WO2022220625A1 - 단백질 분해제 접합체 및 이의 용도 - Google Patents

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이창선
오환희
이건중
이석현
정철웅
이원미
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주식회사 레고켐바이오사이언스
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems

Definitions

  • the present invention relates to a protein degrader conjugate and its use, and more particularly, to an antigen-specific binding moiety-protein degrader conjugate and a pharmaceutical composition comprising the same.
  • drugs express their drug effects in a manner that inhibits the function of the protein by binding to a specific site of a specific protein.
  • whether a new therapeutic agent is a druggable target is determined according to the possibility of attacking a specific active site or binding pocket of a disease-related protein.
  • c-Myc a well-known target of anticancer drugs
  • c-Myc does not have a hydrophobic pocket structure to which drugs can bind as a transcription factor, and protein aggregates that cause degenerative brain diseases such as Tau tangle are currently It is not possible to remove protein tangles with the technology of Therefore, new attempts to target undiscoverable target proteins for new therapeutic agents are continuously being carried out.
  • ubiquitin-proteasome pathway For example, recently, a method for selectively removing a target protein using the ubiquitin-proteasome pathway has been proposed. Most (80%) of cellular proteins are labeled with ubiquitin through the ubiquitin-proteasome pathway and then degraded in the cytoplasm and nucleus by the proteasome. It not only regulates protein conversion and homeostasis, but also regulates physiological functions of cells such as cell cycle, signal regulation, transcriptional regulation, and apoptosis. It also serves to rapidly remove proteins having an abnormal structure, damaged proteins, or proteins having an abnormal structure due to mutation.
  • PROTAC proteolysis-targeting chimaera
  • the target protein By binding the target protein to the target protein, it has a structure in which the target protein can be easily decomposed. It is expected that desired therapeutic efficacy can be expected by decomposing the protein in question by locating the desired disease-related protein near the E3 ubiquitin ligase.
  • the target protein whose degradation is induced by PROTAC is not a substrate of the E3 ubiquitin ligase
  • the target protein that can be ubiquitinated by the E3 ubiquitin ligase having substrate specificity is limited. Accordingly, even if PROTAC binds to the E3 ubiquitin ligase and the target protein, there is a possibility that the target protein is not degraded. In addition, the problem that the targeted delivery of drugs is not easy still remains.
  • the present inventors have completed the present invention by developing an antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate as a new drug platform capable of targeted delivery of drugs while increasing the selective degradation efficiency of the target protein.
  • PROTAC a drug that has been recently developed as a method for selective removal of a target protein, is composed of a ligand-linker-E3 ubiquitin ligase of the target protein. There is a problem that it is not easy. In addition, there is a problem in that the target protein capable of inducing degradation by PROTAC is limited, and the degradation efficiency of the target protein is low. In addition, there is a problem that the drug may cause toxicity by affecting not only problematic cells but also normal cells.
  • the present invention provides a protein degrader that can increase the selective degradation efficiency of a target protein, an antigen-specific binding moiety that can accurately deliver the protein degradation agent to a target cell, and a stable and stable drug during circulation in the body.
  • a protein degrader that can increase the selective degradation efficiency of a target protein
  • an antigen-specific binding moiety that can accurately deliver the protein degradation agent to a target cell
  • a stable and stable drug during circulation in the body Provided is an antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate grafted with linker technology that can be easily released within a target cell to maximize drug efficacy.
  • the present invention provides an antigen-specific binding moiety-protein degrader conjugate, which is represented by the following general formula (I):
  • Ab is an antigen specific binding moiety
  • Linker is a linker
  • B is a protein degrader moiety
  • n and n are integers selected from 1 to 20.
  • the present invention provides an antigen-specific binding moiety according to the present invention - a pharmaceutical composition for preventing and treating hyperproliferative, cancer or angiogenic disease, preventing or treating, containing the proteolytic agent conjugate as an active ingredient.
  • the antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate according to the present invention comprises an antigen-specific binding moiety that binds to an antigen of a target cell, in particular a cancer cell, thereby effectively and specifically and selectively introducing a proteolytic agent into the target cell. can be transmitted as
  • the antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate according to the present invention comprises a proteolytic agent that binds to E3 ubiquitin ligase, and thus a substrate protein of the E3 ubiquitin ligase, particularly cancer cells. It can induce selective degradation of proteins that activate the process, and can increase degradation efficiency.
  • the antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate according to the present invention includes a linker capable of maximizing the effect of the proteolytic agent being easily released within the target cell, so that the proteolytic agent stably reaches the target cell, resulting in efficacy can be used effectively.
  • the antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate according to the present invention can be easily used for the prevention or treatment of hyperproliferative, cancer, or angiogenic diseases.
  • 1 is a diagram showing the reaction pathway of the protein degrading agent of the present invention.
  • FIGS 2 and 3 are diagrams showing the reaction pathway of the conjugate of the present invention.
  • the present invention provides a protein degrader conjugate, more specifically an antigen-specific binding moiety-protein degrader conjugate, which is expressed by a specific general formula.
  • the present invention provides a protein degrader conjugate, more particularly an antigen specific binding moiety-protein degrader conjugate.
  • an antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate represented by the following general formula (I):
  • Ab is an antigen specific binding moiety
  • Linker is a linker
  • B is a protein degrader moiety
  • n are each independently an integer selected from 1 to 20.
  • the present invention also provides the above conjugate, a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • conjugate refers to a cell binding agent that is covalently bound to one or more molecules of a cytotoxic compound.
  • the "cell binding agent” is a molecule having affinity for a biological target, and may be, for example, a ligand, a protein, an antibody, specifically a monoclonal antibody, a protein or antibody fragment, a peptide, an oligonucleotide, an oligosaccharide, , the binding agent functions to direct the biologically active compound to the biological target.
  • the conjugate may be designed to target cancer cells via a cell surface antigen.
  • the antigen may be a cell surface antigen that is overexpressed or expressed in an abnormal cell type.
  • the target antigen may be expressed only on proliferative cells (eg, cancer cells). Target antigens can usually be selected based on different expression between proliferative and normal tissues.
  • antigen-specific binding moiety refers to any molecule or portion of a molecule capable of specifically binding to a target antigen or target epitope.
  • the antigen-specific binding moiety may be an antibody construct or an antibody-like protein.
  • antibody construct refers to an antibody construct that binds to an antigen of a target cell, and includes not only a complete antibody form, but also an antigen-binding fragment of the antibody molecule. Also included are polypeptides comprising an antigen binding domain and an Fc domain.
  • antigen binding domain refers to a binding domain from an antibody or non-antibody capable of specifically binding an antigen.
  • the antigen binding domains may be numbered if there are multiple antigen binding domains (eg, a first antigen binding domain, a second antigen binding domain, a third antigen binding domain, etc.) in a given conjugate or antibody construct.
  • Different antigen binding domains in the same conjugate or construct may be present on the same antigen (e.g., a first antigen binding domain and a second antigen are capable of specifically binding to the same target cell antigen of the conjugate or construct) or different antigens (e.g., For example, the first antigen binding domain may specifically bind a first target cell antigen and the second antigen binding domain may specifically bind a conjugate or a second target cell antigen). have.
  • the antigen binding domain may be an antigen binding portion of an antibody or antibody fragment.
  • An antigen binding domain may be one or more fragments of an antibody capable of retaining the ability to specifically bind an antigen.
  • the antigen binding domain may be any antigen binding fragment.
  • An antigen binding domain typically recognizes a single antigen.
  • Antibody constructs typically include, for example, one or two antigen binding domains, although more may be included in the antibody construct.
  • the antigen binding domain of the antibody construct may be selected from any domain that specifically binds to an antigen, including, but not limited to, an antibody or non-antibody molecule.
  • the antigen binding domain is a monoclonal antibody, polyclonal antibody, recombinant antibody, or functional fragment thereof, e.g., a heavy chain variable domain (VH) and a light chain variable domain (VL), Fab', F( any of an antibody that specifically binds to an antigen, including, but not limited to, ab')2, Fab, Fv, rlgG, scFv, hcAbs (heavy chain antibodies), single domain antibodies, VHH, VNAR, sdAbs, or Nanobodies.
  • the antigen binding domain is a non-antibody scaffold, such as DARPin, apimer, avimer, notin, monobody, lipocalin, anticalin, 'T-body', apibody, peptibody, affinity clamp, ecto domains, receptor ectodomains, receptors, ligands or centrins, including but not limited to, any domain of a non-antibody molecule that specifically binds to an antigen.
  • the antigen binding domain of an antibody construct may comprise a light chain and a heavy chain.
  • the monoclonal antibody specifically binds to an antigen present on the surface of a target cell and is specific for a target cell antigen, including a light chain of an anti-target cell antigen antibody and a heavy chain of an anti-target cell antigen antibody to form an antigen-binding domain that binds hostilely.
  • Fc domain refers to the fragment crystallizable region or tail region of an antibody.
  • An Fc domain is a structure capable of binding to one or more Fc receptors (FcRs) and interacts with Fc receptors (FcRs) on the surface of a cell.
  • FcRs may bind to the Fc domain of an antibody.
  • the FcR is capable of binding to the Fc domain of an antibody bound to an antigen.
  • FcRs are organized into classes based on the class of antibody that the FcR recognizes (eg, gamma ( ⁇ ), alpha ( ⁇ ) and epsilon ( ⁇ )).
  • the Fc ⁇ R class binds IgA and includes multiple isoforms, Fc ⁇ RI (CD89) and Fc ⁇ R.
  • the Fc ⁇ R class binds IgG and includes multiple isotypes, Fc ⁇ RI (CD64), Fc ⁇ RIIA (CD32a), Fc ⁇ RIIB (CD32b), Fc ⁇ RIIIA (CD16a) and Fc ⁇ RIIIB (CD16b).
  • Fc ⁇ RIIIA (CD16a) may be Fc ⁇ RIIIA (CD16a) F158 variant or V158 variant.
  • Modifications in the amino acid sequence of the Fc domain can alter the recognition of FcRs for the Fc domain. However, such modifications may still allow for FcR-mediated signal transduction.
  • the modification may be substituting an amino acid at a residue (eg wild-type) of the Fc domain with a different amino acid at that residue.
  • Modifications may allow binding of an FcR to sites on the Fc domain to which the FcR may not otherwise bind.
  • the modification may increase the binding affinity of the FcR to the Fc domain.
  • Modifications may decrease the binding affinity of an FcR to a site on the Fc domain where the FcR may increase its binding affinity.
  • the modification may increase the subsequent FcR-mediated signaling following binding of the Fc domain to the FcR.
  • the Fc domain may be a naturally occurring or variant of a naturally occurring Fc domain and may comprise at least one amino acid change compared to the sequence of the wild-type Fc domain. Amino acid changes in the Fc domain may cause the antibody construct or conjugate to bind at least one Fc receptor with greater affinity compared to the wild-type Fc domain.
  • the Fc domain may be derived from an antibody.
  • the Fc domain may be derived from an IgG antibody.
  • the Fc domain may be derived from an IgG1, IgG2 or IgG4 antibody.
  • the Fc domain may be at least 80% identical to the Fc domain from the antibody.
  • the Fc domain may be part of the Fc domain of an antibody.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain in an antibody.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain in a scaffold.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain in an antibody scaffold.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain in a non-antibody scaffold.
  • the antibody construct may comprise an antigen binding domain and an Fc domain, wherein the Fc domain may be covalently bound to the antigen binding domain.
  • the antibody construct may comprise a first antigen binding domain and an Fc domain, wherein the Fc domain may be covalently bound to the first antigen binding domain.
  • the antibody construct may comprise an antigen binding domain and an Fc domain, wherein the Fc domain may be covalently linked to the antigen binding domain as an Fc domain-antigen binding domain fusion protein.
  • the antibody construct may comprise an antigen binding domain and an Fc domain, wherein the Fc domain may be bound to the antigen binding domain by a linker.
  • the first antigen binding domain and the second antigen binding domain may be attached to the Fc domain as a fusion protein.
  • the first antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the N-terminus of the Fc domain, wherein the second antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the C-terminus.
  • the first antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the N-terminus of the Fc domain, wherein the second antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the C-terminus via a polypeptide linker.
  • the first antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the C-terminus of the Fc domain, wherein the second antigen binding domain may be attached to the Fc domain at the N-terminus.
  • the second antigen binding domain and the Fc domain may comprise an antibody and the first antigen binding domain may comprise a single chain variable fragment (scFv).
  • a single chain variable fragment may comprise a heavy chain variable domain and a light chain variable domain of an antibody.
  • the first antigen binding domain of the fusion protein may be attached to the second antigen binding domain in the heavy chain variable domain of a single chain variable fragment of the first antigen binding domain (HL orientation).
  • the first antigen binding domain of the fusion protein may be attached to the second antigen binding domain in the light chain variable domain of a single chain variable fragment of the first antigen binding domain (LH orientation). In either orientation, the first antigen binding domain and the second antigen binding domain may be attached via a polypeptide linker.
  • the antibody construct as described herein may have a dissociation constant (Kd) of less than 10 nM for the antigen of the first antigen binding domain.
  • the antibody construct may have a dissociation constant (Kd) for the antigen of the second antigen binding domain of less than 10 nM.
  • the antibody construct may have a dissociation constant (Kd) for the antigen of the first antigen binding domain that is less than 1 nM, less than 100 pM, less than 10 pM, less than 1 pM, or less than 0.1 pM.
  • the antibody construct may have a dissociation constant (Kd) for the antigen of the second antigen binding domain that is less than 1 nM, less than 100 pM, less than 10 pM, less than 1 pM, or less than 0.1 pM.
  • Kd dissociation constant
  • the antibody constructs disclosed herein may be non-natural, designed and/or engineered.
  • the antibody constructs disclosed herein may be non-native, designed and/or engineered scaffolds comprising antigen binding domains.
  • the antibody construct may comprise an antibody which may comprise an antigen binding domain and an Fc domain.
  • An antibody molecule can consist of two identical light chains and two identical heavy chains, all covalently linked by precisely positioned disulfide bonds. The N-terminal regions of the light and heavy chains together may form the antigen recognition site of each antibody. Structurally, the various functions of an antibody may be restricted to distinct protein domains (ie, regions).
  • the site capable of recognizing and binding antigens consists of three complementarity determining regions (CDRs) that may exist within the variable heavy and variable light chain regions at the N-terminus of the two heavy and two light chains.
  • the constant domains may provide the general framework of an antibody and may not be involved in direct binding of the antibody to antigen, but may be involved in various effector functions, such as participation of the antibody in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). .
  • ADCC antibody-dependent cellular cytotoxicity
  • the domains of a native light chain variable region and a heavy chain variable region may have the same general structure, and each domain may comprise three hypervariable regions or four framework regions in which the sequences linked by CDRs may be somewhat conserved.
  • the four framework regions can mainly adopt the ⁇ -sheet structure and the CDRs can form loops that form part of the ⁇ -sheet structure and in some aspects form part of the ⁇ -sheet structure.
  • the CDRs of each chain may be held in close proximity by framework regions and, together with the CDRs of the other chain, may contribute to the formation of an antigen binding site.
  • Antibodies of antibody constructs may comprise any type of antibody, which may be assigned to different classes of immunoglobins, such as IgA, IgD, IgE, IgG and IgM. A number of different classes can be further divided into isotypes, for example, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2. Antibodies may further comprise light and heavy chains, often multiple chains.
  • the heavy chain constant regions (Fc) corresponding to different classes of immunoglobulins may be ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ and ⁇ , respectively.
  • the light chain may be either kappa or ⁇ and lambda or ⁇ based on the amino acid sequence of the constant domain.
  • the Fc region may comprise an Fc domain.
  • Fc receptor is capable of binding to an Fc domain.
  • Conjugates may also include any fragment or recombinant form thereof, including, but not limited to, scFvs, Fabs, variable Fc fragments, domain antibodies and any other fragment capable of specifically binding to an antigen.
  • An antibody may comprise an antigen binding domain that refers to the portion of the antibody comprising an antigen recognition moiety, i.e., an antigenic determinant variable region of the antibody sufficient to confer recognition and specific binding of the antigen recognition moiety to a target, such as an antigen, i.e., an epitope.
  • an antigen i.e., an epitope.
  • the antigen binding domain of an antibody may comprise one or more light chain (LC) CDRs (LCDR) and one or more heavy chain (HC) CDRs (HCDR), one or more LCDRs, or one or more HCDRs.
  • the antibody binding domain of an antibody may comprise one or more of the following: light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain complementarity determining region 2 (LCDR2) or light chain complementarity determining region 3 (LCDR3).
  • the antibody binding domain may comprise one or more of the following: heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), or heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3).
  • the antibody binding domain comprises all of the following: light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1) , heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2) and heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3).
  • LCDR1 light chain complementarity determining region 1
  • LCDR2 light chain complementarity determining region 2
  • LCDR3 light chain complementarity determining region 3
  • HCDR1 heavy chain complementarity determining region 1
  • HCDR2 heavy chain complementarity determining region 2
  • HCDR3 heavy chain complementarity determining region 3
  • the CDRs described herein may be defined according to IMGT (International ImMunoGeneTics Information System).
  • the antigen binding domain may comprise only the heavy chain of an antibody (eg, no other portion of the antibody).
  • the antigen binding domain may comprise only the
  • Antibody constructs may comprise antibody fragments, such as Fab, Fab', F(ab')2 or Fv fragments.
  • Antibodies used in the present invention may be "humanized".
  • a humanized form of a non-human (eg, murine) antibody is an intact (full-length) chimeric immunoglobulin, immunoglobulin chain or antigen-binding fragment thereof (eg, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 or other target-binding subdomains of the antibody), which may contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin.
  • a humanized antibody may comprise substantially all of at least one, and typically two, variable domains, wherein all or substantially all of the CDR regions correspond to those of a non-human immunoglobulin, and all or Substantially all framework (FR) regions are of human immunoglobulin sequences.
  • a humanized antibody may also comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically that of a human immunoglobulin consensus sequence.
  • the antibodies described herein may be human antibodies.
  • a "human antibody” as used herein may include, for example, an antibody having the amino acid sequence of a human immunoglobulin, and a gene for one or more human immunoglobulins that do not express endogenous immunoglobulins or from a human immunoglobulin library. antibodies isolated from the transducing animal. Human antibodies can be generated using transgenic mice that cannot express functional endogenous immunoglobulin but are capable of expressing human immunoglobulin genes. Fully human antibodies that recognize selected epitopes can be generated using directed selection. In this approach, a selected non-human monoclonal antibody, eg, a mouse antibody, can be used to elicit a selection of fully human antibodies that recognize the same epitope.
  • the antibodies described herein may be dual specific antibodies or dual variable domain antibodies (DVDs).
  • Bispecific and DVD antibodies may be monoclonal, often human or humanized antibodies, which may have binding specificities for at least two different antigens.
  • the antibodies described herein may be derived or otherwise modified.
  • the induced antibody can be modified by glycosylation, acetylation, pegylation, phosphorylation, amidation, derivatization with known protecting/blocking groups, proteolytic cleavage, and the like.
  • Antibody constructs may include antibodies having modifications that occur in at least one amino acid residue. Modifications may be substitutions, additions, mutations, deletions, and the like. Antibody modifications may be insertions of unnatural amino acids.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain of the IgG1 isotype.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain of the IgG2 isotype.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain of an IgG3 isotype.
  • the antibody construct may comprise an Fc domain of the IgG4 isotype.
  • Antibody constructs may have hybrid isotypes comprising constant regions from two or more isotypes.
  • Antibodies described herein may have sequences modified to alter at least one constant region-mediated biological effector function relative to the corresponding wild-type sequence.
  • the antibody is configured to increase or decrease at least one constant region-mediated biological effector function, such as, for example, increased binding to an Fc receptor (FcR), as compared to an unmodified antibody. can be deformed. FcR binding can be reduced or increased, for example, by mutating the immunoglobulin constant region segment of the antibody in a specific region required for FcR interaction.
  • FcR Fc receptor
  • the antibodies described herein may be modified to acquire or improve at least one constant region-mediated biological effector function, for example to enhance Fc ⁇ R interactions, relative to an unmodified antibody.
  • antibodies with constant regions that bind Fc ⁇ RIIA, Fc ⁇ RIIB and/or Fc ⁇ RIIIA with greater affinity than the corresponding wild-type constant region can be generated according to the methods described herein.
  • the antibody constructs disclosed herein may be non-natural, designed and/or engineered antibodies.
  • antibody-like protein refers to a protein that has been engineered (by mutagenesis of a loop) to specifically bind to a target antigen.
  • antibody-like proteins comprise one or more variable peptides attached at least at both ends to a protein scaffold. This dual structural constraint greatly increases the binding affinity of the antibody-like protein to a level corresponding to that of the antibody.
  • the length of a variable peptide loop typically consists of 10 to 20 amino acids.
  • the scaffold protein may be any protein with good dissolution properties.
  • the scaffold protein is a small globular protein.
  • Antibody-like proteins include, but are not limited to, affibodies, anticalins, and designed ankyrin repeat proteins.
  • Antibody-like proteins can be derived from multiple mutant libraries, for example, extracted from multiple phage display libraries, and isolated similarly to general antibodies. Antibody-like binding proteins can also be obtained by combinatorially mutagenizing surface-exposed residues in globular proteins.
  • the antigen specific binding moiety may be an antibody construct or an antibody-like protein.
  • the antibody construct comprises an antigen binding domain and an Fc domain that specifically binds an antigen.
  • an antibody construct may comprise a first antigen binding domain and an Fc domain that specifically binds a first antigen.
  • the antibody construct may comprise a first antigen binding domain that specifically binds a first antigen, a second antigen binding domain that specifically binds a second antigen, and an Fc domain.
  • the antibody construct may be covalently bound to an antigen binding domain and an Fc domain.
  • the Fc domain may covalently bind to the first antigen binding domain.
  • the second antigen binding domain is capable of covalent binding at the N-terminus of the second antigen binding domain and at the C-terminus of the first antigen binding domain, or an Fc domain. can be covalently linked at the C-terminus of
  • the first antigen binding domain and/or the second antigen binding domain may comprise an immunoglobulin heavy chain variable region or antigen binding fragment thereof and an immunoglobulin light chain variable region or antigen binding fragment thereof.
  • the first antigen binding domain or the second antigen binding domain may comprise a single chain variable region fragment (scFv).
  • the Fc domain may be an IgG region.
  • the Fc domain may be an IgG1 Fc region.
  • the Fc domain may be an Fc domain variant comprising one or more amino acid substitutions in the IgG region compared to the amino acid sequence of the wild-type IgG region, wherein the Fc domain variant has an affinity for one or more Fc ⁇ receptors compared to the wild-type IgG region. may be increased.
  • the Fc domain may be a non-antibody scaffold.
  • the Fc domain is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl domain
  • the antibody construct may further comprise an effector antigen binding domain that binds to an antigen presented by an antigen presenting cell.
  • the antibody construct may have a Kd of the conjugate for binding antigen to less than 100 nM and up to 100 times the Kd of the unconjugated antibody construct.
  • the Kd of the unconjugated antibody construct may be less than 1 nM, less than 100 pM, less than 10 pM, less than 1 pM, or less than 0.1 pM. It may also be less than 100-fold, less than 200-fold, less than 400-fold, less than 800-fold, or less than 1000-fold the Kd of the unconjugated antibody construct.
  • the antibody construct may be an antibody or antibody fragment.
  • the antibody construct may be a rabbit, mouse, chimeric, humanized or fully human monoclonal antibody.
  • the antibody construct may be of the IgG isotype.
  • the antibody constructs disclosed herein bind to an antigen of a target cell.
  • the antibody construct binds to an antigen of a cancer cell.
  • the antibody is present on the surface of the target cell in an amount of at least 10, 100, 1,000, 10,000, 1.0 x 10 5 , 1.0 x 10 6 , 2.5 x 10 6 , 5 x 10 6 or 1 x 10 7 copies of the target antigen. can be coupled to
  • the antigen is 5T4, A33, ABL, ABCF1, ACVR1, ACVR1B, ACVR2, ACVR2B, ACVRL1, ADORA2A, AFP, Aggrecan, AGR2, AICDA, AIF1, AIGI, AKAP1, AKAP2, ALK, AMH, AMHR2 , ANGPT1, ANGPT2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANPEP, APC, APOCl, AR, aromatase, ATX, AX1, AZGP1 (zinc-a-glycoprotein), avB3, B7.1, B7.2, B7-H1, BAD, BAFF, BAG1, BAI1, BCR, BCL2, BCL6, BDNF, BLNK, BLR1 (MDR15), BIyS, BMP1, BMP2, BMP3B (GDFIO), BMP4, BMP6, BMP8, BMPR1A,
  • the antigen may be an FcR ⁇ -bound receptor
  • FcR ⁇ -bound receptors include GP6 (GPVI), LILRA1 (CD85I), LILRA2 (CD85H, ILT1), LILRA4 (CD85G, ILT7), LILRA5 (CD85F, ILT11), LILRA6 (CD85b, ILT8), NCR1 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD337, NKp30), OSCAR or TARM1.
  • GP6 GPVI
  • LILRA1 CD85I
  • LILRA2 CD85H, ILT1
  • LILRA4 CD85G, ILT7
  • LILRA5 CD85F, ILT11
  • LILRA6 CD85b, ILT8
  • NCR1 CD335, LY94, NKp46
  • NCR3 CD335, LY94, NKp46
  • NCR3 CD337,
  • the antigen may be a DAP12-bound receptor, examples of which are DAP12-bound receptors include CD300C, CD300E, CD300LB (CD300B), CD300LD (CD300D), KIR2DL4 (CD158D), KIR2DS, KLRC2 (CD159C, NKG2C), KLRK1 ( CD314, NKG2D), NCR2 (CD336, NKp44), PILRB, SIGLEC1 (CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15 (CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1 (CD172B), TREM1 (CD354) or TREM2.
  • the antigen may be a hemITAM-bearing receptor, and examples of the hemITAM-bearing receptor include, but are not limited to, KLRF1 (NKp80).
  • the antigen is CLEC4C (BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D (MCL, CLECSF8), CLEC4E (Mincle), CLEC6A (Dectin-2), CLEC5A (MDL-1, CLECSF5), CLEC1B (CLEC-2) ), CLEC9A (DNGR-1) or CLEC7A (Dectin-1), but is not limited thereto.
  • the antigen is ATP5I (Q06185), OAT (P29758), AIFM1 (Q9Z0X1), AOFA (Q64133), MTDC (P18155), CMC1 (Q8BH59), PREP (Q8K411), YMEL1 (O88967), LPPRC (Q6PB66), LONM (Q8CGK3), ACON (Q99KI0), ODO1 (Q60597), IDHP (P54071), ALDH2 (P47738), ATPB (P56480), AATM (P05202), TMM93 (Q9CQW0), ERGI3 (Q9CQE7), RTN4 (Q99P72), CL041P72 (Q8BQR4), ERLN2 (Q8BFZ9), TERA (Q01853), DAD1 (P61804), CALX (P35564), CALU (O35887), VAPA (Q9WV55), MOGS (Q80UM7), VAPA
  • the antigen may be, but is not limited to, CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR Her2, SLAMF7 or gp75.
  • Antibody constructs that bind to the antigen include, but are not limited to, the following antibodies or Fc fusion proteins: avagobumab, abatacept (also known as ORENCIA TM ), absiximab (REOPRO TM , also known as c7E3 Fab) , adalimumab (also known as HUMIRA TM ), adekatumumab, alemtuzumab (CAMPATH TM , also known as MabCampath or Campath-1H), altumomab, apelimomab, anatumomab mafenatox, anetumumab, anrukizumab, apolizumab, arsitumomab, acelizumab, atlizumab, atrolimumab, bafinuzumab, basiliximab (also known as SIMULECT TM ), babituximab, VEC tumoma
  • linker refers to a compound that covalently binds a cytotoxic compound to a ligand.
  • linkers described herein may be cleavable, non-cleavable, hydrophilic or hydrophobic.
  • the cleavable linker is cleavable under intracellular conditions such that cleavage of the linker releases the proteolytic agent from the antibody construct-proteolytic agent conjugate in the intracellular environment.
  • a cleavable linker is cleavable by a cleaving agent present in the intracellular environment (eg, in a lysosome or endosome or caveolea).
  • the cleavable linker may be, for example, a peptidyl linker that is cleaved by an intracellular peptidase or protease enzyme including, but not limited to, a lysosomal or endosomal protease.
  • the peptidyl linker is at least 2 amino acids in length or at least 3 amino acids in length.
  • Cleavage agents may include cathepsins B and D and plasmin, all of which are known to hydrolyze dipeptide drug derivatives to release the active drug in target cells (eg, Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123).
  • Peptidyl linkers cleavable by enzymes present in antigen-expressing cells are most common.
  • a peptidyl linker cleavable by the thiol-dependent protease cathepsin-B which is highly expressed in cancer tissues, can be used (eg, a Phe-Leu or Gly-Phe-Leu-Gly linker).
  • Other such linkers are described, for example, in US Pat. No. 6,214,345.
  • peptidyl linker cleavable by an intracellular protease is described in, for example, a Val-Cit linker, a Phe-Lys linker (eg, U.S. Patent No. 6,214,345, which describes the synthesis of doxorubicin using a Val-Cit linker). see) or a Val-Ala linker.
  • the Val-Cit linker or Val-Ala linker may contain a pentafluorophenyl group and may contain a succinimide group or a maleimide group.
  • it may contain a PABA group and a pentafluorophenyl group, and may contain a PABA (4-aminobenzoic acid) group and a maleimide group, and may contain a PABA group and a succinimide group.
  • intracellularly cleaved and intracellular cleavage refer to a metabolic process or response inside a cell to an antibody construct-proteolytic agent conjugate, thereby The covalent attachment between the proteolytic agent (B) and the antibody construct (Ab), eg, the linker, is broken, resulting in free drug or other metabolites of the conjugate separated from the intracellular antibody.
  • the cleavable linker is pH-sensitive, i.e., can be readily hydrolyzed at certain pH values.
  • the pH-sensitive linker can be hydrolyzed under acidic conditions.
  • acid-labile linkers capable of being hydrolyzed in lysosomes (e.g., hydrazone, semicarbazone, thiosemicarbazone, cis-aconic amide (cis) -aconitic amide), orthoesters, acetals, ketals, etc.) can be used (e.g., U.S. Patent Nos. 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83).
  • linkers are relatively stable at neutral pH conditions, such as blood, but are unstable below pH 5.5 or 5.0, the approximate pH of lysosomes.
  • hydrolysable linkers include thioether linkers (eg, thioethers attached to a therapeutic agent via an acylhydrazone bond (see, eg, US Pat. No. 5,622,929)).
  • the linker is cleavable under reducing conditions (eg, a disulfide linker).
  • a disulfide linker For example, SATA (N-succinimidyl-5-acetylthioacetate), SPDP (N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate), SPDB (N-succinimidyl- Formed using 3-(2-pyridyldithio)butyrate) and SMPT (N-succinimidyl-oxycarbonyl-alpha-methyl-alpha-(2-pyridyl-thio)toluene)-, SPDB and SMPT
  • SATA N-succinimidyl-5-acetylthioacetate
  • SPDP N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate
  • SPDB N-succinimidyl- Formed using 3-(2-pyrid
  • linkers include malonate linkers (Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), maleimidobenzoyl linkers (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299- 1304), 3'-N-amide analogs (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12), beta-glucuronide linker (Jeffery et al) ., 2006, Bioconjug Chem. 17(3):832-40), or a beta-galactoside linker (Kolodych et al., 2017, Eur J Med Chem. Dec 15;142:376-382) ) can be
  • the non-cleavable linker may be a maleimidocaproyl linker.
  • the maleimidocaproyl linker may comprise N-maleimidomethylcyclohexane-1-carboxylate.
  • the maleimidocaproyl linker may contain a succinimide group.
  • the maleimidocaproyl linker may contain a pentafluorophenyl group.
  • the linker may be a combination of a maleimide group and one or more polyethylene glycol molecules.
  • the linker may be a combination of a maleimidocaproyl group and one or more polyethylene glycol molecules.
  • the linker may be a maleimide-PEG4 linker.
  • the linker may be a combination of a maleimidocaproyl linker containing a succinimide group and one or more polyethylene glycol molecules.
  • the linker may be a combination of a maleimidocaproyl linker containing a pentafluorophenyl group and one or more polyethylene glycol molecules.
  • the linker may contain a maleimide linked to a polyethylene glycol molecule, wherein the polyethylene glycol allows for more linker flexibility or may use a longer linker.
  • the linker may be a (maleimidocaproyl)-(valine-citrulline)-(para-aminobenzyloxycarbonyl) linker.
  • the linker may be a cleavable linker.
  • the linker is a protease cleavable linker, an acid-cleavable linker, a disulfide linker, a self-immolative linker or a self-stabilizing linker, a malonate linker, maleimidobenzoyl linker, 3'-N-amide analog, beta-glucuronide linker, or beta-galactoside linker.
  • the protease cleavable linker may include a thiolreactive spacer or a dipeptide, and more specifically, the protease cleavable linker is a thiol-reactive maleimidocaproyl spacer, valine-citrulline dipeptide or p-amino-benzyloxycarbonyl spacer.
  • the acid-cleavable linker may be a hydrazine linker or a quaternary ammonium linker.
  • the linker may have a structure of Formula II.
  • the tilde indicates a site linked to Ab, * indicates a site linked to a proteolytic agent;
  • G is a glucuronic acid moiety or , wherein R 3 is hydrogen or a carboxyl protecting group, and each R 4 is independently hydrogen or a hydroxyl protecting group;
  • R 1 and R 2 are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl or C 3-8 cycloalkyl
  • W is -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO 2 NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- or -PO 2 NR'-, wherein C, S or P is directly bonded to a phenyl ring, and R' and R'' are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1-8 alkoxy, C 1-8 alkylthio, mono- or di- C 1-8 alkylamino, C 3-20 heteroaryl or C 6-20 aryl;
  • Z is independently C 1-8 alkyl, halogen, cyano or nitro
  • n is an integer from 0 to 3;
  • L is a covalent linker
  • the linker may have a structure of the following formula (IIa):
  • G is a sugar, sugar acid, or sugar derivatives
  • W is -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O) 2 NR'-, -P(O)R''NR'-, -S (O)NR'-, or -PO 2 NR'-,
  • R' and R'' are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1 - 8 alkoxy, C 1-8 alkylthio, mono- or di-C 1-8 alkylamino, C 3-20 heteroaryl, or C 6-20 aryl;
  • each Z is independently hydrogen, C 1-8 alkyl, halogen, cyano or nitro;
  • n is an integer from 0 to 3
  • n 0 or 1
  • R 1 and R 2 are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl or C 3-8 cycloalkyl, or
  • R 1 and R 2 together with the carbon atom to which they are attached form a C 3-8 cycloalkyl ring
  • the tilde indicates a site connected to Ab
  • * indicates a site connected to a proteolytic agent.
  • the sugar or sugar acid is a monosaccharide.
  • G is a glucuronic acid moiety or a compound of formula (IIIa):
  • R 3 is hydrogen or a carboxyl protecting group
  • each R 4 is each independently hydrogen or a hydroxyl protecting group.
  • R 3 is hydrogen, and each R 4 is hydrogen.
  • R 1 and R 2 are each hydrogen.
  • each Z is independently C 1-8 alkyl, halogen, cyano or nitro.
  • W is -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO 2 NR'-, -P(O)R''NR '-, -SONR'- or -PO 2 NR'-, wherein C, S or P is directly bonded to a phenyl ring, and R' and R'' are each independently hydrogen, C 1 -8 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1-8 alkoxy, C 1-8 alkylthio, mono- or di- C 1-8 alkylamino, C 3-20 heteroaryl or C 6-20 aryl.
  • W is -C(O)-, -C(O)NR'- or -C(O)O-, and more specifically, W is -C(O)NR' -, where C(O) is connected to a phenyl ring and NR' is bonded to L.
  • W is -C(O)NR'-, and the nitrogen of W is a nitrogen atom of a hydrophilic amino acid.
  • W is -C(O)NR'-, and the nitrogen of W is a nitrogen atom of the N-terminal amino acid of the peptide.
  • the peptide may include 2 to 20 amino acids.
  • n is 0, 1, 2 or 3, more specifically 0, 1 or 2, and even more specifically 0.
  • G is a compound of formula (IIIa):
  • R 3 is hydrogen or a carboxyl protecting group
  • each R 4 is each independently hydrogen or a hydroxyl protecting group
  • W is -C(O)NR'-, wherein C(O) is connected to a phenyl ring and NR' is bonded to L, each Z is C 1-8 alkyl, halogen, cyano or nitro, n is 0, m is 1, and R 1 and R 2 are each hydrogen.
