WO2022236789A1 - 华石斛、密花石斛或本斯石斛的提取物及其主要成分作为抗炎症制剂的应用 - Google Patents

华石斛、密花石斛或本斯石斛的提取物及其主要成分作为抗炎症制剂的应用 Download PDF

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derianthridin
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inflammation
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梅文莉
蔡彩虹
盖翠娟
杨理
魏艳梅
王雅丽
戴好富
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所
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    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the preparation method of the Dendrobium extract comprises: taking the plant to dry and pulverize, extracting three times with 2 times of ethanol, concentrating, extracting and defatting three times with the same volume of petroleum ether, and adjusting the pH value to 9.0- 10.0, filtered, extracted 3 times with 1 volume of ethyl acetate, and concentrated to obtain the ethyl acetate fraction to obtain the dendrobium extract.
  • the compounds of the present invention can be prepared into various agricultural or clinical conventional preparations according to the conventional preparation methods in the art, for example, pharmaceutically acceptable adjuvants (such as disintegrants, lubricants, binders, dispersants, etc.), prepared into various oral medicaments, the present invention is preferably made into tablets, granules, capsules, powders, pills or oral liquids.
  • pharmaceutically acceptable adjuvants such as disintegrants, lubricants, binders, dispersants, etc.
  • auxiliary materials used in the preparation are also well known in the art, such as carboxymethyl Sodium starch, sucrose powder, honey, sesame oil, etc.
  • the extract and the main compound of the present invention have better drug activity than genistein and quercetin, and their toxicity and residue are lower than those of gold Fennel Isoflavones and Quercetin.
  • the present invention is safe and reliable, and can be used in medicine to treat inflammations such as the oral cavity and throat, and has no toxic side effects and drug dependence on the human body, is superior to existing medicines, and can be widely used in the treatment of inflammations such as the oral cavity and throat.
  • the raw materials and reagents used can be purchased from the market.
  • Dendrobium sinense (scientific name: Dendrobium sinense T.Tang et F.T.Wang) dry product
  • the ethyl acetate part A section obtains Densiflorol A (57mg)
  • the B section obtains 3,4,3'-Trimethoxy-5,4 '-dihydroxybibenzyl (267mg)
  • C section Aloifol I (179mg) (40% methanol) and 5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz (88mg) were obtained by ODS chromatography (methanol aqueous solution 30%-100%) (60% methyl alcohol)
  • D section obtains Derianthridin A (56mg) (50% methanol) and B (72mg) (30% methanol) through ODS chromatography column (methanol aqueous solution 30%-100%)
  • E section obtains Derianthridin C ( 33mg)
  • section F obtains Derianthridin D (91mg
  • the purpose extract or the separated eight main component compounds Derianthridin A, Dendrobium B, Derianthridin B, Dendrobium C, Derianthridin C, Dendrosinen D, Dendrosinen D, 4,5'-dihydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl Aloifol I, 3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl, 5,3'-Dihydroxy-3,4- 50g each of dimethoxybibenzyl and Densiflorol A.
  • the purpose extract or the separated eight main component compounds Derianthridin A, Dendrobium B, Derianthridin B, Dendrobium C, Derianthridin C, Dendrosinen D, Dendrosinen D, 4,5'-dihydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl Aloifol I, 3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl, 5,3'-Dihydroxy-3,4- 50g each of dimethoxybibenzyl and Densiflorol A.

