WO2023037160A2 - Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска - Google Patents

Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска Download PDF

Info

Publication number
WO2023037160A2
WO2023037160A2 PCT/IB2022/000446 IB2022000446W WO2023037160A2 WO 2023037160 A2 WO2023037160 A2 WO 2023037160A2 IB 2022000446 W IB2022000446 W IB 2022000446W WO 2023037160 A2 WO2023037160 A2 WO 2023037160A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
diabetes
type
group
gaba
diabetes mellitus
Prior art date
Application number
PCT/IB2022/000446
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2023037160A3 (ru
Inventor
Шмуэль Борис ЛЕВИТ
Original Assignee
Левикуре Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2021126744A external-priority patent/RU2021126744A/ru
Application filed by Левикуре Лтд. filed Critical Левикуре Лтд.
Publication of WO2023037160A2 publication Critical patent/WO2023037160A2/ru
Publication of WO2023037160A3 publication Critical patent/WO2023037160A3/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • kits and a single dosage form for the prevention of type 1 diabetes mellitus their use for the prevention of type 1 diabetes mellitus.
  • Method for the prevention of type 1 diabetes mellitus in healthy people at high risk are provided.
  • SUBSTANCE group of inventions relates to medicine, namely to endocrinology, and can be used to prevent type 1 diabetes mellitus.
  • the invention provides a combination containing 1) a dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) inhibitor, 2) a proton pump inhibitor (PPI), and 3) a gamma-aminobutyric acid or gamma-aminobutyric acid receptor agonist.
  • DPP-4 dipeptidyl peptidase-4
  • PPI proton pump inhibitor
  • gamma-aminobutyric acid or gamma-aminobutyric acid receptor agonist The unique combination and dosage of these drugs resulted in the regeneration (repair) of pancreatic 0-cells resulting in a significant reduction in the number of diabetic NOD mice. This specific combination also proved to be highly effective in preventing the development of DM1 in NOD mice.
  • Type 1 diabetes is the subject of much scientific research, and these studies are often cited in the media and discussed outside of the scientific, professional realm, as many patients with type 1 diabetes (or their parents) seek to learn from physicians about screening other family members (especially children) and what can be done if a family member is at high risk of developing type 1 diabetes.
  • type 1 diabetes mellitus (formerly known as insulin-dependent diabetes mellitus) has led to the consideration of interventions to slow the disease process in an attempt to delay or even prevent the onset of the disease.
  • the immunosuppressant Azathioprine is an immunosuppressive drug that suppresses or prevents T-cell responses to antigens.
  • insulin was discontinued in 10 of 20 treated patients compared with 2 of 20 patients in the placebo group [1]. There are no data on diabetes prevention.
  • Endogenous insulin secretion (measured as the plasma C-peptide response to mixed food) also improved. However, only three treated patients remained in remission after one year. Similarly, disappointing results were noted in the second study (2).
  • MMF Mycophenolate mofetil
  • Anti-CD3 antibodies The use of anti-CD3 monoclonal antibodies (OCTZ) in mice causes reversal of diabetes in mice (nonobese diabetic, NOD (5)). However, the use of OCTZ in humans is problematic due to significant cytokine-mediated side effects.
  • OCTZ anti-CD3 monoclonal antibodies
  • Teplizumab is most effective in maintaining C-peptide secretion when administered early in the disease (6).
  • Teplizumab has been studied in patients with newly diagnosed type 1 diabetes as well as in individuals at high risk of developing type 1 diabetes. It has been shown to slow the clinical progression of type 1 diabetes, but in newly diagnosed type 1 diabetes, the improvement is modest and appears to be temporary. Side effects include transient lymphopenia, rash, anemia, and fever (7).
  • Teplizumab In a study with a mean follow-up of two years, a single 14-day course of Teplizumab was compared with placebo in 76 people ( ⁇ 18 years, mean age 13 to 14 years) who did not have diabetes but were at high risk of developing type 1 diabetes. (relatives of a patient with type 1 diabetes who are positive for at least two diabetes autoantibodies and with evidence of impaired fasting glucose levels or impaired glucose tolerance) [8]. Teplizumab increased the median time to diagnosis of type 1 diabetes (48.4 months compared to 24.4 months). In addition, fewer people who took Teplizumab were diagnosed with type 1 diabetes (43 vs. 72 percent, hazard ratio [RR] 0.41, 95% CI 0.22-0.78).
  • Hotelixizumab is another anti-CD3 monoclonal antibody (ChAglyCD3).
  • a multicenter study included 80 patients with new onset type 1 diabetes who were randomly assigned to either hotelixizumab for six consecutive days or placebo with the following results (10):
  • anti-CD3 antibody has been associated with significant adverse events, including fever after infusion, rash, and acute mononucleosis-like syndrome after therapy has ended.
  • Rituximab an anti-CD20 monoclonal antibody, has been used to treat B-cell neoplasia and antibody-mediated autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis.
  • the mean AUC for C-peptide levels during a mixed-feed tolerance test was significantly higher in the Rituximab group compared to the placebo group. (0.56 vs. 0.47 pmol/mL) (11)
  • the clinical relevance of this minor difference in AUC is unclear. More patients in the rituximab group than in the placebo group developed side effects (eg, fever, rash, pruritus, nausea, vomiting) after the first infusion.
  • IL-1 Interleukin-1 inhibitors.
  • IL-1 is an innate immune mediator that is involved in the pathogenesis of type 1 diabetes. It has been hypothesized that inhibition of IL-1 will prevent continued destruction of beta cells in newly onset type 1 diabetes.
  • Anakinra a human IL-1 receptor antagonist
  • Canakinumab a human anti-IL-1 monoclonal antibody
  • Thymoglobulin Thymoglobulin or antithymocyte globulin (ATG) is used in organ transplantation, but little is known about its potential beneficial effects in type 1 diabetes. Preclinical studies have shown that treatment with anti-lymphocyte sera in newly diabetic NOD mice can induce remission of the disease.
  • Insulin administered in the pre-diabetic period to NOD mice and BB rats delays or prevents the development of diabetes [13]. Insulin may act as an immunomodulator in these animals [14]. Alternatively, this may allow the beta cells to rest and therefore become less vulnerable to further autoimmune attack as they express fewer autoantigens.
  • DPT Diabetes Prevention Trial
  • HLA human leukocyte antigen
  • BCG Bacillus Calmette-Guérin
  • DiaPep277 In a study of 35 patients with type 1 diabetes and baseline serum C-peptide concentrations >0.1 nmol/L, DiaPep277, an immunomodulatory peptide derived from a 60 kDa heat shock protein, or placebo was given at zero, one, and six months. After 10 months, mean serum C-peptide concentrations did not change in the treatment group, but decreased in the placebo group, indicating that endogenous insulin production was maintained in the treatment group [28].
  • Etanercept is a recombinant TNFa receptor that binds to TNFa and blocks its biological activity.
  • patients treated with etanercept had lower A1C values (5.9 vs. by 39 percent against a decrease of 20 percent).
  • Larger studies are needed to evaluate the benefits and risks of etanercept for the prevention of type 1 diabetes. There are no data on diabetes prevention.
  • Interferon alfa Interferons are multifunctional immunomodulatory cytokines that may influence the cytokine cascade, including some anti-inflammatory capabilities.
  • IF-a oral human recombinant interferon alfa-2a
  • placebo placebo in 128 patients with newly diagnosed type 1 diabetes
  • patients randomly assigned to IF-a had a lower percentage loss mixed C-peptide stimulated by food (28 vs. 56 percent).
  • A1C or insulin requirements There are no data on diabetes prevention.
  • Nicotinamide In animals, nicotinamide has been found to protect beta cells from chemical or autoimmune damage. It is thought to act as a free radical scavenger or replenish nicotinamide- adenine dinucleotide, an important coenzyme, in damaged cells, thereby promoting DNA repair and limiting DNA damage.
  • nicotinamide has been shown to be ineffective in a large preventive study.
  • the Nicotinamide Diabetes Trial (ENDIT) studied 552 people aged 3 to 40 years with a first-degree relative with type 1 diabetes, positive islet cell antibodies and a non-diabetic glucose tolerance test; subjects were randomly assigned to receive nicotinamide (1.2 g/m2 per day) or placebo [43]. After a mean follow-up period of 3.3 years, the following results were seen:
  • Known (RU 2694527) combination for the treatment of patients with type 1 diabetes mellitus, providing regeneration of pancreatic beta cells characterized in that it consists of a drug of the dipeptidyl peptidase (DPP-4) inhibitor group containing a therapeutically effective amount of a DPP-4 inhibitor, a drug of the inhibitor group a proton pump (PPI) containing a therapeutically effective amount of a PPI, and a gamma-aminobutyric acid (GABA) preparation or a gamma-aminobutyric acid receptor agonist.
  • DPP-4 dipeptidyl peptidase
  • PPI proton pump
  • GABA gamma-aminobutyric acid
  • This combination is used to treat an already existing disease.
  • the problem is the ineffectiveness of the prevention of diabetes mellitus.
  • the disease that has already occurred is being treated, any preventive measures for people at risk of type 1 diabetes are ineffective.
  • DPP-4 dipeptidyl peptidase inhibitors
  • PPI proton pump inhibitors
  • GABA gamma-aminobutyric acid
  • DPP-4 dipeptidyl peptidase
  • PPI proton pump inhibitors
  • GABA gamma-aminobutyric acid
  • the oral combination comprises a therapeutically effective amount of a DPP-4 inhibitor at a daily dose of 25 to 100 mg, a therapeutically effective amount of a PPI at a daily dose of 10 to 40 mg, and a therapeutically effective amount of a GABA drug or GABA receptor agonist at a daily dose of 125 up to 1500 mg.
  • the oral combination is characterized in that the drug of the DPP-4 inhibitor group is sitagliptin, the drug of the PPI group is omeprazole.
  • an oral combination including active substances from 1) the group of DPP-4 inhibitors, 2) the PPI group, 3) GABA or GABA receptor agonist, for the prevention of type 1 diabetes.
  • a method for the prevention of type 1 diabetes mellitus includes administering to persons from a high risk group for developing type 1 diabetes mellitus a combination according to i.1.
  • a high-risk group for developing type 1 diabetes includes having at least one parent and/or sibling and/or a child with an established diagnosis of type 1 diabetes.
  • a DPP-4 inhibitor Preferably, 25 to 100 mg of a DPP-4 inhibitor, 10 to 40 mg of PPI, 125 to 1500 mg of GABA or a GABA receptor agonist are administered daily in the method for preventing type 1 diabetes mellitus.
  • the aim of the group of inventions is to create a combination of substances that leads to a long-term effect of preventing diabetes in persons with a high risk of developing type 1 diabetes.
  • This goal is achieved through the use of a combination consisting of a dipeptipidipeptidase-4 (DPP-4) inhibitor, a proton pump inhibitor (PPI), and a gamma-aminobutyric acid or gamma-aminobutyric acid receptor agonist.
  • DPP-4 dipeptipidipeptidase-4
  • PPI proton pump inhibitor
  • EFFECT maintaining health, preventing the onset of the disease in persons belonging to a high risk group for developing type 1 diabetes mellitus.