  • L is an unbranched linker or a branched linker.
  • At least one L is alkylene having 1 to 100 carbon atoms, wherein the carbon atoms of the alkylene are one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S. may be substituted, and the alkylene may be further substituted with one or more alkyl having 1 to 20 carbon atoms.
  • L is any one of:
  • L is 1 to 50 membered heteroalkylene
  • said alkylene is substituted with one or more C 1-20 alkyl
  • At least one L is C 1-50 alkylene or 1-50 membered heteroalkylene, and may satisfy one or more of the following:
  • L is 1 to 50 membered heteroalkylene
  • said alkylene is substituted with one or more C 1-20 alkyl.
  • the at least one L is a nitrogen-containing 1-50 membered heteroalkylene
  • the linker comprises two or more atoms of a hydrophilic amino acid
  • the nitrogen forms a peptide bond with the carbonyl of the hydrophilic amino acid.
  • L is covalently bonded to the antibody through a thioether bond, and the thioether bond includes a sulfur atom of cysteine of the antibody.
  • L is C 2-50 alkylene, C 2-50 heteroalkylene, hydrophilic amino acid, -C(O)-, -C(O)NR''-, -C(O)O -, -(CH 2 ) s -NHC(O)-(CH 2 ) t -, -(CH 2 ) u -C(O)NH-(CH 2 ) v -, -(CH 2 ) s -NHC( O)-(CH 2 ) t -C(O)-, -(CH 2 ) u -C(O)NH-(CH 2 ) v -C(O)-, -S(O) 2 NR''- , -P(O)R'''NR''-, -S(O)NR''-, or -PO 2 NR''-,
  • R'' and R''' are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1-8 alkoxy, C 1-8 alkylthio, mono- or di-C 1 -8 alkylamino, C 3-20 heteroaryl or C 5-20 aryl, and s, t, u and v are each independently an integer from 0 to 10.
  • At least one L is a hydrophilic amino acid.
  • the hydrophilic amino acid may be arginine, aspartate, asparagine, glutamate, glutamine, histidine, lysine, ornithine, proline, serine, or threonine.
  • the hydrophilic amino acid may be an amino acid comprising a side chain having a residue having a charge at neutral pH in aqueous solution.
  • the hydrophilic amino acid is aspartate or glutamate.
  • the hydrophilic amino acid is ornithine or lysine.
  • the hydrophilic amino acid is arginine.
  • At least one L is -C(O)-, -C(O)NR''-, -C(O)O-, -S(O) 2 NR''-, -P (O)R'''NR''-, -S(O)NR''-, or -PO 2 NR''-, wherein R'' and R'' are each independently hydrogen, C 1-8 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1-8 alkoxy, C 1-8 alkylthio, mono- or di-C 1-8 alkylamino, C 3-20 heteroaryl, or C 6-20 aryl.
  • At least one L is -C(O)NR''-, -(CH 2 ) s -NHC(O)-(CH 2 ) t -, -(CH 2 ) u -C( O)NH-(CH 2 ) v -, -(CH 2 ) s -NHC(O)-(CH 2 ) t -C(O)-, or -(CH 2 ) u -C(O)NH-( CH 2 ) v —C(O)—, wherein R′′ is hydrogen, C 1-5 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 1-5 alkoxy, C 3-20 heteroaryl, or C 6 -20 aryl, and s, tu and v are each independently an integer from 0 to 10.
  • At least one L is -C(O)NR'- and R' is hydrogen.
  • L may further include a connection unit.
  • the at least one linking unit is represented by the general formula VIII or IX:
  • V is a single bond, -O-, -S-, -NR 21 -, -C(O)NR 22 -, -NR 23 C(O)-, -NR 24 SO 2 - or -SO 2 NR 25 - ego;
  • X is —O—, C 1 -C 8 alkylene or —NR 21 —;
  • R 21 to R 25 are each independently hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl - C 6-20 aryl or C 1-6 alkyl - C 3-20 heteroaryl;
  • r is an integer from 0 to 10;
  • p is an integer from 0 to 10;
  • q is an integer from 1 to 20;
  • w is an integer from 1 to 20;
  • q may be 4 to 20, more specifically 6 to 20. Also, q may be 1 to 10 or 2 to 12, and more specifically 2, 5, or 11. Also, r may be 1 or 2. Also, p may be 1 or 2. Also, V may be -O-.
  • r may be 2
  • p may be 2
  • q may be 2, 5 or 11
  • V may be -O-.
  • X may be -O-.
  • w may be an integer of 1 to 10 or 6 to 20.
  • X is -O-, and w may be 1-10 or 6-20.
  • the at least one linking unit is at least one polyethylene glycol unit, or has the structure of , where n is 1 to 12.
  • the at least one linking unit is 1 to 12 -OCH 2 CH 2 -units, or 3 to 12 -OCH 2 CH 2 -units, or 5 to 12 -OCH 2 CH 2 -units, or 6 to 12 -OCH 2 CH 2 -unit, or 3 -OCH 2 CH 2 -unit.
  • At least one linking unit is -(CH 2 CH 2 X) w -,
  • X is a single bond, —O—, C 1-8 alkylene, or —NR 21 —;
  • R 21 is hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl-C 6-20 aryl, or C 1-6 alkyl-C 3-20 heteroaryl, w is an integer from 1 to 20, specifically 1, 3, 6, or 12.
  • X is -O-, and w is an integer from 6 to 20.
  • the linker is 1,3-dipolar cycloaddition reactions, hetero-Diels-Alder reactions, nucleophilic substitution reactions, Bonding units formed by non-aldol type carbonyl reactions, addition to carbon-carbon multiple bond, oxidation reactions or click reactions further includes.
  • the binding unit is formed by a reaction between an alkynyl group and an azide, or between an aldehyde or ketone group and a hydrazine or alkoxyamine.
  • the binding unit is represented by the following general formula IV a , IV b , IV c , IV d or IV e .
  • L 1 and L 2 are a single bond or alkylene having 1 to 30 carbon atoms
  • R 11 is hydrogen or alkyl having 1 to 10 carbon atoms, specifically methyl.
  • L 1 is a single bond, or alkylene having 11 carbon atoms, or alkylene having 12 carbon atoms.
  • the binding unit is
  • V is a single bond , -O-, -S-, -NR 21 -, -C(O)NR 22 -, -NR 23 C(O)-, -NR 24 SO 2 -, or -SO 2 NR 25 - is;
  • R 21 to R 25 are independently hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl - C 6-20 aryl, or C 1-6 alkyl - C 3-20 heteroaryl;
  • r is an integer from 1 to 10;
  • p is an integer from 0 to 10;
  • q is an integer from 1 to 20;
  • L 1 is a single bond.
  • r may be 2 or 3. Also, p may be 1 or 2. Also, q may be 1 to 6.
  • r is 2 or 3; p is 1 or 2; q may be 1 to 6.
  • the linker comprising the binding unit is
  • tilde indicates a site connected to Ab
  • * indicates a site connected to a proteolytic agent
  • n is an integer from 0 to 20.
  • L is or includes
  • L is further includes.
  • a bonding unit may be formed by a reaction between an alkynyl and an azide, specifically, a click reaction.
  • L is comprising, forming a coupling unit through the structure, the coupling unit comprising: includes
  • the linker is It may further contain at least one isoprenyl unit having the structure of , wherein n is at least 2 or more.
  • the at least one isoprenyl unit is a substrate of an isoprenoid transferase or a product of an isoprenoid transferase.
  • the isoprenyl unit of the linker is covalently bonded to Ab by a thioether bond, wherein the thioether bond comprises the sulfur atom of the cysteine of Ab.
  • L is covalently bonded to Ab through a thioether bond, and the thioether bond includes a sulfur atom of cysteine of Ab.
  • L includes at least one isoprenyl derivative unit of the following general formula III, which can be recognized by isoprenoid transferase.
  • the isoprenyl unit can covalently bond the oxime included in the linker to the Ab.
  • L is 3 to 50 heteroalkylene comprising an oxime
  • the oxygen atom of the oxime is on the side of L linked to W and the carbon atom of the oxime is on the side of L linked with Ab;
  • the carbon atom of the oxime may be on the side of L connected to W, and the oxygen atom of the oxime may be on the side of L connected to Ab.
  • L comprises an oxime, and at least one isoprenyl unit covalently bonds the oxime to Ab.
  • Ab comprises an amino acid motif recognized by isoprenoid transferase, and the thioether bond comprises a sulfur atom of a cysteine of the amino acid motif.
  • an amino acid motif is included at the C-terminus of the Ab.
  • the amino acid motif is a sequence selected from the group consisting of CXX, CXC, XCXC, XXCC, and CYYX, wherein C represents cysteine; Y at each occurrence independently represents an aliphatic amino acid; X independently for each occurrence represents glutamine, glutamate, serine, cysteine, methionine, alanine, or leucine; The thioether linkage contains the sulfur atom of the cysteine of the amino acid motif.
  • the amino acid motif is the sequence CYYX, and Y for each occurrence is independently alanine, isoleucine, leucine, methionine or valine.
  • the amino acid motif is a CVIM or CVLL sequence.
  • one or more of the 1 to 20 amino acids preceding the amino acid motif may each be independently selected from glycine, arginine, aspartic acid and serine.
  • at least one of the seven amino acids preceding the amino acid motif is glycine.
  • at least three of the seven amino acids preceding the amino acid motif are each independently selected from glycine, arginine, aspartic acid and serine.
  • 1 to 10 amino acids preceding the amino acid motif are glycine, specifically, at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acids preceding the amino acid motif are glycine.
  • Ab may comprise the amino acid sequence of GGGGGGGCVIM.
  • the Linker comprises one or more branched linkers covalently bonded to the Ab
  • each branched linker comprises a branched unit covalently linked to the Ab by a first linker (PL);
  • each branched linker comprises a first branch (B1) wherein the first proteolytic agent is covalently linked to the branched unit by a second linker (SL) and a cleavage group (CG); and
  • each branched linker comprises: a) a second branch (B2) in which a second proteolytic agent is covalently linked to the branched unit by a second linker (SL) and a cleaving group (CG); or b) a second branch in which the polyethylene glycol moiety is covalently bonded to the branched unit,
  • Each of the above cleaving groups may be hydrolyzed to release the proteolytic agent from the antigen-specific binding moiety-proteolytic agent conjugate.
  • said at least one linker is a nitrogen-containing 1-100 membered heteroalkylene, and the linker comprises at least two atoms of a hydrophilic amino acid, wherein said nitrogen forms a peptide bond with a carbonyl of a hydrophilic amino acid.
  • the branched unit comprises
  • the L 2 , L 3 , L 4 are each independently a direct bond or -C n H 2n -, wherein n is an integer from 1 to 30,
  • the G 1 , G 2 , G 3 are independently a direct bond
  • R 30 is hydrogen or C 1-30 alkyl
  • R 40 is a direct bond, C 1-10 alkyl or L 5 -COOR 6 ;
  • L 5 is a direct bond or -C n' H 2n' -, where n' is an integer from 1 to 10, and R 6 is hydrogen or C 1-30 alkyl.
  • the cleavage group is cleavable in a target cell.
  • the cleavage group is capable of releasing one or more active agents.
  • the proteolytic agent is bound to the first branch or the second branch by a cleaving group having the formula:
  • said first linker comprises an alkylene having 1 to 100, preferably 1 to 50 carbon atoms;
  • alkylene contains at least one unsaturated bond; alkylene includes at least one heteroarylene; a carbon atom of the alkylene is replaced by one or more heteroatoms selected from nitrogen (N), oxygen (O), and sulfur (S); or
  • Alkylene is further substituted with one or more alkyl having 1 to 20 carbon atoms.
  • the first linker or the second linker has the structure -(CH 2 ) r (V(CH 2 ) p ) q -, -((CH 2 ) p V) q -,-(CH 2 ) ) r (V(CH 2 ) p ) q Y-, -((CH 2 ) p V) q (CH 2 ) r -, -Y((CH 2 ) p V) q - or -(CH 2 ) r (V(CH 2 ) p ) q YCH 2 -, wherein r is an integer from 0 to 10; p is an integer from 1 to 10; q is an integer from 1 to 20;
  • V and Y are each independently a single bond, -O-, -S-, -NR 21 -, -C(O)NR 22 -, -NR 23 C(O)-, -NR 24 SO 2 -, or - SO 2 NR 25 -;
  • R 21 to R 25 are each independently hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl-C 6-20 aryl or C 1-6 alkyl-C 3-20 heteroaryl.
  • each The branched linker comprises a branching unit, each active agent being linked to the branching unit via a second linker, and the branching unit being linked to the antibody by a first linker.
  • the Branching Unit is an amide
  • the first linker may comprise the carbonyl of the amide
  • the second linker may comprise the carbonyl of the amide.
  • B and B' are proteolytic agents, which may be the same or different;
  • n1 and n2 each independently represent an integer of 1 to 20;
  • L' represents a portion of L capable of binding to Ab.
  • L' is to be.
  • the conjugate comprises Ab;
  • the branched linker comprises one or two or more proteolytic agents.
  • L comprises an oxime and at least one polyethylene glycol unit covalently bonds the oxime to the proteolytic agent.
  • the cleaving group is capable of cleaving in a target cell and releasing one or more proteolytic agents.
  • it comprises at least one branched linker covalently attached to the Ab; and two or more proteolytic agents covalently linked to a branched linker.
  • one branched linker may be bound to Ab.
  • branched linkers may be bound to Ab, and each branched linker may be bound to two or more proteolytic agents. More specifically, three branched linkers may be bound to Ab. Alternatively, four branched linkers may be bound to Ab.
  • each branched linker may be associated with two or more identical or different proteolytic agents.
  • each proteolytic agent may be bound to a branched linker by a cleavable bond.
  • each branched linker comprises a branched unit, each proteolytic agent binds to the branched unit via a secondary linker and binds to the Ab by the branched unit primary linker can be
  • the branched unit may be a nitrogen atom.
  • the branched unit may be an amide, and the primary linker or secondary linker may include a carbonyl of the amide.
  • the branched unit may be a lysine unit.
  • the Binding Unit is covalently bound to Ab by means of a thioether bond, wherein the thioether bond comprises the sulfur atom of the cysteine of Ab.
  • Ab comprises an amino acid motif recognized by isoprenoid transferase, and the thioether bond comprises a sulfur atom of a cysteine of the amino acid motif.
  • the isoprenoid transferase is farnesyl protein transferase (FTase) or geranylgeranyl transferase (GGTase).
  • FTase farnesyl protein transferase
  • GTTase geranylgeranyl transferase
  • the amino acid motif is a sequence selected from the group consisting of CXX, CXC, XCXC, XXCC, and CYYX, wherein C represents cysteine; Y at each occurrence independently represents an aliphatic amino acid; X independently for each occurrence represents glutamine, glutamate, serine, cysteine, methionine, alanine, or leucine; The thioether linkage contains the sulfur atom of the cysteine of the amino acid motif.
  • the amino acid motif is the sequence CYYX, and Y for each occurrence is independently alanine, isoleucine, leucine, methionine or valine.
  • the amino acid motif is a CVIM or CVLL sequence.
  • At least one of the seven amino acids preceding the amino acid motif is glycine.
  • At least three of the seven amino acids preceding the amino acid motif may each be independently selected from glycine, arginine, aspartic acid and serine.
  • 1 to 10 amino acids preceding the amino acid motif are glycine, specifically at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acids preceding the amino acid motif is glycine.
  • Ab may comprise the amino acid sequence of GGGGGGGCVIM.
  • proteolytic agent refers to a low-molecular compound that induces target protein degradation, and may also be referred to as “protein eraser”.
  • proteolytic agent refers to a low-molecular compound that induces regulation of a target protein, and may be referred to as a “protein modulator”.
  • the target protein is, for example, a disease-causing protein.
  • proteolytic agent moiety refers to a compound covalently bound to all or part of a linker, including all or part of a proteolytic agent.
  • the proteolytic agent moiety does not necessarily include a linker, and may mean a case in which all or part of the linker is not included.
  • the proteolytic agent moiety may be directly bound to the linker, and one or more, specifically, two or more, three or more, four or more proteolytic agent moieties to the linker may be directly bound to the linker. .
  • the proteolytic agent moiety may include a compound unit for directly binding the proteolytic agent to the linker.
  • the proteolytic agent moiety may refer to the whole including the following structure and proteolytic agent, through which the proteolytic agent and the linker may be directly bonded. However, this is illustrative and not limited thereto.
  • a proteolytic agent acts as a small molecule compound that induces the regulation of a target protein
  • it can be divided into two types according to the mechanism of action (MoA).
  • MoA mechanism of action
  • a monovalent modulator that binds only to a target protein and regulates the activity of the target protein and a PPI modulator that directly binds to both the protein involved in the regulation of the target protein and the target protein to regulate the activity of the target protein (protein- protein interaction modulator).
  • the target protein is a native substrate or a non-native substrate of a protein involved in the regulation of the target protein.
  • the intrinsic substrate is an endogenous substrate specific to a protein, and the PPI modulator directly binds to both the protein involved in the regulation of the target protein and its intrinsic substrate, and the protein involved in the regulation of the target protein and its intrinsic substrate can regulate the activity of the substrate by stabilizing the interaction of
  • a non-native substrate is a substrate that is recruited by an exogenous ligand, and the non-native substrate may also be referred to as a “neosubstrate”.
  • the PPI modulator may act as an exogenous ligand of a protein, and the non-native substrate may bind to the binding site of the protein involved in the regulation of the PPI modulator and the target protein, thereby modulating the activity of the non-native substrate.
  • a proteolytic agent acts as a low-molecular compound that induces target protein degradation
  • it can be divided into three types according to the mechanism of action. Specifically, it can be divided into a bivalent degrader, a monovalent degrader, and a molecular glue degrader.
  • Intracellular protein degradation occurs through two pathways by lysosomes and proteasomes. Most (80%) of cellular proteins are labeled with ubiquitin and then degraded in the cytoplasm and nucleus by proteasome, a process called ubiquitin-proteasome system.
  • E1 ubiquitin-activating enzyme E2 ubiquitin-conjugating enzyme
  • E2 ubiquitin-conjugating enzyme E2 ubiquitin-conjugating enzyme
  • E3 ubiquitin linking Enzyme E3 ubiquitin ligase
  • the binding of ubiquitin to the substrate is between Lys of the substrate molecule and Gly at the ubiquitin-C-terminus.
  • Another ubiquitin can be linked to the ubiquitin-C-terminal Lys bound to the substrate protein, and by repeating this process, several ubiquitin molecules are When they are linked together to form a polyubiquitin chain, the protein is recognized and selectively degraded by the 26S proteasome.
  • E3 ubiquitin ligase More than 600 types of E3 ubiquitin ligase are known to humans and provide substrate specificity for recognizing substrate proteins to be labeled with ubiquitin by binding to both E2 ubiquitin ligases and substrate proteins. That is, the selection of the protein to be degraded is determined by the E3 ubiquitin ligase in the ubiquitination process, and the substrate protein has a recognition site by the E3 ubiquitin ligase and a ubiquitin linking site.
  • a bivalent degrader is a heterobifunctional small molecule in which a ligand specific for a target protein and a ligand specific for the E3 ubiquitin ligase involved in the above process are linked with a linker. It is termed "proteolysis targeting chimera” or "PROTAC”. Accordingly, the bivalent cleavage agent includes a ligand specific for the target protein and induces degradation of the target protein by locating the target protein, not the substrate protein, near the E3 ubiquitin ligase.
  • a monovalent degrader is a small molecule that binds only to a target protein and induces degradation of the bound target protein.
  • the monovalent lysing agent binds to the target protein and induces degradation thereof by changing the target protein to be easily recognized by the ubiquitin-proteasome system. For example, it binds to a target protein and causes a conformation change or folding change of the target protein, or post-translational modification (PTM) of the target protein, or the target protein -Inducing degradation of target proteins by altering protein-protein interactions such as chaperone interactions (Cornella-Taracido et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 30 (2020) 127202).
  • PTM post-translational modification
  • the target protein of the monovalent degradation agent may be, for example, an estrogen receptor (ER) or an androgen receptor (AR), but is not limited thereto.
  • ER estrogen receptor
  • AR androgen receptor
  • the monovalent degradation agent that binds to the ER and induces its degradation may include a selective estrogen receptor degrader (SERD), and examples of the SERD include fulvestrant, brilanestrant (GDC-0810), GDC-0927, elacestrant, giredestrant, amcenestrant (SAR439859), AZD9833, AZD9496, rintodestrant, LSZ102, LY3484356, ZN-c5, D-0502 or SHR9549.
  • SESD selective estrogen receptor degrader
  • monovalent degradation agents that bind to AR and induce its degradation include selective androgen receptor degrader (SARD), and examples of SARD include bicalutamide, dimethylcurcumin (ASC-J9), AZD-3514 or ARN-509. , but is not limited thereto.
  • the molecular adhesive degrading agent may exhibit activity through binding to E3 ubiquitin ligase and/or a target protein.
  • the molecular adhesive degrading agent may modify the structure of the ligase or the like through binding to the ligase and the like, and induce protein degradation by inducing binding of a target protein to the modified structure.
  • Molecular adhesive degrading agent is a small molecule that binds to the substrate protein of E3 ubiquitin ligase and induces substrate proteolysis of E3 ubiquitin ligase, and may also be referred to as "molecular glue".
  • the substrate of the E3 ubiquitin ligase as the target protein may specifically be a native substrate or a non-native substrate of the E3 ubiquitin ligase.
  • the native substrate of E3 ubiquitin ligase is an endogenous substrate specific for E3 ubiquitin ligase, and the molecular adhesive degrading agent binds to E3 ubiquitin ligase and its native substrate to form E3 ubiquitin ligase and E3 ubiquitin ligase and its native substrate. It can induce substrate degradation by stabilizing its intrinsic substrate interaction.
  • a non-native substrate of E3 ubiquitin ligase is a substrate that is recruited by an exogenous ligand, and the non-native substrate may also be referred to as a “neosubstrate”.
  • Molecular adhesive disintegrants act as exogenous ligands of E3 ubiquitin ligase. Accordingly, the non-native substrate may be bound to the binding site of the molecular adhesive degrading agent and the E3 ubiquitin ligase to enhance the bond between the E3 ubiquitin ligase and the non-native substrate and induce degradation of the non-native substrate.
  • the structure of the E3 ubiquitin ligase is modified so that a non-native substrate can bind, and the modified structure is non- Intrinsic substrate binding can enhance binding between E3 ubiquitin ligase and non-native substrate and induce degradation of non-native substrate (Essays Biochem. 2017 Nov 8;61(5):505-516) .
  • E3 ubiquitin ligases to which molecular adhesive breakers bind are von Hippel-Lindau (VHL), cereblon, XIAP, XIAP/cIAP, E3A, MDM2. cullin ring ubiquitin ligase (CRL), including APC (Anaphase-promoting complex), APC/cdc20, APC/cdh1, Cul1-based, Cul2/5-based, Cul3-based, Cul4 based, Cul7-based and Cul7, UBR5 (EDD1), beta-TrCP, SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING, LNXp80, LNX1, CBX4, CBL, CBLL1, C6orf157, CHFR, DTL, E6-AP, HACE1, HECTD1, HECTD2, HECTD3, HECW1, HECW2, HERC1, HERC2, HERC3, HERC4, HERC5, HUWE1, VHL
  • E3 ubiquitin ligase to which the molecular adhesive degrading agent binds may be divided by type, which may be described in PCT Publication No. WO2017/201449, but is not limited thereto.
  • examples of native substrates or non-native substrates of E3 ubiquitin ligase to which molecular adhesive degrading agents bind are NKX3.1, ⁇ -Catenin, aiolos, Akt1, Aurora A, B7-2, Bim, Caspase-3, Caspase -8, Caspase-10, CD147, Cdc20, Cdc25A, CDH1, CHK1, CHK2, c-Jun, CK1- ⁇ , Claspin, C-Myc, CRY2, Cyclin A, Cyclin B, Cyclin E, CDK12/Cyclin K, Delta , Jagged, Dlg, DR4, DVL1, ELF, ErbB4, Erk, Fbxo45, Foxo1, Foxp3, gp190, GSPT1, GSPT2, H2A,H2AX, HIF-1a, HIF-1 ⁇ , HIF-2a, HIPK2, Histone H2A, Histone H2B , HSF1, HSP70
  • the native substrate or non-native substrate of AMFR/gp78 as E3 ubiquitin ligase may be KAI1, and the native substrate or non-native substrate of APC is Aurora A, Cyclin A, Cyclin B, Cdc20, Claspin, Securin or Skp2, the native substrate or non-native substrate of C6orf157 may be Cyclin B, the native substrate or non-native substrate of CBLL1 may be CDH1, the native substrate of CHFR or The non-native substrate may be Aurora A or PLK1, the native substrate or non-native substrate of CHIP may be HSP70/90, iNOS, Runx1 or LRRK2, the native substrate or non-native substrate of DTL may be p21, the native substrate or non-native substrate of E6-AP may be p53 or Dlg, the native substrate or non-native substrate of HECW1 may be a DVL1, p53 or SOD1 mutation, and the native substrate or non-native substrate of
  • the native substrate or non-native substrate of beta-TrCP with E3 ubiquitin ligase may be ⁇ -Catenin or I ⁇ B ⁇
  • the molecular adhesive degrading agent binding to beta-TrCP is NRX-1532, NRX-1933 , NRX-2663, NRX-103094, NRX-103095, NRX-252114 or NRX-252262 (Nature Communications volume 10, Article number: 1402 (2019)), but is not limited thereto.
  • the native substrate or non-native substrate of CRL4-DCAF15 as an E3 ubiquitin ligase may be Rbm39 or Rbm23, and the molecular adhesive degrading agent binding to CRL4-DCAF15 is indisulam, E7820 or tasisulam (tasisulam) or a derivative thereof (Nature Chemical Biology volume 16, pages7-14 (2020)), but is not limited thereto.
  • the native substrate or non-native substrate of cereblon with E3 ubiquitin ligase may be aiolos, ikaros, MEIS2, ILZF1/3, CK1 ⁇ , GSPT1 or GSPT2, and the molecular adhesive degrading agent binding to cereblon is thalidomide (thalidomide). ), lenalidomide, pomalidomide, or an analog thereof, or a compound described in U.S. Patent Publication No. 2016/0058872 and U.S. Patent Publication No. 2015/0291562, but is not limited thereto.
  • the proteolytic agent does not have heterobifunctionality, and may be a monovalent degradation agent or a molecular adhesive degradation agent.
  • the E3 ubiquitin binding enzyme to which the molecular adhesive disintegrant binds is von Hippel-Lindau (VHL), cereblon, XIAP, XIAP/cIAP, E3A, MDM2.
  • APC Anaphase-promoting complex
  • APC/cdc20 APC/cdh1, CRL (cullin ring ubiquitin ligase), UBR5 (EDD1), beta-TrCP, SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING, LNXp80, LNX1, CBX4, CBL , CBLL1, C6orf157, CHFR, DTL, E6-AP, HACE1, HECTD1, HECTD2, HECTD3, HECW1, HECW2, HERC1, HERC2, HERC3, HERC4, HERC5, HUWE1, HYD, ITCH, mahogunin, MARCH-II, MARCH-II , MARCH-III, MARCH-IV, MARCH-VI, MARCH-VII, MARCH-VIII, MARCH-X, MEKK1, MIB1, MIB2, MycBP2, NEDD4, NEDD4L, PELI1, Pirh2, P
  • the target protein to which the molecular adhesive degrading agent binds may be a native substrate or a non-native substrate of E3 ubiquitin binding enzyme, and the native substrate or non-native substrate is NKX3.1, ⁇ - Catenin, aiolos, Akt1, Aurora A, B7-2, Bim, Caspase-3, Caspase-8, Caspase-10, CD147, Cdc20, Cdc25A, CDH1, CHK1, CHK2, c-Jun, CK1- ⁇ , Claspin, C -Myc, CRY2, Cyclin A, Cyclin B, Cyclin E, CDK12/Cyclin K, Delta, Jagged, Dlg, DR4, DVL1, ELF, ErbB4, Erk, Fbxo45, Foxo1, Foxp3, gp190, GSPT1, GSPT2, H2A,H2AX , HIF-1a, HIF-1 ⁇ , HIF-2a, HI
  • a molecular adhesive degrading agent that binds to cerelon as an E3 ubiquitin ligase and to GSPT1, a non-native substrate of E3 ubiquitin ligase as a target protein, was used.
  • the molecular adhesive decomposing agent may be a compound represented by the following general formula X1.
  • D x2 is O, NC ⁇ N or NH
  • a1 is an integer of 0, 1, 2 or 3;
  • a2 is an integer of 0 or 1;
  • a3 is an integer of 0, 1, or 2;
  • A is C, N, or O
  • R xa is hydrogen, halo or C 1-6 alkyl
  • R xb and R xc are each independently hydrogen, halo, C 1-10 alkyl, CF 3 , or R x10 -(R x11 ) a -R x12 ;
  • R xb and R xc are attached form C 5-8 cycloalkyl, C 4-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl, or C 6-10 heteroaryl;
  • R x10 is a direct bond, -NH-, or -O-,
  • R x11 is each independently a direct bond, -C(O)-, C 1-5 alkylene, C 2-5 alkenylene, C 6-10 arylene, C 6-10 heteroarylene, C 3-8 cyclo selected from the group consisting of alkylene, or C 3-8 heterocycloalkylene,
  • R x12 is OH, NH 2 , NH-R x12′ , C 6-10 aryl, C 6-10 heteroaryl, C 3-8 cycloalkyl, or C 3-8 heterocycloalkyl;
  • R x12′ is C 1-5 alkyl, C 2-5 alkenyl, C 6-10 aryl, C 6-10 heteroaryl, C 3-8 cycloalkyl, or C 3-8 heterocycloalkyl;
  • a is an integer from 1 to 5
  • R xb or R xc forms a monovalent moiety and is capable of binding to Linker
  • D x2 is O. In one embodiment of the present invention, D x2 is NC ⁇ N. In one embodiment of the present invention, D x2 is NH.
  • a1 is 0. In one embodiment of the present invention, a1 is 1. In one embodiment of the present invention, a1 is 2. In one embodiment of the present invention, a1 is 3.
  • a2 is 0. In one embodiment of the present invention, a2 is 1.
  • a3 is 0. In one embodiment of the present invention, a3 is 1. wherein a3 is 2.
  • A is C or N.
  • R xa is hydrogen. In one aspect of the invention, R xa is F, Br, Cl or I. In one embodiment of the present invention, R xa is C 1-6 alkyl. In one embodiment of the present invention, R xa is methyl.
  • At least one of R xb and R xc is C 1-10 alkyl.
  • At least one of R xb and R xc is R x10 -(R x11 ) a -R x12 .
  • a is an integer of 1 to 3.
  • R x10 is a direct bond. In one embodiment of the present invention, R x10 is -NH-. In one embodiment of the present invention, R x10 is -O-.
  • R x11 is each independently selected from the group consisting of a direct bond, -C(O)-, C 1-5 alkylene, or C 2-5 alkenylene. In one embodiment of the present invention, R x11 is a direct bond. In one embodiment of the present invention, R x11 is -C(O)-. Wherein R x11 is C 1-3 alkylene.
  • R x11 is each independently C 6-10 arylene, C 6-10 heteroarylene, C 3-8 cycloalkylene, or C 3-8 heterocycloalkylene consisting of selected from the group. In one embodiment of the present invention, R x11 is C 5-6 cycloalkylene.
  • R x12 is NH 2 . In one embodiment of the present invention, R x12 is -NH-CH 3 It is.
  • R x12 is C 6-10 heteroaryl containing one or more N atoms or C 3-8 heterocycloalkyl containing one or more N atoms.
  • R x12 is
  • R x12 is
  • R x12 is
  • R x12 is
  • R x12 is
  • At least one of R xb or R xc comprises -NH 2 or -NH-R x12' , and -NH 2 or -NH-R x12' forms a monovalent moiety to form a monovalent moiety with Linker combine
  • R xb and R xc together with the moiety to which R xb and R xc are bonded form C 4-8 heterocycloalkyl or C 6-10 heteroaryl.
  • a is 1. In one aspect of the present invention, a is 2. In one aspect of the present invention, a is 3.
  • the molecular adhesive degrading agent in one aspect of the present invention, the molecular adhesive degrading agent
  • the molecular adhesive disintegrant binds to the Linker at the terminal NH or NH 2 .
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating a hyperproliferative disease or angiogenic disease, comprising the above-described conjugate, a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • the present invention also provides the use of the above-described conjugate, a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof for use as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of a hyperproliferative disease or angiogenic disease.
  • one or more therapeutic co-agents are also provided. Also, one or more therapeutic co-agents; and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the therapeutic co-agent is an agent that has a preventive, ameliorated or therapeutic effect on a hyperproliferative disease, or an agent that can reduce the expression of side effects that occur when a therapeutic agent for a proliferative disease is administered, or an agent that enhances immunity It may be an agent showing an effect, but is not limited thereto, and exhibits a therapeutically useful effect when applied in the form of a formulation together with a proteolytic agent, and/or further improves the stability of the proteolytic agent, and/or protein This means that any formulation that can reduce the side effects that may appear during release administration and/or maximize the therapeutic effect by enhancing immunity can be combined and applied.
  • the hyperproliferative disease refers to a cell proliferation-related disease in which undesirably excessive or abnormal cells such as neoplasia or hyperplastic growth, whether in vitro or in vivo, are not undesirably controlled.
  • the hyperproliferative disease may be selected from the group consisting of neoplasia, tumor, cancer, leukemia, psoriasis, bone disease, fibroproliferative disorder, and atherosclerosis.
  • neoplasms and tumors include histiocytoma, glioma, astrocytoma, osteoma, and the like.
  • the cancer is lung cancer, small cell lung cancer, gastrointestinal cancer, colorectal cancer, bowel cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, testicular cancer, liver cancer, kidney cancer, bladder cancer, pancreatic cancer, brain cancer, sarcoma, osteosarcoma, Kaposi's sarcoma And it may be selected from the group consisting of melanoma, but all of the cancer types in which the proteolytic agent can exhibit a therapeutic effect are applicable.
  • the present invention also relates to hyperproliferative disease in a subject having a hyperproliferative disease comprising administering to the subject an effective amount of an antibody construct-proteolytic agent conjugate, a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof for treating the hyperproliferative disease.
  • a method for preventing or treating sexually transmitted diseases is provided.
  • a method for preventing or treating cancer comprising administering the pharmaceutical composition to a patient.
  • a method for preventing or treating angiogenesis comprising administering the pharmaceutical composition to a patient.
  • the present invention is suitable for use in providing a proteolytic agent to a target site in a subject.
  • the conjugates according to the present invention release an active proteolytic agent that does not have any linker moieties, and nothing that can affect the reactivity of the proteolytic agent is present.
  • a “therapeutic agent” as used herein is an agent that exerts a cytotoxic, cytostatic and/or immunomodulatory effect on a proliferative disease, for example, cancer cells or activated immune cells.
  • therapeutic agents include cytotoxic agents, chemotherapeutic agents, cytostatic agents, and immunomodulatory agents.
  • chemotherapeutic agent as used herein is a chemical compound useful for the treatment of cancer.
  • subject is intended to include human and non-human animals, particularly mammals.
  • An example of a subject is a human subject, such as a concept including a human patient or normal subject having a disorder described herein, more specifically cancer.
  • Non-human animal refers to all vertebrates, eg, non-mammals (eg, chickens, amphibians, reptiles) and mammals, eg, non-human primates, livestock and/or useful in agriculture. animals (eg, sheep, dogs, cats, cattle, pigs, etc.) and rodents (eg, mice, rats, hamsters, guinea pigs, etc.).
  • the subject is a human patient.
  • treatment refers to both therapeutic treatment and prophylactic or prophylactic measures.
  • Subjects in need of treatment include those already with the disease, and those prone to have the disease or those in which the disease is to be prevented.
  • the term when used in reference to a subject in need of a disease or treatment, the term includes arresting or slowing disease progression, preventing symptoms, reducing disease and/or symptom severity, or reducing disease duration, as compared to an untreated subject However, it is not limited thereto.
  • administration refers to providing, contacting and/or delivering a compound or compounds by any suitable route to achieve a desired effect.
  • Administration may be oral, sublingual, parenteral (eg, intravenous, subcutaneous, intradermal, intramuscular, intraarticular, intraarterial, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intralesional or intracranial injection), transdermal, topical, administration may include, but are not limited to, buccal, rectal, vaginal, nasal, ophthalmic, inhalation and via implantation.
  • unsubstituted or substituted refers to a parent group that may be unsubstituted or substituted
  • substituted refers to a parent group having one or more substituents
  • a substituent refers to a parent group. group) or a chemical moiety fused to a parent group.
