していない。また、回転部材40の第2液体収容部32の底面の孔46aは、第1流路18aにも第2流路18bにも接続していない。すなわち、反応チャンバ15は、第1液体収容部31とも第2液体収容部32とも連通していない。
 図8では、回転部材40の第1液体収容部31の底面の孔45aが第2流路18bと接続した状態である。このとき、孔45aは筒状凹部24の底面の孔24bと一致している。これは、前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15と第1液体収容部31とを連通し、かつ液溜め部13と第1液体収容部31とは連通しない第2状態である。本例において、回転部材40の底面の孔46aは、第1流路18aにも第2流路18bにも接続していない。すなわち、第2液体収容部32は、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通していない。
 図9では、回転部材40の第1液体収容部31の底面の孔45aは、第1流路18aとも第2流路18bとも接続していない状態である。すなわち、第1液体収容部31が、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通しておらず、かつ、第2液体収容部32も、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通していない第3状態である。第3状態は、液溜め部13及び反応チャンバ15の両方が、第1液体収容部31及び第2液体収容部32のいずれとも連通しない状態であればよく、回転部材40の回転位置は、図9の態様に限られない。
 図10では、回転部材40の第2液体収容部32の底面の孔46aが第2流路18bと接続した状態である。このとき、孔46aは筒状凹部24の底面の孔24bと一致している。これは、反応チャンバ15と第2液体収容部32とを連通し、かつ反応チャンバ15と第1液体収容部31とは連通しない第4状態である。
 このように、バルブ16は、回転部材40を本体部材10Aの筒状凹部24内で回転させることにより、第1状態、第2状態、第3状態及び第4状態を切り替えることができる回転バルブである。なお、バルブ16としては、上記第1状態~第4状態を実現できればよく、上記構造の回転バルブに限定されるものではない。
 検査容器10において、検体液Sの送液は、バルブ16により検体液Sが収容されたチャンバと検体液Sを送液するチャンバとを接続した状態とした上で、圧力調整機構60により第1液体収容部31及び/または第2液体収容部32内の圧力を加減圧することで実施される。
 検査容器10を用いた検査の一例において、投入口12から投入される検体液Sは、液溜め部13、第1液体収容部31、反応チャンバ(前処理チャンバを備えた形態では前処理チャンバ)15、第2液体収容部32、及び、反応チャンバ15の順に送液される。
 液溜め部13から第1液体収容部31への送液は、バルブ16を第1状態(図7参照)とし、圧力調整機構60により第1液体収容部31の内圧を減圧することにより実現される。シリンダ61内のプランジャ62を外側に引き、第1液体収容部31内の空気をシリンダ61内に引き込むことで第1液体収容部31内を減圧する。これにより、液溜め部13内の検体液Sは第1流路18aを通って、第1液体収容部31内に引き込まれる。なお、検体液Sは第1液体収容部31の底面に設けられている孔45aから第1液体収容部31に浸入する。第1液体収容部31内から空気を排出するための流路は、分離壁47に設けられている溝47cと、第1液体収容部31の天面を構成する蓋体42とによって構成されているので、検体液Sは溝47cに検体液Sが入り込むことはなく、第1液体収容部31に溜められる。なお、液溜め部13から第1液体収容部31への送液をスムーズに実現するため、液溜め部13の上部は図示しない吸気口を備え、液溜め部13内に空気を吸引可能となっている。なお、吸気口には塵埃を排除するためのフィルタが備えられている。
 第1液体収容部31から反応チャンバ15への送液は、バルブ16を第2状態(図8参照)とし、圧力調整機構60により第1液体収容部31の内圧を加圧することにより実現される。プランジャ62をシリンダ61内で押込み、第1液体収容部31内にシリンダ61内の空気を押し込むことで、第1液体収容部31内を加圧する。これにより、第1液体収容部31内の検体液Sは、第2流路18bを通って、反応チャンバ15に押し出され、反応チャンバ15に送液される。
 反応チャンバ15から第2液体収容部32への送液は、バルブ16を第4状態(図10参照)とし、圧力調整機構60により第2液体収容部32の内圧を減圧することにより実現される。シリンダ61内のプランジャ62を外側に引き、第2液体収容部32内の空気をシリンダ61内引き込むことで、第2液体収容部32内を減圧する。これにより、反応チャンバ15内の検体液Sは第2流路18bを通って、第2液体収容部32内に引き込まれる。検体液Sは第2液体収容部32の底面に設けられている孔46aから第2液体収容部32に浸入する。第2液体収容部32内から空気を排出するための流路は、分離壁47に設けられている溝47cと、第2液体収容部32の天面を構成する蓋体42とによって構成されているので、検体液Sは溝47cに検体液Sが入り込むことはなく、第2液体収容部32に溜められる。
 第2液体収容部32から反応チャンバ15への送液は、バルブ16を第4状態(図10参照)とし、圧力調整機構60により第2液体収容部32の内圧を加圧することにより実現される。プランジャ62をシリンダ61内で押込み、第2液体収容部32内にシリンダ61内の空気を押し込むことで、第2液体収容部32内を加圧する。これにより、第2液体収容部32内の検体液Sは、第2流路18bを通って、反応チャンバ15に押し出され、反応チャンバ15に送液される。
 なお、反応チャンバ15への加熱処理は、反応チャンバ15内が検体液Sで満たされた状態で、バルブ16を第3状態(図9参照)とし、反応チャンバ15を閉じた状態で実施される。
 このように、バルブ16は、液溜め部13から送液される検体液Sを、前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15に送液する前に一時的に収容する第1液体収容部31及び前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15から送液される検体液Sを一時的に収容する第2液体収容部を内部に備えている。これにより、前処理を実施する前の検体液Sの一時的な収容と、前処理を実施した後の検体液Sの一時的な収容とを、異なる液体収容部で実施することができる。そのため、バルブ16に設けられた液体収容部31あるいは32内におけるコンタミネーションを抑制できる。前処理を実施する前の未処理の検体液Sと、前処理を実施した後の処理済みの検体液Sとの混合が生じないため、検査エラーを抑制することができる。
