WO2024004523A1 - 大腸がんバイオマーカーおよびその用途 - Google Patents

Abstract

本発明は、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で簡便かつ無侵襲に判別できる大腸がんバイオマーカーを提供する。　本発明の大腸がんバイオマーカーは、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質である。

Description

大腸がんバイオマーカーおよびその用途

　本発明は、大腸がんバイオマーカーおよびその用途に関する。
　本願は２０２２年６月３０日に日本国特許庁に出願された日本国特許出願２０２２－１０６３６３号に基づく優先権を主張し、同日本国出願の全内容を参照により援用する。

　大腸がん診断のゴールドスタンダードとして、下部消化管内視鏡検査およびこれに伴う組織診断が行われることがある。しかし、下部消化管内視鏡検査は長時間を要し、また、内視鏡の挿入や観察時に被験者の苦痛を伴う高侵襲な検査であり、その検査費用も高額である。加えて、検査時の出血や穿孔、前処置の下剤による腸閉塞のように、検査に伴う合併症のリスクもある。
　よって、健常者を対象とした検診等のスクリーニング検査では、下部消化管内視鏡検査は推奨されない。

　そこで大腸がんの検査として、便潜血検査が広く行われている（例えば、非特許文献１、２）。便潜血検査によれば、大腸がんの罹患の有無を知ることができ、大腸がん死亡率を低下させることができると一般的に考えられている。しかし、便潜血反応では、早期大腸がんの検出感度が低い。便潜血検査による検査において、進行度の高い大腸がんの感度は約８０％と相対的に高いが、早期大腸がんの感度は２８．１％程度であるとする報告もある。

　加えて、便潜血検査においては、健常な被検者を大腸がんに罹患していると誤って判別してしまう確率、すなわち擬陽性の確率が極めて高い。つまり、便潜血検査においては特異度が不充分である。便潜血検査における陽性判定は、肛門や粘膜の傷に起因することがあるためである。そのため、高侵襲であり高コストな内視鏡検査が追加して行われることもある。そして、検体の取り扱いが複雑であることも、便潜血検査の課題の一つである。

　以上のことから、低侵襲な検査を可能とするバイオマーカーの開発が望まれている。かかるバイオマーカーとして、例えば、ＣＥＡ（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）、ＣＡ１９－９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ １９－９）が提案されている。しかし、これらＣＥＡ、ＣＡ１９－９においても、大腸がんの検出感度が低いため、大腸がんの診断においてその使用が推奨されていない。

国立がん研究センター「がん情報サービス」（ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｇａｎｊｏｈｏ．ｊｐ／ｍｅｄ＿ｐｒｏ／ｐｒｅ＿ｓｃｒ／ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ／ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ＿ｃｏｌｏｎ．ｈｔｍｌ、アクセス日：２０２２年０６月１３日） 医学書院「週刊医学界新聞、第２９４０号、２０１１年０８月０８日」（ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｇａｋｕ－ｓｈｏｉｎ．ｃｏ．ｊｐ／ｐａｐｅｒＤｅｔａｉｌ．ｄｏ？ｉｄ＝ＰＡ０２９４０＿０５、アクセス日：２０２２年０６月１３日）

　本発明は、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で簡便かつ無侵襲に判別できる大腸がんバイオマーカーを提供する。

　本発明の一態様によれば、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質である大腸がんバイオマーカーが提供される。

　本発明によれば、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で簡便かつ無侵襲に判別できる大腸がんバイオマーカーが提供される。

実施例の概要を示す説明図である。 ディスカバリーコホートを用いた網羅的相対的定量質量分析（ｉＴＲＡＱ（登録商標））の概要を示す説明図である。 図２に概要を示した網羅的相対的定量質量分析の結果を示す。図３は、大腸がん患者で異常発現しているタンパク質を示すヒートマップである。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＡＮＰＥＰの発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＬＧＡＬＳ３の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＡＮＰＥＰの発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と大腸がん患者の間で尿中のＬＧＡＬＳ３の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＤＰＥＰ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 健常者と腺腫患者と大腸がん患者の間で尿中のＴＦＦ１の発現量を比較した図である。大腸がん患者については該発現量を進行ステージ順に示した。図中の発現量は、標準化前の絶対値である。 早期大腸がん（腺腫）の罹患の有無を判定するために作成したＲＯＣ曲線を示す。発現量は、尿中のクレアチニン濃度で除して標準化した値である。 早期大腸がん（腺腫）の罹患の有無を判定するために作成したＲＯＣ曲線を示す。発現量は、標準化前の絶対値である。 大腸がんの罹患の有無を判定するために、血清検体中のタンパク質濃度の測定値に基づいて作成したＲＯＣ曲線を示す。発現量は、標準化前の絶対値である。

　本明細書における以下の用語の意味は以下の通りである。
　「変異体」とは、多型性、突然変異等に起因した天然の変異体、１または２以上の塩基の欠失、置換、付加または挿入を含む変異体を意味する。
　「感度」または「Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」は、（真陽性の数）／（真陽性の数＋偽陰性の数）を意味する。感度が高いほど大腸がんを早期に発見しやすくなり、がん罹患部の完全切除、再発率の低下に寄与する。結果、大腸がん死亡率の低下にも寄与し得る。
　「特異度」または「Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」は、（真陰性の数）／（真陰性の数＋偽陽性の数）を意味する。特異度が高いほど健常体を大腸がん患者として誤って判別することを防ぎやすくなり、無駄な追加検査の実施を防ぎ、患者の負担の軽減、医療費の削減に寄与する。
　「精度」は（真陽性の数＋真陰性の数）／（全検体数）を意味する。
　「検査」、「判別」および「試験」の各用語で特定される行為は、日本国および医療行為が特許の対象から除外されている国および地域においては、医師による医療行為（例えば、ヒトの病気を診断する行為、ヒトの病気を治療する行為等）を含まない。
　数値範囲を示す「～」は、その前後に記載された数値を下限値および上限値として含むことを意味する。

＜大腸がんバイオマーカー＞
　本発明の大腸がんバイオマーカーは、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質（以下、単に「尿中タンパク質」と記すことがある。）である。

