WO2023189118A1 - 検査容器及び核酸検査方法 - Google Patents

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WO2023189118A1
WO2023189118A1 PCT/JP2023/007397 JP2023007397W WO2023189118A1 WO 2023189118 A1 WO2023189118 A1 WO 2023189118A1 JP 2023007397 W JP2023007397 W JP 2023007397W WO 2023189118 A1 WO2023189118 A1 WO 2023189118A1
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chamber
liquid
test container
sample liquid
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PCT/JP2023/007397
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威史 濱
大亮 衛藤
裕康 石井
直人 磯▲崎▼
和興 込山
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富士フイルム株式会社
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
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    • G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
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    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices

Definitions

  • the present invention relates to a test container and a nucleic acid testing method.
  • test containers such as test cartridges or analysis chips that are used to perform various analyzes on specimens extracted from biological samples are known.
  • the test container includes a plurality of chambers (liquid storage portions) that contain liquid, and a flow path that connects the chambers.
  • a sample liquid is transferred from chamber to chamber using an external force such as electromagnetic force, centrifugal force, or pressure.
  • Japanese Patent Publication No. 2019-515308 discloses a microfluidic chip that uses centrifugal force to send a sample (sample liquid) input from a sample inlet (input port) provided at one end of a sample chamber from the sample chamber to a mixing chamber. is disclosed.
  • the microfluidic chip disclosed in Japanese Patent Publication No. 2019-515308 is equipped with a circuit configured to provide an air connection between the sample chamber and the mixing chamber, that is, a vent channel, so that liquid can be smoothly transferred. I have to.
  • the present disclosure has been made in view of the above circumstances, and is capable of suppressing backflow of a sample liquid from a downstream chamber to an upstream chamber in a test container for transferring liquid by centrifugal force.
  • the purpose is to provide a test container and a nucleic acid testing method.
  • the test container of the present disclosure includes an input port into which a sample liquid is input, a first chamber in which the sample liquid sent from the input port is accommodated, and a second chamber in which the sample liquid transferred from the first chamber is accommodated.
  • a test container having two chambers, which is attached to a centrifuge, and in which a sample liquid is sequentially sent from the first chamber to the second chamber by the centrifugal force caused by the rotation of the centrifuge, A removable lid that covers the input slot; a liquid reservoir for storing the sample liquid input from the input port in front of the first chamber;
  • a valve having a liquid accommodating part disposed between a first chamber and a second chamber and temporarily accommodating a sample liquid to be sent from the first chamber to the second chamber, the valve having a liquid accommodating part disposed between the first chamber and the liquid accommodating part.
  • the sealing part is preferably made of a hydrophobic substance that has a lower specific gravity than the sample liquid.
  • the hydrophobic substance is preferably a low polar solvent or a thermoplastic substance.
  • the hydrophobic substance is preferably provided in the liquid reservoir or the first chamber.
  • It may further include a hydrophobic substance accommodating part for accommodating a hydrophobic substance, which is provided on a side closer to the rotation axis of the centrifuge than the liquid reservoir part.
  • the volume of the liquid reservoir is V1
  • the volume of the first chamber is V2
  • the volume of the liquid storage part is V3
  • the volume of the second chamber is V4, it is preferable that the relationship is V1 ⁇ V2 ⁇ V3 ⁇ V4. .
  • a reagent to be reacted with the sample liquid may be stored in the first chamber, the liquid storage section, or the second chamber.
  • the reagent may include an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a probe for determining the nucleic acid sequence.
  • the probe may be a fluorescent probe.
  • the nucleic acid testing method of the present disclosure is a nucleic acid testing method using the test container of the present disclosure, in which a reagent is housed in a liquid container, wherein the valve is in a second state or a second state in an initial state.
  • test container and nucleic acid testing method of the present disclosure it is possible to suppress the backflow of the sample liquid from the downstream chamber to the upstream chamber.
  • FIG. 1 is a perspective view showing a schematic configuration of a test container 10 according to an embodiment.
  • FIG. 2A is a schematic cross-sectional view of the test container 10, and FIG. 2B is a schematic plan view of the flow path structure.
  • FIG. 3A is a schematic cross-sectional view of the test container 10, showing a state switched to the first state by the valve 20, and FIG. 3B is a schematic plan view of the flow path structure.
  • FIG. 4A is a schematic cross-sectional view of the test container 10, showing a state switched to the second state by the valve 20, and
  • FIG. 4B is a schematic plan view of the flow path structure.
  • 1 is a diagram showing an aspect of a test container 10.
  • FIG. 4 is a diagram showing before and after sending the sample liquid from the liquid reservoir to the first chamber in the flow path structure 11.
  • FIG. 7 is a diagram showing before and after the sample liquid is sent from the liquid reservoir to the first chamber in a flow path structure 11A of a modified example. It is a schematic diagram showing a test container provided with a reagent.
  • FIG. 7 is a schematic plan view of a modified example of a test container 50.
  • FIG. FIG. 7 is a schematic plan view of a modified example of a test container 52.
  • FIG. 5 is a diagram illustrating before and after the sample liquid is sent from the liquid reservoir to the first chamber in the flow path structure 11B of the test container 52.
  • FIG. FIG. 7 is a schematic plan view of a modified example of a test container 53.
  • FIG. FIG. 7 is a diagram illustrating before and after sending the sample liquid from the liquid reservoir to the first chamber in the test container 54 of a modified example.
  • FIG. 1 is a diagram showing a schematic configuration of an inspection device 100 according to an embodiment. It is a figure showing the schematic structure of inspection device 101 of a modification. It is a figure showing the schematic structure of inspection device 102 of a modification.
  • FIG. 1 is a diagram showing the steps of nucleic acid testing (Part 1). It is a figure showing the process of a nucleic acid test (part 2).
  • FIG. 2 is a diagram showing the steps of ⁇ -glucan testing (Part 1).
  • FIG. 2 is a diagram showing the process of ⁇ -glucan testing (Part 2).
  • FIG. 1 is a perspective view schematically showing a test container 10 of one embodiment.
  • FIG. 2A is a schematic cross-sectional view of the test container 10
  • FIG. 2B is a schematic plan view showing a simplified flow path structure 11 of the test container 10.
  • the test container 10 is a microchannel device that includes a channel structure 11 that includes a plurality of chambers and channels that connect the chambers.
  • the test container 10 is attached to a centrifuge, and the liquid inside is transferred from chamber to chamber by centrifugal force caused by rotation of the centrifuge.
  • the test container 10 of this example is a test container that is loaded into a test device 100 (see FIG. 14) equipped with a centrifuge and is used for biochemical analysis.
  • the test container 10 is composed of a main body member 10A in which recesses, holes, etc. are formed, which constitute a part of a flow path structure 11 including a flow path and a chamber, and a bottom member 10B, which constitutes the bottom surface of the flow path. (See Figure 2).
  • the main body member 10A can be made of any known resin-molded plastic material without particular limitation, but from the viewpoint of heat resistance and transparency, polycarbonate, polypropylene, cycloolefin, or silicone resin is preferable.
  • the bottom member 10B is formed of, for example, a thin plate or a film.
  • any known resin-molded plastic material can be used without particular limitation, but from the viewpoint of adhesion to the main body member 10A, the same material as the main body member 10A is preferable.
  • the bottom member 10B is made of a film from the viewpoint of improving close contact with the heating means and enabling efficient heating. It is preferable that the Note that the portions constituting the first chamber 15 and the second chamber 16 on the upper surface side of the main body member 10A may also be made of a film.
  • the test container 10 includes an input port 12, a lid 12A, a liquid reservoir 13, a first chamber 15, a second chamber 16, and a valve disposed between the first chamber 15 and the second chamber 16. 20, channels 18a to 18c connecting them, and a sealing part 19.
  • the plurality of chambers included in the test container 10 are the liquid reservoir section 13 , the first chamber 15 , the second chamber 16 , and the liquid storage section 24 . In the following, when there is no need to distinguish between the liquid reservoir 13, the first chamber 15, the second chamber 16, and the liquid storage section 24, they may be collectively referred to as chambers.
  • the input port 12 is an opening for inputting the sample liquid 40.
  • the lid portion 12A is a lid portion that covers the input port 12 and is detachable from the opening of the input port 12.
  • the lid portion 12A is formed to be able to be screwed onto the end of the cylindrical portion 14 that forms the input port 12.
  • the lid portion 12A may be attached to and detached from the cylindrical portion 14 using a snap-type cap structure or an adhesive.
  • the lid part 12A opens the input port 12 when a sample liquid is input, but closes the input port 12 except when a sample liquid is input to eliminate contamination from the outside and prevent evaporation of the sample liquid 40 from inside. do.
  • the sample fluid 40 is, for example, a liquid obtained by extracting nucleic acids from a sample collected from a subject's nasal cavity, pharynx, oral cavity, affected area, or the like.
  • the surface where the input port 12 is provided will be referred to as the top surface of the test container 10, and the bottom member 10B side will be referred to as the bottom surface of the test container 10.
  • the top surface of the main body member 10A is the same as the top surface of the test container 10
  • the bottom surface of the main body member 10A is a surface in contact with the top surface of the bottom member 10B
  • the bottom surface of the bottom member 10B is the same as the bottom surface of the test container 10. be.
  • the liquid reservoir 13 is provided at a position facing the input port 12 and accommodates the sample liquid 40 dropped from the input port 12.
  • the shape of the liquid reservoir 13 is not particularly limited, and can be arbitrarily selected from a columnar shape, a conical shape, a truncated cone shape, and the like.
  • the input port 12 is constituted by the opening of the cylindrical part 14 that extends through the main body member 10A in the thickness direction and protrudes from the upper surface of the main body member 10A.
  • a liquid reservoir 13 is formed by the inner side portion of the member 10A and the bottom member 10B. The liquid reservoir 13 is a space that stores the sample liquid 40 introduced from the input port 12 in front of the first chamber 15 .
  • the first chamber 15 is a chamber that can accommodate a liquid, and is a chamber that accommodates the sample liquid 40 that is sent from the input port 12 through the liquid reservoir 13 .
  • the first chamber 15 is formed by a recess provided on the lower surface of the main body member 10A and a bottom member 10B.
  • the first chamber 15 is, for example, a chamber in which pre-processing in testing is performed, and heat processing is performed by a first heating unit 120 in the testing apparatus 100 (see FIG. 14), which will be described later.
  • the second chamber 16 is a chamber that can accommodate a liquid, and is a chamber that accommodates the sample liquid 40 sent from the first chamber 15.
  • the sample liquid 40 is sent from the first chamber 15 to the second chamber 16 via a liquid storage section 24 of a valve 20, which will be described later.
  • the second chamber 16 is formed by a recess provided on the lower surface of the main body member 10A and a bottom member 10B.
  • the second chamber 16 is, for example, a chamber in which reaction and detection processing for testing is performed, and heat processing is performed by the second heating unit 122 in the testing apparatus 100 (see FIG. 14), which will be described later.
  • the valve 20 has a liquid storage section 24 that temporarily stores the sample liquid 40 sent from the first chamber 15 to the second chamber 16.
  • the valve 20 is a valve that switches the connection state between the first chamber 15 and the second chamber 16 and the liquid storage section 24 to one of the following states: a first state, a second state, and a third state. be.
  • the first state is a state in which the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are in communication with each other, and the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are not in communication with each other.
  • the second state is a state in which the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are in communication with each other, and the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are not in communication with each other.
  • the third state is a state in which both the first chamber 15 and the second chamber 16 are not in communication with the liquid storage section 24 .
  • FIG. 2A shows a state in which both the first chamber 15 and the second chamber 16 are not in communication with the liquid storage section 24.
  • the x shown on the channel 18b schematically indicates that the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are in a closed state where they are not communicating with each other.
  • an x shown on the flow path 18c schematically indicates that the liquid storage section 24 and the second chamber 16 are in a closed state where they are not communicating with each other.
  • the x shown on the flow path means that the chambers connected via the flow path are not communicating with each other.
  • the valve 20 in the present test container 10 includes a rotating member 25 disposed in a cylindrical portion 22 consisting of a cylindrical recess provided on the upper surface of the main body member 10A and a portion surrounding the recess and protruding from the upper surface of the main body member 10A.
