WO2022270987A1 - Aurka 선택적 분해 유도 화합물 - Google Patents

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WO2022270987A1
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mmol
cancer
synthesis
compound
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류수희
민임숙
김찬호
박정철
김성훈
이준규
정하나
조승현
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(주) 업테라
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Definitions

  • the present invention relates to a compound for inducing selective degradation of AURKA and a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising the compound as an active ingredient.
  • Aurora kinase is a kinase belonging to serine/threonine kinases that regulate cell division.
  • the human three structural isoforms of Aurora kinase (Aurora A, Aurora B, Aurora C) show distinct functions and different subcellular distributions during cell mitosis and show different functions.
  • Aurora kinase A (AURKA) is located in the centrosome of interphase cells, is involved in centrosome maturation and bipolar spindle formation, and its activity is known to be highest in the G2/M phase.
  • AURKA is also a chromosomal passenger protein kinase and regulates phosphorylation of histone H3 at serine 10.
  • AURKA Overexpression of AURKA causes hyperphosphorylation of normal cell division targets and aberrant phosphorylation of cytoplasmic targets, resulting in chromosomal instability, oncogenic transformation, tumor progression and development of anticancer drug resistance. Therefore, overexpression of AURKA is often observed in various cancer cells such as colon, pancreas, breast, lung, thyroid cancer and leukemia. Recently, a number of noteworthy reports have demonstrated that aurora kinase is an attractive anti-cancer drug target. Inhibition of AURKA stops mitosis by forming a monopolar spindle during mitosis through abnormal formation of spindle and immature centrosome formation.
  • AURKA inhibitors targeting cancer treatment various compounds are under clinical trials as AURKA inhibitors targeting cancer treatment, and known AURKA inhibitors are VE465, tozasertib (VX-680), MK-0457, MK-5108, Ali Alisertib (MLN-8237), LY3295668, etc. exist.
  • AURKA inhibitors are VE465, tozasertib (VX-680), MK-0457, MK-5108, Ali Alisertib (MLN-8237), LY3295668, etc. exist.
  • VX-680 tozasertib
  • MK-0457 MK-5108
  • MK-5108 Ali Alisertib
  • LY3295668 Ali Alisertib
  • PROTAC Protein-based platform technology capable of inducing proteolysis of a target protein in vivo.
  • PROTAC is a bifunctional compound in which a ligand molecule that binds to a disease-related target protein and an E3 ubiquitin ligase binding moiety are connected by a chemical linker. Theoretically, PROTAC compounds can induce degradation of target proteins by positioning them near the E3 ubiquitin ligase.
  • PROTAC can selectively bind to a target protein by a ligand molecule that binds to the target protein (eg AURKA), and the E3 ubiquitin ligase by the E3 ubiquitin ligase binding moiety. Recruitment to the target protein can lead to ubiquitination and subsequent degradation of the target protein via the proteasome.
  • a ligand molecule that binds to the target protein eg AURKA
  • E3 ubiquitin ligase by the E3 ubiquitin ligase binding moiety.
  • Recruitment to the target protein can lead to ubiquitination and subsequent degradation of the target protein via the proteasome.
  • non-patent document 1 [Adhikari, Bikash, et al. Nature chemical biology 16.11 (2020): 1179-1188] and non-patent literature 2 [Wang, Richard, et al. Communications biology 4.1 (2021): 1-15.] discloses Alisertib (MLN-8237), known as an AURKA inhibitor, and this functional compound in which a binding moiety for E3 ubiquitin ligase is connected by a chemical linker.
  • the PROTAC compound disclosed in Non-Patent Document 1 was confirmed to have AURKA resolution of 60% or less, and the PROTAC compound disclosed in Non-Patent Document 2 was confirmed to have AURKA resolution of 50% or less, resulting in a PROTAC compound having improved AURKA resolution and selectivity. It is still in demand.
  • the inventors of the present invention have come to complete the present invention, noting that if a compound capable of effectively inducing selective degradation of AURKA can be developed, it can be applied to cancer treatment using AURKA as a target.
  • the present invention has been made in consideration of the above problems, and an object of the present invention is to provide a compound that induces selective degradation of AURKA.
  • Another object of the present invention is to provide a method for producing a compound inducing selective degradation of AURKA.
  • Another object of the present invention is to provide a use of a compound inducing selective degradation of AURKA.
  • the present invention provides a novel compound that induces degradation or selective degradation of AURKA (Aurora kinase A). Specifically, the present invention provides a bifunctional compound in which an AURKA binding moiety and an E3 ubiquitin ligase binding moiety are connected by a chemical linker.
  • a compound represented by Formula I, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided:
  • ULM is an E3 ubiquitin ligase binding moiety represented by Formula A or Formula B below,
  • X 1 is a single bond, -CH 2 -, -NH-, -O-, -CH 2 CH 2 -, -CC- -CO-, -COO-, -NHCO- or -CONH-;
  • X 3 is hydrogen
  • X 4 is hydrogen, halogen, C 1-6 alkyl, CN, NH 2 , NO 2 , OH, COH, COOH or CF 3 ⁇
  • n is an integer from 1 to 3;
  • Y 1 is hydrogen or C 1-3 alkyl ⁇
  • PTM is an AURKA binding moiety represented by Formula II below,
  • R 1 and R 2 are each independently hydrogen, -NO 2 , -CN, -OH, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 1-6 alkoxy, C 1- 6 thioalkoxy, C 3-6 cycloalkyl, C 3-6 heterocycloalkyl, C 3-6 heteroaryl, phenyl or halogen;
  • R 3 is C 1-6 alkylene, -O-, -S-, -NH- , or a direct bond;
  • Linker is a group that chemically connects ULM and PTM.
  • the ULM is a CRBN E3 ubiquitin ligase binding moiety represented by Formula A above.
  • CRBN means Cereblon E3 ubiquitin ligase.
  • CRBN together with DDB1, Cul4A and ROC1 constitute the E3 ubiquitin ligase complex, where CRBN is the substrate recognition subunit of the complex.
  • Some compounds capable of binding CRBN E3 ubiquitin ligase are known in the art.
  • Ids immunomodulatory imide drugs
  • the ULM may be an E3 ubiquitin ligase ligand represented by Formula A-1 below.
  • X 3 is hydrogen.
  • Chemical Formula A-1 may be selected from the group consisting of the following moieties.
  • CRBN E3 ubiquitin ligase binding moiety Another example of a CRBN E3 ubiquitin ligase binding moiety according to the present invention is as follows (Burslem et al. 2018).
  • the CRBN E3 ubiquitin ligase binding moiety of the present invention is as follows.
  • X 2 may be -CO-, and X 3 may be H.
  • ULM is a VHL E3 ubiquitin ligase binding moiety represented by Formula B above.
  • VHL means von Hippel-Lindau tumor suppressor.
  • VHL together with Elongin B, Elongin C, CUL2 and Rbx1 constitute the VCB E3 ubiquitin ligase complex, where VHL is the substrate recognition subunit of the complex.
  • n may be an integer of 1 to 3, an integer of 1 to 2, or 1.
  • in Formula B May be a 5-6 membered heterocycloalkyl or 5-6 membered heteroaryl ring containing at least one heteroatom selected from the group consisting of N, O and S, and specifically, the above is oxazole, isoxazole, thiazole, isothiazole, imidazole, pyrazole, triazole, oxadiazole, pyrrole, pyrrolidine, furan, dihydrofuran and tetrahydrofuran. It may be a heteroaryl ring, more specifically, the Can be a 5-membered heteroaryl ring containing N and S.
  • Y 1 in Formula B may be C 1-3 alkyl. Specifically, Y 1 may be C 1 alkyl.
  • Formula B may be selected from the group consisting of the following moieties.
  • the PTM moiety that functions as a target protein ligand is the AURKA binding moiety represented by Formula II.
  • Formula II constituting some moieties of the compound of Formula I according to the present invention can bind to the active site of AURKA alone.
  • R 1 and R 2 are each independently F, Cl. It may be a halogen selected from the group consisting of Br and I. Specifically, R 1 may be Cl, and R 2 may be F.
  • R 3 may be C 1 alkylene or a direct bond.
  • the direct bond may mean a case in which R 3 is null.
  • in Formula II may be a 4- to 10-membered heterocycloalkyl containing at least one heteroatom selected from the group consisting of N, O and S.
  • the above May be a 4-9 membered, 4-9 membered, 5-membered, 6-membered or 9-membered heterocycloalkyl containing at least one N.
  • the cycloalkyl or heterocycloalkyl refers to a non-aromatic monocyclic or multicyclic ring-based hydrocarbon ring, and as a polycyclic ring, a bridgehead, a fused ring, a spiro ring ( spiro).
  • in Formula II may be a direct bond.
  • the direct bond is may mean a case where is null.
  • Formula II may be selected from the group consisting of the following moieties.
  • R 1 , R 2 and R 3 are the same as defined in Formula II above.
  • Formula II may be selected from the group consisting of the following moieties.
  • Linker is a group that chemically connects ULM and PTM and is represented by the following formula L:
  • L PTM is connected to It binds to the PTM moiety through
  • L ULM and L PTM are each independently a single bond, -CH 2 -, -NH-, -O-, -CO-, -OCO-, -CONH-, -NHCO-, -O(CH) n CONH- ⁇
  • n is an integer from 1 to 5 ⁇ , or a direct bond
  • L INT is C 1-10 alkylene, -CH 2- , -NH-, -O(CH) n CONH- ⁇ wherein n is an integer from 1 to 5 ⁇ , -(CH 2 ) l O(CH 2 ) m O(CH 2 ) q - ⁇ Where l, m and q are independently integers from 1 to 5 ⁇ , -CHCH-, -CC-, -CH 2 CH 2 O-, -OCH 2 CH 2 -, - CH 2 CH 2 S-, -SCH 2 CH 2 -, -COO-, -CONH-, -NHCO-, And selected from the group consisting of a direct bond ⁇ where, is a ring selected from the group consisting of aryl, heteroaryl, 3-10 membered cycloalkyl, 4-10 membered heterocycloalkyl, 4-10 membered cycloalkenyl, and 4-10 membered heterocycloalkenyl ⁇ ;
  • L ULM , L PTM and L INT are each independently selected from one or more of C 1-6 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, halogen, hydroxy , amine, nitro, cyano or C 1-8 8 haloalkyl;
  • p is an integer of 1 to 20, an integer of 1 to 10, an integer of 1 to 6, or an integer of 1 to 3;
  • the cycloalkyl, heterocycloalkyl or heterocycloalkenyl means a non-aromatic monocyclic or multicyclic hydrocarbon ring, and as a polycyclic ring, a bridgehead, a fused ring ), and a double ring group such as spiro.
  • L ULM , L PTM or in L INT A direct bond is L ULM , L PTM or This may mean that L INT is nothing (null).
  • the linker is a linker included in compounds 1 to 38 shown in Table 1 below.
  • the compound represented by Formula I is at least one compound selected from the group consisting of compounds 1 to 38 shown in Table 1 below, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. .
  • a pharmaceutically acceptable salt is any organic acid or inorganic acid addition salt at a concentration that has an effective effect that is relatively non-toxic and harmless to patients and does not reduce the beneficial effects of the compound represented by formula (I) by side effects caused by otitis media. it means.
  • the pharmaceutically acceptable salt may be hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, or nitric acid as an inorganic acid, and methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, maleic acid, succinic acid, oxalic acid, Benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, manderic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid, galacturonic acid, glutamic acid, glutaric acid, glucuronic acid, aspartic acid, ascorbic acid, carbonic acid, vanillic acid, or hydroiodic acid. It may be, but is not limited to these.
  • the compound represented by the above-mentioned formula (I), its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt is synthesized in the organic chemistry field by known synthesis methods or transformation and derivatization techniques obvious to those skilled in the art. It can be prepared by the same reaction as 1 to 3.
  • PTM, Linker and ULM are groups defined above or suitable derivatives thereof, and RG 1 , RG 2 , RG 2a , RG 2b , RG 3 , RG 3a , RG 3b and RG 4 are organic synthesis moieties containing suitable reactive groups capable of linking together the PROTAC compound intermediates represented by Formula I through the formation of covalent bonds in the field.
  • the covalent bond formation is carried out through synthesis reactions such as amide formation, ester formation, carbamate formation, urea formation, ether formation, amine formation, and various carbon single bonds, double bonds, click chemistry, etc., depending on the specific reactive group. can be formed, but is not limited thereto.
  • a variation of each step in the above reaction schemes may involve one or multiple synthetic steps. Isolation and purification of the product can be accomplished by standard procedures known to those skilled in the art of organic chemistry.
  • the reactant indicated by PTM and the reactant indicated by ULM can be easily synthesized by a person skilled in the art by referring to literature known in the field of organic chemistry and the description of examples of the present invention.
  • the present invention includes compounds of the form PTM-Linker-RG 3 or PTM-Linker 1-RG 2b corresponding to the reaction intermediate of formula (I).
  • a composition for inducing decomposition of AURKA comprising the compound represented by Formula 1, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided.
  • Formula I is as defined above.
  • the AURKA degradation-inducing PROTAC compound according to the present invention can degrade AURKA, which is the target protein, from the viewpoint of the mechanism of action, it achieves an excellent AURKA inhibitory effect even compared to conventional AURKA small molecule inhibitors that inhibit the simple activity of AURKA.
  • composition comprising the compound represented by Formula 1, its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt according to the present invention can be usefully used for the selective decomposition of AURKA.
  • a pharmaceutical composition for preventing or treating AURKA-related diseases comprising the compound represented by Formula I, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Formula I is as defined above.
  • an AURKA-related disease refers to any disease or condition that can be treated, alleviated, delayed, inhibited, or prevented from inducing degradation or inhibiting the activity of AURKA.
  • the AURKA-related disease may be cancer (malignant tumor) or benign tumor.
  • the “cancer” includes all cancers that can exhibit preventive or therapeutic effects due to inhibition of AURKA activity, and may be solid cancer or hematological cancer.
  • the cancer is squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung, squamous cell carcinoma of the lung, peritoneal cancer, skin cancer, skin or intraocular melanoma, rectal cancer, perianal cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine cancer Adenocarcinoma, parathyroid cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, myelofibrosis, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, liver tumor, It may be one or more selected from the group consisting of breast cancer, colon cancer, colon
  • the benign tumors include all benign tumors capable of exhibiting preventive or therapeutic efficacy due to inhibition of AURKA activity, such as benign tumors in a pre-cancerous stage, and may be solid tumors or hematological tumors.
  • the tumor may be at least one selected from the group consisting of Barrett's esophagus, colorectal adenoma and polyp, breast fibroadenoma and cyst, single cell gammaglobulinopathy (MGUS), monoclonal lymphocytosis, etc., but is not limited thereto.
  • a method for degrading AURKA protein by administering the compound represented by Formula 1, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject is provided.
  • a method for degrading AURKA protein by administering the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a sample in vitro is provided.
  • the sample may be cells, cell cultures, body fluids or tissues of mammals including humans, but is not limited thereto.
  • a method for preventing or treating cancer comprising the step of administering the compound represented by Formula I, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject in need thereof .
  • “individual” means a subject to be treated for a disease, and more specifically, means a mammal such as a human or non-human primate, mouse, dog, cat, horse, or cow.
  • prevention refers to any activity that delays the progression of cancer by inhibiting the proliferation of tumors or cancer cells or inducing apoptosis of tumors or cancer cells by administering the pharmaceutical composition of the present invention.
  • treatment refers to all activities that improve or beneficially change cancer by inhibiting proliferation of tumors or cancer cells or inducing apoptosis of tumors or cancer cells by administration of the pharmaceutical composition of the present invention, An attempt to obtain useful or desirable results, including clinical results.
  • a useful or desirable clinical outcome, whether detectable or not, is alleviation or amelioration of one or more symptoms or conditions, reduction of disease extent, stabilization of disease state, inhibition of disease occurrence, inhibition of disease spread, delay or slowing of disease progression. , delay or slowing of disease onset, improvement or alleviation of disease state, and reduction (partial or total), but are not necessarily limited thereto.
  • treatment may mean prolonging the survival of a patient beyond what would be predicted in the absence of treatment.
  • treatment may refer to inhibition of disease progression, temporary slowing of disease progression, and more preferably relates to stopping the progression of a disease forever. In the present invention, it may mean improving the survival of patients by enhancing anticancer effects.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated and used in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. there is.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations include at least one excipient in the compound of the present invention, for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, It is prepared by mixing gelatin, etc.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions for oral use, emulsions, syrups, etc.
  • Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried formulations, and suppositories.
  • Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspensions.
  • As a base for the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogeratin and the like may be used.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathological condition to be treated, the severity of the disease or pathological condition, the route of administration, and the judgment of the prescriber. Determination of dosage based on these factors is within the level of those skilled in the art, and generally dosages range from 0.0001 mg/kg/day to approximately 3000 mg/kg/day. A more preferred dosage is 0.1 mg/kg/day to 1000 mg/kg/day. Administration may be administered once a day, or may be administered in several divided doses. The dosage is not intended to limit the scope of the present invention in any way.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, livestock, and humans through various routes. All modes of administration are contemplated, eg oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine intrathecal or intracerebrovascular injection.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating cancer may further include, in addition to the active ingredient, any compound or natural extract whose safety has already been verified and is known to have anticancer activity for enhancement and reinforcement of anticancer effect. there is.
  • an anticancer adjuvant for cancer treatment comprising the compound represented by Formula I, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • anti-cancer adjuvant refers to a composition that synergistically increases the effect of anti-cancer treatment by preventing side effects caused by the anti-cancer agent when applied in parallel with treatment with an anti-cancer agent. Therefore, the adjuvant for treatment is an anticancer adjuvant and can be administered simultaneously or sequentially with an anticancer agent.
  • Anticancer agents can be selected based on general principles that are considered when selecting an anticancer agent, such as the type of cancer cell, the rate of absorption of the anticancer agent (treatment period and route of administration of the anticancer agent), the location of the tumor, and the size of the tumor.
  • the compound according to the present invention may exhibit an effect of inducing selective degradation of AURKA. Therefore, the compound according to the present invention can be usefully used for preventing or treating AURKA-related cancer.
  • FIG. 1 is a Western blot image showing AURKA resolution and AURKA selectivity when the concentrations of example compounds are 0.1 ⁇ M and 1 ⁇ M
  • Compounds 1 and 2 , 3, 11 and 13/ Figure 1b Compounds 4, 5, 12, 13, 14 and 30/ Figure 1c: Compounds 6, 7, 8, 9, 10/ Figure 1d: Compounds 15, 18, 19, 20 and 31 / Fig. 1e: Compounds 13, 16, 17 and 21/ Fig. 1f: Compounds 15, 22, 24, 32 and 33/ Fig. 1g: Intermediate 1, Compounds 13, 25, 26, 27 and 28/ Fig. 1h: Intermediate 1, Compounds 13, 35, 36, 37 and 38/ N. Control: Negative Control (no compound treatment)].
  • Figure 2 is a Western blot image showing AURKA resolution in the case of low concentrations of 6 nM and 30 nM of example compounds
  • Figure 2b Intermediate 1
  • Figure 2c Compounds 2, 11, 14, 15 and 17/
  • Figure 2d Compounds 15, 16, 18, 20 and 21
  • Figure 2e Compounds 15, 26, 36 and 37/ N.
  • Control Negative Control (untreated with compound)].
  • Figure 3 is a Western blot image showing the AURKA resolution when the concentration of Alisertib-based PROTAC of Comparative Examples 1 to 3 is 0.1 ⁇ M and 1 ⁇ M [Fig. 3a: Comparative Example 1 / Fig. 3b: Comparative Example 2 / Fig. 3c: Comparative Example 3].
  • FIG. 4 is a schematic diagram showing the principle of action of PROTAC.
  • the present invention provides synthesis methods for compounds 1 to 38 shown in Table 1 below.
  • the compounds of the present invention were purified and structurally analyzed according to the method below.
  • HPLC data were obtained using 1260 Infinity II G1311B, G7111B or G6410B, 0.1% TFA in water (solvent A) and acetonitrile (solvent B) or 10 mM NH4HCO3 (solvent A) and acetonitrile in water (solvent B) or water.
  • 0.0375% TFA (solvent A) and 0.01875% TFA in acetonitrile (solvent B) were used as mobile phases.
  • Columns were X-Bridge C8 (150X4.6) mm, 3.5 ⁇ m, Atlantis dC18 (250X4.6) mm, 5 ⁇ m or Zobrax Eclipse Plus C18 (4.6X150)mm, 3.5um.
  • Step 4 Synthesis of 4-((2-chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)-N-(2-chlorophenyl)benzamide (INT-4)
  • Step 6 tert-Butyl 4-(2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino) Synthesis of phenyl) acetyl) piperazine-1-carboxylate (INT-6)
  • Step 7 N-(2-chlorophenyl)-4-((5-fluoro-2-((4-(2-oxo-2-(piperazin-1-yl)ethyl)phenyl)amino)pyrimidine Synthesis of -4-yl)amino)benzamide 2,2,2-trifluoroacetate (UPP-L1)
  • Step 4 Synthesis of (2S,4R)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide hydrochloride (5)
  • Step 5 tert-Butyl ((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)carbamoyl)pyrrolidine Synthesis of -1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamate (6)
  • Step 1 tert-butyl (2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) Synthesis of thoxy) ethoxy) ethyl) carbamate (2)
  • Step 2 4-((2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3 -Synthesis of dione hydrochloride (3)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethoxy) Synthesis of ethoxy)ethyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 1)
  • Step 1 tert-butyl (6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)carbamate (2) synthesis of
  • Step 2 4-((6-aminohexyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 2,2,2-trifluoroacetate Synthesis of (3)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)piperazine-1-carboxyl Synthesis of mid (compound 2)
  • Step 1 N-(but-3-yn-1-yl)-4-(2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5- Synthesis of fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl)piperazine-1-carboxamide (2)
  • Step 2 Synthesis of 4-((2-azidoethyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethyl)- Synthesis of 1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 3)
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl (2-(1-(2-cyanoethyl)piperidin-4-yl)ethyl)carbamate (2)
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl (2-(1-(3-aminopropyl)piperidin-4-yl)ethyl)carbamate (3)
  • Step 3 tert-Butyl (2-(1-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl Synthesis of )piperidin-4-yl)ethyl)carbamate (4)
  • Step 4 4-((3-(4-(2-aminoethyl)piperidin-1-yl)propyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline Synthesis of -1,3-dione 2,2,2-trifluoroacetate (5)
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was dissolved in a mixture of DCM/MeOH (1/1, 30 mL). Si-carbonate ( ⁇ 1 g) was added to the solution and stirred at 25 °C for 2 hours. The resin was filtered through celite and washed with methanol (25 mL). The filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain the title compound (0.72 g, 100 % yield) as a greenish yellow gum.