　本発明者は、大腸がんの罹患の有無を簡便かつ無侵襲に検査するために、大腸がん患者の尿中で異常発現を示すタンパク質をバイオマーカーとして樹立することに想到した。
　尿サンプルは無侵襲に採取できる。加えて、検査用サンプルの取得および取り扱いが便潜血検査と比較して簡便である。このように検体材料としての尿には、誰でも簡単に検体を採取できること、採取や保存に特別な器具や試薬を必要としないこと、一度に充分量の検体を採取できること、採取に苦痛やリスクを伴わないこと、および、体内の循環動態を反映すること等のように数多くの検査上の利点がある。
　そのため、尿サンプルは健康診断や自宅でのスクリーニングに最も適した試料であると言える。

　本発明においては、以上の利点を備えた被検体の尿サンプルを利用し、尿中に微量に含まれる尿中タンパク質および／またはその組み合わせを大腸がんバイオマーカーとして使用する。これにより大腸がんの罹患の有無を無侵襲に検査できる。
　ところで、例えば、糖尿病や妊娠反応のテステープのように、尿検体を使用した種々のスクリーニングキットが一般臨床および日常生活において広く一般的に使用されている。一方で、尿サンプルで検出可能な大腸がんバイオマーカーは確立されていないため、尿サンプルを利用した大腸がんのスクリーニングキットとして実用化されたものが未だにない。

　このように尿サンプルはスクリーニング用試料として優れた利点を備える一方で、大腸がん検査の分野においてその利点が充分に活用されているとは言い難い。
　このことを背景として鑑みると、本発明の大腸がんバイオマーカーによれば、大腸がんを無侵襲かつ簡便に、また自宅でも検査できるようになる。そのため、本発明の大腸がんバイオマーカーは、特に検診や一次スクリーニングの現場において非常に有用である。

　後述の実施例に示すように、本発明者は大腸がん患者から採取した尿サンプルについてそのタンパク質濃度を網羅的に解析した。
　統計学的手法を用いたコホート研究の結果、本発明者は特定の１６種類の尿中タンパク質が大腸がん患者において異常発現していることを見出した。これらの尿中タンパク質を大腸がんバイオマーカーとして利用することで、大腸がんの罹患の有無を無侵襲に検査できる。

　本発明者は尿中の大腸がんバイオマーカーとして、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２の１６種類を同定した。これらの大腸がんバイオマーカーによれば、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で判別できる。後述の実施例に示すように本発明の大腸がんバイオマーカーによれば、早期大腸がんに加えて大腸の腺腫も優れた感度で検出できる。

　以下、各タンパク質について順に説明する。以下の説明において、尿中のタンパク質の「濃度」は、該タンパク質の尿中における、「含有量」、「存在量」、「発現量」、「レベル（水準）」といった用語と実質的に同義であり得る。

　ＤＰＥＰ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＤＰＥＰ１は、ｄｉｐｅｐｔｉｄａｓｅ １の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１６４４４から取得できる。ＤＰＥＰ１は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＤＰＥＰ１が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＤＰＥＰ１濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＤＰＥＰ１濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＤＰＥＰ１濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＴＦＦ１は、配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＴＦＦ１は、ｔｒｅｆｏｉｌ ｆａｃｔｏｒ １の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０４１５５から取得できる。ＴＦＦ１は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＴＦＦ１が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＴＦＦ１濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＴＦＦ１濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＴＦＦ１濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＡＮＰＥＰは、配列番号３のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＡＮＰＥＰは、ａｌａｎｙｌ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１５１４４から取得できる。ＡＮＰＥＰは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＡＮＰＥＰが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＡＮＰＥＰ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＡＮＰＥＰ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＡＮＰＥＰ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＬＧＡＬＳ３は、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＬＧＡＬＳ３は、ｇａｌｅｃｔｉｎ－３の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１７９３１から取得できる。ＬＧＡＬＳ３は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＬＧＡＬＳ３が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＬＧＡＬＳ３濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＬＧＡＬＳ３濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＬＧＡＬＳ３濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＰＲＧ４は、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＰＲＧ４は、ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ４の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９２９５４から取得できる。ＰＲＧ４は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＰＲＧ４が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＰＲＧ４濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＰＲＧ４濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＰＲＧ４濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＣＤＨ１７は、配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＣＤＨ１７は、ｃａｄｈｅｒｉｎ－１７の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ１２８６４から取得できる。ＣＤＨ１７は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＣＤＨ１７が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＣＤＨ１７濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＣＤＨ１７濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＣＤＨ１７濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＰＩＧＲは、配列番号７のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＰＩＧＲは、ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１８３３から取得できる。ＰＩＧＲは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＰＩＧＲが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＰＩＧＲ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＰＩＧＲ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＰＩＧＲ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃは、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃは、Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ １０ｃの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｏ１４７９８から取得できる。ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＭＥＰ１Ａは、配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＭＥＰ１Ａは、Ｍｅｐｒｉｎ Ａ ｓｕｂｕｎｉｔ ａｌｐｈａの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ１６８１９から取得できる。ＭＥＰ１Ａは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＭＥＰ１Ａが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＭＥＰ１Ａ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＭＥＰ１Ａ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＭＥＰ１Ａ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＬＧＡＬＳ３ＢＰは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＬＧＡＬＳ３ＢＰは、ｇａｌｅｃｔｉｎ－３ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０８３８０から取得できる。ＬＧＡＬＳ３ＢＰは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＬＧＡＬＳ３ＢＰが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＬＧＡＬＳ３ＢＰ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＬＧＡＬＳ３ＢＰ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＬＧＡＬＳ３ＢＰ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＡＰＯＡ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＡＰＯＡ１は、ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ－１の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０２６４７から取得できる。ＡＰＯＡ１は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＡＰＯＡ１が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＡＰＯＡ１濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＡＰＯＡ１濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＡＰＯＡ１濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＬＲＧ１は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＬＲＧ１は、ｌｅｕｃｉｎｅ ｒｉｃｈ ａｌｐｈａ－２－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ １の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０２７５０から取得できる。ＬＲＧ１は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＬＲＧ１が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＬＲＧ１濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＬＲＧ１濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＬＲＧ１濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＥＮＰＥＰは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＥＮＰＥＰは、Ｇｌｕｔａｍｙｌ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０７０７５から取得できる。ＥＮＰＥＰは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＥＮＰＥＰが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＥＮＰＥＰ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＥＮＰＥＰ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＥＮＰＥＰ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　Ｓ１００Ａ１１は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。Ｓ１００Ａ１１は、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１００－Ａ１１の略である。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ３１９４９から取得できる。Ｓ１００Ａ１１は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、Ｓ１００Ａ１１が大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＳ１００Ａ１１濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＳ１００Ａ１１濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＳ１００Ａ１１濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＭＭＥは、配列番号１５のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＭＭＥは、ｍｅｍｂｒａｎｅ ｍｅｔａｌｌｏｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの略である。ＭＭＥは、Ｎｅｐｒｉｌｙｓｉｎと呼ばれることもある。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０８４７３から取得できる。ＭＭＥは、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＭＭＥが大腸がん患者の尿中で有意に高発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＭＭＥ濃度は大腸がんの罹患と正の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＭＭＥ濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＭＭＥ濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　ＡＣＰ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＡＣＰ２は、ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２の略である。ＡＣＰ２は、Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅと呼ばれることもある。このタンパク質の配列は当技術分野で周知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１１１１７から取得できる。ＡＣＰ２は、その変異体であってもよい。

