WO2023038413A1 - 담팔수 추출물, 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물 - Google Patents

담팔수 추출물, 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물 Download PDF

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WO2023038413A1
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alkyl
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influenza virus
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alkoxy
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강세찬
서영진
김형건
정용준
박재현
김태우
이영근
전혜린
박대원
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주식회사 제넨셀
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing, treating, or improving influenza virus infection of an extract, fraction, or phenolic compound derived from Elaeocarpus sylvestris .
  • Influenza virus which belongs to orthomyxoviridae, shows clear systemic symptoms such as fever, muscle pain, and headache compared to the common cold, and the incubation period is about 1 to 3 days, causing 5 million severely ill patients worldwide every year.
  • These influenza viruses are classified into A, B, and C types and have the same overall structure and composition. They have a diameter of 80 to 120 nm and are filament-shaped in the early stage of infection, but become circular in the later stage.
  • Influenza virus, the viral envelope surrounding the central nucleus is largely composed of two types of glycoproteins, hemagglutinin (H) and neuraminidase (N), and the nucleus is composed of viral RNA (viral RNA). RNA) and viral proteins necessary to protect and activate it.
  • Types B and C have low susceptibility and low genetic diversity, so there are almost no subtypes, and they appear infrequently and do not become prevalent. Depending on the response, it is divided into several subtypes. There are 18 H serotypes and 11 N serotypes in nature, and mainly H1/2/3 and N1/2 cause influenza in humans, and various treatments and vaccines. It was developed and is still being developed.
  • Dampalsu ( Elaeocarpus sylvestris ) is a plant of the Dampalaceae family and is a deciduous broad-leaved arboreous tree mainly inhabiting Jeju Island in Korea, Japan, and Taiwan. The plant grows up to 20 m tall and has long oval or lanceolate leaves, 6-12 cm long and 1.5-3 cm wide.
  • the root of Dampalsu has been called Sanduyeong in oriental medicine since ancient times, and has been used to treat diseases such as fever, diarrhea, and cough.
  • dampalsu extract has therapeutic and inhibitory effects on coronavirus and varicella-zoster virus, but the preventive, ameliorative or therapeutic effect of influenza virus infection has not been known, and was identified for the first time by the present inventors.
  • the inventors of the present invention confirmed that the freshwater extract and phenolic compounds derived therefrom had excellent anti-influenza effects, and based on this, the present invention was completed.
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of influenza virus infection, comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 below and pharmaceutically acceptable salts thereof. will be.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof. is to do
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or ameliorating influenza virus infection, comprising a fresh water extract as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, comprising a fresh water extract as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • the present invention provides a method for preventing, treating, or improving influenza virus infection, comprising administering to a subject in need of a composition containing an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention comprises the step of administering a composition comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 or 2 and a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject in need thereof, influenza virus Methods for preventing, treating, or ameliorating infectious diseases are provided.
  • the present invention provides a use of a composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • the present invention provides a use of a composition comprising at least one selected from the group consisting of the compound represented by Formula 1 or 2 and pharmaceutically acceptable salts thereof to prevent, ameliorate, or treat influenza virus infection.
  • the present invention provides a use of a freshwater extract or a fraction thereof for preparing a drug for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • the present invention provides one or more uses selected from the group consisting of the compound represented by Formula 1 or 2 and pharmaceutically acceptable salts thereof for the preparation of a drug for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • the present invention provides a food composition for preventing or alleviating influenza virus infection, comprising a fresh water extract as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for preventing or ameliorating influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 and a food-acceptable salt thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by the following formula (2) and a food-acceptable salt thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, comprising an extract of dampalsu as an active ingredient.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, characterized in that it contains at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • the freshwater extract may be extracted with one or more solvents selected from the group consisting of water, C 1 to C 4 alcohol, ethyl acetate, chloroform, hexane, and mixed solvents thereof.
  • the fraction is from the group consisting of water, alcohol having 1 to 4 carbon atoms, a polar solvent, ethyl acetate, normal butanol ( n -Butanol), a non-polar solvent, and a mixed solvent thereof It may be extracted with one or more selected solvents.
  • the freshwater extract may be extracted using 30 to 70% ethanol.
  • influenza virus may be an influenza A type H1N1 virus.
  • the freshwater extract can inhibit the expression of at least one selected from the group consisting of influenza virus M1 and NP genes.
  • the compound may be at least one selected from the group consisting of compounds represented by Formulas 3 to 16 below.
  • the food composition may be a health functional food composition.
  • the quasi-drug may be at least one selected from the group consisting of disinfectant cleaner, shower foam, gargreen, wet tissue, detergent soap, hand wash, and ointment.
  • the extract of fresh water, a fraction thereof, or a phenolic compound derived therefrom has no side effects on the human body, is excellent in safety, and has excellent antiviral activity, so it is expected to be useful in the prevention or treatment of influenza A virus infectious diseases. do.
  • New uses for preventing, ameliorating or treating influenza of phenolic compounds derived from freshwater extracts, including the novel compounds of the present invention, have been found for new uses unknown to existing phenolic compounds.
  • the freshwater extract or the phenolic compound derived from it according to the present invention shows excellent influenza suppression ability as a result of molecular docking simulation with influenza virus, so it can be easily used as a composition for preventing, improving or treating influenza.
  • Figure 2 shows the process of separating 14 phenolic compounds derived from the fresh water extract.
  • Figure 3 shows the structural formula of the phenolic compound derived from the fresh water extract.
  • 4a to 4e show the results of an influenza suppression experiment through molecular docking simulation using a phenolic compound derived from a freshwater extract.
  • Figure 5 shows the results of testing the cytotoxicity of the freshwater extract according to the present invention in MDCK cell lines.
  • Figure 6 shows the test results of the cell lesion effect and cell viability in the IAV-infected MDCK cell line of the freshwater extract.
  • 7a shows the result of confirming the expression of influenza virus M1 and NP genes according to the treatment of the freshwater extract.
  • Figure 7b shows the expression level of viral NPs according to the treatment of the freshwater extract through anti-viral NP staining.
  • 7c shows the expression level of M1 protein according to the treatment of the freshwater extract.
  • Fig. 8 shows the morphological changes and cytotoxicity of compounds 2 and 3 derived from freshwater extract in MDCK cell line tested.
  • Fig. 9 shows the test results of cell lesion effects and cell viability of compounds 2 and 3 derived from freshwater extract in an IAV-infected MDCK cell line.
  • Fig. 10a shows the results of M1 and NP gene expression and IAV viral titer after treatment with compounds 2 and 3 derived from freshwater extract.
  • Figure 10b shows the expression level of viral NPs according to treatment with compounds 2 and 3 derived from freshwater extract through anti-viral NP staining.
  • 10c shows the expression levels of M1 and NS1 proteins according to the treatment with Compounds 2 and 3 derived from freshwater extract.
  • 11a and 11b show the experimental results of intranasal administration of freshwater extract and compounds 2 and 3 in an animal model infected with influenza virus.
  • 12a and 12b show experimental results of oral administration of freshwater extract in an animal model infected with influenza virus.
  • solvent-based fractionation was performed on the freshwater extract to obtain a residue of 261 g, and 14 phenolic compounds were isolated from the freshwater extract (see Examples 2 and 3).
  • influenza virus inhibitory effect was confirmed through the average binding energy value through the molecular docking simulation of the phenolic compound derived from the fresh water extract (see Example 4).
  • the survival rate increased to 80% in the freshwater extract and 100% in compounds 2 and 3, compared to the control group. It was confirmed that it did, and it was confirmed that the width of weight loss decreased (see Example 14).
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of influenza virus infection, comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the freshwater extract may be freshwater leaves, stems, branches, roots, or whole plant extracts including all of them . It doesn't work.
  • the freshwater can be directly collected, cultivated, or commercially available without limitation.
  • the freshwater extract may be mixed with E. sylvestris ethanolic extract (ESE).
  • ESE E. sylvestris ethanolic extract
  • extract refers to an extract obtained by the extraction treatment of fresh water, a diluted or concentrated liquid of the extract, a dried product obtained by drying the extract, a crude or purified product of the extract, or a mixture thereof. It includes extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract solution.
  • extract may include a crude extract, a polar solvent-soluble extract, or a non-polar solvent-soluble extract.
  • the freshwater extract may be in the form of a dried product, but is not limited thereto.
  • the method for extracting freshwater is not particularly limited, and can be extracted according to a method commonly used in the art.
  • a method using an extraction device such as supercritical extraction, subcritical extraction, high-temperature extraction, high-pressure extraction, or ultrasonic extraction, or a method using an adsorption resin including XAD and HP-20 may be used.
  • Non-limiting examples of the extraction method include a heating extraction method, a cold extraction method, a reflux cooling extraction method, a steam distillation method, an ultrasonic extraction method, an elution method, a compression method, and the like, which are performed alone or in combination of two or more methods. It can be.
  • the extract may be additionally subjected to a conventional fractionation process and may be purified according to a conventional purification method.
  • the extract included in the composition of the present invention may be prepared by pulverizing the primary extract extracted by the hot water extraction or solvent extraction method through an additional process such as distillation under reduced pressure and freeze drying or spray drying.
  • a purified fraction can be additionally obtained from the primary extract through various chromatography such as silica gel column chromatography, high performance liquid chromatography, and thin layer chromatography.
  • the extract may include all extracts, separated compounds, fractions and purified products obtained in each step of extraction, fractionation or purification, dilution, concentration, or drying thereof.
  • the type of extraction solvent used for extracting the fresh water is not particularly limited, and according to a conventional method known in the art for extracting an extract from a natural product, that is, under normal temperature and pressure conditions. It can be extracted using a phosphorus solvent.
  • the freshwater extract may be extracted with one or more solvents selected from the group consisting of water, C 1 to C 4 alcohol, ethyl acetate, chloroform, hexane, and mixed solvents thereof.
  • extraction may be performed using ethanol as a solvent, but is not limited thereto.
  • methanol or ethanol aqueous solution may be used, and the methanol or ethanol aqueous solution is 10 to 90% (v / v), 10 to 80% (v / v), 10 to 70% (v / v), 10 to 60% % (v/v), 20 to 90% (v/v), 20 to 80% (v/v), 20 to 70% (v/v), 20 to 60% (v/v), 30 to 90 % (v/v), 30 to 80% (v/v), 30 to 70% (v/v), 30 to 60% (v/v), 40 to 90% (v/v), 40 to 80 % (v/v), 40 to 70% (v/v), 40 to 60% (v/v), or 50% (v/v) methanol or ethanol, but is not limited thereto.
  • ethanol when fresh water is extracted using ethanol as a solvent, for example, 10% to 100% ethanol, 10% to 90% ethanol, 10% to 80% ethanol, 10% to 70% ethanol, 10% to 70% ethanol 60% ethanol, 10% to 50% ethanol, 20% to 90% ethanol, 20% to 80% ethanol, 20% to 70% ethanol, 20% to 60% ethanol, 20% to 50% ethanol, 30% to 90% % Ethanol, 30% to 80% Ethanol, 30% to 70% Ethanol, 30% to 60% Ethanol, 30% to 50% Ethanol, 40% to 90% Ethanol, 40% to 80% Ethanol, 40% to 70% Ethanol, 40% to 60% ethanol, 40% to 50% ethanol, 45% to 55% ethanol, or 50% ethanol may be used, but is not limited thereto.
  • the prepared extract may then be filtered or concentrated or dried to remove the solvent, and both filtration, concentration and drying may be performed.
  • filtration may use filter paper or a vacuum filter
  • concentration may use a vacuum vacuum concentrator or vacuum rotary evaporator
  • drying may be performed by vacuum drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, freeze drying, and the like.
  • vacuum drying vacuum drying, boiling drying, spray drying, freeze drying, and the like.
  • the number of extractions may be carried out one or more times, but as the extraction continues, the yield of the active ingredient significantly decreases, so it may not be economical to perform the extraction repeatedly five times or more. Accordingly, the number of extractions is preferably 1 to 5 times, and more preferably 2 to 5 repeated extractions, but is not limited thereto.
  • the freshwater extract may inhibit the expression of one or more selected from the group consisting of influenza virus M1 and NP genes, but is not limited thereto.