  • the rotating member 25 is a cylindrical member whose outer diameter is slightly smaller than the inner diameter of the cylindrical portion 22, and is rotatably installed within the cylindrical portion 22.
  • a liquid storage section 24 is provided inside the rotating member 25, and one hole 24a communicating with the liquid storage section 24 is provided on the bottom surface.
  • the bottom surface of the cylindrical portion 22 has a hole 22a communicating with the flow path 18b and a hole 22b communicating with the flow path 18c.
  • An O-ring 26 is provided in each of the holes 22a and 22b.
  • the upper surface of the rotating member 25 is provided with a knob 25a that is used when rotating the rotating member 25.
  • the O-ring 26 aligns the hole 24a on the bottom surface of the rotating member 25 with either the hole 22a or the hole 22b on the bottom surface of the cylindrical portion 22, and communicates the liquid storage portion 24 with the flow path 18b or the flow path 18c. In this case, it functions to prevent leakage from the connection between the hole 24a and the hole 22a or 22b.
  • any known sealing member such as a packing or a gasket can be used as a sealing means for preventing leakage without particular limitation.
  • the material of the sealing means for example, rubber materials such as nitrile rubber, urethane rubber, silicone rubber, and fluororubber, or known elastomers such as olefin and urethane can be used.
  • the seal portion may be integrally formed with the rotating member 25 or the cylindrical portion 22 of the main body member 10A.
  • the hole 24a on the bottom surface of the rotating member 25 and the hole 22a on the bottom surface of the cylindrical portion 22 are aligned, the hole 24a is aligned with the hole 22b, and the hole 24a is aligned with the hole 22a.
  • 22a and 22b may be set.
  • the channels 18a to 18c are all formed by a recess provided on the lower surface of the main body member 10A and the bottom member 10B.
  • the flow path 18a is a flow path that connects the liquid reservoir 13 and the first chamber 15.
  • the flow path 18b is a flow path that connects the first chamber 15 and the liquid storage portion 24 of the valve 20.
  • the flow path 18b communicates with a hole 22a in the bottom surface of the cylindrical portion 22 of the valve 20.
  • the flow path 18c is a flow path that connects the second chamber 16 and the liquid storage portion 24 of the valve 20.
  • the flow path 18c communicates with a hole 22b in the bottom surface of the cylindrical portion 22.
  • the cross-sectional size of the channels 18a to 18c is, for example, approximately 0.5 mm to 1 mm wide and 0.5 mm deep.
  • FIG. 3 and 4 are diagrams for explaining the first state and second state switched by the valve 20.
  • 3 is an explanatory diagram of the test container 10 in the first state
  • FIG. 3A is a schematic cross-sectional view of the test container 10
  • FIG. 3B is a schematic plan view of the flow path structure 11.
  • FIG. 4 is an explanatory diagram of the test container 10 in the second state, in which FIG. 4A is a schematic cross-sectional view of the test container 10, and FIG. 4B is a schematic plan view of the channel structure 11.
  • the hole 24a on the bottom surface of the rotating member 25 coincides with the hole 22a on the bottom surface of the cylindrical portion 22.
  • the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are in communication with each other, and the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are in a first state in which they are not communicated with each other.
  • the hole 24a on the bottom surface of the rotating member 25 matches the hole 22b on the bottom surface of the cylindrical portion 22.
  • the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are in communication with each other, and the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are in a second state in which they are not communicated with each other.
  • the state in which the hole 24a on the bottom surface of the rotating member 25 is not aligned with either the hole 22a or the hole 22b on the bottom surface of the cylindrical portion 22 is the state in which the first chamber 15 and the second chamber 16 This is a third state in which both and the liquid storage section 24 do not communicate with each other.
  • the valve 20 is a rotary valve that can be switched between the first state, the second state, and the third state by rotating the rotary member 25 within the cylindrical portion 22 of the main body member 10A.
  • the valve 20 is not limited to the rotary valve having the above structure as long as it can realize the first to third states.
  • the sealing part 19 is provided in a part of the channel structure 11 to prevent the sample liquid 40 from flowing backward after the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15. ing.
  • the sealing part 19 is a hydrophobic substance that has a lighter specific gravity than the sample liquid 40 (hereinafter referred to as hydrophobic substance 19).
  • the hydrophobic substance 19 is a low polar solvent or a thermoplastic substance.
  • the hydrophobic substance 19 may be a substance that is liquid at room temperature, or a substance that is solid at room temperature but becomes liquid when heated.
  • low polar solvents include silicone oil, hydrocarbon solvents, fluorine solvents, and carbon tetrachloride.
  • low polarity means that the polarity is such that it does not mix with the specimen liquid 40.
  • thermoplastic substances include various waxes and adhesives.
  • the hydrophobic substance 19 is provided in the liquid reservoir 13 or the first chamber 15. In the example shown in FIG. 2, the hydrophobic substance 19 is provided in the first chamber 15.
  • test container 10 is set in a loading section 111A of a disk-shaped support 111 as shown in FIG. be done.
  • the test container 10 is set in the centrifuge 110 in the order of the liquid reservoir 13, the first chamber 15, the liquid storage part 24, and the second chamber 16 from the inner diameter side closest to the axis A, which is the center of rotation.
  • the sample liquid 40 inputted from the input port 12 is transferred from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15, from the first chamber 15 to the liquid storage section 24, and from the liquid storage section 24 to the second chamber 16.
  • the liquid feeding to each of these is realized by the centrifugal force caused by the rotation of the centrifuge 110.
  • FIG. 6 shows the state of the flow path structure 11 before and after the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15.
  • the injection of the sample liquid 40 is performed in a state where the first chamber 15 and the liquid storage portion 24 of the valve 20 are not in communication with each other.
  • both the first chamber 15 and the second chamber 16 are in the third state in which they do not communicate with the liquid storage section 24, but they may be in the second state.
  • the sample liquid 40 is stored in the liquid reservoir 13.
  • the hydrophobic substance 19 is contained in the first chamber 15.
  • the sexual substance 19 moves toward the inner diameter side, as a result, the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15.
  • the test container 10 of this embodiment has a sealing part 19 (in this example, a hydrophobic It is equipped with substance 19).
  • a sealing part 19 in this example, a hydrophobic It is equipped with substance 19.
  • the hydrophobic substance 19 is provided as the sealing part as in this embodiment, after the sample liquid 40 is sent to the first chamber 15, the sample liquid 40 and the hydrophobic substance 19 are exchanged, and the liquid reservoir 13 is replaced with the hydrophobic substance 19.
  • the hydrophobic substance 19 is accommodated in the area. Since the hydrophobic substance 19 is accommodated in the liquid reservoir 13, the vaporized sample liquid 40 flows into the liquid reservoir 13, compared to the case where only air exists in the liquid reservoir 13 without the hydrophobic substance 19. Backflow can be suppressed. The backflow of the sample liquid 40 from the first chamber 15 to the liquid reservoir 13 can be suppressed without providing any mechanical structure, and the sealing part can be realized very simply and at low cost.
  • the hydrophobic substance 19 be provided in a volume sufficient to fill the liquid reservoir 13 . If the hydrophobic substance 19 fills the liquid reservoir 13 after sending the sample liquid 40 to the first chamber 15, the backflow of the sample liquid 40 from the first chamber 15 to the liquid reservoir 13 can be more effectively prevented. Can be suppressed.
  • the hydrophobic substance 19 When the hydrophobic substance 19 is a low polar solvent, it does not mix with the sample liquid 40, so it is possible to suppress the sample liquid 40 from flowing back into the liquid reservoir 13.
  • the hydrophobic substance 19 is a thermoplastic substance
  • the hydrophobic substance 19 is fed to the liquid reservoir 13 and the hydrophobic substance 19 is transferred to the liquid reservoir 13. It solidifies when cooled. Thereby, backflow of the sample liquid 40 into the liquid reservoir 13 can be effectively suppressed.
  • the hydrophobic substance 19 is provided in the liquid reservoir 13 or the first chamber 15 before the sample liquid 40 is introduced.
  • the portion provided with the hydrophobic substance 19 is not limited to these.
  • the flow path structure 11A of the modified example includes a hydrophobic substance storage part 17 provided closer to the rotation axis of the centrifuge than the liquid reservoir part 13, and the hydrophobic substance 19 is hydrophobic. It may be accommodated in the substance storage section 17.
  • the hydrophobic substance 19 is accommodated in the hydrophobic substance storage unit 17 while the sample liquid 40 is input from the input port 12 and accommodated in the liquid reservoir 13. ing.
  • the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15, as shown in the right diagram of FIG. The liquid is sent to the 13 side.
  • the volume of the liquid reservoir 13 is V1
  • the volume of the first chamber 15 is V2
  • the volume of the liquid storage section 24 is V3
  • the volume of the second chamber 16 is V4.
  • the relationship is V1 ⁇ V2 ⁇ V3 ⁇ V4. That is, it is preferable that adjacent chambers have the same volume, or that among a plurality of chambers arranged from the inner diameter side of the centrifugal center to the outer diameter side, the chambers arranged closer to the outer diameter side have smaller volumes.
  • the volume V1 of the liquid reservoir 13 is more than 100 ⁇ L to 200 ⁇ L
  • the volume V2 of the first chamber 15 is 100 ⁇ L
  • the volume V3 of the liquid storage portion 24 is 50 ⁇ L
  • the volume V4 of the second chamber 16 is 30 ⁇ L.
  • volume V1 of the liquid reservoir 13 is larger than the first chamber 15, more sample liquid 40 can be stored in the liquid reservoir 13 than the volume V2 of the first chamber 15.
  • volume relationship of the plurality of chambers arranged from the inner diameter side of the centrifugal center to the outer diameter side is V1 ⁇ V2 ⁇ V3 ⁇ V4, then the outer diameter When the sample liquid 40 is sent to the chamber arranged on the side, the chamber on the outer diameter side (that is, downstream side) can be filled with the sample liquid 40. Therefore, it is possible to prevent the specimen liquid 40 from running out in the second chamber 16 that is ultimately used for detection.
  • the test container 10 may include a reagent 32 in the channel structure 11 to react with the sample liquid 40.
  • the reagent 32 is a reagent containing an amplification reagent for amplifying a specific nucleic acid sequence and a fluorescent probe for determining the nucleic acid sequence.
  • the reagent 32 may be provided in any of the liquid reservoir 13, the first chamber 15, the liquid storage part 24, and the second chamber 16.
  • the reagent 32 is preferably provided in the first chamber 15 or the liquid storage section 24, and is particularly preferably provided in the liquid storage section 24.
  • a stirring rod for promoting mixing of the sample liquid 40 and the reagent 32 may be included in the chamber containing the reagent 32 or in a chamber downstream thereof.
  • test container 10 of the above embodiment has one flow path structure 11 from the input port 12 to the second chamber 16.
  • one test container 50 may be provided with a plurality of channel structures 11, as shown in FIG.
  • the test container 50 shown in FIG. 9 includes a disc-shaped main body member and a bottom member, and includes four channel structures 11 arranged radially around the rotation axis A.
  • the number of channel structures 11 included in one test container 50 is not limited to four.
  • the flow path structure 11B may be provided with a vent flow path 35.
  • the vent channel 35 is a channel that connects the first chamber 15 and the liquid reservoir 13.
  • the vent channel 35 is a channel through which gas passes.
  • FIG. 11 shows the state of the flow path structure 11B of the test container 52 before and after liquid feeding.
  • the hydrophobic substance 19 fills the liquid reservoir 13, remains partially in the first chamber 15, and vents the first chamber 15.
  • vent flow path 35 may not be completely blocked, it is more preferable not to include a vent flow path like the test container 10.
  • a plurality of second chambers 16a to 16c may be provided, as in a modified example of a test container 53 shown in FIG.
  • test accuracy can be improved by performing the same test on one specimen in the plurality of second chambers 16a to 16c.
  • a plurality of test target substances can be tested in parallel on one specimen.
  • the first second chamber 16a is tested for influenza
  • the second second chamber 16b is tested for the new coronavirus
  • the third second chamber 16c is tested for RS (Respiratory syncytial) virus.
  • RS Respiratory syncytial
  • the hydrophobic substance 19 is provided as the sealing part, but the sealing part is used to prevent the sample liquid 40 from flowing back after the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15. Any structure may be used as long as it has the function of preventing this, and a structure such as a check valve may be provided between the liquid reservoir 13 and the first chamber 15.