 また、バルブ16を用いることで、容易に反応チャンバ15を密閉することができる。この際、反応チャンバ15内は大気圧よりも加圧された状態で密閉されることになる。反応チャンバ15における前処理あるいは反応処理等の際に、反応チャンバ15を加熱する場合、反応チャンバ15を密閉した状態で行うことで、検体液Sの蒸発、及び、検体液S中における気泡の発生を抑制できる。反応チャンバ15内を加圧した状態で加熱するので、検体液Sの昇温性及び冷却性を向上させることができる。したがって、検査精度及び検査速度の向上を図ることができる。
 流路構造11において、液溜め部13の容積をV1、第1液体収容部31の容積をV2、第2液体収容部の容積をV3、反応チャンバ15の容積をV4とした場合に、V1>V2>V3>V4という関係にあることが好ましい。すなわち、検査工程において、検体液Sが後に送液されるチャンバほど容積が小さいことが好ましい。なお、反応チャンバ15は前処理チャンバを兼ねるが、最後に送液されるチャンバであるため、検査工程の検体液Sの送液において最も下流側のチャンバと見做している。
 一例として、液溜め部13の容積V1は、50μL~300μL、第1液体収容部31の容積V2は50μL、第2液体収容部32の容積V3は20μL~40μL、反応チャンバ15の容積V4は10μL~30μLなどである。
 液溜め部13の容積V1が第1液体収容部31の容積V2よりも大きければ、液溜め部13に第1液体収容部31の容積V2よりも多くの検体液Sを貯留させることができる。そして、検査工程の検体液Sの送液における送液上流から下流に向けて配置されている複数のチャンバの容積の関係がV1>V2>V3>V4であれば、検体液Sを送液した際に、下流側のチャンバを検体液Sで満たすことができる。そのため、最終的に検出に用いられる反応チャンバにおいて、検体液Sの不足が生じるのを抑制できる。
 検査容器10は、図7に示すように、検体液Sと反応させる試薬70を第2液体収容部32内に備えていてもよい。例えば、検査容器10が核酸検出に用いられる場合、試薬70は、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む試薬である。
 上記実施形態の検査容器10では、反応チャンバ15が前処理チャンバを兼ねている。しかし、図11に示す変形例の検査容器110のように、反応チャンバ15とは別に前処理チャンバ66を備えていてもよい。前処理チャンバ66を備えた場合、本体部材10Aの筒状凹部24の底面には、前処理チャンバ66と接続された第4流路18dと連通する孔24dがさらに備えられる。前処理チャンバ66を備えた場合、検体液Sは、例えば、液溜め部13から、第1液体収容部31、前処理チャンバ66、第2液体収容部32、反応チャンバ15の順に送液される。そしてバルブ16により切替えられる第1状態~第4状態のうち、第2状態においては、回転部材40の孔45aが筒状凹部24の底面に設けられている24dと一致させる。すなわち、この場合の第2状態は、前処理チャンバ66と第1液体収容部31とを連通し、かつ液溜め部13と第1液体収容部31とは連通しない状態である。なお、第1状態、第3状態及び第4状態は、先に説明した態様と同様である。また、前処理チャンバ66を備えた場合に、バルブ16は、第1状態から第4状態に加え、前処理チャンバ66と第2液体収容部32とを連通する第5状態にも切り替え可能である。第5状態では、前処理チャンバ66と第2液体収容部32とが連通するが、前処理チャンバと第1液体収容部31とは連通しない。バルブ16により第5状態に切り換えた状態で、第2液体収容部32内を減圧することにより、前処理チャンバ66内の前処理後の検体液Sを前処理チャンバ66から第2液体収容部32に送液することができる。
 このように、反応チャンバ15と前処理チャンバ66とを別個に備えてもよいが、上述の実施形態で説明した通り、反応チャンバ15が前処理チャンバ66を兼ねることで、より簡単な構成とすることができる。前処理及び反応処理がそれぞれ加熱を必要とする処理である場合、反応チャンバ15と前処理チャンバ66を別途に備えると、検査容器を装填する検査装置において、それぞれに対応した加熱部が必要になる。しかし、反応チャンバ15が前処理チャンバを兼ねる構成であれば、検査装置において加熱部は1つでよい。また、回転部材40の回転制御の観点からも、一致させる孔の数が少ない方が簡易に実施でき好ましい。
 また、図12Aに示す変形例の検査容器111のように、反応チャンバ15に対してバルブ16を上流側、バルブ16の反対側を下流側とした場合において、反応チャンバ15の下流側にエアーバッファ19を備えていてもよい。エアーバッファ19は、反応チャンバ15の下流側に配置された空間である。エアーバッファ19は、検査装置200に装填された場合に検査装置200内の加熱部210(図19参照)によって加熱される加熱領域68外に配置されていることが好ましい。エアーバッファ19は、反応チャンバ15から流入する加圧された気体を一時的に貯留する。図12Aにおいては、エアーバッファ19は、反応チャンバ15の下流側に設けられた流路19a及びエアーチャンバ19bとからなる。エアーバッファ19は、図12Bに示すように、流路19cのみで構成されていてもよい。
 エアーバッファ19を備えると、第1液体収容部31から反応チャンバ15あるいは第2液体収容部32から反応チャンバ15に検体液Sを送液する場合の送液がし易くなる。また、反応チャンバ15から気体をエアーバッファ19側に押し込むことで、反応チャンバ15内を検体液Sで満たすことが可能となる。反応チャンバ15内を検体液Sで満たした状態で検出処理を実施することができるので、検体液Sが存在しない箇所に測定光を照射する等による検査エラーを抑制することが可能になる。
 また、図13に示す変形例の検査容器112のように、複数の反応チャンバ15A~15Cを備えてもよい。本例では、さらにそれぞれの反応チャンバ15A~15Cの下流側にエアーバッファ19A~19Cを備えている。複数の反応チャンバ15A~15Cを備えた場合、1つの検体に対して同一の検査を複数の反応チャンバ15A~15Cで実施することができ、検査精度を向上させることができる。図13に示す例では3つの反応チャンバ15A~15Cを備えた例を挙げているが、反応チャンバの数に制限はない。
 上記実施形態の検査容器10に備えられている接続口17は、第1液体収容部31に連通し、検体液Sを移送するために第1液体収容部31内の圧力を調整する第1圧力調整機構(ここでは、圧力調整機構60)を接続する第1接続口であり、第2液体収容部32に連通し、検体液Sを移送するために第2液体収容部32内の圧力を調整する第2圧力調整機構(ここでは、圧力調整機構60)を接続する第2接続口である。しかし、検査容器10には、第1接続口および第2接続口を備え、それぞれ第1圧力調整機構、第2圧力調整機構が接続可能に構成されていてもよい。
 上記実施形態の検査容器10においては、第1液体収容部31及び第2液体収容部32と、接続口17とを連通する、第1液体収容部31及び第2液体収容部32に共通の吸排気路35とを備えている。そのため、1つの接続口17のみを備えた簡素な流路構成とすることができる。接続口17が1つであれば、圧力調整機構も1つでよいため、検査装置の構成も簡素化できる。
