WO2022265380A1 - 히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물 - Google Patents

히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물 Download PDF

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WO2022265380A1
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hyaluronic acid
diglycidyl ether
composition
crosslinked product
gel
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임천수
양종철
이창훈
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Definitions

  • the present disclosure relates to a crosslinked hyaluronic acid and a filler composition comprising the same, and more specifically, to a crosslinked hyaluronic acid having high cohesion and adhesive strength and reduced swelling, and a filler composition comprising the same.
  • Hyaluronic acid is a linear polysaccharide that generally has a high average molecular weight.
  • Hyaluronic acid is a negatively charged polymer of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine.
  • Hyaluronic acid is found primarily in the extracellular matrix and intercellular matrix, but is also present intracellularly.
  • hyaluronic acid is a substance that already exists in the body, it has biocompatibility and also has characteristics that make it easy to prepare a crosslinked hyaluronic acid hydrogel using a crosslinking agent or the like. For this reason, filler products using cross-linked hyaluronic acid have been widely used worldwide since Galderma first released Restylane products in the 1990s.
  • the hyaluronic acid gel currently used as a filler is prepared by chemically crosslinking natural hyaluronic acid into a network through a crosslinking reaction. Natural hyaluronic acid and certain partially cross-linked hyaluronic acids absorb water until they are completely dissolved in water, but cross-linked hyaluronic acid gels typically absorb a certain amount of water until they are saturated, and thus have a limited degree of swelling. degree).
  • filler products using cross-linked hyaluronic acid gel can be classified as having a monophasic or biphasic phase.
  • the single-phase cross-linked hyaluronic acid gel has a high viscous modulus and a low elastic modulus.
  • the two-phase cross-linked hyaluronic acid gel has a low viscous modulus and a high elastic modulus.
  • a single-phase cross-linked hyaluronic acid gel and a two-phase cross-linked hyaluronic acid gel have different properties in vivo. For example, single-phase cross-linked hyaluronic acid gels with a low elastic modulus and a high viscous modulus have excellent cohesion and are unlikely to escape from the injected site.
  • the single-phase crosslinked hyaluronic acid gel generally has a disadvantage in that the volume increases compared to the previously injected volume without maintaining the original shape injected at the initial stage of injection when injected into the body.
  • the isomeric cross-linked hyaluronic acid gel which has a high elastic modulus but a low viscous modulus, can maintain the injected form for a long period of time with a small volume change, but has the characteristics of being easily separated from the injected site or not evenly distributed at the injected site.
  • swelling may occur after the hyaluronic acid filler procedure, which refers to a phenomenon in which the hyaluronic acid gel component injected into the body absorbs bodily fluid from the tissue surrounding the injection site and the injected site and surrounding areas swell.
  • This swelling phenomenon is one of the common side effects of the filler procedure in that the injection site is swollen, and it is preferable in that the viscosity, elasticity, and strength of the hyaluronic acid gel may decrease due to absorbed water, thereby reducing the injection effect of the filler. It is a phenomenon that has not been
  • One object of the present disclosure is to provide a hyaluronic acid crosslinked product having a critical strain of 10% to 100% and a swelling degree of 1% to 100%.
  • Another object of the present disclosure is to provide a filler composition comprising the hyaluronic acid crosslinked product.
  • One aspect of the present disclosure provides a hyaluronic acid crosslinked product having a critical strain of 10% to 100% and a swelling degree of 1% to 100%.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have an average particle size ranging from 50 um to 150 um.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have an elastic modulus (G') of 400 Pa to 2,000 Pa.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have a viscosity modulus (G") of 100 Pa to 600 Pa.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have a compressive force of 15 N ⁇ s to 100 N ⁇ s.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have an injection force of 1 N to 50 N.
  • the hyaluronic acid crosslinker may be crosslinked with a crosslinker having a bifunctional epoxy group.
  • the crosslinking agent having the bifunctional epoxy group is 1,4-butanediol diglycidyl ether, poly(ethylene glycol) diglycidyl ether, poly(propylene glycol) diglycidyl ether, poly(tetramethylene glycol) diglycidyl Dyl ether, polyglycerol polyglycidyl ether, glycerol diglycidyl ether, triethylene diglycidyl ether, trimethylolpropane triglycidyl ether, ethylene diglycidyl ether, neopentyl glycol diglycidyl ether, And it may be at least one selected from the group consisting of 1,6-hexanediol diglycidyl ether.
  • Another aspect of the present disclosure provides a filler composition comprising the hyaluronic acid crosslinked product.
  • the concentration of the hyaluronic acid crosslinker in the filler composition may be 10 mg/mL to 30 mg/mL.
  • the filler composition may not further comprise uncrosslinked hyaluronic acid.
  • the filler composition may further include a local anesthetic.
  • the filler composition may be filled into a syringe.
  • the filler composition may be used for one or more purposes selected from the group consisting of facial plastic surgery, wrinkle improvement, facial contouring, breast augmentation, breast augmentation, penis enlargement, glans enlargement, urinary incontinence treatment, and arthritis treatment.
  • the crosslinked hyaluronic acid gel according to the present disclosure has high cohesion and adhesive strength, it is characterized in that it is maintained intact without separation from the injection site and at the same time, the swelling phenomenon after injection is reduced.
  • FIG. 1 is a view showing the volume of the injected hyaluronic acid gel according to the time elapsed after injection after a cross-linked hyaluronic acid sample was injected into a hairless mouse.
  • the present disclosure generally provides a hyaluronic acid crosslinked product having a critical strain of 10% to 100% and a swelling degree of 1% to 100%.
  • hyaluronic acid refers to hyaluronan, hyaluronate, or a pharmaceutically acceptable salt thereof having the formula 1:
  • n is the number of repeating units.
  • the hyaluronic acid may be of any origin. Hyaluronic acid may be of animal or non-animal origin, for example.
  • the hyaluronic acid may also be of bacterial origin.
  • the bacteria may be from the genus Streptococcus .
  • the bacteria of the genus Streptococcus may be Streptococcus equi , S. pyogenes or S. zooepidemicus .
  • the hyaluronic acid may also be purchased commercially.
  • the molecular weight of the hyaluronic acid may be 1,000,000 Da to 2,500,000 Da, for example, 1,000,000 Da to 2,000,000 Da, 1,500,000 Da to 2,500,000 Da, or 1,500,000 Da to 2,000,000 Da.
  • the intrinsic viscosity of the hyaluronic acid is 1.0 m 3 /kg to 5.0 m 3 /kg, for example, 1.5 m 3 /kg to 4.0 m 3 /kg, 2.5 m 3 /kg to 4.0 m 3 /kg, 2.5 m 3 /kg to 3.5 m 3 /kg, or 2.5 m 3 /kg to 3.0 m 3 /kg.
  • hyaluronic acid crosslinked product refers to crosslinked hyaluronic acid
  • hyaluronic acid crosslinked product crosslinked hyaluronic acid
  • crosslinked hyaluronic acid crosslinked hyaluronic acid
  • swelling refers to a phenomenon in which the cross-linked hyaluronic acid gel absorbs water and swells.
  • the term swelling degree refers to the ratio of the weight of the cross-linked hyaluronic acid gel completely swollen to that before swelling when the cross-linked hyaluronic acid is immersed in water.
  • the degree of swelling can be obtained, for example, according to the calculation formula described in the Measurement Methods section below.
  • critical strain is a measurement index for confirming a strain value required to cause destruction of the internal structure of a material including linear viscoelastic properties when a shear strain is applied to the material.
  • a crosslinked hyaluronic acid gel is composed of a crosslinked hyaluronic acid gel or a crosslinked hyaluronic acid gel and a solution, and various internal interaction forces such as hydrogen bonds, covalent bonds, van der Waals bonds, and physical bonds exist inside them. exist. Internal interactions can be classified as gel-gel, gel-solution, or solution-solution interactions.
  • the molecular fluidity is higher than that of a gel, and the contact area is smaller than that of a gel, so the size of the interaction is It can be thought of as gel-gel > gel-solution > solution-solution.
  • gel-gel > gel-solution > solution-solution In the case of a single phase in which only a gel-gel form exists, it can be expected that the internal structure is destroyed at a higher strain rate because it has a relatively high interaction.
  • the gel and the solution exist together since the gel and the solution exist together, the gel-gel interaction is reduced, whereas the total of the interactions of the internal structure is larger than that of the single phase because the gel-solution interaction and the solution-solution interaction are larger. Since it is expected to be smaller when strained, it can be expected that the internal structure will fail at lower strains.
  • the hyaluronic acid crosslinked product according to one aspect of the present disclosure exhibits unexpected properties in that it has a high critical strain rate like conventional single-phase hyaluronic acid fillers, but has a low degree of swelling.
  • the hyaluronic acid crosslinked product of the present disclosure has high cohesive force and high adhesive force similar to conventional single-phase fillers, so it does not easily separate from the injection site and can maintain the injected shape for a long period of time due to its high elastic modulus (G'). It is characterized by having
  • a hyaluronic acid crosslinked product according to the present disclosure has (i) a critical strain of 10% to 100%, such as 10% to 50%, 10% to 30%, or 10% to 40%, such as 10% to 50%. 50%, for example 10% to 30%, with a swelling degree of 1% to 100%, for example 1% to 90%, 1% to 80%, 1% to 70%, 1% to 60%, 1% to 50%, 10% to 60%, 20% to 60%, 30% to 60%, 40% to 60%, 40% to 50%, and 50% to 60%.