  • halo refers to fluorine, chlorine, bromine, iodine, and the like.
  • alkyl is a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from a carbon atom of an aliphatic or alicyclic, saturated or unsaturated (unsaturated, fully unsaturated) hydrocarbon compound, and examples of saturated alkyl include methyl, ethyl, propyl, butyl.
  • examples of saturated straight chain alkyl include methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl (amyl), n-hexyl, n-heptyl, etc., examples of saturated branched chain alkyl isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, neopentyl and the like.
  • alkoxy means -OR [wherein R is an alkyl group], examples of which include methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, sec-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy and the like.
  • aryl means a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from an aromatic ring atom of an aromatic compound having a ring atom.
  • alkenyl is an alkyl having one or more carbon-carbon double bonds
  • alkynyl is an alkyl group having at least one carbon-carbon triple bond, and examples of the unsaturated alkynyl group include ethynyl and 2-propynyl.
  • aryl relates to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from an aromatic ring atom of an aromatic compound.
  • C 5-7 aryl means a monovalent moiety in which the moiety has 5 to 7 ring atoms and is obtained by removing a hydrogen atom from an aromatic ring atom of an aromatic compound
  • C 5 - " 10 aryl” means a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from an aromatic ring atom of an aromatic compound, wherein the moiety has 5 to 10 ring atoms.
  • a prefix (C 5-7 , C 5-10 , etc.) herein refers to a number of ring atoms or a range of number of ring atoms, whether carbon atoms or heteroatoms.
  • C 5-6 aryl relates to an aryl group having 5 or 6 ring atoms.
  • the ring atoms may all be carbon atoms as in "carboaryl group".
  • Examples of carboaryl groups include, but are not limited to, those derived from benzene, naphthalene, azulene, anthracene, phenanthrene, naphthacene, and pyrene.
  • aryl groups comprising a fused ring in which at least one is an aromatic ring include groups derived from indane, indene, isoindene, tetralin, acenaphthene, fluorene, phenalene, acephenanthrene and aceanthrene, but with not limited Alternatively, the ring atom may contain one or more heteroatoms as in "heteroaryl group".
  • heteroaryl is an aryl containing one or more heteroatoms, for example, pyridine, pyrimidine, benzothiophene, furyl, dioxalanyl, pyrrolyl, oxazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidi Neil et al., more specifically benzofuran, isobenzofuran, indole, isoindole, indolizine, indoline, isoindoline, purine (adenine or guanine), benzimidazole, indazole, benzoxazole, benzisoxazole, C 9 having two fused rings derived from benzodioxol, benzofuran, benzotriazole, benzothiofuran, benzothiazole, benzothiadiazole, chromene, isochromen, chromen, isochroman, benzo Two fused rings derived from dio
  • cycloalkyl is an alkyl group that is a cyclyl group, and relates to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from an alicyclic ring atom of a cyclic hydrocarbon compound.
  • cycloalkyl groups include, but are not limited to, those derived from:
  • unsaturated monocyclic hydrocarbon compounds cyclopropene, cyclobutene, cyclopentene, cyclohexene, methylcyclopropene, dimethylcyclopropene, methylcyclobutene, dimethylcyclobutene, methylcyclopentene, dimethylcyclopentene and methylcyclohexene; and
  • Saturated heterocyclic hydrocarbon compounds norcharan, norphinane, norbornane.
  • heterocyclyl relates to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from a ring atom of a heterocyclic compound.
  • a prefix eg C 1-12 , C 3-8 , etc. refers to a number of ring atoms or a range of number of ring atoms, whether carbon atoms or heteroatoms.
  • C 3-6 heterocyclyl herein relates to a heterocyclyl group having 3 to 6 ring atoms.
  • monocyclic heterocyclyl groups include, but are not limited to, those derived from:
  • N 1 aziridine, azetidine, pyrrolidine, pyrroline, 2H- or 3H-pyrrole, piperidine, dihydropyridine, tetrahydropyridine, azepine;
  • N 2 imidazolidine, pyrazolidine, imidazoline, pyrazoline, piperazine;
  • O 1 oxirane, oxetane, oxolane, oxol, oxane, dihydropyran, pyran, oxepin;
  • O 2 dioxolane, dioxane and dioxepane
  • N 1 O 1 tetrahydrooxazole, dihydrooxazole, tetrahydroisoxazole, dihydroisoxazole, morpholine, tetrahydrooxazine, dihydrooxazine, oxazine
  • N 1 S 1 thiazoline, thiazolidine, thiomorpholine;
  • N 1 O 1 S 1 Oxatiazine.
  • prodrug refers to pyrrolobenzodia by the action of an enzyme, gastric acid, under physiological conditions in vivo (eg, enzymatic oxidation, reduction and/or hydrolysis, etc.) A compound that can be converted directly or indirectly into a zepine drug.
  • an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid may be used as the "pharmaceutically acceptable salt", and an organic acid or an inorganic acid may be used as the free acid.
  • the organic acid is not limited thereto, but citric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, gluconic acid, metasulfonic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, glutamic acid and aspartic acid.
  • the inorganic acid includes, but is not limited to, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid.
  • a compound is an anion or has a functional group that can be anionic (eg -COOH can be -COO-), it can form a salt with the appropriate cation.
  • suitable inorganic cations include, but are not limited to, alkali metal ions such as Na + and K + , alkaline earth metal cations such as Ca 2+ and Mg 2+ and other cations such as Al 3+ .
  • suitable organic cations include, but are not limited to, ammonium ions (ie NH 4 + ) and substituted ammonium ions (eg NH 3 R + , NH 2 R 2 + , NHR 3 + , NR 4 + ).
  • Examples of some suitable substituted ammonium ions are those derived from: ethylamine, diethylamine, dicyclohexylamine, triethylamine, butylamine, ethylenediamine, ethanolamine, diethanolamine, piperazine, benzylamine , phenylbenzylamine, choline, meglumine and tromethamine, as well as amino acids such as lysine and arginine.
  • An example of a typical quaternary ammonium ion is N(CH 3 ) 4 + .
  • the compound is a cation or has a functional group that can be a cation (eg -NH 2 can be -NH 3 + ), it can form a salt with an appropriate anion.
  • suitable inorganic anions include, but are not limited to, those derived from the following inorganic acids: hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, sulfurous acid, nitric acid, nitrous acid, phosphoric acid and phosphorous acid.
  • Suitable organic anions include, but are not limited to, those derived from the following organic acids: 2-acetyloxybenzoic acid, acetic acid, ascorbic acid, aspartic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, cinnamic acid, citric acid, edetic acid, ethane Disulfonic acid, ethanesulfonic acid, fumaric acid, glutamic acid, gluconic acid, glutamic acid, glycolic acid, hydroxymaleic acid, hydroxynaphthalene carboxylic acid, isethionic acid, lactic acid, lactobionic acid, lauric acid, maleic acid, Malic acid, methanesulfonic acid, mucoic acid, oleic acid, oxalic acid, palmitic acid, palmic acid, pantothenic acid, phenylacetic acid, phenylsulfonic acid, propionic acid, pyruvic acid, salicylic acid, stearic acid, succin
  • solvate refers to a molecular complex between the compound according to the present invention and solvent molecules, and examples of the solvate include water, isopropanol, ethanol, methanol, dimethyl sulfoxide. (dimethylsulfoxide), ethyl acetate, acetic acid, ethanolamine, or a compound according to the present invention combined with a mixed solvent thereof, but is not limited thereto.
  • solvate is used herein in its conventional sense to refer to a complex of a solute (eg, an active compound, a salt of an active compound) and a solvent.
  • a solute eg, an active compound, a salt of an active compound
  • the solvent is water
  • the solvate may conveniently be referred to as a hydrate, such as a monohydrate, dihydrate, trihydrate, or the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may include macromolecules that are typically slowly metabolized, for example, proteins, polysaccharides, polylactic acid, polyglycolic acid, polymeric amino acids, amino acid copolymers, lipid aggregates, and the like, and these pharmaceutically Acceptable carriers can be appropriately selected and used by those skilled in the art.
  • composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier may be in various oral or parenteral formulations.
  • formulation it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and such solid preparations include one or more compounds and at least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc. prepared by mixing
  • excipients for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc. prepared by mixing
  • lubricants such as magnesium stearate, talc and the like may also be used.
  • Liquid formulations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • injectable esters such as ethyl oleate.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like can be used.
  • the pharmaceutical composition is selected from the group consisting of injections, tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations and suppositories It can have any one of the formulations.
  • the active ingredient may be in the form of an acceptable aqueous solution for parenteral administration, which is pyrogen-free and has appropriate pH, isotonicity and stability.
  • aqueous solution for parenteral administration which is pyrogen-free and has appropriate pH, isotonicity and stability.
  • Those skilled in the art can prepare suitable solutions using isotonic vehicles such as, for example, aqueous sodium chloride solution, Ringer's solution, lactate Ringer's solution, and the like, and may include preservatives, stabilizers, buffers, antioxidants or other additives as required.
  • Solid forms suitable for injection may also be prepared as emulsions or in the form of polypeptides encapsulated in liposomes.
  • the phrase “effective amount” or “therapeutically effective amount” refers to the amount necessary (as for the dosage and duration and means of administration) to achieve the desired therapeutic result.
  • An effective amount is at least the minimum amount of an active agent necessary to confer a therapeutic benefit to a subject and is less than a toxic amount.
  • dosages may range from about 100 ng to about 100 mg/kg per patient, more typically from about 1 ⁇ g/kg to about 10 mg/kg.
  • the active compound is a salt, ester, amide, prodrug, etc.
  • the dosage is calculated on the basis of the parent compound, so the actual weight used increases proportionally.
  • the pyrrolobenzodiazepine compound according to the present invention may be formulated to contain 0.1 mg to 3000 mg, 1 mg to 2000 mg, or 10 mg to 1000 mg of the active ingredient per dosage form, but is not limited thereto.
  • the active ingredient may be administered to obtain a peak plasma concentration of the active compound of about 0.05 ⁇ M to 100 ⁇ M, 1 ⁇ M to 50 ⁇ M, 5 ⁇ M to 30 ⁇ M.
  • it may be administered by intravenous injection of a 0.1 w/v% to 5 w/v% solution of the active ingredient, optionally in saline.
  • the concentration of active compound in a pharmaceutical composition can be determined by the rate of absorption, inactivation and excretion of the drug and other factors known to those skilled in the art.
  • the dosage may vary depending on the severity of the condition/disease.
  • the dosage and administration regimen for a specific patient may be adjusted according to the professional judgment of the administration supervisor in consideration of the patient's symptoms/disease severity, necessity, age, responsiveness to drugs, etc., and the concentration suggested in the present invention
  • the ranges are exemplary only and are not intended to limit the embodiments of the claimed compositions thereto.
  • the active ingredient may be administered once or may be administered in smaller doses divided into several doses.
  • N -bromosuccinimide N-bromosuccinimide
  • AIBN azobisisobutyronitrile
  • 11.75 mmol was added sequentially and stirred under reflux for 17 h.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate (100 mL), washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (100 mL), washed with saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 12 (80 mg, 67%). EI-MS m/z: [M+H] + 1078.59.
  • N -bromosuccinimide N-bromosuccinimide
  • AIBN azobisisobutyronitrile
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (100 mL), washed with saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 22 (83 mg, 42%).
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (100 mL), washed with saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 28 (73 mg, 71%).
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, diluted with ethyl acetate (50 mL), washed with saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. . After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 51 (22 mg, 55%).
  • compound 70 was prepared by the method described in WO2017/089890) in dichloromethane (14 mL), 0 ° C., under a nitrogen atmosphere, bis(pentafluorophenyl) ) carbonate (1.2 g, 3.01 mmol) and pyridine (0.44 ml, 5.47 mmol) were added. After stirring at room temperature for 5 hours, the reaction solution was diluted with dichloromethane (20 mL), washed with distilled water (30 mL X 2), and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 71 (2 g, 77 %).
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (10 mL), washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (10 mL) and distilled water (10 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 79 (72 mg, 23%).
  • N,N -dimethylformamide 5 mL
  • N- ( t -butoxycarbonyl) -N -methylglycine 53 mg, 0.28 mmol
  • N,N,N',N' -tetramethyl- O- (1 H -benzotriazol-1-yl)uronium hexafluorophosphate HBTU, 127 mg, 0.34 mmol
  • N, N' -diisopropylethylamine 0.1 mL, 0.56 mmol
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (50 mL), washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and then distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 90 (64 mg, 58%).
  • reaction solution was diluted with ethyl acetate (50 mL), washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and then distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 93 (117 mg, 63%).
  • Ethyl 2-methyl-6-oxo-1 H -pyridine-3-carboxylate (1.48 g, 8.17 mmol) was dissolved in phosphoryl chloride (15 mL) at 0° C. under a nitrogen atmosphere. The reaction temperature was raised to 100 °C and stirred for 2 hours under nitrogen atmosphere. After cooling to 0 °C, ice water (50 mL) was slowly added dropwise. The pH was adjusted to 7 using an aqueous ammonia solution and filtered to obtain compound 110 (1.52 g, 93%).
  • N -bromosuccinimide N-bromosuccinimide
  • AIBN azobisisobutyronitrile
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, diluted with ethyl acetate (50 mL), washed with saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 mL), and distilled water (50 mL) in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. . After filtration, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to obtain compound 116 (192 mg, 67%).

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Abstract

본 발명은 단백질 분해제(protein degrader) 접합체 및 이의 용도에 관한 것으로, 구체적으로 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체, 질환, 더 상세하게는 과증식 및/또는 혈관신생질환 예컨대, 암 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 이들 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체의 용도에 관한 것이다.

Description

단백질 분해제 접합체 및 이의 용도
본 발명은 단백질 분해제(protein degrader) 접합체 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 약물은 특정 단백질의 특정 부위에 결합함으로써 그 단백질의 기능을 저해하는 방식으로 약효를 발현한다. 다시 말해, 질환 관련 단백질의 특정 활성부위(active site) 또는 결합부위(binding pocket)의 공략 가능성에 따라 신규 치료제 발굴 가능 타겟(druggable target)인지가 정해진다.
2016년 보고에 따르면, 미국 식품의약국(FDA)로부터 승인된 약물의 표적으로 쓰이는 단백질은 약 400여종으로, 대부분 효소, 수용체, 전달물질, 각종 채널, 막 단백질인 것으로 나타났다. 그러나 현재까지 알려진 바에 따르면 약 3000여개의 단백질이 사람의 질환을 야기한다고 알려져 있으며, 이중 불과 13%만이 표적 단백질로 개발되고 있다. 그 원인은 현재의 약물 개발 방법으로는 대부분의 질환 단백질들을 표적으로 삼아 그 기능을 억제하지 못하기 때문이다. 예를 들어, 항암제의 잘 알려진 타겟인 c-Myc의 경우 전사인자로서 약물이 결합할 수 있는 소수성 포켓(hydrophobic pocket) 구조를 갖추고 있지 않고, Tau tangle과 같은 퇴행성뇌질환을 야기하는 단백질 응집체는 현재의 기술로 단백질 엉킴을 제거할 수가 없다. 따라서, 신규 치료제 발굴 불가 표적 단백질(undruggable target protein)을 공략하려는 새로운 시도가 지속적으로 실시되고 있다.
일례로, 최근 유비퀴틴-프로테아좀 경로를 이용하여 선택적으로 표적 단백질을 제거하는 방법이 제안되고 있다. 세포 단백질의 대부분(80%)은 유비퀴틴-프로테아좀 경로를 통해 유비퀴틴(ubiquitin)에 의해 표지된 후 프로테아좀(proteasome)에 의해 세포질과 핵에서 분해된다. 이는 단백질 전환과 항상성 유지뿐만 아니라 세포주기, 신호조절, 전사조절, 세포사멸 등과 같은 세포의 생리적 기능을 조절한다. 또한 비정상적 구조를 가지는 단백질, 손상된 단백질, 또는 돌연변이로 인하여 비정상적인 구조를 가지는 단백질들을 빠르게 제거하는 역할을 한다. 최근 유비퀴틴을 매개로 하는 단백질 분해가 여러 가지 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병과 같은 퇴행성뇌질환 및 유전병과 관련되어 있음이 보고되고 있고, 단백질 분해 경로에 대한 이상이 암을 비롯한 여러 가지 형태의 질환의 원인이 될 것으로 간주되고 있다. 이에, 유비퀴틴-프로테아좀 경로의 활성화를 이용해 질환 유발 단백질을 제거하는 치료법으로 PROTAC(proteolysis-targeting chimaera)이라 불리는 신약개발 연구가 활발히 진행되고 있다. PROTAC은 표적 단백질과 결합하는 리간드, E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase)와 결합하는 리간드 및 링커(linker)로 구성된 이중기능 유기저분자로, 단백질 분해 체계를 시작할 수 있는 E3 유비퀴틴 연결효소 가까운 곳에 분해 대상으로 삼은 표적 단백질을 결합해 둠으로써, 표적 단백질이 손쉽게 분해될 수 있는 구조를 갖는다. 이는 원하는 질환 관련 단백질을 E3 유비퀴틴 연결효소 근처에 위치시킴으로써 문제의 단백질을 분해하여 원하는 치료효능을 기대할 수 있을 것으로 보고 있다. 그러나, PROTAC에 의해 분해가 유도되는 표적 단백질은 E3 유비퀴틴 연결효소의 기질이 아니라는 점에서 기질 특이성을 갖는 E3 유비퀴틴 연결효소에 의해 유비퀴틴화 될 수 있는 표적 단백질은 한정적이라는 단점이 있다. 이에 따라, PROTAC이 E3 유비퀴틴 연결효소 및 표적 단백질과 결합하더라도 표적 단백질이 분해되지 않을 가능성이 있다. 또한, 약물의 표적화 전달이 용이하지 않다는 문제점도 여전히 남아 있다.
이에, 본 발명자들은 표적 단백질의 선택적 분해 효율을 높이면서 약물의 표적화 전달이 가능한 신약 플랫폼으로 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체를 개발하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
최근 표적 단백질의 선택적 제거 방법으로 개발되고 있는 약물인 PROTAC은 표적 단백질의 리간드-링커-E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase)의 리간드로 구성되어 있어, 구조적으로 복잡하고 적합한 리간드 및 링커 조합을 발굴하는 것이 용이하지 않다는 문제점이 있다. 또한, PROTAC으로 분해를 유도할 수 있는 표적 단백질이 한정적이고, 표적 단백질의 분해 효율이 떨어진다는 문제점이 있다. 또한, 약물이, 문제가 되는 세포뿐만 아니라 정상세포에도 영향을 미쳐 독성을 유발할 수 있다는 문제가 있다.
따라서, 정상세포에는 독성을 미치지 않고 문제가 되는 세포만을 표적화 할 수 있으면서도, 표적 단백질의 선택적 분해 효율을 높일 수 있는 새로운 개념의 약물 개발이 요구된다.
본 발명은 표적 단백질의 선택적 분해 효율을 높일 수 있는 단백질 분해제(protein degrader), 표적 세포에 상기 단백질 분해제를 정확하게 전달할 수 있도록 하는 항원 특이적 결합 모이어티 및 체내 순환 시에도 안정적이면서, 약물이 표적 세포 내에서 쉽게 방출되어 약효를 극대화할 수 있는 링커 기술을 접목시킨, 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체를 제공한다.
이를 통해, 표적 단백질의 선택적 분해 효율을 향상시킬 수 있고, 상기 단백질 분해제가 표적 세포에 안정적이고 정확하게 도달하여 약효를 효과적으로 발휘하면서도 독성을 크게 낮출 수 있는 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체를 제공함으로써, 상기 과제를 해결하였다.
본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제(protein degrader) 접합체로서, 하기 일반식 I로 표시되는 접합체를 제공한다:
[일반식 I]
Ab - [Linker - (B)m]n
상기 식에서,
Ab는 항원 특이적 결합 모이어티이고;
Linker는 링커이며;
B는 단백질 분해제(protein degrader) 모이어티이고;
m, n은 1 내지 20 중에서 선택되는 정수이다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체를 유효성분으로 함유하는, 과증식, 암 또는 혈관신생질환의 예방 또는 치료 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체는 표적 세포, 특히 암 세포의 항원에 결합하는 항원 특이적 결합 모이어티를 포함함으로써, 표적 세포 내로 단백질 분해제를 효과적이면서도 특이적 및 선택적으로 전달할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체는 E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase)에 결합하는 단백질 분해제를 포함함으로써, 상기 E3 유비퀴틴 연결효소의 기질 단백질, 특히 암 세포의 진행을 활성화하는 단백질의 선택적 분해를 유도할 수 있고, 분해 효율을 높일 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체는 표적 세포 내에서 단백질 분해제가 쉽게 방출되어 효과를 극대화할 수 있는 링커를 포함함으로써, 단백질 분해제가 표적 세포에 안정적으로 도달하여 효능을 효과적으로 발휘할 수 있다.
이에, 본 발명에 따른 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체는 과증식, 암 또는 혈관신생질환의 예방 또는 치료에 용이하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명 단백질 분해제의 반응 경로를 나타낸 도이다.
도 2 및 도 3은 본 발명 접합체의 반응 경로를 나타낸 도이다.
본 발명은 단백질 분해제(protein degrader) 접합체, 보다 상세하게는 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체로서, 특정 일반식으로 표현되는 접합체를 제공한다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 단백질 분해제(protein degrader) 접합체, 보다 상세하게는 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체를 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체로서, 하기 일반식 I로 표시되는 접합체를 제공한다:
[일반식 I]
Ab - [Linker - (B)m]n
상기 식에서,
Ab는 항원 특이적 결합 모이어티이고;
Linker는 링커이며;
B는 단백질 분해제(protein degrader) 모이어티이고;
m, n은 각각 독립적으로 1 내지 20 중에서 선택되는 정수이다.
본 발명은 또한 상기 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 이의 용매화물을 제공한다.
본 명세서에서 "접합체(conjugate)"는 세포독성 화합물의 하나 이상의 분자에 공유결합되는 세포 결합제를 말한다. 여기서, "세포 결합제"는 생물학적 타깃에 대한 친화도를 갖는 분자로서, 예를 들어 리간드, 단백질, 항체, 구체적으로 모노클로날 항체, 단백질 또는 항체 단편, 펩타이드, 올리고뉴클레오티드, 올리고사카라이드일 수 있으며, 결합제는 생물학적 활성 화합물을 생물학적 타깃으로 유도하는 기능을 한다. 본 발명의 일 양태에서, 접합체는 세포 표면 항원을 통해 암 세포를 표적화하도록 설계될 수 있다. 항원은 비정상적인 세포 타입에서 과다 발현되거나 또는 발현되는 세포 표면 항원일 수 있다. 구체적으로, 표적 항원은 증식성 세포(예컨대 암 세포) 상에서만 발현되는 것일 수 있다. 표적 항원은 통상 증식성 조직 및 정상 조직 사이의 상이한 발현에 기초하여 선택될 수 있다.
본 명세서에서 "항원 특이적 결합 모이어티(moiety)"는 표적 항원 또는 표적 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 구체적으로, 상기 항원 특이적 결합 모이어티는 항체 구조물 또는 항체-유사 단백질일 수 있다.
본 명세서에서 "항체 구조물"은 표적 세포의 항원에 결합하는 항체 구조물로, 완전한 항체 형태뿐 아니라, 상기 항체 분자의 항원 결합 단편도 포함한다. 또한, 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명에 사용된 용어 "항원 결합 도메인"은 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 비항체로부터의 결합 도메인을 지칭한다. 주어진 접합체 또는 항체 구조물에 복수의 항원 결합 도메인 (예를 들어, 제1 항원 결합 도메인, 제2 항원 결합 도메인, 제3 항원 결합 도메인 등)이 존재하는 경우 항원 결합 도메인은 넘버링될 수 있다. 동일한 접합체 또는 구조물에서의 상이한 항원 결합 도메인은 동일한 항원 (예를 들어, 제1 항원 결합 도메인 및 제 2 항원은 접합체 또는 구조물의 동일한 표적 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있음) 또는 상이한 항원 (예를 들어, 제1 항원 결합 도메인은 제 1 표적 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있고, 제2 항원 결합 도메인은 접합체 또는 제 2 표적 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있다)을 표적으로 할 수 있다.
항원 결합 도메인은 항체 또는 항체 단편의 항원 결합 부분일 수 있다. 항원 결합 도메인은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유할 수 있는 항체의 하나 이상의 단편일 수 있다. 항원 결합 도메인은 임의의 항원 결합 단편일 수 있다. 항원 결합 도메인은 전형적으로 단일 항원을 인식한다. 항체 구조물은 전형적으로 예를 들어 하나 또는 두 개의 항원 결합 도메인을 포함하지만 더 많은 것이 항체 구조물에 포함될 수 있다.
항체 구조물의 항원 결합 도메인은 항체 또는 비항체 분자를 포함하나 이에 제한되지 않는 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 도메인으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 항원 결합 도메인은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 재조합 항체, 또는 이의 기능성 단편, 예를 들어, 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL), Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG, scFv, hcAbs (중쇄 항체), 단일 도메인 항체, VHH, VNAR, sdAbs, 또는 나노바디를 포함하나 이에 제한되지 않는 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 임의의 도메인으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 항원 결합 도메인은 비항체 스캐폴드, 예컨대 DARPin, 아피머, 아비머, 노틴, 모노바디, 리포칼린, 안티칼린, 'T-바디', 아피바디, 펩티바디, 친화 클램프, 엑토도메인, 수용체 엑토도메인, 수용체, 리간드 또는 센트린을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 항원에 특이적으로 결합하는 비항체 분자의 임의의 도메인으로부터 선택될 수 있다.
항체 구조물의 항원 결합 도메인, 예를 들어 모노클로날 항체로부터의 항원 결합 도메인은 경쇄 및 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 모노클로날 항체는 표적 세포의 표면에 존재하는 항원에 특이적으로 결합하고, 항-표적 세포 항원 항체의 경쇄 및 항-표적 세포 항원 항체의 중쇄를 포함하여 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 형성한다.
본 명세서에서 "Fc 도메인"은 항체의 단편 결정화가능 영역 또는 꼬리 영역을 지칭한다. Fc 도메인은 하나 이상의 Fc 수용체 (FcR)에 결합할 수 있는 구조로, 세포의 표면 상의 Fc 수용체 (FcR)와 상호작용한다.
FcR은 항체의 Fc 도메인에 결합할 수 있다. FcR은 항원에 결합된 항체의 Fc 도메인에 결합할 수 있다. FcR은 FcR이 인식하는 항체의 클래스에 기초하여 (예를 들어, 감마 (γ), 알파 (α) 및 엡실론 (ε)) 클래스로 편성된다. FcαR 클래스는 IgA에 결합하고 복수의 이소형, FcαRI (CD89) 및 FcαμR을 포함한다. FcγR 클래스는 IgG에 결합하고 복수의 이소형, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32a), FcγRIIB (CD32b), FcγRIIIA (CD16a) 및 FcγRIIIB (CD16b)를 포함한다. FcγRIIIA (CD16a)는 FcγRIIIA (CD16a) F158 변이체 또는 V158 변이체일 수 있다.
Fc 도메인의 아미노산 서열에서의 변형은 Fc 도메인에 대한 FcR의 인식을 변경시킬 수 있다. 그러나, 이러한 변형은 여전히 FcR-매개 신호 전달을 허용할 수 있다. 변형은 Fc 도메인의 잔기 (예를 들어, 야생형)에서의 아미노산을 그 잔기에서 상이한 아미노산으로 치환하는 것일 수 있다. 변형은 FcR이 달리 결합하지 않을 수 있는 Fc 도메인상의 부위에 FcR의 결합을 허용할 수 있다. 변형은 FcR의 Fc 도메인에 대한 결합 친화도를 증가시킬 수 있다. 변형은 FcR이 결합 친화도를 증가시킬 수 있는 Fc 도메인상의 부위에 대한 FcR의 결합 친화도를 감소시킬 수 있다. 변형은 FcR에 대한 Fc 도메인 결합 후 후속 FcR-매개 신호 전달을 증가시킬 수 있다.
Fc 도메인은 자연 발생 또는 자연 발생 Fc 도메인의 변이체일 수 있고 야생형 Fc 도메인의 서열과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. Fc 도메인에서의 아미노산 변화는 항체 구조물 또는 접합체가 야생형 Fc 도메인과 비교하여 더 큰 친화도로 적어도 하나의 Fc 수용체에 결합하게 할수 있다.
Fc 도메인은 항체로부터 유래될 수 있다. Fc 도메인은 IgG 항체로부터 유래될 수 있다. Fc 도메인은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 항체로부터 유래될 수 있다. Fc 도메인은 항체로부터의 Fc 도메인과 적어도 80% 동일할 수 있다. Fc 도메인은 항체의 Fc 도메인의 일부일 수 있다.
항체 구조물은 항체에서의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 스캐폴드에서의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 항체 스캐폴드에서의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 비항체 스캐폴드에서의 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
항체 구조물은 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 Fc 도메인은 항원 결합 도메인에 공유 결합될 수 있다. 항체 구조물은 제 1 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 Fc 도메인은 제 1 항원 결합 도메인에 공유 결합될 수 있다. 항체 구조물은 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 Fc 도메인은 Fc 도메인-항원 결합 도메인 융합 단백질로서 항원 결합 도메인에 공유 결합될 수 있다. 항체 구조물은 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 Fc 도메인은 링커에 의해 항원 결합 도메인에 결합될 수 있다.
제 1 항원 결합 도메인 및 제 2 항원 결합 도메인 (존재하는 경우)은 융합 단백질로서 Fc 도메인에 부착될 수 있다. 제 1 항원 결합 도메인은 Fc 도메인의 N-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있고, 여기서 제 2 항원 결합 도메인은 C-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있다. 제 1 항원 결합 도메인은 Fc 도메인의 N-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있으며, 여기서 제 2 항원 결합 도메인은 폴리펩티드 링커를 통해 C-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있다.
대안적으로, 제 1 항원 결합 도메인은 Fc 도메인의 C-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있으며, 여기서 제 2 항원 결합 도메인은 N-말단에서 Fc 도메인에 부착될 수 있다. 제 2 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인은 항체를 포함할 수 있고, 제 1 항원 결합 도메인은 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함할 수 있다. 단쇄 가변 단편은 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 융합 단백질의 제 1 항원 결합 도메인은 제 1 항원 결합 도메인의 단일쇄 가변 단편의 중쇄 가변 도메인에서 제 2 항원 결합 도메인에 부착될 수 있다 (HL 배향). 대안적으로, 융합 단백질의 제 1 항원 결합 도메인은 제 1 항원 결합 도메인의 단쇄 가변 단편의 경쇄 가변 도메인에서 제 2 항원 결합 도메인에 부착될 수 있다 (LH 배향). 어느 방향에서든, 제 1 항원 결합 도메인 및 제 2 항원 결합 도메인은 폴리펩티드 링커를 통해 부착될 수 있다.
본 발명에 기재된 바와 같은 항체 구조물은 제1 항원 결합 도메인의 항원에 대해 10 nM 미만의 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다. 항체 구조물은 제2 항원 결합 도메인의 항원에 대해 10 nM 미만의 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다. 항체 구조물은 1 nM 미만, 100 pM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만인 제1 항원 결합 도메인의 항원에 대한 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다. 항체 구조물은 1 nM 미만, 100 pM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만인 제2 항원 결합 도메인의 항원에 대한 해리 상수 (Kd)를 가질 수 있다.
본 발명에 개시된 항체 구조물은 비천연, 설계 및/또는 조작될 수 있다. 본 발명에 개시된 항체 구조물은 항원 결합 도메인을 포함하는 비천연, 설계 및/또는 조작된 스캐폴드일 수 있다.
항체 구조물은 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있는 항체를 포함할 수 있다. 항체 분자는 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성될 수 있으며, 모두 정확하게 위치한 디설파이드 결합에 의해 공유 결합되어 있다. 경쇄 및 중쇄의 N-말단 영역은 함께 각 항체의 항원 인식 부위를 형성할 수 있다. 구조적으로, 항체의 다양한 기능은 별개의 단백질 도메인 (즉, 영역)으로 제한될 수 있다. 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있는 부위는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄의 N-말단에서 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역 내에 존재할 수 있는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)으로 구성된다. 불변 도메인은 항체의 일반적인 프레임워크를 제공할 수 있고 항체를 항원에 직접 결합시키는데 관여하지 않을 수 있지만, 항체-의존성 세포의 세포 독성(ADCC)에 항체의 참여와 같은 다양한 이펙터 기능에 관여할 수 있다.
자연 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 도메인은 동일한 일반적인 구조를 가질 수 있고, 각 도메인은 3개의 초가변 영역 또는 CDR에 의해 연결된 서열이 다소 보존될 수 있는 4개의 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. 4개의 프레임워크 영역은 주로 β-시트 구조를 채택할 수 있고 CDR은 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성할 수 있고 일부 측면에서는 β-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 쇄의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 근접하게 유지될 수 있고, 다른 쇄의 CDR과 함께 항원 결합 부위의 형성에 기여할 수 있다.
항체 구조물의 항체는 임의 타입의 항체를 포함할 수 있으며, 이는 상이한 부류의 면역글로빈, 예를 들어 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM에 할당될 수 있다. 다수의 상이한 부류는 이소형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 항체는 경쇄 및 중쇄, 종종 복수의 쇄를 추가로 포함할 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 영역 (Fc)은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ일 수 있다. 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 또는 κ 및 람다 또는 λ 중 하나일 수 있다. Fc 영역은 Fc 도메인을 포함할 수 있다. Fc 수용체는 Fc 도메인에 결합할 수 있다. 접합체는 또한 scFv, Fab, 가변 Fc 단편, 도메인 항체 및 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 다른 단편을 포함하지만 이로 제한되지 않는 임의의 단편 또는 이의 재조합 형태를 포함할 수 있다.
항체는 항원 인식 부분을 포함하는 항체의 일부, 즉 표적, 예컨대 항원, 즉 에피토프에 항원 인식 부분의 인식 및 특이적 결합을 부여하기에 충분한 항체의 항원 결정 가변 영역을 지칭하는 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항체의 항원 결합 도메인은 하나 이상의 경쇄 (LC) CDR (LCDR) 및 하나 이상의 중쇄 (HC) CDR (HCDR), 하나 이상의 LCDR 또는 하나 이상의 HCDR을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체의 항체 결합 도메인은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 경쇄 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 경쇄 상보성 결정 영역 2 (LCDR2) 또는 경쇄 상보성 결정 영역 3 (LCDR3). 다른 예에서, 항체 결합 도메인은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 중쇄 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 중쇄 상보성 결정 영역 2 (HCDR2) 또는 중쇄 상보성 결정 영역 3 (HCDR3). 일부 구체예에서, 항체 결합 도메인은 다음을 모두 포함한다: 경쇄 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 경쇄 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 경쇄 상보성 결정 영역 3 (LCDR3), 중쇄 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 중쇄 상보 결정 영역 2 (HCDR2) 및 중쇄 상보 결정 영역 3 (HCDR3). 달리 언급되지 않는 한, 본 발명에 기재된 CDR은 IMGT (국제 ImMunoGeneTics 정보 시스템)에 따라 정의될 수 있다. 항원 결합 도메인은 항체의 중쇄만을 포함할 수 있다 (예를 들어, 항체의 다른 부분은 포함하지 않음). 항원 결합 도메인은 항체의 중쇄의 가변 도메인만을 포함할 수 있다. 대안적으로, 항원 결합 도메인은 항체의 경쇄만을 포함할 수 있다. 항원 결합 도메인은 항체의 가변 경쇄만을 포함할 수 있다.
항체 구조물은 항체 단편, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 또는 Fv 단편을 포함할 수 있다. 본 발명에 사용된 항체는 "인간화"될 수 있다. 인간화된 형태의 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체는 온전한 (전장) 키메라 면역글로불린, 면역글로불린쇄 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 표적-결합 서브도메인)일 수 있고, 이는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 모두를 실질적으로 포함할 수 있고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모두의 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 (FR) 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 적어도 일부의 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린 공통 서열의 것을 포함할 수 있다.
본 발명에 기재된 항체는 인간 항체일 수 있다. 본 발명에 사용된 "인간 항체"는 예를 들어, 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함할 수 있고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대한 유전자 도입 동물로부터 단리된 항체를 포함할 수 있다. 인간 항체는 기능성 내인성 면역글로불린을 발현할 수 없지만 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 유전자 도입 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 선택된 에피토프를 인식하는 완전 인간 항체는 유도된 선택을 사용하여 생성될 수 있다. 이 접근법에서, 선택된 비인간 모노클로날 항체, 예를 들어, 마우스 항체는 동일한 에피토프를 인식하는 완전 인간 항체의 선택을 유도하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명에 기재된 항체는 이중 특이적 항체 또는 이중 가변 도메인 항체 (DVD)일 수 있다. 이중 특이적 및 DVD 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 가질 수 있는 모노클로날, 종종 인간 또는 인간화된 항체일 수 있다.
