WO2023140582A1 - 이소옥사졸린 유도체를 포함하는 주사용 제제 - Google Patents

이소옥사졸린 유도체를 포함하는 주사용 제제 Download PDF

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WO2023140582A1
WO2023140582A1 PCT/KR2023/000757 KR2023000757W WO2023140582A1 WO 2023140582 A1 WO2023140582 A1 WO 2023140582A1 KR 2023000757 W KR2023000757 W KR 2023000757W WO 2023140582 A1 WO2023140582 A1 WO 2023140582A1
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formula
compound
api
formulation
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PCT/KR2023/000757
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백재욱
김성원
윤정운
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주식회사 엘지화학
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Definitions

  • the present invention relates to an injectable preparation comprising an isoxazoline derivative useful as a caspase inhibitor or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active pharmaceutical ingredient (API).
  • API active pharmaceutical ingredient
  • Caspase is a cysteine protease
  • a caspase inhibitor is a compound capable of controlling inflammation or apoptosis caused by the action of caspase by inhibiting the action of such caspase.
  • Diseases whose symptoms can be eliminated or alleviated by administration of these compounds include osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorders, hepatitis-induced liver disease, acute hepatitis, liver cirrhosis, hepatitis-induced brain damage, human breakthrough liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, AIDS-induced brain damage, diabetes, and gastric ulcer.
  • the compound of Formula 1 has already been used for liver disease caused by hepatitis virus, liver fibrosis, nasal Its efficacy has been demonstrated in nonalcoholic steatohepatitis (NASH).
  • NASH nonalcoholic steatohepatitis
  • a general drug administration method is to administer directly into a joint cavity filled with synovial fluid through a syringe.
  • the drug In the case of oral administration, the drug has a systemic effect, but in the case of direct administration into the joint cavity, the effect of the drug is local, so that a high concentration of the drug can be administered and systemic side effects can be minimized.
  • the compound of Formula 1 has been confirmed to have a therapeutic effect as an oral preparation for existing liver diseases, but since the compound of Formula 1 is not well soluble in water, it is difficult to formulate it as an injectable preparation.
  • Patent Document 1 Republic of Korea Patent Publication No. 0774999 (2007.11.02.) Isoxazoline derivatives and their preparation method
  • Patent Document 2 Korean Patent Application No. 2021-0102476 (2021.08.04.) Use of caspase inhibitors in mitigating or treating osteoarthritis
  • Non-Patent Document 1 Ratziu et al., 'A Phase 2, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Study of GS-9450 in Subjects with Nonalcoholic Steatohepatitis' HEPATOLOGY, Vol. 55, no. 2, 2012.
  • the inventors of the present invention have conducted various studies to solve the above problems, and as a result, it is an object to be solved by the present invention to derive an injectable preparation containing a high content of the compound of Formula 1 as an active pharmaceutical ingredient (API).
  • API active pharmaceutical ingredient
  • the present invention relates to a first agent comprising the compound of Formula 1;
  • a second agent which is an aqueous solution having a pH of 7 to 11, containing a phosphate buffer for dissolving the compound of Formula 1, a surfactant, and NaOH as a pH adjusting agent;
  • the content of the compound of Formula 1 contained in the first agent of the injectable formulation of the present invention is 5 to 20 mg/ml based on a mixed solution of the first agent and the second agent.
  • the contents of phosphate buffer, surfactant, and NaOH included in the second agent of the injectable preparation of the present invention are 100 to 130 mM, 0.2 to 5.0 (w/v)%, and 12 to 42 mM, respectively, based on the second agent.
  • the injectable formulation of the present invention is used for the treatment or prevention of caspase-related diseases selected from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorders, hepatitis virus-induced liver disease, acute hepatitis, liver cirrhosis, hepatitis virus-induced brain damage, human breakthrough liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, AIDS-induced brain damage, diabetes, and gastric ulcer.
  • caspase-related diseases selected from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorders, hepatitis virus-induced liver disease, acute hepatitis, liver cirrhosis, hepatitis virus-induced brain damage, human breakthrough liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, AIDS-induced brain damage, diabetes, and gastric ulcer.
  • the injectable preparation of the present invention is used within 30 minutes after mixing the first agent and the second agent immediately before administration to a patient.
  • An injectable preparation containing the compound of Formula 1 according to the present invention includes a first agent in powder form containing the compound of Formula 1; Including the second agent, which is a buffer solution for dissolving the first agent, a drug is prepared by mixing the first agent in powder form and the second agent acting as an injection agent immediately before administration to the patient, and administered to the patient within 30 minutes. Therefore, there is an advantage in that the active API content is high.
  • Figure 1 shows the content of active API according to the pH of the solvent.
  • an injectable preparation containing ((R)-N-((2S,3S)-2-(fluoromethyl)-2-hydroxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-5-isopropyl-3-(isoquinolin-1-yl)-4,5-dihydroisoxazole-5-carboxamide of Formula 1, which is insoluble in water, as an API.
  • An injectable formulation including a first agent comprising a phosphate buffer, a surfactant, and a pH adjusting agent, and a second agent, which is an aqueous solution, was developed.
  • the pH adjusting agent is NaOH, and the pH of the second agent is 7 to 11.
  • the first agent in the formulation for injection is in a powder form.
  • the content of Chemical Formula 1 is 5 to 20 mg/ml based on a mixed solution of the first agent and the second agent.
  • the pH of the mixed solution of the first agent and the second agent is 6 to 8.
  • the osmotic pressure of the mixed solution of the first agent and the second agent is 280 ⁇ 330 mOsm / kg.
  • the phosphate buffer is a mixture of sodium phosphate dibasic acid hexahydrate and sodium phosphate monobasic acid monohydrate.
  • the surfactant is selected from polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 60, polysorbate 65, and polysorbate 80.
  • the surfactant is polysorbate 80.
  • the content of the surfactant is 0.2 to 5.0 (w / v)% based on the second agent.
  • the content of the NaOH is 12 ⁇ 42 mM based on the second agent.
  • the formulation for injection treats or prevents a disease selected from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorder, liver disease caused by hepatitis virus, acute hepatitis, liver cirrhosis, brain damage caused by hepatitis virus, human breakthrough liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, brain damage caused by AIDS, diabetes, and gastric ulcer.
  • a disease selected from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorder, liver disease caused by hepatitis virus, acute hepatitis, liver cirrhosis, brain damage caused by hepatitis virus, human breakthrough liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, brain damage caused by AIDS, diabetes, and gastric ulcer.
  • the disease that can be treated or prevented by the injectable preparation is a disease selected from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, and destructive bone disorder.
  • the formulation for injection is used as a solution in which the first agent and the second agent are mixed in a single-dosage amount.
  • the formulation for injection is administered into the joint cavity after mixing the first agent and the second agent.
  • the formulation for injection is administered into the joint cavity within 30 minutes after mixing the first agent and the second agent.
  • the formulation for injection is administered once after mixing the first agent and the second agent.
  • the formulation for injection is an injectable formulation in which the content of the compound of Formula 2 is 95% or more of the total content of the compound of Formula 2 and the compound of Formula 3, when the contents of the compound of Formula 2 and the compound of Formula 3 are measured within 30 minutes after mixing the first agent and the second agent.
  • the injectable preparation is an injectable preparation comprising a first agent containing Formula 1 and a second agent, which is a buffer solution having a pH of 7 to 11 for dissolving the compound of Formula 1, in which the content of the compound of Formula 2 is 9 It is an injectable preparation that is 5% or more.
  • the injectable preparation of the present invention has the advantage of having a high active API content because the drug is prepared by mixing a first agent in powder form and a second agent acting as an injection agent immediately before administration to a patient and administered to the patient within 30 minutes.
  • the compound of Formula 1 was hardly soluble in acidic solvents of pH 4 or less, but began to dissolve in weakly acidic solvents of pH 6 or more and was well soluble in basic solvents of pH 7.5 or more.
  • the compound of Formula 1 has a property of reducing the pH of a solution while being dissolved in a solvent.
  • a basic solvent having a high pH must be used, but as the compound of Formula 1 is dissolved, the pH of the solution is lowered to lower the solubility of the undissolved compound, and the active form of the dissolved compound is rapidly changed to an inactive form in the basic solvent. Since this mechanism lowers the purity of the active ingredient in an injectable formulation using the compound of Formula 1 as an API, it may not only affect the drug efficacy, but also lower the pH of the solution as the compound of Formula 1 dissolves. There is a problem that it is difficult to adjust the pH during preparation of the final drug for subject administration.
  • the second agent for dissolving the first agent containing the API includes a buffer to solve the problem of pH control.
  • a conventional buffer that can be used for an injection solution may be used, and specific examples include, but are not limited to, phosphate buffer, Tris buffer, and MES buffer.