  • Step 5 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(1-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl)p Synthesis of peridin-4-yl)ethyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 4)
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetate (2)
  • Step 2 Synthesis of 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetic acid (3)
  • Step 3 tert-Butyl (2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl) Synthesis of oxy)acetamido)ethoxy)ethoxy)ethyl)carbamate (4)
  • Step 4 N-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethyl)-2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-di Synthesis of oxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamide 2,2,2-trifluoroacetate (5)
  • Step 5 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy) Synthesis of acetamido)ethoxy)ethoxy)ethyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 5)
  • Step 1 tert-butyl (2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazole-5- yl)benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-2-oxoethoxy)ethoxy)ethyl)carbamate (2) synthesis of
  • Step 2 (2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-4- Synthesis of hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide hydrochloride (3)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl) benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-2-oxoethoxy)ethoxy)ethyl)piperazine-1-carboxyl Synthesis of mid (compound 6)
  • Step 1 tert-Butyl (8-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)carbamoyl ) Synthesis of pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) amino)-8-oxooctyl) carbamate (2)
  • Step 2 (2S,4R)-1-((S)-2-(8-aminooctaneamino)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthia Synthesis of sol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide 2,2,2-trifluoroacetate (3)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(8-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)carbamoyl)p Synthesis of Rolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-8-oxooctyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 7)
  • reaction process was observed by LCMS. After completion of the reaction, the reaction mixture was diluted with cold water (20 mL) and extracted with EtOAc (2 X 20 mL). The combined organic phases were washed with 10% NaHCO 3 (30 mL) solution and brine (2 X 20 mL). The obtained organic phase was dried over Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by flash column chromatography (100-200 mesh) and eluted with 3-5% MeOH/DCM to give the titled compound (650 mg, 56.8 % yield) as an off-white solid.
  • Step 3 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-aminopropyl)phenyl)propanamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy Synthesis of -N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide (4)
  • the reactant was filtered through celite, and the residue obtained by concentration under reduced pressure was diluted with ammonium hydroxide solution (20 mL) and extracted with DCM (2 X 20 mL). The organic phase was dried over Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to give the titled compound (202 mg, 40.0 % yield) as pale brown gum.
  • Step 4 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(3-(4-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl) benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-3-oxopropyl)phenyl)propyl)piperazine-1-carboxamide ( Synthesis of compound 8)
  • Step 1 N-(but-3-yn-1-yl)-4-(2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5- Synthesis of fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl)piperazine-1-carboxamide (2)
  • Step 2 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-azidopropanamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy-N-(4-(4-) Synthesis of methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide (4)
  • Step 3 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(2-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl) Benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-3-oxopropyl)-1H-1,2,3-triazole-4 Synthesis of -yl)ethyl)piperazine-1-carboxamide (Compound 9)
  • Step 3 Synthesis of 2-(3-(1-benzylpiperidin-4-yl)propyl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 7 Synthesis of ethyl 3-(4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)propyl)piperidin-1-yl)propanoate (8)
  • Step 8 Synthesis of 3-(4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)propyl)piperidin-1-yl)propanoic acid (9)
  • Step 9 tert-Butyl (3-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazole-5- yl)benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-3-oxopropyl)piperidin-4-yl)propyl)carba Synthesis of Mate (10)
  • the reaction mixture was stirred at 25 °C for 3 hours and the reaction process was observed by UPLC-MS. After completion of the reaction, the reaction mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EtOAc (2 X 20 mL). The combined organic phases were washed with 10% NaHCO 3 solution (20 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The obtained compound was purified by flash column chromatography and eluted with 3-5% MeOH/CH 2 Cl 2 . The target compartment was concentrated under reduced pressure to obtain the title compound (326 mg, 43.9 % yield) as a brown gum.
  • Step 10 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-aminopropyl)piperidin-1-yl)propanamido)-3,3-dimethylbutanoyl Synthesis of )-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide 2,2,2-trifluoroacetate (11)
  • Step 11 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(3-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl) Benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-3-oxopropyl)piperidin-4-yl)propyl)piperazine- Synthesis of 1-carboxamide (Compound 10)
  • Step 3 Synthesis of tert-butyl (E/Z)-(4-(2-cyanovinyl)phenethyl)carbamate (4)
  • Step 4 Synthesis of tert-butyl (4-(3-aminopropyl)phenethyl)carbamate (5)
  • Step 6 4-((3-(4-(2-aminoethyl)phenyl)propyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione Synthesis of 2,2,2-trifluoroacetate (7)
  • Step 7 4-(2-(4-((4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetyl )-N-(4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl)phenethyl)pipeline Synthesis of Razine-1-Carboxamide (Compound 11)
  • the reactant was diluted with water (30 mL), and the compound was sequentially extracted with DCM (10 mL) and a mixture of THF and DCM (2 X 20 mL) (2:8). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to give a brown viscous substance (gum).
  • the obtained compound was purified by flash column chromatography and eluted with 1-15% methanol in DCM.
  • the target compartment was concentrated under reduced pressure, purified by prep-HPLC, and lyophilized for 30 hours to obtain the title compound (40 mg, 0.039 mmol, 5.37 % yield) as a yellow solid.
  • Step 4 Methyl 2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetate (8 ) synthesis of
  • Step 5 2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino)phenyl)acetic acid (9 ) synthesis of
  • Step 6 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3- Synthesis of dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 12)
  • Step 1 Synthesis of 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((3-hydroxypropyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2)
  • Step 2 3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl 4-methylbenzenesulfonate (3) synthesis
  • Step 3 tert-Butyl 4-(2-(4-((4-((4-((2-chlorophenyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-2-yl)amino Synthesis of )phenyl)acetyl)piperazine-1-carboxylate (6)
  • Step 4 N-(2-chlorophenyl)-4-((5-fluoro-2-((4-(2-oxo-2-(piperazin-1-yl)ethyl)phenyl)amino)pyrimidine Synthesis of -4-yl)amino)benzamide (7)
  • Step 5 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 13)
  • Step 1 Synthesis of 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((6-hydroxyhexyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2)
  • Step 2 6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl 4-methylbenzenesulfonate (3) synthesis
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 14)
  • Step 1 Synthesis of 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((8-hydroxyoctyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2)
  • Step 2 8-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)octyl 4-methylbenzenesulfonate (3) synthesis
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(8-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)octyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 15)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-((3-(piperazin-1-yl)propyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2) synthesis of
  • Step 2 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-5-yl)amino)propyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 16)
  • Step 3 Benzyl 4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidin-4-yl)methyl ) synthesis of piperazine-1-carboxylate (4)
  • Step 5 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) piperidin-4-yl) methyl) piperazin-1-yl)-2-oxoethyl) phenyl) amino)-5-fluoropyrimidine-4 Synthesis of -yl)amino)benzamide (Compound 17)
  • Step 1 Benzyl 4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl ) synthesis of piperazine-1-carboxylate (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-5-yl) piperidin-4-yl) methyl) piperazin-1-yl)-2-oxoethyl) phenyl) amino)-5-fluoropyrimidine-4 Synthesis of -yl)amino)benzamide (Compound 18)
  • Step 1 Synthesis of benzyl 4-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate (2)
  • Step 3 Benzyl 4-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidin-4-yl)piperazine Synthesis of -1-carboxylate (5)
  • Step 5 N-(2-Chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))- 1,3-dioxoisoindolin-4-yl) piperidin-4-yl) piperazin-1-yl)-2-oxoethyl) phenyl) amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl) Synthesis of amino)benzamide (compound 19)
  • Step 1 Benzyl 4-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)piperazine Synthesis of -1-carboxylate (3)
  • Step 3 N-(2-Chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))- 1,3-dioxoisoindolin-5-yl) piperidin-4-yl) piperazin-1-yl)-2-oxoethyl) phenyl) amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl) Synthesis of amino)benzamide (compound 20)
  • Step 1 Synthesis of 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((5-hydroxypentyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2)
  • Step 2 5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)pentyl 4-methylbenzenesulfonate (3) synthesis
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)pentyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 21)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((4-(piperazin-1-yl)butyl)amino)isoindoline-1,3-dione (2) synthesis of
  • Step 2 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(4-(4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 22)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(3-(hydroxymethyl)azetidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione (2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of 1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)azetidine-3-carbaldehyde (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) azetidin-3-yl) methyl) piperazin-1-yl)-2-oxoethyl) phenyl) amino) -5-fluoropyrimidine-4- Synthesis of yl)amino)benzamide (Compound 23)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(3-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione (3) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)pyrrolidine-3-carbaldehyde (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)pyrrolidin-3-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidine-4 Synthesis of -yl)amino)benzamide (Compound 24)
  • Step 1 tert-Butyl 4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) methyl)piperidin-1 -Synthesis of carboxylate (2)
  • Step 2 Synthesis of 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-((piperidin-4-ylmethyl)amino)isoindoline-1,3-dione (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1, 3-dioxoisoindolin-4-yl) )amino)methyl)piperidin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide Synthesis of (Compound 25)
  • Step 1 tert-Butyl 4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) propyl)piperidine Synthesis of -1-carboxylate (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propyl)piperidin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino) Synthesis of benzamide (Compound 26)
  • Step 1 tert-butyl (3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) propyl)carbamate (3) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 4-((3-aminopropyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-((3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1, Synthesis of 3-dioxoisoindolin-4-yl))amino)propyl)amino)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 27)
  • Step 1 tert-butyl (5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)pentyl)carbamate (3) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 4-((5-aminopentyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-((5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1, Synthesis of 3-dioxoisoindolin-4-yl))amino)pentyl)amino)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 28)
  • Step 1 Synthesis of benzyl (7-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)heptyl)carbamate (3)
  • Step 2 Synthesis of 4-((7-aminoheptyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-((7-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))-1 Synthesis of ,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)heptyl)amino)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 29)
  • Step 2 Synthesis of benzyl (9-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)nonyl)carbamate (4)
  • Step 3 Synthesis of 4-((9-aminononyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (5)
  • Step 4 N-(2-Chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-((9-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))-1 Synthesis of ,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)nonyl)amino)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 30)
  • Step 2 tert-Butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperazin-1-yl) Synthesis of methyl)piperidine-1-carboxylate (4)
  • Step 4 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidine-4 Synthesis of -yl)amino)benzamide (Compound 31)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(3-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione (2) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl 3-(3-cyanopropylidene)azetidine-1-carboxylate (3)
  • Step 3 Synthesis of tert-butyl 3-(4-aminobutyl)azetidine-1-carboxylate (4)
  • Step 5 4-((4-(azetidin-3-yl)butyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (7) synthesis of
  • Step 6 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(3-(4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)azetidin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benz Synthesis of Amide (Compound 32)
  • Step 1 tert-Butyl 2-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) methyl)-7-azaspiro [3.5] Synthesis of nonane-7-carboxylate (3)
  • Step 2 tert-Butyl 2-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino) methyl)-7-azaspiro [3.5] Synthesis of nonane-7-carboxylate (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3 -dioxoisoindolin-4-yl))amino)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl Synthesis of )amino)benzamide (Compound 33)
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl 3-(4-aminobutyl)pyrrolidine-1-carboxylate (3)
  • Step 3 tert-Butyl 3-(4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)pyrrolidine Synthesis of -1-carboxylate (5)
  • Step 5 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-(2-(3-(4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino) Synthesis of benzamide (compound 34)
  • Step 1 tert-butyl (4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)carbamate (3) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 4-((4-aminobutyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (4)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-((4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-di Synthesis of oxoisoindolin-4-yl)amino)butyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 35)
  • Step 1 tert-butyl (6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)carbamate (2) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 4-((6-aminohexyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-((6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-di Synthesis of oxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 36)
  • Step 1 tert-butyl (8-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)octyl)carbamate (2) synthesis of
  • Step 2 4-((8-aminooctyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione Synthesis of (3)
  • Step 3 N-(2-Chlorophenyl)-4-((2-((4-((8-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindoline -4-yl)amino) octyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide Synthesis of (Compound 37)
  • Step 1 tert-butyl (10-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)decyl)carbamate (2) synthesis of
  • Step 2 Synthesis of 4-((10-aminodecyl)amino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (3)
  • Step 3 N-(2-chlorophenyl)-4-((2-((4-((10-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-di Synthesis of oxoisoindolin-4-yl)amino)decyl)carbamoyl)phenyl)amino)-5-fluoropyrimidin-4-yl)amino)benzamide (Compound 38)
  • the MDA-MB-231 cell line was purchased from Korea Cell Line Bank. Passage of cultured cells was maintained around P50.
  • Thermo's cell counter (Catalog # AMQAX1000) and 0.4% trypan blue solution were used.
  • 3 ⁇ 10 5 cells were seeded in each well of a 12-well plate (SPL), and the cells were cultured in a culture medium volume of 1 mL.
  • the compound was completely dissolved in DMSO (Sigma, Cat. No. D2438; Lot. No. RNBK1809) and used in the experiment, and the concentration of DMSO treated in each well was unified at 0.1%, and treated by adding it intracellularly. .
  • the concentration treated in each well is as indicated in the blot image.

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Abstract

본 발명은 AURKA의 선택적 분해를 유도하는 신규 화합물에 관한 것으로, 구체적으로 AURKA 결합 모이어티와 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티가 화학적 링커로 연결된 이기능성 화합물, 이의 제조방법, 및 이의 용도를 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 화합물들은 AURKA 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

AURKA 선택적 분해 유도 화합물
본 발명은 AURKA 선택적 분해 유도 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
오로라 키나아제(Aurora kinase)는 세포 분열을 조절하는 세린/트레오닌 키나아제에 속하는 키나아제이다. 오로라 키나아제의 인간 3가지 구조적 아형(isoform)(Aurora A, Aurora B, Aurora C)는 세포의 유사분열시 구분되는 기능과 서로 다른 세포 내 분포를 나타내고 서로 다른 기능을 보인다. 이중 오로라 키나제 A(Aurora kinase A; AURKA)는 간기 세포 (interphase cells)의 중심체에 위치하고, 중심체 성숙 및 쌍극 방추체 형성에 관여하며, 그 활성은 G2/M기에서 가장 높은 것으로 알려져 있다. 또한 AURKA는 chromosomal passenger protein kinase이고 10번째 세린에서 히스톤 H3의 인산화를 조절한다.
AURKA의 과발현은 정상 세포분열 주기 타겟들의 과인산화 및 세포질 타겟들의 변종인산화를 야기하여, 염색체 불안정성, 발암적 변형(oncogenic transformation), 종양 진행(tumor progression) 및 항암제 저항성의 발달을 야기한다. 따라서, AURKA의 과발현은 대장, 췌장, 유방, 폐, 갑상선암 및 백혈병과 같은 다양한 암세포에서 종종 관찰된다. 최근 주목할만한 다수의 보고들에서 오로라 키나아제가 매력적인 항암 약물 타겟이라는 것이 입증된 바 있다. AURKA의 억제는 방추체의 비정상적인 형성과 미성숙한 중심체 형성을 통하여 유사분열시 단극의 방추체를 형성시켜 유사분열을 멈추게 한다.
이러한 근거를 토대로, 암 치료를 타겟으로 하는 AURKA 저해제로서 다양한 화합물들이 임상시험 중에 있으며, 알려진 AURKA 저해제는 VE465, 토자세르티브(tozasertib)(VX-680), MK-0457, MK-5108, 알리세르티브(Alisertib)(MLN-8237), LY3295668 등이 존재한다. 그러나, 이러한 최근까지의 연구에도 불구하고, 아직 FDA에 의해 승인을 받은 AURKA 저해 약물은 전무한 실정이다.
한편, 최근 들어, 표적 단백질의 체내 단백질 분해(proteolysis)를 유도할 수 있는 저분자 화합물 기반 플랫폼 기술로서 PROTAC(Proteolysis targeting chimera)이 제시된 바 있다. PROTAC이란 질환 관련 표적 단백질에 결합하는 리간드 분자와 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티가 화학적 링커로 연결된 이기능성 화합물이다. 이론적으로 PROTAC 화합물은 질환 관련 표적 단백질을 E3 유비퀴틴 라이게이즈 근처에 위치시킴으로써, 표적 단백질의 분해를 유도할 수 있다. 구체적으로, 도 4를 참조하면, PROTAC은 표적 단백질(예: AURKA)에 결합하는 리간드 분자에 의하여 표적 단백질에 선택적으로 결합할 수 있고, E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티에 의하여 E3 유비퀴틴 라이게이즈를 표적 단백질로 모집시킴으로써 유비퀴틴화 및 프로테아좀을 통한 표적 단백질의 후속 분해를 유도할 수 있다.
AURKA를 타겟 단백질로 하는 PROTAC 화합물의 경우, 비특허 문헌 1[Adhikari, Bikash, et al. Nature chemical biology 16.11 (2020): 1179-1188] 및 비특허 문헌 2[Wang, Richard, et al. Communications biology 4.1 (2021): 1-15.]에 AURKA 저해제로 알려진 알리세르티브(Alisertib)(MLN-8237)와 E3 유비퀴틴 라이게이즈에 대한 결합 모이어티를 화학적 링커로 연결한 이 기능성 화합물을 개시하고 있다. 그러나, 비특허 문헌 1에 개시된 PROTAC 화합물은 60% 이하의 AURKA 분해능이 확인되었으며, 비특허 문헌 2에 개시된 PROTAC 화합물은 50%이하의 AURKA 분해능이 확인되어, 향상된 AURKA 분해능 및 선택성을 갖는 PROTAC 화합물이 여전히 요구되는 실정이다.
이에, 본 발명의 발명자들은 AURKA의 선택적 분해를 효과적으로 유도할 수 있는 화합물을 개발할 수 있으면, AURKA를 타겟으로 하는 암의 치료 용도에 응용할 수 있음에 착안하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 고려하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 AURKA의 선택적 분해 유도 화합물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 AURKA의 선택적 분해 유도 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 AURKA의 선택적 분해 유도 화합물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제(들)로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제(들)는 이하의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
AURKA 선택적 분해 유도 화합물
본 발명은 AURKA(Aurora kinase A)의 분해 또는 선택적 분해를 유도하는 신규 화합물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 AURKA 결합 모이어티와 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티가 화학적 링커로 연결된 이기능성 화합물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 하기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
[화학식 Ⅰ]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000001
상기 화학식 Ⅰ에서,
ULM은 하기 화학식 A 또는 화학식 B로 표시되는 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티이고,
[화학식 A]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000002
{상기 화학식 A에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000003
는
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000004
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000005
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000006
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000007
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000008
및
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000009
로 구성된 군에서 선택된 고리이고,
X1은 단일결합, -CH2-, -NH-, -O-, -CH2CH2-, -CC- -CO-, -COO-, -NHCO- 또는 -CONH-이고;
X2는 -CH2-, -CH(C1-4알킬)-, -NH-, -N(C1-4알킬)-, -O-, -CO-, -CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH(C1-4알킬)-, -N=CH-, -N=C(C1-4알킬)- 또는 -N=N-이고,
X3은 수소이고;
X4는 수소, 할로겐, C1-6알킬, CN, NH2, NO2, OH, COH, COOH 또는 CF3임.}
[화학식 B]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000010
{상기 화학식 B에서,
n은 1 내지 3의 정수이고,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000011
는 5원 내지 6원 사이클로알킬, 페닐, 5원 내지 6원 헤테로사이클로알킬 또는 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리이고,
Y1은 수소 또는 C1-3알킬임}
PTM은 하기 화학식 Ⅱ로 표시되는 AURKA 결합 모이어티이며,
[화학식 Ⅱ]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000012
{상기 화학식 Ⅱ에서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, -NO2, -CN, -OH, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-6알콕시, C1-6티오알콕시, C3-6시클로알킬, C3-6헤테로시클로알킬, C3-6헤테로아릴, 페닐 또는 할로겐이고,
R3는 C1-6알킬렌, -O-, -S-, -NH-, 또는 직접결합이며,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000013
는 4원 내지 10원 사이클로알킬, 페닐, 4원 내지 10원 헤테로사이클로알킬, 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리 또는 직접결합이다.}
Linker는 ULM과 PTM을 화학적으로 연결하는 기이다.
상기 화학식 A 및 B에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000014
는 ULM을 링커에 연결하는 공유 결합을 나타낸다.
상기 화학식 Ⅱ에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000015
는 PTM을 링커에 연결하는 공유 결합을 나타낸다.
(1) E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 ULM은 상기 화학식 A로 표시되는 CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티이다. 본 발명에서 CRBN은 세레블론(Cereblon) E3 유비퀴틴 라이게이즈를 의미한다. CRBN은 DDB1, Cul4A 및 ROC1와 함께 E3 유비퀴틴 라이게이즈 복합체를 구성하며, 여기서 CRBN은 상기 복합체의 기질 인식 서브유닛이다. CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈에 결합할 수 있는 화합물은 당업계에 일부 공지되어 있다. 예컨대, 탈리도마이드(thalidomide)가 CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈에 결합한다는 사실이 알려진 이후, 레날리도마이드 및 포말리도마이드를 포함한 다수의 이미드계 소분자 화합물(immunomodulatory imide drug; IMiD)이 CRBN 결합능을 가진다는 점이 보고되었다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 ULM은 하기 화학식 A-1로 표시되는 E3 유비퀴틴 라이게이즈 리간드일 수 있다.
[화학식 A-1]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000016
상기 화학식 A-1에서,
X2는 -CH2-, -CH(C1-4알킬)-, -CO- 또는 -N=N-이고,
X3은 수소이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 A-1은 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000017
본 발명에 따른 CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈 리간드의 일 예시는 다음과 같다(문헌[Chamberlain and Brian. 2019] 및 문헌[Akuffo et al. 2018]):
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000018
본 발명에 따른 CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티의 또 다른 일 예시는 다음과 같다(문헌[Burslem et al. 2018]).
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000019
구체적 실시양태에서, 본 발명의 CRBN E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티는 하기와 같다.
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000020
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 A-1에서 X2는 -CO-이고, X3은 H일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면 ULM은 상기 화학식 B로 표시되는 VHL E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티이다. 본 발명에서 VHL은 폰 히펠-린다우 종양 억제자(von Hippel-Lindau tumor suppressor)를 의미한다. VHL은 Elongin B, Elongin C, CUL2 및 Rbx1와 함께 VCB E3 유비퀴틴 라이게이즈 복합체를 구성하며, 여기서 VHL은 상기 복합체의 기질 인식 서브유닛이다. VHL E3 유비퀴틴 라이게이즈에 결합할 수 있는 화합물은 당업계에 일부 공지되어 있다. 예컨대, Ala-Leu-Ala-(Hy)Pro-Tyr-Ile-Pro 헵타펩티드, Leu-Ala-(Hy)Pro-Tyr-Ile 펜타펩티드와 같은 펩타이드가 알려진 이후, 이를 개량한 저분자 VHL E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 화합물이 보고된 바 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 B에서, n은 1 내지 3의 정수, 1 내지 2의 정수 또는 1일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 B에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000021
는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 하나 이상 포함하는 5원 내지 6원 헤테로사이클로알킬 또는 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리일 수 있고, 구체적으로, 상기
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000022
는 옥사졸, 이소옥사졸, 싸이아졸, 이소싸이아졸, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 옥사디아졸, 피롤, 피롤리딘, 퓨란, 디하이드로퓨란 및 테트라하이드로퓨란으로 구성된 군에서 선택된 5원 헤테로아릴 고리일 수 있으며, 보다 구체적으로, 상기
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000023
는 N 및 S를 포함하는 5원 헤테로아릴 고리일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 B에서 Y1은 C1-3알킬일 수 있다. 구체적으로, 상기 Y1은 C1알킬일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 B는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000024
(2) 표적 단백질 리간드(PTM)
본 발명에 따른 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물에서, 표적 단백질 리간드 기능을 수행하는 모이어티인 PTM은 상술한 화학식 Ⅱ로 표시되는 AURKA 결합 모이어티이다.
