WO2023167370A1 - 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물 - Google Patents

난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2023167370A1
WO2023167370A1 PCT/KR2022/009026 KR2022009026W WO2023167370A1 WO 2023167370 A1 WO2023167370 A1 WO 2023167370A1 KR 2022009026 W KR2022009026 W KR 2022009026W WO 2023167370 A1 WO2023167370 A1 WO 2023167370A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
egg yolk
hydrolyzate
defatted
present
enzyme
Prior art date
Application number
PCT/KR2022/009026
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
박상재
김병학
강병식
이희환
이재민
황준희
Original Assignee
(주)메디언스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)메디언스 filed Critical (주)메디언스
Priority to KR1020227023739A priority Critical patent/KR20230131437A/ko
Priority to JP2022567636A priority patent/JP2024511909A/ja
Publication of WO2023167370A1 publication Critical patent/WO2023167370A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A23L15/20—Addition of proteins, e.g. hydrolysates, fats, carbohydrates, natural plant hydrocolloids; Addition of animal or vegetable substances containing proteins, fats, or carbohydrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/485—Exopeptidases (3.4.11-3.4.19)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/306—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on bone mass, e.g. osteoporosis prevention
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/02—Acid
    • A23V2250/06—Amino acid
    • A23V2250/0606—Arginine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/02—Acid
    • A23V2250/06—Amino acid
    • A23V2250/0624—Histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/02—Acid
    • A23V2250/06—Amino acid
    • A23V2250/0638—Phenylalanine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/02—Acid
    • A23V2250/06—Amino acid
    • A23V2250/0652—Tyrosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/542—Animal Protein
    • A23V2250/5428—Egg protein

