WO2023008692A1 - 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법 - Google Patents

세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법 Download PDF

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WO2023008692A1
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filter
cell
extrusion
pump
cell suspension
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PCT/KR2022/006147
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정직한
김병진
배신규
오승욱
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주식회사 엠디뮨
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Publication date
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    • C12M47/06—Hydrolysis; Cell lysis; Extraction of intracellular or cell wall material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation

Definitions

  • the present invention relates to a cell extrusion system and a cell extrusion method using the same. More specifically, the present invention relates to a cell extrusion system for producing cell-derived vesicles by transferring a fluid containing nucleated or non-nucleated cells into a filter using a peristaltic pump, and a cell extrusion method using the same.
  • Extracellular vesicles refer to various types of particles secreted from cells, and include exosomes derived from the endosomal pathway and microvesicles derived from the plasma membrane. microvesicles), etc.
  • Exosomes which are spherical vesicles excreted by cells, contain various information such as protein and DNA of the mother cell, and are being used as biomarkers to actively develop cancer diagnostic markers and sensors.
  • microvesicles are a kind of organelles generally having a size of 0.03 to 1 ⁇ m, which are naturally separated from cell membranes and have a double phospholipid membrane form, and cytoplasm such as mRNA, DNA, and proteins. It contains my ingredients.
  • centrifugal separator can be used as a method for obtaining extracellular vesicle mimics, but the centrifugal separator is expensive and still has limitations in terms of yield.
  • An object of the present invention is to provide a cell extrusion system and a cell extrusion method using the same that can easily increase the production scale in manufacturing cell-derived vesicles by extrusion in order to solve the above problems.
  • the present invention provides a filter through which the cell suspension passes; a tube provided to allow the cell suspension to flow therein and connected to both sides of the filter to allow the cell suspension to flow through the filter; and an extrusion unit connected to one side of the tube and having a pump for transporting the cell suspension.
  • the extrusion unit further includes a pump connected to the other side of the tube to transport the cell suspension, and the pumps operate alternately to pass the cell suspension back and forth through the filter. This can be provided.
  • the filter may include a porous membrane; a pair of holders for fixing the membrane; and a dispersion disk interposed between the holder and the membrane and having a plurality of fine holes except for a dispersion zone including a central portion.
  • the filter may be implemented as a depth filter.
  • the extrusion unit is connected to the other side of the tube and further includes a container for accommodating the cell suspension, and a plurality of the extrusion units are connected so that the cell suspension is sequentially passed through each of the filters installed in the plurality of extrusion units. It is characterized in that provided to pass through.
  • the filter may include a porous membrane, and the plurality of membranes provided in the plurality of filters may have the same pore size.
  • the plurality of membranes provided in the plurality of filters may have different pore sizes.
  • a first pump for transferring the cell suspension for transferring the cell suspension; a first filter disposed at a rear end of the first pump; a first container in which the cell suspension that has passed through the first filter is accommodated; a second pump disposed at a rear end of the first container; and a second filter disposed at a rear end of the first container, wherein the cell suspension passes through the first pump, the first filter, the first container, the second pump, and the second filter to pass through the second filter.
  • a second container disposed between the second filter and the first pump may be further included.
  • the present invention comprises the steps of a) preparing an extrusion unit having a filter and a pump; and b) operating the pump to pass the cell suspension through the filter.
  • step a) may include a1) preparing a filter having a porous membrane; a2) connecting tubes to both sides of the filter; and a3) connecting a pump to one side of the tube.
  • a plurality of extrusion units are provided, and the cell suspension is characterized in that it sequentially passes through the filters provided in the plurality of extrusion units.
  • step b) supplying a flushing solution through the tube and operating the pump to remove residues in the tube and the filter.
  • the method may further include, after step c), d) replacing the filter with a filter having a membrane having a smaller pore size, and repeating step b).
  • the pore size of the membrane is characterized in that 0.1 ⁇ m to 20 ⁇ m.
  • the present invention has the effect of stably, economically, and mass-producing cell-derived vesicles.
  • 1A is a schematic view of an extrusion unit.
  • Figure 1b is a view showing a state in which a pump is added to the extrusion unit.
  • 2A and 2B are diagrams illustrating filters.
  • Figure 2c is a diagram illustrating a distribution disk.
  • FIG. 3 is a diagram showing a cell extrusion system according to a first embodiment of the present invention.
  • FIG. 4 is a diagram showing a cell extrusion system according to a second embodiment of the present invention.
  • 5 to 10 are graphs of cell extrusion results using the cell extrusion system of the present invention.
  • Figure 1a is a view schematically showing an extrusion unit
  • Figure 1b is a view showing a state in which a pump is added to the extrusion unit
  • 2a and 2b are views showing filters
  • FIG. 2c is a view showing a distribution disk.
  • the extrusion unit 10 provided in the cell extrusion system 100 or 200 of the present invention will be described with reference to FIGS. 1A to 2C.
  • the extrusion unit 10 includes a first pump 12, a filter 14, a container 18 and a tube 19.
  • the filter 14 is composed of a porous membrane 16 and holders 15 and 15 ′ supporting the membrane 16, as shown in FIG. 2A, and a pair of holders 15 configured to be coupled to each other. , 15 ') between the membrane 16 is interposed.
  • the filter 14 may include two dispersion disks 17 interposed between the respective holders 15 and 15' and the membrane 16, as shown in FIG. 2B. Depending on the case, it is also possible to have only one dispersion disk 17 between any one of the holders 15 and 15' and the membrane 16.
