WO2023043111A1 - 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도 - Google Patents

두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도 Download PDF

Info

Publication number
WO2023043111A1
WO2023043111A1 PCT/KR2022/013364 KR2022013364W WO2023043111A1 WO 2023043111 A1 WO2023043111 A1 WO 2023043111A1 KR 2022013364 W KR2022013364 W KR 2022013364W WO 2023043111 A1 WO2023043111 A1 WO 2023043111A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
culture medium
hair
strain
extract
lysate
Prior art date
Application number
PCT/KR2022/013364
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
백채윤
이동걸
경서연
강승현
박명삼
Original Assignee
코스맥스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 코스맥스 주식회사 filed Critical 코스맥스 주식회사
Priority to US18/681,221 priority Critical patent/US20240307292A1/en
Priority to CN202280054932.7A priority patent/CN117813373A/zh
Priority to EP22870196.7A priority patent/EP4403624A1/en
Publication of WO2023043111A1 publication Critical patent/WO2023043111A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • hair grows from hair follicles on the scalp, and cycles of growth (anagen), catagen (catagen), and telogen (telogen) are continuously repeated throughout life and go through generation, growth, and shedding (Paus et al. , J Invest Dermatol. 113, pp.523-532, 1999).
  • catagen phase of the hair follicle the growth of the hair follicle is stopped, and apoptosis and reorganization of the extracellular matrix occur. Therefore, as the number of hair follicle cells in the catagen and telogen phases of the hair follicle increases, the hair falls out and does not grow back. .
  • Hair is divided into the visible hair shaft and the invisible hair root, and among the hair roots, the root from which hair grows is called the hair bulb, and the recessed part at the bottom is called the hair papilla (Fig. One).
  • the dermal papilla is the most important part in the development of hair, and has blood vessels and nerves to deliver nutrients and growth factors to promote hair growth. Since the number of hairs decreases due to the death and growth reduction of dermal papilla cells, proliferation of dermal papilla cells is required to maintain and increase hair.
  • VEGF Vascular endothelial growth factor
  • FGF7 Fibroblast growth factor 7
  • KGF Keratinocyte growth factor
  • Korean Patent Registration No. 10-2102578 discloses a cosmetic composition for promoting hair growth or hair growth containing a plurality of compounds.
  • a cosmetic composition for promoting hair growth or hair growth containing a plurality of compounds there are not many studies on microorganisms that can improve hair or scalp condition.
  • Probiotics is a collective term for microorganisms that have a beneficial effect on the human body, and refers to microorganisms that benefit the body. Most probiotics known to date are known as lactic acid bacteria. Probiotics have been reported to produce effective effects through various beneficial effects on the human body, but studies on the interaction between scalp flora and scalp are insufficient.
  • One aspect is to provide a Paracoccus denitrificans strain.
  • Another aspect is to provide a lysate of the strain, a culture medium, or an extract of the culture medium.
  • Another aspect is to provide a composition
  • a composition comprising an extract of a Paracoccus denitrificans strain, a lysate thereof, a culture medium, or a culture medium.
  • Paracoccus denitrificans Paracoccus denitrificans
  • Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis
  • Another aspect provides a method for preventing, ameliorating, or treating a condition in a subject comprising treating or administering to a subject in need thereof an effective amount of a composition described above.
  • One aspect provides a Paracoccus denitrificans strain.
  • the strain may be isolated.
  • isolated means something that is artificially separated and available that does not exist in nature.
  • the strain may be isolated from human scalp.
  • the strain may be a strain isolated by a method of inoculating a sample obtained from human scalp (eg, keratinocytes) into R2A (Reasoner's 2A) medium and culturing the cultured colony in pure isolation.
  • the strain may belong to the scalp microbiome.
  • the strain may be a strain belonging to the genus Paracoccus ( Paracoccus sp. ).
  • the strain comprises a 16S rRNA having at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, at least about 99.5%, or at least about 99.9% sequence identity with SEQ ID NO: 1 it may be
  • the strain may contain the 16S rRNA of SEQ ID NO: 1.
  • sequence identity refers to the degree of identity of amino acid residues or bases between sequences after aligning both sequences in a specific comparison region so as to match each other as much as possible. Sequence identity can be confirmed according to methods known in the art. The percent of sequence identity can be determined using a known sequence comparison program, examples of which include BLASTN (NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM (DNASTAR Inc), and the like.
  • the Paracoccus denitrificans ( Paracoccus denitrificans )
  • the strain may be a strain deposited with accession number KCCM12994P.
  • the strain deposited with the accession number may be a Paracoccus denitrificans SC-1 strain.
  • the strain may have an effect of improving hair or scalp conditions.
  • the hair or scalp condition improvement may be one or more of hair growth promotion, hair loss prevention, and hair root strengthening.
  • Another aspect provides a lysate of the strain, a culture medium, or an extract of the culture medium.
  • lysate may be used interchangeably with “lysate” and may refer to a product obtained by disrupting the cell wall of a strain by chemical or physical force.
  • the homogenate may include the homogenate itself, a concentrate or a lyophilized product thereof.
  • the term "culture medium” may be used interchangeably with “culture supernatant”, “conditioned culture medium” or “conditioned medium”, and provides nutrients so that Paracoccus denitrificans strains can grow and survive in vitro. It may mean the entire medium including the strain obtained by culturing the strain for a certain period of time in a medium that can be supplied, metabolites thereof, and extra nutrients.
  • the culture solution may mean a culture solution obtained by removing the cells from the cell culture solution obtained by culturing the strain.
  • the liquid from which the cells are removed from the culture solution is also called “supernatant", and the culture solution is left still for a certain period of time to take only the liquid of the upper layer except for the part sunk in the lower layer, remove the cells through filtration, or centrifuge the culture solution to It can be obtained by removing the precipitate and taking only the upper liquid.
  • the "cell” refers to the strain itself of the present invention, and includes the strain itself separated and selected from a scalp sample or the like, or a strain isolated from a culture solution by culturing the strain.
  • the cells can be obtained by centrifuging the culture solution and taking the part that has sunk to the lower layer, or it can be obtained by leaving it for a certain period of time and then removing the upper liquid because it sinks to the lower layer of the culture medium by gravity.
  • the culture solution may include the culture solution itself obtained by culturing the strain, its concentrate or lyophilisate, or the culture supernatant obtained by removing the strain from the culture solution, its concentrate or lyophilisate.
  • Culture medium and culture conditions for culturing the Paracoccus denitrificans strain can be appropriately selected or modified by those skilled in the art.
  • the culture broth is cultured for a certain period of time, for example, 4 to 72 hours, at any temperature above 10 ° C. or below 40 ° C. in a medium (eg, R2A Broth) for a Paracoccus denitrificans strain may have been obtained.