　本発明者は、ＡＣＰ２が大腸がん患者の尿中で有意に低発現していることを知見した。発明者が取得したデータによれば、尿中のＡＣＰ２濃度は大腸がんの罹患と負の相関を示す。
　よって、尿サンプル中のＡＣＰ２濃度がカットオフ値より低い場合、被検体は大腸がんに罹患していると判別できる。一方、尿サンプル中のＡＣＰ２濃度がカットオフ値より高い場合、被検体は大腸がんに罹患していないと判別できる。

　大腸がんバイオマーカーとしては、上述した１６種類の尿中タンパク質を１種単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。なかでも、尿中ＤＰＥＰ１を単独で使用したときの感度および特異度が極めて高く、再現性も高い。ただし、大腸がんバイオマーカーはＤＰＥＰ１に限定されない。例えば、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質も、再現性の点で大腸がんバイオマーカーとして比較的有用である。

　好ましい大腸がんバイオマーカーの組み合わせとして、例えば、下記の（１）、（２）が挙げられる。
・（１）：ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせ。
・（２）：ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせ。

　ただし、大腸がんバイオマーカーの組み合わせは、前記（１）および前記（２）に限定されない。これらの他にも種々の尿中タンパク質の組み合わせが有用であり得る。

　以下、大腸がんバイオマーカーのいくつかの用途例について説明する。ただし、以下の説明は本発明の大腸がんバイオマーカーの実施形態の代表例として例示したものである。本発明の大腸がんバイオマーカーの適用範囲は、以下の記載に限定されるものではない。

＜大腸がんの検査のための方法＞
　本発明の大腸がんの検査のための方法（以下、「本方法」と記す。）は、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出することを含む。

　（尿中タンパク質の検出）
　尿中タンパク質の検出は、例えば、ＥＬＩＳＡ法、イムノクロマト法、定量的質量分析法、ウエスタンブロッティング、イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ＢＣＡ法やＢｒａｄｆｏｒｄ法等の分光光度計を使用したタンパク質定量法、アプタマーによる検出法のように当業者に通常選択され得る手法によって行われ得る。また、すでに実用化されている妊娠検査薬等のように、尿中タンパク質が検出されたことを視覚的に通知する手法も採用され得る。

　尿中タンパク質の検出に際し、尿中タンパク質濃度を尿中で恒常的に発現していると考えられるタンパク質の発現量で除することで標準化してもよい。また、尿中タンパク質濃度の絶対値（ｒａｗ ｄａｔａ）を用いてもよい。いずれの方法においても、タンパク質濃度の測定値の大小で大腸がんを検査できる。
　標準化に使用するための尿中で恒常的に発現するタンパク質としては、例えば、尿中クレアチニンが挙げられる。ただし、簡便性の観点からは、大腸がんバイオマーカーの量は、かかるタンパク質の発現量で標準化せずに絶対値（ｒａｗ ｄａｔａ）で使用することが好ましい。

　（カットオフ値）
　本方法の一例においては、さらに、尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別できる。また、尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別できる。
　カットオフ値は、感度、特異度、正診率、陽性的中率、陰性的中率等を考慮して当業者によって適宜設定され得る。例えば、大腸がんに罹患していない被検体から採取された尿サンプルにおける尿中タンパク質の濃度に基づいてその都度定められた値をカットオフ値としてもよく、予め定められた値をカットオフ値としてもよい。

　カットオフ値は測定法、決定法によって変わり得る値である。また、カットオフ値は感度の向上を重視するか、特異度を重視するかによっても変動し得る値である。感度および特異度のバランスを考慮してカットオフ値が設定されることもあり得る。また、検査の目的にもよるが、例えば、早期大腸がんの検出が主たる目的の場合、特異度よりも感度の向上を優先してカットオフ値が設定されることもある。

　例えば、ＤＰＥＰ１を単独で使用する場合のカットオフ値としては、尿中クレアチニン（Ｃｒ）相対値では１～１０００ｎｇ／ｇ．Ｃｒが好ましく、２０～１９０ｎｇ／ｇ．Ｃｒがより好ましく、３５～１２８ｎｇ／ｇ．Ｃｒがさらに好ましいと考えられる。尿中絶対値では１～１０００ｐｇ／ｍｌが好ましく、３５～１３０ｐｇ／ｍｌがより好ましく、５０～１０５ｐｇ／ｍｌがさらに好ましいと考えられる。ＤＰＥＰ１におけるカットオフ値が前記数値範囲内であると、さらに優れた感度および特異度で大腸がんの罹患の有無を判別できる。