 上記実施形態においては、既述の通り、第1液体収容部31と第2液体収容部32とで共通の吸排気路35を備えた構成であるため、第1液体収容部31を加圧すると、同時に第2液体収容部32が加圧され、第1液体収容部31を減圧すると、同時に第2液体収容部32が減圧される。しかしながら、本開示の検査容器としては、この形態に限らず、第1液体収容部と第2液体収容部との加減圧を独立して行うことができるように構成されていてもよい。次にそのような例の検査容器113について説明する。
「第2実施形態の検査容器」
 図14に示す第2実施形態の検査容器113においては、バルブ116の構造が第1実施形態の検査容器10のバルブ16と異なる。図14は、検査容器113の流路構造を模式的に示している。図15は、検査容器113の本体部材113Aの平面図を示す。図14及び図15において、第1実施形態の検査容器10と同一の部材には同一の符号を付している。なお、図16~図18についても同様である。
 回転部材140において、第1液体収容部131を構成する半月状凹部145と、第2液体収容部132を構成する半月状凹部146を分離する分離壁147が回転部材円筒部の143の直径からズレた位置に設けられている。第2液体収容部132を構成する半月状凹部145が第1液体収容部131を構成する半月状凹部146よりも大きく形成されている。
 半月状凹部145の底面には、第1孔145a、第2孔145b及び第3孔145cの3つの孔が設けられている。第1孔145aと第3孔145cは、半月状凹部145の直線部分と弧の間の隅に、互いに対向して配置されている。第2孔145bは第1孔145aと第3孔145cの間にそれぞれから回転部材40の回転中心に対して90°回転した位置に配置されている。また、第1孔145aと第2孔145bとの間に仕切り板145dが設けられている。仕切り板145dは、第2孔145bを2方向から囲い、第2孔145bから第3孔145cに向けて弧状の壁部を有している。この壁により、第1孔145aから浸入する液体が、第2孔145bに到達するのを妨げる役割を担っている。
 半月状凹部146の底面には、第1孔146a及び第2孔146bの2つの孔が設けられている。第1孔146aは、半月状凹部146の直線部分と孔の間の隅であって、第1孔145aと分離壁147を隔てて隣り合う位置に配置されている。第2孔146bは、第1孔146aから、回転部材40の回転中心に対して90°回転した位置に配置されている。
 本体部材113Aは、第1実施形態の本体部材10Aと略同様の構造であるが、回転部材140が配置される筒状凹部124の底面に設けられている孔の位置が、筒状凹部24に設けられている孔の位置と異なっている。図15に示すように、筒状凹部124の底面には、第1流路18aと接続された孔124a、第2流路18bと接続された孔124b及び第3流路18cと接続された孔124cを備えている。孔124aの位置を基準として、筒状凹部124の中心に90°回転した位置に孔124bが設けられており、さらに90°回転した位置に孔124cが設けられている。
 上記構成の回転部材140及び筒状凹部124から構成されるバルブ116は、第1実施形態のバルブ16と同様に第1状態、第2状態、第3状態及び第4状態に切り替えることができる。
 図14に示す状態は、第1状態である。図14では、回転部材140の第1液体収容部131の底面の第1孔145aが第1流路18aと接続し、第2孔145bが第2流路18bと接続し、かつ、第3孔145cが第3流路18cに接続した状態である。このとき、第1孔145aは、筒状凹部24の底面の孔124aと一致している。これは、液溜め部13と、第1液体収容部131とを連通した第1状態である。本例においては、第2孔145bは、筒状凹部24の底面の孔124bと一致している。これは、第1液体収容部131と反応チャンバ15とが連通している状態である。このとき、回転部材140の第2液体収容部132の底面の第1孔146a及び第2孔146bはどの流路にも接続していない。すなわち、第2液体収容部132は、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通していない。第3孔145cが第3流路18cと接続しているので、第1液体収容部131は、第3孔145c及び第3流路18cを介して圧力調整機構60と接続されている。これにより、圧力調整機構60により第1液体収容部131内の加減圧が可能となっている。液溜め部13に検体液Sが収容された状態で、バルブ116を第1状態とし、圧力調整機構60により第1液体収容部131内を減圧すれば、検体液Sを液溜め部13から第1液体収容部131に移送できる。本例では、この第1状態において、第1液体収容部131と反応チャンバ15が接続されているが、仕切り板145dを備えていることによって、第1孔145aから第1液体収容部131に浸入する検体液Sが第2孔145bに到達し、反応チャンバ15へ浸入するのは妨げられる。
 図16では、回転部材140の第1液体収容部131の底面の第1孔145aが第2流路18bと接続し、第2孔145bが第3流路18cと接続した状態である。このとき、第1孔145aは筒状凹部124の底面の孔124bと一致しており、第2孔145bは孔124cと一致している。これは、前処理チャンバを兼ねる反応チャンバ15と第1液体収容部131とを連通し、かつ液溜め部13と第1液体収容部131とは連通しない第2状態である。本例において、回転部材140の第2液体収容部132の底面の第1孔146a及び第2孔146bはどの流路にも接続していない。すなわち、第2液体収容部132は、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通していない。第2孔145bが第3流路18cに接続されているので、第1液体収容部131は、第3孔145c及び第3流路18cを介して圧力調整機構60と接続されている。これにより、圧力調整機構60により第1液体収容部131内の加減圧が可能となっている。第1液体収容部131に検体液Sが収容された状態で、バルブ116を第2状態とし、圧力調整機構60により第1液体収容部131内を加圧すれば、検体液Sを第1液体収容部131から反応チャンバ15へ移送できる。
 図17では、回転部材140の第1液体収容部131の底面の第1孔145a~第3孔145cのいずれも、第1流路18a、第2流路18b及び第3流路18cのいずれとも接続していない状態である。また、第2液体収容部132の底面の第1孔146a及び第2孔146bのいずれも、いずれの流路18a~18cにも接続していない状態である。すなわち、第1液体収容部131が、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通しておらず、かつ、第2液体収容部132も、液溜め部13とも反応チャンバ15とも連通していない第3状態である。第3状態は、液溜め部13及び反応チャンバ15の両方が、第1液体収容部131及び第2液体収容部132のいずれとも連通しない状態であればよく、回転部材40の回転位置は、図17の態様に限られない。第3状態では、反応チャンバ15が閉じた状態となっている。反応チャンバ15内に検体液Sが収容された状態で、バルブ116を第3状態とし、反応チャンバ15を加熱することで、前処理あるいは核酸増幅処理等を実施する。