  • the dispersion disk 17 has a plurality of fine holes 17b except for the dispersion zone 17a including the central portion, and the injected cell suspension is passed through the holders 15 and 15' through holes. While moving at high speed along the dispersion disk 130, it collides with the dispersion zone 131 and disperses widely.
  • the through holes of the holders 15 and 15' and the central portion of the dispersion disk 17 should be located on the same axis.
  • the dispersion disk 17 and the dispersion disk 17 It is preferable to place an O-ring (R) between the holders 15 and 15 ′ adjacent to each other.
  • a porous support film F may be further positioned on at least one surface of the membrane 16 .
  • the support film F prevents the membrane 16 from being damaged when a certain pressure is applied to the membrane 16 .
  • the pore size of the supporting film (F) is formed to be larger than the pore size of the membrane 16 to enable smooth movement of the cell suspension.
  • the membrane 16 is preferably provided with a pore size of 0.1 ⁇ m to 20 ⁇ m to enable smooth extrusion.
  • the filter 14 may be implemented as a depth filter to perform extrusion.
  • a tube 19 is connected to both sides of the filter 14 to allow the cell suspension to flow therein, and the cell suspension is provided to pass through the membrane 16 of the filter 14 through the tube 19.
  • a pump 12 for transporting the cell suspension is installed on one side of the tube 19.
  • the pump 12 may be implemented as a peristaltic pump that pumps the cell suspension in the tube 19 by repeatedly compressing and relaxing the tube 19 .
  • the peristaltic pump may be a linear type or a roller type in the pumping method.
  • the number of rollers in the pump head is 2 to 24, the number of channels is 1 to 24, the discharge pressure is 1 to 10 bar, and the flow rate range is 0.001 to 10000ml/min. there is.
  • the extrusion unit 10 of the present invention configured as described above pumps the cell suspension introduced into one end of the tube 19 through the pump 12 and passes it through the filter 14 to harvest cell-derived vesicles.
  • the vessel 18 is connected to the tube 19, and the cell suspension that has passed through the filter 14 is stored.
  • the container 18 is disposed at the end of the flow direction of the cell suspension, and may be connected to both ends of the tube 19 when the cell suspension flows in both directions as shown in FIGS. 1A and 1B.
  • the pump 12 of the extrusion unit 10 can be driven in both directions. Therefore, the harvesting efficiency of cell-derived vesicles can be increased by repeating the bi-directional extrusion process in which containers 18 are provided at both ends of the tube 19 and the cell suspension is passed through the filter 14 back and forth. there is.
  • two pumps 12 may be disposed in the extrusion unit 10 with the filter 14 interposed therebetween.
  • FIG. 1B (a) when the pump 12 on the left side transfers the cell suspension in the forward direction, the pump head provided on the pump 12 on the right side is opened and the cell suspension is placed on the right side of the pump 12. ) to flow into the right vessel 18 without being affected by
  • the bi-directional extrusion process of the cell suspension can be performed.
  • FIG. 3 is a diagram showing a cell extrusion system according to a first embodiment of the present invention.
  • the cell extrusion system 100 may include one extrusion unit 10, but preferably a plurality of extrusion units 10, 10', 10" to increase extrusion efficiency. has a structure that connects
  • the cell extrusion system 100 includes a first pump 12, a first filter 14 and a first container 18 are connected in one direction by a tube 19, and the cell suspension introduced through one end of the tube 19 passes through each of the first filters 14 installed in the plurality of extrusion units 10, 10', and 10". pass sequentially.
  • each of the first pumps 12 has the same rotation direction so that the cell suspension flows in one direction, and FIG. 3 shows a case where the cell suspension flows from left to right.
  • cell-derived vesicles can be harvested with higher efficiency.
  • the plurality of membranes 16 provided in the plurality of first filters 14 may all have the same pore size.
  • the plurality of membranes 16 provided in the plurality of first filters 14 may be arranged such that the size of the pores gradually decreases along the transport direction of the cell suspension.
  • the pore size of the membrane 16 provided in the leftmost first filter 14 is the largest, and the rest of the first filters 14 disposed along the transport direction of the cell suspension
  • the pore size of the membranes 16 provided in is provided to gradually decrease.
  • FIG. 4 is a diagram showing a cell extrusion system according to a second embodiment of the present invention.
  • the cell extrusion system 200 includes a first pump 12 for transporting the cell suspension, a first filter 14 disposed at the rear end of the first pump 12, and a first filter ( 14) and a first container 18 in which the cell suspension fluid passed through is accommodated, and a second pump 22 and a second filter 24 disposed at the rear end of the first container 18.
  • the second filter 14 is formed in the same way as the first filter 14, but in some cases, the pore size of the membrane 16 provided therein is different from the pore size of the membrane 16 of the first filter 14. may be provided.
  • a second container 28 may be disposed between the second filter 24 and the first pump 12 .
  • the tube 19 includes a first pump 12, a first filter 14, a first container 18, a second pump 22, a second filter 24 and a second container so that the cell suspension can be circulated. 28, and in the cell extrusion system 200 according to the second embodiment, the cell suspension repeatedly passes through the first filter 14 and the second filter 24 while circulating.
  • the cell extrusion system 200 is provided with at least one extrusion unit 10 and is configured to circulate the cell suspension, which is necessary for smooth circulation and extrusion efficiency of the cell suspension.
  • the second filter 24 may have a structure further provided with another extrusion unit such as the second container 28 additionally.
  • first filter 14 and the second filter 24 each have a porous membrane 16, and the pores of the membrane provided in the first filter 14 and the membrane provided in the second filter 24
  • the voids may be provided identically or differently.
