WO2023085973A1 - Фармацевтические композоции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний - Google Patents

Фармацевтические композоции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний Download PDF

Info

Publication number
WO2023085973A1
WO2023085973A1 PCT/RU2022/000335 RU2022000335W WO2023085973A1 WO 2023085973 A1 WO2023085973 A1 WO 2023085973A1 RU 2022000335 W RU2022000335 W RU 2022000335W WO 2023085973 A1 WO2023085973 A1 WO 2023085973A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
gramicidin
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
cyclic
decapeptide
Prior art date
Application number
PCT/RU2022/000335
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Алексей Алексеевич САМСОНОВ
Варвара Николаевна Шмелева
Наталья Александровна ГОЛУБЕВА
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2021133140A external-priority patent/RU2794363C1/ru
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект"
Publication of WO2023085973A1 publication Critical patent/WO2023085973A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/66—Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B, C; Related peptides

Definitions

  • SUBSTANCE invention relates to medicine and chemical-pharmaceutical industry, namely to improved gramicidin C substances containing certain amounts of new cyclic decapeptides from the gramicidin C family, as well as to pharmaceutical compositions containing them for the treatment of infectious and inflammatory diseases.
  • Infectious and inflammatory diseases of the oral cavity and pharynx are among the most common reasons for patients to apply to local therapists, otorhinolaryngologists, pediatricians, which is associated with a high incidence among young people, working age and children, therapeutic tactics for infectious-inflammatory diseases of the mucous membrane of the oral cavity and pharynx includes the appointment of drugs with anti-inflammatory, analgesic, immunocorrective effects, local antiseptics, decongestants and hyposensitizing drugs [Morozova S. V. Pain in the throat: causes and possibilities of drug therapy. BC, Vol. 13, No. 21, 2005, p. 1447-1452].
  • Topical antibiotics remain one of the groups of drugs used to treat this group of diseases. New generations of antibiotics are being introduced into medical practice. At the same time, there is a tendency, along with the search for new pharmacological agents, to maximize the potential of already known agents.
  • These agents include gramicidin C, the first original domestic antibiotic polypeptide of the tyrothricin group, isolated from a culture of Bacillus brevis by G.F. Gause and M.G. Brazhnikova in 1942, intended exclusively for local use [Gause, GG; Brazhnikova, M. G. Gramicidin S and its use in the treatment of infected wounds. Nature 1944, 154, 703].
  • Gramicidin C preparations have a pronounced bactericidal effect against pathogenic gram-positive and gram-negative bacteria [Kondejewski, L. N., et al. Gramicidin S Is Active against Both GramPositive and Gram-Negative Bacteria. Int. J. Pept.
  • Protein Res. 1996, 47(6), 460-466 which in most cases either directly cause diseases of the throat and oral cavity, or join secondarily with an initially viral infection - Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus pneumoniae, Neisseria, anaerobes and other Gramicidin C preparations also have some fungistatic and antiviral activity.
  • rational antibiotic therapy in order to prevent the emergence and spread of resistant strains of microorganisms, in all cases where it is possible to predict the causative agent of infection with a high degree of probability, it is recommended to give preference to just such drugs. Polypeptide resistance develops quite rarely.
  • gramicidin C also referred to as gramicidin C-1
  • gramicidin C-2 also referred to as gramicidin C-1
  • gramicidin C-3 Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 58(1), 331-335.].
  • gramicidins C have the following structures: gramicidin C: cyclo(-U al - Om-Leu-D-Phe-Pro - V al - From - Leu-D-Phe-Pro-); gramicidin C-2: cyclo(-Ya1-Om-Leu-P-Pe - Pro-Abu-Om-Leu-D-Phe-Pro-); gramicidin C-3: cyclo(-Abu-Om-Leu-B-Pe - Pro-Abu-Om-Leu-D-Phe-Pro-); where Abu is a 2-aminobutyric acid residue.
  • Gramicidin C-2 has the following structural formula:
  • Gramicidin C-3 has the following structural formula:
  • the objective of the present invention is to expand the arsenal of gramicidin C drugs, including the development of new effective compositions based on gramicidin C, which have increased antibacterial activity.
  • the problem is solved by obtaining improved substances and compositions of gramicidin C containing certain amounts of cyclic decapeptides from the gramicidin C family, and creating effective antibacterial pharmaceutical compositions containing them.
  • the inventors obtained new, previously unknown cyclic decapeptides from the gramicidin C family, which were given the following names: gramicidin C-4-1, gramicidin C-4-2, gramicidin C-5.
  • the subject of the present invention is gramicidin C-4-1, which is a cyclic decapeptide from the gramicidin C family, characterized in that it has the following structure: cyclo(-Ya1-Ot-eu-B-Pe-Pro-Ya1-Ot-2-amino-(5-methylhexanoic acid)-B-Pe-Pro-).
  • Gramicidin C-4-1 has the following structural formula:
  • the subject of the present invention is also gramicidin C-4-2, which is a cyclic decapeptide from the gramicidin C family, characterized in that it has the following structure: homoleucine-B-Pe-Pro-) .
  • Gramicidin C-4-2 has the following structural formula:
  • the subject of the present invention is also gramicidin C-5, which is a cyclic decapeptide from the gramicidin C family, characterized in that it has the following structure: -Om-Leu-D-Phe-Pro-).
  • Gramicidin C-5 has the following structural formula:
  • the subject of the present invention is also an active pharmaceutical substance of gramicidin C intended for the treatment of infectious inflammatory diseases, containing gramicidin C or a pharmaceutically acceptable salt thereof, gramicidin C-4-1 and/or gramicidin C-4-2 and/or gramicidin C-5 in the following ratio (% wt.):
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 3.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 2.5% of the mass. In one embodiment of the present invention, the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 2.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 1.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 1.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-1 in an amount of not more than 0.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 4.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 4.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 3.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 3.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 2.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 2.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 1.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical substance contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 1.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-5 in an amount of not more than 0.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 3.0% of the mass. In one embodiment of the present invention, the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 2.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 2.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 1.5% of the mass.
  • the active pharmaceutical substance contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 1.0% of the mass.
  • the active pharmaceutical ingredient contains gramicidin C-4-2 in an amount of not more than 0.5% of the mass.
  • gramicidin C-4-2 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of its pharmaceutically acceptable salt.
  • gramicidin C-4-2 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of dihydrochloride.
  • the active pharmaceutical substance contains additional unidentifiable impurities in an amount of not more than 2.0% of the mass.
  • gramicidin C in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of dihydrochloride.
  • gramicidin C-4-1 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of its pharmaceutically acceptable salt.
  • gramicidin C-4-1 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of dihydrochloride.
  • gramicidin C-5 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of its pharmaceutically acceptable salt.
  • gramicidin C-5 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of dihydrochloride.
  • the subject of the present invention is also a pharmaceutical composition for the treatment of infectious and inflammatory diseases for topical use, containing the active pharmaceutical ingredient described above in a therapeutically effective amount and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the subject of the present invention is also a pharmaceutical composition for the treatment of infectious and inflammatory diseases for topical use, containing cyclic decapeptides from the gramicidin C family and pharmaceutically acceptable excipients, characterized in that it contains gramicidin C, gramicidin C- 4-1 and/or gramicidin C-4-2 and/or gramicidin C-5 in the following ratio (wt %):
  • the gramicidin C-5 in the active pharmaceutical ingredient is in the form of its pharmaceutically acceptable salt.
  • gramicidin C-5 in the composition of the active pharmaceutical substance is in the form of dihydrochloride.
  • the subject of the present invention is also a pharmaceutical composition for the treatment of infectious and inflammatory diseases for topical use, containing the active pharmaceutical ingredient described above in a therapeutically effective amount and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the subject of the present invention is also a pharmaceutical composition for the treatment of infectious and inflammatory diseases for local use, containing cyclic decapeptides from the gramicidin C family and pharmaceutically acceptable excipients, characterized in that it contains as cyclic decapeptides from the gramicidin C family gramicidin C, gramicidin C-4-2 and/or gramicidin C-5 in the following ratio (wt %):
  • Gramicidin C-4-2 - 0-3.5% wt.
  • the subject of the present invention is also the active pharmaceutical substance of gramicidin C, intended for the treatment of infectious inflammatory diseases, containing gramicidin C or a pharmaceutically acceptable salt thereof and 0-3.5 wt% of a cyclic decapeptide having the structure cyclo(-Ya1-Om-leu-0- P11e-Pro-Ya1-Om-2-amino-(5-methylhexanoic acid)-O-Pe-Pro-) and/or UHKno(-Val-Orn-Leu-D-Phe - Pro-Ya1-Om-P- homoleucine-B-Pe-Pro-).
  • the subject of the present invention is also the active pharmaceutical substance of gramicidin C, intended for the treatment of infectious inflammatory diseases, containing gramicidin C or a pharmaceutically acceptable salt thereof and 0-5.0 wt% of a cyclic decapeptide having the structure cyclo(-Ya1-".-methyl-T .-ornithine-Gay-O-PHe - Pro - Val-Om - Leu - D-Phe-Pro-).
  • the subject of the present invention is also the use of the pharmaceutical compositions of the present invention for the treatment or improvement of an infectious inflammatory disease of the mouth and throat.
  • the subject of the present invention is also a drug for the treatment of infectious and inflammatory diseases, containing gramicidin C or its pharmaceutically acceptable salt, gramicidin C-4-1 and/or C-4-2, and gramicidin C-5 (% wt, based on the total content cyclic decapeptides from the gramicidin C family):
  • the subject of the present invention is also a drug for the treatment of infectious and inflammatory diseases containing gramicidin C or its pharmaceutically acceptable salt of gramicidin C-4-1 and/or C-4-2 in the following amount (% wt, based on the total content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family):
  • the subject of the present invention is also a drug for the treatment of infectious and inflammatory diseases, containing gramicidin C or a pharmaceutically acceptable salt thereof and gramicidin C-5 in the following amount (% wt, based on the total content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family):
  • the subject of the present invention is also a process for the separation of cyclic decapeptides from the gramicidin C family in substances, based on the HPLC method, comprising the following steps:
  • a method for separating cyclic decapeptides from the gramicidin C family in substances includes determining the content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family in the test solution from the obtained chromatograms.
  • the inventors unexpectedly found that the active pharmaceutical ingredients of gramicidin C and the pharmaceutical compositions of the present invention have:
  • the content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family in active pharmaceutical ingredients and/or compositions (in % wt.) decapeptide is divided by the sum of the areas of all considered peaks and multiplied by 100%.
  • a chromatographic system is used that is suitable for the separation of gramicidin C, gramicidins of the C-4 group and gramicidin C-5.
  • the minimum detectable amount of cyclic decapeptide, determined by HPLC is 0.5% of the mass.
  • the gramicidin C substances may further comprise gramicidin C-2 and/or gramicidin C-3.
  • the gramicidin C substances contain gramicidin C in an amount of 85.0-99.9 wt % of the total content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family in the substance.
  • the infectious-inflammatory disease is selected from the group consisting of tonsillitis, periodontal disease, pharyngitis, tonsillitis, periodontitis, gingivitis, stomatitis, glossitis, adenoiditis, laryngitis.
  • the inflammatory disease refers to inflammatory diseases of the mouth and throat.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a topical solution.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a spray.
  • the pharmaceutical composition in the form of a topical solution is applied after meals, topically by irrigation or by spraying onto the mucous membranes of the mouth and throat.
  • a pharmaceutical composition in the form of a spray when using a pharmaceutical composition in the form of a spray, for maximum therapeutic effect, rinse the throat well. Immediately after using the drug, you should refrain from eating and drinking for 1 hour.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a tablet.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a buccal tablet.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a lozenge.