 図18では、回転部材140の第2液体収容部132の底面の第1孔146aが第3流路18cと接続し、第2孔146bが第2流路18bと接続した状態である。このとき、第1孔146aは筒状凹部124の底面の孔124cと一致し、第2孔146bは孔124bと一致している。これは、反応チャンバ15と第2液体収容部132とを連通し、かつ反応チャンバ15と第1液体収容部31とは連通しない第4状態である。第2液体収容部132の第1孔146aが第3流路18cと接続されているので、第2液体収容部132は、第1孔146a及び第3流路18cを介して圧力調整機構60と接続されている。これにより、圧力調整機構60により第2液体収容部132内の加減圧が可能とっている。反応チャンバ15に検体液Sが収容された状態で、バルブ116を第4状態とし、圧力調整機構60により第2液体収容部132内を減圧すれば、検体液Sを反応チャンバ15から第2液体収容部132に移送できる。また、第2液体収容部132に検体液Sが収容された状態で、バルブ116を第4状態とし、圧力調整機構60により第2液体収容部132内を加圧すれば、検体液Sを第2液体収容部132から反応チャンバ15に移送できる。
「検査装置」
 検査容器10が装填され、検査を実施するための検査装置200について図19を参照して説明する。図19は検査装置200の概略構成を示す図である。検査装置200は、一例として、核酸検査装置である。
 検査装置200は、加熱部210と、バルブ回転機構220と、圧力調整機構駆動部230と、検出部240と、各部を制御する図示しないプロセッサとを備えている。
 プロセッサは、図示しないメモリに記憶されている検査プログラムに沿った検査手順で、各部を制御する。
 加熱部210は、検査容器10の反応チャンバ15の底面と接触する位置に備えられている。加熱部210は、反応チャンバ15に収容された液体を加熱する。加熱部210は、前処理のために検体液Sを、例えば、90℃以上の高温に加熱する。また、加熱部210は、検体液Sと試薬70との混合液を加熱して、核酸増幅を促進させる。加熱部210は、ヒータあるいはペルチェ素子などを備え温調可能とされており、核酸増幅工程における温度サイクルを実施する。加熱部210には、公知の加熱機構を用いることができ、特に制限されない。
 バルブ回転機構220は、バルブ16を回転させて液溜め部13、第1液体収容部31、第2液体収容部32及び反応チャンバ15の連通状態を、第1状態、第2状態、第3状態及び第4状態に切り替えるための機構を備える。バルブ回転機構220は、例えば、回転部材40の孔44aに挿入する爪222と、爪222を孔44a挿入した状態で爪を回転させる回転機構とを備える。
 圧力調整機構駆動部230は、圧力調整機構60に接続されて圧力調整機構60を駆動する。圧力調整機構60がシリンジの場合、圧力調整機構駆動部230は、プランジャ62を押し引きするリニアアクチュエータ等で構成される。圧力調整機構駆動部230は、プロセッサにより制御される。各チャンバ及び流路の容積は既知であるので、プロセッサは、図示しない圧力計から接続口に接続されているチャンバ(ここでは、第1液体収容部31及び第2液体収容部32)内の圧力をモニタし、所望の送液量に応じた加減圧量を算出する。そして、プロセッサは、算出した加減圧量に応じて圧力調整機構駆動部230を制御する。
 検出部240は、反応チャンバ15において、検体液S中に検出対象物が含まれているか否かを検出する。検出部240は、図19に示すように、光源242と、波長選択フィルタ244と、光検出器246とを備える。検出部240は、検査容器10の反応チャンバ15の上方に配置されている。光源242は、波長選択フィルタ244を介して、特定の波長の励起光L1を反応チャンバ15内に照射する。光検出器246は、励起光L1によって励起されて蛍光プローブから生じる蛍光L2を検出する。励起光L1は蛍光プローブの励起波長に応じて選択される。また、必要に応じて、強度や光量を調整するフィルタ、励起光L1を収束したり、検出プローブ由来の蛍光L2を光検出器246へ集光するためのレンズ、あるいは光学系などを含んでもよい。
 光源242としては、LED(light emitting diode)あるいはレーザなどが用いられる。波長選択フィルタ244は、光源242から発せられた光のうちプローブの励起波長に応じた波長のみを透過するフィルタである。光検出器246としては、例えばフォトダイオードあるいは光電子増倍管などが適用される。また、CMOS(Complementary Metal Oxide Semiconductor)やCCD(Charge Coupled Device)などカメラを用いて検出プローブからの蛍光を撮影し、得られた画像を解析して検出してもよい。
「核酸検査方法」
 第1実施形態の検査容器10を用いた一例の核酸検査方法について図20~図22を参照して説明する。ここでは、第2液体収容部32に核酸検査用の試薬70が備えられた検査容器10を用いる。試薬70は、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む試薬である。
 まず、事前準備として、スワブなどの採取具80を用いて生体から採取された検体81を、界面活性剤、ProK(プロテイナーゼK(proteinase K))を含む抽出液83中に浸漬させ、核酸の抽出と夾雑物の処理を行う。以下において、抽出液83に検体81が混合され、抽出液83中で核酸抽出がなされた検体81を含む液体を検体液Sという。
 検体81は、例えば、被検者の鼻腔、咽頭、口腔内部あるいは患部から採取具80を用いて採取する。もしくは、鼻腔、咽頭、口腔内部の洗浄液、唾液、尿あるいは血液などの体液である。核酸抽出方法としては、公知の核酸抽出方法を特に制限なく利用できる。例えば、界面活性剤やカオトロピック物質を用いる方法、超音波やビーズミルなどの物理的なせん断を加える方法が挙げられる。
 検査容器10は検体液Sを投入する前の初期状態において、バルブ16は、第1状態から第4状態いずれにあってもよいが、ここでは、液溜め部13と第1液体収容部31が連通する第1状態に設定しておく。検査においては、まず、抽出液中で核酸抽出がなされた検体を含む検体液Sを収容する容器に粗大な夾雑物を除去するフィルタを備えた滴下用のキャップ86を取り付け、フィルタ84で濾した検体液Sを検査容器10の投入口12から投入する(工程ST11)。検体液Sは液溜め部13に貯留される。
 検査容器10は、検体液Sが投入され、蓋部12Aにより投入口12が閉じられた状態で、検査装置200に装填される。以下の処理は、検査装置200内において実施される。
