JP2011510912A - ラカンカ抽出物含有創傷治癒剤 - Google Patents

Abstract

【課題】創傷治癒効果を有するラカンカ抽出物を提供すること。
【解決手段】皮膚創傷誘導動物モデルにより創傷縫合及び創傷治療に必要な時間を短縮できることが確認されたラカンカ抽出物を有効成分として含有する創傷治癒局所経皮薬剤。
【選択図】図１

Description

本発明は創傷治癒効果を有するラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｓｅｍｅｎ）抽出物に関する。更に、本発明は、皮膚創傷誘導動物モデルにより創傷縫合及び創傷治療に必要な時間を短縮できることが確認されたラカンカ抽出物を有効成分として含有する創傷治癒局所経皮薬剤に関する。

ラカンカは中国南部地方に広く分布する多年生つる植物であるラカンカの成熟した種子である。９〜１１月頃に果実を採取した後、次のように処理する。各果実を半分に切り、片方を乾かした時にすぐに種子を取り出すか、または、果実を種子ごとつぼに入れて、果皮が腐敗したら種子を取り出す。

該方法で処理したラカンカは強力な消炎作用と、リウマチ痛、筋肉痙攣などに対して治療効果がある。最近まで、ラカンカ抽出物の成分としては、ステロール、オレアノール酸、モモルディン酸（ｍｏｍｏｒｄｉｃ ａｃｉｄ）、モモルディカ・サポニンＩ、IIなどが知られている。

今日、一般的な皮膚創傷治療のために広く使用されている外用薬剤としては、バシトラシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、メクロサイクリン、ポリミキシン、ニトラフラゾン、スルファジアジン、フシジン酸などがある。実際、糖尿病性足潰瘍のような難治性創傷を効果的に治療するための優れた新規の創傷治癒剤に対する需要が非常に高い。更に、ヒドロゲルまたはポリウレタンフォームのような湿潤ドレッシング剤と前記外用薬剤が配合された機能性ドレッシング剤などの新規の創傷治癒剤が開発されれば、高付加価値製品を創出できる。

本発明者らは、化学物質に比べ、局所塗布による副作用や毒性が少ない植物化学物質を使用した創傷治療または緩和用薬剤を開発するために努力した。選別した生薬抽出物を皮膚創傷マウスモデルを実験に適用し、その結果、ラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含む分画物が創傷皮膚の縫合または治療に必要な時間を著しく短縮できることが分かった。

従って、本発明の目的は、ラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物を含有する創傷治癒剤を提供することある。

本発明は、ラカンカ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする創傷治癒剤に関する。

前記ラカンカ抽出物は下記式１で表されるモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含有するラカンカ分画物を含む。

（式１）

図１は皮膚創傷マウスモデルで見られる創傷治癒効果を表す。

本発明を以下に更に説明する。

本発明は、皮膚創傷誘導動物モデルにより創傷縫合及び創傷治療に必要な時間を著しく短縮できるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含むラカンカ分画物を含有する局所経皮投与用創傷治癒剤に関する。

本発明によるラカンカ抽出物は、乾燥したラカンカより２〜１０倍の水またはアルコール水溶液でラカンカを抽出して得られ、また、従来の生薬抽出方法によっても得られる。前記で使用されるアルコールはＣ₁−Ｃ₆のアルコールが好ましく、更に好ましくはメタノール、エタノールなどを使用する。

本発明によるモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物は、極性溶媒を使用する従来の方法でラカンカを処理して得られたラカンカ抽出物から得られる。前記ラカンカ分画物は、非イオン吸着樹脂または逆相シリカ樹脂を利用した従来のカラムクロマトグラフィにてラカンカ抽出物を処理して効率的に生産されるか、または、有機溶媒を利用したサポニン沈殿法により生産され、前記有機溶媒はアセトン、酢酸エチルなどが好ましい。

カラムクロマトグラフィを行う際、アンバーライトＸＡＤ−１６またはオクタデシルシリル（ＯＤＳ）−シリカ樹脂は、メタノール水溶液、エタノール、アセトンなどの有機溶媒と使用され、それによってサポニンが高濃度で含まれた分画物がラカンカ抽出物から選択的に製造される。

ラカンカ抽出物は３〜５倍（ｗ／ｗ）の精製水に溶かして、精製水より５〜１０倍（ｗ／ｗ）のアセトンを添加した後、サポニンを選択的に沈殿させることで、最終的にモモルディカ・サポニンの含量が増加した分画物を製造する。

本発明によるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物は従来の方法を利用して製造され、有効成分としてラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物を薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤などと２００００〜２０：１の質量比で混合し、全体の薬剤組成物の量に対して０．０１〜３０質量％の質量比で含有させる。このようにして、創傷治癒局所経皮薬剤は軟膏剤、ドレッシング剤、パッチ剤などの形態に製造され得る。

更に、本発明によるラカンカ抽出物または分画物の投与量は、体内吸収度、体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症度、医療専門家（または管理人）の判断と、患者の要求などによって異なる。