  • a critical strain of 10% to 100% such as 10% to 50%, 10% to 30%, or 10% to 40%, such as 10% to 50%.
  • 50% for example 10% to 30%
  • a swelling degree of 1% to 100% for example 1% to 90%, 1% to 80%, 1% to 70%, 1% to 60%, 1% to 50%, 10% to 60%, 20% to 60%, 30% to 60%, 40% to 60%, 40% to 50%, and 50% to 60%.
  • the hyaluronic acid crosslinked product (ii) has an average particle size (um) of 50 um to 150 um, for example, 60 um to 150 um, 70 um to 150 um, 80 um to 150 um, 90 um to 150 um, 60 um to 140 um, 60 um to 130 um, 60 um to 120 um, and 60 um to 100 um.
  • the hyaluronic acid crosslinked product (iii) may have an elastic modulus (G′) of 400 Pa to 2,000 Pa, for example, 500 Pa to 1,900 Pa, 600 Pa to 1,800 Pa, or 600 Pa to 1,700 Pa.
  • G′ elastic modulus
  • the hyaluronic acid crosslinked product may have (iv) a viscosity coefficient (G") of 100 Pa to 600 Pa, for example, 120 Pa to 500 Pa, 150 Pa to 450 Pa, or 160 Pa to 350 Pa.
  • G viscosity coefficient
  • the hyaluronic acid crosslinked product (v) has a compression of 15 N ⁇ s to 100 N ⁇ s, for example, 20 N ⁇ s to 90 N ⁇ s, 25 N ⁇ s to 80 N ⁇ s, or 30 N ⁇ s N ⁇ s to 75 N ⁇ s.
  • the hyaluronic acid crosslinked product (vi) may have an injection force of 1 N to 50 N, for example, 3 N to 45 N, 4 N to 40 N, or 7 N to 35 N.
  • the hyaluronic acid crosslinked product may satisfy one, two, three, four or five of the requirements (ii) to (vi) while satisfying the requirement (i).
  • the hyaluronic acid crosslinked product according to the present disclosure may be, for example, prepared by a process comprising the following steps, but is not limited thereto:
  • steps (b) to (d) in the above process steps may be changed or may be repeated two or more times.
  • the milling step may be additionally carried out between steps (a) and (b) in addition to step (c), or may be carried out only in step (c), or steps (a) and (b) instead of step (c). (b) can only be practiced.
  • steps (a) to (d) may be further included, for example, adding an anesthetic agent as described below, and/or performing high-temperature steam sterilization.
  • adding an anesthetic may be added between steps (b) and (c), or between steps (c) and (d).
  • the step of performing high-temperature steam sterilization may be added between steps (c) and (d) above or after step (d).
  • the aqueous alkali solution may be NaOH, KOH, preferably NaOH aqueous solution, but is not limited thereto.
  • the concentration is 0.1% (w/w) to 2.5% (w/w), such as 0.1% (w/w) to 2.0% (w/w), or 0.5% (w/w). ) to 1.0% (w/w).
  • the concentration of hyaluronic acid dissolved in the aqueous alkali solution is 10% (w / w) to 25% (w / w), for example, 10% (w / w) to 20% (w / w) or 10% (w/w) to 15% (w/w).
  • the crosslinking agent may have a multifunctional group.
  • the crosslinking agent may have a bifunctional epoxy group.
  • the crosslinking agent having the bifunctional epoxy group is 1,4-butanediol diglycidyl ether, poly(ethylene glycol) diglycidyl ether, poly(propylene glycol) diglycidyl ether, poly(tetramethylene glycol) diglycidyl Dyl ether, polyglycerol polyglycidyl ether, glycerol diglycidyl ether, triethylene diglycidyl ether, trimethylolpropane triglycidyl ether, ethylene diglycidyl ether, neopentyl glycol diglycidyl ether, And it may be at least one selected from the group consisting of 1,6-hexanediol diglycidyl ether.
  • the crosslinking reaction may be at room temperature or higher, for example, 20 ° C to 40 ° C, 25 ° C to 40 ° C, or 30 ° C to 40 ° C, and the reaction time is 24 hours or less, for example, 10 to 24 hours, It may be 15 to 24 hours, or 15 to 20 hours.
  • the dialysis is carried out by mixing the crosslinked gel with a dialysis solution containing a predetermined buffer solution such as NaCl solution, KOH solution, PBS solution, etc. in a dialysis membrane or dialysis vessel, dialysis, washing, and dialysis.
  • a dialysis solution containing a predetermined buffer solution such as NaCl solution, KOH solution, PBS solution, etc.
  • a dialysis membrane or dialysis vessel alysis membrane or dialysis vessel
  • dialysis, washing, and dialysis Refers to the step of swelling the gel.
  • This series of dialysis, washing and expansion steps may be repeated two or more times.
  • unreacted cross-linking agent may be removed and/or pH and/or osmotic pressure of the cross-linked gel may be adjusted.
  • the grinding is performed using a grinder at 1,000 to 10,000 rpm, for example, 2,000 to 9,000 rpm, 3,000 to 8,000 rpm, 4,000 to 7,000 rpm, 5,000 to 9,000 rpm, or 5,000 to 8,000 rpm for 60 seconds or more. , For example, it may be performed for 60 seconds to 100 seconds, 70 seconds to 120 seconds, 80 seconds to 140 seconds, 90 seconds to 160 seconds, 100 seconds to 180 seconds, 120 seconds to 240 seconds.
  • Another aspect provides a filler composition comprising the above hyaluronic acid crosslinked product.
  • the final concentration of the crosslinked hyaluronic acid gel may be 10 mg/ml or more, 15 mg/ml or more, 18 mg/ml or more, or 19 mg/ml or more.
  • the concentration of the cross-linked hyaluronic acid is 10 mg/ml to 30 mg/ml, 12 mg/ml to 28 mg/ml, 14 mg/ml to 26 mg/ml, 16 mg/ml to 24 mg/ml ml, 16 mg/ml to 20 mg/ml, or about 18 mg/ml.
  • the composition may not additionally include uncrosslinked hyaluronic acid.
  • "Additionally including" uncrosslinked hyaluronic acid means artificially adding more uncrosslinked hyaluronic acid to the crosslinked hyaluronic acid, and not additionally including uncrosslinked hyaluronic acid means crosslinking hyaluronic acid. It means not artificially adding more uncrosslinked hyaluronic acid to the body.
  • the composition may further contain an anesthetic.
  • the anesthetic may be a local anesthetic.
  • the anesthetic agent is ambucaine, amolanone, amylocaine, benoxinate, benzocaine, betoxycaine, biphenamine, Bupivacaine, butacaine, butamben, butanilicaine, butethamine, butoxycaine, carticaine, chloroprocaine ), cocaethylene, cocaine, cyclomethycaine, dibucaine, dimethysoquin, dimethocaine, diperodon, cyclonine, ecgonidine, ecgonine, ethyl chloride, etidocaine, beta-eucaine, euprocin, phenalcomine, formocaine, hexylcaine, hydroxytetracaine, isobutyl p-aminobenzoate, leucinocaine mesylate, leucinocaine mesylate le
  • the composition may not contain a pharmaceutically active substance selected from the group consisting of proteins, hyaluronic acid and other glycosaminoglycans, and hydroxypropyl methyl cellulose.
  • the composition may be filled in a syringe.
  • composition may be used for tissue repair in a subject.
  • the subject may be a mammal.
  • the mammal may be a human, dog, cat, cow, pig, rat, or sheep.
  • the composition may be used for one or more purposes selected from the group consisting of facial plastic surgery, wrinkle improvement, facial contouring, breast augmentation, breast augmentation, penis enlargement, glans enlargement, urinary incontinence treatment, and arthritis treatment.
  • the composition may further include pharmaceutically acceptable carriers, excipients and diluents.
  • the carrier may include, for example, water or a buffer.
  • the buffer may be such that the pH of the solution hardly changes with the addition of the components of the composition.
  • the composition may be an aqueous liquid composition.
  • the composition may be an aqueous buffered composition.
  • the pH of the aqueous buffered composition may be in the physiological pH range, for example between about 6.0 and 8.0. The pH can be adjusted by adding a suitable acid or base such as HCl, Na 2 CO 3 or NaOH.
  • the aqueous buffered composition may include phosphate buffered saline (PBS).
  • the aqueous buffered composition may include tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris).
  • Tris tris(hydroxymethyl)aminomethane
  • additional solutes such as sodium chloride, calcium chloride, and potassium chloride, may be added to adjust the osmolarity and ion concentration.
  • the composition may be sterile.
  • the composition may be contained in a container.
  • the container may be a syringe.
  • the composition may be pre-filled into a syringe before use.
  • the composition may be administered with a pre-filled syringe.
  • the device may be a pre-filled syringe.
  • the device may be sterile.
  • kits comprising the pre-filled syringe described above.
  • the kit may include instructions including information on administering the composition.
  • Another aspect provides a method of filling tissue of a subject comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a composition described above.
  • the method may be for augmentation, repair or consolidation of a subject's tissue or filling of a body cavity. Volume augmentation in this respect may be a long lasting increase in volume by a component forming the filler composition. Components forming the filler composition may not undergo rapid diffusion.