 まず、検査容器10においては、バルブ16を第1状態に維持したまま、すなわち、液溜め部13と第1液体収容部31とが連通した状態で、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を引いて、第1液体収容部31内を減圧する。これによって、液溜め部13中の検体液Sは第1液体収容部31に移送される(工程ST12)。なお、初期状態でバルブ16が第1状態以外であった場合には、バルブ回転機構220によりバルブ16を第1状態に切り替えて、検体液Sの送液を行う。
 次に、バルブ回転機構220(図19参照)によりバルブ16を第2状態に切り替える(工程ST13)。すなわち、反応チャンバ15と第1液体収容部31とが連通し、かつ、液溜め部13と第1液体収容部31とが連通しない状態とする。
 次に、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を押し込み、第1液体収容部31内を加圧する。これによって、第1液体収容部31から反応チャンバ15へ検体液Sを移送する(工程ST14)。
 第1液体収容部31内に検体液Sが十分に移送された後、バルブ回転機構220により、バルブ16を第3状態に切り替える(工程ST15)。すなわち、第1液体収容部31及び第2液体収容部32が液溜め部13及び反応チャンバ15のいずれとも連通しない状態とする。これにより、反応チャンバ15は他のどのチャンバにも連通せず閉じた状態となっている。
 反応チャンバ15内の検体液Sに対し前処理を実施する(工程ST16)。ここでは、加熱部210により、例えば、90℃以上に加熱される。これにより、検体液S中のProKを失活させる。
 次に、バルブ回転機構220により、バルブ16を第4状態に切り替える(工程ST17)。すなわち、反応チャンバ15と第2液体収容部32とを連通し、反応チャンバ15と第1液体収容部31とは連通しない状態とする。
 反応チャンバ15と第2液体収容部32とが連通した状態で、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を引いて、第2液体収容部32内を減圧する。これによって、反応チャンバ15中の検体液Sは第2液体収容部32に移送される(工程ST18)。
 第2液体収容部32内には試薬70が備えられており、第2液体収容部32に移送された検体液Sと試薬70とが混合される(工程ST19)。なお、第2液体収容部32に検体液Sが移送された状態で、プランジャ62を数回押し引きして検体液Sと試薬70との混合を促進させてもよい。
 検体液Sと試薬70とを混合させた後、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を押込み、第2液体収容部32内を加圧する。これにより、第2液体収容部32内の試薬70と検体液Sが混合された混合液70Sは反応チャンバ15に移送される(工程ST20)。
 次に、バルブ回転機構220によりバルブ16を第3状態に切り替える(工程ST21)すなわち、第1液体収容部31及び第2液体収容部32が液溜め部13及び反応チャンバ15のいずれとも連通しない状態とする。これにより、反応チャンバ15は他のどのチャンバにも連通せず閉じた状態となっている。
 その後、反応チャンバ15中の混合液70Sに対する核酸増幅処理及び蛍光検出処理が実施される(工程ST22)。
 核酸増幅処理は、加熱部210により反応チャンバ15内の検体液Sを加熱して、特定の核酸配列を増幅させる処理である。なお、核酸増幅処理方法は限定されるものではないが、例えば、RT-PCR法、あるいはPCR法を用いる。PCR法を用いる場合、二本鎖DNAを高温で一本鎖DNAに解離させる工程(熱変性工程)、その後温度を下げてプライマーを一本鎖DNAに結合させる工程(アニーリング工程)、および一本鎖DNAを鋳型として、ポリメラーゼにより、新たに二本鎖DNAを合成する工程(伸長工程)を繰り返す。熱変性工程、アニーリング工程及び伸長工程の温度サイクルの一例として、94℃で1分、50~60℃で1分、72℃で1~5分を1サイクルとして、20~50回繰り返すものが挙げられる。また、熱変性工程、アニーリング工程を1つの温度で行ってもよい。このような温度サイクルの一例としては、例えば、94℃で1分、60℃で1分を1サイクルとして、20~50回繰り返すものが挙げられる。増幅工程における温度サイクルの温度、時間は特に制限はなく、ポリメラーゼやプライマーの性能により任意に選択される。
 蛍光検出処理は、反応チャンバ15の上方に配置された検出部240により実施される((図19参照)。光源242から、波長選択フィルタ244を介して、特定の波長の励起光L1が反応チャンバ15内の混合液70Sに照射される。光検出器246により、励起光L1によって励起されて蛍光プローブから生じる蛍光L2を検出する。例えば、核酸増幅処理がPCR法である場合、上記の温度サイクルの1サイクルごとに蛍光検出を行いリアルタイムに増幅状況をモニタリングする。
 検体液S内に特定の核酸配列が存在した場合、増幅工程でその核酸配列が増幅され、この特定の核酸配列に標識される蛍光プローブに励起光L1が照射されることにより、蛍光L2が検出される。他方、検体液S内に特定の核酸配列が存在しない場合には、励起光L1を照射しても蛍光L2が検出されない。これによって、特定の核酸配列の有無を判定することができる。
 本検査容器10を用いた検査方法によれば、前処理前の検体液Sを第1液体収容部31で一時保留し、反応チャンバ15で前処理を行った後、前処理済みの検体液Sを第1液体収容部31とは異なる第2液体収容部32に移送して試薬70と混合する。そのため、前処理をしていない検体液Sと、前処理後の検体液Sを同一のチャンバ(ここでは、第1液体収容部31)に貯留させることはない。したがって、前処理後の検体液Sに未処理の検体液Sを混入させないので、前処理後の検体液Sに失活していないProKを混入させない。したがって、良好な核酸増幅を実現でき、検査精度を向上させることができる。
 また、本検査容器10を用いれば、前処理を実施するチャンバ(本例では反応チャンバ15)、及び核酸増幅処理を実施するチャンバ(本例では反応チャンバ15)は、バルブ16により、他のチャンバと連通しない閉じた状態を簡単に実現できる。反応チャンバ15が閉じた状態で前処理及び核酸増幅処理が実施されるので、反応チャンバ15に収容されている検体液Sの他のチャンバへの流出を防止し、反応チャンバ15内をある程度加圧した状態を維持できる。これにより、検査精度をより高めることができる。
 次に、前処理チャンバ66と反応チャンバ15を個別に備えた検査容器110を用いた一例の核酸検査方法について図23~図26を参照して説明する。ここでは、第2液体収容部32に核酸検査用の試薬70が備えられた検査容器110を用いる。試薬70は、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む試薬である。