　ステージ０またはステージＩの早期大腸がんを検出することを目的とする場合、ＤＰＥＰ１単独使用におけるカットオフ値としては、尿中Ｃｒ相対値では１～１０００ｎｇ／ｇ．Ｃｒが好ましく、２０～１９０ｎｇ／ｇ．Ｃｒがより好ましく、３５～１３０ｎｇ／ｇ．Ｃｒがさらに好ましいと考えられる。尿中絶対値では１～１０００ｐｇ／ｍｌが好ましく、３５～１３０ｐｇ／ｍｌがより好ましく、５０～１０５ｐｇ／ｍｌがさらに好ましいと考えられる。

　大腸がんの罹患の有無の判別においては、判別式を用いた方法も使用され得る。判別式によれば、大腸がんと健常者とを区別的に判別できる。判別式は、任意の判別分析法により取得できる。判別分析法としては、例えば、フィッシャーの判別分析、マハラノビス距離による非線形判別分析、ニューラルネットワーク、Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｖｅｃｔｏｒ Ｍａｃｈｉｎｅ（ＳＶＭ）が挙げられるが、これらの例示に限定されるものではない。
　他にも、例えば、ｋ－近傍法、決定木、ロジスティック回帰分析等を利用して判別することもあり得る。

　本方法の一例においては、検査および／または診断のために大腸がんバイオマーカーの発現量を基準値と比較してもよい。大腸がんバイオマーカーの発現量を基準値と比較することで、被検体が大腸がんに罹患しているか否かを判別できる。
　前記基準値としては、該値以上であるとまたは該値以下であると大腸がんへの罹患が疑われる基準値が考えられる。基準値を定めるに際しては、健常体における大腸がんバイオマーカーの発現量を参考にしてもよい。通常、基準値は健常体における大腸がんバイオマーカーの発現量である。基準値はその都度設定してもよく、予め定められた値を基準値としてもよい。
　判別に際して使用する基準値は、被検体の年齢、性別、使用する大腸がんバイオマーカーの種類、採取方法、検体の種類等の条件に応じて適宜設定できる。

　被検体の生物種としては、主にヒト（Ｈｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎｃｅ）が想定されるが、本発明の大腸がんバイオマーカーの適用範囲は必ずしもヒトに限定されない。例えば上述した大腸がんバイオマーカーの各タンパク質について、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ等の種々の哺乳類動物におけるオルソログがあれば、そのオルソログの尿中タンパク質は、該動物においてもヒトの場合と同様に大腸がんバイオマーカーとして有用である可能性がある。

　被検体の状態も特に制限されない。例えば、大腸がんに罹患しているかどうか不明な検体、大腸がんに罹患していると既に別の方法により判別されている検体、大腸がんに罹患していないと既に別の方法により判別されている検体、大腸がんの治療中の検体が挙げられる。

　以上説明した大腸がんの検査のための方法は、医師の判断を含む、大腸がんの診断方法との区別をより明確にするために、以下に示す各方法、すなわち、大腸がんの検査方法、大腸がんの診断のためにデータを収集する方法、大腸がんの診断のための方法、大腸がんの診断を補助するためのインビトロの方法、大腸がんの診断のための試験方法と同義であるとも言える。

　本発明によれば、医師の判断によらず、客観的指標を利用することで、大腸がんの診断に有益な情報を提供できる。加えて、医師や検査技師のような専門知識を有する者の判断によらずとも自動的ないし機械的に大腸がんの罹患の有無を判定できる。

＜大腸がん検査キット＞
　大腸がん検査キットは、大腸がんの検査のために使用するキットである。大腸がん検査キットは、被検体の尿を採取するための容器と；ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出する試薬と；を備える。

　容器は特に限定されない。種々の採尿用容器、スポイト、コップ、遠心用チューブ等が使用され得る。また、大腸がんバイオマーカー、すなわち、特定の尿中タンパク質の詳細および好ましい態様は、上述の通りである。

　尿中タンパク質を検出する試薬としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法、イムノクロマト法、定量的質量分析法、ウエスタンブロッティング、イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ＢＣＡ法やＢｒａｄｆｏｒｄ法等の分光光度計を使用したタンパク質定量法、アプタマーによる検出法のように当業者に通常選択され得る手法において、実験的にまたは実用的に使用される試薬が好ましい。すでに実用化されている妊娠検査薬等のように、尿中タンパク質が検出されたことを視覚的に通知する手法を利用した試薬も採用され得る。尿中妊娠検査薬等のように簡易キット化し、自宅での検診を可能とすることは、極めて有用である。

　一例において尿中タンパク質を検出する試薬は、下記の試薬αおよび試薬βのいずれか一方または両方であり得る。
　試薬α：尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された該尿中タンパク質の濃度が閾値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。
　試薬β：尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された該尿中タンパク質の濃度が閾値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。

　イムノクロマト法等の定性的手法による検出試薬の場合、検査陽性の閾値が設定され得る。この閾値は感度、特異度、正診率、陽性的中率、陰性的中率等を考慮して当業者によって適宜設定され得る。例えば、大腸がんに罹患していない被検体から採取された尿サンプルにおける尿中タンパク質の濃度に基づいて予め定められた値を該閾値とすることができる。

　ただし、閾値は感度の向上を重視するか、特異度を重視するかによって変動し得る値である。感度および特異度のバランスを考慮して該閾値が設定されることもあり得る。また、検査の目的にもよるが、例えば、早期大腸がんの検出が主たる目的の場合、特異度よりも感度を優先してイムノクロマト法等の定性的手法による検出試薬の閾値が設定されることもある。

　本発明における大腸がんバイオマーカーは、尿中タンパク質を対象としている。イムノクロマト法等を用いた既存のテステープが市販されている事実と併せて鑑みれば、簡易キット作製の障壁は当業者にとって低いと考えられる。よって、簡易キットの作製は当業者によって充分に実現可能である。

　大腸がん検査キットは施設で使用されるものであってもよく、自宅で使用されるものであってもよい。施設でキットを使用する場合、被験者は施設で検査を受診し、尿サンプル採取カップのような容器に尿を採取する。その尿中タンパク質の濃度を該施設にて測定する。濃度測定には、例えば、ＥＬＩＳＡ法等の当業者に通常選択され得る手法が適用され得る。また、施設で使用する場合であっても、テステープのような簡易キットで迅速かつ簡便に検査を行うことができる。