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Abstract

华石斛、密花石斛或本斯石斛的提取物及其含有的八种主要活性成分：华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5'-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A。所述石斛提取物及其主要活性成分能够有效抗炎，并且对人体无毒副作用和药物依赖型，抗炎症活性实验药效优于现有的常用西药，可以广泛应用于消除咽喉和扁桃体等炎症，可用于治疗各种炎症的口服和外用消炎药制备。

Description

[根据细则37.2由ISA制定的发明名称]　华石斛、密花石斛或本斯石斛的提取物及其主要成分作为抗炎症制剂的应用 技术领域
本发明涉及医药领域，特别涉及短棒石斛、聚石斛或红牙刷石斛的提取物及其主要成分化合物作为抗炎症制剂的应用。
背景技术
炎症(inflammation)：就是平时人们所说的“发炎”，是机体对于刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。炎症，可以是感染引起的感染性炎症，也可以不是由于感染引起的非感染性炎症。通常情况下，炎症是有益的，是人体的自动的防御反应，但是有的时候，炎症也是有害的，例如对人体自身组织的攻击、发生在透明组织的炎症等等。抗炎药是用于治疗组织受到损伤后所发生的反应炎症的药物。抗炎药有两大类：一类是甾体抗炎药，另一类是非甾体抗炎药即医疗实践中所指的解热镇痛抗炎药如阿司匹林等。非甾体抗炎药通过抑制前列腺素的合成，抑制白细胞的聚集，减少缓激肽的形成，抑制血小板的凝集等作用发挥抗炎作用。由于非甾体抗炎药抑制了前列腺素的合成，因此在起抗炎作用的同时，也造成了对胃、十二指肠溃疡引起的上消化道出血等胃肠道的副作用。
我国传统中草药在人们防病治病中起着毋庸置疑的作用，从传统中草药中挖掘活性成分是自主知识产权新药研发的重要手段和科技前沿，符合国际药物研发趋势，具有广阔的应用前景。石斛为“中华九大仙草”之首，其味淡微咸，具有健脾生津，滋阴养胃、润肺止咳等功能。是重要的药食两用药材，对人体和环境安全友好。
现有的研究资料表明一些中药的一些酚性成分具有显著的抗炎症活性，提示医疗可用做抗炎药物。应该考虑传统中药中筛选发现抗炎症活性酚性成分，并通过化学方法进行合成。因此，开发具有低毒性且疗效显著的抗炎症活性医用药物，对人类社会具有显著的社会和经济效益前景。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了短棒石斛、聚石斛或红牙刷石斛的提取物及其主要成分化合物作为抗炎症制剂的应用。提取物及其主要成分，其能够有效地抗炎症反应，并且对人体无毒副作用和药物依赖型，抗炎症活性实验药效优于现有的常用西药，可以广泛应用于消除咽喉和扁桃体等炎症，可用于治疗各种炎症的口服和外用消炎药制备。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了石斛提取物，其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述石斛提取物的制备方法包括：取植物晾干粉碎，2倍乙醇提取三次，浓缩，经同体积石油醚萃取脱脂3次，调整pH值为9.0～10.0，过滤，1倍体积乙酸乙酯萃取3次，浓缩，获得乙酸乙酯部分，制得所述石斛提取物。
在本发明的一些具体实施方案中，所述石斛包括植物华石斛、密花石斛或本斯石斛中的一种或多种；具体的，所述石斛来源于植物华石斛(学名：Dendrobium sinense T.Tang etF.T.Wang)、密花石斛(学名：Dendrobium densiflorum Lindl.)和本斯石斛(学名：Dendrobium bensoniae Rchb.f.)提取分离或通过化学合成。
本发明还提供了所述的石斛提取物或其主要成分化合物在制备预防和/或治疗炎症的制剂或药物中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述炎症包括：口腔炎症、咽喉炎症、扁桃体炎症或肠道炎症中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、 3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
本发明还提供了预防和/或治疗炎症的制剂，包括所述石斛提取物或其主要成分化合物，以及可接受的助剂；所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
本发明还提供了预防和/或治疗炎症的药物，包括所述石斛提取物或其主要成分化合物，以及可接受的辅料；所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述药物的剂型包括水溶剂或固体剂；所述固体及包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂中的一种或多种。
本发明公开了三种植物提取物及八种化合物用于医药领域的应用。所述植物提取物为华石斛、密花石斛和本斯石斛三种植物的提取物及其八种主要活性成分。本发明利用植物提取分离方法获得的提取物及其主要成分，其能够有效地抗炎症反应，并且对人体无毒副作用和药物依赖型，抗炎症活性实验药效优于现有的常用西药，可以广泛应用于消除咽喉和扁桃体等炎症，可用于治疗各种炎症的口服和外用消炎药制备。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示三种石斛提取物和八种化合物的植物化学制备流程。