 検査容器10を用いた方法と同様の手順については、詳細を省略する。まず、検体液Sを検査容器120の投入口12から投入する(工程ST31)。検体液Sは液溜め部13に貯留される。このとき、バルブ116は第1状態とする。
 検査容器110は、検体液Sが投入され、蓋部12Aにより投入口12が閉じられた状態で、検査装置200に装填される。以下の処理は、検査装置200内において実施され
る。
 まず、検査容器110においては、バルブ116を第1状態に維持したまま、すなわち、液溜め部13と第1液体収容部31とが連通した状態で、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を引いて、第1液体収容部31内を減圧する。これによって、液溜め部13中の検体液Sは第1液体収容部31に移送される(工程ST32)。
 次に、バルブ回転機構220(図19参照)によりバルブ116を第2状態に切り替える(工程ST33)。すなわち、本例では前処理チャンバ66と第1液体収容部31とが連通し、かつ、液溜め部13と第1液体収容部31とが連通しない状態とする。
 次に、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を押し込み、第1液体収容部31内を加圧する。これによって、第1液体収容部31から前処理チャンバ66へ検体液Sを移送する(工程ST34)。
 第1液体収容部31内に検体液Sが十分に移送された後、バルブ回転機構220により、バルブ116を第3状態に切り替える(工程ST35)。すなわち、第1液体収容部31及び第2液体収容部32が液溜め部13、前処理チャンバ66及び反応チャンバ15のいずれとも連通しない状態とする。これにより、前処理チャンバ66は他のどのチャンバにも連通せず閉じた状態となっている。
 前処理チャンバ66内の検体液Sに対し前処理を実施する(工程ST36)。ここでは、加熱部210により、例えば、90℃以上に加熱される。これにより、検体液S中のProKを失活させる。
 次に、バルブ回転機構220により、バルブ116を第5状態に切り替える(工程ST37)。すなわち、前処理チャンバ66と第2液体収容部32とを連通する状態とする。
 前処理チャンバ66と第2液体収容部32とが連通した状態で、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を引いて、第2液体収容部32内を減圧する。これによって、前処理チャンバ66中の検体液Sは第2液体収容部32に移送される(工程ST38)。
 第2液体収容部32内には試薬70が備えられており、第2液体収容部32に移送された検体液Sと試薬70とが混合される(工程ST39)。なお、第2液体収容部32に検体液Sが移送された状態で、プランジャ62を数回押し引きして検体液Sと試薬70との混合を促進させてもよい。
 次に、バルブ回転機構220により、バルブ116を第4状態に切り替える(工程ST40)。すなわち、反応チャンバ15と第2液体収容部32とが連通する状態とする。
 第2液体収容部32が反応チャンバ15と連通した状態で、圧力調整機構駆動部230により、プランジャ62を押込み、第2液体収容部32内を加圧する。これにより、第2液体収容部32内の試薬70と検体液Sが混合された混合液70Sは反応チャンバ15に移送される(工程ST41)。
 次に、バルブ回転機構220によりバルブ16を第3状態に切り替える(工程ST42)すなわち、第1液体収容部31及び第2液体収容部32が液溜め部13、前処理チャンバ66及び反応チャンバ15のいずれとも連通しない状態とする。これにより、反応チャンバ15は他のどのチャンバにも連通せず閉じた状態となっている。
 その後、反応チャンバ15中の混合液70Sに対する核酸増幅処理及び蛍光検出処理が実施される(工程ST43)。
 本検査容器110を用いた場合も、検査容器10を用いた場合と同様の効果を得ることができ、高い精度の件を実施することができる。
 上記検査装置200を用いた検査方法においては、蛍光プローブを用いた蛍光法により、核酸の有無の判定を行っているが、核酸の有無の検出方法としては、蛍光法に限らず、核酸クロマト法、光散乱法、シーケンス法及び電気化学法などの他の検出方法を用いてもよい。これらは、検出部を適宜変更することで実現可能であり、検査容器に、蛍光プローブに代えて、各検出方法に応じたプローブを含む試薬を備えればよい。
 上記において、検査容器10、110を用いた検査として核酸検査を挙げたが、検査容器10は核酸検査のみならず、他の遺伝子検査あるいは微生物検査などにおいても適用可能である。
 以上の実施形態に関し、更に以下の付記を開示する。
(付記1)
 検査対象の検体液を収容した状態で検査装置に着脱自在に装填される検査容器であって、
 前記検体液が投入される投入口と、
 前記投入口から投入された前記検体液を貯留する液溜め部と、
 前記液溜め部から送液される前記検体液を収容する前処理チャンバと、
 前記液溜め部から送液される前記検体液を前記前処理チャンバに送液する前に一時的に収容する第1液体収容部及び前記前処理チャンバから送液される前記検体液を一時的に収容する第2液体収容部が内部に設けられたバルブと、
 前記第2液体収容部から送液される前記検体液を収容する反応チャンバと、
 前記第1液体収容部に連通し、前記検体液を移送するために前記第1液体収容部内の圧力を調整する第1圧力調整機構を接続する第1接続口と、
 前記第2液体収容部に連通し、前記検体液を移送するために前記第2液体収容部内の圧力を調整する第2圧力調整機構を接続する第2接続口と、を備え、
 前記バルブは、前記液溜め部と前記第1液体収容部とを連通する第1状態と、前記前処理チャンバ又は前記反応チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない第2状態と、前記液溜め部、前記前処理チャンバ及び前記反応チャンバのいずれとも前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部の両方が連通しない第3状態と、前記反応チャンバと前記第2液体収容部とを連通する第4状態とを切り替え可能なバルブである、検査容器。
(付記2)
 前記反応チャンバが前記前処理チャンバを兼ね、
 前記第2状態が、前記反応チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない状態である、付記1に記載の検査容器。
(付記3)
 前記反応チャンバと、前記前処理チャンバとが個別に設けられ、
 前記第2状態が、前記前処理チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない状態であり、
 前記バルブは、前記第1状態から前記第4状態に加え、前記前処理チャンバと前記第2液体収容部とを連通する第5状態にも切り替え可能である、付記1に記載の検査容器。
(付記4)
 前記液溜め部の容積をV1とし、前記第1液体収容部の容積をV2とし、前記第2液体収容部の容積をV3とし、前記反応チャンバの容積をV4とした場合に、