  • TIDM type 1 diabetes
  • the first drug of the proposed combination belongs to the group of DPP-4 inhibitors (DPP41).
  • Drugs of the DPP-4i group for example, sitagliptin, vildagliptin and saxagliptin and other members of this group of drugs
  • help in the regeneration of 0-cells This is due, in particular, to the fact that drugs of the DPP-4i family are able to modulate the immune response, limiting autoimmune activity, reducing the inflammatory component (insulitis) and, ultimately, ensuring the regeneration of pancreatic 0-cells.
  • DPP-4 inhibitors (DPP-41) block the activity of the DPP-4 enzyme, which leads to an increase in both the concentration and duration of action of GLP-1 and GIP.
  • DPP-4 inhibitors are taken orally and provide healthy physiological levels of incretins in the blood.
  • a critical feature of GLP-1's effect on 0- and ⁇ -cell function is its glucose-dependent nature. This means that GLP-1 stimulates insulin secretion and, on the other hand, suppresses glucagon production only under conditions of hyperglycemia. Once plasma glucose falls to normal levels, the aforementioned effects of GLP-1 subside, making it a reliable physiological mechanism to prevent the development of a hypoglycemic state.
  • the DPP-4 inhibitor is administered orally at a daily dose of 25 to 100 mg, depending on body weight.
  • drugs in this group that are suitable for use in this invention are: alogliptin, linagliptin, saxagliptin, sitagliptin and vildagliptin.
  • sitagliptin sitagliptin
  • These can be, for example, sitagliptin tablets manufactured by various companies.
  • Sitagliptin The drug Sitagliptin (Januvia) is registered in many countries around the world. Sitagliptin may serve as a classic member of the DPP-4 inhibitor family. Sitagliptin increases the concentration of two known hormones of the incretin family: GLP-1 and glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP). Hormones of the incretin family are secreted in the intestine during the day, and their level rises in response to food intake. Incretins are part of the internal physiological system for the regulation of glucose homeostasis. With normal or elevated blood glucose levels, hormones of the family incretins contribute to an increase in insulin synthesis, as well as its secretion by pancreatic beta cells due to intracellular signaling mechanisms associated with cyclic AMP.
  • GLP-1 glucose-dependent insulinotropic peptide
  • a double-blind, randomized, crossover, 8-week pilot study in adult patients with type 1 diabetes showed that the drug significantly lowered blood glucose levels despite a reduction in total and lunchtime insulin dose (DiabetMed. 2011 Oct; 28 (10): 1176-81 Effect sitagliptin on glucose control in an adult with type 1 diabetes: a pilot, double-blind, randomized, cross-over study (Ellis SL, Moser EG, Snell-Bergeon JK, Rodionova AS, Hazenfield RM, Garg CK).
  • US Pat. No. 9,463,174 discloses a method of treating type 1 diabetes (T1D) comprising administering a therapeutically effective amount of gamma-aminobutyric acid (GABA) and an effective amount of a DPP-4 inhibitor, eg sitagliptin, to a patient with T1D.
  • GABA and DPP-4 inhibitor are used in single or divided dosage form.
  • the dosage includes GABA in an amount of 0.002 to 2 mg/kg of body weight. This combination does not result in significant recovery of pancreatic beta cells.
  • the second drug of the proposed combination belongs to the PPI group.
  • the proton pump inhibitor is administered orally in a daily dose of 10 to 40 mg, depending on body weight.
  • Proton pump inhibitors may be selected from, for example, omeprazole, pantoprazole, lansoprazole, rabeprazole and esomeprazole.
  • Omeprazole is preferred in the practice of the present invention, for example in the form of pills or capsules.
  • the third drug from the proposed combination is gamma-aminobutyric acid (GABA), as well as other gamma-aminobutyric acid receptor agonists.
  • the drug is prescribed in a daily dose of 125 to 1500 mg, depending on body weight.
  • GABA, gelatin or cellulose capsules (US5698155) or tablets (aminalon) can be used.
  • GABA agonists such as baclofen, phenibut, pantogam, and antiepileptic drugs such as valproic acid, Depalept, Topamax, Carbamazepine, and medical cannabis can also be used.
  • Oral forms include any pharmaceutically acceptable dosage form, powders, granules, capsules, tablets, microcapsule suspensions, and the like.
  • the drugs can be used alone or in a single dosage form, for example, in the form of capsules.
  • the technical result of the invention lies in the fact that the introduction of drugs in this combination can significantly reduce the need for insulin, and in some cases it is even possible to completely stop insulin injections.
  • GABA gamma-aminobutyric acid
  • ⁇ -cells GABA causes membrane hyperpolarization and inhibits Glucagon secretion, while in 0-cells it causes membrane depolarization and increases insulin production.
  • GABA has a multidirectional positive effect on 0-cells, which includes the stimulation of cell proliferation and counteracting apoptosis.
  • Proton pump inhibitors inhibit Na + / K + -ATPase (proton pump) on the apical membrane of the parietal cells of the gastric mucosa and ensure the achievement of clinical, endoscopic remission in all acid-dependent diseases, including those requiring long-term or continuous therapy. For a long period during the day, they maintain the pH values in the stomach in the range favorable for the healing of ulcers.
  • the general effect of the pharmacological action of drugs in this group is an increase in the concentration of gastrin in the blood and pancreatic tissue.
  • Gastrin is a natural stimulator of restoration (regeneration) of pancreatic cells.
  • triple therapy (DPP-4i + GABA + PPi) is promising for maintaining pancreatic function and for preventing TIDM.
  • Teplizumab for treatment of type 1 diabetes 1-year results from a randomised, placebo-controlled trial. Sherry N, Hagopian W, Ludvigsson J, Jain SM, Wahlen J, Ferry RJ Jr, Bode B, Aronoff S, Holland C, Carlin D, King KE, Wilder RE, Pillemer S, Bonvini E, Johnson S, Stein KE, Koenig S, Herold KS, Daifotis AG, ProtegeTrial Investigators Lancet. 2011;378(9790):487. Epub 2011 Jun 28.
  • eplizumab preserves C-peptide in recent-onset type 1 diabetes: two-year results from the randomized, placebo-controlled Protegetrial. Hagopian W, Ferry RJ Jr, Sherry N, Carlin D, Bonvini E, Johnson S, Stein KE, Koenig S, Daifotis AG, Herold KS, Ludvigsson J, ProtegeTrial Investigators Diabetes. 2013;62(l l):3901. Epub 2013 Jun 25
  • Diabetes Prevention Trial Type 1 Diabetes Study Group. Effects of insulin in relatives of patients with type 1 diabetes mellitus. N Engl J Med 2002; 346:1685
  • 06/11/2021 is the end date of the study.
  • Dosage form Tablets, film-coated
  • Composition Aminalon, tab. 250 mg, 100 pcs.
  • GABA Gamma-aminobutyric acid
  • gamma-aminobutyric acid is a biogenic amine that restores metabolic processes in the brain, promotes the utilization of glucose by the brain and the removal of toxic metabolic products from it, and ensures the normalization of the dynamics of nervous processes in the brain.
  • Dosage form Film-coated tablets Ingredients: Januvia, tab. 100 mg, 28 pcs active ingredient:
  • Tablets 100 mg: round, biconvex, beige, film-coated, debossed with "277" on one side and smooth on the other.
  • Januvia® is an orally active, highly selective inhibitor of the D1111-4 enzyme, intended for the treatment of type 2 diabetes mellitus.
  • Sitagliptin differs in chemical structure and pharmacological action from analogues of G1P1-1, insulin, derivatives sulfonylureas, biguanides, peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-y) agonists, alpha-glucosidase inhibitors, amylin analogues.
  • PPAR-y peroxisome proliferator-activated receptor gamma
  • sitagliptin increases the concentration of two hormones of the incretin family: GII-1 and GII.
  • Hormones of the incretin family are secreted in the intestine during the day, their concentration increases in response to food intake. Incretins are part of the internal physiological system for the regulation of glucose homeostasis. At normal or elevated blood glucose concentrations, hormones of the incretin family contribute to an increase in insulin synthesis, as well as its secretion by pancreatic beta cells due to intracellular signaling mechanisms associated with cAMP.
  • GII-1 also contributes to the suppression of increased secretion of glucagon by pancreatic alpha cells.
  • a decrease in the concentration of glucagon against the background of an increase in the concentration of insulin contributes to a decrease in the production of glucose by the liver, which ultimately leads to a decrease in glycemia.
  • This mechanism of action differs from the mechanism of action of sulfonylurea derivatives, which stimulate the release of insulin even at low blood glucose concentrations, which is fraught with the development of sulfonylurea-induced hypoglycemia not only in patients with type 2 diabetes mellitus, but also in healthy individuals.
  • Omeprazole is a weak base, concentrated and converted into an active form in the acidic environment of the secretory tubules of the parietal cells of the gastric mucosa, where it inhibits the enzyme H +, K + -ATPase (proton pump).
  • Omeprazole has a dose-dependent effect on the final stage of hydrochloric acid synthesis and inhibits both basal and stimulated acid secretion in the stomach, regardless of the nature of the stimulus. Promotes an increase in the level of Gastrin in the blood, which, in turn, causes an increase in the regeneration of pancreatic cells.
  • the study used 60 female NOD mice, weighing 18-20 grams, aged 10-11 weeks. At the time of initiation of therapy, the animals were 17-18 weeks old.
  • NOD mice are used as an animal model for type 1 diabetes. Diabetes develops in NOD mice as a result of insulitis, a leukocyte infiltrate of the pancreatic islets. The onset of diabetes is manifested by mild glucosuria and hyperglycemia not associated with fasting. The development of glucosuria begins at 12 weeks of age. In NOD mice, spontaneous diabetes develops at a rate of 60-80% in females and 20-30% in males. Animal source
  • the animals were kept in quarantine for 3 days, in accordance with SOP C-DKI-045-2.
  • the food ration consisted of PK-120 complete compound feed (produced by the Gatcha Feed Mill) ad libitum. Animals received water from the central water supply and had free access to food and water. Food and water were autoclaved.
  • NOD mice are used to model type 1 diabetes. Diabetes in such mice develops as a result of autoimmune insulitis - lymphoplasmacytic infiltration in the islets of Langerhans of the pancreas. NOD mice develop spontaneous insulin-dependent diabetes. The incidence of spontaneous diabetes is 60-80% in females and 20-30% in males at 12 weeks of age.
  • control screening for diabetes was performed for three days according to the following criteria: hyperglycemia: non-fasting (random) blood glucose level >13.9 mM/l) ketonuria: urinary VNV level >1.5 mM/l
  • the level of VNV in the blood was measured.
  • the individuals were prescribed insulin (Lantus) at an initial dose of 1.5 units in the morning and 1 unit in the evening administration.
  • the individuals were prescribed insulin (Lantus) at an initial dose of 1.5 units in the morning and 1.5 units in the evening administration.
  • Blood glucose and urinary ketones were measured after the animals were admitted for 6 weeks three times a week. Blood ketones were measured at 0; 5 and 10 weeks once after the entry of animals into diabetes.