  • the pharmaceutical composition in the form of a lozenge is administered after a meal by dissolving in the mouth without chewing. Immediately after using the drug, you should refrain from eating and drinking for 1-2 hours.
  • the dosage when using a pharmaceutical composition in the form of a lozenge, is 1 tablet (3 mg of gramicidin C) 1-4 times a day for 7 days.
  • the pharmaceutical composition contains an antiseptic. Cetylpyridinium, benzalkonium, benzethonium, cetalkonium chloride, cetrimonium chloride, cetrimide, chlorhexidine, didecyldimethylammonium chloride, domifene bromide, dophanium chloride, tetraethylammonium bromide, etc. are used as an antiseptic. The group is not limited to this list.
  • the pharmaceutical composition contains an anesthetic.
  • an anesthetic lidocaine, trimecaine, ultracaine, mepivacaine, procaine, dicaine, benzocaine, oxybuprocaine, bupivacaine are used.
  • the group is not limited to this list.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention further comprise cetylpyridinium chloride and/or oxybuprocaine hydrochloride.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention can be administered (but not limited to) orally, inhalation, topically.
  • Dosage forms of the pharmaceutical compositions of the present invention include, but are not limited to: tablets, in particular buccal tablets, effervescent tablets, orodispersible tablets, and the like; solutions, aerosols, sprays, and other dosage forms.
  • the therapeutic dosage of the active pharmaceutical substance or pharmaceutical composition of the present invention containing gramicidin C in a therapeutically effective amount in patients may be adjusted depending on the therapeutic efficacy, age, sex and stage of the disease of the patient.
  • immediate principle means a physiologically active substance (active substance) synthetic or other (biotechnological, plant, animal, microbial and other) origin, possessing pharmacological activity and being the active principle of a pharmaceutical composition used for the production and manufacture of a medicinal product (means).
  • drug means a substance (or combination of substances) that comes into contact with the human or animal body, penetrates the organs and tissues of the human or animal body, and is intended to restore, correct or change physiological functions in humans and animals, as well as to treatment and prevention of diseases.
  • Medicinal products include pharmaceutical substances and drugs.
  • drug means a medicinal product in the form of a dosage form used for the treatment and prevention of a disease.
  • drug form means the state of the medicinal product, corresponding to the methods of its administration and use and ensuring the achievement of the desired therapeutic effect.
  • pharmaceutically acceptable excipient in the context of the present invention characterizes substances of inorganic or organic origin used in the manufacturing process, the manufacture of drugs to give them the necessary physical and chemical properties.
  • “Pharmaceutical composition” in the context of the present invention means a composition comprising an active substance and at least one of the pharmaceutically acceptable excipients used in the art, where the "pharmaceutically acceptable excipient” in the context of the present invention is selected from the group, consisting of pharmaceutically acceptable and pharmacologically compatible carriers, adjuvants such as solvents, diluents, preservatives, stabilizers, fillers, disintegrants, humectants, emulsifiers, suspending agents, thickeners, sweeteners, flavoring agents, fragrances, antibacterial agents, fungicides, lubricants, slow release regulators delivery agents, antiseptics, anesthetics, solubilizers, buffer agents, the choice and ratio of which depends on their nature, method of administration of the composition and dosage.
  • adjuvants such as solvents, diluents, preservatives, stabilizers, fillers, disintegrants, humectants, emulsifier
  • Protection against the action of microorganisms can be provided with a variety of antibacterial and antifungal agents, such as benzyl alcohol, urotropine, ethylenediaminetetraacetic acid, benzoic acid, chlorobutanol, sorbic acid, parabens, alkyl pyridinium, benzethonium and their pharmaceutically acceptable salts and the like.
  • the pharmaceutical composition may also include isotonic agents such as sugars, sodium chloride and the like.
  • Prolonged action of the composition can be achieved with agents that slow down the absorption of the active principle, such as hydrophilic polymeric release retardants, for example, cellulose derivatives, in particular hydroxypropyl methylcellulose, polyethylene oxide, gelatin, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, alginates, carbomers, hydrophobic release retarders such as glyceryl behenate, aluminum monostearate.
  • hydrophilic polymeric release retardants for example, cellulose derivatives, in particular hydroxypropyl methylcellulose, polyethylene oxide, gelatin, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, alginates, carbomers, hydrophobic release retarders such as glyceryl behenate, aluminum monostearate.
  • suitable carriers, solvents and diluents are water, ethanol, polyalcohols, buffer solutions and mixtures thereof, vegetable oils (such as, for example, olive oil) and organic esters (such as, for example, ethyl oleate
  • fillers are lactose, microcrystalline cellulose, sodium citrate, calcium carbonate, calcium phosphate and the like.
  • lubricants are magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, talc, and polyethylene glycol.
  • sliding agents are colloidal silicon dioxide, starch, talc and the like.
  • filler means excipients used to give solid dosage forms a given volume or mass.
  • Starch, glucose, sucrose, lactose (milk sugar), basic magnesium carbonate, magnesium oxide, sodium chloride, sodium bicarbonate, white clay (kaolin), gelatin, microcrystalline cellulose (MCC), methylcellulose (MC) can be used as fillers.
  • binder means substances that are part of the tableting mass to give it the necessary viscosity.
  • Water, ethyl alcohol, starch paste, sugar syrup, solutions are used as binders: carboxymethylcellulose (CMC), hydroxyethylcellulose (OEC), hydroxypropylmethylcellulose (OPMC); polyvinyl alcohol (PVA), polyvinylpyrrolidone (PVP), alginic acid, sodium alginate, gelatin, etc.
  • the group is not limited to this list.
  • disintegrant means substances used to improve disintegration or dissolution by providing mechanical disintegration of tablets in a liquid medium, which is necessary for the rapid release of the active substance.
  • the disintegrant may be one or more of microcrystalline cellulose, croscarmellose sodium, crospovidone, sodium starch glycolate, starch, pectin, gelatin, amylopectin, ultramylopectin, agar-agar, alginic acid, potassium and sodium alginate, tween-80, and others. The group is not exhausted by this list.
  • the term "glidant” means adjuvants used in the tablet manufacturing process at the compression stage to improve the flow of granules or powder by reducing friction between particles.
  • the lubricant may be one or more of starch, talc, polyethylene oxide-4000, stearic acid, calcium and magnesium stearate, and others. The group is not limited to this list.
  • lubricant or “lubricant” means excipients that help reduce the friction force between the tablet surface and the walls of the punch cell in which the tablet is formed, used in the technological process of tablet production at the pressing stage.
  • the lubricant may be one or more of magnesium stearate, calcium stearate, sodium stearyl fumarate, polyethylene glycol (over 3350 molecular weight), sodium lauryl sulfate, talc, mineral oil, leucine and poloxamer, etc. The group is not limited to this list.
  • antiseptic means quaternary ammonium salts, as well as other compounds: cetylpyridinium, benzalkonium, benzethonium, cetalkonium chloride, cetrimonium chloride, cetrimide, chlorhexidine, didecyldimethylammonium chloride, domifene bromide, dophanium chloride, tetraethylammonium bromide.
  • the group is not limited to this list.
  • the term "anesthetic” means lidocaine, trimecaine, ultracaine, mepivacaine, procaine, dicaine, benzocaine, oxybuprocaine, bupivacaine. The group is not exhausted by this list.
  • flavoring means aromatic substances related to flavorings artificial, identical to natural or natural origin.
  • moistureturizer also means a thickener to slow down the hydrolysis of components; as a moisturizer, you can use: propylene glycol, hexylene glycol, butylene glycol, glyceryl triacetate (aka triacetin, if I'm not mistaken), neoagarobiose, sorbitol, xylitol, maltitol, maltol. The group is not exhausted by this list.
  • sweetener means sucralose, acesulfame potassium, sodium saccharinate. The group is not exhausted by this list.
  • preservative means propyl paraben, methyl paraben, benzoic acid, ethyl paraben, sodium benzoate, potassium.
  • group is not limited to this list.
  • the term "solubilizer” means polysorbate, a surfactant, in the presence of which sparingly soluble antibiotics dissolve better.
  • the group includes pluronics, polyethylglycols. The group is not exhausted by this list.
  • pharmaceutically acceptable in the context of the present invention means that the substance or composition to which this term is applied must be compatible from the point of view of chemistry and / or toxicology with other ingredients that make up the drug, and are safe for the person who treat (relieve symptoms) with the substance or composition.
  • active pharmaceutical ingredient in the context of the present invention means a synthesis product containing any substance or mixture of substances of synthetic or other (biotechnological, plant, animal, microbial and other) origin, intended for the production of medicines, which in the process of manufacturing a medicine ( drug) becomes the active ingredient of that drug.
  • Such products are intended to exhibit pharmacological activity or other direct effect in the diagnosis, treatment, symptomatic relief or prevention of disease, or to affect the structure or function of the body.
  • pharmaceutically acceptable salts or “salts” includes salts of active compounds that are prepared with relatively non-toxic acids.
  • non-toxic salts examples include salts formed with inorganic acids such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric and perchloric acids, or with organic acids such as acetic, oxalic, maleic, tartaric, succinic, citric or malonic acids, or obtained by others. methods used in this area.
  • inorganic acids such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric and perchloric acids
  • organic acids such as acetic, oxalic, maleic, tartaric, succinic, citric or malonic acids, or obtained by others. methods used in this area.
  • salts include adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentane propionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemi sulfate, heptanate, hexanate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate (mesylate), 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate,
  • an “effective amount” in the context of the present invention refers to the amount of a pharmaceutical composition or drug that, when administered to a subject for the treatment of a disease or at least one of the clinical symptoms of the disease or disorder, is sufficient to effect such treatment on the disease, disorder or symptom.
  • An “effective amount” may vary depending on the disease, disorder and/or symptoms of the disease or disorder, the severity of the disease, disorder and/or symptoms of the disease, the age of the subject being treated, and/or the weight of the subject being treated. The proper amount in any particular case will be apparent to one of ordinary skill in the art, or can be determined by routine experimentation.
  • dosage used here characterizes the content of one or more active substances in quantitative terms per dose unit, or volume unit, or mass unit in accordance with the dosage form, or for some types of dosage forms, the amount of active substance released from the dosage form per unit time .
  • treatment cover the treatment of pathological conditions in mammals, preferably in humans, and include: a) reduction, b) blocking (suspension) of the course of the disease, c) alleviation of the severity of the disease, i. induction of regression of the disease, d) reversal of the disease or condition to which the term is applied, or one or more symptoms of the disease or condition.
  • prophylaxis encompasses the elimination of risk factors as well as the prophylactic treatment of subclinical stages of the disease in mammals, preferably in humans, aimed at reducing the likelihood of occurrence of clinical stages of the disease.
  • Patients for prophylactic therapy are selected on the basis of factors that, based on known data, entail an increased risk of clinical stages of the disease compared with the general population.
  • Preventive therapy includes: a) primary prevention and b) secondary prevention.
  • Primary prevention is defined as prophylactic treatment in patients who have not yet reached the clinical stage of the disease. Secondary prevention is the prevention of the recurrence of the same or a closely related clinical condition or disease.
  • HPLC refers to a high-performance liquid chromatography method, one of the effective methods for separating complex mixtures of substances, which is widely used in both analytical chemistry and chemical technology.
  • PPHS solution refers to a chromatographic system suitability test solution used in the process of determining the content of cyclic decapeptides from the gramicidin C family in substances by HPLC.
  • SPTS solution refers to a solution for assessing the sensitivity of the chromatographic system used in the process of determining the content cyclic decapeptides from the gramicidin C family in substances by HPLC.
  • New cyclic decapeptides from the gramicidin C family (gramicidins C-4-1, C-4-2 and C-5) were isolated and identified from the gramicidin C substance obtained by cultivating a mutant strain derived from the Aneurinibacillus migulanus strain VKPMV-10212 (RU2627182, 08/03/2017).
  • the mutant strain was obtained as follows.