본 발명에 기재된 항체는 유도되거나 달리 변형된 것일 수 있다. 예를 들어, 유도된 항체는 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 단백질 분해 절단 등에 의해 변형될 수 있다.
항체 구조물은 적어도 하나의 아미노산 잔기에서 발생하는 변형을 갖는 항체를 포함할 수 있다. 변형은 치환, 첨가, 돌연변이, 결실 등일 수 있다. 항체 변형은 비천연 아미노산의 삽입일 수 있다.
항체 구조물은 IgG1 이소형의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 IgG2 이소형의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 IgG3 이소형의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 IgG4 이소형의 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 2 이상의 이소형으로부터의 불변 영역을 포함하는 하이브리드 이소형을 가질 수 있다.
본 발명에 기재된 항체는 상응하는 야생형 서열에 비해 적어도 하나의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능을 변경하도록 변형된 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항체는 변형되지 않은 항체와 비교하여, 예를 들어 Fc 수용체 (FcR)에 대한 결합 증가와 같이 적어도 하나의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능을 증가시키거나 감소시키도록 변형될 수 있다. FcR 결합은 예를 들어 FcR 상호 작용에 필요한 특정 영역에서 항체의 면역글로불린 불변 영역 세그먼트를 돌연변이시킴으로써 감소되거나 증가될 수 있다.
본 발명에 기재된 항체는 변형되지 않은 항체에 비해, 예를 들어 FcγR 상호 작용을 향상시키기 위해 적어도 하나의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능을 획득하거나 개선하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 상응하는 야생형 불변 영역보다 더 큰 친화도로 FcγRIIA, FcγRIIB 및/또는 FcγRIIIA에 결합하는 불변 영역을 갖는 항체가 본 발명에 기재된 방법에 따라 생성될 수 있다.
본 발명에 개시된 항체 구조물은 비천연, 설계 및/또는 조작된 항체일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "항체-유사 단백질"은 표적 항원에 특이적으로 결합하도록 (루프의 돌연변이 유발에 의해) 조작된 단백질을 지칭한다. 전형적으로, 이러한 항체-유사 단백질은 적어도 단백질 스캐폴드에 양 말단에서 부착된 하나 이상의 가변 펩타이드를 포함한다. 이러한 이중적인 구조 제약은 항체의 결합 친화성에 상응하는 수준으로 항체유사 단백질의 결합 친화성을 크게 증가시킨다. 가변 펩타이드 루프의 길이는 전형적으로 아미노산 10 내지 20개로 구성된다. 스캐폴드 단백질은 용해 특성이 우수한 임의의 단백질일 수 있다. 바람직하게는, 스캐폴드 단백질은 소형 구상 단백질(globular protein)이다. 항체-유사 단백질은 비제한적으로 아피바디(affibody), 안티칼린(anticalin) 및 설계된 안키린 반복 단백질(designed ankyrin repeat protein)을 포함한다. 항체-유사 단백질은 다수 돌연변이 라이브러리로부터 유래될 수 있으며, 예를 들어 다수 파지 디스플레이 라이브러리로부터 추출될 수 있으며, 일반적인 항체와 유사하게 분리할 수 있다. 또한, 항체-유사 결합 단백질은 구상 단백질에서 표면-노출형 잔기를 조합적으로 돌연변이 유발함으로써 수득할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항원 특이적 결합 모이어티는 항체 구조물 또는 항체-유사 단백질일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함한다. 예컨대, 항체 구조물은 제 1 항원에 특이적으로 결합하는 제 1 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항체 구조물은 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인, 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 도메인, 및 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 항원 결합 도메인과 Fc 도메인이 공유 결합될 수 있다. 예컨대, 항체 구조물은 제 1 항원 결합 도메인에 Fc 도메인이 공유 결합할 수 있다. 또한, 항체 구조물이 제 2 항원 결합 도메인을 포함할 경우, 제 2 항원 결합 도메인은 제 2 항원 결합 도메인의 N-말단이 제 1 항원 결합 도메인의 C-말단에서 공유 결합할 수 있고, 또는 Fc 도메인의 C-말단에서 공유 결합할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 제 1 항원 결합 도메인 및/또는 제 2 항원 결합 도메인이 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 이의 항원 결합 단편 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 또한, 제 1 항원 결합 도메인 또는 제 2 항원 결합 도메인이 단쇄 가변 영역 단편(scFv)을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Fc 도메인은 IgG 영역일 수 있다. Fc 도메인은 IgG1 Fc 영역일 수 있다. 또한, Fc 도메인이 야생형 IgG 영역의 아미노산 서열과 비교하여 IgG 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 Fc 도메인 변이체일 수 있고, 상기 Fc 도메인 변이체가 야생형 IgG 영역과 비교하여 하나 이상의 Fcγ 수용체에 대한 친화도가 증가된 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Fc 도메인은 비항체 스캐폴드일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Fc 도메인은
a) Fc 도메인-항원 결합 도메인 융합 단백질로서; 또는
b) 제2 링커를 통한 접합에 의해
항원 결합 도메인에 공유 결합될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 항원 제시 세포에서 제시하는 항원에 결합하는 이펙터(effector) 항원 결합 도메인을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 항원에 결합하기 위한 접합체의 Kd가 비접합된 항체 구조물의 Kd의 100 nM 미만 및 100 배 이하일 수 있다. 예컨대, 비접합된 항체 구조물의 Kd의 1 nM 미만, 100 pM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만일 수 있다. 또한, 비접합된 항체 구조물의 Kd의 100 배 미만, 200 배 미만, 400 배 미만, 800 배 미만, 또는 1000 배 미만일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 예컨대, 모노클로날 항체, dAb, scAb, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv, scFv-Fc 단편, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 항체 변이체, 다중 결합 항체(multimeric antibody) 또는 이중 특이적 항체일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 래빗, 마우스, 키메릭, 인간화 또는 완전 인간 모노클로날 항체일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 IgG 이소형일 수 있다.
본 발명에 개시된 항체 구조물은 표적 세포의 항원에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 구조물은 암 세포의 항원에 결합한다. 항체는 표적 세포의 표면 상에 적어도 10, 100, 1,000, 10,000, 1.0 x 105, 1.0 x 106, 2.5 x 106, 5 x 106 또는 1 x 107 개 카피의 양으로 존재하는 표적 항원에 결합할 수 있다.
본 발명에 개시된 항체 구조물은 표적 세포의 항원에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항원은 5T4, A33, ABL, ABCF1, ACVR1, ACVR1B, ACVR2, ACVR2B, ACVRL1, ADORA2A, AFP, Aggrecan, AGR2, AICDA, AIF1, AIGI, AKAP1, AKAP2, ALK, AMH, AMHR2, ANGPT1, ANGPT2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANPEP, APC, APOCl, AR, aromatase, ATX, AX1, AZGP1 (zinc-a-glycoprotein), avB3, B7.1, B7.2, B7-H1, BAD, BAFF, BAG1, BAI1, BCR, BCL2, BCL6, BDNF, BLNK, BLR1 (MDR15), BIyS, BMP1, BMP2, BMP3B (GDFIO), BMP4, BMP6, BMP8, BMPR1A, BMPR1B, BMPR2, BPAG1 (plectin), BRCA1, C19orflO (IL27w), C3, C4A, C5, C5R1, CA-125, ,CA19-9 CAMPATH-1, CANT1, CAPRIN-1, CASP1, CASP4, CAV1, CCBP2 (D6/JAB61), CCL1 (1-309), CCLI1 (eotaxin), CCL13 (MCP-4), CCL15 (MIP-Id), CCL16 (HCC-4), CCL17 (TARC), CCL18 (PARC), CCL19 (MIP-3b), CCL2 (MCP-1), MCAF, CCL20 (MIP-3a), CCL21 (MEP-2), SLC, exodus-2, CCL22(MDC/STC-I), CCL23 (MPIF-I), CCL24 (MPIF-2/eotaxin-2), CCL25 (TECK), CCL26(eotaxin-3), CCL27 (CTACK/ILC), CCL28, CCL3 (MIP-Ia), CCL4 (MIPIb), CCL5 (RANTES), CCL7 (MCP-3), CCL8 (mcp-2), CCNA1, CCNA2, CCND1, CCNE1, CCNE2, CCR1 (CKR1/HM145), CCR2 (mcp-IRB/RA), CCR3 (CKR3/CMKBR3), CCR4, CCR5 (CMKBR5/ChemR13), CCR6 (CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6), CCR7 (CKR7/EBI1), CCR8 (CMKBR8/TERI/CKR-L1), CCR9 (GPR-9-6), CCRL1 (VSHK1), CCRL2 (L-CCR), CD164, CD19, CDIC, CD2, CD20, CD21, CD200, CD-22, CD24, CD25, CD27, CD28, CD3, CD30, CD33, CD35, CD37, CD38, CD3E, CD3G, CD3Z, CD4, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD45RB, CD47, CD5, CD52, CD69, CD72, CD74, CD79A, CD79B, CD8, CD80, CD81, CD83, CD86, CD137, CD152, CD274, CDH1 (E-cadherin), CDH1O, CDH12, CDH13, CDH18, CDH19, CDH2O, CDH5, CDH7, CDH8, CDH9, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK9, CDKN1A (p21Wap1/Cip1), CDKN1B (p27Kip1), CDKN1C, CDKN2A (p16INK4a), CDKN2B, CDKN2C, CDKN3, CEA, CEBPB, CERI, CHGA, CHGB, Chitinase, CHST1O, CKLFSF2, CKLFSF3, CKLFSF4, CKLFSF5, CKLFSF6, CKLFSF7, CKLFSF8, CLDN3, CLDN7 (claudin-7), CLN3, CLU (clusterin), CMKLR1, CMKOR1 (RDC1), CNR1, COL18A1, COLIA1, COL4A3, COL6A1, CR2, 크립토, CRP, CSF1 (M-CSF), CSF2 (GM-CSF), CSF3 (GCSF), CTL8, CTNNB1 (β-catenin), CTSB (cathepsin B), CX3CL1 (SCYD1), CX3CR1 (V28), CXCL1 (GRO1), CXCL1O (IP-IO), CXCLI1 (1-TAC/IP-9), CXCL12 (SDF1), CXCL13, CXCL14, CXCL16, CXCL2 (GRO2), CXCL3 (GRO3), CXCL5 (ENA-78/LIX), CXCL6 (GCP-2), CXCL9 (MIG), CXCR3 (GPR9/CKR-L2), CXCR4, CXCR6 (TYMSTR/STRL33/본조(Bonzo)), cyclin B1, CYB5, CYC1, CYSLTR1, DAB2IP, DES, DKFZp451J0118, DNCL1, DPP4, E2F1, Engel, Edge, Fennel, EFNA3, EFNB2, EGF, EGFR, ELAC2, ENG, Enola, ENO2, ENO3, EPHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHA9, EPHA10, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB5, EPHB6, EPHRIN-A1, EPHRIN-A2, EPHRINA3, EPHRIN-A4, EPHRIN-A5, EPHRIN-A6, EPHRIN-B1, EPHRIN-B2, EPHRIN-B3, EPHB4, EPG, ERG, ERBB2 (Her-2), EREG, ERK8, Estrogen receptor, Endosialin, Earl, ESR2, F3 (TF), FADD, farnesyltransferase, FasL, FASNf, FBP (Folate-binding protein), FCER1A, FCER2, FCGR3A, FGF, FGF1 (aFGF), FGF10, FGF1 1, FGF12, FGF12B, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF19, FGF2 (bFGF), FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, FGF3 (int-2), FGF4 (HST), FGF5, FGF6 (HST-2), FGF7 (KGF), FGF8, FGF9, FGFR3, FIGF (VEGFD), FIL1(EPSILON), FBL1 (ZETA), FLJ12584, FLJ25530, FLRT1 (fibronectin), FLT1, FLT-3, FOS, FOSL1(FRA-1), FY (DARC), G250, GABRP (GABAa), GAGEB1, GAGEC1, GALNAC4S-6ST, GATA3, GD2, GD3, GDF5, GFI1, GGT1, GM2, GM-CSF, GNAS1, GNRH1, gp100, GPR2 (CCR10), GPR31, GPR44, GPR81 (FKSG80), GRCC1O (C1O), GRP, GSN (Gelsolin), GSTP1, HAVCR2, HDAC, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, Hedgehog, HGF, HIF1A, HIP1, histamine, histamine receptor, HLA-A, HLA-DRA, HLA-E, HLD-DR, HM74, HMOXI, HPV E6, HPV E7, HSP90, hTERT, HUMCYT2A, ICEBERG, ICOSL, ID2, IFN-a, IFNA1, IFNA2, IFNA4, IFNA5, EFNA6, BFNA7, IFNB1, IFNγ, IFNW1, IGBP1, IGF1, IGFIR, IGF2, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP6, DL-1, ILIO, ILIORA, ILIORB, IL-1, IL1R1 (CD121a), IL1R2(CD121b), IL-IRA, IL-2, IL2RA (CD25), IL2RB(CD122), IL2RG(CD132), IL-4, IL-4R(CD123), IL-5, IL5RA(CD125), IL3RB(CD131), IL-6, IL6RA, (CD126), IR6RB(CD130), IL-7, IL7RA(CD127), IL-8, CXCR1 (IL8RA), CXCR2, (IL8RB/CD128), IL-9, IL9R(CD129), IL-10, IL10RA(CD210), IL10RB(CDW210B), IL-11, IL-11RA, IL-12, IL-12A, IL-12B, IL-12RB1, IL-12RB2, IL-13, IL-13RA1, IL-13RA2, IL-14, IL-15, IL-15RA, IL-16, IL-17, IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17R, IL-18, IL-18BP, IL-18R1, IL-18RAP, IL-19, ILIA, ILIB, ILIF10, ILIF5, IL1F6, ILIF7, IL1F8, DL1F9, ILIHYI, ILIR1, IL1R2, ILIRAP, ILIRAPLI, ILIRAPL2, ILIRL1, IL1RL2, ILIRN, IL-2, IL-20, IL-20RA, IL-21R, IL-22, IL-22R, IL-22RA2, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, IL-28B, IL-29, IL-2RA, IL-2RB, IL-2RG, IL-3, IL-30, IL-3RA, IL-4, IL-6ST (당단백질 130), ILK, INHA, INHBA, INSL3, INSL4, IRAK1, IRAK2, ITGA1, ITGA2, ITGA3, ITGA6 (α6 integrin), ITGAV, ITGB3, ITGB4 (β4 integrin), JAG1, JAK1, JAK3, JTB, JUN, K6HF, KAI1, KDR, KITLG, KLF5 (GC Box BP), KLF6, KLK10, KLK12, KLK13, KLK14, KLK15, KLK3, KLK4, KLK5, KLK6, KLK9, KRT1, KRT19 (Keratin 19), KRT2A, KRTHB6(hair-specific type II keratin), LAMA5, LEP (leptin), Lingo-p75, Lingo-Troy, LMP2, LPS, LTA (TNF-b), LTB, LTB4R (GPR16), LTB4R2, LTBR, MelanA/MART1, MACMARCKS, MAG, OMgp, MAGE A3, MAP2K7 (c-Jun), MCP-1, MDK, MIB1, midkine, MIF, MISRII, MJP-2, MK, MKI67 (Ki-67), ML-IAP, MMP2, MMP9, MS4A1, MSMB, MT3 (metallothionectin-UI), MMPs, mTOR, MTSS1, MUC1 (mucin), MYC, MYD88, NCK2, NA17, neurocan, NFKBI, NFKB2, NGFB (NGF), NGFR, NgR-Lingo, NgRNogo66, (Nogo), NgR-p75, NgR-Troy, NMEI (NM23A), NOTCH, NOTCH1, NOX5, NPPB, NROB1, NROB2, NRID1, NR1D2, NR1H2, NR1H3, NR1H4, NR112, NR113, NR2C1, NR2C2, NR2E1, NR2E3, NR2F1, NR2F2, NR2F6, NR3C1, NR3C2, NR4A1, NR4A2, NR4A3, NR5A1, NR5A2, NR6A1, NRP1, NRP2, NT5E, NTN4, NY-ESO-1, ODZI, OPRDI, P2RX7, p53 및 이의 변이체, PAP, PART1, PATE, PAWR, PAX3, PCA3, PCDGF, PCNA, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PECAMI, peg-asparaginase, PF4 (CXCL4), PGF, PGR, phosphacan, PIAS2, PI3 Kinase, PIK3CG, PLAU (uPA), PLG, PLXDCI, PKC, PKC-베타, PPBP (CXCL7), PPID, PR1, PRKCQ, PRKD1, PRL, PROC, PROK2, PSAP, PSCA, PSM, PTAFR, PTEN, PTGS2 (COX-2), PTN, RAC2 (P21Rac2), RANK, RANK ligand, RARB, Ras 변이체, RGS1, RGS13, RGS3, RNFI1O (ZNF144), Ron, ROBO2, RXR, S100A2, SCGB 1D2 (lipophilin B), SCGB2A1 (mammaglobin 2), SCGB2A2 (mammaglobin 1), SCYE1 (endothelial Monocyte-activating cytokine), SDF2, SERPENA1, SERPINA3, SERPINB5 (maspin), SERPINEI (PAI-I), SERPINFI, SHIP-1, SHIP-2, SHB1, SHB2, SHBG, SfcAZ, SLC2A2, SLC33A1, SLC43A1, SLIT2, SPP1, SPRR1B (Spr1), ST6GAL1, STAB1, STATE, STEAP, STEAP2, TAG-72, TB4R2, TBX21, TCP1O, TDGF1, TEK, 테나신, TGFA, TGFB1, TGFB1I1, TGFB2, TGFB3, TGFBI, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, THIL, THBS1 (thrombospondin-1), THBS2, THBS4, THPO, TIE (Tie-1), TIMP3, tissue factor, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TNF, TNF-a, TNFAIP2 (B94), TNFAIP3, TNFRSFI1A, TNFRSF1A, TNFRSF1B, TNFRSF21, TNFRSF5, TNFRSF6 (Fas), TNFRSF7, TNFRSF8, TNFRSF9, TNFSF1O (TRAIL), TNFSF1 1 (TRANCE), TNFSF12 (APO3L), TNFSF13 (April), TNFSF13B, TNFSF14 (HVEM-L), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF15 (VEGI), TNFSF18, TNFSF4 (OX40 ligand), TNFSF5 (CD40 ligand), TNFSF6 (FasL), TNFSF7 (CD27 ligand), TNFSF8 (CD30 ligand), TNFSF9 (4-1BB ligand), TOLLIP, Toll-like receptor, TOP2A (topoisomerase Iia), TP53, TPM1, TPM2, TRADD, TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF4, TRAF5, TRAF6, TRKA, TREM1, TREM2, TRPC6, TSLP, TWEAK, Tyrosinase, uPAR, VEGF, VEGFB, VEGFC, versican, VHL C5, VLA-4, Wnt-1, XCL1 (lymphotactin), XCL2 (SCM-Ib), XCRI (GPR5/CCXCR1), YY1, ZFPM2, CLEC4C (BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D (MCL, CLECSF8), CLEC4E (Mincle), CLEC6A (Dectin-2), CLEC5A (MDL-1, CLECSF5), CLEC1B (CLEC-2), CLEC9A (DNGR-1), CLEC7A (Dectin-1), PDGFRa, SLAMF7, GP6 (GPVI), LILRA1 (CD85I), LILRA2 (CD85H, ILT1), LILRA4 (CD85G, ILT7), LILRA5 (CD85F, ILT11), LILRA6 (CD85b, ILT8), NCR1 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD337, NKp30), OSCAR, TARM1, CD300C, CD300E, CD300LB (CD300B), CD300LD (CD300D), KIR2DL4 (CD158D), KIR2DS, KLRC2 (CD159C, NKG2C), KLRK1 (CD314, NKG2D), NCR2 (CD336, NKp44), PILRB, SIGLEC1 (CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15 (CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1 (CD172B), TREM1 (CD354), TREM2, WT1 또는 KLRF1 (NKp80)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
보다 구체적으로, 항원은 FcRγ-결합된 수용체일 수 있고, FcRγ-결합된 수용체의 예로 GP6 (GPVI), LILRA1 (CD85I), LILRA2 (CD85H, ILT1), LILRA4 (CD85G, ILT7), LILRA5 (CD85F, ILT11), LILRA6 (CD85b, ILT8), NCR1 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD337, NKp30), OSCAR 또는 TARM1을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또는, 항원은 DAP12-결합된 수용체일 수 있고, DAP12-결합된 수용체의 예로 CD300C, CD300E, CD300LB (CD300B), CD300LD (CD300D), KIR2DL4 (CD158D), KIR2DS, KLRC2 (CD159C, NKG2C), KLRK1 (CD314, NKG2D), NCR2 (CD336, NKp44), PILRB, SIGLEC1 (CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15 (CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1 (CD172B), TREM1 (CD354) 또는 TREM2를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또는, 항원은 hemITAM-보유 수용체일 수 있고, hemITAM-보유 수용체의 예로 KLRF1 (NKp80)을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또는, 항원은 CLEC4C (BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D (MCL, CLECSF8), CLEC4E (Mincle), CLEC6A (Dectin-2), CLEC5A (MDL-1, CLECSF5), CLEC1B (CLEC-2), CLEC9A (DNGR-1) 또는 CLEC7A (Dectin-1)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또는, 항원은 ATP5I (Q06185), OAT (P29758), AIFM1 (Q9Z0X1), AOFA (Q64133), MTDC (P18155), CMC1 (Q8BH59), PREP (Q8K411), YMEL1 (O88967), LPPRC (Q6PB66), LONM (Q8CGK3), ACON (Q99KI0), ODO1 (Q60597), IDHP (P54071), ALDH2 (P47738), ATPB (P56480), AATM (P05202), TMM93 (Q9CQW0), ERGI3 (Q9CQE7), RTN4 (Q99P72), CL041 (Q8BQR4), ERLN2 (Q8BFZ9), TERA (Q01853), DAD1 (P61804), CALX (P35564), CALU (O35887), VAPA (Q9WV55), MOGS (Q80UM7), GANAB (Q8BHN3), ERO1A (Q8R180), UGGG1 (Q6P5E4), P4HA1 (Q60715), HYEP (Q9D379), CALR (P14211), AT2A2 (O55143), PDIA4 (P08003), PDIA1 (P09103), PDIA3 (P27773), PDIA6 (Q922R8), CLH (Q68FD5), PPIB (P24369), TCPG (P80318), MOT4 (P57787), NICA (P57716), BASI (P18572), VAPA (Q9WV55), ENV2 (P11370), VAT1 (Q62465), 4F2 (P10852), ENOA (P17182), ILK (O55222), GPNMB (Q99P91), ENV1 (P10404), ERO1A (Q8R180), CLH (Q68FD5), DSG1A (Q61495), AT1A1 (Q8VDN2), HYOU1 (Q9JKR6), TRAP1 (Q9CQN1), GRP75 (P38647), ENPL (P08113), CH60 (P63038) 또는 CH10 (Q64433)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또는, 항원은 CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR Her2, SLAMF7 또는 gp75일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 항원에 결합하는 항체 구조물로 다음의 항체 또는 Fc 융합 단백질을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다: 아바고보맙, 아바타셉트 (ORENCIATM로도 알려짐), 아브식시맙 (REOPROTM, c7E3 Fab로도 알려짐), 아달리무맙 (HUMIRATM로도 알려짐), 아데카투무맙, 알렘투주맙 (CAMPATHTM, 맙캠패스(MabCampath) 또는 캠패스-1H로도 알려짐), 알투모맙, 아펠리모맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아네투무맙, 안루키주맙, 아폴리주맙, 아르시투모맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 아토롤리무맙, 바피뉴주맙, 바실릭시맙 (SIMULECTTM로도 알려짐), 바비툭시맙, 벡투모맙 (LYMPHOSCANTM으로도 알려짐), 벨리무맙(LYMPHO-STAT-BTM로도 알려짐), 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙 (AVASTINTM), 비시로맙 브랄로바르비탈, 비바투주맙 메르탄신, 캠패스, 카나키누맙 (ACZ885로도 알려짐), 칸투주맙 메라탄신, 카프로맙 (PROSTASCINTTM로도 알려짐), 카투막소맙 (REMOVABTM로도 알려짐), 세델리주맙 (CIMZIATM로도 알려짐), 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙 (ERBITUXTM로도 알려짐), 클레놀릭시맙, 다세투주맙, 다클릭시맙, 다클리주맙 (ZENAPAXTM로도 알려짐), 데노수맙 (AMG 162로도 알려짐), 데투모맙, 도를리모맙 아리톡스, 도를릭시주맙, 둔투무맙, 두리물루맙, 두르물루맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙 (SOLIRISTM로도 알려짐), 에도바코맙, 에드레콜로맙 (Mab17-1A, PANOREXTM로도 알려짐), 에팔리주맙 (RAPTIVATM로도 알려짐), 에푼구맙 (MYCOGRABTM로도 알려짐), 엘실리모맙, 엔리모맙 페골, 에피투모맙 시툭세탄, 에팔리주맙, 에피투모맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 에르투막소맙 (REXOMUNTM로도 알려짐), 에타터셉트 (ENBRELTM로도 알려짐), 에타라시주맙 (에타라투주맙, VITAXINTM, ABEGRINTM으로도 알려짐), 엑스비비루맙, 파놀레소맙 (NEUTROSPECTM로도 알려짐), 파랄리모맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙 (HUZAFTM로도 알려짐), 갈릭시맙, 간테네루맙, 가빌리모맙 (ABXCBLTM로도 알려짐), 겜투주맙 오조가미신 (MYLOTARGTM로도 알려짐), 골리무맙 (CNTO 148로도 알려짐), 고밀릭시맙, 이발리주맙 (TNX-355로도 알려짐), 이브리투모맙 티욱세탄 (ZEVALINTM으로도 알려짐), 이고보맙, 임시로맙, 인플릭시맙 (REMICADETM로도 알려짐), 이놀리모맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙 (MDX-010, MDX-101로도 알려짐), 이라투무맙, 켈릭시맙, 라베투주맙, 레말레소맙, 레브릴리주맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙 (HGS-ETR2, ETR2-ST01로도 알려짐), 렉시투무맙, 리비비루맙, 린투주맙, 루카투무맙, 루밀릭시맙, 마파투무맙 (HGSETR1, TRM-1로도 알려짐), 마슬리모맙, 마투주맙 (EMD72000으로도 알려짐), 메폴리주맙 (BOSATRIATM로도 알려짐), 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 모롤리무맙, 모타비주맙 (NUMAXTM로도 알려짐), 무로모납 (OKT3으로도 알려짐), 나콜로맙 타페나톡스, 납투모맙 에스타페나톡스, 나탈리주맙(TYSABRITM, ANTEGRENTM으로도 알려짐), 네바쿠맙, 네레리모맙, 니모투주맙 (THERACIM hR3TM, THERA-CIM-hR3TM, THERALOCTM로도 알려짐), 노페투모맙 메르펜탄 (VERLUMATM로도 알려짐), 오크렐리주맙, 오둘리모맙, 오파투무맙, 오말리주맙 (XOLAIRTM로도 알려짐), 오레고보맙 (OVAREXTM로도 알려짐), 오텔릭시주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙 (SYNAGISTM로도 알려짐), 파니투무맙 (ABX-EGF, VECTIBIXTM로도 알려짐), 파스콜리주맙, 펨투모맙 (THERAGYNTM으로도 알려짐), 퍼투주맙 (2C4, OMNITARGTM로도 알려짐), 펙셀리주맙, 핀투모맙, 프릴릭시맙, 프리투무맙, 라니비주맙 (LUCENTISTM로도 알려짐), 락시바쿠맙, 레가비루맙, 레슬리주맙, 리툭시맙 (RITUXANTM, MabTHERATM로도 알려짐), 로벨리주맙, 루플리주맙, 사투모맙, 세비루맙, 시브로투주맙, 시플리주맙 (MEDI-507로도 알려짐), 손투주맙, 스타물루맙 (MYO-029로도 알려짐), 술레소맙 (LEUKOSCANTM으로도 알려짐), 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 테피바주맙 (AUREXISTM로도 알려짐), 텔리모맙 아리톡스, 테넬릭시맙, 테플리주맙, 티실리무맙, 토실리주맙 (ACTEMRATM로도 알려짐), 토랄리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙 (HERCEPTINTM으로도 알려짐), 트레멜리무맙 (CP-675,206으로도 알려짐), 투코투주맙 셀모류킨, 투비루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙 (CNTO 1275로도 알려짐), 바팔릭시맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 비실리주맙 (NUVIONTM으로도 알려짐), 볼로식시맙 (M200으로도 알려짐), 보투무맙 (HUMASPECTTM으로도 알려짐), 잘루투무맙, 자놀리무맙 (HuMAX-CD4로도 알려짐), 지랄리무맙, 졸리모맙 아리톡스, 다라투무맙, 엘로툭수맙, 오빈툰주맙, 올라라투맙, 브렌툭시맙 베도틴, 아플리베르셉트, 아바타셉트, 벨라타셉트, 아피베르셉트, 에타너셉트, 로미플로스팀, SBT-040 (서열이 미국 공개 특허 제2017/0158772호에 열거되어 있음).
본 명세서에서 "링커"는 세포독성 화합물을 리간드에 공유결합시키는 화합물을 말한다.
본 발명에 기재된 링커는 절단성, 비절단성, 친수성 또는 소수성 일 수 있다.
절단성 링커는 세포 내 조건들 하에서 절단 가능하여 상기 링커의 절단으로 세포 내 환경에서 항체 구조물-단백질 분해제 접합체로부터 단백질 분해제를 방출한다.
절단성 링커는 세포 내 환경(예를 들어, 리소좀 또는 엔도좀 또는 카베올레아 (caveolea) 내)에 존재하는 절단제에 의해 절단 가능하다. 절단성 링커는, 예컨대, 리소좀의 또는 엔도좀의 프로테아제를 포함하는 이에 제한되지 않는 세포 내 펩티다아제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커(peptidyl linker)일 수 있다. 일반적으로, 상기 펩티딜 링커는 적어도 2개의 아미노산 길이 또는 적어도 3개의 아미노산 길이이다. 절단제들은 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있으며, 이들 모두는 디펩타이드 약물 유도체들 가수분해하여 표적 세포들 내에서 활성 약물을 방출하는 것으로 알려져 있다(예를 들어, Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123 참조). 항원 발현 세포들 내에 존재하는 효소들에 의해 절단 가능한 펩티딜 링커들이 가장 일반적이다. 예를 들어, 암 조직에서 고도로 발현되는 티올-의존성 프로테아제 카텝신-B에 의해 절단 가능한 펩티딜 링커가 사용될 수 있다(예를 들어, Phe-Leu 또는 Gly-Phe-Leu-Gly 링커). 다른 이러한 링커들은, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,214,345에서 설명된다. 또한, 세포 내 프로테아제에 의해 절단 가능한 상기 펩티딜 링커는 예를 들어, Val-Cit 링커, Phe-Lys 링커(예를 들어, Val-Cit 링커를 이용한 독소루비신의 합성을 설명하는 미국 등록 특허 제6,214,345호 참조) 또는 Val-Ala 링커일 수 있다. Val-Cit 링커 또는 Val-Ala 링커는 펜타플루오로페닐 그룹을 함유할 수 있고, 숙신이미드 그룹 또는 말레이미드 그룹을 함유할 수 있다. 또는, PABA 그룹 및 펜타플루오로페닐 그룹을 함유할 수 있고, PABA(4-Aminobenzoic acid) 그룹 및 말레이미드 그룹을 함유할 수 있으며, PABA 그룹 및 숙신이미드 그룹을 함유할 수 있다.
본 발명의 명세서에서 사용된 용어 "세포 내 절단된(intracellularly cleaved)" 및 "세포 내 절단(intracellular cleavage)"은 항체 구조물-단백질 분해제 접합체에 대한 세포 내부의 대사 과정 또는 반응을 지칭하며, 이로써 단백질 분해제 (B) 및 항체 구조물 (Ab) 사이의 공유 부착, 예를 들어, 링커가 파괴되어 유리 약물 또는 세포 내 항체로부터 분리된 접합체의 다른 대사 산물이 야기된다.
또한, 절단성 링커는 pH-민감, 즉, 특정 pH 값에서 쉽게 가수분해 될 수 있다. 일반적으로, 상기 pH-민감성 링커는 산성 조건들에서 가수분해될 수 있다. 예를 들어, 리소좀에서 가수분해될 수 있는 산-불안정성 링커(예를 들어, 하이드라존(hydrazone), 세미카르바존(semicarbazone), 티오세미카르바존 (thiosemicarbazone), 시스-아코니틱 아미드(cis-aconitic amide), 오쏘에스테르(orthoester), 아세탈, 케탈 등)가 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 등록 특허 제5,122,368호; 제5,824,805호; 제5,622,929호; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661 참조). 이러한 링커들은 혈액과 같은 중성 pH 조건들에서 비교적 안정적이지만 리소좀의 대략적인 pH인 pH 5.5 또는 5.0 미만에서는 불안정하다. 가수분해성 링커의 예로는 티오에테르 링커(예를 들어, 아실하이드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르와 같은(예를 들어, 미국 등록 특허 제5,622,929호 참조)를 들 수 있다..
또한, 링커는 환원 조건들 하에서 절단 가능하다(예를 들어, 디설파이드 링커). 예를 들어, SATA (N-숙신이미딜-5-아세틸티오아세테이트), SPDP (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT (N-숙신이미딜-옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-티오)톨루엔)-, SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함하는 다양한 디설파이드 링커들이 공지되어 있다 (예를 들어, Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; 미국 등록 특허 제4,880,935호 참조).
또한, 링커는 말로네이트 링커(Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), 말레이미도벤조일 링커(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304), 3'-N-아미드 유사체(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12), 베타-글루쿠로나이드(β-Glucuronide) 링커(Jeffery et al., 2006, Bioconjug Chem. 17(3):832-40), 또는 베타-갈락토사이드(β-galactoside) 링커(Kolodych et al., 2017, Eur J Med Chem. Dec 15;142:376-382)일 수 있다.
비절단성 링커는 말레이미도카프로일 링커일 수 있다. 말레이미도카프로일 링커는 N-말레이미도메틸사이클로헥산-1-카복실레이트를 포함할 수 있다. 말레이미도카프로일 링커는 숙신이미드 그룹을 함유할 수 있다. 말레이미도카프로일 링커는 펜타플루오로페닐 그룹을 함유할 수 있다. 링커는 말레이미드 그룹과 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자의 조합일 수 있다. 링커는 말레이미도카프로일 그룹과 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자의 조합일 수 있다. 링커는 말레이미드-PEG4 링커일 수 있다. 링커는 숙신이미드 그룹을 함유하는 말레이미도카프로일 링커 및 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자의 조합일 수 있다. 링커는 펜타플루오로페닐 그룹 및 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 함유하는 말레이미도카프로일 링커의 조합일 수 있다. 링커는 폴리에틸렌 글리콜 분자에 연결된 말레이미드를 함유할 수 있으며, 여기서 폴리에틸렌 글리콜은 더 많은 링커 가요성을 허용하거나 링커를 길게 사용할 수 있다. 링커는 (말레이미도카프로일)-(발린-시트룰린)-(파라-아미노벤질옥시카보닐) 링커일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 링커는 절단성 링커일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 링커는 프로테아제 절단성 링커, 산-절단성 링커, 디설파이드 링커, 자기-희생기 링커(self-immolative linker) 또는 자기-안정화 링커(self-stabilizing linker), 말로네이트 링커, 말레이미도벤조일 링커, 3'-N-아미드 유사체, 베타-글루쿠로나이드(β-Glucuronide) 링커, 또는 베타-갈락토사이드(β-galactoside) 링커일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 프로테아제 절단성 링커는 티올반응성 스페이서(thiolreactive spacer) 또는 디펩타이드를 포함할 수 있고, 보다 구체적으로, 상기 프로테아제 절단성 링커는 티올반응성 말레이미도카프로일 스페이서, 발린-시트룰린 디펩타이드 또는 p-아미노-벤질옥시카보닐 스페이서를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 산 절단성 링커는 하이드라진(hydrazine) 링커 또는 제4급 암모늄 링커일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 링커는 일반식 Ⅱ의 구조를 갖는 것일 수 있다.