  • a medium eg, R2A Broth
  • culture broth extract refers to an extract obtained from the culture medium or a concentrate thereof, and may include an extract, a dilution or concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude or purified product thereof, or a fraction obtained by fractionating the same.
  • the strain, a lysate thereof, a culture medium, or an extract of the culture medium may be biologically pure.
  • the strain may be obtained by pure culture.
  • Another aspect provides the use of a Paracoccus denitrificans strain, a lysate, culture, or extract of the strain. Specifically, it provides a composition containing a Paracoccus denitrificans strain, a lysate thereof, a culture medium, or an extract of the culture medium.
  • the Paracoccus denitrificans strain may be a Paracoccus denitrificans strain according to the above aspect.
  • Uses of the strain may include improving hair or scalp condition.
  • the hair or scalp condition improvement may be one or more of hair growth promotion, hair loss prevention, hair root strengthening, scalp lipid inhibition, dandruff prevention, and scalp inflammation inhibition. In one embodiment, the hair or scalp condition improvement may be one or more of hair growth promotion, hair loss prevention, and hair root strengthening.
  • hair growth means that hair is generated and grown.
  • hair growth promotion is used interchangeably with “hair growth promotion”, and means to increase the specific gravity of anagen hair in total hair by promoting hair generation and growth. This includes not only stimulating new hair growth, but also allowing existing hair to grow healthily.
  • the term "alopecia” refers to a phenomenon in which hair falls off from the scalp or a condition in which hair becomes sparse or thin.
  • the hair loss may be caused by a decrease in the specific gravity of anagen hair.
  • the hair loss may be caused by extrinsic factors or endogenous factors.
  • the extrinsic factors refer to various external factors, such as ultraviolet rays, and the endogenous factors include oxidative stress due to cell death of dermal papilla cells caused by telomeres and cell function degradation, etc., which occur over time.
  • the hair loss is alopecia areata, hereditary androgenetic alopecia, telogen effluvium, traumatic alopecia, hair loss due to trichotillomania, pressure alopecia, anagen alopecia, pityriasis It may be one or more selected from alopecia, syphilitic alopecia (alopecia syphlltiac), seborrheic alopecia (alopecia seborrhecia), symptomatic alopecia, scarring alopecia, and congenital alopecia, but is not limited thereto.
  • anti-hair loss means to prevent or suppress hair loss. Therefore, the prevention of hair loss may include hair loss improvement, hair loss prevention, hair loss treatment, and the like.
  • hair root strengthening refers to all actions that strengthen and strengthen the hair root part of the hair.
  • hair roots can be strengthened by proliferation of dermal papilla cells, promotion of nutrient delivery to dermal papilla cells, and increased expression of growth factors in dermal papilla cells.
  • the term "scalp lipid” refers to lipids produced in the scalp. Excessive accumulation of lipids on the scalp causes problems such as shine, dandruff, stinging, and itching. When sebum is excessively secreted, a lipid film is formed on the scalp. When the lipid film is excessively formed on the scalp, the propagation of anaerobic bacteria and the production of fatty acids increase, which can cause various troubles, seborrheic scalpitis, odor, hair loss, and the like.
  • the lipid may mean a lipid peroxide.
  • the term "suppressing scalp lipids” refers to any action that reduces or inhibits the production of lipids in the scalp. Prevention of dandruff, improvement or suppression of scalp inflammation and itching due to sebum, and prevention of hair loss due to lipid peroxide can be obtained through inhibition of scalp lipids.
  • the term "dandruff” refers to a phenomenon in which epidermal detachment occurs on the scalp and dead skin cells appear conspicuously. Dandruff can be accompanied by itching.
  • anti-dandruff means preventing or inhibiting the production of dandruff. Therefore, the anti-dandruff may mean improving dandruff, preventing dandruff, and the like.
  • the term "scalp inflammation” means inflammation occurring in the scalp.
  • the scalp inflammation may include any one or more of seborrheic dermatitis, pruritus, dry eczema, erythema, urticaria, psoriasis, drug rash, and scalp acne.
  • treating scalp inflammation refers to any action that reduces or improves scalp inflammation or prevents or suppresses the occurrence of scalp inflammation.
  • prevention includes inhibiting the occurrence of a disease.
  • treatment includes the inhibition, alleviation, or elimination of the development of a disease.
  • the composition according to one aspect may proliferate human follicular dermal papilla cells (HFDPC) by including a Paracoccus denitrificans strain, a lysate thereof, a culture medium, or an extract of the culture medium. Therefore, the composition may exhibit a hair root strengthening effect, an hair loss preventing effect, and a hair growth promoting effect.
  • HFDPC human follicular dermal papilla cells
  • the composition according to one aspect can increase the expression of one or more of vascular endothelial growth factor (VEGF) and fibroblast growth factor 7 (FGF7) by including a Paracoccus denitrificans strain, its lysate, culture medium or an extract of the culture medium.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • FGF7 fibroblast growth factor 7
  • Increased expression of growth factors such as VEGF and FGF7 promotes delivery of nutrients to dermal papilla cells and induces growth of hair root cells, thereby preventing hair loss and promoting hair growth as well as strengthening hair roots. Therefore, the composition may exhibit a hair root strengthening effect, an hair loss preventing effect, and a hair growth promoting effect.
  • the strain may exhibit a synergistic effect when used together with other strains having an effect of improving hair or scalp conditions, for example, strains belonging to the genus Staphylococcus or the genus Paracoccus.
  • the composition may exhibit a synergistic effect on improving hair or scalp conditions by further including an extract of Staphylococcus epidermidis , a lysate thereof, a culture medium, or a culture medium. Therefore, the composition Paracoccus denitrificans ( Paracoccus denitrificans ) strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium; and Staphylococcus epidermidis, a lysate thereof, a culture medium, or a combination of an extract of the culture medium.
  • Paracoccus denitrificans Paracoccus denitrificans
  • the Staphylococcus epidermidis may be isolated from human scalp.
  • the Staphylococcus epidermidis has a sequence identity of at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, at least about 99.5%, or at least about 99.9% with SEQ ID NO: 2 It may include 16S rRNA having The Staphylococcus epidermidis may include 16S rRNA of SEQ ID NO: 2.
  • the Staphylococcus epidermidis may be a strain deposited under accession number KCCM12559P.
  • the strain deposited with the accession number KCCM12559P may be a Staphylococcus epidermidis CICARIA strain.
  • the composition may exhibit a synergistic effect on improving hair or scalp conditions by further including yeast extract.
  • Paracoccus denitrificans Paracoccus denitrificans
  • Staphylococcus epidermidis its lysate, culture, or extract of the culture
  • yeast extract are used interchangeably herein with the term “scalp microbiome complex”.
  • the composition may include an extract of the Paracoccus denitrificans strain, its lysate, culture medium, or culture medium; Staphylococcus epidermidis, a lysate thereof, a culture medium, or an extract of a culture medium; and yeast extracts.