  • the original strain of Aneurinibacillus migulanus VKPMV-10212, producing gramicidin C was grown on a standard liquid semi-synthetic medium containing yeast autolysate in shaking flasks with a capacity of 0.75 l (0.1 l of the medium) on a circular shaker (speed 220 rpm, amplitude 1 m) at 37°C for 48 hours.
  • the cells were then sequentially treated with rubomycin and acridine orange for 20 minutes each by sequentially adding the indicated mutagens to the cells at final concentrations of 100 and 40 ⁇ g/ml, respectively.
  • the cells treated with mutagens were placed on agarized Gause-Brazhnikova medium in Petri dishes (50 ⁇ l of cell suspension per 1 Petri dish). The cells were then incubated at 37°C for 24 hours. At the end of the incubation, the resulting cell colonies were examined and those that were morphologically different from the original strain were selected. As a result of the mutagenesis, seven cell colonies were selected. Next, for each selected mutant colony, the yield of gramicidin C was determined.
  • Gramicidin C was extracted with ethanol:HC1 (2:1 ratio, respectively).
  • the HPLC method was used for the quantitative determination of gramicidin C in the obtained substances of gramicidin C.
  • HPLC HPLC was used for analysis, a technique compatible with mass spectrometric detection.
  • a 0.1% formic acid solution (pH 2.7) was selected as the aqueous phase compatible with mass spectrometry.
  • Substances with chromatographic peaks other than those of gramicidins C, C-2 and C-3 were extracted and the collected samples were analyzed by chromatography-mass spectrometry to obtain MS and MS/MS spectra for the collected substances.
  • MSI release time of which coincided with the release time of the substances of interest
  • the isolated substances were identified, which belonged to cyclic decapeptides not previously described in the literature.
  • their hydrolysis was also carried out, followed by a chromato-mass-spectrometric analysis of the hydrolysis products.
  • extracted ion chromatograms were constructed for amino acids and their homologues.
  • the leucine residue was replaced by a 2-amino-5-methylhexanoic acid residue (the decapeptide was given the name gramicidin C-4-1); 2) the leucine residue was replaced by a P-homoleucine residue (the decapeptide was given the name gramicidin C-4-2);
  • Chromatography-mass-spectrometric analysis of the reference substances confirmed the identity of the structures of the reference substances and new cyclic decapeptides - gramicidins C-4-1, C-4-2, C-5, isolated from the gramicidin C substance of the mutant strain. The results obtained confirmed the correctness of the determination of the structures of gramicidins C-4-1, C-4-2, C-5.
  • the quantitative content of gramicidins C-4-1, C-4-2, C-5 in the substance of gramicidin C obtained during its cultivation was also measured by HPLC using a chromatographic system suitable for separating gramicidin C, gramicidins of the group C-4 and gramicidin C-5.
  • the gramicidin C substance was separated from the culture liquid and biomass.
  • the substance of gramicidin C obtained by cultivating the obtained mutant strain, always contained amounts of gramicidin C-5 and/or one of the gramicidins of the C-4 group: C-4-1 or C-4-2 detected by HPLC. .
  • the minimum detectable amount of cyclic decapeptide using the HPLC method was determined as 0.5% of the mass.
  • the substance of gramicidin C obtained by cultivating the obtained mutant strain always contained no more than 3.5 wt% of gramicidin C-4-1 or C-4-2 and no more than 5.0 wt% of gramicidin C -5.
  • Example 2 HPLC Method Using a Chromatographic System Suitable for the Separation of Gramicidin C, Group C-4 Gramicidins, and Gramicidin C-5
  • a solution with pH 2.5 was used, which was prepared as follows: 6.00 g of lithium perchlorate was placed in a volumetric flask with a capacity of 1000 ml, 900 ml of water for chromatography was added, stirred until the salt was completely dissolved, 1.0 ml of phosphoric acid was added concentrated acid, mixed, adjusted the pH of the resulting solution to 2.5 ⁇ 0.05 with a 30% sodium hydroxide solution, brought the volume of the solution with water for chromatography to 1000 ml, stirred and filtered through a membrane filter with a pore diameter of 0.45 ⁇ m.
  • the solvent used was a solution prepared as follows: sufficient amounts of pH 2.5 buffer solution and acetonitrile were mixed in a 1:1 (v/v) ratio.
  • test solution was prepared as follows: 25.0 mg of powder of the substance was placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, dissolved in 20 ml solvent, the volume of the solution was brought up to the mark with the solvent and mixed. 1.0 ml of the obtained solution was transferred into a volumetric flask with a capacity of 10 ml, the volume of the solution was adjusted to the mark with the solvent and stirred.
  • a solution was used that was prepared as follows: 25.0 mg of a standard sample of gramicidin C dihydrochloride (a sample containing detectable amounts of gramicidin C, gramicidin C-4-1 or C-4-2, gramicidin C-5 ) was placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, dissolved in 20 ml of the solvent, the volume of the solution was brought up to the mark with the solvent, and mixed. 1.0 ml of the obtained solution was transferred into a volumetric flask with a capacity of 10 ml, the volume of the solution was adjusted to the mark with the solvent and stirred.
  • solution for checking the suitability of the chromatographic system As a solution for checking the suitability of the chromatographic system (solution for PPHS), a solution was used, which was prepared as follows: 1.0 ml of the standard solution was placed in a 20.0 ml volumetric flask, the volume of the solution was brought up to the mark with the solvent and stirred.
  • solution for SPChS As a solution for assessing the sensitivity of the chromatographic system (solution for SPChS), a solution was used, which was prepared as follows: 1.0 ml of a solution for PPHS was transferred into a volumetric flask with a capacity of 50.0 ml, the volume of the solution was brought up to the mark with a solvent and stirred.
  • the volume of the injected sample is 20 ⁇ l.
  • the retention time of the gramicidin C peak was determined to be about 17 min, the relative retention time of the C-4 group gramicidin peak relative to the gramicidin C peak was about 1.20, and the relative retention time of the gramicidin C-5 peak was about 0.95.
  • a typical chromatogram of a solution for PPHS (a solution containing detectable amounts of gramicidin C, gramicidin C-4-1 or C-4-2, gramicidin C-5) is obtained by HPLC using a chromatographic system suitable for separating gramicidin C, gramicidins of the C-4 group and gramicidin C-5.
  • HPLC did not take into account peaks from the solvent, peaks up to 7.0 min (substances not related to cyclic decapeptides from the gramicidin C family), peaks after 25 min (return of the system to its original state) and peaks with an area less than the area of the gramicidin C peak on the chromatogram of the solution for PTCS (less than 0.10%).
  • S is the peak area of the target decapeptide i on the chromatogram of the test solution (average value over three chromatograms);
  • ⁇ Si is the sum of the areas of all peaks of decapeptides from the gramicidin C family on the chromatogram of the test solution (average value over three chromatograms).
  • compositions 1-14 (Table 1) were obtained by adding a certain amount of gramicidins C-4-1, C-4-2, C-5, synthesized by peptide synthesis, to the purified substance of gramicidin C, containing only gramicidin C-1.
  • compositions 1-14 their antibacterial activity in vitro was determined according to the following method: the minimum inhibitory concentration (in ⁇ g/ml) of each of the compositions 1-14, which completely inhibited the growth of the test bacterial strain on agarized meat-peptone medium.
  • the minimum inhibitory concentration was determined by the method of serial microdilutions of the starting substances and the addition of each microdilution to the tested bacterial strain. The minimum inhibitory concentration was determined as the last dilution in which there was no growth of the test bacterial strain.
  • compositions 15-21 substances were prepared that either contain gramicidin C-4-1 or C-4-2 in an amount of more than 3.5% of the mass, and / or gramicidin C-5 of more than 5% of the mass, (compositions 15-21), or do not contain gramicidins C-4-1, C-4-2 and C-5 (compositions 22, 23). Comparison compositions are shown in Table 2.
  • Gramicidins C-2 and C-3 in composition 22 were obtained according to the method described in [Nozaki, S., & Muramatsu, I. (1985). Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 58(1), 331-335].
  • Gramicidin C in formulation 23 was prepared according to the procedure described in [Wee, X., Wu, X., Ng, NLJ, Mak, C. K., Qin, C., & Guo, Z. (2004). Synthesis of Gramicidin S and Its Analogues via an On-Resin Macrolactamization Assisted by a Predisposed Conformation of the Linear Precursors. The Journal of Organic Chemistry, 69(8), 2681-2685]. Table 2. Comparison compositions indicating the ratio of gramicidin C (in wt %)
  • compositions 1-14 compositions 1-14
  • reference compounds compositions 15-283
  • minimum inhibitory concentration in ⁇ g/ml
  • Mycoides 537 is given
  • Table 3 shows that the active pharmaceutical ingredients of the present invention have lower minimum inhibitory concentration values than the reference formulations, i.e. the substances of the present invention have higher antibacterial activity than the reference formulations.
  • the content of gramicidin C-4-1 or C-4-2 in an amount of not more than 3.5% of the mass, and gramicidin C-5 in an amount of not more than 5.0% of the mass, in the substance of gramicidin C leads to an unexpected improvement in their antibacterial properties against pathogenic bacteria in vitro.
  • reference substances that do not contain gramicidins C-4 and C-5 are characterized by reduced antibacterial activity. against pathogenic bacteria in vitro compared to the substances of the present invention.
  • the active pharmaceutical ingredients of the present invention also have surprisingly higher minimum inhibitory concentration values with respect to strains of non-pathogenic bacteria in the microbiota of healthy people than the reference formulations, i.e. the substances of the present invention have lower antibacterial activity against non-pathogenic bacteria than the reference formulations.
  • the found selectivity of the antibacterial action of the substances according to the present invention is a great advantage of the claimed invention, since it provides:
  • gramicidin compounds C-4-1, C-4-2, C-5 showed independent antibacterial activity against pathogenic bacteria.
  • compositions 1-14 For the active pharmaceutical ingredients of the present invention obtained in example 3 (compositions 1-14) and the comparative compositions obtained in example 4 (compositions 15-23), their hemolytic activity was determined.
  • compositions 1-14 Hemolytic activity of pharmaceutical substances of the present invention (compositions 1-14) and reference compounds (compositions 15-23)
  • the substances of the present invention unexpectedly have higher concentrations required for lysis of 100% of red blood cells, that is, they have reduced hemolytic activity compared to the reference compounds (formulations 15-23). Reduced hemolytic activity is a great advantage of the substances of the present invention, as it reduces the frequency and intensity of side effects.
  • the content of gramicidin C-4-1 or C-4-2 in an amount of not more than 3.5% of the mass, and / or gramicidin C-5 in an amount of not more than 5.0% of the mass, in the substance of gramicidin C leads to an unexpected improve its properties, namely, to reduce hemolytic activity.
  • compositions 1-14, table 1 Based on the active pharmaceutical ingredients of gramicidin C obtained in example 3 (compositions 1-14, table 1), a pharmaceutical composition was prepared in the form of a spray of the following composition:
  • Gramicidin C any of the compositions 1-14 of table 1 0.027-0.033% of the mass.
  • Citric acid monohydrate 0.026-0.032% wt.
  • Methyl parahydroxybenzoate (methylparaben) 0.0736-0.1104% wt.
  • Propyl parahydroxybenzoate (propyl paraben) 0.0080-0.0120% wt.
  • the specified pharmaceutical composition in the form of a spray was prepared in the following way: glycerol was added to purified water, stirred, then citric acid monohydrate, sodium citrate and sucralose were added, stirred until complete dissolution.
  • a solution of gramicidin C was prepared by mixing purified water, ethanol 96% and polysorbate 80, adding gramicidin C, methyl parahydroxybenzoate, propyl parahydroxybenzoate and stirring until complete dissolution, followed by the addition of mint flavor and stirring. The resulting solutions were stirred until complete homogenization and filtered.
  • compositions 1-14, table 1 Based on the active pharmaceutical ingredients of gramicidin C obtained in example 3 (compositions 1-14, table 1), a pharmaceutical composition was prepared in the form of a tablet for buccal administration of the following composition:
  • Gramicidin C any of the compositions 1-14 of Table 1 0.2-0.4% wt.
  • the specified pharmaceutical composition in the form of a tablet for buccal administration was prepared in the following way: refined sugar in the form of powder and lactose at a ratio of 1:1 were sieved through a 38 sieve, mixed, moistened with a mixture of solutions from a 5% aqueous solution of methylcellulose and an alcoholic solution of gramicidin C.
  • the moistened mass was granulated through a sieve with D-1.2 mm, dried in air or in a dryer at a temperature not exceeding 40°C to a moisture content of 1.5-2.5%.
  • the mass was passed through a granulator with a drum opening diameter of 1–1.2 mm.
  • the resulting granulate was powdered with calcium stearate and tableted.
  • compositions of the present invention are by no means limited to the examples presented, which are provided merely as an illustration of the present invention.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к улучшенным субстанциям грамицидина С, содержащих определенные количества новых циклических декапептидов из семейства грамицидинов С, а также к содержащим их фармацевтическим композициям для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.