V1>V2>V3>V4
を満たす、付記3に記載の検査容器。
(付記5)
 前記第1接続口が前記第2接続口を兼ね、前記第1圧力調整機構が前記第2圧力調整機構を兼ねる、付記1から付記4のいずれか1つに記載の検査容器。
(付記6)
 前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部と、前記第1接続口とを連通する前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部に共通の吸排気路を備える、付記5に記載の検査容器。
(付記7)
 前記反応チャンバに対して前記バルブを上流側、前記バルブの反対側を下流側とした場合において、前記反応チャンバの下流側に、前記反応チャンバから流入する加圧された気体を一時的に貯留するエアーバッファを備えている、付記1から付記6のいずれか1つに記載の検査容器。
(付記8)
 前記第2液体収容部に、前記検体液と混合させる試薬が収容されている、付記1から付記7のいずれか1つに記載の検査容器。
(付記9)
 前記試薬が、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む、付記8に記載の検査容器。
(付記10)
 前記第1接続口に前記第1圧力調整機構が、前記第2接続口に前記第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された付記2を引用する付記9に記載の検査容器を用いた核酸検査方法であって、
 前記検査容器の前記投入口から、前記検体液を投入して、前記液溜め部に前記検体液を収容させ、
 前記バルブを前記第1状態のまま、もしくは前記第1状態に切り替え、前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を減圧する操作により前記液溜め部から前記第1液体収容部に前記検体液を送液させ、
 前記バルブを前記第2状態に切り替え、
 前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を加圧する操作により前記第1液体収容部から前記反応チャンバに前記検体液を送液させ、
 前記バルブを前記第3状態に切り替え、
 前記反応チャンバにおいて、前記検体液を加熱処理し、
 前記バルブを前記第4状態に切り替え、
 前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を減圧する操作により、前記反応チャンバから前記第2液体収容部に前記検体液を送液させて、前記第2液体収容部において、前記検体液と前記試薬とを混合し、
 前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を加圧する操作により、前記第2液体収容部から前記反応チャンバに、前記検体液及び前記試薬の混合液を送液し、
 前記バルブを前記第3状態に切り替え、
 前記反応チャンバにおいて、前記混合液を温調することにより、前記混合液中の前記特定の核酸配列を増幅し、
 励起光を前記混合液に照射し、前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
 前記特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する、核酸検査方法。
(付記11)
 前記第1接続口に前記第1圧力調整機構が、前記第2接続口に前記第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された付記3を引用する付記9に記載の検査容器を用いた核酸検査方法であって、
 前記検査容器の前記投入口から、前記検体液を投入して、前記液溜め部に前記検体液を収容させ、
 前記バルブを前記第1状態のまま、もしくは前記第1状態に切り替え、前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を減圧する操作により前記液溜め部から前記第1液体収容部に前記検体液を送液させ、
 前記バルブを前記第2状態に切り替え、
 前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を加圧する操作により前記第1液体収容部から前記前処理チャンバに前記検体液を送液させ、
 前記バルブを前記第3状態に切り替え、
 前記前処理チャンバにおいて、前記検体液を加熱処理し、
 前記バルブを前記第5状態に切り替え、
 前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を減圧する操作により、前記前処理チャンバから前記第2液体収容部に前記検体液を送液させて、前記第2液体収容部において、前記検体液と前記試薬とを混合し、
 前記バルブを前記第4状態に切り替え、
 前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を加圧する操作により、前記第2液体収容部から前記反応チャンバに、前記検体液及び前記試薬の混合液を送液し、
 前記バルブを前記第3状態に切り替え、
 前記反応チャンバにおいて、前記混合液を温調することにより、前記混合液中の前記特定の核酸配列を増幅し、
 励起光を前記混合液に照射し、前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
 前記特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する、核酸検査方法。
 なお、2022年9月5日に出願された日本国特許出願2022-140925の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書に記載された全ての文献、特許出願及び技術規格は、個々の文献、特許出願及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。

Claims (11)

  1.  検査対象の検体液を収容した状態で検査装置に着脱自在に装填される検査容器であって、
     前記検体液が投入される投入口と、
     前記投入口から投入された前記検体液を貯留する液溜め部と、
     前記液溜め部から送液される前記検体液を収容する前処理チャンバと、
     前記液溜め部から送液される前記検体液を前記前処理チャンバに送液する前に一時的に収容する第1液体収容部及び前記前処理チャンバから送液される前記検体液を一時的に収容する第2液体収容部が内部に設けられたバルブと、
     前記第2液体収容部から送液される前記検体液を収容する反応チャンバと、
     前記第1液体収容部に連通し、前記検体液を移送するために前記第1液体収容部内の圧力を調整する第1圧力調整機構を接続する第1接続口と、
     前記第2液体収容部に連通し、前記検体液を移送するために前記第2液体収容部内の圧力を調整する第2圧力調整機構を接続する第2接続口と、を備え、