  • FIG. 13 shows a schematic cross-sectional view of a modified test container 54. Further, FIG. 13 shows the state of the flow path structure 11 before and after the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15.
  • the flow path 29a connecting the liquid reservoir 13 and the first chamber 15 is formed in a tapered shape whose diameter gradually increases from the liquid reservoir 13 side to the first chamber 15 side.
  • a sphere 29b is provided within the flow path 29a. The diameter of the sphere 29b is larger than the diameter of the channel 29a closest to the liquid reservoir 13 side.
  • a stopper 29c for restricting movement of the sphere 29b toward the first chamber 15 is provided in a portion of the flow path 29a on the first chamber 15 side.
  • the flow path 29a, the sphere 29b, and the stopper 29c constitute a sealing part 29 that prevents the sample liquid 40 from flowing back after the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15. There is.
  • the sphere 29b is movably arranged in the flow path 29a before liquid feeding.
  • a sample liquid 40 is input from the input port 12 and stored in the liquid reservoir 13.
  • the test container 54 is rotated in a centrifuge while the first chamber 15 and the liquid storage section 24 are closed. Thereby, as shown in the lower diagram of FIG. 13, the specimen liquid 40 is sent to the first chamber 15 by centrifugal force.
  • the sphere 29b is gradually pushed toward the liquid reservoir 13 by the sample liquid 40, and is moved to a portion having the same diameter as the sphere 29b. Thereby, the sphere 29b becomes a check valve that closes the flow path 29a.
  • the first chamber 15 when the first chamber 15 is heated for pretreatment of the sample liquid 40 while the sample liquid 40 is stored in the first chamber 15, for example, 90° C.
  • the sample liquid 40 When heated to a high temperature above, if the sample liquid 40 is vaporized and the pressure inside the first chamber 15 increases, the sphere 29b will be pushed further toward the liquid reservoir 13 and seal the flow path 29a. Become. Therefore, it is possible to prevent the sample liquid 40 from flowing back into the liquid reservoir 13.
  • the bottom member 10B that constitutes the bottom surface of the flow path 18c connecting the liquid reservoir 13 and the first chamber 15 is made of a film, and the bottom member 10B is pressed from the outside to form the flow path. It may be provided with a configuration that makes it possible to close 18c.
  • the channel structures 11, 11A, and 11B in each of the test containers 10, 50, 52, and 54 described above may further include a deformable chamber that communicates with the second chamber 16.
  • a deformable chamber that communicates with the second chamber 16.
  • the inside of the deformable chamber and the second chamber 16 communicating with the deformable chamber can be pressurized.
  • pressurizing the inside of the second chamber 16 the temperature raising and cooling characteristics of the liquid contained in the second chamber 16 can be improved.
  • FIG. 14 is a diagram showing a schematic configuration of the inspection device 100.
  • the testing device 100 is, for example, a nucleic acid testing device.
  • the inspection device 100 includes a centrifuge 110, a first heating section 120, a second heating section 122, a valve control section 124, and a detection section 126.
  • the centrifuge 110 includes a pedestal 112 equipped with a rotation mechanism such as a motor, a disk-shaped support 111 constituting a rotation table equipped with a loading section 111A (see FIG. 5) for loading the test container 10, and a rotation mechanism.
  • a rotary coupler 114 is connected to the shaft and rotatably supports the disc-shaped support 111. By driving the rotation mechanism, the disk-shaped support 111 is rotated about the axis A. Due to the centrifugal force accompanying this rotation, liquid delivery is realized in the channel structure within the test container 10.
  • the disk-shaped support 111 has a presser foot 111B that presses down the test container 10 set in the loading section 111A.
  • the first heating unit 120 is provided so as to be movable between a position where it contacts the bottom surface of the first chamber 15 of the test container 10 set on the disc-shaped support 111 and a position away from it.
  • the first heating unit 120 is disposed at a position apart from the bottom surface of the first chamber 15 while the disc-shaped support 111 is rotating, and is located at a position apart from the bottom surface of the first chamber 15 when the disc-shaped support 111 is stopped. It is placed in a position where it makes contact with the bottom surface.
  • the first heating unit 120 heats the liquid contained in the first chamber 15 .
  • the liquid contained in the first chamber 15 is the sample liquid 40.
  • the first heating unit 120 heats the sample liquid 40 to a high temperature of, for example, 90° C. or higher for pretreatment.
  • the second heating unit 122 is provided so as to be movable between a position in which it contacts the bottom surface of the second chamber 16 of the test container 10 set on the disk-shaped support 111 and a position away from it.
  • the second heating unit 122 is disposed at a position apart from the bottom surface of the second chamber 16 while the disc-shaped support 111 is rotating, and is located at a position apart from the bottom surface of the second chamber 16 when the disc-shaped support 111 is stopped. It is placed in a position where it makes contact with the bottom surface.
  • the second heating unit 122 heats the liquid contained in the second chamber 16.
  • the liquid contained in the second chamber 16 is, for example, a mixed liquid of the specimen liquid 40 and the reagent 32.
  • the second heating unit 122 heats the mixture of the sample liquid 40 and the reagent 32 to promote nucleic acid amplification.
  • the second heating unit 122 is equipped with a Peltier device and the like, and is capable of temperature control, and performs temperature cycles in the nucleic acid amplification process.
  • the first heating section 120 does not require a temperature cycle like the second heating section 122, and is composed of, for example, a heater.
  • the heating mechanisms used for each of the first heating section 120 and the second heating section 122 are not particularly limited and can be any known heating mechanism.
  • the valve control unit 124 includes a mechanism for controlling the valve 20 to switch the communication state of the first chamber 15, second chamber 16, and liquid storage unit 24 to a first state, a second state, and a third state.
  • the valve control unit 124 includes, for example, a gripping portion that grips the knob 25a of the rotating member 25, a rotation mechanism that rotates the gripping portion while the gripping portion grips the knob 25a, and a rotation mechanism that rotates the gripping portion as necessary in the inspection process. and a processor that drives the rotation mechanism accordingly.
  • the detection unit 126 detects whether a detection target object is contained in the sample liquid 40 in the second chamber 16.
  • the detection unit 126 includes a light source 126a, a wavelength selection filter 126b, and a photodetector 126c.
  • the detection unit 126 is arranged above the second chamber 16 of the test container 10. Detection by the detection unit 126 is also carried out in a state where rotation by the centrifuge 110 is stopped.
  • the light source 126a irradiates the second chamber 16 with excitation light L1 of a specific wavelength via the wavelength selection filter 126b.
  • the photodetector 126c is excited by the excitation light L1 and detects fluorescence L2 generated from the fluorescent probe.
  • Excitation light L1 is selected according to the excitation wavelength of the fluorescent probe. Further, if necessary, it may include a filter for adjusting the intensity and light amount, a lens for converging the excitation light L1 and condensing the fluorescence L2 derived from the detection probe onto the photodetector 126c, or an optical system.
  • the light source 126a an LED, a laser, or the like is used.
  • the wavelength selection filter 126b is a filter that transmits only the wavelength corresponding to the excitation wavelength of the probe out of the light emitted from the light source 126a.
  • the photodetector 126c for example, a photodiode or a photomultiplier tube is applied.
  • testing container 10 can also be used in the testing device 101 shown in FIG. 15, or the testing device 102 shown in FIG. 16.
  • FIGS. 15 and 16 components equivalent to those of the inspection apparatus 100 shown in FIG. 14 are denoted by the same reference numerals, and detailed description thereof will be omitted.
  • the inspection device 101 and the inspection device 102 each include centrifuges 110A and 110B that have a different structure from the centrifuge 110 of the inspection device 100.
  • the inspection apparatus 101 shown in FIG. 15 is configured such that a centrifuge 110A rotates the disk-shaped support 111 with its surface tilted from the horizontal plane.
  • the rotation axis A of the centrifuge 110A is configured to be inclined from a direction perpendicular to a horizontal plane.
  • the centrifuge 110B is equipped with an umbrella-shaped support 131 instead of the disk-shaped support 111.
  • the umbrella-shaped support 131 includes a horizontal portion supported by the rotary coupler 114 and an inclined portion surrounding the horizontal portion with the outer peripheral side located vertically downward with respect to the horizontal portion.
  • test container 10 can be applied to any of the configurations of the various centrifuges 110A, 110B, and 110C shown in FIGS. 14 to 16.
  • the testing devices 100, 101, and 102 are described as nucleic acid testing devices used for nucleic acid testing that involves nucleic acid amplification processing.
  • the first heating section 120, the second heating section 122, and the detection section 126 are configured to be suitable for various tests, so that the testing devices 100, 101, and 102 can be used for various tests other than nucleic acid tests. I can do it.
  • nucleic acid testing method An embodiment of a nucleic acid testing method using the test container 10 of the above embodiment will be described with reference to FIGS. 17 and 18.
  • a test container 10 (see FIG. 8) is used, in which the first chamber 15 is provided with a hydrophobic substance 19 as a sealing part, and the liquid storage part 24 is provided with a reagent 32 for nucleic acid testing.
  • a specimen 40a collected from a living body using a collection tool 60 such as a swab is placed in an extract solution 62 containing a surfactant and ProK (proteinase K). to extract nucleic acids and treat impurities.
  • a liquid containing the sample 40a obtained by mixing the sample 40a with the extract liquid 62 and performing nucleic acid extraction in the extract liquid 62 will be referred to as a sample liquid 40.
  • the specimen 40a is collected, for example, from the nasal cavity, pharynx, oral cavity, or affected area of the subject using a collection tool. or body fluids such as nasal, pharynx, or oral cavity cleaning fluids, saliva, urine, or blood.
  • a nucleic acid extraction method any known nucleic acid extraction method can be used without particular limitations. Examples include a method using a surfactant or a chaotropic substance, and a method applying physical shear such as ultrasonic waves or a bead mill.
  • the valve 20 In the initial state of the test container 10 before the sample liquid 40 is introduced, the valve 20 is placed in the second or third state in which at least the first chamber 15 and the liquid storage section 24 do not communicate with each other. In this embodiment, a third state is set in which neither the first chamber 15 nor the second chamber 16 communicates with the liquid storage section 24 .
  • the valve 20 is left in the initial state as described above, and the filter 64 for removing coarse impurities is placed in the container 63 containing the sample liquid 40 containing the sample 40a from which the nucleic acid has been extracted.
  • a dripping cap 66 equipped with a dripping cap 66 is attached, and the sample liquid 40 filtered through the filter 64 is poured into the test container 10 from the input port 12 (step ST1).
  • the sample liquid 40 is stored in the liquid reservoir 13.
  • the input port 12 is closed by the lid part 12A, and the internal space of the test container 10 is sealed (step ST2).
  • the test container 10 is loaded into the test apparatus 100 with the sample liquid 40 added thereto and the inlet 12 closed by the lid 12A. The following processing is performed within the inspection device 100.
  • the test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15 (step ST3).
  • the sample liquid 40 is sent to the first chamber 15, and the hydrophobic substance 19 contained in the first chamber 15 is moved to the liquid reservoir 13.
  • Step ST4 This heat treatment deactivates ProK.
  • the heating temperature is preferably, for example, 80°C or higher, more preferably 85°C or higher, and even more preferably 90°C or higher.
  • the upper limit temperature is preferably 100°C or lower, more preferably 95°C or lower, from the viewpoint of evaporation of the sample liquid.
  • valve control unit 124 switches the valve 20 to the first state (step ST5). That is, the first chamber 15 and the liquid storage section 24 communicate with each other, and the liquid storage section 24 and the second chamber 16 do not communicate with each other.
  • test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the sample liquid 40 is sent from the first chamber 15 to the liquid storage section 24 of the valve 20 (step ST6).
  • a reagent 32 is stored in the liquid storage section 24 , and the supplied sample liquid 40 and the reagent 32 are mixed in the liquid storage section 24 .
  • the valve control unit 124 switches the valve 20 to the second state (step ST7). That is, the second chamber 16 and the liquid storage section 24 communicate with each other, and the liquid storage section 24 and the first chamber 15 do not communicate with each other.