본 발명에 따른 화학식 Ⅰ 화합물의 일부 모이어티를 구성하는 화학식 Ⅱ는 단독적으로 AURKA의 활성 부위에 결합할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅱ에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 F, Cl. Br 및 I로 이루어진 군으로부터 선택되는 할로겐일 수 있다. 구체적으로, 상기 R1은 Cl일 수 있고, R2는 F일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅱ에서, R3는 C1알킬렌 또는 직접결합일 수 있다. 상기 직접결합은 R3가 아무것도 아닌(null) 경우를 의미할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅱ에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000025
는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 하나 이상 포함하는 4원 내지 10원 헤테로사이클로알킬일 수 있다. 구체적으로, 상기
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000026
는 N을 하나 이상 포함하는 4원 내지 9원, 4원, 5원, 6원 또는 9원 헤테로사이클로알킬일 수 있다.
상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 비방향족 일환식(monocyclic) 또는 다환식(multicyclic)고리계 탄화수소 고리를 의미하며, 다환식 고리로서, 다리목(bridgehead), 접합고리(fused ring), 스피로고리(spiro)와 같은 이중고리기를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅱ에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000027
는 직접결합일 수 있다. 상기 직접결합은
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000028
가 아무것도 아닌(null) 경우를 의미할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅱ는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000029
상기 모이어티로 구성된 군에서, R1, R2 및 R3는 상기 화학식 Ⅱ에서 정의한 바와 동일하다.
구체적으로, 상기 화학식 Ⅱ는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000030
(3) 링커(Linker)
Linker는 ULM과 PTM을 화학적으로 연결하는 기이고, 하기 화학식 L로 표시된다:
[화학식 L]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000031
상기 화학식 L에서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000032
및
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000033
는 결합이고,
LULM는 이에 연결된
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000034
를 통해 ULM 모이어티와 결합하며,
LPTM은 이에 연결된
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000035
를 통해 PTM 모이어티와 결합하며,
LULM 및 LPTM은 각각 독립적으로 단일결합, -CH2-, -NH-, -O-, -CO-, -OCO-, -CONH-, -NHCO-, -O(CH)nCONH-{여기서, n은 1 내지 5의 정수임}, 또는 직접결합이며,
LINT는 C1-10알킬렌, -CH2-, -NH-, -O(CH)nCONH-{여기서, n은 1 내지 5의 정수임}, -(CH2)lO(CH2)mO(CH2)q-{여기서, l, m 및 q는 독립적으로 1 내지 5의 정수임}, -CHCH-, -CC-, -CH2CH2O-, -OCH2CH2-, -CH2CH2S-, -SCH2CH2-, -COO-, -CONH-, -NHCO-,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000036
및 직접결합으로 구성된 군에서 선택되며{여기서,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000037
은 아릴, 헤테로아릴, 3 내지 10원 사이클로알킬, 4원 내지 10원 헤테로사이클로알킬, 4 내지 10원 사이클로알케닐, 및 4 내지 10원 헤테로사이클로알케닐로 구성된 군에서 선택된 고리임},
LULM, LPTM 및 LINT는 각각 독립적으로 1 이상의 C1-6알킬, C3-8사이클로알킬, C3-8헤테로사이클로알킬, 할로겐, 히드록시, 아민, 니트로, 시아노 또는 C1-8할로알킬로 치환될 수 있으며,
p는 1 내지 20의 정수, 1 내지 10의 정수, 1 내지 6의 정수 또는 1 내지 3의 정수이다.
상기 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알케닐은 비방향족 일환식(monocyclic) 또는 다환식(multicyclic)고리계 탄화수소 고리를 의미하며, 다환식 고리로서, 다리목(bridgehead), 접합고리(fused ring), 스피로고리(spiro)와 같은 이중고리기를 포함할 수 있다.
상기 LULM, LPTM 또는 LINT에서 직접결합은, LULM, LPTM 또는 LINT가 아무것도 아닌(null) 경우를 의미할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기
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은
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,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000040
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000041
,
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,
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,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000044
,
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000045
또는
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000046
이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, Linker는 하기 표 1에 나타낸 화합물 1 내지 38에 포함된 Linker이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물은 하기 표 1에 나타낸 화합물 1 내지 38로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 화합물, 이의 입체 입성질체 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염이다.
본 발명에서 약학적으로 허용가능한 염이란 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이염에 기인한 부작용이 화학식 I로 표시되는 화합물의 이로운 효능을 저하시키지 않는 임의의 유기산 또는 무기산 부가염을 의미한다. 예컨대, 약학적으로 허용가능한 염은 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 또는 질산 등일수 있고, 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레인산, 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산, 구연산, 젖산, 글리콜산, 글루콘산, 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산, 글루쿠론산, 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산 또는 요오드화수소산일 수 있으나, 이들에 제한되지 않는다.
AURKA 선택적 분해 유도 화합물의 제조방법
본 발명에서, 상술한 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 유기화학 기술 분야에 공지된 합성 방법 또는 통상의 기술자에게 자명한 변형 및 유도체화 기법에 의해 하기 반응식 1 내지 3과 같은 반응에 의해 제조될 수 있다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000047
[반응식 2]
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[반응식 3]
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000049
상기 반응식 1 내지 3에서, PTM, Linker 및 ULM은 위에서 정의된 기이거나, 그의 적합한 유도체이고, RG1, RG2, RG2a, RG2b, RG3, RG3a, RG3b 및 RG4는 유기 합성 분야에서 공유 결합 형성을 통해 화학식 Ⅰ로 표시되는 PROTAC 화합물 중간체를 함께 연결할 수 있는 적합한 반응기를 포함하는 모이어티이다. 상기 공유 결합 형성은 특정한 반응기에 따라 아미드 형성, 에스테르 형성, 카바메이트 형성, 우레아 형성, 에테르 형성, 아민 형성 및 다양한 탄소간 단일결합, 이중결합 형성, 클릭 케미스트리(Click chemistry) 등의 합성 반응을 거쳐 형성될 수 있고, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식들에서 각 단계의 변형은 1개 또는 다중 합성 단계를 포함할 수 있다. 생성물의 분리 및 정제는 유기화학 분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 과정에 의해 달성될 수 있다.
본 발명에서, 반응식 2의 일례로 실시예 1, 2, 4 내지 8, 및 10 내지 38의 제조방법이 제시되었고, 반응식 3의 일례로 실시예 3 및 9가 제시되었다.
상기 반응식에서, PTM으로 제시된 반응물 및 ULM으로 제시된 반응물은 유기화학 분야에 공지된 문헌 및 본 발명의 실시예 기재 등을 참고로 하여 통상의 기술자가 용이하게 합성할 수 있다.
본 발명은 화학식 I의 반응 중간체에 해당하는 PTM-Linker-RG3 또는 PTM-Linker 1-RG2b 형태의 화합물을 포함한다.
AURKA 선택적 분해 유도 화합물의 용도
본 발명의 일 실시예 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 AURKA 분해 유도용 조성물이 제공된다. 화학식 Ⅰ는 위에서 정의된 바와 같다.
본 발명에 따른 AURKA 분해 유도 PROTAC 화합물은 작용 기전의 관점에서 타겟 단백질인 AURKA를 원천 분해할 수 있으므로, AURKA의 단순 활성을 억제하는 종래 AURKA 저분자 억제제와 비교하여서도 우수한 AURKA 억제 효과를 달성한다.
따라서, 본 발명에 따른 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물은 AURKA의 선택적 분해를 위해 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 AURKA 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다. 화학식 Ⅰ는 위에서 정의된 바와 같다.
본 발명에서 AURKA 관련 질환은 AURKA의 분해 유도 또는 활성 억제로부터 치료, 경감, 지연, 저해 또는 예방될 수 있는 임의의 질환 또는 병태를 의미한다. 구체적으로, 상기 AURKA관련 질환은 암(악성 종양) 또는 양성 종양일 수 있다.
상기　암은 AURKA의 활성 억제로 인해 예방 또는 치료 효능을 나타낼 수 있는 모든 암을 포함하며, 고형암　또는 혈액암일 수 있다. 예컨대, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 골수섬유증, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 골육종 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기　암은 원발성　암뿐 아니라 전이성　암도 포함한다.
상기 양성 종양은 AURKA의 활성 억제로 인해 예방 또는 치료 효능을 나타낼 수 있는 모든 양성 종양, 예컨대 암 이전 단계의 양성 종양을 포함하며, 고형 종양 또는 혈액 종양일 수 있다. 예컨대, 상기 종양은 배럿 식도, 대장 선종 및 용종, 유방 섬유선종 및 낭종, 단세포 감마글로불린병증 (MGUS), 단클론 림프구증가증 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여하여 AURKA 단백질을 분해하는 방법이 제공된다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외에서 샘플에 투여하여 AURKA 단백질을 분해하는 방법이 제공된다. 상기 샘플은 세포, 세포 배양물, 사람을 포함한 포유동물의 체액 또는 조직일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
본 발명에서 “개체”란 질병의 치료가 있어야 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말, 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 약학적 조성물의 투여로 종양 또는 암세포의 증식을 억제하거나, 종양 또는 암세포의 세포사멸을 유도하여 암의 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 약학적 조성물의 투여로 종양 또는 암세포의 증식을 억제하거나, 종양 또는 암세포의 세포사멸을 유도하여 암의 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, 임상적 결과를 포함하는 유용한 결과 또는 바람직한 결과를 얻기 위한 시도를 의미한다. 유용한 또는 바람직한 임상적 결과는 검출 가능하거나 가능하지 않더라도, 하나 이상의 증상 또는 상태의 완화 또는 개선, 질병 범위의 축소, 질병 상태의 안정화, 질병 발생의 억제, 질병 확산의 억제, 질병 진행의 지연 또는 늦춤, 질병 발병의 지연 또는 늦춤, 질병 상태의 개선 또는 경감, 및 감퇴 (부분 또는 전체)를 포함할 수 있으며, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, “치료”는 치료의 부재에서 예측되는 것 이상으로 환자의 생존이 연장되는 것을 의미할 수 있다. 또한, “치료”는 질병 진행의 억제, 일시적으로 질병 진행의 늦춤을 의미할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 질병의 진행을 영원히 정지시키는 것과 관련이 있다. 본 발명에서는 항암 효과를 증진시켜 환자의 생존을 향상시키는 것을 의미할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.0001㎎/㎏/일 내지 대략 3000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.1㎎/㎏/일 내지 1000㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 있어서, 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 유효성분 이외에, 항암 효과의 상승 및 보강을 위하여 이미 안전성이 검증되고 항암 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약햑적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 항암 보조제를 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "항암 보조제"는 항암제에 의한 치료와 병행하여 적용 시 상기 항암제에 의한 부작용을 방지하여 항암 치료의 효과를 상승적으로 증가시키는 조성물을 의미한다. 따라서 상기 치료용 보조제는 항암 보조제로 항암제와 함께, 동시에 또는 순차적으로 투여 가능하다.
본 발명의 항암 보조제와 함께 사용될 수 있는 항암제의 종류는 특별히 한정되지 않는다. 항암제는 암세포의 종류, 항암제의 흡수 속도(치료기간과 항암제 투여 경로), 종양의 위치, 종양의 크기 등의 항암제 선택 시 고려하는 일반적인 원칙하에 선택될 수 있다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 일 구현예를 이용하여 설명한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에서 설명된 실시예는 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이런 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호범위는 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명에 따른 화합물은 AURKA의 선택적 분해를 유도하는 효과를 나타낼 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 AURKA 관련 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 실시예 화합물들의 농도가 0.1 μM 및 1 μM인 경우의 AURKA 분해능 및 AURKA 선택성(selectivity)을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다[도 1a: 중간체 1(PTM only (=inhibitor)), 화합물 1, 2, 3, 11 및 13/ 도 1b: 화합물 4, 5, 12, 13, 14 및 30/ 도 1c: 화합물 6, 7, 8, 9, 10/ 도 1d: 화합물 15, 18, 19, 20 및 31/ 도 1e: 화합물 13, 16, 17 및 21/ 도 1f: 화합물 15, 22, 24, 32 및 33/ 도 1g: 중간체 1, 화합물 13, 25, 26, 27 및 28/ 도 1h: 중간체 1, 화합물 13, 35, 36, 37 및 38/ N. Control : Negative Control (화합물 미처리)].
도 2는 실시예 화합물들의 농도가 6 nM 및 30 nM의 저농도인 경우의 AURKA 분해능을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다[도 2a: 중간체 1(PTM only (=inhibitor)), 화합물 13, 14, 15, 26 및 29/ 도 2b: 중간체 1, 화합물 13, 35, 36 및 38/ 도 2c: 화합물 2, 11, 14, 15 및 17/ 도 2d: 화합물 15, 16, 18, 20 및 21/ 도 2e: 화합물 15, 26, 36 및 37/ N. Control : Negative Control (화합물 미처리)].
도 3은 비교예 1 내지 3의 Alisertib 기반의 PROTAC의 농도가 0.1 μM 및 1 μM인 경우의 AURKA 분해능을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다[도 3a: 비교예 1/ 도 3b: 비교예 2/ 도 3c: 비교예 3].
도 4는 PROTAC의 작용원리를 나타낸 모식도이다.
이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면들을 참조하여 더욱 상세하게 설명한다. 본 발명의 실시예는 여러 가지 형태로 변형할 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래의 실시예들로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다. 따라서 도면에서의 요소의 형상은 보다 명확한 설명을 강조하기 위해 과장되었다.
본 발명은 하기 표 1에 표시된 화합물 1 내지 38에 대한 합성 방법을 제공한다.
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본 발명의 화합물을 아래 방법에 따라 정제하고 구조를 분석하였다.
분석 기기
LCMS : Agilent 1290 Infinity II, Agilent 1200 series , SHIMADZU LCMS-2020
HPLC : Agilent 1260 Infinity II
NMR : BRUKER AVANCE Neo or III/400MHz
LCMS 분석 방법
LCMS 데이터는 multimode source (ESI, APCI 동시에 가능)가 장착된 Agilent 1200 시리즈, Agilent 1290 Infinity II 또는 SHIMADZU LCMS-2020를 사용하였다. 물 내 0.1% FA (용매 A)와 아세토니트릴 (용매 B), 물 내 0.1% TFA(용매 A)와 물 내 0.1% TFA 아세토니트릴 (용매 B), 물 내 10mM NH₄HCO₃(용매 A)와 아세토니트릴 (용매 B) 또는 물 내 0.0375% TFA (용매 A)와 아세토니트릴 내 0.01875% TFA(용매 B)를 이동상으로 사용하였다. 컬럼은 Atlantis dC18 (50x4.6mm) 5 μm, X-Bridge C8 (50x4.6mm) 3.5 μm 또는 Kinetex® EVO C18 2.1x30mm 5um를 사용하였다.
HPLC 분석 방법
HPLC 데이터는 1260 Infinity II G1311B, G7111B 또는 G6410B를 사용하였고, 물 내 0.1% TFA (용매 A)와 아세토니트릴 (용매 B) 또는 물 내 10mM NH₄HCO₃(용매 A)와 아세토니트릴 (용매 B) 또는 물 내 0.0375% TFA (용매 A)와 아세토니트릴 내 0.01875% TFA(용매 B)를 이동상으로 사용하였다. 컬럼은 X-Bridge C8 (150X4.6) mm, 3.5μm, Atlantis dC18 (250X4.6) mm, 5μm 또는 Zobrax Eclipse Plus C18 (4.6X150)mm, 3.5um를 사용하였다.
NMR 분석 방법
1H NMR 스펙트럼을 Bruker AVANCE Neo or III 400 MHz/5 mm Probe (BBO)로 기록하였다.
<제조예>
제조예 1: 중간체 1(UPP-L1)의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000059
실험과정
단계 1: 4-니트로벤조일 클로라이드(INT-1)의 합성
25 °C N2하에서 250 mL 둥근바닥플라스크에 4-니트로벤조산 (10 g, 59.8 mmol) 및 SOCl2 (50 mL)를 채웠다. 반응혼합물을 110°C에서 12시간동안 환류 시키고, GCMS로 반응을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 감압 농축하고 n-hexane과 함께 증발시켰다. 얻어진 화합물을 n-hexane (50 mL)과 30분간 교반 하였다. 얻어진 고체를 여과하고 n-hexane (20 mL)로 세척하여 황색 고체의 표제화합물 (10.2 g, 54.1 mmol, 90 % yield)을 수득하였다. GCMS : [m/z] = 185.
단계 2: N-(2-클로로페닐)-4-니트로벤즈아미드(INT-2)의 합성
0-5 °C N2 하에서 피리딘 (50 mL) 내 2-클로로아닐린 (8.25 g, 64.7 mmol) 교반액에 아세톤 (100 mL) 내 4-니트로벤조일 클로라이드 (10 g, 53.9 mmol)를 적가 하였다. 반응혼합물을 25°C에서 2시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하고, 반응 완료 후 반응물을 냉수 (200 mL)에 넣었다. 여과하여 침전된 고체를 얻고, 물 (50 mL)로 세척하고 진공 상태에서 건조하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (13.01 g, 46.1 mmol, 86 % yield)을 수득하였다. LCMS : (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 277.1
단계 3: 4-아미노-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드(INT-3)의 합성
EtOH (200 mL) 및 물 (50 mL) 혼합물 내 N-(2-클로로페닐)-4-니트로벤즈아미드 (13 g, 47.0 mmol) 현탁액에 Fe (13.12 g, 235 mmol) 및 NH4Cl (5.03 g, 94 mmol)을 25°C에서 첨가하였다. 반응혼합물을 80°C에서 3시간동안 가열하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 셀라이트 패드로 여과하고, 물 (100 mL), 메탄올(200 mL)로 순차 세척하였다. 여과물로부터 저비등용매를 증발시키고, 여과하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (11.3 g, 45.6 mmol, 97 % yield)을 수득하였다. LCMS : (MM-ES+APCI) (M+H)+ 246.9; Purity : 99.63% by LCMS.
단계 4: 4-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드(INT-4)의 합성
에탄올 (100 mL) 내 4-아미노-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드 (10.3 g, 41.8 mmol), 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘 (10.46 g, 62.6 mmol) 현탁액에 DIPEA (13.49 g, 104 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 95 °C에서 16시간동안 환류 하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응완료 후, 여과하여 침전된 고체를 얻고 에탄올 (30 mL)로 세척하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (11.8 g, 31.2 mmol, 74.6 % yield)을 수득하였다. LCMS : (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 377.0
단계 5: 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (INT-5)의 합성
디옥산 (100 mL) 및 DMSO (20 mL) 내 4-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드 (10.5 g, 27.8 mmol), 2-(4-아미노페닐)아세트산 (4.21 g, 27.8 mmol) 현탁액에 p-TsOH·H2O (5.29 g, 27.8 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 110 °C에서 24시간동안 환류 하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응혼합물을 냉수 (150 mL)에 넣고 침전된 고체를 여과하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (12.62 g, 22.32 mmol, 80 % yield)을 수득하였다. LCMS : (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 492.0
단계 6: tert-부틸 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복실레이트(INT-6)의 합성
DMF (120 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (12 g, 24.39 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (5.00 g, 26.8 mmol) 현탁액에 DIPEA (12.75 mL, 73.2 mmol) 및 TBTU (9.40 g, 29.3 mmol)를 10-15 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 16시간동안 교반하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응혼합물을 냉수 (300 mL)에 붓고 여과하여 침전된 고체를 얻고 물 (100 mL)로 세척하였다. 얻어진 고체를 Pet ehter로 세척하고 25°C에서 12시간동안 진공 건조 후 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (16.68 g, 23.69 mmol, 97 % yield)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 660.3; HPLC Purity : 93.76%
단계 7: N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(UPP-L1)의 합성
DCM (25 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.3 g, 1.969 mmol) 현탁액에 트리플루오로아세트산 (4.49 g, 39.4 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 12시간동안 교반 하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응혼합물을 증발시켜 건조하였다. 얻어진 화합물을 THF (25 mL), 메탄올 (25 mL)에 녹이고, Si-carbonate (3.0g)을 첨가하였다. 현탁액을 2시간동안 교반하고 셀라이트 패드로 여과하고, 메탄올(25 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하여 갈색 고체의 표제화합물 (1.0 g, 96.9% yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 560.2; HPLC : Rt-3.39; Purity : 98.85%.
제조예 2: 중간체 2(UPP-L2)의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000060
실험과정
단계 1: 4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤조니트릴(2)의 합성
탈기된 DMA (50 mL) 내 4-브로모벤조니트릴 (5 g, 27.5 mmol), 4-메틸티아졸 (5.45 g, 54.9 mmol) 용액에 KOAc (5.39 g, 54.9 mmol) 및 Pd(OAc)2 (0.062 g, 0.275 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응혼합물을 145°C N2 하에서 15시간동안 교반하고, 반응과정을 TLC로 관찰하고 20% Pet ether/EtOAc로 용출하였다. 반응 완료 후 반응혼합물을 25°C로 냉각하고, 물로 희석하고, EtOAc (3 X 100 mL)로 추출하였다. 유기상을 물 (3 X 100 mL) 및 염수 (1 X 150 mL)로 세척하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 25-30% Pet ether/EtOAc로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (4.52 g, 78 % yield)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 201.1; Purity : 95.2% by LCMS.
단계 2: (4-(4-메틸티아졸-5-일)페닐)메탄아민(3)의 합성
THF (90 mL) 내 4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤조니트릴 (4.5 g, 22.47 mmol) 용액에 LiAlH4 (33.7 mL, 67.4 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응혼합물을 70 °C에서 5시간동안 환류 하였다. 반응과정을 TLC로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응혼합물을 0-5°C로 냉각하고, N2 하에서 10% NaOH (15 mL) 용액으로 퀜칭 하였다. 여과하여 무기염을 모으고 THF (2 X 100 mL)로 세척하였다. 여과물을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 toluene (2 X 50 mL)과 증발시켜 주황색(yellow orange) 액체의 표제화합물을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 205.1; Purity: 80.5% by LCMS.
단계 3: tert-부틸 (2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일) 피롤리딘-1-카복실레이트(4)의 합성
DMF (15 mL) 내 (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-히드록시피롤리딘-2-카복시산 (1.585 g, 6.85 mmol) 용액에 (4-(4-메틸티아졸-5-일)페닐)메탄아민 (1.4 g, 6.85 mmol), DIPEA (1.771 g, 13.71 mmol) 및 HATU (3.91 g, 10.28 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 16시간동안 교반하고 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (3 X 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (3 X 30mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 3-5% MeOH/CH2Cl2로 용출하여 황색 고체의 표제화합물 (1.4 g, 48.9 % yield)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 418.2; Purity: 87.21% by LCMS.
단계 4: (2S,4R)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드(5)의 합성
메탄올 (10 mL) 내 tert-부틸 (2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤질) 카바모일) 피롤리딘-1-카복실레이트 (1.4 g, 3.35 mmol) 교반액에 4M HCl/dioxane (4.19 mL, 16.77 mmol)을 0-10 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응혼합물을 감압 농축하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (1.01 g, 77 % yield)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 318.2; Purity : 90.68% by LCMS.
단계 5: tert-부틸 ((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤질) 카바모일) 피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트(6)의 합성
DMF (10 mL) 내 (2S,4R)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤질) 피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (1.0 g, 2.83 mmol) 현탁액에 DIPEA (1.481 mL, 8.48 mmol), (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3,3-디메틸부탄산 (0.719 g, 3.11 mmol) 및 HATU (1.612 g, 4.24 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 12시간동안 교반 하였다. 반응과정을 LCMS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응물을 물로 희석하고 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 유기상을 10% NaHCO3 용액 (30 mL), 염수 (30 mL) 로 세척하고 Na2SO4로 건조했다. 얻어진 유기상을 감압 농축하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 70-80% Pet ether/EtOAc로 용출하여 베이지색 고체의 표제화합물 (1.03 g, 65.1 % yield)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M + H)+ = 531.2; Purity: 94.8% by LCMS.