  • a phosphate buffer When a phosphate buffer is used, it may be selected from the group consisting of sodium phosphate dibasic acid, sodium phosphate monobasic acid, potassium phosphate monobasic acid, potassium phosphate dibasic acid, and mixtures thereof.
  • Tris buffer Tris buffer
  • TRIZMA® buffer may be used.
  • the buffer has a concentration of 100 to 130 mM based on the second agent, specifically, 100 to 130 mM, 110 to 130 mM, 120 to 130 mM, 100 to 120 mM, 110 to 120 mM, 100 to 110 mM, 110 to 120 mM, or 120 to 130 mM.
  • the second agent uses NaOH as a pH adjusting agent.
  • the NaOH has a concentration of 12 to 42 mM based on the second agent.
  • the pH of the second agent is adjusted to pH 7-11 using a buffer and a pH adjusting agent, specifically, 7-11, 7.5-11, 8-11, 8.5-11, 9-11, 9.5-11, 10-11, 10.5-11, 7-10.5, 7.5-10.5, 8-10.5, 8. 5-10.5, 9-10.5, 9.5-10.5, 10-10.5, 7-10, 7.5-10, 8-10, 8.5-10, 9-10, 9.5-10, 7-9.5, 7.5-9.5, 8-9.5, 8.5-9.5, 9-9.5, 7-9, 7. Adjust to 5-9, 8-9, 8.5-9, 7-8.5, 7.5-8.5, 8-8.5, 7-8, or 7.5-8.
  • the formulation for injection of the present invention contains a surfactant in the second agent.
  • the surfactant may help dissolve the compound of Formula 1.
  • a conventional surfactant that can be used in an injection solvent may be used, and a cyclodextrin-based or polysorbate-based surfactant may be used.
  • Specific examples of the polysorbate-based surfactant may include polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 60, polysorbate 65, or polysorbate 80.
  • the concentration of the surfactant is 0.2 to 5.0 (w / v)% based on the second agent, specifically, 0.2 to 5.0 (w / v)%, 0.8 to 5.0 (w / v)%, 1.2 to 5.0 (w / v)%, 1.6 to 5.0 (w / v)%, 2.0 to 5.0 (w / v)%, 2.4 to 5.0 (w / v)%, 2 .8 ⁇ 5.0(w/v)%, 3.2 ⁇ 5.0(w/v)%, 3.6 ⁇ 5.0(w/v)%, 4.0 ⁇ 5.0 (w/v)%, 4.4 ⁇ 5.0 (w/v)%, 0.2 ⁇ 4.4(w/v)%, 0.8 ⁇ 4.4(w/v)%, 1.2 ⁇ 4.4(w/v)%, 1.6 ⁇ 4.4(w/v)%, 2.0 ⁇ 4.4(w/v)%, 2.4 ⁇ 4.4(w/v)%, 2.8 ⁇ 4.4(w/v)%, 3.2 ⁇ 4.4(w/
  • the compound represented by Formula 1 contained in the first agent dissolves in the second agent to lower the pH of the solution. If the pH of the mixed solution is too low, it may cause pain to the patient, so the pH of the mixed solution of the first agent and the second agent should be 6 to 8.
  • the pH of the mixed solution of the first agent and the second agent is 6-8, 6-7.7, 6-7.4, 6-7.1, 6-6.8, 6-6.5, 6-6.2, 6.3-8, 6.3-7.7, 6.3-7.4, 6.3-7.1, 6.3-6.8, 6.3-6.5, 6.6-8 , 6.6-7.7, 6.6-7.4, 6.6-7.1, 6.6-6.8, 6.9-8, 6.9-7.7, 6.9-7.4, 6.9-7.1, 7.2-8, 7.2-7.7, 7.2-7.4, 7.5-8, or 7.5-7.7.
  • the osmotic pressure of the solution in which the first agent and the second agent are mixed is 280 to 330 mOsm/kg. If the osmotic pressure is lower or higher than the above range, it is not preferable because it may cause pain to the patient.
  • the content of Formula 1 has a concentration of 5 to 20 mg/ml based on the formulation in which the first agent and the second agent are mixed.
  • the content of Formula 1 is 5 to 20 mg/ml, 10 to 20 mg/ml, 15 to 20 mg/ml, 5 to 15 mg/ml, 10 to 15 mg/ml, 5 to 10 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, or 20 mg/ml, preferably in a single dose, based on a mixture of the first and second agents.
  • the compound represented by Formula 1 included in the first agent when the compound represented by Formula 1 included in the first agent is mixed with the second agent, the compound is completely dissolved, and the mixed solution of the first agent and the second agent is in a transparent state.
  • the injectable formulation of the present invention is used by mixing the first agent and the second agent immediately before administration to a patient, it does not additionally contain excipients for preservation such as antioxidants and preservatives.
  • the present invention provides a method for treating or preventing caspase-related diseases using the injectable formulation of the present invention.
  • treatment means to stop or delay the progression of a disease when used in an object showing symptoms
  • prevention means to stop or delay the symptoms when used in a high-risk object that does not show symptoms
  • caspase-related disease refers to a disease that can be treated or prevented by inhibiting caspase, and includes, for example, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis, destructive bone disorder, liver disease caused by a hepatitis virus, acute hepatitis, liver cirrhosis, brain damage caused by a hepatitis virus, human sudden liver failure, sepsis, organ transplant rejection, ischemic heart disease, dementia, stroke, brain damage caused by AIDS, diabetes, gastric ulcer, etc. , but not limited to the above diseases.
  • the injectable preparation of the present invention can be administered to a subject in need of treatment or prevention to treat or prevent a caspase-related disease in the subject.
  • administration refers to a method of administering a dose of the injectable formulation of the present invention to a vertebrate or non-vertebrate animal, including mammals, birds, fish, or amphibians, by injection.
  • Preferred administration methods may be selected from conventional injection methods such as intravascular injection, subcutaneous injection, transdermal injection, intramuscular injection, spinal injection, intradermal injection, etc., depending on the type of disease to be treated, the site of the disease, and the severity of the disease.
  • an imaging method using ultrasound or the like may be used for guidance, or a local anesthetic may be preceded or administered in combination.
  • the term "individual” as used herein refers to a human or non-human mammal, such as a dog, cat, mouse, rat, cow, sheep, pig, goat, non-human ape, or bird. In some embodiments, the subject is a human.
  • the injectable preparation of the present invention is administered to the subject within 30 minutes after mixing the first agent and the second agent to form a mixed solution. Accordingly, the injectable preparation of the present invention is for single-administration for single patient infusion or administration.
  • the injectable formulation of the present invention may be additionally administered in combination with drugs such as analgesics, anti-inflammatory drugs, and steroids.
  • drugs such as analgesics, anti-inflammatory drugs, and steroids.
  • nonsteroidal anti-inflammatory drugs selected from ibuprofen, naproxen, aspirin, acetaminophen, indomethacin, orally or to the site of the lesion, diclofenac, meloxicam, celecoxib, piroxicam, etodolac, nabumetone, lumiracoxib, valdecoxib, etoricoxib, parecoxib, fenoprofen, oxaprozin, mepanamic acid, diflunisal, fluvirofen, ketoprofen Stimulants (NSAIDs); It may be administered in combination with drugs such as corticoid drugs such as prednisone and methylprednisolone, narcotic analgesics such as codeine,
  • the present invention provides a kit comprising the injectable preparation of the present invention.
  • the kit includes an injectable preparation comprising a first agent containing the compound of Formula 1 of the present invention, and a second agent that is an aqueous solution for dissolving the compound of Formula 1;
  • Instructions for use of the kit may include an administration system such as one or more syringes for administering the formulation, a method for mixing the first agent and the second agent, and instructions for treating a patient.
  • the kit may include a label stating that the formulation and contents as described herein are administered to a patient suffering from osteoarthritis, rheumatoid arthritis, degenerative arthritis or destructive bone disorder, which is a disease associated with bone and joint.
  • selecting an appropriate dose for the patient is within the knowledge of a person skilled in the art in consideration of the patient's symptoms, age, and the like.
  • Test Example 1 Confirmation of API solubility according to the pH of the solvent (Examples 1 to 10)
  • the API was dissolved as much as possible for 24 hours using 10 ml each of sodium phosphate buffer (PB) (Examples 1 to 9) and distilled water (Example 10) having various pHs. After dissolving the API to the maximum, the concentrations of pH, active substance (compound of formula 2), and inactive substance (compound of formula 3) were analyzed using HPLC.
  • the API was more soluble in basic solvents (Examples 8 and 9) and more soluble in phosphate buffer (Example 4) than in distilled water (Example 10) even at a similar pH.
  • the acidic solvent did not dissolve the API well compared to the neutral or basic solvent, but the conversion from the active material to the inactive material was lower than that of the basic solvent (Example 1).