  • test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the mixed liquid 42 of the sample liquid 40 and the reagent 32 is sent from the liquid storage part 24 of the valve 20 to the second chamber 16 (step ST8). .
  • the valve control unit 124 switches the valve 20 to the third state (step ST9).
  • the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are not in communication with each other.
  • neither the first chamber 15 nor the second chamber 16 communicates with the liquid storage section 24, but since it is sufficient that the second chamber 16 and the liquid storage section 24 do not communicate with each other, It does not matter if it is in the 1 state.
  • the nucleic acid amplification process and fluorescence detection are performed on the mixed liquid 42 in a state where the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are not in communication with each other (step ST10).
  • the nucleic acid amplification process is a process in which the mixed liquid 42 in the second chamber 16 is heated by the second heating unit 122 to amplify a specific nucleic acid sequence.
  • the nucleic acid amplification treatment method is not limited, but for example, RT-PCR method or PCR method is used.
  • PCR method there are a step of dissociating double-stranded DNA into single-stranded DNA at high temperature (thermal denaturation step), a step of lowering the temperature and binding the primer to the single-stranded DNA (annealing step), and Using the stranded DNA as a template, a polymerase repeats the step (elongation step) of newly synthesizing double-stranded DNA.
  • one cycle is 94° C. for 1 minute, 50 to 60° C. for 1 minute, and 72° C. for 1 to 5 minutes, which is repeated 20 to 50 times. It will be done. Further, the heat denaturation step and the annealing step may be performed at one temperature.
  • An example of such a temperature cycle is, for example, one cycle consisting of 94° C. for 1 minute and 60° C. for 1 minute, which is repeated 20 to 50 times.
  • the temperature and time of the temperature cycle in the amplification step are not particularly limited and can be arbitrarily selected depending on the performance of the polymerase and primers.
  • Fluorescence detection is performed by the detection unit 126 located above the second chamber 16. Excitation light L1 of a specific wavelength is irradiated into the second chamber 16 from the light source 126a via the wavelength selection filter 126b. The photodetector 126c detects fluorescence L2 generated from the fluorescent probe excited by the excitation light L1. For example, when the nucleic acid amplification process is a PCR method, fluorescence detection is performed every cycle of the above-mentioned temperature cycle to monitor the amplification status in real time.
  • the nucleic acid sequence is amplified in the amplification step, and the fluorescent probe labeled with this specific nucleic acid sequence is irradiated with excitation light L1, whereby fluorescence L2 is detected. be done.
  • the fluorescent probe labeled with this specific nucleic acid sequence is irradiated with excitation light L1, whereby fluorescence L2 is detected.
  • the excitation light L1 is irradiated.
  • the sample liquid 40 sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15 is pretreated by high-temperature heating in the first chamber 15. Since the sample liquid 40 is provided with a sealing portion (hydrophobic substance 19 in this example) that prevents the sample liquid 40 from flowing back into the liquid reservoir 13, the back flow of the sample liquid 40 can be suppressed. Thereby, it is possible to suppress a decrease in the amount of the sample liquid 40 that is finally processed in the second chamber 16, so that the test accuracy can be improved.
  • a sealing portion hydrophobic substance 19 in this example
  • the presence or absence of nucleic acids is determined by a fluorescence method using a fluorescent probe.
  • Other detection methods such as , light scattering, sequence methods and electrochemical methods may also be used. These can be realized by appropriately changing the detection section, and the test container may be equipped with a reagent containing a probe corresponding to each detection method instead of the fluorescent probe.
  • the nucleic acid test was mentioned as a test using the test container 10, but the test container 10 is applicable not only to nucleic acid tests but also to other genetic tests, microbial tests, etc.
  • test container 10 As an example of a microbial test, an example in which the test container 10 is used for a ⁇ -glucan test will be described with reference to FIGS. 19 and 20.
  • a test container 10 (see FIG. 8) is used, in which the first chamber 15 is equipped with a hydrophobic substance 19 as a sealing part, and the liquid storage part 24 is equipped with an LAL (Limulus Amebocyte Lysate) reagent as a reagent 32.
  • LAL Local Amebocyte Lysate
  • an inspection device having the same configuration as inspection device 100 can be used.
  • a sample liquid 40 is prepared by mixing the sample and a pretreatment liquid.
  • a dripping cap 66 equipped with a filter 64 is attached to the container 63 containing the sample liquid 40, and the sample liquid 40 filtered through the filter 64 is poured into the test container 10 from the inlet (step ST11).
  • the sample liquid 40 is stored in the liquid reservoir 13.
  • the input port 12 is closed by the lid portion 12A, and the internal space of the test container 10 is sealed (step ST12).
  • the test container 10 is loaded into the test apparatus 100 with the sample liquid 40 added thereto and the inlet 12 closed by the lid 12A. The following processing is performed within the inspection device 100.
  • the test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the sample liquid 40 is sent from the liquid reservoir 13 to the first chamber 15 (step ST13).
  • the sample liquid 40 is sent to the first chamber 15, and the hydrophobic substance 19 contained in the first chamber 15 is moved to the liquid reservoir 13.
  • the first heating unit 120 heats the first chamber 15 to raise the sample liquid 40 to 70°C for 10 minutes. Temperature control is carried out by heating and cooling to 3° C. (step ST14).
  • the pretreatment carried out here is a treatment in which the specimen liquid 40 is heated to stop the reaction cascade of endotoxin.
  • valve control unit 124 switches the valve 20 to the first state (step ST15). That is, the first chamber 15 and the liquid storage section 24 communicate with each other, and the liquid storage section 24 and the second chamber 16 do not communicate with each other.