  • Each animal is assigned an individual number, according to which the animal is marked with a coloring label. On the label of a cage of a certain color, groups, study code, name of the head of the study are indicated.
  • the drugs were administered to the animals twice, orally, in a volume of 1 ml in the morning at 10:00-11:00 and in the evening at 18:00-19:00. A 1% starch solution was used as a solvent. The drugs were administered for 70 days.
  • respiratory indicators diffusety breathing, cyanosis, rapid breathing, nasal discharge
  • eye signs (lacrimation, miosis, mydriasis, exophthalmos, ptosis, clouding, ulceris, conjunctivitis, chromodactriorrhea, weakening of the nictitating membrane);
  • Biomaterial sampling is carried out on every first day of a new week.
  • mice in the A+B+C group developed a tumor.
  • the mouse was withdrawn from the study and euthanized in a CO2 chamber until complete respiratory arrest.
  • the probability of tumor development is specific to linear animals and is typical for this line of mice.
  • NOD mice are characterized by spontaneous type 1 diabetes. A marked decrease in the content of insulin in the pancreas occurs in females at the age of 12 weeks. By the 30th week of the study, 90% of the females were shown to be diabetic. The median onset of disease in females is 18 weeks (Oh SH et al., 2017).
  • mice were considered to be animals with a two-replicate glucose level of less than 13.9 mM/L. If a mouse had a blood sugar level above 13.9 mM/L during two consecutive glucose measurements, the animal was considered diabetic.
  • mice with undiagnosed diabetes at the start of the study were included in the analysis of diabetes prevention dynamics.
  • the percentage of non-diabetic healthy animals was obtained by dividing the number of healthy mice at day 70 of therapy by the number of healthy mice at baseline ( Figure 2). It is important to note that this calculation was carried out only in animals with undiagnosed diabetes mellitus during the entire study (mice that entered diabetes and then went into remission were still counted as having entered diabetes).
  • the percentage of non-diabetic animals in the placebo group was 30%, which can be considered the “baseline non-diabetic input parameter” for of this population of NOD mice at 23 weeks of age.
  • the percentage of animals not included in diabetes in group A + B + C was 76.5% ( Figure 3). Based on these calculations, the percentage of sick mice in the A + B + C group was 23.5%, in the Placebo group - 70%.
  • A+B+C therapy prevented the development of diabetes in 66.39% of NOD mice during the 10 weeks of the study.
  • This report presents data from a study of the specific pharmacological activity of a triple combination of drugs (A + B + C) in comparison with placebo in a model of type 1 diabetes mellitus in NOD mice. Data collection for the report was completed on the 70th day from the start of therapy.
  • the number of animals that did not enter diabetes in the Placebo group is significantly less than in the A + B + C group (30% (placebo) vs. 76.5% (A + B + C)); 2.
  • A+B+C treatment prevented the development of diabetes in at least 66.39% of NOD mice during the 10 weeks of the study;

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к эндокринологии. Набор для ежедневного перорального приёма для профилактики сахарного диабета 1 типа включает эффективные количества веществ из 1) группы ингибиторов дипептидилпептидазы (ДПП-4), 2) группы ингибиторов протонного насоса (ИПП), 3) гамма аминомасляной кислоты (ГАМК) или агониста рецепторов ГАМК. Способ профилактики сахарного диабета 1 типа включает введение данных веществ лицам из группы высокого риска развития сахарного диабета 1 типа. Группа изобретений позволяет предотвратить начало заболевания у здоровых лиц из группы высокого риска.

Description

Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. Способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска
Группа изобретений относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть применена для профилактики сахарного диабета 1 типа.
В изобретении предлагается комбинация, содержащая 1) ингибитор дипептидилпептидазы-4 (ДПП-4), 2) ингибитор протонного насоса (ИПП) и 3) гамма-аминомасляную кислоту или агонист рецептора гамма-аминомасляной кислоты. Уникальная комбинация и дозировка этих препаратов приводит к регенерации (восстановлению) 0-клеток поджелудочной железы, что выражается в значительном сокращении числа мышей NOD, заболевающих диабетом. Эта специфическая комбинация также оказалась высокоэффективной в предотвращении развития СД1 у мышей NOD.
Уровень техники
Профилактика диабета 1 типа является предметом многих научных исследований, и эти исследования часто упоминаются в средствах массовой информации и обсуждаются за пределами научной, профессиональной сферы, поскольку многие пациенты с диабетом 1 типа (или их родители) стремятся узнать у врачей о скрининге других членов семьи (особенно детей) и о том, что можно сделать, если член семьи имеет высокий риск развития диабета 1 типа.
Улучшение понимания патогенеза сахарного диабета 1 типа (ранее известного как инсулинозависимый сахарный диабет) позволило рассмотреть возможность вмешательства для замедления процесса заболевания в попытке отсрочить или даже предотвратить начало заболевания.
В отличие от нашего понимания генеза СД1 как «нейропанкреатической эпилепсии» с последующим вмешательством в ее течение, исторические цели профилактики и лечения по сей день ограничиваются только модуляцией иммунной системы.
История проблемы (краткий обзор)
Большинство исследований было выполнено на больных со свежевыявленным диабетом, с целью сохранения остаточной функции бета-клеток. Обычно ее измеряют как площадь под кривой (AUC) секреции инсулина в ответ на стимуляцию. Многие исследования проводятся с участием небольшого числа пациентов и не контролируются должным образом. Следует отметить, что данные о профилактике диабета скудны. Ниже приводится краткий обзор современного состояния проблемы профилактики развития СД1.
Иммунодепрессант Азатиоприн - иммунодепрессивный препарат, подавляющий или предотвращающий Т-клеточные ответы на антигены. В одном рандомизированном двойном слепом исследовании 46 пациентов, получавших Азатиоприн и глюкокортикоиды, инсулин был отменён у 10 из 20 пациентов, получавших лечение, по сравнению с 2 из 20 пациентов в группе плацебо [1]. Данных о профилактике диабета нет.
Эндогенная секреция инсулина (измеряемая как реакция С-пептида плазмы на смешанную пишу) также улучшилась. Однако только у трех пациентов, прошедших курс лечения, через год сохранялась ремиссия. Точно так же неутешительные результаты были отмечены во втором исследовании (2).
Микофенолятмофетил (ММФ) - ни ММФ отдельно, ни в комбинации с даклизумабом не замедляли прогрессирование разрушения бета-клеток при недавно диагностированном диабете 1 типа (3). Данных о профилактике сахарного диабета нет.
Циклоспорин - хотя ремиссии длились дольше, почти всем пациентам снова потребовался инсулин в течение трех лет (4). Данных о профилактике сахарного диабета получено не было.
Лечение моноклональными антителами
Антитела против CD3. Использование в эксперименте на мышах моноклональных антител против CD3 (ОКТЗ) вызывает обратное развитие диабета у мышей (диабета без ожирения, nonobese diabetic, NOD (5)). Однако использование ОКТЗ у людей проблематично из-за значительных побочных эффектов, опосредованных цитокинами.
Теплизумаб наиболее эффективен в сохранении секреции С-пептида при введении на ранних стадиях заболевания (6).
Теплизумаб изучался на пациентах с недавно диагностированным диабетом 1 типа, а также на лицах с высоким риском развития диабета 1 типа. Было показано, что он замедляет клиническое прогрессирование диабета 1 типа, но при недавно диагностированном диабете 1 типа улучшение является умеренным и, по-видимому, временным. Побочные эффекты включают преходящую лимфопению, сыпь, анемию и лихорадку (7).
Профилактика у лиц с высоким риском развития сахарного диабета.
В исследовании со средним периодом наблюдения в течение двух лет однократный 14-дневный курс Теплизумаба сравнивался с плацебо у 76 человек (<18 лет, средний возраст от 13 до 14 лет), которые не страдали диабетом, но имели высокий риск развития сахарного диабета 1 типа (родственники пациента с диабетом 1 типа, положительные по крайней мере на два аутоантитела к диабету и с доказательствами нарушения уровней глюкозы натощак или нарушения толерантности к глюкозе) [8]. Теплизумаб увеличил среднее время до постановки диагноза диабета 1 типа (48,4 месяца по сравнению с 24,4 месяца). Кроме того, диабет 1 типа был диагностирован у меньшего числа лиц, принимавших Теплизумаб (43 против 72 процентов, отношение рисков [ОР] 0,41, 95% ДИ 0,22-0,78).
Отеликсизумаб. Отеликсизумаб - ещё одно моноклональное антитело против CD3 (ChAglyCD3). Многоцентровое исследование включало 80 пациентов с впервые возникшим диабетом типа 1, которым случайным образом назначали Отеликсизумаб в течение шести дней подряд или плацебо со следующими результатами (10):
- Через 6, 12 и 18 месяцев остаточная функция бета- клеток, оцениваемая по высвобождению С-пептида, индуцированному введением глюкагона, лучше сохранялось в группе анти-СОЗ антител. Потребность в инсулине увеличилась в группе плацебо, но не в группе лечения. В подгруппе пациентов с исходной остаточной функцией бета-клеток на уровне выше 50 перцентилей, из 80 пациентов, средняя доза инсулина через 18 месяцев составляла 0,22 и 0,61 международных единиц / кг / день в группе терапии и группе плацебо соответственно.
- Введение антитела к CD3 было связано со значительными побочными эффектами, включая лихорадку после начала инфузий, сыпь и острый мононуклеозо-подобный синдром после окончания терапии.
Ритуксимаб. Ритуксимаб, моноклональное антитело против CD20, использовалось для лечения В-клеточной неоплазии и опосредованных антителами аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит. В предварительном исследовании по определению его безопасности и эффективности в сохранении уровней С-пептида у 87 пациентов с впервые возникшим диабетом 1 типа средняя AUC для уровней С-пептида во время теста на переносимость смешанного питания была значительно выше в группе Ритуксимаба по сравнению с плацебо, группа (0,56 против 0,47 пмоль / мл) (11) Клиническая значимость этой незначительной разницы в AUC неясна. У большего числа пациентов в группе Ритуксимаба по сравнению с группой плацебо развились побочные эффекты (например, лихорадка, сыпь, зуд, тошнота, рвота) после первой инфузии.
Ингибиторы интерлейкина-1. IL-1 - это медиатор врожденного иммунитета, который участвует в патогенезе диабета 1 типа. Было высказано предположение, что ингибирование ИЛ-1 будет предотвращать продолжающееся разрушение бета- клеток при недавно начавшемся диабете 1 типа. Однако рандомизированные испытания, оценивающие монотерапию Анакинрой (антагонистом человеческого рецептора IL-1) или Канакинумабом (человеческое моноклональное антитело против IL-1), не были эффективны в поддержании функции бета-клеток, как показано на примере стимуляции секреции С - пептида стандартной, смешанной пищей (12).
Тимоглобулин. Тимоглобулин или антитимоцитарный глобулин (АТГ) используется при трансплантации органов, но мало что известно о его потенциальных положительных эффектах при диабете 1 типа. Доклинические исследования показали, что лечение антилимфоцитарной сывороткой мышей NOD с недавно начавшимся диабетом может вызвать ремиссию заболевания.