Definitions

  • the present invention relates to a method for preparing an egg yolk protein hydrolyzate obtained by hydrolyzing proteins present in egg yolk and having an effect of promoting height growth and increasing bone density at the same time, and the composition.
  • Osteoporosis is a disease in which the amount of bone decreases and the strength of the bone weakens, making it easy to fracture even with a small impact. Osteoporosis is a problem due to various fractures caused by bone weakness, especially femur fractures or vertebral fractures, which restrict activity for a long time, rather than the symptoms themselves, and is known to account for 15% of deaths in the elderly.
  • Osteoporosis drugs include hormones, alendronate, calcitonin, raloxifene, Na-F, calcitriol, or bisphosphonate preparations.
  • treatment of osteoporosis is a disease that requires a long treatment period, and when the treatment is taken for a long time, the possibility of side effects such as urolithiasis, endometrial cancer, and breast cancer increases.
  • egg yolk is known to be very effective in promoting health as it contains a large amount of lipids and proteins. .
  • the present inventor introduced an enzymatic hydrolysis process to provide useful substances contained in egg yolk in an optimal state while resolving the instability of egg yolk, and the egg yolk hydrolyzate thus prepared increases bone density, promotes bone growth, and prevents osteoporosis.
  • the present invention was completed by confirming that there is an effect on the improvement of.
  • One object of the present invention is to provide a defatted egg yolk hydrolyzate obtained by jointly treating defatted egg yolk with an endo-peptidase enzyme and an exo-peptidase enzyme.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for promoting height growth or improving bone density, containing the degreased egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoporosis comprising the defatted egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is (a) adding an organic solvent capable of dissolving lipids to egg yolk powder, followed by extraction and filtration to prepare defatted egg yolk; (b) drying the remaining egg yolk foil after separation in step (a) to obtain defatted egg yolk powder; (c) adding water to the defatted egg yolk powder obtained in step (b) to prepare a defatted egg yolk powder solution and treating it with endopeptidase to obtain a primary hydrolyzate; (d) removing insoluble egg yolk foil from the primary hydrolyzate obtained in step (c); and (e) treating the primary hydrolyzate obtained in step (d) with exo-peptidase to obtain a secondary hydrolyzate. is to provide
  • the present invention provides a defatted egg yolk hydrolyzate obtained by jointly treating defatted egg yolk with an endo-peptidase enzyme and an exo-peptidase enzyme.
  • the hydrolyzate is preferably filtered to remove insoluble egg yolk peel between the endopeptidase and exopeptidase enzyme treatments.
  • the hydrolyzate preferably contains 7% (w/w) or more of the sum of the contents of arginine, phenylalanine, tyrosine, and histidine based on the total solids. good night.
  • the present invention provides a food composition for promoting height growth comprising the degreased egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for improving bone density comprising the degreased egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoporosis comprising the above defatted egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • the hydrolyzate has an effect of increasing the activity of Alkaline phosphatase (ALP).
  • ALP Alkaline phosphatase
  • the present invention comprises the steps of (a) adding an organic solvent capable of dissolving lipids to egg yolk powder, followed by extraction and filtration to prepare defatted egg yolk; (b) drying the remaining egg yolk foil after separation in step (a) to obtain defatted egg yolk powder; (c) adding water to the defatted egg yolk powder obtained in step (b) to prepare a defatted egg yolk powder solution and treating it with endopeptidase to obtain a primary hydrolyzate; (d) removing insoluble egg yolk foil from the primary hydrolyzate obtained in step (c); and (e) treating the primary hydrolyzate obtained in step (d) with exo-peptidase to obtain a secondary hydrolyzate.
  • the present invention was able to obtain a functional composition having an effect of height growth, bone density increase, and bone growth promotion by physiological activity by preparing an egg yolk protein hydrolyzate having a novel composition, and utilizing it for the development of functional foods and medicines, etc. It can help improve health.
  • 1 is a diagram showing the chromatogram results of amino acid analysis of egg yolk hydrolysate.
  • Figure 4 is a diagram showing the results of comparison of bone length growth effect in animal tests.
  • the present invention comprises the steps of (a) adding an organic solvent capable of dissolving lipids to egg yolk powder, followed by extraction and filtration to prepare defatted egg yolk; (b) drying the remaining egg yolk foil after separation in step (a) to obtain defatted egg yolk powder; (c) adding water to the defatted egg yolk powder obtained in step (b) to prepare a defatted egg yolk powder solution and treating it with endopeptidase to obtain a primary hydrolyzate; (d) removing insoluble egg yolk foil from the primary hydrolyzate obtained in step (c); and (e) treating the primary hydrolyzate obtained in step (d) with exo-peptidase to obtain a secondary hydrolyzate.
  • This step is a step of preparing defatted egg yolk by adding an organic solvent capable of dissolving lipids to egg yolk powder, followed by extraction and filtration at 50 to 70° C. for 3 to 5 hours.
  • ethanol or acetone diluted solution may be preferably used, and 50 to 99.99% (v/v) ethanol may be more preferably used. At this time, it is preferable to add the solvent in an amount of 5 to 10 times the weight ratio of the dried egg yolk powder.
  • the fat component containing lecithin can be efficiently removed by hydrolyzing the solvent under the corresponding conditions.
  • the extraction yield of useful components is lowered or the fat component is not completely removed, which is undesirable.
  • the extraction time is also preferably performed for 3 to 5 hours for the same reason as above.
  • This step is a process of obtaining defatted egg yolk powder by drying the remaining egg yolk foil after separation in step (a) at 40 to 60 ° C.
  • the residual amount of the solvent can be adjusted to 1% (w/w) or less.
  • the steps (a) and (b) may be omitted.
  • This step is a process of preparing a degreased egg yolk powder solution by adding water to the defatted egg yolk powder obtained in step (b), and treating it with endo-peptidase to obtain a primary hydrolyzate.
  • any known enzyme may be used, but alcalase may be more preferably used. Insoluble components can be removed through this process.
  • This process is a process of removing insoluble egg yolk foil from the primary hydrolyzate obtained in step (c).
  • a filtrate (so-called 'primary hydrolyzate from which egg yolk foil is removed') is obtained. Removal of the insoluble egg yolk meal is preferably carried out by filtration rather than centrifugation.
  • this process includes a process of helping to remove the insoluble egg yolk meal so that the emulsification of the filtrate due to the lecithin remaining in the degreased egg yolk does not occur.
  • This step is a process of obtaining a secondary hydrolyzate by treating the primary hydrolyzate from which the egg yolk foil obtained in step (d) has been removed with exo-peptidase.
  • any known enzyme may be used as the exo-peptidase in this step, but more preferably, a flavourzyme may be used. Through this process, it can be broken down into more peptides and amino acids.
  • the present invention may further include the following process.
  • (f) layer separation and concentration processes may be further performed.
  • the separated aqueous solution layer is recovered and concentrated.
  • the separated aqueous solution layer is filtered using a micro filter with a pore size of 5 microns or less. This step is applied for the purpose of removing insoluble substances contained in the oil layer and neutral fat and some contaminating bacteria in the egg yolk during the layer separation process.
  • the layer separation method of the present invention when the layer separation method of the present invention is not the case, a method of adding diatomaceous earth as a filter aid and filtering with a filter press is used. In this method, the fat components in the reaction solution are filtered out as they are, so the crude fat content in the final powder.
  • the crude fat content can be finally manufactured to 1% (w/w) or less, but according to a general process, the crude fat content is 2 to 3% (w/w).
  • a high crude fat content can easily contribute to the oil's rancid odor when exposed to air.
  • the concentration process is carried out under reduced pressure, and is usually carried out in the range of 20 to 100 Torr vacuum so that the solid content is 20 to 40% (w / v).
  • a microfilter may be used to remove contaminant cells present in the concentrate before spray drying the concentrate.
  • the microfilter used should have a pore size of 0.5 microns or less. The reason is that it is difficult to remove contaminants with a microfilter having a pore size larger than 0.5 micron.
  • the present invention provides a defatted egg yolk hydrolyzate obtained by jointly treating defatted egg yolk with an endo-peptidase enzyme and an exo-peptidase enzyme.
  • the enzyme is preferably composed of endopeptidase (endo-peptidase) and exo-peptidase (exo-peptidase) respectively or a combination thereof.
  • endopeptidase endo-peptidase
  • exo-peptidase exo-peptidase
  • an egg yolk enzyme hydrolyzate containing more peptides and amino acids could be obtained by sequentially treating endo-peptidase and exo-peptidase, respectively.
  • the hydrolyzate preferably contains 7% (w/w) or more of the sum of the contents of arginine, phenylalanine, tyrosine, and histidine based on the total solids. It is good.
  • the hydrolyzate preferably has a sum of arginine, phenylalanine, tyrosine, and histidine content of 10% (w/w) or more of the total amino acid content, more preferably It is preferable to contain 13 to 18% (w/w) of the total amino acid content.
  • the egg yolk enzyme hydrolyzate of the present invention contains leucine, lysine, valine, arginine, glutamic acid, threonine, serine, and isoleucine among amino acids. ), Phenylalanine, Tyrosine, Asparagine, Alanine, Aspartic acid, Methionine, Glutamine, Histidine, Tryptophane, Contains Cystine, Glycine and Proline.
  • the sum of the contents of arginine, phenylalanine, tyrosine, and histidine, which are known to have effects on height growth, bone density improvement, and osteoporosis prevention, is 7% (w/ w) It contains more than one and has excellent functionality.
  • the egg yolk enzyme hydrolyzate of the present invention increases the activity of Alkaline phosphatase (ALP), and the effect of promoting bone growth and increasing bone density was confirmed in animal models.
  • ALP Alkaline phosphatase
  • the present invention provides a food composition for promoting height growth or improving bone density comprising the degreased egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • the term “improvement” refers to any activity that improves or beneficially changes height growth or bone density by administration of the composition of the present invention.
  • the degreased egg yolk hydrolyzate is preferably included in an amount of 0.00001 to 50% by weight compared to the food composition. If it is less than 0.00001% by weight, the effect is insufficient, and if it exceeds 50% by weight, the increase in effect compared to the amount used is insignificant, which is uneconomical.
  • the food composition of the present invention is, for example, noodles, gums, dairy products, ice creams, meats, grains, caffeinated beverages, general beverages, chocolates, breads, snacks, confectionery products, candies, pizzas, jellies, alcoholic beverages, alcohol, and vitamin complexes. And it may be any one selected from other health supplements, but is not necessarily limited thereto.