Description

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
ОПИСАНИЕ
Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к улучшенным субстанциям грамицидина С, содержащих определенные количества новых циклических декапептидов из семейства грамицидинов С, а также к содержащим их фармацевтическим композициям для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.
Уровень техники
Инфекционно-воспалительные заболевания полости рта и глотки (фарингит, глоссит, стоматит, гингивит и другие) относятся к наиболее частым причинам обращаемости пациентов к участковым терапевтам, оториноларингологам, педиатрам, что связано с высоким уровнем заболеваемости среди людей молодого, трудоспособного возраста и детей, терапевтическая тактика при инфекционновоспалительных заболеваниях слизистой оболочки полости рта и глотки включает в себя назначение лекарственных препаратов, обладающих противовоспалительным, анальгезирующим, иммунокорректирующим действием, локальных антисептиков, противоотечных и гипосенсибилизирующих препаратов [Морозова С. В. Боль в глотке: причины и возможности медикаментозной терапии. РМЖ, том 13, №21, 2005, с. 1447- 1452].
Одной из групп препаратов, используемых для лечения указанной группы заболеваний, остаются топические антибиотики. В медицинскую практику внедряются новые поколения антибиотиков. В то же время существует тенденция наряду с поиском новых фармакологических средств максимально использовать потенциал уже известных средств.
К таким средствам относится грамицидин С - первый оригинальный отечественный антибиотик-полипептид тиротрициновой группы, выделенный из культуры Bacillus brevis Г.Ф. Гаузе и М.Г. Бражниковой в 1942 г., предназначенный исключительно для местного применения [Gause, G. G.; Brazhnikova, М. G. Gramicidin S and its use in the treatment of infected wounds. Nature 1944, 154, 703]. Препараты грамицидина С обладают выраженным бактерицидным действием в отношении патогенных грамположительных и грамотрицательных бактерий [Kondejewski, L. Н., et al. Gramicidin S Is Active against Both GramPositive and Gram-Negative Bacteria. Int. J. Pept. Protein Res. 1996, 47(6), 460-466], которые в большинстве случаев либо непосредственно являются причиной заболеваний горла и полости рта, либо присоединяются вторично при изначально вирусной инфекции, - Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus pneumoniae, нейссерий, анаэробов и др. Препараты грамицидина С обладают также некоторой фунгистатической и противовирусной активностью. Согласно современным представлениям о рациональной антибиотикотерапии, с целью профилактики возникновения и распространения устойчивых штаммов микроорганизмов во всех случаях, когда с высокой степенью вероятности можно предсказать возбудителя инфекции, предпочтение рекомендуется отдавать именно таким препаратам. Устойчивость к полипептидам развивается достаточно редко. В литературе имеется очень мало сообщений о выделении резистентных к грамицидину С штаммов микроорганизмов от больных или из природных источников. Очень трудно получить устойчивые к этому антибиотику штаммы и в лабораторных условиях [Полин А.Н., Егоров Н.С. Структурнофункциональные особенности грамицидина С в связи с его антибиотической активностью // Антибиотики и химиотерапия. - 2003. - №48(12). - С. 29-32]. Благодаря оригинальности химической структуры, механизма действия и способу применения использование грамицидина С не должно сопровождаться повышением уровня устойчивости к антибиотикам для системного применения.
Известны препараты грамицидина С в виде таблеток [патент РФ №2213558, опубл. 10.10.2003] и в виде жидких композиций [патент РФ №2633635, опубл. 16.10.2017; патент РФ №2604576, опубл. 10.12.2016; патент РФ №2627423, опубл. 08.08.2017]. Также известны комбинации грамицидина С с амброксолом [патент РФ №2749902, опубл. 18.06.2021], грамицидина С с цетилпиридиния хлоридом [патент РФ №2633635, опубл. 16.10.2017] и с оксибупрокаина гидрохлоридом [патент РФ №2627423, опубл. 08.08.2017].
В настоящее время известны три циклических декапептида из семейства грамицидинов С, имеющих схожую антибактериальную активность: грамицидин С (также имеет обозначение грамицидин С-1), грамицидин С-2 и грамицидин С-3 [Nozaki, S., & Muramatsu, I. (1985). Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 58(1), 331-335.]. Указанные грамицидины С имеют следующие структуры: грамицидин С : цикло(-У al— Om-Leu-D-Phe-Pro— V al— От— Leu-D-Phe-Pro-) ; грамицидин С-2: цикло(-Уа1-От-Ьеи-П-РЬе — Pro- Abu-Om-Leu-D-Phe-Pro-); грамицидин С-3: цикло(-АЬи-От-Ьеи-В-РЬе — Pro-Abu-Om-Leu-D-Phe-Pro-); где Abu - остаток 2-аминомасляной кислоты.
Грамицидин С-2 имеет следующую структурную формулу:
Figure imgf000004_0001
Грамицидин С-3 имеет следующую структурную формулу:
Figure imgf000005_0001
С учетом распространенности инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта и глотки есть необходимость в создании новых эффективных лекарственных средств с антибактериальной активностью.
Таким образом, задачей настоящего изобретения является расширение арсенала лекарственных препаратов грамицидина С, включающее разработку новых эффективных композиций на основе грамицидина С, обладающих повышенной антибактериальной активностью.
Задача решается получением улучшенных субстанций и композиций грамицидина С, содержащих определенные количества циклических декапептидов из семейства грамицидинов С, и создание содержащих их эффективных антибактериальных фармацевтических композиций.
Раскрытие сущности изобретения
Авторы изобретения получили новые, ранее неизвестные циклические декапептиды из семейства грамицидинов С, которым были присвоены следующие названия: грамицидин С-4-1, грамицидин С-4-2, грамицидин С-5.
Таким образом, предметом настоящего изобретения является грамицидин С-4-1, представляющий собой циклический декапептид из семейства грамицидинов С, отличающийся тем, что он имеет следующую структуру: цикло(-Уа1-От- еи-В-РЬе- Рго-Уа1-От-2-амино-(5-метилгексановая кислота)-В-РЬе-Рго-).
Грамицидин С-4-1 имеет следующую структурную формулу:
Figure imgf000006_0001
Предметом настоящего изобретения также является грамицидин С-4-2, представляющий собой циклический декапептид из семейства грамицидинов С, отличающийся тем, что он имеет следующую структуру: цикло(-Уа1-Огп-Геи-О-РЬе — Pro-V аЮгп-Р-гомолейцин-В-РЬе-Рго-) .
Грамицидин С-4-2 имеет следующую структурную формулу:
Figure imgf000006_0002
Предметом настоящего изобретения также является грамицидин С-5, представляющий собой циклический декапептид из семейства грамицидинов С, отличающийся тем, что он имеет следующую структуру: цикло(-Уа1-а-метил-Ь- орнитин-Leu-D-Phe — Pro-Val-Om- Leu- D-Phe-Pro-).
Грамицидин С-5 имеет следующую структурную формулу:
Figure imgf000007_0001
Предметом настоящего изобретения также является активная фармацевтическая субстанция грамицидина С, предназначенная для лечения инфекционновоспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, грамицидин С-4-1 и/или грамицидин С-4-2 и/или грамицидин С-5 в следующем соотношении (% масс.):
Грамицидин С — 91,5-99,9% масс.;
Грамицидин С-4-1 и/или С-4-2 - 0-3,5% масс.;
Грамицидин С-5 - 0-5,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 3,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 2,5% масс. В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 2,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 1,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 1,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-1 в количестве не более 0,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 4,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 4,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 3,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 3,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 2,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 2,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 1,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 1,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-5 в количестве не более 0,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 3,0% масс. В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 2,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 2,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 1,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 1 ,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит грамицидин С-4-2 в количестве не более 0,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-4-2 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-4-2 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме дигидрохлорида.
В одном из вариантов настоящего изобретения активная фармацевтическая субстанция содержит дополнительно неидентифицируемые примеси в количестве не более 2,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме дигидрохлорида.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-4-1 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-4-1 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме дигидрохлорида.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-5 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-5 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме дигидрохлорида. Предметом настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний для местного применения, содержащая описанную выше активную фармацевтическую субстанцию в терапевтически эффективном количестве и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
Предметом настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний для местного применения, содержащая циклические декапептиды из семейства грамицидинов С и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что она в качестве циклических декапептидов из семейства грамицидинов С содержит грамицидин С, грамицидин С-4-1 и/или грамицидин С-4-2 и/или грамицидин С-5 в следующем соотношении (% масс.):
Грамицидин С - 91,5-99,9% масс.;
Грамицидин С-4-1 и/или С-4-2 - 0-3,5% масс.;
Грамицидин С-5 - 0-5,0% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-5 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме егофармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов настоящего изобретения грамицидин С-5 в составе активной фармацевтической субстанции находится в форме дигидрохлорида.
Предметом настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний для местного применения, содержащая описанную выше активную фармацевтическую субстанцию в терапевтически эффективном количестве и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
Предметом настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний для местного применения, содержащая циклические декапептиды из семейства грамицидинов С и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что она в качестве циклических декапептидов из семейства грамицидинов С содержит грамицидин С, грамицидин С-4-2 и/или грамицидин С-5 в следующем соотношении (% масс.):
Грамицидин С - 91,5-99,9% масс.;
Грамицидин С-4-2 - 0-3,5% масс.;
Грамицидин С-5 - 0-5,0% масс.
Предметом настоящего изобретения также является активная фармацевтическая субстанция грамицидина С, предназначенная для лечения инфекционновоспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и 0-3,5% масс, циклического декапептида, имеющего структуру цикло(-Уа1-От-Ьеи-0-Р11е-Рго-Уа1-От-2-амино-(5-метилгексановая кислота)-О-РЬе- Рго-) и/или UHKno(-Val-Orn-Leu-D-Phe — Рго-Уа1-От-Р-гомолейцин-В-РЬе-Рго-).
Предметом настоящего изобретения также является активная фармацевтическая субстанция грамицидина С, предназначенная для лечения инфекционновоспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и 0-5,0% масс, циклического декапептида, имеющего структуру цикло(-Уа1-«.-метил-Т.-орнитин-Геи-О-РНе — Pro— Val-Om— Leu— D-Phe-Pro-).
Предметом настоящего изобретения также является применение фармацевтических композиций по настоящему изобретению для лечения или улучшения состояния при инфекционно-воспалительном заболевании полости рта и горла.
Предметом настоящего изобретения также является лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, грамицидин С-4-1 и/или С-4-2, и грамицидин С-5 (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидина С):
Грамицидин С - 91,5-99,9% масс.;
Грамицидин С-4-1 и/или С-4-2 - 0-3,5% масс.;
Грамицидин С-5 - 0-5,0% масс.
Предметом настоящего изобретения также является лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль грамицидин С-4-1 и/или С-4-2 в следующем количестве (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидина С):
Грамицидин С - 96,5-99,9% масс.;
Грамицидин С-4-1 и/или С-4-2 - 0-3,5% масс.
Предметом настоящего изобретения также является лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и грамицидин С-5 в следующем количестве (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидина С):
Грамицидин С - 95,0-99,9% масс.;
Грамицидин С-5 - 0-5,0% масс.
Предметом настоящего изобретения также является способ разделения циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанциях, основанный на методе ВЭЖХ, включающий следующие стадии:
- приготовление буферного раствора с pH 2,5 путем смешивания перхлората лития, воды, фосфорной кислоты и натрия гидроксида;
- приготовления растворителя путем смешивания буферного раствора с pH 2,5 и ацетонитрила в соотношении 1 :1 (о: о);
- приготовление испытуемого раствора путем растворения порошка субстанции в растворителе;
- разделение циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанции методом ВЭЖХ с использованием колонки «Kinetex® Cl 8» (2,6 мкм; 100 х 4,6 мм фирмы Phenomenex) при скорости потока 0,9 мл/мин, температуре колонки (15 ± 1)°С и при следующем градиентном режиме:
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
В одном из вариантов настоящего изобретения способ разделения циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанциях включает определение содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в испытуемом растворе по получаемым хроматограммам.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что активные фармацевтические субстанции грамицидина С и фармацевтические композиции по настоящему изобретению обладают:
- повышенной антибактериальной активностью по отношению к патогенным бактериям;
- сниженной антибактериальной активностью по отношению к непатогенным бактериям нормальной микробиоты человека;
- сниженной антибактериальной активностью по отношению к непатогенным бактериям нормальной микробиоты дыхательных путей человека;
- сниженной частотой возникновения и интенсивностью побочных эффектов;
- повышенной противовоспалительной активностью;
- улучшенной стабильностью при хранении;
- сниженной гигроскопичностью.
Таким образом, техническими результатами настоящего изобретения являются:
- расширение арсенала лекарственных препаратов грамицидина С;
- повышенная антибактериальная активность по отношению к патогенным бактериям у активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению;
- сниженная антибактериальная активность по отношению к непатогенным бактериям нормальной микробиоты человека у активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению; - сниженная антибактериальная активность по отношению к непатогенным бактериям нормальной микробиоты дыхательных путей человека у активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению;
- сниженная частота возникновения и интенсивности побочных эффектов;
- повышенная противовоспалительная активность активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению;
- улучшенная стабильность при хранении активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению;
- сниженная гигроскопичность активных фармацевтических субстанций и фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
В одном из вариантов настоящего изобретения содержание циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в составе активных фармацевтических субстанций и/или композиций (в % масс.) рассчитывается методом нормализации по хроматограмме, полученной методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), следующим образом: площадь пика целевого циклического декапептида делится на сумму площадей всех учитываемых пиков и умножается на 100 %. При определении содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С используется хроматографическая система, пригодная для разделения грамицидина С, грамицидинов группы С-4 и грамицидина С-5.
В одном из вариантов настоящего изобретения минимальное детектируемое количество циклического декапептида, определяемое методом ВЭЖХ, составляет 0,5% масс.
В одном из вариантов настоящего изобретения субстанции грамицидина С могут дополнительно содержать грамицидин С-2 и/или грамицидин С-3.
В одном из вариантов настоящего изобретения субстанции грамицидина С содержат грамицидин С в количестве 85,0-99,9 % масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидина С в субстанции.
В одном из вариантов настоящего изобретения инфекционно-воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из ангины, пародонтоза, фарингита, тонзиллита, пародонтита, гингивита, стоматита, глоссита, аденоидита, ларингита. В одном из вариантов настоящего изобретения инфекционно-воспалительное заболевание относится к инфекционно-воспалительным заболеваниям полости рта и горла.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция выполнена в форме раствора для местного применения.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция выполнена в форме спрея.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическую композицию в форме раствора для местного применения применяют после еды, местно путем орошения или путем распыления на слизистую оболочку полости рта и горла.
В одном из вариантов настоящего изобретения при применении фармацевтической композиции в форме спрея для максимального терапевтического эффекта следует хорошо прополоскать горло. Непосредственно после применения препарата следует воздержаться от приема пищи и напитков в течение 1 часа.
В одном из вариантов настоящего изобретения при применении фармацевтической композиции в форме спрея дозировка составляет 3-4 впрыска (1 впрыск = 200 мкл, 0,3 мг/мл грамицидина С) на 1 применение, 3-4 раза в день в течение 3-7 дней.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция выполнена в форме таблетки.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция выполнена в форме буккальной таблетки.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция выполнена в форме таблетки для рассасывания.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическую композицию в форме таблетки для рассасывания применяют после еды, путем рассасывания во рту не разжевывая. Непосредственно после применения препарата следует воздержаться от приема пищи и напитков в течение 1-2 часов.
В одном из вариантов настоящего изобретения при применении фармацевтической композиции в форме таблетки для рассасывания дозировка составляет по 1 таблетке (3 мг грамицидина С) 1-4 раза в день в течение 7 дней. В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит антисептик. В качестве антисептика используются цетилпиридиний, бензалконий, бензетоний, цеталкония хлорид, цетримония хлорид, цетримид, хлоргексидин, дидецилдиметиламмония хлорид, домифен бромид, дофания хлорид, тетраэтиламмония бромид и др. Группа не исчерпывается данным списком.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит анестетик. В качестве анестетика используются лидокаин, тримекаин, ультракаин, мепивакаин, прокаин, дикаин, бензокаин, оксибупрокаин, бупивакаин. Группа не исчерпывается данным списком.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтические композиции по настоящему изобретению дополнительно содержат цетилпиридиния хлорид и/или оксибупрокаина гидрохлорид.
В одном из вариантов настоящего изобретения фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут вводиться (не ограничиваясь указанным) перорально, ингаляционно, местно.
Лекарственные формы фармацевтических композиций по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются указанным: таблетки, в частности, буккальные таблетки, шипучие таблетки, диспергируемые в полости рта таблетки и т.п.; растворы, аэрозоли, спреи, и другие лекарственные формы.
Терапевтическая дозировка активной фармацевтической субстанции или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, содержащие в терапевтически эффективном количестве грамицидин С, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности, возраста, пола и стадии заболевания пациента.
Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.
Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.
Термин «лекарственное начало», «лекарственная субстанция», «лекарственное вещество» означает физиологически активное вещество (действующее вещество) синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).
Термин «лекарственное средство» означает вещество (или комбинацию веществ), вступающее в контакт с организмом человека или животного, проникающее в органы и ткани организма человека или животного, и предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней. К лекарственным средствам относятся фармацевтические субстанции и лекарственные препараты.
Термин «лекарственный препарат», «препарат» означает лекарственное средство в виде лекарственной формы, применяемой для лечения и профилактики заболевания.
Термин «лекарственная форма» означает состояние лекарственного препарата, соответствующее способам его введения и применения и обеспечивающее достижение необходимого лечебного эффекта.
Термин «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» в контексте настоящего изобретения характеризует вещества неорганического или органического происхождения, используемые в процессе производства, изготовления лекарственных препаратов для придания им необходимых физико-химических свойств.
«Фармацевтическая композиция» в контексте настоящего изобретения обозначает композицию, включающую в себя активное вещество и, по крайней мере, одно из фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, применяемых в данной области техники, где «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» в контексте настоящего изобретения выбрано из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых носителей, вспомогательных средств, таких как растворители, разбавители, консерванты, стабилизаторы, наполнители, дезинтегранты, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, антисептики, анестетики, солюбилизаторы, буферные агенты, выбор и соотношение которых зависит от их природы, способа введения композиции и дозировки. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как бензиловый спирт, уротропин, этилендиаминтетрауксусная кислота, бензойная кислота, хлорбутанол, сорбиновая кислота, парабены, алкилпиридиний, бензетоний и их фармацевтически приемлемые соли и подобные им соединения. Фармацевтическая композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, таких как гидрофильные полимерные замедлители высвобождения, например, производные целлюлозы, в частности, гидроксипропилметилцеллюлоза, полиэтиленоксид, желатин, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, альгинаты, карбомеры, гидрофобные замедлители высвобождения, такие как глицерилбегенат, моностеарат алюминия. Примерами подходящих носителей, растворителей и разбавителей являются вода, этанол, полиспирты, буферные растворы, а также их смеси, растительные масла (такие, например, как оливковое масло) и органические сложные эфиры (такие, например, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль. Примерами скользящих агентов являются кремния диоксид коллоидный, крахмал, тальк и тому подобное.
Термин «наполнитель» или «разбавитель» означает вспомогательные вещества, используемые для придания твердым лекарственным формам заданного объема или массы. В качестве наполнителей могут быть использованы крахмал, глюкоза, сахароза, лактоза (молочный сахар), магния карбонат основной, магния окись, натрия хлорид, натрия гидрокарбонат, глина белая (каолин), желатин, целлюлоза микрокристаллическая (МЦК), метилцеллюлоза (МЦ), натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (Na КМЦ), кальция карбонат, кальция фосфат двузамещенный, глицин (аминоуксусная кислота), декстрин, амилопектин, ультраамилпектин, сорбит, маннит, пектин и др. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «связывающие» означает вещества, входящие в состав таблетируемой массы для придания ей необходимой вязкости. В качестве связывающих веществ используются вода, спирт этиловый, крахмальный клейстер, сахарный сироп, растворы: карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), оксиэтилцеллюлозы (ОЭЦ), оксипропилметилцеллюлозы (ОПМЦ); поливиниловый спирт (ПВС), поливинилпирролидон (ПВП), альгиновая кислота, натрия альгинат, желатин и др. Группа не исчерпывается данным списком. Термин «разрыхлитель» означает вещества, использующиеся для улучшения распадаемости или растворения, обеспечивая механическое разрушение таблеток в жидкой среде, что необходимо для скорейшего высвобождения действующего вещества. Разрыхлитель может быть представлен одним или несколькими из числа микрокристаллической целлюлозы, кроскармеллозы натрия, кросповидона, натриевой соли гликолята крахмала, крахмала, пектина, желатина, амилопектина, ультраамилопектина, агар-агар, альгиновой кислоты, калия и натрия альгината, твин-80 и др. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «скользящее вещество» означает вспомогательные вещества, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования для улучшения текучести гранул или порошка за счет уменьшения трения между частицами. Скользящее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа крахмала, талька, полиэтиленоксида-4000, стеариновой кислоты, кальция и магния стеарата и др. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «смазывающее вещество» или «лубрикант» означает вспомогательные вещества, способствующие уменьшению силы трения между поверхностью таблетки и стенками кюветы пуансона, в которой таблетка формируется, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования. Смазывающее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа стеарата магния, стеарата кальция, стеарил фумарата натрия, полиэтиленгликоля (с молекулярной массой свыше 3350), лаурилсульфата натрия, талька, минерального масла, лейцина и полоксамера и др. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «антисептик» означает четвертичные аммониевые соли, а также другие соединения: цетилпиридиний, бензалконий, бензетоний, цеталкония хлорид, цетримония хлорид, цетримид, хлоргексидин, дидецилдиметиламмония хлорид, домифен бромид, дофания хлорид, тетраэтиламмония бромид. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «анестетик» означает лидокаин, тримекаин, ультракаин, мепивакаин, прокаин, дикаин, бензокаин, оксибупрокаин, бупивакаин. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «ароматизатор» означает ароматические вещества, относящиеся к ароматизаторам искусственным, идентичным натуральным либо натурального происхождения. Термин «увлажнитель» означает также загуститель для замедления гидролиза компонентов; в качестве увлажнителя можно использовать: пропиленгликоль, гексиленгликоль, бутиленгликоль, глицерил триацетат (он же триацетин, если не ошибаюсь), неоагаробиоза, сорбитол, ксилит, мальтитол, мальтол. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «подсластитель» означает сукралозу, ацесульфам калия, сахаринат натрия. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «консервант» означает пропил парабен, метил парабен, бензойную кислоту, этилпарабен, бензоат натрия, калия. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «солюбилизатор» означает полисорбат, ПАВ, в присутствии которого лучше растворяются труднорастворимые антибиотики. Группа включает плюроники, полиэтилгликоли. Группа не исчерпывается данным списком.