단계 6: (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드(UPP-L2)의 합성
메탄올 (10 mL) 내 tert-부틸 ((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일) 카바메이트 (1.0 g, 1.884 mmol) 교반액에 4M HCl/dioxane (4.71 mL, 18.84 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. 반응과정을 TLC로 관찰하였다. 반응완료 후, 잔여용매를 rotary evaporation으로 제거하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (930 mg, 100 % yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M + H)+ = 431.2, Purity by HPLC : 94.83%.
<실시예>
실시예 1: 화합물 1의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000061
실험과정
단계 1: tert-부틸 (2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(2)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린 -1,3-디온 (1 g, 3.62 mmol) 용액에 tert-부틸 (2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 (0.989 g, 3.98 mmol) 및 DIPEA (1.404 g, 10.86 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90 °C에서 16 시간 동안 가열하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하고 반응 완료 후 반응물을 감압 농축했다. 잔여물을 물로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 10% NaHCO3 용액 (30 mL)으로 세척 후 소금물 (30 mL)로 세척하였다. 이후 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축했다. 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (80-100% EtOAc/Petroleum ether)로 정제한 후 감압 농축하여 황색 점성 물질 (yellow gum)의 표제 화합물 (658 mg, 31.0 % yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H-100)+ = 405.2; Purity : 86% by LCMS.
단계 2: 4-((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드(3)의 합성
DCM(5 mL) 내 tert-부틸 (2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 (275 mg, 0.469 mmol) 용액에 HCl/1,4-디옥산 (2.344 mL, 9.37 mmol)을 0-5°C N2 하에서 적가하고, 반응 혼합물을 25 °C에서 12 시간 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하고, 디에틸 에테르 (5 mL)로 세척하여 황색 고체의 표제 화합물 (250 mg)을 수득하고 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 405.2; Purity : 87.4% by LCMS.
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 1)의 합성
DCM (5 mL) 내 4-((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드 (250 mg, 0.567 mmol) 현탁액에 DIPEA (147 mg, 1.134 mmol) 및 Phosgene 20%/톨루엔 (421 mg, 0.851 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5 °C에서 40분간 교반 하였다. 반응 혼합물에 THF (3mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드2,2,2-트리플루오로아세테이트 (UPP-L1) (229 mg, 0.340 mmol) 및 TEA (0.158 mL, 1.134 mmol) 용액을 0-5 °C에서 적가 하였다. 반응물을 25 °C로 천천히 승온 후 1시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하고, 반응 완료 후 10% NaHCO3 용액 (10 mL)으로 퀜칭하고 DCM (2 X 20 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축했다. 얻어진 반응물을 prep-HPLC로 정제한 후 48시간동안 동결 건조하여 황색 고체의 표제 화합물 (56 mg, 9.68% yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 990.3, HPLC : Rt-11.52; Purity: 97.07%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.10 (br s, 1H), 9.91 (br s, 1H), 9.67 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66 (dd, J1 = 7.6, J2 = 1.2 Hz 1H), 7.63-7.56 (m, 4H), 7.40 ( td, J1 = 8.8, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.30 (td, J1 = 8.0, J2 = 1.60, Hz, 1H), 7.13 (m, 3H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.61 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.65 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.06 (dd, J1 = 12.8, J2 = 5.2 Hz, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.61 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.56-3.54 (m, 2H), 3.51-3.50 (m, 2H), 3.46-3.38 (m, 8H), 3.23-3.14 (m, 6H), 2.93-2.83 (m, 1H), 2.64-2.58 (m, 2H), ), 2.04-2.02 (m, 1H)
실시예 2: 화합물 2의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000062
실험과정
단계 1: tert-부틸 (6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)카바메이트(2)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1.0 g, 3.62 mmol) 용액에 tert-부틸 (6-아미노헥실)카바메이트 (0.783 g, 3.62 mmol) 및 DIPEA (0.946 mL, 5.43 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90 °C에서 16시간동안 가열했다. LCMS로 반응과정을 관찰하고, 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 물로 희석하고 EtOAc (2 X 30 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기상을 염수(30mL)로 세척, 건조, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후 감압 농축하고, 10% NaHCO3 용액으로 중화한 후 DCM (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과한 후 감압 농축하여 황색 폼 (yellow foam)의 표제화합물 (0.502 g, 29.3 % yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H-100)+ = 373.8; Purity : 99.26% by LCMS.
단계 2: 4-((6-아미노헥실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트(3)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소인돌린-4-일)아미노)헥실)카바메이트 (0.5 g, 1.058 mmol)에 트리플루오로아세트산 (1.630 mL, 21.16 mmol)을 0-5 °C에서 적가 하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 5시간동안 교반 하였다. TLC로 반응과정을 관찰하고, 반응 완료 후 반응혼합물을 감압 농축하였다. 얻어진 화합물을 DCM (30 mL)에 녹이고 Si-carbonate (2 g)을 첨가하였다. 현탁액을 celite를 통해 여과하고 DCM (50 mL)로 세척 후, 감압 농축하여 황색 점성 물질 (yellow gum)의 표제화합물 (508 mg, 98 % yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 373.8; Purity : 99.87% by LCMS.
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)피페라진-1-카복사미드(화합물 2)의 합성
DCM (5 mL) 내 4-((6-아미노헥실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (0.5 g, 1.028 mmol)에 DIPEA (0.133 g, 1.028 mmol)를 첨가하고 Phosgene 20%/톨루엔 (0.517 mL, 1.028 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응혼합물을 0-5°C에서 45분간 교반 후, DCM (5 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (0.485 g, 0.720 mmol) 및 DIPEA (0.133 g, 1.028 mmol) 용액을 0-5 °C에서 상기 혼합물에 첨가하였다. 그 후, 반응혼합물을 25 °C에서 1시간동안 교반 했다. LCMS로 반응과정을 관찰하고, 반응 완료 후 10% NaHCO3 용액(25 mL)으로 퀜칭하고 DCM (2 X 30 mL)으로 추출하였다. 유기물을 Na2SO4로 건조하고, 여과한 후 감압 농축하였다. 반응물을 prep-HPLC로 정제한 후 얻어진 화합물을 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (43 mg; 4.36% yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 958.3, HPLC : Rt-14.67; Purity : 88.75%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.11 (br s, 1H), 9.92 (br s, 1H), 9.67 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz 1H), 7.63-7.55 (m, 4H), 7.40 ( td, J1 = 9.2, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.30 (td, J1 = 8.8, J2 = 1.20, Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 6.8 Hz, 1H,) 6.54-6.47 (m, 2H), 5.05 (dd, J1 = 12.8, J2 = 5.2 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.47-3.42 (m, 4H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.22-3.18 (m, 4H), 3.01-2.96 (m, 2H), 2.93-2.84 (m, 1H), 2.61-2.58 (m, 2H), 2.05-2.00 (m, 1H), 1.59-1.58 (m, 2H), 1.40-1.26 (m, 6H)
실시예 3: 화합물 3의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000063
실험과정
단계1: N-(부트-3-인-1-일)-4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로 피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복사미드(2)의 합성
THF (6 mL) 내 부트-3-인-1-아민 HCl (70 mg, 0.663 mmol) 용액에 TEA (0.279 mL, 1.989 mmol) 및 CDI (161 mg, 0.995 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반 하였다. THF (6 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (313 mg, 0.464 mmol) 및 TEA (0.279 mL, 1.989 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. TLC로 반응물을 확인하고, 반응완료 후 물 (15 mL)로 세척하고 25 °C에서 농축하여 THF를 제거하였다. DCM (2 X 20mL) 내 20% 메탄올 혼합물을 통해 수용상으로부터 화합물을 추출하였다. 얻어진 유기층을 Na2SO4로 건조하고, 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (335 mg, 0.283 mmol, 42.7 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 655.3, Purity: 55.38% by LCMS
단계 2: 4-((2-아지도에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
DMF (10mL) 내 2-아지도에탄-1-아미늄 클로라이드 (222 mg, 1.810 mmol) 교반액에 DIPEA (0.948 mL, 5.43 mmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.810 mmol)을 10-15 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응용액을 50 °C까지 가열 후 48시간 유지하였다. UPLC-MS로 반응물을 관측하였다. 반응완료 후 반응물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (3 X 20mL) 로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (2 X 20 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고 25 °C에서 감압 농축하여 표제화합물 (285 mg, 0.349 mmol, 19.30 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 343.0; Purity : 41.96% by LCMS
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 3)의 합성
THF (10 mL) 및 물(5 mL) 혼합물 내 4-((2-아지도에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (280 mg, 0.818 mmol) 용액에 L-아스코브산나트륨 (32.4 mg, 0.164 mmol), N-(부트-3-인-1-일)-4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복사미드 (322 mg, 0.491 mmol) 및 CuSO4·5H2O (40.8 mg, 0.164 mmol)를 순차적으로 첨가하였다. 반응 현탁액을 25 °C에서 12시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응물을 관측하였다. 반응 완료 후 반응물을 celite로 여과하고, THF (20 mL)로 세척하였다. 얻어진 여과물을 25 °C에서 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (624 mg)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 997.3, Purity : 13.98% by LCMS
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.09 (br s, 1H), 9.90 (br s, 1H), 9.67 (br s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.17 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 7.67 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.58-7.52 (m, 2H), 7.40 ( td, J1 = 7.6, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.29 (td, J1 = 7.6, J2 = 1.6, Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.05-7.00 (m, 2H), 6.74 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.06-4.97 (m, 1H), 4.53 ( t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.80-3.73 (m, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.46-3.41 (m, 4H), 3.23-3.20 (m, 6H), 2.89-2.81(m, 1H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.62-2.56 (m, 2H), 2.05-1.96 (m, 1H)
실시예 4: 화합물 4의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000064
실험과정
단계 1: tert-부틸 (2-(1-(2-시아노에틸)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트(2)의 합성
20 ml 바이알에서, 디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 (2-(피페리딘-4-일)에틸)카바메이트 (1 g, 4.38 mmol), DIPEA (2.295 mL, 13.14 mmol) 용액에 아크릴로니트릴 (0.465 g, 8.76 mmol)을 25 °C에서 첨가하였다. 밀폐된 바이알을 100 °C에서 12시간동안 가열하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하고, 반응완료 후 반응물을 물로 희석하고 EtOAc (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 갈색 오일의 표제화합물 (1.2 g, 98% yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 282.3; Purity : 98.58% by ELSD-LCMS.
단계 2: tert-부틸 (2-(1-(3-아미노프로필)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트(3)의 합성
작은 용기(clave) 내에서, 탈기된 에탄올 (15 mL) 내 tert-부틸 (2-(1-(2-시아노에틸)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트 (1.0 g, 3.55 mmol) 용액에 Raney/Ni (0.209 g, 3.55 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 5kg/H2와 함께 60 °C에서 16시간동안 가열하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 celite로 여과하고, 에탄올 (30 mL)로 세척하고, 감압 농축하여 옅은 갈색 점성 물질 (pale brown gum)의 표제화합물 (1.02 g, 68.5 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 286.3; Purity : 66.2% by ELSD-LCMS.
단계 3: tert-부틸 (2-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트(4)의 합성
DMF (10 mL) 내 tert-부틸 (2-(1-(3-아미노프로필)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트 (1.0 g, 3.50 mmol) 용액에 DIPEA (0.612 mL, 3.50 mmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.968 g, 3.50 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 100 °C에서 16시간동안 가열하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 냉수 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (2 X 30mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 3-5% 메탄올/CH3Cl2로 용출하여 황색 점성 물질 (yellow gum)의 표제화합물 (620 mg, 25.3 % yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 542.3; Purity : 77.4% by LCMS.
단계 4: 4-((3-(4-(2-아미노에틸)피페리딘-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트(5)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (2-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페리딘-4-일)에틸)카바메이트 (0.6 g, 1.108 mmol) 용액에 TFA (1.707 mL, 22.15 mmol)를 0 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 6 시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔여물을 DCM/MeOH (1/1, 30 mL) 혼합물에서 용해시켰다. 용액에 Si-carbonate (~1 g)를 넣고 25 °C에서 2시간동안 교반 하였다. 레진을 celite로 여과하고, 메탄올 (25 mL)로 세척했다. 여과물을 감압 농축하여 녹황색 점성 물질 (greenish yellow gum)의 표제화합물 (0.72 g, 100 % yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 442.3; Purity : 85.7% by LCMS.
단계 5: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일) 아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 4)의 합성
THF (5 mL) 내 4-((3-(4-(2-아미노에틸)피페리딘-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (490 mg, 0.755 mmol) 용액에 TEA (153 mg, 1.510 mmol) 및 CDI (184 mg, 1.132 mmol)를 20-25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 20-25 °C에서 30분간 교반 하였다. 상기 반응 혼합물에 THF (5mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (305 mg, 0.453 mmol) 및 TEA (153 mg, 1.510 mmol) 용액을 20-25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 물로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기물을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축했다. 잔여물을 wash column으로 정제하고 12-15% 메탄올/DCM으로 용출하였다. 얻어진 정제물을 prep-HPLC로 다시 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (142 mg, 16.75 % yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1027.3, HPLC : Rt-8.34; Purity = 91.53%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.09 (br s, 1H), 9.92 (br s, 1H), 9.67 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.2 Hz 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.59-7.55 (m, 2H), 7.40 ( td, J1 = 8.8, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.30 (td, J1 = 8.0, J2 = 1.60, Hz, 1H), 7.12 (m, 3H), 7.02 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.88 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.44 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.05 (dd, J1 = 12.4, J2 = 5.2 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.44-3.40 (m, 5H), 3.22-3.18 (m, 5H), 3.05-3.00 (m, 3H), 2.91-2.83 (m, 4H), 2.61-2.56 (m, 2H) 2.04-2.00 (m, 1H), 1.83-1.79 (m, 2H), 1.73-1.70 (m, 2H), 1.59-1.57 (m, 2H), 1.31 (s, 2H), 1.21 (s, 3H)
실시예 5: 화합물 5의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000065
실험과정
단계 1: tert-부틸 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세테이트(2)의 합성
DMF (50 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (2.0 g, 7.29 mmol) 교반액에 K2CO3 (1.512 g, 10.94 mmol) 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (1.063 mL, 7.29 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 19시간동안 교반하고 UPLC-MS로 반응을 관측하였다. 반응 완료 후 반응물을 여과하고 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 농축하고, 잔여물을 플래시 컬럼으로 정제하고, 30-40% EtOAc/hexane으로 용출하여 무색 고체의 표제화합물 (2.7 g, 90% yield)을 수득하였다.
UPLC-MS (MS ES-)(M-H) = 387.2; Purity : 93.96% by UPLC-MS.
단계 2: 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트산(3)의 합성
DCM (20 mL) 내 tert-부틸 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세테이트 (1.0 g, 2.57 mmol) 교반액에 TFA (5.0 mL, 2.57 mmol)를 25 °C에서 적가 하였다. 반응물을 5시간동안 25 °C에 두었다. 반응 과정을 UPLC-MS로 관찰하고, 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하여 갈색 고체의 표제화합물 (830 mg, 76.45% yield)을 수득하였다.
UPLC-MS (MS ES+) (M+H)+ = 333.9; Purity : 78.85% by UPLC-MS.
단계 3: tert-부틸 (2-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트아미도)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(4)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트산 (500 mg, 1.505 mmol)에 DIPEA (1.314 mL, 7.52 mmol), tert-부틸 (2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 (374 mg, 1.505 mmol) 및 HATU (858 mg, 2.257 mmol)를 0-10 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응물을 관측하고, 반응 완료 후 물 20mL를 첨가하였다. 유기상은 분리하고, 수용상은 EtOAc (2 X 10mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상은 감압 농축하고 플래시 컬럼으로 정제하고, 15% EtOAc/pet ether로 용출하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (410 mg, 36.94% yield)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 563.2; Purity : 76.31 % by LCMS.
단계 4: N-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(5)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트아미도)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 (400 mg, 0.711 mmol) 교반액에 TFA (0.822 mL, 10.67 mmol)를 0-10 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (0.66 g)을 수득하였다.
LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 463.1; Purity : 96.05% by LCMS.
단계 5: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트아미도)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 5)의 합성
DCM (9 mL) 내 N-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세트아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (300 mg, 0.520 mmol) 교반액에 DIPEA (0.182 mL, 1.041 mmol) 및 Phosgene 20%/톨루엔 (0.263 mL, 0.520 mmol)을 0-10 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-10 °C에서 30분간 교반 하였다. DCM (6 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (351 mg, 0.520 mmol) 및 DIPEA (0.182 mL, 1.041 mmol) 용액을 반응 혼합물에 0-10 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 교반하고 TLC로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 NaHCO3 (15 mL) 용액으로 퀜칭 하였다. 유기상을 분리하고, 수용상은 DCM (10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상은 감압 농축하여 320mg의 화합물을 얻고, Prep-HPLC로 정제하고, 40시간 동안 동결 건조하여 연한 황색 고체 (pale yellow solid)의 표제화합물 (108.0 mg, 18.98% yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1048, HPLC : Rt-7.39; Purity : 95.91%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.12 (br s, 1H), 9.89 (br s, 1H), 9.65 (br s, 1H), 9.28 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.05-7.97 (m, 5H), 7.81(dd, J1 =8.4, J2 = 7.2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.57 ( td, J1 = 8.0, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.42-7.39 (m, 2H), 7.30 (td, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.55 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.12(dd, J1 = 12.8, J2 = 5.2 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.50-3.35 (m, 14H), 3.40-3.12 (m, 6H), 2.91-2.85 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.05-2.04 (m, 1H)
실시예 6: 화합물 6의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000066
실험과정
단계 1: tert-부틸 (2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-2-옥소에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(2)의 합성
DMF (10 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (930 mg, 1.872 mmol)에 DIPEA (0.981 mL, 5.62 mmol), 2,2-디메틸-4-옥소-3,8,11-트리옥사-5-아자트리데칸-13-산 (542 mg, 2.059 mmol) 및 HATU (1068 mg, 2.81 mmol)을 0-10 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응을 관찰하고, 반응 완료 후 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (25mL X 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 10% Na2SO4 (20 mL)로 세척하고, 감압 농축하여 얻어진 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 5-7% MeOH/DCM으로 용출하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (650 mg, 49.8 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 676.3; Purity : 96.97% by LCMS.
단계 2: (2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드(3)의 합성
MeOH (5 mL) 내 tert-부틸 (2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-2-옥소에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 (250 mg, 0.370 mmol)에 4M HCl/dioxane (0.925 mL, 3.70 mmol)을 0-5 °C에서 적가 하였다. 반응 혼합물을 25-30 °C에서 3시간동안 교반 하였다. TLC로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 감압 농축하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (200 mg; 77.4% Yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 576.5; Purity : 84.21% by LCMS.
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-2-옥소에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 6)의 합성
DCM (5 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (200 mg, 0.327 mmol)에 DIPEA (84 mg, 0.653 mmol) 및 Phosgene 20%/톨루엔 (242 mg, 0.490 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5 °C에서 35분간 교반 하였다. THF (5 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (UPP-L1) (200 mg, 0.297 mmol) 및 DIPEA (84 mg, 0.653 mmol)을 0-5 °C에서 반응물에 적가 하였다. 반응물을 25 °C까지 천천히 승온한 후 1시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 10% NaHCO3 (10 mL) 용액으로 퀜칭하고 DCM (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC로 정제하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (123 mg, 30.8 % yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1161.4, HPLC : Rt-7.74; Purity : 95.02%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.90 (br s, 1H), 9.65 (br s, 1H), 9.28 (br s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.58 (t, J = 4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.66 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.44-7.38 (m, 6H), 7.31 ( td, J1 = 8.0, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.56 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.47-4.36 (m, 3H), 4.26 (dd, J1 = 16.0, J2 = 6 Hz 1H), 3.97 (s, 2H), 3.69-3.66 (m, 3H), 3.62-3.58 (m, 3H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.44-3.40 (m, 6H), 3.21-3.17 (m, 6H), 2.44 (s, 3H), 2.09-2.04 (m, 1H), 1.94-1.87 (m, 1H), 0.94 (s, 9H)
실시예 7: 화합물 7의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000067
실험과정
단계 1: tert-부틸 (8-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤질) 카바모일) 피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일) 아미노)-8-옥소옥틸) 카바메이트(2)의 합성
DMF (10 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (1.0 g, 2.14 mmol), 8-((tert-부톡시카보닐)아미노)옥탄산 (0.554 g, 2.14 mmol) 교반액에 DIPEA (1.2 mL, 6.42 mmol) 및 HATU (1.2 g, 3.2 mmol)를 0-10 °C에서 첨가하였다.　반응물을 25 °C에서 16시간동안 교반하고, LCMS로 반응 과정을 관찰하였다.　반응 완료 후 DMF 초과분은 제거하고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 유기상을 염수 (30mL)로 세척하고, N2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 얻어진 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 2-5% MeOH/DCM으로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (0.9 g, 58.01 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 672.2; Purity : 93.39% by LCMS
단계 2: (2S,4R)-1-((S)-2-(8-아미노옥탄아미노)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일) 벤질) 피롤리딘-2-카복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(3)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (8-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질) 카바모일) 피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-8-옥소옥틸)카바메이트 (0.9 g, 1.339 mmol) 용액에 TFA (2.064 mL, 26.8 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 6시간동안 교반 하였다. TLC로 반응 과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (1.0 g, 68.1 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 572.0, Purity : 62.68% by LCMS
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(8-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질) 카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-8-옥소옥틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 7)의 합성
THF (5 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(8-아미노옥탄아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (470 mg, 0.685 mmol) 교반액에 TEA (139 mg, 1.371 mmol) 및 CDI (167 mg, 1.028 mmol)를 20-25°C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 20-25°C에서 30분간 교반 하였다. 30분 후, THF (5mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (370 mg, 0.548 mmol) (UPP-L1) 및 TEA (139 mg, 1.371 mmol) 용액을 20-25°C에서 상기 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반하고 LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 물로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC로 정제하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (92 mg, 11.07 % yield)을 수득하였다. LCMS (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1157.4, HPLC : Rt-8.26; Purity : 95.48%
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ = 9.92 (br s, 1H), 9.67 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.58 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.2 Hz 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 (dd, J1 = 6.8 , J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.44-7.37 (m, 5H), 7.31 ( td, J1 = 8.8, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.48 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.47-4.41 (m, 2H), 4.35 (s, 1H), 4.22 (dd, J1 = 15.6, J2 = 5.2 Hz 1H), 3.67 (s,3H), 3.44-3.38 (m, 5H), 3.21-3.18 (m, 4H), 2.99-2.94 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.29-2.21( m, 1H), 1.14-2.10 (m,1H), 2.06-2.01(m,1H), 1.93-1.88 (m,1H), 1.51-1.44 (m, 2H), 1.37-1.34 (m, 2H), 1.22 (s, 6H), 0.93 (s, 9H)
실시예 8: 화합물 8의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000068
실험과정
단계 1: 3-(4-(2-시아노비닐)페닐)프로판산(2)의 합성
50 mL 밀폐튜브에서 진공의 DMF (25 mL) 내 3-(4-요오드페닐)프로판산 (2 g, 7.24 mmol) 용액에 NaHCO3 (1.826 g, 21.73 mmol), Bu4NCl hydrate (1.072 g, 3.62 mmol), ACN (1.153 g, 21.73 mmol) 및 Pd(OAc)2 (0.163 g, 0.724 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50 °C에서 16 시간동안 가열하였다. LCMS로 반응 과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 celite로 여과하고, EtOAc (2 X 20 mL)로 추출하였다. 유기상을 물 (2 X 20 mL)로 세척한 후 염수 (20 mL)로 세척하였다. 얻어진 유기상을 감압 농축하여 얻은 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 25-30% EtOH/pet ether로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (251 mg, 17.15 % yield)을 수득하였다.