У пациентов с впервые диагностированным диабетом 1 типа лошадиные ATG, по-видимому, продлевали начальную фазу. Плацебо-контролируемое исследование фазы II находится в стадии разработки. Пациенты с впервые диагностированным диабетом типа 1 будут случайным образом распределены на кроличьи поликлональные ATG (Тимоглобулин 6,5 мг / кг, вводимый в течение четырех дней) или плацебо. Первичной конечной точкой будет наличие остаточной эндогенной секреции инсулина через 12 месяцев наблюдения.
Ожидаемый результат состоит в том, что группа ATG будет иметь устойчивую секрецию эндогенного инсулина и будет демонстрировать более низкую суточную потребность в экзогенном инсулине по сравнению с контрольной группой. Это исследование поддерживается как The Immune Tolerance Network, так и TrialNet.
Инсулин. Инсулин, вводимый в преддиабетический период мышам NOD и крысам ВВ, задерживает или предотвращает развитие диабета [13]. Инсулин может действовать как иммуномодулятор у этих животных [14]. В качестве альтернативы, это может позволить бета-клеткам отдохнуть и, следовательно, стать менее уязвимыми для дальнейшей аутоиммунной атаки, поскольку они экспрессируют меньше аутоантигенов.
Была надежда, что эти открытия будут применимы к людям. Однако последующие испытания не показали положительных результатов.
Можно привести следующие примеры.
• В испытании по профилактике диабета (DPT) 339 пациентов с высоким риском диабета 1 типа (братья и сестры пациентов с диабетом с высокими концентрациями сывороточных антител к островковым клеткам и низким острым ответом инсулина на глюкозу) были рандомально распределены для тщательного наблюдения или введения малых доз инсулина (инсулин ultralente, вводимый дважды в день; общая суточная доза 0,25 единиц / кг) плюс ежегодные четырехдневные непрерывные инфузии инсулина [16]. После среднего периода наблюдения 3,7 года кумулятивная частота диабета была аналогичной в группах вмешательства и наблюдения (42 против 41%, соответственно, ОР 0,96, 95% ДИ 0,69-1,34).
• В том же исследовании 372 пациентам с промежуточным (а не высоким) риском диабета 1 типа случайным образом назначали пероральный инсулин (7,5 мг в день) или плацебо [17]. Пероральный инсулин также был неэффективен в отсрочке или профилактике диабета 1 типа (ОР 0,76, 95% ДИ 0,51-1,14). Однако при анализе подгруппы небольшой положительный эффект перорального введения инсулина в профилактике диабета 1 типа был замечен у участников с подтвержденным высоким уровнем аутоантител к инсулину (ИУК) (>80 нЕ / мл) [17] и более сильный эффект у субъектов с уровнем ИУК более 300 нЕ / мл [18].
Последующее испытание было разработано для оценки роли перорального инсулина у родственников пациентов с сахарным диабетом 1 типа, которые были аналогичны пациентам в подгруппе DPT, которые получили очевидное улучшение [19]. В этом исследовании 560 аутоантител-положительных родственников пациентов с сахарным диабетом 1 типа случайным образом получали пероральный инсулин (7,5 мг в день) или плацебо. После среднего периода наблюдения 2,7 года диабет был впоследствии диагностирован у 28,5 и 33 процентов участников, соответственно. Не было существенной разницы во времени до развития диабета 1 типа (ОР 0,87, 95% ДИ 0-1,2).
• В финском испытании инсулина, вводимого через нос, у детей с человеческим лейкоцитарным антигеном (HLA) связанный с риском диабета 1 типа и высоким уровнем как минимум двух типов аутоантител (островковые клетки, инсулин, декарбоксилаза глютаминовой кислоты, протеинтирозинфосфатаза- подобного белка), не было различий в начале диабета 1 типа у пациентов, рандомально назначенных для интраназального введения инсулина по сравнению с плацебо (ОР 1,14, 95% ДИ 0,73-1,77) (20).
Таким образом, введение инсулина в дозах, используемых в этих исследованиях, не задерживало и не предотвращало начало диабета 1 типа у лиц из группы высокого риска. Иммунотерапия GAD65. Декарбоксилаза глутаминовой кислоты, изоформа 65 кило дальтон (GAD65), является основным аутоантигеном у пациентов с типом 1. При введении путем инъекции в преддиабетический период мышам NOD прогрессирование заболевания замедлялось [21]. Однако в рандомизированном исследовании вакцинного состава рекомбинантного человеческого GAD65 (GAD- квасцы) или подкожного плацебо (только квасцы) у детей с впервые установленным диагнозом (в течение 18 месяцев) и у подростков с диабетом 1 типа не было различий в концентрациях С-пептида натощак или потребности в инсулине через 15 месяцев, несмотря на то, что вакцинированные дети демонстрировали GAD-специфический иммунный ответ [22]
В аналогичном исследовании 145 пациентов (в возрасте от 3 до 45 лет) с диагнозом сахарный диабет 1 типа в течение последних трех месяцев были случайным образом распределены для получения трех доз GAD-квасцов, двух доз с третьей дозой плацебо (только квасцы) или трех доз. дозы плацебо [23]. Через год не было разницы в средней AUC концентрации С-пептида в сыворотке во время теста на толерантность к смешанной еде. Во втором испытании, в котором GAD-квасцы или плацебо вводили 334 пациентам в течение трех месяцев после постановки диагноза, концентрации стимулированного С-пептида снизились в одинаковой степени в обеих группах исследования через 15 месяцев наблюдения [24]. Таким образом, более раннее введение GAD65 с квасцами (через 3 месяца после постановки диагноза) не повлияло на первичный результат.
Бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ). Ввиду успеха иммуномодуляции БЦЖ у мышей NOD, БЦЖ была назначена в пилотном исследовании 17 пациентам с впервые диагностированным диабетом 1 типа [25]. Одиннадцать (65 процентов) вошли в ремиссию на срок до 10 месяцев. Этот показатель успеха был значительно выше, чем в историческом контроле, и побочных эффектов не было.
В более крупном исследовании случайным образом 72 пациента с впервые возникшим (менее четырех недель) диабетом типа 1 были рандомизированы для лечения никотинамидом или в комбинации с БЦЖ [26]. Число пациентов в ремиссии в каждой группе было три через три месяца и ни одного через 12 месяцев. Впоследствии сообщалось, что терапия только никотинамидом была неэффективной профилактической терапией [27].
DiaPep277 - в исследовании 35 пациентов с диабетом 1 типа и базовыми концентрациями С-пептида в сыворотке> 0,1 нмоль / л, DiaPep277, иммуномодулирующий пептид, полученный из белка теплового шока 60 кДа, или плацебо давали через ноль, один и шесть месяцев. Через 10 месяцев средние сывороточные концентрации С-пептида не изменились в группе лечения, но снизились в группе плацебо, что свидетельствует о сохранении выработки эндогенного инсулина в группе лечения [28].
Этанерцепт представляет собой рекомбинантный рецептор TNFa, который связывает TNFa и блокирует его биологическую активность. В 24-недельном испытании Этанерцепта по сравнению с плацебо у 18 пациентов с впервые диагностированным диабетом 1 типа у пациентов, которым назначался Этанерцепт, были более низкие значения А1С (5,9 против 7,0 процентов) и большее увеличение AUC С-пептида (увеличение на 39 процентов против снижения на 20 процентов). Необходимы более масштабные исследования для оценки преимуществ и рисков Этанерцепта для профилактики диабета 1 типа. Данных о профилактике диабета нет.
Интерферон альфа. Интерфероны представляют многофункциональные иммуномодулирующие цитокины, которые могут оказывать влияние на каскад цитокинов, включая некоторые противовоспалительные возможности. В 12- месячном испытании перорального человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2а (ИФ-а) по сравнению с плацебо у 128 пациентов с впервые диагностированным диабетом типа 1 пациенты, случайным образом назначенные на ИФ-а (5000 единиц в день), имели меньшую процентную потерю смешанного С- пептид, стимулированный едой (28 против 56 процентов). Однако не было никаких различий в потребностях в А1С или инсулине. Данных о профилактике диабета нет.
Никотинамид. Было обнаружено, что у животных Никотинамид защищает бета-клетки от химического или аутоиммунного повреждения. Считается, что он действует как поглотитель свободных радикалов или восполняет никотинамид- адениндинуклеотид, важный кофермент, в поврежденных клетках, тем самым способствуя репарации ДНК и ограничивая повреждение ДНК.
Однако никотинамид показал неэффективность в большом профилактическом исследовании. В исследовании по борьбе с никотинамидным диабетом (ENDIT) изучались 552 человека в возрасте от 3 до 40 лет с родственником первой степени с диабетом 1 типа, положительными антителами к островковым клеткам и не диабетическим тестом на толерантность к глюкозе; субъекты были случайным образом распределены для приема Никотинамида (1,2 г / м2 в день) или плацебо [43]. После среднего периода наблюдения 3,3 года были замечены следующие результаты:
1. Риск развития диабета был одинаковым в двух группах: 82 из 274 (30 процентов) и 77 из 275 (28 процентов) в группах лечения и плацебо, соответственно (HR 1,07).
2. Результаты были такими же после поправки на возраст, статус толерантности к глюкозе, статус антител и инсулиновый ответ первой фазы при внутривенном тесте толерантности к глюкозе.
Известна (RU 2694527) комбинация для терапии больных сахарным диабетом 1 типа, обеспечивающая регенерацию бета-клеток поджелудочной железы, характеризующаяся тем, что состоит из препарата группы ингибиторов дипептидилпептидазы (ДПП-4), содержащего терапевтически эффективное количество ингибитора ДПП-4, препарата группы ингибиторов протонного насоса (ИПП), содержащего терапевтически эффективное количество ИПП, и препарат гамма аминомасляной кислоты (ГАМК) или агониста рецепторов гамма аминомасляной кислоты.
Данная комбинация применяется для лечения уже возникшего заболевания.
Подводя итоги обзора литературы, следует отметить, что все исследования, посвященные профилактике СД1, направлены только на иммунную систему. Действующие вещества были протестированы с целью сохранения функции бета- клеток, но только для некоторых из них изучалась способность предотвращать СД 1-го типа. Результаты в основном неутешительны или недостаточны для однозначных выводов. Пока профилактика диабета остается проблемой.
Проблемой является неэффективность профилактики сахарного диабета. Производится лечение уже возникшего заболевания, какие-либо профилактические меры для людей из группы риска заболевания сахарного диабета 1 типа неэффективны.
Нами предлагается превентивный приём для группы высокого риска заболевания сахарным диабетом 1 типа комбинации из трёх компонентов: 1) препарат группы ингибиторов дипептидилпептидазы (ДПП-4), 2) препарат группы ингибиторов протонного насоса (ИПП), 3) препарат гамма аминомасляной кислоты (ГАМК) или агониста рецепторов гамма аминомасляной кислоты.
Предлагается пероральная комбинация для профилактики сахарного диабета 1 типа, включающая действующие вещества из 1) группы ингибиторов дипептидилпептидазы (ДПП-4), 2) группы ингибиторов протонного насоса (ИПП), 3) гамма аминомасляной кислоты (ГАМК) или агониста рецепторов ГАМК.