Термин «фармацевтически приемлемый» в контексте настоящего изобретения означает, что данное вещество или композиция, в отношении которых применяется этот термин, должны быть совместимы с точки зрения химии и/или токсикологии с другими ингредиентами, входящими в состав препарата, и безопасны для того, кого лечат (снимают симптомы) этим веществом или композицией.
Выражение «находится в твердой форме» в данном контексте характеризует фармацевтические композиции и лекарственные средства твердой, плотной или вязкой консистенции, в которых частицы не могут свободно перемещаться, а могут только совершать малые колебания около положения равновесия, при этом частицы активно взаимодействуют между собой.
Термин активная фармацевтическая субстанция (АФС) в контексте настоящего изобретения означает продукт синтеза, содержащий любое вещество или смесь веществ синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, предназначенный для производства лекарственных средств, который в процессе производства лекарственного средства (препарата) становится активным ингредиентом этого лекарственного средства. Такие продукты предназначены для проявления фармакологической активности или другого прямого эффекта при диагностике, лечении, облегчении симптомов или профилактике болезни, или для воздействия на структуру или функцию организма. Термин «фармацевтически приемлемые соли» или «соли» включает соли активных соединений, которые получены с помощью относительно нетоксичных кислот. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей могут служить соли, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная, бромоводородная, фосфорная, серная и хлорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, малеиновая, винная, янтарная, лимонная или малоновая кислоты, или полученные другими методами, используемыми в данной области. К другим фармацевтически приемлемым солям относятся адипинат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептанат, гексанат, гидройодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурил сульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат (мезилат), 2- нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, полуфумарат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, п-толуолсульфонат (тозилат), ундеканат, валериат и подобные.
Термины «содержащий», «содержит» в контексте настоящего изобретения означает, что указанные фармацевтические композиции и лекарственные средства включают перечисленные компоненты, но не исключают включение других компонентов.
Термин «эффективное количество» в контексте настоящего изобретения относится к количеству фармацевтической композиции или лекарственного средства, которое при введении субъекту для лечения заболевания или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания или нарушения является достаточным для воздействия такого лечения на заболевание, нарушение или симптом. "Эффективное количество" может изменяться в зависимости от заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, тяжести заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания, возраста субъекта, подлежащего лечению, и/или веса субъекта, подлежащего лечению. Надлежащее количество в каждом конкретном случае будет очевидно специалисту в данной области или может быть определено путем стандартных экспериментов. Термин «дозировка», используемый здесь, характеризует содержание одного или нескольких действующих веществ в количественном выражении на единицу дозы, или единицу объема, или единицу массы в соответствии с лекарственной формой либо для некоторых видов лекарственных форм количество высвобождаемого из лекарственной формы действующего вещества за единицу времени.
Термины «лечение», «терапия» охватывают лечение патологических состояний у млекопитающих, предпочтительно у человека, и включают: а) снижение, б) блокирование (приостановку) течения заболевания, в) облегчение тяжести заболевания, т.е. индукцию регрессии заболевания, г) реверсирование заболевания или состояния, к которому данный термин применяется, или одного или более симптомов данного заболевания или состояния.
Термин «профилактика», «предотвращение» охватывает устранение факторов риска, а также профилактическое лечение субклинических стадий заболевания у млекопитающих, предпочтительно у человека, направленное на уменьшение вероятности возникновения клинических стадий заболевания. Пациенты для профилактической терапии отбираются на основе факторов, которые, на основании известных данных, влекут увеличение риска возникновения клинических стадий заболевания по сравнению с общим населением. К профилактической терапии относятся: а) первичная профилактика и б) вторичная профилактика. Первичная профилактика определяется как профилактическое лечение у пациентов, клиническая стадия заболевания у которых еще не наступила. Вторичная профилактика - это предотвращение повторного наступления того же или близкого клинического состояния или заболевания.
Термин «ВЭЖХ» относится к методу высокоэффективной жидкостной хроматографии, одному из эффективных методов разделения сложных смесей веществ, широко применяемому как в аналитической химии, так и в химической технологии.
Термин «раствор для ППХС» относится к раствору для проверки пригодности хроматографической системы, используемому в процессе определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанциях методом ВЭЖХ.
Термин «раствор для ОЧХС» относится к раствору для оценки чувствительности хроматографической системы, используемому в процессе определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанциях методом ВЭЖХ.
Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.
Осуществление изобретения
Настоящее изобретение дополнительно поясняется, но не ограничивается следующими примерами, которые иллюстрируют настоящее изобретение.
Пример 1. Получение и определение новых циклических декапептидов из семейства грамицидинов С
Новые циклические декапептиды из семейства грамицидинов С (грамицидины С-4-1, С-4-2 и С-5) выделили и идентифицировали из субстанции грамицидина С, полученной при культивировании мутантного штамма, происходящего от штамма Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212 (RU2627182, 03.08.2017).
Мутантный штамм получали следующим образом.
Исходный штамм Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212, продуцирующий грамицидин С, растили на стандартной жидкой полусинтетической среде, содержащей дрожжевой автолизат, в качалочных колбах вместимостью 0,75 л (0,1 л среды) на круговой качалке (частота вращения 220 об/мин, амплитуда 1 м) при 37°С в течение 48 часов. Затем клетки последовательно обрабатывали рубомицином и акридиновым оранжевым в течение 20 минут каждый путем последовательного добавления указанных мутагенов к клеткам в финальных концентрациях 100 и 40 мкг/мл, соответственно.
Обработанные мутагенами клетки помещали на агаризованную среду Гаузе- Бражниковой в чашках Петри (по 50 мкл суспензии клеток на 1 чашку Петри). Затем клетки инкубировали при 37°С в течение 24 часов. По окончанию инкубации исследовали полученные колонии клеток и отбирали те, которые морфологически отличались от исходного штамма. В результате проведенного мутагенеза было отобрано семь колоний клеток. Далее для каждой отобранной мутантной колонии определяли выход грамицидина С.
Грамицидин С экстрагировали при помощи смеси этанол:НС1 (соотношении 2:1 соответственно). Для количественного определения грамицидина С в получаемых субстанциях грамицидина С использовали метод ВЭЖХ.
Проведенный анализ ВЭЖК показал, что в хроматограмме субстанции грамицидина С, полученной при культивировании одного из полученных мутантных штаммов, выявляются пики, отличающиеся от пиков известных из литературы грамицидинов С, С-2 и С-3.
Далее для анализа использовали ВЭЖХ методику, совместимую с масс- спектрометрической детекцией. В качестве водной фазы, совместимой с масс- спектрометрией, был выбран 0,1% раствор муравьиной кислоты (pH 2,7). Вещества с хроматографическими пиками, отличными от пиков грамицидинов С, С-2 и С-3, экстрагировали и проводили хромато-масс-спектрометрический анализ собранных образцов с получением MS и MS/MS спектров для собранных веществ. Для получения спектров сначала определяли ионы, время выхода которых совпадало с временем выхода интересуемых веществ (MSI). Затем данные ионы подвергали фрагментации и детектировали полученные фрагменты (MS/MS). На основании анализа фрагментов проводили идентификацию выделенных веществ, которые относились к ранее не описанным в литературе циклическим декапептидам. Для определения структуры выделенных циклических декапептидов также проводили их гидролиз с последующим хромато-масс-спектрометрическим анализом продуктов гидролиза. Для определения аминокислотных замен, находящихся в выделенных декапептидах по сравнению со структурой грамицидина С, были построены экстрагированные ионные хроматограммы для аминокислот и их гомологов.
В результате проведенного анализа были определены следующие аминокислотные замены в выделенных декапептидах по сравнению со структурой грамицидина С:
1) остаток лейцина заменен на остаток 2-амино-5-метилгексановой кислоты (декапептиду присвоено название грамицидин С-4-1); 2) остаток лейцина заменен на остаток Р-гомолейцина (декапептиду присвоено название грамицидин С-4-2);
3) остаток орнитина заменен на остаток а-метил-Ь-орнитина (декапептиду присвоено название грамицидин С-5).
Для проверки правильности определения структур полученных декапептидов, методом пептидного синтеза было синтезировано три референсных вещества:
- вещество №1, имеющее предполагаемую структуру грамицидина С-4-1 : цикло(-Уа1-От-Ьеи-0-РЬе-Рго-Уа1-От-2-амино-(5-метилгексановая кислота)-О-РЬе- Рго-);
- вещество №2, имеющее предполагаемую структуру грамицидина С-4-2: цикло(-Уа1-Огп-Ьеи-В-РЬе — Рго-Уа1-От-р-гомолейцин-В-РЬе-Рго-);
- вещество №3, имеющее предполагаемую структуру грамицидина С-5: цикло(- Уа1-а-метил-Ь-орнитин-Ьеи-О-РЬе — Pro-Val-Om- Leu- D-Phe-Pro-).
Проведение хромато-масс-спектрометрического анализа референсных веществ подтвердило идентичность структур референсных веществ и новых циклических декапептидов - грамицидинов С-4-1, С-4-2, С-5, выделенных из субстанции грамицидина С мутантного штамма. Полученные результаты подтвердили правильность определения структур грамицидинов С-4-1, С-4-2, С-5.
При исследовании полученного штамма также было измерено количественное содержание грамицидинов С-4-1, С-4-2, С-5 в субстанции грамицидина С, полученной при его культивировании, методом ВЭЖХ с использованием хроматографической системы, пригодной для разделения грамицидина С, грамицидинов группы С-4 и грамицидина С-5.
Перед ВЭЖХ анализом субстанцию грамицидина С отделяли от культуральной жидкости и биомассы.
Полученные результаты показали, что в зависимости от условий культивирования штамма (варьирование оптической плотности культуры, температуры, освещения, состава и типа среды, длительности культивирования, объема ферментера, pH, уровня кислорода и др.) в субстанции грамицидина С, полученной при культивировании полученного мутантного штамма, обнаруживаются следующие количества грамицидинов группы С-4 и грамицидина С-5: 1) грамицидин С-4-1 или С-4-2 - 3,5% масс, или меньшее количество;
2) грамицидин С-5 - 5,0% масс, или меньшее количество.
При этом в независимости от условий культивирования субстанция грамицидина С, полученная при культивировании полученного мутантного штамма, всегда содержала детектируемые методом ВЭЖХ количества грамицидина С-5 и/или одного из грамицидинов группы С-4: С-4-1 или С-4-2. Минимально детектируемое количество циклического декапептида при используемом методе ВЭЖХ определили как 0,5% масс.
Также в независимости от условий культивирования субстанция грамицидина С, полученная при культивировании полученного мутантного штамма, всегда содержала не более 3,5% масс, грамицидина С-4-1 или С-4-2 и не более 5,0% масс, грамицидина С-5.
Пример 2. Метод ВЭЖХ с использованием хроматографической системы, пригодной для разделения грамицидина С, грамицидинов группы С-4 и грамицидина С-5
Для разделения и определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С методом ВЭЖХ использовали следующие реактивы: ацетонитрил для жидкостной хроматографии; фосфорная кислота концентрированная; перхлорат лития; натрия гидроксид.
В качестве буферного раствора использовали раствор с pH 2,5, который готовили следующим образом: 6,00 г перхлората лития помещали в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляли 900 мл воды для хроматографии, перемешивали до полного растворения соли, прибавляли 1,0 мл фосфорной кислоты концентрированной, перемешивали, доводили pH полученного раствора до 2,5 ± 0,05 с помощью раствора натрия гидроксида 30 %, доводили объем раствора водой для хроматографии до 1000 мл, перемешивали и фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
В качестве растворителя использовали раствор, который готовили следующим образом: смешивали достаточные количества буферного раствора с pH 2,5 и ацетонитрил в соотношении 1:1 (о/ о).
Испытуемый раствор готовили следующим образом: 25,0 мг порошка субстанции помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 20 мл растворителя, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали. 1,0 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали.
В качестве стандартного раствора использовали раствор, который готовили следующим образом: 25,0 мг стандартного образца грамицидина С дигидрохлорида (образца, содержащего в своем составе детектируемые количества грамицидина С, грамицидина С-4-1 или С-4-2, грамицидина С-5) помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 20 мл растворителя, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали. 1,0 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали.
В качестве раствора для проверки пригодности хроматографической системы (раствор для ППХС) использовали раствор, который готовили следующим образом: 1,0 мл стандартного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 20,0 мл, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали.