  • the API is well soluble in basic solvents, it can be seen that the conversion rate of the active compound of formula 2 to the inactive compound of formula 3 after dissolution is higher in basic solvents than in acidic solvents.
  • the pH of the solution is lower than the pH of the solvent in all of the solvents of Examples 1 to 10, and especially in the case of Example 10, since distilled water has no buffering effect, it can be seen that the pH rapidly decreases.
  • Example 1 1.72 1.66 0.15 0.12 0.03
  • Example 2 3.41 3.44 0.06 0.03 0.03
  • Example 3 4.38 4.30 0.15 0.07 0.08
  • Example 4 6.17 5.45 1.47 0.67 0.8
  • Example 5 6.74 6.14 4.62 2.03 2.59
  • Example 6 7.49 6.63 6.18 2.67 3.51
  • Example 9 10.66 7.17 6.04 2.82 3.22
  • Example 10 6.08 3.93 0.07 0.04 0.03
  • Test Example 2 Dissolution of API according to solvent composition. Determination of dissolution time and pH (Examples 11-20)
  • a solvent for preparing a 10 mg/ml solution was prepared by dissolving the API with the composition shown in Table 2. As shown in Table 2, the concentration of sodium phosphate buffer (PB) was 0 to 10 mM, the NaOH concentration was 23 to 50 mM, the concentration of Tween®80 was 0 to 0.4 (w / v)%, and the concentration of hydroxypropyl beta cyclodextrin (HP ⁇ CD) was 0 to 20 (w / v)%. Since API has a characteristic of being soluble in basic solutions, a solvent having a pH of 11 to 12 was prepared using NaOH and/or PB.
  • PB sodium phosphate buffer
  • HP ⁇ CD hydroxypropyl beta cyclodextrin
  • the sodium phosphate buffer solution was prepared at pH 7.4 by mixing sodium phosphate dibasic acid heptahydrate and sodium phosphate monobasic monohydrate.
  • HP ⁇ CD a parenteral grade reagent having a molar substitution range of 0.81 to 0.99 and a molecular weight of about 1500 g/mol was used.
  • Example solvent composition solvent pH Example 11 50 mM NaOH 12.4
  • Example 12 30 mM NaOH 12.1
  • Example 13 25 mM NaOH 12.1
  • Example 14 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 12.0
  • Example 15 25 mM NaOH 20 (w/v)% HP ⁇ CD 11.0
  • Example 16 10 mM PB pH 7.4 50 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 12.3
  • Example 17 10 mM PB pH 7.4 30 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 11.8
  • Example 18 10 mM PB pH 7.4 27 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 11.8
  • Example 19 10 mM PB pH 7.4 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 11.7
  • Example 20 10 mM PB pH 7.4 23 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80
  • the solvents prepared in Examples 11 to 13 had 25 to 50 mM NaOH, and no other excipients were used.
  • Example 13 in which the NaOH concentration was 25 mM did not completely dissolve the API, so it could not be a suitable solvent. Therefore, it can be seen from the results of Examples 11 to 13 that a solvent containing only NaOH is not suitable as a solvent for dissolving the API.
  • Examples 14 and 15 are solvents prepared by including polysorbate 80 (hereinafter referred to as "Tween® 80") or HP ⁇ CD as a solubilizing agent in 25 mM NaOH, respectively.
  • Teween® 80 polysorbate 80
  • HP ⁇ CD HP ⁇ CD
  • the solvent additionally containing a solubilizing agent in NaOH is also not suitable as a solvent for dissolving the API.
  • the solvents prepared in Examples 16 to 20 were the same including 0.4 (w / v)% Tween® 80 in 10 mM PB, and only the content of NaOH was different, but the API was well dissolved in all solvents. However, it can be seen that in Examples 16 and 17, the pH is still high at 11.3 and 9.4 after the API is dissolved, whereas in Examples 18 to 20, the pH is 7.0 to 7.3, which is suitable for use as an injection formulation.
  • Example 19 only 10 mM PB was added in the composition of Example 14, but 10 mg/ml API, which was not dissolved, was dissolved, and the pH of the solution after dissolution was appropriately adjusted to 7.3. Therefore, it can be seen that the presence of PB, which acts as a pH buffer, is very important in selecting a solvent for dissolving the API of the present invention.
  • the HP ⁇ CD surfactant did not show a significant effect compared to 0.4% Tween® 80 even at 20%, and the osmotic pressure could be too high when the HP ⁇ CD content increased, so Tween® 80 was selected as the surfactant.
  • Test Example 2 Confirmation of osmotic pressure according to solvent composition (Examples 21 to 25)
  • Example solvent composition solvent pH Example 21 50 mM PB 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 7.3
  • Example 22 100 mM PB 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 7.3
  • Example 23 130 mM PB 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 7.3
  • Example 24 10 mM PB 25 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 0.6 (w/v)% NaCl 11.7
  • the osmotic pressure increased after dissolving 10 mg/ml compared to the solvent osmotic pressure.
  • the osmotic pressure difference was 22 to 23 mOsm / kg, which is because the molarity was 24 mM when 10 mg / ml of API was dissolved, so in Examples 21 to 23, it can be seen that all of the API was dissolved.
  • the API was not completely dissolved, and the osmotic pressure difference was 11 to 13 mOsm / kg, reflecting this.
  • Examples 24 and 25 are solvents with a higher pH than Examples 21 to 23, but since they do not completely dissolve the API, it can be seen that a certain level of buffering capacity is essential to dissolve the API of the present invention.
  • the preferred range of osmotic pressure of the formulation for use as an injection is 280 to 330 mOsm/kg, and patients may feel pain if it falls below or exceeds this range. Therefore, it can be seen that the formulation of Example 23 having a final solution osmotic pressure of 318 mOsm/kg is preferable as an injection formulation when these criteria are applied.
  • mOsm/Kg dissolving solvent osmotic pressure
  • mOsm/Kg solution osmotic pressure
  • mOsm/Kg osmotic pressure difference
  • API active form of Chemical Formula 1
  • 10 mg/ml of API was dissolved using the solvent of Example 23 to measure the active form content in the solution after preparing the injection, and the concentration and purity of the active form API (compound of Formula 2), which changed over time, was measured using HPLC until 60 minutes after dissolution.
  • an API solution was prepared by mixing 10 mg/ml of the API with the solvent of Example 23, and then the concentration of the sum of the compounds of Formula 2 (referred to as 'active API') and Formula 3 (hereinafter referred to as 'inactive API') reached a concentration of 9.69 mg/ml by 10 minutes after mixing and maintained a similar concentration until 30 minutes after mixing, but maintained a similar concentration until 30 minutes after mixing. After that, it showed a decreasing trend.
  • the active API it continued to decrease after mixing. After 30 minutes of mixing, the active API content was about 95.5% and the inactive API content was 4.33%, whereas after 60 minutes, the active API content was 94.18% and the inactive API content was 5.59%, which is less than the normal API specification of 95% or more active API, so it was confirmed that the API of the present invention should be used within 30 minutes after solvent mixing.
  • Test Example 4 Preparation of API solutions with various contents
  • the solvents of Examples 26 to 28 were prepared by changing the composition of PB and NaOH in consideration of the solubility of the API of the present invention in basicity and the osmotic pressure of the final solution.
  • Example API content solvent composition Example 26 2 mg/ml 130 mM PB 5 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 Example 27 5 mg/ml 120 mM PB 12.5 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80 Example 28 15 mg/ml 110 mM PB 37.5 mM NaOH 0.4 (w/v)% Tween® 80
  • Example API content (mg/ml) menstruum solution pH Osmotic Pressure (mOsm/Kg) pH Osmotic Pressure (mOsm/Kg)
  • Example 26 2 7.34 293 7.29 297
  • Example 27 5 7.57 277 7.3 290
  • Example 28 15 10.65 266 7.31 299
  • the API concentration and purity of the injections prepared by the solvents of Examples 26 to 28 were measured immediately after preparation, after 30 minutes, and after 60 minutes, respectively, and the results are shown in Table 8.
  • the purity immediately after mixing was about 97%
  • the purity after 30 minutes of mixing was 95 to 96%
  • the purity after 60 minutes of mixing was measured to be 93 to 94%. Therefore, in the finished product of all doses, appropriate purity is maintained until 30 minutes after mixing, and after 60 minutes of mixing, inactive API is produced beyond the specification (less than 5% of inactive API), so it is not suitable for administration to patients. Thus, it was confirmed that all finished products should be prepared immediately prior to use and injected within 30 minutes of mixing.