  • the test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the sample liquid 40 is sent from the first chamber 15 to the liquid storage part 24 of the valve 20 (step ST16).
  • a reagent 32 is stored in the liquid storage section 24 , and the supplied sample liquid 40 and the reagent 32 are mixed in the liquid storage section 24 .
  • the reagent 32 is a freeze-dried reagent, and is dissolved and mixed with the sample liquid 40.
  • valve 20 is switched to the second state by the valve control unit 124 (see FIG. 14) (step ST17). That is, the second chamber 16 and the liquid storage section 24 communicate with each other, and the liquid storage section 24 and the first chamber 15 do not communicate with each other.
  • test container 10 is rotated by the centrifuge 110 of the test device 100, and the mixed liquid 42 of the sample liquid 40 and the reagent 32 is sent from the liquid storage part 24 of the valve 20 to the second chamber 16 (step ST18). .
  • the valve control unit 124 switches the valve 20 to the third state (step ST19).
  • the second chamber 16 and the liquid storage section 24 are not in communication with each other.
  • neither the first chamber 15 nor the second chamber 16 communicates with the liquid storage section 24, but since it is sufficient that the second chamber 16 and the liquid storage section 24 do not communicate with each other, It does not matter if it is in the 1 state.
  • the LAL reaction is detected for the mixed liquid 42 by a colorimetric method (step ST20). Detection using the colorimetric method is performed by the detection section 126 disposed on the second chamber 16. Irradiation light L having a specific wavelength is irradiated into the second chamber 16 from the light source 126a via the wavelength selection filter 126b. The LAL reaction is detected by detecting the absorbance (or transmittance) of the irradiated light L using the photodetector 126c.

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Abstract

検査容器は、遠心機に取り付けられ、遠心機の回転による遠心力によって、検体液が、第１チャンバから第２チャンバへ順に送液される検査容器であって、投入口から投入された検体液を、第１チャンバの手前で貯留する液溜め部と、第１チャンバから第２チャンバに送液される検体液を一時的に収容する液体収容部を有するバルブであって、第１チャンバと液体収容部とを連通し、かつ第２チャンバと液体収容部とは連通しない第１状態と、第２チャンバと液体収容部とを連通し、かつ第１チャンバと液体収容部とは連通しない第２状態と、第１チャンバ及び第２チャンバの両方と液体収容部とが連通しない第３状態とを切換え可能なバルブと、液溜め部から第１チャンバへ検体液を送液した後に、検体液の逆流を防ぐ封止部と、を備える。

Description

検査容器及び核酸検査方法
　本発明は、検査容器及び核酸検査方法に関する。
　生体試料から抽出された検体に対して各種分析を行うために用いられる検査用カートリッジあるいは分析チップなどの検査容器が知られている。例えば、検査容器は、液体を収容する複数のチャンバ（液体収容部）と、チャンバ間を接続する流路とを備えている。検査容器においては、電磁力、遠心力あるいは圧力などの外力を用いて、チャンバからチャンバへ検体液が送液される。
　特表２０１９－５１５３０８号公報には、試料チャンバの一端に設けられた試料入口（投入口）から投入される試料（検体液）を、遠心力により試料チャンバから混合チャンバへ送液するマイクロ流体チップが開示されている。特表２０１９－５１５３０８号公報のマイクロ流体チップは、試料チャンバと混合チャンバとの間に空気接続を提供するように構成される回路、すなわちベント流路を備えることで、スムーズに液体を送液可能にしている。
　特表２０１９－５１５３０８号公報のマイクロ流体チップにおいては、上流側の試料チャンバから下流側の混合チャンバへ流体を送液した後、両チャンバ間の流路は開放されたままとなっている。下流側チャンバにおいて、加熱温度を９０℃以上とする処理が必要な分析の場合、検体液が気化して上流側のチャンバに逆流してしまい、下流側チャンバ中の検体液量が不足する等による検査エラーが生じる場合がある。特表２０１９－５１５３０８号公報においては、検体液に対して前処理等のために検体液が送液された下流側のチャンバで加熱処理を実施することは開示されているが、加熱温度が６５℃程度と低いため、検体液の気化することによる上流側チャンバへの逆流の問題については考慮されていない。
　本開示は、上記事情に鑑みてなされたものであって、遠心力により送液を行うための検査容器において、下流側のチャンバから上流側のチャンバへの検体液の逆流を抑制することができる検査容器及び核酸検査方法を提供することを目的とする。
　本開示の検査容器は、検体液が投入される投入口と、投入口から送液される検体液が収容される第１チャンバと、第１チャンバから送液される検体液が収容される第２チャンバとを有し、遠心機に取り付けられ、遠心機の回転による遠心力によって、検体液が、第１チャンバから第２チャンバへ順に送液される検査容器であって、
　投入口を覆う着脱可能な蓋部と、
　投入口から投入された検体液を、第１チャンバの手前で貯留する液溜め部と、
　第１チャンバと第２チャンバとの間に配置され、第１チャンバから第２チャンバに送液される検体液を一時的に収容する液体収容部を有するバルブであって、第１チャンバと液体収容部とを連通し、かつ第２チャンバと液体収容部とは連通しない第１状態と、第２チャンバと液体収容部とを連通し、かつ第１チャンバと液体収容部とは連通しない第２状態と、第１チャンバ及び第２チャンバの両方と液体収容部とが連通しない第３状態とを切換え可能なバルブと、
　液溜め部から第１チャンバへ検体液を送液した後に、検体液の逆流を防ぐ封止部と、を備える。
　封止部は、検体液よりも比重の軽い疎水性物質であることが好ましい。
　疎水性物質は低極性溶媒又は熱可塑性物質であることが好ましい。
　疎水性物質は、液溜め部又は第１チャンバに備えられていることが好ましい。
　液溜め部よりも遠心機の回転軸に近い側に設けられた疎水性物質を収容する疎水性物質収容部を、さらに備えていてもよい。
　液溜め部の容積をＶ１、第１チャンバの容積をＶ２、液体収容部の容積をＶ３、第２チャンバの容積をＶ４とした場合に、Ｖ１≧Ｖ２≧Ｖ３≧Ｖ４という関係にあることが好ましい。
　検体液と反応させる試薬が、第１チャンバ、液体収容部又は第２チャンバに収容されていてもよい。
　試薬は、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用のプローブとを含む試薬とすることができる。
　プローブは蛍光プローブであってもよい。
　本開示の核酸検査方法は、本開示の検査容器であって、試薬が液体収容部に収容されている検査容器を用いた核酸検査方法であって、バルブは初期状態で第２状態、もしくは第３状態にあり、初期状態のまま、検査容器の投入口から、検体液を投入して、液溜め部に検体液を収容させ、
　投入口を蓋部によって密閉し、
　遠心力により液溜め部から第１チャンバへ検体液を送液させ、
　封止部により第１チャンバから液溜め部への検体液の逆流を防いだ状態で、第１チャンバを加熱して検体液を加熱処理し、
　バルブを第１状態に切り替え、
　遠心力により第１チャンバからバルブの液体収容部に検体液を送液して、液体収容部において、検体液と試薬とを混合し、
　バルブを第２状態に切り替え、
　遠心力により、液体収容部から第２チャンバに検体液及び試薬の混合液を送液し、
　バルブを第３状態もしくは第１状態に切り替え、
　第２チャンバにおいて、混合液を温調することにより、混合液中の特定の核酸配列を増幅し、
　励起光を混合液に照射し、蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
　特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する。
　本開示の検査容器及び核酸検査方法によれば、下流側のチャンバから上流側のチャンバへの検体液の逆流を抑制することができる。
一実施形態の検査容器１０の概略構成示す斜視図である。 図２Ａは検査容器１０の断面模式図であり、図２Ｂは流路構造の平面模式図である。 バルブ２０により第１状態に切り換えた状態を示す、図３Ａは検査容器１０の断面模式図であり、図３Ｂは流路構造の平面模式図である。 バルブ２０により第２状態に切り換えた状態を示す、図４Ａは検査容器１０の断面模式図であり、図４Ｂは流路構造の平面模式図である。 検査容器１０の態様を示す図である。 流路構造１１における液溜め部から第１チャンバへの検体液の送液前後を示す図である。 変形例の流路構造１１Ａにおける液溜め部から第１チャンバへの検体液の送液前後を示す図である。 試薬を備えた検査容器を示す模式図である。 変形例の検査容器５０の平面模式図である。 変形例の検査容器５２の平面模式図である。 検査容器５２の流路構造１１Ｂにおける液溜め部から第１チャンバへの検体液の送液前後を示す図である。 変形例の検査容器５３の平面模式図である。 変形例の検査容器５４における液溜め部から第１チャンバへの検体液の送液前後を示す図である。 一実施形態の検査装置１００の概略構成を示す図である。 変形例の検査装置１０１の概略構成を示す図である。 変形例の検査装置１０２の概略構成を示す図である。 核酸検査の工程を示す図である（その１）。 核酸検査の工程を示す図である（その２）。 β－グルカン検査の工程を示す図である（その１）。 β－グルカン検査の工程を示す図である（その２）。
　以下、図面を参照して本開示の実施形態を詳細に説明する。なお、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜変更している。各図において、同一の構成要素には同一の符号を付している。
「検査容器」
　図１は、一実施形態の検査容器１０を模式的に示す斜視図である。図２Ａは、検査容器１０の断面模式図であり、図２Ｂは、検査容器１０の流路構造１１を簡略化して示す平面模式図である。
　検査容器１０は、内部に複数のチャンバ及びチャンバ間を接続する流路を含む流路構造１１を有するマイクロ流路デバイスである。検査容器１０は、遠心機に取り付けられ、内部の液体は遠心機の回転による遠心力によって、チャンバからチャンバへ移送される。なお、本例の検査容器１０は、遠心機を備えた検査装置１００（図１４参照）に装填され、生化学分析の検査に供される検査容器である。
　検査容器１０は、流路及びチャンバを含む流路構造１１の一部を構成する凹部及び孔部等が形成された本体部材１０Ａと、流路の底面を構成する底部材１０Ｂとから構成されている（図２参照）。
　本体部材１０Ａは、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、耐熱性及び透明性の観点から、ポリカーボネート、ポリプロピレン、シクロオレフィンあるいはシリコーン樹脂が好ましい。
　底部材１０Ｂは、例えば、薄板あるいはフィルムにより形成されている。底部材１０Ｂとしては、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、本体部材１０Ａとの密着性の観点から、本体部材１０Ａと同じ材質が好ましい。なお、詳細は後述するが、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６を加熱する際において、加熱手段との密着を高め加熱を効率的に実施することができる観点から、底部材１０Ｂはフィルムにより構成されていることが好ましい。なお、本体部材１０Ａの上面側の第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６を構成する部分についてもフィルムで構成されていてもよい。
　検査容器１０は、投入口１２と、蓋部１２Ａと、液溜め部１３と、第１チャンバ１５と、第２チャンバ１６と、第１チャンバ１５と第２チャンバ１６との間に配置されたバルブ２０と、それらを接続する流路１８ａ～１８ｃと、封止部１９とを備える。なお、検査容器１０が備えた複数のチャンバとは、液溜め部１３、第１チャンバ１５、第２チャンバ１６及び液体収容部２４である。以下において、液溜め部１３、第１チャンバ１５、第２チャンバ１６及び液体収容部２４を区別する必要がない場合には、総括的にチャンバと称する場合がある。