具体实施方式
本发明公开了短棒石斛、聚石斛或红牙刷石斛的提取物及其主要成分化合物作为抗炎症制剂的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的目的在于提供三种石斛提取物及其主要成分化合物的应用，使得所述提取物和化合物对具有抗炎症活性，具有消除炎症的疗效，且安全性高，无毒副作用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
化合物的结构为
Figure PCTCN2021093730-appb-000001
式I 八种化合物的结构
上述药物化学名称为：
华石斛素A Derianthridin A
华石斛素B Derianthridin B
华石斛素C Derianthridin C
华石斛素D Dendrosinen D
4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I
3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl
5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl
密花石斛醇A Densiflorol A
华石斛素A Derianthridin A，橙色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +260，分子式C 15H 16O 4， 13C NMR(CD 3OD,125MHz)δ C:141.9s,102.9d,154.2s,136.7s,151.2s,107.9d,141.3s,117.5d,158.2s,114.0d,130.0d,121.9d,76.5d,46.8t,56.3q,61.0q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
华石斛素B Derianthridin B，橙色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +283，分子式C 15H 16O 4， 13C NMR(CD 3OD,125MHz)δ C:134.0s,105.0d,159.4s,133.1s,146.2s,109.9d,144.8s,116.4d,158.2s,113.6d,130.2d,120.9d,38.8t,39.2t,56.5q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
华石斛素C Dendrosinen C，白色粉末，ESI-MS m/z:[M+Na] +297，分子式C 15H 14O 5， 13C NMR(CD 3OD,125MHz)δ C:128.7s,111.8d,146.3s,141.3s,149.4s,105.5d,138.3s,117.2d,158.6s,114.7d,130.6d,121.6d,199.3s,46.0t,56.7q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
华石斛素D Derianthridin D，橙色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +539，分子式C 30H 28O 8， 13C NMR(CD 3OD,125MHz)δ C:137.3s,138.2s,142.2s,110.2d,118.0s,140.5s,141.5s,117.6d,157.8s,114.0d,129.7d,122.1d,40.1d,46.6t,61.7q,147.9s,134.0s,143.0s,130.1s,109.0d,144.6s,113.9d,158.3s,116.5d,130.3d,120.9d,34.6t,39.0t,56.7q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I，黄色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +274，分子式C 16H 18O 4, 13CNMR(CD 3OD,125MHz)δ C:143.6s,108.1d,149.1s,138.3s,152.2s,104.6d,133.7s,115.5d,155.8d,113.0d,129.6s,120.8d,37.7t,37.8t,55.9q,56.9q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中 提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl，黄色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +341，分子式C 18H 22O 5, 13C NMR(CD 3OD,125MHz)δ C:145.9s,108.3d,150.1s,137.8s,134.9s,105.4d,153.2s,113.2d,147.4s,115.5d,122.5d,135.7s,38.0t,37.7t,60.8q,56.1q,56.2q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl，黄色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +297，分子式C 16H 18O 4, 13C NMR(CDCl 3,125MHz)δ C:135.7s,108.3d,153.2s,145.6s,144.5s,105.4d,150.1s,116.4d,137.8s,115.9d,122.8d,135.3s,38.0t,37.7t,60.8q,56.1q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