  • “composition” and “individual” are as described above.
  • the administration may be administered within the skin or joint cavity, such as in the dermis.
  • the administration may be administration through a syringe, eg, a pre-filled syringe into the skin, eg, into the dermis.
  • the administration may be administration of 0.1 to 50ml, 0.5 to 30ml, 0.5 to 20ml, 0.5 to 15ml, or 0.8 to 12ml per time.
  • the administration comprises administering the composition once per period of 3 months or longer, once for 4 months or longer, once for 5 months or longer, once for 6 months or longer, once for 12 months or longer, or It may be administration once per period of 18 months or more.
  • Critical strain was measured by strain-sweep test. Specifically, a DHR-2 rheometer instrument (TA Instruments) was driven. In the strain-sweep test, calibration was performed by setting the instrument temperature to 25° C. and mounting a 25 mm diameter geometry. An appropriate amount of sample was loaded centrally between the upper and lower geometries of the Peltier plates of the instrument. A sufficient amount of the sample was over-loaded so as not to be insufficient, and an appropriate amount was loaded so that the residue outside the lower area of the geometry was not smeared on the side and upper surfaces of the geometry. After the geometry was lowered to the set distance, it was confirmed that the sample was well filled under the geometry, and then the remaining sample outside the geometry was removed by trimming.
  • strain % strain %
  • elastic modulus Storage Modulus, Pa
  • Transform function converts strain % (strain (%)) value into log (strain (%)), and in order to easily check the minimum strain % (Strain, %) from the obtained value, the program’s built-in Smooth function logs log After calculating the smooth graph of the change in the elastic modulus (Storage Modulus, Pa) for the (strain (%)) value, the strain % (strain (%)) is the value before taking log (strain (%)) with the Transform function. ) was converted to From the data obtained through the above process, the amount of change in the storage modulus (Pa) value according to the strain % (Strain, %) can be confirmed. At this time, the strain % (Strain, %) of the minimum elastic modulus value was defined as the critical strain. .
  • Hyaluronic acid gel was added to the conical tube and weighed to record the initial weight.
  • 5.0 mL of PBS solution (pH 7.4) was added to the conical tube, vortexed for 1 minute to homogeneously mix, and then completely sealed and incubated at room temperature for 24 hours to swell the hyaluronic acid gel.
  • 200 ⁇ L of Alcian Blue Solution was added to the swollen hyaluronic acid gel in the conical tube, and after vortexing for 1 minute, incubation was performed at room temperature for 30 minutes to stain the hyaluronic acid gel.
  • the hyaluronic acid gel was precipitated by centrifugation at 14000 g at 4° C.
  • Average particle size measurement is performed using Microtrac's Particle Size Analyzer S3500. Average particle size measurement is performed by adding a sample to a solvent, and is performed using laser diffraction analysis. The solvent is measured using distilled water. After thoroughly washing the sample inlet with distilled water before performing, enter the refractive index of distilled water and the refractive index of the sample as 1.33 and 1.37, respectively, and set the sample type as transparent and irregularly shaped particles. Before measurement, after filling the sample inlet of the device with distilled water, inserting the sample into a tube, etc., diluting it with an excess of distilled water, dispersing the sample sufficiently using a vortex, etc., and then inserting it into the device for measurement. Among the measurement results, the average particle size (D50) was used as data.
  • a DHR-2 rheometer instrument (TA instruments) was driven.
  • the viscoelasticity test was calibrated by setting the instrument temperature to 25°C and mounting a 40 mm diameter geometry. An appropriate amount of sample was loaded centrally between the upper and lower geometries of the Peltier plates of the instrument. A sufficient amount of the sample was overloaded so as not to be insufficient, and an appropriate amount was loaded to the extent that it did not smudge the top and side surfaces of the geometry. After the geometry was lowered to the set distance, it was checked whether the sample was filled under the geometry, and then the remaining sample outside the geometry was cut away and removed.
  • Adhesion was measured as follows. A DHR-2 rheometer instrument (TA instruments) was driven. The adhesion test was performed by setting the instrument temperature to 25 ° C and mounting a 40 mm diameter geometry. An appropriate amount of sample was loaded centrally between the upper and lower geometries of the Peltier plates of the instrument. A sufficient amount of the sample was overloaded so as not to be insufficient, and an appropriate amount was loaded to the extent that it did not smudge the top and side surfaces of the geometry. After the geometry was lowered to the set distance, it was checked whether the sample was well filled under the geometry, and then the remaining sample outside the geometry was cut away and removed.
  • TA instruments DHR-2 rheometer instrument
  • the force applied to the geometry was measured when the geometry gap was pulled at a constant speed of 100.0 um/s in the vertical axis direction from the lower Peltier plate to a height of 1000 um for 180 seconds. Due to the adhesive force of the sample between the geometry and the Peltier plate, the largest force was measured at the moment the initial sample fell, and the force was defined as the adhesive force.
  • a DHR-2 rheometer instrument (TA instruments) was driven.
  • the compression force test was calibrated by setting the instrument temperature to 25°C and mounting a 25 mm diameter geometry. A sample of 1 mL was loaded centrally between the upper and lower geometries of the Peltier plate of the instrument. After lowering the geometry to the set interval, the geometry was rotated at a slow speed to adjust the sample to come to the center of the geometry standard. Then, the force applied to the geometry was measured while lowering the geometry from 2500 um to 900 um at a constant speed of 13.33 um/s.
  • Compressive force was defined as a value corresponding to the value of the area under the graph, which is the integral value of the graph when a graph with the force measured from the start to the end of the test as the Y axis and the movement time as the X axis was drawn.
  • Injection force measurement was measured using Mecmesin's Multitest 2.5-i Universal Testing Machine.
  • a load cell to measure the force applied to the device was used by installing an appropriate load cell with a tolerance higher than the injection force measurement range.
  • a syringe containing a sample was placed under the load cell of the device, and a needle was coupled to the syringe.
  • a push rod with a flat end was placed on the syringe so that a constant force could be applied when the load cell applied force. After adjusting the distance until just before the load cell part touches the tip of the push rod, the load cell was pressed at a speed of 12 mm/min to measure the applied force.
  • the pressure value generated when the sample flows into the needle is lower than the pressure required when injecting the syringe.
  • the applied force is a force that is not related to the injection force of the sample. Therefore, the value measured excluding the value corresponding to the part where the sample flows into the needle and the part where the injection is almost completed Average of the injection force values measured in the middle part of the syringe filling liquid excluding the initial injection force and final injection force values was defined as the injection power.
  • a hyaluronic acid crosslinked product having a critical strain of 10% to 100% and a swelling degree of 1% to 100% was prepared as follows.
  • a 1% (w/w) NaOH solution was prepared.
  • 5 g of sodium hyaluronate (IV 2.2 to 3.0) was mixed with the prepared 1% NaOH solution to a concentration of 13.00% (w/w), and then stirred to sufficiently dissolve.
  • IV represents the intrinsic viscosity.
  • 0.630 g of butanediol diglycidyl ether (BDDE) (Sigma-Aldrich) was added to the solution and further stirred to mix well, then taken out and crosslinked at 40 ° C. for 16 to 20 hours The reaction proceeded to prepare a cross-linked hyaluronic acid gel.
  • BDDE butanediol diglycidyl ether
  • the obtained cross-linked gel was placed in a dialysis membrane, sealed, and dialysis was performed using 1 mol/kg aqueous NaCl solution and 1x PBS aqueous solution as dialysis solutions to remove unreacted cross-linking agent.
  • content correction was performed using 1x PBS so that the final concentration of sodium hyaluronate removed in consideration of the loss rate from the weight of the initially introduced sodium hyaluronate was 18 mg/mL.
  • the content was corrected to be 3 mg/mL.
  • Example 1 a PBS solution containing 18 mg/mL of cross-linked hyaluronic acid and 3 mg/mL of lidocaine was prepared. Grinding was performed at 8000 rpm for 180 seconds using the prepared cross-linked hyaluronic acid-containing solution using a mixer (Retsch GM-200). Thereafter, 1 ml of the pulverized cross-linked hyaluronic acid-containing solution was filled into a glass syringe, followed by high-temperature steam sterilization. The material obtained through this process was designated as Example 1.
  • Example 2 the crosslinked hyaluronic acid-containing solution was prepared in the same manner as in Example 1 except that grinding was performed at 5000 rpm for 75 seconds using a mixer (Retsch GM-200).
  • Comparative Example 1 was prepared in the same manner as in Example 1 except that the cross-linked hyaluronic acid-containing solution was pulverized at 2000 rpm for 180 seconds using a mixer (Retsch GM-200).
  • Examples 1 and 2 have compressive force and adhesive force similar to those of the conventional single-phase filler, so they are less likely to depart from the injection site and have a low degree of swelling. It can be seen that it is significantly reduced. In addition, it can be seen that the injected form can be maintained for a long time from the fact that it has a high elastic modulus (G').
  • mice 52 hairless mice (SKH1-hr), 6-week-old females (20 ⁇ 3 g), were obtained from Orient Bio (Korea) and acclimatized for about 1 week or more.
  • ketamine 100 mg/kg
  • rumpun 10 mg/kg
  • the dorsal region site of Examples 1 to 2 and Comparative Examples 1 to 3 0.1 mL each was subcutaneously injected using a glass syringe.