[일반식 Ⅱ]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000001
상기 식에서,
물결표시는 Ab와 연결되는 부위, * 표시는 단백질 분해제와 연결되는 부위를 나타내며;
G는 글루쿠론산 모이어티(glucuronic acid moiety) 또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000002
이고, 상기 R3은 수소 또는 카복실 보호기이며, 상기 각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬 또는 C3-8 사이클로알킬이며;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- 또는 -PO2NR'-이고, 상기 C, S 또는 P는 직접적으로 페닐링(phenyl ring)에 결합하며, 상기 R' 및 R''는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20아릴인 화합물이고;
Z는 독립적으로 C1-8 알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이며;
n은 0 내지 3의 정수이고;
L은 공유 링커(covalent linker)이다.
본 발명의 일 양태에서, 링커는 하기 화학식 IIa의 구조를 갖는 것일 수 있다:
[화학식 IIa]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000003
상기 식에서,
G는 당(sugar), 당산(sugar acid), 또는 당 유도체(sugar derivatives)이고,
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'-, 또는 -PO2NR'-이며,
C(O), S, 또는 P가 페닐링(phenyl ring)과 바로 연결되는 경우, R' 및 R''은 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 디-C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴, 또는 C6-20 아릴이고,
Z는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로이며,
n은 0 내지 3의 정수이고,
m은 0 또는 1이며,
L은 상기 정의와 동일하고,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬 또는 C3-8 사이클로알킬이거나, 또는
R1 및 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 C3-8 사이클로알킬 환을 형성하며,
상기 식에서 물결표시는 Ab와 연결되는 부위,
* 표시는 단백질 분해제와 연결되는 부위를 나타낸다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 당 또는 당산은 모노사카라이드이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 G는 글루쿠론산 모이어티(glucuronic acid moiety) 또는 하기 화학식 (IIIa) 구조의 화합물이다:
[화학식 (IIIa)]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000004
여기에서,
R3는 수소 또는 카르복실 보호기이고,
각 R4는 각각 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 R3는 수소이고, 각 R4는 수소이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 R1 및 R2는 각각 수소이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Z는 각각 독립적으로 C1-8 알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- 또는 -PO2NR'-이고, 상기 C, S 또는 P는 직접적으로 페닐링(phenyl ring)에 결합하며, 상기 R' 및 R''는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20아릴이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 -C(O)-, -C(O)NR'- 또는 -C(O)O-이고, 보다 구체적으로 상기 W는 -C(O)NR'-이며, 여기에서 C(O)가 페닐링과 연결되고, NR'은 L에 결합된다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 -C(O)NR'- 이고, 상기 W의 질소는 친수성 아미노산의 질소 원자이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 W는 -C(O)NR'- 이고, 상기 W의 질소는 펩타이드의 N-말단 아미노산의 질소 원자이다. 또한, 상기 펩타이드는 2 내지 20개의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 n은 0, 1, 2 또는 3이고, 보다 구체적으로 0, 1 또는 2이며, 보다 더 구체적으로 0이다.
보다 구체적으로, 상기 G는 하기 화학식 (IIIa) 구조의 화합물이고:
[화학식 (IIIa)]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000005
여기에서,
R3는 수소 또는 카르복실 보호기이고,
각 R4는 각각 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기이며,
W는 -C(O)NR'-이고, 여기에서 C(O)가 페닐링과 연결되며 NR'은 L에 결합하며, 각 Z는 C1-8 알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로이며, n은 0이고, m은 1이며, R1 및 R2는 각각 수소이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 비분지형 링커 또는 분지형 링커이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 L은 1 내지 100개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이고, 여기에서 알킬렌의 탄소 원자는, N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상의 헤테로원자로 치환될 수 있으며, 알킬렌은 1 내지 20개의 탄소원자를 갖는 하나 이상의 알킬로 더 치환될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, L은, 하기 중 어느 하나이다:
A) C1-50 알킬렌 또는 1-50 원자 헤테로알킬렌이며, 하기 중 하나 이상을 만족한다:
(i) L은 하나 이상의 불포화 결합을 포함하고;
(ii) L 내의 2 개의 원자가 치환체와 같은 2가 치환체로 치환되고, 이는 헤테로아릴렌(heteroarylene)을 완성시키며;
(iii) L은 1 내지 50 원자 헤테로알킬렌이고;
(iv) 상기 알킬렌은 하나 이상의 C1-20 알킬로 치환되고;
B) 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하기 일반식 Ⅲ의 이소프레닐 유도체 유닛을 적어도 하나 이상 포함한다:
[일반식 Ⅲ]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000006
구체적으로, 최소 하나의 L은 C1-50 알킬렌 또는 1-50 원자 헤테로알킬렌이고, 하기 중 하나 이상을 만족할 수 있다:
(i) 하나 이상의 불포화 결합을 포함하고;
(ii) L 내의 2 개의 원자가 치환체와 같은 2가 치환체로 치환되고; 이는 헤테로아릴렌(heteroarylene)을 완성시키며
(iii) L은 1 내지 50 원자 헤테로알킬렌이고;
(iv) 상기 알킬렌은 하나 이상의 C1-20 알킬로 치환된다.
또한, 상기 최소 하나의 L은 질소 함유 1-50 원자 헤테로알킬렌이고, 링커는 친수성 아미노산의 2 이상의 원자를 포함하며, 상기 질소는 친수성 아미노산의 카르보닐과 펩타이드 결합을 형성한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 티오에테르 결합에 의해 항체와 공유결합하고, 상기 티오에테르 결합은 항체의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, L은 C2-50 알킬렌, C2-50 헤테로알킬렌, 친수성 아미노산, -C(O)-, -C(O)NR''-, -C(O)O-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-, -S(O)2NR''-, -P(O)R'''NR''-, -S(O)NR''-, 또는 -PO2NR''- 이고,
여기에서, R'' 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-8알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 디-C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴 또는 C5-20 아릴이며, s, t, u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 L은 친수성 아미노산(hydrophilic amino acid)이다.
본 발명의 일 양태에서, 친수성 아미노산은 아르기닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 히스티딘, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린, 또는 트레오닌일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 친수성 아미노산은 수용액에서 중성 pH에서 전하를 갖는 잔기를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 친수성 아미노산은 아스파테이트 또는 글루타메이트이다.
본 발명의 일 양태에서, 친수성 아미노산은 오르니틴 또는 리신이다.
본 발명의 일 양태에서, 친수성 아미노산은 아르기닌이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 L은 -C(O)-, -C(O)NR''-, -C(O)O-, -S(O)2NR''-, -P(O)R'''NR''-, -S(O)NR''-, 또는 -PO2NR''-이고, R'' 및 R'''은 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 디-C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴, 또는 C6-20 아릴이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 L은 -C(O)NR''-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-, 또는 -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-이고, 여기에서, R''은 수소, C1-5 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-5 알콕시, C3-20 헤테로아릴, 또는 C6-20 아릴이며, s, t u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 L은 -C(O)NR'- 이고, R'은 수소이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 연결 유닛을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 연결 유닛은 일반식 VIII 또는 일반식 IX로 표시된다:
[일반식 VIII]
-(CH2)r(V(CH2)p)q-
[일반식 IX]
-(CH2CH2X)w-
상기 V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
X는 -O-, C1-C8 알킬렌 또는 -NR21-이며;
R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 알킬 - C6-20 아릴 또는 C1-6 알킬 - C3-20 헤테로아릴이고;
r은 0 내지 10의 정수이며;
p는 0 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 20의 정수이며; 및
w는 1 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, q는 4 내지 20일 수 있고, 보다 구체적으로 6 내지 20일 수 있다. 또한, q는 1 내지 10 또는 2 내지 12일 수 있고, 보다 구체적으로 2, 5, 또는 11일 수 있다. 또한, r은 1 또는 2일 수 있다. 또한, p는 1 또는 2일 수 있다. 또한, V는 -O-일 수 있다.
보다 구체적으로, r은 2이고, p는 2이며, q는 2, 5 또는 11이고, V는 -O-일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, X는 -O-일 수 있다. 또한, w는 1 내지 10 또는 6 내지 20의 정수일 수 있다.
보다 구체적으로, X는 -O-이고, w는 1 내지 10 또는 6 내지 20일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 연결 유닛은 최소 하나의 폴리에틸렌 글리콜 유닛이고,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000007
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000008
의 구조를 가지며, 여기서 n은 1 내지 12이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 연결 유닛은 1 내지 12 -OCH2CH2-유닛, 또는 3 내지 12 -OCH2CH2-유닛, 또는 5 내지 12 -OCH2CH2-유닛, 또는 6 내지 12 -OCH2CH2-유닛, 또는 3 -OCH2CH2-유닛이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 연결 유닛은 -(CH2CH2X)w-이고,
여기에서 X는 단일 결합, -O-, C1-8 알킬렌, 또는 -NR21-이고;
R21은 수소, C1-6 알킬, C1-6 알킬-C6-20아릴, 또는 C1-6알킬-C3-20 헤테로아릴이며, w는 1 내지 20의 정수이고, 구체적으로는 1, 3, 6, 또는 12이다.
본 발명의 일 양태에서 X는 -O-이고, w는 6 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 링커는 1,3-양극성고리 첨가반응(1,3-dipolar cycloaddition reactions), 헤테로-디엘스 반응(hetero-Diels-Alder reactions), 친핵성 치환(nucleophilic substitution) 반응, 비-알돌형 카르보닐 반응(non-aldol type carbonyl reactions), 탄소-탄소 다중 결합 첨가(addition to carbon-carbon multiple bond), 산화 반응(osidation reactions) 또는 클릭 반응(click reactions)에 의해 형성된 결합 유닛을 추가로 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 결합 유닛은 알키닐기 및 아자이드 사이의 반응, 또는 알데하이드 또는 케톤기 및 하이드라진 또는 알콕시아민 사이의 반응에 의해 형성된다.
본 발명의 일 양태에서, 결합 유닛은 하기 일반식 Ⅳa, Ⅳb, Ⅳc, Ⅳd 또는 Ⅳe로 표현된다.
[일반식 Ⅳa]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000009
[일반식 Ⅳb]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000010
,
[일반식 Ⅳc]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000011
,
[일반식 Ⅳd]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000012
[일반식 Ⅳe]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000013
여기에서,
L1 및 L2은 단일 결합 또는 1 내지 30개의 탄소원자를 갖는 알킬렌이고,
R11은 수소 또는 1 내지 10개의 탄소원자를 갖는 알킬이며, 구체적으로 메틸이다.
본 발명의 일 양태에서, L1은 단일 결합, 또는 11개의 탄소원자를 갖는 알킬렌, 또는 12개의 탄소원자를 갖는 알킬렌이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 결합 유닛은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000014
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000015
을 포함하고,
상기 V는 단일 결합 , -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, 또는 -SO2NR25-이며;
R21 내지 R25는 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 알킬 - C6-20 아릴, 또는 C1-6 알킬 - C3-20 헤테로아릴이고;
r은 1 내지 10의 정수이며;
p는 0 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 20의 정수이며; 및
L1은 단일결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 r은 2 또는 3일 수 있다. 또한, p는 1 또는 2일 수 있다. 또한, q는 1 내지 6일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 결합 유닛에서 r은 2 또는 3; p는 1 또는 2; q는 1 내지 6일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 결합 유닛을 포함하는 링커는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000016
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000017
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000018
,
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000019
일 수 있고, 여기에서 물결표시는 Ab와 연결되는 부위, * 표시는 단백질 분해제와 연결되는 부위를 나타내며, n은 0 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000020
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000021
을 포함한다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 L은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000022
를 추가로 포함한다. 또한, 상기 구조에서 알키닐 및 아자이드 사이의 반응, 상세하게는 클릭 반응에 의해 결합 유닛을 형성할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 L은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000023
를 포함하고, 상기 구조를 통해 결합 유닛을 형성하며, 결합 유닛은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000024
를 포함한다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 링커는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000025
의 구조를 갖는 최소 하나 이상의 이소프레닐 유닛을 추가로 함유할 수 있으며, 여기에서 n은 최소 2 이상이다.
본 발명의 일 양태에서, 최소 하나의 이소프레닐 유닛은 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 또는 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 생성물이다.
본 발명의 일 양태에서, 링커의 이소프레닐 유닛은 티오에테르 결합에 의해 Ab와 공유결합하며, 티오에테르 결합은 Ab의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 티오에테르 결합에 의해 Ab와 공유 결합하고, 상기 티오에테르 결합은 Ab의 시스테인의 황원자를 포함한다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하기 일반식 Ⅲ의 이소프레닐 유도체 유닛을 적어도 하나 이상 포함한다.
[일반식 Ⅲ]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000026
.
또한, 이소프레닐 유닛은 링커에 포함된 옥심을 Ab에 공유 결합시킬 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, L은 옥심을 포함하는 3 내지 50 헤테로알킬렌이고,
상기 옥심의 산소 원자는 W와 연결된 L의 측면에 있고, 옥심의 탄소 원자는 Ab에 연결된 L의 측면에 있으며; 또는 상기 옥심의 탄소 원자는 W에 연결된 L의 측면에 있고, 옥심의 산소 원자는 Ab에 연결된 L의 측면에 있는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L은 옥심을 포함하고, 하나 이상의 이소프레닐 유닛은 옥심을 Ab에 공유 결합시킨다.
본 발명의 일 양태에서, Ab는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식되는 아미노산 모티프를 포함하고, 티오에테르 결합은 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함한다. 또한, 아미노산 모티프는 Ab의 C-말단에 포함된다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CXX, CXC, XCXC, XXCC, 및 CYYX로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열이고, 여기에서 C는 시스테인을 나타내며; Y는 각 경우 독립적으로 지방족 아미노산을 나타내고; X는 각 경우 독립적으로 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌, 또는 루신을 나타내고; 티오에테르 결합은 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CYYX 서열이고, Y는 각 경우 독립적으로 알라닌, 이소루신, 루신, 메티오닌 또는 발린이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CVIM 또는 CVLL 서열이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프에 선행하는 1 내지 20개의 아미노산 중 하나 이상이 글리신, 아르기닌, 아스파르트산 및 세린으로부터 각각 독립적으로 선택될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 하나는 글리신이다. 또는, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 3개 이상이 글리신, 아르기닌, 아스파르트산 및 세린으로부터 각각 독립적으로 선택된다. 또는, 아미노산 모티프에 선행하는 1 내지 10개의 아미노산이 글리신, 구체적으로는 아미노산 모티프에 선행하는 최소 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산은 글리신이다.
본 발명의 일 양태에서, Ab는 GGGGGGGCVIM의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Linker는 Ab에 공유 결합된 하나 이상의 분지형 링커를 포함하고,
i) 각각의 분지형 링커는 제1 링커(PL)에 의해 Ab에 공유 결합된 분지형 유닛을 포함하고;
ii) 각각의 분지형 링커는 제1 단백질 분해제가 제2 링커 (SL) 및 절단기(CG)에 의해 분지형 유닛에 공유 결합된 제1 분지(B1)를 포함하며; 및
iii) 각각의 분지형 링커는 a) 제2 단백질 분해제가 제2 링커 (SL) 및 절단기 (CG)에 의해 분지형 유닛에 공유 결합된 제2 분지 (B2); 또는 b) 폴리에틸렌 글리콜 모이어티가 분지형 유닛에 공유 결합되어 있는 제2 분지를 포함하고,
상기 각각의 절단기는 항원 특이적 결합 모이어티-단백질 분해제 접합체로부터 단백질 분해제를 방출하기 위해 가수분해되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 최소 하나의 링커는 질소 함유 1-100 원자 헤테로알킬렌이고, 링커는 친수성 아미노산의 2 이상의 원자를 포함하며, 상기 질소는 친수성 아미노산의 카르보닐과 펩타이드 결합을 형성한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 분지형 유닛는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000027
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000028
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000029
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000030
이고,
상기 L2, L3, L4 는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 -CnH2n-이며, 상기 n은 1 내지 30의 정수이고,
상기 G1, G2, G3은 독립적으로 직접 결합,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000031
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000032
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000033
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000034
이며,
상기 R30은 수소 또는 C1-30 알킬이고,
R40은 직접 결합, C1-10 알킬 또는 L5-COOR6이며;
상기 L5는 직접 결합 또는 -Cn'H2n'-이고, 여기에서 n'은 1 내지 10의 정수이고, R6는 수소 또는 C1-30 알킬이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 절단 그룹은 표적 세포 내에서 절단가능하다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 절단 그룹은 하나 이상의 활성제를 방출시킬 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질 분해제는 하기 화학식을 갖는 절단기에 의해 제1 분지 또는 제2 분지에 결합된다:
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000035
(상기 식에서 각 부분은 일반식 II에서 정의한 바와 같다.)
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 링커는 1 내지 100개, 바람직하게는 1 내지 50개의 탄소원자를 갖는 알킬렌을 포함하고, 또는;
알킬렌은 적어도 하나의 불포화 결합을 포함하고; 알킬렌은 적어도 하나의 헤테로아릴렌을 포함하며; 알킬렌의 탄소원자는 질소(N), 산소(O), 및 황(S)으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자에 의해 대체되고; 또는
알킬렌은 1 내지 20개의 탄소원자를 갖는 하나 이상의 알킬로 더욱 치환된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 링커 또는 제2 링커는 구조 -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-,-(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q- 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-를 가지며, 여기에서, r은 0 내지 10의 정수이고; p는 1 내지 10의 정수이며; q는 1 내지 20의 정수이고;
V 및 Y는 각각 독립적으로 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, 또는 -SO2NR25-이고; R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 알킬 - C6-20 아릴 또는 C1-6 알킬 - C3-20 헤테로아릴이다.일 구체예에서, 각각의 분지된 링커는 분지 유닛을 포함하고, 각각의 활성제는 제2 링커를 통해 분지 유닛과 연결되며, 분지 유닛은 제1 링커에 의해 항체와 연결된다. 분지 유닛이 아미드인 구체예에서, 제1 링커는 아미드의 카보닐을 포함할 수 있거나, 제2 링커는 아미드의 카보닐을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 분지형 링커를 포함하는 [Linker - (B)m]은
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000036
이고,
상기 B 및 B'는 동일하거나 상이할 수 있는 단백질 분해제이며;
n1 및 n2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수를 나타내고;
L'는 Ab에 결합가능한 L의 부분을 나타낸다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 L'는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000037
이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 Ab를 포함하고;
Ab에 공유 결합된 1, 2, 3 또는 4개 이상의 분지형 링커를 포함하며;
분지형 링커가 1개 또는 2개 이상의 단백질 분해제를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, L은 옥심을 포함하고, 적어도 하나의 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 옥심을 단백질 분해제에 공유 결합시킨다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 절단기는 표적 세포 내에서 절단될 수 있고, 하나 이상의 단백질 분해제를 방출시킬 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, Ab에 공유 결합된 하나 이상의 분지형 링커를 포함하며; 및 분지형 링커에 공유 결합 된 2개 이상의 단백질 분해제를 포함한다.
구체적으로, 1개의 분지형 링커는 Ab와 결합되는 것일 수 있다.
또한, 2 이상의 분지형 링커가 Ab와 결합되고, 각각의 분지형 링커가 2개 이상의 단백질 분해제와 결합하는 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 3개의 분지형 링커가 Ab와 결합되는 것일 수 있다. 또는 4개의 분지형 링커가 Ab와 결합되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 각각의 분지형 링커는 2개 이상의 동일 또는 상이한 단백질 분해제와 결합될 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 각각의 단백질 분해제는 절단 가능한 결합에 의해 분지형 링커에 결합될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 각각의 분지형 링커는 분지형 유닛을 포함하고, 각각의 단백질 분해제는 2차 링커를 통해 분지형 유닛에 결합하고, 상기 분지형 유닛 1차 링커에 의해 Ab에 결합될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 분지형 유닛은 질소 원자일 수 있다. 또는, 상기 분지형 유닛은 아미드이고, 1차 링커 또는 2차 링커는 아미드의 카르보닐을 포함할 수 있다. 또는, 상기 분지형 유닛은 라이신 유닛일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 결합 유닛은 티오에테르 결합에 의해 Ab와 공유결합하며, 티오에테르 결합은 Ab의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, Ab는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식되는 아미노산 모티프를 포함하고, 티오에테르 결합은 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 파네실 단백질 트랜스퍼라아제(FTase) 또는 게라닐게라닐 트랜스퍼라제(GGTase)이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CXX, CXC, XCXC, XXCC, 및 CYYX로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열이고, 여기에서 C는 시스테인을 나타내며; Y는 각 경우 독립적으로 지방족 아미노산을 나타내고; X는 각 경우 독립적으로 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌, 또는 루신을 나타내고; 티오에테르 결합은 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CYYX 서열이고, Y는 각 경우 독립적으로 알라닌, 이소루신, 루신, 메티오닌 또는 발린이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프는 CVIM 또는 CVLL 서열이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 하나는 글리신이다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 3개 이상이 글리신, 아르기닌, 아스파르트산 및 세린으로부터 각각 독립적으로 선택될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 아미노산 모티프에 선행하는 1 내지 10개의 아미노산이 글리신, 구체적으로는 아미노산 모티프에 선행하는 최소 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산은 글리신이다.
본 발명의 일 양태에서, Ab는 GGGGGGGCVIM의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "단백질 분해제"는 표적 단백질 분해를 유도하는 저분자 화합물로, "protein eraser" 로도 명명될 수 있다. 또는, 본 발명에서 사용된 용어 "단백질 분해제"는 표적 단백질의 조절을 유도하는 저분자 화합물로, "protein modulater"로 명명될 수 있다. 여기서 표적 단백질은 예컨대 질환 유발 단백질이다.
본 명세서에서, "단백질 분해제 모이어티"는 단백질 분해제의 전부 또는 일부를 포함하여 링커의 전부 또는 일부와 공유결합한 화합물을 말한다. 단백질 분해제 모이어티는 링커를 반드시 포함하여야 하는 것은 아니고, 링커의 전부 또는 일부가 포함되지 않는 경우도 의미할 수 있다.
본 발명에서, 단백질 분해제 모이어티는 링커에 직접결합할 수 있고, 링커에 하나 이상, 구체적으로, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상의 단백질 분해제 모이어티가 링커에 직접결합할 수 있다.
또한, 본 발명에서 단백질 분해제 모이어티는 단백질 분해제를 링커에 직접결합시키기 위한 화합물 단위를 포함할 수 있다. 일 예에서, 단백질 분해제 모이어티는 하기 구조 및 단백질 분해제를 포함한 전체를 의미할 수 있고, 이를 통해 단백질 분해제와 링커를 직접결합할 수 있다. 다만, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000038
(여기에서, 각 부분은 상기 정의와 같다)
단백질 분해제가 표적 단백질의 조절을 유도하는 저분자 화합물로 작용하는 경우, 작용 기전(Mechanism of action, MoA)에 따라 2가지 유형으로 나눌 수 있다. 구체적으로, 표적 단백질에만 결합하여 표적 단백질의 활성을 조절하는 일가 조절제(monovalent modulator) 및 표적 단백질의 조절에 관여하는 단백질 및 표적 단백질 모두에 직접 결합하여 표적 단백질의 활성을 조절하는 PPI 조절제(protein-protein interaction modulator)로 나눌 수 있다. 여기서 표적 단백질은 표적 단백질의 조절에 관여하는 단백질의 고유적 기질(native substrate) 또는 비-고유적 기질(non-native substrate)이다. 고유적 기질은 단백질에 특이적인 내인성 기질(endogenous substrate)로, PPI 조절제는 표적 단백질의 조절에 관여하는 단백질 및 이의 고유적 기질 모두에 직접 결합하여 표적 단백질의 조절에 관여하는 단백질 및 이의 고유적 기질의 상호작용을 안정화하여 기질의 활성을 조절할 수 있다. 비-고유적 기질은 외인성 리간드(exogenous ligand)에 의해 모집되는 기질로, 상기 비-고유적 기질은 "네오기질(neosubstrate)"로도 명명될 수 있다. PPI 조절제는 단백질의 외인성 리간드로 작용할 수 있고, 이에 PPI 조절제 및 표적 단백질의 조절에 관여하는 단백질의 결합 부위에 비-고유적 기질이 결합하여 비-고유적 기질의 활성을 조절할 수 있다.
단백질 분해제가 표적 단백질 분해를 유도하는 저분자 화합물로 작용하는 경우, 작용 기전에 따라 3가지 유형으로 나눌 수 있다. 구체적으로, 이가 분해제(bivalent degrader), 일가 분해제(monovalent degrader) 및 분자 접착제 분해제(molecular glue degrader)로 나눌 수 있다.
세포 내 단백질 분해는 라이소좀(lysosome)과 프로테아좀(proteasome)에 의한 두 가지 경로를 통해 이루어진다. 세포 단백질의 대부분(80%)은 유비퀴틴(ubiquitin)에 의해 표지된 후 프로테아좀에 의해 세포질과 핵에서 분해되며, 이 과정을 유비퀴틴-프로테아좀 시스템(ubiquitin-proteasome system)이라 한다.
유비퀴틴이 선택적으로 단백질을 분해하기 위하여 표지되는 과정(유비퀴틴화, ubiquitination)에는 일련의 효소계(E1 유비퀴틴 활성화효소(E1 ubiquitin-activating enzyme), E2 유비퀴틴 접합효소(E2 ubiquitin-conjugating enzyme), E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase)가 관여하며, 표지된 단백질은 ATP-의존성 단백질 분해효소 복합체인 26S 프로테아좀에 의해 분해된다. 유비퀴틴과 기질의 결합은 기질 분자의 Lys과 유비퀴틴-C-말단의 Gly 사이의 이소펩티드 결합(isopeptide bond) 형성을 통해 일어나며, 기질 단백질에 결합된 유비퀴틴-C-말단 Lys에 또 다른 유비퀴틴이 연결될 수 있는데, 이러한 과정을 반복하여, 기질 단백질에 여러 개의 유비퀴틴 분자가 가지를 친 모양으로 연결되어 폴리유비퀴틴 사슬(polyubiquitin chain)을 형성하면, 그 단백질은 26S 프로테아좀에 인식되어 선택적으로 분해된다.
E3 유비퀴틴 연결효소는 인간에게 600여개 이상의 종류가 알려져 있으며, E2 유비퀴틴 접합효소 및 기질 단백질에 모두 결합하여 유비퀴틴으로 표지될 기질 단백질을 인지하는 기질 특이성을 제공한다. 즉, 분해될 단백질의 선택은 유비퀴틴화 과정의 E3 유비퀴틴 연결효소에 의해 결정되며, 이때 기질 단백질에는 E3 유비퀴틴 연결효소에 의한 인식 부위와 유비퀴틴 연결부위가 존재한다.
이가 분해제(bivalent degrader)는 표적 단백질에 특이적인 리간드와 상기 과정에 관여하는 E3 유비퀴틴 연결효소에 특이적인 리간드를 링커로 연결한 이종이작용성 저분자(heterobifunctional small molecule)로, "단백질 분해-표적 키메라(proteolysis targeting chimera)" 또는 "PROTAC"으로 명명된다. 이에, 이가 분해제는 표적 단백질에 특이적인 리간드를 포함하여 기질 단백질이 아닌 상기 표적 단백질을 E3 유비퀴틴 연결효소 근처에 위치시킴으로써 표적 단백질의 분해를 유도한다.
일가 분해제(monovalent degrader)는 표적 단백질에만 결합하여, 결합한 표적 단백질의 분해를 유도하는 저분자이다. 일가 분해제는 표적 단백질에 결합하여 표적 단백질이 유비퀴틴-프로테아좀 시스템에 의해 인식되기 쉽도록 변화를 일으켜 이의 분해를 유도한다. 예컨대, 표적 단백질에 결합하여 표적 단백질의 구조 변화(conformation change) 또는 접힘 변화(folding change)를 일으키거나, 표적 단백질의 번역 후 변형(post-translational modification, PTM)에 변화를 일으키거나, 또는 표적 단백질-샤페론(chaperone) 상호작용과 같은 단백질-단백질 상호작용에 변화를 일으켜 표적 단백질의 분해를 유도한다(Cornella-Taracido et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 30 (2020) 127202).
일가 분해제의 표적 단백질은 예를 들어 ER(estrogen receptor) 또는 AR(androgen receptor)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
보다 구체적으로, ER에 결합하여 이의 분해를 유도하는 일가 분해제는 SERD(selective estrogen receptor degrader)를 들 수 있으며, SERD의 예로 fulvestrant, brilanestrant(GDC-0810), GDC-0927, elacestrant, giredestrant, amcenestrant(SAR439859), AZD9833, AZD9496, rintodestrant, LSZ102, LY3484356, ZN-c5, D-0502 또는 SHR9549를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, AR에 결합하여 이의 분해를 유도하는 일가 분해제는 SARD(selective androgen receptor degrader)를 들 수 있으며, SARD의 예로 bicalutamide, dimethylcurcumin(ASC-J9), AZD-3514 또는 ARN-509를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
분자 접착제 분해제는 E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase) 및/또는 표적 단백질과의 결합을 통해 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들어 분자 접착제 분해제는 연결효소 등과의 결합을 통해 연결효소 등의 구조를 변형하고, 변형된 구조에 표적 단백질의 결합을 유도하여 단백질 분해를 유도할 수 있다. 분자 접착제 분해제는 E3 유비퀴틴 연결효소의 기질 단백질에 결합하여 E3 유비퀴틴 연결효소의 기질 단백질 분해를 유도하는 저분자로, "molecular glue"로도 명명될 수 있다. 여기서 표적 단백질로서 E3 유비퀴틴 연결효소의 기질은 구체적으로 E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질(native substrate) 또는 비-고유적 기질(non-native substrate)일 수 있다.
E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질(native substrate)은 E3 유비퀴틴 연결효소에 특이적인 내인성 기질(endogenous substrate)로, 분자 접착제 분해제는 E3 유비퀴틴 연결효소 및 이의 고유적 기질에 결합하여 E3 유비퀴틴 연결효소 및 이의 고유적 기질의 상호작용을 안정화하여 기질의 분해를 유도할 수 있다.
E3 유비퀴틴 연결효소의 비-고유적 기질(non-native substrate)은 외인성 리간드(exogenous ligand)에 의해 모집되는 기질로, 상기 비-고유적 기질은 "네오기질(neosubstrate)"로도 명명될 수 있다. 분자 접착제 분해제는 E3 유비퀴틴 연결효소의 외인성 리간드로 작용한다. 이에 분자 접착제 분해제 및 E3 유비퀴틴 연결효소의 결합 부위에 비-고유적 기질이 결합하여 E3 유비퀴틴 연결효소 및 비-고유적 기질 간 결합이 강화되고 비-고유적 기질의 분해가 유도될 수 있다. 보다 구체적으로 하기의 모식도에 나타낸 바와 같이 분자 접착제 분해제가 E3 유비퀴틴 연결효소의 결합 부위에 결합하면 E3 유비퀴틴 연결효소의 구조가 비-고유적 기질이 결합할 수 있도록 변형되고, 변형된 구조에 비-고유적 기질이 결합하여 E3 유비퀴틴 연결효소 및 비-고유적 기질 간 결합이 강화되고 비-고유적 기질의 분해를 유도할 수 있다(Essays Biochem. 2017 Nov 8;61(5):505-516).