密花石斛醇A Densiflorol A，无色油状，ESI-MS m/z:[M+Na] +295，分子式C 16H 16O 4, 13C NMR(CDCl 3,125MHz)δ C:147.6s,145.7s,100.8d,109.0d,121.3d,108.2d,144.5s,108.1d,156.7s,99.2d,160.9s,106.8d,38.3t,37.3t,56.7q。一种华石斛、密花石斛或本斯石斛茎中提取分离的联苄类物质，为已知化合物，未见抗炎症活性报道。
植物化学制备方法：华石斛(学名：Dendrobium sinense T.Tang etF.T.Wang)、密花石斛(学名：Dendrobium densiflorum Lindl.)和本斯石斛(学名：Dendrobium bensoniae Rchb.f.)的植物晾干粉碎后，2倍乙醇提取三次，浓缩至浑浊(体积1/10)，经同体积石油醚萃取脱脂后3次，经过调整pH值(9.0-10.0)过滤后，1倍体积乙酸乙酯萃取三次浓缩成浸膏获得乙酸乙酯部分，作为发明的目的提取物。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析(200-300目，石油醚-乙酸乙酯10:1、5:1、3:1、2:1、1:1和1:2)层析分别分为A-F段，经标准品确定化合物所在部位，重点分离。化合物所在部位经ODS、MCI(甲醇：水，3：10-0:10)和正相硅胶等反复色谱分离后纯化或析出结晶，过滤结晶获得单体化合物。
例如：10Kg华石斛(学名：Dendrobium sinense T.Tang etF.T.Wang)干品的乙酸乙酯部分A段获得Densiflorol A(57mg)，B段获得 3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(267mg),C段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(179mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(88mg)(60％甲醇)，D段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Derianthridin A(56mg)(50％甲醇)和B(72mg)(30％甲醇)，E段获得Derianthridin C(33mg)，F段获得Derianthridin D(91mg)；10Kg密花石斛(学名：Dendrobium densiflorum Lindl.)干品的乙酸乙酯部分A段获得Densiflorol A(97mg)，B段获得3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(122mg),C段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(371mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(126mg)(60％甲醇)；本斯石斛(学名：Dendrobium bensoniae Rchb.f.)干品的乙酸乙酯部分B段获得3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(33mg)，C段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(115mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(342mg)(60％甲醇)，F段获得Derianthridin B(42mg)(流程见图1)。
在制备抗炎症药物的应用中，本发明所述化合物可按本领域常规制剂方法制备成各种农用或临床上常规制剂，例如，可以向本发明有效量的剂量下加入药学上可接受辅料(例如崩解剂、润滑剂、黏合剂、分散剂等)，制备成各种口服药剂，本发明优选制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂或口服液。
对于本领域技术人员来说，在知晓活性成分的情况下，可根据常规的制剂方法，轻易的制成各种药剂产品，同时在制备中所采用的辅料也为本领域所公知，如羧甲淀粉钠、蔗糖粉、蜂蜜、芝麻油等。
在本发明所述化合物与现有药物金雀异黄酮和槲皮素对比试验中，本发明所述提取物和主要化合物药物活性优于金雀异黄酮和槲皮素，毒性和残留低于金雀异黄酮和槲皮素。
同时，在对本发明所述化合物的动物急性毒性和长期毒性的研究中未发现本发明所述化合物有任何不良反应，对各器官无损伤。在临床试验中，本发明所述化合物对口腔和咽喉等炎症有明显的疗效，且无毒副作用和药 物依赖性。
由以上技术方案可知，本发明安全可靠，医用可以治疗口腔和咽喉等炎症，并且对人体无毒副作用和药物依赖型，优于现有的医药，可以广泛应用于治疗口腔和咽喉等炎症。
本发明提供的短棒石斛、聚石斛或红牙刷石斛的提取物及其主要成分化合物作为抗炎症制剂的应用中，所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 提取物的制备