     前記バルブは、前記液溜め部と前記第1液体収容部とを連通する第1状態と、前記前処理チャンバ又は前記反応チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない第2状態と、前記液溜め部、前記前処理チャンバ及び前記反応チャンバのいずれとも前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部の両方が連通しない第3状態と、前記反応チャンバと前記第2液体収容部とを連通する第4状態とを切り替え可能なバルブである、検査容器。
  2.  前記反応チャンバが前記前処理チャンバを兼ね、
     前記第2状態が、前記反応チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない状態である、請求項1に記載の検査容器。
  3.  前記反応チャンバと、前記前処理チャンバとが個別に設けられ、
     前記第2状態が、前記前処理チャンバと前記第1液体収容部とを連通し、かつ前記液溜め部と前記第1液体収容部とは連通しない状態であり、
     前記バルブは、前記第1状態から前記第4状態に加え、前記前処理チャンバと前記第2液体収容部とを連通する第5状態にも切り替え可能である、請求項1に記載の検査容器。
  4.  前記液溜め部の容積をV1とし、前記第1液体収容部の容積をV2とし、前記第2液体収容部の容積をV3とし、前記反応チャンバの容積をV4とした場合に、
    V1>V2>V3>V4
    を満たす、請求項2に記載の検査容器。
  5.  前記第1接続口が前記第2接続口を兼ね、前記第1圧力調整機構が前記第2圧力調整機構を兼ねる、請求項1に記載の検査容器。
  6.  前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部と、前記第1接続口とを連通する前記第1液体収容部及び前記第2液体収容部に共通の吸排気路を備える、請求項5に記載の検査容器。
  7.  前記反応チャンバに対して前記バルブを上流側、前記バルブの反対側を下流側とした場合において、前記反応チャンバの下流側に、前記反応チャンバから流入する加圧された気体を一時的に貯留するエアーバッファを備えている、請求項1に記載の検査容器。
  8.  前記第2液体収容部に、前記検体液と混合させる試薬が収容されている、請求項1に記載の検査容器。
  9.  前記試薬が、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む、請求項8に記載の検査容器。
  10.  前記第1接続口に前記第1圧力調整機構が、前記第2接続口に前記第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された請求項2を引用する請求項9に記載の検査容器を用いた核酸検査方法であって、
     前記検査容器の前記投入口から、前記検体液を投入して、前記液溜め部に前記検体液を収容させ、
     前記バルブを前記第1状態のまま、もしくは前記第1状態に切り替え、前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を減圧する操作により前記液溜め部から前記第1液体収容部に前記検体液を送液させ、
     前記バルブを前記第2状態に切り替え、
     前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を加圧する操作により前記第1液体収容部から前記反応チャンバに前記検体液を送液させ、
     前記バルブを前記第3状態に切り替え、
     前記反応チャンバにおいて、前記検体液を加熱処理し、
     前記バルブを前記第4状態に切り替え、
     前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を減圧する操作により、前記反応チャンバから前記第2液体収容部に前記検体液を送液させて、前記第2液体収容部において、前記検体液と前記試薬とを混合し、
     前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を加圧する操作により、前記第2液体収容部から前記反応チャンバに、前記検体液及び前記試薬の混合液を送液し、
     前記バルブを前記第3状態に切り替え、
     前記反応チャンバにおいて、前記混合液を温調することにより、前記混合液中の前記特定の核酸配列を増幅し、
     励起光を前記混合液に照射し、前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
     前記特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する、核酸検査方法。
  11.  前記第1接続口に前記第1圧力調整機構が、前記第2接続口に前記第2圧力調整機構がそれぞれ直接もしくは配管を介して間接的に接続された請求項3を引用する請求項9に記載の検査容器を用いた核酸検査方法であって、
     前記検査容器の前記投入口から、前記検体液を投入して、前記液溜め部に前記検体液を収容させ、
     前記バルブを前記第1状態のまま、もしくは前記第1状態に切り替え、前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を減圧する操作により前記液溜め部から前記第1液体収容部に前記検体液を送液させ、
     前記バルブを前記第2状態に切り替え、
     前記第1圧力調整機構による前記第1液体収容部内を加圧する操作により前記第1液体収容部から前記前処理チャンバに前記検体液を送液させ、
     前記バルブを前記第3状態に切り替え、
     前記前処理チャンバにおいて、前記検体液を加熱処理し、
     前記バルブを前記第5状態に切り替え、
     前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を減圧する操作により、前記前処理チャンバから前記第2液体収容部に前記検体液を送液させて、前記第2液体収容部において、前記検体液と前記試薬とを混合し、
     前記バルブを前記第4状態に切り替え、
     前記第2圧力調整機構による前記第2液体収容部内を加圧する操作により、前記第2液体収容部から前記反応チャンバに、前記検体液及び前記試薬の混合液を送液し、
     前記バルブを前記第3状態に切り替え、
     前記反応チャンバにおいて、前記混合液を温調することにより、前記混合液中の前記特定の核酸配列を増幅し、
     励起光を前記混合液に照射し、前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
     前記特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する、核酸検査方法。
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