В качестве раствора для оценки чувствительности хроматографической системы (раствор для ОЧХС) использовали раствор, который готовили следующим образом: 1,0 мл раствора для ППХС переносили в мерную колбу вместимостью 50,0 мл, доводили объем раствора растворителем до метки и перемешивали.
Для разделения и определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С методом ВЭЖХ использовали следующие хроматографические условия:
Колонка - «Kinetex® С18», 2,6 мкм; 100 х 4,6 мм фирмы Phenomenex,
Подвижная фаза - А: буферный раствор pH 2,5,
Б: ацетонитрил для жидкостной хроматографии;
Градиентный режим
Figure imgf000027_0001
Скорость потока - 0,9 мл/мин;
Температура колонки - (15 ± 1) °C;
Температура отделения для - (20 ± 3) °C; образцов
Детектор - спектрофотометрический или диодно-матричный, 210 нм;
Объем вводимой пробы - 20 мкл.
Для разделения и определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С методом ВЭЖХ последовательно хроматографировали растворитель (2 инжекции), раствор для ОЧХС (1 инжекция), раствор для ППХС (1 инжекция), стандартный раствор (3 инжекции) и испытуемый раствор (3 инжекции).
Время удерживания пика грамицидина С определяли как около 17 мин, относительное время удерживания пика грамицидинов группы С-4 по отношению к пику грамицидина С - как около 1,20, пика грамицидина С-5 - как около 0,95.
Точные времена удерживания пиков грамицидинов С, С-4-1, С-4-2, С-5 устанавливали по хроматограмме раствора для ППХС. Типичную хроматограмму раствора для ППХС (раствора, содержащего в своем составе детектируемые количества грамицидина С, грамицидина С-4-1 или С-4-2, грамицидина С-5), получают методом ВЭЖХ с использованием хроматографической системы, пригодной для разделения грамицидина С, грамицидинов группы С-4 и грамицидина С-5.
Для определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С методом ВЭЖХ не учитывали пики из растворителя, пики до 7,0 мин (вещества, не относящиеся к циклическим декапептидам из семейства грамицидинов С), пики после 25 мин (возвращение системы в исходное состояние) и пики с площадью менее площади пика грамицидина С на хроматограмме раствора для ОЧХС (менее 0, 10 %).
Для определения содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С методом ВЭЖХ содержание целевого декапептида (/) в процентах ( ) вычисляли по формуле:
_ S,. xl00 Xi = где S, - площадь пика целевого декапептида i на хроматограмме испытуемого раствора (среднее значение по трем хроматограммам);
^Si - сумма площадей всех пиков декапептидов из семейства грамицидинов С на хроматограмме испытуемого раствора (среднее значение по трем хроматограммам). Пример 3. Активные фармацевтические субстанции по настоящему изобретению
Для исследования свойств новых субстанций грамицидина С получали составы 1-14 (Таблица 1) путем добавления определенного количества грамицидинов С-4-1, С- 4-2, С-5, синтезированных методом пептидного синтеза, к очищенной субстанции грамицидина С, содержащей только грамицидин С- 1.
Содержание грамицидинов С, С-4-1, С-4-2 и С-5 в полученных составах субстанций указаны в Таблице 1.
Таблица 1. Составы активных фармацевтических субстанций по настоящему изобретению с указанием соотношения грамицидинов С (в % масс.)
Figure imgf000029_0001
Пример 4. Антибактериальная активность активных фармацевтических субстанций по настоящему изобретению in vitro
Для полученных в примере 3 активных фармацевтических субстанций (составы 1-14) определяли их антибактериальную активность in vitro согласно следующей методике: методом диффузии в агаре определяли минимальную ингибирующую концентрацию (в мкг/мл) каждого из составов 1-14, которая полностью ингибировала рост тестового бактериального штамма на агаризованной мясопептонной среде.
Минимальную ингибирующую концентрацию определяли методом серийных микроразведений исходных субстанций и добавления каждого микроразведения к тестируемому бактериальному штамму. Минимальную ингибирующую концентрацию определяли как последнее разведение, в котором отсутствовал рост тестового бактериального штамма.
В качестве тестируемого бактериального штамма использовали штамм Bacillus cereus var. Mycoides 537.
В качестве составов сравнения готовили субстанции, которые либо содержат грамицидин С-4-1 или С-4-2 в количестве более 3,5% масс, и/или грамицидин С-5 более 5% масс, (составы 15-21), либо не содержат грамицидины С-4-1, С-4-2 и С-5 (составы 22, 23). Составы сравнения указаны в Таблице 2.
Грамицидины С-2 и С-3 в составе 22 были получены согласно методике, описанной в [Nozaki, S., & Muramatsu, I. (1985). Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 58(1), 331- 335].
Грамицидин С в составе 23 был получен согласно методике, описанной в [Ви, X., Wu, X., Ng, N. L. J., Mak, С. K., Qin, C., & Guo, Z. (2004). Synthesis of Gramicidin S and Its Analogues via an On-Resin Macrolactamization Assisted by a Predisposed Conformation of the Linear Precursors. The Journal of Organic Chemistry, 69(8), 2681- 2685]. Таблица 2. Составы сравнения с указанием соотношения грамицидинов С (в % масс.)
Figure imgf000031_0001
Полученная антибактериальная активность фармацевтических субстанций по настоящему изобретению и составов сравнения приведена в Таблице 3.
Таблица 3. Антибактериальная активность in vitro фармацевтических субстанций по настоящему изобретению (составы 1-14) и составов сравнения (составы 15-23) (приведена минимальная ингибирующая концентрация (в мкг/мл) в отношении штамма Bacillus cereus NQI. Mycoides 537)
Figure imgf000031_0002
Figure imgf000032_0001
Из таблицы 3 видно, что активные фармацевтические субстанции по настоящему изобретению имеют более низкие значения минимальной ингибирующей концентрации, чем составы сравнения, то есть субстанции по настоящему изобретению обладают более высокой антибактериальной активностью, чем составы сравнения.
Таким образом, содержание грамицидина С-4-1 или С-4-2 в количестве не более 3,5% масс, и грамицидина С-5 в количестве не более 5,0% масс, в субстанции грамицидина С приводит к неожиданному улучшению их антибактериальных свойств против патогенных бактерий in vitro. При этом субстанции сравнения, не содержащие грамицидины С-4 и С-5, характеризуются сниженной антибактериальной активностью против патогенных бактерий in vitro по сравнению с субстанциями по настоящему изобретению.
Активные фармацевтические субстанции по настоящему изобретению также имеют неожиданно более высокие значения минимальной ингибирующей концентрации по отношению к штаммам непатогенных бактерий микробиоты здоровых людей, чем составы сравнения, то есть субстанции по настоящему изобретению обладают более низкой антибактериальной активностью против непатогенных бактерий, чем составы сравнения. Обнаруженная избирательность антибактериального действия субстанций по настоящему изобретению является большим преимуществом заявляемого изобретения, поскольку обеспечивает:
(1) усиленный антибактериальный эффект против патогенных микроорганизмов,
(2) одновременное снижение частоты возникновения и интенсивности побочных эффектов, связанных с негативным влиянием на нормальную микробиоту пищеварительной и дыхательных систем.
Для субстанций по настоящему изобретению, полученных при культивировании мутантного штамма из Примера 1, результаты антибактериальной активности были аналогичны результатам, указанным в Таблице 3.
Кроме того, соединения грамицидина С-4-1, С-4-2, С-5 показали самостоятельную антибактериальную активность против патогенных бактерий.
Пример 5. Гемолитическая активность активных фармацевтических субстанций по настоящему изобретению
Для полученных в примере 3 активных фармацевтических субстанций по настоящему изобретению (составы 1-14) и полученных в примере 4 составов сравнения (составы 15-23) определяли их гемолитическую активность.
Исследование гемолитической активности проводили следующим способом.
Свежесобранную кровь человека с гепарином центрифугировали для удаления лейкоцитов, полученные эритроциты трижды промывали физиологическим раствором и хранили при 4°С. Серийные разведения составов 1-23 в физиологическом растворе готовили в круглодонных микротитровальных планшетах, используя объемы 100 мкл. Эритроциты разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:25 (объем клеток : объем физиологического раствора). Получившиеся суспензии добавляли по 50 мкл в каждую лунку с разведениями составов 1-23. Планшеты инкубировали при качании при 37°С, и концентрацию, необходимую для полного лизиса, определяли визуально через 4 часа. Полученные результаты приведены в Таблице 4.
Таблица 4. Гемолитическая активность фармацевтических субстанций по настоящему изобретению (составы 1-14) и составов сравнения (составы 15-23)
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
Из Таблицы 4 видно, что субстанции по настоящему изобретению (составы 1-14) неожиданно обладают более высокими значениями концентрации, необходимой для лизиса 100% эритроцитов, то есть обладают сниженной гемолитической активностью по сравнению с составами сравнения (составы 15-23). Пониженная гемолитическая активность является большим преимуществом субстанций по настоящему изобретению, поскольку обеспечивает снижение частоты возникновения и интенсивности побочных эффектов.
Таким образом, содержание грамицидина С-4-1 или С-4-2 в количестве не более 3,5% масс, и/или грамицидина С-5 в количестве не более 5,0% масс, в субстанции грамицидина С приводит к неожиданному улучшению ее свойств, а именно, к снижению гемолитической активности. При этом субстанции сравнения, не содержащие грамицидины С-4 и С-5 или содержащие грамицидин С-4-1 или С-4-2 в количестве более 3,5% масс, или грамицидин С-5 в количестве более 5,0% масс., характеризуются повышенной гемолитической активностью по сравнению с субстанциями по настоящему изобретению.
Для субстанций по настоящему изобретению, полученным при культивировании мутантного штамма из Примера 1, результаты гемолитической активности были аналогичны результатам, указанным в Таблице 4.
Пример 6. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению
На основе полученных в примере 3 активных фармацевтических субстанций грамицидина С (составы 1-14, таблица 1) готовили фармацевтическую композицию в форме спрея следующего состава:
Грамицидин С (любой из составов 1-14 таблицы 1) 0,027-0,033 % масс.
Этанол 96% 7,3-10,9 % масс.
Сукралоза 0,09-0,11 % масс.
Глицерол 14,9-18,2 % масс. Ароматизатор мятный 0,37-0,44 % масс.
Лимонной кислоты моногидрат 0,026-0,032 % масс.
Натрия цитрат 0,0099-0,012 % масс.
Полисорбат 80 0,18-0,22 % масс.
Метилпарагидроксибензоат (метилпарабен) 0,0736-0,1104 % масс.
Пропилпарагидроксибензоат (пропилпарабен) 0,0080-0,0120 % масс.
Вода очищенная остальное
Указанную фармацевтическую композицию в виде спрея готовили следующим способом: добавляли глицерол в воду очищенную, перемешивали, затем добавляли лимонную кислоту моногидрат, натрия цитрат и сукралозу, перемешивали до полного растворения. Отдельно готовили раствор грамицидина С путем перемешивания воды очищенной, этанола 96% и полисорбата 80, добавлением грамицидина С, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата и перемешивания до полного растворения с последующим добавлением ароматизатора мятного и перемешивания. Полученные растворы перемешивали до полной гомогенизации и фильтровали.
На основе полученных в примере 3 активных фармацевтических субстанций грамицидина С (составы 1-14, таблица 1) готовили фармацевтическую композицию в форме таблетки для буккального введения следующего состава:
Грамицидин С (любой из составов 1-14 таблицы 1) 0, 2-0, 4 % масс.
Сахарная пудра 48,1-48,4% масс.
Сахар молочный 48,1-48,4% масс.
Метил целлюлоза МЦ-100 0, 2-0, 4% масс.
Кальция стеарат 2,8-3% масс. Указанную фармацевтическую композицию в виде таблетки для буккального введения готовили следующим способом: сахар-рафинад в виде пудры и лактозу при соотношении 1:1 просеивали через сито 38, перемешивали, увлажняли смесью растворов из 5%-ного водного раствора метилцеллюлозы и спиртового раствора грамицидина С. Увлажненную массу гранулировали через сито с Д-1,2 мм, сушили на воздухе или в сушилке при температуре не более 40°С до содержания влаги 1,5-2, 5%. По окончании сушки массу пропускали через гранулятор с диаметром отверстий барабана 1-1,2 мм. Полученный гранулят опудривали стеаратом кальция и таблетировали.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению ни в коем случае не ограничиваются представленными примерами, которые приведены лишь в качестве иллюстрации настоящего изобретения.
Настоящее изобретение ни в коем случае не ограничивается представленными примерами, которые приведены лишь в качестве иллюстрации настоящего изобретения.
Список цитируемой литературы
Патент РФ №2213558, опубл. 10.10.2003.
Патент РФ №2633635, опубл. 16.10.2017.
Патент РФ №2604576, опубл. 10.12.2016.
Патент РФ №2627423, опубл. 08.08.2017
Патент РФ №2749902, опубл. 18.06.2021
Патент РФ №2627182, опубл. 03.08.2017
Морозова С. В. Боль в глотке: причины и возможности медикаментозной терапии. РМЖ, том 13, №21, 2005, с. 1447-1452.
Полин А.Н., Егоров Н.С. Структурно-функциональные особенности грамицидина С в связи с его антибиотической активностью // Антибиотики и химиотерапия. - 2003. - №48(12). - С. 29-32.
Bu, X., Wu, X., Ng, N. L. J., Mak, С. K., Qin, C., & Guo, Z. (2004). Synthesis of Gramicidin S and Its Analogues via an On-Resin Macrolactamization Assisted by a Predisposed Conformation of the Linear Precursors. The Journal of Organic Chemistry, 69(8), 2681-2685. Gause, G. G.; Brazhnikova, M. G. Gramicidin S and Its Use in the Treatment of Infected Wounds. Nature 1944, 154, 703. Kondejewski, L. H.; Farmer, S. W.; Wishart, D. S.; Hancock, R. E. W.; Hodges, R. S. Gramicidin S Is Active against Both GramPositive and Gram-Negative Bacteria. Int. J. Pept. Protein Res. 1996, 47(6), 460-466.
Nozaki, S., & Muramatsu, I. (1985). Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 58(1), 331-335.
Swingle K., Hamilton R., Harrington J., Kvam D. “3-Benzoyldifluoromethanesulfonanilide, sodium salt (diflumidone sodium, MBR 4164-8): a new anti-inflammatory agent” // Arch. Int. Pharmacodyn, 1971, vol. 189, pp. 129-144.

Claims

38 Формула изобретения
1. Циклический декапептид, обладающий следующей структурой:
Цикло - (XI -Х2- Leu-D-Phe-Pro-X6- 0m-X8- D-Phe-Pro-), где
XI - валин или 2-аминомасляная кислота,
Х2 - орнитин, а-метил- -орнитин или 2-аминомасляная кислота,
Х6 - валин или 2-аминомасляная кислота,
Х8 - 2-амино-(5-метилгексановая кислота), р-гомолейцин или лейцин, или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Циклический декапептид или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, имеющий следующую структуру: цикло(-Уа1-От-Ьеи-О-РЬе-Рго-Уа1-От-2-амино-(5- метилгексановая кислота)-Е)-РЬе-Рго~).
3. Циклический декапептид или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, имеющий следующую структуру: uHKno(-Val-Om-Leu-D-Phe — Pro-Val-Om-P- гомолейцин-D-Phe-Pro-) .
4. Циклический декапептид или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, имеющий следующую структуру: цикло(-Уа1— а-метил-Е-орнитин-Ееи-П-РНе — Рго- Val-Om- Leu- D-Phe-Pro-).
5. Активная фармацевтическая субстанция, предназначенная для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащая по меньшей мере один декапептид по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемую соль.
6. Активная фармацевтическая субстанция, предназначенная для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 или п.З и/или циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4.
7. Активная фармацевтическая субстанция по п. 6, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль в количестве 80-99,9% масс.
8. Активная фармацевтическая субстанция по п. 6, содержащая циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 - от 0 до 3,5% масс. 39
9. Активная фармацевтическая субстанция по п. 6, содержащая циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.З - от 0 до 3,5% масс.;
10. Активная фармацевтическая субстанция по п. 6, содержащая циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4 - от 0 до 5,0% масс.
И. Активная фармацевтическая субстанция по п.6, дополнительно содержащая грамицидин С-2 и/или грамицидин С-3 или их фармацевтически приемлемые соли.
12. Активная фармацевтическая субстанция по п.6, где грамицидин С находится в форме дигидрохлорида.
13. Активная фармацевтическая субстанция по п.6, где инфекционновоспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из ангины, пародонтоза, фарингита, тонзиллита, пародонтита, гингивита, стоматита, глоссита, аденоидита, ларингита.
14. Активная фармацевтическая субстанция по п.6, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 и/или по п.З и циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4 в следующем количестве (% масс.):
Грамицидин С - 91,5-99,9% масс.; циклический декапептид или его фармацевтически приемлемая соль по п.2 и/или п.З - 0-3,5% масс.; циклический декапептид или его фармацевтически приемлемая соль по п.4 - 0- 5,0% масс.
15. Фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний для местного применения, содержащая активную фармацевтическую субстанцию по любому из пп.5-14 в терапевтически эффективном количестве и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
16. Фармацевтическая композиция по п.15, дополнительно содержащая цетилпиридиния хлорид и/или оксибупрокаина гидрохлорид.
17. Фармацевтическая композиция по п.15, где инфекционно-воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из ангины, пародонтоза, фарингита, тонзиллита, пародонтита, гингивита, стоматита, глоссита, аденоидита, ларингита. 40
18. Фармацевтическая композиция по п.15, где композиция выполнена в форме спрея или таблетки.
19. Применение фармацевтической композиции по пп. 15-18 для лечения или улучшения состояния при инфекционно-воспалительном заболевании полости рта и горла.
20. Применение по п.19, где инфекционно-воспалительное заболевание полости рта и горла выбрано из группы, состоящей из ангины, пародонтоза, фарингита, тонзиллита, пародонтита, гингивита, стоматита, глоссита, аденоидита, ларингита.
21. Активная фармацевтическая субстанция грамицидина С, предназначенная для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и 0-3,5% масс, циклического декапептида, имеющего структуру цикло(-У al-Om-Leu-D-Phe-Pro-V а1-От-2-амино-(5- метилгексановая кислота)-О-Р е-Рго-) или цикло(-Уа1-Огп-Ьеи-П-РИе — Pro-Val-Om- р-гомолейцин-D-Phe-Pro-) или их фармацевтически приемлемые соли.
22. Активная фармацевтическая субстанция грамицидина С, предназначенная для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащая грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и 0-5,0% масс, циклического декапептида, имеющего структуру цикло(-Уа1-а-метил-Ь-орнитин-Ьеи-0-РЬе — Pro-Val-Orn- Leu- D-Phe-Pro-) или его фармацевтически приемлемую соль.
23. Лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее по меньшей мере один декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп. 1-4.
24. Лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее по меньшей мере грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 или п.З и/или циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4.
25. Лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 и/или по п.З и циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4 в следующем количестве (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С):
Грамицидин С - 91,5-99,9% масс.; циклический декапептид по п.2 и/или п.З - 0-3,5% масс.; циклический декапептид по п.4 - 0-5,0% масс.
26. Лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.2 и/или по п.З в следующем количестве (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С):
Грамицидин С - 96,5-99,9% масс.; циклический декапептид по п.2 и/или п.З - 0-3,5% масс.
27. Лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, содержащее грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль и циклический декапептид или его фармацевтически приемлемую соль по п.4 в следующем количестве (% масс, от общего содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С):
Грамицидин С - 95,0-99,9% масс.; циклический декапептид по п.4 — 0-5,0% масс.
28. Способ разделения циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанциях, основанный на методе ВЭЖХ, включающий следующие стадии:
- приготовление буферного раствора с pH 2,5 путем смешивания перхлората лития, воды, фосфорной кислоты и натрия гидроксида;
- приготовления растворителя путем смешивания буферного раствора с pH 2,5 и ацетонитрила в соотношении 1 :1 (о:о);
- приготовление испытуемого раствора путем растворения порошка субстанции в растворителе;
- разделение циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в субстанции методом ВЭЖХ при градиентном режиме.
29. Способ по п.28, при котором по получаемым хроматограммам проводится определение содержания циклических декапептидов из семейства грамицидинов С в испытуемом растворе.
PCT/RU2022/000335 2021-11-15 2022-11-14 Фармацевтические композоции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний WO2023085973A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021133140 2021-11-15
RU2021133140A RU2794363C1 (ru) 2021-11-15 Фармацевтические композиции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023085973A1 true WO2023085973A1 (ru) 2023-05-19

Family

ID=86336536

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2022/000335 WO2023085973A1 (ru) 2021-11-15 2022-11-14 Фармацевтические композоции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2023085973A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010113042A1 (en) * 2009-04-03 2010-10-07 Universiteit Leiden Antimicrobial cyclic peptides
RU2604576C1 (ru) * 2015-12-01 2016-12-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" Фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний местного применения и способ ее получения и применения

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010113042A1 (en) * 2009-04-03 2010-10-07 Universiteit Leiden Antimicrobial cyclic peptides
RU2604576C1 (ru) * 2015-12-01 2016-12-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" Фармацевтическая композиция для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний местного применения и способ ее получения и применения

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NOZAKI SUKEKASU, MURAMATSU ICHIRO : "Natural Homologs of Gramicidin S. II. Synthesis of Gramicidin S-2 and S-3", BULLETIN OF THE CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN,NIPPON KAGAKUKAI, JP, vol. 58, no. 1, 1 January 1985 (1985-01-01), JP , pages 331 - 335, XP093068126, ISSN: 0009-2673, DOI: 10.1246/bcsj.58.331 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2755550B2 (ja) ヘリコバクター・ピロリに起因する胃性消化不良を治療するためのリファキシミンを含有する医薬製剤
Teng et al. Multiple-dose pharmacokinetics and safety of trovafloxacin in healthy volunteers
SK4862002A3 (en) Extended release formulations of erythromycin derivatives
JPH02502459A (ja) リポソーム含有ニスタチン
KR19980069961A (ko) 항문직장 및 결장 질병의 제어 및 치료를 위한 신규 약제학적조성물 및 그 제조방법
EP3124023B1 (en) Durable preparation of an injectable of melatonin exhibiting long-term stability
RU2536264C2 (ru) Композиция для наружного применения на коже, содержащая соль и сахар в качестве активных ингредиентов, для предотвращения и лечения вагиноза, и ее применение
HUE027373T2 (hu) Kezelési eljárások oritavancin egyszeri dózisainak alkalmazásával
Goldberg et al. Single‐Dose Pharmacokinetics and Tolerability of Telavancin in Elderly Men and Women
RU2794363C1 (ru) Фармацевтические композиции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний
US20200405687A1 (en) Methods for the treatment of infection
EP3534913A1 (en) Composition and method for treating otitis
WO2023085973A1 (ru) Фармацевтические композоции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний
RU2513580C1 (ru) Средство для лечения аритмии сердца
EP1670496B1 (en) A glycopeptide composition with improved antibiotic activity
CA1174169A (en) Orally active tolciclate and tolnaftate
RU2239418C2 (ru) Твердая лекарственная форма на основе сульфаметоксазола и триметоприма
RU2255730C1 (ru) Стабильная фармацевтическая суспензия азитромицина и способ ее получения
US20230404969A1 (en) Compositions and method for effective management of peritonitis
EP0005733B1 (en) Pharmaceutical compositions for use in the treatment of diabetic nephropathy and method for preparing them
US20220409651A1 (en) Anti-fungal compositions and methods for using same
RU2800287C1 (ru) Антибактериальная композиция грамицидина с, способ ее получения и применения
JP4589126B2 (ja) 抗感染剤の生物学的有効性に影響を及ぼすためのクミン（ｃｕｍｉｎｕｍｃｙｍｉｎｕｍ）抽出物及びピペリンの使用
KR101880000B1 (ko) 스티피탈리드를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR101791407B1 (ko) 스티피탈리드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22893356

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1