  • the food composition of the present invention when used as a food additive, it may be added as it is or used together with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to conventional methods.
  • the food composition includes health functional food.
  • health functional food refers to food manufactured and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body in accordance with the Health Functional Food Act No. 6727, and “functional” refers to the structure of the human body. And it refers to intake for the purpose of obtaining useful effects for health purposes such as regulating nutrients for functions or physiological functions.
  • the food composition and health functional food of the present invention may include additional ingredients that are commonly used and can improve odor, taste, and visual properties.
  • it may include biotin, folate, panthotenic acid, vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, and the like.
  • minerals such as chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu), zinc (Zn), iron (Fe), and calcium (Ca) may be included.
  • amino acids such as cysteine, valine, lysine, and tryptophan may be included.
  • preservatives potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dihydroacetate, etc.
  • coloring agents tar colorant, etc.
  • coloring agents sodium nitrite, sodium nitrite, etc.
  • bleaching agents sodium sulfite
  • disinfectants bleaching powder and high bleaching powder, sodium hypochlorite, etc.
  • swelling agent alum, D-potassium hydrogen tartrate, etc.
  • strengthening agent emulsifier, thickener (thickener), coating agent, antioxidant (butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluene (BHT), etc.
  • Food additives such as seasonings (MSG monosodium glutamate, etc.), sweeteners (dulcin, cyclemate, saccharin, sodium, etc.), flavorings (vanillin, lactones, etc.), gum base, antifoaming agent, solvent, improver, etc. can be added.
  • the additive may be selected according to the type of food and
  • the content of the defatted egg yolk hydrolyzate is not particularly limited, and may be variously changed depending on the condition of the subject to be administered, the type of specific disease, and the degree of progression. If necessary, it may also be included in the total content of food.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoporosis comprising the above defatted egg yolk hydrolyzate as an active ingredient.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the onset of a disease, that is, osteoporosis, which is affected by the administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • treatment refers to all activities in which symptoms caused by osteoporosis are improved or advantageously changed by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • composition containing the degreased egg yolk hydrolyzate as an active ingredient of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions to the above ingredients.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the defatted egg yolk hydrolyzate.
  • the type of carrier that can be used in the present invention is not particularly limited, and any carrier commonly used in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the carrier include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, xylitol, erythritol, maltitol, maltodextrin, glycerol, ethanol, and the like. can These may be used alone or in combination of two or more.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be used by adding other pharmaceutically acceptable additives such as antioxidants, excipients, diluents, buffers or bacteriostats, surfactants, binders, fillers, bulking agents, wetting agents, disintegrants , a dispersant or a lubricant may be additionally added and used.
  • other pharmaceutically acceptable additives such as antioxidants, excipients, diluents, buffers or bacteriostats, surfactants, binders, fillers, bulking agents, wetting agents, disintegrants , a dispersant or a lubricant may be additionally added and used.
  • the degreased egg yolk hydrolyzate may be included in an amount of 0.00001% to 99.99% by weight, preferably 0.1% to 90% by weight, more preferably 0.1% to 90% by weight based on the total weight of the pharmaceutical composition. It may be included in 0.1% by weight to 70% by weight, more preferably 0.1% by weight to 50% by weight, but is not limited thereto and may be variously changed depending on the condition of the subject to be administered, the type of specific disease, the degree of progression, etc. If necessary, it may be included in the entire content of the pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutically effective amount and effective dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the formulation method, administration method, administration time and/or route of administration of the pharmaceutical composition, and Type and degree of reaction, type of subject to be administered, age, weight, general health condition, symptom or severity of disease, sex, diet, excretion, drugs used simultaneously or at different times in the subject, or components of other compositions, etc. It can vary according to various factors including, and similar factors well known in the medical field, and those skilled in the art can easily determine and prescribe an effective dosage for the desired treatment.
  • the daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is about 0.01 to 1,000 mg/kg, preferably 150 to 300 mg/kg, and may be administered once or several times a day.
  • Administration of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered once a day, or may be divided into several administrations.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. Considering all of the above factors, it can be administered in an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be additionally used in combination with various methods such as hormone therapy and drug therapy to prevent or treat osteoporosis.
  • the term "administration” means introducing the pharmaceutical composition of the present invention to a patient by any suitable method, and the route and method of administration of the pharmaceutical composition of the present invention may be independent, respectively, and the purpose Any administration route and administration method may be followed without particular limitation, as long as the pharmaceutical composition can reach the corresponding site.
  • the pharmaceutical composition may be administered by oral administration or parenteral administration, and may be formulated into various dosage forms suitable for oral administration or parenteral administration.
  • Non-limiting examples of preparations for oral administration using the pharmaceutical composition of the present invention include oily suspensions, troches, lozenges, tablets, aqueous suspensions, prepared powders, granules, emulsions, hard capsules, and soft capsules, syrups or elixirs; and the like.
  • a binder such as sorbitol, mannitol, starch, amylopectin, cellulose lactose, saccharose or gelatin; lubricating oils such as magnesium stearate, calcium stearate, sodium stearyl fumarate or polyethylene glycol wax; excipients such as dicalcium phosphate and the like; A disintegrant such as corn starch or sweet potato starch may be used, and aromatics, syrups, sweeteners, and the like may also be used.
  • a liquid carrier such as fatty oil may be additionally used in addition to the above-mentioned materials.
  • intramuscular administration As a method for parenteral administration of the pharmaceutical composition of the present invention, intramuscular administration, transdermal administration, intravenous administration, intraperitoneal administration, or subcutaneous administration may be used, and a method of applying, spraying, or inhaling the composition to a diseased area It can also be used, but is not limited thereto.
  • Non-limiting examples of parenteral preparations using the pharmaceutical composition of the present invention include injection solutions, suppositories, ointments, powders for application, oils, powders for respiratory inhalation, aerosols for sprays, creams, and the like.
  • aqueous solutions In order to formulate the pharmaceutical composition of the present invention for parenteral administration, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, external preparations, etc. may be used. Vegetable oils, propylene glycol, polyethylene glycol, injectable esters such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is formulated as an injection solution
  • the pharmaceutical composition of the present invention is mixed in water together with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension, which is used for unit administration in an ampoule or vial. can be formulated.
  • a propellant or the like may be mixed with additives so that the water-dispersed concentrate or wet powder is dispersed.
  • composition of the present invention When the pharmaceutical composition of the present invention is formulated into ointments, oils, creams, powders for application, skin external preparations, etc., animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc, starch, tras It can be formulated using Kant, cellulose derivatives, zinc oxide and the like as carriers.
  • Example 1 As in Example 1, an attempt was made to obtain an enzyme reaction liquid by removing insoluble solids, but it was impossible to obtain the enzyme reaction liquid because the enzyme reaction liquid was not separated due to emulsification.
  • the egg yolk hydrolyzate prepared by the process of Example 1 has about 3 times the total amino acid content compared to the sample of Comparative Example 1 prepared under conditions where emulsification occurs. It was found that the yield of water-soluble components was also 1.7 times higher.
  • 1 is a diagram showing the chromatogram results of amino acid analysis of egg yolk hydrolysate.
  • FIG. 2 shows the results of SDS-PAGE photographs of egg yolk hydrolysates.
  • M2 is a sample after treatment with Alcalase
  • M3 is a sample further treated with flavozyme.
  • Example 1 when hydrolysis was performed in two steps by treating two enzymes, it was confirmed that most proteins were degraded to a molecular weight of 10 kDa or less and became low molecular weight, exceeding the size of the molecular weight marker by electrophoresis. .
  • composition of the present invention exhibits effects of increasing height growth and bone density
  • the effect on the activity of Alkaline phosphatase (ALP) was measured.
  • the sample of Example 1 was treated.
  • MC3T3-E1 osteoblastic cells derived from the bones of mice were purchased from ATCC (American Type Culture Collection) and used.
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • 100 U/ml penicillin, and 100 U/ml streptomycin were added to the culture medium at 37° C. in a humid CO 2 incubator (5% CO 2 ).
  • PBS Phosphate-buffered saline
  • trypsin-2.65mM EDTA subcultured, and the medium was changed every 2 days.
  • ⁇ -MEM medium 10 mM ⁇ -glycerophosphate (Sigma-Aldrich Co.) and 50 ⁇ g/ml ascorbic acid were added to ⁇ -MEM medium. ; Sigma-Aldrich Co.) was added thereto to culture the cells by exchanging the cell culture medium with the osteoblast differentiation culture medium, and the osteoblast differentiation culture medium was exchanged every 3 days.
  • MC3T3-E1 cells were dispensed in a 96-well plate to be 1*10 4 cells/well and stabilized for 24 hours. Samples were treated with various concentrations and cultured for 8 days. Collagen production of differentiated cells was measured using a Sirius red collagen detection kit (Chondrex) according to the method suggested by the manufacturer.
  • Sirius red collagen detection kit Chous red collagen detection kit
  • Three-week-old Sprague Dawley rats without specific pathogens were purchased from Dooyeol Biotech Co., Ltd., and after a week of quarantine and adaptation, healthy animals were selected and used. During the entire test period, the experimental animals were allowed to freely consume solid feed for experimental animals (Cargill Agripuna Co., Ltd.) and drinking water.
  • AG1-4 male experimental animals
  • AG5-8 female laboratory animals
  • AG1,5 negative control group
  • AG4, 8 positive control group (recombinant human growth hormone). It was confirmed that the length of the growth plate significantly increased in the test substance groups (AG2, 3, 6, 7) compared to the control group (AG1, 5).