  • fraction means a result obtained by performing fractionation to separate a specific component or a specific component group from a mixture containing various components.
  • the fraction may be extracted with one or more solvents selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 4 carbon atoms, chloroform, ethyl acetate, normal butanol ( n -Butanol), and mixed solvents thereof, but is limited thereto It doesn't work.
  • solvents selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 4 carbon atoms, chloroform, ethyl acetate, normal butanol ( n -Butanol), and mixed solvents thereof, but is limited thereto It doesn't work.
  • it may be extracted with other polar or non-polar solvents.
  • a fractionation method for obtaining the fraction is not particularly limited, and may be performed according to a method commonly used in the art.
  • the fractionation method include a solvent fractionation method performed by treating various solvents, an ultrafiltration fractionation method performed by passing an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value, and various chromatography (size, charge, hydrophobicity). or prepared for separation according to affinity), and a combination thereof, according to an embodiment of the present invention, thin-layer chromatography, silica gel column chromatography Silica gel column chromatography Sephadex LH-20 column chromatography and ODS column chromatography may be used, but are not limited thereto.
  • any solvent known in the art may be used.
  • the fractionation solvent include polar solvents such as water and alcohol having 1 to 4 carbon atoms; Non-polar solvents such as ethyl acetate and normal butanol ( n -Butanol); or mixed solvents thereof. These may be used alone or in combination of one or more, but are not limited thereto. Specifically, water, methanol, butanol, hexane, ethyl acetate or a mixed solvent thereof may be used.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection, comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • the compound may be one or more selected from the group consisting of compounds represented by the following formulas 3 to 16, but is not limited thereto.
  • the method for obtaining the compound may be chemically synthesized by a method known in the field to which the present invention belongs, or a commercially available material may be used, and may be obtained by extraction and separation according to an embodiment of the present invention, Not limited to this.
  • At least one selected from the group consisting of compounds represented by Chemical Formulas 1 or 2 or compounds represented by Chemical Formulas 3 to 16 may be included as an active ingredient or standard substance in the fresh water extract or fraction, but is not limited thereto.
  • the extract or fraction may contain a high dose of the compound, but is not limited thereto.
  • the compound may be mixed with water, a polar solvent such as alcohol having 1 to 4 carbon atoms; Non-polar solvents such as ethyl acetate and normal butanol ( n -Butanol); Or it may be a compound obtained by fractionation with a mixed solvent thereof.
  • a polar solvent such as alcohol having 1 to 4 carbon atoms
  • Non-polar solvents such as ethyl acetate and normal butanol ( n -Butanol)
  • it may be a compound obtained by fractionation with a mixed solvent thereof.
  • an extract of freshwater freshwater was obtained by using 50% ethanol from dried freshwater freshwater leaves, and the extract was mixed with water, methanol, butanol, and hexane.
  • ethyl acetate, chloroform or a mixed solvent thereof to separate at least one selected from the group consisting of compounds represented by Formulas 3 to 16, but is not limited thereto.
  • the compound represented by Formula 1 may include at least one selected from the group consisting of compounds represented by Formula 3 and Formulas 6 to 16, but is not limited thereto.
  • the compound represented by Formula 2 may include one or more selected from the group consisting of compounds represented by Formulas 4 to 5, but is not limited thereto.
  • the compound represented by Chemical Formula 3 is kaempferol - 3- O - ⁇ -D-(2''-galloyl)-xylopyranoside, which is a flavonoid compound derived from fresh water extract. (2''-galloyl)-xylopyranoside), which is a novel compound not previously known, and its structure as well as its presence in freshwater was first identified by the present inventors. Also, it was named elaeocarposide A by the present inventors.
  • the compound represented by Formula 4 may be a tannin compound derived from a freshwater extract, [(1R,7R,8S,26R,28S,29R,38R)-1,13,14,15,18,19,20,34, 35,39,39-undecahydroxy-2,5,10,23,31-pentaoxo-6,9,24,27,30,40-hexaoxaoctacyclo[34.3.1.0 4,38 .0 7,26 .0 8,29 .0 11,16 .0 17,22 .0 32,37 ]tetraconta-3,11,13,15,17,19,21,32,34,36-decaen-28-yl] 3,4,5- It can have the IUPAC name of trihydroxybenzoate.
  • the compound represented by Chemical Formula 5 may be a tannin compound derived from a fresh water extract, [(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetrakis[(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxy It can have the IUPAC name of ]oxan-2-yl]methyl 3,4,5-trihydroxybenzoate.
  • the compound represented by Chemical Formula 6 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract and may have an IUPAC name of 3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one.
  • the compound represented by Formula 7 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 3-[(2S,3R,4R,5S)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-5 It may have the IUPAC name of ,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 8 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4, It can have the IUPAC name of 5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 9 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5S)-3,4,5- It can have the IUPAC name of trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 10 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, or may be kaempferol-3- O - ⁇ -D-xylopyranoside.
  • the compound represented by Chemical Formula 11 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5S)-3,4, It may have the IUPAC name of 5-trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 12 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3, It can have the IUPAC name of 4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 13 may be a flavonoid compound derived from an extract of dampalsu, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3, It can have the IUPAC name of 4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 14 may be a flavonoid compound derived from freshwater extract, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4, It can have the IUPAC name of 5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 15 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(3R,4S,5R)-3,4,5- It can have the IUPAC name of trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one.
  • the compound represented by Chemical Formula 16 may be a flavonoid compound derived from a fresh water extract, kaempferol-3- O - ⁇ -L- (2''-galloyl) -arabinopyranoside (kaempferol-3- O - ⁇ -L-(2''-galloyl)-arabinopyranoside).
  • influenza refers to an infectious disease caused by an orthomyxoviridae influenza virus among viruses that cause cold symptoms. Compared to the common cold, systemic symptoms such as fever, muscle pain, and headache appear distinctly, and the incubation period is about 1 to 3 days. Influenza is classified into A, B, and C types, and their overall structure and composition are the same. They have a diameter of 80 to 120 nm and are filament-shaped in the early stage of infection, but become circular in the later stage.
  • Influenza virus the viral envelope surrounding the central nucleus is largely composed of glycoproteins that can be distinguished into two types, hemagglutinin (H) and neuraminidase (N), and the nucleus is composed of viral RNA (viral RNA). RNA) and viral proteins necessary to protect and activate it. Types B and C have low susceptibility and low genetic diversity, so there are almost no subtypes, and they appear infrequently and do not become prevalent. It is again divided into several subtypes according to the reaction. In nature, there are 18 H serotypes and 11 N serotypes, and mainly H1/2/3 and N1/2 are the subtypes that cause influenza in humans. According to one embodiment of the present invention, the influenza virus may be an influenza A type H1N1 virus, but is not limited thereto.
  • molecular docking simulation predicts the binding suitability of a small molecule ligand to an appropriate target binding site based on the association between biologically relevant molecules such as proteins, peptides, nucleic acids, carbohydrates, and lipids, thereby improving structure-based drug design. A method that is used a lot.
  • influenza inhibitory activity was determined based on the ability to bind to influenza virus proteins.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may further include suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • the excipient may be, for example, one or more selected from the group consisting of a diluent, a binder, a disintegrant, a lubricant, an adsorbent, a moisturizer, a film-coating material, and a controlled release additive.
  • compositions according to the present invention are powders, granules, sustained-release granules, enteric granules, solutions, eye drops, elsilic agents, emulsions, suspensions, spirits, troches, perfumes, and limonadese, respectively, according to conventional methods.
  • tablets, sustained-release tablets, enteric tablets, sublingual tablets, hard capsules, soft capsules, sustained-release capsules, enteric capsules, pills, tinctures, soft extracts, dry extracts, fluid extracts, injections, capsules, perfusate It can be formulated and used in the form of external preparations such as warning agents, lotions, pasta agents, sprays, inhalants, patches, sterile injection solutions, or aerosols, and the external agents are creams, gels, patches, sprays, ointments, and warning agents.
  • lotion, liniment, pasta, or cataplasma may have formulations such as the like.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition according to the present invention include lactose, dextrose, sucrose, oligosaccharide, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • Additives for the liquid formulation according to the present invention include water, dilute hydrochloric acid, dilute sulfuric acid, sodium citrate, sucrose monostearate, polyoxyethylene sorbitol fatty acid esters (tween esters), polyoxyethylene monoalkyl ethers, lanolin ethers, Lanolin esters, acetic acid, hydrochloric acid, aqueous ammonia, ammonium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, prolamine, polyvinylpyrrolidone, ethyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, and the like may be used.
  • a solution of white sugar, other sugars, or a sweetener may be used, and aromatics, coloring agents, preservatives, stabilizers, suspending agents, emulsifiers, thickeners, etc. may be used as necessary.
  • Purified water may be used in the emulsion according to the present invention, and emulsifiers, preservatives, stabilizers, fragrances, etc. may be used as needed.
  • tragacantha methylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose sodium, microcrystalline cellulose, sodium alginate, hydroxypropylmethylcellulose, HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910, etc. and, if necessary, surfactants, preservatives, stabilizers, colorants, and fragrances may be used.
  • Injections according to the present invention include distilled water for injection, 0.9% sodium chloride injection, IV injection, dextrose injection, dextrose + sodium chloride injection, PEG, lactated IV injection, ethanol, propylene glycol, non-volatile oil-sesame oil , solvents such as cottonseed oil, peanut oil, soybean oil, corn oil, ethyl oleate, isopropyl myristate, and benzene benzoate; solubilizing agents such as sodium benzoate, sodium salicylate, sodium acetate, urea, urethane, monoethylacetamide, butazolidine, propylene glycol, twins, nijuntinamide, hexamine, and dimethylacetamide; buffers such as weak acids and their salts (acetic acid and sodium acetate), weak bases and their salts (ammonia and ammonium acetate), organic compounds, proteins, albumin, peptone, and gums; tonicity agents such as sodium chlor
  • the suppository according to the present invention includes cacao butter, lanolin, witapsol, polyethylene glycol, glycerogelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, a mixture of stearic acid and oleic acid, subanal, cottonseed oil, peanut oil, palm oil, cacao butter + Cholesterol, Lecithin, Lannet Wax, Glycerol Monostearate, Tween or Span, Imhausen, Monolen (Propylene Glycol Monostearate), Glycerin, Adeps Solidus, Buytyrum Tego-G -G), Cebes Pharma 16, Hexalide Base 95, Cotomar, Hydroxycote SP, S-70-XXA, S-70-XX75 (S-70-XX95), Hyde Hydrokote 25, Hydrokote 711, Idropostal, Massa estrarium (A, AS, B, C, D, E, I, T), Massa-MF, Masupol, Masupol-15, Neos
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations contain at least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose, etc. ) or by mixing lactose and gelatin.
  • excipients for example, starch, calcium carbonate, sucrose, etc.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions for oral administration, emulsions, syrups, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried formulations, and suppositories.
  • Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents.
  • composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type of patient's disease, severity, activity of the drug, It may be determined according to factors including sensitivity to the drug, administration time, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered single or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by a person skilled in the art to which the present invention belongs.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be envisaged, eg oral administration, subcutaneous injection, intraperitoneal administration, intravenous injection, intramuscular injection, paraspinal space (intrathecal) injection, sublingual administration, buccal administration, intrarectal insertion, vaginal It can be administered by intraoral insertion, ocular administration, otic administration, nasal administration, inhalation, spraying through the mouth or nose, dermal administration, transdermal administration, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is determined according to the type of drug as an active ingredient together with various related factors such as the disease to be treated, the route of administration, the age, sex, weight and severity of the disease of the patient.
  • the present invention provides a method for preventing, treating, or improving influenza virus infection, comprising administering to a subject in need of a composition containing an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention comprises the step of administering a composition comprising at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 or 2 and a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject in need thereof, influenza virus Methods for preventing, treating, or ameliorating infectious diseases are provided.
  • the present invention provides a use of a composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • the present invention provides a use of a composition comprising at least one selected from the group consisting of the compound represented by Formula 1 or 2 and pharmaceutically acceptable salts thereof to prevent, ameliorate, or treat influenza virus infection.