また、このように剤形化された単位投薬は、専門的な方法で使用され、あるいは医療専門家の指導及び監視による判断と個人の要求に応じて、一定間隔で投与され得る。

本発明を下記実施例により更に詳細に説明するが、本発明がこれらに限定されるわけではない。

製造例１：ラカンカ抽出物の製造
漢方薬市場で得たラカンカの種子を適切な大きさにすりつぶした後、そのラカンカ種子（１ｋｇ、乾燥質量）に１０％エタノール水溶液（２Ｌ）を添加し、８０℃の水槽に６時間２度抽出した。前記抽出液をろ過した後、ロータリーエバポレーターにて６０℃で減圧濃縮して真空オーブンで溶媒を完全に除去し、乾燥させて粉末化した後、ラカンカ抽出物（４０〜５０ｇ）が得られた。

製造例２：非イオン吸着樹脂を利用したモモルディカ・サポニンＩ分画物１の製造
製造例１で得た抽出物に対して非イオン吸着樹脂アンバーライトＸＡＤ−１６を利用してカラムクロマトグラフィを行った。１０％メタノールに溶解された前記抽出物（３０ｇ）を吸着樹脂カラム（１Ｌ）に注いだ。精製水と３０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液を各々樹脂体積の３倍量をカラムを介して流した後、溶出分画物を得た。前記分画物を乾燥し、最終的にモモルディカ・サポニンＩ分画物１（１０ｇ）が得られた。

製造例３：有機溶媒沈殿法を利用したモモルディカ・サポニンＩ分画物２の製造
製造例１で得た抽出物をアセトンなどの有機溶媒を利用した沈殿法にてモモルディカ・サポニンＩが高濃度で含まれた分画物を得た。製造例１で得られた抽出物（１００ｇ）を精製水（３００〜５００ｍＬ）に溶解した後、アセトン（１８００〜３０００ｍＬ）を添加して混合した後、サポニンを含む沈殿が発生した。前記沈殿をろ紙を利用して分離して乾燥した後、モモルディカ・サポニンＩ分画物２（６０ｇ）が得られた。

製造例４：逆相シリカ樹脂クロマトグラフィを利用したモモルディカ・サポニンＩ分画物３の製造
オクタデシルシリル（ＯＤＳ）−シリカ樹脂（ＹＭＣ^*ＧＥＬ ＯＤＳ−Ａ １２ｎｍ、Ｓ−１５０ｍ）を利用したカラムクロマトグラフィを製造例３で得た抽出物に対して行った。試料１０ｇに対して前記樹脂２５０ｇが使用された。樹脂の２〜３倍量の３０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液を流した後、樹脂の２〜３倍量の６０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液を流して溶出分画物を得た。

この分画物を減圧濃縮し、真空オーブンで溶媒を完全に乾燥させた後、モモルディカ・サポニンＩ分画物３（３．５ｇ）が得られた。

製造例５：モモルディカ・サポニンＩの純粋分離
製造例４で得た分画物からモモルディカ・サポニンＩが精製された。アセトニトリルと水の混合溶媒（２９：７１、０．１％トルフルオロ酢酸）を利用した高速液体クロマトグラフィ（ＨＬＰＣ）を１分９．５ｍＬの溶出率で行い、約４５分のピークが分取された。この分画物を減圧濃縮し、真空オーブンで完全に乾燥させた。使用したカラムはＹＭＣ Ｊ‘Ｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ−Ｈ８０であり、波長は２１０ｎｍであった。

得られた物質の構造を究明するために、ＭａｓｓとＮＭＲスペクトルデータを既存文献［Iwamoto, Okabe, Yamauchi, Tanaka, Rokutani, Hara, Mihashi, Higuchi. Studies on the constituents of Momordica cochinchinensis Spreng. I. Isolation and characterization of the seed saponins, Momordica saponin I and II. Chemical & pharmaceutical bulletin 1985, 33(2):464-478］のデータと比較した結果、ラカンカに存在すると報告されたモモルディカ・サポニンＩ（３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルクロノピラノシド−２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→３）−［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−フコピラノシルギプソゲニン）のデータと一致することを確認した。

分子量：１６７３．７７
融点：２４１〜２４４℃
比旋光度：［α］１９Ｄ＝−１４．８°（Ｃ０．７、ＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ＝１：２）

前記製造例１乃至４で得たラカンカ抽出物とモモルディカ・サポニンＩ分画物の含量は次の表１の通りである。

実施例１：ラカンカ抽出物の創傷治癒効果
１．試験物質及び投与
製造例１で得たラカンカ抽出物、製造例４で得たモモルディカ・サポニンＩ分画物３及び製造例５で得たモモルディカ・サポニンＩを０．５％ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）に各々５０、１０及び５μｇ／２０μＬの濃度で溶解した。このように準備された試験物質（２０μＬ）を１０日間連続して１日１度マウスの創傷皮膚に局所に投与した。