  • Example API content (mg/ml) immediately after dissolution 30 minutes later after 60 minutes active (%) inactive (%) active (%) inactive (%) active (%) inactive (%) inactive (%) Example 26 2 97.09 2.91 95.98 3.93 94.25 5.52 Example 27 5 97.23 2.77 95.83 4.04 94.29 5.48 Example 28 15 96.88 3.06 95.63 4.23 93.85 5.9

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Abstract

본 발명은 카스파제 저해제로서 유용한 이소옥사졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 활성 제약 성분(API)으로 포함하는 주사용 제제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 주사용 제제는 고용량의 API로 구성된 제1제와 이를 녹일 수 있는 용매인 제2제를 포함하여, 투여 직전에 제1제와 제2제를 혼합하여 제조될 수 있고, 활성형 API를 안정적으로 포함하여 함유하고 있으므로, 환자에 투여하는 경우 효과적으로 약효를 기대할 수 있다는 장점이 있다.

Description

이소옥사졸린 유도체를 포함하는 주사용 제제
본 출원은 2022년 1월 24일자 한국 특허 출원 제10-2022-0010141에 기초한 우선권의 이익을 주장하며, 해당 한국 특허 출원의 문헌에 개시된 모든 내용을 본 명세서의 일부로서 포함한다.
본 발명은 카스파제 저해제로서 유용한 이소옥사졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 활성 제약 성분(API)으로 포함하는 주사용 제제에 관한 것이다.
카스파제(caspase)는 시스테인 프로테아제(cysteine protease)이며, 카스파제 저해제는 이러한 카스파제의 작용을 억제함으로써 카스파제의 작용으로 인하여 유발되는 염증이나 세포사멸(apoptosis)을 조절할 수 있는 화합물이다. 이러한 화합물을 투여하여 증상을 없애거나 완화시킬 수 있는 질병으로는 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애, 간염바이러스에 의한 간질환, 급성 간염, 간경화, 간염바이러스에 의한 뇌손상, 인간 돌발성 간부전증, 패혈증, 장기이식 거부반응, 허혈성 심장질환, 치매, 뇌졸중, AIDS로 인한 뇌손상, 당뇨, 위궤양 등이 있다.
카스파제 저해제로서, 다양한 종류의 이소옥사졸린 유도체 및 이소옥사졸린 유도체의 프로드럭이 알려져 있다. 상기 이소옥사졸린 유도체 중 (R)-N-((2S,3S)-2-(플루오로메틸)-2-하이드록시-5-옥소테트라하이드로퓨란-3-일)-5-이소프로필-3-(이소퀴놀린-1-일)-4,5-디하이드로이소옥사졸-5-카르복사미드(이하 "화학식 1의 화합물"이라 함)는 이미 간염 바이러스로 인한 간질환, 간섬유증, 비알코올성 지방간염(Nonalcoholic steatohepatitis: NASH)에서 그 효능이 입증된 바 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000001
최근 상기 화학식 1의 화합물을 골관절염(OA: osteoarthritis), 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애 등의 골 관절과 관련된 질환에 적용하고자 하는 시도가 있다.
골 관절과 관련된 질환의 치료에 있어서 일반적인 약물 투여 방법은 윤활액(synovial fluid)으로 채워져 있는 관절강(joint cavity) 내에 직접 주사기로 투여하는 것이다. 경구 투여의 경우 전신에 약물의 효과가 미치지만, 관절강 내에 직접 투여하는 경우 약물의 효과가 국소적이므로, 고농도의 약물을 투여할 수 있을 뿐 아니라, 전신 부작용을 최소화할 수 있다는 장점이 있다.
화학식 1의 화합물은 기존 간 질환에 대해 경구용 제제로 치료 효과를 확인하였지만, 화학식 1의 화합물은 물에 잘 녹지 않으므로, 주사용 제제로 제형화하기에는 어려움이 있다.
따라서, 화학식 1의 화합물을 주사제로 사용할 수 있는 고농도의 주사용 제제 개발이 필요한 실정이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 대한민국 특허공보 제0774999호(2007.11.02.) 이소옥사졸린 유도체 및 그의 제조 방법
(특허문헌 2) 대한민국 특허출원 제2021-0102476호(2021.08.04.) 카스파제 저해제의 골관절염 완화 또는 치료에서의 용도
[비특허문헌]
(비특허문헌 1) Ratziu et al., 'A Phase 2, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Study of GS-9450 in Subjects with Nonalcoholic Steatohepatitis' HEPATOLOGY, Vol. 55, No. 2, 2012.
이에 본 발명자들은 상기 문제를 해결하고자 다각적으로 연구를 수행한 결과, 고함량의 화학식 1의 화합물을 활성 제약 성분(API)으로 하는 주사용 제제를 도출하는 것이 본 발명의 해결하고자 하는 과제이다.
본 발명은 화학식 1의 화합물을 포함하는 제1제; 및
상기 화학식 1의 화합물을 녹이기 위한 포스페이트 완충제, 계면활성제, 및 pH 조절제로서 NaOH를 포함하는 pH 7~11의 수용액인 제2제;를 포함하는 주사용 제제를 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000002
본 발명의 주사용 제제의 제1제에 포함된 화학식 1의 화합물의 함량은 제1제와 제2제가 혼합된 용액 기준으로 5~20 mg/ml이다,
본 발명의 주사용 제제의 제2제에 포함된 포스페이트 완충제, 계면활성제, NaOH의 함량은 각각 제2제 기준으로 100~130 mM, 0.2~5.0(w/v)%, 및 12~42 mM이다.
본 발명의 주사용 제제는 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애, 간염바이러스에 의한 간질환, 급성 간염, 간경화, 간염바이러스에 의한 뇌손상, 인간 돌발성 간부전증, 패혈증, 장기이식 거부반응, 허혈성 심장질환, 치매, 뇌졸중, AIDS로 인한 뇌손상, 당뇨, 위궤양에서 선택되는 카스파제 관련 질환의 치료 또는 예방에 사용된다.
본 발명의 주사용 제제는 환자에 투여하기 직전 제1제와 제2제를 혼합한 후, 30분 이내에 사용된다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물을 포함하는 주사용 제제는 화학식 1의 화합물을 포함하는 분말 형태의 제1제와; 상기 제1제를 녹이기 위한 완충액 용액인 제2제를 포함하여, 실제 환자에 투여하기 직전에 분말 형태의 제1제와 주사용제로 작용하는 제2제를 혼합하여 약물을 제조하여 환자에 30분 이내에 투여하므로, 활성형 API의 함량이 높다는 장점이 있다.
도 1은 용매의 pH에 따른 활성형 API의 함량을 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 전체가 본 명세서에 참고로 통합된다.
본 발명자들은 물에 잘 녹지 않는 화학식 1의 ((R)-N-((2S,3S)-2-(플루오로메틸)-2-하이드록시-5-옥소테트라하이드로퓨란-3-일)-5-이소프로필-3-(이소퀴놀린-1-일)-4,5-디하이드로이소옥사졸-5-카르복사미드를 API로 포함하는 주사용 제제를 개발하기 위해 다양한 방법으로 연구를 지속한 결과, 상기 API를 포함하는 제1제; 및 포스페이트 완충액, 계면활성제, 및 pH 조절제를 포함하는 수용액인 제2제를 포함하는 주사용 제제를 개발하였다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000003
발명의 일 실시예에서 상기 pH 조절제는 NaOH로서, 제2제의 pH는 7~11이다.
발명의 일 실시예에서 상기 주사용 제제에서 제1제는 분말 형태이다.
발명의 일 실시예에서 상기 화학식 1의 함량은 제1제와 제2제가 혼합된 용액 기준으로 5~20 mg/ml이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 pH는 6~8이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 삼투압은 280~330 mOsm/kg이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 포스페이트 완충제는 소듐 포스페이트 2염기산 6수화물과 소듐 포스페이트 1염기산 1수화물의 혼합물이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 및 폴리소르베이트 80에서 선택된다.
발명의 일 실시예에서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 계면활성제의 함량은 제2제 기준으로 0.2~5.0(w/v)%이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 NaOH의 함량은 제2제 기준으로 12~42 mM이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애, 간염바이러스에 의한 간질환, 급성 간염, 간경화, 간염바이러스에 의한 뇌손상, 인간 돌발성 간부전증, 패혈증, 장기이식 거부반응, 허혈성 심장질환, 치매, 뇌졸중, AIDS로 인한 뇌손상, 당뇨, 위궤양에서 선택되는 질환을 치료 또는 예방한다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제가 치료 또는 예방할 수 있는 질환은 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애에서 선택되는 질환이다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 단일-투여양으로, 제1제와 제2제를 혼합한 용액 상태로 사용된다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 관절강 내로 투여된다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 30분 이내에 관절강 내로 투여된다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 1회 투여된다.