  • the extrusion unit (10, 10 ', 10 ") is preferably configured by connecting a plurality of them as shown in FIG. 3, but in some cases, one extrusion unit 10 is provided and the extrusion unit 10 It is also possible to configure by adding only a plurality of filters 14 to ).
  • extrusion is performed by operating the pump 12 to allow the cell suspension supplied through the tube 19 to pass through the filter 14.
  • a flushing process of supplying a flushing solution through the tube 19 and operating the pump 12 to remove residues in the tube 19 and the filter 14 may be additionally performed.
  • the flushing solution may be a liquid that does not contain cells or a solution used for cell suspension, such as phosphate buffer saline (PBS).
  • PBS phosphate buffer saline
  • flushing is carried out by injecting a certain amount of PBS into each extrusion unit (10, 10', 10") in the direction of cell suspension injection, and then operating the pumps 12 and 22 to pump the tube 19 and filters 14 and 24. This is a process of collecting the remaining substances into a storage container at the rear end of the filters 14 and 24.
  • the existing filter 14 is replaced with other filters 14 having a membrane 16 having a smaller pore size, and then the cell suspension is transferred to the replaced filters 14.
  • a passing process may be additionally performed.
  • 5 to 10 are graphs of cell extrusion results obtained through the following experiments according to the cell extrusion method of the present invention.
  • the cell suspension in the supply storage container was passed through three filters having the same pore size in one direction once.
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 90 mL/min.
  • the concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 11,000 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution thereof is as shown in FIG. 5 .
  • the cell suspension in the supply storage container was passed through three filters having the same pore size in one direction once. A total of 9 extrusions were performed through the filter in order of large pore size (10 ⁇ m ⁇ 3 ⁇ m ⁇ 0.4 ⁇ m).
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 180 mL/min.
  • the concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 12,800 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution is as shown in FIG. 6 .
  • the cell suspension in the supply storage container was passed through three filters having the same pore size in one direction once. A total of 18 times were extruded through the filter in order of large pore size (10 ⁇ m ⁇ 5 ⁇ m ⁇ 3 ⁇ m ⁇ 1 ⁇ m ⁇ 0.8 ⁇ m ⁇ 0.4 ⁇ m).
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 200 mL/min. In addition, 10 mL of flushing was performed after extrusion was completed for each pore size. The concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 14,200 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution is as shown in FIG. 7 .
  • the cell suspension in the supply storage container was passed through 10 times by connecting two filters in a circulation manner and passing through each filter 5 times.
  • a total of 60 extrusions were performed in order of the pore size (10 ⁇ m ⁇ 5 ⁇ m ⁇ 3 ⁇ m ⁇ 1 ⁇ m ⁇ 0.8 ⁇ m ⁇ 0.4 ⁇ m).
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 200 mL/min. In addition, 10 mL of flushing was performed after extrusion for each pore size.
  • the concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 21,400 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution is as shown in FIG. 8 .
  • the cell suspension in the supply storage container was passed through three filters having the same pore size in one direction once. A total of 18 times were extruded through the filter in order of large pore size (10 ⁇ m ⁇ 5 ⁇ m ⁇ 3 ⁇ m ⁇ 1 ⁇ m ⁇ 0.8 ⁇ m ⁇ 0.4 ⁇ m).
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 200 mL/min.
  • 15 mL of flushing was performed.
  • the concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 10,000 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution is as shown in FIG. 9 .
  • the cell suspension in the feed storage container was extruded through the same filter in both directions a total of 30 times.
  • the speed of the peristaltic pump supplied to the filter was 200 mL/min. Furthermore, 500 mL of flushing was performed after extrusion 30 times.
  • the concentration of particles in the solution in the storage container at the end of the process was measured by zetaview, and the productivity of particles per cell was analyzed as 15,900 particles/cell.
  • the result of measuring the particle distribution is as shown in FIG. 10 .
  • the cell extrusion system and the cell extrusion method using the cell extrusion system of the present invention are very beneficial because they have the effect of stably, economically, and mass-producing cell-derived vesicles.

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Abstract

본 발명은 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 다공성 멤브레인 및 상기 멤브레인을 지지하는 홀더를 구비하는 필터; 내부로 세포부유액이 흐르도록 구비되고, 상기 세포부유액이 상기 멤브레인을 통과하여 흐르도록 상기 필터의 양측에 연결되는 튜브; 및 상기 튜브의 일측에 연결되어 상기 세포부유액을 이송시키는 펌프를 구비하는 압출유닛을 포함하는 세포 압출 시스템과 이를 이용한 세포 압출 방법에 관한 것이다. 이러한 본 발명은 세포 유래 베시클을 안정적이면서도 경제적이고, 대량으로 제조할 수 있는 효과가 있다.

Description

세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법
본 발명은 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게 본 발명은 유핵 또는 무핵 세포가 포함된 유체를 연동펌프를 이용해 필터 내로 이행함으로써 세포 유래 베시클을 제조하기 위한 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법에 관한 것이다.
세포외 소포체(extracellular vesicles)는 세포에서 분비되는 다양한 종류의 입자를 지칭하며, 크게는 엔도좀 경로(endosomal pathway)에서 유래하는 엑소좀(exosomes)과 원형질막(plasma membrane)에서 유래하는 마이크로 베지클(microvesicles) 등으로 구분될 수 있다.
세포에 의해 배출되는 구형 소낭인 엑소좀(exosomes)은 모세포의 단백질, DNA 등의 다양한 정보를 지니고 있어, 이를 바이오 마커로 활용하여 암진단 마커 및 센서 개발이 활발히 진행되고 있다.