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물의 제조방법 및 그 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 신규의 조성을 가지는 난황단백가수분해물을 제조하여 생리활성으로 키 성장, 골 밀도 증가 및 뼈 성장 촉진효과를 가지는 기능성조성물을 얻을 수 있었고, 이를 기능성 식품 및 의약품 등의 개발에 활용하여 국민의 건강증진에 도움을 줄 수 있다.

Description

난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물
본 발명은 난황에 존재하는 단백질을 가수분해하여 얻어지는 난황단백 가수분해물로서 키 성장을 촉진하며 동시에 골 밀도를 증가시키는 효과를 가지는 조성물의 제조방법 및 그 조성물에 관한 것이다.
골다공증은 골의 양이 감소하고, 골의 강도가 약해져 작은 충격에도 골절이 일어나기 쉬워지는 질환이다. 골다공증은 그 증세 자체보다는 골의 약화에 따라 초래되는 각종 골절, 특히 대퇴골 골절 또는 척추골절 등이 장기간 활동을 제한하여 문제가 되며, 노인층 사망의 15%를 차지하는 것으로 알려졌다.
골다공증 치료제로는 호르몬, 알렌드로네이트(alendronate), 칼시토닌(calcitonin), 라록시펜(raloxifene), Na-F, 칼시트리올(calcitriol) 또는 비스포스포네이트(bisphosphonate) 제제가 있다. 다만, 골다공증의 치료는 장기적인 치료기간을 요하는 질환으로, 상기 치료제를 장기 복용하게 될 경우 요로결석, 자궁내막암, 유방암과 같은 부작용이 초래될 가능성이 높아진다.
특히, 에스트로겐이나 칼시토닌을 포함하는 호르몬 요법의 경우 유방암, 심근경색, 정맥 혈전증 등의 부작용이 보고된 바 있다. 또한, 비스포스포네이트는 파골세포를 억제하는 골흡수 억제제로 이용되나 흡수율이 낮은 문제가 있고, 올바르지 않은 경구 투여시에는 상기도에 병소가 관찰되는 등의 문제가 보고되고 있어, 독성 및 부작용이 적은 치료제의 개발이 절실히 요구되는 현실이다.
한편, 난황은 다량의 지질 및 단백질을 함유하고 있어 건강 증진에 매우 유효함이 알려져 있으나, 유화능력이 뛰어난 레시틴, 중성지방을 함유하고 있어, 이를 직접적으로 제품화하기에는 안정성 및 생리활성 측면에서 바람직하지 못하다.
이에, 본 발명자는 상기한 난황의 불안정성을 해소하면서 난황이 함유하는 유용물질을 최적의 상태로 제공하고자 효소 가수분해 공정을 도입하였고, 이렇게 제조된 난황 가수분해물이 골 밀도 증가, 뼈 성장 촉진 및 골다공증의 개선에 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 탈지난황에, 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 효소 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 효소를 병합 처리하여 수득되는 탈지난황 가수분해물을 제공하는 것을 하나의 목적으로 한다.
본 발명의 또 하나의 목적은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 키 성장 촉진용 또는 골 밀도 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 (a) 계란 난황 분말에 지질을 용해할 수 있는 유기용매를 가한 후, 추출 및 여과하여 탈지 난황을 제조하는 단계; (b) 상기 단계 (a)에서 분리 후 남은 난황박을 건조하여 탈지난황분말을 수득하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 수득한 탈지난황분말에 가수하여 탈지난황분말액을 제조하고, 엔도펩티다아제(endo-peptidase)를 처리하여 1차 가수분해물을 수득하는 단계; (d) 상기 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거하는 단계; 및 (e) 상기 단계 (d)에서 수득한 난황박이 제거된 1차 가수분해물에 엑소펩티다아제(exo-peptidase)를 처리하여 2차 가수분해물을 수득하는 단계;를 포함하는 탈지난황 가수분해물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 탈지난황에, 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 효소 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 효소를 병합 처리하여 수득되는 탈지난황 가수분해물을 제공한다.
이때, 상기 가수분해물은, 바람직하게는 상기 엔도펩티다아제 효소와 엑소펩티다아제 효소 처리 사이에, 여과를 통해 불용성 난황박을 제거하는 것이 좋다.
이때, 상기 가수분해물은, 바람직하게는 아르기닌(Arginine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine) 및 히스티닌(Histidine)의 함량의 합이 전체고형분 기준으로 7%(w/w) 이상 함유된 것이 좋다.
한편, 본 발명은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 키 성장 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골 밀도 개선용 식품 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
이때, 상기 가수분해물은, ALP(Alkaline phosphatase)의 활성을 증가시키는 효과가 있다.
한편, 본 발명은 (a) 계란 난황 분말에 지질을 용해할 수 있는 유기용매를 가한 후, 추출 및 여과하여 탈지 난황을 제조하는 단계; (b) 상기 단계 (a)에서 분리 후 남은 난황박을 건조하여 탈지난황분말을 수득하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 수득한 탈지난황분말에 가수하여 탈지난황분말액을 제조하고, 엔도펩티다아제(endo-peptidase)를 처리하여 1차 가수분해물을 수득하는 단계; (d) 상기 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거하는 단계; 및 (e) 상기 단계 (d)에서 수득한 난황박이 제거된 1차 가수분해물에 엑소펩티다아제(exo-peptidase)를 처리하여 2차 가수분해물을 수득하는 단계;를 포함하는 탈지난황 가수분해물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 신규의 조성을 가지는 난황단백가수분해물을 제조하여 생리활성으로 키 성장, 골 밀도 증가 및 뼈 성장 촉진효과를 가지는 기능성조성물을 얻을 수 있었고, 이를 기능성 식품 및 의약품 등의 개발에 활용하여 국민의 건강증진에 도움을 줄 수 있다.
도 1은 난황가수분해물의 아미노산 분석 크로마토그램 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 난황가수분해물의 SDS-PAGE 사진을 나타낸 결과이다.
도 3은 세포시험에서 ALP 활성 증가 효과를 나타낸 결과이다.
도 4는 동물시험에서 골길이 성장 효과 비교 결과를 나타낸 도이다.
본 발명은 (a) 계란 난황 분말에 지질을 용해할 수 있는 유기용매를 가한 후, 추출 및 여과하여 탈지 난황을 제조하는 단계; (b) 상기 단계 (a)에서 분리 후 남은 난황박을 건조하여 탈지난황분말을 수득하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 수득한 탈지난황분말에 가수하여 탈지난황분말액을 제조하고, 엔도펩티다아제(endo-peptidase)를 처리하여 1차 가수분해물을 수득하는 단계; (d) 상기 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거하는 단계; 및 (e) 상기 단계 (d)에서 수득한 난황박이 제거된 1차 가수분해물에 엑소펩티다아제(exo-peptidase)를 처리하여 2차 가수분해물을 수득하는 단계;를 포함하는 탈지난황 가수분해물의 제조방법을 제공한다.
이하, 상기 본 발명의 각 단계를 세분화해 설명하고자 한다.
<단계 (a): 탈지난황의 제조>
본 단계는 계란 난황 분말에 지질을 용해할 수 있는 유기용매를 가한 후, 50~70℃에서 3~5시간 동안 추출 및 여과하여 탈지 난황을 제조하는 단계이다.
상기 용매로는 바람직하게는 에탄올 또는 아세톤 희석액을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 50~99.99%(v/v) 에탄올을 이용할 수 있다. 이때, 상기 용매는 건조난황분말 대비 무게비로 5~10배수를 가하는 것이 바람직하다. 해당 조건의 용매를 가수함에 따라 레시틴을 함유하는 지방성분을 효율적으로 제거할 수 있다.
상기 난황 추출 공정을 50℃ 미만으로 수행하면 유용성분의 추출수율이 낮아지거나 지방성분의 제거가 완전히 이뤄지지 못해 바람직하지 못하고, 70℃ 이상으로 수행하면 유용성분이 변성되어 바람직하지 못하다. 추출 시간도 상기와 동일한 이유로 3~5시간 동안 수행되는 것이 바람직하다.
<단계 (b): 탈지난황분말의 수득>
본 단계는 상기 단계 (a)에서 분리 후 남은 난황박을 40~60℃로 건조하여 탈지난황분말을 수득하는 과정이다.
상기 건조가 40℃ 미만으로 수행되면 건조가 완전히 이루어지지 않아 바람직하지 못하고, 60℃를 초과하여 수행되면 유용성분이 변성되어 바람직하지 못하다. 본 과정을 통해 용매의 잔존량을 1%(w/w) 이하로 조정할 수 있다.
본 발명의 원료의 시작은 난황이나 탈지난황의 상태로 구입가능한 경우 상기 단계 (a) 및 (b)의 과정을 생략할 수 있다.
<단계 (c): 1차 효소 가수분해>
본 단계는 상기 단계 (b)에서 수득한 탈지난황분말에 가수하여 탈지난황분말액을 제조하고, 엔도펩티다아제(endo-peptidase)를 처리하여 1차 가수분해물을 수득하는 과정이다.
본 단계의 엔도펩티다아제(endo-peptidase)는 공지된 어떠한 효소를 이용하더라도 무방하나, 더욱 바람직하게는 알칼라아제(alcalase)를 이용할 수 있다. 본 과정을 통해 불용성 성분을 제거할 수 있다.
<단계 (d): 불용성의 난황박 제거>
본 과정은 상기 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거하는 과정이다. 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거함으로써 여액 (소위 '난황박이 제거된 1차 가수분해물')이 수득된다. 불용성의 난황박 제거는 바람직하게 원심분리보다는 여과를 통해 수행하는 것이 좋다.
본 단계 (d)의 난황박 제거 시 유화가 발생할 경우, 다음에 이어지는 2차 효소 가수분해반응이 현저히 저해된다. 이에, 본 과정에서는 탈지난황에 잔류하는 레시틴으로 인한 여액의 유화가 발생하지 않도록 불용성의 난황박의 제거를 돕는 과정을 포함한다.
유화의 발생을 방지하는 방법으로는 일반적인 모터가 부착된 원심펌프의 경우 1,800rpm 이상 고속으로 회전하기 때문에 필연적으로 유화를 초래할 수밖에 없다. 따라서 본 과정에서는 고속회전하는 모터가 장착된 원심펌프를 사용하지 않고, 다이아프램펌프, 모노펌프 또는 압력을 이용한 이송방식을 사용하여 유화없이 이송하는 방식을 적용하는 것이 보다 바람직하다. 이는 효소반응의 진행 자체를 좋게 할 뿐 아니라 반응 완료 후 분리단계에서 용이한 분리가 가능하게 하기 때문이다.
<상기 단계 (e): 2차 효소 가수분해>
본 단계는 상기 단계 (d)에서 수득한 난황박이 제거된 1차 가수분해물에 엑소펩티다아제(exo-peptidase)를 처리하여 2차 가수분해물을 수득하는 과정이다.
본 단계의 엑소펩티다아제(exo-peptidase)는 공지된 어떠한 효소를 이용하더라도 무방하나, 더욱 바람직하게는 플라보자임(flavourzyme)을 이용할 수 있다. 본 과정을 통해 더 많은 펩타이드 및 아미노산으로 분해할 수 있다.