华石斛(学名：Dendrobium sinense T.Tang etF.T.Wang)、密花石斛(学名：Dendrobium densiflorum Lindl.)和本斯石斛(学名：Dendrobium bensoniae Rchb.f.)的植物晾干粉碎后，2倍乙醇提取三次，浓缩至浑浊(体积1/10)，经同体积石油醚萃取脱脂后3次，经过调整pH值(9.0-10.0)过滤后，1倍体积乙酸乙酯萃取三次浓缩成浸膏获得乙酸乙酯部分，作为发明的目的提取物。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析(200-300目，石油醚-乙酸乙酯10:1、5:1、3:1、2:1、1:1和1:2)层析分别分为A-F段，经标准品确定化合物所在部位，重点分离。化合物所在部位经ODS、MCI(甲醇：水，3：10-0:10)和正相硅胶等反复色谱分离后纯化或析出结晶，过滤结晶获得单体化合物。
例如：10Kg华石斛(学名：Dendrobium sinense T.Tang etF.T.Wang)干品的乙酸乙酯部分A段获得Densiflorol A(57mg)，B段获得3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(267mg),C段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(179mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(88mg)(60％甲醇)，D段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Derianthridin A(56mg)(50％甲醇)和B(72mg)(30％甲醇)，E段获得Derianthridin C(33mg)，F段获得Derianthridin D(91mg)；10Kg密花石斛(学名：Dendrobium densiflorum Lindl.)干品的乙酸乙酯部分A段获得Densiflorol A(97mg)，B段获得3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(122mg),C段经ODS 层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(371mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(126mg)(60％甲醇)；本斯石斛(学名：Dendrobium bensoniae Rchb.f.)干品的乙酸乙酯部分B段获得3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl(33mg)，C段经ODS层析柱(甲醇水溶液30％-100％)获得Aloifol I(115mg)(40％甲醇)和5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenz(342mg)(60％甲醇)，F段获得Derianthridin B(42mg)(流程见图1)。
实施例2 制备本发明所述化合物的胶囊剂
按下述重量称取各原料(单位：g):
对三种石斛按照实施例1的提取方法制备的目的提取物或分离的八种主要成分化合物华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl和密花石斛醇A Densiflorol A各50g。
将对提取物或化合物分别加入乙醇100mL，过滤，加入羧甲淀粉钠，充分混匀，喷雾干燥制成颗粒，分别装入1号胶囊，即得胶囊剂。
实施例3 制备本发明所述化合物的片剂
按下述重量称取各原料(单位：g):
对三种石斛按照实施例1的提取方法制备的目的提取物或分离的八种主要成分化合物华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl和密花石斛醇A Densiflorol A各50g。
将对提取物或化合物分别加入乙醇100mL，过滤，加入羧甲淀粉钠，充分混匀，分别喷雾干燥制成颗粒，送至压片机压片即得。
实施例4 制备本发明所述化合物的丸剂
按下述重量称取各原料(单位：g):
对三种石斛按照实施例1的提取方法制备的目的提取物或分离的八种主要成分化合物华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl和密花石斛醇A Densiflorol A各50g。
将对提取物或化合物分别加入乙醇100mL，过滤，加入羧甲淀粉钠，充分混匀，喷雾干燥制成颗粒，接着加入纯芝麻油或者蜂蜜混匀，送至离心造丸机制成丸剂。
实施例5 本发明所述提取物和化合物的体外抗炎症活性
所有待测样品以及阳性对照均用DMSO溶解；提取物或单体化合物先粗筛，一般终浓度最大值200μM，可适当调整；若测IC 50值，再稀释几个浓度，按相同的方法检测即可。若为粗样，一般终浓度最大值200μg/mL，可适当调整。先用MTT法检测200μg/mL或μM浓度下提取物和化合物的细胞毒性(200μg/mL抑制率)。
抗炎活性测试(化合物对LPS诱导RAW264.7细胞产生NO抑制活性)
选取RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)，在96孔平底细胞培养板上接种100μL浓度为5×10 4个/mL的细胞，培养于37℃，5％CO 2，90％以上湿度的条件下，24h后加入50μL配制好的待测化合物溶液，继续在该条件下培养，1h后加入50μL配制的LPS(终浓度1μg/mL)溶液，24h后每孔取上清100μL于新的96孔板中，之后向每孔加入100μL Griess试剂，十字交叉法混匀。于酶标仪540nm波长下测定并记录每孔的吸光度，按下面公式计算NO抑制率。对照组为槲皮素，阴性对照组为DMSO，把待测化合物倍半稀释5个浓度梯度。用横坐标表示待测化合物 浓度，纵坐标表示抑制率，作图求出待测化合物的IC 50值。