　投入口１２は、検体液４０を投入するための開口である。蓋部１２Ａは投入口１２を覆い、投入口１２の開口に着脱可能な蓋部である。本例においては、蓋部１２Ａは投入口１２を形成する筒状部１４の端部に螺合可能に形成されている。着脱方法に関して特に制限はなく、例えば、スナップ式のキャップ構造や粘着剤を用いて蓋部１２Ａを筒状部１４に対して着脱してもよい。蓋部１２Ａは、検体液投入時には投入口１２を開放するが、検体液投入時以外は、投入口１２を閉じて外部からのコンタミの混入を排除すると共に内部からの検体液４０の蒸発を防止する。検体液４０は、例えば、被検者の鼻腔、咽頭、口腔及び患部などから採取した検体から核酸を抽出した液体である。
　なお、以下において、投入口１２が設けられている面を検査容器１０の上面、底部材１０Ｂ側を検査容器１０の下面と称する。ここで、本体部材１０Ａの上面は検査容器１０の上面と同一であり、本体部材１０Ａの下面は底部材１０Ｂの上面と接する面であり、底部材１０Ｂの下面は検査容器１０の下面と同一である。
　液溜め部１３は、投入口１２に対向する位置に設けられており、投入口１２から滴下された検体液４０を収容する。液溜め部１３の形状に特に制限はなく、柱状、錐状、錐台状など任意に選択することができる。
　本検査容器１０においては、本体部材１０Ａを厚み方向に貫き、本体部材１０Ａの上面から突出して形成された筒状部１４の開口によって、投入口１２が構成されており、筒状部１４の本体部材１０Ａの内部側部分と底部材１０Ｂとによって、液溜め部１３が形成されている。液溜め部１３は、投入口１２から投入された検体液４０を第１チャンバ１５の手前で貯留する空間である。
　第１チャンバ１５は、液体を収容可能なチャンバであり、投入口１２から液溜め部１３を介して送液される検体液４０が収容されるチャンバである。第１チャンバ１５は本体部材１０Ａの下面に設けられた凹部と、底部材１０Ｂとによって形成されている。
　第１チャンバ１５は、一例として、検査における前処理が実施されるチャンバであり、後述する検査装置１００（図１４参照）において、第１加熱部１２０による加熱処理が実施される。
　第２チャンバ１６は、液体を収容可能なチャンバであり、第１チャンバ１５から送液される検体液４０が収容されるチャンバである。本例においては、第２チャンバ１６は、後述のバルブ２０の液体収容部２４を介して、第１チャンバ１５から検体液４０が送液される。第２チャンバ１６は本体部材１０Ａの下面に設けられた凹部と、底部材１０Ｂとによって形成されている。
　第２チャンバ１６は、一例として、検査のための反応及び検出処理が実施されるチャンバであり、後述する検査装置１００（図１４参照）において、第２加熱部１２２による加熱処理が実施される。
　図２Ａに示すように、バルブ２０は、第１チャンバ１５から第２チャンバ１６に送液される検体液４０を一時的に収容する液体収容部２４を有する。バルブ２０は、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６と、液体収容部２４との接続状態を、次の第１状態と、第２状態と、第３状態とのいずれかの状態に切換えるバルブである。第１状態は、第１チャンバ１５と液体収容部２４とを連通し、かつ、第２チャンバ１６と液体収容部２４とは連通しない状態である。第２状態は、第２チャンバ１６と液体収容部２４とを連通し、かつ第１チャンバ１５と液体収容部２４とは連通しない状態である。第３状態は、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６の両方と液体収容部２４とは連通しない状態である。
　図２Ａは、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６の両方と液体収容部２４とは連通しない状態を示す。図２Ｂの流路構造を示す模式図において、流路１８ｂ上に示す×は、第１チャンバ１５と液体収容部２４が連通していない閉じた状態であることを模式的に示す。同様に、流路１８ｃ上に示す×は、液体収容部２４と第２チャンバ１６とが連通していない閉じた状態であることを模式的に示す。以下の図面においても、流路上に示す×は流路を介して接続されたチャンバ間が連通していないことを意味する。
　本検査容器１０におけるバルブ２０は、本体部材１０Ａの上面に設けられた円筒状の凹部と凹部を囲み本体部材１０Ａ上面から突出する部分とからなる筒状部２２中に配置される回転部材２５を有する。回転部材２５は外径が筒状部２２の内径より若干小さい円筒状部材であり、筒状部２２内において回転可能に設置される。回転部材２５内部に液体収容部２４が設けられており、底面に、液体収容部２４と連通する孔２４ａが１つ設けられている。筒状部２２の底面には流路１８ｂと連通する孔２２ａと、流路１８ｃと連通する孔２２ｂとを有する。孔２２ａ及び２２ｂにはそれぞれＯリング２６が備えられている。回転部材２５の上面には、回転部材２５を回転させる際に使用される摘み２５ａを備える。
　Ｏリング２６は、回転部材２５の底面の孔２４ａと筒状部２２の底面の孔２２ａ及び孔２２ｂのいずれか一方とを一致させ、液体収容部２４を流路１８ｂもしくは流路１８ｃと連通させた場合において、孔２４ａと孔２２ａもしくは孔２２ｂとの接続部からの漏れ防止の機能を奏する。漏れ防止のためのシール手段としては、Ｏリング２６の他、パッキンやガスケットなど公知のシール部材を特に制限なく利用できる。シール手段の材料としては、例えばニトリルゴム、ウレタンゴム、シリコンゴム及びフッ素ゴムなどのゴム材料、あるいは、オレフィン及び、ウレタンなどの公知のエラストマーを用いることができる。また、シール部が、回転部材２５もしくは本体部材１０Ａの筒状部２２に一体的に成形されていてもよい。
　回転部材２５を回転させることで、回転部材２５の底面の孔２４ａと、筒状部２２の底面の孔２２ａとが一致した状態、孔２４ａと孔２２ｂとが一致した状態、及び孔２４ａが孔２２ａ及び２２ｂのいずれにも一致しない状態とすることができる。
　流路１８ａ～１８ｃはいずれも、本体部材１０Ａの下面に設けられた凹部と、底部材１０Ｂとによって形成されている。流路１８ａは、液溜め部１３と第１チャンバ１５とを接続する流路である。流路１８ｂは、第１チャンバ１５とバルブ２０の液体収容部２４とを接続する流路である。流路１８ｂは、バルブ２０の筒状部２２の底面の孔２２ａと連通している。流路１８ｃは、第２チャンバ１６とバルブ２０の液体収容部２４とを接続する流路である。流路１８ｃは、筒状部２２の底面の孔２２ｂと連通している。流路１８ａ～１８ｃの断面サイズは一例として、０．５ｍｍ～１ｍｍ幅、深さ０．５ｍｍ程度である。
　図３及び図４は、バルブ２０により切り換えられる第１状態及び第２状態を説明するための図である。図３は第１状態にある検査容器１０の説明図であって、図３Ａは検査容器１０の断面模式図であり、図３Ｂは流路構造１１の平面模式図である。図４は第２状態にある検査容器１０の説明図であって、図４Ａは検査容器１０の断面模式図であり、図４Ｂは流路構造１１の平面模式図である。
　図３では、回転部材２５の底面の孔２４ａが筒状部２２の底面の孔２２ａと一致している。このとき、第１チャンバ１５と液体収容部２４とを連通し、かつ、第２チャンバ１６と液体収容部２４とは連通しない第１状態にある。
　図４に示すように、回転部材２５の底面の孔２４ａが筒状部２２の底面の孔２２ｂと一致している。このとき、第２チャンバ１６と液体収容部２４とを連通し、かつ第１チャンバ１５と液体収容部２４とは連通しない第２状態にある。
　そして、図２に示すように、回転部材２５の底面の孔２４ａが筒状部２２の底面の孔２２ａ及び孔２２ｂのいずれとも一致してない状態が、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６の両方と液体収容部２４とが連通しない第３状態である。
　このように、バルブ２０は、回転部材２５を本体部材１０Ａの筒状部２２内で回転させることにより、第１状態、第２状態及び第３状態を切り替えることができる回転バルブである。なお、バルブ２０としては、上記第１状態～第３状態を実現できればよく、上記構造の回転バルブに限定されるものではない。
　図２に示すように、封止部１９は、液溜め部１３から第１チャンバ１５へ検体液４０を送液した後に、検体液４０の逆流を防ぐために流路構造１１の一部に備えられている。
　図２に示す例において、封止部１９は、検体液４０よりも比重の軽い疎水性物質である（以下において、疎水性物質１９という）。
　疎水性物質１９は、低極性溶媒又は熱可塑性物質である。疎水性物質１９は常温で液体の物質、もしくは、常温で固体であるが加熱により液状になる物質であればよい。低極性溶媒としては、シリコーンオイル、炭化水素系溶媒、フッ素系溶剤及び四塩化炭素などが挙げられる。ここで、低極性とは、検体液４０と混ざらない程度の極性であることを意味する。熱可塑性物質としては、各種ワックス及び接着剤などが挙げられる。
　疎水性物質１９は、本構成の検査容器１０においては、液溜め部１３又は第１チャンバ１５に備えられる。図２で示す例では、疎水性物質１９は第１チャンバ１５に備えられている。
　検査容器１０は、一例として、図５に示すようなディスク状支持体１１１の装填部１１１Ａにセットされ、遠心機１１０が備えられた検査装置１００（図１３参照）において、軸Ａを中心に回転される。検査容器１０は、回転中心となる軸Ａに近い内径側から液溜め部１３、第１チャンバ１５、液体収容部２４及び第２チャンバ１６の順になるように遠心機１１０にセットされる。
　投入口１２から投入される検体液４０は、液溜め部１３から第１チャンバ１５への送液、第１チャンバ１５から液体収容部２４への送液、及び液体収容部２４から第２チャンバ１６への送液は、それぞれ、遠心機１１０の回転による遠心力によって実現される。
　ここで、液溜め部１３から第１チャンバ１５への検体液４０の送液方法及び疎水性物質１９の機能について図６を参照して説明する。図６は、流路構造１１における、液溜め部１３から第１チャンバ１５への検体液４０の送液前後の状態を示す。
　検体液４０の投入は、バルブ２０によって、第１チャンバ１５と、バルブ２０の液体収容部２４とが連通しない状態で実施される。図６の例では、第１チャンバ１５と第２チャンバ１６のいずれもが液体収容部２４と連通しない第３状態とされているが、第２状態であっても構わない。
　図６に左図に示すように、投入口１２から検体液４０が投入された直後は、液溜め部１３に検体液４０が貯留された状態である。この時点では疎水性物質１９は第１チャンバ１５に収容されている。この状態で、遠心機にて回転されることにより、図６の右図に示すように、相対的に比重の重い検体液４０が中心から離れた外径側に、相対的に比重の軽い疎水性物質１９が内径側に移動するため、結果として、検体液４０が液溜め部１３から第１チャンバ１５に送液されることになる。
　このように、本実施形態の検査容器１０は、液溜め部１３から第１チャンバ１５へ検体液４０を送液した後に、検体液４０の逆流を防ぐ封止部１９（本例では、疎水性物質１９）を備えている。係る構成によれば、第１チャンバ１５に検体液４０が収容された状態で、検体液４０に対する前処理のために第１チャンバ１５が加熱された場合、例えば、９０℃以上の高温に加熱された場合に、検体液４０が液溜め部１３に逆流するのを抑制することができる。
　本実施形態のように、封止部として疎水性物質１９を備えている場合、第１チャンバ１５へ検体液４０を送液した後は、検体液４０と疎水性物質１９が入れ替わり液溜め部１３に疎水性物質１９が収容された状態となる。液溜め部１３に疎水性物質１９が収容されているので、疎水性物質１９を備えず液溜め部１３に空気のみが存在する場合と比較して、気化した検体液４０が液溜め部１３へ逆流するのを抑制することができる。機械的な構造を付与することなく第１チャンバ１５から液溜め部１３への検体液４０の逆流を抑制することができ、非常に簡便であり、低コストに封止部を実現できる。
　なお、疎水性物質１９が液溜め部１３を満たすだけの体積分備えられていることが好ましい。検体液４０を第１チャンバ１５に送液した後、疎水性物質１９が液溜め部１３を満たしていれば、第１チャンバ１５から液溜め部１３への検体液４０の逆流をより効果的に抑制することができる。
　疎水性物質１９が低極性溶媒である場合、検体液４０と混ざらないので、検体液４０が液溜め部１３に逆流するのを抑制できる。
　疎水性物質１９が熱可塑性物質である場合、疎水性物質１９を液状化させ、検体液４０を送液することで、疎水性物質１９を液溜め部１３に送液され、液溜め部１３で冷却することで固体化する。これにより、液溜め部１３への検体液４０の逆流を効果的に抑制することができる。
　上記実施形態では、疎水性物質１９は、検体液４０の投入前において、液溜め部１３もしくは第１チャンバ１５に備えられている。疎水性物質１９を備える部分をこれらに限らない。変形例の流路構造１１Ａとして、図７に示すように、液溜め部１３よりも遠心機の回転軸に近い側に設けられた疎水性物質収容部１７を備え、疎水性物質１９が疎水性物質収容部１７に収容されていてもよい。
　変形例の流路構造１１Ａを備えた検査容器では、検体液４０が投入口１２から投入され液溜め部１３に収容された状態において、疎水性物質１９は、疎水性物質収容部１７に収容されている。この状態で、遠心機にて回転されることにより、図７の右図に示すように、検体液４０が液溜め部１３から第１チャンバ１５に送液され、疎水性物質１９は液溜め部１３側に送液される。
　このように、液溜め部１３よりも遠心機の回転軸に近い側に設けられた疎水性物質収容部１７に疎水性物質１９を備えた場合にも、検体液４０の送液後において、液溜め部１３に疎水性物質１９が収容されているので、検体液４０の液溜め部１３への逆流を抑制することができる。
　流路構造１１（あるいは流路構造１１Ａ）において、液溜め部１３の容積をＶ１、第１チャンバ１５の容積をＶ２、液体収容部２４の容積をＶ３、第２チャンバ１６の容積をＶ４とした場合に、Ｖ１≧Ｖ２≧Ｖ３≧Ｖ４という関係にあることが好ましい。すなわち、隣り合うチャンバの容積は等しい、もしくは、遠心の中心内径側から外径側に配置されている複数のチャンバのうち、外径側に配置されているチャンバほど容積が小さいことが好ましい。
　一例として、液溜め部１３の容積Ｖ１は、１００μＬ超～２００μＬ、第１チャンバ１５の容積Ｖ２は１００μＬ、液体収容部２４の容積Ｖ３は５０μＬ、第２チャンバ１６の容積Ｖ４は３０μＬなどである。
　液溜め部１３の容積Ｖ１が第１チャンバ１５よりも大きければ、液溜め部１３に第１チャンバ１５の容積Ｖ２よりも多くの検体液４０を貯留させることができる。そして、遠心の中心内径側から外径側に向けて配置されている複数のチャンバの容積の関係がＶ１≧Ｖ２≧Ｖ３≧Ｖ４であれば、遠心の中心内径側に配置されたチャンバから外径側に配置されたチャンバに検体液４０を送液した際に、外径側（すなわち下流側）のチャンバを検体液４０で満たすことができる。そのため、最終的に検出に用いられる第２チャンバ１６において、検体液４０の不足が生じるのを抑制できる。