추가적인 공정으로써, 본 발명은 하기의 공정을 더 포함할 수 있다.
구체적으로, (f) 층분리 및 농축공정을 더 수행할 수 있다.
층분리 단계에서는 분리된 수용액 층을 회수하여 이를 농축하는 과정을 거치게 되는데 이 과정에서 분리된 수용액 층을 기공크기 5 마이크론 이하의 마이크로 필터를 사용하여 여과한다. 이 단계는 층분리 과정에서 오일층에 포함된 불용성 물질 및 난황의 중성지방 및 일부의 오염균을 제거하기 위한 목적으로 적용된다.
일반적으로 본 발명의 층분리 방법이 아닐 경우 규조토 등을 여과 보조제로서 첨가하고 필터프레스 등으로 여과하는 방법을 사용하게 되는데 이 방법은 반응액 중의 지방성분들이 그대로 여과되어 들어가게 되므로 최종 분말 중의 조지방의 함량이 높아지는 문제를 초래하며, 여과를 위한 여과과정이 복잡하고, 2차 효소반응의 진행을 방해하며, 고가의 설비를 요구한다는 결정적인 제조 공정상, 품질상의 단점이 있다.
조지방의 함량은 본 발명의 경우 최종적으로 1%(w/w) 이하로 제조가 가능하나, 일반적인 공정에 의하면 2~3%(w/w)의 조지방 함량을 가지게 된다. 높은 조지방 함량은 공기 중에 노출될 경우 쉽게 기름의 산패된 냄새가 나게 하는 요인이 될 수 있다.
이후, 반응과 여과가 완료된 여액은 농축공정을 거치게 된다. 농축공정은 감압농축을 진행하며 통상적으로 진공도 20~100 Torr의 범위에서 진행하여 고형분의 함량이 20~40%(w/v)가 되도록 한다.
농축액을 분무건조 하기 전 농축액에 존재하는 오염균체의 제거를 위하여 마이크로필터를 사용할 수 있다. 사용하는 마이크로필터는 0.5 마이크론 이하의 기공크기를 가지는 것으로 하여야 한다. 그 이유는 0.5 마이크론보다 큰 기공의 크기를 가진 마이크로 필터로는 오염균을 제거하기가 어렵기 때문이다.
이에 따라, 본 발명은 탈지난황에, 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 효소 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 효소를 병합 처리하여 수득되는 탈지난황 가수분해물을 제공한다.
이때, 상기 효소는, 바람직하게는 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 각각 또는 이들의 조합으로 이루어진 것이 좋다. 본 발명에서는 보다 바람직하게 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 각각을 순차적으로 처리함에 따라 더 많은 펩타이드 및 아미노산을 포함하는 난황 효소 가수분해물을 수득할 수 있었다.
이때, 상기 가수분해물은, 바람직하게는 아르기닌(Arginine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine) 및 히스티닌(Histidine)의 함량의 합이 전체고형분 기준으로 7%(w/w) 이상이 함유된 것이 좋다.
또한, 상기 가수분해물은 바람직하게는 아르기닌(Arginine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine) 및 히스티닌(Histidine)의 함량의 합이 아미노산 총합의 10%(w/w) 이상, 더욱 바람직하게는 아미노산 총합의 13~18%(w/w)가 함유된 것이 좋다.
본 발명의 난황 효소 가수분해물은 아미노산 중 류신(Leucine), 라이신(Lysine), 발린(Valine) 아르기닌(Arginine), 글루탐산(Glutamic acid), 쓰레오닌(Threonine), 세린(Serine), 이소류신(Isoleucine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine), 아스파라진(Asparagine), 알라닌(Alanine), 아스파틱산(Aspartic acid), 메티오닌(Methionine), 글루타민(Glutamine), 히스티딘(Histidine), 트립토판(Tryptophane), 시스틴(Cystine), 글리신(Glycine) 및 프롤린(Proline)을 함유한다.
그 중에서도 키 성장, 골 밀도 향상, 골다공증 예방 효과를 가지는 것으로 알려진 아르기닌(Arginine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine) 및 히스티닌(Histidine)의 함량의 합이 전체고형분 기준으로 7%(w/w) 이상 함유되어 우수한 기능성을 보유한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 본 발명의 난황 효소 가수분해물이 ALP(Alkaline phosphatase)의 활성을 증가시킴을 확인하고, 동물모델에서 골 성장 촉진효과 및 골 밀도 증가 효과를 확인한 바 있다.
이에, 본 발명은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 키 성장 촉진용 또는 골 밀도 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어, "개선"이란, 본 발명의 조성물의 투여로 키 성장 또는 골 밀도가 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 식품 조성물에 있어, 상기 탈지난황 가수분해물은 바람직하게 식품 조성물 대비 0.00001~50 중량% 포함되는 것이 좋다. 0.00001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 50 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
본 발명의 식품 조성물은 일 예로, 면류, 껌류, 유제품류, 아이스크림류, 육류, 곡류, 카페인 음료, 일반음료, 초콜릿, 빵류, 스낵류, 과자류, 사탕, 피자, 젤리, 알코올성 음료, 술, 비타민 복합제 및 그 밖의 건강보조식품류 중 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
본 발명에서 식품 조성물은 건강기능식품을 포함한다.
상기 "건강기능식품"이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 식품 조성물 및 건강기능식품은 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid), 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin) 등을 포함할 수 있다. 또한, 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 시스테인, 발린, 라이신, 트립토판 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 디히드로초산나트륨 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨루엔(BHT) 등), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품에 있어, 탈지난황 가수분해물의 함량은 특별히 제한되지 않으며, 투여 대상의 상태, 구체적인 병증의 종류, 진행 정도 등에 따라 다양하게 변경될 수 있다. 필요한 경우, 식품의 전체 함량으로도 포함될 수 있다.
한편, 본 발명은 상기의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 영향을 받는 질환, 즉 골다공증을 억제하거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 골다공증에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 상기 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 탈지난황 가수분해물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 말토덱스트린, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 필요한 경우, 항산화제, 부형제, 희석제, 완충액 또는 정균제 등 기타 약학적으로 허용 가능한 첨가제들을 첨가하여 사용할 수 있으며, 계면 활성제, 결합제, 충진제, 증량제, 습윤제, 붕해제, 분산제 또는 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 사용할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 있어서, 탈지난황 가수분해물은 약학적 조성물의 전체의 중량을 기준으로 0.00001중량％ 내지 99.99중량％로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 90중량%, 보다 바람직하게는 0.1중량% 내지 70중량%, 더욱 바람직하게는 0.1중량% 내지 50중량%로 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 투여 대상의 상태, 구체적인 병증의 종류, 진행 정도 등에 따라 다양하게 변경될 수 있다. 필요한 경우, 약학적 조성물의 전체 함량으로도 포함될 수 있다.
즉, 본 발명의 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학적 조성물의 일일 투여량은 약 0.01 내지 1,000mg/kg이고, 바람직하게는 150 내지 300mg/kg이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다.
발명의 약학적 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수 회에 나누어 투여될 수도 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양으로 투여할 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 골다공증을 예방 또는 치료하기 위하여 추가적으로 호르몬 치료, 약물치료 등의 다양한 방법들과 병용하여 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한, 특별한 제한 없이 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있으며, 경구 투여 또는 비경구 투여를 위한 적합하고 다양한 제형으로 제제화되어 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 이용한 경구 투여용 제제의 비제한적인 예로는, 유성 현탁액, 트로키제(troches), 로젠지(lozenge), 정제, 수용성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여용으로 제제화하기 위하여, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 락토오스, 사카로오스 또는 젤라틴 등과 같은 결합제; 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴 푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌 글리콜 왁스 등과 같은 윤활유; 디칼슘 포스페이트 등과 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분 등과 같은 붕해제 등을 사용할 수 있으며, 방향제, 시럽제, 감미제 등도 사용할 수 있다. 나아가 캡슐제의 경우에는 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체 등을 추가로 사용할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 비경구 투여 방법으로는, 근육 내 투여, 경피 투여, 정맥 내 투여, 복강 내 투여 또는 피하 투여 등을 이용할 수 있으며, 상기 조성물을 질환 부위에 도포하거나 분무, 흡입하는 방법 또한 이용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물을 이용한 비경구용 제제의 비제한적인 예로는, 주사액, 좌제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 크림 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 비경구 투여용으로 제제화하기 위하여, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조 제제, 외용제 등을 사용할 수 있으며, 상기 비수성용제, 현탁제로는 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 주사액으로 제제화하는 경우, 본 발명의 약학적 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플(ampoule) 또는 바이알(vial)의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 에어로졸제로 제제화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 연고, 오일, 크림, 도포용 파우더, 피부 외용제 등으로 제제화하는 경우에는, 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 산화 아연 등을 담체로 사용하여 제제화할 수 있다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예로 상세하게 설명하고자 한다. 다만, 하기의 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 한정되지는 않는다.