  • the composition is 0.001% to 80% by weight, for example, 0.01% to 60% by weight, 0.01% to 40% by weight, 0.01% to 30% by weight, 0.01% to 20% by weight, based on the total weight of the composition. %, 0.01% to 10%, 0.01% to 5%, 0.05% to 60%, 0.05% to 40%, 0.05% to 30%, 0.05% to 20%, 0.05% to 10% by weight, 0.05% to 5% by weight, 0.1% to 60% by weight, 0.1% to 40% by weight, 0.1% to 30% by weight, 0.1% to 20% by weight, 0.1% by weight % to 10% by weight, or 0.1% to 5% by weight of the strain, its lysate, culture, or extract of the culture, or a mixture of two strain cultures, or a combination of two strains.
  • the term "included as an active ingredient” means that the strain of the present specification, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium is added to the extent that the above-mentioned effects can be exhibited, and drug delivery and stabilization, etc. It means that it is formulated in various forms by adding various components as subcomponents for the purpose.
  • the composition may be in a liquid or dry state.
  • the composition may be in the form of a dry powder.
  • a drying method for preparing the composition in a dry state may use a method commonly used in the art, and is not particularly limited.
  • Non-limiting examples of the drying method include an air drying method, a natural drying method, a spray drying method, a freeze drying method, and the like. These methods may be used alone or at least two methods may be used together.
  • the composition may contain an additive in an effective amount sufficient to reduce deterioration of the strain, its lysate, culture medium or extract of the culture broth.
  • the additive may be, for example, a binder, but is not limited thereto.
  • the composition may further include a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable carrier.
  • the composition may be formulated with a carrier and provided as cosmetics, drugs, food additives, and the like.
  • the composition may be a cosmetic composition.
  • the cosmetic composition may further include ingredients commonly used in cosmetic compositions, functional additives, etc. in addition to the active ingredients disclosed herein, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, surfactants, dispersants, preservatives, and vitamins. , conventional adjuvants such as pigments, flavors, and the like, and carriers.
  • the cosmetic composition is not particularly limited to a specific formulation, and the formulation may be appropriately selected according to the purpose.
  • the cosmetic composition may have, for example, a solubilizing formulation, an emulsifying formulation, or a dispersion formulation.
  • the cosmetic composition may have, for example, a softening lotion, a nutrient lotion, a massage cream, a nutrient cream, an essence, a pack, a gel, an ampoule, or a skin-adhesive cosmetic formulation.
  • the cosmetic composition may be a formulation that can be used for hair or scalp.
  • the cosmetic composition for example, hair tonic, hair conditioner, hair essence, hair lotion, hair nutrition lotion, hair shampoo, hair rinse, hair treatment, hair cream, hair nutrition cream, hair moisture cream, hair massage cream, hair Wax, hair aerosol, hair pack, hair nutrition pack, hair soap, hair cleansing foam, hair oil, hair drying agent, hair preservative, hair dye, hair waving agent, hair bleach, hair gel, hair glaze, hair dressing, hair lacquer, It may be in the form of a hair moisturizer, hair mousse or hair spray, specifically shampoo, cleanser, conditioner, treatment, hair pack, rinse, scalp pack, tonic, essence, lotion, cream, oil, mist, spray, or hair gel may be a formulation.
  • the composition may be a composition for external application for skin.
  • the external skin preparation may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermal delivery patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof.
  • the external skin preparation is a component usually used in external preparations for skin such as cosmetics or pharmaceuticals, for example, water-based components, oil-based components, powder components, alcohols, moisturizers, thickeners, ultraviolet absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, and fragrances. , colorants, various skin nutrients, or combinations thereof and may be suitably blended as needed.
  • metal sequestering agents such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, gluconic acid
  • drugs such as caffeine, tannin, bellapamil, licorice extract, glabridin, hot water extract of calin fruit, various herbal medicines, tocopherol acetate, glycylitnic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts
  • Vitamin C magnesium ascorbyl phosphate, ascorbic acid glucoside, arbutin, kojic acid
  • Sugars such as glucose, fructose, and trehalose, etc. can also be mix
  • the composition may be a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition may additionally include a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.
  • the diluent may be lactose, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose, mannitol, or a combination thereof.
  • the carrier may be an excipient, a disintegrant, a binder, a lubricant, or a combination thereof.
  • the excipient may be microcrystalline cellulose, lactose, low-substituted hydroxycellulose, or a combination thereof.
  • the disintegrant may be calcium carboxymethylcellulose, sodium starch glycolate, calcium monohydrogen phosphate, or a combination thereof.
  • the binder may be polyvinylpyrrolidone, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropylcellulose, or a combination thereof.
  • the lubricant may be magnesium stearate, silicon dioxide, talc, or a combination thereof.
  • the pharmaceutical composition may be formulated for oral or parenteral administration.
  • Oral dosage forms may be granules, powders, liquids, tablets, capsules, dry syrups, and the like.
  • Parenteral dosage forms may be injections, ointments, and the like.
  • the composition may be a health functional food composition.
  • it may be formulated in the form of a conventional health functional food known in the art.
  • the health functional food composition may be used alone, or in combination with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to conventional methods.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • beverage compositions may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional components, like conventional beverages.
  • the natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; disaccharides such as maltose and sucrose; and polysaccharides such as dextrins and cyclodextrins; It is a sugar alcohol, such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • the sweetener natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract, or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame may be used.
  • the health food composition may also contain nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, and carbonated beverages. carbonation agent used, or a combination thereof.
  • the health functional food composition may also contain natural fruit juice, fruit juice beverages, fruit flesh for preparing vegetable beverages, or a combination thereof.
  • Another aspect provides a method for preventing, ameliorating, or treating a condition in a subject comprising treating or administering to a subject in need thereof an effective amount of a composition described above.
  • the condition of the subject may be a hair or scalp condition, and may specifically be a condition related to hair loss or a condition related to inflammation of the scalp.
  • administering introducing
  • implanting are used interchangeably herein, and according to one embodiment, a subject by a method or route that results in at least partial localization of a composition to a desired site. It can mean the placement of a composition according to one embodiment into.