발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 제1제와 제2제를 혼합한 후, 30분 이내에 하기 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물의 함량을 측정하였을 때, 화학식 2의 화합물 및 화학식 3의 화합물의 전체 함량 중, 화학식 2의 화합물의 함량이 95% 이상인, 주사용 제제이다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000004
[화학식 3]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000005
본 발명의 일 실시예에서, 상기 주사용 제제는 화학식 1을 포함하는 제1제 및 상기 화학식 1의 화합물을 녹이기 위한 pH 7~11의 완충액인 제2제를 포함하는 주사용 제제로서, 상기 주사용 제제는 제1제와 제2제를 혼합한 후, 30분 이내에 하기 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물의 함량을 측정하였을 때, 화학식 2의 화합물 및 화학식 3의 화합물의 전체 함량 중, 화학식 2의 화합물의 함량이 95% 이상인, 주사용 제제이다.
본 발명의 주사용 제제는 환자에 투여하기 직전에 분말 형태의 제1제와 주사용제로 작용하는 제2제를 혼합하여 약물을 제조하여 환자에 30분 이내에 투여하므로, 활성형 API의 함량이 높다는 장점이 있다.
본 발명의 화학식 1의 화합물은 물에 거의 녹지 않으므로, 화학식 1의 화합물을 고함량으로 녹일 수 있는 용매를 찾기 위하여 다양한 pH의 완충용액을 이용하여 용해도를 분석하였다.
그 결과 화학식 1의 화합물은 pH 4 이하의 산성 용매에서는 거의 녹지 않는 반면, pH 6 이상의 약산성 용매에서 녹기 시작하여 pH 7.5 이상의 염기성 용매에서 잘 녹는 것을 확인하였다. 또한, 상기 화학식 1의 화합물은 용매에 녹으면서 용액의 pH를 감소시키는 성질을 가진다는 것을 확인하였다.
또한, 화학식 1의 화합물이 수성 용매에 용해되는 경우, 락톤고리가 끊어지면서 하기 화학식 2의 화합물로 변환되는 것을 발견하였다. 이 때 상기 화학식 2의 화합물은 활성을 가지는 형태이나, 상기 화학식 2의 화합물은 수용액 상태에서 빠르게 구조이성질체인 화학식 3의 화합물로 비가역적으로 변환되고, 상기 화학식 3의 화합물은 화학식 2의 화합물과는 달리 카스파제 저해 활성을 보이지 않는 비활성 형태라는 것을 발견하였다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000006
[화학식 3]
Figure PCTKR2023000757-appb-img-000007
게다가 용매의 pH에 따라 화학식 2의 화합물에서 화학식 3의 화합물로의 변환율을 측정한 결과, 산성 용매에서는 화학식 3의 화합물은 거의 생성되지 않지만, 중성 이상 염기성 용매에서는 상기 화학식 3의 화합물이 빠르게 생성되는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 화학식 1의 화합물을 녹이기 위해서는 pH가 높은 염기성 용매를 이용해야 하지만, 상기 화학식 1의 화합물이 용해되면서, 용액의 pH를 낮춰 용해되지 않은 화합물의 용해도를 낮출 뿐 아니라, 용해된 화합물의 활성형 형태는 염기성 용매에서 급속도로 비활성형 형태로 변경된다는 것을 알 수 있었다. 이러한 기전은 화학식 1의 화합물을 API로 하는 주사제 제형에서 활성성분의 순도를 낮추게 되므로, 약효에 영향을 미칠 수 있을 뿐만 아니라, 상기 화학식 1의 화합물이 용해되면서 용액의 pH를 낮추므로, 개체 투여를 위한 최종 약품 제조시 pH를 조절하는 것이 어렵다는 문제가 있다.
본 발명의 주사용 제제는, 이러한 pH 조절 문제를 해결하기 위해 API를 포함하는 제1제를 녹이기 위한 제2제는 완충제를 포함한다.
상기 제2제에 포함되는 완충제는 주사용 용제에 사용될 수 있는 통상의 완충제를 사용할 수 있고, 구체적인 예로는 포스페이트 완충제, 트리스 완충제, MES 완충제 등이 있지만, 이에 제한되지 않는다. 포스페이트 완충제를 사용하는 경우 소듐 포스페이트 2염기산, 소듐 포스페이트 1염기산, 포타슘 포스페이트 1염기산, 포타슘 포스페이트 2염기산, 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택할 수 있다. 트리스 완충제를 사용하는 경우 TRIZMA®완충제를 사용할 수 있다.
상기 완충제는 제2제 기준으로 100~130 mM의 농도를 가지고, 구체적으로는, 100~130 mM, 110~130mM, 120~130mM, 100~120 mM, 110~120 mM, 100~110 mM, 110~120 mM, 또는 120~130 mM의 농도를 가진다.
본 발명의 주사용 제제는, 상기 제2제는 pH 조절제로 NaOH를 사용한다.
상기 NaOH는 제2제 기준으로 12~42 mM의 농도를 가진다.
본 발명의 주사용 제제는 상기 제2제의 pH는 완충제와 pH 조절제를 이용하여 pH 7~11로 조절하고, 구체적으로는, 7~11, 7.5~11, 8~11, 8.5~11, 9~11, 9.5~11, 10~11, 10.5~11, 7~10.5, 7.5~10.5, 8~10.5, 8.5~10.5, 9~10.5, 9.5~10.5, 10~10.5, 7~10, 7.5~10, 8~10, 8.5~10, 9~10, 9.5~10, 7~9.5, 7.5~9.5, 8~9.5, 8.5~9.5, 9~9.5, 7~9, 7.5~9, 8~9, 8.5~9, 7~8.5, 7.5~8.5, 8~8.5, 7~8, 또는 7.5~8로 조절한다.
본 발명의 주사용 제제는, 상기 제2제에 계면활성제를 포함한다. 상기 계면활성제는 화학식 1의 화합물이 용해되는데 도움을 줄 수 있다. 상기 계면활성제는 주사용 용제에 사용될 수 있는 통상의 계면활성제를 사용할 수 있으며, 사이클로덱스트린 계열, 또는 폴리소르베이트 계열의 계면활성제를 사용할 수 있다. 폴리소르베이트 계열 계면활성제의 구체적인 예로는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65 또는 폴리소르베이트 80을 사용할 수 있다.
상기 계면활성제의 농도는 제2제 기준으로 0.2~5.0(w/v)%로서, 구체적으로는, 0.2~5.0(w/v)%, 0.8~5.0(w/v)%, 1.2~5.0(w/v)%, 1.6~5.0(w/v)%, 2.0~5.0(w/v)%, 2.4~5.0(w/v)%, 2.8~5.0(w/v)%, 3.2~5.0(w/v)%, 3.6~5.0(w/v)%, 4.0~5.0 (w/v)%, 4.4~5.0 (w/v)%, 0.2~4.4(w/v)%, 0.8~4.4(w/v)%, 1.2~4.4(w/v)%, 1.6~4.4(w/v)%, 2.0~4.4(w/v)%, 2.4~4.4(w/v)%, 2.8~4.4(w/v)%, 3.2~4.4(w/v)%, 3.6~4.4(w/v)%, 4.0~4.4(w/v)%, 0.2~4.0(w/v)%, 0.8~4.0(w/v)%, 1.2~4.0(w/v)%, 1.6~4.0(w/v)%, 2.0~4.0(w/v)%, 2.4~4.0(w/v)%, 2.8~4.0(w/v)%, 3.2~4.0(w/v)%, 3.6~4.0(w/v)%, 0.2~3.6(w/v)%, 0.8~3.6(w/v)%, 1.2~3.6(w/v)%, 1.6~3.6(w/v)%, 2.0~3.6(w/v)%, 2.4~3.6(w/v)%, 2.8~3.6(w/v)%, 3.2~3.6(w/v)%, 0.2~3.2(w/v)%, 0.8~3.2(w/v)%, 1.2~3.2(w/v)%, 1.6~3.2(w/v)%, 2.0~3.2(w/v)%, 2.4~3.2(w/v)%, 2.8~3.2(w/v)%, 0.2~2.8(w/v)%, 0.8~2.8(w/v)%, 1.2~2.8(w/v)%, 1.6~2.8(w/v)%, 2.0~2.8(w/v)%, 2.4~2.8(w/v)%, 0.2~2.4(w/v)%, 0.8~2.4(w/v)%, 1.2~2.4(w/v)%, 1.6~2.4(w/v)%, 2.0~2.4(w/v)%, 0.2~2.0(w/v)%, 0.8~2.0(w/v)%, 1.2~2.0(w/v)%, 1.6~2.0(w/v)%, 0.2~1.6(w/v)%, 0.8~1.6(w/v)%, 1.2~1.6(w/v)%, 0.2~1.2(w/v)%, 0.8~1.2(w/v)%, 또는 0.2~0.8(w/v)%이다.
본 발명의 주사용 제제는, 환자에 투여하기 위해 제1제와 제2제를 혼합하는 경우, 제1제에 포함된 화학식 1의 화합물이 제2제에 용해되면서 용액의 pH를 낮추는데, 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 pH가 너무 낮은 경우 환자에게 고통을 야기할 수 있으므로, 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 pH는 6~8이어야 한다.