[실시예 1: 2차 가수분해에 따른 탈지난황가수분해물의 제조]
국내산 계란을 구입하여 할란하고, 난황을 분리한 후 이를 분무건조하여 난황분말을 수득하였다. 이후, 난황분말 1,000g에 주정 5,000L를 가하고 60℃에서 2시간 동안 추출하였고 이를 여과하여 추출액을 분리하였다. 그 후, 남은 난황박을 50℃ 오븐에서 건조하여 탈지난황분말 550g을 수득하였다.
탈지난황분말 100g을 물 600㎖에 충분히 풀고, 60℃로 가온한 다음, 여기에 단백가수분해 효소로서 노보사의 알칼라아제를 5g 가하고 3시간 동안 가수분해하였다. 반응이 완료된 후 반응액이 유화되지 않도록 불용성의 난황박을 제거하고, 1차 효소반응이 완료된 여액을 410㎖ 수득하였다.
여기에 2차 반응으로 엑소펩티다아제로 노보사의 플라보자임을 4㎖ 가하고, 55℃에서 4시간 동안 반응시킨 다음 진공도 50 Torr에서 진공농축하여 고형분의 함량이 25%(w/v)인 농축액 82g을 수득하였다. 수율은 고형분의 함량을 기준으로 20.5%로 나타났다.
[비교예 1: 1차 가수분해에 따른 탈지난황가수분해물의 제조]
실시예 1의 탈지난황 100g에 물 600㎖를 가하고, 60℃에서 임펠러를 3,000rpm으로 30분간 돌린 다음, 여기에 가수분해 효소로 알칼라아제를 5g 가하고, 3시간 동안 효소반응을 진행하였다.
이를 실시예 1과 같이 불용성의 고형분을 제거하여 효소반응액을 얻고자 하였으나, 유화로 인하여 효소반응액이 분리되지 않아서 수득이 불가능하였다.
이에 여과하는 방법에 의하여 여액 320㎖를 수득하였다. 고형분 함량을 기준으로 수율은 12.3%로 나타났다.
[실시예 2: 아미노산 구성성분의 분석]
상기 실시예 1 및 비교예 1에서 얻어진 효소반응액을 이용하여 아미노산 구성성분의 분석을 진행하였다. 아미노산 분석조건 및 결과는 하기에 기재하였다.
아미노산 분석조건:
모델: HITACH L-8900
Type: Post-reaction type(Ninhydrin reagent)
Detector: Photometer 440, 570㎚
Injection volume: 20㎕
아미노산 분석 결과: 하기 표 1 참고.
아미노산 이름 실시예 1의 시료, 함량 비교예 1의 시료, 함량
Leucine 6.41 2.22
Lysine 4.56 1.13
Arginine 4.40 0.65
Glutamic acid 4.34 2.29
Valine 4.18 0.33
Serine 3.91 1.48
Isoleucine 3.80 1.61
Threonine 3.37 0.80
Alanine 3.26 0.96
Phenylalanine 2.93 1.15
Asparagine 2.82 0.54
Aspartic acid 2.72 0.50
Methionine 1.63 0.78
Histidine 1.19 0.31
Glycine 0.92 0.46
Tryptophan 0.87 0.68
Cystine 0.82 0.00
Tyrosine 0.65 0.07
Proline 0.65 0.00
Glutamine 0.49 0.80
Ammonia 0.27 0.91
Ornitine 0.27 0.83
Cystathionine 0.05 0.00
합계 54.51g/100g 시료 18.50g/100g 시료
상기 표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 공정으로 제조한 난황가수분해물은 유화가 발생하는 조건으로 제조한 비교예 1의 시료와 비교할 때, 총 아미노산의 함량이 약 3배에 달하는 것으로 나타났으며, 수용성 성분의 수율도 1.7배 높은 것으로 나타났다. 도 1은 난황가수분해물의 아미노산 분석 크로마토그램 결과를 나타낸 도이다.
[실시예 3: SDS-PAGE를 이용한 단백질 분해정도의 비교]
실시예 1의 전기영동법을 이용하여 단백질 분해 시료 중 분해된 단백질의 분자량을 비교하여 보았다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 난황가수분해물의 SDS-PAGE 사진을 나타낸 결과이다. M2는 알칼라아제를 처리한 후의 시료이고, M3는 추가로 플라보자임까지 처리한 시료이다.
실시예 1에서와 같이, 2개의 효소를 처리하여 2단계에 걸친 가수분해를 수행한 경우 대부분의 단백질이 분자량 10kDa 이하로 분해돼 저분자화되어 전기영동에 의한 분자량 마커의 크기를 벗어났음을 확인하였다.
[실시예 4: 키 성장 및 골 밀도 증가 효능 검증을 위한 세포시험]
본 발명의 조성물이 키 성장 및 골 밀도 증가 효과를 나타내는지 확인하기 위하여 ALP(Alkaline phosphatase)의 활성에 미치는 영향을 측정하였다. 시료는 실시예 1의 시료를 처리하였다.
생쥐의 뼈에서 유래한 MC3T3-E1 골 형성 세포(osteoblastic cells)는 ATCC(American Type Culture Collection)에서 구입하여 사용하였고, MC3T3-E1 세포는 α-MEM 배지(Gibco-Invitrogen)에 10%(v/v) FBS(Fetal Bovine Serum), 100U/㎖ 페니실린(penicillin), 100U/㎖ 스트렙토마이신(stereptomycin)을 첨가한 배지를 사용하여 37℃, 습윤한 CO2 배양기(5% CO2)에서 배양하였다. 세포가 배양접시의 80% 정도 차면 PBS(Phosphate-buffered saline)으로 세포의 단층을 씻어내고 0.25% trypsin-2.65mM EDTA를 처리하여 계대배양하였고 배지는 2일 마다 교환하였다. MC3T3-E1 세포가 배양접시의 90% 정도 찼을 때 분화를 유도하기 위하여 α-MEM 배지에 10mM β-글리세로인산염(β-glycerophosphate; Sigma-Aldrich Co.)와 50㎍/㎖ 아스코르브산(ascorbic acid; Sigma-Aldrich Co.)를 첨가한 조골세포 분화배양액으로 세포배양액을 교환하여 세포를 배양하였고, 조골세포 분화배양액은 3일마다 교환하였다.
ALP(Alkaline phosphatase)의 활성을 측정하기 위하여 MC3T3-E1세포를 1*104cells/well이 되도록 96-well plate에 분주하고 24시간 동안 안정화시켰다. 시료를 다양한 농도로 처리하고 8일간 배양 후 분화유도된 세포의 콜라겐 생성은 Sirius red collagen detection kit(Chondrex)를 사용하여 제조회사에서 제시된 방법에 따라 측정하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3은 세포시험에서 ALP 활성 증가 효과를 나타낸 결과이다.
실시예 1의 조성물인 Y-PEP의 투여에 의하여 농도의존적으로 ALP의 활성을 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다. 이러한 결과는 실시예 1의 조성물이 키 성장 및 골 밀도 증가에 효과가 있음을 보여주는 증거가 된다.
[실시예 5: 동물시험에 의한 키 성장 및 골 성장 효과의 검증]
특정병원체가 없는 3주령 Sprague Dawley rat을 (주)두열바이오텍에서 구입하여 1주일간의 검역과 적응과정을 거친 뒤 건강한 동물을 선별하여 사용하였다. 시험 전 기간 실험동물은 실험동물용 고형사료((주)카길애그리퓨나)와 음수를 자유섭취하도록 하였다.
1주간의 적응 기간 경과 후 성별로 분류하여 난괴법에 의해 암, 수 각각 4개 군으로 분류하고 대조군(AG1), 100㎎/㎏ 투여군(AG2), 300㎎/㎏ 투여군(AG3), 양성대조군으로 재조합인간성장호르몬 200㎍/㎏ 투여군(AG4)로 분류하고, 각 시험군당 10마리의 실험동물을 사용하였고, 시험물질(TM)은 실시예 1에서 제조한 것을 음수에 녹여 14일 동안 매일 일정한 시간에 경구투여하였고, 양성대조물질은 1일 1회 피하주사 하였다.
키 성장 평가는 시험 개시일과 종료일에 각각 실험동물의 NA-NT(코에서 꼬리)를 측정하여 실험동물의 성장을 평가하였다.
견골무게, 길이 및 골 밀도 측정은 시험 종료일에 채혈 후 경골을 적출하여 골격에 붙어있는 근육, 인대 및 지방을 제거한 후 경골의 무게를 측정하고, 경골의 길이를 디지털캘리퍼스(Caliper)를 사용하여 길이를 측정한 후, dual-energy X-ray absorptiometry(DEXA, PIXmus TM, GE Lunar)를 사용하여 골 밀도를 측정하였다. 이후, 우측 경골은 고해상도 미세전산단층촬영시스템(micro-CT, Quantum GX, Perkinelmer, USA)을 사용하여 단층촬영을 시행하였고, 좌측경골은 조직형태학적 관찰 및 면역염색을 시행하였다.
실험동물의 NA-NT(코에서 꼬리) 길이 성장 비교
AG1 AG2 AG3 AG4
길이성장 10.49±0.17 10.75±0.22 11.55±0.13*** 11.41±0.18**
** P<0.01, *** P<0.001 대조군과의 유의미한 차이가 있다는 결론에 대한 오차 확률실험동물의 길이는 대조군(AG1) 대비하여 재조합인간성장호르몬 투입군(AG4)과 유사한 수준으로 성장 촉진효과가 있음을 확인할 수 있다.
경골길이 및 경골 골 밀도 비교
AG1 AG2 AG3 AG4
경골길이(mm) 31.48±0.19 31.91±0.09 32.14±0.18 32.22±0.40
경골 골 밀도 (g/cm2) 0.1097±0.0015 0.1117±0.0022 0.1101±0.0051 0.1101±0.0014
경골의 길이 촉진 및 골 밀도가 대조군에 비하여 증가하는 경향을 확인할 수 있다. 이러한 결과에 따라, 향후 골 밀도 증가 및 골다공증 예방용 기능성 소재 및 의약품으로 활용할 수 있을 것으로 판단된다.
성장판 길이(Micro CT 분석) 성장촉진 효과
AG1 AG2 AG3 AG4 AG5 AG6 AG7 AG8
상장판길이(um) 591.0±15.7 677.1±17.7 697.4±31.4 688.3±23.8 496.8±9.5 576.3±10.4 577.0±6.8 608.0±49.4
AG1~4: 수컷 실험동물; AG5~8: 암컷 실험동물; AG1,5: 음성대조군; AG4, 8: 양성대조군(재조합인간성장호르몬).성장판의 길이는 시험물질군(AG2,3,6,7)에서 대조군(AG1,5) 대비 현저하게 증가함을 확인할 수 있었다.
도 4에는 뼈의 길이성장을 조직형태학적으로 염색하여 분석한 결과를 나타내었다. 본 발명의 탈지난황가수분해물(AG2, AG3)은 대조군(AG1)과 비교할 때 현저한 수준의 뼈길이성장 효과를 가짐을 확인하였다.