또한, 마이크로베지클(microvesicles)은 일반적으로 0.03~1㎛의 크기를 가지는 세포 소기관의 일종으로서 세포의 세포막으로부터 자연 유리되어 이중 인지질(phospholipid) 막 형태를 가지고 있으며, mRNA, DNA 및 단백질 등의 세포질 내 성분을 함유하고 있다.
근래에는 이러한 세포외 소포체를 이용한 약물전달체 연구가 활발히 진행되고 있으며, 미량의 약물을 베지클에 캡슐화시켜 특정 부위에 해당 약물을 전달할 수 있는 바, 세포외 소포체를 이용한 다양한 의료분야에서 활용성이 커지고 있다. 특히 마이크로베지클은 세포막에서 직접적으로 유리됨으로써 모세포의 항원체를 그대로 보유하고 있으므로 백신 등의 활용 가능성이 매우 높다.
그러나, 세포로부터 얻을 수 있는 세포외 소포체의 양이 매우 한정적이므로, 최근에는 이를 인위적으로 많은 양을 얻기 위한 세포외 소포 모사체 제조방법이 요구되고 있다.
통상적으로, 세포외 소포 모사체를 얻기 위한 방법으로 원심분리기가 이용될 수 있으나, 원심 분리기는 가격이 높고 여전히 수득량이 기대에 미치지 못하는 한계가 있다.
본 발명은 상기한 문제를 해결하기 위해 세포 유래 베시클을 압출하여 제조함에 있어 생산 규모를 용이하게 증대할 수 있는 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 세포부유액이 통과되는 필터; 내부로 상기 세포부유액이 흐르도록 구비되고, 상기 세포부유액이 상기 필터를 통과하여 흐르도록 상기 필터의 양측에 연결되는 튜브; 및 상기 튜브의 일측에 연결되어 상기 세포부유액을 이송시키는 펌프를 구비하는 압출유닛을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템을 제공한다.
이때, 상기 압출유닛은 상기 튜브의 타측에 연결되어 상기 세포부유액을 이송시키는 펌프를 더 구비하고, 상기 펌프들은 상기 세포부유액이 상기 필터를 왕복하여 통과하도록 교대로 작동하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템이 제공될 수 있다.
또한, 상기 필터는 다공성 멤브레인; 상기 멤브레인을 고정시키는 한 쌍의 홀더; 및 상기 홀더와 상기 멤브레인 사이에 개재되고, 중심부를 포함하는 분산존을 제외하고 복수의 미세홀이 형성된 분산 디스크를 구비하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 필터는 깊이 필터(depth filter)로 구현될 수 있다.
또한, 상기 압출유닛은 상기 튜브의 타측에 연결되어 상기 세포부유액을 수용하는 용기를 더 구비하고, 복수의 상기 압출유닛이 연결되어 상기 세포부유액이 복수의 상기 압출유닛에 설치된 각각의 상기 필터를 순차적으로 통과하도록 구비되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 필터는 다공성 멤브레인을 포함하고, 복수의 상기 필터에 구비되는 복수의 상기 멤브레인들은 공극 크기가 동일하게 구비될 수 있다.
또한, 복수의 상기 필터에 구비되는 복수의 상기 멤브레인들은 공극 크기가 서로 다르게 구비될 수 있다.
한편, 본 발명은 다른 양태로서 세포부유액을 이송시키는 제1 펌프; 상기 제1 펌프의 후단에 배치되는 제1 필터; 상기 제1 필터를 통과한 세포부유액이 수용되는 제1 용기; 상기 제1 용기의 후단에 배치되는 제2 펌프; 및 상기 제1 용기의 후단에 배치되는 제2 필터를 포함하고, 상기 세포부유액은 상기 제1 펌프, 상기 제1 필터, 상기 제1 용기, 상기 제2 펌프 및 상기 제2 필터를 거쳐 다시 상기 제1 펌프로 순환되도록 구비되는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템을 제공한다.
이때, 상기 제2 필터와 상기 제1 펌프 사이에 배치되는 제2 용기를 더 포함할 수 있다.
한편, 본 발명은 a) 필터 및 펌프를 구비하는 압출유닛을 준비하는 단계; 및 b) 상기 펌프를 작동시켜 세포부유액을 상기 필터로 통과시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법을 제공한다.
이때, 상기 a) 단계는 a1) 다공성 멤브레인을 구비하는 필터를 준비하는 단계; a2) 상기 필터의 양측에 튜브를 연결하는 단계; 및 a3) 상기 튜브의 일측에 펌프를 연결하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 압출유닛은 복수 개 구비되고, 상기 세포부유액은 복수의 상기 압출유닛들에 구비되는 상기 필터들을 순차적으로 통과하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 b) 단계 이후, c) 상기 튜브를 통해 플러싱(flushing) 용액을 공급하고 상기 펌프를 작동시켜 상기 튜브 및 상기 필터 내의 잔여물을 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 c) 단계 이후, d) 상기 필터를 공극의 크기가 더 작은 멤브레인을 구비하는 필터로 교체하고, 상기 b) 단계를 반복하여 수행하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 멤브레인의 공극 크기는 0.1㎛ 내지 20㎛ 인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 세포 유래 베시클을 안정적이면서도 경제적이고, 대량으로 제조할 수 있는 효과가 있다.
도 1a는 압출유닛을 개략적으로 도시한 도면이다.
도 1b는 압출유닛에 펌프가 추가된 상태를 도시한 도면이다.
도 2a 및 도 2b는 필터를 도시한 도면이다.
도 2c는 분산 디스크를 도시한 도면이다.
도 3은 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 압출 시스템을 도시한 도면이다.
도 4는 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 압출 시스템을 도시한 도면이다.