  • subjects were weighed according to designated days.
  • the height of the injection site, the maximum length and volume of the injection were measured using Primos 5.8E (Canfield Scientific Inc, NJ, USA). In addition, the injection site was visually observed and a photograph was taken.
  • Figure 1 is the observation of the volume change up to 42 weeks after intradermal injection of the hyaluronic acid gel.
  • Comparative Example 1 which is a conventional single-phase cross-linked hyaluronic acid gel
  • the initial injection volume greatly increases (about 100% increase compared to the initial injection volume) and the volume decreases significantly over time
  • Examples 1 and 2 showed little or no volume change compared to the initial injection (about 10% increase compared to the initial injection volume).
  • Example 1 and Example 2 can confirm that the volume loss is relatively small during 24 weeks.
  • Example 1 and Example 2 show that the original volume can be maintained during injection due to small swelling in the early stage after injection, and it is confirmed that the change in volume until 24 weeks after injection is small. This excellence was confirmed.

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Abstract

히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 높은 응집력 및 점착력을 가지면서 팽윤 현상이 감소된 히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물에 관한 것이다.

Description

히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물
본 개시내용은 히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 높은 응집력 및 점착력을 가지면서 팽윤 현상이 감소된 히알루론산 가교체, 및 이를 포함하는 충전제 조성물에 관한 것이다.
히알루론산(HA)은 일반적으로 높은 평균 분자량을 갖는 선형 다당류이다. 히알루론산은 D-글루쿠론산과 N-아세틸-D-글루코사민의 중합체로서 음전하를 띈다. 히알루론산은 주로 세포외 기질 및 세포간 기질에서 발견되지만 세포 내에도 존재한다. 이와 같이 히알루론산은 신체 내에 이미 존재하는 물질이기 때문에 생체적합성을 지니며, 가교제 등을 이용하여 가교된 히알루론산 하이드로겔을 제조하기에 용이한 특성 또한 가지고 있다. 때문에 가교된 히알루론산을 이용한 필러 제품이 Galderma 에서 Restylane 제품을 1990년대에 첫 출시한 이후로 전세계적으로 널리 사용되고 있다.
현재 필러로서 사용되는 히알루론산 겔은 천연 히알루론산을 가교반응을 통해 네트워크로 화학적으로 가교함으로써 제조된다. 천연 히알루론산과 특정한 일부 가교된 히알루론산은 이들이 물에 완전히 용해될 때까지 물을 흡수하지만, 가교된 히알루론산 겔은 전형적으로 이들이 포화될 때까지 일정량의 물을 흡수하며, 이에 따라 한정된 팽윤도(swelling degree)를 갖는다.
한편, 가교된 히알루론산 겔을 이용한 필러 제품은 단일상(monophasic) 또는 이성상(biphasic)을 갖는 것으로 구분할 수 있다. 단일상의 가교된 히알루론산 겔은 점성계수(Viscous modulus)가 높고 탄성계수(Elastic modulus)가 낮다. 이성상의 가교된 히알루론산 겔은 점성계수가 낮고 탄성계수가 높다. 단일상 가교된 히알루론산 겔과 이성상 가교된 히알루론산 겔은 체내에서도 다른 특성을 갖는다. 예를 들면, 탄성계수가 낮고 점성계수가 높은 단일상 가교된 히알루론산 겔의 경우 응집력이 우수하여 주입된 부위에서 이탈할 가능성이 낮으나, 추가로 물을 흡수할 수 있는 특성을 가지고 있기 때문에 체내에서도 계속해서 주변의 수분을 흡수하려는 성질을 가진다. 이로 인해 단일상 가교된 히알루론산 겔은 일반적으로 체내 주입 시 주입 초기 단계에 주입된 본래의 형태를 유지하지 못하고 기존 주입한 부피에 비해 부피가 증가하는 단점이 있다. 이와 반대로 탄성계수는 높으나 점성계수가 낮은 이성상 가교된 히알루론산 겔은 주입된 형태를 작은 부피 변화로 장기간 유지할 수 있으나, 주입된 부위에서 쉽게 이탈하거나 주입 부위에 고르게 분포하지 못하는 특성을 가지고 있다.
한편, 히알루론산 필러 시술 후 팽윤 현상(swelling)이 발생할 수 있는데, 이는 체내에 주입된 히알루론산 겔 성분이 주입 부위의 주변 조직으로부터 체액을 흡수하여 주입된 부위 및 주변 부위가 붓는 현상을 지칭한다. 이러한 팽윤 현상은 주입 부위가 부어오른다는 점에서 필러 시술의 흔한 부작용 중 하나이며, 흡수된 물에 의해 히알루론산 겔의 점성과 탄성 및 강도가 저하되어 필러의 주입 효과를 떨어뜨릴 수 있다는 점에서 바람직하지 않은 현상이다.
따라서, 체내 주입 시 적합한 점탄성 및 겔의 강도를 유지하면서 주입 시 체내에서 팽윤 현상이 작은 히알루론산 필러에 대한 요구가 남아있다.
본 개시내용의 일 목적은 임계 변형률이 10% 내지 100%이고, 팽윤도(swelling degree)가 1% 내지 100%인 히알루론산 가교체를 제공하는 것이다.
본 개시내용의 다른 목적은 상기 히알루론산 가교체를 포함하는 충전제 조성물을 제공하는 것이다.
본 개시내용의 일 양상은 임계 변형률이 10% 내지 100%이고, 팽윤도(swelling degree)가 1% 내지 100%인 히알루론산 가교체를 제공한다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 평균 입도가 50 um 내지 150 um 범위일 수 있다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 탄성 계수(G')가 400 Pa 내지 2,000 Pa일 수 있다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 점성 계수(G")가 100 Pa 내지 600 Pa일 수 있다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 압축력이 15 Nㆍs 내지 100 Nㆍs일 수 있다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 주입력이 1 N 내지 50 N일 수 있다.
구체예에서, 히알루론산 가교체는 이작용성 에폭시 기를 가진 가교제로 가교될 수 있다. 상기 이작용성 에폭시 기를 가진 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(프로필렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(테트라메틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 디글리시딜 에테르, 트리에틸렌 디글리시딜 에테르, 트리메틸롤프로판 트리글리시딜 에테르, 에틸렌 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 및 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있다.
본 개시내용의 다른 양상은 상기 히알루론산 가교체를 포함하는 충전제 조성물을 제공한다.
구체예에서, 충전제 조성물 중의 히알루론산 가교체 농도는 10 mg/mL 내지 30 mg/mL일 수 있다.
구체예에서, 충전제 조성물은 가교되지 않은 히알루론산을 추가로 포함하지 않을 수 있다.
구체예에서, 충전제 조성물은 국소 마취제를 더 포함할 수 있다.
구체예에서, 충전제 조성물은 주사기에 충전되어 있을 수 있다.
구체예에서, 충전제 조성물은 안면부 성형, 주름 개선, 안면 윤곽술, 가슴 성형, 가슴확대술, 성기 확대, 귀두 확대, 요실금 치료, 및 관절염 치료로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도로 사용될 수 있다.
본 개시내용에 따른 가교된 히알루론산 겔은 높은 응집력 및 점착력을 가지므로 주입 부위로부터의 이탈 없이 온전하게 유지되는 동시에, 주입 후 팽윤 현상이 감소됨을 특징으로 한다.
도 1은 가교된 히알루론산 시료를 무모 마우스에 주입한 후, 주입된 히알루론산 겔의 부피를 주입 이후 경과한 시간에 따라 나타낸 도면이다.
본 개시내용은 일반적으로 임계 변형률(critical strain)이 10% 내지 100%이고, 팽윤도(swelling degree)가 1% 내지 100%인 히알루론산 가교체를 제공한다.
본 명세서에 있어서, 용어 "히알루론산(hyaluronic acid)"은 식 1의 화학식을 갖는 히알루로난(hyaluronan), 히알루로네이트(hyaluronate), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 나타낸다:
Figure PCTKR2022008447-appb-I000001
(1)
식 1 중 n은 반복단위(repeating unit) 수이다. 상기 히알루론산은 임의의 기원으로부터 유래한 것일 수 있다. 히알루론산은 예를 들면, 동물 또는 비동물체로부터 유래된 것일 수 있다. 상기 히알루론산은 또한 박테리아로부터 유래된 것일 수 있다. 상기 박테리아는 Streptococcus 속 유래의 것일 수 있다. 상기 Streptococcus 속 박테리아는 Streptococcus equi, S. pyogenes 또는 S. zooepidemicus일 수 있다. 상기 히알루론산은 또한 상업적으로 구입한 것일 수 있다.
상기 히알루론산의 분자량은 1,000,000 Da 내지 2,500,000 Da, 예를 들어 1,000,000 Da 내지 2,000,000 Da, 1,500,000 Da 내지 2,500,000 Da, 또는 1,500,000 Da 내지 2,000,000 Da일 수 있다.
상기 히알루론산의 극한점도(Intrinsic Viscosity)는 1.0 m3/kg 내지 5.0 m3/kg, 예를 들면 1.5 m3/kg 내지 4.0 m3/kg, 2.5 m3/kg 내지 4.0 m3/kg, 2.5 m3/kg 내지 3.5 m3/kg, 또는 2.5 m3/kg 내지 3.0 m3/kg 일 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "히알루론산 가교체"는 가교된 히알루론산을 의미하는 것으로, "히알루론산 가교체", "가교된 히알루론산", "가교 히알루론산"은 상호 교환가능하게 사용된다.