Claims (8)

  1. 탈지난황에, 엔도펩티다아제(endo-peptidase) 효소 및 엑소펩티다아제(exo-peptidase) 효소를 병합 처리하여 수득되는 탈지난황 가수분해물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 엔도펩티다아제 효소와 엑소펩티다아제 효소 처리 사이에,
    여과를 통해 불용성 난황박을 제거하는 것을 특징으로 하는 탈지난황 가수분해물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 가수분해물은,
    아르기닌(Arginine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 티로신(Tyrosine) 및 히스티닌(Histidine)의 함량의 합이 전체고형분 기준으로 7%(w/w) 이상 함유된 것을 특징으로 하는 탈지난황 가수분해물.
  4. 제1항의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 키 성장 촉진용 식품 조성물.
  5. 제1항의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골 밀도 개선용 식품 조성물.
  6. 제1항의 탈지난황 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 가수분해물은,
    ALP(Alkaline phosphatase)의 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  8. (a) 계란 난황 분말에 지질을 용해할 수 있는 유기용매를 가한 후, 추출 및 여과하여 탈지 난황을 제조하는 단계;
    (b) 상기 단계 (a)에서 분리 후 남은 난황박을 건조하여 탈지난황분말을 수득하는 단계;
    (c) 상기 단계 (b)에서 수득한 탈지난황분말에 가수하여 탈지난황분말액을 제조하고, 엔도펩티다아제(endo-peptidase)를 처리하여 1차 가수분해물을 수득하는 단계;
    (d) 상기 단계 (c)에서 수득한 1차 가수분해물로부터 불용성의 난황박을 제거하는 단계; 및
    (e) 상기 단계 (d)에서 수득한 난황박이 제거된 1차 가수분해물에 엑소펩티다아제(exo-peptidase)를 처리하여 2차 가수분해물을 수득하는 단계;를 포함하는 탈지난황 가수분해물의 제조방법.
PCT/KR2022/009026 2022-03-04 2022-06-24 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물 WO2023167370A1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020227023739A KR20230131437A (ko) 2022-03-04 2022-06-24 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물
JP2022567636A JP2024511909A (ja) 2022-03-04 2022-06-24 卵黄タンパク質由来の身長成長及び骨密度増加用組成物