  • Administration may be administered by a method known in the art. Administration may be administered directly to a subject by any means, for example, by routes such as intravenous, intramuscular, oral, transdermal, mucosal, intranasal, intratracheal or subcutaneous administration. can The administration may be administered systemically or locally.
  • the subject may be a mammal, such as a human, cow, horse, pig, dog, sheep, goat, or cat.
  • the subject may be a subject in need of hair or scalp condition improvement, for example, a subject in need of hair growth promotion, hair loss prevention, hair root strengthening, scalp lipid inhibition, dandruff prevention, or scalp inflammation inhibitory effect.
  • the administration is 0.1 mg to 1,000 mg per day of the composition according to one embodiment, for example, 0.1 mg to 500 mg, 0.1 mg to 100 mg, 0.1 mg to 50 mg, 0.1 mg to 25 mg, 1 mg to 1,000 mg, 1 mg to 500 mg, 1 mg to 100 mg, 1 mg to 50 mg, 1 mg to 25 mg, 5 mg to 1,000 mg, 5 mg to 500 mg, 5 mg to 100 mg, 5 mg to 50 mg , 5 mg to 25 mg, 10 mg to 1,000 mg, 10 mg to 500 mg, 10 mg to 100 mg, 10 mg to 50 mg, or 10 mg to 25 mg may be administered.
  • the dosage may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate and reaction sensitivity, and those skilled in the art can Dosage can be appropriately adjusted in consideration of these factors.
  • the number of administrations can be once a day or two or more times within the range of clinically acceptable side effects, and administration can be performed at one or two or more sites, daily or at intervals of 2 to 5 days.
  • the number of administration days may be administered from 1 day to 30 days per treatment. If necessary, the same treatment can be repeated after a titration period.
  • the same dosage per kg as for humans is used, or the above dosage is converted by the volume ratio (eg, average value) of the organ (heart, etc.) between the target animal and the human.
  • a single dose can be administered.
  • novel Paracoccus denitrificans strain since it has hair growth promotion, hair loss prevention, and hair root strengthening effects, it can be variously applied for improvement, prevention, or treatment of hair or scalp conditions.
  • FIG. 1 is a diagram showing the structure of hair and dermal papilla cells.
  • Figure 3 is a graph showing the degree of VEGF gene expression in dermal papilla cells by each test substance.
  • Figure 4 is a graph showing the degree of FGF7 gene expression in dermal papilla cells by each test substance.
  • a sample was obtained by washing the scalp of a woman in her twenties with a healthy scalp with sterile distilled water.
  • the samples were inoculated into R2A (Reasoner's 2A) liquid medium or solid medium (manufacturer: Difco). After culturing in a 28° C. incubator for 48 hours after inoculation, 100 formed colonies were cultured in pure isolation and re-cultured in a 28° C. incubator for 48 hours. 16S rRNA sequence identification was performed on colonies completed with culture.
  • the primers used at this time were designed to amplify in response only to bacteria.
  • PCR amplification was carried out in 30 cycles of 95 ° C for 1 minute, 55 ° C for 1 minute, and 75 ° C for 1 minute and 30 seconds, and finally maintained at 72 ° C for 8 minutes and then stored at 4 ° C.
  • DNA sequences of the isolated and cultured species were determined using ABI-3730XL (ABI, USA).
  • SC-1 novel microorganism Paracoccus denitrificans strain
  • CICARIA Staphylococcus epidermidis
  • Example 2 The SC-1 strain culture medium of Example 2 and the CICARIA strain culture medium of Example 3 were mixed in a 1:1 ratio to prepare a strain culture medium mixture (named "CICARIA + SC-1").
  • a composite (named “Scalpiome”) was prepared by mixing the SC-1 strain culture medium of Example 2, the CICARIA strain culture medium and yeast extract of Example 3 at a ratio of 1:1:1.
  • MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 -diphenyl-2H-tetrazolium bromide
  • human dermal papilla cells were dispensed in 2x10 4 cells/well in a 96-well plate, and then cultured for 24 hours in an incubator at 37°C and 5% CO 2 conditions. Then, after replacing with a medium containing nothing, the culture medium of Example 2 (SC-1), the culture medium of Example 3 (CICARIA), the culture medium mixture of Example 4 (CICARIA + SC-1), Example 5
  • the complex Scalpiome
  • yeast extract yeast Extract
  • the group in which 10 ppm of minoxidil (MXD, 6-piperidin-1-ylpyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) or 2.5 mM of AS2P (Ascorbic acid 2-phosphate) was added instead of the strain culture medium was positive.
  • a medium addition group (media control) not containing the strain culture medium was set as a negative control group, and a culture medium addition group (None) was also set as a control group to confirm the efficacy of the strain culture medium.
  • Example 2 As shown in Figure 2, it was confirmed that the SC-1 strain culture medium of Example 2, the CICARIA strain culture medium of Example 3, the strain culture medium mixture of Example 4, and the composite of Example 5 all exhibit dermal papilla cell proliferation effects. . In particular, it was confirmed that the complex of Example 5 exhibits a synergistic dermal papilla cell proliferation effect.
  • the SC-1 strain, or the combination of the SC-1 strain and the CICARIA strain, or the combination of the SC-1 strain, the CICARIA strain, and the yeast extract can be used for strengthening hair roots, preventing hair loss, and promoting hair growth.
  • HFDPC human dermal papilla cells
  • Real-time polymerase chain reaction was performed in a real-time PCR machine using a mixture in which primers for VEGF or FGF7 and cyanine dye Cybergreen (SYBR Green supermis, Applied Biosystems, USA) were added to the synthesized cDNA, and finally VEGF and FGF7 The expression level of the gene was evaluated.
  • the sequence and reaction conditions of the primers used are shown in Table 1 below, and the expression level of the gene was finally analyzed through correction for the ⁇ -actin gene.
  • Primer name direction order sequence number reaction conditions VEGF F 5′-GTGCCCACTGAGGAGTTCAAC-3′ 3 After polymerase activation at 94°C for 5 minutes, polymerization reaction at 40 cycles at 95°C for 30 seconds, 60°C for 30 seconds, and 72°C for 30 seconds R 5′-CCCTATGTGCTGGCCTTGAT-3′ 4 FGF7 F 5′-TCCTGCCAACTTTGCTCTACA-3′ 5 R 5′-CAGGGCTGGAACAGTTCACAT-3′ 6 ⁇ -actin F 5′-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3′ 7 R 5′-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3′ 8
  • Figure 3 is a graph showing the degree of VEGF gene expression in dermal papilla cells by each test substance.
  • Figure 4 is a graph showing the degree of FGF7 gene expression in dermal papilla cells by each test substance.
  • FGF7 fibroblast growth factor 7
  • the SC-1 strain culture medium of Example 2 exhibits an excellent expression increasing effect of fibroblast growth factor 7 (FGF7).
  • FGF7 fibroblast growth factor 7
  • the CICARIA strain culture solution of Example 3 the strain culture mixture of Example 4
  • the composite of Example 5 all exhibit excellent expression increasing effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) and fibroblast growth factor 7 (FGF7).
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • FGF7 fibroblast growth factor 7
  • the SC-1 strain or the combination of the SC-1 strain and the CICARIA strain, or the combination of the SC-1 strain, the CICARIA strain and yeast extract can be used for strengthening hair roots, preventing hair loss, promoting hair growth, and scalp health. Confirmed.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액, 및 이들의 모발 또는 두피 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 신규 파라코커스 데니트리피칸스 균주에 의하면, 발모 촉진, 탈모 방지, 및 모근 강화 효과가 있으므로, 모발 또는 두피 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다. 또한, 상기 균주를 스타필로코커스 에피덜미디스 균주 및 효모 추출물 중 어느 하나 이상과 조합하여 사용할 경우, 모발 또는 두피 상태의 개선에 시너지 효과를 나타낼 수 있다.