LCMS : (MM-ES+APCI) (M-H)- = 200.4; Purity : 99.62% by LCMS
단계 2: (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(2-시아노비닐)페닐)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드(3)의 합성
DMF (6 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (812 mg, 1.739 mmol) (UPP-L2) 용액에 DIPEA (674 mg, 5.22 mmol), 3-(4-(2-시아노비닐)페닐)프로판산 (350 mg, 1.739 mmol) 및 HATU (992 mg, 2.61 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응 과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉수 (20mL)로 희석하고 EtOAc (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 10% NaHCO3 (30 mL) 용액 및 염수(2 X 20mL)로 세척하였다. 얻어진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100-200 mesh)로 정제하고 3-5% MeOH/DCM으로 용출하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (650 mg, 56.8 % yield)을 수득하였다.
LCMS : (MM-ES+APCI)(M+H)+ = 614.2; Purity : 93.29% by LCMS
단계 3: (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-아미노프로필)페닐)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드(4)의 합성
MeOH (10 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(2-시아노비닐)페닐)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 (300 mg, 0.489 mmol) 용액에 CoCl2 (190 mg, 1.466 mmol) 및 NaBH4 (92 mg, 2.444 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응 과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 celite로 여과하고, 감압 농축하여 얻은 잔여물을 수산화암모늄 용액 (20 mL)으로 희석하고 DCM (2 X 20mL)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 연갈색 점성 물질 (pale brown gum)의 표제화합물 (202 mg, 40.0 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 620.3; Purity : 60.05% by LCMS
단계 4: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(3-(4-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-옥소프로필)페닐)프로필)피페라진-1-카복사미드(화합물 8)의 합성
THF (5 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-아미노프로필)페닐)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 (200 mg, 0.323 mmol)에 TEA (0.067 mL, 0.484 mmol) 및 CDI (78 mg, 0.484 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응용액을 25 °C에서 30분간 교반 하였다. THF (5 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (UPP-L1) (130 mg, 0.194 mmol) 및 TEA (0.067 mL, 0.484 mmol) 용액을 상기 반응 혼합물에 0-5 °C에서 적가 하였다. 반응용액을 25 °C에서 12시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc:THF (1:1) (2 X 20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (340mg 16.6% by LCMS)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1205.4; Purity : 16.40% by LCMS
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.91 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.58 (t, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.66 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.56 (dd, J1= 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.43-7.37 (m, 5H), 7.30 ( td, J1 = 8.0, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.13-7.06 (m, 6H), 6.52 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.15 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.47-4.41 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 4.22 (dd, J1 = 16.0, J2 = 5.6 Hz 1H), 3.67 (s, 3H), 3.45-3.40 (m, 5H), 3.23-3.19 (m, 4H), 3.03-2.98 (m, 2H), 2.82-2.72 (m, 4H), 2.61-2.58 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.07-2.01 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 1H), 1.69-1.61( m, 2H), 0.89 (s, 9H)
실시예 9: 화합물 9의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000069
실험과정
단계 1: N-(부트-3-인-1-일)-4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로 피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복사미드(2)의 합성
THF (3 mL) 내 부트-3-인-1-아민 히드로클로라이드 (35 mg, 0.332 mmol) 교반액에 TEA (0.139 mL, 0.995 mmol) 및 CDI (81 mg, 0.497 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반 하였다. 반응 혼합물에 THF (3 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (156 mg, 0.232 mmol) (UPP-L1) 용액 및 TEA (0.139 mL, 0.995 mmol)를 첨가하고 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. TLC로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 퀜칭 하였다. 수용상 및 유기상을 분리하였다. 수용상은 20% MeOH/DCM (3 X 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (125 mg, 0.191 mmol, 57.5 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 655.2; Purity : 94.44% by LCMS
단계 2: (2S,4R)-1-((S)-2-(3-아지도프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드(4)의 합성
DCM (3 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (100 mg, 0.214 mmol) 용액에 TEA (0.090 mL, 0.642 mmol), 3-아지도프로판산 (37.0 mg, 0.321 mmol) 및 EDC·HCl (61.6 mg, 0.321 mmol)을 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응용액을 25-30 °C에서 3시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 물 (10 mL)로 희석하고 DCM (2 X 10mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 10% NaHCO3 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 무색 점성 물질 (colorless gum)의 표제화합물 (108 mg, 79 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 528.2; Purity : 82.41% by LCMS
단계 3: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(2-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-옥소프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 9)의 합성
THF (3 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-아지도프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 (105 mg, 0.199 mmol) 및 물 (1.5 mL)의 교반액에 L-아스코브산나트륨염 (7.88 mg, 0.040 mmol), N-(부트-3-인-1-일)-4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노) 페닐)아세틸) 피페라진-1-카복사미드 (78 mg, 0.119 mmol), CuSO4·5H2O (9.94 mg, 0.040 mmol)를 25 °C 순차적으로 첨가하였다. 반응 현탁액을 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응혼합물을 여과하고, THF (10 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (150 mg)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 1182.1; Purity : 25.24% by LCMS
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.91 (br s, 1H), 9.66 (br s, 1H), 9.29 (br s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.60-8.56 (m, 1H), 8.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.67-7.61 (m, 3H), 7.56 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 5H), 7.31 ( td, J1 = 8.0, J2 = 1.60 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.71 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.58-4.42 (m, 5H), 4.36 (s, 1H), 4.22 (dd, J1 = 16.0, J2 = 5.6 Hz 1H), 3.67 (s, 3H), 3.51-3.42 (m, 5H), 3.23-3.17 (m, 6H), 2.91-2.79 (m, 1H), 2.77-2.71 (m, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.08-2.03 (m, 1H), 1.94-1.87 (m, 1H), 0.88 (s, 9H)
실시예 10: 화합물 10의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000070
실험과정
단계 1: 3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로판-1-올(2)의 합성
EtOH (45 mL) 내 3-(피페리딘-4-일)프로판-1-올 (4.5 g, 31.4 mmol) 현탁액에 K2CO3 (8.68 g, 62.8 mmol) 및 (브로모메틸)벤젠 (5.91 g, 34.6 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90 °C에서 3시간동안 환류 하였다. TLC로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 45 °C 진공상태에서 초과분의 용매를 제거하였다. 얻어진 잔여물을 물 (50 mL)로 희석하고 DCM (2 X 50mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (7.3 g, 59.5 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 234.2; Purity : 59.8% by LCMS
단계 2: 1-벤질-4-(3-시클로프로필)피페리딘(3)의 합성
DCM (75 mL) 내 3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로판-1-올 (7.3 g, 18.46 mmol) 용액에 SOCl2 (6.59 g, 55.4 mmol)를 20-25 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응물을 45 °C에서 3시간동안 가열하고, TLC로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 물로 희석하고 DCM (2 X 50mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 중탄산염 용액 (2 X 50mL)으로 세척하였다. 얻어진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 17-20% EtOAc/PE로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하여 표제화합물 (3.23 g, 62.3 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M + H)+ = 252.2; Purity : 89.7% by LCMS
단계 3: 2-(3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로필)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
DMF (25 mL) 내 1-벤질-4-(3-시클로프로필)피페리딘 (1.6 g, 6.35 mmol) 현탁액에 K2CO3 (4.39 g, 31.8 mmol) 및 프탈이미드칼륨 (1.765 g, 9.53 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 100 °C에서 16시간동안 교반하고 LCMS로 반응과정을 관찰하였다. LCMS에서 ~81.8%의 목적화합물이 확인되었다. 초과분의 용매를 제거하고 농축하였다. 얻어진 잔여물은 물 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (2 X 30mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상은 물 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (2.05 g, 53.2 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 363.2; Purity : 59.7% by LCMS
단계 4: 3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로판-1-아민(5)의 합성
EtOH (30 mL) 내 2-(3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로필)이소인돌린-1,3-디온 (2.0 g, 3.26 mmol) 용액에 N2H4·H2O를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80 °C에서 3시간동안 가열하였다. LCMS로 반응 과정을 관측하였다. 반응 완료 후, DCM (30 mL)을 25 °C에서 혼합물에 첨가하였다. 잔여물을 celite로 여과하고 DCM (30 mL)로 세척하고, 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 DCM (30 mL)에 넣고 면으로 여과한 후 여과물을 감압 농축하였다. 얻어진 화합물을 중성 알루미나 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 10-12% MeOH/DCM으로 용출하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (280 mg, 27.4 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 233.2; Purity: 73.9% by LCMS.
단계 5: tert-부틸 (3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로필)카바메이트(6)의 합성
DCM (5 mL) 내 3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로판-1-아민 (275 mg, 1.183 mmol) 용액에 Boc-anhydride (0.275 mL, 1.183 mmol)를 25 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응 용액을 25 °C에서 16시간동안 교반하고 LCMS로 반응 과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 DCM (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (370 mg, 90 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 333.2; Purity: 95.3% by LCMS
단계 6: tert-부틸 (3-(피페리딘-4-일)프로필)카바메이트(7)의 합성
50 mL RBF에서 탈기된 MeOH (25 mL) 내 tert-부틸 (3-(1-벤질피페리딘-4-일)프로필)카바메이트 (370 mg, 1.113 mmol) 용액에 10% Pd(OH)2 (78 mg, 0.556 mmol) 및 Pd-C (59.2 mg, 0.556 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 bladder로 25 °C에서 16시간동안 교반 하였다. LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 celite로 여과하고 MeOH (20mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하여 무색 점성 물질 (colorless gum)의 표제화합물 (260 mg, 79 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 243.2; Purity : 81.5% by LCMS
단계 7: 에틸 3-(4-(3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)피페리딘-1-일)프로파노에이트(8)의 합성
EtOH (10 mL) 내 tert-부틸 (3-(피페리딘-4-일)프로필)카바메이트 (260 mg, 1.073 mmol) 현탁액에 아크릴산에틸 (215 mg, 2.146 mmol)을 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90 °C에서 16시간동안 환류 시키고 LCMS로 반응과정을 관측하였다. 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하고, 얻어진 잔여물을 물 (10 mL)로 희석하고 DCM (2 X 10mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 N2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (362 mg, 87 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 343.3; Purity : 88.5% by LCMS
단계 8: 3-(4-(3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)피페리딘-1-일)프로판산(9)의 합성
THF (3 mL) 및 물 (1.5 mL) 내 에틸 3-(4-(3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)피페리딘-1-일)프로파노에이트 (360 mg, 1.051 mmol) 용액에 LiOH·H2O를 25 °C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 2시간동안 교반하고 LCMS로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 1.5N HCl 용액 (1mL)으로 산화시키고 감압 농축하였다. 잔여물을 톨루엔 (3 X 10mL)과 감압 농축하여 황백색 (off-white) 고체의 표제화합물 (302 mg, 91 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 315.3
단계 9: tert-부틸 (3-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-옥소프로필)피페리딘-4-일)프로필)카바메이트(10)의 합성
DMF (5 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 히드로클로라이드 (0.446 g, 0.954 mmol) (UPP-L2) 및 3-(4-(3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)피페리딘-1-일)프로판산 (0.3 g, 0.954 mmol) 교반액에 DIPEA (0.370 g, 2.86 mmol), HATU (0.472 g, 1.240 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 °C에서 3시간동안 교반하고 UPLC-MS로 반응과정을 관찰하였다. 반응완료 후 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 10% NaHCO3 용액 (20 mL)으로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하였다. 얻어진 화합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 3-5% MeOH/CH2Cl2로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물 (326 mg, 43.9 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 727.5; Purity : 93.5% by LCMS
단계 10: (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-아미노프로필)피페리딘-1-일)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(11)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 (3-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-옥소프로필)피페리딘-4-일) 프로필)카바메이트 (0.32 g, 0.440 mmol) 교반액에 TFA (0.678 mL, 8.80 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 적가 하였다. 반응용액을 25 °C에서 2시간동안 교반하고 TLC로 반응과정을 관찰하였다. 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (brown gum)의 표제화합물을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 627.4; Purity : 92.62% by LCMS.
단계 11: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(3-(1-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-옥소프로필)피페리딘-4-일)프로필)피페라진-1-카복사미드(화합물 10)의 합성
DCM (3 mL) 내 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(3-아미노프로필)피페리딘-1-일)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (0.35 g, 0.472 mmol) 교반액에 TEA (0.066 mL, 0.472 mmol) and CDI (0.077 g, 0.472 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응용액을 25 °C에서 1시간동안 교반 하였다. 그리고 DCM (3mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (0.159 g, 0.236 mmol) (UPP-L1), TEA (0.066 mL, 0.472 mmol) 용액을 상기 반응물에 0-5 °C에서 적가 하였다. 그 후 반응물을 25 °C에서 3시간동안 교반 하였다. UPLC-MS로 반응과정을 관찰하였다. 반응완료 후 반응물을 물 (10 mL)로 희석하고 DCM (2 X 20mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (0.38 g)을 수득하였다. LCMS: (MM-ES+APCI) (M-H)- = 1210.8; Purity : ~10% by UPLC-MS
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.90 (br s, 1H), 9.66 (br s, 1H), 9.29 (br s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.67 (d, J =9.6 Hz, 1H), 8.60 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.67 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 (dd, J1 = 8.0, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.45-7.36 (m, 5H), 7.29 (td, J1 = 7.6, J2 = 1.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.46 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.47-4.42 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 4.21 (dd, J1 = 16.0, J2 = 5.6 Hz, 1H), 3.69-3.63 (m, 3H), 3.44-3.41 (m, 5H), 3.21-3.17 (m, 4H), 2.92-2.85 (m, 4H), 2.52-2.50 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.33-2.24 (m, 1H), 2.06-2.10 (m, 1H), 1.94-1.87 (m, 2H), 1.64-1.59 (m, 2H), 1.39-1.30 (m, 2H), 1.19-1.16 (m, 2H), 1.12-1.10 (m, 3H), 0.95 (s, 9H)
실시예 11: 화합물 11의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000071
실험과정
단계 1: 2-(4-브로모페닐)에탄-1-아민(2)의 합성
진공의 THF (30 mL) 내 2-(4-브로모페닐)아세토니트릴 (2.0 g, 10.20 mmol) 교반 용액에 BH3.THF (30.6 mL, 30.6 mmol)을 0 °C N2 하에서 적가 하였다. 그 후 반응물을 25 °C로 유지하고 20시간동안 66 °C까지 가열하였다. 반응물을 TLC로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 메탄올 (30 mL)로 퀜칭하고, 감압 농축하여 표제화합물 (2.38 g)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 200.0; Purity : 97.18% by LCMS
단계 2: tert-부틸 (4-브로모펜에틸)카바메이트(3)의 합성
진공의 DCM (25 mL) 내 2-(4-브로모페닐)에탄-1-아민 (2.3 g, 11.50 mmol) 교반 용액에 DIPEA (4.02 mL, 22.99 mmol) 및 Boc-anhydride (2.94 mL, 12.65 mmol)를 25 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 2시간동안 유지하고 TLC로 관찰하였다. 반응 완료 후, 반응물을 물 (20 mL)로 희석하고 수용상과 유기상을 분리하였다. 수용상은 DCM (3 X 15mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고 감압 농축했다. 얻어진 화합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 1-20% Pet ether/EtOH로 용출하였다. 목적 구획을 감압 농축하여 표제화합물 (1.800 g, 6.00 mmol, 52.2 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H-100)+ = 200.0; Purity : 99.72% by LCMS
단계 3: tert-부틸 (E/Z)-(4-(2-시아노비닐)펜에틸)카바메이트(4)의 합성
10mL 진공밀폐튜브에 tert-부틸 (4-브로모펜에틸)카바메이트 (90 mg, 0.300 mmol), DMA (3.0 mL) 및 NaOAc (29.5 mg, 0.360 mmol)를 채웠다. 현탁액을 N2 로 퍼지하고, 아크릴로니트릴 (0.059 mL, 0.899 mmol), P(o-tol)3 (9.13 mg, 0.030 mmol), Pd(II) acetate (3.37 mg, 0.015 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 140 °C에서 20시간동안 교반하였다. 반응을 TLC로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응물을 Celite로 여과하고 EtOH (20 mL)로 세척하였다. 여과물을 염수 (2 X 20 mL)로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 갈색 점성 액체의 표제화합물 (107 mg)을 수득하였다.
단계 4: tert-부틸 (4-(3-아미노프로필)펜에틸)카바메이트(5)의 합성
메탄올 (5 mL) 내 tert-부틸 (E/Z)-(4-(2-시아노비닐)펜에틸)카바메이트 (100 mg, 0.367 mmol) 용액에 CoCl2 (47.7 mg, 0.367 mmol) 및 NaBH4 (13.89 mg, 0.367 mmol)를 0-5 °C N2 하에서 첨가하였다. 반응혼합물을 25 °C에서 24시간동안 교반 하였다. 반응완료 후, 반응물을 celite로 여과하고, 메탄올 (10 mL)로 세척하고, 얻어진 여과물을 감압 농축하였다. 얻어진 농축물에 NH3·H2O (10 mL)를 충전하고 DCM (2 X 10mL)로 화합물을 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 표제화합물(55 mg, 0.052 mmol, 14.05 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 279.2; Purity : 26.11% by LCMS
단계 5: tert-부틸 (4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)펜에틸)카바메이트(6)의 합성
DMF (1 mL) 내 tert-부틸 (4-(3-아미노프로필)펜에틸)카바메이트 (50 mg, 0.180 mmol) 용액에 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (49.6 mg, 0.180 mmol) 및 DIPEA (0.094 mL, 0.539 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응물을 90 °C까지 가열하고 16시간동안 유지하였다. 반응물을 UPLC-MS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응물을 25 °C에서 EtOAc로 희석하고 염수 (3 X 10mL)로 세척하였다. 얻어진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 황색 점성 물질 (yellow gum)의 표제화합물 (68 mg, 0.019 mmol, 10.70 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M-H)+ = 533.3; Purity : 15.11% by UPLC-MS
단계 6: 4-((3-(4-(2-아미노에틸)페닐)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트(7)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 (4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)펜에틸)카바메이트 (60 mg, 0.112 mmol) 교반용액에 TFA (0.173 mL, 2.245 mmol)를 0-5 °C에서 적가 하였다. 반응용액을 교반하고 25 °C 로 승온 하였다. 반응물을 2시간동안 유지한 뒤 UPLC-MS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응물을 감압 농축하여 황색 점성 물질 (gum)의 표제화합물 (55 mg, 0.013 mmol, 11.84 % yield)을 수득하였다.
LCMS: (MM-ES+APCI) (M+H)+ = 435.3; Purity : 13.25% by UPLC-MS
단계 7: 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)-N-(4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)펜에틸)피페라진-1-카복사미드(화합물 11)의 합성
THF (10 mL) 내 4-((3-(4-(2-아미노에틸)페닐)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (400 mg, 0.729 mmol) 교반용액에 TEA (0.499 mL, 3.65 mmol) 및 CDI (177 mg, 1.094 mmol)를 0-10 °C 에서 첨가하였다. 반응용액을 1시간동안 교반하고 25 °C 로 승온하였다. 반응물에 THF (10mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (246 mg, 0.365 mmol) 용액 및 TEA (0.499 mL, 3.65 mmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 반응물을 4시간동안 유지하고 UPLC-MS로 관찰하였다. 반응완료 후, 반응물을 물 (30 mL)로 희석하고 DCM (10 mL) 및 THF 및 DCM(2 X 20 mL) 혼합액 (2:8)로 순차적으로 화합물을 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 갈색 점성 물질 (gum)을 수득하였다. 얻어진 화합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, DCM 내 1-15% 메탄올로 용출하였다. 목적구획을 감압 농축하고, prep-HPLC로 정제하고, 30시간동안 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (40 mg, 0.039 mmol, 5.37 % yield)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.10 (br s, 1H), 9.91 (br s, 1H), 9.66 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66 (dd, J1 = 7.6, J2 = 1.2 Hz 1H), 7.63 (d, 2H), 7.58-7.54 (m, 2H), 7.40 ( td, J1 = 7.6, J2 = 1.2 Hz, 1H), 7.30 (td, J1 = 8.0, J2 = 1.6, Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 7.09-7.01 (m, 4H), 6.63 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.06 (dd, J1 = 12.8, J2 = 5.6 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.43-3.39 (m, 4H), 3.31-3.27 (m, 2H), 3.22-3.18 (m, 6H), 2.93-2.84 (m, 1H), 2.68-2.57 (m, 6H), 2.06-2.01 (m, 1H), 1.89-1.82 (m, 2H), LCMS (MM-ES+APCI) (M + H)+ = 1020.3, HPLC : Rt-15.298; Purity : 97.38%
실시예 12: 화합물 12의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000072
실험과정
단계 1: N-(2-클로로페닐)-4-니트로벤즈아미드(3)의 합성
DCM (50 mL) 내 4-니트로벤조일 클로라이드 (10 g, 53.89 mmol) 및 TEA (8.18 g, 80.83 mmol) 용액에 DCM (50 mL) 내 2-클로로아닐린 (7.22 g, 56.58 mmol)용액을 0°C에서 적가 하였다. 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 물 (100 mL)을 추가하여 혼합물 층을 분리하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조 후 감압 농축하였다. 생성물을 petroleum ether/EtOAc (100 mL, 10:1)로 분쇄하여 황색 고체의 표제화합물 (8 g, 28.91 mmol, 53.66% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 277.7.
단계 2: 4-아미노-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드(4)의 합성
에탄올 (30 mL) 및 H2O (30 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-니트로벤즈아미드 (4g, 14.46mmol) 및 NH4Cl (3.09g, 57.83mmol) 용액에 20°C에서 Fe (3.23 g, 57.83 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 NaHCO3 용액 (200 mL)를 첨가 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 Na2SO4로 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (2.3 g, 9.32 mmol, 64.49% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 247.1.
단계 3: 4-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드(6)의 합성
메탄올 (50 mL) 내 4-아미노-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드 (2.3g, 9.32mmol), 2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘 (4.67g, 27.97mmol) 및 DIPEA (1.20g, 9.32mmol)용액을 70°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. (참고: 많은 양의 백색 고체가 형성됨). 상온으로 온도 하강 후 혼합물을 여과하였다. 고체 부분을 모아 건조하여 백색 고체의 표제화합물 (2.4 g, 6.36 mmol, 68.24% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 377.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.26 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 8.40 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.62 (dd, J = 1.5, 7.9 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.3, 7.9 Hz, 1H), 7.39 (dt, J = 1.4, 7.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.27 (m, 1H).
단계 4: 메틸 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세테이트(8)의 합성
디옥산 (12 mL) 내 4-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-N-(2-클로로페닐)벤즈아미드 (1.1g, 2.92mmol) 및 메틸 2-(4-아미노페닐)아세테이트 (578.07mg, 3.50mmol)용액에 20°C에서 TsOH뷝2O (1.66 g, 8.75 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 농축하여 흑갈색 오일의 표제화합물 (2g, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 506.1.
단계 5: 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산(9)의 합성
THF (20 mL) 내 메틸 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세테이트 (2g, 3.95mmol)용액에 물 (10 mL) 내 NaOH (790.57 mg, 19.77 mmol)용액을 20°C에서 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 농축하여 유기 용매를 제거하였다. 잔여 수층을 1N HCl 용액을 사용하여 pH=2로 산성화하였다. 혼합물을 여과 후 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 고체 부분을 모아 건조하여 회색 고체의 표제화합물 (1.5 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 492.2.