　自宅で使用されるキットの場合、大腸がん検査キットは郵送用の尿サンプル容器、ドライアイス、梱包材、取扱説明書等を備え得る。簡易キットであれば、ドラッグストア等で購入し、自宅でキットを使用することも考えられる。

＜大腸がんの治療方法＞
　本発明の大腸がんの治療方法は、上述の大腸がんバイオマーカーの使用により被検体を診断することを含む。一態様においては、被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、大腸がんの治療薬を被検体に投与する。また、さらなる一態様においては、被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、被検体に対して手術を行う。

　大腸がんの治療薬は特に限定されない。大腸がんの治療薬としては、効能、薬効が医学的に確認されている薬が好ましい。治療薬は、抗がん剤でもよく、分子標的治療薬でもよく、免疫チェックポイント阻害剤でもよい。

　抗がん剤としては、例えば、フルオロウラシル、テガフール・ウラシル配合剤、テガフール・ギメラシル・オテラシウムカリウム配合剤、カペシタビン、イリノテカン、オキサリプラチン、トリフルリジン・チピラシル塩酸塩が挙げられる。

　分子標的治療薬としては、例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、ベバシズマブ、ラムシルマブ、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、エンコラフェニブ、ビニメチニブ、トラスツズマブ、ペルツズマブが挙げられる。

　免疫チェックポイント阻害剤としては、例えば、ニボルマブ、イピリムマブ、ペンブロリズマブが挙げられる。

　ただし、治療薬はこれらの例示に限定されない。日本国以外の国または地域においては、その国または地域において認可された種々の大腸がん治療薬が使用され得る。

　薬剤の投与方法は、特に限定されない。通常は、内服、点滴等が選択される。ただし、薬剤の投与方法はこれらの例示に限定されない。
　被検体に対して行う手術は、特に限定されない。通常は、内視鏡手術、外科的切除、放射線療法等が選択される。ただし、被検体に対して行う手術はこれらの例示に限定されない。

　本発明の大腸がんの治療方法においては、上述の大腸がんバイオマーカーを使用するため、感度および特異度に優れる診断結果に基づいて被検体を治療できる。また、早期大腸がんの検出感度も良好である。よって、大腸がんを適切な時期に治療できるため、大腸がん死亡率の低下に寄与し得る。

＜作用機序＞
　以上いくつかの用途例を用いて説明した本発明の大腸がんバイオマーカーは、上述の尿中タンパク質および／またはその組み合わせの濃度を大腸がんや早期大腸がんの罹患の有無の指標とする。そのため、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で判別できる。後述の実施例に示すように本発明の大腸がんバイオマーカーによれば、早期大腸がんに加えて大腸の腺腫も優れた感度で検出できる。
　加えて、尿中タンパク質の検出は被検体の尿を用いて行われるため、無侵襲の検査法を提供できる。そのため、高侵襲な検査にともなう合併症のようなリスクを排除しやすい。また、検査に伴う患者の負担も軽減できる。そして、尿検体の取り扱いにおいては、便潜血検査の検体と比較して煩雑さが軽減されるという利点もある。
　よって、本発明の大腸がんバイオマーカーによれば、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で簡便かつ無侵襲に判別できる。

＜実施形態のまとめ＞
　本発明の実施形態は、下記の［１］～［１４］を包含する。ただし、本発明の実施形態は以下に限定されるものではない。
［１］大腸がんの検査のための方法であって；ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出することを含む、方法。
［２］前記尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別し；前記尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別することをさらに含む、［１］に記載の方法。
［３］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］または［２］に記載の方法。
［４］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［１］～［３］のいずれかに記載の方法。
［５］前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
［６］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］～［５］のいずれかに記載の方法。
[７]前記大腸がんが、早期大腸がんである、［１］～［６］のいずれかに記載の方法。
［８］大腸がんの検査のために使用するキットであって；被検体の尿を採取するための容器と；ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出する試薬と；を備える、大腸がん検査キット。
［９］前記試薬が、下記の試薬αおよび試薬βのいずれか一方または両方である、［８］に記載の大腸がん検査キット。
　試薬α：前記尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度が閾値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。
　試薬β：前記尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度が閾値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。
［１０］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［８］または［９］に記載の大腸がん検査キット。
［１１］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［８］～［１０］のいずれかに記載の大腸がん検査キット。
［１２］前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［８］～［１１］のいずれかに記載の大腸がん検査キット。
［１３］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［８］～［１２］のいずれかに記載の大腸がん検査キット。
［１４］前記大腸がんが、早期大腸がんである、［８］～［１３］のいずれかに記載の大腸がん検査キット。

　本発明のさらなる実施形態は、下記の［１５］～［２３］を包含する。ただし、本発明の実施形態は以下に限定されるものではない。
［１５］大腸がんの診断方法であって；ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出することを含む、方法。
［１６］前記尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別し；前記尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別することをさらに含む、［１５］に記載の方法。
［１７］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１５］または［１６］に記載の方法。
［１８］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［１５］～［１７］のいずれかに記載の方法。
［１９］前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［１５］～［１８］のいずれかに記載の方法。
［２０］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１５］～［１９］のいずれかに記載の方法。
［２１］前記大腸がんが、早期大腸がんである、［１５］～［２０］のいずれかに記載の方法。
［２２］大腸がんの治療方法であって；［１５］～［２１］のいずれかに記載の方法を使用して被検体を診断すること；および、前記被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、大腸がんの治療薬を前記被検体に投与すること；を含む、大腸がんの治療方法。
［２３］大腸がんの治療方法であって；［１５］～［２２］のいずれかに記載の方法を使用して被検体を診断すること；および、前記被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、前記被検体に対して手術を行うこと；を含む、大腸がんの治療方法。