도 5 내지 도 10은 본 발명의 세포 압출 시스템을 이용한 세포 압출 결과에 대한 그래프이다.
이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면들을 참조하여 상세하게 설명한다. 우선 각 도면의 구성 요소들에 참조 부호를 첨가함에 있어서, 동일한 구성 요소들에 대해서는 비록 다른 도면상에 표시되더라도 가능한 한 동일한 부호를 가지도록 하고 있음에 유의해야 한다. 또한, 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다. 또한, 이하에서 본 발명의 바람직한 실시예를 설명할 것이나, 본 발명의 기술적 사상은 이에 한정하거나 제한되지 않고 당업자에 의해 실시될 수 있음은 물론이다.
도 1a는 압출유닛을 개략적으로 도시한 도면이고, 도 1b는 압출유닛에 펌프가 추가된 상태를 도시한 도면이다. 또한, 도 2a 및 도 2b는 필터를 도시한 도면이고, 도 2c는 분산 디스크를 도시한 도면이다.
먼저, 도 1a 내지 도 2c를 참고하여 본 발명의 세포 압출 시스템(100,200)에 구비되는 압출유닛(10)에 대해 설명한다.
본 발명에 따른 압출유닛(10)은 도 1에 도시된 바와 같이 제1 펌프(12), 필터(14), 용기(18) 및 튜브(19)를 포함한다.
구체적으로 필터(14)는 도 2a에 도시된 바와 같이 다공성의 멤브레인(16)과 멤브레인(16)을 지지하는 홀더(15,15')로 이루어지며, 서로 결합되도록 구성되는 한 쌍의 홀더(15,15') 사이에 멤브레인(16)이 개재된다.
다른 양태로서 필터(14)는 도 2b에 도시된 바와 같이 각 홀더(15,15')와 멤브레인(16)의 사이에 개재되는 2 개의 분산 디스크(17)를 구비할 수도 있다. 경우에 따라서 분산 디스크(17)는 어느 하나의 홀더(15,15')와 멤브레인(16) 사이에 하나만 구비하는 것도 가능하다.
도 2c에 도시한 바와 같이 분산 디스크(17)는 중심부를 포함하는 분산존(17a)을 제외하고 미세홀(17b)이 다수 형성되어 있는데, 주입되는 세포부유액이 홀더(15,15')관통홀을 따라 빠른 속도로 이동하다가 분산 디스크(130)의 분산존(131)에 충돌하면서 넓게 분산하게 된다.
이때 분산 효율을 높이기 위해서는 홀더(15,15')의 관통홀과 분산 디스크(17) 중심부가 동일축 상에 위치하여야 한다.
분산 디스크(17)에 의해 분산된 세포 부유액이 외부로 유출되지 않고서 지속적인 압력을 받으면서 분산 디스크(17)에 형성된 다수의 미세홀(17b)을 빠져 나가기 위해서는 분산 디스크(17) 및 분산 디스크(17)와 인접하는 홀더(15,15') 사이에 오링(R)을 배치하는 것이 바람직하다.
또한, 멤브레인(16)의 적어도 하나 이상의 면에 다공성을 갖는 지지필름(F)이 더 위치할 수 있다. 지지필름(F)은 멤브레인(16)에 일정한 압력이 가해질 때 멤브레인(16)이 파손되는 것을 방지한다. 이때, 지지필름(F)의 공극 크기는 멤브레인(16)의 공극 크기보다 크게 형성함으로써 세포 부유액의 원활한 이동이 가능토록 한다.
멤브레인(16)은 원활한 압출이 가능하도록 공극 크기가 0.1㎛ 내지 20㎛ 인 것으로 구비하는 것이 바람직하다.
한편, 필터(14)는 경우에 따라 깊이 필터(depth filter)로 구현하여 압출을 수행하는 것도 가능하다.
필터(14)의 양측에는 내부로 세포부유액이 흐르도록 구비되는 튜브(19)가 연결되고, 세포부유액은 튜브(19)를 통해 필터(14)의 멤브레인(16)을 통과하도록 구비된다.
또한, 튜브(19)의 일측에는 세포부유액을 이송시키는 펌프(12)가 설치된다. 이때, 펌프(12)는 튜브(19)를 반복적으로 압축 및 이완시켜 튜브(19) 내의 세포부유액을 펌핑하는 연동펌프로 구현될 수 있다.
이때, 연동펌프는 펌핑방식에 있어서 리니어(linear) 타입 또는 롤러(roller) 타입일 수 있다. 또한, 롤러 타입의 연동펌프인 경우 펌프헤드 내의 롤러 개수는 2~24개, 채널의 개수는 1~24, 토출압력은 1~10 bar, 유량범위는 0.001~10000ml/min 의 펌프로 구현될 수 있다.
이와 같이 구성되는 본 발명의 압출유닛(10)은 튜브(19)의 일단으로 유입된 세포부유액을 펌프(12)를 통해 압송하여 필터(14)로 통과시키는 과정을 거침으로써 세포 유래 베시클을 수확하게 된다.
용기(18)는 튜브(19)에 연결되며, 필터(14)를 통과한 세포부유액이 저장된다. 용기(18)는 세포부유액의 흐름방향 종단부에 배치되며, 도 1a 및 도 1b에 도시된 바와 같이 세포부유액의 흐름이 양방향으로 이루어지는 경우 튜브(19)의 양측 단부에 연결되도록 구비될 수 있다.
도 1a에 도시된 바와 같이 압출유닛(10)의 펌프(12)는 양방향으로 구동이 가능하다. 따라서, 튜브(19)의 양단에 용기(18)를 각각 구비하고, 세포부유액이 필터(14)를 사이에 두고 왕복하여 통과하도록 하는 양방향 압출 과정을 반복함으로써 세포 유래 베시클의 수확 효율을 높일 수 있다.