　検査容器１０は、図８に示すように、検体液４０と反応させる試薬３２を流路構造１１内に備えていてもよい。例えば、検査容器１０が核酸検出に用いられる場合、試薬３２は、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用の蛍光プローブとを含む試薬である。試薬３２は、液溜め部１３、第１チャンバ１５、液体収容部２４及び第２チャンバ１６のいずれに備えられていてもよい。試薬３２は、第１チャンバ１５もしくは液体収容部２４に備えられていることが好ましく、液体収容部２４に備えられていることが特に好ましい。
　なお、試薬３２が収容されているチャンバもしくはそれよりも下流側のチャンバに検体液４０と試薬３２との混合を促進するための攪拌棒が内包されていてもよい。
　なお、上記実施形態の検査容器１０は、投入口１２から第２チャンバ１６までの流路構造１１を１つ備える形態である。変形例の検査容器５０として、図９に示すように、１つの検査容器５０に、複数の流路構造１１を備えてもよい。図９に示す検査容器５０は、ディスク状の本体部材及び底部材を備え、回転軸Ａを中心に放射状に配置された４つの流路構造１１を備えている。もちろん、１つの検査容器５０が備える流路構造１１の数は４つに限るものではない。
　また、図１０に示す変形例の検査容器５２のように、流路構造１１Ｂに、ベント流路３５を備えていてもよい。本例において、ベント流路３５は、第１チャンバ１５と液溜め部１３とを接続する流路である。ベント流路３５は、気体が通過する流路である。ベント流路３５を備えることにより、液溜め部１３から第１チャンバ１５への検体液４０の送液が容易になり、効率の良い送液が可能になる。一方で、ベント流路３５を備えると、検体液４０を第１チャンバ１５へ送液した後に、第１チャンバ１５を前処理のために高温に加熱した場合、気化した検体液４０がベント流路３５を通じて液溜め部１３に戻ってしまう場合がある。しかし、本実施形態においては液溜め部１３に疎水性物質が収容されているので、ベント流路３５からの検体液４０の逆流も抑制することができる。
　図１１に、検査容器５２の流路構造１１Ｂにおける送液前後の状態を示す。図１１に示すように、検体液４０を第１チャンバ１５に送液した後において、疎水性物質１９が液溜め部１３を満たし、第１チャンバ１５に一部残留させ、第１チャンバ１５のベント流路３５の入り口を疎水性物質１９で塞ぐようにすれば、ベント流路３５への検体液４０の逆流をより効果的に防止することができる。
　但し、ベント流路３５を完全に塞げない場合があることを考慮すると、検査容器１０のように、ベント流路を備えないことがより好ましい。
　また、図１２に示す変形例の検査容器５３のように、複数の第２チャンバ１６ａ～１６ｃを備えてもよい。複数の第２チャンバ１６ａ～１６ｃを備えた場合、１つの検体に対して同一の検査を複数の第２チャンバ１６ａ～１６ｃで実施することにより、検査精度を向上させることができる。 また、複数の第２チャンバ１６ａ～１６ｃを備えた場合、１つの検体に対して、複数の検査対象物質を並行して検査を実施することもできる。１つ目の第２チャンバ１６ａでインフルエンザ、２つ目の第２チャンバ１６ｂで新型コロナ、３つ目の第２チャンバ１６ｃでＲＳ（Respiratory syncytial）ウイルスを検査するなどであ
る。図１２に示す例では３つの第２チャンバ１６ａ～１６ｃを備えた例を挙げているが、第２チャンバの数に制限はない。但し、複数の第２チャンバ１６ａ～１６ｃを備えた場合、全ての第２チャンバ１６ａ～１６ｃの総容積が、バルブ２０の液体収容部２４の容積よりも小さいことが望ましい。
　上記実施形態においては、封止部として、疎水性物質１９を備えているが、封止部は、液溜め部１３から第１チャンバ１５へ検体液４０を送液した後に、検体液４０の逆流を防ぐ機能を奏するものであればよく、液溜め部１３と第１チャンバ１５との間に逆止弁などの構造を備えていてもよい。
　図１３は、変形例の検査容器５４の断面模式図を示す。また、図１３には、流路構造１１における、液溜め部１３から第１チャンバ１５への検体液４０の送液前後の状態を示す。
　検査容器５４は、液溜め部１３と第１チャンバ１５とを接続する流路２９ａは液溜め部１３側から第１チャンバ１５側に向けて径が徐々に大きくなるテーパ状に形成されている。流路２９ａ内には球体２９ｂが備えられている。球体２９ｂの直径は流路２９ａの最も液溜め部１３側の直径よりも大きい。流路２９ａの第１チャンバ１５側の一部には球体２９ｂが第１チャンバ１５への移動を制限するストッパ２９ｃが設けられている。本例においては、流路２９ａ、球体２９ｂ及びストッパ２９ｃにより、液溜め部１３から第１チャンバ１５へ検体液４０を送液した後に、検体液４０の逆流を防ぐ封止部２９が構成されている。
　検査容器５４は、送液前において、球体２９ｂは流路２９ａ中において移動可能に配置されている。図１３の上図において、検体液４０が投入口１２から投入され液溜め部１３に貯留されている。既述の実施形態の場合と同様に、検査容器５４は、第１チャンバ１５と液体収容部２４との間は閉じられた状態で、遠心機にて回転される。これにより、図１３の下図に示すように、検体液４０は遠心力により第１チャンバ１５に送液される。第１チャンバ１５が検体液４０で満たされてくると、球体２９ｂは検体液４０により徐々に液溜め部１３側に押され、球体２９ｂの直径と同等の直径を有する部分まで移動される。これにより、球体２９ｂが流路２９ａを塞ぐ逆止弁となる。
　本構成によれば、係る構成によれば、第１チャンバ１５に検体液４０が収容された状態で、検体液４０に対する前処理のために第１チャンバ１５が加熱された場合、例えば、９０℃以上の高温に加熱された場合に、検体液４０が気化して第１チャンバ１５内の圧力が高まれば、球体２９ｂはより液溜め部１３側に押し付けられ、流路２９ａを封止することになる。したがって、液溜め部１３に検体液４０が逆流するのを抑制することができる。
　また、封止部としては、液溜め部１３と第１チャンバ１５とを接続する流路１８ｃの底面を構成する底部材１０Ｂをフィルムで構成し、底部材１０Ｂを外部から押さえ付けることにより流路１８ｃを塞ぐことを可能とした構成を備えてもよい。
　なお、上述した各検査容器１０、５０、５２、５４における流路構造１１、１１Ａ、１１Ｂには、さらに、第２チャンバ１６と連通する、変形可能なチャンバを備えていてもよい。変形可能なチャンバを外部から押圧する等により変形させることで、変形可能なチャンバ及びそのチャンバに連通する第２チャンバ１６内を加圧することができる。第２チャンバ１６内を加圧することにより、第２チャンバ１６内に収容される液体の昇温性及び冷却性を向上させることができる。また、第２チャンバ１６内を加圧することにより、加熱時において、内部の液体が気化するのを抑制することができる。
「検査装置」
　検査容器１０が装填され、検査を実施するための検査装置１００について図１４を参照して説明する。図１４は検査装置１００の概略構成を示す図である。検査装置１００は、一例として、核酸検査装置である。
　検査装置１００は、遠心機１１０と、第１加熱部１２０と、第２加熱部１２２と、バルブ制御部１２４と、検出部１２６とを備える。
　遠心機１１０は、モータ等の回転機構を備えた台座１１２と、検査容器１０を装填する装填部１１１Ａ（図５参照）を備えた、回転台を構成するディスク状支持体１１１と、回転機構の軸に接続され、ディスク状支持体１１１を回転可能に支持する回転カプラ１１４とを備える。回転機構を駆動することにより、軸Ａを中心にディスク状支持体１１１が回転される。この回転に伴う遠心力により、検査容器１０内の流路構造において送液が実現される。図１３に示す例において、ディスク状支持体１１１は、装填部１１１Ａにセットされた検査容器１０を押さえる押え１１１Ｂを有している。
　第１加熱部１２０は、ディスク状支持体１１１にセットされた検査容器１０の第１チャンバ１５の底面と接触する位置と、離隔した位置との間で移動可能に備えられている。第１加熱部１２０は、ディスク状支持体１１１が回転している間は、第１チャンバ１５の底面から離隔した位置に配置され、ディスク状支持体１１１が停止した状態で、第１チャンバ１５の底面と接触する位置に配置される。第１加熱部１２０は、第１チャンバ１５に収容された液体を加熱する。ここで、第１チャンバ１５に収容される液体は、検体液４０である。第１加熱部１２０は、前処理のために検体液４０を、例えば、９０℃以上の高温に加熱する。
　第２加熱部１２２は、ディスク状支持体１１１にセットされた検査容器１０の第２チャンバ１６の底面と接触する位置と、離隔した位置との間で移動可能に備えられている。第２加熱部１２２は、ディスク状支持体１１１が回転している間は、第２チャンバ１６の底面から離隔した位置に配置され、ディスク状支持体１１１が停止した状態で、第２チャンバ１６の底面と接触する位置に配置される。第２加熱部１２２は、第２チャンバ１６に収容された液体を加熱する。ここで、第２チャンバ１６に収容される液体は、例えば、検体液４０と試薬３２との混合液である。第２加熱部１２２は、検体液４０と試薬３２との混合液を加熱して、核酸増幅を促進させる。
　第２加熱部１２２は、ペルチェ素子などを備え温調可能とされており、核酸増幅工程における温度サイクルを実施する。他方、第１加熱部１２０は、第２加熱部１２２のような温度サイクルは不要であり、例えば、ヒーターから構成される。第１加熱部１２０及び第２加熱部１２２それぞれに用いられる加熱機構は、公知の加熱機構を用いることができ、特に制限されない。
　バルブ制御部１２４は、バルブ２０を制御して第１チャンバ１５、第２チャンバ１６及び液体収容部２４の連通状態を、第１状態、第２状態及び第３状態に切り替えるための機構を備える。バルブ制御部１２４は、例えば、回転部材２５の摘み２５ａを把持する把持部と、把持部により摘み２５ａを把持させた状態で、把持部を回転させる回転機構と、検査の処理工程において、必要に応じて回転機構を駆動させるプロセッサとを備える。
　検出部１２６は、第２チャンバ１６において、検体液４０中に検出対象物が含まれているか否かを検出する。検出部１２６は、図１７に示すように、光源１２６ａと、波長選択フィルタ１２６ｂと、光検出器１２６ｃとを備える。検出部１２６は、検査容器１０の第２チャンバ１６の上方に配置されている。検出部１２６による検出も遠心機１１０による回転が停止された状態で実施される。光源１２６ａは、波長選択フィルタ１２６ｂを介して、特定の波長の励起光Ｌ１を第２チャンバ１６内に照射する。光検出器１２６ｃは、励起光Ｌ１によって励起されて蛍光プローブから生じる蛍光Ｌ２を検出する。励起光Ｌ１は蛍光プローブの励起波長に応じて選択される。また、必要に応じて、強度や光量を調整するフィルタ、励起光Ｌ１を収束したり検出プローブ由来の蛍光Ｌ２を光検出器１２６ｃへ集光するためのレンズ、あるいは光学系などを含んでもよい。
　光源１２６ａとしては、ＬＥＤあるいはレーザなどが用いられる。波長選択フィルタ１２６ｂは、光源１２６ａから発せられた光のうちプローブの励起波長に応じた波長のみを透過するフィルタである。光検出器１２６ｃとしては、例えばフォトダイオードあるいは光電子増倍管などが適用される。
　検査容器１０が使用される検査装置としては、上述の図１４に示した検査装置１００の他、図１５に示す検査装置１０１、あるいは図１６に示す検査装置１０２などにおいても適用可能である。図１５及び図１６において、図１４に示す検査装置１００と同等の構成要素には同一符号を付して詳細な説明を省略する。
　検査装置１０１及び検査装置１０２は、それぞれ検査装置１００の遠心機１１０と異なる構造を有する遠心機１１０Ａ，１１０Ｂを備えている。
　図１５に示す検査装置１０１は、遠心機１１０Ａが、ディスク状支持体１１１の面を水
平面から傾けた状態で回転させるよう構成されている。遠心機１１０Ａの回転軸Ａが水平面に垂直な方向から傾くように構成されている。
　図１６に示す検査装置１０１は、遠心機１１０Ｂが、ディスク状支持体１１１の代わりに、傘状支持体１３１を備えている。傘状支持体１３１は、回転カプラ１１４に支持された水平部と、水平部を囲むように水平部に対して外周側が鉛直方向下方に位置する傾斜部とを備え、傾斜部に検査容器１０がセットされる。
　検査容器１０は、図１４～図１６に示すような各種の遠心機１１０Ａ，１１０Ｂ及び１１０Ｃのいずれの構成の遠心機であっても、適用可能である。
　上記においては、検査装置１００、１０１及び１０２について、核酸増幅処理を伴う核酸検査に用いられる核酸検査装置として説明している。検査装置１００、１０１及び１０２において、第１加熱部１２０、第２加熱部１２２、及び検出部１２６を、各種検査に適する構成とすることによって、核酸検査以外の各種検査のための装置とすることができる。
「核酸検査方法」
　上記実施形態の検査容器１０を用いた一実施形態の核酸検査方法について図１７及び図１８を参照して説明する。ここでは、第１チャンバ１５に封止部としての疎水性物質１９を備え、液体収容部２４に核酸検査用の試薬３２が備えられた検査容器１０（図８参照）を用いる。
　まず、図１７に示すように、事前準備として、スワブなどの採取具６０を用いて生体から採取された検体４０ａを、界面活性剤、ProK（プロテイナーゼＫ（proteinase K））を含む抽出液６２中に浸漬させ、核酸の抽出と夾雑物の処理を行う。以下において、抽出液６２に検体４０ａが混合され、抽出液６２中で核酸抽出がなされた検体４０ａを含む液体を検体液４０という。
　検体４０ａは、例えば、被検者の鼻腔、咽頭、口腔内部あるいは患部から採取具を用いて採取する。もしくは、鼻腔、咽頭、口腔内部の洗浄液、唾液、尿あるいは血液などの体液である。核酸抽出方法としては、公知の核酸抽出方法を特に制限なく利用できる。例えば、界面活性剤やカオトロピック物質を用いる方法、超音波やビーズミルなどの物理的なせん断を加える方法が挙げられる。
　検査容器１０は検体液４０を投入する前の初期状態において、バルブ２０は、少なくとも第１チャンバ１５と液体収容部２４とが連通しない第２状態もしくは第３状態にしておく。本実施形態においては、第１チャンバ１５及び第２チャンバ１６のいずれもが液体収容部２４と連通しない第３状態とする。検査においては、まず、バルブ２０を初期状態のまま上記のようにして、抽出液中で核酸抽出がなされた検体４０ａを含む検体液４０を収容する容器６３に粗大な夾雑物を除去するフィルタ６４を備えた滴下用のキャップ６６を取り付け、フィルタ６４で濾した検体液４０を検査容器１０の投入口１２から投入する（工程ＳＴ１）。検体液４０は液溜め部１３に貯留される。
　検体液４０の投入完了後には蓋部１２Ａにより投入口１２を閉じて、検査容器１０の内部空間を密閉する（工程ＳＴ２）。検査容器１０は、検体液４０が投入され、蓋部１２Ａにより投入口１２が閉じられた状態で、検査装置１００に装填される。以下の処理は、検査装置１００内において実施される。