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분자 접착제 분해제가 결합하는 E3 유비퀴틴 연결효소의 예로 VHL(von Hippel-Lindau), cereblon, XIAP, XIAP/cIAP, E3A, MDM2. APC(Anaphase-promoting complex), APC/cdc20, APC/cdh1, Cul1-based, Cul2/5-based, Cul3-based, Cul4 based, Cul7-based 및 Cul7 등을 포함한 CRL(cullin ring ubiquitin ligase), UBR5(EDD1), beta-TrCP, SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING, LNXp80, LNX1, CBX4, CBL, CBLL1, C6orf157, CHFR, DTL, E6-AP, HACE1, HECTD1, HECTD2, HECTD3, HECW1, HECW2, HERC1, HERC2, HERC3, HERC4, HERC5, HUWE1, HYD, ITCH, mahogunin, MARCH-I, MARCH-II, MARCH-III, MARCH-IV, MARCH-VI, MARCH-VII, MARCH-VIII, MARCH-X, MEKK1, MIB1, MIB2, MycBP2, NEDD4, NEDD4L, PELI1, Pirh2, PJA1, PJA2, PPIL2, PRPF19, PIAS1, PIAS2, PIAS3, PIAS4, RANBP2, RFFL, RFWD2, Rictor, RNF4, RNF5, RNF8, RNF19, RNF190, RNF20, RNF34, RNF40, RNF125, RNF128, RNF138, RNF168, RBX1, SMURF1, SMURF2, STUB1, TOPORS, TRIP12, UBE3A, UBE3B, UBE3C, UBE4A, UBE4B, UBOX5, UBR5, WWP1, WWP2, Parkin, A20/TNFAIP3, AMFR/gp78, ARA54, beta-TrCP1/BTRC, SCF/beta-TrCP, BRCA1, CHIP, CHIP/STUB1, E6;E6AP/UBE3A, F-box protein 15/FBXO15, FBXW7/Cdc4, SCF/FBW7, GRAIL/RNF128, HOIP/RNF31, cIAP-1/HIAP-2, cIAP-2/HIAP-1, cIAP(pan), ITCH/AIP4, KAP1, MARCH8, Mind Bomb 1/MIB1, Mind Bomb 2/MIB2, MuRF1/TRIM63, NDFIP1, NleL, Parkin, RNF2, RNF4, RNF8, RNF168, RNF43, SART1, Skp2, SCF/Skp2, SHPRH, SIAH1, SIAH2, SMURF1, SMURF2, TOPORS, TRAF-1, TRAF-2, TRAF-3, TRAF-4, TRAF-5, TRAF-6, TRAF-7, TRIM5, TRIM21, TRIM32, TRIM63, UBE3B, UBE3C, UBR1, UBR2, UHRF2, WWP1, WWP2, ZNRF1 또는 ZNRF3들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 분자 접착제 분해제가 결합하는 E3 유비퀴틴 연결효소는 유형별로 나눌 수 있으며, 이는 PCT 공개 특허 제WO2017/201449호 기재된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 분자 접착제 분해제가 결합하는 E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질의 예로 NKX3.1, β-Catenin, aiolos, Akt1, Aurora A, B7-2, Bim, Caspase-3, Caspase-8, Caspase-10, CD147, Cdc20, Cdc25A, CDH1, CHK1, CHK2, c-Jun, CK1-α, Claspin, C-Myc, CRY2, Cyclin A, Cyclin B, Cyclin E, CDK12/Cyclin K, Delta, Jagged, Dlg, DR4, DVL1, ELF, ErbB4, Erk, Fbxo45, Foxo1, Foxp3, gp190, GSPT1, GSPT2, H2A,H2AX, HIF-1a, HIF-1α, HIF-2a, HIPK2, Histone H2A, Histone H2B, HSF1, HSP70/90, ikaros, IKZF1/3, IL-1β, IL-6, iNOS, IRAK, IRS1 IκBα, JAMP, KAI1, KLFs LRRK2, Mad2, Mcl-1, MDM2, MED13, MEDL, MEIS2, MHC class I, MHC class II, MKK4, MTA1, MyBP-C, MyLC1/2, NEMO, NF-κB, N-Myc, Nrf2, NOTCH, NUMB, p21, p27, p53, p73, P-gp paxillin, PCNA, PCNP, PHD1/3, PLK1, Rbm39, Rbm23, RIP2, RhoA, RNF8, Runx1, SALL4, Securin, Skp2, Skp2-CKS1, SGK1, SMAC, Smad2, Smads, SOD1 및 이의 변이체, TCF/LEF, TNF-α, TopBP1, TP53, TRAF2, TRB3, TRIP, Troponin I, TSC2, UCK1, Wee1, WNK1 또는 WNK4를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, E3 유비퀴틴 연결효소로 AMFR/gp78의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 KAI1일 수 있고, APC의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Aurora A, Cyclin A, Cyclin B, Cdc20, Claspin, Securin 또는 Skp2일 수 있으며, C6orf157의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Cyclin B일 수 있고, CBLL1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 CDH1일 수 있으며, CHFR의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Aurora A 또는 PLK1일 수 있고, CHIP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 HSP70/90, iNOS, Runx1 또는 LRRK2일 수 있으며, DTL의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p21일 수 있고, E6-AP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p53 또는 Dlg일 수 있으며, HECW1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 DVL1, p53 또는 SOD1 돌연변이일 있고, HECW2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p73일 수 있으며, HERC2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 RNF8일 수 있고, HUWE1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 N-Myc, C-Myc, p53, Mcl-1 또는 TopBP1일 수 있으며, HYD의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 CHK2일 수 있고, ITCH의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 MKK4, RIP2 또는 Foxp3일 수 있으며, LNX1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 NUMB일 수 있고, MARCH-IV의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 MHC class I일 수 있으며, MARCH-VII의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 gp190일 수 있고, MARCH-VIII의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 B7-2 또는 MHC class II일 수 있으며, MDM2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p53일 수 있고, MEKK1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 c-Jun 또는 Erk일 수 있으며, MIB1 또는 MIB2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Delta 및 Jagged일 수 있고, MycBP2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Fbxo45 또는 TSC2일 수 있으며, NEDD4L의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Smad2일 수 있고, PELI1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 TRIP 또는 IRAK일 수 있으며, Pirh2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 TP53일 수 있고, PJA1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 ELF일 수 있으며, PJA1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 ELF일 수 있고, RFFL의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p53일 수 있으며, RFWD2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 MTA1, p53 또는 FoxO1일 수 있고, Rictor의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 SGK1일 수 있으며, RNF5의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 JAMP 또는 paxillin일 수 있고, RNF8 또는 RNF168의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 H2A 또는 H2AX일 수 있으며, RNF19의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질 단백질은 SOD1일 수 있고, RNF20 또는 RNF40의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Histone H2B일 수 있으며, RNF34의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Caspase-8 또는 Caspase-10일 수 있고, RNF138의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 TCF/LEF일 수 있으며, RNF168의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Histone H2A 또는 H2A.X일 수 있고, SCF/beta-TrCP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 IκBα, Wee1, Cdc25A 또는 β-Catenin일 수 있으며, SCF/FBW7의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Cyclin E, c-Myc 또는 c-Jun일 수 있고, SCF/Skp2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p27, p21 또는 Fox01일 수 있으며, SHPRH의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 PCNA일 수 있고, SIAH1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 β-catenin, Bim 또는 TRB3일 수 있으며, SIAH2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 HIPK2 또는 PHD1/3일 수 있고, SMURF1 또는 SMURF2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Smads일 수 있으며, SMURF2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질 단백질은 Mads일 수 있고, TOPORS의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 p53 또는 NKX3.1일 수 있으며, TRAF-6의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 NEMO 또는 Akt1일 수 있고, TRIM63의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Troponin I, MyBP-C 또는 MyLC1/2일 수 있으며, UBR2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Histone H2B일 수 있고, UHRF2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 PCNP일 수 있으며, VHL의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 HIF-1α 또는 HIF-2α일 수 있고, WWP1의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Erb4일 수 있으며, WWP2의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Oct-4일 수 있고, beta-TrCP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 β-Catenin 또는 IκBα일 수 있으며, XIAP 또는 cIAP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Caspase-3 또는 SMAC일 수 있고, CRL4-DCAF15의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Rbm39 또는 Rbm23일 수 있으며, cereblon의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 aiolos, ikaros, MEIS2, ILZF1/3, CK1α, GSPT1 또는 GSPT2일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
보다 구체적으로, E3 유비퀴틴 연결효소로 beta-TrCP의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 β-Catenin 또는 IκBα일 수 있고, beta-TrCP에 결합하는 분자 접착제 분해제는 NRX-1532, NRX-1933, NRX-2663, NRX-103094, NRX-103095, NRX-252114 또는 NRX-252262일 수 있으나(Nature Communications volume 10, Article number: 1402 (2019)), 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, E3 유비퀴틴 연결효소로 CRL4-DCAF15의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 Rbm39 또는 Rbm23일 수 있고, CRL4-DCAF15에 결합하는 분자 접착제 분해제는 인디술람(indisulam), E7820 또는 타시술람(tasisulam) 또는 이들의 유도체 일 수 있으나(Nature Chemical Biology volume 16, pages7-14(2020)), 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, E3 유비퀴틴 연결효소로 cereblon의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 aiolos, ikaros, MEIS2, ILZF1/3, CK1α, GSPT1 또는 GSPT2일 수 있고, cereblon에 결합하는 분자 접착제 분해제는 탈리도마이드(thalidomide), 레날리도마이드(lenalidomide), 포말리도마이드(pomalidomide) 또는 이들의 유사체, 또는 미국 공개 특허 제2016/0058872호, 미국 공개 특허 제2015/0291562호에 기재된 화합물일 수 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 단백질 분해제는 이종이작용성(heterobifucntional)을 가지지 않는 것으로, 일가 분해제 또는 분자 접착제 분해제일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 분자 접착제 분해제가 결합하는 E3 유비퀴틴 결합효소는 VHL(von Hippel-Lindau), cereblon, XIAP, XIAP/cIAP, E3A, MDM2. APC(Anaphase-promoting complex), APC/cdc20, APC/cdh1, CRL(cullin ring ubiquitin ligase), UBR5(EDD1), beta-TrCP, SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING, LNXp80, LNX1, CBX4, CBL, CBLL1, C6orf157, CHFR, DTL, E6-AP, HACE1, HECTD1, HECTD2, HECTD3, HECW1, HECW2, HERC1, HERC2, HERC3, HERC4, HERC5, HUWE1, HYD, ITCH, mahogunin, MARCH-I, MARCH-II, MARCH-III, MARCH-IV, MARCH-VI, MARCH-VII, MARCH-VIII, MARCH-X, MEKK1, MIB1, MIB2, MycBP2, NEDD4, NEDD4L, PELI1, Pirh2, PJA1, PJA2, PPIL2, PRPF19, PIAS1, PIAS2, PIAS3, PIAS4, RANBP2, RFFL, RFWD2, Rictor, RNF4, RNF5, RNF8, RNF19, RNF190, RNF20, RNF34, RNF40, RNF125, RNF128, RNF138, RNF168, RBX1, SMURF1, SMURF2, STUB1, TOPORS, TRIP12, UBE3A, UBE3B, UBE3C, UBE4A, UBE4B, UBOX5, UBR5, WWP1, WWP2, Parkin, A20/TNFAIP3, AMFR/gp78, ARA54, beta-TrCP1/BTRC, SCF/beta-TrCP, BRCA1, CHIP, CHIP/STUB1, E6;E6AP/UBE3A, F-box protein 15/FBXO15, FBXW7/Cdc4, SCF/FBW7, GRAIL/RNF128, HOIP/RNF31, cIAP-1/HIAP-2, cIAP-2/HIAP-1, cIAP(pan), ITCH/AIP4, KAP1, MARCH8, Mind Bomb 1/MIB1, Mind Bomb 2/MIB2, MuRF1/TRIM63, NDFIP1, NleL, Parkin, RNF2, RNF4, RNF8, RNF168, RNF43, SART1, Skp2, SCF/Skp2, SHPRH, SIAH1, SIAH2, SMURF1, SMURF2, TOPORS, TRAF-1, TRAF-2, TRAF-3, TRAF-4, TRAF-5, TRAF-6, TRAF-7, TRIM5, TRIM21, TRIM32, TRIM63, UBE3B, UBE3C, UBR1, UBR2, UHRF2, WWP1, WWP2, ZNRF1 또는 ZNRF3일 수 있고, 보다 구체적으로 cereblon일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 분자 접착제 분해제가 결합하는 표적 단백질은 E3 유비퀴틴 결합효소의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질일 수 있고, 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 NKX3.1, β-Catenin, aiolos, Akt1, Aurora A, B7-2, Bim, Caspase-3, Caspase-8, Caspase-10, CD147, Cdc20, Cdc25A, CDH1, CHK1, CHK2, c-Jun, CK1-α, Claspin, C-Myc, CRY2, Cyclin A, Cyclin B, Cyclin E, CDK12/Cyclin K, Delta, Jagged, Dlg, DR4, DVL1, ELF, ErbB4, Erk, Fbxo45, Foxo1, Foxp3, gp190, GSPT1, GSPT2, H2A,H2AX, HIF-1a, HIF-1α, HIF-2a, HIPK2, Histone H2A, Histone H2B, HSF1, HSP70/90, ikaros, IKZF1/3, IL-1β, IL-6, iNOS, IRAK, IRS1 IκBα, JAMP, KAI1, KLFs LRRK2, Mad2, Mcl-1, MDM2, MED13, MEDL, MEIS2, MHC class I, MHC class II, MKK4, MTA1, MyBP-C, MyLC1/2, NEMO, NF-κB, N-Myc, Nrf2, NOTCH, NUMB, p21, p27, p53, p73, P-gp paxillin, PCNA, PCNP, PHD1/3, PLK1, Rbm39, Rbm23, RIP2, RhoA, RNF8, Runx1, SALL4, Securin, Skp2, Skp2-CKS1, SGK1, SMAC, Smad2, Smads, SOD1 및 이의 변이체, TCF/LEF, TNF-α, TopBP1, TP53, TRAF2, TRB3, TRIP, Troponin I, TSC2, UCK1, Wee1, WNK1 또는 WNK4일 수 있으며, 보다 구체적으로 GSPT1 또는 GSPT2일 수 있다.
본 발명의 구체예에서는, E3 유비퀴틴 연결효소로 cerelon에, 표적 단백질로 E3 유비퀴틴 연결효소의 비-고유적 기질인 GSPT1에 결합하는 분자 접착제 분해제를 이용하였다.
본 발명의 일 양태에서, 분자 접착제 분해제는 하기 일반식 X1로 표시되는 화합물일 수 있다.
[일반식 X1]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000040
상기 식에서,
Dx1은 C(=O) 또는 CH2이고;
Dx2는 O, N-C≡N 또는 NH이며;
a1은 0, 1, 2 또는 3의 정수이고;
a2는 0 또는 1의 정수이며;
a3는 0, 1, 또는 2의 정수이고;
A는 C, N, 또는 O이며;
Rxa는 수소, 할로 또는 C1-6 알킬이며;
Rxb 및 Rxc는 각각 독립적으로 수소, 할로, C1-10 알킬, CF3, 또는 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고;
또는 Rxb 및 Rxc가 결합된 부분과 함께, C5-8 사이클로알킬, C4-8 헤테로사이클로알킬, C6-10 아릴, 또는 C6-10 헤테로아릴을 형성하며,
여기에서,
Rx10은 직접결합, -NH-, 또는 -O-이고,
Rx11은 각각 독립적으로 직접결합, -C(O)-, C1-5 알킬렌, C2-5 알케닐렌, C6-10 아릴렌, C6-10 헤테로아릴렌, C3-8 사이클로알킬렌, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬렌으로 구성된 군으로부터 선택되며,
Rx12는 OH, NH2, NH-Rx12', C6-10 아릴, C6-10 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬이고,
여기에서, Rx12'는 C1-5 알킬, C2-5 알케닐, C6-10 아릴, C6-10 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬이며;
a는 1 내지 5의 정수이고,
Rxb 또는 Rxc 중 어느 하나가 1가 부분을 형성하여 Linker와 결합가능하고,
단, a2가 0인 경우 NH가 Linker와 직접 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Dx1이 CH2이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Dx1이 C(=O)이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Dx2가 O이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Dx2가 N-C≡N이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Dx2가 NH이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 a1이 0이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a1이 1이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a1이 2이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a1이 3이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 a2가 0이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a2가 1이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 a3가 0이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a3가 1이다. 상기 a3가 2이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A는 C 또는 N이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxa가 수소이다. 본 발명의 일 양태에서, Rxa가 F, Br, Cl 또는 I이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxa가 C1-6 알킬이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxa가 메틸이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 C1-10 알킬이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 Rx10-(Rx11)a-Rx12이다. 여기에서, a는 1 내지 3의 정수이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx10은 직접결합이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx10은 -NH-이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx10은 -O-이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx11는 각각 독립적으로 직접결합, -C(O)-, C1-5 알킬렌, 또는 C2-5 알케닐렌으로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx11는 직접 결합이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx11는 -C(O)-이다. 상기 Rx11는 C1-3 알킬렌이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx11는 각각 독립적으로 C6-10 아릴렌, C6-10 헤테로아릴렌, C3-8 사이클로알킬렌, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬렌으로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx11는 C5-6 사이클로알킬렌이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는 NH2이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는 -NH-CH3이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는 하나 이상의 N 원자를 포함하는 C6-10 헤테로아릴 또는 하나 이상의 N 원자를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알킬이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000041
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000042
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000043
이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000044
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000045
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000046
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000047
이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000048
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000049
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000050
이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000051
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000052
이다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 Rx12는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000053
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000054
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000055
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000056
이다.
본 발명의 일 양태에서, Rxb 또는 Rxc 중 어느 하나 이상이 -NH2 또는 -NH-Rx12'를 포함하고, -NH2 또는 -NH-Rx12'가 1가 부분을 형성하여 Linker와 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Rxb 및 Rxc는 Rxb 및 Rxc가 결합된 부분과 함께, C4-8 헤테로사이클로알킬 또는 C6-10 헤테로아릴을 형성한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 a는 1이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a는 2이다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 a는 3이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 분자 접착제 분해제는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000057
,
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,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000059
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000060
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000061
,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000062
,
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,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000064
,
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,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000066
,
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또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000068
이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 분자 접착제 분해제는 말단 NH 또는 NH2에서 Linker와 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, Ab에 결합하는 링커-단백질 분해제는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000069
,
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,
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000071
,
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,
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,
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,
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,
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,
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,
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,
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,
또는
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000081
이다.
본 발명은 또한 상기 기재된 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 과증식성 질환 또는 혈관신생질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 과증식성 질환 또는 혈관신생질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 상기 기재된 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 용도를 제공한다.
또한, 1종 이상의 치료적 공동-작용제(therapeutic co-agent); 및 약학적으로 허용되는 부형제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 치료적 공동-작용제는 과증식성 질환에 대한 예방, 개선 또는 치료효과를 나타내는 작용제, 또는 증식성 질환 치료제 투약 시 나타나는 부작용의 발현을 감소시킬 수 있는 작용제, 또는 면역력 증진 효과를 나타내는 작용제 등일 수 있으나 이로 제한되는 것은 아니고, 단백질 분해제와 함께 배합제의 형태로 적용하였을 때 치료적으로 유용한 효과를 나타내고/거나, 단백질 분해제의 안정성을 보다 향상시키고/거나, 단백질 분해제 투여 시 나타날 수 있는 부작용을 감소시키고/거나, 면역력의 증진을 통해 치료효과를 극대화할 수 있는 효과를 나타내는 제제라면 어떤 것이든 배합하여 적용할 수 있음을 의미한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 과증식성 질환은 시험관내이든 생체내이든, 신생물 또는 과형성성 성장과 같은 바람직하지 않게 과도하거나 비정상적인 세포가 원치 않게 제어되지 않는 세포 증식관련 질환을 말한다. 과증식성 질환은 신생물, 종양, 암, 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애, 및 죽상동맥경화증으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 신생물 및 종양의 예로는 조직구종, 신경교종, 성상세포종, 골종 등을 들 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 암은 폐암, 소세포성 폐암, 위장관암, 대장암, 장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있으나, 단백질 분해제가 치료효과를 나타낼 수 있는 암종이라면 모두 적용이 가능하다.
본 발명은 또한, 과증식성 질환을 치료하기 위한 유효량의 항체 구조물-단백질 분해제 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 과증식성 질환을 갖는 대상체에서의 과증식성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물을 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 암 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물을 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 혈관신생질환 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
본 발명은 대상체의 목표 위치에 단백질 분해제를 제공하는데 사용하기에 적합하다. 본 발명에 따른 접합체는 링커 부분을 전혀 보유하지 않는 활성 단백질 분해제을 방출시키며, 단백질 분해제의 반응성에 영향을 줄 수 있는 것은 존재하지 않는다.
[정의]
본 명세서에서는 또한 하기 정의가 적용된다:
본 명세서에서 "치료제"는 증식성 질환, 예를 들어 암 세포 또는 활성화된 면역 세포에 세포독성, 세포증식억제 및/또는 면역조절 효과를 행사하는 작용제이다. 치료제의 예는 세포독성제, 화학요법제, 세포증식억제제 및 면역조절제를 포함한다.
본 명세서에서 "화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다.
본 명세서에서 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물, 특히 포유동물을 포함하는 것으로 의도된다. 대상체의 예로는 인간 대상체를 들 수 있으며, 예컨대 본 명세서에 기재된 장애, 보다 구체적으로는 암을 갖는 인간 환자 또는 정상 대상체를 포함하는 개념이다. "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 비-포유동물(예를 들어, 닭, 양서류, 파충류) 및 포유동물, 예를 들어, 비-인간 영장류, 가축 및/또는 농업에 유용한 동물(예를 들어, 양, 개, 고양이, 소, 돼지 등) 및 설치류(예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 기니피그 등)를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간 환자이다.
본 명세서에서 "치료" 또는 "치료한다"는 치료적 처치 및 예방학적 또는 예방적 조치 둘 모두를 지칭한다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 질환을 갖는 대상체, 및 질환을 갖기 쉬운 대상체 또는 질환이 예방되어야 할 대상체를 포함한다. 따라서, 질환 또는 치료를 필요로 하는 대상체에 관하여 사용되는 경우, 상기 용어는 미처리 대상체에 비하여, 질환 진행의 저지 또는 둔화, 증상의 예방, 질환 및/또는 증상 중증도의 감소 또는 질환 기간의 감소를 포함하나 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에서, "투여" 또는 "투여하는"은 요망되는 효과를 달성하기 위하여 임의의 적절한 경로에 의해 화합물 또는 화합물들을 제공하고/거나 접촉시키고/거나 전달하는 것을 지칭한다. 투여는 경구, 설하, 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 피내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활막내, 흉골내, 척수강내, 병변내 또는 두개내 주사), 경피, 국소, 협측, 직장, 질, 비강, 안과적, 흡입 및 이식물을 통한 투여를 포함할 수 있지만, 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에서 "비치환되거나 치환된"은 비치환될 수 있거나 또는 치환될 수 있는 모기(parent group)를, "치환된"은 1 이상의 치환기를 갖는 모기(parent group)를, 치환기는 모기(parent group)에 공유결합되거나 모기(parent group)에 융합된 화학적 부분을 의미한다.
본 명세서에서 "할로"는 플루오린, 클로라인, 브로마인, 요오드 등을 말한다.
본 명세서에서 "알킬"은 지방족 또는 지환족, 포화 또는 불포화(불포화, 완전 불포화) 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분으로서, 포화 알킬의 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸 등을, 포화 직쇄형 알킬의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸(아밀), n-헥실, n-헵틸 등, 포화 분지쇄형 알킬의 예로는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "알콕시"는 -OR[여기서, R은 알킬기]을 의미하며, 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, sec-부톡시, 이소부톡시, tert-부톡시 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "아릴"은 고리 원자를 갖는 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분을 의미한다.
본 명세서에서 "알케닐"은 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬로서, 불포화 알케닐기의 예로는 에테닐(비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CH-CH3), 2-프로페닐, 이소프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "알키닐"은 1 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기로서, 불포화 알키닐기의 예는 에티닐 및 2-프로피닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "카르복시"는 -C(=O)OH를 말한다.
본 명세서에서 "포르밀"은 -C(=O)H를 말한다.
본 명세서에서 "아릴"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 모이어티에 관한 것이다. 예를 들어 "C5-7아릴"은 모이어티가 5 내지 7 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미하고,"C5-10아릴"은 모이어티가 5 내지 10 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미한다. 여기에서 접두사(C5-7, C5-10 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 "C5-6아릴"은 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 아릴기에 관한 것이다. 여기에서, 고리 원자는 "카르보아릴기"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있다. 카르보아릴기의 예는 벤젠, 나프탈렌, 아줄렌, 안트라센, 페난트렌, 나프타센 및 피렌으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 적어도 하나가 방향족 고리인 융합 고리를 포함하는 아릴기의 예는 인단, 인덴, 이소인덴, 테트랄린, 아세나프텐, 플루오렌, 페날렌, 아세페난트렌 및 아세안트렌으로부터 유도된 기를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 또는, 고리 원자는 "헤테로아릴기"에서와 같이 하나 이상의 헤테로 원자를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "헤테로아릴"은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 아릴로서, 예로는 피리딘, 피리미딘, 벤조티오펜, 푸릴, 디옥살라닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐 등, 보다 구체적으로 벤조푸란, 이소벤조푸란, 인돌, 이소인돌, 인돌리진, 인돌린, 이소인돌린, 푸린(아데닌 또는 구아닌), 벤즈이미다졸, 인다졸, 벤즈옥사졸, 벤즈이속사졸, 벤조디옥솔, 벤조푸란, 벤조트리아졸, 벤조티오푸란, 벤조티아졸, 벤조티아디아졸로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C9, 크로멘, 이소크로멘, 크로만, 이소크로만, 벤조디옥산, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴놀리진, 벤족사진, 벤조디아진, 피리도피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 프테리딘으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C10, 벤조디아제핀으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C11, 카르바졸, 디벤조푸란, 디벤조티오펜, 카르볼린, 페리미딘, 피리도인돌로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C13, 아크리딘, 크산텐, 티오크산텐, 옥산트렌, 페녹사티인, 페나진, 페녹사진, 페노티아진, 티안트렌, 페난트리딘, 페난트롤린, 페나진으로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C14를 들 수 있다.
본 명세서에서, "사이클로알킬"은 시클릴기인 알킬기이고, 고리(cyclic) 탄화수소 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분에 관한 것이다. 사이클로알킬기의 예는 하기로부터 유도된 것들을 포함하나, 이로 제한되지 않는다:
포화 단일고리 탄화수소 화합물: 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로헵탄, 메틸사이클로프로판, 디메틸사이클로프로판, 메틸사이클로부탄, 디메틸사이클로부탄, 메틸사이클로펜탄, 디메틸사이클로펜탄 및 메틸사이클로헥산;
불포화 단일고리 탄화수소 화합물: 사이클로프로펜, 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 메틸사이클로프로펜, 디메틸사이클로프로펜, 메틸사이클로부텐, 디메틸사이클로부텐, 메틸사이클로펜텐, 디메틸사이클로펜텐 및 메틸사이클로헥센; 및
포화 헤테로사이클릭 탄화수소 화합물: 노르카란, 노르피난, 노르보르난.
본 명세서에서, "헤테로사이클릴"은 헤테로사이클릭 화합물의 고리원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분에 관한 것이다.
본 명세서에서 접두사(예를 들어 C1-12, C3-8 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리 원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 본 명세서에서 "C3-6헤테로사이클릴"은 3 내지 6개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릴기에 관한 것이다.
단일고리 헤테로사이클릴기의 예는 하기로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다:
N1: 아지리딘, 아제티딘, 피롤리딘, 피롤린, 2H- 또는 3H-피롤, 피페리딘, 디하이드로피리딘, 테트라하이드로피리딘, 아제핀;
N2: 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 이미다졸린, 피라졸린, 피페라진;
O1: 옥시란, 옥세탄, 옥솔란, 옥솔, 옥산, 디하이드로피란, 피란, 옥세핀;
O2: 디옥솔란, 디옥산 및 디옥세판;
O3: 트리옥산;
N1O1: 테트라하이드로옥사졸, 디하이드로옥사졸, 테트라하이드로이속사졸, 디하이드로이속사졸, 모르폴린, 테트라하이드로옥사진, 디하이드로옥사진, 옥사진
S1: 티이란, 티에탄, 티올란, 티안, 티에판;
N1S1: 티아졸린, 티아졸리딘, 티오모르폴린;
N2O1: 옥사디아진;
O1S1: 옥사티올, 옥사티안; 및
N1O1S1: 옥사티아진.
본 명세서에서 "전구체(prodrug)"는 생체내 생리학적 조건 하(예를 들어 효소 산화(enzymatic oxidation), 환원(reduction) 및/또는 가수분해 등)에서 효소, 위산의 작용에 의해 피롤로벤조다이아제핀 약물로 직접적으로 또는 간접적으로 변환할 수 있는 화합물을 말한다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용되는 염"으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염을 사용할 수 있고, 상기 유리산으로는 유기산 또는 무기산을 사용할 수 있다.
상기 유기산은 이로 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이로 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
예컨대, 화합물이 음이온이거나 또는 음이온일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예컨대 -COOH는 -COO-일 수 있음), 적절한 양이온으로 염을 형성할 수 있다. 적절한 무기 양이온의 예는 알칼리 금속 이온, 예컨대 Na+ 및 K+, 알칼리 토금속 양이온, 예컨대 Ca2+ 및 Mg2+ 및 다른 양이온, 예컨대 Al3+을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 적절한 유기 양이온의 예는 암모늄 이온(즉, NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온(예컨대 NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 적절한 치환된 암모늄 이온의 예는 하기로부터 유도된 것들이다: 에틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민 및 트로메타민 뿐 아니라, 아미노산, 예컨대 리신 및 아르기닌. 통상적인 4급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온이거나 또는 양이온일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예컨대 -NH2는 -NH3 +일 수 있음), 적절한 음이온으로 염을 형성할 수 있다. 적절한 무기 음이온의 예는 하기 무기 산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아인산 등을 예로 들 수 있다.
적절한 유기 음이온의 예는 하기 유기산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다: 2-아세티옥시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캠퍼설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루쳅톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 히드록시말레산, 히드록시나프탈렌 카르복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 점액산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산 및 발레르산 등을 예로 들 수 있다. 적절한 중합체 유기 음이온의 예는 하기 중합체 산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 타닌산, 카르복시메틸 셀룰로오스 등을 예로 들 수 있다.
본 명세서에서 "용매화물(solvate)"은 본 발명에 따른 화합물과 용매 분자(solvent molecules) 사이의 분자 복합체(molecular complex)를 말하며, 용매화물의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide), 에틸 아세테이트, 아세트산, 에탄올아민 또는 이의 혼합용매와 결합한 본 발명에 따른 화합물을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
활성 화합물의 상당하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 또는 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 본 명세서에서 용질(예컨대 활성 화합물, 활성 화합물의 염) 및 용매의 착체를 지칭하기 위해 통상적인 의미로 사용된다. 용매가 물인 경우, 용매화물을 편리하게 수화물, 예컨대 일수화물, 이수화물, 삼수화물 등으로 지칭할 수 있다.
상기 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 통상적으로 서서히 대사되는 거대분자, 예를 들어 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 공중합체, 지질 응집물 등을 포함할 수 있으며, 이러한 약학적으로 허용 가능한 담체는 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 주사제, 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사 등을 위해, 활성 성분은 무발열성(pyrogen-free)이고 적절한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구 투여용의, 허용가능한 수용액의 형태일 수 있다. 당업자는 예를 들어 염화나트륨 수용액, 링거액, 락테이트 링거액 등과 같은 등장성 비히클을 사용하여 적절한 용액을 제조할 수 있으며, 보존제, 안정화제, 완충제, 산화 방지제 또는 기타 다른 첨가제로 필요한 경우 포함될 수 있다. 주사에 적합한 고체 형태는 또한 에멀젼으로서 또는 리포솜에 캡슐화된 폴리펩티드의 형태로 제조될 수 있다.
본 명세서에 사용된 어구 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 목적 치료 결과를 달성하는데 (투여량 및 투여 기간 및 수단에 대해) 필요한 양을 지칭한다. 유효량은 적어도 대상체에게 치료 이익을 부여하는데 필요한 활성제의 최소량이며, 독성량 미만이다. 예를 들어 투여량은 환자 당 약 100 ng 내지 약 100 mg/kg 범위로, 보다 전형적으로 약 1 μg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위로 투여할 수 있다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 전구체약물(prodrug) 등인 경우에 투여양은 모 화합물을 기준으로 계산되므로, 사용되는 실제 중량은 비례하여 증가된다. 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 화합물은 단위 제형(dosage form)당 활성 성분 0.1 mg 내지 3000 mg, 1 mg 내지 2000 mg, 10 mg 내지 1000 mg을 포함하도록 제형화될 수 있으나 이로 한정되지 않는다. 활성 성분은 약 0.05 μM 내지 100 μM, 1 μM 내지 50 μM, 5 μM 내지 30 μM의 활성 화합물의 피크 플라즈마 농도를 얻도록 투여될 수 있다. 예를 들어 임의로 식염수내에서 활성 성분 0.1 w/v% 내지 5 w/v% 용액의 정맥 주사에 의해 투여될 수 있다.
약학적 조성물에서 활성 화합물의 농도는 약물의 흡수, 불활성화 및 배출율 및 당 기술분야의 숙련자에게 알려진 다른 인자에 의해 결정될 수 있다. 투여량은 증상/질환의 심각도에 따라 달라질 수 있다. 또한 어떤 특정 환자에 대한 투여량 및 투여요법은 환자의 증상/질환의 정도, 필요성, 나이, 약물에 대한 반응성 등을 종합적으로 고려하여 투여 감독자의 직업적 판단에 따라 조정될 수 있으며, 본 발명에서 제시된 농도 범위는 단지 일예이며 청구된 조성물의 실시양태를 이로 한정하는 것을 의도하지 않는다. 또한 활성 성분은 1회 투여될 수 있거나, 보다 적은 투여량을 수 회 나누어 투여할 수도 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예를 통해 보다 상세히 설명한다.
하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것이고, 본 발명의 권리범위를 이로 한정하려는 의도를 갖는 것은 아니다.
<실시예 1> 화합물 2의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000082
화합물 1의 제조
2-메틸-5-나이트로아닐린 (10 g, 65.7 mmol)을 다이클로로메테인 (80 mL)에
녹인 후 다이-t-부틸 다이카보네이트 (28.7 g, 131.9 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 묽힌 용액을 첨가하였다. 피리딘 (10.7 mL, 131.9 mmol)을 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 19 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽히고, 0.5 N 염산 수용액 (50 mL)으로 닦아주었다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 테트라하이드로퓨란/메탄올 (3:1)용액에 녹인 후 4 M 수산화나트륨 수용액 (24.7 mL, 98.6 mmol)을 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 1.5 시간 동안 상온에서 교반한 후 농축하고, 다이클로로메테인 (200 mL)으로 묽힌 후 증류수 (100 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1 (14.8 g, 89%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 8.83 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.55 (s, 9H).
화합물 2의 제조
화합물 1 (9.5 g, 25.9 mmol)을 메탄올 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (200 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 1.0 g)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 2 (8.2 g, 95%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.34 (s, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.33 (d, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).
<실시예 2> 화합물 10의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000083
화합물 3의 제조
4-브로모-2-메틸벤조산 (3 g, 13.95 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 탄산수소 나트륨 (2.3 g, 27.90 mmol)과 아이오도메테인 (1.7 mL, 27.90 mmol)을 차례로 첨가하고 60 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)와 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 3 (3.1 g, 99%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.78 (d, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.38 (d, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.57 (s, 3H).
화합물 4의 제조
화합물 3 (3.1 g, 13.88 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 시안화아연 (Zn(CN)2, 8.2 g, 69.44 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (3.2 g, 2.78 mmol)을 차례로 첨가하고 120 ℃에서 17 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 상온으로 식힌 후 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여과된 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 후 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 4 (2.0 g, 85%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.97 (d, 1H), 7.55-7.53 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.62 (s, 3H).
화합물 5의 제조
화합물 4 (2.0 g, 11.75 mmol)를 벤젠 (100 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 N-브로모석신이마이드 (NBS, 3.1 g, 17.62 mmol)와 아조비스아이소뷰티로나이트릴 (AIBN, 1.9 g, 11.75 mmol)을 차례로 첨가하고 17 시간 동안 가열 환류시키면서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5 (2.5 g, 84%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 8.04 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 4.91 (s, 2H), 3.98 (s, 3H).
화합물 6의 제조
화합물 5 (2.5 g, 9.83 mmol)과 3-아미노피페리딘-2,6-다이온 염산염 (1.6 g, 9.83 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (30 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (2.2 mL, 12.92 mmol)을 첨가하고 상온에서 16 시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽힌 후 생긴 고체를 여과하여 화합물 6 (1.9 g, 71%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.02 (s, 1H), 8.16 (s, 2H), 7.99 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 5.17-5.12 (m, 1H), 4.57-4.40 (m, 2H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.44-2.39 (m, 1H), 2.19-2.16 (m, 1H).
화합물 7의 제조
화합물 6 (1 g, 3.37 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (30 mL)에 녹인 후 레이니 니켈 (Raney Ni, 2 g)과 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (2.1 mL, 9.06 mmol)을 차례로 첨가하고 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 48 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7 (576 mg, 45%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 10.96 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.49 (t, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.35 (d, 1H) 5.10-5.06 (m, 1H), 4.44-4.26 (m, 2H), 4.22-4.20 (d, 2H), 2.89-2.84 (m, 1H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.38-2.34 (m, 1H), 1.99-1.97 (m, 1H), 1.37 (s, 9H).
화합물 8의 제조
화합물 7 (200 mg, 0.53 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1 시간 동안 교반하고 감압 농축하여 화합물 8 (181 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.00 (s, 1H), 8.24 (br, 2H), 7.80 (d, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, 1H) 5.15-5.10 (m, 1H), 4.51-4.33 (m, 2H), 4.19-4.15 (m, 2H), 2.99-2.87 (m, 1H), 2.63-2.59 (m, 1H), 2.43-2.40 (m, 1H), 2.03-2.00 (m, 1H).
화합물 9 의 제조
화합물 2 (159 mg, 0.69 mmol)를 건조한 톨루엔 (15 mL)에 녹인 후 트라이포스겐 (82 mg, 0.28 mmol)과 트라이에틸아민 (0.15 mL, 1.04 mmol)을 첨가하고 80 ℃, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 가열 교반 후 감압 농축하였다. 이 생성물을 건조한 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹이고, 0 ℃, 질소 대기 하에서 화합물 8 (181 mg)과 트라이에틸아민 (0.22 mL, 1.60 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹인 용액을 반응 용액에 첨가하였다. 1.5 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9 (222 mg, 79%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.69 (t, 1H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.47-4.28 (m, 4H), 2.92-2.86 (m, 1H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 2.00-1.97 (m, 1H), 1.48 (s, 9H).
화합물 10의 제조
화합물 9 (50 mg, 0.09 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 감압 농축하여 화합물 10 (44 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.82 (t, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.46-4.28 (m, 4H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.40-2.36 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.01-1.98 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+422.4.
<실시예 3> 화합물 14의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000084
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000085
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000086
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000087
화합물 12의 제조
화합물 10 (60 mg, 0.11 mmol)과 화합물 11 (91 mg, 0.10 mmol, 화합물 11은 공개특허 WO2017/089890 에 기술된 방법으로 제조하였다)을 다이메틸폼아마이드 (4 mL)와 피리딘(1 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (6.9 mg, 0.05 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.04 mL, 0.25 mmol)을 차례로 첨가하고 50 ℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 12 (80 mg, 67%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1078.59.
화합물 13의 제조
화합물 12 (80 mg, 0.07 mmol)를 2-프로판올 (1 mL)과 테트라하드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수(1 mL)에 녹인 수산화 리튬 (8.6 mg, 0.20 mmol) 수용액과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.06 mL, 0.07 mmol) 을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 13 (83 mg, crude)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1038.63.
화합물 14의 제조
화합물 13 (83 mg, crude)을 다이클로로메테인 (4 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 14 (41 mg)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 10.98 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.31 (t, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.55-7.51 (m, 2H), 7.44-7.42 (m, 2H), 7.28 (d, 1H), 7.14 (d, 1H), 7.00 (d, 1H), 6.64 (t, 1H), 5.16-5.08 (m, 4H), 4.47-4.28 (m, 4H), 4.05 (t, 2H), 3.98 (d, 1H), 3.65-3.52 (m, 10H) 2.96-2.87 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 2.03-1.98 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+938.54.
<실시예 4> 화합물 21의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000088
화합물 15의 제조
3-브로모-2-메틸벤조산 (5 g, 23.25 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (30 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 탄산수소 나트륨 (3.9 g, 46.50 mmol)과 아이오도메테인 (2.9 mL, 46.50 mmol)을 차례로 첨가하고 60 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)과 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 15 (5.2 g, 97%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.73-7.68 (m, 2H), 7.09 (t, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).
화합물 16의 제조
화합물 15 (2.6 g, 11.35 mmol)를 벤젠 (100 mL)에 녹인 후, 질소 대기 하에서 N-브로모석신이마이드 (NBS, 4.4 g, 24.96 mmol)와 아조비스아이소뷰티로나이트릴 (AIBN, 1.8 g, 11.35 mmol)을 차례로 첨가하고 17 시간 동안 가열 환류시키면서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 후, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순서로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 16 (3.2 g, 91%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.88 (d, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.95 (s, 3H).
화합물 17의 제조
화합물 16 (3.2 g, 10.39 mmol)과 3-아미노피페리딘-2,6-다이온 염산염 (1.9 g, 11.43 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (2.7 mL, 15.58 mmol)을 첨가하고 상온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽힌 후 생긴 고체를 여과하여 화합물 17 (2.2 g, 67%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.01 (s, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.51 (t, 1H), 5.17-5.12 (m, 1H), 4.44-4.24 (m, 1H), 2.98-2.87 (m, 1H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.46-2.44 (m, 1H), 2.03-1.99 (m, 1H).
화합물 18의 제조
화합물 17 (2.2 g, 6.99 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후, 질소 대기 하에서 시안화아연 (Zn(CN)2, 4.1 g, 34.96 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (1.4 g, 1.39 mmol)을 차례로 첨가하고 120 ℃에서 17 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 상온으로 식힌 후 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 감압 농축하고 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽힌 후 생긴 고체를 여과하여 화합물 18 (1.2 g, 63%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+270.32.