도 1b에 도시된 바와 같이 압출유닛(10)에는 필터(14)를 사이에 두고 2개의 펌프(12)가 배치될 수 있다. 도 1b(a)에 도시된 바와 같이 좌측의 펌프(12)가 정방향으로 세포부유액을 이송시키는 경우에는 우측의 펌프(12)에 구비되는 펌프헤드는 개방시켜 세포부유액이 우측에 배치된 펌프(12)의 영향을 받지 않고 우측 용기(18)로 흐르도록 한다.
반대로 도 1b(b)에 도시된 바와 같이 우측의 펌프(12)가 역방향으로 세포부유액을 이송시키는 경우에는 좌측의 펌프(12)에 구비되는 펌프헤드를 개방하여 좌측의 용기(18)로 세포부유액이 흐르도록 한다.
상기와 같은 과정을 소정의 횟수만큼 반복함으로써 세포부유액의 양방향 압출 공정을 수행할 수 있다.
도 3은 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 압출 시스템을 도시한 도면이다.
본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 압출 시스템(100)은 하나의 압출유닛(10)을 구비할 수 있으나, 바람직하게는 압출 효율을 높이기 위해 복수의 압출유닛(10, 10', 10")을 연결한 구조를 갖는다.
구체적으로 복수의 압출유닛(10, 10', 10")을 갖는 제1 실시예에 따른 세포 압출 시스템(100)은 제1 펌프(12), 제1 필터(14) 및 제1 용기(18)가 튜브(19)에 의해 단 방향으로 연결되며, 튜브(19)의 일단을 통해 유입된 세포부유액은 복수의 압출유닛(10, 10', 10")에 설치된 각각의 제1 필터(14)들을 순차적으로 통과하게 된다.
여기서 각각의 제1 펌프(12)들은 일 방향으로 세포부유액이 흐르도록 동일한 회전 방향을 가지며, 도 3에서는 좌측에서 우측으로 세포부유액이 흐르는 경우를 도시하였다.
바람직하게 이와 같은 압출 과정은 적어도 1회 이상 수행함으로써 더욱 높은 효율로 세포 유래 베시클을 수확할 수 있다.
이때, 복수의 제1 필터(14)에 구비되는 복수의 멤브레인(16)들은 모두 동일한 공극의 크기를 갖도록 구비될 수 있다.
또는 복수의 제1 필터(14)에 구비되는 복수의 멤브레인(16)들은 세포부유액의 이송 방향을 따라 공극의 크기가 점점 작아지도록 배치하는 것도 가능하다.
다시 말해, 도 3을 기준으로 할 때 가장 좌측의 제1 필터(14)에 구비되는 멤브레인(16)의 공극 크기가 가장 크고, 세포부유액의 이송방향을 따라 배치되는 나머지 제1 필터(14)들에 구비되는 멤브레인(16)들의 공극 크기는 점차 작아지도록 구비된다.
도 4는 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 압출 시스템을 도시한 도면이다.
본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 압출 시스템(200)은 세포부유액을 이송시키는 제1 펌프(12), 제1 펌프(12)의 후단에 배치되는 제1 필터(14), 제1 필터(14)를 통과한 세포부유액이 수용되는 제1 용기(18) 및 제1 용기(18)의 후단에 배치되는 제2 펌프(22) 및 제2 필터(24)를 포함한다.
제2 필터(14)는 제1 필터(14)와 동일하게 형성되나, 경우에 따라 내부에 구비되는 멤브레인(16)의 공극 크기가 제1 필터(14)의 멤브레인(16) 공극 크기와 상이하게 구비될 수 있다.
또한, 제2 필터(24)와 제1 펌프(12) 사이에는 제2 용기(28)가 배치될 수 있다.
튜브(19)는 세포부유액이 순환될 수 있도록 제1 펌프(12), 제1 필터(14), 제1 용기(18), 제2 펌프(22), 제2 필터(24) 및 제2 용기(28)에 연결되며, 제2 실시예에 따른 세포 압출 시스템(200)에서 세포부유액은 순환하면서 제1 필터(14) 및 제2 필터(24)를 반복적으로 통과하게 된다.
다시 말해, 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 압출 시스템(200)은 적어도 하나의 압출유닛(10)을 구비하고 세포부유액을 순환시키도록 한 것이며, 세포부유액의 원활한 순환 및 압출 효율을 위해 필요에 따라 제2 펌프(22), 제2 필터(24), 제2 용기(28)와 같은 또 다른 압출유닛을 추가로 더 구비한 구조를 가질 수 있다.
이때, 제1 필터(14) 및 제2 필터(24)는 각각 다공성 멤브레인(16)을 구비하고, 제1 필터(14)에 구비되는 멤브레인의 공극과 제2 필터(24)에 구비되는 멤브레인의 공극은 동일하거나 다르게 구비될 수 있다.
이하에서는 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 압출 시스템(100)을 이용한 세포 압출 방법에 대해 서술한다.
먼저, 다공성 멤브레인(16)을 구비하는 필터(14)를 준비하고, 필터(14)의 양측에 튜브(19)를 연결한 후, 튜브(19)의 일측에 펌프(12)를 연결함으로써 적어도 하나의 압출유닛(10)을 포함하는 세포 압출 시스템(100)을 구성한다.
이때, 압출유닛(10,10',10")은 도 3에 도시된 바와 같이 복수 개를 연결하여 구성하는 것이 바람직하나, 경우에 따라서는 하나의 압출유닛(10)을 구비하고 압출유닛(10)에 필터(14)만을 복수 개 추가하여 구성하는 것도 가능하다.