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20220028117 2022-03-04
KR10-2022-0028117 2022-03-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023167370A1 true WO2023167370A1 (ko) 2023-09-07

Family

ID=87883897

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/009026 WO2023167370A1 (ko) 2022-03-04 2022-06-24 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물

Country Status (3)

Country Link
JP (1) JP2024511909A (ko)
KR (1) KR20230131437A (ko)
WO (1) WO2023167370A1 (ko)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050003989A (ko) * 2003-07-03 2005-01-12 임강현 난유래 골강화 조성물
KR20070121639A (ko) * 2005-01-11 2007-12-27 가부시키 가이샤 파마푸즈 계란유래의 뼈 강화 조성물
KR20150005780A (ko) * 2013-07-04 2015-01-15 (주)메디언스 난황펩타이드의 제조방법 및 그 조성물
KR20200047359A (ko) * 2018-10-26 2020-05-07 건국대학교 산학협력단 탈지 난황 단백질 가수분해물 제조 방법 및 이를 포함하는 항산화용 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050003989A (ko) * 2003-07-03 2005-01-12 임강현 난유래 골강화 조성물
KR20070121639A (ko) * 2005-01-11 2007-12-27 가부시키 가이샤 파마푸즈 계란유래의 뼈 강화 조성물
KR20150005780A (ko) * 2013-07-04 2015-01-15 (주)메디언스 난황펩타이드의 제조방법 및 그 조성물
KR20200047359A (ko) * 2018-10-26 2020-05-07 건국대학교 산학협력단 탈지 난황 단백질 가수분해물 제조 방법 및 이를 포함하는 항산화용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAE HEE-JEONG, INMANJIN, MINHONG KIM: "Optimization of an enzymatic reaction system for enzymatic production of hydrolyzed vegetable proteins.", KOREAN JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY, SEOUL, KR, vol. 29, no. 6, 1 December 1997 (1997-12-01), KR , pages 1125 - 1130, XP009548350, ISSN: 0367-6293 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024511909A (ja) 2024-03-18
KR20230131437A (ko) 2023-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101156703B1 (ko) 계란유래의 뼈 강화 조성물
WO2015190643A1 (ko) 부틸 피리디늄(butylpyridinium) 또는 이의 유도체를 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2020149636A1 (ko) 아우쿠빈을 포함하는 안구 건조증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2023167370A1 (ko) 난황 단백질 유래 키 성장 및 골 밀도 증가용 조성물
WO2013024950A1 (ko) 누에탈지번데기 가수분해물을 포함하는 항비만 조성물 및 이를 제조하는 방법
WO2016093613A2 (ko) 진피 추출물을 포함하는 이상 체중 감소 증상의 예방 또는 치료용 조성물
US20180036350A1 (en) Hyaluronic acid production promoting agent
WO2020222366A1 (ko) 한삼덩굴 추출물 또는 한삼덩굴 분쇄물을 유효성분으로 포함하는 키 성장 촉진용 식품 조성물 및 키성장 촉진용 약학 조성물
JP2003210138A (ja) 機能性食品、その製造方法及び医薬
WO2010008150A2 (ko) 삼백초와 황금의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물
WO2022146029A1 (ko) 참깨박 추출물을 포함하는 근육 질환 개선 및 근육량 증대용 조성물
WO2019035545A1 (ko) 골 흡수 억제용 펩타이드
WO2013015611A2 (ko) 효모 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 연골세포 손상방지 및 재생효과를 갖는 조성물
WO2021040416A1 (ko) 비쑥 추출물을 유효성분으로 포함하는 골대사성 질환으로 유발된 골소실 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
WO2019208914A1 (ko) 마치현을 유효성분으로 포함하는 뼈 성장 촉진용 조성물
WO2020222369A1 (ko) 골다공증 예방 또는 치료용 조성물
US11241475B2 (en) Preventive and/or therapeutic agent for osteogenesis imperfecta and other diseases
WO2018190638A1 (ko) 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 조성물
JP2005006533A (ja) 機能性食品、その製造方法及び医薬
WO2020235900A1 (ko) 골 손실 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 chp(사이클로-히스프로) 및 부갑상선 호르몬을 포함하는 조성물의 용도
WO2019078381A1 (ko) 엔테로코커스 패칼리스, 이의 배양액 또는 이의 사균체를 유효성분으로 함유하는 근육감퇴, 약화 및 근위축 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물, 식품 조성물 및 식품첨가제
WO2023277222A1 (ko) 돈태반 효소 가수분해물과 산 분해물의 혼합물을 포함하는 간 보호용 조성물
WO2023128197A1 (ko) 우도 땅콩 새싹 추출물을 유효성분으로 함유하는 근감소증의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
WO2019208913A1 (ko) 지유를 유효성분으로 포함하는 뼈 성장 촉진용 조성물
WO2022239916A9 (ko) 신규한 비피도박테리움 롱검 균주 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022567636

Country of ref document: JP

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22930014

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1