구체적으로는, 상기 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 pH는 6~8, 6~7.7, 6~7.4, 6~7.1, 6~6.8, 6~6.5, 6~6.2, 6.3~8, 6.3~7.7, 6.3~7.4, 6.3~7.1, 6.3~6.8, 6.3~6.5, 6.6~8, 6.6~7.7, 6.6~7.4, 6.6~7.1, 6.6~6.8, 6.9~8, 6.9~7.7, 6.9~7.4, 6.9~7.1, 7.2~8, 7.2~7.7, 7.2~7.4, 7.5~8, 또는 7.5~7.7이다.
본 발명의 주사용 제제는, 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 삼투압은 280~330 mOsm/kg이다. 삼투압이 상기 범위보다 낮거나 높은 경우 환자에게 고통을 야기할 수 있으므로 바람직하지 않다.
본 발명의 주사용 제제는, 화학식 1의 함량은 제1제와 제2제가 혼합된 제제 기준으로 5~20 mg/ml의 농도를 가진다.
구체적으로는, 상기 화학식 1의 함량은 제1제와 제2제가 혼합된 제제 기준으로 5~20 mg/ml, 10~20 mg/ml, 15~20 mg/ml, 5~15 mg/ml, 10~15 mg/ml, 5~10 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 또는 20 mg/ml로서, 1회분 용량이 바람직하다.
본 발명의 주사용 제제는, 제1제에 포함된 화학식 1의 화합물은 제2제와 혼합되는 경우, 상기 화합물은 완전히 녹아 제1제와 제2제가 혼합된 용액은 투명한 상태이다.
본 발명의 주사용 제제는 환자에 투여 직전에 제1제와 제2제를 혼합하여 사용하므로, 항산화제, 방부제 등 보존을 위한 부형제를 추가적으로 포함하지 않는다.
본 발명은 본 발명의 주사용 제제를 이용하여 카스파제 관련 질환을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
상기 "치료"란 발병 증상을 보이는 객체에 사용될 때 질병의 진행을 중단 또는 지연시키는 것을 의미하며, 상기 "예방"이란 발병 증상을 보이지는 않지만 그러한 위험성이 높은 객체에 사용될 때 발병 징후를 중단 또는 지연시키는 것을 의미한다.
본 발명의 "카스파제 관련 질환"이란 카스파제를 저해함으로써 치료 내지 예방될 수 있는 질병으로서, 예를 들어, 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애, 간염바이러스에 의한 간질환, 급성 간염, 간경화, 간염바이러스에 의한 뇌손상, 인간 돌발성 간부전증, 패혈증, 장기이식 거부반응, 허혈성 심장질환, 치매, 뇌졸중, AIDS로 인한 뇌손상, 당뇨, 위궤양 등을 들 수 있지만, 위 질환만으로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 주사용 제제는 치료 또는 예방을 요하는 개체에 투여되어 개체의 카스파제 관련 질환을 치료 또는 예방할 수 있다.
본 발명의 용어 "투여" 또는 "투여하는 것"은 본 발명의 주사용 제제의 투여량을 포유동물, 조류, 어류 또는 양서류를 포함하는 척추동물 또는 비척추동물에게 주사로 투여하는 방법을 지칭한다. 바람직한 투여 방법은 치료하고자 하는 질환의 종류, 질환의 부위 및 질환의 경중도에 따라 혈관 주사, 피하주사, 경피주사, 근육주사, 척수 주사, 피부 내 주사 등 통상의 주사 방법에서 선택할 수 있으며, 특히 골 관절과 관련된 질환인 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 또는 파괴성 골 장애의 경우 관절강 내 주사를 선택할 수 있다.
본 발명의 주사용 제제를 이용하여 관절강 내에 주사하는 경우, 초음파 등을 이용한 조영 방법을 사용하여 안내하거나, 국소마취제가 선행 또는 조합되어 투여될 수 있다.
본 발명의 용어 "개체"는 사람, 또는 사람이 아닌 포유동물, 예를 들어, 개, 고양이, 마우스, 래트, 소, 양, 돼지, 염소, 사람이 아닌 유인원, 또는 조류를 칭한다. 일부 구체예에서, 상기 개체는 사람이다.
본 발명의 주사용 제제는 제1제와 제2제를 혼합하여 혼합 용액을 만든 후, 30분 이내에 개체에 투여한다. 따라서, 본 발명의 주사용 제제는 단일환자 주입 또는 투여를 위한 단일-투여를 위한 것이다.
또한, 본 발명의 주사용 제제에는 추가적으로 진통제, 소염제, 스테로이드 등의 약물과 조합하여 투여될 수 있다. 구체적으로는 이부프로펜, 나프록센, 아스피린, 아세트아미노펜, 인도메타신, 경구 또는 병변 부위로의 디클로페낙, 멜록시캄, 셀레콕시브, 피록시캄, 에토돌락, 나부메톤, 루미라콕시브, 발데콕시브, 에토리콕시브, 파레콕시브, 페노프로펜, 옥사프로진, 메파남산, 디플루니살, 플루비로펜, 케토프로펜에서 선택되는 비스테로이드성 항염증제 (NSAIDs); 프레드니손, 메틸프레드니솔론 등의 코르티코이드 계열 약제, 코데인, 펜타닐, 모르핀, 메페리딘 등의 마약류 진통제, 또는 히알루론산 유도체의 주사제 등의 약물과 조합하여 투여될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 주사용 제제를 포함하는 키트를 제공한다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 키트는 본 발명의 화학식 1의 화합물을 포함하는 제1제, 및 상기 화학식 1의 화합물을 녹이기 위한 수용액인 제2제를 포함하는 주사용 제제; 상기 제제를 투여하기 위한 하나 이상의 주사기 등의 투여 시스템, 상기 제1제 및 제2제를 혼합하는 방법, 및 환자를 치료하기 위한 설명 등이 기재된 키트 사용에 대한 설명서를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 키트는 여기서 기술된 바와 같은 제제 및 내용물이 골 관절과 관련된 질환인 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염 또는 파괴성 골 장애에 걸린 환자에 투여된다는 것이 기재된 라벨(label)을 포함할 수 있다. 여기서 환자에 적합한 투여량을 선택하는 것은 환자의 증세, 연령 등을 고려하여 해당 분야의 통상의 기술자의 지식 범위 내이다.
달리 나타내지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 모든 숫자는, 언급되었든지 아니든지, 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 명세서 및 특허청구범위에 사용된 정밀한 수치는 본 개시내용의 추가적인 실시양태를 형성하는 것으로 이해되어야 한다. 실시예에 개시된 수치의 정확성을 보장하기 위해 노력을 기울였다. 그러나, 측정된 모든 수치는 내재적으로 이의 각각의 측정 기법에서 실측된 표준 편차로부터 생성된 특정 오차값을 함유할 수 있다.
실시예 및 비교예에서의 각종 평가는 다음과 같이 실시하였다.
제조예
본 발명에서 API로 사용되는 화학식 1의 화합물인 (R)-N-((2S,3S)-2-(플루오로메틸)-2-하이드록시-5-옥소테트라하이드로퓨란-3-일)-5-이소프로필-3-(이소퀴놀린-1-일)-4,5-디하이드로이소옥사졸-5-카르복사미드) [(R)-N-((2S,3S)-2-(fluoremethyl)-2-hydroxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)-5-isopropyl-3-(isoquinoline-1-yl)-4,5-dihydroisooxazol-5-carboxamide) (이하 "API"라 함)은 KR 10-0774999에 따라 제조되었다.
시험예 1: 용매의 pH에 따른 API의 용해도 확인 (실시예 1~10)
API를 녹일 수 있는 최적의 pH를 도출하기 위하여 다양한 pH를 가지는 소듐 포스페이트 완충액(Sodium phosphate buffer: PB)(실시예 1~9) 및 증류수(실시예 10)를 각각 10 ml을 사용하여 24시간 동안 API를 최대한 녹인 후 pH, 활성형 물질(화학식 2의 화합물), 비활성형 물질(화학식 3의 화합물)의 농도를 HPLC를 이용하여 분석하였다.
그 결과 상기 API는 염기성 용매에서 더 잘 녹았고(실시예 8, 9), 유사한 pH라도 증류수(실시예 10)보다는 포스페이트 완충액(실시예 4)에서 더 잘 녹았다. 또한, 산성 용매의 경우 중성 또는 염기성 용매에 비해 API를 잘 녹이지는 못했지만, 활성형 물질에서 비활성형 물질로의 변환은 염기성 용매에 비해 낮다는 것을 알 수 있다(실시예 1).
또한 용매에 상기 API를 녹인 후 활성형인 화학식 2의 함량 변화를 시간에 따라 측정한 결과 실시예 1의 경우 용해 후 25시간까지 활성형의 함량이 유지되지만, pH가 증가함에 따라 급격하게 활성형의 함량이 감소하고, 특히 실시예 3 내지 실시예 8은 5시간 이내에 20~30%가 비활성형으로 변환된다는 것을 알 수 있다(도 1).