Предпочтительно пероральная комбинация включает терапевтически эффективное количество ингибитора ДПП-4, составляющее суточную дозу от 25 до 100 мг, терапевтически эффективное количество ИПП, составляющее суточную дозу от 10 до 40 мг и терапевтически эффективное колечество препарата ГАМК или агониста рецепторов ГАМК, составляющее суточную дозу от 125 до 1500 мг.
Предпочтительно пероральная комбинация характеризуется тем, что препарат группы ингибиторов ДПП-4 представляет собой ситаглиптин, препарат группы ИПП - омепразол.
Предлагается применение пероральной комбинации, включающей действующие вещества из 1) группы ингибиторов ДПП-4, 2) группы ИПП, 3) ГАМК или агониста рецепторов ГАМК, для профилактики сахарного диабета 1 типа.
Предлагается способ профилактики сахарного диабета 1 типа, включающий введение лицам из группы высокого риска развития сахарного диабета 1 типа комбинации по и.1.
К группе высокого риска развития сахарного диабета 1 типа относят имеющих по меньшей мере одного родителя и/или сибса и/или ребёнка с установленным диагнозом «сахарный диабет 1 типа».
При осуществлении способа профилактики сахарного диабета 1 типа предпочтительно вводят в сутки от 25 до 100 мг ингибитора ДПП-4, от 10 до 40 мг ИПП, от 125 до 1500 мг ГАМК или агониста рецепторов ГАМК.
Целью группы изобретений является создание комбинации веществ, которая приводит к длительному эффекту предотвращения диабета у лиц с высоким риском развития сахарного диабета 1 типа. Эта цель достигается за счет использования комбинации, состоящей из ингибитора дипептипидипептидазы-4 (DPP-4), ингибитора протонной помпы (PPI) и агониста рецепторов гамма-аминомасляной кислоты или гамма-аминомасляной кислоты.
Техническим результатом является сохранение здоровья, предотвращение начала заболевания у лиц, относящихся к группе высокого риска развития сахарного диабета 1 типа.
Чтобы подтвердить предложение относительно профилактики терапии СД1, было проведено доклиническое исследование.
Введение комбинации из трех лекарственных средств согласно настоящей группе изобретений предлагается для профилактики диабета 1 типа (TIDM).
Первый препарат предложенной комбинации относится к группе ингибиторов ДПП-4 (ДПП41). Препараты группы DPP-4i (например, ситаглиптин, вилдаглиптин и саксаглиптин и другие представители данной группы препаратов) помогают в регенерации 0-клеток. Это связано, в частности, с тем фактом, что препараты семейства DPP-4i способны модулировать иммунный ответ, ограничивая аутоиммунную активность, уменьшая воспалительный компонент (инсулит) и, в конечном итоге, обеспечивая регенерацию 0-клеток поджелудочной железы. Ингибиторы ДПП-4 (ДПП-41) блокируют активность фермента ДПП-4, что приводит к увеличению как концентрации, так и продолжительности действия ГПП- 1 и GIP. Ингибиторы ДПП-4 принимаются перорально и обеспечивают здоровый физиологический уровень инкретинов в крови. Критически важной особенностью влияния GLP- 1 на функцию 0- и а- клеток является его глюкозозависимая природа. Это означает, что GLP-1 стимулирует секрецию инсулина и, с другой стороны, подавляет выработку глюкагона только в условиях гипергликемии. Как только уровень глюкозы в плазме падает до нормального уровня, вышеупомянутые эффекты GLP- 1 ослабевают, что делает его надежным физиологическим механизмом для предотвращения развития гипогликемического состояния.
Ингибитор ДПП-4 вводят перорально в суточной дозе от 25 до 100 мг в зависимости от массы тела. Примерами лекарственных средств этой группы, которые подходят для использования в данном изобретении, являются: алоглиптин, линаглиптин, саксаглиптин, ситаглиптин и вилдаглиптин. Использование ситаглиптина (ситаглиптина), в частности, предпочтительно при практическом применении этого изобретения. Это могут быть, например, таблетки ситаглиптина производства различных компаний.
Препарат Ситаглиптин (Янувия) зарегистрирован во многих странах мира. Ситаглиптин может служить классическим представителем семейства ингибиторов ДПП-4. Ситаглиптин увеличивает концентрацию двух известных гормонов семейства инкретинов: GLP-1 и глюкозозависимый инсулинотропный пептид (GIP). Г ормоны семейства инкретинов секретируются в кишечнике в течение дня, причем их уровень повышается в ответ на прием пищи. Инкретины являются частью внутренней физиологической системы регуляции гомеостаза глюкозы. При нормальном или повышенном уровне глюкозы в крови гормоны семейства инкретинов способствуют увеличению синтеза инсулина, а также его секреции бета- клетками поджелудочной железы из-за внутриклеточных сигнальных механизмов, связанных с циклическим АМФ. Двойное слепое рандомизированное перекрестное 8-недельное предварительное исследование у взрослых пациентов с диабетом 1 типа показало, что препарат значительно снизил уровень глюкозы в крови, несмотря на снижение общей и обеденной дозы инсулина (DiabetMed. 2011 Oct; 28 (10): 1176-81 Влияние ситаглиптина на контроль глюкозы у взрослого пациента с диабетом 1 типа: пилотное, двойное слепое, рандомизированное, перекрестное исследование Ellis SL, Moser EG, Snell-Bergeon JK, Rodionova AS, Hazenfield RM, Гарг C.K.).
Кроме того, были предприняты попытки создания комбинированных препаратов на основе ситаглиптина и других ингибиторов ДПП-4 для лечения диабета с учетом того, что дефицит инсулина в организме развивается из-за его недостаточной секреции 0-клетками островки Лангерганса в поджелудочной железе.
В частности, в статье Griffin KJ, Thompson РА, Gottschalk М, Kyllo JH, Rabinovitch А. Комбинированная терапия ситаглиптином и лансопразолом у пациентов с недавно начавшимся сахарным диабетом 1 типа (REPAIR-T1D): 12- месячные результаты мультицентрового исследования рандомизированное плацебо- контролируемое исследование фазы 2. // Ланцет Диабет Эндокринол, 2014 Сентябрь; 2 (9): 710-8, предполагается, что ситаглиптин и лансопразол будут поддерживать функцию бета- клеток у пациентов с диабетом 1 типа.
Патент США № 9463174 раскрывает способ лечения диабета 1 типа (T1D), включающий введение терапевтически эффективного количества гамма- аминомасляной кислоты (ГАМК) и эффективного количества ингибитора DPP-4, например, ситаглиптина, пациенту с СД1. ГАМК и ингибитор ДПП-4 используются в форме однократной или раздельной дозировки. Дозировка включает ГАМК в количестве от 0,002 до 2 мг / кг массы тела. Эта комбинация не приводит к значительному восстановлению бета-клеток поджелудочной железы. Данных о профилактике диабета с помощью этих комбинаций препаратов нет. Ни эти вещества, ни их комбинации не были предложены для использования в профилактике СД Его типа. . Второй препарат предложенной комбинации относится к группе ИПП. Ингибитор протонной помпы назначают внутрь в суточной дозе от 10 до 40 мг в зависимости от массы тела. Ингибиторы протонной помпы могут быть выбраны, например, из омепразола, пантопразола, лансопразола, рабепразола и эзомепразола. Омепразол является предпочтительным в практике настоящего изобретения, например, в форме пилюль или капсул.
Третий препарат из предложенной комбинации - гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), а также другие агонисты рецепторов гамма-аминомасляной кислоты. Препарат назначают в суточной дозе от 125 до 1500 мг в зависимости от массы тела. Можно использовать капсулы из ГАМК, желатина или целлюлозы (US5698155) или таблетки (аминалон). Вместо ГАМК также можно использовать агонисты ГАМК, такие как баклофен, фенибут, пантогам, и противоэпилептические препараты, такие как Вальпроевая кислота, Депалепт, Топамакс, Карбамазепин и медицинский каннабис.
Пероральные формы включают любые фармацевтически приемлемые лекарственные формы, порошки, гранулы, капсулы, таблетки, суспензии микрокапсул и тому подобное. Лекарства можно использовать отдельно или в разовой дозировке, форме, например, в виде капсул. Технический результат изобретения заключается в том, что введение препаратов в этой комбинации позволяет значительно снизить потребность в инсулине, а в некоторых случаях даже можно полностью прекратить инъекции инсулина.
ГАМК (гамма-аминомасляная кислота) влияет как на а, так и на 0-клетки, их функции и жизнеспособность поджелудочной железы в целом. Это вещество широко используется в качестве пищевой добавки. В а- клетках ГАМК вызывает гиперполяризацию мембраны и подавляет секрецию Глюкагона, тогда как в 0- клетках она вызывает деполяризацию мембраны и увеличивает выработку инсулина.
Кроме того, ГАМК оказывает разнонаправленное положительное действие на 0-клетки, которое включает стимуляцию пролиферации клеток и противодействие апоптозу. Ингибиторы протонного насоса помпы ингибируют Na + / К + -АТФазу (протонный насос) на апикальной мембране париетальных клеток слизистой оболочки желудка и обеспечивают достижение клинической, эндоскопической ремиссии при всех кислотозависимых заболеваниях, в том числе требующих длительной или непрерывной терапии. В течение длительного периода в течение дня они поддерживают значения pH в желудке в пределах, благоприятных для заживления язв. Общий эффект фармакологического действия препаратов этой группы - увеличение концентрации гастрина в крови и ткани поджелудочной железы. Гастрин - естественный стимулятор восстановления (регенерации) клеток поджелудочной железы.
В свете вышесказанного, применение тройной терапии (DPP-4i + GABA + PPi) является многообещающим для поддержания функции поджелудочной железы и для профилактики TIDM.
Дополнительно к описанию группы изобретений прилагаются выдержки из отчёта об экспериментальном изучении фармакологической активности тройственной комбинации препаратов на 16 л.
Литература
1. Immunosuppression with azathioprine and prednisone in recent-onset insulin-dependent diabetes mellitus Silverstein J, Maclaren N, Riley W, Spillar R, Radjenovic D, Johnson SN Engl J Med. 1988;319(10):599
2. Double blind controlled trial of azathioprine in children with newly diagnosed type I diabetes. Cook JJ, Hudson I, Harrison LC, Dean B, Colman PG, Werther GA, Warne GL, Court JM Diabetes. 1989;38(6):779.
3. Gottlieb PA, Quinlan S, Krause-Steinrauf H, et al. Failure to preserve betacell function with mycophenolate mofetil and daclizumab combined therapy in patients with new- onset type 1 diabetes. Diabetes Care 2010; 33:826
4. Limited duration of remission of insulin dependency in children with recent overt type I diabetes treated with low-dose cyclosporin. Bougneres PF, Eandais P, Boisson C, Carel JC, Frament N, Boitard C, Chaussain JE, Bach JF Diabetes. 1990;39 (10): 1264. 5. Anti-CD3 antibody induces long-term remission of overt autoimmunity in nonobese diabetic mice.Chatenoud L, Thervet E, Primo J, Bach JF Proc Natl Acad Sci U S A. 1994;91(1): 123.