본 명세서에서, 용어 팽윤(swelling)은 가교된 히알루론산 겔이 물을 흡수하여 부푸는 현상을 지칭한다.
본 명세서에서, 용어 팽윤도(swelling degree)는 가교된 히알루론산을 물에 침지시켰을 때, 팽윤되기 전 대비 완전히 팽윤된 가교된 히알루론산 겔 무게의 비율을 지칭한다. 팽윤도는, 예를 들어 하기 측정 방법 섹션에 기재된 계산식에 따라 수득될 수 있다.
본 명세서에서, 임계 변형률(Critical strain)은 전단 변형률을 물질에 가했을 때, 선형 점탄성적(Linear viscoelastic) 성질을 포함한 물질 내부 구조의 파괴를 일으키는 데에 필요한 변형률 값을 확인하는 측정 지표이다. 일반적으로 가교된 히알루론산 겔의 경우 가교된 히알루론산 겔 또는 가교된 히알루론산 겔과 용액으로 이루어져 있으며, 이들 내부에는 수소 결합, 공유 결합, 반 데르 발스 결합 및 물리적 결합 등에 의한 다양한 내부 상호작용 힘이 존재한다. 내부 상호작용은 겔-겔, 겔-용액 또는 용액-용액 사이의 상호작용으로 분류할 수 있으며, 용액의 경우 분자의 유동성이 겔에 비해 높고, 접촉 면적이 겔에 비해 작기 때문에 상호작용의 크기는 겔-겔 > 겔-용액 > 용액-용액으로 생각할 수 있다. 겔-겔 형태만 존재하는 단일상의 경우 비교적 높은 상호작용을 가지므로 보다 높은 변형률에서 내부 구조가 파괴될 것으로 예상할 수 있다. 반면, 이성상의 경우 겔과 용액이 함께 존재하는 형태이므로 겔-겔 상호작용은 줄어들게 되며 반면 겔-용액 상호작용 및 용액-용액 상호작용이 보다 커지기 때문에 내부 구조의 상호작용의 총합이 단일상과 비교했을 때 작아질 것으로 예상되므로, 더 낮은 변형률에서 내부 구조가 파괴될 것으로 예상할 수 있다.
또한, 비슷한 현상의 결과로, 일반적인 단일상 필러 제품의 경우 응집력이 강한 특성을 가지게 되며, 이성상 필러 제품의 경우 응집력이 단일상 필러 대비 상대적으로 약한 모습을 보일 것으로 예상할 수 있다. 응집력 특성은 생체 내에서 얼마나 주입물이 잘 뭉쳐 있는지에 대한 예상 지표로 사용될 수 있는 특성이다. 이를 검증하고자 이성상 필러 제품과 단일상 필러 제품의 응집력 정도를 측정하는 지표인 점착력 수치로 비교한 결과, 단일상 제품들이 이성상 제품들에 비해 높은 점착력 수치를 나타낸 것을 확인하였다.
본 개시내용의 일 양상에 따른 히알루론산 가교체는 종래 단일상 히알루론산 필러와 같이 높은 임계 변형률을 가지는 반면, 팽윤도가 낮다는 점에서 예기치 않은 특성을 나타내는 것이다. 또한, 본 개시내용의 히알루론산 가교체는 종래 단일상 필러와 유사한 정도로 높은 응집력 및 높은 점착력을 가지므로 주입 부위에서 쉽게 이탈하지 않는 동시에 높은 탄성 계수(G')로 인해 주입된 형태를 장기간 유지할 수 있음을 특징으로 한다.
본 개시내용에 따른 히알루론산 가교체는 (i) 임계 변형률이 10% 내지 100%, 예를 들어 10% 내지 50%, 10% 내지 30%, 또는 10% 내지 40%, 예를 들어 10% 내지 50%, 예를 들어 10% 내지 30%이면서, 팽윤도가 1% 내지 100%, 예를 들어 1% 내지 90%, 1% 내지 80%, 1% 내지 70%, 1% 내지 60%, 1% 내지 50%, 10% 내지 60%, 20% 내지 60%, 30% 내지 60%, 40% 내지 60%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%일 수 있다.
상기 히알루론산 가교체는 (ii) 평균 입도(um)가 50 um 내지 150 um, 예를 들어 60 um 내지 150 um, 70 um 내지 150 um, 80 um 내지 150 um, 90 um 내지 150 um, 60 um 내지 140 um, 60 um 내지 130 um, 60 um 내지 120 um, 60 um 내지 100 um 일 수 있다.
상기 히알루론산 가교체는 (iii) 탄성 계수(G')가 400 Pa 내지 2,000 Pa, 예를 들면, 500 Pa 내지 1,900 Pa, 600 Pa 내지 1,800 Pa, 또는 600 Pa 내지 1,700 Pa일 수 있다.
상기 히알루론산 가교체는 (iv) 점성 계수(G")가 100 Pa 내지 600 Pa, 예를 들면, 120 Pa 내지 500 Pa, 150 Pa 내지 450 Pa, 또는 160 Pa 내지 350 Pa일 수 있다.
상기 히알루론산 가교체는 (v) 압축력(compression)이 15 Nㆍs 내지 100 Nㆍs, 예를 들면, 20 Nㆍs 내지 90 Nㆍs, 25 Nㆍs 내지 80 Nㆍs, 또는 30 Nㆍs 내지 75 Nㆍs일 수 있다.
상기 히알루론산 가교체는 (vi) 주입력이 1 N 내지 50 N, 예를 들면, 3 N 내지 45 N, 4 N 내지 40 N, 또는 7 N 내지 35 N일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 히알루론산 가교체는 상기 (i)의 요건을 충족시키면서 상기 (ii) 내지 (vi)의 요건 중 하나, 둘, 셋, 넷 또는 다섯 요건을 충족시키는 것일 수 있다.
본 개시내용에 따른 히알루론산 가교체는 예를 들어 다음의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:
(a) 알칼리 수용액에 용해된 히알루론산에 가교제를 첨가하여 가교결합을 수행하는 단계;
(b) 가교된 겔을 투석, 세척 및/또는 팽창을 진행하는 단계;
(c) 분쇄하는 단계; 및
(d) 주사기에 충진하는 단계.
상기 공정 단계에서 단계 (b) 내지 (d)의 순서는 변경될 수 있거나 2회 이상 반복될 수 있다. 예를 들어, 분쇄 단계는 (c) 단계 외에 단계 (a)와 (b) 사이에 추가로 실시될 수 있거나, 오직 (c) 단계에서만 실시될 수 있거나, (c) 단계 대신 단계 (a)와 (b)에서만 실시될 수 있다.
또한, 상기 단계 (a) 내지 (d) 외에 다른 추가 단계, 예를 들어 하기된 바와 같은 마취제를 첨가하는 단계, 및/또는 고온 증기 멸균을 실시하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 마취제를 첨가하는 단계가 상기 단계 (b)와 (c)사이에, 또는 상기 단계 (c)와 (d) 사이에 추가될 수 있다. 고온 증기 멸균을 실시하는 단계는 상기 단계 (c)와 (d) 사이에, 또는 단계 (d) 이후에 추가될 수 있다.
상기 단계 (a)에서, 알칼리 수용액은 NaOH, KOH, 바람직하게는 NaOH 수용액일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. NaOH 수용액이 사용되는 경우 농도는 0.1%(w/w) 내지 2.5%(w/w), 예를 들면 0.1%(w/w) 내지 2.0%(w/w), 또는 0.5%(w/w) 내지 1.0%(w/w)일 수 있다.
또한, 상기 알칼리 수용액에 용해된 히알루론산의 농도는 10%(w/w) 내지 25%(w/w), 예를 들면 10%(w/w) 내지 20%(w/w) 또는 10%(w/w) 내지 15%(w/w)일 수 있다.
상기 단계 (a)에서, 가교제는 다관능기를 갖는 것일 수 있다. 상기 가교제는 이작용성 에폭시 기를 가진 것일 수 있다. 상기 이작용성 에폭시 기를 가진 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(프로필렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(테트라메틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 디글리시딜 에테르, 트리에틸렌 디글리시딜 에테르, 트리메틸롤프로판 트리글리시딜 에테르, 에틸렌 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 및 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있다.
또한, 상기 가교 반응은 상온 이상, 예를 들면 20℃ 내지 40℃, 25℃ 내지 40℃, 또는 30℃ 내지 40℃일 수 있으며, 반응 시간은 24시간 이하, 예를 들면 10시간 내지 24시간, 15시간 내지 24시간, 또는 15시간 내지 20시간일 수 있다.
상기 단계 (b)에서, 투석은 투석막 또는 투석 용기에서 가교된 겔을 소정의 완충 용액 예컨대 NaCl 용액, KOH 용액, PBS 용액 등을 포함하는 투석 용액과 함께 혼합하여 투석하고, 세척하고, 투석을 거친 겔을 팽창시키는 단계를 지칭한다. 상기 일련의 투석, 세척 및 팽창 단계는 2회 이상 반복될 수 있다. 상기 일련의 투석, 세척 및 팽창 단계를 통해 미반응 가교제가 제거되고/되거나 가교된 겔의 pH 및/또는 삼투압이 조절될 수 있다.