　本発明のさらなる実施形態は、下記の［２４］～［２９］を包含する。ただし、本発明の実施形態は以下に限定されるものではない。
［２４］大腸がんバイオマーカーであって；ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質である、大腸がんバイオマーカー。
［２５］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［２４］に記載の大腸がんバイオマーカー。
［２６］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［２４］または［２５］に記載の大腸がんバイオマーカー。
［２７］前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［２４］～［２６］のいずれかに記載の大腸がんバイオマーカー。
［２８］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［２４］～［２７］のいずれかに記載の大腸がんバイオマーカー。
［２９］前記大腸がんが、早期大腸がんである、［２４］～［２８］のいずれかに記載の大腸がんバイオマーカー。

　本発明のさらなる実施形態は、下記の［３０］～［３５］を包含する。ただし、本発明の実施形態は以下に限定されるものではない。
［３０］大腸がんの検査および／または診断のための尿中タンパク質の使用であり；前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種である、使用。
［３１］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［３０］に記載の使用。
［３２］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と；ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［３１］または［３２］に記載の使用。
［３３］前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と；ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と；の組み合わせである、［３０］～［３２］のいずれかに記載の使用。
［３４］前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［３０］～［３３］のいずれかに記載の使用。
［３５］前記大腸がんが、早期大腸がんである、［３０］～［３４］のいずれかに記載の使用。

　以上いくつかの実施形態について説明したが、本発明は本明細書に開示の実施形態に限定されず、その要旨を変更しない範囲で適宜変更して実施できる。本明細書に開示の実施形態は、その他の様々な形態で実施可能であり、発明の要旨を逸脱しない範囲で、種々の省略、置換、変更が可能である。

　以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定されない。

＜用語の説明＞
　ｎ：症例数
　ｍｅｄｉａｎ：中央値
　ＩＱＲ：四分位範囲（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅ ｒａｎｇｅ）
　Ｐ　ｖａｌｕｅ：ｐ値
　ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ＲＯＣ Ｃｕｒｖｅ
　９５％ＣＩ：９５％信頼区間
　ＨＣ：健常者（Ｈｅａｌｔｈ Ｃｏｎｔｒｏｌ）
　ＣＲＣ：大腸がん患者
　Ｕｎｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ：単変量解析
　Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ：多変量解析
　以下に示す表および図面において、各タンパク質の接頭語の「ｕ」は、尿中のタンパク質であることを意味する。

＜コホートの構築＞
　年齢、性別を適合させた臨床ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩおよびステージＩＩＩの大腸がん患者１７５例と健常者２９９例から採取した尿検体から、ランダムに年齢および性別を一致させた以下の３種類のコホートを構築した。
・ディスカバリーコホート（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｃｏｈｏｒｔ）：大腸がん患者１６例および健常者１６例からなる３２例。
・トレーニングコホート（Ｔｒａｉｎｉｎｇ ｃｏｈｏｒｔ）：大腸がん患者１１０例および健常者１１０例からなる２２０例。
・バリデーションコホート（Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｃｏｈｏｒｔ）：大腸がん患者６２例および健常者４９例からなる１１１例。

＜バイオマーカー候補の絞り込み＞
　本発明においてはバイオマーカーの絞り込みの際には、相対的定量質量分析法を用いた。また、バイオマーカーの樹立および検証の際には、抗原抗体反応を利用したＥＬＩＳＡ法を用いて個々の尿中タンパク質濃度を測定した。

　ディスカバリーコホートは、バイオマーカー候補の発見に用いた。ディスカバリーコホート（網羅的解析コホート）の３２例に対し、相対的定量質量分析（ｉＴＲＡＱ（登録商標））を用いた網羅的解析を行った。尿サンプルの濃縮、タンパク質の還元反応、アルキル化、消化反応は一般的な手法に準じて行った。続いて図２に示すように、Ｈｉｇｈ ｐＨ ＲＰ－ＨＰＬＣ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ、Ｌｏｗ ｐＨ ｎａｎｏ ＬＣ－ＭＳ／ＭＳをこの順に実行し、データ解析を行った。
　その結果、大腸がん症例の尿中で有意に異常発現している７８種類の尿中タンパク質を同定した（図３）。これらのなかから、消化管特異性や腫瘍特異性を満たす２３種類のタンパク質をバイオマーカー候補としてデータベースサーチにより絞り込んだ。

＜大腸がんバイオマーカーの樹立＞
　トレーニングコホートは、大腸がんバイオマーカーの樹立に用いた。ディスカバリーコホートの解析で絞り込んだ２３種類のバイオマーカー候補の尿中タンパク質の濃度を、トレーニングコホートの２２０例の尿検体についてＥＬＩＳＡで測定した。
　解析の便宜上、尿中タンパク質濃度はその測定値そのものである絶対値に加えて、尿中クレアチニン濃度で除して標準化した尿中Ｃｒ相対値を取得した。尿中クレアチニンは、通常、検体の尿中に広く発現しているタンパク質である。バイオマーカー候補のタンパク質濃度を尿中クレアチニン濃度で標準化することで、候補タンパク質濃度を標準化した。結果を表１―表４に示す。
　以下に示すデータ解析結果において、ＡＵＣは統計学的指標であり、０から１までの値をとる。ＡＵＣの値が１に近いほど大腸がんの罹患の有無の判別能、すなわち、診断能が高いことを示す。

　トレーニングコホートの解析結果から、２３種類のバイオマーカー候補から１５種類の大腸がんバイオマーカー、すなわち、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥを尿中Ｃｒ相対値での解析結果に基づいて樹立した（表１、表２）。
　加えて、絶対値での解析結果では、１１種類の大腸がんバイオマーカー、すなわち、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＬＲＧ１、ＡＣＰ２、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥを樹立した（表３、表４）。

　表１－表４に示すように、これら同定された大腸がんバイオマーカーは、ｐ値がその他のバイオマーカー候補のタンパク質より低い。このことから、大腸がんバイオマーカーが大腸がん患者の尿中で有意に異常発現していることが分かる。
　なかでも、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＬＲＧ１、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥの１０種類については、尿中Ｃｒによる標準化の有無にかかわらずｐ値が低いため、再現性は高い。