단계 6: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 12)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100 mg, 203.29 μmol), 2- (2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (77.01mg, 203.29μmol, HCl) 및 DIPEA (131.37mg, 1.02mmol)용액에 20°C에서 HATU (85.03 mg, 223.62 μmol)를 첨가 후 혼합물을 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 AcOH로 중화 후 prep-HPLC (column: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 32%-62%, 10 min)로 정제 및 동결건조 하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 34%-64%, 9 min)로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (18.9 mg, 21.07 μmol, 10.36% yield, 91% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 816.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (br s, 1H), 9.89 (s, 1H), 9.65 (br s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.06 - 7.93 (m, 4H), 7.63 (br dd, J = 8.5, 17.2 Hz, 4H), 7.55 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 3H), 5.07 (br dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 3.71 (br s, 2H), 3.67-3.64 (m, 2H), 3.64-3.58 (m, 2H), 3.46-3.38 (m, 4H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.63-2.55 (m, 2H), 2.05-1.98 (m, 1H).
실시예 13: 화합물 13의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000073
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-히드록시프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1g, 3.62mmol)용액에 DIPEA (935.80mg, 7.24mmol, 1.26mL) 및 3-아미노프로판-1-올 (299.11mg, 3.98mmol, 307.10μL)를 첨가 후 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하였다. 여과 및 감압 농축 후 황색 오일의 표제화합물 (1.3 g, 2.98 mmol, 82.37% yield, 76% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 332.1.
단계 2: 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필 4-메틸벤젠술포네이트(3)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-히드록시프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (1.3 g, 3.92 mmol)용액에 TsCl (1.12 g, 5.89 mmol), DMAP (95.87 mg, 784.73 μmol) 및 TEA (794.06 mg, 7.85 mmol, 1.09 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 58%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (50 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하였다. 여과 및 감압 농축 후 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~50% petroleum ether: EtOAc gradient @ 60 mL/min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (460 mg, 820.50 μmol, 20.91% yield, 86.6% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 486.1.
단계 3: tert-부틸 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1- 카복실레이트(6)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (500 mg, 1.02 mmol), tert- 부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (189.32mg, 1.02mmol) 및 DIPEA (656.86mg, 5.08mmol) 용액에 20°C에서 HATU (425.14 mg, 1.12 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (15 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 생성물을 petroleum ether/EtOAc (10:1, 30 mL)로 분쇄하여 회색 고체의 표제화합물 (450 mg, 681.68 μmol, 67.06% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 660.3.
단계 4: N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(7)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세틸)피페라진-1-카복실레이트 (450mg, 681.68 μmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 73% 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (430 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 560.3.
단계 5: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 13)의 합성
DMF (2 mL) 내 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필 4-메틸벤젠술포네이트 (100 mg, 205.97 μmol)용액에 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노) 벤즈아미드 (135.14mg, 226.57μmol, HCl), NaI (6.17mg, 41.19μmol) 및 DIPEA (133.10mg, 1.03mmol, 179.38μL)를 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 50%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC(column: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 8%-38%, 2 min) 및 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; mobile phase: [물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 45%-75%, 8 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (20.2 mg, 21.72 μmol, 10.54% yield, 93.9% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 873.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.05 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.14 - 7.08 (m, 3H), 7.00 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.80 - 6.74 (m, 1H), 5.04 (dd, J = 5.3, 12.7 Hz, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.50 - 3.49 (m, 4H), 3.30 (s, 2H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.60 - 2.58 (m, 2H), 2.33 - 2.31 (m, 2H), 2.27 - 2.25 (m, 4H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.71 - 1.70 (m, 2H).
실시예 14: 화합물 14의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000074
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((6-히드록시헥실)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1g, 3.62mmol)용액에 DIPEA (1.40g, 10.86mmol, 1.89mL) 및 6-아미노헥산-1-올 (509.11mg, 4.34mmol)을 첨가 후 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 50%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash ® Silica Flash Column, Eluent of 0~60% petroleum ether: EtOAc gradient @ 60 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.63 g, 1.37 mmol, 37.75% yield, 81% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 374.2.
단계 2: 6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실 4-메틸벤젠술포네이트(3)의 합성
DCM (6 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((6-히드록시헥실)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.63 g, 1.69 mmol)용액에 TsCl (482.49mg, 2.53mmol), TEA (512.17mg, 5.06mmol, 704.50μL) 및 DMAP (20.61mg, 168.72μmol)를 첨가 후 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 44%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (50 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.7 g, 987.13 μmol, 58.51% yield, 74.4% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 528.3.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 14)의 합성
DMF (3 mL) 내 6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실 4-메틸벤젠술포네이트 (110 mg, 208.50 μmol)용액에 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노) 벤즈아미드 (124.36mg, 208.50μmol, HCl), DIPEA (134.73mg, 1.04mmol, 181.58μL) 및 NaI (6.25mg, 41.70μmol)를 첨가 후 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Phenomenex C18 75 x 30 mm x 3 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 7 min) 및 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; mobile phase: [물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 45% - 75%, 8 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (14.5 mg, 14.30 μmol, 6.86% yield, 90.3% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 915.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.90 - 9.86 (m, 1H), 9.64 (br s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.17 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.06 - 8.00 (m, 2H), 8.00 - 7.93 (m, 2H), 7.68 - 7.63 (m, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 4H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 7.15 - 7.05 (m, 3H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.55 - 6.48 (m, 1H), 5.08 - 5.01 (m, 1H), 3.64 - 3.61 (m, 2H), 3.46 - 3.42 (m, 4H), 3.34 - 3.33 (m, 2H), 3.29 (s, 2H), 2.87- 2.86 (m, 1H), 2.62 - 2.58 (m, 2H), 2.24 - 2.22 (m, 4H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.58 - 1.51 (m, 2H), 1.41 - 1.27 (m, 6H).
실시예 15: 화합물 15의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000075
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((8-히드록시옥틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (500mg, 1.81mmol), 8-아미노옥탄-1-올 (262.91mg, 1.81mmol) 및 DIPEA (467.90mg, 3.62mmol) 용액을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (15 mL)에 붓고 EtOAc (8 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4 로 건조 및 감압 농축하여 어두운 녹색 고체의 표제화합물 (620 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 402.3.
단계 2: 8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)옥틸 4-메틸벤젠술포네이트(3)의 합성
DCM (15 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((8-히드록시옥틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (620mg, 1.54mmol) 및 TsCl (474.83mg, 2.49mmol) 용액에 20°C에서 TEA (504.05 mg, 4.98 mmol) 및 DMAP (20.28 mg, 166.00 μmol)를 첨가 후 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g silica gel column, EtOAc/petroleum ether = 20-80%, 60 mL/min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (450 mg, 809.88 μmol, 52.44% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 556.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)옥틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 15)의 합성
DMF (3 mL) 내 8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)옥틸 4-메틸벤젠술포네이트 (150 mg, 269.96 μmol) 및 N-(2-클로로페닐)- 4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 (130 mg, 217.94 μmol, HCl 염) 용액에 20°C에서 DIPEA (104.67mg, 809.88μmol) 및 NaI (8.09mg, 53.99μmol)를 첨가 후 80°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (10 mL)를 붓고 EtOAc (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL)로 세척 후 Na2SO4 로 건조 및 감압 농축했다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 6%-36%, 10 min)로 정제 및 동결건조 후 prep-HPLC (column: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 52%-82%, 10 min)로 추가정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (14.8 mg, 14.43 μmol, 5.35% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 943.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.06 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.65 (dd, J = 1.5, 7.9 Hz, 1H), 7.62 - 7.54 (m, 4H), 7.39 (dt, J = 1.3, 7.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 7.14 - 7.06 (m, 3H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.51 (br t, J = 5.4 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.46-3.38 (m, 4H), 3.30-3.24 (m, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.25 - 2.16 (m, 6H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.59 - 1.51 (m, 2H), 1.37 - 1.21 (m, 10H).
실시예 16: 화합물 16의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000076
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((3-(피페라진-1-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
디옥산 (3 mL) 내 tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)프로필)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 200.18 μmol) 용액에 HCl/dioxane (4 M, 3 mL)를 첨가 후 20°C에서 30분 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (87 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 400.2.
단계 2: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)프로필)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 16)의 합성
DMF (1 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (98.18 mg, 199.59 μmol)용액에 HATU (113.83 mg, 299.38 μmol) 및 DIPEA (77.39 mg, 598.76 μmol, 104.29 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 30분 동안 교반 하였다. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((3-(피페라진-1-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (87 mg, 199.59 μmol, HCl)를 첨가 후 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석 후 EtOAc (5mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 여과했다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 9:1)로 정제 후 역상 HPLC (column: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 10%-40%, 2 min)로 재정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (22.5 mg, 23.70 μmol, 11.88% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 873.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.05 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.07 - 7.95 (m, 4H), 7.68 - 7.53 (m, 5H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.17 - 7.04 (m, 3H), 6.95 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.86 - 6.81 (m, 1H), 5.08 - 4.96 (m, 1H), 3.69 - 3.59 (m, 2H), 3.53 - 3.44 (m, 4H), 3.22 - 3.15 (m, 2H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.69 - 2.57 (m, 1H), 2.44 - 2.36 (m, 2H), 2.35 - 2.30 (m, 2H), 2.29 - 2.25 (m, 3H), 2.04 - 1.93 (m, 1H), 1.74 - 1.63 (m, 2H).
실시예 17: 화합물 17의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000077
실험과정
단계 1: 4-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트(2)의 합성
DCE (30 mL) 내 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (3g, 14.07mmol) 및 벤질 피페라진-1-카르복실레이트 (3.10g, 14.07mmol, 2.72mL)용액에 25°C에서 AcOH (844.69 mg, 14.07 mmol, 804.47 μL)를 첨가 후 30분 동안 교반 하였다. 이후 혼합물에 25°C에서 NaBH(OAc)3 (5.96 g, 28.13 mmol)를 첨가 후 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 생성물을 DCM (50 mL)로 희석 후 포화 NaHCO3 (30 mL)로 세척 및 Na2SO4로 건조, 여과, 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~25% EtOAc/Petroleum ethergradient @ 120 mL/min)로 정제하여 무색 오일의 표제화합물 (5.3 g, 12.19 mmol, 86.63% yield, 96% purity)을 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 418.2
단계 2: 벤질 4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-카르복실레이트(3)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 벤질 4-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 2.63 mmol)용액에 25°C에서 HCl/dioxane (4 M, 41.16 mL)를 첨가 후 30분 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 갈색 고체의 표제화합물 (930 mg, crude, HCl)을 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 318.0
단계 3: 벤질 4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트(4)의 합성
DMSO (6 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (359.05mg, 1.30mmol), 벤질 4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (460mg, 1.30mmol, HCl) 및 TEA (526.13mg, 5.20mmol, 723.70μL)용액을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (30 mL)를 붓고 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~70% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.6 g, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 574.3
단계 4: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(5)의 합성
TFA (5 mL) 내 벤질 4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일) 피페리딘-4-일) 메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (0.6 g, 1.05 mmol) 용액을 40°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 갈색 오일의 표제 화합물 (0.5 g, crude, TFA)을 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 440.2
단계 5: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4 -일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 17)의 합성
DMF (1 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (50 mg, 101.65 μmol)용액에 HATU (46.38mg, 121.98μmol) 및 DIPEA (65.68mg, 508.23μmol, 88.52μL)를 첨가 후 25°에서 10분 동안 교반 하였다. 이후 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (112.53 mg, 203.29 μmol, TFA)를 첨가 후 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (30 mL)을 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC(column: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 um;mobile phase: [물(FA)-ACN];B%: 19%-49%,7min)로 정제 및 동결건조 했다. 생성물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 재정제하여 황색 고체의 표제화합물 (14.7 mg, 15.77 umol, 14.41% yield, 98% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 913.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 4H), 7.70 - 7.58 (m, 4H), 7.57 - 7.54 (m, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.13 - 5.05 (m, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 4H), 3.51 - 3.40 (m, 4H), 3.31 - 3.29 (m, 2H), 2.90 - 2.78 (m, 3H), 2.63 - 2.56 (m, 2H), 2.28 - 2.21 (m, 3H), 2.16 - 2.12 (m, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.60 (m, 3H), 1.34 - 1.25 (m, 2H).
실시예 18: 화합물 18의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000078
실험과정
단계 1: 벤질 4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트(3)의 합성
DMSO (6 mL) 내 벤질 4-(4-피페리딜메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (460mg, 1.30mmol, HCl), 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-5-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (359.05 mg, 1.30mmol) 및 TEA (526.13mg, 5.20mmol)용액을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (30 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 여과, 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g Sepa Flash® Silica Flash Column, Eluent of 0~70% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (0.4 g, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 574.2
단계 2: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
TFA (5 mL) 내 벤질 4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (0.4 g, 697.30 μmol)용액을 50°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 표제화합물 (0.4 g, crude, TFA)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M + H)+ = 440.2
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5 -일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 18)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100 mg, 203.29 μmol)용액에 HATU (92.76mg, 243.95μmol), DIPEA (131.37mg, 1.02mmol, 177.05μL)를 첨가 후 20°C에서 30분 동안 교반 하였다. 이후 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (135.71 mg, 203.29 μmol, 2TFA)을 첨가 후 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과하였다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제 및 역상 HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 40%-70%, 8 min)로 재정제 하였다. 용출액을 동결건조 하여 황색 고체의 표제화합물 (30.2 mg, 30.42 μmol, 14.96% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 913.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.07 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.06 - 7.91 (m, 4H), 7.68 - 7.52 (m, 5H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.09 - 5.02 (m, 1H), 4.04 - 3.95 (m, 2H), 3.70 - 3.58 (m, 2H), 3.50 - 3.40 (m, 4H), 3.31 - 3.30 (m, 2H), 2.97 - 2.83 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.26 - 2.20 (m, 3H), 2.10 - 2.07 (m, 1H), 2.04 - 1.98 (m, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 2H).
실시예 19: 화합물 19의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000079
실험과정
단계 1: 벤질 4-(1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(2)의 합성
메탄올 (30 mL) 내 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (2g, 10.04mmol), 벤질 피페라진-1-카르복실레이트 (2.21g, 10.04mmol) 및 AcOH (301.40mg, 5.02mmol) 용액을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 이후 NaBH3CN (946.20 mg, 15.06 mmol)를 첨가 후 혼합물을 20°C에서 13시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 NaHCO3 (10 mL)로 퀜칭 및 감압 농축하여 메탄올을 제거하였다. 잔여물을 EtOAc (60 mL)로 용해 및 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 25 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 5~50% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 100 mL/min)로 정제하여 밝은 황색 오일의 표제화합물 (2.4 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 404.1
단계 2: 벤질 4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(3)의 합성
Dioxane (15 mL) 내 벤질 4-(1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.4 g, 5.95 mmol)용액에 20°C에서 HCl/dioxane (4 M, 15 mL)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 백색 고체의 표제화합물 (2.2 g, crude, 2HCl)을 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 304.3
단계 3: 벤질 4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(5)의 합성
DMSO (8 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (400mg, 1.45mmol) 및 벤질 4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.47mmol, HCl)용액에 20°C에서 DIPEA (561.48 mg, 4.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (30 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 4 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 30~100% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 50 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (400 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 560.3
단계 4: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(6)의 합성
TFA (4 mL) 내 벤질 4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 357.39 μmol)용액을 40°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 출발물질 및 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 60°C에서 1시간 동안 추가로 교반 하였다. 혼합물을 감압 농축 후 잔여물을 물 (20 mL)로 용해 및 동결건조 하여 황색 고체의 표제화합물 (250 mg, crude, 2TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 426.3
단계 5: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 19)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100mg, 203.29μmol), DIPEA (131.37mg, 1.02mmol) 및 HATU (92.76mg, 243.95μmol)용액에 20°C에서 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (132.86 mg, 203.29 μmol, 2TFA)를 첨가 후 혼합물을 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (15 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 37%-67%, 8 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (44.5 mg, 44.04 μmol, 21.66% yield, 89% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 899.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.05 - 8.00 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 1.3, 8.0 Hz, 1H), 7.39 (dt, J = 1.3, 7.7 Hz, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.08 (dd, J = 5.3, 13.0 Hz, 1H), 3.75-3.68 (m, 2H), 3.64 (s, 2H), 3.51 - 3.41 (m, 4H), 3.31-3.29 (m, 4H), 2.91 - 2.80 (m, 3H), 2.62 - 2.57 (m, 1H), 2.44-2.41 (m, 2H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.63 - 1.50 (m, 2H).
실시예 20: 화합물 20의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000080
실험과정
단계 1: 벤질 4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(3)의 합성
DMSO (8 mL) 내 벤질 4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (400mg, 1.45mmol) 및 벤질 4-(4-피페리딜)피페라진-1-카르복실레이트 (544.96mg, 1.45mmol, 2HCl)용액에 20°C에서 DIPEA (561.48 mg, 4.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (30 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 4 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 30~100% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 50 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (400 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 560.4
단계 2: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
TFA (4 mL) 내 벤질 4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 357.39 μmol)용액을 40°에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 출발물질 및 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 60°C에서 1시간 동안 추가로 교반 하였다. 혼합물을 감압 농축 후 잔여물을 물 (20 mL)로 용해 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (250 mg, crude, 2TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 426.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 20)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100mg, 203.29μmol), DIPEA (131.37mg, 1.02mmol) 및 HATU (92.76mg, 243.95μmoL)용액에 20°C에서 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (132.86 mg, 203.29 μmol, 2TFA)를 첨가 후 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 출발물질 및 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (15 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 4 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 30~100% EtOAc/Petroleum ether gradient 이후 10% methanol/EtOAc gradient @ 50 mL/min)로 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 34%-64%, 8 min)로 재정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (15.5 mg, 15.68 μmol, 7.71% yield, 91% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 899.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (br s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.04 - 8.00 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.61 - 7.54 (m, 3H), 7.39 (dt, J = 1.3, 7.7 Hz, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 2H), 7.21 (dd, J = 2.1, 8.6 Hz, 1H), 7.11 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.45-3.40 (m, 4H), 3.30-3.28 (m, 4H), 2.95 - 2.85 (m, 3H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 2H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.46 - 1.34 (m, 2H).
실시예 21: 화합물 21의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000081
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((5-히드록시펜틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (500mg, 1.81mmol) 및 5-아미노펜탄-1-올 (224.09mg, 2.17mmol)용액에 100°C에서 DIPEA (701.85 mg, 5.43 mmol, 945.89 μL)를 첨가 후 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 brine (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 5)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 5)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과, 감압 농축하여 황색 오일의 표제화합물 (650 mg, 1.81 mmol, 99.92% yield, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 360.1.
단계 2: 5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)펜틸 4-메틸벤젠술포네이트(3)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((5-히드록시펜틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (650mg, 1.81mmol), TosCl (517.23mg, 2.71mmol), TEA (549.06mg, 5.43mmol, 755.24μL) 및 DMAP (22.10mg, 180.87μmol)용액을 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과하였다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 20~80% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 40 mL/min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (500 mg, 973.59 μmol, 53.83% yield, N/A purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 514.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)펜틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 21)의 합성
DMF (1 mL) 내 5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)펜틸 4-메틸벤젠술포네이트 (91.70 mg, 178.56 μmol), N-(2-클로로페닐)- 4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 (100 mg, 167.65 μmol, HCl)용액에 DIPEA (69.23 mg, 535.69 μmol, 93.31 μL) 및 NaI (2.68 mg, 17.86 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 brine (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과하였다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하였고 역상 HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 40%-70%, 8 min)로 재정제 하였다. 생성물을 동결건조 하여 황색 고체의 표제화합물 (19.2 mg, 19.81 μmol, 11.09% yield, 93% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 901.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.05 - 7.92 (m, 4H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 4H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 3H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.54 - 6.48 (m, 1H), 5.11 - 4.98 (m, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 2H), 3.47 - 3.39 (m, 4H), 3.27 - 3.24 (m, 2H), 2.94 - 2.80 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.26 - 2.16 (m, 6H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.61 - 1.49 (m, 2H), 1.46 - 1.37 (m, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 2H).
실시예 22: 화합물 22의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000082
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((4-(피페라진-1-일)부틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
TFA (1 mL) 내 벤질 4-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 182.61 μmol)용액을 40°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 갈색 오일의 표제화합물 (96 mg, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 414.3.
단계 2: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 22)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (83.93 mg, 170.62 μmol) 및 2- (2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((4-(피페라진-1-일)부틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, 170.62 μmol, TFA)용액에 EDCI (49.06mg, 255.93μmol), HOBt (34.58mg, 255.93μmol) 및 DIPEA (110.25mg, 853.09μmol, 148.59μL)를 첨가 후 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (15 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 여과했다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 40% - 70%, 10 min)로 추가 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (32.6 mg, 35.64 μmol, 20.89% yield, 97% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 887.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.69 - 9.60 (m, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.07 - 7.89 (m, 4H), 7.69 - 7.51 (m, 5H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 1H), 7.15 - 7.04 (m, 3H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.48 (m, 1H), 5.05 - 4.97 (m, 1H), 3.63 (s, 2H), 3.47 - 3.42 (m, 4H), 3.31 - 3.28 (m, 4H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.62 - 2.58 (m, 2H), 2.26 - 2.21 (m, 4H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.61 - 1.42 (m, 4H).
실시예 23: 화합물 23의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000083
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(히드록시메틸)아제티딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (0.5g, 1.81mmol) 및 아제티딘-3-일메탄올 염산염 (246.07mg, 1.99mmol, HCl) 용액에 TEA (549.51 mg, 5.43 mmol)를 첨가 후 120°C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (15 mL)로 세척 후 Na2SO4 로 건조, 여과 및 감압 농축하여 황색 고체 (860 mg, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 344.1.
단계 2: 1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-카르브알데히드(3)의 합성
DCM (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(히드록시메틸)아제티딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.35 g, 1.02 mmol)용액에 DMP (475.62 mg, 1.12 mmol)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발 물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (360 mg, crude)를 수득하였고 다음반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+= 342.1.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4 -일)아제티딘-3-일)메틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 23)의 합성
MeOH (6 mL) 내 1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-카르브알데히드 (357.64 mg, 628.69 μmol), N-(2-클로로페닐)-4- ((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 (150 mg, 251.47 μmol, HCl) 및 NaOAc (41.26mg, 502.95μmol)용액을 25°C에서 30분 동안 교반 하였다. 이후 NaBH3CN (47.41 mg, 754.42 μmol)를 첨가 후 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (15 mL)로 세척 후 Na2SO4 로 건조 및 여과하여 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 50~100% EtOAc/Petroleum ether to 0~10% Methanol/ EtOAc gradient @ 100 mL/min)로 정제했다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge BEH C18 150*25 mm*5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 41%-71%, 10 min)로 추가 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (36.5 mg, 38.34 μmol, 15.25% yield, 93% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 885.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.06 (s, 1H), 9.89 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.17 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.04 - 8.00 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.65 (dd, J = 1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 - 7.51 (m, 2H), 7.38 (dt, J = 1.4, 7.7 Hz, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 5.5, 12.6 Hz, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 2H), 3.83 - 3.74 (m, 2H), 3.68 - 3.60 (m, 2H), 3.50 - 3.38 (n, 6H), 2.91 - 2.82 (m, 2H), 2.59 - 2.54 (m, 2H), 2.30-2.27 (m, 4H), 2.03 - 1.94 (m, 1H).