화합물 19의 제조
화합물 18 (1.2 g, 4.45 mmol)을 메탄올 (20 mL)과 염산 (4 M 1,4-다이옥세인 용액, 5 mL)에 녹인 다음 0 ℃, 질소 대기 하에서 팔라듐/차콜 (10% w/w, 1.5 g)을 첨가하였다. 반응 용액을 50 psi, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 감압 농축하여 화합물 19 (732 mg, crude)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+273.97.
화합물 20의 제조
화합물 2 (798 mg, 3.48 mmol)를 건조한 톨루엔 (50 mL)에 녹인 후 트라이포스겐 (413 mg, 1.39 mmol)과 트라이에틸아민 (0.7 mL, 5.22 mmol)을 첨가하고 80 ℃, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반한 후 감압 농축하였다. 이 생성물을 건조한 테트라하이드로퓨란 (25 mL)에 녹이고, 0 ℃, 질소 대기 하에서 화합물 19 (732 mg)와 트라이에틸아민 (1.1 mL, 8.03 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (25 mL)에 녹인 용액을 반응 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 1.5 시간 동안 교반한 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 20 (160 mg, 11%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+544.31, [M-Boc+H]+422.24.
화합물 21의 제조
화합물 20 (160 mg, 0.30 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 감압 농축하여 화합물 21 (157 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.01 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.56-7.47 (m, 3H), 7.04 (d, 1H), 6.94 (d, 1H) 6.76 (t, 1H), 5.17-5.12 (m, 1H), 4.55-4.35 (m, 4H), 2.97-2.88 (m, 1H), 2.67-2.60 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.04-2.01 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+422.51.
<실시예 5> 화합물 24의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000089
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000090
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000091
화합물 22의 제조
화합물 21 (100 mg, crude)과 화합물 11 (149 mg, 0.16 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (4 mL)와 피리딘(1 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (11 mg, 0.08 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.1 mL, 0.55 mmol)을 차례로 첨가하고 50 ℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 22 (83 mg, 42%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1179.06.
화합물 23의 제조
화합물 22 (83 mg, 0.07 mmol)를 2-프로판올(1 mL)과 테트라하드로퓨란(1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수(1 mL)에 녹인 수산화 리튬 (8.8 mg, 0.21 mmol)과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.06 mL, 0.07 mmol)을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 HPLC로 정제하여 화합물 23 (32 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1038.95.
화합물 24의 제조
화합물 23 (32 mg)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 24 (24 mg)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.00 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.31 (t, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54-7.50 (m, 2H), 7.43 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.00 (d, 1H) 6.63 (t, 1H), 5.16-5.10 (m, 3H), 4.55-4.35 (m, 4H), 4.05 (t, 2H), 3.98 (d, 1H), 3.65-3.52 (m, 10H) 2.98-2.88 (m, 1H), 2.63-2.59 (m, 1H), 2.42-2.32 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.04-2.00 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+938.82.
<실시예 6> 화합물 26의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000092
화합물 26은 화합물 25 (lenalidomide)와 화합물 11로부터 화합물 14의 합성과 유사한 방법으로 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOH-d4): δ 7.95 (t, 1H), 7.74 (t, 1H), 7.57 (t, 2H), 7.49 (t, 1H), 7.34 (d, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.20-5.11 (m, 2H), 4.42-4.35 (m, 2H), 4.18-4.16 (m, 2H), 4.06 (d, 1H), 3.81 (t, 2H), 3.72-3.52 (m, 12H), 2.94-2.76 (m, 2H), 2.46-2.39 (m, 1H), 2.18-2.46 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+776.62.
<실시예 7> 화합물 30의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000093
화합물 28의 제조
화합물 27 (42 mg, 0.09 mmol, 화합물 27은 J. Med. Chem. 2019, 62, 699-726에 기술된 방법으로 제조하였다)과 화합물 11 (92 mg, 0.10 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (4 mL)와 피리딘 (1 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-하이드록시벤조트리아졸 (2.5 mg, 0.02 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.03 mL, 0.19 mmol)을 차례로 첨가하고 50 ℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소 나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 28 (73 mg, 71%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 9.98 (s, 2H), 7.94 (t, 1H), 7.84 (t, 1H), 7.69 (d, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.33 (d, 2H), 7.15 (d, 1H), 6.95-6.93 (m, 1H), 6.78 (d, 1H), 5.75 (d, 1H), 5.49 (t, 1H), 5.22 (t, 1H), 5.06 (t, 1H), 5.00 (s, 2H) 4.73 (d, 1H), 4.21 (d, 2H), 3.80 (t, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.56-3.50 (m, 8H), 3.39-3.36 (m, 2H), 2.10-1.99 (m, 9H), 1.38 (s, 9H). EI-MS m/z : [M+H]+1092.33.
화합물 29의 제조
화합물 28 (73 mg, 0.07 mmol)을 2-프로판올(1 mL)과 테트라하드로퓨란(1 mL)에 녹인 후, -50 ℃ 질소 대기 하에서 증류수(1 mL)에 녹인 수산화 리튬 (8.4 mg, 0.20 mmol)을 첨가하고 -5 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 29 (70 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+952.31.
화합물 30의 제조
화합물 29 (70 mg)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 30 (43.6 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.03 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.31 (t, 1H), 7.88 (t, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.70 (d, 2H), 7.48-7.46 (m, 2H), 7.37 (d, 2H), 7.25-7.22 (m, 2H), 6.64 (t, 1H), 6.79 (d, 1H), 5.14 (d, 1H), 5.01 (s, 3H), 4.22 (d, 2H), 4.06 (t, 2H), 3.98 (d, 1H) 3.65-3.37 (m, 12H). EI-MS m/z : [M+H]+852.21.
<실시예 8> 화합물 34의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000094
화합물 31의 제조
화합물 2-아이오도-4-나이트로톨루엔 (800 mg, 2.59 mmol)을 톨루엔 (5 mL)녹인 뒤 팔라듐 아세테이트 (27.3 mg, 0.12 mmol), 엑스포스 (XPhos, 174 mg, 0.36 mmol), 세슘 카보네이트 (2.97 g, 9.12 mmol), 그리고 사이클로헥실아민 (0.7 ml, 6.08 mmol)을 넣고 마이크로파 반응기(microwave reactor)에서 130 oC 에서 2 시간 동안 반응하였다. 반응 용액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 31 (160 mg, 22%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3):δ 7.45 (d, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.13 (d, 1H), 3.61(br, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.77-1.71 (m, 2H), 1.68-.49(m, 2H), 1.43-1.00 (m, 2H), 1.27-1.19 (m, 4H).
화합물 32의 제조
화합물 31 (800 mg, 3.41 mmol)을 메탄올 (10 mL)과 에틸 아세테이트 (20 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 100 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 32 (670 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+205.4.
화합물 33의 제조
화합물 32 (55 mg, 0.27 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (117 mg, 0.30 mmol)와 피리딘 (0.03 ml, 0.35 mmol)을 넣고 상온에서 5 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (10 mL)으로 희석하고 증류수 (10 mL * 2)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하여 화합물 33 (crude)을 수득하였다.
화합물 34의 제조
화합물 33 (117 mg, 0.28 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹이고 0 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.12 mL, 0.85 mmol)과 화합물 8 (110 mg, 0.28 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 2 시간 교반한 후 농축한 뒤 Prep. HPLC로 정제하여 화합물 34 (98.7 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+504.2.
<실시예 9> 화합물 44의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000095
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000096
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000097
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000098
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000099
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000100
화합물 35의 제조
화합물 32 (802 mg, 3.42 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 뒤 피리딘 (0.42 mL, 5.13 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.4 mL, 3.77 mmol)를 -78 oC에서 첨가하고, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 35 (320 mg, 32%)를 수득하였다. 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.93 (d, 1H), 6.75 (br, 1H), 6.54-6.49(m, 2H), 6.01-5.92(m, 1H), 5.37-5.33(m, 1H), 5.26-5.23 (m, 1H), 4.65 (d, 1H), 3.47 (br, 1H), 3.30-3.28 (m, 1H), 2.11-2.08 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.78-1.76(m, 2H), 1.67-1.64(m, 1H), 1.45-1.35 (m, 2H), 1.29-1.15 (m, 4H). EI-MS m/z : [M+H]+289.3.
화합물 36의 제조
t-뷰틸-N-t-뷰톡시카보닐-N-하이드록시카바메이트 (10.02 g, 42.9 mmol)를 다이메틸폼아마이드 (50 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 소듐 하이드라이드 (60% dispersion in mineral oil, 1.57 g, 39.4 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-아지도-2-[2-(2-브로모에톡시)에톡시]에탄 (8.52 g, 35.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 온도를 상온으로 올리고 질소 대기 하에서 4 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트 (150 mL)로 묽히고, 증류수(100 mL)와 포화 염화 나트륨 수용액 (100 mL)으로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 36 (10.9 g, 78%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (s, 1H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 3.74-3.69 (m, 6H), 3.42 (t, J = 4.8Hz, 2H), 1.49 (s, 18H).
화합물 37의 제조
화합물 36 (5.52g, 14.1 mmol)과 트라이페닐포스핀 (4.08 g, 15.6 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (2.5 mL, 141 mmol)를 첨가하고 10 분 교반 후 상온으로 올려 16 시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 37 (4.4 g, 85%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.04-4.01 (m, 2H), 3.74-3.62 (m, 7H), 3.55 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 2.88 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 2.81 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 1.64 (s, 2H), 1.48 (s, 18H).
화합물 39의 제조
화합물 38 (3.0 g, 6.19 mmol, 화합물 38은 공개특허 WO2017/089890 에 기술된 방법으로 제조하였다)과 화합물 37 (2.71 g, 7.43 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (50 mL)에 녹인 후 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 3.52 g, 9.29 mmol)와 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (2.2 mL, 12.4 mmol)을 0 oC,질소 대기하에서 첨가하였다. 반응 용액을 2 시간 동안 상온 교반한 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (100 mL)을 반응 용액에 넣고 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (200 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 39 (2.14 g, 42%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+831.5, [M-Boc+H]+731.4, [M-2Boc+H]+631.3.
화합물 40의 제조
화합물 39 (346 mg, 0.42 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 후 -45 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.12 mL, 0.69 mmol)과 트라이포스겐 (15 % 톨루엔 용액, 0.32 mL, 0.45 mmol)을 차례로 첨가하고, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 질소 대기 하에서 화합물 35 (100 mg, 0.347 mmol)와 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.06 mL, 0.347 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 반응 용액에 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 -15 ℃ 까지 올리면서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 40 (99 mg, 25%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+1167.7.
화합물 41의 제조
화합물 40 (255 mg, 0.09 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (10.3 mg, 0.089 mmol)과 소듐-2-에틸헥사노에이트 (44.4 mg, 0.267 mmol)를 차례로 첨가하고 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 묽힌 후 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 41 (90 mg, 98%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1061.8.
화합물 42 의 제조
화합물 41 (103 mg, 0.97 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (3 mL)에 녹인 후 -45 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.03 mL, 0.19 mmol)과 트라이포스겐 (15 % 톨루엔 용액, 0.01 ml, 0.097 mmol)을 차례로 첨가하고, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 질소 대기 하에서 화합물 8 (41 mg, 0.019 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.01 mL, 0.016 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후 반응 용액에 첨가하였다. -15 ℃에서 1.5 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 42 (85 mg, 64%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1360.9, [M+Na]+1383.7.
화합물 43의 제조
화합물 42 (51 mg, 0.038 mmol)를 2-프로판올 (0.5 mL)과 테트라하이드로퓨란 (0.5 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (0.5 mL)에 녹인 수산화 리튬 (6.4 mg, 0.15 mmol)과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.038 mL, 0.038 mmol)을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 43 (crude)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1220.8, [M+Na]+1242.4.
화합물 44의 제조
위에서 얻은 화합물 43 (Crude)을 다이클로로메테인 (1 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 44 (10 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1020.7, [M+Na]+1042.6.
<실시예 10> 화합물 48의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000101
화합물 45의 제조
화합물 2-아이오도-4-나이트로톨루엔 (600 mg, 2.28 mmol)을 톨루엔 (5 mL)녹인 뒤 팔라듐 아세테이트 (20.5 mg, 0.09 mmol), 엑스포스 (XPhos, 131 mg, 0.27 mmol), 세슘 카보네이트 (2.22 g, 6.84 mmol), 그리고 n-프로필아민 (0.28 mL, 3.42 mmol)을 넣고 마이크로파 반응기(microwave reactor)에서 130 oC 에서 2 시간 동안 반응하였다. 반응 용액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 45 (111 mg, 25%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.49 (dd, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 3.71 (br, 1H), 3.20(q, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.05 (t, 3H). EI-MS m/z : [M+H]+195.1.
화합물 46의 제조
화합물 45 (111 mg, 0.57 mmol)를 메탄올 (3 mL)과 에틸 아세테이트 (6 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10% w/w, 50 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 46 (Crude 93 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+165.2.
화합물 47의 제조
화합물 46 (20 mg, 0.12 mmol)을 다이클로로메테인 (1 mL)에 녹인 후 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (53 mg, 0.13 mmol)와 피리딘 (0.01 ml, 0.16 mmol)을 넣고 상온에서 5 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (10 mL)으로 희석하고 증류수 (10 mL * 2)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하여 화합물 47 (crude 40mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+375.3.
화합물 48의 제조
화합물 47 (40 mg, 0.107 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹이고 0 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.057 mL, 0.32 mmol)과 화합물 8 (42 mg, 0.107 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 2 시간 교반한 후 농축한 뒤 HPLC로 정제하여 화합물 48 (43 mg, 68%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+464.3.
<실시예 11> 화합물 52의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000102
화합물 49의 제조
6-나이트로인돌린 (500 mg, 3.04 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (798 mg, 3.65 mmol), 4-다이메틸아미노피리딘 (74 mg, 0.61 mmol), 그리고 트라이에틸아민 (0.85 mL, 6.09 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 17 시간 동안 교반한 후 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽히고, 증류수 (50 mL)로 닦아 준 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 49 (673 mg, 83%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.82 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.08 (t, 2H), 3.17 (t, 2H), 1.59 (s, 9H).
화합물 50의 제조
화합물 49 (50 mg, 0.19 mmol)를 메탄올 (5 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 10 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 50 (45 mg, quant.)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.89 (d, 1H), 6.27 (dd, 1H), 3.93 (t, 2H), 2.96 (t, 2H), 1.55(s, 9H).
화합물 51 의 제조
화합물 50 (21 mg, 0.09 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (41 mg, 0.11 mmol)와 피리딘 (0.01 mL, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반한 후 화합물 8 (29 mg, 0.08 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.03 mL, 0.15 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (1 mL)에 녹여 첨가하고 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 51 (22 mg, 55%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.98 (s, 1H), 8.60 (m, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.00 (m, 2H), 6.64 (m, 1H), 5.12-5.08 (dd, 1H), 4.47-4.28 (m, 4H), 3.87 (t, 2H) 2.97-2.91 (m, 3H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.43-2.37 (m, 1H), 2.09-1.84 (m, 1H), 1.49 (s, 9H).
화합물 52 의 제조
화합물 51 (22 mg, 0.04mmol)을 다이클로로메테인 (1.5 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 52 (14 mg, 62%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.21-7.08 (m, 1H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.77(t, 1H), 5.12-5.08 (dd, 1H), 4.46-4.28 (m, 4H), 3.59 (t, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.98-2.88(m, 1H) 2.67-2.57 (m, 1H), 2.40-2.36 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+434.42.
<실시예 12> 화합물 59의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000103
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000104
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000105
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000106
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000107
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000108
화합물 53의 제조
화합물 50 (261 mg, 1.11 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 뒤 피리딘 (0.13 ml, 1.67 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.13 ml, 1.22 mmol)를 -78 oC에서 첨가하고, 질소 대기 하에서 17 시간 동안 교반 하였다. 반응 용액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 53 (268 mg, 75%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.63 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.54 (br, 1H), 5.99-5.92 (m, 1H), 5.37 (d, 1H), 5.26 (d, 1H), 4.65 (d, 2H), 3.97 (t, 2H), 3.03 (t, 2H). 1.5 (s, 9H).
화합물 54의 제조
화합물 53 (145 mg, 0.455 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고 농축하여 화합물 54 (140 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+219.2.
화합물 55의 제조
화합물 39 (203 mg, 0.24 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 후 -45 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.07 mL, 0.41 mmol)과 트라이포스겐 (15 % 톨루엔 용액, 0.18 mL, 0.26 mmol)을 차례로 첨가하고, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 질소 대기 하에서 화합물 54 (67 mg, 0.20 mmol)와 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.04 mL, 0.20 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (2 mL)에 녹인 후 반응 용액에 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 -15 ℃ 까지 올리면서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 55 (138 mg, 63%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+1076.7.
화합물 56의 제조
화합물 55 (138 mg, 0.13 mmol)를 다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (15.0 mg, 0.01 mmol)과 소듐-2-에틸헥사노에이트 (64.0 mg, 0.39 mmol)를 차례로 첨가하고 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 묽힌 후 증류수 (20 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 56 (105 mg, 83%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+991.7.
화합물 57 의 제조
화합물 56 (40 mg, 0.04 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (2 mL)에 녹인 후 -45 ℃에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.01 mL, 0.08 mmol)과 트라이포스겐 (15 % 톨루엔 용액, 0.03 ml, 0.03 mmol)을 차례로 첨가하고, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 질소 대기 하에서 화합물 8 (17.2 mg, 0.04 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.01 mL, 0.08 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후 반응 용액에 첨가하였다. -15 ℃에서 1.5 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 57 (32 mg, 60%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1291.6.
화합물 58의 제조
화합물 57 (32 mg, 0.02 mmol)을 2-프로판올 (0.5 mL)과 테트라하이드로퓨란 (0.5 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (0.5 mL)에 녹인 수산화 리튬 (4.2 mg, 0.10 mmol)과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.02 mL, 0.02 mmol)를 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 58 (crude)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1150.7.
화합물 59의 제조
위에서 얻은 화합물 58 (crude)을 다이클로로메테인 (1 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 59 (14 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+950.5.
<실시예 13> 화합물 64의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000109
화합물 60의 제조
5-나이트로-1H-인다졸-3(2H)-온 (4.46 g, 24.9 mmol)을 증류수 (60 mL)에 녹이고 탄산수소 나트륨을 약염기 (pH 9)가 될 때까지 첨가한 후 40 분간 교반하였다. 반응 용액에 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (10 mL, 49.8 mmol)를 첨가하고 상온에서 교반하였다. 4 시간 후 탄산수소 나트륨 (10 g, 119 mmol)과 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (5 mL, 24.9 mmol)을 추가하고 상온에서 16 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고 증류수 (30 mL)로 닦아준 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 60 (700 mg, 10%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.62 (br s, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.44-8.41 (m, 1H), 8.17 (d, 1H), 1.62 (s, 9H).
화합물 61의 제조
화합물 60 (200 mg, 0.72 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹인 후, 탄산 세슘 (257 mg, 0.79 mmol)과 아이오딘화 메틸 (0.07 mL, 1.07 mmol)을 넣고 상온에서 12 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (40 mL)로 묽히고 증류수 (20 mL)로 닦아준 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 61 (85 mg, 40%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.57 (m, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 3.57 (s, 3H), 1.63 (s, 9H).
화합물 62의 제조
화합물 61 (85 mg, 0.29 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (2 mL)과 메탄올 (2 mL)에 녹이고 팔라듐/차콜 (46 mg)을 첨가한 후, 수소 대기 하에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트 여과 후 감압 농축하여 화합물 62 (75 mg, 99%)를 수득하였다.
화합물 63의 제조
비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (63 mg, 0.16 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후, 화합물 8 (35 mg, 0.13 mmol)과 피리딘 (0.03 mL, 0.40 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹인 용액을 반응 용액에 첨가하였다. 반응 30 분 후, 화합물 62 (57 mg, 0.15 mmol)를 다이메틸폼아마이드 (2 mL)에 녹인 용액을 반응 용액에 첨가하고 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 묽히고 증류수 (15 mL)로 닦아준 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 63 (9.4 mg, 12%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+563.5.
화합물 64의 제조
화합물 63 (9.4 mg, 0.017 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 64 (2 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+463.4.
<실시예 14> 화합물 69의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000110
화합물 65의 제조
2-아이오도-4-나이트로톨루엔 (800 mg, 3.04 mmol)을 톨루엔 (14 mL)에 녹인 뒤 팔라듐 아세테이트 (27.3 mg, 0.12 mmol), 엑스포스 (XPhos, 174 mg, 0.36 mmol), 세슘 카보네이트 (2.97 g, 9.12 mmol), 그리고 1-(t-뷰톡시카보닐)피페라진 (1.7 g, 9.12 mmol)을 넣고 마이크로파 반응기 (microwave reactor)에서 130 oC 에서 2 시간 동안 반응하였다. 반응 용액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 65 (315 mg, 32%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.88-7.82 (m, 2H), 7.32 (d, 1H), 3.61-3.59 (m, 4H), 2.91-2.89 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).
화합물 66의 제조
화합물 65 (315 mg, 0.98 mmol)를 메탄올 (5 mL)과 에틸 아세테이트 (2 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 65 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 66 (crude 280 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.95 (d, 1H), 6.40-6.35 (m, 2H), 3.56-3.53 (m, 4H), 2.83-2.17 (m, 4H), 2.18 (s, 3H), 1.48 (s, 9H).
화합물 67의 제조
화합물 66 (70 mg, 0.24 mmol)을 다이클로로메테인 (1.5 mL)에 녹인 후 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (104 mg, 0.26 mmol)와 피리딘 (0.02 ml, 0.31 mmol)을 넣고 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 농축한 후 얻은 화합물 67을 다음 반응에 바로 사용하였다.
화합물 68의 제조
화합물 8 (92 mg, 0.24 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (2 mL)에 녹인 후 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.13 mL, 0.72 mmol)을 첨가하였다. 화합물 67 (crude)을 반응 용액에 첨가한 후 16 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 증류수 (20 mL X 2)로 세척한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 68 (93 mg, 65 %)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.25 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.32-7.30 (d, 1H), 7.10-7.08 (d, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.95-6.93 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.56-5.52 (t, 1H), 5.15-5.10 (m, 1H), 4.56-4.44 (m, 2H), 4.44-4.24 (m, 2H), 4.16-4.08 (m, 1H), 3.55-3.52 (m, 4H), 2.92-2.72 (m, 6H), 2.40-2.16 (m, 5H), 1.48 (s, 9H).
화합물 69의 제조
화합물 68 (9.4 mg, 0.017 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 69 (2 mg)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, MeOH-d4): δ 7.77 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.15 (d, 1H), 4.54-4.43 (m, 4H), 3.37-3.31 (m, 4H), 3.13-3.10 (m, 4H), 2.91-2.86 (m, 1H), 2.81-2.79 (m, 1H), 2.51-2.47 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.20-2.12 (m, 1H).
<실시예 15> 화합물 74의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000111
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000112
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000113
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000114
화합물 71의 제조
화합물 70 (2.0 g, 2.74 mmol, 화합물 70은 공개특허 WO2017/089890 에 기술된 방법으로 제조하였다)을 다이클로로메테인 (14 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (1.2 g, 3.01 mmol)과 피리딘 (0.44 ml, 5.47 mmol)을 첨가하였다. 5 시간 동안 상온에서 교반 한 후, 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 증류수 (30 mL X 2)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 71 (2 g, 77 %)을 수득하였다.
화합물 72의 제조
화합물 69 (40 mg, 0.066 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (2 mL)에 녹이고, 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.24 mL, 0.13 mmol)과 화합물 71 (68mg, 0.073 mmol)을 차례로 첨가한 후 2 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)으로 희석하고 소금물 (20 mL X 2)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 72 (62 mg, 75 %)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1247.90.
화합물 73의 제조
화합물 72 (62 mg, 0.049 mmol)를 2-프로판올(1 mL)과 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (1 mL)에 녹인 수산화 리튬 (6.2 mg, 0.15 mmol)과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.05 mmol)을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 농축하여 화합물 73 (crude)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1107.76.
화합물 74의 제조
위에서 얻은 화합물 73 (crude)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 농축한 후, HPLC로 정제하여 화합물 74 (18 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1007.68, 1/2[M+H]+504.60.
<실시예 16> 화합물 80의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000115
화합물 75의 제조
에틸 브로모다이플루오로아세테이트 (2.02 g, 9.98 mmol), 4-아이오도-1-메틸-2-나이트로-벤젠 (2.6 g, 9.98 mmol), 그리고 구리 가루 (1.6 g, 25.95 mmol)를 질소 대기 하에서 다이메틸설폭사이드 (15 mL)에 녹인 뒤 60 ℃ 에서 12 시간 동안 교반하였다. 온도를 상온으로 낮춘 뒤 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트로 여과한 후 여과액을 1 N 염산 수용액 (15 mL)과 소금물 (2 X 15 mL)로 순차적으로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 75 (1.07 g, 41%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.21 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 4.31 (q, 2H), 2.67 (s, 3H), 1.32 (t, 3H).
화합물 76의 제조
화합물 75 (1.07 g, 4.12 mmol)를 에탄올 (35 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 100 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 76 (0.92 g, 98%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.07 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.31 (q, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.32 (t, 3H).
화합물 77의 제조
화합물 76 (444 mg, 1.94 mmol)을 톨루엔 (10 mL)에 녹인 후 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (0.53 mL, 2.33 mmol)을 첨가하고 반응 용액을 100 ℃, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 77 (624 mg, 98%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+484.45
화합물 78의 제조
화합물 77 (200 mg, 0.61 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (1 mL), 메탄올 (2.5 mL), 그리고 증류수 (2 mL)에 녹인 후 포타슘 카보네이트 (120 mg, 0.87mmol)을 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 0.1 N 염산 수용액으로 pH 3 정도로 맞춘 뒤 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하고 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 여과 및 농축하여 화합물 78 (163 mg, crude)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.98 (br, 1H), 7.26-7.21 (m, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).
화합물 79의 제조
화합물 78 (163 mg, 0.54 mmol)과 화합물 8 (167mg, 0.54mmol)을 다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.29 mL, 1.62 mmol)과 1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-비]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 226mg, 0.595 mmol)을 첨가하고 상온에서 16 시간 동안 교반 하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 묽히고, 포화 탄산수소 나트륨 수용액 (10 mL)과 증류수 (10 mL) 순으로 닦아 준 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 79 (72 mg, 23%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+557.3.
화합물 80의 제조
화합물 79 (72 mg, 0.13 mmol)를 다이클로로메테인 (1 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 80 (53 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+457.2.
<실시예 17> 화합물 83의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000116
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000117
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000118
화합물 81의 제조
화합물 39 (130 mg, 0.160 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (3 mL)에 녹인 후 포스겐 (15% 톨루엔 용액, 0.02 mL, 0.18 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.047 mL, 0.13 mmol)을 -40 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 40 분 동안 교반하였다. 건조한 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 화합물 80 (76 mg, 0.13 mmol)을 0 ℃, 질소 대기 하에서 반응 용액에 첨가하였다. 12 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 81 (70 mg, 40%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+1335.8.
화합물 82의 제조
화합물 81 (32 mg, 0.025 mmol)를 2-프로판올(1 mL)과 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (1 mL)에 녹인 수산화 리튬 (4.2 mg, 0.099 mmol)과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.025 mmol)을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 농축하여 화합물 82 (crude)를 수득하였다 EI-MS m/z : [M+H]+1173.7.
화합물 83의 제조
위에서 수득한 화합물 82 (crude 21 mg)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 83 (17 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+973.7.
<실시예 18> 화합물 88의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000119
화합물 84의 제조
다이에틸 아조다이카르복실레이트 (40% 톨루엔 용액, 273 mg, 1.57 mmol)와 t-뷰틸 4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (289 mg, 1.44 mmol)를 톨루엔 (10 mL)에 녹인 후 상온 질소 대기 하에서 트라이페닐포스핀 (411 mg, 1.57 mmol)와 2-메틸-5-나이트로페놀 (200 mg, 1.31 mmol)를 첨가하였다. 4 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 증류수 (50 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 84 (331 mg, 75%)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.76-7.74 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 4.64-4.62 (m, 2H), 3.67-3.61 (m, 2H), 3.49-3.43 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.99-1.94 (m, 2H), 1.83-1.81 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
화합물 85의 제조
화합물 84 (350 mg, 1.04 mmol)를 메탄올 (10 mL)에 녹인 뒤, 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 70 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 85 (325 mg)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 6.74 (d, 1H), 6.23 (s, 1H), 6.06 (d, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.60-3.50 (m, 2H), 3.30-3.25 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).
화합물 86의 제조
화합물 85 (70 mg, 0.23 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹인 후, 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (99 mg, 0.25 mmol)와 피리딘 (0.024 ml, 0.29 mmol)을 넣고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 얻은 화합물 86을 다음 반응에 바로 사용하였다.
화합물 87의 제조
화합물 8 (85 mg, 0.22 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (1.5 mL)에 녹이고, N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.12 mL, 0.66 mmol)을 차례로 첨가하였다. 위에서 수득한 화합물 86을 첨가한 후 16 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (10 mL)으로 희석하고 증류수 (2 X 10 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 87 (65 mg, 49%)을 수득하였다.
화합물 88의 제조
화합물 87 (65 mg, 0.11 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고 농축한 후, HPLC로 정제하여 화합물 88 (40 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.98 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.79 (t, 1H), 6.73 (d, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.60-4.50 (m, 1H), 4.47-4.28 (m, 4H), 2.96-2.87 (m, 1H), 2.62-2.50 (m, 1H), 2.45-2.36 (m, 1H), 2.09-1.96 (m, 5H), 1.87-1.82 (m, 2H).
<실시예 19> 화합물 89의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000120
화합물 89는 화합물 88과 화합물 71로부터 화합물 74와 유사한 방법으로 합성하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1022.03,1/2 [M+H]+512.25.
<실시예 20> 화합물 91의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000121
화합물 90의 제조
화합물 10 (100 mg, 0.19 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (5 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 N-(t-뷰톡시카보닐)-N-메틸글리신 (53 mg, 0.28 mmol), N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트라아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 127 mg, 0.34 mmol), 그리고 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.1 mL, 0.56 mmol)을 차례로 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 후 포화 탄산수소 나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 90 (64 mg, 58%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 9.23-9.20 (m, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.51-7.48 (m, 2H), 7.43 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.64 (m, 1H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.46-4.28 (m, 4H), 3.96(m, 2H), 2.94-2.86 (m, 4H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.00-1.97 (m, 1H), 1.41-1.34 (m, 9H).
화합물 91의 제조
화합물 90 (13 mg, 0.02mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 91 (8 mg, 60%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 10.97 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.74 (br, 2H), 8.65 (s, 1H) 7.69 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.08 (s, 2H), 6.72 (t, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.46-4.28 (m, 4H), 3.94 (t, 2H), 2.96-2.87 (m, 1H), 2.67-2.57 (m, 4H), 2.40-2.36 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.01-1.98 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+493.48.
<실시예 21> 화합물 92의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000122
화합물 92는 화합물 91과 화합물 71로부터 화합물 74와 유사한 방법으로 합성하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1009.65.
<실시예 22> 화합물 94의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000123
화합물 93의 제조
화합물 10 (164 mg, 0.31 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-(t-뷰톡시카보닐)아제티딘-3-카르복실산 (92 mg, 0.46 mmol), N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트라아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 209 mg, 0.55 mmol), 그리고 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.16 mL, 0.91 mmol)을 차례로 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 후 포화 탄산수소 나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 93 (117 mg, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.98 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.51-7.50 (m, 2H), 7.44 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.67 (t, 1H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.47-4.28 (m, 4H), 4.00-3.91 (m, 4H), 3.55-3.50 (m, 1H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.00-1.97 (m, 1H), 1.38-1.35 (m, 9H). EI-MS m/z : [M+H]+ 605.58.
화합물 94 의 제조
화합물 93 (13 mg, 0.02mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 94 (8 mg, 60%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 10.98 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.74-8.68 (m, 3H), 7.69 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.08 (s, 2H), 6.71 (t, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.46-4.28 (m, 4H), 4.00-3.91 (m, 4H), 3.81-3.71 (m, 1H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.40-2.36 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 2.01-1.98 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+505.52.
<실시예 23> 화합물 95의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000124
화합물 95는 화합물 94와 화합물 71로부터 화합물 74와 유사한 방법으로 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 10.98 (s, 1H), 9.38 (s, 1H) 8.60 (s, 1H), 8.32 (t, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.51-7.49 (m, 3H), 7.43 (d, 1H), 7.25 (d, 2H), 7.16 (d, 1H), 7.04 (d, 1H) 6.67 (t, 1H), 5.15-5.02 (m, 4H), 4.47-4.28 (m, 4H), 4.10-3.96 (m, 7H), 3.65-3.52 (m, 12H) 2.95-2.86 (m, 1H), 2.67-2.57 (m, 1H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.03-1.98 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+1021.72.
<실시예 24> 화합물 100의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000125
화합물 96의 제조
다이에틸 아조다이카복실레이트 (40% 톨루엔 용액, 297 mg, 1.47 mmol)와 t-뷰틸 (트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)카바메이트 (230 mg, 1.08 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 후 상온, 질소 대기 하에서 트라이페닐포스핀 (385 mg, 1.47 mmol)과 2-메틸-5-나이트로페놀 (150 mg, 0.98 mmol)을 첨가하였다. 16 시간 동안 환류 교반 후 감압 농축 하고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 96을 수득하였고 정제과정 없이 다음 반응에 사용하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.73 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.35-4.25 (m, 1H), 3.70 (s, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.17-2.09 (t, 4H), 1.67-1.55 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.38-1.25 (m, 2H).
화합물 97의 제조
위에서 얻은 화합물 96을 메탄올 (3 mL)과 에틸 아세테이트 (2 mL)에 녹인 후, 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 35 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 97 (90 mg, 28%, 2 steps)을 수득하였다.
화합물 98의 제조
화합물 97 (85 mg, 0.27 mmol)을 다이클로로메테인 (2 mL)에 녹인 후, 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (115 mg, 0.29 mmol)와 피리딘 (0.028 ml, 0.35 mmol)을 넣고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 얻은 화합물 98을 다음 반응에 바로 사용하였다.
화합물 99의 제조
화합물 8 (103 mg, 0.27 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (1.5 mL)에 녹이고, N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.14 mL, 0.80 mmol)을 차례로 첨가하였다. 반응 용액에 화합물 98을 첨가한 후 16 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (20 mL)으로 희석하고 증류수 (2 X 10 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 99 (147 mg, 88%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.81-6.75 (m, 2H), 6.70-6.65 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.50-4.29 (m, 4H), 4.09 (s, 1H), 2.99-2.85 (m, 1H), 2.62-2.36 (m, 2H), 2.10-1.98 (m, 5H), 1.85-1.75 (d, 2H), 1.47-1.15 (m, 15H).
화합물 100의 제조
화합물 99 (147 mg, 0.23 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반하고, 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 100 (75 mg)을 수득하였다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.99 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.80 (s, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.76-6.71 (m, 2H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.09 (s, 1H), 2.93-2.88 (m, 1H), 2.62-2.36 (m, 2H), 2.10-1.98 (m, 8H), 1.49-1.41 (m, 4H). EI-MS m/z : [M+H]+ 520.56.
<실시예 25> 화합물 101의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000126
화합물 101은 화합물 100과 화합물 71로부터 화합물 74와 유사한 방법으로 합성하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1036.75,1/2 [M+H]+519.16.
<실시예 26> 화합물 105의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000127
화합물 102의 제조
2-(메틸아미노)에탄올 (1 g, 13.3 mmol)을 다이클로로메테인 (40 mL)에 녹인 후 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (3.0 mL, 13.3 mmol)을 첨가하고 반응 용액을 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 소금물로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조한 다음 감압 농축하여 화합물 102 (2.29 g, 98%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 3.75 (q, 2H), 3.40 (t, 2H), 2.92 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
화합물 103의 제조
다이에틸 아조다이카복실레이트 (40 % 톨루엔 용액, 3.92 mmol)과 화합물 102 (629 mg, 3.59 mmol)를 톨루엔 (10 mL)에 녹인 후 상온, 질소 대기 하에서 트라이페닐포스틴 (1.03 g, 3.92 mmol)과 2-메틸-5-나이트로페놀 (500 mg, 3.26 mmol)을 첨가하였다. 상온에서 18 시간 교반 후 증류수 (50 mL)를 첨가하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출한 후 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 103 (780 mg, 77%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.78 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 4.15-4.13 (m, 2H), 3.69-3.65 (m, 2H), 3.02 (d, 3H), 2.30 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
화합물 104의 제조
화합물 104는 화합물 103으로부터 화합물 87의 합성과 유사한 방법으로 합성하였다. EI-MS m/z : [M+H]+580.6.