陽性対照薬としては、ＣＧＳ−２１６８０（トクリス社、米）を上のように準備し、１０μｇ／２０μＬの用量で１０日間連続して１日１度局所投与した。

２．実験方法
体重が２４ｇ±２ｇのＣＤ−１起源のオスのマウス２５匹を５群に分けた。前記マウスを個別のおりに入れた。ヘキソバルビタール（９０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）麻酔後、マウスの肩と背中の毛を剃った。鋭利なパンチ（ＩＤ１２ｍｍ）を利用して皮膚下の筋肉層と付着組織を含む皮膚部位を除去した。皮膚創傷後、実験物質であるラカンカ抽出物、モモルディカ・サポニンＩ分画物３、モモルディカ・サポニンＩ及びＣＧＳ−２１６８０を各々５０、１０、５及び１０μｇ／２０μＬの濃度で１０日間連続して１日１度マウスに局所投与した。

透明なプラスチックシート上に検出された創傷した皮膚面積を１、３、５、７、９及び１１日目にＩｍａｇｅ−ＰｒｏＰｌｕｓ（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｖｅｒｓｉｏｎ４．５．０２９）を使用して測定した。その後、創傷縫合率（％）と創傷の縫合に必要な時間（ＣＴ₅₀）をグラフ−プリズム（Ｇｒａｐｈ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＵＳＡ）（表２と図１）を使用して計算した。一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）の後、各測定時点で処理群と媒体群との比較のためにダネット検定を行った。差はＰ＜０．０５で有意差であった。

表２と図１で表されるように、本発明のラカンカ抽出物、モモルディカ・サポニンＩ含有ラカンカ分画物及びモモルディカ・サポニンＩが、優れた創傷治癒効果を有することがわかった。

（^*は媒体群対比Ｐ＜０．０５である）

実施例２：ラットに対する経口投与による急性毒性実験
６週齢のＳＰＦ（特定病原体未感染）ＳＤ系ラットに対して２週間反復投与毒性実験を行った。

製造例１で得たラカンカ抽出物と製造例４で得たモモルディカ・サポニンＩ分画物３を各々０．５％ＣＭＣに溶解させた。前記製剤を毎日各々２，０００ｍｇ／ｋｇと５００ｍｇ／ｋｇの用量で２週間ラット（５匹／群）に経口投与した。

１５日目、ラットの生存、臨床症状及び体重変化を観察した。その後、血液学的検査と血液生化学的検査を行った後、解剖して肉眼で観察し、腹腔臓器及び胸郭臓器の異常を観察した。その結果、目に見える臨床症状はなく、全てのラットが生存していた。更に、体重変化、血液学的検査、血液生化学検査、剖検所見でも毒性は見つからなかった。従って、本発明によるラカンカ抽出物とモモルディカ・サポニンＩ分画物３は経口投与の最小致死量（ＬＤ₅₀）が各々２，０００ｍｇ／ｋｇと５００ｍｇ／ｋｇであることを確認した。

製剤例１：経皮剤の製造
本発明のラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物を利用して次のように経皮剤を製造した。

［組成１］
有効成分０．０４ｇ、ポリアクリル酸ナトリウム１．３ｇ、グリセリン３．６ｇ、水酸化アルミニウム０．０４ｇ、メチルパラベン０．２ｇ、水１４ｇ。

［組成２］
有効成分０．０８ｇ、プロピレングリコール１．６ｇ、液体パラフィン０．８ｇ、ミリスチン酸イソプロピル０．４ｇ、ゲルバ（登録商標）１４３０ １６．４ｇ。

製剤例２：軟膏剤の製造
本発明のラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物から次のような組成にて軟膏剤を製造した。

［組成］
有効成分１ｇ、パルミチン酸セチル２０ｇ、セタノール４０ｇ、ステアリルアルコール４０ｇ、ミリスチン酸イソプロピル８０ｇ、モノステアリン酸ソルビタン２０ｇ、ポリソルベート６０ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル１ｇ、パラオキシ安息香酸メチル１ｇ、リン酸及び精製水 適量。

本発明は、局所塗布により発生する副作用または毒性のない天然抽出物であるラカンカ抽出物を開示し、創傷の治療効果が優れているため、創傷治癒剤として有用であると期待される。

Claims (6)

1. ラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを含むラカンカ分画物を有効成分として含有する創傷治癒剤。
2. 前記ラカンカ抽出物は、ラカンカを水または低級アルコール水溶液で抽出して得られる請求項１記載の創傷治癒剤。
3. 前記ラカンカ分画物は、有機溶媒を利用したサポニン沈殿法または非イオン吸着樹脂や逆相シリカ樹脂を利用したカラムクロマトグラフィ法により含量を増加させたモモルディカ・サポニンＩを含有する請求項１記載の創傷治癒剤。
4. 前記ラカンカ分画物は、式１で表されるモモルディカ・サポニンＩを１６〜８０質量％含有する請求項３記載の創傷治癒剤。
   （式１）
   

   
5. 前記薬剤は局所経皮剤である請求項１記載の創傷治癒剤。
6. 前記局所経皮剤は軟膏剤、ドレッシング剤またはパッチ剤である請求項５記載の創傷治癒剤。

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