6. Teplizumab for treatment of type 1 diabetes (Protegestudy): 1-year results from a randomised, placebo-controlled trial. Sherry N, Hagopian W, Ludvigsson J, Jain SM, Wahlen J, Ferry RJ Jr, Bode B, Aronoff S, Holland C, Carlin D, King KE, Wilder RE, Pillemer S, Bonvini E, Johnson S, Stein KE, Koenig S, Herold КС, Daifotis AG, ProtegeTrial Investigators Lancet. 2011;378(9790):487. Epub 2011 Jun 28.
7. eplizumab preserves C-peptide in recent-onset type 1 diabetes: two-year results from the randomized, placebo-controlled Protegetrial. Hagopian W, Ferry RJ Jr, Sherry N, Carlin D, Bonvini E, Johnson S, Stein KE, Koenig S, Daifotis AG, Herold КС, Ludvigsson J, ProtegeTrial Investigators Diabetes. 2013;62(l l):3901. Epub 2013 Jun 25
8. Herold КС, Bundy BN, Long SA, et al. An Anti-CD3 Antibody, Teplizumab, in Relatives at Risk for Type 1 Diabetes. N Engl J Med 2019; 381:603.
9. An Anti-CD3 Antibody, Teplizumab, in Relatives at Risk for Type 1 Diabetes. Herold КС, Bundy BN, Long SA, Bluestone JA, DiMeglio LA, Dufort MJ, Gitelman SE, Gottlieb PA, Krischer JP, Linsley PS, Marks JB, Moore W, Moran A, Rodriguez H, Russell WE, Schatz D, Skyler JS, Tsalikian E, Wherrett DK, Ziegler AG, Greenbaum CJ, Type 1 Diabetes TrialNet Study Group N Engl J Med. 2019;381(7):603. Epub 2019 Jun 9
10. Insulin needs after CD3-antibody therapy in new-onset type 1 diabetes. Keymeulen B, Vandemeulebroucke E, Ziegler AG, Mathieu C, Kaufman L, Hale G, Gorus F, Goldman M, Walter M, Candon S, Schandene L, Crenier L, De Block C, Seigneurin JM, De Pauw P, Pierard D, Weets I, Rebello P, Bird P, Berrie E, Frewin M, Waldmann H, Bach JF, Pipeleers D, Chatenoud L N Engl J Med. 2005;352(25):2598
11. Pescovitz MD, Greenbaum CJ, Krause-Steinrauf H, et al. Rituximab, B- lymphocyte depletion, and preservation of beta-cell function. N Engl J Med 2009; 361:2143
12. Moran A, Bundy B, Becker DJ, et al. Interleukin- 1 antagonism in type 1 diabetes of recent onset: two multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled trials. Lancet 2013; 381:1905. 13. Muir A, Peck A, Clare-Salzler M, et al. Insulin immunization of nonobese diabetic mice induces a protective insulitis characterized by diminished intraislet interferon-gamma transcription. J Clin Invest 1995; 95:628.
Vlahos WD, Seemayer TA, Yale JF. Diabetes prevention in BB rats by inhibition of endogenous insulin secretion. Metabolism 1991; 40:825
14. Peakman M, Hussain MJ, Millward BA, et al. Effect of initiation of insulin therapy on T-lymphocyte activation in type 1 diabetes. Diabet Med 1990; 7:327
15. [Aaen K, Rygaard J, Josef sen K, et al. Dependence of antigen expression on functional state of beta-cells. Diabetes 1990; 39:697
16. Diabetes Prevention Trial— Type 1 Diabetes Study Group. Effects of insulin in relatives of patients with type 1 diabetes mellitus. N Engl J Med 2002; 346:1685
17. Skyler JS, Krischer JP, Wolfsdorf J, et al. Effects of oral insulin in relatives of patients with type 1 diabetes: The Diabetes Prevention Trial— Type 1. Diabetes Care 2005; 28:1068
18. Skyler JS, Type 1 Diabetes TrialNet Study Group. Update on worldwide efforts to prevent type 1 diabetes. Ann N Y Acad Sci 2008; 1150:190.
19. Writing Committee for the Type 1 Diabetes TrialNet Oral Insulin Study Group, Krischer JP, Schatz DA, et al. Effect of Oral Insulin on Prevention of Diabetes in Relatives of Patients With Type 1 Diabetes: A Randomized Clinical Trial. JAMA 2017; 318:1891.
20. Nanto-Salonen K, Kupila A, Simell S, et al. Nasal insulin to prevent type 1 diabetes in children with HLA genotypes and autoantibodies conferring increased risk of disease: a double-blind, randomised controlled trial. Lancet 2008; 372:1746
21. Tisch R, Liblau RS, Yang XD, et al. Induction of GAD65- specific regulatory T-cells inhibits ongoing autoimmune diabetes in nonobese diabetic mice. Diabetes 1998; 47:894.
22. Ludvigsson J, Faresjo M, Hjorth M, et al. GAD treatment and insulin secretion in recent-onset type 1 . diabetes. N Engl J Med 2008; 359: 1909
23. Wherrett DK, Bundy B, Becker DJ, et al. Antigen-based therapy with glutamic acid decarboxylase (GAD) vaccine in patients with recent-onset type 1 diabetes: a randomized double-blind trial. Lancet 2011; 378:319 24. Ludvigsson J, Krisky D, Casas R, et al. GAD65 antigen therapy in recently diagnosed type 1 diabetes mellitus. N Engl J Med 2012; 366:433
25. hehadeh N, Calcinaro F, Bradley BJ, et al. Effect of adjuvant therapy on development of diabetes in mouse and man. Lancet 1994; 343:706.
26. Pozzilli P. BCG vaccine in insulin-dependent diabetes mellitus. IMDIAB Group. Lancet 1997; 349:1520.
27. Gale EA, Bingley PJ, Emmett CL, et al. European Nicotinamide Diabetes Intervention Trial (ENDIT): a randomized controlled trial of intervention before the onset of type 1 diabetes. Lancet 2004; 363:925.
28. Raz I, Elias D, Avron A, et al. Beta-cell function in new-onset type 1 diabetes and immunomodulation with a heat-shock protein peptide (DiaPep277): a randomized, double-blind, phase II trial. Lancet 2001; 358:1749.
Выдержки из Отчёта об экспериментальном изучении фармакологической активности тройственной комбинации препаратов.
ОСНОВНЫЕ ДАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
26.10.2020 - дата инициации исследования.
30.10.2020 - дата начала эксперимента.
25.05.2021 - дата окончания эксперимента.
11.06.2021 - дата окончания исследования.
ДАННЫЕ ОБ ИССЛЕДУЕМОМ ВЕЩЕСТВЕ
Препарат А
Серия'. 471020
Годен до: ноябрь 2023 г.
Дата выпуска: ноябрь 2020 г. (Срок годности 3 года)
Торговое наименование: Аминалон
Международное непатентованное название: Гамма-аминомасляная кислота
Лекарственная форма: Таблетки, покрытые пленочной оболочкой
Состав: Аминалон, таб. 250 мг, 100 шт.
Figure imgf000020_0001
Описание: Круглые двояковыпуклые таблетки, покрытые пленочной оболочкой белого или почти белого цвета. На поперечном разрезе ядро белого или почти белого цвета. Гамма- аминобутировая кислота (GABA, гамма-аминомасляная кислота) является биогенным амином, восстанавливает процессы метаболизма в головном мозге, способствует утилизации глюкозы мозгом и удалению из него токсических продуктов обмена, обеспечивает нормализацию динамики нервных процессов в головном мозге. Повышает продуктивность мышления, улучшает память, оказывает мягкое психостимулирующее действие, благоприятно влияет на восстановление движений и речи после нарушения мозгового кровообращения. Способствует снижению и стабилизации повышенного АД и уменьшению субъективных симптомов артериальной гипертензии (головокружение, нарушение сна).
Оказывает умеренное антигипоксическое и противосудорожное действие. У больных сахарным диабетом снижает содержание глюкозы, при нормальном содержании глюкозы в крови оказывает обратный эффект (за счет гликогенолиза).
Препарат В
Серия'.30320
Годен до: март 2023 г.
Дата выпуска: март 2020 г
Торговое наименование: Янувия
Международное непатентованное название: Ситаглиптин
Лекарственная форма: Таблетки, покрытые пленочной оболочкой Состав: Янувия, таб. 100 мг, 28 шт действующее вещество:
Figure imgf000021_0001
128,5 ситаглиптина фосфата моногидрат мг
(эквивалентно 100 мг ситаглиптина) вспомогательные вещества: МКЦ — 123,8 мг; кальция гидрофосфат
Figure imgf000021_0002
неизмельченный — 123,8 мг; кроскармеллоза натрия — 8 мг; магния стеарат — 4 мг; натрия стеарилфумарат — 12 мг оболочка таблетки: Опадрай® II бежевый 85F17438 (поливиниловый спирт — 40%, титана диоксид (Е171) — 21,56%, макрогол 3350 (ПЭГ) — 20,2%, тальк — 14,8%, краситель железа оксид желтый (Е172) — 3,07%, краситель железа оксид красный (Е172) — 0,37%) — 16 мг
Figure imgf000021_0003
Описание: Таблетки, 100 мг: круглые, двояковыпуклые, бежевого цвета, покрытые пленочной оболочкой, с гравировкой «277» на одной стороне и гладкие на другой.
Препарат Янувия® (ситаглиптин) является активным при пероральном приеме, высокоселективным ингибитором фермента Д1111-4, предназначенным для лечения сахарного диабета типа 2. Ситаглиптин отличается по химической структуре и фармакологическому действию от аналогов Г1П1-1, инсулина, производных сульфонилмочевины, бигуанидов, агонистов гамма-рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом (PPAR-y), ингибиторов альфа-глюкозидазы, аналогов амилина. Ингибируя Д1111-4, ситаглиптин повышает концентрацию двух гормонов семейства инкретинов: ГИИ-1 и ГИИ. Гормоны семейства инкретинов секретируются в кишечнике в течение суток, их концентрация повышается в ответ на прием пищи. Инкретины являются частью внутренней физиологической системы регуляции гомеостаза глюкозы. При нормальной или повышенной концентрации глюкозы в крови гормоны семейства инкретинов способствуют увеличению синтеза инсулина, а также его секреции бета-клетками поджелудочной железы за счет сигнальных внутриклеточных механизмов, ассоциированных с цАМФ.
ГИИ-1 также способствует подавлению повышенной секреции глюкагона альфа- клетками поджелудочной железы. Снижение концентрации глюкагона на фоне повышения концентрации инсулина способствует уменьшению продукции глюкозы печенью, что в итоге приводит к уменьшению гликемии. Этот механизм действия отличается от механизма действия производных сульфонилмочевины, которые стимулируют высвобождение инсулина и при низкой концентрации глюкозы в крови, что чревато развитием сульфонил- индуцированной гипогликемии не только у больных сахарным диабетом типа 2, но и у здоровых лиц.