따라서, 상기 API는 염기성 용매에서 잘 녹지만, 녹은 후에는 활성형인 화학식 2의 화합물에서 비활성형인 화학식 3의 화합물로의 변환율이 염기성 용매에서 산성 용매보다는 높다는 것을 알 수 있다. 또한, 실시예 1 내지 10의 용매 모두 용매의 pH 보다 용액의 pH가 낮다는 것을 알 수 있고, 특히 실시예 10의 경우 증류수는 완충 효과가 없으므로, pH가 급격하게 감소하는 것을 알 수 있다.
실시예 용매의 pH 용액 pH 활성형+비활성형 농도(mg/ml) 활성형
농도(mg/ml)		 비활성형
농도(mg/ml)
실시예 1 1.72 1.66 0.15 0.12 0.03
실시예 2 3.41 3.44 0.06 0.03 0.03
실시예 3 4.38 4.30 0.15 0.07 0.08
실시예 4 6.17 5.45 1.47 0.67 0.8
실시예 5 6.74 6.14 4.62 2.03 2.59
실시예 6 7.49 6.63 6.18 2.67 3.51
실시예 7 7.95 7.04 5.71 2.47 3.24
실시예 8 9.27 7.06 5.88 2.56 3.32
실시예 9 10.66 7.17 6.04 2.82 3.22
실시예 10 6.08 3.93 0.07 0.04 0.03
시험예 2: 용매 조성에 따른 API의 용해 여부. 용해 시간 및 pH 확인 (실시예 11~20)
표 2에 기재되어 있는 조성으로 API를 녹여 10 mg/ml 용액을 만들기 위한 용매를 제조하였다. 표 2와 같이 소듐 포스페이트 완충액 (Sodium phosphate buffer: PB) 농도를 0 내지 10 mM, NaOH 농도를 23 내지 50 mM, Tween®80의 농도를 0 내지 0.4(w/v)%, 하이드록시프로필 베타 사이클로덱스트린(Hydroxypropyl beta cyclodextrein: HPβCD)의 농도를 0 내지 20(w/v)%로 용매를 만들었다. API는 염기성 용액에서 잘 녹는 특징을 가지고 있으므로, NaOH 및/또는 PB를 이용하여 pH 11~12의 용매를 제조하였다.
소듐 포스페이트 완충액은 소듐 포스페이트 2염기산 6수화물(Sodium phosphate dibasic heptahydrate)와 소듐 포스페이트 1염기산 1수화물(Sodium phosphate monobasic monohydrate)를 혼합하여 pH 7.4로 제조하였다. HPβCD는 몰당 치환범위(molar substitution range)는 0.81~0.99이고, 분자량은 약 1500g/mol인 파렌터럴 그레이드(parenteral grade)의 시약을 사용하였다.
실시예 용매 조성 용매의 pH
실시예 11 50 mM NaOH 12.4
실시예 12 30 mM NaOH 12.1
실시예 13 25 mM NaOH 12.1
실시예 14 25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 12.0
실시예 15 25 mM NaOH
20(w/v)% HPβCD		 11.0
실시예 16 10 mM PB pH 7.4
50 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 12.3
실시예 17 10 mM PB pH 7.4
30 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 11.8
실시예 18 10 mM PB pH 7.4
27 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 11.8
실시예 19 10 mM PB pH 7.4
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 11.7
실시예 20 10 mM PB pH 7.4
23 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 11.6
조성에 따라 실시예 11 내지 20에 의해 제조된 용매(1 ml)를 뚜껑이 있는 용기에 넣은 후, API를 10 mg/ml의 농도로 넣은 후 뚜껑을 닫고 최대 10분 동안 손으로 흔들어 혼합하였다. 이때 API 용해 여부, API가 완전히 용해되는데 걸리는 시간(용해시간) 및 API 용해 후 용매의 pH를 측정하여 표 3에 나타내었다.
실시예 11 내지 13에서 제조한 용매는 NaOH가 25 내지 50 mM이고, 다른 부형제는 사용하지 않았다. NaOH 농도가 50 mM인 실시예 1과 30 mM인 실시예 2는 API 10 mg/ml을 잘 녹였지만, API가 용해된 용액의 pH가 10 이상으로 본 제형을 관절강 내 투여시 환자에게 통증을 유발할 수 있으므로, 실시예 11 및 12는 API를 용해시키기 위한 용매로 적절하지 않다. 또한, NaOH 농도가 25 mM인 실시예 13은 API를 완전히 녹이지 못하므로, 적절한 용매가 될 수 없었다. 따라서, 실시예 11 내지 13의 결과로부터 NaOH 만을 포함하는 용매는 API를 용해시키기 위한 용매로 적절하지 않다는 것을 알 수 있다.
실시예 14, 15는 각각 25 mM NaOH에 가용화제로 폴리소르베이트 80(이하 "Tween® 80"이라 함) 또는 HPβCD를 포함하여 제조된 용매로서, 각 용매에서는 API가 일부 녹지 않아 NaOH에 가용화제를 추가로 포함하는 용매 역시 API를 용해시키기 위한 용매로 적절하지 않다는 것을 알 수 있다.
실시예 16 내지 20에서 제조한 용매는 10mM PB에 0.4(w/v)% Tween® 80을 포함하는 것은 동일하고, NaOH의 함량만이 달랐는데, 모든 용매에서 API가 잘 녹았다. 다만, 실시예 16, 17은 API가 용해된 후 pH가 11.3, 9.4로서 여전히 높은데 비해, 실시예 18~20은 모두 pH가 7.0~7.3으로 주사제형으로 사용하기에 절절한 용매라는 것을 알 수 있다.
또한, 실시예 19는 실시예 14의 조성에서 10 mM PB를 추가하였을 뿐인데, 녹지 않았던 10 mg/ml의 API가 녹았고, 용해 후 용액의 pH도 7.3으로 적절히 조절되었다. 따라서, 본 발명의 API를 녹이는 용매 선정에 있어, pH 완충작용을 하는 PB의 존재가 매우 중요함을 알 수 있다.
HPβCD 계면활성제는 20%에서도 0.4% Tween® 80에 비해 큰 효과를 보지 못하였고, HPβCD 함량 증가시 삼투압이 너무 높아질 수 있어, 계면활성제로서 Tween® 80을 선정하였다.
실시예 API 10mg/ml
용해 여부		 100% 용해시간 API와 혼합 후
측정된 pH
실시예 11 O 0.5분 11.7
실시예 12 O 2분 10.4
실시예 13 완전히 녹지 않음 - 8.5
실시예 14 완전히 녹지 않음 - 8.0
실시예 15 완전히 녹지 않음 - 7.8
실시예 16 O 0.5분 11.3
실시예 17 O 4분 9.4
실시예 18 O 5분 7.2
실시예 19 O 5분 7.3
실시예 20 O 7~10분 7.0
(O: API가 완전히 녹아 투명한 상태)
시험예 2: 용매 조성에 따른 삼투압 확인 (실시예 21~25)
표 4에 기재되어 있는 조성으로 실시예 21 내지 25의 용매를 제조한 후, 각 용매의 삼투압을 삼투압측정기를 이용하여 측정한 후, 10 mg/ml의 API를 녹인 후 용액(혼합액)의 삼투압을 측정하였다.
실시예 용매 조성 용매의 pH
실시예 21 50 mM PB
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 7.3
실시예 22 100 mM PB
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 7.3
실시예 23 130 mM PB
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80		 7.3
실시예 24 10 mM PB
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80
0.6(w/v)% NaCl		 11.7
실시예 25 10 mM PB
25 mM NaOH
0.4(w/v)% Tween® 80
0.7(w/v)% NaCl		 11.7
실시예 21 내지 25의 용매 모두 10 mg/ml의 API를 잘 녹였고, 용매의 삼투압, API를 용해시킨 용액의 삼투압 및 양 삼투압의 차이를 표 5에 나타내었다.
실시예 21 내지 25 모두 용매 삼투압에 비해 10 mg/ml을 녹인 후에 삼투압이 증가되었다. 특히 PB로 삼투압을 높인 실시예 21 내지 23의 경우 삼투압 차이는 22~23 mOsm/kg인데, 이는 API 10 mg/ml이 녹으면 몰농도가 24 mM이므로, 실시예 21 내지 23은 API가 모두 용해된 것을 알 수 있다. 하지만, NaCl로 용매의 삼투압을 맞춘 실시예 24 및 25는 API가 완전히 용해되지 않았을 뿐만 아니라, 이를 반영하여 삼투압 차이도 11 내지 13 mOsm/kg였다.