＜大腸がんバイオマーカーの検証＞
　次に、ディスカバリーコホートおよびトレーニングコホートとはいずれも独立したバリデーションコホートの１１１例を用いた。バリデーションコホートは、ディスカバリーコホートおよびトレーニングコホートを通して樹立した大腸がんバイオマーカーの検証に用いた。
　この検証においては、尿中Ｃｒ相対値での解析結果で高いＡＵＣを示した８種類の尿中タンパク質、すなわち、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃについて大腸がん診断精度を検証した。結果を表５、表６に示す。

　表５に示すように、尿中Ｃｒ相対値では５種類の尿中タンパク質、すなわち、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃは、バリデーションコホートにおいても健常者と比較して大腸がん患者の尿中において高発現を示した。
　表６に示すように、絶対値ではＣＤＨ１７以外の７種類の尿中タンパク質、すなわち、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃは、バリデーションコホートにおいても健常者と比較して大腸がん患者の尿中において高発現を示した。

　これらの結果は、ディスカバリーコホートおよびトレーニングコホートと一致している。また、バリデーションコホートにおいてもトレーニングコホートでの解析と同様に尿中ＤＰＥＰ１のＡＵＣは最も高く、尿中Ｃｒ相対値では０．８０９（表５）、絶対値では０．９３０（表６）であった。このように尿中ＤＰＥＰ１のバイオマーカーとしての再現性は最も高く、極めて高精度に大腸がんを診断可能であった。

　尿中ＤＰＥＰ１の診断精度は、ＡＵＣ＝０．８０２（表１）、ＡＵＣ＝０．８０９（表５）といずれのコホートにおいても極めて高い数値を示した。次に優れた候補として、尿中ＴＦＦ１の診断精度もＡＵＣ＝０．７５１（表１）、ＡＵＣ＝０．７３１（表５）といずれのコホートにおいても高値を示した。

＜大腸がんバイオマーカーの診断能＞
　表７は、尿中Ｃｒ相対値での解析結果から得られたステージ０―ＩＩＩの大腸がんにおける各種の大腸がんバイオマーカーのカットオフ値の一例と診断精度を示す。
　表８は、絶対値での解析結果から得られたステージ０―ＩＩＩの大腸がんにおける各種の大腸がんバイオマーカーのカットオフ値の一例とその診断精度を示す。

　表中に示すカットオフ値（Ｃｕｔ－ｏｆｆ ｖａｌｕｅ）は、あくまでも今回の解析で適用した一例としての値である。実際の検査現場において使用されるカットオフ値は、必ずしも以下の表中で例示した数値になるとは限らない。後述の表９－表１０においても同様である。

　今回の解析において、カットオフ値は以下の通り算出した。まず、各因子の値ごとに（感度・特異度・１－特異度）の値を算出し、ＲＯＣ曲線を描いた。そのＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎ Ｉｎｄｅｘをカットオフ値とした。Ｙｏｕｄｅｎ Ｉｎｄｅｘは、（感度＋特異度－１）の値が最大となるポイントである。２因子以上の組み合わせによるカットオフ値の算出には、ロジスティック回帰分析を用いた。組み合わせる因子を説明変数とし、大腸がんを予測する式を作成し、予測値を算出した。あとは同様に、予測値ごとに、感度・特異度・１－特異度を算出し、ＲＯＣ曲線を描き、Ｙｏｕｄｅｎ Ｉｎｄｅｘをカットオフ値とした。
　ただし、実際の検査現場において使用するカットオフ値は、Ｙｏｕｄｅｎ Ｉｎｄｅｘに必ずしも限定されない。大腸がん検診の目的を考慮してカットオフ値を設定することができる。例えば、感度の向上を優先してカットオフ値を設定することが好ましい場合もある。

　表７、表８に示すように、尿中ＤＰＥＰ１単独においては、尿中Ｃｒ相対値では感度８０．４％、特異度６４．５％であり、絶対値で感度８５．４％、特異度６４．５％であった。尿中ＤＰＥＰ１によれば、優れた感度および特異度で大腸がんを判定できると考えられる。

　また、１６種類の尿中タンパク質は、２種以上を組み合わせても診断に利用できる。例えば、ＤＰＥＰ１またはＴＦＦ１を中心とした様々な組み合わせパターンが考慮され得る。その組み合わせパターンの一例とその感度および特異度を表７、表８に併せて示した。
　すべての条件にて再現性がある尿中ＤＰＥＰ１およびＴＦＦ１の２種類のタンパク質を中心とした組み合わせによれば、ＡＵＣは尿中Ｃｒ相対値で０．８４６、絶対値で０．８７０と高値を示した。加えて、尿中Ｃｒ相対値で感度９１．１％、特異度６２．８％、絶対値では感度９４．３％、特異度６３．４％と高い診断精度を示した。

＜早期大腸がんにおける診断能＞
　表９は、尿中Ｃｒ相対値での解析結果から得られたステージ０／Ｉ大腸がんにおける各種の大腸がんバイオマーカーのカットオフ値の一例と診断精度を示す。
　表１０は、絶対値での解析結果から得られたステージ０／Ｉ大腸がんにおける各種の大腸がんバイオマーカーのカットオフ値の一例と診断精度を示す。

　表９、表１０に示すカットオフ値の算出法は、表７、表８にそれぞれ示すカットオフ値の算出法と同じである。つまり、ＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎ Ｉｎｄｅｘをカットオフ値とした。また、２因子以上の組み合わせによるカットオフ値の算出には、ロジスティック回帰分析を用いた。
　ただし、実際の検査現場において使用するカットオフ値は、表９、表１０に示す値に必ずしも限定されない。大腸がん検診の目的を考慮してカットオフ値を設定することができる。例えば、感度の向上を優先してカットオフ値を設定することが好ましい場合もある。

　樹立した大腸がんバイオマーカーによれば、内視鏡治療で切除可能なステージ０／Ｉの早期大腸がんも高精度に診断できる。この点は、非常に注目すべきことである。
　図４－図１１に示すように、単独使用で優れた感度および特異度を示す４つの尿中タンパク質（ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３）のステージ別の発現量は、いずれのタンパク質についても健常者と比較してステージ０の段階から高値を示した。加えて、いずれのタンパク質の発現量も健常者と比較してステージＩ－ＩＩＩでは高値を維持した。しかも、いずれのタンパク質についても早期大腸がんの診断に適したグラフ傾向を示している。