화합물 105의 제조
화합물 104 (145 mg, 0.455 mmol)를 다이클로로메테인 (4 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 105 (150 mg, 56 %)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+480.4.
<실시예 27> 화합물 109의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000128
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000129
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000130
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000131
화합물 106 의 제조
화합물 39 (150 mg, 0.18 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (78 mg, 0.19 mmol)와 피리딘 (0.019 mL, 0.235 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반한 후 농축하여 화합물 106 (180 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1042.1.
화합물 107 의 제조
화합물 106 (175 mg, 0.168 mmol)과 화합물 105 (100mg, 0.168 mmol)를 다이메틸폼아마이드 (2 mL)에 녹인 후 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.07 mL, 0.50 mmol)을 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 107 (181 mg, 80%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1337.0.
화합물 108의 제조
화합물 107 (181 mg, 0.13 mmol)을 2-프로판올 (2 mL)과 테트라하드로퓨란 (2 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (2 mL)에 녹인 수산화 리튬 (23 mg, 0.54 mmol) 수용액과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.13 mL, 0.13 mmol) 을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 농축하여 화합물 108 (crude)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1196.8.
화합물 109의 제조
위에서 수득한 화합물 108 (crude)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 109 (70.4 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+996.7.
<실시예 28> 화합물 117의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000132
화합물 110의 제조
에틸 2-메틸-6-옥소-1H-피리딘-3-카르복실레이트 (1.48 g, 8.17 mmol) 를 0 ℃ 질소 대기 하에서 포스포릴 클로라이드(15 mL)에 녹였다. 반응 온도를 100 ℃로 올리고 질소 대기 하에서 2 시간동안 교반하였다. 0 ℃로 식힌 후 얼음물 (50 mL)을 천천히 적가하였다. 암모니아 수용액을 이용하여 pH를 7로 맞추고 여과하여 화합물 110 (1.52 g, 93%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.16 (d, 1H), 7.23 (d, 1H), 4.38 (q, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.40 (t, 3H). EI-MS m/z : [M+H]+200.25.
화합물 111 의 제조
화합물 110 (1.52 g, 7.61 mmol)을 벤젠 (20 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 N-브로모석신이마이드 (NBS, 2.17 g, 12.18 mmol)와 아조비스아이소뷰티로나이트릴 (AIBN, 1.62 g, 9.90 mmol)을 차례로 첨가하고 17 시간 동안 가열 환류시키면서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 111 (1.18 g, 56%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3):δ 8.24 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.43 (q, 2H), 1.44 (t, 3H).
화합물 112 의 제조
화합물 111 (1.18 g, 4.24 mmol)과 3-아미노피페리딘-2,6-다이온 염산염 (836 mg, 5.08 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (2.2 mL, 12.71 mmol)을 첨가하고 80 ℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 감압 농축하고 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽힌 후 생긴 고체를 여과하여 화합물 112 (970 mg, 82%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 11.03 (s, 1H), 8.20 (d, 2H), 7.68 (d, 1H), 5.19-5.15 (m, 1H), 4.57-4.36 (m, 2H), 2.92-2.87 (m, 1H), 2.58-2.56 (m, 1H), 2.47-2.33 (m, 1H), 2.05-1.99 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+280.32.
화합물 113 의 제조
화합물 112 (970 mg, 3.47 mmol)를 다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 시안화아연 (Zn(CN)2, 2.03g,17.34mmol)첨가하였다. 20 분간 질소로 버블링 후 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (801 mg, 0.69 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 120 ℃에서 17 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 상온으로 식힌 후 감압 농축하고 다이클로로메테인 (5 mL)와 다이에틸 이써 (20 mL)로 묽힌 후 생긴 고체를 여과하여 화합물 113 (603 mg, 82%)을 수득하였다. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.06 (s, 1H), 8.42 (d, 2H), 8.21 (d, 1H), 5.24-5.19 (m, 1H), 4.66-4.45 (m, 2H), 2.96-2.87 (m, 1H), 2.59-2.56 (m, 1H), 2.46-2.40 (m, 1H), 2.06-2.02 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+271.35.
화합물 114 의 제조
화합물 113 (603 mg, 2.23 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (15 mL)와 메탄올 (5 mL)에 녹인 후 레이니 니켈 (Raney Ni, 2 g)과 다이-t-뷰틸 다이카보네이트 (0.61 mL, 2.67 mmol)을 차례로 첨가하고 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 48 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 114 (209 mg, 25%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 11.00 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.41 (d, 1H) 5.19-5.14 (m, 1H), 4.45-4.29 (m, 4H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.61-2.58 (m, 1H), 2.47-2.40 (m, 1H), 2.03-1.98 (m, 1H), 1.40 (s, 9H). EI-MS m/z : [M+H]+375.43.
화합물 115 의 제조
화합물 114 (209 mg, 0.55 mmol)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 감압 농축하여 화합물 115 (210 mg, crude)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+275.40.
화합물 116 의 제조
화합물 2 (156 mg, 0.70 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트 (319 mg, 0.81 mmol)와 피리딘 (0.09 mL, 1.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 3 시간 동안 교반한 후 화합물 115 (210 mg, 0.54 mmol)와 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.29 mL, 1.62 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (1 mL)에 녹여 첨가하고 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 116 (192 mg, 67%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 10.99 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12-8.09 (m, 1H), 7.48-7.46 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.12-7.11 (m, 1H), 6.98-6.96 (m, 1H), 6.74-6.72 (m, 1H), 5.17-5.14 (m, 1H), 4.49-4.30 (m, 4H), 3.01-2.86 (m, 1H), 2.71-2.56 (m, 1H), 2.33-2.31 (m, 1H) 2.08-1.96 (m, 4H), 1.43 (s, 9H). EI-MS m/z : [M+H]+523.55.
화합물 117 의 제조
화합물 116 (17 mg, 0.03 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반하고 감압 농축하여 화합물 117 (12 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 11.01 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.42 (br, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.93-6.85 (m, 2H), 5.20-5.15 (m, 1H), 4.52-4.32 (m, 4H), 2.97-2.88 (m, 1H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.45-2.42 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.04-2.01 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+423.49.
<실시예 29> 화합물 120의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000133
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000134
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000135
화합물 118의 제조
화합물 117 (76 mg, 0.14 mmol)과 화합물 71 (146 mg, 0.16 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (9.5 mg, 0.07 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.08 mL, 0.42 mmol)을 차례로 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 증류수 (50 mL) 순으로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 118 (154 mg, 92%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1179.76.
화합물 119의 제조
화합물 118 (154 mg, 0.13 mmol)을 2-프로판올 (1 mL)과 테트라하드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (1.5 mL)에 녹인 수산화 리튬 (27 mg, 0.39 mmol) 수용액과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.12 mL, 0.13 mmol) 을 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 농축하여 화합물 119 (130 mg, crude)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1039.71.
화합물 120의 제조
화합물 119 (130 mg, crude)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 120 (56 mg)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.01 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.31 (t, 1H), 8.31 (d, 1H), 7.92 (d, 1H), 7.61-7.45 (m, 3H), 7.27 (d, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.00 (d, 1H), 6.78 (t, 1H), 5.19-5.10 (m, 4H), 4.53-4.05 (m, 4H), 3.98-3.97 (m, 2H), 3.72-3.63 (m, 2H), 3.50-3.36 (m, 8H), 2.97-2.87 (m, 1H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.49-2.44 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.04-1.90 (m, 1H). EI-MS m/z : [M+H]+939.66.
<실시예 30> 화합물 122의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000136
화합물 121 의 제조
메틸 2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세테이트 (573 mg, 3.23 mmol)와 2-(t-뷰톡시카복실아미노)옥시-2-메틸-프로피온산 (779 mg, 3.56 mmol) 을 건조한 다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 1.35 g, 3.56 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)와 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 121 (510 mg, 42%)을 수득하였다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 4.13 (s, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.45-3.20 (m, 6H), 1.49 (q, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.30 (s, 3H)
화합물 122의 제조
화합물 121 (150 mg, 0.40 mmol)을 메탄올 (1 mL)과 테트라하드로퓨란 (3 mL)에 녹인 후, 0 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (1 mL)에 녹인 수산화 나트륨 (24 mg, 0.60 mmol) 수용액을 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 1 N 염산수용액으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 122 (135 mg, 92%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+364.50 1H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 9.38 (brs, 1H), 4.01 (s, 1H), 3.62-3.48 (m, 4H), 3.42 (t, 2H), 3.23 (t, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.30 (s, 3H),
<실시예 31> 화합물 125의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000137
화합물 124의 제조
화합물 123 (149 mg, 0.30 mmol)과 화합물 122 (110 mg, 0.30 mmol)를 건조한 다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 126 mg, 0.33 mmol)와 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.16 mL, 0.91 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 7 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)와 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 124 (100 mg, 48%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+806.63.
화합물 125 의 제조
화합물 124 (100 mg, 0.30 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (5 mL)와 물 (1 mL)에 녹인 후 트라이페닐포스핀 (78 mg, 0.30 mmol)을 상온에서 첨가하고 60 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 125 (82 mg, 88%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+754.62.
<실시예 32> 화합물 131의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000138
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000139
화합물 127의 제조
화합물 126 (478 mg, 0.82 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (9 mL)에 녹인 후 포스겐 (15% 톨루엔 용액, 0.089 mL, 0.82 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.36 mL, 1.04 mmol)을 -40 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 40 분 동안 교반하였다. 40 분 후 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 화합물 35 (200 mg, 0.68 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 반응 용액에 첨가하였다. 12 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 127 (320 mg, 50%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.52 (brs, 1H), 7.42-7.30 (m, 6H), 7.15-7.02 (m, 3H), 6.02-5.90 (m, 1H), 5.40-5.24 (m, 5H), 5.20-5.10 (m, 2H), 5.06-4.92 (m, 1H), 4.72-4.60 (m, 2H), 4.20-4.16 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.12-1.96 (m, 12H), 1.80-1.62 (m, 3H), 1.44-1.28 (m, 3H), 0.92-1.26 (m, 2H).
화합물 128 의 제조
화합물 127 (140 mg, 0.16 mmol)을 건조한 다이메틸폼아마이드 (4 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (9 mg, 0.008 mmol)과 피롤리딘 (0.04 mL, 0.48 mmol)를 차례로 첨가하고 상온으로 천천히 온도를 올린 후, 5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)와 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 128 (70 mg, 55%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.55 (brs, 1H), 7.46-7.30 (m, 5H), 8.10-7.04 (m, 1H), 6.88-6.96 (m, 1H), 6.56-6.50 (m, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.38-5.24 (m, 5H), 5.18-5.08 (m, 1H), 5.04-4.92 (m, 2H), 4.18-4.14 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 2.08-2.00 (m, 9H), 1.96-1.92 (m, 2H), 1.78-1.62 (m, 3H), 1.36-1.24 (s, 2H), 1.10-0.92 (m, 2H), EI-MS m/z : [M+H]+805.56.
화합물 129의 제조
화합물 128 (70 mg, 0.087 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (9 mL)에 녹인 후 -45 ℃, 질소 대기 하에서 포스겐 (15% 톨루엔 용액, 0.009 mL, 0.087 mmol)과 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (0.046 mL, 0.26 mmol)을 차례로 첨가하고 30 분 동안 교반하였다. 30 분 후 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 화합물 8 (36 mg, 0.096 mmol)을 -45 ℃에서 반응 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 천천히 올린 후 5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)과 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 129 (84 mg, 87%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+1104.83.
화합물 130의 제조
화합물 129 (84 mg, 0.087 mmol)를 메탄올 (3 mL)과 에틸 아세테이트 (2 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (5 % w/w, 10 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 130 (60 mg, 78%)을 수득하였다.
화합물 131 의 제조
화합물 130 (135 mg, 0.134 mmol)과 화합물 125 (42 mg, 0.056 mmol)를 건조한 다이메틸폼아마이드 (5 mL)에 녹인 후 질소 대기 하에서 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 50 mg, 0.134 mmol)와 N,N’-다이아이소프로필에틸아민 (30 uL, 0.17 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 7 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)와 증류수 (50 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 131 (58 mg, 38%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+2H]+2747.39, 1/2[M+H]+1374.09.
<실시예 33> 화합물 133의 제조
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000140
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000141
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000142
화합물 132 의 제조
화합물 131 (58 mg, 0.02 mmol)을 2-프로판올 (1 mL)과 테트라하이드로퓨란 (1 mL)에 녹인 후, -50 ℃, 질소 대기 하에서 증류수 (1.5 mL)에 녹인 수산화 리튬 (6.2 mg, 0.15 mmol) 수용액과 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 (1.1 M 수용액, 0.04 mL, 0.042 mmol)를 차례로 첨가하고 -10 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 pH 4~5 정도로 맞춘 후 동결 건조하여 화합물 132 (27 mg, crude)를 수득하였다. EI-MS m/z : 1/2[M+H]+1234.46.
화합물 133 의 제조
위에서 수득한 화합물 132 (27 mg, crude)를 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 교반한 후 농축하고 HPLC로 정제하여 화합물 133 (14 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+NH4]+2368.37, 1/2[M+H]+1184.10.
<실시예 34> ADC의 제조
ADC의 제조는 다음의 두 단계를 거처 제조 되었으며, 공통적으로 사용한 isoprenoid인 LCB14-0511, 0512 및 0606은 한국공개특허 제10-2014-0035393호에 기재된 방법으로 제조하였다. LCB14-0511, 0512 및 0606 구조식은 다음과 같다.
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000143
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000144
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000145
1 단계 : 프레닐화 항체 (prenylated antibody)의 제조
본 발명에서 항체의 프레닐레이션 (prenylation) 반응은 24 μM 항체, 600 nM FTase와 0.144 mM 혹은 0.250 mM isoprenoid (LCB14-0511, 0512 혹은 0606)를 포함하는 완충용액 {50 mM 트리스 염산염 (Tris-HCl, pH 7.4), 5 mM 염화마그네슘 (MgCl2), 10μM 염화아연 (ZnCl2), 0.250 mM 다이싸이오쓰레이톨 (DTT)}의 반응 혼합물을 이용하였다. 반응 종료 후 프레닐레이션된 항체는 PBS 완충용액으로 평형화된 G25 Sepharose 컬럼 (AKTA purifier, GE healthcare)으로 제염시켰다.
2 단계 : 약물 컨쥬게이션 (drug-conjugation) 반응
옥심 결합반응을 이용한 ADC는 300 mM 아세트산 나트륨 (NaOAc) 완충용액 (pH 5.2), 10% 다이메틸 설폭사이드 (DMSO), 24 uM 프레닐레이션된 항체와 240 uM 링커-약물을 섞어서 반응 혼합물을 제조하고 30 ℃에서 약하게 교반하였다. 6 시간 또는 24 시간 반응 후에 G25 Sepharose 컬럼으로 과량의 저분자 화합물을 제거하고 단백질 분획은 수집하여 농축하였다. 옥심 결합반응을 이용한 대표적인 ADC의 반응 경로는 도 2에 나타난 바와 같다.
Copper-free 클릭 (click) 결합반응을 이용한 ADC는 PBS 완충용액 (pH 7.4), 1% 다이메틸 설폭사이드 (DMSO), 10 uM 프레닐레이션 항체와 100 uM 링커-약물을 섞어서 반응 혼합물을 제조하고 25 ℃에서 6 시간 반응 후에 G25 Sepharose 컬럼으로 과량의 저분자 화합물을 제거하고 단백질 분획은 수집하여 농축하였다.
Copper를 이용한 클릭 결합반응을 이용한 ADC는 20 uM 프레닐레이션 항체, 200 uM 링커-약물, 10% 다이메틸 설폭사이드 (DMSO), 1 mM 황산구리 5수화물, 2 mM (BimC4A)3 (Sigma-Aldrich), 10 mM 아스코르빈산 나트륨 (sodium ascorbate) 및 10 mM 아미노구아니딘 염산염을 섞어 제조하고 25 ℃에서 3 시간 반응 후에 20 mM EDTA를 처리하여 30 분 동안 반응하였다. 반응 종료 후, G25 Sepharose 컬럼으로 과량의 저분자 화합물을 제거하고 단백질 분획은 수집하여 농축하였다. 클릭 결합반응을 이용한 대표적인 ADC의 반응 경로는 도 3에 나타난 바와 같다.
[표 1]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000146
* 실시예 화합물 번호, ** 네분자 화합물 도입된 ADC
<실시예 35> In vitro 세포 독성 평가
실시예 34에서 제조한 anti-EGFR-ADC 와 약물 자체의 암세포에 대한 세포증식억제 활성을 측정하였다. 이를 위하여 시판 중인 암세포주 (HCC827 (NSCLC, 비소세포성폐암 세포주), MDA-MB-468 (TNBC, 삼중음성유방암 세포주))를 사용하였다. 96-웰 플레이트에 각 암세포주를 웰당 1500~5000개씩 접종하여 24 시간 동안 배양한 뒤 ADC 와 약물 시료를 연속 희석하여 처리하였다. 72 시간 뒤에 살아있는 세포수는 SRB assay를 이용하여 정량하였다. 암세포에 대한 세포 독성 결과는 표 2에 기재하였다.
[표 2]
Figure PCTKR2022005438-appb-img-000147
항원이 과발현된 암세포주에서 ADC1은 IC50값이 1 nM (HCC827), 0.7 nM (MDA-MB-468)을 나타낸 반면 약물 자체의 화합물 10은 850 nM (HCC827), 35.3 nM (MDA-MB-468)의 세포독성을 보였다. 상기 결과는 본 발명으로 도출된 ADC1이 약물 자체의 세포 독성보다 약 50~850 배 이상 우수하였다. 또한 약물 자체의 활성이 매우 약한 화합물 69, 88, 91, 94, 105, 그리고 117 대비 이들의 ADC의 세포 독성은 화합물 자체 활성 대비 수 백배 이상의 더 좋은 활성을 보여 주었다.
네분자의 화합물 34가 도입된 ADC14의 세포독성은 두분자의 화합물 34가 도입된 ADC3에 비해 현저하게 향상된 활성 (5.5~34 배 향상)이 관찰되었다.
반면 대조 물질인 뼈대 (scaffold) 구조가 다른 화합물 27을 적용한 ADC13은 활성이 수백 nM 이상으로 현저히 떨어지는 결과를 나타내었다.
본 발명은 질환, 더 상세하게는 과증식 및/또는 혈관신생질환 예컨대, 암 질환의 치료 및/또는 예방에 사용가능하여 의약산업에 이용될 수 있다.

Claims (54)

  1. 하기 일반식 I로 표시되는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [일반식 I]
    Ab - [Linker - (B)m]n
    상기 식에서,
    Ab는 항원 특이적 결합 모이어티(moiety)이고;
    Linker는 링커이며;
    B는 단백질 분해제(protein degrader) 모이어티이고;
    m, n은 각각 독립적으로 1 내지 20 중에서 선택되는 정수이다.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 항원 특이적 결합 모이어티는 항체 구조물 또는 항체-유사 단백질인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 항체 구조물은 항원에 결합하는 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 항체 구조물은 항원 제시 세포에서 제시하는 항원에 결합하는 이펙터(effector) 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  5. 제 2항에 있어서,
    상기 항체 구조물은 모노클로날 항체(monoclonal antibody), 도메인 항체(domain antibody; dAb), 단일 사슬 항체(single chain antibody; scAb), Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일 사슬 가변 항체(single chain variable fragment; scFv), scFv-Fc 단편, 단일 도메인 중쇄 항체(single domain heavy chain antibody), 단일 도메인 경쇄 항체(single domain light chain antibody), 항체 변이체(variant antibody), 다중 결합 항체(multimeric antibody) 및 이중 특이적 항체(bispecific antibody)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 링커는 절단 가능한 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 링커는 프로테아제 절단성 링커(protease cleavable linker), 산-절단성 링커(acid-cleavable linker), 디설파이드 링커, 자기-희생기 링커(self-immolative linker), 자기-안정화 링커(self stabilizing linker), 말로네이트 링커, 말레이미도벤조일 링커, 3'-N-아미드 유사체, 베타-글루쿠로나이드(β-Glucuronide) 링커 및 베타-갈락토사이드(β-galactoside) 링커로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    여기에서, 상기 프로테아제 절단성 링커는 티올반응성 말레이미도카프로일 스페이서, 발린-시트룰린 디펩타이드 또는 p-아미노-벤질옥시카보닐 스페이서를 포함하는 것이고,
    상기 산 절단성 링커는 하이드라진 링커 또는 제4급 암모늄 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 링커는 일반식 Ⅱ의 구조를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [일반식 Ⅱ]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000148
    상기 식에서,
    물결표시는 Ab와 연결되는 부위, * 표시는 단백질 분해제와 연결되는 부위를 나타내며;
    G는 글루쿠론산 모이어티(glucuronic acid moiety) 또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000149
    이고, 상기 R3은 수소 또는 카복실 보호기이며, 상기 각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬 또는 C3-8 사이클로알킬이며;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- 또는 -PO2NR'-이고, 상기 C, S 또는 P는 직접적으로 페닐링(phenyl ring)에 결합하며, 상기 R' 및 R''는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20아릴인 화합물이고;
    Z는 독립적으로 C1-8 알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이며;
    n은 0 내지 3의 정수이고;
    L은 비분지형 링커 또는 분지형 링커이다.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 G는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000150
    이고, 상기 R3은 수소 또는 카복실 보호기이며, 상기 각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기인 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 R1 및 R2은 모두 수소이고;
    n은 0이며;
    상기 W는 -C(O)NR'-이고, 상기 C는 직접적으로 페닐링(phenyl ring)에 결합하며, 상기 R'는 각각 독립적으로 수소, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-8 알콕시, C1-8 알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-8 알킬아미노, C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20아릴이며, NR'는 L에 결합하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  11. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 티오에테르 결합에 의해 Ab와 공유 결합하고,
    상기 티오에테르 결합은 Ab의 시스테인의 황원자를 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  12. 제 1항에 있어서,
    상기 Ab는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 Ab의 C-말단에 포함하고,
    상기 티오에테르 결합은 상기 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프는 CYYX 서열이고, C가 시스테인이며, Y가 지방족 아미노산이고, X가 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌 및 루신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이며; 및
    상기 티오에테르 결합은 상기 아미노산 모티프의 시스테인의 황원자를 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  14. 제 12항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프는 CYYX 서열이고, Y가 알라닌, 이소루이신, 류신, 메티오닌 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이거나; 또는
    CVIM 또는 CVLL 서열인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  15. 제 12항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프에 선행하는 1 내지 20 개의 아미노산 중 적어도 하나가 글리신인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  16. 제 8항에 있어서,
    상기 Ab는 C-말단에 아미노산 서열 GGGGGGGCVIM을 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  17. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 옥심을 포함하는 3 내지 50 헤테로알킬렌이고,
    상기 옥심의 산소 원자는 W와 연결된 L의 측면에 있으며,
    옥심의 탄소 원자는 Ab에 연결된 L의 측면에 있거나; 또는
    상기 옥심의 탄소 원자는 W에 연결된 L의 측면에 있으며,
    옥심의 산소 원자는 Ab에 연결된 L의 측면에 있는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  18. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 옥심을 포함하고, 하나 이상의 이소프레닐 유닛은 옥심을 Ab에 공유 결합시키는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  19. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 일반식 VIII 또는 일반식 IX로 표시되는 연결 유닛을 더 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [일반식 VIII]
    -(CH2)r(V(CH2)p)q-
    [일반식 IX]
    -(CH2CH2X)w-
    상기 V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
    X는 -O-, C1-8 알킬렌 또는 -NR21-이며;
    R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 알킬-C6-20 아릴 또는 C1-6 알킬-C3-20 헤테로아릴이고;
    r은 0 내지 10의 정수이며;
    p는 0 내지 10의 정수이고;
    q는 1 내지 20의 정수이며; 및
    w는 1 내지 20의 정수이다.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 q는 1 내지 10의 정수이고;
    r 및 p는 각각 1 또는 2이며;
    V는 -O-인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  21. 제 19항에 있어서,
    상기 X는 -O-이고;
    w는 1 내지 10의 정수인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  22. 제 19항에 있어서,
    상기 L은
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000151
    또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000152
    로 표시되는 적어도 하나의 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  23. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 알키닐기와 아지드와의 반응, 또는 알데히드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 하이드록실아민과의 반응으로 형성되는 결합 유닛을 더 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  24. 제 8항에 있어서,
    상기 L은 하기 일반식 Ⅳa, Ⅳb, Ⅳc, Ⅳd 또는 Ⅳe로 표시되는 결합 유닛을 더 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [일반식 Ⅳa]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000153
    [일반식 Ⅳb]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000154
    [일반식 Ⅳc]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000155
    [일반식 Ⅳd]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000156
    [일반식 Ⅳe]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000157
    상기 식에서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 단일결합 또는 C1-30의 알킬렌이고;
    R11은 수소 또는 C1-10의 알킬이다.
  25. 제 24항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 단일결합; 또는 C11의 알킬렌; 또는 C12의 알킬렌인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  26. 제 8항에 있어서,
    상기 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 파네실 단백질 트랜스퍼라아제(FTase) 또는 게라닐게라닐 트랜스퍼라제(GGTase)인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  27. 제 1항에 있어서, 상기 Linker는 Ab에 공유 결합된 하나 이상의 분지형 링커를 포함하고,
    i) 각각의 분지형 링커는 제1 링커(PL)에 의해 Ab에 공유 결합된 분지형 유닛을 포함하고;
    ii) 각각의 분지형 링커는 제1 단백질 분해제가 제2 링커 (SL) 및 절단기(CG)에 의해 분지형 유닛에 공유 결합된 제1 분지(B1)를 포함하며; 및
    iii) 각각의 분지형 링커는 a) 제2 단백질 분해제가 제2 링커 (SL) 및 절단기 (CG)에 의해 분지형 유닛에 공유 결합 된 제2 분지 (B2); 또는 b) 폴리에틸렌 글리콜 모이어티(moiety)가 분지형 유닛에 공유 결합되어 있는 제2 분지를 포함하고,
    상기 각각의 절단기는 접합체로부터 단백질 분해제를 방출하기 위해 가수분해되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  28. 제 27항에 있어서,
    상기 링커는 질소 함유 1-100 원자 헤테로 알킬렌이고,
    상기 링커는 친수성 아미노산의 2 이상의 원자를 포함하며,
    상기 질소는 친수성 아미노산의 카르보닐과 펩타이드 결합을 형성하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  29. 제 27항에 있어서,
    상기 분지형 유닛은
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000158
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000159
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000160
    또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000161
    이고,
    상기 L2, L3, L4 는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 -CnH2n-이며, 상기 n은 1 내지 30의 정수이고,
    상기 G1, G2, G3은 독립적으로 직접 결합,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000162
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000163
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000164
    또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000165
    이며,
    상기 R30은 수소 또는 C1-30 알킬이고;
    상기 R40은 수소 또는 L5-COOR6이며;
    상기 L5는 직접 결합 또는 -Cn'H2n'-이고, 여기에서 n'은 1 내지 10의 정수이고, R6는 수소 또는 C1-30 알킬인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  30. 제 27항에 있어서,
    상기 절단 그룹은 표적 세포 내에서 절단가능하거나; 또는 하나 이상의 활성제를 방출시킬 수 있는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  31. 제 27항에 있어서,
    상기 접합체는 Ab를 포함하고;
    Ab에 공유 결합된 1, 2, 3 또는 4개 이상의 분지형 링커를 포함하며;
    분지형 링커가 1개 또는 2개 이상의 단백질 분해제를 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  32. 제 1항에 있어서,
    상기 단백질 분해제는 표적 단백질 분해, 또는 표적 단백질의 조절을 유도하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  33. 제 27항에 있어서,
    상기 단백질 분해제는 이종이작용성(heterobifunctional)을 가지지 않는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  34. 제 1항에 있어서,
    상기 단백질 분해제는 일가 분해제(monovalent degrader) 또는 분자 접착제 분해제(molecular glue degrader)인 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  35. 제 34항에 있어서,
    상기 일가 분해제는 표적 단백질에만 결합하여 표적 단백질 분해를 유도하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  36. 제 34항에 있어서,
    상기 분자 접착제 분해제는 E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase) 및 표적 단백질에 결합하여 표적 단백질 분해를 유도하거나;
    또는 E3 유비퀴틴 연결효소(E3 ubiquitin ligase) 또는 표적 단백질에 결합하여 표적 단백질 분해를 유도하며,
    여기서 표적 단백질은 E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질(native substrate) 또는 비-고유적 기질(non-native substrate)인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  37. 제 36항에 있어서,
    상기 E3 유비퀴틴 연결효소는 VHL(von Hippel-Lindau), cereblon, XIAP, XIAP/cIAP, E3A, MDM2. APC(Anaphase-promoting complex), APC/cdc20, APC/cdh1, CRL(cullin ring ubiquitin ligase), UBR5(EDD1), beta-TrCP, SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING, LNXp80, LNX1, CBX4, CBL, CBLL1, C6orf157, CHFR, DTL, E6-AP, HACE1, HECTD1, HECTD2, HECTD3, HECW1, HECW2, HERC1, HERC2, HERC3, HERC4, HERC5, HUWE1, HYD, ITCH, mahogunin, MARCH-I, MARCH-II, MARCH-III, MARCH-IV, MARCH-VI, MARCH-VII, MARCH-VIII, MARCH-X, MEKK1, MIB1, MIB2, MycBP2, NEDD4, NEDD4L, PELI1, Pirh2, PJA1, PJA2, PPIL2, PRPF19, PIAS1, PIAS2, PIAS3, PIAS4, RANBP2, RFFL, RFWD2, Rictor, RNF4, RNF5, RNF8, RNF19, RNF190, RNF20, RNF34, RNF40, RNF125, RNF128, RNF138, RNF168, RBX1, SMURF1, SMURF2, STUB1, TOPORS, TRIP12, UBE3A, UBE3B, UBE3C, UBE4A, UBE4B, UBOX5, UBR5, WWP1, WWP2, Parkin, A20/TNFAIP3, AMFR/gp78, ARA54, beta-TrCP1/BTRC, SCF/beta-TrCP, BRCA1, CHIP, CHIP/STUB1, E6;E6AP/UBE3A, F-box protein 15/FBXO15, FBXW7/Cdc4, SCF/FBW7, GRAIL/RNF128, HOIP/RNF31, cIAP-1/HIAP-2, cIAP-2/HIAP-1, cIAP(pan), ITCH/AIP4, KAP1, MARCH8, Mind Bomb 1/MIB1, Mind Bomb 2/MIB2, MuRF1/TRIM63, NDFIP1, NleL, Parkin, RNF2, RNF4, RNF8, RNF168, RNF43, SART1, Skp2, SCF/Skp2, SHPRH, SIAH1, SIAH2, SMURF1, SMURF2, TOPORS, TRAF-1, TRAF-2, TRAF-3, TRAF-4, TRAF-5, TRAF-6, TRAF-7, TRIM5, TRIM21, TRIM32, TRIM63, UBE3B, UBE3C, UBR1, UBR2, UHRF2, WWP1, WWP2, ZNRF1 및 ZNRF3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  38. 제 36항에 있어서,
    상기 E3 유비퀴틴 연결효소는 cereblon인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  39. 제 36항에 있어서,
    상기 E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 NKX3.1, β-Catenin, aiolos, Akt1, Aurora A, B7-2, Bim, Caspase-3, Caspase-8, Caspase-10, CD147, Cdc20, Cdc25A, CDH1, CHK1, CHK2, c-Jun, CK1-α, Claspin, C-Myc, CRY2, Cyclin A, Cyclin B, Cyclin E, CDK12/Cyclin K, Delta, Jagged, Dlg, DR4, DVL1, ELF, ErbB4, Erk, Fbxo45, Foxo1, Foxp3, gp190, GSPT1, GSPT2, H2A,H2AX, HIF-1α, HIF-2α, HIPK2, Histone H2A, Histone H2A.X, Histone H2B, HSF1, HSP70/90, ikaros, IKZF1/3, IL-1β, IL-6, iNOS, IRAK, IRS1 IBα, IκBα, JAMP, KAI1, KLFs, LRRK2, Mad2, Mcl-1, MDM2, MED13, MEDL, MEIS2, MHC class I, MHC class II, MKK4, MTA1, MyBP-C, MyLC1/2, NEMO, NF-κB, N-Myc, Nrf2, NOTCH, NUMB, p21, p27, p53, p73, P-gp, paxillin, PCNA, PCNP, PHD1/3, PLK1, Rbm39, Rbm23, RIP2, RhoA, RNF8, Runx1, SALL4, Securin, Skp2, Skp2-CKS1, SGK1, SMAC, Smad2, Smads, SOD1 및 이의 변이체, TCF/LEF, TNF-α, TopBP1, TP53, TRAF2, TRB3, TRIP, Troponin I, TSC2, UCK1, Wee1, WNK1 및 WNK4로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  40. 제 36항에 있어서,
    상기 E3 유비퀴틴 연결효소의 고유적 기질 또는 비-고유적 기질은 GSPT1 또는 GSPT2인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  41. 제 34항에 있어서,
    상기 분자 접착제 분해제는 하기 일반식 X1로 표시되는 화합물인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [일반식 X1]
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000166
    상기 식에서,
    Dx1은 C(=O) 또는 CH2이고;
    Dx2는 O, N-C≡N 또는 NH이며;
    a1은 0, 1, 2 또는 3의 정수이고;
    a2는 0 또는 1의 정수이며;
    a3는 0, 1, 또는 2의 정수이고;
    A는 C, N, 또는 O이며;
    Rxa는 수소, 할로 또는 C1-6 알킬이며;
    Rxb 및 Rxc는 각각 독립적으로 수소, 할로, C1-10 알킬, CF3, 또는 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고;
    또는 Rxb 및 Rxc가 결합된 부분과 함께, C5-8 사이클로알킬, C4-8 헤테로사이클로알킬, C6-10 아릴, 또는 C6-10 헤테로아릴을 형성하며,
    여기에서,
    Rx10은 직접결합, -NH-, 또는 -O-이고,
    Rx11은 각각 독립적으로 직접결합, -C(O)-, C1-5 알킬렌, C2-5 알케닐렌, C6-10 아릴렌, C6-10 헤테로아릴렌, C3-8 사이클로알킬렌, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬렌으로 구성된 군으로부터 선택되며,
    Rx12는 OH, NH2, NH-Rx12', C6-10 아릴, C6-10 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬이고,
    여기에서, Rx12'는 C1-5 알킬, C2-5 알케닐, C6-10 아릴, C6-10 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬, 또는 C3-8 헤테로사이클로알킬이며;
    a는 1 내지 5의 정수이고,
    Rxb 또는 Rxc 중 어느 하나가 1가 부분을 형성하여 Linker와 결합가능하고,
    단, a2가 0인 경우 NH가 Linker와 직접 결합한다.
  42. 제 41항에 있어서,
    상기 Dx1은 CH2이고; Dx2는 O인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  43. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxa는 수소 또는 할로이고; A는 C, 또는 N인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  44. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 C1-10 알킬인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  45. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고,
    a는 1 내지 3의 정수인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  46. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고,
    Rx10 및 Rx11은 직접결합인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  47. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고,
    상기 Rx11는 각각 독립적으로 직접결합, -C(O)-, C1-5 알킬렌, 또는 C2-5 알케닐렌으로 구성된 군으로부터 선택되며,
    a는 1 내지 3의 정수인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  48. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc 중 어느 하나 이상은 Rx10-(Rx11)a-Rx12이고,
    상기 Rx12는 NH2이거나; 하나 이상의 N 원자를 포함하는 C6-10 헤테로아릴 또는 하나 이상의 N 원자를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알킬인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  49. 제 41항에 있어서,
    상기 Rxb 및 Rxc는 Rxb 및 Rxc가 결합된 부분과 함께, C4-8 헤테로사이클로알킬 또는 C6-10 헤테로아릴을 형성하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  50. 제 41항에 있어서, 상기 분자 접착제 분해제는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000167
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000168
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000169
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000170
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000171
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000172
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000173
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000174
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000175
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000176
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000177
    또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000178
    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  51. 제 1항에 있어서,
    상기 [Linker - (B)m]는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000179
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000180
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000181
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000182
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000183
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000184
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000185
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000186
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000187
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000188
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000189
    ,
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000190
    ,
    또는
    Figure PCTKR2022005438-appb-img-000191
    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  52. 제 1항에 따른 접합체를 유효성분으로 함유하는, 과증식, 암 또는 혈관신생질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  53. 제 52항에 있어서, 추가적으로 약학적으로 유효한 양의 화학 치료제(chemotherapeutic agent)를 포함하는 것인 약학적 조성물.
  54. 제 52항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 소세포성 폐암, 위장관암, 대장암, 장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종 및 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인 약학적 조성물.
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