게다가 실시예 24 및 25는 실시예 21 내지 23보다 pH 가 높은 용매지만, API를 완전히 녹이지 못하는 것으로 보아 본 발명의 API를 녹이기 위해서는 일정 정도의 완충능이 필수적이라는 것을 알 수 있다.
또한, 주사제로 사용하기 위한 제형의 바람직한 삼투압 범위는 280~330 mOsm/kg로서, 이 범위를 못 미치거나 넘으면 환자는 고통을 느낄 수 있다. 따라서 이러한 기준을 적용하였을 때, 최종 용액 삼투압이 318 mOsm/kg인 실시예 23의 제형이 주사제 제형으로 바람직하다는 것을 알 수 있다.
실시예 API 10mg/ml
용해 여부		 용매 삼투압
(mOsm/Kg)		 용액 삼투압
(mOsm/Kg)		 삼투압 차이
(mOsm/Kg)
실시예 21 O 129 152 23
실시예 22 O 236 259 23
실시예 23 O 296 318 22
실시예 24 △ 249 262 13
실시예 25 △ 277 288 11
(O: API가 완전히 녹아 투명한 상태, △: API 일부가 녹지 않음)
시험예 3: API의 용액 내 안정성 확인
화학식 1의 API(Active form)는 수용액에서 빠르게 가수분해되어 활성이 없는 상태(Inactive form)로 변하기 때문에 주사제 조제 후 용액 내 활성형의 함량을 측정하기 위해 실시예 23의 용매를 이용하여 API 10 mg/ml을 녹였고, 시간이 지남에 따라 변화되는 활성형 API(화학식 2의 화합물)의 농도 및 순도를 용해 후 60분까지 HPLC를 이용하여 측정하였다.
아래 표 6와 같이 실시예 23의 용매로 10 mg/ml의 API를 혼합하여 API 용액을 제조한 후, 화학식 2('활성형 API'라 함) 및 화학식 3의 화합물(이하 '비활성형 API'라 함)을 합한 농도(활성형 및 비활성형 API를 합한 양)는 혼합 후 10분까지 9.69 mg/ml의 농도에 도달한 후 30분까지는 비슷한 농도를 유지하였지만, 혼합 후 60분 후에는 감소하는 경향을 보였다.
하지만, 활성형 API의 경우 혼합 후 계속 감소하는 경향을 보였다. 혼합 30분 후에는 활성형 API의 함량이 약 95.5%이고, 비활성형 API의 함량이 4.33%인데 반해, 60분 후에는 활성형 API의 함량이 94.18%, 비활성형 API의 함량이 5.59%로서, 통상의 API 스펙인 활성형 95% 이상의 함량에 미치지 못하므로, 본 발명의 API는 용매 혼합 후 30분 이내로 사용해야 한다는 것을 확인하였다.
혼합 후 측정 시간 (분) 농도 (mg/ml) 피크 면적(%)
전체 활성형 비활성형 활성형 비활성형
3.5 9.02 8.76 0.26 97.12 2.84
5 9.3 9.03 0.27 97.08 2.85
10 9.69 9.4 0.29 96.92 3.00
30 9.73 9.31 0.42 95.52 4.33
60 9.46 8.93 0.53 94.18 5.59
시험예 4: 다양한 함유량의 API 용액 제조
표 7과 같이 실시예 23의 용매를 기반으로 하여, 본 발명의 API가 염기성에 잘 녹는 성질 및 최종 용액의 삼투압을 고려하여 PB와 NaOH 조성에 변화를 주어 실시예 26~28의 용매를 제조하였다.
실시예 API 함유량 용매 조성
실시예 26 2 mg/ml 130 mM PB
5 mM NaOH
0.4 (w/v)% Tween® 80
실시예 27 5 mg/ml 120 mM PB
12.5 mM NaOH
0.4 (w/v)% Tween® 80
실시예 28 15 mg/ml 110 mM PB
37.5 mM NaOH
0.4 (w/v)% Tween® 80
실시예 26 내지 28의 용매의 pH 및 삼투압을 측정한 후, 각각 2 mg/ml, 5 mg/ml, 15 mg/ml의 API를 각각 녹인 후 혼합액의 pH 및 삼투압을 측정하였다. 그 결과 표 7에 기재된 바와 같이 실시예 26 내지 28의 용매를 사용하여 API를 녹이는 경우 그 혼합액의 pH 및 삼투압은 모두 환자의 관절강 내 투여하기에 적절한 pH와 삼투압을 가지는 것을 알 수 있다.
실시예 API 함유량
(mg/ml)		 용매 용액
pH 삼투압 (mOsm/Kg) pH 삼투압 (mOsm/Kg)
실시예 26 2 7.34 293 7.29 297
실시예 27 5 7.57 277 7.3 290
실시예 28 15 10.65 266 7.31 299
다음으로 실시예 26 내지 28의 용매에 의해 제조된 주사제의 API 농도와 순도를 조제직후, 30분 후, 60분 후에 각각 측정한 후 그 결과를 표 8에 기재하였다. 혼합 직후 순도는 약 97%이고, 혼합 30분 후 순도는 95~96%, 혼합 60분 후 순도는 93~94%로 측정되었다. 따라서, 모든 용량의 완제에서 혼합 30분까지는 적절한 순도를 유지하고, 혼합 60분 후에는 비활성형 API가 스펙(비활성형 API가 5% 미만) 기준 이상으로 생성되므로, 환자에 투여하기에는 적절하지 않다. 따라서, 모든 완제는 사용 직전에 조제하고, 혼합 후 30분 내에 주사해야 한다는 것을 확인하였다.
실시예 API
함유량
(mg/ml)		 용해 직후 30분 후 60분 후
활성형
(%)		 비활성형
(%)		 활성형
(%)		 비활성형
(%)		 활성형
(%)		 비활성형
(%)
실시예 26 2 97.09 2.91 95.98 3.93 94.25 5.52
실시예 27 5 97.23 2.77 95.83 4.04 94.29 5.48
실시예 28 15 96.88 3.06 95.63 4.23 93.85 5.9

Claims (18)

  1. 화학식 1의 화합물을 포함하는 제1제; 및
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023000757-appb-img-000008
    상기 화학식 1의 화합물을 녹이기 위한 포스페이트 완충제, 계면활성제, 및 pH 조절제로서 NaOH를 포함하는 pH는 7~11의 수용액인 제2제;를 포함하는, 주사용 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제1제는 분말 형태인, 주사용 제제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 화합물의 함량은 제1제와 제2제가 혼합된 용액 기준으로 5~20 mg/ml인, 주사용 제제.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 pH는 6~8인, 주사용 제제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 제1제와 제2제가 혼합된 용액의 삼투압은 280~330 mOsm/kg인, 주사용 제제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 포스페이트 완충제는 소듐 포스페이트 2염기산 6수화물과 소듐 포스페이트 1염기산 1수화물의 혼합물인, 주사용 제제.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 포스페이트 완충제의 함량은 제2제 기준으로 100~130 mM인, 주사용 제제.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65 및 폴리소르베이트 80에서 선택되는 것인, 주사용 제제.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80인, 주사용 제제.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 계면활성제의 함량은 제2제 기준으로 0.2~5.0(w/v)%인, 주사용 제제.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 NaOH의 함량은 제2제 기준으로 12~42 mM인, 주사용 제제.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 주사용 제제는 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애, 간염바이러스에 의한 간질환, 급성 간염, 간경화, 간염바이러스에 의한 뇌손상, 인간 돌발성 간부전증, 패혈증, 장기이식 거부반응, 허혈성 심장질환, 치매, 뇌졸중, AIDS로 인한 뇌손상, 당뇨, 위궤양에서 선택되는 질환을 치료 또는 예방하기 위한, 주사용 제제.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 질환은 골 관절염, 류마티스성 관절염, 퇴행성 관절염, 파괴성 골 장애에서 선택되는 질환인, 주사용 제제.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 주사용 제제는 단일-투여양으로, 제1제와 제2제를 혼합한 용액 상태로 사용되는, 주사용 제제.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 관절강 내로 투여되는, 주사용 제제.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 30분 이내에 관절강 내로 투여되는, 주사용 제제.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 주사용 제제는 제1제와 제2제가 혼합된 후, 1회 투여되는, 주사용 제제.
  18. 화학식 1의 화합물을 포함하는 제1제; 및
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023000757-appb-img-000009
    상기 화학식 1의 화합물을 녹이기 위한 pH 7~11의 완충액인 제2제;를 포함하는 주사용 제제로서,
    상기 주사용 제제는 제1제와 제2제를 혼합한 후, 30분 이내에 하기 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물의 함량을 측정하였을 때, 화학식 2의 화합물 및 화학식 3의 화합물의 전체 함량 중, 화학식 2의 화합물의 함량이 95% 이상인, 주사용 제제.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2023000757-appb-img-000010
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2023000757-appb-img-000011
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