Description

두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
본 출원은 2021년 9월 14일 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2021-0122765호 를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다.
신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액, 및 이들의 모발 또는 두피 상태 개선 용도에 관한 것이다.
인체에 있어서 모발은 두피에 있는 모낭에서 자라나며, 일생 동안 성장기(anagen), 퇴행기(catagen), 휴지기(telogen) 등의 주기가 지속적으로 반복되며 생성, 성장, 탈락을 거치게 된다(Paus et al., J Invest Dermatol. 113, pp.523-532, 1999). 모낭의 퇴행기에는 모낭의 성장이 중단되고, 세포사멸 및 세포외 기질의 재구성이 발생하게 되기 때문에, 모낭의 퇴행기 및 휴지기 상태의 모낭세포가 많아질수록 머리카락이 빠지고 다시 자라나지 않는 탈모 현상을 나타내게 된다.
모발은 눈에 보이는 모간부와 눈에 보이지 않는 모근부로 나누어지며, 모근부 중 모발이 자라는 뿌리를 모구(Hair bulb)라고 부르고, 그 아랫부분에 움푹 들어간 부분을 모유두(Hair papilla)라고 한다(도 1). 모유두는 모발의 발생에 있어 가장 중요한 부분으로, 혈관과 신경이 있어 영양분과 성장인자를 전달하여 모발의 성장을 촉진한다. 모유두세포(dermal papilla cell)의 사멸 및 생장 감소로 인해 모발의 수가 감소하기 때문에, 모발의 유지 및 증가를 위해서는 모유두세포의 증식이 필요하다.
혈관내피 성장인자(Vascular endothelial growth factor: VEGF)는 혈관내피세포의 성장을 유도하여 혈관 신생을 촉진시키는 당단백질이다. VEGF는 모유두에 존재하는 VEGF 수용체-2(VEGFR-2)에 붙어 VEGF-2/ERK pathway를 유도함으로써 모유두세포의 증식을 유도한다(Wei Li et al., Exp Cell Res. 2012 Aug 15;318(14):1633-40). 더불어, 섬유아세포 성장인자 7(Fibroblast growth factor 7, FGF7)은 각질세포 성장인자(Keratinocyte growth factor, KGF)라고도 하며, 모낭 바깥 부분과 두피 표면으로 드러나는 모발 부분의 생장에 관여함으로써 모발 생성 주기를 조절하는 증식 인자이다(Genes Dev. 1996;10(2):165-175). 따라서, 모유두세포에서 VEGF 및 FGF7의 유전자 발현의 증가는 모발 생장을 유도하는 데 큰 도움을 줄 수 있다.
최근 환경 오염 및 도시 스트레스가 심각해지면서 탈모증을 가진 현대인이 많아짐에 따라 이를 개선할 수 있는 물질에 대한 관심이 높아지고 있다. 따라서, 모근부 중 모발 생성의 시작을 담당하는 모유두세포의 성장 인자 발현을 증가시켜 모발의 생장을 유도하여 모근을 강화하고 탈모 예방에 도움을 줄 수 있는 물질을 발명하고자 하였다.
이와 관련하여, 대한민국 등록특허공보 제10-2102578호는 다수의 화합물을 포함하는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물을 개시하고 있다. 그러나, 모발 또는 두피 상태를 개선할 수 있는 미생물에 대한 연구는 많지 않다.
프로바이오틱스(Probiotics)는 인체에 유익한 작용을 하는 미생물을 총칭하는 말로 우리 몸에 유익(benefit)을 주는 미생물을 말한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균으로 알려져 있다. 프로바이오틱스는 인체에 여러 가지 유익작용을 통해 효과적인 효능이 발생되는 것으로 보고되었지만, 두피상재균과 두피의 상호관계에 대한 연구는 미비한 실정이다.
이에, 두피 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 두피상재균의 개발이 필요하다.
일 양상은 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주를 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물의 조합을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주를 제공한다.
상기 균주는 분리된 것일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "분리된(isolated)"이란 자연계에 존재하는 것이 아닌 인위적으로 분리하여 이용가능한 것을 의미한다. 상기 균주는 인간 두피로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 균주는 인간 두피로부터 얻은 샘플(예: 각질세포)을 R2A(Reasoner's 2A) 배지에 접종하여 배양된 콜로니를 순수 분리 배양하는 방법에 의해 분리된 균주일 수 있다. 따라서, 상기 균주는 두피 마이크로바이옴에 속할 수 있다.
상기 균주는 파라코커스 속(Paracoccus sp.)에 속하는 균주일 수 있다.
상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다.
상기 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주는 기탁번호 KCCM12994P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호로 기탁된 균주는 파라코커스 데니트리피칸스 SC-1 균주일 수 있다.
상기 균주는 모발 또는 두피 상태 개선 효과를 갖는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 모발 또는 두피 상태 개선은 발모 촉진, 탈모 방지 및 모근 강화 중 1종 이상일 수 있다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공한다.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 "용해물"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 상기 파쇄액은 파쇄액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 호환적으로 사용될 수 있고, 파라코커스 데니트리피칸스 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로, 두피 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물, 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
상기 파라코커스 데니트리피칸스 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배양액은 파라코커스 데니트리피칸스 균주를 배지(예를 들면, R2A Broth)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 72시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액으로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물은 생물학적으로 순수한 것일 수 있다. 상기 균주는 순수배양(pure culture)에 의해 얻은 것일 수 있다.
또 다른 양상은 파라코커스 데니트리피칸스 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 파라코커스 데니트리피칸스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 용도 또는 조성물에 있어서, 상기 파라코커스 데니트리피칸스 균주는 상기 일 양상에 따른 파라코커스 데니트리피칸스 균주일 수 있다.
상기 균주의 용도는 모발 또는 두피 상태 개선을 포함할 수 있다.
상기 모발 또는 두피 상태 개선은 발모 촉진, 탈모 방지, 모근 강화, 두피 지질 억제, 비듬 방지, 및 두피 염증 억제 중 1종 이상일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 모발 또는 두피 상태 개선은 발모 촉진, 탈모 방지, 및 모근 강화 중 1종 이상일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "발모"란 모발이 생성 및 성장하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "발모 촉진"은 "육모 촉진"과 혼용되며, 모발의 생성 및 성장을 촉진하여 전체 모발에서 성장기 모발의 비중을 증가시키는 것을 의미한다. 이는 새로운 모발의 생성을 촉진하는 것뿐만 아니라, 기존 모발이 건강하게 자라도록 하는 것도 포함한다.
본 명세서에서 용어 "탈모(alopecia)"란 두피로부터 모발이 탈락하는 현상 또는 모발이 성기거나 가늘어지는 상태를 의미한다. 상기 탈모는 성장기 모발의 비중이 감소함에 따라 유발될 수 있다. 상기 탈모는 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발될 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선을 말하고, 상기 내인성 요인은 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인으로 텔로미어에 의한 모유두세포의 세포사와 세포 기능 저하에 따른 산화 스트레스 등을 포함한다. 상기 탈모는 원형 탈모증(alopecia areata), 유전성 안드로겐 탈모증(androgenetic alopecia), 휴지기 탈모증(Telogen effluvium), 외상성 탈모증, 발모벽(trichotillomania)으로 인한 탈모, 압박성 탈모증(pressure alopecia), 생장기 탈모증, 비강성 탈모증, 매독성 탈모증(alopecia syphlltiac), 지루 탈모증(alopecia seborrhecia), 증후성 탈모증, 반흔성 탈모증, 및 선천성 탈모증 중에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 용어 "탈모 방지"란 탈모를 예방하거나 억제하는 것을 의미한다. 따라서, 상기 탈모 방지는 탈모 개선, 탈모 예방, 탈모 치료 등을 포함하는 의미일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "모근 강화"란 모발의 모근부를 강하고 튼튼하게 하는 모든 작용을 의미한다. 예를 들어, 모유두세포의 증식, 모유두세포로의 영양분 전달 촉진, 모유두세포에서 성장인자의 발현 증가에 의해 모근이 강화될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "두피 지질"이란 두피에서 생성된 지질을 의미한다. 지질이 두피에 과다하게 쌓이면 번들거림, 비듬, 따가움, 가려움 등의 문제를 일으킨다. 피지가 과다 분비되면 두피에 지질막을 형성하게 된다. 두피에 지질막이 과다하게 형성되면 혐기성 세균의 번식, 지방산 생성이 증가하고, 이는 각종 트러블, 지루성 두피염, 악취, 탈모 등을 일으킬 수 있다. 상기 지질은 과산화지질을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "두피 지질 억제"란 두피에서 지질의 생성을 감소 또는 저해하는 모든 작용을 의미한다. 두피 지질 억제를 통해, 비듬 방지, 피지로 인한 두피 염증 및 가려움증 개선 또는 억제, 과산화지질로 인한 탈모의 방지 효과를 얻을 수 있다.