이후, 펌프(12)를 작동시켜 튜브(19)를 통해 공급된 세포부유액이 필터(14)를 통과하도록 함으로써 압출을 수행한다.
압출이 완료된 후에는 튜브(19)를 통해 플러싱 용액을 공급하고 펌프(12)를 작동시켜 튜브(19) 및 필터(14) 내의 잔여물을 제거하는 플러싱(flushing) 과정을 추가로 수행할 수 있다.
이때, 플러싱 용액은 PBS(phosphate buffer saline) 등과 같이 세포를 포함하지 않는 액체 또는 세포 부유에 사용되는 용액이 사용될 수 있다.
참고로, 플러싱은 각 압출유닛(10,10',10")에 세포부유액 주입 방향으로 PBS를 일정량 주입한 뒤 펌프(12,22)를 작동시켜 튜브(19) 및 필터(14,24)에 잔류한 물질들을 필터(14,24) 후단의 보관 용기로 모으는 과정이다.
상기와 같은 압출 과정이 완료된 후에는 기존의 필터(14)를 공극의 크기가 더 작은 멤브레인(16)을 구비하는 다른 필터(14)들로 교체한 후 세포부유액을 교체된 필터(14)들로 통과시키는 과정을 추가적으로 수행할 수도 있다.
도 5 내지 도 10은 본 발명의 세포 압출 방법에 따른 하기의 실험을 통해 도출된 세포 압출 결과에 대한 그래프이다.
실험예 1
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 5.0E+05 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 50mL로 제조하고(총 세포수 = 2.5E+07), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 필터의 멤브레인 공극 크기가 10㎛, 3㎛, 0.4㎛인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)를 각 3개씩 준비하고 2㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 단 방향으로 같은 공극 크기를 가진 필터 3개를 한 번씩 통과하였다.
즉, 처음에는 멤브레인 공극 크기가 10㎛인 필터를 세포부유액 이동 경로에 3개 배치하여 세포부유액이 각 필터들을 통과하도록 하였고, 이후 멤브레인 공극 크기가 3㎛인 것으로 필터들을 모두 교체하여 다시 세포부유액을 통과시켰다. 마지막으로 멤브레인 공극 크기가 0.4㎛인 것으로 필터들을 모두 교체하여 세포부유액을 통과시킴으로써, 공극 크기가 큰 순서로(10㎛ → 3㎛ → 0.4㎛) 필터를 통과하여 총 9번 압출하였다.
필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 90mL/min으로 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 11,000 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 5에 도시된 바와 같다.
실험예 2
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 5.0E+05 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 45 mL로 제조하고(총 세포수 = 2.25E+07), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 멤브레인 필터의 공극 크기가 10㎛, 3㎛, 0.4㎛인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)을 각 3개씩 준비하고 2㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 단 방향으로 같은 공극 크기를 가진 필터 3개를 한 번씩 통과하였다. 공극 크기가 큰 순서로 (10㎛ → 3㎛ → 0.4㎛) 필터를 통과하여 총 9번 압출하였다. 필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 180mL/min으로 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 12,800 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 6에 도시된 바와 같다.
실험예 3
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 5.0E+05 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 200 mL로 제조하고 (총 세포수 = 1.0E+08), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 멤브레인 필터의 공극 크기가 10㎛, 5㎛, 3㎛, 1㎛, 0.8㎛, 0.4㎛인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)을 각 3개씩 준비하고 2㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 단 방향으로 같은 공극 크기를 가진 필터 3개를 한 번씩 통과하였다. 공극 크기가 큰 순서로 (10㎛ → 5㎛ → 3㎛ → 1㎛ → 0.8㎛ → 0.4㎛) 필터를 통과하여 총 18번 압출하였다.
필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 200mL/min으로 실시하였다. 또한 각 공극 크기마다 압출이 끝나면 플러싱(flushing) 10mL를 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 14,200 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 7에 도시된 바와 같다.
실험예 4
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 5.0E+05 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 400 mL로 제조하고(총 세포수 = 2.0E+08), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 멤브레인 필터의 공극 크기가 10㎛, 5㎛, 3㎛, 1㎛, 0.8㎛, 0.4㎛인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)을 각 2개씩 준비하고 4㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 순환 방식으로 필터 두 개를 연결하고 필터 한 개당 5번씩 통과하여 10번 통과하였다. 공극 크기가 큰 순서로 (10㎛ → 5㎛ → 3㎛ → 1㎛ → 0.8㎛ → 0.4㎛) 진행하여 총 60번 압출하였다.
필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 200mL/min으로 실시하였다. 또한 각 공극 크기마다 압출이 끝나면 플러싱 10mL를 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 21,400 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 8에 도시된 바와 같다.
실험예 5
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 5.0E+05 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 400 mL로 제조하고 (총 세포수 = 2.0E+08), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 멤브레인 필터의 공극 크기가 8㎛, 5㎛, 3㎛, 1㎛, 0.6㎛, 0.4인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)을 각 3개씩 준비하고 4㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 단 방향으로 같은 공극 크기를 가진 필터 3개를 한 번씩 통과하였다. 공극 크기가 큰 순서로 (10㎛ → 5㎛ → 3㎛ → 1㎛ → 0.8㎛ → 0.4㎛) 필터를 통과하여 총 18번 압출하였다.
필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 200mL/min으로 실시하였다. 또한 각 공극 크기마다 3회 압출이 끝나면 플러싱 15mL를 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 10,000 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 9에 도시된 바와 같다.