抑制率(％)＝(C 2-C 1)/(C 2-C 0)×100％；
式中：C 0、C 1、C 2分别为540nm下测得的空白对照组(不加LPS)、实验组、阴性(加LPS)对照组的吸光值。计算各浓度下的抑制率并绘制化合物浓度—抑制率曲线图，计算得到化合物对LPS诱导RAW264.7产生NO的半抑制浓度(IC 50值)。
表1.提取物和化合物体外抗炎症活性
Figure PCTCN2021093730-appb-000002
通过表1的结果显示，三种石斛的提取物表现出较强的抗炎症活性，IC 50分别达到91.61±1.74、128.47±1.45、70.97±1.25μg/mL；其主要成分化合物也表现得比现有的阳性对照药物槲皮素还要好，IC 50值分别达到 0.74-5.62μM，其细胞毒性也很小，CC 50大于200μM，从而使化合物具有更好的安全性。这说明三种石斛的提取物及其主要成分化合物具有很好的体外抗炎症活性和很好的安全性。
实施例6 本发明所述化合物毒性研究
1、急性毒性研究
取昆明种小鼠，按1g/kg灌胃给予本发明药物(实施例2所制备的提取物和化合物胶囊内粉末)，1天连续给药4次，每次间隔6h，然后给予正常饮食，对各个器官进行病理性检查，未发现脏器病变。
2、长期毒性研究
取昆明种小鼠，按中、大剂量组(1g/kg，2g/kg)灌胃给予本发明药物(实施例2所制备的化合物胶囊内粉末)，每天1次，连续给药14天后，测定小鼠体重、心功能、肝功能、肾功能、心电图等指标，给药组分别与对照组比较，未见明显异常。病理学检查心、肝、肾、脾、肺、胃、十二指肠、大肠、小肠、肾上腺和生殖器等脏器，给药组分别与对照组比较，均未见明显中毒性改变。以上结果表明本发明所述提取物和化合物安全无毒，可用于临床。
实施例7 本发明所述提取物和化合物制剂的分别进行了临床试验
1、试验对象资料
单一组：女27例，男19例，感冒引发咽炎或扁桃体炎病程1～3天，年龄18～45岁。口服感康，2次/d。
联合用药组：感冒引发咽炎或扁桃体炎患者，病程1～3天，随机平分联合组女23例，男21例，病程1-3年，年龄18～45岁，以感康+口服提取物或化合物制剂(实施例1胶囊)50mg/次，3次/d。持续治疗1周。
联合用药组(含三种石斛提取物、八种化合物和阳性对照阿司匹林)共15组，每组46病例。
2、临床结果
2.1、临床主要症状体征改善情况，未住院。
检查咽部和扁桃体炎症情况，记录炎症消退所需时间(天)。
咽部、扁桃体红肿化脓，记录3；红肿记录2，轻微红肿记录1，消退记录0，改组分数累加。采用SPSS 22.0统计学软件，计量资料以
Figure PCTCN2021093730-appb-000003
表示、t检验，计数资料用n(％)表示、χ 2检验。
2.2、各种检查结果
联合组总有效率99.9％，单一组78.7％(P>0.05)。联合用药组治疗后2天局部炎症反应明显降低，3-4天炎症基本消退。未见胃肠道反应发生，单一组肠道反应发生率为19.6％(P<0.02)。结果见表2。
表2 提取物和化合物制剂临床试验(P<0.02)
Figure PCTCN2021093730-appb-000004
2.3、临床结果总结。
①、三种提取物和7种化合物胶囊分别对46例感冒引起咽炎扁桃体炎临床治疗综合观察，结果表明，此药作为口服抗炎症联合感冒药联合使用，具有明确的消炎疗效，能够提前消除咽喉和扁桃体炎症反应，也能抑制肠道不良反应。
②、毒副作用观察结果：所治疗的每组例患者，没有一例患者出现任何不良反应，消化道反应均为0，说明本发明药物对人体是安全的。
上述临床观察结果表明本发明化合物用于治疗炎症反应，辅助治疗感冒引起的咽喉和扁桃体炎症疗效显著，无毒副作用，无药物依赖性。
以上对本发明所提供的短棒石斛、聚石斛或红牙刷石斛的提取物及其主要成分作为抗炎症制剂的应用进行了详细介绍。本文应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (9)

  1. 石斛提取物，其特征在于，其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
  2. 如权利要求1所述的石斛提取物，其特征在于，其制备方法包括：取植物晾干粉碎，2倍乙醇提取三次，浓缩，经同体积石油醚萃取脱脂3次，调整pH值为9.0～10.0，过滤，1倍体积乙酸乙酯萃取3次，浓缩，获得乙酸乙酯部分，制得所述石斛提取物。
  3. 如权利要求1或2所述的石斛提取物，其特征在于，所述石斛包括植物华石斛、密花石斛或本斯石斛中的一种或多种。
  4. 如权利要求1至3任一项所述的石斛提取物或其主要成分化合物在制备预防和/或治疗炎症的制剂或药物中的应用。
  5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述炎症包括：口腔炎症、咽喉炎症、扁桃体炎症或肠道炎症中的一种或多种。
  6. 如权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
  7. 预防和/或治疗炎症的制剂，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的石斛提取物或其主要成分化合物，以及可接受的助剂；
    所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、 3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