본 명세서에서 용어 "비듬(dandruff)"이란 두피에서 표피 탈락이 발생하여 각질이 눈에 띄게 나타나는 현상을 말한다. 비듬은 가려움증을 동반할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "비듬 방지"란 비듬의 생성을 예방하거나 억제하는 것을 의미한다. 따라서, 상기 비듬 방지는 비듬 개선, 비듬 예방 등을 포함하는 의미일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "두피 염증"이란 두피에 발생한 염증을 의미한다. 상기 두피 염증은 지루성 피부염, 소양증, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 두피 여드름 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "두피 염증 억제"란 두피 염증을 감소 또는 개선시키거나, 두피 염증의 발생을 예방 또는 억제하는 모든 작용을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다.
일 양상에 따른 조성물은 파라코커스 데니트리피칸스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함함으로써 인간모유두세포(Human follicular dermal papilla cells, HFDPC)를 증식시킬 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 모근 강화 효과, 탈모 방지 효과, 및 발모 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 파라코커스 데니트리피칸스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함함으로써 혈관내피 성장인자(VEGF) 및 섬유아세포 성장인자 7(FGF7) 중 하나 이상의 발현을 증가시킬 수 있다. 상기 VEGF, FGF7 등 성장인자의 발현 증가에 의해 모유두세포로의 영양분 전달 촉진, 모근부 세포의 생장이 유도되어, 모근 강화뿐만 아니라 탈모 방지 및 발모 촉진이 가능하다. 따라서, 상기 조성물은 모근 강화 효과, 탈모 방지 효과, 및 발모 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 모발 또는 두피 상태 개선 효과를 갖는 다른 균주, 예를 들어, 스타필로코커스 속 또는 파라코커스 속에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타낼 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis), 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 더 포함함으로써, 모발 또는 두피 상태 개선에 대해 시너지 효과를 나타낼 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 스타필로코커스 에피덜미디스, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물의 조합을 포함할 수 있다.
상기 스타필로코커스 에피덜미디스는 인간 두피로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 스타필로코커스 에피덜미디스는 서열번호 2와 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 스타필로코커스 에피덜미디스는 서열번호 2의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 스타필로코커스 에피덜미디스는 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 균주는 스타필로코커스 에피덜미디스 CICARIA 균주일 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 효모 추출물(Yeast Extract)을 더 포함함으로써, 모발 또는 두피 상태 개선에 대해 시너지 효과를 나타낼 수 있다.
따라서, (1) 상기 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 (2) 스타필로코커스 에피덜미디스, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 효모 추출물 중 1종 이상의 조합은 본 명세서에서 용어 "두피 마이크로바이옴 콤플렉스(Scalp microbiome complex)"와 상호교환적으로 사용된다.
예를 들어, 상기 조성물은 상기 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 스타필로코커스 에피덜미디스, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 효모 추출물의 조합을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물, 또는 2종 균주 배양액의 혼합물, 또는 2종 균주 복합물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
상기 조성물은 액체 상태 또는 건조 상태인 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 건조 분말 형태일 수 있다.
상기 조성물을 건조 상태로 제조하는 건조 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법을 사용할 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 상기 건조 방법의 비제한적인 예는, 공기 건조 방법, 자연 건조 방법, 분무 건조 방법, 동결 건조 방법 등이 있다. 이들 방법은 단독으로 사용하거나 적어도 두 가지 방법을 함께 사용할 수 있다.
상기 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 담체와 함께 제형화되어 화장품, 약품, 식품 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 명세서에 개시된 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 기능성 첨가물 등을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 분산제, 방부제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 특정 제형에 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 가용화 제형, 유화 제형, 또는 분산 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 모발 또는 두피에 사용할 수 있는 제형일 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들면 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형일 수 있고, 구체적으로 샴푸, 클렌져, 컨디셔너, 트리트먼트, 헤어팩, 린스, 두피팩, 토닉, 에센스, 로션, 크림, 오일, 미스트, 스프레이, 또는 헤어젤 제형일 수 있다.
상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제; 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제; 비타민 C, 마그네슘아스코빌포스페이트, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산; 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 만니톨, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제 등일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 연고제 등일 수 있다.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물 단독을 사용하거나, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 모발 또는 두피 상태일 수 있고, 구체적으로 탈모와 관련된 상태, 또는 두피 염증과 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고, 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 모발 또는 두피 상태 개선을 필요로 하는 개체, 예를 들어 발모 촉진, 탈모 방지, 모근 강화, 두피 지질 억제, 비듬 방지, 또는 두피 염증 억제 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
일 양상에 따른 신규 파라코커스 데니트리피칸스 균주에 의하면, 발모 촉진, 탈모 방지, 및 모근 강화 효과가 있으므로, 모발 또는 두피 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.
또한, 상기 파라코커스 데니트리피칸스 균주를 스타필로코커스 에피덜미디스 균주와 조합하여 사용할 경우, 모발 또는 두피 상태의 개선에 시너지 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 모발의 구조 및 모유두세포를 도시한 도이다.
도 2는 각 시험 물질에 의한 모유두세포의 증식능 증가 효능을 확인한 결과이다.
도 3은 각 시험 물질에 의한 모유두세포에서 VEGF 유전자 발현 정도를 나타낸 그래프이다.
도 4는 각 시험 물질에 의한 모유두세포에서 FGF7 유전자 발현 정도를 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
건강한 두피를 가진 20대 여성의 두피를 멸균 증류수로 세척하여 샘플을 얻었다. 상기 샘플을 R2A(Reasoner's 2A) 액체 배지 또는 고체 배지(제조사: Difco)에 접종하였다. 접종 후 48시간 동안 28℃ 인큐베이터에서 배양한 뒤, 형성된 집락 100개를 순수분리 배양하여, 48시간 동안 28℃ 인큐베이터에서 재배양 하였다. 배양이 완료된 집락은 16S rRNA 서열 동정을 실시하였다. 이때 사용된 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안되었다. PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분 30초씩 30 사이클로 실시 하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 유지한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다.
분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA 부위의 염기서열을 미국 국립생물정보센터(NCBI, National Center for Biotechnology Information) 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램을 통해 등록된 다른 균주들과 비교 분석 하였을 때, 상동성 97% 이하의 신규성 있는 종들만 선별하였고, 그 중 상동성 98% 이하의 신규 미생물 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주(이하 "SC-1"이라 함)를 선별하였다. 선별된 SC-1 균주를 2021년 5월 28일자로 한국 미생물 보존센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM12994P를 부여 받았다. SC-1 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16S rRNA 서열을 갖는다.
한편, 동일한 방법으로 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis)(이하 “CICARIA"이라 함)를 선별하여, 2019년 6월 11일자로 한국 미생물 보존센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM12559P를 부여 받았다. CICARIA 균주는 서열번호 2(complementary DNA)의 16S rRNA 서열을 갖는다.
실시예 2. SC-1 균주 배양액의 제조
실시예 1의 SC-1 균주를 R2A(Reasoner's 2A) 액체 배지(제조사: Difco)에 접종하여 30℃에서 48시간 배양한 후, 0.45um 필터로 균주를 제거하여, SC-1 균주 배양액을 제조하였다.
실시예 3. CICARIA 균주 배양액의 제조
실시예 1의 CICARIA 균주를 R2A(Reasoner's 2A) 액체 배지(제조사: Difco)에 접종하여 30℃에서 48시간 배양한 후, 0.45um 필터로 균주를 제거하여, CICARIA 균주 배양액을 제조하였다.
실시예 4. SC-1 균주 배양액 및 CICARIA 균주 배양액의 혼합물의 제조
실시예 2의 SC-1 균주 배양액 및 실시예 3의 CICARIA 균주 배양액을 1:1 비율로 혼합하여 균주 배양액 혼합물("CICARIA+SC-1"로 명명함)을 제조하였다.
실시예 5. SC-1 균주 배양액, CICARIA 균주 배양액 및 효모추출물을 포함하는 복합물의 제조
실시예 2의 SC-1 균주 배양액, 실시예 3의 CICARIA 균주 배양액 및 효모 추출물(Yeast extract)를 1:1:1의 비율로 혼합하여 복합물("Scalpiome"로 명명함)을 제조하였다.
실험예 1. 인간모유두세포(HFDPC) 증식능 증가 효능 평가
실시예 2 내지 5의 균주 배양액, 혼합물 또는 복합물이 모유두세포의 증식을 현저하게 유도하는지를 평가하기 위해, 다음과 같은 조건으로 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) 분석을 수행하였다.
먼저 인간모유두세포(HFDPC)를 96웰 플레이트에 2x104 세포/웰씩 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 아무것도 포함하지 않은 배지로 교체한 후, 상기 실시예 2의 배양액(SC-1), 실시예 3의 배양액(CICARIA), 실시예 4의 배양액 혼합물(CICARIA+SC-1), 실시예 5의 복합물(Scalpiome) 또는 효모 추출물(Yeast Extract)을 0.1%(w/w)의 양으로 첨가하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 균주 배양액 대신 모발 발육 촉진제로 알려진 미녹시딜(Minoxidil, MXD, 6-piperidin-1-ylpyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) 10 ppm 또는 AS2P(Ascorbic acid 2-phosphate) 2.5 mM을 첨가한 군을 양성 대조군으로 설정하고, 균주 배양액을 포함하지 않는 배지 첨가군(배지 control)을 음성 대조군으로 설정하였으며, 균주 배양액의 효능을 확인하기 위해 배양액 비첨가군(None)도 대조군으로 설정하였다. 24시간 후, 각 웰의 배지를 제거하고 DPBS(Dulbecco's phosphate buffered saline)를 이용한 워싱 과정을 1회 거친 다음, 각 웰당 500 μl의 0.5 mg/mL MTT(Sigma-aldrich, St. Louis, USA)를 포함하는 배지로 교체하고 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 이후 빅터 3 (Victor 3, Perkin-Elmer)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 평균 흡광도 값에 대한 백분율로 세포의 생존율을 나타내었으며, 이를 통해 인간모유두세포(HFDPC) 증식능을 확인할 수 있다.
도 2는 각 시험 물질에 의한 모유두세포의 증식능 증가 효능을 확인한 결과이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 SC-1 균주 배양액, 실시예 3의 CICARIA 균주 배양액, 실시예 4의 균주 배양액 혼합물 및 실시예 5의 복합물은 모두 모유두세포 증식 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 5의 복합물은 상승적인 모유두세포 증식 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, SC-1 균주, 또는 SC-1 균주와 CICARIA 균주의 조합, 또는 SC-1 균주, CICARIA 균주 및 효모 추출물의 조합은 모근 강화, 탈모 방지, 및 발모 촉진을 위해 사용될 수 있음을 확인하였다.
실험예 2. 인간모유두세포(HFDPC)에서 성장인자(VEGF 및 FGF7)의 발현 증가 효능 평가
실시예 2 내지 5의 균주 배양액, 혼합물 또는 복합물이 모발 생장을 유도하고 두피 건강을 유지시켜 주는 성장인자 VEGF 및 FGF7의 발현을 증가시킬 수 있는지 여부를 평가하기 위해, 실시간 중합효소연쇄반응(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction: qRT-PCR)을 수행하였다.
구체적으로, 인간모유두세포(HFDPC)를 6웰 플레이트에 3x105 세포/웰씩 분주한 후, 세포 배양조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 이후 배지를 버리고 PBS(Phosphate buffered saline)로 세척한 다음, FBS(Fetal bovine serum)를 포함하지 않는 배지를 사용하여 세포를 기아상태로 만들어 주었다. 다음날, 상기 실시예 2의 배양액(SC-1), 실시예 3의 배양액(CICARIA), 실시예 4의 배양액 혼합물(CICARIA+SC-1), 실시예 5의 복합물(Scalpiome) 또는 효모 추출물(Yeast Extract)을 0.1%(w/w)의 양으로 포함하는 배지로 교체해 준 후, 24시간 동안 추가 배양하였다. 미녹시딜(MXD) 10ppm 또는 AS2P 2.5 mM을 첨가한 군을 양성 대조군으로 설정하고, 균주 배양액을 포함하지 않는 배지 첨가군(배지con)을 음성 대조군으로 설정하고, 배양액 비첨가군(None)을 대조군으로 설정하였다. 이후, RNeasy Mini Kit(Qiagen)을 이용하여 세포에서 RNA를 분리한 뒤, 나노드롭(nanodrop)을 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량 한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국)에서 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA에 VEGF 또는 FGF7용 프라이머와 시아닌 염료인 사이버그린(SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 실시간 PCR 기계에서 실시간 중합효소연쇄반응을 실시함으로써, 최종적으로 VEGF 및 FGF7 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 사용된 프라이머의 서열과 반응 조건은 하기 표 1과 같으며, 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
프라이머 명칭 방향 서열 서열번호 반응 조건
VEGF F 5'-GTGCCCACTGAGGAGTTCAAC-3' 3 94℃, 5분 동안 중합 효소 활성화 후, 95℃ 30초, 60℃ 30초, 72℃ 30초 조건에서 40 사이클로 중합 반응
R 5'-CCCTATGTGCTGGCCTTGAT-3' 4
FGF7 F 5'-TCCTGCCAACTTTGCTCTACA-3' 5
R 5'-CAGGGCTGGAACAGTTCACAT-3' 6
β-actin F 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3' 7
R 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3' 8
도 3은 각 시험 물질에 의한 모유두세포에서 VEGF 유전자 발현 정도를 나타낸 그래프이다. 도 4는 각 시험 물질에 의한 모유두세포에서 FGF7 유전자 발현 정도를 나타낸 그래프이다. 도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 SC-1 균주 배양액은 섬유아세포 성장인자 7(FGF7)의 우수한 발현 증가 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 실시예 3의 CICARIA 균주 배양액, 실시예 4의 균주 배양액 혼합물 및 실시예 5의 복합물은 모두 혈관내피 성장인자(VEGF) 및 섬유아세포 성장인자 7(FGF7)의 우수한 발현 증가 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 5의 복합물은 VEGF, FGF7 발현 증가능에서 상승적인 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, SC-1 균주, 또는 SC-1 균주와 CICARIA 균주의 조합, 또는 SC-1 균주, CICARIA 균주 및 효모 추출물의 조합은 모근 강화, 탈모 방지, 발모 촉진, 및 두피 건강을 위해 사용될 수 있음을 확인하였다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다.
Figure PCTKR2022013364-appb-img-000001
Figure PCTKR2022013364-appb-img-000002

Claims (17)

  1. 서열번호 1과 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는, 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주.
  2. 청구항 1에 있어서, 기탁번호 KCCM12994P로 기탁된 것인 균주.
  3. 청구항 1의 균주의 배양액.
  4. 청구항 1의 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서, 모발 또는 두피 상태 개선용인 것인 화장료 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 모발 또는 두피 상태 개선은 발모 촉진, 탈모 방지, 및 모근 강화 중 1종 이상인 것인 화장료 조성물.
  7. 청구항 4에 있어서, 인간모유두세포를 증식시키거나; 혈관내피 성장인자(VEGF) 및 섬유아세포 성장인자 7(FGF7) 중 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인 화장료 조성물.
  8. 청구항 4에 있어서, 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis), 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 더 포함하는 것인 화장료 조성물.
  9. 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 모발 또는 두피 상태 개선용 화장료 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서, 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis), 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 더 포함하는 것인 화장료 조성물.
  11. 청구항 9 또는 10에 있어서, 효모 추출물(Yeast extract)을 더 포함하는 것인 화장료 조성물.
  12. 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모 방지용 약학적 조성물.
  13. 청구항 12에 있어서, 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis), 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 효모 추출물(Yeast extract) 중 1종 이상을 더 포함하는 것인 약학적 조성물.
  14. 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 모발 또는 두피 상태 개선용 건강기능식품 조성물.
  15. 청구항 14에 있어서, 기탁번호 KCCM12559P로 기탁된 스타필로코커스 에피덜미디스(Staphylococcus epidermidis), 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물; 및 효모 추출물(Yeast extract) 중 1종 이상을 더 포함하는 것인 건강기능식품 조성물.
  16. 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물의 용도.
  17. 유효한 양의 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans) 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 탈모를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법.
PCT/KR2022/013364 2021-09-14 2022-09-06 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도 WO2023043111A1 (ko)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18/681,221 US20240307292A1 (en) 2021-09-14 2022-09-06 Scalp microbiome complex and use thereof for improving hair or scalp condition
CN202280054932.7A CN117813373A (zh) 2021-09-14 2022-09-06 头皮的微生物组复合体及其对头发或头皮状态改善的用途
EP22870196.7A EP4403624A1 (en) 2021-09-14 2022-09-06 Scalp microbiome complex and use thereof for improving hair or scalp condition

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2021-0122765 2021-09-14
KR1020210122765A KR102558084B1 (ko) 2021-09-14 2021-09-14 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023043111A1 true WO2023043111A1 (ko) 2023-03-23

Family

ID=85603150

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/013364 WO2023043111A1 (ko) 2021-09-14 2022-09-06 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20240307292A1 (ko)
EP (1) EP4403624A1 (ko)
KR (1) KR102558084B1 (ko)
CN (1) CN117813373A (ko)
WO (1) WO2023043111A1 (ko)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007093523A1 (de) * 2006-02-16 2007-08-23 Wacker Chemie Ag Verfahren zum anaeroben abbau von organosiliciumverbindungen durch bakterien der gattung parac0ccus
KR102102578B1 (ko) 2019-06-26 2020-04-21 코스맥스 주식회사 18β-글리시레틴산, D-판테놀 및 멘톨을 유효성분으로 포함하는 모근 강화용 화장료 조성물
KR20200053531A (ko) * 2017-09-08 2020-05-18 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. 박테리아 세포외 소포
KR20210025317A (ko) * 2019-08-27 2021-03-09 코스맥스 주식회사 스타필로코커스속 균주 및 그의 용도
CN112723558A (zh) * 2020-12-16 2021-04-30 青岛尚德生物技术有限公司 脱氮副球菌在用于制备降解垃圾渗滤液中氨态氮的微生物菌剂中的应用
KR20210122765A (ko) 2018-08-27 2021-10-12 (주)에이치앤씨 건설연구소 드론 및 스마트글라스를 이용한 시설물 점검 시스템

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007093523A1 (de) * 2006-02-16 2007-08-23 Wacker Chemie Ag Verfahren zum anaeroben abbau von organosiliciumverbindungen durch bakterien der gattung parac0ccus
KR20200053531A (ko) * 2017-09-08 2020-05-18 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. 박테리아 세포외 소포
KR20210122765A (ko) 2018-08-27 2021-10-12 (주)에이치앤씨 건설연구소 드론 및 스마트글라스를 이용한 시설물 점검 시스템
KR102102578B1 (ko) 2019-06-26 2020-04-21 코스맥스 주식회사 18β-글리시레틴산, D-판테놀 및 멘톨을 유효성분으로 포함하는 모근 강화용 화장료 조성물
KR20210025317A (ko) * 2019-08-27 2021-03-09 코스맥스 주식회사 스타필로코커스속 균주 및 그의 용도
CN112723558A (zh) * 2020-12-16 2021-04-30 青岛尚德生物技术有限公司 脱氮副球菌在用于制备降解垃圾渗滤液中氨态氮的微生物菌剂中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE NUCLEOTIDE ANONYMOUS : "Paracoccus denitrificans 16S ribosomal RNA gene, partial sequence", XP093049151, retrieved from NCBI *
GENES DEV., vol. 10, no. 2, 1996, pages 165 - 175
PAUS ET AL., J INVEST DERMATOL, vol. 113, 1999, pages 523 - 532
WEI LI ET AL., EXP CELL RES., vol. 318, no. 14, 15 August 2012 (2012-08-15), pages 1633 - 40
YU RUI, LIN QINGBIN, ZHAI YANFANG, MAO YUNYUN, LI KAI, GAO YUEMEI, LIU YANHONG, FU LING, FANG TING, ZHAO MENGSU, GUAN LEI, HOU LIH: "Recombinant human thymosin beta‐4 (rhTβ4) improved scalp condition and microbiome homeostasis in seborrheic dermatitis", MICROBIAL BIOTECHNOLOGY, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING LTD., GB, vol. 14, no. 5, 1 September 2021 (2021-09-01), GB , pages 2152 - 2163, XP093049152, ISSN: 1751-7915, DOI: 10.1111/1751-7915.13897 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230039435A (ko) 2023-03-21
EP4403624A1 (en) 2024-07-24
KR102558084B1 (ko) 2023-07-21
US20240307292A1 (en) 2024-09-19
CN117813373A (zh) 2024-04-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20180121268A (ko) 스트렙토코커스 써모필러스 균주 및 이의 배양액을 포함하는 조성물
WO2019143055A1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 콩의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
WO2021060659A1 (ko) 스타필로코커스 캐피티스 st-1 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102495405B1 (ko) 마이크로코커스 루테우스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102467931B1 (ko) 브레비바실러스 보스테렌시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102484422B1 (ko) 사막 선인장 추출물 및 락토바실러스 배양액을 포함하는 화장료 조성물
WO2023043111A1 (ko) 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
WO2021060652A1 (ko) 스타필로코커스 헤모리티쿠스 st-8 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
WO2021060648A1 (ko) 스타필로코커스 와르네리 st-12 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102480529B1 (ko) 큐티박테리움 그래뉼로섬 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495404B1 (ko) 브레분디모나스 베지큘라리스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480528B1 (ko) 스트렙토코커스 뉴모니아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495403B1 (ko) 데이노코커스 우루무치엔시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495400B1 (ko) 노보스핑고비움 후미 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480527B1 (ko) 코쿠리아 팔루스트리스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480526B1 (ko) 다이어트지아 신나메아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495401B1 (ko) 이멜라 루테아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495399B1 (ko) 골도니아 테레 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495402B1 (ko) 버크홀데리아 비에트나미엔시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
WO2019139307A1 (ko) 플록쿨린을 포함하는 피부 미용을 위한 조성물
WO2023038404A1 (ko) 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
WO2023018078A1 (ko) 마이크로코커스 안타르크티쿠스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
WO2023018077A1 (ko) 마이크로코커스 코니이 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
WO2023243924A1 (ko) 마이크로코커스 테리우스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR20200142376A (ko) 코코넛 추출물을 함유하는 피부 미백, 항주름, 또는 보습용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22870196

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202280054932.7

Country of ref document: CN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022870196

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022870196

Country of ref document: EP

Effective date: 20240415