실험예 6
세포 유래 베시클 제작을 위하여 HEK293 세포(ATCC, CRL-1573.3)를, 원심분리하여 수확하였다. 수확된 세포는 1.64E+06 cells/mL 농도가 되도록 인산완충식염생리수에 재부유하여 122 mL로 제조하고(총 세포수 = 2.00E+08), 연동펌프(Cole-parmer, US, Masterflex LS 07522-20)와 연결된 공급 보관 용기에 넣었다.
세포 압출을 위하여 멤브레인 필터의 공극 크기가 10㎛인 whatman PC(PolyCarbonate) membrane filter(Millipore)을 1개 준비하고 2㎜의 타공 직경을 가진 멤브레인 고정용 홀더와 조립하였다.
공급 보관 용기에 있는 세포부유액은 양 방향으로 같은 필터를 총 30번 통과하여 압출되었다.
구체적으로 도 1b(a)와 같이 정방향 압출 후, 도 1b(b)와 같이 역방향으로 압출하는 과정을 15회 반복함으로써 세포부유액이 필터를 총 30번 통과하도록 하였다.
필터로 공급되는 연동펌프의 속도는 200mL/min으로 실시하였다. 또한 30회 압출 후, 플러싱 500mL를 실시하였다. 공정 마지막 보관 용기에서 용액 내 입자의 농도를 zetaview로 측정하였고 세포당 입자의 생산성은 15,900 particles/cell 로 분석되었다.
이의 입자 분포도 측정 결과는 도 10에 도시된 바와 같다.
상술한 바와 같이 본 발명의 세포 압출 시스템 및 이를 이용한 세포 압출 방법은 세포 유래 베시클을 안정적이면서도 경제적이고, 대량으로 제조할 수 있는 효과가 있어 매우 유익한 것이다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정, 변경 및 치환이 가능할 것이다. 따라서 본 발명에 개시된 실시예 및 첨부된 도면들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예 및 첨부된 도면에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호범위는 청구 범위에 의해서 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (15)

  1. 세포부유액이 통과되는 필터;
    내부로 상기 세포부유액이 흐르도록 구비되고, 상기 세포부유액이 상기 필터를 통과하여 흐르도록 상기 필터의 양측에 연결되는 튜브; 및
    상기 튜브의 일측에 연결되어 상기 세포부유액을 이송시키는 펌프를 구비하는 압출유닛을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 압출유닛은
    상기 튜브의 타측에 연결되어 상기 세포부유액을 이송시키는 펌프를 더 구비하고,
    상기 펌프들은 상기 세포부유액이 상기 필터를 왕복하여 통과하도록 교대로 작동하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 필터는
    다공성 멤브레인;
    상기 멤브레인을 고정시키는 한 쌍의 홀더; 및
    상기 홀더와 상기 멤브레인 사이에 개재되고, 중심부를 포함하는 분산존을 제외하고 복수의 미세홀이 형성된 분산 디스크를 구비하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  4. 제 1 항에 이어서,
    상기 필터는 깊이 필터(depth filter)인 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 압출유닛은 상기 튜브의 타측에 연결되어 상기 세포부유액을 수용하는 용기를 더 구비하고,
    복수의 상기 압출유닛이 연결되어 상기 세포부유액이 복수의 상기 압출유닛에 설치된 각각의 상기 필터를 순차적으로 통과하도록 구비되는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 필터는 다공성 멤브레인을 포함하고,
    복수의 상기 필터에 구비되는 복수의 상기 멤브레인들은 공극 크기가 동일한 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 필터는 다공성 멤브레인을 포함하고,
    복수의 상기 필터에 구비되는 복수의 상기 멤브레인들은 공극 크기가 서로 다른 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  8. 세포부유액을 이송시키는 제1 펌프;
    상기 제1 펌프의 후단에 배치되는 제1 필터;
    상기 제1 필터를 통과한 세포부유액이 수용되는 제1 용기;
    상기 제1 용기의 후단에 배치되는 제2 펌프; 및
    상기 제1 용기의 후단에 배치되는 제2 필터를 포함하고,
    상기 세포부유액은 상기 제1 펌프, 상기 제1 필터, 상기 제1 용기, 상기 제2 펌프 및 상기 제2 필터를 거쳐 다시 상기 제1 펌프로 순환되도록 구비되는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 제2 필터와 상기 제1 펌프 사이에 배치되는 제2 용기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 시스템.
  10. a) 필터 및 펌프를 구비하는 압출유닛을 준비하는 단계; 및
    b) 상기 펌프를 작동시켜 세포부유액을 상기 필터로 통과시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    상기 a) 단계는
    a1) 다공성 멤브레인을 구비하는 필터를 준비하는 단계;
    a2) 상기 필터의 양측에 튜브를 연결하는 단계; 및
    a3) 상기 튜브의 일측에 펌프를 연결하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
  12. 제 10 항에 있어서,
    상기 압출유닛은 복수 개 구비되고, 상기 세포부유액은 복수의 상기 압출유닛들에 구비되는 상기 필터들을 순차적으로 통과하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
  13. 제 11 항에 있어서,
    상기 b) 단계 이후,
    c) 상기 튜브를 통해 플러싱(flushing) 용액을 공급하고 상기 펌프를 작동시켜 상기 튜브 및 상기 필터 내의 잔여물을 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    상기 c) 단계 이후,
    d) 상기 필터를 공극의 크기가 더 작은 멤브레인을 구비하는 필터로 교체하고, 상기 b) 단계를 반복하여 수행하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
  15. 제 11 항에 있어서,
    상기 멤브레인의 공극 크기는 0.1㎛ 내지 20㎛ 인 것을 특징으로 하는 세포 압출 방법.
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