상기 단계 (c)에서, 분쇄는 분쇄기를 이용하여 1,000 내지 10,000 rpm, 예를 들어 2,000 내지 9,000 rpm, 3,000 내지 8,000 rpm, 4,000 내지 7,000 rpm, 5,000 내지 9,000 rpm, 또는 5,000 내지 8,000 rpm에서 60초 이상, 예를 들어 60 초 내지 100초, 70초 내지 120초, 80초 내지 140초, 90초 내지 160초, 100초 내지 180초, 120초 내지 240초 동안 수행될 수 있다.
다른 양상은 상기한 히알루론산 가교체를 포함하는 충전제(filler) 조성물을 제공한다.
상기 조성물에 있어서, 상기 가교된 히알루론산 겔의 최종 농도는 10 mg/ml 이상, 15 mg/ml 이상, 18 mg/ml 이상, 또는 19 mg/ml 이상일 수 있다. 예를 들면, 상기 가교된 히알루론산의 농도는 10 mg/ml 내지 30 mg/ml, 12 mg/ml 내지 28 mg/ml, 14 mg/ml 내지 26 mg/ml, 16 mg/ml 내지 24 mg/ml, 16 mg/ml 내지 20 mg/ml, 또는 약 18 mg/ml인 것일 수 있다.
상기 조성물은 가교되지 않은 히알루론산을 추가로 포함하지 않는 것일 수 있다. 가교되지 않은 히알루론산을 "추가로 포함한다"는 것은 히알루론산 가교체에 가교되지 않은 히알루론산을 인위적으로 더 첨가해주는 것을 의미하는 것으로, 가교되지 않은 히알루론산을 추가로 포함하지 않는다는 것은 히알루론산 가교체에 가교되지 않은 히알루론산을 인위적으로 더 첨가해주지 않는 것을 의미한다.
상기 조성물은 마취제를 더 포함하는 것일 수 있다. 상기 마취제는 국소 마취제일 수 있다. 상기 마취제는 암부카인(ambucaine), 아몰라논(amolanone), 아밀로카인(amylocaine), 베녹시네이트(benoxinate), 벤조카인(benzocaine), 베톡시카인(betoxycaine), 비페나민(biphenamine), 부피바카인(bupivacaine), 부타카인(butacaine), 부탐벤(butamben), 부타닐리카인(butanilicaine), 부테타민(butethamine), 부톡시카인(butoxycaine), 카르티카인(carticaine), 클로로프로카인(chloroprocaine), 코카에틸렌(cocaethylene), 코카인(cocaine), 사이클로메티카인(cyclomethycaine), 다이부카인(dibucaine), 다이메티소퀸(dimethysoquin), 다이메토카인(dimethocaine), 디페로돈(diperodon), 다이사이클로닌(dycyclonine), 에크고니딘(ecgonidine), 에크고닌(ecgonine), 에틸 클로라이드(ethyl chloride), 에티도카인(etidocaine), 베타-유카인(beta-eucaine), 유프로신(euprocin), 페날코민(fenalcomine), 포르모카인(formocaine), 헥실카인(hexylcaine), 하이드록시테트라카인(hydroxytetracaine), 이소부틸 p-아미노벤조에이트(isobutyl paminobenzoate), 류시노카인 메실레이트(leucinocaine mesylate), 레복사드롤(levoxadrol), 리도카인(lidocaine), 메피바카인(mepivacaine), 메프릴카인(meprylcaine), 메타부톡시카인(metabutoxycaine), 메틸 클로라이드(methyl chloride), 미르테카인(myrtecaine), 나에파인(naepaine), 옥타카인(octacaine), 오르소카인(orthocaine), 옥세타자인(oxethazaine), 파레톡시카인(parethoxycaine), 페나카인(phenacaine), 페놀(phenol), 피페로카인(piperocaine), 피리도카인(piridocaine), 폴리도카놀(polidocanol), 프라목신(pramoxine), 프릴로카인(prilocaine), 프로카인(procaine), 프로파노카인(propanocaine), 프로파라카인(proparacaine), 프로피오카인(propipocaine), 프로록시카인(propoxycaine), 슈도코카인(psuedococaine), 피로카인(pyrrocaine), 로피바카인(ropivacaine), 살리실 알코올(salicyl alcohol), 테트라카인(tetracaine), 톨릴카인(tolycaine), 트리메카인(trimecaine), 졸라민(zolamine), 및 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것 중 1종 이상일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 조성물은 단백질, 히알루론산과 다른 글리코스아미노글리칸, 및 히드록시프로필 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택된 약제학적으로 활성인 물질은 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 조성물은 주사기에 충전되어 있는 것일 수 있다.
상기 조성물은 개체에서 조직수복을 위하여 사용되는 것일 수 있다.
상기 조성물에 있어서, 상기 개체는 포유동물일 수 있다. 상기 포유동물은 사람, 개, 고양이, 소, 돼지, 랫트, 또는 양일 수 있다.
상기 조성물은 안면부 성형, 주름 개선, 안면 윤곽술, 가슴 성형, 가슴 확대술, 성기 확대, 귀두 확대, 요실금 치료 및 관절염 치료로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도로 사용하기 위한 것일 수 있다.
상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체는 예를 들면, 물, 또는 버퍼를 포함할 수 있다. 상기 버퍼는 용액의 pH가 상기 조성물의 성분의 첨가와 함께 거의 변화하지 않도록 하는 것일 수 있다. 상기 조성물은 수성 액체 조성물일 수 있다. 상기 조성물은 수성 완충된 조성물일 수 있다. 상기 수성 완충된 조성물의 pH는 생리적 pH 범위, 예를 들면, 약 6.0 에서 8.0 사이일 수 있다. 상기 pH는 HCl, Na2CO3 또는 NaOH와 같은 적당한 산 또는 염기를 첨가함으로써 조정될 수 있다. 일 구체예에서 상기 수성 완충된 조성물은 인산완충식염수(phosphate buffered saline: PBS)를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서 상기 수성 완충된 조성물은 트리스(히드록시메틸)아미노메탄(Tris)을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서 소듐 클로리드, 칼슘 클로리드, 및 포타슘 클로리드와 같은, 추가적인 용질(solute)이 오스몰 농도(osmolarity) 및 이온 농도를 조정하기 위하여 첨가될 수 있다.
상기 조성물은 멸균된 것일 수 있다.
상기 조성물은 용기에 포함된 것일 수 있다. 상기 용기는 주사기일 수 있다. 상기 조성물은 사용하기 전에 미리 주사기에 충전된 것일 수 있다. 상기 조성물은 사전-충전된 주사기로 투여되는 것일 수 있다.
다른 양상은 상기한 조성물을 포함하는 장치를 제공한다. 상기 장치는 사전-충전된 주사기인 것일 수 있다. 상기 장치는 멸균된 것일 수 있다.
다른 양상은 상기한 사전-충전된 주사기를 포함하는 키트를 제공한다. 상기 키트는 상기 조성물을 투여하는 것에 대한 정보를 포함하는 설명서를 포함하는 것일 수 있다.
다른 양상은 치료학적으로 유효한 양의 상기한 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 조직을 충전하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 개체의 조직의 증강, 수복 또는 강화 또는 체강의 충전을 위한 것일 수 있다. 이 관점에서 부피 증강(volume augmentation)은 필러 조성물을 형성하는 성분에 의한 부피가 오래 지속되는 증가일 수 있다. 상기 필러 조성물을 형성하는 성분은 빠른 확산을 겪지 않는 것일 수 있다. 상기 방법에 있어서, "조성물" 및 "개체"에 대하여는 상기한 바와 같다. 상기 투여는 진피 내와 같은 피부 또는 관절강 내에 투여하는 것일 수 있다. 상기 방법에 있어서, 상기 투여는 주사기, 예를 들면 사전-충전된 주사기를 통하여 피부, 예를 들면 진피 내에 투여하는 것일 수 있다. 상기 방법에 있어서, 상기 투여는 1회 당 0.1 내지 50ml, 0.5 내지 30ml, 0.5 내지 20ml, 0.5 내지 15ml, 또는 0.8 내지 12ml를 투여하는 것일 수 있다. 상기 방법에 있어서, 상기 투여는 상기 조성물을 3개월 이상의 기간 당 1회, 4개월 이상의 기간 1회, 5개월 이상의 기간 1회, 6개월 이상의 기간당 1회, 12개월 이상의 기간 당 1회, 또는 18개월 이상의 기간 당 1회 투여하는 것일 수 있다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
측정 방법
(1) 임계 변형률(critical strain) 측정 방법
임계 변형률은 변형-스윕 테스트(strain-sweep test)에 의하여 측정하였다. 구체적으로, DHR-2 레오미터 기기(TA instruments 사)를 구동하였다. 변형-스윕 테스트는 기기 온도를 25℃로 설정하고, 직경 25 mm 지오메트리를 장착하여 보정(calibration)을 수행하였다. 적절한 양의 시료를 상기 기기의 펠티어 플레이트 상부 및 하부 지오메트리 사이 중앙에 적재하였다. 시료는 부족하지 않도록 충분한 양을 과적재(over-loading)하여 지오메트리 하부 면적 바깥의 잔여물을 깎아내더라도 지오메트리 옆면 및 윗면에 묻지 않을 정도의 적절한 양을 적재하였다. 지오메트리를 설정한 간격까지 내린 후 시료가 지오메트리 아래에 잘 채워져 있는지 확인한 후, 지오메트리 밖에 있는 잔여 시료를 깎아내어 제거하였다(trimming). 이후, 지오메트리를 이용하여 시료에 0.1~1000%까지의 변형(Strain)을 가하였을 때, 각 변형률에서 측정되는 탄성계수 값을 측정하였다. 레오미터에서 측정된 측정 값 중 변형률 %(Strain %)과 탄성 계수 (Storage Modulus, Pa)의 값을 취하여 Graphpad Software사의 Graphpad Prism(Prism 8, version 8.4.3(686))을 사용하여 프로그램에서 내장된 Transform 기능으로 변형률 %(strain (%)) 값을 log (strain (%)) 으로 변환하고, 얻어진 값에서 최소값의 변형률 % (Strain, %)을 쉽게 확인하기 위하여 프로그램에 내장된 Smooth 기능으로 log (strain (%)) 값에 대한 탄성 계수 (Storage Modulus, Pa)의 변화량에 대한 Smooth한 그래프를 산출한 후, Transform 기능으로 log (strain (%))를 취하기 전 값인 변형률 % (strain (%))으로 변환하였다. 상기 과정으로 얻어진 데이터로부터 변형률 % (Strain, %) 에 따른 탄성 계수(Storage Modulus, Pa) 값의 변화량을 확인할 수 있으며, 이때 최소 탄성계수 값의 변형률 % (Strain, %)를 임계 변형률이라 정의하였다.