　検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０を液溜め部１３から第１チャンバ１５へ送液する（工程ＳＴ３）。検体液４０が第１チャンバ１５に送液されると共に、第１チャンバ１５に収容されていた疎水性物質１９が液溜め部１３に移動される。
　疎水性物質１９により第１チャンバ１５から液溜め部１３への検体液４０の逆流を防いだ状態で、第１加熱部１２０により第１チャンバ１５を加熱して検体液４０を加熱処理による前処理を実施する（工程ＳＴ４）。この加熱処理によりProKを失活させる。加熱温度としては、例えば８０℃以上が好ましく、８５℃以上がより好ましく、９０℃以上が更に好ましい。上限温度としては、検体液の蒸発の観点で１００℃以下が好ましく、９５℃以下がより好ましい。
　前処理後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第１状態に切り換える（工程ＳＴ５）。すなわち、第１チャンバ１５と液体収容部２４とが連通し、かつ、液体収容部２４と第２チャンバ１６とが連通しない状態とする。
　次に、検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０を第１チャンバ１５からバルブ２０の液体収容部２４へ送液する（工程ＳＴ６）。液体収容部２４には試薬３２が収容されており、液体収容部２４において、送液された検体液４０と試薬３２とを混合する。
　検体液４０と試薬３２とを混合させた後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第２状態に切り換える（工程ＳＴ７）。すなわち、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通し、かつ、液体収容部２４と第１チャンバ１５とが連通しない状態とする。
　そして、検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０と試薬３２との混合液４２をバルブ２０の液体収容部２４から第２チャンバ１６へ送液する（工程ＳＴ８）。
　混合液４２を第２チャンバ１６へ送液した後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第３状態に切り換える（工程ＳＴ９）。ここでは、少なくとも、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通しない状態とする。本例では、第１チャンバ１５と第２チャンバ１６とのいずれもが液体収容部２４と連通しない状態とするが、第２チャンバ１６と液体収容部２４が連通しない状態であればよいため、第１状態としてもかまわない。
　ここで、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通しない状態で、混合液４２に対する核酸増幅処理及び蛍光検出が実施される（工程ＳＴ１０）。
　核酸増幅処理は、第２加熱部１２２により第２チャンバ１６内の混合液４２を加熱して、特定の核酸配列を増幅させる処理である。なお、核酸増幅処理方法は限定されるものではないが、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ法、あるいはＰＣＲ法を用いる。ＰＣＲ法を用いる場合、二本鎖ＤＮＡを高温で一本鎖ＤＮＡに解離させる工程（熱変性工程）、その後温度を下げてプライマーを一本鎖ＤＮＡに結合させる工程（アニーリング工程）、および一本鎖ＤＮＡを鋳型として、ポリメラーゼにより、新たに二重鎖ＤＮＡを合成する工程（伸長工程）を繰り返す。熱変性工程、アニーリング工程及び伸長工程の温度サイクルの一例として、９４℃で１分、５０～６０℃で１分、７２℃で１～５分を１サイクルとして、２０～５０回繰り返すものが挙げられる。また、熱変性工程、アニーリング工程を１つの温度で行ってもよい。このような温度サイクルの一例としては、例えば、９４℃で１分、６０℃で１分を１サイクルとして、２０～５０回繰り返すものが挙げられる。増幅工程における温度サイクルの温度、時間は特に制限はなく、ポリメラーゼやプライマーの性能により任意に選択される。
　蛍光検出は、第２チャンバ１６の上方に配置された検出部１２６により実施される。光源１２６ａから、波長選択フィルタ１２６ｂを介して、特定の波長の励起光Ｌ１が第２チャンバ１６内に照射される。光検出器１２６ｃにより、励起光Ｌ１によって励起されて蛍光プローブから生じる蛍光Ｌ２を検出する。例えば、核酸増幅処理がＰＣＲ法である場合、上記の温度サイクルの１サイクルごとに蛍光検出を行いリアルタイムに増幅状況をモニタリングする。
　検体液４０内に特定の核酸配列が存在した場合、増幅工程でその核酸配列が増幅され、この特定の核酸配列に標識される蛍光プローブに励起光Ｌ１が照射されることにより、蛍光Ｌ２が検出される。他方、検体液４０内に特定の核酸配列が存在しない場合には、励起光Ｌ１を照射しても蛍光Ｌ２が検出されない。これによって、特定の核酸配列の有無を判定することができる。
　本検査容器１０を用いた検査方法によれば、液溜め部１３から第１チャンバ１５に送液された検体液４０を第１チャンバ１５において、高温加熱による前処理を実施するが、検体液４０が液溜め部１３に逆流するのを防ぐ封止部（本例では疎水性物質１９）を備えているので、検体液４０の逆流を抑制できる。これにより、最終的に第２チャンバ１６において処理される検体液４０の液量の減少を抑制できるので、検査精度を向上させることができる。
　上記検査装置１００を用いた検査方法においては、蛍光プローブを用いた蛍光法により、核酸の有無の判定を行っているが、核酸の有無の検出方法としては、蛍光法に限らず、核酸クロマト法、光散乱法、シーケンス法及び電気化学法などの他の検出方法を用いてもよい。これらは、検出部を適宜変更することで実現可能であり、検査容器に、蛍光プローブに代えて、各検出方法に応じたプローブを含む試薬を備えればよい。
　上記において、検査容器１０を用いた検査として核酸検査を挙げたが、検査容器１０は核酸検査のみならず、他の遺伝子検査あるいは微生物検査などにおいても適用可能である。
　微生物検査の一例として、β－グルカン検査に検査容器１０を用いる例を図１９及び図２０を参照して説明する。ここでは、第１チャンバ１５に封止部としての疎水性物質１９を備え、液体収容部２４に試薬３２としてＬＡＬ（Limulus Amebocyte Lysate）試薬が備えられた検査容器１０（図８参照）を用いる。本例では、検査装置１００と同様の構成の検査装置を用いることができる。
　検体と前処理液とを混合して検体液４０を調製する。検体液４０を収容した容器６３にフィルタ６４を備えた滴下用のキャップ６６を取り付け、フィルタ６４で濾した検体液４０を検査容器１０の投入口から投入する（工程ＳＴ１１）。検体液４０は液溜め部１３に貯留される。
　検体液４０の投入完了後には蓋部１２Ａにより投入口１２を閉じて、検査容器１０の内部空間を密閉する（工程ＳＴ１２）。検査容器１０は、検体液４０が投入され、蓋部１２Ａにより投入口１２が閉じられた状態で、検査装置１００に装填される。以下の処理は、検査装置１００内において実施される。
　検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０を液溜め部１３から第１チャンバ１５へ送液する（工程ＳＴ１３）。検体液４０が第１チャンバ１５に送液されると共に、第１チャンバ１５に収容されていた疎水性物質１９が液溜め部１３に移動される。
　疎水性物質１９により第１チャンバ１５から液溜め部１３への検体液４０の逆流を防いだ状態で、第１加熱部１２０により第１チャンバ１５を加熱して検体液４０を７０℃１０分昇温し、３℃に冷却する温調を実施する（工程ＳＴ1４）。ここで実施する前処理は検体液４０を加熱し、エンドトキシンの反応カスケードを止める処理である。
　前処理後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第１状態に切り換える（工程ＳＴ１５）。すなわち、第１チャンバ１５と液体収容部２４とが連通し、かつ、液体収容部２４と第２チャンバ１６とが連通しない状態とする。
　次に、検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０を第１チャンバ１５からバルブ２０の液体収容部２４へ送液する（工程ＳＴ１６）。液体収容部２４には試薬３２が収容されており、液体収容部２４において、送液された検体液４０と試薬３２とを混合する。試薬３２は凍乾試薬であり、検体液４０により溶解して混合される。
　検体液４０と試薬３２とを混合させた後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第２状態に切り換える（工程ＳＴ１７）。すなわち、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通し、かつ、液体収容部２４と第１チャンバ１５とが連通しない状態とする。
　そして、検査容器１０を検査装置１００の遠心機１１０により、回転させ、検体液４０と試薬３２との混合液４２をバルブ２０の液体収容部２４から第２チャンバ１６へ送液する（工程ＳＴ１８）。
　混合液４２を第２チャンバ１６へ送液した後、バルブ制御部１２４（図１４参照）によりバルブ２０を第３状態に切り換える（工程ＳＴ１９）。ここでは、少なくとも、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通しない状態とする。本例では、第１チャンバ１５と第２チャンバ１６とのいずれもが液体収容部２４と連通しない状態とするが、第２チャンバ１６と液体収容部２４が連通しない状態であればよいため、第１状態としてもかまわない。
　ここで、第２チャンバ１６と液体収容部２４とが連通しない状態で、混合液４２に対し、ＬＡＬ反応を比色法により検出する（工程ＳＴ２０）。比色法による検出は、第２チャンバ１６上に配置された検出部１２６により実施される。光源１２６ａから、波長選択フィルタ１２６ｂを介して、特定の波長の照射光Ｌが第２チャンバ１６内に照射される。光検出器１２６ｃにより、照射光Ｌの吸光度（もしくは透過率）を検出することによりＬＡＬ反応を検出する。
　このように、β－グルカン検査においても、核酸検査の場合と同様に、検査容器１０を用い、同様の効果を得ることができる。
　２０２２年３月３０日に出願された日本国特許出願２０２２－０５７５２５号の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
　本明細書に記載された全ての文献、特許出願及び技術規格は、個々の文献、特許出願及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。

Claims (10)

  1. 　検体液が投入される投入口と、前記投入口から送液される前記検体液が収容される第１チャンバと、前記第１チャンバから送液される前記検体液が収容される第２チャンバとを有し、遠心機に取り付けられ、前記遠心機の回転による遠心力によって、前記検体液が、前記第１チャンバから前記第２チャンバへ順に送液される検査容器であって、
    　前記投入口を覆う着脱可能な蓋部と、
    　前記投入口から投入された前記検体液を、前記第１チャンバの手前で貯留する液溜め部と、
    　前記第１チャンバと前記第２チャンバとの間に配置され、前記第１チャンバから前記第２チャンバに送液される前記検体液を一時的に収容する液体収容部を有するバルブであって、前記第１チャンバと前記液体収容部とを連通し、かつ前記第２チャンバと前記液体収容部とは連通しない第１状態と、前記第２チャンバと前記液体収容部とを連通し、かつ前記第１チャンバと前記液体収容部とは連通しない第２状態と、前記第１チャンバ及び前記第２チャンバの両方と前記液体収容部とが連通しない第３状態とを切換え可能なバルブと、
    　前記液溜め部から前記第１チャンバへ前記検体液を送液した後に、前記検体液の逆流を防ぐ封止部と、を備えた検査容器。
  2. 　前記封止部は、前記検体液よりも比重の軽い疎水性物質である、請求項１に記載の検査容器。
  3. 　前記疎水性物質が低極性溶媒又は熱可塑性物質である、請求項２に記載の検査容器。
  4. 　前記疎水性物質が、前記液溜め部又は前記第１チャンバに備えられている、請求項２又は３に記載の検査容器。
  5. 　前記液溜め部よりも前記遠心機の回転軸に近い側に設けられた前記疎水性物質を収容する疎水性物質収容部を、さらに備えた、請求項２又は３に記載の検査容器。
  6. 　前記液溜め部の容積をＶ１、前記第１チャンバの容積をＶ２、前記液体収容部の容積をＶ３、前記第２チャンバの容積をＶ４とした場合に、Ｖ１≧Ｖ２≧Ｖ３≧Ｖ４という関係にある、請求項１から５のいずれか１項に記載の検査容器。
  7. 　前記検体液と反応させる試薬が、前記第１チャンバ、前記液体収容部又は前記第２チャンバに収容されている、請求項１から６のいずれか１項に記載の検査容器。
  8. 　前記試薬が、特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と核酸配列判定用のプローブとを含む、請求項７に記載の検査容器。
  9. 　前記プローブが蛍光プローブである、請求項８に記載の検査容器。
  10. 　請求項９に記載の検査容器であって、前記試薬が前記液体収容部に収容されている検査容器を用いた核酸検査方法であって、
    　前記バルブは初期状態で前記第２状態、もしくは前記第３状態にあり、前記初期状態のまま、前記検査容器の前記投入口から、前記検体液を投入して、前記液溜め部に前記検体液を収容させ、
    　前記投入口を前記蓋部によって密閉し、
    　遠心力により前記液溜め部から前記第１チャンバへ前記検体液を送液させ、
    　前記封止部により前記第１チャンバから前記液溜め部への前記検体液の逆流を防いだ状態で、前記第１チャンバを加熱して前記検体液を加熱処理し、
    　前記バルブを前記第１状態に切り替え、
    　遠心力により前記第１チャンバから前記バルブの前記液体収容部に前記検体液を送液して、前記液体収容部において、前記検体液と前記試薬とを混合し、
    　前記バルブを前記第２状態に切り替え、
    　遠心力により、前記液体収容部から前記第２チャンバに前記検体液及び前記試薬の混合液を送液し、
    　前記バルブを前記第３状態もしくは前記第１状態に切り替え、
    　前記第２チャンバにおいて、前記混合液を温調することにより、前記混合液中の前記特定の核酸配列を増幅し、
    　励起光を前記混合液に照射し、前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
    　前記特定の核酸配列の有無もしくは濃度を判定する、核酸検査方法。
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