실시예 24: 화합물 24의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000084
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(3)의 합성
DMSO (6 mL) 내 피롤리딘-3-일메탄올 (164.78 mg, 1.63 mmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 1.09 mmol)용액에 TEA (219.80 mg, 2.17 mmol, 302.34 μL)를 첨가 후 120°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 brine (30 mL)로 세척 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 5)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (300 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 358.2.
단계 2: 1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-카르브알데히드(4)의 합성
DCM (1 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 279.83 μmol)용액에 DMP (142.43 mg, 335.80 μmol)를 첨가 후 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 한 개의 메인 스팟이 검출되었다. 혼합물을 셀라이트 패드로 여과 후 여액을 감압 농축하여 갈색 오일의 표제화합물 (99 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 356.4.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4 -일)피롤리딘-3-일)메틸)피페라진-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 24)의 합성
MeOH (2 mL) 내 N-(2-클로로페닐)-4-((5-플루오로-2-((4-(2-옥소-2-(피페라진-1-일)에틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 (90 mg, 160.71 μmol) 및 1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-카르브알데히드 (57.11 mg, 160.71 μmol)용액에 NaOAc (19.78 mg, 241.06 μmol)를 첨가 후 20°C에서 30분 동안 교반 하였다. 이후 NaBH3CN (30.30 mg, 482.13 μmol)를 첨가 후 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (12 %)가 검출되었다. 혼합물을 NaHCO3 (5 mL)로 퀜칭 후 EtOAc (10 mL × 3)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 여과했다. 여액을 감압 농축 후 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제 및 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um; mobile phase: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 41% - 71%, 8 min)로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (10.1 mg, 11.12 μmol, 6.92% yield, 94% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 899.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.05 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.06 - 8.00 (m, 2H), 7.99 - 7.94 (m, 2H), 7.68 - 7.63 (m, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 2H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 4H), 5.11 - 4.97 (m, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.62 - 3.50 (m, 3H), 3.50 - 3.42 (m, 4H), 3.30 - 3.26 (m, 1H), 2.93 - 2.80 (m, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 2H), 2.48 - 2.43 (m, 2H), 2.32 - 2.25 (m, 5H), 2.07 - 1.93 (m, 2H), 1.68 - 1.56 (m, 1H).
실시예 25: 화합물 25의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000085
실험과정
단계 1: tert-부틸 4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (500mg, 1.81mmol), tert-부틸 4-(아미노메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (387.92mg, 1.81mmol) 및 DIPEA (467.90mg, 3.62mmol) 용액을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (15 mL)를 붓고 EtOAc (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축하여 녹색 고체의 표제화합물 (820 mg, crude)를 수득하였다. MS(M-Boc+H)+ = 371.2.
단계 2: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온(3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (820 mg, 1.74 mmol) 용액에 20°C에서 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 표제 화합물 (700 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 371.2
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일) )아미노)메틸)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 25)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 245.78 μmol, HCl), 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (120.90mg, 245.78μmol) 및 DIPEA (158.83mg, 1.23mmol)용액에 20°C에서 HATU (102.80 mg, 270.36 μmol)를 첨가 후 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (10 mL)를 붓고 EtOAc (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축했다. 생성물을 prep-HPLC (column: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 34%-64%, 10 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (29.1 mg, 32.40 μmol, 13.18% yield, 94% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 844.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.22 - 8.16 (m, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.94 (m, 2H), 7.67 - 7.52 (m, 5H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H), 7.15 - 7.06 (m, 3H), 7.00 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.63 - 6.57 (m, 1H), 5.04 (dd, J = 5.5, 13.0 Hz, 1H), 4.45-4.35 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 1H), 3.70 - 3.57 (m, 2H), 3.32 - 3.29 (m, 2H), 3.20 - 3.13 (m, 2H), 3.00 - 2.83 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 1H), 2.06 - 1.96 (m, 1H), 1.87 - 1.74 (m, 1H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.07 - 0.92 (m, 2H).
실시예 26: 화합물 26의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000086
실험과정
단계 1: tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 프로필)피페리딘-1-카르복실레이트(3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (150mg, 543.05μmol)용액에 DIEA (140.37mg, 1.09mmol, 189.18μL) 및 tert-부틸 4-(3-아미노프로필)피페리딘-1-카복실레이트 (131.61mg, 543.05μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 ~46% 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 60 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.3 g, 385.10 μmol, 70.92% yield, 64% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 521.1.
단계 2: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-(피페리딘-4-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 프로필)피페리딘-1-카르복실레이트 (0.3 g, 601.72 μmol) 용액에 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc=1: 1)로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (0.3 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 399.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4 -일)아미노)프로필)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 26)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (150 mg, 304.94 μmol)용액에 HATU (173.92 mg, 457.41 μmol) 및 DIPEA (118.23 mg, 914.82 μmol, 159.34 μL)를 첨가하였다. 30분 이후 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-(피페리딘-4-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (198.93 mg, 457.41 μmol, HCl)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC(column: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 43%-73%,10 min) 및 prep-HPLC(column: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; mobile phase: [물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 49%-79%, 8min)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (23.5 mg, 24.84 μmol, 8.15% yield, 92.2% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 872.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (br s, 1H), 9.89 (s, 1H), 9.65 (br s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.03 - 7.95 (m, 4H), 7.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 4H), 7.39 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.11 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.57 - 6.49 (m, 1H), 5.08 - 5.00 (m, 1H), 4.36 - 4.34 (m, 1H), 3.97 - 3.89 (m, 1H), 3.68 - 3.60 (m, 2H), 3.31 - 3.30 (m, 2H), 3.25 - 3.23 (m, 1H), 2.98 - 2.81 (m, 4H), 2.03 - 1.98 (m, 1H), 1.64 - 1.52 (m, 4H), 1.46 - 1.39 (m, 1H), 1.25 - 1.18 (m, 2H), 0.90 - 0.80 (m, 2H).
실시예 27: 화합물 27의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000087
실험과정
단계 1: tert-부틸 (3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 프로필)카바메이트(3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 1.09 mmol)용액에 DIEA (280.74mg, 2.17mmol, 378.36μL) 및 tert-부틸(3-아미노프로필)카바메이트 (189.24mg, 1.09mmol, 189.62μL)를 첨가 후 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)을 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 및 무수 Na2SO4로 건조, 여과 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 60 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.2 g, 458.59 μmol, 42.22% yield, 98.7% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 453.2.
단계 2: 4-((3-아미노프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 프로필)카바메이트 (0.2 g, 464.63 μmol) 용액에 HCl/dioxane (4 M, 5 mL)를 첨가 후 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc=1:1)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (0.17 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 331.0.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-((3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일))아미노)프로필)아미노)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 27)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100 mg, 203.29 μmol)용액에 HATU (154.60 mg, 406.59 μmol) 및 DIPEA (78.82 mg, 609.88 μmol, 106.23 μL)를 첨가하였다. 30분 이후 4-((3-아미노프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (74.57 mg, 203.29 μmol, HCl)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC(column: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 30% - 60%, 10min) 및 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; mobile phase: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 36%-66%, 9 min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (20.5 mg, 23.32 μmol, 11.47% yield, 91.5% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 804.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (br s, 1H), 9.90 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.17 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.07 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.04 - 8.00 (m, 2H), 8.00 - 7.94 (m, 2H), 7.66 - 7.63 (m, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.01 - 6.95 (m, 2H), 6.64 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.1, 12.7 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 2H), 3.13 - 3.08 (m, 2H), 2.91 - 2.82 (m, 1H), 2.61 - 2.57 (m, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.71 - 1.60 (m, 2H).
실시예 28: 화합물 28의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000088
실험과정
단계 1: tert-부틸 (5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)펜틸)카바메이트(3)의 합성
DMSO (6 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 500 mg, 1.81 mmol)용액에 DIPEA (467.89mg, 3.62mmol) 및 tert-부틸 N-(5-아미노펜틸)카바메이트 (366.18mg, 1.81mmol)를 첨가 후 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (20mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 감압 농축하여 갈색 오일의 표제화합물 (770 mg, 1.68 mmol, 92.77% yield)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 481.3.
단계 2: 4-((5-아미노펜틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
Dioxane (8 mL) 내 tert-부틸 (5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)펜틸)카바메이트 (770 mg, 1.68 mmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 8 mL)를 첨가 후 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 백색 고체의 표제화합물 (500 mg, 1.40 mmol, 83.07% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 359.3.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-((5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일))아미노)펜틸)아미노)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 28)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (274.51 mg, 558.05 μmol) 및 4- ((5-아미노펜틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 558.05 μmol)용액에 25°C에서 DIPEA (360.62 mg, 2.79 mmol) 및 HATU (254.62 mg, 669.66 μmol)를 첨가 후 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)을 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Unisil 3-100 C18 μLtra 150*50 mm*3 um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 39%-69%, 7 min)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (83.5 mg, 92.30 μmol, 16.54% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 832.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.16 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.06 - 7.94 (m, 5H), 7.64 (dd, J = 1.5, 7.9 Hz, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 4H), 7.39 (dt, J = 1.4, 7.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 7.15 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.07 - 6.98 (m, 2H), 6.50 (br t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 3.33 (br s, 2H), 3.21 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.02 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 2H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.56 - 1.48 (m, 2H), 1.44 - 1.36 (m, 2H), 1.31 - 1.23 (m, 2H).
실시예 29: 화합물 29의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000089
실험과정
단계 1: 벤질 (7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헵틸)카바메이트(3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.5g, 1.81mmol) 용액에 DIEA (701.85mg, 5.43mmol, 945.89μL) 및 벤질(7-아미노헵틸)카바메이트 (589.94mg, 1.90mmol, FA)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash ® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.8 g, 1.54 mmol, 84.90% yield, 100% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 521.2.
단계 2: 4-((7-아미노헵틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질(7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헵틸)카바메이트(0.3 g, 576.29 μmol) 용액에 질소 기체 하 Pd/C (0.1 g, 288.14 μmol, 10% purity)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 수소 기체 (15 Psi)하 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 오일의 표제화합물 (140 mg, 224.61 μmol, 38.98% yield, 62% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 387.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-((7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헵틸)아미노)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 29)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (150 mg, 304.94 μmol)용액에 HATU (167.48 mg, 440.47 μmol) 및 DIPEA (87.58 mg, 677.64 μmol, 118.03 μL)를 첨가하였다. 30분 이후 4-((7-아미노헵틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130.94 mg, 338.82 μmol)를 첨가 후 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Phenomenex C18 75 x 30 mm x 3 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 45%-75%, 7 min) 및 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; mobile phase: [물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 47%-77%, 8 min)로 정제 후 동결건조 했다. 생성물을 prep-HPLC(column: Welch Ultimate XB-SiOH 250 x 50 x 10 μm; mobile phase: [Hexane-EtOH]; B%: 15%-55%, 15 min)로 재정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (9.8 mg, 10.75 μmol, 3.17% yield, 94.4% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 860.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.16 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.03 - 7.94 (m, 5H), 7.67 - 7.62 (m, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 4H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.06 - 6.97 (m, 2H), 6.54 - 6.44 (m, 1H), 5.04 (dd, J = 5.3, 13.6 Hz, 1H), 3.30 - 3.30 (m, 2H), 3.26 - 3.21 (m, 2H), 3.02 - 2.97 (m, 2H), 2.88 - 2.82 (m, 1H), 2.60- 2.58 (m, 2H), 2.03 - 1.96 (m, 1H), 1.55 - 1.49 (m, 2H), 1.38 - 1.32 (m, 2H), 1.28 - 1.22 (m, 6H).
실시예 30: 화합물 30의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000090
실험과정
단계 1: 4벤질(9-아미노노닐)카바메이트(2)의 합성
DCM (100 mL) 내 노난-1,9-디아민 (2.5g, 15.79mmol)용액에 0°C에서 DCM (100 mL) 내 CbzCl (1.62 g, 9.48 mmol, 1.35 mL)용액을 3시간 동안 적가 하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 감압 농축 후 역상 플래시 컬럼 (column: Phenomenex Luna C18 15 μm; 100 A, solvent for sample dissolution about 3.00 grams of sample dissolved in 10 ml of MeOH; mobile phase: [물-ACN]; B%: 0%-50%; 20 min)으로 정제 및 동결 건조하여 백색 고체의 표제화합물 (0.9 g, 2.83 mmol, 17.93% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 293.2.
단계 2: 벤질 (9-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)노닐)카바메이트(4)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (220 mg, 796.47 μmol)용액에 DIPEA (308.81mg, 2.39mmol) 및 벤질(9-아미노노닐)카바메이트 (269.56mg, 796.47μmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 25 g SepaFlash ® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (300 mg, 546.82 μmol, 68.66% yield, N/A purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 549.2.
단계 3: 4-((9-아미노노닐)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(5)의 합성
TFA (5 mL) 내 벤질(9-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)노닐) 카바메이트 (250 mg, 455.68 μmol)용액에 40°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 표제화합물 (240 mg, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 415.2.
단계 4: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-((9-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)노닐)아미노)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 30)의 합성
DMF (1 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (186.14 mg, 378.42 μmol)용액에 HATU (215.83 mg, 567.62 μmol) 및 DIPEA (146.72 mg, 1.14 mmol)를 첨가 후 20°C에서 30분 동안 교반 하였다. 이후 4-((9-아미노노닐)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 378.42 μmol, TFA)를 첨가 후 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (1 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 2)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제 후 역상 HPLC (column: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 48%-78%, 10 min)으로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (41.1 mg, 41.64 μmol, 11.00% yield, 90% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 910.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 9.78 - 9.69 (m, 1H), 9.37 - 9.27 (m, 1H), 8.18 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.04 - 7.91 (m, 5H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 4H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.09 - 6.98 (m, 2H), 6.55 - 6.45 (m, 1H), 5.08 - 5.02 (m, 1H), 3.25 (s, 2H), 3.28 - 3.23 (m, 2H), 3.02 - 2.94 (m, 2H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.57 - 1.49 (m, 2H), 1.38 - 1.25 (m, 6H), 1.25-1.13 (m, 6H).
실시예 31: 화합물 31의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000091
실험과정
단계 1: tert-부틸 4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(2)의 합성
CF3CH2OH (30 mL) 내 벤질 4-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1 g, 2.39 mmol)용액에 20°C 질소 기체 하 Pd/C (200 mg, 10% purity)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 기체 하 3차례 퍼지 및 탈기 후 20°C 수소 기체 (15 Psi) 하 14시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1:1, Rf = 0) 및 LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 셀라이트 패드로 여과 후 여액을 감압 농축하여 백색 고체의 표제화합물 (700 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 284.4
단계 2: tert-부틸 4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(4)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (700 mg, 2.53 mmol) 및 tert-부틸 4-(피페라진-1-일메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 2.47 mmol)용액에 20°C에서 DIPEA (655.06 mg, 5.07 mmol)를 첨가 후 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (40 mL)를 부은 후 여과하였고 물 (10 mL)로 세척하였다. 고체 부분을 모아 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (1.5 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 540.4
단계 3: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온(5)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (100 mg, 185.31μmol)용액에 20°C 에서 HCl/dioxane (4 M, 2 mL)를 첨가 후 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (100 mg, crude, 2HCl)을 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 440.3
단계 4: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4 -일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 31)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (95.99 mg, 195.15 μmol), DIPEA (126.11 mg, 975.75 μmol) 및 HATU (89.04 mg, 234.18 μmol)용액에 20°C에서 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 195.15 μmol, 2HCl)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (10 mL)를 붓고 EtOAc (6 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조 및 감압 농축 후 prep-TLC (DCM : MeOH = 10:1, Rf = 0.6)로 정제하였다. 생성물을 MeCN/H2O에 용해 후 동결건조 하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25 mm* 5um;mobile phase: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 43%-73%, 8 min)로 추가 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (9.1 mg, 9.56 μmol, 4.90% yield, 96% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 913.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.05 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.72 - 7.63 (m, 2H), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 1.4, 8.0 Hz, 1H), 7.39 (dt, J = 1.4, 7.7 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.7, 12.9 Hz, 1H), 4.36 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.95 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.70-3.55 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 3.30-3.20 (m, 4H), 3.02 - 2.80 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 5H), 2.16-2.08 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 2H), 0.96 - 0.79 (m, 2H)
실시예 32: 화합물 32의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000092
실험과정
단계 1: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온(2)의 합성
무수 톨루엔 (200 mL) 내 411.34-브로모부탄니트릴 (10.00g, 67.57mmol) 및 PPh3 (17.72g, 67.57mmol)용액을 질소 기체 하 110°C에서 16시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 여과 후 고체 부분을 petroleum ether (30 mL) 로 세척 후 백색 고체의 표제화합물 (6.5 g, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H)+ = 411.3.
단계 2: tert-부틸 3-(3-시아노프로필리덴)아제티딘-1-카르복실레이트(3)의 합성
THF (20 mL) 내 (3-시아노프로필)트리페닐포스포늄 브로마이드 (2 g, 4.87 mmol)용액에 질소 기체 하 20°C에서 n-BuLi (2.5 M, 2.14 mL)를 적가 후 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 0°C로 온도 하강 후 tert-부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트 (1.67 g, 9.75 mmol)를 첨가 후 질소 기체 하 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 이후 70°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 남아 있음을 확인하였고 원하는 질량이 검출되지 않았다. 추가로 혼합물을 70°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되지 않았다. 혼합물에 NH4Cl 용액 (60 mL)를 붓고 EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 25 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~20% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 100 mL/min)로 정제 후 무색 오일의 표제화합물 (450 mg, 2.02 mmol, 41.53% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 223.3.
단계 3: tert-부틸 3-(4-아미노부틸)아제티딘-1-카르복실레이트(4)의 합성
MeOH (10 mL) 및 NH3·H2O (1 mL) 내 tert-부틸 3-(3-시아노프로필리덴) 아제티딘-1-카르복실레이트 (450 mg, 2.02 mmol)용액에 질소 기체 하 Raney-Ni (100 mg, 1.17 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 기체 하 3차례 퍼지 및 탈기 후 20°C에서 수소 기체 (45 Psi)하 14시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1:1, Rf = 0)로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (350 mg, 1.53 mmol, 75.72% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 229.3.
단계 4: tert-부틸 3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)아제티딘-1-카르복실레이트(6)의 합성
DMSO (5 mL) 내 tert-부틸 3-(4-아미노부틸)아제티딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 1.31 mmol) 및 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (362.92 mg, 1.31 mmol)용액에 20°C에서 DIPEA (339.61 mg, 2.63 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (8 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 녹색 고체의 표제화합물 (450 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+Na)+ = 507.2.
단계 5: 4-((4-(아제티딘-3-일)부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(7)의 합성
DCM (4 mL) 내 tert-부틸 3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸) 아제티딘-1-카르복실레이트 (250 mg, 515.95 μmol)용액에 20°C에서 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 흑색 오일의 표제 화합물 (250 mg, crude, TFA)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+H) + = 385.1.
단계 6: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)아제티딘-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 32)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (200mg, 406.59μmol), DIPEA (324.11mg, 2.51mmol) 및 HATU (190.71mg, 501.55μmol)용액에 20°C에서 4-((4-(아제티딘-3-일)부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (250 mg, 501.55 μmol, TFA)를 첨가 후 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축했다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1, Rf = 0.6)로 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Unisil 3-100 C18 μLtra 150*50 mm*3 um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 44%-74%, 7 min)로 재정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (21.4 mg, 23.19 μmol, 4.62% yield, 93% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 858.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.89 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.17 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.04 - 8.00 (m, 2H), 7.98 - 7.95 (m, 2H), 7.64 (br dd, J = 1.4, 7.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 4H), 7.39 (dt, J = 1.4, 7.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.52 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 3.85 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 5.7, 8.2 Hz, 1H), 3.40 (br dd, J = 5.6, 9.5 Hz, 2H), 3.29 - 3.23 (m, 3H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.61 - 2.52 (m, 3H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.59 - 1.49 (m, 4H), 1.32 - 1.20 (m, 2H).
실시예 33: 화합물 33의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000093
실험과정
단계 1: tert-부틸 2-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 tert-부틸 2-(아미노메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (250 mg, 982.83 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3- 디온 (271.48 mg, 982.83 μmol)용액에 20°C에서 DIPEA (254.05 mg, 1.97 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (8 mL x 4)로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (5 mL x 3)으로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (200 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 511.3
단계 2: tert-부틸 2-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(4)의 합성
Dioxane (2 mL) 내 tert-부틸 2-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (200 mg, 391.71μmol)용액에 20°C에서 HCl/dioxane (4 M, 4 mL)를 첨가 후 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (180 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 411.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일))아미노)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 33)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (100 mg, 203.29 μmol), 4- (((7-아자스피로[3.5]노난-2-일)메틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90.86 mg, 203.29 μmol, HCl) 및 DIPEA (131.37mg, 1.02mmol)용액에 20°C에서 HATU (92.76 mg, 243.95 μmol)를 첨가 후 2 시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)을 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축 후 prep-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1, Rf = 0.6)로 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Unisil 3-100 C18 μLtra 150*50 mm*3 um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 47%-77%, 7 min)로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (10.6 mg, 11.03 μmol, 5.42% yield, 92% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 884.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.08 (br s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.18 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.05 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.93 (m, 2H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 4H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.14 - 7.06 (m, 3H), 7.02 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.46 (br s, 1H), 5.04 (dd, J = 5.1, 12.9 Hz, 1H), 3.64-3.59 (m, 2H), 3.41-3.37 (m, 2H), 3.30-3.29 (m, 4H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 3H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.91-1.81 (m, 2H), 1.54 - 1.40 (m, 4H), 1.39 - 1.29 (m, 2H).
실시예 34: 화합물 34의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000094
실험과정
단계 1: tert-부틸 (E)-3-(3-시아노프로필리덴)피롤리딘-1-카르복실레이트(2)의 합성
100mL 크기의 세 목 둥근 바닥 플라스크의 THF (50 mL) 내 (3-시아노프로필)트리페닐포스포늄 브로마이드 (3g, 7.31mmol) 용액을 질소 기체 하 준비했다. 위 용액에 20°C에서 n-BuLi (2.5 M, 3.22 mL)를 주입 주사기를 통해 적가 후 1시간 동안 교반 하였다. 0°C로 온도 하강 후 tert-부틸 3-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.71g, 14.62mmol, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 질소 기체 하 70°C에서 3시간 동안 교반 하였다. 이후 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1:1, Rf = 0.6)에서 새로운 스팟이 형성됨을 확인하였다. 혼합물에 NH4Cl (50 mL) 용액을 붓고 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 25 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~20% EtOAc/Petroleum ether gradient @ 100 mL/min)로 정제하여 황색 고체의 표제화합물 (160 mg, 677.08 μmol, 9.26% yield)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 237.3.
단계 2: tert-부틸 3-(4-아미노부틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(3)의 합성
MeOH (10 mL) 및 NH3뷝2O (1 mL) 내 tert-부틸 (E)-3-(3-시아노프로필리덴)피롤리딘-1-카르복실레이트 (160 mg, 677.08 μmol)용액에 질소 기체 하 Raney-Ni (50 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 기체 하 3차례 퍼지 및 탈기 후 20°C에서 수소 기체 (45 Psi)하 16시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1:1, Rf = 0)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 황색 고체의 표제화합물 (160 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 243.4.