　早期大腸がんの診断のためのＡＵＣは、ＤＰＥＰ１単独の場合、尿中Ｃｒ相対値ではＡＵＣ＝０．７８０であり、絶対値ではＡＵＣ＝０．８４２であった。ＤＰＥＰ１＋ＴＦＦ１の組み合わせの場合、尿中Ｃｒ相対値ではＡＵＣ＝０．７９２、絶対値ではＡＵＣ＝０．８５２であった（表９、表１０）。

＜腺腫の診断能＞
　健常者１７２例、大腸がん患者１５９例および腺腫患者３１例からそれぞれ採取した尿検体中のＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１の各濃度を測定した。結果を図１２－図１９、表１１、表１２に示す。表１１は、各尿中タンパク質濃度を尿中クレアチニン濃度で除して標準化した尿中Ｃｒ相対値を示す。表１２は、各尿中タンパク質濃度の絶対値を示す。

　尿検体中のＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１は、腺腫患者において健常者より有意に高発現していることが判明した。この結果から、早期大腸がんに加えて腺腫の検出への有用性が示唆された。

　次に、各尿中タンパク質濃度の測定結果から腺腫の罹患の有無を判定するためのＲＯＣ曲線を作成した（図２０、図２１）。図２０は、各尿中タンパク質濃度を尿中クレアチニン濃度で除して標準化した尿中Ｃｒ相対値に基づくＲＯＣ曲線を示し、図２１は、各尿中タンパク質濃度の絶対値に基づくＲＯＣ曲線を示す。
　図２０の尿中Ｃｒ相対値のＲＯＣ曲線の場合、ＤＰＥＰ１のＡＵＣは０．６１８であり、ＴＦＦ１のＡＵＣは０．６８４であった。図２１の絶対値のＲＯＣ曲線の場合、ＤＰＥＰ１のＡＵＣは０．６４１であり、ＴＦＦ１のＡＵＣは０．６６８であった。

＜血清検体の検討＞
　健常者６８例、大腸がん患者６８例からそれぞれ採取した血清検体中のＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１の各濃度を測定した。結果を表１３に示す。表１３は、各尿中タンパク質濃度の絶対値を示す。図２２は、各タンパク質濃度の測定値に基づいて描いたＲＯＣ曲線を示す。このＲＯＣ曲線からＡＵＣ値を取得した。

　以上の結果から、早期大腸がんをも高精度かつ無侵襲に診断できる新規かつ画期的な大腸がんバイオマーカーを提供できると考えられる。早期大腸がんを高精度かつ無侵襲に診断することは、既存の便潜血や血清腫瘍マーカーでは実現困難である。本発明の大腸がんバイオマーカーの使用により、施設で使用される検査キットのみならず、自宅でも検査可能な簡易キットも提供できると期待される。

　本発明によれば、大腸がんの罹患の有無を優れた感度および特異度で簡便かつ無侵襲に判別できる大腸がんバイオマーカーが提供される。

Claims (23)

1. 　大腸がんの検査のための方法であって、
   　ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出することを含む、方法。
2. 　大腸がんの診断方法であって、
   　ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出することを含む、方法。
3. 　前記尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別し、
   　前記尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度がカットオフ値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していると判別することをさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と、
   　ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
   　の組み合わせである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 　前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と、
   　ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
   　の組み合わせである、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 　前記大腸がんが、早期大腸がんである、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 　大腸がんの治療方法であって、
   　請求項１～８のいずれか一項に記載の方法を使用して被検体を診断すること、および、
   　前記被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、大腸がんの治療薬を前記被検体に投与すること、
   　を含む、大腸がんの治療方法。
10. 　大腸がんの治療方法であって、
    　請求項１～８のいずれか一項に記載の方法を使用して被検体を診断すること、および、
    　前記被検体が大腸がんに罹患していると診断した場合、前記被検体に対して手術を行うこと、
    　を含む、大腸がんの治療方法。
11. 　大腸がんの検査のために使用するキットであって、
    　被検体の尿を採取するための容器と、
    　ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種の尿中タンパク質を検出する試薬と、
    　を備える、大腸がん検査キット。
12. 　前記試薬が、下記の試薬αおよび試薬βのいずれか一方または両方である、請求項１１に記載の大腸がん検査キット。
    　試薬α：前記尿中タンパク質がＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１およびＭＭＥからなる群から選ばれる少なくとも１種である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度が閾値以上であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。
    　試薬β：前記尿中タンパク質がＡＣＰ２である場合、検出された前記尿中タンパク質の濃度が閾値以下であれば、被検体が大腸がんに罹患していることを定性的手法により通知する試薬。
13. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１１または１２に記載の大腸がん検査キット。
14. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と、
    　ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
    　の組み合わせである、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の大腸がん検査キット。
15. 　前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と、
    　ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
    　の組み合わせである、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の大腸がん検査キット。
16. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の大腸がん検査キット。
17. 　前記大腸がんが、早期大腸がんである、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の大腸がん検査キット。
18. 　大腸がんの検査および／または診断のための尿中タンパク質の使用であり、
    　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＣＤＨ１７、ＰＩＧＲ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＭＥＰ１Ａ、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＡＰＯＡ１、ＬＲＧ１、ＥＮＰＥＰ、Ｓ１００Ａ１１、ＭＭＥおよびＡＣＰ２からなる群から選ばれる少なくとも１種である、使用。
19. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１８に記載の使用。
20. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１と、
    　ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
    　の組み合わせである、請求項１８または１９に記載の使用。
21. 　前記尿中タンパク質が、ＴＦＦ１と、
    　ＤＰＥＰ１、ＡＮＰＥＰ、ＬＧＡＬＳ３、ＰＲＧ４、ＰＩＧＲおよびＴＮＦＲＳＦ１０Ｃからなる群から選ばれる少なくとも１種と、
    　の組み合わせである、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の使用。
22. 　前記尿中タンパク質が、ＤＰＥＰ１、ＴＦＦ１、ＡＮＰＥＰおよびＬＧＡＬＳ３からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の使用。
23. 　前記大腸がんが、早期大腸がんである、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の使用。

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