  • the present invention provides a use of a freshwater extract or a fraction thereof for preparing a drug for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • the present invention provides one or more uses selected from the group consisting of the compound represented by Formula 1 or 2 and pharmaceutically acceptable salts thereof for the preparation of a drug for preventing, ameliorating, or treating influenza virus infection.
  • subject means a subject in need of treatment of a disease, and more specifically, a human or non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse, cow, etc. of mammals.
  • administration means providing a given composition of the present invention to a subject by any suitable method.
  • prevention refers to any action that suppresses or delays the onset of a desired disease
  • treatment means that the desired disease and its resulting metabolic abnormality are improved or improved by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention. All actions that are advantageously altered are meant, and “improvement” means any action that reduces a parameter related to a target disease, for example, the severity of a symptom, by administration of the composition according to the present invention.
  • the present invention provides a food composition for preventing or ameliorating influenza virus infection, comprising an extract of fresh water as an active ingredient.
  • a food composition for preventing or improving influenza virus infection characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by the following formula (1) and a food-acceptable salt thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl,
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • a food composition for preventing or improving influenza virus infection characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by the following formula (2) and a food-acceptable salt thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • "food” means a natural product or processed product containing one or more nutrients, preferably means a state that can be eaten directly through a certain degree of processing process, and usually means As, it means to include all health functional foods, beverages, food additives and beverage additives.
  • the food composition may be a health functional food composition, but is not limited thereto.
  • the "functional food” is the same term as food for special health use (FoSHU), medicine processed to efficiently display bioregulatory functions in addition to nutritional supply, It means a food with high medical effect, and can be manufactured into tablets, capsules, pills, granules, powders, liquids, flakes, pastes, syrups, gels, jellies, bars, or film formulations.
  • “functionality” means obtaining useful effects for health purposes such as regulating nutrients for the structure and function of the human body or physiological functions.
  • the extract, fraction, or phenolic compounds derived from these extracts of the present invention are used as food additives, they can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be appropriately used according to conventional methods.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the freshwater extract of the present invention may be added in an amount of 15% by weight or less, or 10% by weight or less based on the raw material.
  • the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount greater than the above range.
  • Examples of foods to which the above substances can be added include meat, sausages, bread, chocolates, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice creams, various soups, beverages, tea, drinks, There are alcoholic beverages and vitamin complexes, and includes all health functional foods in a conventional sense.
  • the health beverage composition according to the present invention may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional components, like conventional beverages.
  • the aforementioned natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrins and cyclodextrins, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol.
  • natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract, or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame may be used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01-0.20 g, or about 0.04-0.10 g per 100 mL of the composition of the present invention.
  • the composition of the present invention contains various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, A carbonation agent used in carbonated beverages and the like may be contained.
  • the composition of the present invention may contain fruit flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverages and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination. The ratio of these additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.01-0.20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, comprising an extract of dampalsu as an active ingredient.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • R 1 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 16 alkyl, C 1 -C 15 alkoxy, C 3 -C 16 cyclic alkyl, C 2 -C 15 heterocyclic alkyl, ego;
  • R 2 is a hydroxyl group
  • R 1 is a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 10 heterocyclic alkyl, am.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or inhibiting influenza virus infection, characterized in that it contains at least one selected from the group consisting of a compound represented by Formula 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • n is an integer from 0 to 3;
  • R 3 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • R 4 is hydrogen, a hydroxy group, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 9 alkoxy, C 3 -C 10 cyclic alkyl, C 2 -C 9 heterocyclic alkyl, or
  • adjacent substituents among R 3 to R 4 may be linked to form a ring
  • R 3a is an oxygen or hydroxyl group
  • R 3b and R 4a may be connected to form a ring
  • the R 3c and R 4b may be connected to form a ring.
  • the quasi-drug is a preparation used for sterilization, insecticide, and similar purposes for the prevention of infectious diseases described in Article 2, Item 7, Item C of the Pharmaceutical Affairs Act, and is used for human or animal It may refer to repellents, repellents, preventives, pesticides, or attracting insecticides such as flies and mosquitoes used for the health of people.
  • the quasi-drugs may include external skin preparations and personal hygiene products.
  • it may be a disinfectant cleaner, shower foam, gargreen, wet tissue, detergent soap, hand wash, or ointment, but is not limited thereto.
  • the quasi-drug composition according to the present invention When used as a quasi-drug additive, the composition may be added as it is or used together with other quasi-drugs or quasi-drug ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use.
  • the quasi-drug composition of the present invention may be prepared in the form of, for example, a general emulsified formulation and a solubilized formulation.
  • a general emulsified formulation for example, it may have formulations such as emulsions, creams, ointments, sprays, oil gels, gels, oils, aerosols, and smokers such as lotions, but it may be used without limitation as long as it exhibits the pest control inducing effect of the present invention. .
  • the quasi-drug composition is appropriately mixed as necessary with oil, water, surfactant, moisturizer, lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, thickener, chelating agent, colorant, preservative or flavoring agent, which are generally formulated in quasi-drug compositions, in each dosage form and can be used.
  • the EtOAc fraction was eluted with CHCl 3 -MeOH (40:1 ⁇ 30:1 ⁇ 10:1 ⁇ 5:1, 16.2 L each) using SiO 2 cc (SiO 2 Column chromatography, ⁇ 14 ⁇ 19 cm) , and 19 fractions (ESE-1 to ESE-19) were obtained.
  • the ESE-12 fraction [7.7 g, eluent/total volume (Ve/Vt) 0.491-0.591] was mixed with acetone-water (2:1, 6.6 L) using ODS c.c. ( ⁇ 5 ⁇ 10 cm). ), and 12 fractions (ESE-12-1 to ESE-12-12) were obtained.
  • the ESE-12-2 fraction [6.7 g, Ve/Vt 0.491-0.591] was eluted with acetone-water (1:1, 2.0 L) using ODS c.c. ( ⁇ 5.5 ⁇ 10 cm) , 8 fractions (ESE-12-2-1 to ESE-12-2-8) were obtained.
  • the ESE-12-2-5 fraction [178.0 mg, Ve/Vt 0.090-0.170] was eluted with 1.0 L of MeOH using Sephadex LH-20 cc ( ⁇ 1.5 ⁇ 55 cm), and 10 Fractions (ESE-12-2-5-1 to ESE-12-2-5-10) were obtained. Then, compound 4 [34.7 mg, Ve/Vt 0.460-0.550, TLC (Kieselgel 60 F 254 ) Rf 0.62, CHCl 3 -MeOH (7: 1) in the ESE-12-2-5-8 fraction among the 10 fractions , TLC (RP-18F 254S ) Rf 0.46, MeOH-water (3:1)] were separated.
  • the ESE-17 fraction [9.7 g, Ve/Vt 0.799-0.884] was eluted with MeOH-water (1:1, 1 L) using ODS c.c. ( ⁇ 5 ⁇ 11 cm) , three fractions (ESE-17-1 to ESE-17-3) were obtained.
  • the ESE-17-2 fraction [5.9 g, Ve/Vt 0.050-0.560] was mixed with CHCl 3 -MeOH -water (15:3:1 ⁇ 10:3:1, 2.85 L each), and 14 fractions (ESE-17-2-1 to ESE-17-2-14) were obtained.
  • the ESE-17-2-4 fraction [178.0 mg, Ve/Vt 0.133-0.167] was eluted with 1.0 L of MeOH using Sephadex LH-20 cc ( ⁇ 1 ⁇ 55 cm), and 5 Fractions (ESE-17-2-4-1 to ESE-17-2-4-5) were obtained. Then, compound 5 [4.3 mg, Ve / Vt 0.320-0.360, TLC (Kieselgel 60 F 254 ) Rf 0.45, CHCl 3 -MeOH-water (10: 3:1), TLC (RP-18F 254S ) Rf 0.45, MeOH-water (3:2)] were separated.
  • the ESE-17-2-8 fraction [269.0 mg, Ve/Vt 0.303-0.330] was eluted with 1.3 L of MeOH using Sephadex LH-20 cc ( ⁇ 1.5 ⁇ 55 cm) , 8 fractions (ESE-17-2-8-1 to ESE-17-2-8-8) were obtained. Thereafter, the ESE-17-2-8-4 fraction [41.9 mg, Ve/Vt 0.354-0.385] among the 8 fractions was purified using Preparative HPLC (Waters 600S).
  • the ESE-17-2-10 fraction [876.6 mg, Ve/Vt 0.453-0.633] was mixed with MeOH-water (2:3, 110 mL), and 7 fractions (ESE-17-2-10-1 to ESE-17-2-10-7) were obtained. Thereafter, the ESE-17-2-10-6 fraction [58.1 mg, Ve/Vt 0.265-0.345] among the 7 fractions was purified using Preparative HPLC (Waters 600S).
  • a Cosmosil 5C18 column (Waters, 5 ⁇ m, 250 ⁇ 10 mm) was used as a column, and elution was performed under isocratic (0.1% formic acid in DW 70%, acetonitrile 30%) conditions under 254 nm conditions. At this time, the dissolution rate was 4.0 ⁇ L/min.
  • the ESE-17-2-13 fraction [320.0 mg, Ve/Vt 0.453-0.633] was mixed with MeOH-water (2:3 ⁇ 1) using ODS cc ( ⁇ 2.5 ⁇ 6 cm). :1, 110 mL), and 15 fractions (ESE-17-2-13-1 to ESE-17-2-13-15) were obtained. Then, compound 2 [43.7 mg, Ve / Vt 0.100-0.153, TLC (Kieselgel 60 F 254 ) Rf 0.49, CHCl 3 -MeOH-water (65: 35:10), TLC (RP-18F 254S ) Rf 0.65, MeOH-water (1:1)] were separated.
  • the ESE-18 fraction [31.0 g, Ve/Vt 0.814-0.910] was mixed with CHCl 3 -MeOH-water (13:3:1 ⁇ 10:3:1, 2.2 L each), and 11 fractions (ESE-18-1 to ESE-18-11) were obtained.
  • the ESE-18-8 fraction [1.7 g, Ve/Vt 0.617-0.763] was mixed with EtOAc-BuOH-water (50:3:1 ⁇ 23 cm) using SiO 2 cc ( ⁇ 4 ⁇ 18 cm). :3:1 ⁇ 13:3:1, 1.5 L each), and 11 fractions (ESE-18-8-1 to ESE-18-8-11) were obtained.
  • the ESE-18-8-2 fraction [172.4 mg, Ve/Vt 0.090-0.153] was eluted with 710 mL of MeOH using Sephadex LH-20 cc ( ⁇ 1.5 ⁇ 55 cm) , 6 fractions (ESE-18-8-2-1 to ESE-18-8-2-6) were obtained. Thereafter, the ESE-18-8-2-5 fraction [91.2 mg, Ve/Vt 0.479-0.634] among the six fractions was purified using Preparative HPLC (Waters 600S).
  • a Cosmosil 5C18 column (Waters, 5 ⁇ m, 250 ⁇ 10 mm) was used as a column, and elution was performed under isocratic (0.1% formic acid in DW 70%, acetonitrile 30%) conditions under 254 nm conditions. At this time, the dissolution rate was 4.0 ⁇ L/min.
  • the ESE-18-8-5 fraction [297.3 mg, Ve/Vt 0.270-0.300] was mixed with MeOH-water (2:3, 1.5 L), and 10 fractions (ESE-18-8-5-1 to ESE-18-8-5-10) were obtained.
  • compound 3 [23.2 mg, Ve / Vt 0.080-0.130, TLC (Kieselgel 60 F 254 ) Rf 0.43, EtOAc-BuOH-water (23:3) in the ESE-18-8-5-2 fraction among the 10 fractions :1), TLC (RP-18F 254S ) Rf 0.79, MeOH-water (3:2)] were separated.
  • the ESE-18-8-5-5 fraction [100.9 mg, Ve/Vt 0.700-0.860] among the 10 fractions was purified using Preparative HPLC (Waters 600S). At this time, a Cosmosil 5C18 column (Waters, 5 ⁇ m, 250 ⁇ 10 mm) was used as a column, and elution was performed under isocratic (0.1% formic acid in DW 70%, acetonitrile 30%) conditions under 254 nm conditions. At this time, the dissolution rate was 4.0 ⁇ L/min.