단계 3: tert-부틸 3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(5)의 합성
DMSO (5 mL) 내 tert-부틸 3-(4-아미노부틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (160 mg, 660.18 μmol), 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (164.12 mg, 594.17 μmol) 및 DIPEA (170.65 mg, 1.32 mmol)용액을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL x 2)로 세척 및 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하여 갈색 고체의 표제화합물 (250 mg, crude)를 수득하였고 다음 반응에 바로 사용되었다. MS(M+Na)+ = 521.3.
단계 4: 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((4-(피롤리딘-3-일)부틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온(6)의 합성
DCM (4 mL) 내 tert-부틸 3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (250 mg, 501.43 μmol)용액에 20°C에서 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 감압 농축 후 흑색 오일의 표제화합물 (250 mg, crude, TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 399.1.
단계 5: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-(2-(3-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 34)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페닐)아세트산 (200 mg, 406.59 μmol), DIPEA (262.74 mg, 2.03 mmol) 및 HATU (185.52 mg, 487.90 μmol)용액에 20°C에서 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((4-(피롤리딘-3-일)부틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (250 mg, 487.83 μmol, TFA)를 첨가 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 brine (10 mL)로 세척 및 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축 후 prep-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1, Rf = 0.6)로 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC (column: Unisil 3-100 C18 μLtra 150*50 mm*3 um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 48%-78%, 7 min)로 재정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (6.8 mg, 7.02 μmol, 1.73% yield, 90% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 872.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.89 (s, 1H), 9.65 (br s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.17 (t, J = 3.4 Hz, 1H), 8.05 - 8.00 (m, 2H), 7.99 - 7.94 (m, 2H), 7.64 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 4H), 7.39 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 3H), 7.01 (dd, J = 1.7, 6.8 Hz, 1H), 6.58 - 6.48 (m, 1H), 5.07 - 5.01 (m, 1H), 3.69 - 3.58 (m, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 3H), 3.20 - 2.94 (m, 2H), 2.93 - 2.72 (m, 2H), 2.63-2.55 (m, 3H), 2.20-1.89 (m, 4H), 1.58-1.50 (m, 2H), 1.40 - 1.27 (m, 4H).
실시예 35: 화합물 35의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000095
실험과정
단계 1: tert-부틸 (4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)카바메이트(3)의 합성
DMSO (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.5g, 1.81mmol) 용액에 DIPEA (467.90mg, 3.62mmol, 630.59μL) 및 tert-부틸(4-아미노부틸)카바메이트 (340.79mg, 1.81mmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 60 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.6 g, 1.12 mmol, 61.90% yield, 83% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 467.1.
단계 2: 4-((4-아미노부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부틸)카바메이트 (0.6g, 1.35mmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 10:1)에서 출발물질이 완전히 소모되었다. 혼합물을 여과 후 고체부분을 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (340 mg, 892.80 μmol, 66.14% yield, 100% purity, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 345.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-((4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 부틸)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 35)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)벤조산 (0.15g, 313.89μmol)용액에 DIPEA (121.70 mg, 941.67 μmol, 164.02 μL) 및 HATU (131.29 mg, 345.28 μmol)를 첨가하였다. 30분 이후 4-((4-아미노부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (95.63 mg, 251.11 μmol)를 첨가하였고 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 반응물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Phenomenex C18 75 x 30 mm x 3 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 42%-72%,7 min)로 정제 및 동결건조 하여 황색 고체의 표제화합물 (68.6 mg, 79.24 μmol, 25.25% yield, 92.9% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 804.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.94 (br s, 1H), 9.75 (br s, 1H), 9.62 (br s, 1H), 8.32 - 8.21 (m, 2H), 8.06 - 7.98 (m, 4H), 7.77 (br s, 4H), 7.65 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 7.43 - 7.35 (m, 1H), 7.29 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 1H), 7.01 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.08 - 5.00 (m, 1H), 3.34- 3.27 (m, 4H), 2.89 - 2.84 (m, 1H), 2.60 - 2.57 (m, 2H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.62 - 1.57 (m, 4H).
실시예 36: 화합물 36의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000096
실험과정
단계 1: tert-부틸 (6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)카바메이트(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.5g, 1.81mmol)용액에 DIPEA (350.92mg, 2.72mmol, 472.94μL) 및 tert-부틸(6-아미노헥실)카바메이트 (430.73mg, 1.99mmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.8 g, 1.37 mmol, 75.76% yield, 81% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 495.3.
단계 2: 4-((6-아미노헥실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(3)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)카바메이트 (0.8g, 1.69mmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1: 2)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 고체의 표제화합물 (0.63 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 373.1.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-((6-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)헥실)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 36)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((4-((4-((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)벤조산 (0.1 g, 209.26 μmol)용액에 HATU (95.48 mg, 251.11 μmol) 및 DIPEA (81.14 mg, 627.78 μmol, 109.35 μL)를 첨가하였다. 30분 이후 4-((6-아미노헥실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (77.01 mg, 188.33 μmol, HCl)를 첨가하였고 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; mobile phase: [물 (FA)-ACN]; B%: 48%-78%,10 min)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (32.5 mg, 36.12 μmol, 17.26% yield, 92.5% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 832.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.94 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.28 - 8.20 (m, 2H), 8.06 - 7.99 (m, 4H), 7.79 - 7.75 (m, 4H), 7.65 (dd, J = 1.5, 7.8 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 2H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.51 (m, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 3.30 - 3.20 (m, 4H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.62 - 2.57 (m, 2H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.60 - 1.49 (m, 4H), 1.39 - 1.32 (m, 4H).
실시예 37: 화합물 37의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000097
실험과정
단계 1: tert-부틸 (8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)옥틸)카바메이트(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.81 mmol) 용액에 DIPEA (350.92 mg, 2.72 mmol, 472.94 μL) 및 tert-부틸 (8-아미노옥틸)카바메이트 (486.59 mg, 1.99 mmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (10 mL)로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하였고 황색 오일의 표제화합물 (900 mg, 1.52 mmol, 83.93% yield, 84.5% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 523.3.
단계 2: 4-((8-아미노옥틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
Dioxane (5 mL) 내 tert-부틸 (8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)옥틸)카바메이트 (0.9 g, 1.80 mmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1: 2)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 오일의 표제화합물 (1 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 401.2.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-((8-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 옥틸)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드 (화합물 37)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((8-아미노옥틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 228.87 μmol, HCl) 및 4-((4-((4) -((2-클로로페닐)카바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)벤조산 (119.33 mg, 249.71 μmol)용액에 EDCI (71.80 mg, 374.56 μmol), HOBt (50.61 mg, 374.56 μmol) 및 DIPEA (96.82 mg, 749.12 μmol, 130.48 μL)를 첨가 후 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 메인 피크가 검출되었다. 혼합물을 셀라이트 패드로 여과 후 여액을 prep-HPLC (column: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10um;mobile phase: [물 (FA) -ACN];B%: 57%-87%, 10 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (66.7 mg, 72.10 μmol, 28.87% yield, 93% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 860.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 8.28 - 8.17 (m, 2H), 8.07 - 7.96 (m, 4H), 7.80 - 7.73 (m, 4H), 7.68 - 7.63 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.51 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.11 - 4.98 (m, 1H), 3.29 - 3.19 (m, 4H), 2.95 - 2.81 (m, 1H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.06 - 1.96 (m, 1H), 1.59 - 1.47 (m, 4H), 1.35 - 1.28 (m, 8H).
실시예 38: 화합물 38의 합성
합성계획:
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000098
실험과정
단계 1: tert-부틸 (10-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)데실)카바메이트(2)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.81 mmol)용액에 DIPEA (350.92 mg, 2.72mmol, 472.94μL) 및 tert-부틸(10-아미노데실)카바메이트 (542.45 mg, 1.99 mmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 64%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (50 mL)로 세척 후 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluent of 0~40% petroleum ether: EtOAc gradient @ 80 mL/min)로 정제하여 황색 오일의 표제화합물 (0.8 g, 1.24 mmol, 68.55% yield, 82% purity)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 551.3.
단계 2: 4-((10-아미노데실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(3)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (10-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)데실)카바메이트 (0.8 g, 1.51 mmol)용액에 HCl/dioxane (4 M, 10 mL)를 첨가 후 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (petroleum ether: EtOAc = 1: 2)에서 출발 물질이 완전히 사라짐을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축 후 황색 오일의 표제화합물 (1.1 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 429.3.
단계 3: N-(2-클로로페닐)-4-((2-((4-((10-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노) 데실)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)벤즈아미드(화합물 38)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((4-((4-((2-클로로페닐)카르바모일)페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)벤조산 (0.1 g, 209.26 μmol)용액에 HATU (95.48 mg, 251.11 μmol) 및 DIPEA (81.14 mg, 627.78 μmol, 109.35 μL)를 첨가하였다. 30분 후 4-((10-아미노데실)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (87.57 mg, 188.33 μmol, HCl)를 첨가하였고 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 54%의 원하는 질량이 검출되었다. 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 brine (20 mL)으로 세척 후 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC (column: Phenomenex Luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; mobile phase: [물 (FA) - ACN]; B%: 60% - 90%, 10 min)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 표제화합물 (40.3 mg, 40.19 μmol, 19.21% yield, 90.7% purity)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 888.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 8.28 - 8.19 (m, 2H), 8.08 - 7.99 (m, 4H), 7.80 - 7.72 (m, 4H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.61 - 7.53 (m, 2H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.07 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.55 - 6.49 (m, 1H), 5.05 (dd, J = 5.2, 12.9 Hz, 1H), 3.28 - 3.18 (m, 4H), 2.91 - 2.85 (m, 1H), 2.59- 2.57 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 4H), 1.34- 1.24 (m, 12H).
비교예 1: Alisertib 기반의 PROTAC
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000099
비교예 2: Alisertib 기반의 PROTAC
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000100
비교예 3: Alisertib 기반의 PROTAC
Figure PCTKR2022009074-appb-img-000101
<실험예>
1. HeLa 세포주의 배양
MDA-MB-231 세포주를 한국세포주은행에서 구입하였다. 배양 세포의 계대(Passage)를 P50 내외로 유지하였다.
세포 계수를 위해, Thermo사의 세포 계수기(cell counter)(Catalog # AMQAX1000) 및 0.4% 트립판 블루(Trypan blue) 용액을 사용하였다.
세포 배양을 위해, RPMI(Gibco, Cat. No. 22400-089; Lot. No. 2323633), FBS(Gibco, Cat. No. 16000044; Lot. No. 2454168P), 페니실린/스트렙토마이신(PS)(Gibco, Cat. No. 15140-122; Lot. No. 2321150), 100mm 배양플레이트(SPL, Cat. No. 20100), 6 웰 배양 플레이트(SPL, Cat. No. 30006), PBS pH7.4(Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2380329), 카운팅 챔버(Hematocytometer)(Hirschmann, Cat. No. 8100204), 및 0.4% 트립판 블루 용액(DYNEBIO, Cat. No. CBT3710; Lot. No. 20211201)를 사용하였다.
2. 본 발명의 화합물 처리
12 웰 플레이트(SPL사)의 각 웰마다 3×105개의 세포를 시딩하였고, 배양 배지 부피를 총 1mL로 하여 세포를 배양하였다.
화합물은 DMSO(Sigma, Cat. No. D2438; Lot. No. RNBK1809)에 완전 용해시켜 실험에 사용하였고, 각 웰에 처리되는 DMSO의 농도는 0.1%으로 통일하였으며, 세포 내 추가하는 방식으로 처리하였다. 각 웰에 처리된 농도는 Blot image에 표시된 바와 같다.
마지막으로 화합물 처리 24시간 후 PBS pH7.4(Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2380329) 0.5ml로 세척 후, TrypLE Express(Gibco, Cat. No. 12605-010; Lot. No. 2193192) 500ul 처리하여 세포를 분리하였다. 분리된 세포는 RPMI(Gibco, Cat. No. 22400-089; Lot. No. 2323633) 5ml을 넣어 중화한다. 원심분리기를 이용하여 세포와 배지를 분리 후 세포만을 보관하여 추후 Western blot 실험에 사용하였다.
3. 웨스턴 블롯팅
SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯팅을 위해, RIPA 용해 버퍼(ROCKLAND, Cat. no. MB-030-0050; Lot. no. 46352), 100X 프로테아제 억제제 칵테일(Quartett, Cat. No. PPI1015; Lot no. PCO50039472), Pierce™ BCA protein assay kit(ThermoScientific, Cat. No. 23225; Lot no. UJ290659), 알부민 standard(ThermoScientific, Cat. No. 23209; Lot no. UB269561), 4-15 % Mini-PROTEAN TGX stain-free gel(Bio-rad, Cat. No. 4561086; Lot no. 64454521), 10X Tris/Glycine/SDS buffer(Bio-rad, Cat. No. 1610772; Lot no. 64442350); Tris/Glycine buffer (Bio-rad, Cat. No. 1610771; Lot no. 64442352), 10X TBS(Bio-rad, Cat. No. 1706435; Lot no. 64446921), 10% Tween 20 용액(Cat. No. 1610781; Lot no. 64399445), Color protein standard broad range(Biolabs, Cat. P7719S; Lot no. 10118359), 4X　Laemmli　sample buffer(Bio-rad, Cat. No. 1610747; Lot no. 64377840), Skim milk(BD, Cat. No. 232100; Lot no.8346795), 1M 소듐 아자이드 용액(Sigma-Aldrich, Cat. No. S2002-500G; Lot no.MKCG9565), α-Rabbit pAb to Ms IgG(abcam, Cat. No. ab97046; Lot no. GR3329375-5), α-Goat pAb to Rb IgG(CST, Cat. no. 7074S; Lot no. 30), α-AURKA(Abcam, Cat. No. ab1287; Lot no. GR3338838-6), α-AURKB(Abcam, Cat. No. ab2254; Lot no. GR3396402-2), α-GAPDH(Abcam, Cat. No. ab8245; Lot no. GR3401390-1), ECL™ Prime western blotting reagents(Cytiva, Cat. No. RPN2232; Lot no. 17246828), Ponceau S 용액(Sigma-Aldrich, Cat. No. P7170; Lot no. SLBV4112), Difco™ Skim milk(BD, Cat. No. 232100; Lot no. 232100), Acrylamide gel tank(Bio-Rad, Cat. No. 1658039), PowerPac HC(Bio-Rad, Cat. No. 043BR80483)을 사용하였다.
세포 용해(lysis)를 위해, 용해 버퍼(lysis buffer)를 첨가하고 세포 파쇄물(debris)을 제거하여 세포 용해물(lysate)을 얻었다. 구체적으로, 세포에 프로테아제 억제제가 함유된 35 μL의 1X RIPA 버퍼를 처리하고 얼음 위에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 4 ℃ 15,000 rpm에서 20 분 동안 원심분리하여 세포 용해물을 얻었다.
그 다음, BCA 어세이를 이용하여 표준 커브를 구하고 이를 대입하여 용해물 내 단백질 질량을 정량하였다. 혼합물에는 20 μL의 표준 또는 샘플 용액, 200 μL의 BCA 또는 브래드포드 용액을 사용하여 37 ℃에서 30 분 동안 인큐베이션하였고, 562 nm 흡광도에서 측정하였다. 샘플은 각 웰당 15μg이 되도록 4X 샘플 버퍼를 넣어 준비하였다.
4-15 % Mini-PROTEAN TGX stain-free gel (15　well)에 120 V로 100 분의 러닝 타임을 설정하여 SDS-PAGE를 수행하였다. Nitrocellulose membrane에 트렌스퍼버퍼(10X Tris/Gycine buffer : Methanol : DDW의 비율을 1: 2: 7로 혼합하여 제조)을 이용하여 트랜스퍼하였다. Ponceau S 용액을 사용하여 염색한 뒤, Skim milk(BD)로 1 시간 동안 블로킹하였다. 0.05% Tween20를 포함한 1X TBS로 세척한 후, 1차 항체로서 1X TBS-T 내 항-AURKA(Abcam) 항체(1:1000), 항-AURKB(Abcam) 항체(1:1000), 항-GAPDH(Abcam) 항체(1:5,000)와 함께 4 ℃에서 16 시간 동안 반응시켰다. 0.05% Tween20를 포함한 1X TBS로 10 분 동안 3회 세척한 후, 2차 항체로서 1X TBS-T 내 항-마우스 항체(abcam)(1:5,000), 항-레빗 항체(CST)와 함께 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 그 다음, 0.05% Tween 20을 포함한 1X TBS로 10 분 동안 3회 세척한 후, ECL 워킹 용액(1:1)으로 검출하였다.
결과 분석을 위해, 이미지 애널라이저(GE)를 사용하여 최종 블롯 데이터를 얻었다.
4. 본 발명 화합물의 AURKA 분해능 확인
상술한 실험 결과를 도 1 내지 3에 나타내었다.
도 1a 내지 1h는 실시예 화합물들의 농도가 0.1 μM 및 1 μM인 경우의 AURKA 분해능 및 AURKA 선택성(selectivity)을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다.
도 2a 내지 도 2e는 실시예 화합물들의 농도가 6 nM 및 30 nM의 저농도인 경우의 AURKA 분해능을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다.
도 3a 내지 3c는 비교예 1 내지 3의 Alisertib 기반의 PROTAC의 농도가 0.1 μM 및 1 μM인 경우의 AURKA 분해능을 나타낸 웨스턴 블랏 이미지이다.
도 1a 내지 1h를 참조하면, 실시예 화합물들의 농도가 0.1 μM인 경우 80% 이상의 AURKA 단백질 분해 활성을 확인할 수 있고, 특히 화합물 14는 95% 이상의 우수한 AURKA 분해능을 나타냄을 확인할 수 있다. 또한, 실시예 화합물들의 농도가 1 μM인 경우 90% 이상의 AURKA 단백질 분해 활성을 확인할 수 있다.
또한, 도 2a 내지 도 2e를 참조하면, 6 nM(0.006 μM) 및 30 nM (0.03 μM)의 저농도에서도 90% 이상의 AURKA 단백질 분해 활성을 나타냄을 확인할 수 있다.
반면, 도 3a 내지 3c를 참조하면, 비교예 1 내지 3의 Alisertib 기반 PROTAC 화합물은 30% 이하의 AURKA 단백질 분해 활성을 나타냄을 확인할 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 실시예 화합물들은 종래 Alisertib 기반 PROTAC에 비하여 현저히 우수한 AURKA 단백질 분해 활성 및 AURKA 분해 선택성을 나타냄을 확인할 수 있다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 하기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 Ⅰ]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000102
    상기 화학식 Ⅰ에서,
    ULM은 하기 화학식 A 또는 화학식 B로 표시되는 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티이고,
    [화학식 A]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000103
    {상기 화학식 A에서,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000104
    는
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000105
    ,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000106
    ,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000107
    ,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000108
    ,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000109
    및
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000110
    로 구성된 군에서 선택된 고리이고,
    X1은 단일결합, -CH2-, -NH-, -O-, -CH2CH2-, -CC- -CO-, -COO-, -NHCO- 또는 -CONH-이고;
    X2는 -CH2-, -CH(C1-4알킬)-, -NH-, -N(C1-4알킬)-, -O-, -CO-, -CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH(C1-4알킬)-, -N=CH-, -N=C(C1-4알킬)- 또는 -N=N-이고,
    X3은 수소이고;
    X4는 수소, 할로겐, C1-6알킬, CN, NH2, NO2, OH, COH, COOH 또는 CF3임.}
    [화학식 B]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000111
    {상기 화학식 B에서,
    n은 1 내지 3의 정수이고,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000112
    는 5원 내지 6원 사이클로알킬, 페닐, 5원 내지 6원 헤테로사이클로알킬 또는 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리이고,
    Y1은 수소 또는 C1-3알킬임}
    PTM은 하기 화학식 Ⅱ로 표시되는 AURKA 결합 모이어티이며,
    [화학식 Ⅱ]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000113
    {상기 화학식 Ⅱ에서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, -NO2, -CN, -OH, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-6알콕시, C1-6티오알콕시, C3-6시클로알킬, C3-6헤테로시클로알킬, C3-6헤테로아릴, 페닐 또는 할로겐이고,
    R3는 C1-6알킬렌, -O-, -S-, -NH-, 또는 직접결합이며,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000114
    는 4원 내지 10원 사이클로알킬, 페닐, 4원 내지 10원 헤테로사이클로알킬, 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리 또는 직접결합이다.}
    Linker는 ULM과 PTM을 화학적으로 연결하는 기이고, 하기 화학식 L로 표시됨:
    [화학식 L]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000115
    상기 화학식 L에서,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000116
    및
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000117
    는 결합이고,
    LULM은 이에 연결된
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000118
    를 통해 ULM 모이어티와 결합하며,
    LPTM은 이에 연결된
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000119
    를 통해 PTM 모이어티와 결합하며,
    LULM 및 LPTM은 각각 독립적으로 단일결합, -CH2-, -NH-, -O-, -CO-, -OCO-, -CONH-, -NHCO-, -O(CH)nCONH-{여기서, n은 1 내지 5의 정수임}, 또는 직접결합이며,
    LINT는 C1-10알킬렌, -CH2-, -NH-, -O(CH)nCONH-{여기서, n은 1 내지 5의 정수임}, -(CH2)lO(CH2)mO(CH2)q-{여기서, l, m 및 q는 독립적으로 1 내지 5의 정수임}, -CHCH-, -CC-, -CH2CH2O-, -OCH2CH2-, -CH2CH2S-, -SCH2CH2-, -COO-, -CONH-, -NHCO-,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000120
    및 직접결합으로 구성된 군에서 선택되며{여기서,
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000121
    은 아릴, 헤테로아릴, 3 내지 10원 사이클로알킬, 4원 내지 10원 헤테로사이클로알킬, 4 내지 10원 사이클로알케닐, 및 4 내지 10원 헤테로사이클로알케닐로 구성된 군에서 선택된 고리임},
    LULM, LPTM 및 LINT는 각각 독립적으로 1 이상의 C1-6알킬, C3-8사이클로알킬, C3-8헤테로사이클로알킬, 할로겐, 히드록시, 아민, 니트로, 시아노 또는 C1-8할로알킬로 치환될 수 있으며,
    p는 1 내지 20의 정수이다.
  2. 제1항에 있어서,
    ULM은 하기 화학식 A-1로 표시되는 E3 유비퀴틴 라이게이즈 리간드인 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 A-1]
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000122
    상기 화학식 A-1에서,
    X2는 -CH2-, -CH(C1-4알킬)-, -CO- 또는 -N=N-이고,
    X3은 수소이다.
  3. 제2항에 있어서,
    화학식 A-1은 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000123
    .
  4. 제1항에 있어서,
    화학식 B는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000124
  5. 제1항에 있어서,
    화학식 Ⅱ는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000125
    상기 모이어티로 구성된 군에서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, -NO2, -CN, -OH, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-6알콕시, C1-6티오알콕시, C3-6시클로알킬, C3-6헤테로시클로알킬, C3-6헤테로아릴, 페닐 또는 할로겐이고,
    R3는 C1-6알킬렌, -O-, -S-, -NH-, 또는 직접결합이다.
  6. 제5항에 있어서, 화학식 Ⅱ는 하기 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000126
  7. 제1항에 있어서,
    하기 표에 표시된 화합물 1 내지 38로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000127
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000128
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000129
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000130
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000131
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000132
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000133
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000134
    Figure PCTKR2022009074-appb-img-000135
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물은 AURKA 단백질의 선택적 분해를 유도하는 것인, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 골수섬유증, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 골육종, 배럿 식도, 대장 선종 및 용종, 유방 섬유선종 및 낭종, 단세포 감마글로불린병증 (MGUS), 단클론 림프구증가증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 AURKA 관련 암인, 약학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암 예방 또는 치료 방법.
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