(2) 팽윤도 측정 방법
Conical Tube에 히알루론산 겔을 첨가하고 칭량하여 초기 무게를 기록하였다. 상기 Conical Tube에 PBS 용액(pH 7.4)을 5.0 mL 첨가하고 1분 동안 Vortex를 진행하여 균질하게 혼합한 후 완전히 밀봉하여 실온에서 24시간 동안 인큐베이션하여 히알루론산 겔을 팽윤시켰다. 이어서, 상기 Conical Tube 내의 팽윤된 히알루론산 겔에 Alcian Blue Solution을 200 μL 첨가하고 1분 동안 Vortex 후 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 히알루론산 겔을 염색하였다. 이를 14000 g 로 4 ℃에서 10분 동안 원심분리하여 히알루론산 겔을 침전시킨 후 상층액을 파이펫으로 조심스럽게 제거하였다. 이어서, 상기 히알루론산 겔의 염료를 제거하기 위해, PBS 용액(pH 7.4)을 5.0 mL 첨가하고 1분 동안 Vortex 후, 다시 14000 g 로 4 ℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 상층액을 파이펫으로 조심스럽게 제거한 후, PBS 첨가 및 원심분리 절차를 추가로 2회 더 수행하였다. 이와 같이 수득된 팽윤된 히알루론산 겔을 칭량하여 아래 계산식에 의해 팽윤도를 계산하였다:
Figure PCTKR2022008447-appb-I000002
(3) 평균 입도 측정 방법
평균 입도 측정은 Microtrac사의 Particle Size Analyzer S3500을 이용하여 수행한다. 평균 입도 측정은 용매에 시료를 첨가하여 수행하며, 레이저 회절 분석법을 이용하여 수행한다. 용매는 증류수를 이용하여 측정한다. 수행 전 시료 투입구를 충분히 증류수를 이용하여 세척한 후, 증류수의 굴절률 및 시료의 굴절률을 각각 1.33, 1.37로 입력하고, 시료의 유형을 투명하며 불규칙한 모양을 가진 입자로 설정한다. 측정 전 기기 시료 투입구에 증류수를 채운 후, 시료를 튜브 등에 투입한 후 과량의 증류수를 넣어 희석한 후 볼텍스(Vortex) 등을 이용하여 시료를 충분히 분산시킨 후 기기에 투입하여 측정을 실시한다. 측정 결과값 중 평균 입도 크기(D50)를 데이터로 사용하였다.
(4) 점탄성 측정 방법
DHR-2 레오미터 기기(TA instruments)를 구동하였다. 점탄성 테스트는 기기 온도를 25℃로 설정하고, 직경 40 mm 지오메트리를 장착하여 보정을 수행하였다. 적절한 양의 시료를 상기 기기의 펠티어 플레이트 상부 및 하부 지오메트리 사이 중앙에 적재하였다. 시료는 부족하지 않도록 충분한 양을 과적재하여 지오메트리 옆면 및 윗면에 묻지 않을 정도의 적절한 양을 적재하였다. 지오메트리를 설정한 간격까지 내린 후 지오메트리 아래에 시료가 채워져 있는지 확인한 후, 지오메트리 밖에 있는 잔여 시료를 깍아내어 제거하였다. 이후, 지오메트리를 일정 변형률로 특정 주파수(Frequency)에 따라 주기적으로 전단 변형률(shear strain)을 시료에 가하여, 이에 얻어지는 탄성률(Modulus) 값 중 약 0.1 Hz 주파수 때의 저장 탄성률(Storage Modulus) 및 손실 탄성률(Loss Modulus) 값을 각각 탄성 및 점성으로 정의하였다.
(5) 점착력 측정 방법
점착력은 하기와 같이 측정하였다. DHR-2 레오미터 기기(TA instruments)를 구동하였다. 점착력 테스트는 기기 온도를 25℃로 설정하고, 직경 40 mm 지오메트리를 장착하여 보정을 수행하였다. 적절한 양의 시료를 상기 기기의 펠티어 플레이트 상부 및 하부 지오메트리 사이 중앙에 적재하였다. 시료는 부족하지 않도록 충분한 양을 과적재하여 지오메트리 옆면 및 윗면에 묻지 않을 정도의 적절한 양을 적재하였다. 지오메트리를 설정한 간격까지 내린 후 지오메트리 아래에 시료가 잘 채워져 있는지 확인한 후, 지오메트리 밖에 있는 잔여 시료를 깍아내어 제거하였다. 이후, 지오메트리 갭을 1000 um 높이로 하여 하부 펠티어 플레이트에서 수직 축 방향으로 100.0 um/s의 일정한 속도로 180 초 동안 끌어당길 때, 지오메트리에 걸리는 힘을 측정하였다. 지오메트리와 펠티어 플레이트 사이에 있는 시료가 가지고 있는 점착력으로 인해 초기 시료가 떨어지는 순간 가장 큰 힘이 측정되게 되며, 해당 힘을 점착력으로 정의하였다.
(6) 압축력 측정 방법
DHR-2 레오미터 기기(TA instruments)를 구동하였다. 압축력 테스트는 기기 온도를 25℃로 설정하고, 직경 25 mm 지오메트리를 장착하여 보정을 수행하였다. 1 mL 만큼의 시료를 상기 기기의 펠티어 플레이트 상부 및 하부 지오메트리 사이 중앙에 적재하였다. 지오메트리를 설정한 간격까지 내린 후, 지오메트리를 느린 속도로 회전시켜 시료가 지오메트리 기준 정 중앙에 올 수 있도록 조절하였다. 이후, 13.33 um/s의 일정한 속도로 2500 um 에서 900um 위치가 될 때까지 지오메트리를 아래로 내리면서 지오메트리에 가해지는 힘을 측정하였다. 압축력은 시험 시작부터 끝까지 측정된 힘을 Y 축으로, 움직인 시간을 X 축으로 한 그래프를 그렸을 때 그래프의 적분 값인 그래프의 아래 면적 값에 해당하는 값을 압축력으로 정의하였다.
(7) 주입력 측정 방법
주입력 측정은 Mecmesin의 Multitest 2.5-i Universal Testing Machine을 사용하여 측정하였다. 기기에 가해지는 힘을 측정할 로드 셀(Load Cell)은 주입력 측정 범위보다 높은 허용값을 가진 적절한 로드 셀을 장착하여 사용하였다. 기기 로드 셀 아래 부분에 시료가 들어 있는 주사기를 놓고, 해당 주사기에 주사침을 결합하였다. 주사기에는 끝 부분이 평평한 밀대를 놓아, 로드 셀이 힘을 가할 때 일정하게 힘이 가해질 수 있도록 하였다. 로드 셀 부분이 밀대 끝 부분에 닿기 직전까지 거리를 조절한 후, 12 mm/min 의 속도로 로드 셀을 이용하여 밀대 부분을 눌러, 가해지는 힘을 측정하였다. 측정값의 초기 부분 및 끝 부분의 경우 시료가 주사침에 흘러 들어갈 때 생기는 압력 값이 주사기를 주입할 때 드는 압력보다 낮다. 또한 주입물의 주입이 거의 다 완료되었을 때에는 시료가 없음에도 계속해서 힘을 가할 경우가 생길 수 있으며, 이 때에는 가해지는 힘이 시료의 주입력과는 관계없는 힘이다. 따라서, 시료가 주사침에 흘러가는 부분 및 주입이 거의 다 완료된 부분에 해당하는 값은 제외하고 측정되는 값 초기 주입력 및 말기 주입력 값을 제외한 주사기 충진액의 중간 부분에서 측정한 주입력 값의 평균을 주입력으로 정의하였다.