  • influenza A/H1N1 The phenolic compound continuously binds to the subunit viral RdRp (PA, PB1, PB2) that affects replication and transcription in the virus. Therefore, in this study, blind docking was performed for the subunit viral RdRp (PA, PB1, PB2). In particular, in the case of PB2, molecular docking simulation was performed for the C-terminal domain, Middle domain and Cap binding domain.
  • Influenza virus also has a Receptor binding domain (RBD) like the spike protein of coronavirus (SARS-CoV-2). RBD; and A pocket, which plays a major role in the process of fusion of cell membranes after RBD enters the cell and before exporting its RNA into the cell.
  • RBD Receptor binding domain
  • the MDCK cell line used in the experiment was cultured at 37 °C and 5% CO 2 in MEM (Minimum essential) containing 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone Thermo Scientific) and 1% penicillin/streptomycin (P/S, Gibco). medium, Gibco) medium.
  • MEM Minimum essential
  • FBS fetal bovine serum
  • P/S penicillin/streptomycin
  • MDCK cells were seeded in a 96 well-plate at a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells/well.
  • Cytopathic effect (CPE) and cell viability of freshwater extract after culturing for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C and treating with freshwater extract at different concentrations (2.5, 5, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours was measured. The results are shown in FIG. 5 .
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 24 well-plate at a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells/well. After culturing for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C, removing the cell medium, and treating influenza A virus (IAV/California/2007/H1N1) at 0.1 MOI for 1 hour, freshwater extracts were prepared at different concentrations (2.5, 5, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, the cells were washed three times with PBS, and then fixed with 4% formaldehyde for 10 minutes. Thereafter, the cells were stained with 1% crystal violet to measure the cytopathic effect (CPE) of the cells. The results are shown in FIG. 6 .
  • CPE cytopathic effect
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 6 well-plate at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well. Incubated for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C, the cell medium was removed, and influenza A virus (IAV/California/2007/H1N1) was treated at 0.1 MOI for 1 hour. 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, RNA was extracted from the cells using RANiso Plus (Takara).
  • influenza A virus IAV/California/2007/H1N1
  • MDCK cells were treated with 0.1 MOI of IAV for 1 hour, followed by treatment with freshwater extract for 24 hours. Then, after fixing the cells, they were stained with DAPI and mouse monoclonal anti-viral NP, and the IAV inhibitory effect of the freshwater extract was measured by confocal microscopy. The results are shown in Figure 7b.
  • both M1 and NP gene expressions were suppressed when the freshwater extract was treated, and as a result of staining with anti-viral NP, the expression level of viral NP was suppressed in the freshwater extract. This means that the dampalsu extract exhibits very good antiviral efficacy.
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 6 well-plate at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well. After culturing for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C, removing the cell medium, and treating influenza A virus (INV/California/2007/H1N1) for 1 hour at an MOI of 0.1, freshwater extracts were prepared at different concentrations (0.4, 2, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, proteins were extracted with a protein extraction solution (Elpisbio), electrophoresed on an SDS-polyacrylamide gel, and transferred to a nicrocellulose membrane.
  • influenza A virus INV/California/2007/H1N1
  • freshwater extracts were prepared at different concentrations (0.4, 2, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, proteins were extracted with a protein extraction solution (Elpisbio), electrophoresed on an SDS-polyacrylamide gel, and transferred to a n
  • the transcribed membrane was blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour, reacted with primary antibodies at 4°C for 16 hours, and then washed with TBST buffer 5 times or more.
  • the membrane was reacted with the secondary antibody for 1 hour at room temperature, and then washed five or more times with TBST buffer.
  • the ECL solution was reacted and the protein expression level was measured using a ChemidocTM image analyzer and then quantified. The results are shown in Figure 7c.
  • MDCK cells were seeded in a 96 well-plate at a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells/well.
  • Cell lesion effect cytopathic effect, CPE
  • cell viability was measured.
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 24 well-plate at a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells/well. After culturing for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C, removing the cell medium, and treating influenza A virus (IAV/California/2007/H1N1) at 0.1 MOI for 1 hour, compounds 2 and 3 were added at each concentration (2.5 , 5, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, the cells were washed three times with PBS, and then fixed with 4% formaldehyde for 10 minutes. Thereafter, the cells were stained with 1% crystal violet to measure the cytopathic effect (CPE) of the cells. The results are shown in FIG. 9 .
  • CPE cytopathic effect
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 6 well-plate at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well. After culturing for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C and removing the cell medium, influenza A virus (IAV/California/2007/H1N1) was treated for 1 hour at an MOI of 0.1, and compounds 2 and 3 were added at each concentration (2.5 , 5, 10 ⁇ g/mL) for 24 hours. After 24 hours, RNA was extracted from the cells using RANiso Plus (Takara).
  • influenza A virus IAV/California/2007/H1N1
  • RNA was quantified through Nanodrop, synthesized into cDNA using a cDNA synthesis kit (RevertraAce qPCR RT kit, Toyobo), and real-time PCR was performed using a CFX Connect real-time system (Bio-rad). Primer reaction conditions were prewarmed at 95 °C for 10 minutes, followed by a total of 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minute. Then, expression of M1 and nucleoprotein (NP) genes, which form the structure of influenza virus, and IAV viral titer were confirmed. The results are shown in Figure 10a.
  • MDCK cells were treated with 0.1 MOI of IAV for 1 hour, followed by treatment with freshwater extract for 24 hours. Then, after fixing the cells, staining with DAPI and mouse monoclonal anti-viral NP (mouse monoclonal anti-viral NP) IAV inhibitory efficacy of compounds 2 and 3 derived from freshwater extract was measured by confocal microscopy did The results are shown in Figure 10b.
  • MDCK cells cultured in MEM medium were seeded in a 6 well-plate at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well. Incubated for 24 hours in a CO 2 incubator at 37 °C, the cell medium was removed, and influenza A virus (INV/California/2007/H1N1) was treated for 1 hour at an MOI of 0.1, followed by compound 2 (2.5, 5, 10 ⁇ g/ mL) and compound 3 (0.4, 2, 10 ⁇ g/mL) at each concentration for 24 hours. After 24 hours, proteins were extracted with a protein extraction solution, electrophoresed on an SDS-polyacrylamide gel, and transferred to a nicrocellulose membrane.
  • influenza A virus IMV/California/2007/H1N1
  • the transcribed membrane was blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour, reacted with the primary antibody at 4°C for 16 hours, and then washed with TBS-T buffer 5 times or more.
  • the membrane was reacted with the secondary antibody for 1 hour at room temperature, and then washed five or more times with TBS-T buffer.
  • the ECL solution was reacted and the protein expression level was measured using a ChemidocTM image analyzer and then quantified. The results are shown in Figure 10c.
  • mice 6-week-old C57BL/6 male mice were intranasally infected with 1 ⁇ 10 3 PFU of IAV, and 10 minutes, 3 hours, and 6 hours after infection, the mice were injected with freshwater extract and compounds 2 and 3. After intranasal administration, mouse body weight and mortality were observed for 14 days. The results are shown in Figures 11a and 11b.
  • the control group showed a survival rate of 20% on the 10th day of IAV infection, whereas the group administered with freshwater extract showed a survival rate of 80%, and the groups administered with compounds 2 and 3 showed a survival rate of 100%, indicating that the survival rate was greatly increased.
  • the control group showed a decrease in body weight after infection, whereas when the freshwater extract and compounds 2 and 3 were intranasally administered, the width of the body weight loss decreased compared to the control group. weight was recovered after the 8th day of infection. Therefore, it was confirmed that when intranasal administration of the freshwater extract and compounds 2 and 3 was effective in alleviating the symptoms of influenza virus infection.
  • mice were anesthetized and infected with IAV at 1 ⁇ 10 3 pfu through the nasal cavity. Then, the extract of dampalsu (0.5 mg/kg) was orally administered from 3 days before IAV infection to 5 days after infection for a total of 8 days, and on the 5th day after infection, the mice were sacrificed and viral RNA was extracted from the lungs. The body weight of the mouse was observed for 8 days, and the expression level of M1, which forms an influenza virus structure in the mouse lung, was confirmed. The results are shown in Figures 12a and 12b.
  • the extract of fresh water, a fraction thereof, or a phenolic compound derived therefrom has no side effects on the human body, is excellent in safety, has excellent antiviral activity, and has an excellent ability to suppress influenza, so it is useful for preventing or treating influenza virus infectious diseases. expected to be used.

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Abstract

본 발명의 목적은 담팔수 추출물(Elaeocarpus sylvestris), 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

Description

담팔수 추출물, 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물
본 발명은 담팔수(Elaeocarpus sylvestris) 추출물, 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
본 출원은 2021년 09월 08일에 출원된 한국특허출원 제10-2021-0119644호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
오소믹소바이러스과에 속하는 인플루엔자(influenza) 바이러스는 일반 감기에 비해 발열, 근육통, 두통 등의 전신적인 증상이 뚜렷하게 나타나며 잠복기는 1~3일 정도로 세계적으로 매년 500만명의 중증 환자를 발병시킨다. 이러한 인플루엔자는 A, B, C형으로 구분되며 이들의 전체적 구조 및 조성이 동일하며, 직경 80~120 nm의 크기로 감염 초기에는 필라멘트 모양이지만, 후기에는 원형이 된다. 인플루엔자 바이러스는 중앙의 핵을 둘러싸고 있는 바이러스성 외피는 크게 헤마글루티닌(H)과 뉴라미니다아제(N) 두 종류로 구별할 수 있는 당단백질로 구성되어 있으며, 핵은 바이러스성 RNA(viral RNA)와 이를 보호하고 활성화하는데 필요한 바이러스성 단백질(viral protein)를 포함한다. B형과 C형의 경우 감수성이 낮고 유전학적 다양성이 떨어져 아형이 거의 존재하지 않으며, 적은 빈도로 출현하여 유행이 잘 일어나지 않는 반면, A형은 헤마글루티닌과 뉴라미니다제에 대한 항체의 반응 여부에 따라 다시 여러 개의 아형으로 나눠지며, 자연계에는 H혈청형이 18개, N혈청형이 11개 존재하며 주로 H1/2/3 및 N1/2가 인간에게 독감을 일으키고, 다양한 치료제 및 백신이 개발되었으며, 현재도 개발되고 있는 실정이다.
반면, 담팔수(Elaeocarpus sylvestris)는 담팔수과 식물로 주로 한국의 제주도, 일본, 대만 등지에 서식하는 낙엽활엽교목이다. 해당 식물은 20 m까지 자라며, 잎은 긴타원형 혹은 피침형의 형태로 길이 6-12 cm, 폭 1.5-3 cm의 크기를 가진다. 담팔수의 뿌리는 한방에서 예로부터 산두영으로 불려, 해열, 설사, 기침 등의 질환 치료 용도로 사용되어져 왔다.
한편, 담팔수 추출물의 코로나바이러스, 수두-대상포진 바이러스 치료 및 억제 효과가 있음은 공지된 바 있으나, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선 또는 치료 효과에 대해서는 공지된 바 없으며, 본 발명자들에 의해 최초로 규명되었다.
본 발명자들은 인플루엔자(Influenza A) 감염증의 치료를 위해서 연구한 결과 담팔수 추출물 및 이의 유래 페놀화합물에 뛰어난 항인플루엔자 효능이 있는 것을 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에 본 발명의 목적은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000001
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000002
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000003
이다.
본 발명의 또 다른 목적은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000004
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000005
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000006
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000007
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000008
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000009
이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000010
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000011
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000012
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료, 또는 개선 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료, 또는 개선 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 담팔수 추출물 또는 이의 분획물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000013
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000014
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000015
이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000016
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000017
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000018
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000019
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000020
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000021
이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000022
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000023
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000024
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 담팔수 추출물은 물, C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 분획물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 극성 용매, 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 노말 부탄올(n-Butanol), 비극성 용매, 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 담팔수 추출물은 30 내지 70 % 에탄올을 사용하여 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A형 H1N1 바이러스일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 담팔수 추출물은 인플루엔자 바이러스의 M1, 및 NP 유전자로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 화합물은 하기 화학식 3 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루지는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000025
[화학식 4]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000026
[화학식 5]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000027
[화학식 6]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000028
[화학식 7]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000029
[화학식 8]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000030
[화학식 9]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000031
[화학식 10]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000032
[화학식 11]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000033
[화학식 12]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000034
[화학식 13]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000035
[화학식 14]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000036
[화학식 15]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000037
[화학식 16]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000038
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 식품 조성물은 건강기능성 식품조성물일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 의약외품은 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시 및 연고제로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른, 담팔수 추출물, 이의 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물은 인체에 부작용이 없어 안전성이 우수하며, 항바이러스 활성이 뛰어나므로 A형 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료에 있어서 유용하게 활용될 것으로 기대된다. 본 발명의 신규 화합물을 포함한 담팔수 추출물 유래 페놀화합물들의 신규한 인플루엔자 예방, 개선 또는 치료 용도는 기존 페놀화합물에 대해서 알려지지 않았던 새로운 용도를 밝혀낸 것이다. 또한, 본 발명에 따른 담팔수 추출물 또는 이의 유래 페놀화합물은 인플루엔자 바이러스와 분자 도킹 시뮬레이션 결과 우수한 인플루엔자 억제능을 보이는 것인 바, 인플루엔자 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 용이하게 사용될 수 있을 것이다.
도 1은 담팔수 추출물의 용매 계통분획 과정을 나타낸 것이다.
도 2는 담팔수 추출물 유래 14종의 페놀 화합물을 분리한 과정을 나타낸 것이다.
도 3은 담팔수 추출물 유래 페놀화합물에 대한 구조식을 나타낸 것이다.
도 4a 내지 4e는 담팔수 추출물 유래 페놀화합물을 이용하여 분자도킹 시뮬레이션을 통한 인플루엔자 억제 실험의 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 담팔수 추출물의 MDCK 세포주에서 세포독성을 시험하여 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 담팔수 추출물의 IAV 감염된 MDCK 세포주에서 세포의 병변 효과, 세포생존율의 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 7a는 담팔수 추출물 처리에 따른 인플루엔자 바이러스 M1 및 NP 유전자 발현을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 7b는 anti-viral NP의 염색을 통해 담팔수 추출물 처리에 따른 viral NP의 발현 수준을 나타낸 것이다.
도 7c는 담팔수 추출물의 처리에 따른 M1 단백질의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 8은 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 MDCK 세포주에서 세포의 형태학적 변화 및 세포독성을 시험하여 나타낸 것이다.
도 9는 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 IAV 감염된 MDCK 세포주에서 세포의 병변 효과 및 세포생존율의 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 10a는 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 처리에 따른 M1 및 NP 유전자 발현과 IAV viral titer를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 10b는 anti-viral NP의 염색을 통해 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 처리에 따른 viral NP의 발현 수준을 나타낸 것이다.
도 10c는 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 처리에 따른 M1 및 NS1 단백질의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 11a 및 도 11b는 인플루엔자 바이러스 감염 동물모델에서 담팔수 추출물, 화합물 2 및 3의 비강투여 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 12a 및 도 12b는 인플루엔자 바이러스 감염 동물모델에서 담팔수 추출물 경구투여 실험 결과를 나타낸 것이다.
본 발명의 일 실시예에서는, 담팔수 추출물에 대해 용매 계통 분획을 수행하여, 261 g의 잔류물을 얻었고, 담팔수 추출물로부터 14종의 페놀화합물을 분리 하였다(실시예 2 및 3 참조).
본 발명의 다른 실시예에서는, 담팔수 추출물 유래 페놀화합물의 분자도킹 시뮬레이션을 통해서 인플루엔자 바이러스 억제 효과를 평균 결합 에너지 값을 통하여 확인하였다(실시예 4 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 담팔수 추출물을 MDCK 세포에 처리하였을 때, 세포독성이 없음을 확인하였다(실시예 6 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 MDCK 세포에 담팔수 추출물을 처리하였을 때 CPE가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였고, 세포생존율이 증가하는 것도 확인하였다(실시예 7 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 MDCK 세포에 담팔수 추출물을 처리하였을 때 MI 유전자, NP 유전자 및 viral M1 단백질의 발현이 억제되는 것을 확인하였고, viral NP의 발현량이 억제되어 담팔수 추출물이 매우 우수한 항바이러스 효과를 나타냄을 확인하였다(실시예 8 및 9 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 2 및 3을 MDCK 세포에 처리하였을 때, 세포의 형태학적 변화 및 세포독성이 없음을 확인하였다(실시예 10 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 MDCK 세포에 화합물 2 및 3을 처리하였을 때, CPE가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였고, 세포생존율이 증가하는 것도 확인하였다(실시예 11 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 MDCK 세포에 화합물 2 및 3을 처리하였을 때, M1 및 NP mRNA 발현, M1 및 NS1의 단백질 발현이 억제되고, IAV viral titer 및 viral NP 가 모두 감소한 것을 확인하였다(실시예 12 및 13 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 마우스에 담팔수 추출물, 화합물 2 및 3을 비강 내로 투여한 결과, 생존율이 담팔수 추출물에서는 80 %, 화합물 2 및 3에서는 100 %로 대조군에 비해 생존율이 증가하였음을 확인하였고, 체중 감소의 폭이 감소함을 확인하였다(실시예 14 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, IAV에 감염된 마우스에 담팔수 추출물을 경구투여한 결과, 담팔수 추출물 경구투여군에서는 대조군에 비해서 체중 감소가 억제되는 것을 확인하였고, 인플루엔자 바이러스 구조를 형성하는 M1의 발현이 억제되는 것을 확인하였다(실시예 14 참조).
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.
본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 담팔수 추출물은 담팔수 잎, 줄기, 가지, 뿌리, 또는 이를 모두 포함한 식물 전체 추출물일 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 담팔수(Elaeocarpus sylvestris) 잎 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 담팔수는 직접 채취, 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 담팔수 추출물은 ESE(E. sylvestris ethanolic extract)와 혼용될 수 있다.
본 발명에 있어서, “추출물”은 상기 담팔수의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 또한, “추출물”에는 조 추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성 용매 가용 추출물 등이 포함될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 담팔수 추출물은 건조물 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 담팔수를 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 예를 들어, 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압 추출 또는 초음파추출법 등의 추출 장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등을 이용할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 가열추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. 또한 목적에 따라서 추출물은 추가적으로 통상의 분획 공정을 수행할 수 있으며, 통상의 정제 방법에 따라 정제될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기의 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가 과정을 통해 분말화하여 제조할 수 있다. 또 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography) 등의 다양한 크로마토그래피를 통해 추가적으로 정제 분획을 얻을 수 있다. 따라서 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분리 화합물, 분획 및 정제물, 이들의 희석, 농축, 건조물 등이 포함될 수 있다.
본 발명에서 상기 담팔수를 추출하는 데에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에 있어서 상기 담팔수 추출물은 물, C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 에탄올을 용매로 사용하여 추출할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 메탄올 또는 에탄올 수용액이 사용될 수 있으며, 상기 메탄올 또는 에탄올 수용액은 10 내지 90 %(v/v), 10 내지 80 %(v/v), 10 내지 70 %(v/v), 10 내지 60 %(v/v), 20 내지 90 %(v/v), 20 내지 80 %(v/v), 20 내지 70 %(v/v), 20 내지 60 %(v/v), 30 내지 90 %(v/v), 30 내지 80 %(v/v), 30 내지 70 %(v/v), 30 내지 60 %(v/v), 40 내지 90 %(v/v), 40 내지 80 %(v/v), 40 내지 70 %(v/v), 40 내지 60 %(v/v), 또는 50 %(v/v) 메탄올 또는 에탄올일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 에탄올을 용매로 사용하여 담팔수를 추출할 경우, 예컨대 10 % 내지 100 % 에탄올, 10 % 내지 90 % 에탄올, 10 % 내지 80 % 에탄올, 10 % 내지 70 % 에탄올, 10 % 내지 60 % 에탄올, 10 % 내지 50 % 에탄올, 20 % 내지 90 % 에탄올, 20 % 내지 80 % 에탄올, 20 % 내지 70 % 에탄올, 20 % 내지 60 % 에탄올, 20 % 내지 50 % 에탄올, 30 % 내지 90 % 에탄올, 30 % 내지 80 % 에탄올, 30 % 내지 70 % 에탄올, 30 % 내지 60 % 에탄올, 30 % 내지 50 % 에탄올, 40 % 내지 90 % 에탄올, 40 % 내지 80 % 에탄올, 40 % 내지 70 % 에탄올, 40 % 내지 60 % 에탄올, 40 % 내지 50 % 에탄올, 45 % 내지 55 % 에탄올, 또는 50 % 에탄올을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있고, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조, 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
추출 횟수는 1회 이상 실시할 수 있으나, 추출이 계속될수록 활성 성분은 수득량이 현저히 감소되므로 5회 이상 반복 실시하는 것은 경제적이지 않을 수 있다. 이에, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 2 내지 5회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 담팔수 추출물은 인플루엔자 바이러스의 M1, 및 NP 유전자로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 발현을 억제시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, “분획물”은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
상기 분획물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 클로로포름, 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 노말 부탄올(n-Butanol), 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 이외의 극성 또는 비극성 용매로 추출될 수 있다.
상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 다양한 용매를 처리하여 수행하는 용매 분획법, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법, 및 이들의 조합을 포함할 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 박층 크로마토그래피(thin-layer chromatography), 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography) Sephadex LH-20 컬럼 크로마토그래피, ODS 컬럼 크로마토그래피를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 분획물을 얻는데 사용되는 분획 용매의 종류는 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 등의 극성 용매; 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 노말 부탄올(n-Butanol) 등의 비극성 용매; 또는 이들의 혼합용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 물, 메탄올, 부탄올, 헥산, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합용매가 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000039
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000040
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000041
이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000042
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000043
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000044
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 화합물은 하기 화학식 3 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루지는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000045
[화학식 4]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000046
[화학식 5]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000047
[화학식 6]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000048
[화학식 7]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000049
[화학식 8]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000050
[화학식 9]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000051
[화학식 10]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000052
[화학식 11]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000053
[화학식 12]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000054
[화학식 13]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000055
[화학식 14]
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[화학식 15]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000057
[화학식 16]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000058
또한, 본 발명은 상기 화합물의 획득 방법은 본 발명이 속한 분야에서 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나, 시판되는 물질을 사용할 수 있으며, 본 발명의 실시예에 따라 추출, 분리하여 획득할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 담팔수 추출물 또는 분획물에 유효성분 또는 표준물질로 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 또는 화학식 3 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상이 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다, 또한, 상기 추출물 또는 분획물은 상기 화합물을 고용량 함유할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화합물은 담팔수 추출물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 등의 극성 용매; 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 노말 부탄올(n-Butanol) 등의 비극성 용매; 또는 이들의 혼합용매로 분획하여 수득한 화합물일 수 있다, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 건조한 담팔수 잎을 50 % 에탄올을 이용하여 담팔수 추출물을 수득하였고, 상기 추출물을 물, 메탄올, 부탄올, 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들의 혼합용매로 분획하여 상기 화학식 3 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루지는 군에서 선택된 하나 이상을 분리하였으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 화학식 3, 및 화학식 6 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 화학식 4 내지 5로 표시되는 화합물로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화학식 3으로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물인 캠프페롤-3-O-β-D-(2''-갈로일)-자일로피라노사이드(kaempferol-3-O-β-D-(2''-galloyl)-xylopyranoside)이며, 기존에 공지되지 않은 신규한 화합물로서 그 구조는 물론 담팔수에 존재하는 것 또한 본 발명자들에 의해 처음 규명되었다. 또한, 본 발명자들에 의해 엘레오칼포사이드 A(elaeocarposide A)로 명명되었다.
상기 화학식 4로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 탄닌 화합물일 수 있으며, [(1R,7R,8S,26R,28S,29R,38R)-1,13,14,15,18,19,20,34,35,39,39-undecahydroxy-2,5,10,23,31-pentaoxo-6,9,24,27,30,40-hexaoxaoctacyclo[34.3.1.04,38.07,26.08,29.011,16.017,22.032,37]tetraconta-3,11,13,15,17,19,21,32,34,36-decaen-28-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 5로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 탄닌 화합물일 수 있으며, [(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetrakis[(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxy]oxan-2-yl]methyl 3,4,5-trihydroxybenzoate의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 6으로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 7로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 3-[(2S,3R,4R,5S)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 8로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 9로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5S)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 10으로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 켐프페롤-3-O-β-D-자일로피라노사이드 (kaempferol-3-O-β-D-xylopyranoside)일 수 있다.
상기 화학식 11로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5S)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 12로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 13으로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 14로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 15로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxychromen-4-one의 IUPAC 네임을 가질 수 있다.
상기 화학식 16으로 표시되는 화합물은 담팔수 추출물 유래 플라보노이드 화합물일 수 있으며, 캠프페롤-3-O-α-L-(2''-갈로일)-아라비노피라노사이드 (kaempferol-3-O-α-L-(2''-galloyl)-arabinopyranoside)일 수 있다.
본 발명에 있어서, “인플루엔자”는 감기 증세를 일으키는 바이러스 중 오소믹소바이러스과의 인플루엔자 (influenza) 바이러스가 유발하는 감염성 질환을 일컫는다. 일반 감기에 비해 발열, 근육통, 두통 등의 전신적인 증상이 뚜렷하게 나타나며 잠복기는 1~3일 정도이다. 인플루엔자는 A, B, C형으로 구분되며 이들의 전체적 구조 및 조성이 동일하며, 직경 80~120 nm의 크기로 감염 초기에는 필라멘트 모양이지만, 후기에는 원형이 된다. 인플루엔자 바이러스는 중앙의 핵을 둘러싸고 있는 바이러스성 외피는 크게 헤마글루티닌(H)과 뉴라미니다아제(N) 두 종류로 구별할 수 있는 당단백질로 구성되어있으며, 핵은 바이러스성 RNA(viral RNA)와 이를 보호하고 활성화하는데 필요한 바이러스성 단백질(viral protein)를 포함한다. B형과 C형의 경우 감수성이 낮고 유전학적 다양성이 떨어져 아형이 거의 존재하지 않으며, 적은 빈도로 출현하여 유행이 잘 일어나지 않는 반면, A형은 헤마글루티닌과 뉴라미니다제에 대한 항체의 반응 여부에 따라 다시 여러 개의 아형으로 나눠지며, 자연계에는 H혈청형이 18개, N혈청형이 11개 존재하며 주로 H1/2/3 및 N1/2가 인간에게 독감을 일으키는 아형이다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A형 H1N1 바이러스일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, “분자 도킹 시뮬레이션”은 단백질, 펩타이드, 핵산, 탄수화물, 지질과 같은 생물학적으로 관련된 분자간의 연관성을 토대로 적절한 표적 결합부위에 대한 소분자 리간드의 결합 적합성을 예측하여, 구조 기반 약물설계에서 많이 사용되는 방법이다. 본 발명에서는 인플루엔자 바이러스 단백질과의 결합능을 바탕으로 인플루엔자 저해 활성여부를 판단하였다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO3), 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na2S2O5), 아황산나트륨(Na2SO3), 질소가스(N2), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료, 또는 개선 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료, 또는 개선 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 담팔수 추출물 또는 이의 분획물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용도를 제공한다.
본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000059
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000060
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000061
이다.
또한, 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000062
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000063
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000064
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
본 발명에 있어서, “식품”이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 건강기능성 식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함하는 의미이다.
본 발명에 있어서, 상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 “건강기능성 식품(functional food)”이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하며, 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 분말, 액제, 편상(flake), 페이스트, 시럽제, 겔, 젤리, 바(bar), 또는 필름 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명의 담팔수 추출물, 분획물, 또는 이들 유래 페놀화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 담팔수 추출물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000065
상기 화학식 1에서,
R2가 수소인 경우,
R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000066
이고;
R2가 히드록시기인 경우,
R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000067
이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000068
n은 0 내지 3의 정수이며;
R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000069
이고;
R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
Figure PCTKR2022013402-appb-img-000070
이고;
선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
본 발명에 따른 "인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물"에 있어서, 의약외품은 약사법 제2조 제7호 다목에 기재된 감염병 예방을 위하여 살균ㆍ살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제로서, 사람 또는 동물의 보건을 위해 사용되는 파리, 모기 등의 기피제, 구제제, 방지제, 방제제 또는 유인살충제를 의미할 수 있다.
또한, 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 예를 들어, 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 상기 의약외품 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용 할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물은 일 예로, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조된 것일 수 있다. 예를 들어, 로션 등과 같은 유액, 크림, 연고, 스프레이, 오일젤, 젤, 오일, 에어로졸, 연막제와 같은 제형을 가질 수 있으나, 본 발명의 해충 방제 유도 효과를 나타내는 것이라면 제한되지 않고 사용할 수 있다. 또한 상기 의약외품 조성물은 각각의 제형에 일반적으로 의약외품 조성물에 배합되는 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 또는 향료 등을 필요에 따라 적절히 배합하여 사용할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 담팔수 추출물의 제조
제주도 일대의 국내산 담팔수 잎을 입수하여 건조한 후 세절한 다음 담팔수 잎 100 kg을 50 % 에탄올 2,000 L로 60 ℃에서 16시간 추출하였으며, 이를 여과 및 농축 후 감압 건조하여 담팔수 추출물 28 kg (수율 28 %)을 얻었다.
실시예 2. 용매계통분획을 통한 담팔수 추출물 유래 분획물
유효성분 정제를 위해, 수득한 담팔수 추출물 중 1 kg에 대하여 물(500 mL)을 연속적으로 부었고, n-부탄올(n-BuOH, 4 L×4) 및 에틸 아세테이트(EtOAc, 5 L×4)를 이용하여 분배 추출하였다. 상기 분획물에 대하여 TLC(thin-layer chromatography)로 검정하고, 페놀화합물이 높은 분획인 EtOAc 분획물 (ESE)에 대하여 감압농축을 진행하여 261 g의 잔류물을 얻었다. 이 과정은 도 1에 나타내었다.
실시예 3. 담팔수 추출물 유래 페놀화합물 정제 및 화학구조 결정
상기 EtOAc 분획물에 대하여 SiO2 c.c.(SiO2 Column chromatography, φ 14×19 cm)을 이용하여 CHCl3-MeOH(40:1→30:1→10:1→5:1, 각각 16.2 L)로 용출하였고, 19개의 분획물(ESE-1 ~ ESE-19)을 얻었다.
상기 19개의 분획물 중에서, ESE-12 분획물[7.7 g, 용리액/총 부피(Ve/Vt) 0.491-0.591]을 ODS c.c.(φ 5×10 cm)을 이용하여 acetone-물 (2:1, 6.6 L)로 용출하였고, 12개의 분획물(ESE-12-1 ~ ESE-12-12)을 얻었다.
상기 12개의 분획물 중에서, ESE-12-2 분획물[6.7 g, Ve/Vt 0.491-0.591]을 ODS c.c.(φ 5.5×10 cm)을 이용하여 acetone-물 (1:1, 2.0 L)로 용출하였고, 8개의 분획물(ESE-12-2-1 ~ ESE-12-2-8)을 얻었다.
상기 8개의 분획물 중에서, ESE-12-2-5 분획물[178.0 mg, Ve/Vt 0.090-0.170]을 Sephadex LH-20 c.c.(φ 1.5×55 cm)을 이용하여 MeOH 1.0 L로 용출하였고, 10개의 분획물(ESE-12-2-5-1 ~ ESE-12-2-5-10)을 얻었다. 이후, 상기 10개의 분획물 중 ESE-12-2-5-8 분획물에서 화합물 4 [34.7 mg, Ve/Vt 0.460-0.550, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.62, CHCl3-MeOH(7:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.46, MeOH-물(3:1)]를 분리하였다.
또한, 상기 19개의 분획물 중에서, ESE-17 분획물[9.7 g, Ve/Vt 0.799-0.884]을 ODS c.c.(φ 5×11 cm)을 이용하여 MeOH-물 (1:1, 1 L)로 용출하였고, 3개의 분획물(ESE-17-1 ~ ESE-17-3)을 얻었다.
상기 3개의 분획물 중에서, ESE-17-2 분획물[5.9 g, Ve/Vt 0.050-0.560]을 SiO2 c.c.(φ 4×16 cm)을 이용하여 CHCl3-MeOH-물 (15:3:1→10:3:1, 각각 2.85 L)로 용출하였고, 14개의 분획물(ESE-17-2-1 ~ ESE-17-2-14)을 얻었다.
상기 14개의 분획물 중에서, ESE-17-2-4 분획물[178.0 mg, Ve/Vt 0.133-0.167]을 Sephadex LH-20 c.c.(φ 1×55 cm)을 이용하여 MeOH 1.0 L로 용출하였고, 5개의 분획물(ESE-17-2-4-1 ~ ESE-17-2-4-5)을 얻었다. 이후, 상기 5개의 분획물 중 ESE-17-2-4-4 분획물에서 화합물 5 [4.3 mg, Ve/Vt 0.320-0.360, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.45, CHCl3-MeOH-물(10:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.45, MeOH-물(3:2)]를 분리하였다.
계속하여, 상기 14개의 분획물 중에서, ESE-17-2-8 분획물[269.0 mg, Ve/Vt 0.303-0.330]을 Sephadex LH-20 c.c.(φ 1.5×55 cm)을 이용하여 MeOH 1.3 L로 용출하였고, 8개의 분획물(ESE-17-2-8-1 ~ ESE-17-2-8-8)을 얻었다. 이후, 상기 8개의 분획물 중 ESE-17-2-8-4 분획물[41.9 mg, Ve/Vt 0.354-0.385]에 대하여 Preparative HPLC (Waters 600S)을 활용하여 정제를 진행하였다. 이때 컬럼으로 Cosmosil 5C18 column (Waters, 5 μm, 250×10 mm)를 사용하였으며, 254 nm 조건하에 isocratic (0.1% formic acid in DW 70%, acetonitrile 30%)조건으로 용출시켰다. 이때 용출속도는 4.0 μL/min로 하였다. 이를 통하여 화합물 7 [13.9 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.52, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.37, MeOH-물(3:2)] 및 화합물 8 [28.0 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.52, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.37, MeOH-물(3:2)]을 분리하였다.
계속하여, 상기 14개의 분획물 중에서, ESE-17-2-10 분획물[876.6 mg, Ve/Vt 0.453-0.633]을 ODS c.c.(φ 3×6 cm)을 이용하여 MeOH-물(2:3, 110 mL)로 용출하였고, 7개의 분획물(ESE-17-2-10-1 ~ ESE-17-2-10-7)을 얻었다. 이후, 상기 7개의 분획물 중 ESE-17-2-10-6 분획물[58.1 mg, Ve/Vt 0.265-0.345]에 대하여 Preparative HPLC(Waters 600S)을 활용하여 정제를 진행하였다. 이때 컬럼으로 Cosmosil 5C18 column(Waters, 5 μm, 250×10 mm)를 사용하였으며, 254 nm 조건하에 isocratic(0.1 % formic acid in DW 70 %, acetonitrile 30 %) 조건으로 용출시켰다. 이때 용출속도는 4.0 μL/min로 하였다. 이를 통하여 화합물 6[37.4 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.51, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.60, MeOH-물(3:2)] 및 화합물 9[20.7 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.52, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.60, MeOH-물(3:2)]를 분리하였다.
계속하여, 상기 14개의 분획물 중에서, ESE-17-2-13 분획물[320.0 mg, Ve/Vt 0.453-0.633]을 ODS c.c.(φ 2.5×6 cm)을 이용하여 MeOH-물(2:3→1:1, 110 mL)로 용출하였고, 15개의 분획물(ESE-17-2-13-1 ~ ESE-17-2-13-15)을 얻었다. 이후, 상기 15개의 분획물 중 ESE-17-2-13-7 분획물에서 화합물 2[43.7 mg, Ve/Vt 0.100-0.153, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.49, CHCl3-MeOH-물(65:35:10), TLC(RP-18F254S) Rf 0.65, MeOH-물(1:1)]를 분리하였다. 또한 상기 15개의 분획물 중 ESE-17-2-13-11 분획물[28.5 mg, Ve/Vt 0.501-0.633]에 대하여 Preparative HPLC(Waters 600S)을 활용하여 정제를 진행하였다. 이때 컬럼으로 Cosmosil 5C18 column(Waters, 5 μm, 250×10 mm)를 사용하였으며, 254 nm 조건하에 isocratic(0.1 % formic acid in DW 70 %, acetonitrile 30 %) 조건으로 용출시켰다. 이때 용출속도는 4.0 μL/min로 하였다. 이를 통하여 화합물 12[9.7 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.51, CHCl3-MeOH-물(65:35:10), TLC(RP-18F254S) Rf 0.35, MeOH-물(1:1)] 및 화합물 13[18.8 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.51, CHCl3-MeOH-물(65:35:10), TLC(RP-18F254S) Rf 0.37, MeOH-물(1:1)]을 분리하였다.
또한, 상기 19개의 분획물 중에서, ESE-18 분획물[31.0 g, Ve/Vt 0.814-0.910]을 SiO2 c.c.(φ 7×15 cm)을 이용하여 CHCl3-MeOH-물(13:3:1→10:3:1, 각 2.2 L)로 용출하였고, 11개의 분획물(ESE-18-1 ~ ESE-18-11)을 얻었다.
상기 11개의 분획물 중에서, ESE-18-8 분획물[1.7 g, Ve/Vt 0.617-0.763]을 SiO2 c.c.(φ 4×18 cm)을 이용하여 EtOAc-BuOH-물(50:3:1→23:3:1→13:3:1, 각 1.5 L)로 용출하였고, 11개의 분획물(ESE-18-8-1 ~ ESE-18-8-11)을 얻었다.
계속하여, 상기 11개의 분획물 중에서, ESE-18-8-2 분획물[172.4 mg, Ve/Vt 0.090-0.153]을 Sephadex LH-20 c.c.(φ 1.5×55 cm)을 이용하여 MeOH 710 mL로 용출하였고, 6개의 분획물(ESE-18-8-2-1 ~ ESE-18-8-2-6)을 얻었다. 이후, 상기 6개의 분획물 중 ESE-18-8-2-5 분획물[91.2 mg, Ve/Vt 0.479-0.634]에 대하여 Preparative HPLC(Waters 600S)을 활용하여 정제를 진행하였다. 이때 컬럼으로 Cosmosil 5C18 column(Waters, 5 μm, 250×10 mm)를 사용하였으며, 254 nm 조건하에 isocratic(0.1 % formic acid in DW 70 %, acetonitrile 30 %) 조건으로 용출시켰다. 이때 용출속도는 4.0 μL/min로 하였다. 이를 통하여 화합물 14[60.5 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.34, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.56, MeOH-물(2:1)] 및 화합물 1[30.7 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.34, CHCl3-MeOH-물(8:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.56, MeOH-물(2:1)]을 분리하였다.
계속하여, 상기 11개의 분획물 중에서, ESE-18-8-5 분획물[297.3 mg, Ve/Vt 0.270-0.300]을 ODS c.c.(φ 2.5×6 cm)을 이용하여 MeOH-물(2:3, 1.5 L)로 용출하였고, 10개의 분획물(ESE-18-8-5-1 ~ ESE-18-8-5-10)을 얻었다. 이후, 상기 10개의 분획물 중 ESE-18-8-5-2 분획물에서 화합물 3[23.2 mg, Ve/Vt 0.080-0.130, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.43, EtOAc-BuOH-물(23:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.79, MeOH-물(3:2)]을 분리하였다. 또한 상기 10개의 분획물 중 ESE-18-8-5-5 분획물[100.9 mg, Ve/Vt 0.700-0.860]에 대하여 Preparative HPLC (Waters 600S)을 활용하여 정제를 진행하였다. 이때 컬럼으로 Cosmosil 5C18 column(Waters, 5 μm, 250×10 mm)를 사용하였으며, 254 nm 조건하에 isocratic(0.1 % formic acid in DW 70 %, acetonitrile 30 %) 조건으로 용출시켰다. 이때 용출속도는 4.0 μL/min로 하였다. 이를 통하여 화합물 10[72.8 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.44, EtOAc-BuOH-물(23:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.51, MeOH-물(3:2)] 및 화합물 11[28.1 mg, TLC(Kieselgel 60 F254) Rf 0.44, EtOAc-BuOH-물(23:3:1), TLC(RP-18F254S) Rf 0.51, MeOH-물(3:2)]을 분리하였다. 이 과정은 도 2에 나타내었다. 또한, 본 실시예에서 분리한 14종의 페놀화합물의 구조는 도 3에 나타내었다.
실시예 4. 담팔수 추출물 유래 페놀 화합물 분자도킹 시뮬레이션을 통한 인플루엔자 바이러스 억제능 평가
실시예 3에서 분리한 14종의 페놀화합물에 대하여 인플루엔자 바이러스에 대해 분자도킹 시뮬레이션을 수행하여 바이러스 억제능을 평가하였다.
구체적으로, 인플루엔자 A/H1N1에 대하여 분자 모델링을 진행하였다. 상기 페놀화합물은 해당 바이러스에서 복제 및 전사에 영향을 주는 subunit viral RdRp(PA, PB1, PB2)에 연속적으로 결합한다. 따라서 본 연구에선, subunit viral RdRp(PA, PB1, PB2)에 대해 blind docking으로 진행하였다. 특히, PB2의 경우 C-terminal domain, Middle domain 및 Cap binding domain에 대해 분자도킹시뮬레이션을 수행하였다. 또한 인플루엔자 바이러스는 코로나바이러스(SARS-CoV-2)의 스파이크 단백질과 마찬가지로 Receptor binding domain (RBD)이 존재한다. RBD; 및 RBD가 세포 내로 들어간 후, 갖고 있던 RNA를 세포 내로 내보내기 전에 세포막이 융합되는 과정에서 주요한 역할을 하는 곳인 A pocket;에 대하여 PDB 파일을 확보하여 분자도킹 시뮬레이션을 수행하였다. 도킹 결과는 Kcal/mol 단위의 결합 친화도의 형태로 얻어졌고, 도킹 과정은 별도의 10개의 컴퓨터 시스템에서 10번 되풀이하여 수행하였다. 결합 모드는 Discovery Studio 4.0을 이용하여 시각화하였고, 분자의 상호작용을 확인하기 위해 2차원 또는 3차원 이미지를 이용하였다. 그 결과는 도 4a 내지 4e에 나타내었다. 또한, 화합물 1 내지 14의 도킹 후에 계산된 평균 결합 에너지 값을 표 1에 나타내었다.
도 4a 내지 4e, 및 표 1에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물 유래 모든 페놀화합물에서 인플루엔자 바이러스의 3차원 구조 기반 결합(docking)을 통하여 높은 인실리코 결합능을 보이는 것을 확인하였으며, 그 중 화합물 2가 가장 높은 억제능을 보이는 것을 확인하였다.
Compounds Average Binding Affinity (Kcal/mol)
PA PB1 PB2 RBD A pocket
C-terminal domain Middle domain Cap binding domain
화합물 1(화학식 3) -8.22 -3.47 -8.02 -4.94 -6.84 -6.91 -6.04
화합물 2(화학식 4) -14.17 -8.05 -14.53 -11.14 -10.6 -12.27 -14.67
화합물 3(화학식 5) -8.93 -1.68 -5.55 -0.47 -3.86 -5.26 -5.57
화합물 4(화학식 6) -5.83 -4.39 -6.59 -5.26 -7.03 -6.98 -9.53
화합물 5(화학식 7) -7.88 -5.23 -6.91 -5.08 -7.21 -8.38 -9.13
화합물 6(화학식 8) -6.55 -3.20 -6.88 -3.83 -5.81 -6.98 -5.87
화합물 7(화학식 9) -6.78 -4.46 -5.82 -4.57 -5.45 -7.38 -6.36
화합물 8(화학식 10) -6.88 -3.83 -7.59 -4.80 -7.00 -7.10 -8.49
화합물 9(화학식 11) -6.54 -4.30 -7.48 -4.64 -7.33 -7.02 -7.68
화합물 10(화학식 12) -6.61 -2.85 -6.64 -3.9 -6.35 -6.35 -6.19
화합물 11(화학식 13) -6.34 -2.85 -6.35 -3.63 -5.87 -6.61 -5.49
화합물 12(화학식 14) -6.08 -3.10 -5.14 -3.56 -4.76 -6.97 -5.83
화합물 13(화학식 15) -6.78 -3.68 -6.67 -4.22 -6.61 -6.63 -8.36
화합물 14(화학식 16) -6.74 -1.93 -6.96 -3.63 -5.64 -5.93 -5.55
실시예 5. 세포배양
실험에 사용된 MDCK 세포주는 37 ℃, 5 % CO2의 조건으로 10 % 소 태아 혈청 (FBS, Hyclone Thermo Scientific) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(P/S, Gibco)이 포함된 MEM(Minimum essential medium, Gibco) 배지에서 배양하였다.
실시예 6. 담팔수 추출물의 세포 독성 확인
MDCK 세포를 96 웰-플레이트에 1×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고, 담팔수 추출물을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리한 후 담팔수 추출물의 세포 병변 효과(cytopathic effect, CPE) 및 세포 생존율을 측정하였다. 그 결과는 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물이 세포의 형태학적 변화 및 세포 독성이 없음을 확인하였다.
실시예 7. 담팔수 추출물의 항바이러스 활성 조사-1
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 24 웰-플레이트에 1×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음 인플루엔자 A 바이러스(IAV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후 담팔수 추출물을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후에 세포를 PBS로 세 번 세척한 후, 4 % 포름알데히드(formaldehyde)로 10분간 고정하였다. 이후 1 % 크리스털바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 세포의 병변 효과(cytopathic effect, CPE)를 측정하였다. 그 결과는 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물을 처리하였을 때, IAV에 의한 CPE가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였으며, 세포생존율도 증가하는 것을 확인하였다.
실시예 8. 담팔수 추출물의 항바이러스 활성 조사-2
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 6 웰-플레이트에 2×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음 인플루엔자 A 바이러스(IAV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후, 담팔수 추출물을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후에 세포를 RANiso Plus (Takara)를 이용하여 RNA를 추출하였다. 분리된 RNA는 나노드롭을 통해 정량한 후 cDNA 합성 키트(RevertraAce qPCR RT kit, Toyobo)를 이용해 cDNA로 합성하였으며, CFX Connect real-time system(Bio-rad)를 이용해 real-time PCR를 실시하였다. 프라이머 반응 조건은 95 ℃에서 10분간 전보온 시켰으며, 95 ℃에서 15초, 60 ℃에서 1분으로 총 40 cycle을 반복하였다. 그 후, 인플루엔자 바이러스의 구조를 형성하는 M1과 핵단백질(Neucleoprotein, NP) 유전자의 발현을 확인하였다. 그 결과는 도 7a에 나타내었다. 또한, 프라이머의 센스와 안티센스 서열은 표 2에 나타내었다.
또한, MDCK 세포에 IAV 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후, 담팔수 추출물을 24시간 동안 처리하였다. 그 후, 세포를 고정한 후 DAPI, 마우스 단일 복제 항-viral NP(mouse monoclonal anti-viral NP)로 염색한 후 공초점 현미경(confocal microscopy)으로 담팔수 추출물의 IAV의 억제 효능을 측정하였다. 그 결과는 도 7b에 나타내었다.
도 7a 및 7b에 나타난 바와 같이, 담팔수 추출물을 처리할 경우 M1 및 NP 유전자 발현이 모두 억제되었고, anti-viral NP로 염색한 결과 담팔수 추출물에서 viral NP의 발현량이 억제되었다. 이는 담팔수 추출물이 매우 우수한 항바이러스 효능을 나타낸다는 것을 의미한다.
M1 primer Sense 5'-AAGACCAATCCTGTCACCTCTG-3' 서열번호 1
Antisense 5'-CAAAACGTCTACGCTGCAGTCC-3' 서열번호 2
NP primer Sense 5'-CCAGATCAGTGTGCAGCCTA-3' 서열번호 3
Antisense 5'-CTTCTGGCTTTGCACTTTCC-3' 서열번호 4
GAPDH primer Sense 5'-TGGACCTGACCTGCCGTCTA-3' 서열번호 5
Antisense 5'-CCCTGTTGCTGTAGCCAAATTC-3' 서열번호 6
실시예 9. 담팔수 추출물의 항바이러스 활성 조사-3
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 6 웰-플레이트에 2×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음 인플루엔자 A 바이러스(INV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후 담팔수 추출물을 농도별(0.4, 2, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후 단백질을 단백질 추출 용액(Elpisbio)으로 추출한 후 SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동하고 니크로셀룰로오스 막으로 전사하였다. 전사된 막을 5 % skim milk로 상온에서 1시간동안 블로킹하고, 4 ℃에서 1차 항체를 16시간 동안 반응시킨 다음, TBST 완충액으로 5회 이상 세척하였다. 막을 2차 항체로 1시간 동안 상온에서 반응시킨 다음, TBST 완충액으로 5회 이상 세척하였다. ECL 용액을 반응시켜 단백질 발현 정도를 Chemidoc™이미지 분석기를 사용하여 측정 후 정량하였다. 그 결과는 도 7c에 나타내었다.
도 7c에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물을 처리하였을 때 인플루엔자 바이러스 구조를 형성하는 M1의 발현이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이는 담팔수 추출물의 인플루엔자 바이러스 억제 효과가 있음을 의미한다.
실시예 10. 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 세포독성 확인
MDCK 세포를 96 웰-플레이트에 1×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고, 담팔수 추출물 성분인 화합물 2 및 3을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리한 후 세포 병변 효과(cytopathic effect, CPE) 및 세포 생존율을 측정하였다.
도 8에 나타낸 결과와 같이, 담팔수 추출물 성분인 화합물 2 및 3의 처리로 인하여 세포의 형태학적 변화 및 세포 독성이 없음을 확인하였다.
실시예 11. 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 항바이러스 활성 조사-1
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 24 웰-플레이트에 1×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음, 인플루엔자 A 바이러스(IAV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 한 시간 동안 처리한 후, 화합물 2 및 3을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후에 세포를 PBS로 세 번 세척한 후, 4 % 포름알데히드 (formaldehyde)로 10분간 고정하였다. 이후 1 % 크리스털바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 세포의 병변 효과(cytopathic effect, CPE)를 측정하였다. 그 결과는 도 9에 나타내었다.
도 9에 나타낸 바와 같이, 화합물 2 및 3을 처리하였을 때, 각각 IAV에 의한 CPE가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였으며, 세포생존율 또한 증가하는 것을 확인하였다.
실시예 12. 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 항바이러스 활성 조사-2
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 6 웰-플레이트에 2×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음, 인플루엔자 A 바이러스(IAV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후, 화합물 2 및 3을 농도별(2.5, 5, 10 μg/mL)로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후에 세포를 RANiso Plus(Takara)를 이용하여 RNA를 추출하였다. 분리된 RNA는 Nanodrop을 통해 정량한 후 cDNA 합성 키트(RevertraAce qPCR RT kit, Toyobo)를 이용해 cDNA로 합성하였으며, CFX Connect real-time system (Bio-rad)를 이용해 real-time PCR를 실시하였다. 프라이머 반응 조건은 95 ℃에서 10분간 전보온 시켰으며, 95 ℃에서 15초, 60 ℃에서 1분으로 총 40 cycle을 반복하였다. 그 후, 인플루엔자 바이러스의 구조를 형성하는 M1과 핵단백질(Neucleoprotein, NP) 유전자의 발현, IAV viral titer를 확인하였다. 그 결과는 도 10a에 나타내었다.
또한, MDCK 세포에 IAV 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후, 담팔수 추출물을 24시간 동안 처리하였다. 그 후, 세포를 고정한 후 DAPI, 마우스 단일 복제 항-viral NP(mouse monoclonal anti-viral NP)로 염색한 후 공초점 현미경(confocal microscopy)로 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 IAV의 억제 효능을 측정하였다. 그 결과는 도 10b에 나타내었다.
도 10a 및 10b에 나타난 바와 같이, 화합물 2 및 3을 처리한 경우, M1 및 NP 유전자 발현이 모두 억제되었고, IAV viral titer이 감소하였다. 또한, anti-viral NP로 염색한 결과에서 viral NP의 발현량이 억제되었다. 이는 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3이 매우 우수한 항바이러스 효능을 나타낸다는 것을 의미한다.
실시예 13. 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3의 항바이러스 활성 조사-3
MEM 배지에서 배양된 MDCK 세포를 6 웰-플레이트에 2×105 세포/웰의 농도로 접종하였다. 37 ℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 세포 배지를 제거한 다음 인플루엔자 A 바이러스(INV/California/2007/H1N1)를 0.1 MOI로 1시간 동안 처리한 후, 화합물 2(2.5, 5, 10 μg/mL)와 화합물 3(0.4, 2, 10 μg/mL)을 농도별로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후 단백질을 단백질 추출 용액으로 추출한 후 SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동하고 니크로셀룰로오스 막으로 전사하였다. 전사된 막을 5 % skim milk로 상온에서 1시간동안 블로킹하고, 4 ℃에서 1차 항체를 16시간 동안 반응시킨 다음, TBS-T 완충액으로 5회 이상 세척하였다. 막을 2차 항체로 1시간 동안 상온에서 반응시킨 다음, TBS-T 완충액으로 5회 이상 세척하였다. ECL 용액을 반응시켜 단백질 발현 정도를 Chemidoc™이미지 분석기를 사용하여 측정 후 정량하였다. 그 결과는 도 10c에 나타내었다.
도 10c에 나타낸 바와 같이, 화합물 2 및 3을 처리하였을 때, 인플루엔자 바이러스 구조를 형성하는 M1 및 인플루엔자 바이러스의 병원성을 결정하는 NS1의 발현량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이는 담팔수 추출물 유래 화합물 2 및 3이 인플루엔자 바이러스 억제 효과가 있음을 의미한다.
실시예 14. 동물실험
14-1. 실험동물
6주령 C57BL/6 수컷 마우스을 사용하였고, 투여된 바이러스의 경우 안전성이 확보되어 있으나, 다른 설치류의 감염을 우려하여 네거티브(negative) 사육 시스템을 사용해 다른 동물과의 접촉을 차단하였다. 바이러스의 분리, 동정, 역가 계산 및 투여는 그 안전성을 확보하기 위하여 준비된 특수 클린벤치(clean bench)에서 실시하였으며, 바이러스 소독을 위한 특수 소독제를 이용하여 실험 전후 소독을 실시하였다. 체중에 직접적인 영향을 줄 수 있는 사료 급여 관리는 매일 사료의 양을 판단하여 급여함으로써 급식에 제한이 발생하지 않도록 하였다. 조명은 12시간 주기로 교체하였고, 물과 사료를 자유롭게 먹도록 하였다. 기타 동물 사육과 관련되는 사항은 중앙대학교 동물실험 윤리위원회(National Association of Laboratory Animal Care) 규정에 따라 동물실험을 수행하였다.
14-2. 비강투여
항인플루엔자 효능을 평가하기 위해서 6주령 C57BL/6 수컷 마우스에 IAV를 1×103 PFU로 비강을 통해 감염시켰으며, 감염 10분, 3시간 및 6시간 후에 마우스에 담팔수 추출물, 화합물 2 및 3을 비강 내로 투여한 후 14일 동안 마우스 체중 및 사망률을 관찰하였다. 그 결과는 도 11a 및 도 11b에 나타내었다.
도 11a에 나타낸 바와 같이, 대조군은 IAV 감염 10일째에 20 %의 생존율을 보인 반면, 담팔수 추출물 투여군은 80 %의 생존율을 보였으며, 화합물 2 및 3의 투여군은 100 % 생존율을 보였는바, 생존율이 크게 증가하였다.
또한, 도 11b에 나타낸 바와 같이, 실험기간 동안 체중 변화에 관하여, 대조군에서는 감염 후부터 체중의 감소가 나타난 반면, 담팔수 추출물, 화합물 2 및 3을 비강 내로 투여한 경우 대조군에 비해 체중 감소의 폭이 감소했으며, 감염 8일째 이후로는 체중이 회복되었다. 따라서 담팔수 추출물, 화합물 2 및 3을 비강 내로 투여한 경우 인플루엔자 바이러스 감염 증상 완화에 효과가 있음을 확인하였다.
14-3. 경구투여
항인플루엔자 효능을 평가하기 위해서 마우스를 마취한 뒤 IAV를 1×103 pfu로 비강을 통해 감염시켰다. 그 후, 담팔수 추출물(0.5 mg/kg)을 IAV 감염 3일 전부터 감염 5일 후까지 총 8일간 경구투여 하였으며, 감염 후 5일째에 마우스를 희생하여 폐에서 viral RNA를 추출하였다. 8일 동안의 마우스 체중을 관찰하였고, 마우스 폐에서 인플루엔자 바이러스 구조를 형성하는 M1의 발현 정도를 확인하였다. 그 결과는 도 12a 및 도 12b에 나타내었다.
도 12a에 나타낸 바와 같이, 대조군에서는 IAV 감염 후부터 체중의 감소가 나타났지만, 담팔수 추출물 경구투여군에서는 대조군에 비해서 체중 감소가 억제되는 것을 확인하였다.
또한, 도 12b에 나타낸 바와 같이, 대조군에 비해 담팔수 추출물 처리군에서는 M1의 발현이 억제되는 것을 확인하였다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명에 따른, 담팔수 추출물, 이의 분획물 또는 이들 유래 페놀화합물은 인체에 부작용이 없어 안전성이 우수하며, 항바이러스 활성이 뛰어나고, 우수한 인플루엔자 억제능을 가지는 바, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

Claims (23)

  1. 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 담팔수 추출물은 물, C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 분획물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 극성 용매, 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 노말 부탄올 (n-Butanol), 비극성 용매, 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 담팔수 추출물은 30 내지 70% 에탄올을 사용하여 추출된 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A형 H1N1 바이러스인 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 담팔수 추출물은 인플루엔자 바이러스의 M1, 및 NP 유전자로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000071
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000072
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000073
    이다.
  8. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000074
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000075
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000076
    이고;
    선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
    상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    상기 화합물은 하기 화학식 3 내지 16으로 표시되는 화합물로 이루지는 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000077
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000078
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000079
    [화학식 6]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000080
    [화학식 7]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000081
    [화학식 8]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000082
    [화학식 9]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000083
    [화학식 10]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000084
    [화학식 11]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000085
    [화학식 12]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000086
    [화학식 13]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000087
    [화학식 14]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000088
    [화학식 15]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000089
    [화학식 16]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000090
  10. 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  11. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000091
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000092
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000093
    이다.
  12. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 식품학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000094
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000095
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000096
    이고;
    선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
    상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 건강기능성 식품조성물인 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  14. 담팔수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 의약외품은 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시 및 연고제로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물.
  16. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000097
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000098
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000099
    이다.
  17. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 예방 또는 억제용 의약외품 조성물:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000100
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000101
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000102
    이고;
    선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
    상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
  18. 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 치료 또는 개선 방법.
  19. 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염증 치료 또는 개선 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000103
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000104
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000105
    이다.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000106
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000107
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000108
    이고;
    선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
    상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
  20. 담팔수 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도.
  21. 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 담팔수 추출물 또는 이의 분획물의 용도.
  22. 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000109
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000110
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000111
    이다.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000112
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000113
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000114
    이고;
    선택적으로 상기 R3 내지 R4 중 인접한 치환기는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3a는 산소 또는 히드록시기이며;
    상기 R3b 및 R4a는 연결되어 고리를 형성할 수 있으며;
    상기 R3c 및 R4b는 연결되어 고리를 형성할 수 있다.
  23. 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 개선, 또는 치료용 약제 제조를 위한 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000115
    상기 화학식 1에서,
    R2가 수소인 경우,
    R1은 수소, 히드록시기, C1-C16의 알킬, C1- C15의 알콕시, C3-C16의 사이클릭 알킬, C2-C15의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000116
    이고;
    R2가 히드록시기인 경우,
    R1는 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1-C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C10의 헤테로 사이클릭 알킬,
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000117
    이다.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000118
    n은 0 내지 3의 정수이며;
    R3은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000119
    이고;
    R4은 수소, 히드록시기, C1-C10의 알킬, C1- C9의 알콕시, C3-C10의 사이클릭 알킬, C2-C9의 헤테로 사이클릭 알킬, 또는
    Figure PCTKR2022013402-appb-img-000120
    이고;
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