  8. 预防和/或治疗炎症的药物，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的石斛提取物或其主要成分化合物，以及可接受的辅料；
    所述其主要成分化合物包括华石斛素A Derianthridin A、华石斛素B Derianthridin B、华石斛素C Derianthridin C、华石斛素D Dendrosinen D、4,5′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄Aloifol I、3,4,3'-Trimethoxy-5,4'-dihydroxybibenzyl、5,3'-Dihydroxy-3,4-dimethoxybibenzyl或密花石斛醇A Densiflorol A中的一种或多种。
  9. 如权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括水溶剂或固体剂；所述固体及包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂中的一种或多种。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170057906A1 (en) * 2015-06-16 2017-03-02 Hong Kong Baptist University Skin-protection composition containing dendrobium-based ingredients
CN108605931A (zh) * 2018-04-20 2018-10-02 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 四种化合物在制备杀线虫药物中的应用
CN111087285A (zh) * 2019-11-25 2020-05-01 浙江大学 一种从铁皮石斛中提取联苄类化合物的方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170057906A1 (en) * 2015-06-16 2017-03-02 Hong Kong Baptist University Skin-protection composition containing dendrobium-based ingredients
CN108605931A (zh) * 2018-04-20 2018-10-02 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 四种化合物在制备杀线虫药物中的应用
CN111087285A (zh) * 2019-11-25 2020-05-01 浙江大学 一种从铁皮石斛中提取联苄类化合物的方法及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAI, CAIHONG: "Chemical Constituents from Dendrobium Sinense (Ⅱ)", GUIHAIA, vol. 40, no. 9, 30 September 2020 (2020-09-30) *
CHEN, XIUJUAN: "Chemical Components and Bioactivities of Dendrobium Sinense(Orchidaceae), an Endeimic Species in Hainan Island", MEDICINE & PUBLIC HEALTH, CHINESE SELECTED DOCTORAL DISSERTATIONS AND MASTER'S THESES FULL-TEXT DATABASES, no. 07, 15 July 2015 (2015-07-15), pages 1 - 70, XP009540999 *
FAN CHENGQI; WANG WEI; WANG YIPING; QIN GUOWEI; ZHAO WEIMIN: "Chemical constituents fromDendrobium densiflorum", PHYTOCHEMISTRY, vol. 57, no. 8, 31 August 2001 (2001-08-31), Amsterdam , NL , pages 1255 - 1258, XP029986325, ISSN: 0031-9422, DOI: 10.1016/S0031-9422(01)00168-6 *
SU SHUANG-QIAO , JIANG HUI , LI QIANG-MING , ZHA XUE-QIANG , LUO JIAN-PING: "Study on Chemical Constituents of Dendrobium Huoshanense Stems and Their Anti-inflammatory Activity", CHINA JOURNAL OF CHINESE MATERIA MEDICA, vol. 45, no. 14, 31 July 2020 (2020-07-31), pages 3452 - 3458, XP093003480, DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20200423.201 *

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