실시예 1 및 2: 가교된 히알루론산의 제조
임계 변형률이 10% 내지 100%이고, 팽윤도가 1% 내지 100%인 히알루론산 가교체를 다음과 같이 제조하였다.
먼저, 1%(w/w) NaOH 용액을 제조하였다. 제조한 1% NaOH 용액에 5g의 히알루론산 나트륨(IV 2.2 내지 3.0) 을 13.00%(w/w)이 되게 혼합한 후 교반하여 충분히 용해시켰다. 여기서, IV는 극한 점도(intrinsic viscosity)를 나타낸다. 상기 용액에 0.630g의 부탄디올 디글리시딜 에테르(butanediol diglycidyl ether: BDDE)(Sigma-Aldrich)를 첨가하고 추가로 교반하여 잘 섞일 수 있도록 한 후, 꺼내어 섭씨 40℃에서 16 시간 내지 20 시간 동안 가교 반응을 진행하여 가교된 히알루론산 겔을 제조하였다.
다음으로, 얻어진 가교된 겔을 투석막에 넣은 후 밀봉하고, 1 mol/kg NaCl 수용액 및 1x PBS 수용액을 투석 용액으로 하여 투석을 진행하여 미반응 가교제를 제거하였다. 투석을 완료한 후, 최초에 투입한 히알루론산 나트륨의 무게에서 손실율을 감안하여 제거한 최종 히알루론산 나트륨의 농도가 18 mg/mL 이 되도록 1x PBS를 이용하여 함량 보정을 진행하였다. 이때 리도카인 염산염 수화물의 경우 3 mg/mL 이 되도록 함량 보정을 진행하였다. 그 결과, 가교된 히알루론산이 18 mg/mL 및 리도카인이 3 mg/mL 만큼 함유된 PBS 용액을 제조하였다. 제조된 가교된 히알루론산 함유 용액을 믹서기(Retsch GM-200)를 이용하여 이용하여 8000 rpm에서 180초 동안 분쇄를 진행하였다. 이후, 분쇄가 완료된 가교된 히알루론산 함유 용액 1 ml을 유리 주사기에 충전을 실시한 후, 고온 증기 멸균을 실시하였다. 이와 같은 과정을 통해 수득된 물질을 실시예 1로 지정하였다.
실시예 2의 경우, 가교된 히알루론산 함유 용액을 믹서기(Retsch GM-200)를 이용하여 5000 rpm에서 75초 동안 분쇄를 진행한 것을 제외하고 실시예 1과 동일하게 제조하였다.
비교예 1
비교예 1은 가교된 히알루론산 함유 용액을 믹서기(Retsch GM-200))를 이용하여 2000rpm에서 180초 동안 분쇄를 진행한 것을 제외하고 실시예 1과 동일하게 제조하였다.
비교예 2 및 비교예 3:
비교예 2로서 단일상 가교된 히알루론산인 Allergan 사의 Juvederm Voluma Lidocaine을 사용하였고, 비교예 3으로서 이성상 가교된 히알루론산인 Galderma 사의 Restylane Lyft Lidocaine을 사용하였다.
실험예 1: 가교된 히알루론산 겔의 물리적 특성 측정
가교 히알루론산 겔의 물리적 특성을 상기 실시예의 측정방법 (1) 내지 (7)에 기재된 방법에 의해 측정하고 그 결과를 하기 표 1에 나타냈다.
명칭 임계
변형률
(%)		 팽윤도
(%)		 평균 입도
(um)		 G'
(Pa)		 점착력
(N)		 압축력
(Ns)		 주입력
(N)		 가교도
(%)
실시예 1 26.01 56.30 66.0 611 6.27 50.09 16
(27G 1/2”)		 4.1
실시예 2 14.69 49.40 113.3 622 6.07 49.12 18
(27G 1/2”)		 4.13
비교예 1 4.49 67.10 261.6 824 4.82 47.08 11
(27G 1/2”)		 3.89
비교예 2 54.96 126.1 660.7 227 5.11 45.60 8 (27G) 2.08
비교예 3 6.53 N/A
(측정불가)		 809.0 743 2.42 22.18 19 (29G) 0.16
표 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1 및 실시예 2는 종래 단일상 가교된 히알루론산 필러인 비교예 2(Juvederm Voluma L, Allergan)에 비해 팽윤도가 현저하게 감소되었음을 확인할 수 있다. 종래 이성상 가교된 히알루론산 필러인 비교예 3(Restylane Lyft L, Galderma)의 경우, 팽윤도 측정 시 가교된 히알루론산 겔과 용액이 분리가 되지 않는 문제로 인해 팽윤도를 측정할 수 없었다.
상기 표 1의 물리적 특성의 결과를 종합하면, 실시예 1 및 실시예 2는 종래 단일상 필러와 유사한 압축력 및 점착력을 가져 주입 부위에서 이탈할 가능성이 낮음과 동시에 팽윤도가 낮아 체내 주입 시 팽윤 현상이 현저하게 감소됨을 알 수 있다. 또한 높은 탄성 계수(G')를 갖는다는 사실로부터 주입된 형태를 장기간 유지할 수 있음을 알 수 있다.
실험예 2: 가교된 히알루론산을 동물에 적용시 상승 및 부피증가 영향 측정: 상승 및 부피 증가 시험(lifting and volumizing test)
무모 마우스(SKH1-hr) 6주령 암컷(20±3g) 52마리를 오리엔트바이오(대한민국)로부터 입수하여 약 1주 이상 순화하였다. 상기 순화된 마우스에 케타민(100 mg/kg)과 럼푼(10 mg/kg) 혼합 마취제를 복강 내 주사하여 마취한 후 등쪽 부위(dorsal region site)에 상기 실시예 1 내지 2 및 비교예 1 내지 3을 유리 주사기를 사용하여 각각 0.1 mL씩 피하로 주입하였다. 주입 후, 지정된 날짜에 따라 개체의 체중을 측정하였다. 주입 부위에 대해서는 Primos 5.8E(Canfield Scientific Inc, NJ, USA)를 이용하여 주입 부위의 높이, 주입물의 최대 길이 및 부피를 측정하였다. 아울러, 주입 부위를 육안 관찰하고, 사진 촬영을 하였다.
도 1은 히알루론산 겔을 피내에 주입 후 42주까지 부피 변화를 관찰한 것이다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 종래 단일상의 가교된 히알루론산 겔인 비교예 1의 경우 주입 초기 부피가 크게 증가하고(초기 주입 부피 대비 약 100% 증가) 시간이 경과함에 따라 부피가 크게 감소하는 것에 비해, 실시예 1 및 실시예 2는 주입 초기 대비 부피 변화가 작거나 거의 없는 것으로 나타났다(초기 주입 부피 대비 약 10% 증가). 또한, 실시예 1 및 실시예 2는 24주가 경과하는 동안 부피 손실이 상대적으로 적다는 것을 확인할 수 있다.
종합하면, 실시예 1 및 실시예 2는 주입 후 초기 단계에 팽윤 현상이 작아 주입 시 본래의 부피를 유지할 수 있으며, 주입 후 24주까지의 부피 변화가 적다는 것을 확인하여 생체 내 지속성 및 생체 적합성이 우수함을 확인하였다.

Claims (14)

  1. 임계 변형률(critical strain)이 10% 내지 100%이고, 팽윤도(swelling degree)가 1% 내지 100%인 히알루론산 가교체.
  2. 청구항 1에 있어서, 평균 입도가 50 um 내지 150 um 범위인 히알루론산 가교체.
  3. 청구항 1에 있어서, 탄성 계수(G')가 400 Pa 내지 2,000 Pa인 것인 히알루론산 가교체.
  4. 청구항 1에 있어서, 점성 계수(G”)가 100 Pa 내지 600 Pa인 것인 히알루론산 가교체.
  5. 청구항 1에 있어서, 압축력이 15 Nㆍs 내지 100 Nㆍs인 것인 히알루론산 가교체.
  6. 청구항 1에 있어서, 주입력이 1 N 내지 50 N인 것인 히알루론산 가교체.
  7. 청구항 1에 있어서, 이작용성 에폭시 기를 가진 가교제로 가교된 것인 히알루론산 가교체.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 이작용성 에폭시 기를 가진 가교제는 1,4-부탄디올디글리시딜 에테르, 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(프로필렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리(테트라메틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 디글리시딜 에테르, 트리에틸렌 디글리시딜에테르, 트리메틸롤프로판 트리글리시딜 에테르, 에틸렌 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 및 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르로 이루어진군으로부터 선택된 하나 이상인 것인 히알루론산 가교체.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항의 히알루론산 가교체를 포함하는 충전제 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서, 히알루론산 가교체의 농도가 10 mg/mL 내지 30 mg/mL인 조성물.
  11. 청구항 9에 있어서, 가교되지 않은 히알루론산을 추가로 포함하지 않은 것인 조성물.
  12. 청구항 9에 있어서, 국소 마취제를 더 포함하는 것인 조성물.
  13. 청구항 9에 있어서, 주사기에 충전되어 있는 것인 조성물.
  14. 청구항 9에 있어서, 안면부 성형, 주름 개선, 안면 윤곽술, 가슴 성형, 가슴확대술, 성기 확대, 귀두 확대, 요실금 치료, 및 관절염 치료로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도로 사용하기 위한 것인 조성물.
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