У пациентов с сахарным диабетом типа 2 прием одной дозы препарата Янувия® приводит к ингибированию активности фермента Д1111-4 в течение 24 ч, что приводит к увеличению концентрации циркулирующих инкретинов ГИИ-1 и ГИИ в 2-3 раза, нарастанию плазменной концентрации инсулина и С-пептида, снижению концентрации глюкагона в плазме крови, уменьшению гликемии натощак, а также после нагрузки глюкозой или пищевой нагрузки.
Препарат С
Серия: 16191
Годен до: май 2022 г
Дата выпуска: май 2020 г. (Срок годности 2 года)
Торговое наименование: Омепразол-Тева
Международное непатентованное название: Омепразол
Лекарственная форма: Капсулы кишечнорастворимые Состав:
Омепразол-Тева, капе. 20 мг, 28 шт.
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000023_0001
Описание: Капсулы кишечнорастворимые белые непрозрачные твердые желатиновые, №2; черными чернилами нанесены на крышечке "О", на корпусе - "20"; содержимое капсул - микропеллеты от белого до белого с желтоватым или розоватым оттенком цвета. Омепразол является слабым основанием, концентрируется и конвертируется в активную форму в кислой среде секреторных канальцев париетальных клеток слизистой оболочки желудка, где ингибирует фермент Н+, К+-АТФазу (протонный насос). Омепразол оказывает дозозависимое действие на заключительный этап синтеза соляной кислоты и ингибирует как базальную, так и стимулированную секрецию кислоты в желудке, независимо от природы раздражителя. Способствует повышению уровня Гастрина в крови, что, в свою очередь, вызывает усиление регенерации клеток поджелудочной железы.
ТЕСТ-СИСТЕМА
Вид, количество, пол, возраст животных
В исследовании использовано 60 самок NOD мышей, массой 18-20 грамм, возрастом 10-11 недель. На момент начала терапии животные достигли возраста 17-18 недель.
Обоснование выбора вида животных
NOD мыши используются в качестве животной модели для диабета 1-го типа. Диабет развивается у NOD мышей в результате инсулита, лейкоцитарного инфильтрата островков поджелудочной железы. Начало диабета проявляется умеренной глюкозурией и гипергликемией, не связанной с голоданием. Развитие глюкозурии начинается с 12- недельного возраста. У мышей NOD спонтанный диабет развивается с частотой 60-80% у самок и 20-30% у самцов. Источник получения животных
The Jackson lab, Maine, USA через дистрибьютера ООО «Лаборатория БИОТЕХ- ИНВИВО».
Карантин/Акклиматизация
Животных содержали в карантине 3-е суток, в соответствии с СОП Ц-ДКИ-045-2.
Условия содержания животных
Во время эксперимента животные содержались в контролируемых условиях:
• температура окружающего воздуха 20-26°С;
• относительная влажность 55± 15 %;
• смена светового периода (08:00-20:00 - день, 20:00-08:00 - ночь).
Санитарные мероприятия проведены в соответствии с СОП Ц-СОК-058-2.
Подстил
В качестве подстила были использованы автоклавированные опилки мягких нехвойных пород древесины (ООО «Лабораторкорм», Россия).
Корм и вода
Пищевой рацион состоял из полнорационного комбикорма “ПК- 120” (производства Г атчинского Комбикормового завода) ad libitum. Животные получали воду из центрального водопровода и имели свободный доступ к корму и воде. Корм и воду автоклавировали.
Клетки для содержания животных
Животных содержали в поликарбонатных клетках, системы ИВК-Вент-Био-1М с индивидуальной вентиляцией, на подстиле, оборудованных стальными решетчатыми крышками с кормовым углублением, стальными разделителями для корма и стальными держателями этикеток. Количество животных в одной клетке - 5 шт.
Материалы и оборудование, необходимые для проведения исследования
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ
Идентификация животных и распределение по группам
NOD мыши используются для моделирования диабета 1 типа. Диабет у таких мышей развивается в результате аутоиммунного инсулита - лимфоплазмоцитарной инфильтрации в островках Лангерганса поджелудочной железы. У NOD мышей возникает спонтанный инсулинозависимый диабет. Частота спонтанного диабета составляет 60-80% у самок и 20- 30% у самцов на 12 недельный возраст.
Исследование было начато при подтверждении диабета у 30% особей. Для этого три раза в неделю осуществляли скрининг гликемии и кетонурии у животных. После того, как было набрано 30% особей (по 45 из общего числа всех животных) с диагнозом диабета, были сформированы гомогенные группы с одинаковым количеством животных, заболевших диабетом (30% животных с диабетом в группе).
Животных распределяли по группам лечения, в соответствии с комбинациями вводимых препаратов (Таблица 1), случайным образом.
После формирования групп проводили контрольный скрининг диабета в течение трех дней по следующим критериям: гипергликемия: не-тощаковый (рандомалъный) уровень глюкозы в крови >13,9 мМ/л) кетонурия: уровень ВНВ в моче >1,5 мМ/л
Перед первым введением препаратов проводили измерение уровня ВНВ в крови.
Поскольку утренние часы характеризуются максимальной инсулинорезистентностью, заборы крови и мочи производили утром с 8:00 до 11 :00.
Терминология :
Г ипергл икемия, а также кетонурия были подтверждены в течение двух последующих дней (с интервалом 24 часа)
Критерии постановки диагноза диабета:
- рандомальный сахар более 13.9 мМ/л в двух повторных измерениях.
При этом, если у особи впервые уровень глюкозы более 13.9 мМ/л, следующий замер был осуществлен через 24 часа.
-при превышении уровня сахара крови от 30 мМ/л до 33,3 мМ/л, особям назначен инсулин (Lantus) в начальной дозе 1,5 единицы в сутки.
-при превышении уровня сахара крови свыше 33,3 мМ/л, особям назначен инсулин (Lantus) в начальной дозе 1,5 единицы в утренние часы и 1 единица в вечерние часы введения.
-при превышении уровня сахара крови (в двух повторных измерениях) свыше 33,3 мМ/л, особям назначен инсулин (Lantus) в начальной дозе 1,5 единицы в утренние часы и 1,5 единицы в вечерние часы введения.
-при превышении уровня сахара крови свыше 33,3 мМ/л и/или превышении уровня кетонов в моче свыше 2 мМ/л, особям назначен инсулин (Lantus) в начальной дозе 1,5 единицы в утренние часы и 1,5 единицы в вечерние часы введения. Решение о поддерживающей инсулинотерапии и её длительности принималось индивидуально, для каждого животного. Критерии ремиссии диабета-.
- снижение рандомальных сахаров ниже 13.9 мМ/л при двух повторных замерах
- снятие животных с инсулинотерапии.
Критерий снижения тяжести диабета:
- снижение рандомальных сахаров ниже 33,3 мМ/л при двух повторных замерах;
- снижение рандомальных сахаров ниже 30 мМ/л при двух повторных замерах;
Глюкозу в крови и кетоны в моче измеряли после поступления животных в течение 6 недель три раза в неделю. Кетоны в крови измеряли на 0; 5 и 10 неделю однократно после вхождения животных в диабет.
Каждому животному присвоен индивидуальный номер, в соответствии с которым животное помечено с помощью красящей метки. На этикетке клетки определенного цвета указаны группы, код исследования, ФИО руководителя исследования.
Распределение животных по группам при изучении специфической фармакологической активности тройственной терапии (ТТ) на модели диабета 1 типа у NOD мышей
Figure imgf000027_0001
Процедура введения вещества
Препараты вводили животным двукратно, перорально, в объеме 1 мл утром в 10:00- 11 :00 и вечером в 18:00-19:00. В качестве растворителя использовали 1% раствор крахмала. Препараты вводились в течение 70 дней.
Период наблюдения
Наблюдение за животными составило 10 недель (70 дней) с момента начала лечения.
НАБЛЮДЕНИЯ И ИЗМЕРЕНИЯ В ХОДЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Масса тела
Животных взвешивали в момент формирования групп, а также каждую неделю на протяжении всего исследования.
8Л. Клинический осмотр
На протяжении всего исследования проводили клинический осмотр животных:
• количество и сроки гибели животных (при наличии таковых);
• респираторные показатели (затрудненное дыхание, цианоз, учащенное дыхание, выделения из носа);
• двигательная активность (повышенная/пониженная, сонливость, потеря равновесия, чувствительности, каталепсия, атаксия, необычные передвижения, прострация, тремор, фасцикуляция;
• конвульсии (клонические, тонические, тонико-клонические, асфиктические);
• рефлексы (корнеальный, равновесие, миотатический, световой, рефлекс испуга);
• глазные признаки (слезотечение, миоз, мидриаз, экзофтальм, птоз, помутнение, ирит, конъюнктивит, хромодактриорея, ослабление мигательной мембраны);
• повышенная саливация;
• состояние шерстного покрова (пило- лейомиома, алопеция);
• аналгезия;
• мышечный тонус (гипотония, гипертония);
• желудочно-кишечные показатели (мягкий стул, диарея, рвота, полиурия, ринорея);
Клинические анализы Для определения эффективности тройной терапии (ТТ), три раза в неделю, на протяжении всего исследования, у животных производили замеры уровня глюкозы в крови с помощью тест-полосок Акку-Чек. Уровень бета- гидроксибутирата (В НВ) в крови определяли на 0; 5 и 10 неделю. Уровень кетонов в моче определяли три раза в неделю с помощью хромогенных тест-полосок.
Протокол исследования
Формирование экспериментальных групп проведено на 7 сутки после карантина и после того, как было набрано более 30% особей (более 45 из общего числа всех животных) с диагнозом диабета. Перечень необходимых исследований и вмешательств указан ниже.
Г рафик процедур и диагностических тестов, проводимых при изучении специфической фармакологической активности тройной терапии (ТТ) на модели диабета 1 типа у NOD мышей.
Забор биоматериала производиться на каждый первый день новой недели.
Figure imgf000028_0001
Анализ данных
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М) и стандартную ошибку среднего (SEM) или стандартное отклонение (SD).
Гомогенность выборок (равенство дисперсий трех сравниваемых групп в каждом эксперименте) проверяли с помощью критерия Бартлетта (Bartlett).
В случае подтверждения нулевой гипотезы о равенстве групповых дисперсий, и после успешной проверки других допущений, для определения значимости различий групповых средних использовали однофакторный дисперсионный анализ ANOVA. При этом, если нулевая гипотеза ANOVA о равенстве генеральных средних отвергалась, последующее попарное сравнение опытных групп с контрольной проводилось с помощью теста Даннета (Dunnett).
В случае отклонения нулевой гипотезы о равенстве групповых дисперсий, или неуспешной проверки других допущений для применения ANOVA, для определения значимости различий групповых медиан использовали непараметрический критерий Краскела-Уоллиса (Kruskal-Wallis). При этом, если нулевая гипотеза о равенстве генеральных медиан отвергалась, последующее попарное сравнение опытных групп с контрольной проводилось с помощью непараметрического критерия Данна (Dunn).
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Statistica 12 для Windows 10.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Клинический осмотр
Во всех группах животные с уровнем глюкозы до 30 мМ/л выглядели здоровыми, активно поедали корм, адекватно реагировали на раздражители, проявляли исследовательский интерес. Шерстный покров густой, ровный и блестящий, плотно прилегал к поверхности тела, выпадения или ломкости шерсти не выявлено. Мышечный тонус не отличался повышенной возбудимостью. Ушные раковины без корок, не воспалены, подергиваний не замечено. Зубы обычного цвета, без поломок. Мыши были средней упитанности, истощением не страдали. Область живота в объеме не увеличена. Дыхание ровное, незатрудненное. Слюноотделение в норме. Частота мочеиспускания, цвет мочи, желудочно-кишечные показатели, мышечный тонус, рефлексы соответствовали физиологической норме. Поведение опытных животных не отличалось от контрольных.
Животные с уровнем глюкозы выше 30 мМ/л проявляли апатию, малоподвижность и неохотно поедали корм.
Животным с уровнем глюкозы выше детектируемого (33,3 мМ/л) давали 1,5 ед инсулина в качестве поддерживающей терапии.
Через 26 дней после старта исследования в группе А+В+С у одной мыши развилась опухоль. Мышь вывели из исследования и подвергли эвтаназии в СОг камере до полной остановки дыхания. Вероятность развития опухоли является спецификой линейных животных и характерна для данной линии мышей.
Масса тела
При взвешивании установлено, что все животные всех групп стабильно набирали вес, колебания в наборе массы тела на протяжении эксперимента укладываются в допустимую норму. Средние значения по группам массы тела указаны ниже.
Масса мышей
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
Динамика предотвращения диабета
NOD мыши характеризуются спонтанным диабетом первого типа. Заметное снижение содержания инсулина в поджелудочной железе происходит у самок в возрасте 12 недель. Было показано, что к 30 неделе исследования 90% самок болеют диабетом. Медиана возникновения заболевания среди самок составляет 18 недель (Oh SH et al., 2017).
В настоящем исследовании здоровыми мышами считали животных с уровнем глюкозы при двух повторных замерах менее 13,9 мМ/л. Если у мыши в ходе двух последовательных измерений глюкозы уровень сахара в крови был выше 13,9 мМ/л, то такое животное считали больным сахарным диабетом.
Для анализа динамики предотвращения диабета учитывались только мыши с не диагностированным диабетом на начало исследования.
Анализ данных в начальный момент и на момент окончания исследования показывает, что количество животных, которые не вошли в диабет в группе Плацебо было значительно меньше, чем в группе А+В+С (Рисунок 1). В группе А+В+С на старте 17 здоровых животных, на 70 сутки 13 животных. В группе Плацебо на старте 20 здоровых животных, на 70 сутки 6 животных.
Изменение количества здоровых животных
Figure imgf000031_0001
Процент не вошедших в диабет здоровых животных получали путем деления количества здоровых мышей на 70 сутки терапии на количество здоровых мышей на старте исследования (Рисунок 2). Важно отметить, что данный расчет велся только у животных с не диагностированным сахарным диабетом в течение всего исследования (мыши, вошедшие в диабет, а потом вышедшие из него в ремиссию все равно учитывались как вошедшие в диабет).
Процент животных, не вошедших в диабет
Figure imgf000031_0002
Процент животных, не вошедших в диабет, группы Плацебо составил 30%, что можно считать «базовым входным параметром не вхождения животных в диабет» для данной популяции мышей NOD в возрасте 23 недели. Процент животных, не вошедших в диабет, в группе А+В+С составил 76,5% (Рисунок 3). Исходя из данных расчетов, процент больных мышей в группе А+В+С составил 23,5%, в группе Плацебо - 70%.
Таким образом, терапия А+В+С предотвращает развитие диабета у 66,39% NOD мышей в течение 10 недель исследования.
Кривые Каплана-Майера доли мышей с не диагностированным диабетом на протяжении исследования
Figure imgf000032_0001
сутки
В результате расчетов можно сделать заключение, что препарат А+В+С статистически значимо снижает вхождение животных в спонтанный диабет (%2=7,94; /2=0,0048, поправка Йетса) благодаря тройственной комбинации препаратов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В настоящем отчете представлены данные по исследованию специфической фармакологической активности тройной комбинации препаратов (А+В+С) в сравнении с Плацебо на модели сахарного диабета 1 типа у NOD мышей. Сбор данных для отчета завершен на 70-й день от начала терапии.
В результате анализа данных, полученных по завершению исследования, можно сделать следующие выводы:
1. Количество животных, которые не вошли в диабет в группе Плацебо значительно меньше, чем в группе А+В+С (30% (плацебо) против 76,5% (А+В+С)); 2. Терапия А+В+С предотвращает развитие диабета у как минимум 66,39% NOD мышей, в течение 10 недель исследования;
3. Препарат А+В+С статистически значимо снижает вхождение животных в спонтанный диабет (%2=7,94; /2=0,0048) благодаря тройственной комбинации препаратов.
Таким образом, в результате анализа данных можно сделать вывод, что терапия комбинацией трех препаратов А+В+С имеет превосходящий фармакологический эффект на мышей NOD по сравнению с Плацебо и статистически значимо снижает вероятность вхождения NOD мышей в спонтанный диабет 1 типа.
Дополнительно
Индивидуальные значения массы тела мышей
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001

Claims

Формула изобретения
1. Набор для ежедневного перорального приёма для профилактики сахарного диабета 1 типа, включающий эффективные количества веществ из 1) группы ингибиторов дипептидилпептидазы (ДПП-4), 2) группы ингибиторов протонного насоса (ИПП), 3) гамма аминомасляной кислоты (ГАМК) или агониста рецепторов ГАМК.
2. Набор по п.1, отличающийся тем, что включает количество ингибитора ДПП-4 от 25 до 100 мг, количество ИПП от 10 до 40 мг, количество препарата ГАМК или агониста рецепторов ГАМК от 125 до 1500 мг.
3. Набор по п.1, характеризующийся тем, что препарат группы ингибиторов ДПП-4 представляет собой ситаглиптин, препарат группы ИПП представляет собой омепразол.
4. Разовая дозированная форма, вводимая перорально, для профилактики сахарного диабета 1 типа, содержащая эффективные количества 1) ДПП-4, 2) ИПП и 3) препарата ГАМК или агониста рецептора ГАМК.
5. Разовая дозированная форма по и.4, в которой количество ингибитора ДПП-4 составляет от 25 до 100 мг, количество ИПП составляет от 10 до 40 мг, а количество ГАМК или агониста ГАМК составляет от 125 до 1500 мг.
6. Разовая дозированная форма по и.4, отличающаяся тем, что ингибитор ДПП-4 представляет собой ситаглиптин, а ИПП представляет собой омепразол.
7. Применение пероральной комбинации, включающей действующие вещества из 1) группы ингибиторов ДПП-4, 2) группы ИПП, 3) ГАМК или агониста рецепторов ГАМК, для профилактики сахарного диабета 1 типа.
8. Способ профилактики сахарного диабета 1 типа, включающий введение лицам из группы высокого риска развития сахарного диабета 1 типа комбинации, представляющей собой набор по п.1, или дозированных форм по п.7.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что к группе высокого риска развития сахарного диабета 1 типа относят имеющих по меньшей мере одного родителя и/или сибса и/или ребёнка с установленным диагнозом «сахарный диабет 1 типа».
10. Способ по и.8, отличающийся тем, что вводят в сутки от 25 до 100 мг ингибитора ДПП-4, от 10 до 40 мг ИПП, от 125 до 1500 мг ГАМК или агониста рецепторов ГАМК.
35
PCT/IB2022/000446 2021-09-10 2022-08-16 Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска WO2023037160A2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021126744 2021-09-10
RU2021126744A RU2021126744A (ru) 2021-09-10 Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа, способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2023037160A2 true WO2023037160A2 (ru) 2023-03-16
WO2023037160A3 WO2023037160A3 (ru) 2023-08-03

Family

ID=85410514

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/IB2022/000446 WO2023037160A2 (ru) 2021-09-10 2022-08-16 Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2023037160A2 (ru)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090042781A1 (en) * 2004-06-28 2009-02-12 Novo Nordisk A/S Methods for Treating Diabetes
RU2694527C1 (ru) * 2018-02-06 2019-07-16 Шмуэль Борис Левит Комбинация для регенеративной терапии больных сахарным диабетом 1 типа

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023037160A3 (ru) 2023-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1743655B1 (en) Combinations comprising dipeptidylpeptidase-iv inhibitors and antidiabetic agents
EP2579879B1 (en) Triazine derivatives for delaying the onset of type 1 diabetes
JP2018514555A (ja) 勃起機能不全を治療又は改善するための方法及びｓｇｌｔ２阻害薬を含む医薬組成物
JP2005533775A (ja) 糖尿病を処置するための組成物および方法
JP2006522151A (ja) 不妊症におけるホスホジエステラーゼ阻害剤
ITRM960790A1 (it) Uso di sostanze che attivano il recettore del cntf ( fattore neurotro fico ciliare) per la preparazione di farmaci per la terapia della
CN103648520A (zh) 用于诱导ii型糖尿病患者体重减轻或者/和用于防止ii型糖尿病患者体重增加的药物组合产品
EP3349740B1 (en) Co-therapy comprising canagliflozin and phentermine for use in the treatment of obesity and obesity related disorders
WO2004039356A1 (en) A method for normalizing insulin levels
US20210379059A1 (en) Combination of substances for regenerative therapy in patients with type 1 diabetes mellitus
CZ295567B6 (cs) Tetrahydrolipstatin pro výrobu orálního farmaceutického prostředku pro ošetřování typu II diabetes mellitus
CN117355297A (zh) 用于诱导褐色脂肪生成的方法和组合物
DE69630527T2 (de) Vorbeugung einer krankheit mit diabetes charakter
EP3694538A1 (en) Semaglutide in medical therapy
Jenner et al. Cyclosporin A treatment of young children with newly-diagnosed Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus
US6342227B1 (en) Use of IGF-I or analogues thereof in the prevention of diabetes
WO2021053076A1 (en) Combination therapy with vildagliptin and metformin
WO2023037160A2 (ru) Набор и разовая дозированная форма для профилактики сахарного диабета 1 типа, их применение для профилактики сахарного диабета 1 типа. способ профилактики сахарного диабета 1 типа у здоровых людей из группы высокого риска
EP3698801B1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, containing zinc salt, cyclo-hispro and antidiabetic drug as active ingredients
EP3402505B1 (en) Pharmaceutical formulations for the treatment of diabetes
US20210100872A1 (en) Pharmacological Formulation Comprising Cyclo (HIS-PRO) As Effective Ingredient For Preventing Or Treating Diabetes Mellitus
WO2015160249A2 (en) Use of enoximone in the treatment of atopic immune-related disorders, in pharmaceutical composition as well as in pharmaceutical preparation
EP4353234A1 (en) Use of pyrrolopyrimidine compound
Yong et al. Synergism in pharmacokinetics of retagliptin and metformin observed during clinical trials of their combination therapy
Umarkar et al. Dibetes in India: A Review

Legal Events

Date Code Title Description
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE