KR20240027018A - 비스-벤즈이미다졸 sting 효능제 면역접합체 및 이의 용도 - Google Patents

비스-벤즈이미다졸 sting 효능제 면역접합체 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하나 이상의 STING 효능제 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 화학식 I의 면역접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 STING 효능제-링커 중간 화합물을 제공한다. 이러한 중간체 조성물은 링커 또는 연결 모이어티를 통한 면역접합체의 형성을 위한 적합한 기질이다. 본 발명은 면역접합체로 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

Description

비스-벤즈이미다졸 STING 효능제 면역접합체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 정규출원은 2021년 6월 25일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/215,100호에 대한 우선권의 이득을 주장하며, 이 기초출원은 전문이 참조에 의해 원용된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 비스-벤즈이미다졸 분자에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
막관통 단백질 173(TMEM173) 및 MPYS/MITA/ERIS으로도 알려진 STING(Stimulator of Interferon Genes: 인터페론 유전자 자극제)은 STING1 유전자에 의해 인간에서 암호화된 단백질이다. STING은 특히 면역 세포, 폐 및 난소에서 광범위하게 발현된다. STING은, 세포가 바이러스, 마이코박테리아 및 세포내 기생충과 같은 세포내 병원체에 감염되면 I형 인터페론 생산을 유도함으로써 선천면역에 역할을 한다. STING에 의해 매개되는 I형 인터페론은 자가분비 신호전달에 의해 이를 분비하는 동일한 세포와 측분비 신호전달에 의해 인근 세포에 결합함으로써 감염된 세포와 주변 세포를 국소 감염으로부터 보호한다. STING은 직접적인 세포질 DNA 센서(CDS)와 다양한 분자 메커니즘을 통한 I형 인터페론 신호전달에서의 어댑터 단백질의 둘 다로서 작용한다. STING은 세포내 병원체에 대한 항바이러스 반응 및 선천적 면역 반응을 담당하는 TBK1을 통해 하류 전사 인자 STAT6 및 IRF3을 활성화시키는 것으로 나타났다. STING에 결합하고 효능제(agonist)로서 작용하는 화합물은 인간 PBMC와의 인큐베이션 시에 1형 인터페론을 포함하는 전염증성 사이토카인의 분비를 유도하는 것으로 나타났다(WO 2017/175147). STING 조절제는 다양한 장애, 예를 들어, 알레르기 질환, 신경변성 질환, 전암성 증후군 및 암의 치료에 유용할 수 있으며, 또한 면역원성 조성물 또는 백신 보조제(vaccine adjuvant)에도 유용할 수 있다.
접근하기 어려운 종양에 도달하고/하거나 암 환자 및 기타 대상체에 대한 치료 옵션을 확장하기 위해서는 항체 및 면역 보조제의 전달을 위한 새로운 조성물 및 방법이 필요하다.
본 발명은 일반적으로 링커에 의해 하나 이상의 STING 효능제 모이어티에 공유 부착된 항체를 포함하고 하기 화학식 I을 갖는 면역접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
식 중,
Ab는 항체이고;
p는 1 내지 8의 정수이고;
D는 화학식:
을 갖는 STING 효능제 모이어티이고, 여기서 치환체는 본 명세서에 정의되어 있다.
본 발명은 또한 질병, 특히 암의 치료에서 이러한 면역접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양상은 비스-벤즈이미다졸-링커 화합물이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 하나 이상의 비스-벤즈이미다졸 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는, 치료학적 유효량의, 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 양상은, 암을 치료하기 위한 하나 이상의 비스-벤즈이미다졸 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 양상은 하나 이상의 비스-벤즈이미다졸 모이어티와 항체의 접합에 의해 면역접합체를 제조하는 방법이다.
이제 본 발명의 소정의 실시형태를 상세히 참조할 것이며, 그 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 있다. 본 발명은 열거된 실시형태와 관련하여 설명될 것이지만, 본 발명을 이러한 실시형태로 제한하도록 의도되지 않음이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 동등물을 포함하도록 의도된다.
당업자라면 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 또는 등가인 많은 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 발명은 기술된 방법 및 물질로 결코 제한되지 않는다.
정의
용어 "면역접합체"는 링커를 통해 보조제 모이어티에 공유 결합된 항체 작제물을 지칭한다. 용어 "보조제"(adjuvant)는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. 어구 "보조제 모이어티"는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 항체 작제물에 결합되는 동안 또는 면역접합체를 대상체에게 투여한 후 항체 작제물로부터의 절단(예를 들어, 효소적 절단) 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
용어 "면역자극제" 및 "면역자극성"은 동등하게 사용되고, 링커의 생체내 절단 후의 면역자극성 모이어티 또는 면역자극성 화합물에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 모이어티, 물질 또는 보조제를 지칭한다. 용어 "보조제 모이어티" 또는 "면역자극성 모이어티"는, 대안적으로, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 엘라스타제-기질인 펩타이드 링커를 통해서 항체 작제물과 같은 세포-결합제에 공유 결합되는 "페이로드"로 대안적으로 지칭되는 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 대상체에 면역접합체의 투여 후 항체 작제물로부터 절단(예를 들어, 효소 절단) 후 또는 항체 작제물에 결합되는 동안 면역 반응을 유발할 수 있다. 면역접합체는 표적 항원이 결합되는 동안 활성 보조제 모이어티의 표적화된 전달을 허용한다.
용어 "패턴-인식 수용체"(PRR)는 병원체에 대해서 전형적인 분자를 검출하고 천연 면역계의 기능을 조절하는 생식세포계열-암호화된 센서를 지칭한다(Mahla, RS et al (2013) Frontiers in Immunology 4:248; Kumar, H et al (2011) Intl. Rev. of Immun. 30:16-34; Schroder K et al (2010) Cell 140(6):821-832). PRR은 미생물 병원체와 연관된 병원체-관련 분자 패턴(PAMP) 및 세포 손상 또는 사멸 동안 방출된 숙주 세포의 성분과 연관된 손상-관련 분자 패턴(DAMP)을 식별하기 위하여, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구 및 상피 세포와 같은 천연 면역계의 세포에 의해 주로 발현되는 단백질이다. PRR은 또한 면역계의 다른 부분 전에, 특히 적응 면역 전에 진화되었기 때문에 원시 패턴 인식 수용체라고도 불린다. PRR은 또한 항원-특이적 적응 면역 반응의 개시와 염증성 사이토카인의 방출을 중재한다. PRR은 톨-유사 수용체(TLR), STING-유사 수용체, RIG-I-유사 수용체(RLR), NOD-유사 수용체(NLR), C형 렉틴-유사 수용체(CLR) 및 DNA 센서를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"보조제"는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. 어구 "보조제 모이어티"는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 항체 작제물에 결합되는 동안 또는 면역접합체를 대상체에게 투여한 후 항체 작제물로부터의 절단(예를 들어, 효소적 절단) 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다클론성 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포괄한다. "항체 단편" 및 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 이의 모든 문법적 변형어는 온전한 항체의 항원 결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 온전한 항체의 일부분으로서 정의되며, 여기서 그 부분에는 온전한 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인(즉, 항체 아이소형에 따라서, CH2, CH3 및 CH4)이 없다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 및 Fv 단편; 다이아바디; 제한 없이 (1) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (2) 연관된 중쇄 모이어티 없이, 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 함유하는, 단지 하나의 경쇄 가변 도메인 또는 이의 단편을 함유하는 단쇄 폴리펩타이드; (3) 연관된 경쇄 모이어티 없이, 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 함유하는, 단지 하나의 중쇄 가변 영역 또는 이의 단편을 함유하는 단쇄 폴리펩타이드; (4) 비-인간 종 또는 다른 특이적 단일-도메인 결합 모듈로부터 단일 Ig 도메인을 포함하는 나노바디; 및 (5) 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 또는 다가 구조를 포함하는, 인접한 아미노산 잔기의 하나의 비의도된 서열로 이루어진 1차 구조를 갖는 폴리펩타이드(본 명세서에서 "단쇄 항체 단편" 또는 "단쇄 폴리펩타이드"로 지칭됨)인 임의의 항체 단편을 포함한다. 하나 이상의 중쇄를 포함하는 항체 단편에서, 중쇄(들)는 온전한 항체의 비-Fc 영역에서 발견되는 임의의 불변 도메인 서열(예를 들어, IgG 아이소형에서의 CH1)을 함유할 수 있고/있거나, 온전한 항체에서 발견되는 임의의 힌지 영역 서열을 함유할 수 있고/있거나, 중쇄(들)의 힌지 영역 서열 또는 불변 도메인 서열에 융합되거나 위치된 류신 지퍼 서열(leucine zipper sequence)을 함유할 수 있다.
"항체"는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 항원 결합 영역(상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)을 포함)을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 용어 "항체"는 구체적으로 단클론성 항체(전장 단클론성 항체 포함), 다클론성 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편을 포함한다. 예시적인 면역글로불린(항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 이황화 결합에 의해 연결된 하나의 "경쇄"(약 25kDa)와 하나의 "중쇄"(약 50kDa 내지 70kDa)을 갖는 2개의 동일한 폴리펩타이드 사슬의 쌍으로 구성된다. 각각의 사슬은 면역글로불린 도메인으로 지칭되는 구조 도메인으로 구성된다. 이들 도메인은 크기 및 기능에 따라 다양한 범주, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄(각각 VL 및 VH) 상의 가변 도메인 또는 영역 및 경쇄 및 중쇄(각각 CL 및 CH) 상의 불변 도메인 또는 영역으로 분류된다. 각 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식, 즉, 항원 결합 도메인을 담당하는 파라토프라고 하는 약 100개 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 차례로 면역글로불린 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다. IgG 항체는 4개의 펩타이드 사슬로 구성된 약 150kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50kDa의 동일한 클래스 γ 중쇄 2개 및 약 25kDa의 동일한 경쇄 2개를 포함하므로, 사량체 4차 구조이다. 두 개의 중쇄는 서로 이황화 결합에 의해 각 경쇄에 연결되어 있다. 생성된 사량체는 두 개의 동일한 반쪽을 가지며, 이는 함께 Y-형 모양을 형성한다. 분지(fork)의 각 말단은 동일한 항원 결합 도메인을 포함한다. 인간에는 4개의 IgG 하위클래스(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)가 있으며, 혈청에서 풍부한 순서대로 명명된다(즉, IgG1이 가장 풍부함). 전형적으로, 항체의 항원 결합 도메인은 암세포에 대한 결합의 특이성 및 친화성에 가장 중요할 것이다.
특정 항원을 표적으로 하는 항체는 특정 항원을 표적으로 하는 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖는 이중특이적 또는 다중특이적 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적화된 단클론성 항체는 종양 세포를 표적으로 하는 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖는 이중특이적 항체이다. 이러한 항원은 메소텔린, 전립선 특이적 막 항원(prostate specific membrane antigen: PSMA), HER2, TROP2, CEA, EGFR, 5T4, 넥틴4, CD19, CD20, CD22, CD30, CD70, B7H3, B7H4(08E로도 알려져 있음), 단백질 타이로신 키나제 7(protein tyrosine kinase 7: PTK7), 글리피칸-3, RG1, 퓨코실-GM1, CTLA-4 및 CD44를 포함하지만 이에 제한되지 않는다(WO 2017/196598).
"항체 작제물"은 (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 또는 융합 단백질을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 결합제는 항체의 적어도 항원-결합 영역을 단독으로 또는 항원-결합 작제물을 구성하는 다른 성분과 함께 포함하는 작제물인 항원-결합 항체 "단편"이다. 많은 상이한 유형의 항체 "단편"이, 예를 들어, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 이황화 브리지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편, (iii) 항체의 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (iv) 온화한 환원 조건을 사용하여 F(ab')2 단편의 이황화 브리지를 파괴하여 생성되는 Fab' 단편, (v) 이황화-안정화된 Fv 단편(disulfide-stabilized Fv fragment: dsFv) 및 (vi) 2개의 도메인이 단일 폴리펩타이드 사슬로 합성될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 두 도메인(즉, VL 및 VH)으로 구성된 1가 분자인 단일 사슬 Fv(scFv)를 포함하여 당업계에 공지되어 있다.
항체 또는 항체 단편은 더 큰 작제물의 일부, 예를 들어, 항체 단편의 추가적인 영역에 대한 접합체 또는 융합 작제물일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 항체 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 영역에 융합될 수 있다. 다른 실시형태에서, 항체 단편(예를 들어, Fab 또는 scFv)은, 예를 들어, 막관통 도메인(선택적으로 개재 링커 또는 "줄기(stalk)"(예를 들어, 힌지 영역)와 함께) 및 선택적 세포내 신호전달 도메인에 융합함으로써 키메라 항원 수용체 또는 키메라 T-세포 수용체의 일부일 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은, TROP2에 결합하는 T-세포 수용체 유사 작제물을 제공하기 위해, T-세포 수용체의 감마 및/또는 델타 사슬에 융합될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 항체 단편은 CD1 또는 CD3 결합 도메인 및 링커를 포함하는 이중특이적 T-세포 관여자(bispecific T-cell engager: BiTE)의 일부이다.
"에피토프"는 항원 결합 도메인이 결합하는(즉, 항원 결합 도메인의 파라토프에) 항원의 임의의 항원 결정기 또는 에피토프 결정기를 의미한다. 항원 결정기는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹으로 구성되며, 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성뿐만 아니라 특정 전하 특성을 갖는다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 지칭한다. Fc 수용체에는 다음의 세 가지 주요 클래스가 있다: (1) IgG에 결합하는 FcγR, (2) IgA에 결합하는 FcαR 및 (3) IgE에 결합하는 FcεR. FcγR 패밀리는 FcγI(CD64), FcγRIIA(CD32A), FcγRIIB(CD32B), FcγRIIIA(CD16A) 및 FcγRIIIB(CD16B)와 같은 여러 구성원을 포함한다. Fcγ 수용체는 IgG에 대한 친화성이 다르며, 또한 IgG 하위클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)에 대한 친화성도 다르다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "면역 관문 저해제"는 면역 관문 분자의 활성을 저해하는 임의의 조절제를 지칭한다. 면역 관문 저해제는 면역 관문 분자 결합 단백질, 소분자 저해제, 항체(면역 관문 단백질을 표적으로 하는 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖는 이중특이적 및 다중특이적 항체, 예를 들어, 면역 관문 단백질만을 표적으로 하지 않는 이중특이적 또는 다중특이적 항체뿐만 아니라 저해 표적의 차단, 억제 세포의 고갈 및/또는 효과기 세포의 활성화를 초래하는 이중 면역조절제(2개의 면역조절 표적을 동시에 표적화함); 종양-표적화된 면역조절제(종양 항원 및 CD40 또는 4-1BB와 같은 공동 자극 분자를 표적화함으로써 종양-침윤 면역 세포에 강력한 공동자극을 지시함); NK-세포 재지시제(redirector)(종양 항원 및 CD16A를 표적화함으로써 NK 세포를 악성 세포에 재지시함); 또는 T-세포 재지시제(종양 항원 및 CD3을 표적화함으로써 T 세포를 악성 세포에 재지시함)인 항체를 포함), 항체-파생물(Fc 융합체, Fab 단편 및 scFv 포함), 항체-약물 접합체, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 압타머, 펩타이드 및 펩타이드 모방체를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 언급된 핵산 또는 아미노산 서열 "동일성"은 관심 핵산 또는 아미노산 서열을 참조 핵산 또는 아미노산 서열과 비교함으로써 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트는 최적으로 정렬된 관심 서열과 참조 서열 사이의 것과 동일한(same)(즉, 동일한(identical)) 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 수를 가장 긴 서열의 길이(즉, 관심 서열 또는 참조 서열의 길이 중 더 긴 것의 길이)로 나눈 값이다. 서열의 정렬 및 동일성 퍼센트의 계산은 이용 가능한 소프트웨어 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 프로그램의 예는 CLUSTAL-W, T-Coffee 및 ALIGN(핵산 및 아미노산 서열 정렬용), BLAST 프로그램(예를 들어, BLAST 2.1, BL2SEQ, BLASTp, BLASTn 등) 및 FASTA 프로그램(예를 들어, FASTA3x, FASTM 및 SSEARCH)(서열 정렬 및 서열 유사성 검색용)을 포함한다. 서열 정렬 알고리즘은 또한, 예를 들어, 문헌[Altschul et al., J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin et al., eds., Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997) 및 Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997))]에 개시되어 있다. 서열의 동일성 퍼센트(%)는, 예를 들어, 100×[(동일한 위치)/min(TGA, TGB)]로 계산될 수 있으며, 여기서 TGA 및 TGB는 TGA 및 TGB를 최소화하는 정렬에서 펩타이드 서열 A 및 B에서의 잔기의 수와 내부 갭 위치의 합이다. 예를 들어, 문헌[Russell et al., J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994)]을 참조한다.
결합제는 함께 항원 결합 부위를 형성하는 Ig 중쇄 및 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 각각의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 프레임워크 영역에 의해 연결된 3개의 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함하는 폴리펩타이드이다. 결합제는 Ig 중쇄 및 경쇄를 포함하는 당업계에 공지된 임의의 다양한 유형의 결합제일 수 있다. 예를 들어, 결합제는 항체, 항원-결합 항체 "단편", 또는 T-세포 수용체일 수 있다.
"바이오시밀러(biosimilar)"는, 예를 들어, 사시투주맙 고비테칸(sacituzumab govitecan)(TRODELVY®, Immunomedics, IMMU-132)으로 이전에 승인된 Trop2-표적화 항체 작제물인 사시투주맙과 유사한 활성 특성을 갖는 항체 작제물을 지칭한다.
"바이오베터(biobetter)"는, 사시투주맙 또는 사시투주맙 고비테칸과 같은 이전에 승인된 항체 작제물의 개선물인 승인된 항체 작제물을 지칭한다. 바이오베터는 이전에 승인된 항체 작제물에 비해서 하나 이상의 변형(예를 들어, 변경된 글리칸 프로파일 또는 고유한 에피토프)을 가질 수 있다.
"아미노산"은 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질에 혼입될 수 있는 임의의 단량체 단위를 지칭한다. 아미노산은 자연 발생적 α-아미노산 및 이의 입체이성질체뿐만 아니라 비천연(비-자연 발생적) 아미노산 및 이의 입체이성질체를 포함한다. 주어진 아미노산의 "입체이성질체"는 동일한 분자식 및 분자내 결합을 갖지만 결합 및 원자의 상이한 3차원 배열을 갖는 이성질체(예를 들어, L-아미노산 및 상응하는 D-아미노산)를 지칭한다. 아미노산은 글리코실화(예를 들어, N-연결된 글리칸, O-연결된 글리칸, 포스포글리칸, C-연결된 글리칸 또는 글리피칸화(glypication) 또는 탈글리코실화될 수 있다. 아미노산은 일반적으로 공지된 세 글자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에 의해 권장되는 한 글자 기호로 본 명세서에서 언급될 수 있다.
자연 발생적 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화되는 것들뿐만 아니라 나중에 변형되는 것들, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 자연 발생적 α-아미노산은 제한 없이 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 페닐알라닌(Phe), 글리신(Gly), 히스티딘(His), 아이소류신(Ile), 아르기닌(Arg), 라이신(Lys), 류신(Leu), 메티오닌(Met), 아스파라긴(Asn), 프롤린(Pro), 글루타민(Gln), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 발린(Val), 트립토판(Trp), 타이로신(Tyr) 및 이들의 조합을 포함한다. 자연 발생적 α-아미노산의 입체이성질체는 제한 없이 D-알라닌(D-Ala), D-시스테인(D-Cys), D-아스파르트산(D-Asp), D-글루탐산(D-Glu), D-페닐알라닌(D-Phe), D-히스티딘(D-His), D-아이소류신(D-Ile), D-아르기닌(D-Arg), D-라이신(D-Lys), D-류신(D-Leu), D-메티오닌(D-Met), D-아스파라긴(D-Asn), D-프롤린(D-Pro), D-글루타민(D-Gln), D-세린(D-Ser), D-트레오닌(D-Thr), D-발린(D-Val), D-트립토판(D-Trp), D-타이로신(D-Tyr) 및 이들의 조합을 포함한다.
자연 발생적 아미노산은 시트룰린(Cit)과 같은 번역 후 변형에 의해 단백질에서 형성되는 것들을 포함한다.
비천연(비-자연 발생적) 아미노산은 제한 없이 아미노산 유사체, 아미노산 모방체, 합성 아미노산, N-치환된 글리신 및 자연 발생적 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 L- 또는 D-배열의 N-메틸 아미노산을 포함한다. 예를 들어, "아미노산 유사체"는 자연 발생적 아미노산(즉, 수소에 결합된 탄소, 카복실기, 아미노기)과 동일한 기본 화학 구조를 갖지만 변형된 측쇄기 또는 변형된 펩타이드 백본을 갖는 비천연 아미노산, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄일 수 있다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반 화학 구조와는 구조가 다르지만 자연 발생적 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다.
"링커"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합시키는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체 작제물에 보조제 모이어티를 공유 결합시키는 역할을 할 수 있다.
"연결 모이어티"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합시키는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체에 보조제 모이어티를 공유 결합시키는 역할을 할 수 있다. 연결 모이어티를 단백질 및 기타 물질에 연결하는 데 유용한 결합은 아마이드, 아민, 에스터, 카바메이트, 우레아, 티오에터, 티오카바메이트, 티오카보네이트 및 티오우레아를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"2가"는 2개의 작용기를 연결하기 위한 2개의 부착 지점을 포함하는 화학적 모이어티를 지칭하고; 다가 연결 모이어티는 추가 작용기를 연결하기 위한 추가적인 부착 지점을 가질 수 있다. 2가 라디칼은 접미사 "다이일"로 표시될 수 있다. 예를 들어, 2가 연결 모이어티는 2가 폴리(에틸렌 글리콜), 2가 사이클로알킬, 2가 헤테로사이클로알킬, 2가 아릴 및 2가 헤테로아릴기와 같은 2가 중합체 모이어티를 포함한다. "2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴기"는 분자 또는 물질에서 2개의 모이어티를 공유적으로 연결하기 위한 2개의 부착 지점을 갖는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴기를 지칭한다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 나이트로, 사이아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
물결선("")은 명시된 화학적 모이어티의 부착 지점을 나타낸다. 명시된 화학적 모이어티에 2개의 물결선("")이 있는 경우, 화학적 모이어티는 양방향으로 사용될 수 있으며, 즉, 왼쪽에서 오른쪽으로 또는 오른쪽에서 왼쪽으로 읽을 수 있음이 이해될 것이다. 일부 실시형태에서, 2개의 물결선("")이 있는 명시된 모이어티는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때 사용되는 것으로 간주된다.
"알킬"은 표시된 탄소 원자의 수를 갖는 직선(선형) 또는 분지형의 포화된 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은, 예를 들어, 1에서 12까지의 임의의 수의 탄소를 포함할 수 있다. 알킬기의 예는 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, -CH2CH3), 1-프로필(n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필(i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸(n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필(i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸(s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필(t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸(n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸(-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸(-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸(-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸(-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸(-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸(-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-다이메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-다이메틸-2-부틸(-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 알킬기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환된 알킬기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 나이트로, 사이아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 치환된 알킬기는 알킬의 탄소 원자가 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실과 같은 스피로, 사이클로 알킬기를 형성하는 경우 같은자리(geminally) 치환될 수 있다.
용어 "알킬다이일"은 2가 알킬 라디칼을 지칭한다. 알킬다이일기의 예는 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), 프로필렌(-CH2CH2CH2-) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 알킬다이일기는 "알킬렌"기로도 지칭될 수 있다. 알킬다이일기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환된 알킬다이일기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 나이트로, 사이아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 치환된 알킬다이일킬기는 알킬의 탄소 원자가 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실과 같은 스피로, 사이클로 알킬기를 형성하는 경우 같은자리 치환될 수 있다.
"알켄일"은 표시된 탄소 원자의 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합, sp2를 갖는 직선(선형) 또는 분지형의 불포화된 지방족 라디칼을 지칭한다. 알켄일은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 알켄일기는 "시스" 및 "트랜스" 배향 또는 대안적으로, "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼이다. 예는 에틸렌일 또는 비닐(-CH=CH2), 알릴(-CH2CH=CH2), 부텐일, 펜텐일 및 이들의 이성질체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 알켄일기는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환된 알켄일"기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 나이트로, 사이아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알켄일렌" 또는 "알켄일다이일"은 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 예는 에틸렌일렌 또는 비닐렌(-CH=CH-), 알릴(-CH2CH=CH-) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
"알킨일"은 표시된 탄소 원자의 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합, sp를 갖는 직선(선형) 또는 분지형의 불포화된 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킨일은 2개에서 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 예를 들어, C2-C6 알킨일은 에틴일(-C≡CH), 프로핀일(프로파길, -CH2C≡CH), 부틴일, 펜틴일, 헥신일 및 이들의 이성질체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 알킨일기는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환된 알킨일"기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 나이트로, 사이아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알킨일렌" 또는 "알킨일다이일"은 2가 알킨일 라디칼을 지칭한다.
용어 "카보사이클", "카보사이클릴", "탄소고리형 고리" 및 "사이클로알킬"은 3개 내지 12개의 고리 원자 또는 표시된 원자의 수를 포함하는 포화 또는 부분적 불포화된, 단일고리형, 융합된 이중고리형, 스피로 또는 브리지된 다중고리형 고리 어셈블리를 지칭한다. 포화 단일고리형 탄소고리형 고리는, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 이중고리형 및 다중고리형 탄소고리형 고리는, 예를 들어, 노보난, [2.2.2] 바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 탄소고리형기는 또한 부분적 불포화될 수 있으며, 고리에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 갖는다. 부분적 불포화된 대표적인 탄소고리형기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사다이엔(1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타다이엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타다이엔(1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노보넨 및 노보나다이엔을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "사이클로알킬다이일"은 2가 사이클로알킬 라디칼을 지칭한다.
"아릴"은 모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자의 제거에 의해 파생된 6개 내지 20개의 탄소 원자(C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 아릴기는 이중고리형 또는 삼중고리형 기를 형성하기 위해 융합되거나 또는 바이아릴기를 형성하기 위해 결합에 의해 연결되는 단일고리형일 수 있다. 대표적인 아릴기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴기는 메틸렌 연결기를 갖는 벤질을 포함한다. 일부 아릴기는 6개 내지 12개의 고리 구성원, 예컨대, 페닐, 나프틸 또는 바이페닐을 갖는다. 다른 아릴기는 6개 내지 10개의 고리 구성원, 예컨대, 페닐 또는 나프틸을 갖는다.
용어 "아릴렌" 또는 "아릴다이일"은 모 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자의 제거에 의해 파생된 6개 내지 20개의 탄소 원자(C6-C20)의 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴다이일기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴다이일은 포화, 부분적 불포화된 고리 또는 방향족 탄소고리형 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 이중고리형 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴다이일기는 벤젠(페닐다이일), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인덴일렌, 인단일렌, 1,2-다이하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸 등으로부터 파생된 라디칼을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 아릴다이일기는 또한 "아릴렌"으로도 지칭되며, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴" 및 "헤테로고리형 고리"는 본 명세서에서 호환 가능하게 사용되고, 3개 내지 약 20개의 고리 원자의 포화 또는 부분적 불포화(즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 탄소고리형 라디칼을 지칭하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택되는 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자는 C이되, 하나 이상의 고리 원자는 아래 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3개 내지 7개의 고리 구성원(2개 내지 6개의 탄소 원자와 N, O, P 및 S로부터 선택되는 1개 내지 4개의 헤테로원자)을 갖는 모노사이클 또는 7개 내지 10개의 고리 구성원(4개 내지 9개의 탄소 원자와 N, O, P 및 S로부터 선택되는 1개 내지 6개의 헤테로원자)를 갖는 바이사이클, 예를 들어: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌[Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 Chapters 1, 3, 4, 6, 7 및 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 특히 Volumes 13, 14, 16, 19 및 28; 및 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기술되어 있다. "헤테로사이클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화, 부분적 불포화 고리 또는 방향족 탄소고리형 또는 헤테로고리형 고리와 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로고리형 고리의 예는 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라진일, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-다이옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]다이아제판-1-일, 피롤리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 다이하이드로퓨란일, 테트라하이드로티엔일, 테트라하이드로피란일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥산일, 피페라진일, 호모피페라진일, 아제티딘일, 옥세탄일, 티에탄일, 호모피페리딘일, 옥세판일, 티에판일, 옥사제핀일, 다이아제핀일, 티아제핀일, 2-피롤린일, 3-피롤린일, 인돌린일, 2H-피란일, 4H-피란일, 다이옥산일, 1,3-다이옥소란일, 피라졸린일, 다이티안일, 다이티오란일, 다이하이드로피란일, 다이하이드로티엔일, 다이하이드로퓨란일, 피라졸리딘일이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산일, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵탄일, 아자바이사이클로[2.2.2]헥산일, 3H-인돌일 퀴놀리진일 및 N-피리딜 우레아를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티도 또한 이 정의의 범위 내에 포함된다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티의 예는 아자스피로[2.5]옥탄일 및 아자스피로[2.4]헵탄일을 포함한다. 2개의 고리 원자가 옥소(=O) 모이어티로 치환된 헤테로고리형 기의 예는 피리미디논일 및 1,1-다이옥소-티오모폴린일이다. 본 명세서에서 헤테로사이클기는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 선택적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클릴다이일"은 3개 내지 약 20개의 고리 원자의 2가의 포화 또는 부분적 불포화(즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 탄소고리형 라디칼을 지칭하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택되는 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자는 C이되, 하나 이상의 고리 원자는 기재된 바와 같은 하나 이상의 치환기로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 5-원 및 6-원 헤테로사이클릴다이일의 예는 모폴린일다이일, 피페리딘일다이일, 피페라진일다이일, 피롤리딘일다이일, 다이옥산일다이일, 티오모폴린일다이일 및 S-다이옥소티오모폴린일다이일을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 5-원, 6-원 또는 7-원 고리의 1가 방향족 라디칼을 지칭하며, 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5개 내지 20개의 원자의 융합된 고리 시스템(이 중 적어도 하나는 방향족임)을 포함한다. 헤테로아릴기의 예는 피리딘일(예를 들어, 2-하이드록시피리딘일 포함), 이미다졸일, 이미다조피리딘일, 피리미딘일(예를 들어, 4-하이드록시피리미딘일 포함), 피라졸일, 트라이아졸일, 피라진일, 테트라졸일, 퓨릴, 티엔일, 아이소옥사졸일, 티아졸일, 옥사다이아졸일, 옥사졸일, 아이소티아졸일, 피롤일, 퀴놀린일, 아이소퀴놀린일, 테트라하이드로아이소퀴놀린일, 인돌일, 벤즈이미다졸일, 벤조퓨란일, 신놀린일, 인다졸일, 인돌리진일, 프탈라진일, 피리다진일, 트라이아진일, 아이소인돌일, 프테리딘일, 퓨린일, 옥사다이아졸일, 티아다이아졸일, 티아다이아졸일, 퓨라잔일, 벤조퓨라잔일, 벤조티오페닐, 벤조티아졸일, 벤족사졸일, 퀴나졸린일, 퀴녹살린일, 나프티리딘일 및 퓨로피리딘일이다. 헤테로아릴기는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 선택적으로 치환된다.
용어 "헤테로아릴다이일"은 5-원, 6-원 또는 7-원 고리의 2가 방향족 라디칼을 지칭하며, 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5개 내지 20개의 원자의 융합된 고리 시스템(이 중 적어도 하나는 방향족임)을 포함한다. 5-원 및 6-원 헤테로아릴다이일의 예는 피리딜다이일, 이미다졸일다이일, 피리미딘일다이일, 피라졸일다이일, 트라이아졸일다이일, 피라진일다이일, 테트라졸일다이일, 퓨릴다이일, 티엔일다이일, 아이소옥사졸일다이일다이일, 티아졸일다이일, 옥사다이아졸일다이일, 옥사졸일다이일, 아이소티아졸일다이일 및 피롤일다이일을 포함한다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴기는 가능한 경우 탄소(탄소-연결된) 또는 질소(질소-연결된) 결합될 수 있다. 예로서 그리고 제한 없이, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 2번, 3번, 4번, 5번 또는 6번 위치, 피리다진의 3번, 4번, 5번 또는 6번 위치, 피리미딘의 2번, 4번, 5번 또는 6번 위치, 피라진의 2번, 3번, 5번 또는 6번 위치, 퓨란, 테트라하이드로퓨란, 티오퓨란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 2번, 3번, 4번 또는 5번 위치, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 2번, 4번 또는 5번 위치, 아이소옥사졸, 피라졸 또는 아이소티아졸의 3번, 4번 또는 5번 위치, 아지리딘의 2번 또는 3번 위치, 아제티딘의 2번, 3번 또는 4번 위치, 퀴놀린의 2번, 3번, 4번, 5번, 6번, 7번 또는 8번 위치 또는 아이소퀴놀린의 1번, 3번, 4번, 5번, 6번, 7번 또는 8번 위치에 결합된다.
예로서 그리고 제한 없이, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 1번 위치, 아이소인돌 또는 아이소인돌린의 2번 위치, 모폴린의 4번 위치 및 카바졸 또는 β-카볼린의 9번 위치에 결합된다.
용어 "할로" 및 "할로겐"은 그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 플루오린, 클로린, 브로민 또는 아이오딘 원자를 지칭한다.
용어 "카보닐"은 그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 C(=O) 또는 -C(=O)-를 지칭하며, 즉, 탄소 원자는 산소에 이중-결합되고 카보닐을 갖는 모이어티에서 2개의 다른 기에 결합된다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "4차 암모늄염" 알킬 치환기(예를 들어, C1-C4 알킬, 예컨대, 메틸, 에틸, 프로필 또는 부틸)로 4차화된 3차 아민을 지칭한다.
용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 감퇴(abatement)와 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 포함하여 손상, 병리, 병태(예를 들어, 암) 또는 증상(예를 들어, 인지 장애)의 치료 또는 개선; 관해; 증상의 감소, 또는 손상, 병리 또는 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 만드는 것; 증상 진행 속도의 감소; 증상 또는 병태의 빈도 또는 기간 감소; 또는, 일부 상황에서, 증상의 발병을 예방하는 것의 임의의 성공의 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은, 예를 들어, 신체 검사의 결과를 포함하여 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 기반으로 할 수 있다.
용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 세포가 세포 증식에 대한 제어의 현저한 상실을 특징으로 하는 비정상적인 성장 표현형을 나타내는 자율적이고, 조절되지 않은 성장을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 본 발명의 맥락에서 검출, 분석 및/또는 치료를 위한 관심 세포는 암세포(예를 들어, 암이 있는 개체로부터의 암세포), 악성 암세포, 전이발생 전(pre-metastatic) 암세포, 전이성 암세포 및 비-전이성 암세포를 포함한다. 사실상 모든 조직의 암이 알려져 있다. 어구 "암 부담(cancer burden)"은 대상체 내 암세포의 양 또는 암 부피를 지칭한다. 따라서 암 부담을 감소시키는 것은 대상체 내 암세포의 수 또는 암세포 부피를 감소시키는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "암세포"는 암세포(예를 들어, 개체가 치료될 수 있는 임의의 암으로부터 유래된 것, 예를 들어, 암에 걸린 개체로부터 단리된 것)이거나 또는 암세포로부터 유래되는 임의의 세포, 예를 들어, 암세포의 클론을 지칭한다. 예를 들어, 암세포는 확립된 암세포주로부터 유래될 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 일차 세포일 수 있으며, 암에 걸린 개체로부터 단리된 일차 세포로부터의 자손 세포 등일 수 있다. 일부 실시형태에서, 용어는 또한 암세포의 일부, 예컨대, 암세포의 세포내 부분, 세포막 부분 또는 세포 용해물을 지칭할 수 있다. 암종, 육종, 교아세포종, 흑색종, 림프종 및 골수종과 같은 고형 종양 및 백혈병과 같은 순환성 암을 포함하여 많은 유형의 암이 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "암"은 최소 잔존 질환(minimal residual disease)을 포함하며 원발성 및 전이성 종양을 모두 포함하는 고형 종양 암(예를 들어, 피부, 폐, 전립선, 유방, 위, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 간, 교아세포종, 수아세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 및 신경내분비) 및 액상 암(예를 들어, 혈액암); 암종; 연조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 뇌암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 임의의 형태의 암을 포함한다.
암의 "병리"는 환자의 웰빙을 위태롭게 하는 모든 현상을 포함한다. 이는 제한 없이 비정상적이거나 또는 제어할 수 없는 세포 성장, 전이, 인접 세포의 정상적인 기능의 방해, 비정상적인 수준의 사이토카인 또는 다른 분비 산물의 방출, 염증성 또는 면역학적 반응의 억제 또는 악화, 신생물 형성(neoplasia), 전암성, 악성 및 주변 또는 원거리 조직 또는 장기, 예컨대, 림프절의 침습(invasion)을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "암 재발" 및 "종양 재발" 및 이의 문법적 변형은 암의 진단 후 신생물 또는 암세포의 추가 성장을 지칭한다. 특히, 재발은 추가의 암세포 성장이 암 조직에서 발생하는 경우에 발생할 수 있다. 유사하게, "종양 전파(tumor spread)"는 종양의 세포가 국부 또는 원거리 조직 및 장기로 퍼질 때 발생하므로, 종양 전파는 종양 전이를 포함한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국부로 전파되어 정상 장기 기능의 압박, 파괴 또는 방지에 의해 연루되는 조직의 기능을 위태롭게 하는 경우에 발생한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "전이"는 원래의 암성 종양의 장기에 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부분에서의 암성 종양의 성장을 지칭한다. 전이는 미세전이를 포함하는 것으로 이해될 것이며, 이는 원래의 암성 종양의 장기에 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부분에 검출할 수 없는 양의 암세포가 존재하는 것이다. 전이는 또한 원래의 종양 부위로부터의 암세포의 일탈 및 신체의 다른 부분으로의 암세포의 이동 및/또는 침습과 같은 몇몇의 단계의 과정으로 정의될 수 있다.
어구 "유효량" 및 "치료학적 유효량"은 투여되는 치료적 효과를 생성하는 면역접합체와 같은 물질의 용량 또는 양을 지칭한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 다를 것이며, 공지된 기법을 사용하여 당업자가 확인할 수 있을 것이다(예를 들어, 문헌[Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition (McGraw-Hill, 2006); 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, (Pharmaceutical Press, London, 2012)] 참조). 암의 경우에, 면역접합체의 치료학적 유효량은 암세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키며; 말단 기관으로의 암세포 침윤(infiltration)을 저해하고(즉, 어느 정도 느리게 하고, 바람직하게는 중지); 종양 전이를 저해하며(즉, 어느 정도 느리게 하고, 바람직하게는 중지); 종양 성장을 어느 정도 저해하고; 그리고/또는 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 면역접합체가 성장을 방지하고/하거나 기존의 암세포를 죽일 수 있는 한, 이는 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 효능은, 예를 들어, 질환 진행까지의 시간(time to disease progression: TTP)을 평가하고/하거나 반응률(response rate: RR)을 결정함으로써 측정될 수 있다.
"수용자(recipient)", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 호환 가능하게 사용될 수 있으며, 진단, 치료 또는 요법이 필요한 임의의 포유동물 대상체(예를 들어, 인간)을 지칭한다. 치료 목적을 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물 및 동물원, 스포츠 또는 반려 동물, 예컨대, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등을 포함하여 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 맥락에서 어구 "상승적 보조제" 또는 "상승적 조합"은 수용체 효능제, 사이토카인 및 보조제 폴리펩타이드와 같은 2개의 면역 조절제의 조합을 포함하며, 이는 조합으로 단독 투여되는 것에 비해 면역에 대한 상승적 효과를 유도한다. 특히, 본 명세서에 개시된 면역접합체는 청구된 보조제 및 항체 작제물의 상승적 조합을 포함한다. 투여 시 이러한 상승적 조합은, 예를 들어, 항체 작제물 또는 보조제가 다른 모이어티의 부재하에서 투여되는 경우에 비해 면역에 대해 더 큰 효과를 유도한다. 또한, 항체 작제물 또는 보조제가 단독으로 투여되는 경우와 비교하여, 감소된 양의 면역접합체가 투여될 수 있다(면역접합체의 일부로서 투여된 항체 작제물의 총 수 또는 보조제의 총 수에 의해 측정됨).
본 명세서에서 사용되는 용어 "투여하는"은 비경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 종양내, 병변내, 비강내 또는 피하 투여, 경구 투여, 좌약으로 투여, 국소 접촉, 척추강내 투여 또는 대상체에게 느린-방출 장치, 예를 들어, 미니-삼투압 펌프의 이식을 지칭한다.
수치를 수식하기 위해 본 명세서에서 사용되는 용어 "약" 및 "대략"은 수치 주변의 가까운 범위를 나타낸다. 따라서, "X"가 값이면, "약 X" 또는 "대략 X"는 0.9X 내지 1.1X, 예를 들어, 0.95X 내지 1.05X 또는 0.99X 내지 1.01X의 값을 나타낸다. "약 X" 또는 "대략 X"에 대한 언급은 구체적으로 적어도 X, 0.95X, 0.96X, 0.97X, 0.98X, 0.99X, 1.01X, 1.02X, 1.03X, 1.04X 및 1.05X 값을 나타낸다. 따라서, "약 X" 및 "대략 X"는, 예를 들어, "0.98X"의 제한 조건(claim limitation)에 대한 명세서 기재요건 지지를 교시하고 제공하는 것으로 의도된다.
항체
본 발명의 면역접합체는 항체를 포함한다. 본 발명의 실시형태의 범위에는 본 명세서에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 기능적 변이체가 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "기능적 변이체"는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 실질적으로 또는 상당한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물을 지칭하며, 이 기능적 변이체는 변이체인 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 생물학적 활성을 유지한다. 기능적 변이체는, 예를 들어, Trop2를 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 유사한 정도로, 동일한 정도로 또는 더 높은 정도로 발현하는 표적 세포를 인식하는 능력을 보유하는 본 명세서에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인(모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인)의 변이체를 포함한다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 관련하여, 기능적 변이체는, 예를 들어, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 아미노산 서열이 적어도 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 이상 동일할 수 있다.
기능적 변이체는, 예를 들어, 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비-보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이 경우, 비-보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 또는 저해하지 않는 것이 바람직하다. 비-보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 비교하여 증가되도록 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 Fc 조작된 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대해 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내의 돌연변이는 다음 돌연변이 중 하나 이상을 포함할 수 있다: SD(S239D), SDIE(S239D/I332E), SE(S267E), SELF(S267E/L328F), SDIE(S239D/I332E), SDIEAL(S239D/I332E/A330L), GA(G236A), ALIE(A330L/I332E), GASDALIE(G236A/S239D/A330L/I332E), V9(G237D/P238D/P271G/A330R) 및 V11(G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 및/또는 다음 아미노산에서 하나 이상의 돌연변이: E345R, E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가적인 Fc 영역 변형은, 예를 들어, US 2016/0145350, US 7416726 및 US 5624821에 기술되어 있으며, 이들은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 어푸코실화(afucosylation)와 같은 글리칸 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합제의 Fc 영역은 천연 비변형 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
본 발명의 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있으며, 소정의 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일하거나 또는 유사한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 또 다른 산성/음으로 하전된 극성 아미노산(예를 들어, Asp 또는 Glu)으로 치환된 산성/음으로 하전된 극성 아미노산, 비극성 측쇄가 있는 또 다른 아미노산으로 치환된 비극성 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Cys, Val 등), 또 다른 염기성/양으로 하전된 극성 아미노산으로 치환된 염기성/양으로 하전된 극성 아미노산(예를 들어, Lys, His, Arg 등), 극성 측쇄가 있는 또 다른 비하전된 아미노산으로 치환된 극성 측쇄가 있는 비하전된 아미노산(예를 들어, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr 등), 베타-분지형 측쇄가 있는 또 다른 아미노산으로 치환된 베타-분지형 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, Ile, Thr 및 Val), 방향족 측쇄가 있는 또 다른 아미노산으로 치환된 방향족 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, His, Phe, Trp 및 Tyr) 등일 수 있다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 다른 성분, 예를 들어, 다른 아미노산이 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 기능적 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않도록 본 명세서에 기재된 명시된 아미노산 서열 또는 서열로 본질적으로 구성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 포함하되, 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체(예를 들어, 적어도 2개의 보조제 모이어티에 접합된 항체)는 Fc 영역에 돌연변이가 결여된 천연 항체와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체(예를 들어, FcγRI(CD64), FcγRIIA(CD32A), FcγRIIB(CD32B), FcγRIIIA(CD16a) 및/또는 FcγRIIIB(CD16b))에 대한 조절된 결합(예를 들어, 증가된 결합 또는 감소된 결합)을 초래하는 Fc 영역에 하나 이상의 변형(예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 감소시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형(예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체는 Fc 영역에 돌연변이가 결여된 천연 항체와 비교하여 동일한 결합을 유지하거나 또는 FcγRI(CD64), FcγRIIA(CD32A) 및/또는 FcRγIIIA(CD16a)에 대한 증가된 결합을 갖는 FcγRIIB에 대한 항체의 결합을 감소시키는 항체의 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형(예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 증가시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형을 포함한다.
일부 실시형태에서, 조절된 결합은 항체의 천연 Fc 영역에 비해 항체의 Fc 영역 내의 돌연변이에 의해 제공된다. 돌연변이는 CH2 도메인, CH3 도메인 또는 이들의 조합일 수 있다. "천연 Fc 영역"은 "야생형 Fc 영역"과 동의어이며, 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일하거나 또는 천연 항체(예를 들어, 세툭시맙(cetuximab))에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 자연 발생적 변이체를 포함한다. 천연 서열 Fc는 Fc의 다양한 알로형(allotype)을 포함한다(Jefferis et al., (2009) mAbs, 1(4):332-338).
일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체의 Fc 영역은 천연 비-변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
인간 면역글로불린은 각 중쇄의 Cγ2 도메인에 있는 Asn297 잔기에서 글리코실화된다. 이러한 N-연결된 올리고당은 코어 7당류인 N-아세틸글루코사민4만노스3(GlcNAc4Man3)으로 구성된다. 엔도글리코시데이스 또는 PNGase F를 이용한 7당류의 제거는 항체 Fc 영역에서 구조적 변화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이는 활성화 FcγR에 대한 항체-결합 친화성을 현저히 감소시키고 효과기 기능을 감소시킬 수 있다. 코어 7당류는 종종 갈락토스, 이등분 GlcNAc, 푸코스 또는 살리실산으로 장식되어 있으며, 이는 활성화 및 억제성 FcγR에 대한 Fc 결합에 차등적으로 영향을 미친다. 추가적으로, α2,6-시알화는 생체내에서 항-염증성 활성을 향상시키는 반면, 어푸코실화는 FcγRIIIa 결합을 개선하고 항체-의존성 세포 세포독성 및 항체-의존성 식균 작용을 10-배 증가시킨다는 것이 입증되었다. 따라서, 특정 글리코실화 패턴은 염증성 효과기 기능을 제어하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 변형은 돌연변이이다. 예를 들어, Asn297의 치환. 일부 실시형태에서, Asn297은 글루타민(N297Q)으로 돌연변이된다. FcγR-조절 신호전달을 조절하는 항체로 면역 반응을 제어하는 방법은, 예를 들어, US 7416726, US 2007/0014795 및 US 2008/0286819에 기술되어 있으며, 이들은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체는 비-자연 발생적 글리코실화 패턴을 갖는 조작된 Fab 영역을 포함하도록 변형된다. 예를 들어, 하이브리도마는 증가된 FcRγIIIa 결합 및 효과기 기능을 가능하게 하는 특정 돌연변이를 갖는 어푸코실화된(afucosylated) mAb, 탈시알화된 mAb 또는 탈글리코실화된 Fc를 분비하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체는 어푸코실화되도록 조작된다.
일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체의 전체 Fc 영역은 상이한 Fc 영역으로 교환되어, 항체의 Fab 영역이 비-천연 Fc 영역에 접합된다. 예를 들어, 일반적으로 IgG1 Fc 영역을 포함하는 세툭시맙의 Fab 영역은 IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA에 접합될 수 있거나, 또는 일반적으로 IgG4 Fc 영역을 포함하는 니볼루맙(nivolumab)의 Fab 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgA1 또는 IgG2에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 기재된 Fc 도메인의 안정성을 조절하는 IgG4 Fc 내의 S228P 돌연변이와 같은 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 FcR에 대한 Fc 결합을 조절하는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다.
일부 실시형태에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 천연의 비-변형된 항체와 비교할 때 항체의 Fab 영역의 이의 항원에 대한 결합을 변경하지 않는다. 다른 실시형태에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 또한 천연의 비-변형된 항체와 비교할 때 항체의 Fab 영역의 이의 항원에 대한 결합을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 포함하되, 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 형질전환 성장 인자 베타 1(transforming growth factor beta 1: TGFβ1)에 결합할 수 있는 TGFβ1 수용체 또는 이의 단편을 포함시켜 변형된다. 예를 들어, 수용체는 TGFβ 수용체 II(TGFβRII)일 수 있다. 일부 실시형태에서, TGFβ 수용체는 인간 TGFβ 수용체이다. 일부 실시형태에서, IgG는 본 명세서에 원용되어 있는 US 9676863에 기술되어 있는 바와 같이 TGFβRII 세포외 도메인(extracellular domain: ECD)에 대한 C-말단 융합을 갖는다. "Fc 링커"는 IgG를 TGFβRII 세포외 도메인에 부착하는 데 사용될 수 있다. Fc 링커는 표적에 대한 결합-특이성을 유지하면서 분자의 적절한 3차원 폴딩을 허용하는 짧고 유연한 펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, TGFβ 수용체의 N-말단은 항체 작제물의 Fc에 (Fc 링커가 있거나 없이) 융합된다. 일부 실시형태에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단은 TGFβ 수용체에 (Fc 링커가 있거나 없이) 융합된다. 일부 실시형태에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단 라이신 잔기는 알라닌으로 돌연변이된다.
일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체는 글리코실화된다.
일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체는 조작된 시스테인이 접합에 이용 가능하고 반응성이지만 면역글로불린 폴딩 및 어셈블리를 교란하거나 항원 결합 및 효과기 기능을 변경하지 않는 부위에서 시스테인 치환을 통해 항체에 대한 보조제의 부위-특이적 접합을 제공하는 시스테인-조작된 항체이다(Junutula, et al., (2008) Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al. (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; US 2012/0121615; WO 2009/052249). "시스테인 조작된 항체" 또는 "시스테인 조작된 항체 변이체"는 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 항체이다. 시스테인-조작된 항체는 균일한 화학량론(예를 들어, 단일 조작된 시스테인 부위를 갖는 항체에서 항체당 최대 2개의 티에노아제핀 모이어티)을 갖는 티에노아제핀-링커 화합물로서 티에노아제핀 보조제 모이어티에 접합될 수 있다.
일부 실시형태에서, 시스테인-조작된 항체는 면역접합체를 제조하는 데 사용된다. 면역접합체는 Kabat 넘버링에 의해 번호가 매겨진 149-라이신 부위(LC K149C)와 같은 경쇄 부위 또는 122-세린 부위(HC S122C)와 같은 중쇄 부위에 도입된 반응성 시스테인 티올 잔기를 가질 수 있다. 다른 실시형태에서, 시스테인-조작된 항체는 경쇄(HC A118C)의 118-알라닌 부위(EU 넘버링)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 이 부위는 대안적으로 순차적 넘버링에 의해 121 또는 Kabat 넘버링에 의해 114로 번호가 매겨진다. 다른 실시형태에서, 시스테인-조작된 항체는 (i) Kabat 넘버링에 따른 G64C, R142C, K188C, L201C, T129C, S114C 또는 E105C의 경쇄; (ii) Kabat 넘버링에 따른 D101C, V184C, T205C 또는 S122C의 중쇄에 도입된 시스테인 잔기를 갖거나; 또는 (iii) 다른 시스테인-돌연변이 항체 및 문헌[Bhakta, S. et al, (2013) "Engineering THIOMABs for Site-Specific Conjugation of Thiol-Reactive Linkers", Laurent Ducry (ed.), Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pages 189-203]; WO 2011/156328; US 9000130에 기술되어 있는 것과 같은 것을 포함한다.
면역 관문 저해제
일부 실시형태에서, 항체의 면역접합체는 면역 관문 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질의 발현 또는 활성을 저감시킨다. 또 다른 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질과 이들의 리간드 간의 상호작용을 저감시킨다. 면역 관문 분자의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 저해 핵산이 또한 본 명세서에 개시된 방법에서 사용될 수 있다.
면역 관문 저해제인 니볼루맙 및 아테졸리주맙은 IgG1 Fc를 포함하도록 변형되고, 후속적으로 본 발명의 면역접합체로 전환될 수 있다.
대부분의 관문 항체는 세포를 죽이는 효과기 기능을 갖지 않고 오히려 신호 전달을 차단하도록 설계된다. 본 발명의 면역접합체는 골수성 면역을 활성화하는 데 필요한 "효과기 기능"을 도로 추가할 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 세포독성 T-림프구 항원 4(CTLA4, CD152로도 알려짐), Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체(TIGIT), 글루코코르티코이드-유도 TNFR-관련 단백질(GITR, TNFRSF18로도 알려짐), 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS, CD278로도 알려짐), CD96, 폴리오바이러스 수용체-관련 2(PVRL2, CD112R로도 알려짐, 예정 세포사 단백질 1(PD-1, CD279로도 알려짐), 예정 세포사 1 리간드 1(PD-L1, B7-H3 및 CD274로도 알려짐), 예정 세포사 리간드 2(PD-L2, B7-DC 및 CD273으로도 알려짐), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3, CD223으로도 알려짐), B7-H4, 살해세포 면역글로불린 수용체(killer immunoglobulin receptor: KIR), 종양 괴사인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 4(TNFRST4, OX40 및 CD134로도 알려짐) 및 이의 리간드 OX40L(CD252), 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 1(IDO-1), 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 2(IDO-2), 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 1(CEACAM1), B 및 T 림프구 감쇄물질(lymphocyte attenuator)(BTLA, CD272로도 알려짐), T-세포 막 단백질 3(TIM3), 아데노신 A2A 수용체(A2Ar), 및 T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제제(VISTA 단백질)이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CTLA4, PD-1 또는 PD-L1의 저해제이다.
일부 실시형태에서, 항체는, 이필리무맙(Yervoy®로도 알려짐) 펨브롤리주맙(Keytruda®로도 알려짐), 니볼루맙(Opdivo®로도 알려짐), 아테졸리주맙(Tecentriq®로도 알려짐), 아벨루맙(Bavencio®로도 알려짐) 및 두르발루맙(Imfinzi®로도 알려짐)으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CTLA4의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CTLA4에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CTLA4에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CTLA4에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, CTLA4의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, PD-1의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L1의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L1에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L1에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L1에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, PD-L1의 발현 또는 활성을 저감시킨다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1과 PD-L1 간의 상호작용을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L2의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L2에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L2에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-L2에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, PD-L2의 발현 또는 활성을 저감시킨다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1과 PD-L2 간의 상호작용을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 LAG-3의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 LAG-3에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 LAG-3에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 LAG-3에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, LAG-3의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 B7-H4의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 B7-H4에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 B7-H4에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 B7-H4에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, B7-H4의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 KIR의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 KIR에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 KIR에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 KIR에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, KIR의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TNFRSF4의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TNFRSF4에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TNFRSF4에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TNFRSF4에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, TNFRSF4의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 OX40L의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 OX40L에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 OX40L에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 OX40L에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, OX40L의 발현 또는 활성을 저감시킨다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TNFRSF4와 OX40L 간의 상호작용을 저감시킨다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-1의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-1에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-1에 대한 단클론성 항체이다, 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-1에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, IDO-1의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-2의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-2에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-2에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 IDO-2에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, IDO-2의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CEACAM1의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CEACAM1에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CEACAM1에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 CEACAM1에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, CEACAM1의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 BTLA의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 BTLA에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 BTLA에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 BMA에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, BTLA의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TIM3의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TIM3에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TIM3에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 TIM3에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, TIM3의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 A2Ar의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 A2Ar에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 A2Ar에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 A2Ar에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, A2Ar의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 VISTA 단백질의 저해제이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 VISTA 단백질에 대한 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 VISTA 단백질에 대한 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 VISTA 단백질에 대한 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 하나 이상의 면역 관문 단백질, 예컨대, VISTA 단백질의 발현 또는 활성을 저감시킨다.
항체 표적
일부 실시형태에서, 면역접합체의 항체는 5T4, ABL, ABCF1, ACVR1, ACVR1B, ACVR2, ACVR2B, ACVRL1, ADORA2A, Aggrecan, AGR2, AICDA, AIF1, AIGI, AKAP1, AKAP2, AMH, AMHR2, ANGPT1, ANGPT2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANPEP, APC, APOC1, AR, 아로마타제, ATX, AX1, AZGP1(아연-a-당단백질), B7.1, B7.2, B7-H1, BAD, BAFF, BAG1, BAI1, BCR, BCL2, BCL6, BDNF, BLNK, BLR1(MDR15), BIyS, BMP1, BMP2, BMP3B(GDFIO), BMP4, BMP6, BMP8, BMPRTA, BMPR1B, BMPR2, BPAG1(플렉틴), BRCA1, C19orflO(IL27w), C3, C4A, C5, C5R1, CANT1, CAPRIN-1, CASP1, CASP4, CAV1, CCBP2(D6/JAB61), CCLI(1-309), CCLI1(에오탁신), CCL13(MCP-4), CCL15(MIP-Id), CCL16(HCC-4), CCL17(TARC), CCL18(PARC), CCL19(MIP-3b), CCL2(MCP-1), MCAF, CCL20(MIP-3a), CCL21(MEP-2), SLC, 엑소더스(exodus)-2, CCL22(MDC/STC-1), CCL23(MPIF-I), CCL24(MPIF-2/에오탁신-2), CCL25(TECK), CCL26(에오탁신-3), CCL27(CTACK/ILC), CCL28, CCL3(MIP-Ia), CCL4(MIPIb), CCL5(RANTES), CCL7(MCP-3), CCL8(mcp-2), CCNA1, CCNA2, CCND1, CCNE1, CCNE2, CCR1(CKR1/HM145), CCR2(mcp-IRB/RA), CCR3(CKR3/CMKBR3), CCR4, CCR5(CMKBR5/ChemR13), CCR6(CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6), CCR7(CKR7/EBI1), CCR8(CMKBR8/TERI/CKR-L1), CCR9(GPR-9-6), CCRL1(VSHK1), CCRL2(L-CCR), CD164, CD19, CDIC, CD2, CD20, CD21, CD200, CD-22, CD24, CD27, CD28, CD3, CD33, CD35, CD37, CD38, CD3E, CD3G, CD3Z, CD4, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45RB, CD47, CD52, CD69, CD72, CD74, CD79A, CD79B, CD8, CD80, CD81, CD83, CD86, CD137, CD152, CD274, CDH1(Ecadherin), CDH1O, CDH12, CDH13, CDH18, CDH19, CDH2O, CDH5, CDH7, CDH8, CDH9, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK9, CDKN1A(p21Wap1/Cip1), CDKN1B(p27Kip1), CDKN1C, CDKN2A(p16INK4a), CDKN2B, CDKN2C, CDKN3, CEBPB, CERI, CHGA, CHGB, Chitinase, CHST1O, CKLFSF2, CKLFSF3, CKLFSF4, CKLFSF5, CKLFSF6, CKLFSF7, CKLFSF8, CLDN3, CLDN7(클라우딘(claudin)-7), CLDN18.2(클라우딘 18.2), CLN3, CLU(클러스테린), CMKLR1, CMKOR1(RDC1), CNR1, COL18A1, COLIA1, COL4A3, COL6A1, CR2, Cripto, CRP, CSF1(M-CSF), CSF2(GM-CSF), CSF3(GCSF), CTL8, CTNNB1(b-카테닌), CTSB(카텝신 B), CX3CL1(SCYD1), CX3CR1(V28), CXCL1(GRO1), CXCL1O(IP-IO), CXCLI1(1-TAC/IP-9), CXCL12(SDF1), CXCL13, CXCL14, CXCL16, CXCL2(GRO2), CXCL3(GRO3), CXCL5(ENA-78/LIX), CXCL6(GCP-2), CXCL9(MIG), CXCR3(GPR9/CKR-L2), CXCR4, CXCR6(TYMSTR/STRL33/Bonzo), CYB5, CYC1, CYSLTR1, DAB2IP, DES, DKFZp451J0118, DNCL1, DPP4, E2F1, Engel, Edge, Fennel, EFNA3, EFNB2, EGF, EGFR, ELAC2, ENG, Enola, ENO2, ENO3, EPHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHA9, EPRA10, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB5, EPHB6, EPHRIN-A1, EPHRIN-A2, EPHRINA3, EPHRIN-A4, EPHRIN-A5, EPHRIN-A6, EPHRIN-B1, EPHRIN-B2, EPHRIN-B3, EPHB4, EPG, ERBB2(Her-2), EREG, ERK8, 에스트로겐 수용체, Earl, ESR2, F3(TF), FADD, 파메실트랜스퍼라제, FasL, FASNf, FCER1A, FCER2, FCGR3A, FGF, FGF1(aFGF), FGF10, FGF11, FGF12, FGF12B, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF19, FGF2(bFGF). FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, FGF3(int-2), FGF4(HST), FGF5, FGF6(HST-2), FGF7(KGF), FGF8, FGF9, FGFR3, FIGF(VEGFD), FILI(EPSILON), FBL1(ZETA), FLJ12584, FLJ25530, FLRT1(피브로넥틴), FLT1, FLT-3, FOS, FOSL1(FRA-1), FY(DARC), GABRP(GABAa), GAGEB1, GAGEC1, GALNAC4S-6ST, GATA3, GD2, GDF5, GFI1, GGT1, GM-CSF, GNAS1, GNRH1, GPR2(CCR10), GPR31, GPR44, GPR81(FKSG80), GRCC1O(C1O), GRP, GSN(Gelsolin), GSTP1, HAVCR2, HDAC, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, Hedgehog, HGF, HIF1A, HIP1, 히스타민 및 히스타민 수용체, HLA-A, HLA-DRA, HLA-E, HM74, HMOXI, HSP90, HUMCYT2A, ICEBERG, ICOSL, ID2, IFN-a, IFNA1, IFNA2, IFNA4, IFNA5, EFNA6, BFNA7, IFNB1, IFN감마, IFNW1, IGBP1, IGF1, IGFIR, IGF2, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP6, DL-1, ILIO, ILIORA, ILIORB, IL-1, IL1R1(CD121a), IL1R2(CD121b), IL-IRA, IL-2, IL2RA(CD25), IL2RB(CD122), IL2RG(CD132), IL-4, IL-4R(CD123), IL-5, IL5RA(CD125), IL3RB(CD131), IL-6, IL6RA(CD126), IR6RB(CD130), IL-7, IL7RA(CD127), IL-8, CXCR1(IL8RA), CXCR2(IL8RB/CD128), IL-9, IL9R(CD129), IL-10, IL10RA(CD210), IL10RB(CDW210B), IL-11, IL11RA, IL-12, IL-12A, IL-12B, IL-12RB1, IL-12RB2, IL-13, IL13RA1, IL13RA2, IL14, IL15, IL15RA, IL16, IL17, IL17A, IL17B, IL17C, IL17R, IL18, IL18BP, IL18R1, IL18RAP, IL19, ILIA, ILIB, ILIF10, ILIF5, IL1F6, ILIF7, IL1F8, DL1F9, ILIHYI, ILIR1, ILIR2, ILIRAP, ILIRAPLI, ILIRAPL2, ILIRL1, IL1RL2, ILIRN, IL2, IL20, IL20RA, IL21R, IL22, IL22R, IL22RA2, IL23, DL24, IL25, IL26, IL27, IL28A, IL28B, IL29, IL2RA, IL2RB, IL2RG, IL3, IL30, IL3RA, IL4, IL4, IL6ST(당단백질 130), ILK, INHA, INHBA, INSL3, INSL4, IRAK1, IRAK2, ITGA1, ITGA2, ITGA3, ITGA6(.알파.6 인테그린), ITGAV, ITGB3, ITGB4(.베타.4 인테그린), JAG1, JAK1, JAK3, JTB, JUN, K6HF, KAI1, KDR, KITLG, KLF5(GC Box BP), KLF6, KLK10, KLK12, KLK13, KLK14, KLK15, KLK3, KLK4, KLK5, KLK6, KLK9, KRT1, KRT19(케라틴 19), KRT2A, KRTHB6(모발-특이적 II형 케라틴), LAMA5, LEP(렙틴), Lingo-p75, Lingo-Troy, LPS, LRRC15, LTA(TNF-b)), LTB, LTB4R(GPR16), LTB4R2, LTBR, MACMARCKS, MAG 또는 OMgp, MAP2K7(c-Jun), MCP-1, MDK, MIB1, 미드카인, MIF, MISRII, MJP-2, MK, MKI67(Ki-67), MMP2, MMP9, MS4A1, MSMB, MT3(메탈로티오네인-III), mTOR, MTSS1, MUC1(뮤신), MYC, MYD88, NCK2, 뉴로칸, 넥틴-4, NFKBI, NFKB2, NGFB(NGF), NGFR, NgR-Lingo, NgRNogo66(Nogo), NgR-p75, NgR-Troy, NMEI(NM23A), NOTCH, NOTCH1, NOX5, NPPB, NROB1, NROB2, NRID1, NR1D2, NR1H2, NR1H3, NR1H4, NR112, NR113, NR2C1, NR2C2, NR2E1, NR2E3, NR2F1, NR2F2, NR2F6, NR3C1, NR3C2, NR4A1, NR4A2, NR4A3, NR5A1, NR5A2, NR6A1, NRP1, NRP2, NT5E, NTN4, ODZI, OPRDI, P2RX7, PAP, PART1, PATE, PAWR, PCA3, PCDGF, PCNA, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PECAMI, 페그-아스파라기나제, PF4(CXCL4), PGF, PGR, 포스파칸, PIAS2, PI3 Kinase, PIK3CG, PLAU(uPA), PLG, PLXDCI, PKC, PKC-beta, PPBP(CXCL7), PPID, PR1, PRKCQ, PRKD1, PRL, PROC, PROK2, PSAP, PSCA, PTAFR, PTEN, PTGS2(COX-2), PIN, RAC2(P21Rac2), RANK, RANK 리간드, RARB, RGS1, RGS13, RGS3, RNFI1O(ZNF144), Ron, ROBO2, RXR, S100A2, SCGB 1D2(리포필린 B), SCGB2A1(맘마글로빈 2), SCGB2A2(맘마글로빈 1), SCYE1(혈관내피 단구-활성화 사이토카인), SDF2, SERPENA1, SERPINA3, SERPINB5(마스핀), SERPINEI(PAI-I), SERPINFI, SHIP-1, SHIP-2, SHB1, SHB2, SHBG, SfcAZ, SLC2A2, SLC33A1, SLC43A1, SLIT2, SPP1, SPRR1B(Spr1), ST6GAL1, STAB1, STATE, STEAP, STEAP2, TB4R2, TBX21, TCP1O, TDGF1, TEK, TGFA, TGFB1, TGFB1I1, TGFB2, TGFB3, TGFBI, TGEBR1, TGFBR2, TGFBR3, THIL, THBS1(트롬보스폰딘-1), THBS2, THBS4, THPO, TIE(Tie-1), TIMP3, 조직 인자, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TNF, TNF-a, TNFAIP2(B94), TNFAIP3, TNFRSF11A, TNFRSF1A, TNFRSF1B, TNFRSF21, TNFRSF5, TNFRSF6(Fas), TNFRSF7, TNFRSF8, TNFRSF9, TNFSF1O(TRAIL), TNFSF11(TRANCE), TNFSF12(APO3L), TNFSF13(April), TNFSF13B, TNSF14(HVEM-L), TNFRSF14(HVEM), TNFSF15(VEGI), TNFSF18, TNFSF4(OX40 리간드), TNFSF5(CD40 리간드). TNFSF6(FasL), TNFSF7(CD27 리간드), TNFSF8(CD30 리간드), TNFSF9(4-1BB 리간드), TOLLIP, 톨-유사 수용체, TOP2A(토포아이소머라제 1ia), TP53, TPM1, TPM2, TRADD, TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF4, TRAF5, TRAF6, TRKA, TREM1, TREM2, TROP2, TRPC6, TSLP, TWEAK, 타이로시나제, uPAR, VEGF, VEGFB, VEGFC, 베르시칸, VHL C5, VLA-4, Wnt-1, XCL1(림포탁틴), XCL2(SCM-Ib), XCRI(GPR5/CCXCR1), YYI, ZFPM2, CLEC4C(BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D(MCL, CLECSF8), CLEC4E(Mincle), CLEC6A(Dectin-2). CLEC5A(MDL-1, CLECSF5), CLEC1B(CLEC-2), CLEC9A(DNGR-1), CLEC7A(Dectin-1), PDGFRa, SLAMF7, GP6(GPVI), LILRA1(CD85I), LILRA2(CD85H, ILT1), LILRA4(CD85G, ILT7), LILRA5(CD85F, ILT11), LILRA6(CD85b, ILT8), NCR1(CD335, LY94, NKp46), NCR3(CD335, LY94, NKp46), NCR3(CD337, NKp30), OSCAR, TARM1, CD300C, CD300E, CD300LB(CD300B), CD300LD(CD300D), KIR2DL4(CD158D), KIR2DS, KLRC2(CD159C, NKG2C), KLRK1(CD314, NKG2D), NCR2(CD336, NKp44), PILRB, SIGLEC1(CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15(CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1(CD172B), TREM1(CD354), TREM2 및 KLRF1(NKp80)로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합 가능하다(예를 들어, 이로부터 선택된 표적에 특이적으로 결합한다).
일부 실시형태에서, 항체는 FcR.감마-커플링된 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, FcR.감마-커플링된 수용체는 GP6(GPVI), LILRA1(CD85I), LILRA2(CD85H, ILT1), LILRA4(CD85G, ILT7), LILRA5(CD85F, ILT11), LILRA6(CD85b, ILT8), NCR1(CD335, LY94, NKp46), NCR3(CD335, LY94, NKp46), NCR3(CD337, NKp30), OSCAR 및 TARM1로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항체는 DAP12-커플링된 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, DAP12-커플링된 수용체는 CD300C, CD300E, CD300LB(CD300B), CD300LD(CD300D), KIR2DL4(CD158D), KIR2DS, KLRC2(CD159C, NKG2C), KLRK1(CD314, NKG2D), NCR2(CD336, NKp44). PILRB, SIGLEC1(CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15(CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1(CD172B), TREM1(CD354) 및 TREM2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항체는 hemITAM-보유 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, hemITAM-보유 수용체는 KLRF1(NKp80)이다.
일부 실시형태에서, 항체는 CLEC4C(BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D(MCL, CLECSF8), CLEC4E(Mincle), CLEC6A(Dectin-2), CLEC5A(MDL-1, CLECSF5), CLEC1B(CLEC-2), CLEC9A(DNGR-1) 및 CLEC7A(Dectin-1)로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합 가능하다. 일부 실시형태에서, 항체는 CLEC6A(Dectin-2) 또는 CLEC5A에 결합 가능하다. 일부 실시형태에서, 항체는 CLEC6A(Dectin-2)에 결합 가능하다.
일부 실시형태에서, 항체는, ATP5I(Q06185), OAT(P29758), AIFM1(Q9Z0X1), AOFA(Q64133), MTDC(P18155), CMC1(Q8BH59), PREP(Q8K411), YMEL1(O88967), LPPRC(Q6PB66), LONM(Q8CGK3), ACON(Q99KI0), ODO1(Q60597), IDHP(P54071), ALDH2(P47738), ATPB(P56480), AATM(P05202), TMM93(Q9CQW0), ERGI3(Q9CQE7), RTN4(Q99P72), CL041(Q8BQR4), ERLN2(Q8BFZ9), TERA(Q01853), DAD1(P61804), CALX(P35564), CALU(O35887), VAPA(Q9WV55), MOGS(Q80UM7), GANAB(Q8BHN3), ERO1A(Q8R180), UGGG1(Q6P5E4), P4HA1(Q60715), HYEP(Q9D379), CALR(P14211), AT2A2(O55143), PDIA4(P08003), PDIA1(P09103), PDIA3(P27773), PDIA6(Q922R8), CLH(Q68FD5), PPIB(P24369), TCPG(P80318), MOT4(P57787), NICA(P57716), BASI(P18572), VAPA(Q9WV55), ENV2(P11370), VAT1(Q62465), 4F2(P10852), ENOA(P17182), ILK(O55222), GPNMB(Q99P91), ENV1(P10404), ERO1A(Q8R180), CLH,(Q68FD5), DSG1A(Q61495), AT1A1(Q8VDN2), HYOU1(Q9JKR6), TRAP1(Q9CQN1), GRP75(P38647), ENPL(P08113), CH60(P63038) 및 CH10(Q64433)로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합 가능하다(예를 들어, 이로부터 선택된 표적에 특이적으로 결합한다). 선행하는 목록에서, 수탁 번호는 괄호안에 표시된다.
일부 실시형태에서, 항체는 CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR, Her2, SLAMF7 및 gp75로부터 선택된 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항원은 CD19, CD20, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR 및 Her2로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항체는 Tn 항원 및 Thomsen-Friedenreich 항원으로부터 선택된 항원에 결합한다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 Fc 융합 단백질은 하기로부터 선택된다: 아바고보맙, 아바타셉트(ORENCIA®로도 알려짐), 압식시맙(REOPRO®로도 알려짐), c7E3 Fab), 아달리무맙(HUMIRA®로도 알려짐), 아데카투무맙, 알렘투주맙(CAMPATH®로도 알려짐), MabCampath 또는 Campath-1H), 알투모맙, 아펠리모맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아네투무맙, 안루키주맙, 아폴리주맙, 아르시투모맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 아토롤리무맙, 바피뉴주맙, 바실릭시맙(SIMULECT®로도 알려짐), 바비툭시맙, 벡투모맙(LYMPHOSCAN®로도 알려짐), 벨리무맙(LYMPHO-STAT-B®로도 알려짐), 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙(AVASTIN®로도 알려짐), 비시로맙 브랄로바비탈, 비바투주맙 메르탄신, 캄패스, 카나키누맙(ACZ885로도 알려짐), 칸투주맙 메르탄신, 카프로맙(PROSTASCINT®), 카투막소맙(REMOVAB®로도 알려짐), 세델리주맙(CIMZIA®로도 알려짐), 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙(ERBITUX®로도 알려짐), 클레놀릭시맙, 다세투주맙, 다클릭시맙, 다클리주맙(ZENAPAX®로도 알려짐), 데노수맙(AMG 162로도 알려짐), 데투모맙, 도를리모맙 아리톡스, 도를릭시주맙, 둔투무맙, 두리물루맙, 두르물루맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙(SOLIRIS®로도 알려짐), 에도바코맙, 에드레콜로맙(Mab17-1A, PANOREX®로도 알려짐), 에팔리주맙(RAPTIVA®로도 알려짐), 에푼구맙(efungumab)(MYCOGRAB®로도 알려짐), 엘실리모맙, 엔리모맙 페골, 에피투모맙 시툭세탄, 에팔리주맙, 에피투모맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 에르투막소맙(REXOMUN®로도 알려짐), 에타너셉트(ENBREL®로도 알려짐), 에타라시주맙(에타라투주맙, VITAXIN®, ABEGRIN®로도 알려짐), 엑스비비루맙, 파놀레소맙(NEUTROSPEC®로도 알려짐), 파랄리모맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙(HUZAF®로도 알려짐), 갈릭시맙, 간테네루맙, 가빌리모맙(ABXCBL®로도 알려짐), 젬투주맙 오조가미신(MYLOTARG®로도 알려짐), 골리무맙(CNTO 148로도 알려짐), 고미릭시맙, 이발리주맙(TNX-355로도 알려짐), 이브리투모맙 티욱세탄(ZEVALIN®으로도 알려짐), 이고보맙, 임시로맙, 인플릭시맙(REMICADE®로도 알려짐), 이놀리모맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙(MDX-010, MDX-101로도 알려짐), 이라투무맙, 켈릭시맙, 라베투주맙, 레말레소맙, 레브릴리주맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙(HGS-ETR2, ETR2-ST01로도 알려짐), 렉시투무맙, 리비비루맙, 린투주맙, 루카투무맙, 루미릭시맙, 마파투무맙(HGSETR1, TRM-1로도 알려짐), 마슬리모맙, 마투주맙(EMD72000으로도 알려짐), 메폴리주맙(BOSATRIA®로도 알려짐), 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 모롤리무맙, 모타비주맙(NUMAX®로도 알려짐), 무라모납(OKT3으로도 알려짐), 나콜로맙 타페나톡스, 나프투모맙 에스타페나톡스, 나탈리주맙(TYSABRI®, ANTEGREN®로도 알려짐), 네바쿠맙, 네렐리모맙, 니모투주맙(THERACIM hR3®, THERA-CIM-hR3®, THERALOC®로도 알려짐), 노페투모맙 메르펜탄(VERLUMA®로도 알려짐), 오크렐리주맙, 오둘리모맙, 오파투무맙, 오말리주맙(XOLAIR®로도 알려짐), 오레고보맙(OVAREX®로도 알려짐), 오텔릭시주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙(SYNAGIS®로도 알려짐), 파니투무맙(ABX-EGF, VECTIBIX®로도 알려짐), 파스콜리주맙, 펨투모맙(THERAGYN®로도 알려짐), 퍼투주맙(2C4, OMNITARG®로도 알려짐), 펙셀리주맙, 핀투모맙, 프릴릭시맙, 프리투무맙, 라니비주맙(LUCENTIS®로도 알려짐), 락시바쿠맙, 레가비루맙, 레슬리주맙, 리툭시맙(RITUXAN®, MabTHERA®로도 알려짐), 로벨리주맙, 루플리주맙, 사투모맙, 세비루맙, 시브로투주맙, 시플리주맙(MEDI-507로도 알려짐), 손투주맙, 스타물루맙(MYO-029로도 알려짐), 술레소맙(LEUKOSCAN®으로도 알려짐), 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 테피바주맙(AUREXIS®로도 알려짐), 텔리모맙 아리톡스, 테넬릭시맙, 테플리주맙, 티실리무맙, 토실리주맙(ACTEMRA®로도 알려짐), 토랄리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙(HERCEPTIN®으로도 알려짐), 트레멜리무맙(CP-675,206으로도 알려짐), 투코투주맙 셀몰류킨, 투비루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙(CNTO 1275로도 알려짐), 바팔릭시맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 비실리주맙(NUVION®로도 알려짐), 볼로식시맙(M200으로도 알려짐), 보투무맙(HUMASPECT®로도 알려짐), 잘루투무맙, 자놀리무맙(HuMAX-CD4로도 알려짐), 지랄리무맙, 졸리모맙 아리톡스, 다라투무맙, 엘로툭수맙, 오빈툰주맙, 올라라투맙, 브렌툭시맙 베도틴, 아피버셉트, 아바타셉트, 벨라타셉트, 아피버셉트, 에타너셉트, 로미플로스팀, SBT-040(US 2017/0158772에 열거된 서열). 일부 실시형태에서, 항체는 리툭시맙이다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 PD-L1을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
예정사-리간드 1(Programmed Death-Ligand 1: PD-L1, 분화 클러스터 274, CD274, B7-상동체 1 또는 B7-H1)은 B7 단백질 슈퍼패밀리에 속하며, 예정 세포사 단백질 1(programmed cell death protein 1: PD-1, PDCD1, 분화 클러스터 279 또는 CD279)의 리간드이다. PD-L1은 또한 B7.1(CD80)과 상호작용할 수 있으며, 이러한 상호작용은 T 세포 프라이밍(priming)을 저해하는 것으로 여겨진다. PD-L1/PD-1 축은 적응성 면역 반응을 억제하는데 큰 역할을 한다. 보다 구체적으로, PD-L1과 이의 수용체 PD-1의 결합(engagement)은 T-세포의 활성화 및 증식을 저해하는 신호를 전달하는 것으로 여겨진다. PD-L1에 결합하고 리간드가 PD-1 수용체에 결합하는 것을 방지하는 작용제는 이러한 면역억제를 방지하므로, 암 또는 감염의 치료와 같이 원하는 경우 면역 반응을 향상시킬 수 있다. PD-L1/PD-1 경로는 또한 자가면역을 예방하는데 기여하므로, 면역 억제성 페이로드를 전달하는 PD-L1에 대한 효능제 또는 효능제들은 자가면역 장애의 치료에 도움이 될 수 있다.
아테졸리주맙(TECENTRIQ™), 더발루맙(IMFINZI™) 및 아벨루맙(BAVENCIO™)을 포함하여 PD-L1을 표적화하는 여러 항체가 암의 치료를 위해 개발되었다. 그럼에도 불구하고, 높은 친화성으로 PD-L1에 결합하고 PD-L1/PD-1 신호전달을 효과적으로 방지하는 작용제 및 치료적 페이로드를 PD-L1 발현 세포에 전달할 수 있는 작용제를 포함하는 새로운 PD-L1-결합제에 대한 필요성이 계속 존재한다. 또한, 자가면역 장애 및 감염을 치료하기 위한 새로운 PD-L1-결합제가 필요하다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 HER2를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 항-HER2 항체를 포함한다. 본 발명의 일 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 참조에 의해 본 명세서에 구체적으로 원용되는 US 5821337의 표 3에 기술되어 있는 바와 같은 인간화된 항-HER2 항체, 예를 들어, huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8을 포함한다. 이러한 항체는 HER2에 결합하는 뮤린 항체(4D5)의 상보성-결정 영역이 있는 인간 프레임워크 영역을 포함한다. 인간화된 항체 huMAb4D5-8은 또한 상표명 HERCEPTIN™(Genentech, Inc.)으로 상업적으로 입수 가능한 트라스투주맙으로 지칭된다.
트라스투주맙(CAS 180288-69-1, HERCEPTIN®, huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, 제넨테크(Genentech))은 세포-기반 검정(Kd = 5nM)에서 HER2의 세포외 도메인에 높은 친화성으로 선택적으로 결합하는 뮤린 항-HER2 항체(4D5)의 인간화된 버전인 재조합 DNA-유래, IgG1 카파, 단클론성 항체이다(US 5677171; US 5821337; US 6054297; US 6165464; US 6339142; US 6407213; US 6639055; US 6719971; US 6800738; US 7074404; 문헌[Coussens et al (1985) Science 230:1132-9; Slamon et al (1989) Science 244:707-12; Slamon et al (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792]).
본 발명의 실시형태에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 트라스투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 프레임워크 영역을 더 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 다를 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 인간화된 항-HER2 항체, 예를 들어, US 7862817에 기술되어 있는 바와 같은 인간화된 2C4를 포함한다. 예시적인 인간화된 2C4 항체는 퍼투주맙(CAS 등록 번호 380610-27-5), PERJETA™(Genentech, Inc.)이다. 퍼투주맙은 HER 이량체화 저해제(HER dimerization inhibitor: HDI)이며, 다른 HER 수용체(예컨대, EGFR/HER1, HER2, HER3 및 HER4)와 활성인 이종이량체 또는 동종이량체를 형성하는 HER2의 능력을 저해하는 기능을 한다. 예를 들어, 문헌[Harari and Yarden, Oncogene 19:6102-14 (2000); Yarden and Sliwkowski. Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001); Sliwkowski Nat Struct Biol 10:158-9 (2003); Cho et al. Nature 421:756-60 (2003); 및 Malik et al. Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7 (2003)]을 참조한다. PERJETA™은 유방암의 치료제로 승인되었다.
본 발명의 실시형태에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 퍼투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 프레임워크 영역을 더 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 다를 더 포함한다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 CEA를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다. CD66e(분화 클러스터 66e)로도 알려져 있는 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 5(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5: CEACAM5)는 암배아 항원(carcinoembryonic antigen: CEA) 유전자 패밀리의 구성원이다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 CEA를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
암배아 항원(CEA, CD66e, CEACAM5)의 상승된 발현은 신생물 형성의 다양한 생물학적 양상, 특히 종양 세포 부착, 전이, 세포면역 메커니즘의 차단 및 항세포자멸사 기능과 관련이 있다. CEA는 또한 많은 암종에 대한 혈액 마커로서 사용된다. MN-14 및 hMN14로도 알려진 라베투주맙(CEA-CIDE™, Immunomedics, CAS 등록 번호 219649-07-7)은 또한 인간화된 IgG1 단클론성 항체이며, 결장직장암의 치료에 대해 연구되어 왔다(Blumenthal, R. et al (2005) Cancer Immunology Immunotherapy 54(4):315-327). 캄프토테신 유사체에 접합된 라베투주맙(라베투주맙 고비테칸, IMMU-130)은 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 5(CEACAM5)를 표적으로 하며, 재발성 또는 불응성 전이성 결장직장암 환자에서 연구 중이다(Sharkey, R. et al, (2018), Molecular Cancer Therapeutics 17(1):196-203; Cardillo, T. et al (2018) Molecular Cancer Therapeutics 17(1):150-160).
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 Trop2를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다. 종양-관련 칼슘 신호 변환기 2(Tumor-associated calcium signal transducer 2: TROP-2)는 TACSTD2 유전자에 의해 암호화되는 막횡단 당단백질이다(Linnenbach AJ, et al (1993) Mol Cell Biol. 13(3): 1507-15; Calabrese G, et al (2001) Cytogenet Cell Genet. 92(1-2): 164-5). Trop2는 많은 암에서 차별적으로 발현되는 세포내 칼슘 신호 변환기이고, 세포에 자가-재생, 증식, 침습 및 생존에 대해서 신호를 전달한다. Trop2는 줄기 세포 마커로 간주되고, 많은 정상 조직에서 발현되지만, 이와 대도적으로 많은 암에서 과발현된다(Ohmachi T, et al., (2006) Clin. Cancer Res., 12(10), 3057-3063; Muhlmann G, et al., (2009) J. Clin. Pathol., 62(2), 152-158; Fong D, et al., (2008) Br. J. Cancer, 99(8), 1290-1295; Fong D, et al., (2008) Mod. Pathol., 21(2), 186-191; Ning S, et al., (2013) Neurol. Sci., 34(10), 1745-1750). Trop2의 과발현은 예후에 중요하다. Trop2와 상호작용하는 여러 리간드가 제안되었다. Trop2는 상이한 경로를 통해 세포에 신호를 전달하고, 여러 전사 인자의 복잡한 네트워크에 의해 전사적으로 조절된다.
인간 Trop2(TACSTD2: 종양-관련 칼슘 신호 변환기 2, GA733-1, EGP-1, M1S1; 이하 hTrop2로 지칭됨)는 323개의 아미노산 잔기로 이루어진 단일-통과 막횡단 유형 1 세포막 단백질이다. 인간 영양막 세포(trophoblast) 및 암세포에 공통적으로 존재하는 면역 저항성에 관여하는 세포막 단백질의 존재가 이전에 제시되어 왔지만(Faulk W P, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 75(4):1947-1951 (1978)), 인간 융모막암종 세포주에서 세포막 단백질에 대한 단클론성 항체에 의해 인식되는 항원 분자가 확인되었으며 인간 영양막 세포에서 발현되는 분자 중 하나로서 Trop2로 지정되었다(Lipinski M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 78(8), 5147-5150 (1981)). 이 분자는 위암 세포주로 면역화하여 얻은 마우스 단클론성 항체 GA733에 의해 인식되는 종양 항원 GA733-1(Linnenbach A J, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 86(1), 27-31 (1989)) 또는 비소세포 폐암 세포로 면역화하여 얻은 마우스 단클론성 항체 RS7-3G11에 의해 인식되는 상피 당단백질(EGP-1; Basu A, et al., Int. J. Cancer, 62 (4), 472-479 (1995))로도 지정되었다. 그러나, 1995년에, Trop2 유전자가 클로닝되면서 이들 분자가 모두 동일한 분자임이 확인되었다(Fornaro M, et al., Int. J. Cancer, 62(5), 610-618 (1995)). hTrop2의 DNA 서열 및 아미노산 서열은 공개 데이터베이스에서 이용 가능하며, 예를 들어, 등록 번호 NM_002353 및 NP_002344(NCBI)로 지칭될 수 있다.
암과의 연관성을 시사하는 이러한 정보에 대응하여, 지금까지 다수의 항-hTrop2 항체가 확립되어 이들의 항종양 효과에 대해 연구되었다. 이들 항체 중에는, 예를 들어, 누드 마우스 이종이식 모델에서 그 자체로 항종양 활성을 나타내는 비접합된 항체(WO 2008/144891; WO 2011/145744; WO 2011/155579; WO 2013/077458)뿐만 아니라 세포독성 약물과 함께 ADC로서 항종양 활성을 나타내는 항체(WO 2003/074566; WO 2011/068845; WO 2013/068946; US 7999083)가 개시되어 있다. 그러나, 이들의 활성 강도 또는 적용 범위(coverage)는 아직 충분하지 않으며 치료 표적으로서 hTrop2에 대한 의학적 요구도 충족되지 않는다.
암세포에서 TROP2 발현은 약물 저항성과 상관관계가 있다. 여러 전략이 항체, 항체 융합 단백질, 화학적 저해제, 나노입자 등을 포함하는 암세포의 TROP2를 표적으로 한다. 이러한 다양한 치료적 치료법을 사용한 시험관내 연구 및 전임상 연구에서는 시험관내 및 마우스의 생체내에서 모두 종양 세포 성장이 크게 저해되는 것으로 나타났다. 임상 연구에서는 예후예측 바이오마커 및 저항성을 역전시키기 위한 치료 표적 모두로서 Trop2의 잠재적인 적용을 조사하였다.
토포아이소머라제 저해제 약물에 연결된 Trop2-지시된 항체를 포함하는 항체-약물 접합체인 사시투주맙 고비테칸(TRODELVY®, I㎜unomedics, IMMU-132)은 이전에 적어도 2회의 요법을 받은 성인 환자의 전이성 삼중-음성 유방암(metastatic triple-negative breast cancer: mTNBC)의 치료에 적절하다. 사시투주맙 고비테칸의 Trop2 항체는 이리노테칸의 활성 대사산물인 SN-38에 접합된다(US 2016/0297890; WO 2015/098099).
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 Caprin-1을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다(Ellis JA, Luzio JP (1995) J Biol Chem. 270(35):20717-23; Wang B, et al (2005) J Immunol. 175 (7):4274-82; Solomon S, et al (2007) Mol Cell Biol. 27(6):2324-42). Caprin-1은 또한 GPIAP1, GPIP137, GRIP137, M11S1, RNG105, p137GPI, 및 세포 주기 관련 단백질 1로도 알려져 있다.
세포질 활성화/증식-관련 단백질-1(caprin-1)은 세포주기 제어-관련 유전자의 조절에 참여하는 RNA-결합 단백질이다. Caprin-1은 c-Myc 및 사이클린 D2 mRNA에 선택적으로 결합하여, G1 단계를 거쳐 S 단계로의 세포 진행을 가속화시키고, 세포 생존력을 향상시키고, 세포 성장을 촉진시켜, 종양 형성에 중요한 역할을 할 수 있음을 나타낸다(Wang B, et al (2005) J Immunol. 175:4274-4282). Caprin-1은 단독으로 작용하거나 RasGAP SH3-도메인-결합 단백질 1 및 취약 X 정신 지체 단백질과 같은 다른 RNA-결합 단백질과 조합하여 작용한다. 종양 형성 과정에서 caprin-1은 주로 세포 증식을 활성화시키고 면역 관문 단백질의 발현을 상향 조절함으로써 기능한다. 스트레스 과립의 형성을 통해서, caprin-1은 종양 세포가 불리한 조건에 적응하는 과정에도 관여하며, 이는 방사선 및 화학 요법 저항에 기여한다. 다양한 임상 악성 종양에서의 역할을 고려할 때, caprin-1은 바이오마커 및 새로운 치료법 개발을 위한 표적으로서 사용될 가능성이 있다(Yang, Z-S, et al (2019) Oncology Letters 18:15-21).
치료 및 검출을 위해 caprin-1을 표적화하는 항체가 기재되어 있었다(WO 2011/096519; WO 2013/125654; WO 2013/125636; WO 2013/125640; WO 2013/125630; WO 2013/018889; WO 2013/018891; WO 2013/018883; WO 2013/018892; WO 2014/014082; WO 2014/014086; WO 2015/020212; WO 2018/079740).
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 클라우딘-1을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
클라우딘-1은 세포-세포 밀착 연접에 위치된 막관통 단백질 패밀리 클라우딘의 구성원이고, 간 세포로의 HCV 유입을 위한 공동-수용체 역할을 한다(Kniesel U, et al (2000). Cell. Mol. Neurobiol. 20(1):57-76; Furuse M, et al (1998). J. Cell Biol. 141(7):1539-50; Swisshelm K, et al (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 57(6):919-28). 클라우딘 1은 노화-관련 상피막 단백질, 노화-관련 상피막 단백질 1, CLDN1, CLD1, ILVASC, SEMP1로도 알려져 있다.
클라우딘은 상피 세포 극성을 유지하는 관강 상피 시트에 풍부하다. 클라우딘-1은 방광, 나팔관, 간, 췌장, 전립선 및 피부와 같은 대부분의 조직에서 발현된다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 Nectin-4를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
넥틴은 칼슘-의존적 세포 접착에 수반되는 세포 접착 분자의 단백질 패밀리이다(Takai Y. et al (2003) Cancer Science 94(8):655-67; Fuchs, A. et al (2006) Seminars in Cancer Biology 16(5):359-366; Miyoshi J. et al (2007) American journal of nephrology 27(6):590-604). 넥틴은, 상피 세포의 중간 접합부나 신경 세포의 화학적 시냅스를 비롯하여, 많은 상이한 조직의 세포 간 결합에 중요한 역할을 한다.
예시적인 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체는 LRRC15(류신 풍부 반복 함유 15(Leucine rich repeat containing 15))를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
LRRC15는 인간에서 LRRC15 유전자에 의해 암호화되는 세포막-발현 단백질이다. LRRC15는 많은 고형 종양(예를 들어, 유방, 두경부, 폐, 췌장)의 간질 섬유아세포에서 발현될 뿐만 아니라 중간엽 기원 암세포(예를 들어, 육종, 흑색종, 교모세포종)의 하위집합에서도 직접 발현된다. LRRC15는 LRRC15-양성 간질 이형성증이 있는 암 또는 중간엽 기원 암의 치료를 위한 치료 표적으로서 유용성을 가질 수 있다(Purcell, JW et al (2018) Cancer Res., 78(14):4059-4072).
비스-벤즈이미다졸 보조제 화합물
본 발명의 면역접합체는 비스-벤즈이미다졸 보조제 모이어티를 포함한다. 본 명세서에 기재된 보조제 모이어티는 면역 반응을 유발하는 화합물(즉, 면역자극성 제제)이다. 일반적으로, 본 명세서에 기재된 보조제 모이어티는 STING 효능제이다.
소정의 아미도 벤즈이미다졸 화합물은 전신 활성을 가진 입증된 STING 수용체 효능제이다(Ramanjulu, J.M. et al (2018 ) Nature 564:439-443; Barber, G.N. (2015) Nature Rev Immunol 15:760-770; US 2019/0300513).
STING은 크고 대칭적인 결합 포켓을 갖는 이량체 구조이다. 표적화 항체에 접합될 때 표 1의 비스-벤즈이미다졸 화합물은 STING의 결합 포켓의 열린 형태를 표적화하고 이에 결합하도록 설계되었다. 소분자 효능제에의 결합은 통상 STING 단백질의 폐쇄 형태를 유도한다. 이는 특히 "비절단"인 경우 링커가 결합 및 활성화를 방해할 위험을 초래한다. 비스-벤즈이미다졸은 열린 형태를 통해 결합하고 활성화되는 것으로 보고되었으며, 이는 링커의 부착에 더 잘 적응할 것으로 예측되었다(Ramanjulu, J.M. et al (2018) Nature 564:439-443; Barber, G.N. (2015) Nature Rev Immunol 15:760-770).
비스-벤즈이미다졸 링커 화합물
본 발명의 면역접합체는 비스-벤즈이미다졸-링커 화합물과 항체의 접합에 의해 제조된다. 비스-벤즈이미다졸-링커 화합물은 링커 단위(L)에 공유 부착된 비스-벤즈이미다졸(BBI) 모이어티를 포함한다. 링커 단위는 면역접합체의 안정성, 투과성, 용해도 및 기타 약동학, 안전성 및 효능 특성에 영향을 미치는 작용기 및 서브유닛을 포함한다. 링커 단위는 항체의 반응성 작용기와 반응, 즉, 접합하는 반응성 작용기를 포함한다. 예를 들어, 항체의 라이신 측쇄 아미노와 같은 친핵성기는 면역접합체를 형성하기 위해 BBI-링커 화합물의 친전자성 반응성 작용기와 반응한다. 또한, 예를 들어, 항체의 시스테인 티올은 면역접합체를 형성하기 위해 BBI-링커 화합물의 말레이미드 또는 브로모아세트아마이드기와 반응한다.
본 발명의 면역접합체 설계에 대한 고려사항은, (1) 생체내 순환 동안 비스-벤즈이미다졸(BBI) 모이어티의 조기 방출을 방지하는 것 및 (2) BBI 모이어티의 생물학적 활성 형태가 적절한 속도로 목적하는 작용 부위에서 방출되는 것을 보장하는 것을 포함한다. 기능적 특성과 함께 면역접합체의 복잡한 구조는 항체, 접합 부위, 링커 구조 및 비스-벤즈이미다졸 화합물을 포함하는 분자의 모든 구성성분의 세심한 설게 및 선택을 필요로 한다. 링커는 보조제 방출의 메커니즘과 속도를 결정한다.
일반적으로, 링커 단위(L)는 절단성 또는 비-절단성일 수 있다. 절단성 링커 단위는 펩타이드 링커 단위를 인식하고 절단하여 항체로부터 STING 효능제를 분리하는 카텝신과 같은 소정의 프로테아제에 대한 기질인 펩타이드 서열을 포함할 수 있다(Caculitan NG, et al (2017) Cancer Res. 77(24):7027-7037).
절단성 링커 단위는 산-민감성 이황화물 기와 같은 불안정한 기능을 포함할 수 있다(Kellogg, BA et al (2011) Bioconjugate Chem. 22, 717-727; Ricart, A. D. et al (2011) Clin. Cancer Res. 17, 6417-6427; Pillow, T., et al (2017) Chem. Sci. 8, 366-370; Zhang D, et al (2016) ACS Med Chem Lett. 7(11):988-993).
일부 실시형태에서, 링커는 생리학적 조건하에서 비-절단성이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생리학적 조건"은 섭씨 20 내지 40도의 온도 범위, 대기압(즉, 1 atm), 약 6 내지 약 8의 pH, 및 하나 이상의 생리학적 효소, 프로테아제, 산 및 염기를 지칭한다. 면역접합체에서 항체와 STING 효능제 간의 비절단성 링커의 한 가지 장점은 조기 페이로드 방출 및 상응하는 독성을 최소화하는 것이다. STING은 광범위하게 발현되는 수용체이므로, 특히 관련된 고려사항이다.
일 실시형태에서, 본 발명은, 프로테아제, 예컨대, 카텝신, 종양-관련 엘라스타제 효소 또는 프로테아제-유사 또는 엘라스타제-유사 활성을 가진 효소에 의해 선택적으로 절단될 수 있는 특정 아미노산 잔기의 선형 서열을 기반으로 하는 펩타이드 라디칼을 포함하는, 세포-결합제와 면역자극성 모이어티 사이의, 펩타이드 연결 단위, 즉, L 또는 링커를 포함한다. 펩타이드 라디칼은 약 2 내지 약 12개의 아미노산일 수 있다. 펩타이드 링커 내의 결합의 효소적 절단은 면역자극성 모이어티의 활성 형태를 방출한다. 이것은 본 발명에 따른 접합체의 조직 특이성의 증가, 따라서 다른 조직 유형에서 본 발명에 따른 접합체의 톡성의 추가적인 감소를 초래한다.
링커는 생물학적 배지, 예를 들어, 배양 배지 또는 혈청에서의 면역접합체의 충분한 안정성, 및 동시에, 면역자극성 모이어티, 즉, "페이로드"의 방출에 의한 특이적 효소적 또는 가수분해적 절단성의 결과로서 종양 조직 내의 목적하는 세포내 작용을 제공한다.
프로테아제, 카텝신 또는 엘라스타제의 효소 활성은 생리학적 조건 하에서 면역접합체의 공유 결합의 절단을 촉매할 수 있다. 효소 활성은 종양 조직과 관련된 세포의 발현 산물이다. 표적화 펩타이드의 절단 부위에 대한 효소 활성은 면역접합체를 표적화 펩타이드 및 연결기가 없는 활성 면역자극성 약물로 전환시킨다. 절단 부위는 효소에 의해 특이적으로 인식될 수 있다. 카텝신 또는 엘라스타제는 특정 펩타이드의 C-말단 아미노산 잔기와 면역접합체의 면역자극성 모이어티 간의 특정 펩타이드 결합의 절단을 촉매할 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명은, 글루쿠로니다제(Jeffrey SC, et al (2006) Bioconjug Chem. 17(3):831-40) 또는 설파타제(Bargh JD, et al (2020) Chem Sci. 11(9):2375-2380) 절단을 위한 기질을 포함하는, 세포-결합제와 면역자극성 모이어티 사이의 연결 단위, 즉, L 또는 링커를 포함한다. 특히, L은 Gluc 단위를 포함하고 하기로부터 선택된 화학식을 포함한다:
본 발명의 면역접합체의 구체적인 절단은 면역계의 종양 침윤 세포 및 백혈구-분비 효소의 존재를 이용하여, 종양 부위에서 항암 약물의 활성화를 촉진시킨다.
BBI-링커 화합물에 적합한 반응성 친전자성 반응성 작용기(화학식 II에서의 Q)는 N-하이드록시석신이미딜(NHS) 에스터 및 N-하이드록시설포석신이미딜(설포-NHS) 에스터(아민 반응성); 카보다이이미드(아민 및 카복실 반응성); 하이드록시메틸 포스핀(아민 반응성); 말레이미드(티올 반응성); 할로겐화된 아세트아마이드, 예컨대, N-아이오도아세트아마이드(티올 반응성); 아릴 아자이드(1차 아민 반응성); 플루오린화된 아릴 아자이드(탄소-수소(C-H) 삽입)을 통한 반응성; 펜타플루오로페닐(PFP) 에스터(아민 반응성); 테트라플루오로페닐(TFP) 및 설포테트라플루오로페닐(STP) 에스터(아민 반응성); 이미도에스터(아민 반응성); 아이소사이아네이트(하이드록실 반응성); 비닐 설폰(티올, 아민 및 하이드록실 반응성); 피리딜 다이설파이드(티올 반응성); 및 벤조페논 유도체(C-H 결합 삽입을 통한 반응성)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가의 시약은 문헌[Hermanson, Bioconjugate Techniques 2nd Edition, Academic Press, 2008]에 기술되어 있는 것들을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명은 면역접합체의 설계, 제조 및 용도에 대한 한계 및 도전에 대한 해결책을 제공한다. 프로테아제용 펩타이드 단위 및 기질을 포함하는 것과 같은 일부 링커는 혈류에서 불안정하여 표적 세포에서 내재화되기 전에 허용할 수 없는 양의 보조제/약물을 방출할 수 있다(Khot, A. et al (2015) Bioanalysis 7(13):1633-1648. 다른 링커는 혈류에 안정성을 제공할 수 있지만, 세포내 방출 효과는 부정적인 영향을 받을 수 있다. 목적하는 세포내 방출을 제공하는 링커는 전형적으로 혈류에서 불량한 안정성을 갖는다. 달리 말하면, 혈류 안정성 및 세포내 방출은 전형적으로 반비례한다. 또한, 표준 접합 과정에서, 항체에 로딩된 보조제/약물 모이어티의 양, 즉, 약물 로딩, 접합 반응에서 형성되는 응집체의 양 및 얻어질 수 있는 최종 정제된 접합체의 수율은 상호 관련되어 있다. 예를 들어, 응집체 형성은 일반적으로 항체에 접합된 보조제/약물 모이어티 및 이의 유도체의 당량 수와 양의 상관관계가 있다. 높은 약물 로딩하에, 형성된 응집체는 치료적 적용을 위해 제거되어야만 한다. 결과적으로, 약물 로딩-매개성 응집체 형성은 면역접합체 수율을 감소시키고, 공정 규모 확대를 어렵게 만들 수 있다.
예시적인 실시형태는 하기 화학식 II의 비스-벤즈이미다졸-링커 화합물을 포함한다:
식 중,
Xa 및 Xb는 독립적으로 R5로 선택적으로 치환된 5-원 헤테로아릴로부터 선택되고;
R1 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, -CN, -OH, -O-(C1-C6 알킬) 및 R5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2a 및 R2b는 독립적으로 H, -C(=O)N(R6)2 및 R5로부터 선택되고;
Xa, Xb, R1, R4, R2a 및 R2b 중 하나는 R5로 치환되고;
R3은, F, Cl, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C1-C6 알킬다이일, -(C1-C3 알킬다이일)-O-(C1-C3 알킬다이일)-, C2-C6 알켄일다이일 및 C2-C6 알킨일다이일로부터 선택되고;
R5는,
-(C1-C12 알킬다이일)-L;
-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-L;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-N(R6)-L;
-OC(=O)N(R6)-L;
-OC(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
-N(R6)-L;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-L;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
-C(=O)N(R6)-L;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-L;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L
로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
L은,
Q-C(=O)-PEG-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
Q-C(=O)-PEG-O-;
Q-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R5)-C(=O);
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-; 및
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-
로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고;
PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 하기 화학식을 갖고:
;
PEP는 하기 화학식을 갖고:
여기서 AA는 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄로부터 선택되거나, 또는 AA 중 하나 이상과, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는, F, Cl, NO2, -OH, -OCH3 및 하기 구조를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C6-C20 아릴다이일 및 C1-C20 헤테로아릴다이일로부터 선택되고:
;
R7은 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)- 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되되, R8은 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, R9는 독립적으로 H, C1-C12 알킬 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 선택되고, m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이거나, 2개의 R9기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고;
Q는 F, Cl, NO2 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된, N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드 및 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
알킬, 알킬다이일, 알켄일, 알켄일다이일, 알킨일, 알킨일다이일, 아릴, 아릴다이일, 카보사이클릴, 카보사이클릴다이일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴다이일, 헤테로아릴 및 헤테로아릴다이일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C*CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환된다.
예시적인 실시형태에서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 다이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는다:
.
예시적인 실시형태에서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 트라이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는다:
.
예시적인 실시형태에서, PEP는 트라이펩타이드이되, 여기서 AA1은 메틸이고, AA2는 프롤린을 형성하고, AA3은 아이소프로필이다.
예시적인 실시형태에서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩타이드이고 하기 화학식을 갖는다:
.
예시적인 실시형태에서, PEP는 테트라펩타이드이고, 여기서,
AA1은 Abu, Ala 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
예시적인 실시형태에서, PEP는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 아미노산 잔기로 구성된다:
및
.
예시적인 실시형태에서, PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, 및 WO 2021/226440에 기재된 바와 같은 기타 펩타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
예시적인 실시형태에서, PEP는 하기 화학식을 갖는다:
.
예시적인 실시형태에서, PEP는 하기 화학식을 갖는다:
.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 L이 하기 화학식을 포함하는 것을 포함한다:
.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 Q가 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 Q가 F, Cl, NO2 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페녹시인 것을 포함한다.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 Q가 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인 것을 포함한다.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 Q가 2,3,5,6-테트라플루오로-4-설포나토-페녹시인 것을 포함한다.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 Q가 말레이미드인 것을 포함한다.
STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 L이 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
비스-벤즈이미다졸인, STING 효능제-링커 중간 화합물의 예시적인 실시형태는 표 1a 및 표 1b에 나타낸다. 각각의 STING 효능제-링커 중간 화합물은 제조되고 질량 분광법에 의해 특성규명되었으며, 표시된 질량을 갖는 것으로 나타났다. 표 1a 및 표 1b의 STING 효능제-링커 중간 화합물은 항체에 접합된 경우 암 및 기타 장애를 치료하기 위한 유용한 치료적 활성을 예측할 수 있는 STING 효능제 선택성의 놀랍고도 예기치 않은 특성을 입증한다.
표 1a. 비스-벤즈이미다졸 -링커 (BBI-L) 화학식 II 화합물
표 1b. 비스-벤즈이미다졸 -링커 (BBI-L) 화학식 II 화합물
면역접합체
본 발명의 면역접합체는 골수 세포뿐만 아니라 STING 자체를 발현하는 종양 세포와 같은 면역 효과기 세포의 표적-특이적 활성화를 유도한다. 종양 표적화는 표적외 STING 활성화를 최소화하는 특이성을 야기하며, 면역접합체는 식균작용이 효과기 세포의 활성화뿐만 아니라 면역 복합체 흡수 및 후속 종양 항원 처리 및 제시도 증가시키게 한다.
면역접합체의 예시적인 실시형태는 링커에 의해 하나 이상의 STING 효능제인 비스-벤즈이미다졸(BBI) 모이어티에 공유 부착된 항체를 포함하고, 하기 화학식 I을 갖는 것 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
식 중,
Ab는 항체이고;
p는 1 내지 8의 정수이고;
D는 하기 화학식:
을 갖는 STING 효능제 모이어티이고;
Xa 및 Xb는 독립적으로 R5로 선택적으로 치환된 5-원 헤테로아릴로부터 선택되고;
R1 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, -CN, -OH, -O-(C1-C6 알킬) 및 R5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2a 및 R2b는 독립적으로 H, -C(=O)N(R6)2 및 R5로부터 선택되고;
Xa, Xb, R1, R4, R2a 및 R2b 중 하나는 R5로 치환되고;
R3은, F, Cl, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C1-C6 알킬다이일, -(C1-C3 알킬다이일)-O-(C1-C3 알킬다이일)-, C2-C6 알켄일다이일 및 C2-C6 알킨일다이일로부터 선택되고;
R5는,
-(C1-C12 알킬다이일)-*;
-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-*;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
-O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-N(R6)-*;
-OC(=O)N(R6)-*;
-OC(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
-N(R6)-*;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-*;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
-C(=O)N(R6)-*;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-*;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*
로 이루어진 군으로부터 선택되되; 여기서 별표 *는 L의 부착부위를 나타내고;
R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
L은,
-C(=O)-PEG-;
-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
-C(=O)-PEG-O-;
-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R5)-C(=O);
-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-; 및
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-
로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고;
PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 하기 화학식을 갖고:
;
PEP는 하기 화학식을 갖고:
여기서 AA는 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄로부터 선택되거나, 또는 AA 중 하나 이상과, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는, F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 하기 구조를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C6-C20 아릴다이일 및 C1-C20 헤테로아릴다이일로부터 선택되고:
;
R7은 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)- 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되되, R8은 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, R9는 독립적으로 H, C1-C12 알킬 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 선택되고, m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이거나, 2개의 R9기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고; 그리고
알킬, 알킬다이일, 알켄일, 알켄일다이일, 알킨일, 알킨일다이일, 아릴, 아릴다이일, 카보사이클릴, 카보사이클릴다이일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴다이일, 헤테로아릴 및 헤테로아릴다이일은, F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3 및 -S(O)3H로 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환된다.
항체는 종양-특이적 및/또는 면역-특이적 (예를 들어, PD-L1) 항원을 표적으로 하여, 면역접합체의 표적화에 특이성을 부여하여 안전한 전신 전달을 가능하게 한다
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 항체가 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물, 예컨대, 아테졸리주맙, 두르발루맙 및 아벨루맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 항체가 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물, 예컨대, 트라스투주맙 및 퍼투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 항체가 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물, 예컨대, 라베투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 특징으로 한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 항체가 Trop2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물, 예컨대, 사시투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 Xa 및 Xb가 독립적으로 이미다졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 퓨릴, 티엔일, 아이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴, 옥사졸릴, 아이소티아졸릴, 피롤릴, 옥사다이아졸릴 및 티아다이아졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 Xa 및 Xb가 각각 -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2 및 -CH2CH(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된 피라졸릴인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 Xa 및 Xb 중 하나가 R5로 치환되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R1이 -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH 및 -OCH2CH2N(CH3)2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R1이 -OCH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R1이 F인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R2a 및 R2b가 각각 -C(=O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R2a 및 R2b 중 하나가 R5로 치환되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R3이 -CH2CH2-, -CH=CH- 및 -C≡C-로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R3이 F, -OH 및 -OCH3로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된 C2-C4 알켄일다이일인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R4가 -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 C1-C12 알킬다이일이 프로필다이일이고, C2-C20 헤테로사이클릴다이일이 피페리다이일(piperidiyl)인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 R1 및 R4 중 하나가 R5로 치환되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 L이 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 L이 항체의 시스테인 티올에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, PEG에 대해서, m이 1 또는 2이고, n은 2 내지 10의 정수인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, PEG에 대해서, n이 10인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, L이 PEP를 포함하고, PEP가 다이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, L이 PEP를 포함하고, PEP가 트라이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, L이 PEP를 포함하고, PEP가 테트라펩타이드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는, L이 하기 화학식으로부터 선택된, Gluc를 포함하는 것을 포함한다:
.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 L이 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
본 발명은 화학식 I의 실시형태의 모든 합리적인 조합 및 특징의 순열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체 화합물은 면역자극 활성을 갖는 것들을 포함한다. 본 발명의 항체-약물 접합체는 유효 용량의 비스-벤즈이미다졸 약물을 종양 조직에 선택적으로 전달함으로써, 미접합 비스-벤즈이미다졸에 비해서 치료 지수("치료 창(therapeutic window)")를 증가시키면서 더 큰 선택성(즉, 더 낮은 유효 용량)이 달성될 수 있다.
약물 로딩은 화학식 I의 면역접합체에서 항체당 BBI 모이어티의 수인 p로 표시된다. 약물(BBI) 로딩은 항체당 1 내지 약 8의 약물 모이어티(D) 범위일 수 있다. 화학식 I의 면역접합체는 1 내지 약 8의 약물 모이어티 범위와 접합된 항체의 혼합물 또는 집합체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 라이신 및 시스테인과 같은 반응성 또는 이용 가능한 아미노산 측쇄 잔기의 수에 의해 제한된다. 일부 실시형태에서, 유리 시스테인 잔기는 본 명세서에 기재된 방법에 의해 항체 아미노산 서열에 도입된다. 이러한 양상에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 및 1 내지 8 또는 2 내지 5와 같은 이들의 범위일 수 있다. 임의의 이러한 양상에서, p 및 n은 동일하다(즉, p = n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이거나, 또는 그 사이의 일부 범위임). 화학식 I의 예시적인 면역접합체는 1개, 2개, 3개 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다(Lyon, R. et al. (2012) Methods in Enzym. 502:123-138). 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기가 공학을 사용하지 않고 사슬내 및 사슬간 이황화 결합(천연의 이황화 기)을 형성하는 항체에 이미 존재하며, 이 경우 기존 유리의 환원된 시스테인 잔기는 항체를 약물에 접합하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 항체의 접합 전에 환원 조건에 노출된다.
일부 면역접합체의 경우, p는 항체의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올인 경우, 본 명세서에 기재된 소정의 예시적인 실시형태에서와 같이, 항체는 단지 하나 또는 제한된 수의 시스테인 티올기를 가질 수 있거나, 또는 단지 하나 또는 제한된 수의 약물이 부착될 수 있는 충분히 반응성인 티올기를 가질 수 있다. 다른 실시형태에서, 항체에서 하나 이상의 라이신 아미노기가 이용 가능하며, 화학식 II의 BBI-링커 화합물과의 접합에 반응성일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 예를 들어, p가 5 초과인 더 높은 약물 로딩은 소정의 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포투과성의 손실을 야기할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 면역접합체에 대한 평균 약물 로딩은 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 또는 약 3 내지 약 5의 범위이다. 소정의 실시형태에서, 항체는 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵성기를 나타내기 위해 변성 조건에 적용된다.
면역접합체의 로딩(약물/항체 비)은, 예를 들어, (i) 항체에 대한 BBI-링커 중간체 화합물의 몰 과량의 제한, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도의 제한 및 (iii) 최적화된 항체 반응성을 위한 부분적 또는 제한적 환원성 변성 조건에 의해 상이한 방식으로 제어될 수 있다.
항체의 하나 이상의 친핵성기가 약물과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 면역접합체 화합물의 혼합물임을 이해하여야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 대해 특이적이며 약물에 대해 특이적인 이중 ELISA 항체 검정에 의하여 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 면역접합체 분자는 질량 분광법에 의해 혼합물에서 확인되며, HPLC, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다(예를 들어, 문헌[McDonagh et al. (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004] 참조). 소정의 실시형태에서, 단일 로딩 값을 갖는 균질한 면역접합체는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 실시형태는 표 2a 및 표 2b의 면역접합체로부터 선택된다. 시험관내 면역접합체 활성의 평가는 실시예 202의 방법에 따라서 수행될 수 있다.
STING 활성화는 IRF3(인터페론 조절 인자 3) 신호전달을 통해 I/III형 IFN(인터페론)의 유도와 정식으로 연관되어 있지만, NF-κB(활성화된 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서) 경로를 통해 TNFα(종양 괴사 인자 알파)와 같은 전염증성 사이토카인을 유도할 수도 있다. 소정의 면역접합체는, STING 활성화와 일관되게, IFNλ1(인터페론 람다 1)뿐만 아니라 TNFα를 유도하는 능력을 입증한다. 비교자로서, 트라스투주맙은 PBMC 종양 공배양 검정에서 본질적으로 TNFα 또는 IFNλ1을 유발하지 않았다(실시예 202).
표 2a BBI 면역접합체(IC)
표 2b BBI 면역접합체(IC)
면역접합체의 조성물
본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 복수의 면역접합체 및 선택적으로 이를 위한 담체, 예를 들어, 약제학적으로 또는 약리학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약제학적으로 또는 약리학적으로 허용 가능한 조성물 또는 제형을 제공한다. 면역접합체는 조성물에서 동일하거나 상이할 수 있으며, 즉, 조성물은 항체 작제물 상의 동일한 위치에 연결된 동일한 수의 BBI 보조제를 갖는 면역접합체 및/또는 항체 작제물 상의 상이한 위치에 연결된 동일한 수의 BBI 보조제를 갖거나, 항체 작제물 상의 동일한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 갖거나, 항체 작제물 상의 상이한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 갖는 면역접합체를 포함할 수 있다.
예시적인 실시형태에서, 면역접합체 화합물을 포함하는 조성물은 면역접합체 화합물의 혼합물을 포함하되, 면역접합체 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물(BBI) 로딩은 약 2 내지 약 5이다.
본 발명의 면역접합체의 조성물은 약 0.4 내지 약 10의 평균 보조제 대 항체 작제물 비(drug to antibody ratio: DAR)를 가질 수 있다. 당업자라면 항체 작제물에 접합된 BBI 보조제의 수가 본 발명의 다중 면역접합체를 포함하는 조성물에서 면역접합체마다 다를 수 있으므로, 보조제 대 항체 작제물(예를 들어, 항체) 비는 약물 대 항체 비(DAR)로 지칭될 수 있는 평균으로 측정될 수 있음을 인식할 것이다. 보조제 대 항체 작제물(예를 들어, 항체) 비는 임의의 적합한 수단에 의해 평가될 수 있으며, 이들 중 다수는 당업계에 공지되어 있다.
접합 반응으로부터 면역접합체의 제조에서 항체당 보조제 모이어티의 평균 수(DAR)는 질량 분석법, ELISA 검정 및 HPLC와 같은 종래의 수단에 의해 특성화될 수 있다. p와 관련하여 조성물에서 면역접합체의 정량적 분포가 또한 결정될 수 있다. 일부 예에서, p가 다른 약물 로딩을 갖는 면역접합체로부터의 소정의 값인 균질한 면역접합체의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 또는 약리학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 IV 투여, 또는 장기의 체강(body cavity) 또는 내강(lumen)으로의 투여와 같은 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 대안적으로, 면역접합체는 종양으로(종양 내로) 주사될 수 있다. 주사용 조성물은 일반적으로 약제학적으로 허용 가능한 담체에 용해된 면역접합체의 용액을 포함할 것이다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물 및 소듐 클로라이드와 같은 하나 이상의 염의 등장성 용액, 예를 들어, 링거 용액이 있다. 또한, 멸균 고정유가 전통적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이를 위해, 합성 모노글리세리드 또는 다이글리세리드를 포함하여 임의의 무자극성 고정유가 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에서 마찬가지로 사용될 수 있다. 이들 조성물은 바람직하게는 멸균되고, 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 없다. 이들 조성물은 종래의 잘 알려진 멸균 기법에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 소듐 락테이트 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약제학적으로 허용 가능한 보조 물질을 포함할 수 있다.
조성물은 임의의 적합한 농도의 면역접합체를 포함할 수 있다. 조성물 내 면역접합체의 농도는 광범위하게 변할 수 있고, 이는 주로 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. 소정의 실시형태에서, 주사용 용액 제형 내 면역접합체의 농도는 약 0.1%(w/w) 내지 약 10%(w/w)의 범위일 것이다.
면역접합체로 암을 치료하는 방법
본 발명은 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 바와 같은 면역접합체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물)를 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암이 있고 암에 대한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 방법은 표 2로부터 선택되는 치료학적 유효량의 면역접합체(IC)를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 면역접합체는, 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 과증식성 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있는 것으로 상정된다. 예시적인 과증식성 장애는 양성 또는 악성 고형 종양 및 백혈병 및 림프성 악성종양과 같은 혈액학적 장애를 포함한다.
또 다른 양상에서, 약제로서 사용하기 위한 면역접합체가 제공된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명은 유효량의 면역접합체를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 면역접합체를 제공한다. 하나의 이러한 실시형태에서, 방법은 유효량의, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 더 포함한다.
추가의 양상에서, 본 발명은 약제의 제조 또는 준비에서의 면역접합체의 용도를 제공한다. 일 실시형태에서, 약제는 암의 치료를 위한 것으로, 방법은 유효량의 약제를 암이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 이러한 실시형태에서, 방법은 유효량의, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 더 포함한다.
암종은 상피 조직에서 발생하는 악성종양이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고, 내부 공동을 감싸며, 선 조직의 내벽을 형성한다. 암종의 예는 선암종(유방, 췌장, 폐, 전립선, 위, 위식도 접합부 및 결장의 암과 같은 선(분비) 세포에서 시작하는 암) 부신피질 암종; 간세포암종; 신세포 암종; 난소 암종; 제자리 암종; 도관 암종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장암종; 비인두 암종; 다방성 낭포성 신세포 암종; 귀리세포 암종; 대세포 폐암종; 소세포 폐암종; 비-소세포 폐암종; 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌(일반적으로 2차 전이로), 폐, 유방 및 피부에서 발견될 수 있다.
연조직 종양은 결합 조직으로부터 유래되는 매우 다양한 희귀 종양의 그룹이다. 연조직 종양의 예는 폐포 연부 육종; 혈관종 섬유성 조직구종; 연골점액유사 섬유종; 골격 연골육종; 골격외 점액성 연골육종; 투명 세포 육종; 섬유조직형성 작은 원형-세포 종양; 융기성 피부섬유육종; 자궁내막 기질 종양; 유잉 육종; 섬유종증(유건종); 소아형 섬유육종; 위장관 기질 종양; 뼈 거대 세포 종양; 건활막 거대 세포 종양; 염증성 근섬유아세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방아세포종; 전형적 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비전형적 지방종; 연골 지방종; 잘 분화된 지방육종; 점액질/원형 세포 지방육종; 다형성 지방육종; 점액질 악성 섬유성 조직구종; 고등급 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말단 신경초 종양; 중피종; 신경아세포종; 뼈연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 폐포 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 양성 또는 악성 신경초종; 활액 육종; 에반스 종양; 결절성 근막염; 유건종-유형 섬유종증; 고립성 섬유성 종양; 융기성 피부섬유육종(dermatofibrosarcoma protuberans: DFSP); 혈관육종; 상피성 혈관내피종; 건활막 거대 세포 종양(tenosynovial giant cell tumor: TGCT); 색소성 융모결절성 활막염(pigmented villonodular synovitis: PVNS); 섬유성 이형성증; 점액섬유육종; 섬유육종; 활액 육종; 악성 말단 신경초 종양; 신경섬유종; 연조직의 다형성 선종; 및 섬유아세포, 근섬유아세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포 및 신경초 세포로부터 유래되는 신생물 형성을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
육종은 중간엽 기원의 세포, 예를 들어, 뼈, 또는 연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유성 조직 또는 기타 결합 또는 지지 조직을 포함하는 신체의 연조직에서 발생하는 드문 유형의 암이다. 다양한 유형의 육종은 암이 형성되는 위치에 따라 다르다. 예를 들어, 골육종은 뼈에서 발생하고, 지방육종은 지방에서 발생하며, 횡문근육종은 근육에서 발생한다. 육종의 예는 아스킨 종양; 포도상 육종; 연골육종; 유잉 육종; 악성 혈관내피종; 악성 신경초종; 골육종; 및 연조직 육종(예를 들어, 폐포 연부 육종; 혈관육종; 낭포육종 엽상 융기성피부섬유육종(cystosarcoma phyllodesdermatofibrosarcoma protuberans: DFSP); 유건종 종양; 섬유조직형성 작은 원형 세포 종양; 상피성 육종; 골격외 연골육종; 골격외 골육종; 섬유육종; 위장관 기질 종양(gastrointestinal stromal tumor: GIST); 혈관외피세포종; 혈관육종(hemangiosarcoma)(보다 일반적으로는 "혈관육종(hemangiosarcoma)"으로 지칭됨); 카포시 육종; 평활근육종; 지방육종; 림프관육종; 악성 말단 신경초 종양(malignant peripheral nerve sheath tumor: MPNST); 신경섬유육종; 활액 육종; 및 미분화 다형성 육종)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
기형종은, 예를 들어, 머리카락, 근육 및 뼈를 포함하는 여러 다양한 유형의 조직(예를 들어, 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 세 가지 배엽 중 어느 하나 및/또는 전부에서 유래되는 조직을 포함할 수 있음)을 포함할 수 있는 생식 세포 종양의 한 유형이다. 기형종은 여성의 난소, 남성의 고환 및 어린이의 꼬리뼈에서 가장 흔하게 발생한다.
흑색종은 멜라닌 세포(멜라닌 색소를 만드는 세포)에서 시작되는 암의 한 형태이다. 흑색종은 점(피부 흑색종)에서 시작될 수 있지만, 눈 또는 장과 같은 다른 색소성 조직에서도 시작될 수 있다.
메르켈 세포 암종은 일반적으로 얼굴, 머리 또는 목에서 살색 또는 청적색 결절로 나타나는 드문 유형의 피부암이다. 메르켈 세포 암종은 또한 피부의 신경내분비 암종이라고도 한다. 일부 실시형태에서, 메르켈 세포 암종을 치료하는 방법은 Trop2에 결합할 수 있는 항체 작제물(예를 들어, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 이의 바이오시밀러 또는 이의 바이오베터)을 포함하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 메르켈 세포 암종은 투여가 일어날 때 전이되었다.
백혈병은 골수와 같은 혈액 형성 조직에서 시작하여 많은 수의 비정상적 혈액 세포가 생성되어 혈류로 들어가서 발생하는 암이다. 예를 들어, 백혈병은 혈류에서 정상적으로 성숙하는 골수-유래 세포에서 발생할 수 있다. 백혈병은 질환이 얼마나 빠르게 발병하고 진행되는지(예를 들어, 급성 대 만성) 및 영향을 받는 백혈구의 유형(예를 들어, 골수 대 림프구)에 따라 명명된다. 골수성 백혈병은 또한 골수성 또는 골수아구성 백혈병이라고도 한다. 림프성 백혈병은 림프아구성 또는 림프구성 백혈병이라고도 한다. 림프성 백혈병 세포는 림프절에 모여서 부어 오를 수 있다. 백혈병의 예는 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia: AML), 급성 림프아구성 백혈병(Acute lymphoblastic leukemia: ALL), 만성 골수성 백혈병(Chronic myeloid leukemia: CML) 및 만성 림프구성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia: CLL)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
림프종은 면역계의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 림프계에서 정상적으로 성숙하는 골수-유래 세포에서 발생할 수 있다. 림프종에는 두 가지 기본 범주가 있다. 림프종의 한 범주는 리드-스턴버그 세포(Reed-Sternberg cell)라 불리는 세포 유형의 존재로 표시되는 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma: HL)이다. 현재 6개의 인정된 유형의 HL이 있다. 호지킨 림프종의 예는 결절성 경화증 고전적 호지킨 림프종(classical Hodgkin lymphoma: CHL), 혼합 세포성 CHL, 림프구-고갈 CHL, 림프구-풍부 CHL 및 결절성 림프구 우세 HL을 포함한다.
림프종의 다른 범주는 면역계 세포의 크고 다양한 암의 그룹을 포함하는 비-호지킨 림프종(NHL)이다. 비-호지킨 림프종은 무통성(indolent)(느리게 성장하는) 과정이 있는 암과 공격적(빠르게 성장하는) 과정이 있는 암으로 더 나뉠 수 있다. 현재 61개의 인정된 유형의 NHL이 있다. 비-호지킨 림프종의 예는 AIDS-관련 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관면역아세포성 림프종, 아세포성 NK-세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷-유사 림프종(소형 비절단 세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소형 림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마-델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프아구성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 비강 T-세포 림프종, 소아 림프종, 말단 T-세포 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 형질전환된 림프종, 치료-관련 T-세포 림프종 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
뇌암은 뇌 조직의 임의의 암을 포함한다. 뇌암의 예는 신경교종(예를 들어, 교아세포종, 성상세포종, 희소돌기신경교종, 뇌실막종 등), 수막종, 뇌하수체샘종 및 청신경 신경초종, 원시 신경외배엽 종양(수아세포종)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체는 요법에서 단독으로 또는 다른 작용제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역접합체는 화학치료제와 같은 적어도 하나의 추가적인 치료제와 공동-투여될 수 있다. 이러한 조합 요법은 병용 투여(2개 이상의 치료제가 동일한 또는 별도의 제형에 포함되는 경우) 및 개별 투여를 포함하며, 이 경우, 면역접합체의 투여는 추가적인 치료제 및/또는 보조제의 투여 이전에, 동시에 그리고/또는 후에 일어날 수 있다. 면역접합체는 또한 방사선 요법과 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명의 면역접합체(및 임의의 추가적인 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하여 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국부 치료가 필요한 경우, 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 투여가 단기인지 또는 장기인지 여부에 따라 임의의 적합한 경로, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본 명세서에서 상정된다.
본 명세서에 기재된 면역접합체는 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 이의 바이오시밀러 및 이의 바이오베터로서 동일한 유형의 암, 특히 유방암, 특히 삼중 음성(에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과잉 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암, 방광암 및 메르켈 세포 암종을 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 면역접합체는 방광암, 침샘암, 자궁내막암, 요로암, 요로상피 암종, 폐암, 비소세포 폐암, 머켈세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암 및 유방암의 치료에 유효할 수 있다.
면역접합체는 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 이의 바이오시밀러 및 이의 바이오베터에 사용되는 투여 양생법과 같은 임의의 적합한 투여 양생법을 사용하여 임의의 치료학적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 방법은 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 대상체에게 제공하기 위해 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100 μg/kg, 200 μg/kg, 300 μg/kg, 400 μg/kg 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여에서 다회 투여 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역접합체는 1개월에 1회 내지 1주일에 약 5회 투여된다. 일부 실시형태에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 암을 예방하는 방법을 제공한다. 방법은 치료학적 유효량의 면역접합체(예를 들어, 위에 기재된 바와 같은 조성물)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 예방될 소정의 암에 취약하다. 예를 들어, 방법은 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 대상체에게 제공하기 위해 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100 μg/kg, 200 μg/kg, 300 μg/kg, 400 μg/kg 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여에서 다회 투여 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역접합체는 1개월에 1회 내지 1주일에 약 5회 투여된다. 일부 실시형태에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
본 발명의 일부 실시형태는 위에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법을 제공하되, 암은 유방암이다. 유방암은 유방의 다양한 부위에서 발생할 수 있으며, 다양한 유형의 유방암이 특성화되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 도관 제자리 암종; 침윤성 도관 암종(예를 들어, 세관 암종; 수질 암종; 점액 암종; 유두상 암종; 또는 사상엽 유방 암종); 소엽 제자리 암종; 침습성 소엽 암종; 염증성 유방암; 및 삼중 음성(에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과잉의 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암과 같은 다른 형태의 유방암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 암은 STING에 의해 유도된는 전염증성 반응에 민감하다.
실시예
비스-벤즈이미다졸 -링커(BBI-L) 화학식 II 화합물 및 중간체의 제조
실시예 3 (2E)-1-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸 -3-카보닐)이미노-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 3의 합성
4-클로로-3-메톡시-5-나이트로-벤즈아마이드, 3b의 제조
NH3·H2O(136.5g, 973.7 mmol, 150mL, 25% 순도, 16.0 eq) 중 메틸 4-클로로-3-메톡시-5-나이트로-벤조에이트, 3a(15g, 61.0 mmol, 1 eq)의 용액을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 케이크를 물(300mL)로 세척하였다. 케이크를 감압하에 건조시켜 3b(11g, 47.70 mmol, 78.11% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.29 (s, 1H), 8.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.02 (s, 3H).
4-클로로-3-하이드록시-5-나이트로-벤즈아마이드, 3c의 제조
DCM(100mL) 중 3b(6g, 26.0 mmol, 1 eq)의 용액에 AlCl3(21.0g, 156 mmol, 8.50mL, 6 eq)를 첨가하고, 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 0℃에서 aq 2M HCl 50 mL의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 15℃에서 30분 동안 교반하고, EtOAc(50mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 3c(4g, 조질물)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.52 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H).
3-[3-[tert-부틸(다이메틸)실릴]옥시프로폭시]-4-클로로-5-나이트로-벤즈아마이드, 3d의 제조
THF(250mL) 중 3-브로모프로판-1-올(25g, 180.0 mmol, 16.0mL, 1 eq)의 혼합물에 이미다졸(25.0g, 360 mmol, 2 eq) 및 TBSCl(32.6g, 216 mmol, 26.50mL, 1.2 eq)을 첨가하고, 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(300mL)로 희석시키고, EtOAc(100mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 70g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배, 100 mL/분에서)에 의해 정제시켜 3-브로모프로폭시-tert-부틸-다이메틸-실란(43g, 170 mmol, 94.40% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.11-1.99 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
DMF(200mL) 중 3-브로모프로폭시-tert-부틸-다이메틸-실란(19.8g, 78.0 mmol, 1.3 eq)의 용액에 3c(13g, 60.0 mmol, 1 eq) 및 K2CO3(16.60g, 120.0 mmol, 2 eq)를 15℃에서 첨가하고, 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(600mL)로 희석시키고, EtOAc(200mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(200mL×3)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 35g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~50% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배, 65 mL/분에서)에 의해 정제시켜 3d(24g, 조질물)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.28 (s, 1H), 8.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 4.29 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.01-1.93 (m, 2H), 0.83 (s, 9H), 0.01 (s, 6H).
4-클로로-3-(3-하이드록시프로폭시)-5-나이트로-벤즈아마이드, 3e의 제조
MeOH(300mL) 중 3d(24g, 61.7 mmol, 1 eq)의 용액에 아세틸 클로라이드(48.4g, 617 mmol, 44.0mL, 10 eq)를 첨가하고, 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물의 pH를 고체 NaHCO3를 점차적으로 첨가함으로써 대략 ~8로 조정하고, 이어서 여과시키고, 농축시켜 3e(15g, 54.61 mmol, 88.50% 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.35 (br s, 1H), 8.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 4.64 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.64-3.52 (m, 2H), 1.97-1.89 (m, 2H).
3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필 4-메틸벤젠설포네이트, 3f의 제조
THF(150mL) 중 3e(15g, 54.6 mmol, 1 eq)의 용액에 Et3N(27.6g, 273 mmol, 38.0mL, 5 eq), DMAP(667mg, 5.5 mmol, 0.1 eq) 및 TsCl(11.60g, 164 mmol, 3 eq)을 첨가하고, 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(300mL)로 희석시키고, EtOAc(100mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~80% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배, 45 mL/분에서)에 의해 정제시켜 3f(20g, 46.6 mmol, 85.39% 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.28 (s, 1H), 8.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75-7.69 (m, 3H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.22 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.15-2.07 (m, 2H).
tert-부틸 4-[3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필] 피페라진-1-카복실레이트, 3g의 제조
THF(150mL) 중 3f(13.5g, 31.5 mmol, 1 eq)의 용액에 Et3N(6.40g, 63.0 mmol, 8.80mL, 2 eq) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트;염산염(9.80g, 44.0 mmol, 1.4 eq)을 첨가하고, 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(300mL)로 희석시키고, EtOAc(100mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 20g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0 내지 80% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배, 45 mL/분에서)에 의해 정제시켜 3g(10g, 22.58 mmol, 71.72% 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.28 (br s, 1H), 8.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.77 (br s, 1H), 4.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.30 (br t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.48-2.44 (m, 2H), 2.32 (br t, J = 4.8 Hz, 4H), 1.95 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.39 (s, 9H).
2-[(E)-4-브로모부트-2-엔일]아이소인돌린-1,3-다이온, 3h의 제조
DMF(300mL) 중 (1,3-다이옥소아이소인돌린-2-일)칼륨(33.6g, 181 mmol, 0.8 eq)의 용액에 (E)-1,4-다이브로모부트-2-엔(48.5g, 227 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(1000mL)로 희석시키고, EtOAc(500mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(300mL×3)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 100g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0 내지 60% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 65 mL/분)에 의해 정제시켜 2-[(E)-4-브로모부트-2-엔일]아이소인돌린-1,3-다이온(50g, 178 mmol, 78.72% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.89-7.83 (m, 2H), 7.77-7.69 (m, 2H), 6.00-5.90 (m, 1H), 5.88-5.79 (m, 1H), 4.35-4.28 (m, 2H), 3.93-3.88 (m, 2H).
tert-부틸 N-tert-부톡시카보닐-N-[(E)-4-(1,3-다이옥소아이소인돌린-2-일)부트-2-엔일]카바메이트, 3i의 제조
DMF(500mL) 중 3h(50g, 178 mmol, 1 eq)의 용액에 Cs2CO3(87.2g, 268 mmol, 1.5 eq) 및 tert-부틸 N-tert-부톡시카보닐카바메이트(50.0g, 232 mmol, 1.3 eq)를 첨가하고, 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(2000mL)로 희석시키고, EtOAc(500mL×3)로 추출하였다. 유기층을 염수(500mL×3)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 100g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0 내지 70% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배, 65 mL/분에서)에 의해 정제시켜 3i(46.5g, 112 mmol, 62.55% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.87-7.82 (m, 2H), 7.75-7.69 (m, 2H), 5.82-5.63 (m, 2H), 4.27 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.14 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 18H).
tert-부틸 N-[(E)-4-아미노부트-2-엔일]-N-tert- 부톡시카보닐-카바메이트, 3j의 제조
MeOH(500mL) 중 3i(46.5g, 112 mmol, 1 eq)의 용액에 하이드라진;수화물(19.7g, 335 mmol, 19.0mL, 85% 순도, 3 eq)를 20℃에서 첨가하고, 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 조질의 생성물을 MTBE로 15℃에서 20분 동안 분쇄하고, 여과액을 농축시켜 3j(33g, 조질물)를 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 5.79-5.69 (m, 1H), 5.66-5.55 (m, 1H), 4.15 (dd, J = 6.0, 1.2 Hz, 2H), 3.29 (dd, J = 5.6, 1.2,Hz, 2H), 1.50 (s, 18H)
tert-부틸 N-[(E)-4-(4-카바모일-2-메톡시-6-나이트로-아닐리노)부트-2- 엔일]카바메이트, 3k의 제조
DIEA(11.21g, 86.73 mmol, 15.11mL, 4.0 eq)(순수 반응) 중 4-클로로-3-메톡시-5-나이트로-벤즈아마이드, 3b(5g, 21.7 mmol, 1.0 eq) 및 3j(18.6g, 65.1 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 110℃에서 5.5시간 동안 교반하였다. 이어서 이 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(100mL)를 첨가하고, 10분 동안 교반하고, 이어서 얼음물(100mL)에 붓고 10분 동안 교반하고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체를 석출시키고, 이어서 여과시켜 3k(10g, 조질물)를 오렌지색 고체로서 제공하였다.
4-[[(E)-4-아미노부트-2-엔일]아미노]-3-메톡시-5-나이트로-벤즈아마이드, 3l의 제조
EtOAc(80mL) 중 3k(10g, 26.29 mmol, 1 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc(4M, 197mL, 30 eq)를 15℃에서 첨가하고, 이어서 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 3l(8.5g, 24.07 mmol, 91.54% 수율, 2HCl)을 적색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 8.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.05 (s, 4H), 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.91-5.84 (m, 1H), 5.66-5.61 (m, 1H), 4.17 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
tert-부틸 4-[3-[5-카바모일-2-[[(E)-4-(4-카바모일-2-메톡시-6-나이트로 -아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-3-나이트로-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3m의 제조
부탄-1-올(106.00mL) 중 3l(5.31g, 15.0 mmol, 1.26 eq, 2HCl)의 용액에 NaHCO3(5.03g, 59.8 mmol, 2.33mL, 5 eq) 및 DIEA(7.73g, 59.8 mmol, 10.4mL, 5 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 tert-부틸 4-[3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필] 피페라진-1-카복실레이트, 3g(5.3g, 11.97 mmol, 1 eq)를 20℃에서 N2하에 첨가하고, 이 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 진공 중 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 EtOAc(200mL) 및 얼음물(200mL)로 희석시키고, 10분 동안 교반하였다. 석출물을 여과시켜 3m(14g, 조질물)을 적색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.15 (dd, J = 5.6, 1.6 Hz, 2H), 8.03 (s, 2H), 7.81-7.65 (m, 3H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.33 (s, 2H), 5.65-5.55 (m, 2H), 4.12-4.10 (m, 2H), 4.08-3.97 (m, 4H), 3.81 (s, 3H), 3.30-3.27 (m, 4H), 2.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.31-2.24 (m, 4H), 1.93-1.82 (m, 2H), 1.38 (s, 9H).
tert-부틸 4-[3-[3-아미노-2-[[(E)-4-(2-아미노-4-카바모일-6-메톡시- 아닐리노부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3n의 제조
MeOH(50mL), THF(50mL) 및 H2O(10mL) 중 3m(10.5g, 15.0 mmol, 1 eq)의 용액에 NaHCO3(6.5g, 76.0 mmol, 3.0mL, 5 eq) 및 다이나트륨 다이티오나이트, Na2S2O4(40.0g, 229 mmol, 15 eq)를 첨가하고, 20℃에서 5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(200mL)로 희석시키고, DCM:i-PrOH = 3:1(100mL×6)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 3n(4.6g, 7.34 mmol, 48.00% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 6.94-6.91 (m, 2H), 6.88-6.83 (m, 2H), 5.77-5.64 (m, 2H), 4.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.59 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.56 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.51 (br s, 4H), 2.89-2.64 (m, 6H), 2.11-2.02 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)
2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트의 제조
DCE(60mL) 중 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카복실산(6g, 39.0 mmol, 1 eq)의 용액에 티오닐 클로라이드, SOCl2(23.0g, 195 mmol, 14.0mL, 5 eq)를 0℃에서 N2하에 첨가하고, 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 클로라이드(8g, 조질물)를 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.91 (s, 1H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
아세톤(20mL) 중 티오사이아나토포타슘(4.0g, 41.7 mmol, 4.0mL, 1.2 eq)의 용액에 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 클로라이드(6g, 34.8 mmol, 1 eq)를 N2하에 첨가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 10g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~40% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 45 mL/분)에 의해 정제시켜 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트(5.5g, 28.17 mmol, 81.04% 수율)를 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.73 (s, 1H), 4.50 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3o의 제조
DMF(5mL) 중 3n(500mg, 798 umol(micromoles), 1 eq) 및 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트(327mg, 1.68 mmol, 2.1 eq)의 용액을 30분 0℃에서 교반하고, 이어서 Et3N(565mg, 5.60 mmol, 777uL, 7 eq) 및 EDCI(765.0mg, 4.0 mmol, 5 eq)를 첨가하고, 이 혼합물을 15℃에서 더욱 12시간 동안 교반하였다. 잔사를 포화 수성 NaHCO3(30mL)에 붓고, 여과시키고, 케이크를 H2O(10mL×3)로 세척하고, 건조시켜 조질의 생성물을 제공하였다. 조질의 생성물을 CH3CN으로 20℃에서 20분 동안 분쇄하여 3o(500mg, 527 umol, 66.04% 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.58 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 7.29-7.17 (m, 2H), 6.63-6.52 (m, 2H), 5.89-5.76 (m, 2H), 5.00 (br dd, J = 4.4, 8.8 Hz, 4H), 4.64-4.55 (m, 4H), 3.89 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.37-3.33 (m, 4H), 2.39-2.33 (m, 2H), 2.29-2.26 (m, 4H), 2.03 (s, 6H), 1.78-1.67 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.38-1.32 (m, 6H).
3의 제조
EtOAc(10mL) 중 3o(50mg, 47.0 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 11.0mL)를 첨가하고, 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시키고, 이어서 냉동-건조시켜 3(39mg, 42.3 umol, 89.95% 수율, 2HCl)을 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 6.00 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.88-5.78 (m, 1H), 5.13 (br d, J = 6.4 Hz, 4H), 4.69-4.59 (m, 4H), 4.19-4.07 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.69 (br s, 8H), 3.43-3.37 (m, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.22-2.15 (m, 2H), 1.44-1.35 (m, 6H). HPLC: 95.099 % (220 nm). LCMS (ESI): C42H52N14O6에 대한 질량 계산치 848.42, m/z 실측치 849.4 [M+H]+
실시예 L-1 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2- [2-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, BBI-L-1의 합성
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(4-나이트로페녹시)카보닐옥시에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트의 제조
DCM(100mL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-하이드록시에톡시)에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트(5g, 8.52 mmol, 1 eq) 및 (4-나이트로페닐) 카보노클로리데이트(1.89g, 9.37 mmol, 1.1 eq)의 혼합물에 피리딘(1.01g, 12.8 mmol, 1.03mL, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가하고, 이어서 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 얼음물(w/w = 1/1)(100mL)에 붓고, 10분 동안 교반하고, 혼합물의 pH를 HCl(1M)로 약 4로 조정하였다. 수성상을 DCM(50mL×2)으로 추출하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메시 실리카겔, 석유 에터/에틸 아세테이트=1/0, 0/1, 에틸 아세테이트/메탄올=1/0,2/1)에 의해 정제시켜 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(4-나이트로페녹시)카보닐옥시에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트(3g, 3.99 mmol, 46.82% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz, MeOD)δ 8.36-8.28 (m, 2H), 7.54-7.46 (m, 2H), 4.46-4.40 (m, 2H), 3.83-3.77 (m, 2H), 3.72-3.57 (m, 40H), 1.45(s, 9H)
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3 -[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-1a의 제조
MeOH(5mL) 중 (2E)-1-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐) 이미노-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 3 (70mg, 79.1 umol, 1 eq, HCl) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(4-나이트로페녹시)카보닐옥시에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트(55.5mg, 94.8 umol, 1.2 eq)의 혼합물에 NaBH3CN(14.9mg, 237 umol, 3 eq)을 15℃에서 한번에 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 이것을 35℃에서 감압에서 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 10%-40%,10분)에 의해 정제시켜 L-1a(80mg, 56.43 umol, 71.38% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)-4 -[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-1b의 제조
H2O(2mL) 중 L-1a(80mg, 52.2 umol, 1 eq, TFA)의 혼합물에 HCl(12M, 65.3uL, 15 eq)을 15℃에서 첨가하였다. 이 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 50℃에서 감압에서 농축시켜 L-1b(80mg, 조질물, HCl)를 연황색 오일로서 제공하였다.
BBI-L-1의 제조
DCM(0.3mL) 및 DMA(0.03mL) 중 L-1b(68.1mg, 50.07 umol, 1 eq, HCl)의 혼합물에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀(66.5mg, 400 umol, 8 eq) 및 EDCI(96.0mg, 501 umol, 10 eq)를 15℃에서 한번에 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서 이것을 35℃에서 감압에서 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um (미크론); 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-1(17.4mg, 10.72 umol, 21.40% 수율, TFA)을 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.63 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.48-7.37 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.10-5.00 (m, 4H), 4.74-4.55 (m, 4H), 4.00 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.89-3.82 (m, 4H), 3.78 (s, 3H), 3.73-3.56 (m, 42H), 3.28-3.21 (m, 2H), 3.15 (, 2H), 2.97 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.63-2.55 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.79-1.77 (m 2H), 1.44-1.32 (m, 6H). HPLC: 96.08 % (220 nm). LCMS (ESI): C71H96F4N14O16에 대한 질량 계산치1508.70, m/z 실측치 1509.5 [M+H]+
실시예 L-3 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일 옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, BBI-L-3의 합성
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일 -3-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-3a의 제조
DMF(3.00mL) 중 (2E)-1-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 3(180mg, 203 umol, 1 eq, HCl)의 용액에 Et3N(82.0mg, 813 umol, 113uL, 4 eq) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(3-tert-부톡시-3-옥소-프로폭시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트(171mg, 223 umol, 1.1 eq)를 첨가하고, 이어서 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)에 의해 정제시켜 L-3a(280mg, 194 umol, 95.3 % 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-3b의 제조
H2O(3.00mL) 중 L-3a(280mg, 194 umol, 1 eq)의 용액에 HCl(12M, 0.20mL, 12.4 eq)을 첨가하고, 이어서 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 10%-30%, 8분)에 의해 정제시켜 L-3b(100mg, 66.51 umol, 34.34% 수율, TFA)를 연황색 고체로서 제공하였다.
BBI-L-3의 제조
DCM(2.00mL) alc DMA(0.10mL) 중 L-3b(100mg, 71.9 umol, 1 eq) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-페닐)설포닐옥시나트륨(77.0mg, 288 umol, 4 eq)의 용액에 EDCI(55.0mg, 288 umol, 4 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-3(28mg, 16.17 umol, 22.47% 수율, TFA)을 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66-7.58 (m, 2H), 7.28 (br d, J = 14.0 Hz, 2H), 6.60 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 5.85-5.78 (m, 2H), 5.06-4.97 (m, 4H), 4.70-4.51 (m, 4H), 4.34-4.23 (m, 2H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.86-3.80 (m, 2H), 3.78-3.66 (m, 5H), 3.64-3.47 (m, 38H), 3.38-3.32 (m, 2H), 3.18-3.07 (m, 2H), 2.94 (br t, J = 5.6 Hz, 6H), 2.57-2.45 (m, 2H), 2.28-2.14 (m, 6H), 2.10-2.03 (m, 2H), 1.43-1.30 (m, 6H). HPLC: 96.21% (220 nm), 97.95% (254 nm). LCMS (ESI): C72H96F4N14O22S에 대한 질량 계산치 1616.65, m/z 실측치 1617.5 [M+H]+.
실시예 L-9 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4- [5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-일]에틸카바모일옥시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, BBI-L-9의 합성
tert-부틸 N-[2-[4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2- [(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-일]에틸]카바메이트, L-9a의 제조
MeOH(20mL) 중 1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐) 아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 3(530mg, 496 umol, 1.0 eq, 2HCl) 및 tert-부틸 N-(2-옥소에틸)카바메이트(395mg, 2.48 mmol, 5.0 eq)의 용액에 아세트산, AcOH(2.98mg, 49.6 umol, 2.84uL, 0.1 eq)를 첨가하고, 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 나트륨 사이아노보로하이드라이드, NaBH3CN(62.4mg, 993 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 이 혼합물을 20℃에서 더욱 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 H2O(1mL)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 혼합물의 pH를 포화 NaHCO3로 8로 조정하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(10mL×5)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(20mL×1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 중 농축시켰다. 조질의 생성물을 MTBE로 20℃에서 10분동안 분쇄하여 L-9a(600mg, 450 umol, 90.60% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1-[(E)-4-[7-[3-[4-(2-아미노에틸)피페라진-1-일]프로폭시]-5-카바모일 -2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-9b의 제조
EtOAc(1mL) 중 L-9a(20mg, 20.2 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 1mL)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)에 의해 정제시켜 L-9b(5mg, 4.05 umol, 20.10% 수율, 3TFA)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.59 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 5.80 (s, 2H), 5.06-5.00 (m, 4H), 4.67-4.53 (m, 4H), 4.05-3.95 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.33-3.80 (m, 10H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.52-2.45 (m, 2H), 2.21 (d, J = 3.6 Hz, 6H), 2.10-1.91 (m, 2H), 1.40-1.32 (m, 6H). HPLC: 100.00 % (220 nm). LCMS (ESI): C44H57N15O6에 대한 질량 계산치 891.46, m/z 실측치 892.4 [M+H]+.
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-일]에틸카바모일옥시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-9c의 제조
DMF(2mL) 중 L-9b(150mg, 145 umol, 1 eq, 4HCl)의 용액에 Et3N(58.5mg, 578 umol, 80.5uL, 4.0 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(4-나이트로페녹시)카보닐옥시에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트(120mg, 159 umol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물에 물(5mL)을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 수성상을 DCM/i-PrOH=3/1(5mL×3)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 중 농축시켜 L-9c(150mg, 81.2 umol, 56.20% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-일]에틸카바모일옥시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-9d의 제조
MeCN(0.5mL) 및 H2O(2mL) 중 L-9c(150mg, 81.2 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA(92.6mg, 812 umol, 60.1uL, 10 eq)를 첨가하고, 이어서 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 L-9d(100mg, 55.8 umol, 68.7% 수율, 3TFA)를 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz, MeOD)δ 7.59 (d, J = 15.2 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 19.2 Hz, 2H), 6.65-6.56 (m, 2H), 5.83 (s, 2H), 5.02 (s, 4H), 4.69-4.49 (m, 4H), 4.21 (s, 2H), 4.01-3.91 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.73-3.67 (m, 6H), 3.64-3.57 (m, 36H), 3.43-3.35 (m, 2H), 2.98-2.92 (m, 4H), 2.78-2.70 (m, 4H), 2.53 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.26-2.16 (m, 6H), 1.83-1.79 (m, 2H), 1.39-1.32 (m, 6H).
BBI-L-9의 제조
DCM(2mL) 및 DMA(1mL) 중 L-9d(100mg, 55.8 umol, 1.0 eq, 3TFA)의 용액에 (2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-페닐)설포닐옥시나트륨(59.9mg, 223 umol, 4.0 eq) 및 EDCI(42.8mg, 223 umol, 4.0 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-35%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-9(43mg, 22.6 umol, 40.42% 수율, 2TFA)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.59 (d, J = 18.8 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 22.8 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 22.4 Hz, 2H), 5.86-5.72 (m, 2H), 5.02-4.95 (m, 4H), 4.65-4.50 (m, 4H), 4.19 (s, 2H), 4.00-3.94 (m, 2H), 3.84 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.69-3.54 (m, 40H), 3.48-3.42 (m, 4H), 3.24-3.07 (m, 6H), 2.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.19 (d, J = 10.4 Hz, 6H), 1.95-1.90 (m, 2H), 1.39-1.30 (m, 6H). HPLC: 100.00 % (220 nm). LCMS (ESI): C74H101F4N15O23S에 대한 질량 계산치 1675.69, m/z 실측치 1676.6 [M+H]+.
실시예 L-13 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]프로파노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]페닐]메틸 4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, BBI-L-13의 합성
(S)-1-((9H-플루오렌-9-일)메틸) 2-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 피롤리딘-1,2-di카복실레이트, 13b의 제조
DCM(200mL) 중 (2S)-1-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)피롤리딘-2-카복실산, 13a(15g, 44.5 mmol, 1.0 eq)의 용액에 1-하이드록시피롤리딘-2,5-다이온(5.12g, 44.5 mmol, 1.0 eq) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드, EDCI, EDAC, EDC, CAS 등록 번호 25952-53-8(10.2g, 53.44 mmol, 1.2 eq)을 첨가하고, 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 NaHCO3의 포화 수용액(70mL×3)으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 농축시켜 13b(17.5g, 40.28 mmol, 90.60% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
(2S)-2-[[(2S)-1-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)피롤리딘-2- 카보닐]아미노]-3-메틸-부탄산, 13c의 제조
THF(200mL) 중 (2S)-2-아미노-3-메틸-부탄산, L-발린(4.95g, 42.3 mmol, 1.05 eq)의 용액에 H2O(50mL) 중 NaHCO3(3.55g, 42.3 mmol, 1.64mL, 1.05 eq) 및 13b(17.5g, 40.28 mmol, 1.0 eq)를 첨가하고, 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 MTBE(2 x 100mL)로 추출하였다(폐기하였다). 수성층의 pH를 HCl(6 M)로 5 내지 6으로 조정하고, EtOAc(3 x 200 ml)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 농축시켜 13c(15g, 34.36 mmol, 85.31% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.80 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.70-7.54 (m, 2H), 7.43-7.28 (m, 4H), 4.49-4.15 (m, 5H), 3.69-3.38 (m, 2H), 2.42-2.01 (m, 3H), 2.00-1.82 (m, 2H), 1.01-0.86 (m, 6H).
9H-플루오렌-9-일메틸(2S)-2-[[(1S)-1-[[4-(하이드록시메틸)페닐] 카바모일]-2-메틸-프로필]카바모일]피롤리딘-1-카복실레이트, 13d의 제조
MeOH(80mL) 및 DCM(80mL) 중 13c(10g, 22.9 mmol, 1.0 eq) 및 (4-아미노페닐)메탄올(4.23g, 34.4 mmol, 1.5 eq)의 용액에 2-에톡시-1-에톡시카보닐-1,2- 다이하이드로퀴놀린, EEDQ, CAS 등록 번호 16357-59-8(8.50g, 34.36 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 이어서 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켜 잔사를 제공하였으며, 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(실리카 플래시 칼럼, 0-40% 에틸 아세테이트/MeOH의 용리액 @ 65 mL/분)에 의해 정제시켜 13d(13g, 24.0 mmol, 52.38% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.85-7.71 (m, 2H), 7.68-7.48 (m, 3H), 7.47-7.16 (m, 7H), 4.53 (d, J = 15.2 Hz, 2H), 4.49-4.41 (m, 1H), 4.40-4.33 (m, 2H), 4.32-4.27 (m, 1H), 4.26-4.17 (m, 1H), 4.16-4.07 (m, 1H), 3.69-3.38 (m, 2H), 2.40-2.05 (m, 2H), 1.99-1.82 (m, 2H), 1.08-0.88 (m, 6H).
(2S)-N-[(1S)-1-[[4-(하이드록시메틸)페닐]카바모일]-2-메틸- 프로필]피롤리딘-2-카복스아마이드, 13e의 제조
DCM(130mL) 중 13d(13g, 24.0 mmol, 1.0 eq)의 용액에 피페리딘(10.22g, 120 mmol, 11.85mL, 5.0 eq)을 첨가하고, 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하였으며, 잔사를 EtOAc로 20℃에서 20분 동안 분쇄하여 7e(8g, 조질물)를 백색 고체로서 제공하였다.
9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-2-[(2S)-2-[[(1S)-1-[[4-(하이드록시메틸) 페닐]카바모일]-2-메틸-프로필]카바모일]피롤리딘-1-일]-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트, 13f의 제조
DMF(30mL) 중 (2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)프로판산(3.95g, 12.68 mmol, 1.5 eq)의 용액에 1-비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트, 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트라이아졸 테트라메틸 우로늄, HATU, CAS 등록 번호 148893-10-1(4.82g, 12.68 mmol, 1.5 eq) 및 DIPEA(3.28g, 25.36 mmol, 4.42mL, 3 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 이 혼합물을 이 온도에서 5분 동안 교반하고, 이어서 13e(2.7g, 8.45 mmol, 1 eq)를 0℃에서 첨가하고, 이어서 얻어진 혼합물을 0℃에서 25분 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 H2O(150mL)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 EtOAc(70mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50mL×3)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에터:에틸 아세테이트 = 1:0 내지 0:1), 이어서 (SiO2, EtOAc:MeOH = 1:0 내지 10:1)에 의해 정제시켜 13f(2.94g, 4.80 mmol, 56.76% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.79 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.35-7.26 (m, 4H), 4.59-4.51 (m, 3H), 4.50-4.40 (m, 1H), 4.39-4.30 (m, 2H), 4.29-4.18 (m, 2H), 3.83-3.71 (m, 1H), 3.68-3.63 (m, 1H), 2.31-2.09 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 3H), 1.36 (dd, J = 6.4, 9.6 Hz, 4H), 1.03 (dd, J = 4.0, 6.8 Hz, 6H).
[4-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노) 프로파노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]페닐]메틸 (4-나이트로페닐) 카보네이트, 13g의 제조
DMF(20mL) 중 13f(2.4g, 3.92 mmol, 1 eq)의 용액에 비스(4-나이트로페닐) 카보네이트(2.38g, 7.83 mmol, 2 eq) 및 DIPEA(1.01g, 7.83 mmol, 1.36mL, 2 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 H2O(100mL)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 EtOAc(80mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50mL×3)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에터:에틸 아세테이트 = 1:0 내지 0:1)에 의해 정제시켜 13g(2.7g, 3.47 mmol, 88.62% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.32-8.22 (m, 3H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.67 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.60 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.46-7.29 (m, 8H), 7.18 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.60 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.70-4.66 (m, 1H), 4.62-4.52 (m, 1H), 4.46-4.28 (m, 3H), 4.28-4.19 (m, 1H), 3.81-3.68 (m, 1H), 3.62-3.58 (m, 1H), 2.48-2.29 (m, 2H), 2.19-1.98 (m, 3H), 1.41 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.10-0.94 (m, 6H). LC/MS [M+H] 778.3(계산치); LC/MS [M+H] 778.2(관측치).
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일) 아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, 13i의 제조
DCM(100mL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, 13h(11.3g, 19.3 mmol, 1 eq), 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세트산 (3g, 19.3 mmol, 1 eq) 및 DIPEA (10.0g, 77.4 mmol, 13.5mL, 4 eq)의 용액에 HATU(8.09g, 21.3 mmol, 1.1 eq)를 0℃에서 첨가하고, 이어서 이 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC(TFA 조건; 칼럼: Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%,25분)에 의해 정제시켜 13i(4.5g, 6.23 mmol, 32.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.88-6.80 (m, 1H), 6.78 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.77-3.54 (m, 40H), 3.47 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 2.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일) 아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, 13j의 제조
CH3CN(25mL) 및 H2O(25mL) 중 13i(4.5g, 6.23 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA(5.68g, 49.8 mmol, 3.69mL, 8 eq)를 첨가하고, 이어서 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 CH3CN을 제거하였다. 잔사를 MTBE(10mL×3)로 추출하고, 폐기하였다. 수상을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Luna c18 250mm x 100mm x 10um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 0%-25%,24분)에 의해 정제시켜 13j(1.6g, 2.40 mmol, 38.6% 수율)를 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.95 (br s, 1H), 6.78 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.78 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.70-3.63 (m, 36H), 3.60-3.54 (m, 2H), 3.46 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 6.0 Hz, 2H). LCMS (ESI): C42H43N5O10에 대한 질량 계산치 667.3, m/z 실측치 667.2 [M+H]+.
[4-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-아미노프로파노일]피롤리딘-2- 카보닐]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]페닐]메틸 4-[3-[[(2E)-6-카바모일-3-[(E)- 4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-1H-벤즈이미다졸-4-일]옥시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, 13l의 제조
DMF(3.00mL) 중 (2E)-1-[(E)-4-[(2E)-5-카바모일-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3 -카보닐)이미노-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)-3H-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)이미노-7-메톡시-3H-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 13k(150mg, 151 umol, 1 eq, 4HCl) 및 13g(129mg, 166 umol, 1.1 eq)의 용액에 DIPEA(97.0mg, 754 umol, 131uL, 5 eq)를 20℃에서 첨가하고, 이 혼합물을 이 온도에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 피페리딘 (39.0mg, 452.35 umol, 45.0uL, 3 eq)을 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 더욱 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 13l(90mg, 60.26 umol, 39.97% 수율, 2TFA)을 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67-7.53 (m, 4H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.25 (dd, J = 1.2, 14.0 Hz, 2H), 6.60 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.85-5.68 (m, 2H), 5.14 (s, 2H), 5.00 (br s, 5H), 4.64-4.54 (m, 4H), 4.33-4.18 (m, 2H), 3.95 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.74-3.58 (m, 5H), 3.25-3.13 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.16-1.92 (m, 6H), 1.52 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.40-1.29 (m, 6H), 1.08-0.98 (m, 6H).
BBI-L-13의 제조
DMF(1.00mL) 중 13l(50mg, 33.5 umol, 1 eq, 2TFA) 및 7j(22.0mg, 33.5 umol, 1 eq)의 용액에 Et3N(7.00mg, 66.9 umol, 9.00uL, 2 eq) 및 1-Propanephosphonic anhydride, T3P, CAS 등록 번호 68957-94-8(32.0mg, 50.2 umol, 30.0uL, 50% 순도, 1.5 eq)을 첨가하고, 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-13(16mg, 7.47 umol, 22.31% 수율, 2TFA)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.68-7.53 (m, 4H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.30-7.20 (m, 2H), 6.88 (s, 2H), 6.60 (d, J = 12 Hz, 2H), 5.78 (br s, 2H), 5.14 (s, 2H), 4.99 (br s, 4H), 4.68-4.47 (m, 8H), 4.29-4.25 (m, 1H), 4.16 (s, 3H), 3.96 (br t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.80 (td, J = 6.8, 9.2 Hz, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.70 (s, 4H), 3.67-3.56 (m, 36H), 3.53 (br t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48 (td, J = 1.6, 3.2 Hz, 1H), 3.36 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.23-3.13 (m, 4H), 2.54-2.43 (m, 2H), 2.20 (d, J = 10.4 Hz, 6H), 2.18-2.10 (m, 2H), 2.06-1.94 (m, 5H), 1.40-1.28 (m, 9H), 1.02 (dd, J = 5.2, 6.4 Hz, 6H). LCMS (ESI): C42H43N5O10에 대한 질량 계산치 1913.9, m/z 실측치 1914.0 [M+H]+.
실시예 L-18 1-[(E)-4-[5-카바모일-7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2- [[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-3a,7a-dihydro벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-18의 합성
MeOH(3mL) 중 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2 -(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]아세트아마이드(68.9mg, 108 umol, 2 eq) 및 1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)-3a,7a-dihydro벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, 3(50mg, 54.1 umol, 1 eq, 2HCl)의 혼합물에 나트륨 사이아노보로하이드라이드, NaBH3CN(6.8mg, 108 umol, 2 eq)을 25℃에서 N2하에 첨가하고, 이어서 25℃에서 13시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC 칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%:15%-40%, 8분에 의해 정제시켜 BBI-L-18(15mg, 9.46 umol, 17.48% 수율, TFA)을 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.61 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.88-5.83 (m, 2H), 5.08-5.01 (m, 4H), 4.54-4.69 (m, 4H), 4.16 (s, 2H), 4,01-3.95 (m, 2H), 3.80-3.88 (m, 2H), 3.55-3.72 (m, 38H), 3.52 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.38-3.30 (m, 6H), 2.69-2.93 (m, 4H), 2.60 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.21 (d, J = 8.8 Hz, 6H), 1.71-1.82 (m, 2H), 1.40-1.32 (m, 6H). HPLC: 99.67% (220 nm). LC/MS [M+H] 1469.7(계산치); LC/MS [M+H] 1469.8(관측치).
실시예 L-24 1-[4-[5-카바모일-7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2- (2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부틸]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-24의 합성
tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-3-[4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸- 피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부틸]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-24a의 제조
EtOAc(20mL) 중 tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5 -메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3o(0.3g, 316.10 umol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C(10%, 0.1 g)를 N2하에 첨가하였다. 이 현탁액을 진공하에 탈기시키고, H2로 여러 번 퍼지시키고， 이어서 H2(50psi)하에 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 여과시키고, 감압하에 농축시켜 L-24a(0.2g, 210.29 umol, 66.53% 수율)를 흑색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 951.5(계산치); LC/MS [M+H] 951.4(관측치).
1-[4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐) 아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-1-일]부틸]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-24b의 제조
EtOAc(2mL) 중 L-24a(0.2g, 210.29 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 10.00mL, 190 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(0.1% TFA) -ACN]; B%: 10%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 L-24b(0.1g, 117.51 umol, 55.88% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHZ, DMSO-d6) δ 7.32-7.27 (m, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.68 (s, 2H), 4.73-4.63 (m, 4H), 4.43-4.34 (m, 4H), 4.13-4.04 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.26-3.18 (m, 4H), 2.77-2.63 (m, 4H), 2.60-2.51 (m, 2H), 2.24 (d, J = 2.4 Hz, 6H), 2.07- 1.96 (m, 4H), 1.94-1.76 (m, 2H), 1.46-1.35 (m, 6H). HPLC: 96.010% (220 nm), 96.753% (254 nm). LC/MS [M+H] 851.4(계산치); LC/MS [M+H] 851.4(관측치).
BBI-L-24의 제조
MeOH(5mL) 중 L-24b(80.0mg, 74.1 umol, 1 eq, 2TFA)의 용액에 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]아세트아마이드(142mg, 222 umol, 3 eq)를 15℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 이 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반하고, 이어서 NaBH3CN(14.0mg, 222 umol, 3 eq)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-24(40.1mg, 23.6 umol, 31.8% 수율, 2TFA)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.36-7.29 (m, 2H), 7.23 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 6.88 (s, 2H), 6.68 (s, 2H), 4.67 (q, J = 6.0 Hz, 4H), 4.45-4.31 (m, 4H), 4.16 (s, 2H), 4.10 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.89-3.77 (m, 5H), 3.72-3.66 (m, 4H), 3.66-3.55 (m, 32H), 3.52 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.47-3.33 (m, 8H), 3.03-2.90 (m, 4H), 2.84-2.72 (m, 2H), 2.23 (d, J = 2.0 Hz, 6H), 2.08-1.87 (m, 6H), 1.49-1.34 (m, 6H). HPLC: 97.38% (220 nm). LC/MS [M+H] 1471.7(계산치); LC/MS [M+H] 1471.7(관측치).
실시예 L-26 7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-1-[(E)-4-[2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-26의 합성
tert-부틸 N-tert-부톡시카보닐-N-[(E)-4-(2-나이트로아닐리노)부트-2-엔일]카바메이트, L-26a의 제조.
DMF(10mL) 중 1-플루오로-2-나이트로-벤젠(1g, 7.09 mmol, 746uL, 1 eq)의 용액에 DIEA(2.75g, 21.26 mmol, 3.7mL, 3 eq) 및 tert-부틸 N-[(E)-4-아미노부트-2-엔일]-N-tert-부톡시카보닐-카바메이트, 3j(2.23g, 7.80 mmol, 1.1 eq)를 첨가하고, 이어서 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 20℃에서 H2O(100mL)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 EtOAc(50mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 H2O(50mL) 및 염수(20mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~5% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 100 mL/분)에 의해 정제시켜 L-26a(2g, 4.91 mmol, 69.26% 수율)를 갈색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.12 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 1.6,7.2, 8.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 1.6, 7.2, 8.8 Hz, 1H), 5.80-5.72 (m, 2H), 4.17 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.03 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 1.45 (s, 18H). LC/MS [M+H] 408.2(계산치); LC/MS [M+H] 408.2(관측치).
(E)-N홀땀-(2-나이트로페닐)부트-2-엔-1,4-다이아민, L-26b의 제조.
EtOAc(1mL) 중 L-26a(500mg, 1.23 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 15.34mL, 50 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 L-26b(500mg, 조질물)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.14 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.49 (td, J = 1.6, 7.2, 8.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (td, J = 1.6, 7.2, 8.4 Hz, 1H), 6.14-6.02 (m, 1H), 5.86-5.70 (m, 1H), 4.11 (dd, J = 1.2, 4.4 Hz, 2H), 3.57 (d, J = 6.4 Hz, 2H). LC/MS [M+H] 208.1(계산치); LC/MS [M+H] 208.1(관측치).
tert-부틸 4-[3-[5-카바모일-3-나이트로-2-[[(E)-4-(2-나이트로아닐리노)부트-2-엔일]아미노]페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-26c의 제조.
n-BuOH(10mL) 중 L-26b (0.5g, 1.78 mmol, 1 eq, 2HCl), DIEA(1.15g, 8.92 mmol, 1.55mL, 5 eq) 및 NaHCO3(375mg, 4.46 mmol, 174uL, 2.5 eq)의 용액을 15℃에서 20분 동안 교반하였다. 이어서 tert-부틸 4-[3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3g(632mg, 1.43 mmol, 0.8 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 n-BuOH를 제거하고, 잔사를 20℃에서 H2O(50mL)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이어서 EtOAc(10mL×2)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(10mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 L-26c(550mg, 896.26 umol, 50.22% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 614.3(계산치); LC/MS [M+H] 614.2(관측치).
tert-부틸 4-[3-[3-아미노-2-[[(E)-4-(2-아미노아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-26d의 제조.
MeOH(1mL) 및 THF(1mL) 및 H2O(0.5mL) 중 L-26c(550mg, 896 umol, 1 eq)의 용액에 Na2CO3(570mg, 5.38 mmol, 6 eq) 및 다이나트륨 다이티오나이트(1.56g, 8.96 mmol, 1.95mL, 10 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거하였다. 잔사를 H2O(10mL)로 희석시키고, 석출물을 여과시켜 L-26d(5 50mg, 조질물)를 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 554.3(계산치); LC/MS [M+H] 554.3(관측치).
tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-3-[(E)-4-[2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-26e의 제조.
DMF(5mL) 중 L-26d(550mg, 993 umol, 1 eq) 및 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트, 3o(213mg, 1.09 mmol, 1.1 eq)의 용액을10분 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 Et3N(301mg, 2.98 mmol, 414uL, 3 eq) 및 EDCI(571mg, 2.98 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨(10mL) 및 H2O(10mL)를 첨가함으로써 반응중지시키고, 석출물을 여과시켜 L-26e(560mg, 639 umol, 64.36% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 876.5(계산치); LC/MS [M+H] 876.4(관측치).
2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-1-[(E)-4-[2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-26f의 제조.
EtOAc(5mL) 중 L-26e(560mg, 639 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 7.99mL, 50 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축시키고, 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80x30mmx3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 5%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 L-26e(96.7mg, 124.63 umol, 19.50% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.57 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35-7.24 (m, 3H), 7.22-7.16 (m, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.00-5.90 (m, 1H), 5.84-5.74 (m, 1H), 5.06 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.83-4.79 (m, 2H), 4.69-4.54 (m, 4H), 4.04 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.27-3.23 (m, 4H), 2.86-2.69 (m, 4H), 2.61 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.88-1.77 (m, 2H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 776.4(계산치); LC/MS [M+H] 776.4(관측치).
BBI-L-26의 제조
MeOH(3mL) 중 L-26e(30mg, 29.9 umol, 1 eq, 2TFA) 및 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]e th옥시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]아세트아마이드(47.6mg, 74.7 umol, 2.5 eq)의 용액을 10분 동안 20℃에서 교반하고, 이어서 NaBH3CN(5.63mg, 89.6 umol, 3 eq)을 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 더욱 0.5시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 여과시키고, 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80x30mmx3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 10%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-26(14.9mg, 10.67 umol, 35.70% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.57 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.30 (m, 2H), 7.27 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22-7.16 (m, 1H), 6.86 (s, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.05-5.87 (m, 1H), 5.86-5.70 (m, 1H), 5.06 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.65-4.54 (m, 4H), 4.15 (s, 2H), 4.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.86-3.78 (m, 2H), 3.67 (d, J = 2.8 Hz, 4H), 3.64-3.54 (m, 34H), 3.51 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 3.37-3.33 (m, 4H), 3.21-2.75 (m, 6H), 2.66 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.21 (d, J = 8.0 Hz, 6H), 1.88-1.78 (m, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1396.7(계산치); LC/MS [M+H] 1396.7(관측치).
실시예 L-28 1-[(E)-4-[5-카바모일-7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[[2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[[2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-28의 합성
에틸 2-(2-아세톡시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카복실레이트, L-28b의 제조
THF(30mL) 중 에틸 3-메틸-1H-피라졸-5-카복실레이트, L-28a(3g, 19.5 mmol, 1 eq) 및 2-하이드록시에틸 아세테이트(2.03g, 19.5 mmol, 1.83mL, 1 eq)의 용액에 트라이페닐포스핀, PPh3(15.3g, 58.4 mmol, 3 eq) 및 다이아이소프로필 아조-다이카복실레이트, DIAD(11.80g, 58.4 mmol, 11.4mL, 3 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 H2O 50 mL의 첨가에 의해 반응중지시키고, EtOAc(50mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~50% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 60mL/분)에 의해 정제시켜 L-28b(5g, 조질물)를 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.63 (s, 1H), 4.75 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.41 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카복실산, L-28c의 제조
MeOH(30mL) 및 H2O(5mL) 중 L-28b(5g, 20.8 mmol, 1eq)의 용액에 LiOH.H2O(2.62g, 62.4 mmol, 3 eq)를 첨가하고， 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물의 pH를 0℃에서 HCl(4M)로 약 1로 조정하고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체를 석출시키고, 여과시켜 L-28c(3g, 17.6 mmol, 84.71% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.46 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.16 (s, 3H)
2-(2-아세톡시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카복실산, L-28d의 제조
DCM(50mL) 중 L-28c(3g, 17.6 mmol, 1 eq)의 용액에 아세트산 무수물(3.60g, 35.3 mmol, 3.30mL, 2 eq) 및 피리딘(2.79g, 35.3 mmol, 2.85mL, 2 eq)을 첨가하였다. 이 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물의 pH를 0℃에서 HCl(4M)로 약 1로 조정하고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체를 석출시키고, 여과시켜 L-28d(3g, 14.14 mmol, 80.19% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.88 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.64 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.30 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.92 (s, 3H)
2-(5-클로로카보닐-3-메틸-피라졸-1-일)에틸 아세테이트, L-28e의 제조
DCM(10mL) 중 L-28d(1g, 4.71 mmol, 1 eq)의 용액에 DMF(344mg, 4.71 mmol, 363uL, 1 eq) 및 옥살릴 다이클로라이드(COCl)2(1.20g, 9.42 mmol, 825uL, 2 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 L-28e를 황색 오일로서 제공하였다.
2-(5-카본아이소티오사이아나티도일-3-메틸-피라졸-1-일)에틸 아세테이트, L-28f의 제조
MeCN(5mL) 중 L-28e(1g, 4.34 mmol, 1 eq) 및 티오사이안산칼륨, KSCN(843mg, 8.67 mmol, 843uL, 2 eq)의 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 여과시키고, 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~30% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 45 mL/분)에 의해 정제시켜 L-28f(0.4g, 1.58 mmol, 36.43% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다
tert-부틸 4-[3-[2-[[2-(2-아세톡시에틸)-5-메틸-피라졸-3 -카보닐]아미노]-3-[(E)-4-[2-[[2-(2-아세톡시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-5-카바모일-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-6-카바모일-벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-28g의 제조
DMF(5mL) 중 tert-부틸 4-[3-[3-아미노-2-[[(E)-4-(2-아미노-4-카바모일-6-메톡시-아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3n(0.3g, 479 umol, 1 eq) 및 L-28f(242mg, 957 umol, 2 eq)의 용액을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서 EDCI(459mg, 2.39 mmol, 5 eq) 및 Et3N(242mg, 2.39 mmol, 333uL, 5 eq)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 25℃에서 더욱 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 aq NaHCO3 10 mL의 첨가에 의해 반응중지시키고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체 생성물을 석출시키고, 여과시켜 L-28g(0.4g, 375 umol, 78.46% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[[2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[[2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-28h의 제조
EtOAc(10mL) 중 L-28g(0.4g, 375 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 5mL, 53.3 eq)를 첨가하고, 이어서 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)에 의해 정제시켜 L-28h(0.05g, 56.8 umol, 15.11% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.06-12.67 (m, 2H), 8.95-8.44 (m, 2H), 7.96 (d, J = 9.6 Hz, 3H), 7.65 (s, 3H), 7.36 (s, 2H), 7.28 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 5.85-5.80 (m, 2H), 4.91 (dd, J = 3.6, 9.6 Hz, 4H), 4.61 (d, J = 2.8 Hz, 4H), 3.95 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.72 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.67 (s, 3H), 3.15-3.10 (m, 4H), 2.58-2.50 (m, 6H),2.12 (d, J = 5.2 Hz, 6H), 1.75-1.70 (m, 2H). HPLC: 98.124% (220 nm), 98.808% (254 nm). LC/MS [M+H] 881.4(계산치); LC/MS [M+H] 881.4(관측치).
BBI-L-28의 제조
MeOH(1mL) 중 L-28h (35mg, 31.6 umol, 1 eq, 2TFA) 및 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]아세트아마이드(40.2mg, 63.1 umol, 2 eq)의 용액에 나트륨 사이아노보로하이드라이드, NaBH3CN(5.95mg, 94.7 umol, 3 eq)을 첨가하고, 이어서 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 여과시켰다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-28을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.01-12.71 (m, 1H), 8.21 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 7.65 (s, 2H), 7.37 (s, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.08 (s, 2H), 6.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.98-5.68 (m, 2H), 4.93-4.90 (4, 3H), 4.63-4.59 (m, 4H), 4.01 (s, 2H), 3.95-3.90 (m, 2H), 3.72 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.66 (s, 3H), 3.55-3.45 (m, 38H), 3.44-3.40 (m, 6H), 3.26-3.14 (m, 6H), 2.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.80-1.60 (m, 2H). HPLC: 96.878% (220 nm), 99.512% (254 nm). LC/MS [M+H] 1501.7(계산치); LC/MS [M+H] 1501.8(관측치).
실시예 L-31 1-[(E)-4-[5-카바모일-7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[[2-(2,3-다이하이드록시프로필)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-31의 합성
에틸 2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카복실레이트, L-31b의 제조
THF(100mL) 중 에틸 3-메틸-1H-피라졸-5-카복실레이트, L-31a(5g, 32.43 mmol, 1 eq)의 용액에 PPh3(25.52g, 97.30 mmol, 3 eq) 및 (2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메탄올(5.14g, 38.92 mmol, 4.8mL, 1.2 eq)에 이어서 DEAD(11.30g, 64.87 mmol, 11.8mL, 2 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 H2O(300mL)로 반응중지시키고, EtOAc(50mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 120g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~8% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 100 mL/분)에 의해 정제시켜 L-31b(5g, 18.64 mmol, 57.46% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.60 (s, 1H), 4.75 (dd, J = 5.6, 13.2 Hz, 1H), 4.59-4.51 (m, 1H), 4.51-4.42 (m, 1H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.42-1.28 (m, 9H). LC/MS [M+H] 269.1(계산치); LC/MS [M+H] 269.0(관측치).
2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카복실산, L-31c의 제조.
THF(20mL) 및 H2O (5mL) 중 L-31b(2.5g, 9.32 mmol, 1 eq)의 용액에 LiOH·H2O(1.96g, 46.59 mmol, 5 eq)를 첨가하고, 이어서 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 THF를 제거하고, 이어서 수성상의 pH를 TFA로 pH=~5로 조정하고, EtOAc(50mL×2)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 조질의 생성물 L-31c(2.05g, 8.53 mmol, 91.57% 수율)를 백색 고체로서 제공하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.64 (s, 1H), 4.72 (dd, J = 6.0, 13.6 Hz, 1H), 4.59-4.49 (m, 1H), 4.42 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.28 (s, 3H). LC/MS [M+H] 241.1(계산치); LC/MS [M+H] 241.1(관측치).
2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카보닐 클로라이드, L-31d의 제조.
DCM(15mL) 중 L-31c(1g, 4.16 mmol, 1 eq)의 용액에 1-클로로-N,N,2-트라이메틸-프로프-1-엔-1-아민(1.11g, 8.32 mmol, 1.1mL, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 이어서 15℃에서 5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 L-31d(0.6g, 2.32 mmol, 55.72% 수율)를 연황색 오일로서 제공하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트, L-31e의 제조.
MeCN(2mL) 중 L-31d(0.6g, 2.32 mmol, 1 eq)의 용액에 티오사이안산칼륨, KSCN(676.2mg, 6.96 mmol, 3 eq)을 첨가하고, 이어서 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 잔사를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~40% 에틸 아세테이트/석유 에터의 용리액 구배 @ 75 mL/분)에 의해 정제시켜 L-31e(0.5g, 1.78 mmol, 76.63% 수율)를 연황색 오일로서 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.76 (s, 1H), 4.74 (dd, J = 6.0, 13.2 Hz, 1H), 4.59-4.43 (m, 2H), 4.06 (dd, J = 6.0, 8.8 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 5.6, 8.8 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.33 (s, 3H).
tert-부틸 N-[(E)-4-(4-카바모일-2-메톡시-6-나이트로-아닐리노)부트-2-엔일]카바메이트, L-31g의 제조
n-BuOH(70mL) 중 4-클로로-3-메톡시-5-나이트로-벤즈아마이드, L-31f(4g, 17.35 mmol, 1 eq) 및 tert-부틸 N-[(E)-4-아미노부트-2-엔일]카바메이트(4.52g, 24.28 mmol, 1.4 eq)의 용액에 다이아이소프로필에틸아민, DIEA(11.21g, 86.73 mmol, 15.11mL, 5 eq)를 첨가하고, 이어서 120℃에서 18시간 동안 N2하에 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축시켜 n-BuOH를 제거하고, 잔사를 H2O 100 mL로 15℃에서 희석시키고, 30분 동안 교반하고, 여과시켜 조질의 생성물을 제공하였다. 조질의 생성물을 EtOAc(50mL)로 15℃에서 30분 동안 분쇄하여 L-31g(6g, 15.77 mmol, 90.93% 수율)를 적색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ 8.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.74 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.09 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.48 (s, 2H), 1.44-1.30 (m, 9H). LC/MS [M+H] 381.2(계산치); LC/MS [M-55] 325.0(관측치).
tert-부틸 N-[(E)-4-(2-아미노-4-카바모일-6-메톡시-아닐리노)부트-2-엔일]카바메이트, L-31h의 제조.
MeOH(30mL), THF(30mL) 및 H2O(15mL) 중 L-31g(6g, 15.77 mmol, 1 eq)의 용액에 Na2CO3(6.69g, 63.09 mmol, 4 eq) 및 다이나트륨 다이티오나이트(19.22g, 110.41 mmol, 7 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거하고, 이어서 H2O(50mL)를 첨가하고, 10분 동안 교반하고, 여과시켜 조질의 생성물 L-31h(4g, 11.42 mmol, 72.37% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.74-5.57 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.60-3.57 (m, 4H), 1.43 (s, 9H). LC/MS [M+H] 351.2(계산치); LC/MS [M+H] 351.1(관측치).
3-아미노-4-[[(E)-4-아미노부트-2-엔일]아미노]-5-메톡시-벤즈아마이드, L-31i의 제조.
EtOAc(15mL) 중 L-31h(1.2g, 3.42 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 42.8mL, 50 eq)를 첨가하고, 이어서 15℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 이 혼합물을 농축시켜 L-31i(1.1g, 3.40 mmol, 99.38% 수율, 2HCl)를 백색 고체로서 제공하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LC/MS [M+H] 251.2(계산치); LC/MS [M+H] 251.1(관측치).
tert-부틸 4-[3-[2-[[(E)-4-(2-아미노-4-카바모일-6-메톡시-아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-3-나이트로-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-31j의 제조.
n-BuOH(30mL) 중 L-31i(1.1g, 3.40 mmol, 1 eq, 2HCl) 및 DIEA(3.52g, 27.2 mmol, 4.7mL, 8 eq)의 용액을 15℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 tert-부틸 4-[3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필]피페라진-1-카복실레이트(829mg, 1.87 mmol, 0.55 eq)를 첨가하고, 이 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켜 n-BuOH를 제거하고, 이어서 잔사를 물 20 mL로 희석시키고, DCM/i-PrOH=3/1(30mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 20 mL로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 조질의 생성물을 MTBE/EtOAc=5/1(30 ml)로 15℃에서 10분 동안 분쇄하여 L-31j(1g, 1.52 mmol, 44.74% 수율)를 적색 고체로서 제공하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.77-5.61 (m, 2H), 4.23 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.71-3.57 (m, 2H), 3.48-3.44 (m, 4H), 2.54 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.46 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.06-1.98 (m, 2H), 1.47 (s, 9H). LC/MS [M+H] 657.3(계산치); LC/MS [M+H] 657.3(관측치).
tert-부틸 4-[3-[5-카바모일-2-[[(E)-4-[5-카바모일-2-[[2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]아미노]-3-나이트로-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-31k의 제조.
DMF(4mL) 중 L-31e(111mg, 396 umol, 1.3 eq)의 용액에 L-31j(200mg, 305 umol, 1 eq)를 첨가하고, 30분 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 Et3N(92.5mg, 914 umol, 127uL, 3 eq) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드, EDCI, EDAC, EDC, CAS 등록 번호 25952-53-8(175mg, 914 umol, 3 eq)을 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 NaHCO3.aq(5mL) 및 물(5mL)로 반응중지시키고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체를 석출시키고, 여과시켜 L-31k(0.2g, 221 umol, 72.65% 수율)를 연황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 904.4(계산치); LC/MS [M+H] 904.3(관측치).
tert-부틸 4-[3-[3-아미노-5-카바모일-2-[[(E)-4-[5-카바모일-2-[[2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]아미노]페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트 - L-31l의 제조.
THF(1mL), MeOH(1mL) 및 H2O(1mL) 중 L-31k(0.2g, 221 umol, 1 eq)의 용액에 Na2CO3(93.8mg, 885 umol, 4 eq) 및 다이나트륨;다이티오나이트(270mg, 1.55 mmol, 7 eq)를 첨가하고, 이어서 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거하였다. 목적하는 고체를 수상으로부터 여과시키고, 여과시키고, 케이크를 H2O(5mL)로 세척하여 L-31l(170mg, 194.51 umol, 87.92% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 874.4(계산치); LC/MS [M+H] 874.4(관측치).
tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[[2-[(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)메틸]-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-31m의 제조.
DMF(2mL) 중 L-31l(170mg, 195 umol, 1 eq) 및 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트, 3o(49.4mg, 253 umol, 1.3 eq)의 용액을 0.5시간 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 Et3N(59.1mg, 584 umol, 81.2uL, 3 eq) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드, EDCI, EDAC, EDC, CAS 등록 번호 25952-53-8(112mg, 584 umol, 3 eq)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 NaHCO3.aq(5mL) 및 물(5mL)로 반응중지시키고, 이 혼합물로부터 목적하는 고체를 석출시키고, 여과시켜 L-31m(0.15g, 144.91 umol, 74.50% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 1035.5(계산치); LC/MS [M+H] 1035.5(관측치).
1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[[2-(2,3-다이하이드록시프로필)-5-메틸-피라졸-3-카보닐]아미노]-7-메톡시-벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-31n의 제조.
EtOAc(2mL) 중 L-31m(0.15g, 145 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 7.25mL, 200 eq)를 첨가하고, 이어서 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축시키고, 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 5%-30%, 8분)에 의해 정제시켜 L-31n(75mg, 66.78 umol, 46.09% 수율, 2TFA)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.60 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.92-5.82 (m, 2H), 5.05-5.01 (m, 4H), 4.79-4.72 (m, 1H), 4.69-4.59 (m, 3H), 4.09-4.01 (m, 1H), 3.90 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.54 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.70-2.64 (m, 4H), 2.51 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.78-1.69 (m, 2H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 895.4(계산치); LC/MS [M+H] 895.4(관측치).
BBI-L-31의 제조
MeOH(0.3mL) 중 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]아세트아마이드(42.5mg, 66.8 umol, 2.5 eq)의 용액에 L-31n(30mg, 26.7 umol, 1 eq, 2TFA) 및 NaBH3CN(5.04mg, 80.1 umol, 3 eq)을 첨가하고, 이어서 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 10%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-31(15.6mg, 10.29 umol, 38.53% 수율)을 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.63 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.89 (s, 2H), 6.66 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.96-5.83 (m, 2H), 5.10-5.02 (m, 4H), 4.79-4.61 (m, 4H), 4.21-4.16 (m, 2H), 4.11-4.02 (m, 1H), 3.96 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.86-3.81 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.72-3.69 (m, 4H), 3.67-3.59 (m, 38H), 3.56-3.52 (m, 4H), 3.39-3.36 (m, 3H), 2.99-2.72 (m, 4H), 2.62 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.79 (td, J = 6.8, 13.6 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1515.7(계산치); LC/MS [M+H] 1515.7(관측치).
실시예 L-34 1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-7-[3-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에틸]피페라진-1-일]프로폭시]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, BBI-L-34의 합성
tert-부틸 4-[3-[2-[[(E)-4-아미노부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-3-나이트로-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-34a의 제조
n-BuOH(150mL) 중 (E)-부트-2-엔-1,4-다이아민(8.98g, 56.45 mmol, 5 eq, 2HCl)의 용액에 DIEA(29.18g, 225.79 mmol, 39.3mL, 20 eq) 및 tert-부틸 4-[3-(5-카바모일-2-클로로-3-나이트로-페녹시)프로필]피페라진-1-카복실레이트, 3g(5g, 11.29 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 N2하에 교반하였다. 이 혼합물을 여과시켜 불용성 물질을 제거하였다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Xtimate C18 10u 250mm*80mm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 10%-50%,27분)에 의해 정제시켜 L-34a(4g, 8.12 mmol, 35.97% 수율)를 적색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 493.3(계산치); LC/MS [M+H] 493.2(관측치).
tert-부틸 4-[3-[5-카바모일-2-[[(E)-4-(4-메톡시카보닐-2-나이트로-아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-3-나이트로-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-34b의 제조
n-BuOH(1.20g, 16.2 mmol, 1.49mL, 20 eq) 중 L-34a(400mg, 812 umol, 1 eq)의 용액에 DIEA(524mg, 4.06 mmol, 707uL, 5 eq) 및 메틸 4-플루오로-3-나이트로-벤조에이트(242mg, 1.22 mmol, 1.5 eq)를 잔사를 제공하였다. 이 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 N2하에 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축시켜 n-BuOH를 제거하였다. 잔사를 H2O(10mL)로 희석시키고, 이어서 EtOAc(10mL×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축시켜 L-34b(600mg, 조질물)를 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 672.3(계산치); LC/MS [M+H] 672.3(관측치).
tert-부틸 4-[3-[3-아미노-2-[[(E)-4-(2-아미노-4-메톡시카보닐-아닐리노)부트-2-엔일]아미노]-5-카바모일-페녹시]프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-34c의 제조
MeOH(3mL), THF(3mL) 및 H2O(1.5mL) 중 L-34b(600mg, 893 umol, 1 eq)의 용액에 Na2CO3(473mg, 4.47 mmol, 5 eq) 및 다이나트륨;다이티오나이트(1.09g, 6.25 mmol, 7 eq)를 첨가하고, 이어서 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 EtOAc(10mL)로 희석시키고, 여과사켜 불용성 물질을 제거하고, 여과액을 감압하에 농축시켜 L-34c(570mg, 조질물)를 백색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 612.3(계산치); LC/MS [M+H] 612.3(관측치).
메틸 1-[(E)-4-[7-[3-(4-tert-부톡시카보닐피페라진-1-일)프로폭시]-5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-5-카복실레이트, L-34d의 제조
DMF(5mL) 중 L-34c(570mg, 931 umol, 1 eq)의 용액에 2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐 아이소티오사이아네이트(400mg, 2.05 mmol, 2.2 eq)를 첨가하였다. 첨가 후, 이 혼합물을 0℃에서 30분 교반하고, 이어서 Et3N(565mg, 5.59 mmol, 778uL, 6 eq) 및 EDCI(1.07g, 5.59 mmol, 6 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 15℃에서 더욱 12시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 포화 NaHCO3(20mL)로 반응중지시키고, 수성상을 EtOAc(50mL×3)로 추출하고, 합한 유기상을 염수(30mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 L-34d(800mg, 조질물)를 황색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 934.5(계산치); LC/MS [M+H] 934.5(관측치).
1-[(E)-4-[7-[3-(4-tert-부톡시카보닐피페라진-1-일)프로폭시]-5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-5-카복실산, L-34e의 제조
H2O(2mL) 및 THF(10mL) 중 L-34d(700mg, 749 umol, 1 eq)의 용액에 수산화리튬 수화물, LiOH.H2O(125mg, 3.00 mmol, 4 eq)를 첨가하고, 이어서 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 pH가 약 5가 될 때까지 HCl(2M)로 반응 중지시키고, 이 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔사를 제공하였으며, 잔사를 H2O(10mL)로 분쇄하고, 여과시켜 L-34e(800mg, 조질물)를 백색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 920.5(계산치); LC/MS [M+H] 920.5(관측치).
tert-부틸 4-[3-[6-카바모일-3-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-4-일]옥시프로필]피페라진-1-카복실레이트, L-34f의 제조
DMF(0.5mL) 중 L-34e(250mg, 272 umol, 1 eq)의 용액에 NH4Cl(145mg, 2.72 mmol, 10 eq), DIEA(105mg, 815 umol, 142uL, 3 eq) 및 1-비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트, 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트라이아졸 테트라메틸 우로늄, HATU, CAS 등록 번호 148893-10-1(155mg, 408 umol, 1.5 eq)을 첨가하였다. 이 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 물(15mL)에 붓고, 수성상을 EtOAc(20mL×3)로 추출하고, 합한 유기상을 염수(15mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 L-34f(250mg, 조질물)를 백색 고체로서 제공하였다. LC/MS [M+H] 919.4(계산치); LC/MS [M+H] 919.4(관측치).
1-[(E)-4-[5-카바모일-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]벤즈이미다졸-1-일]부트-2-엔일]-2-[(2-에틸-5-메틸-피라졸-3-카보닐)아미노]-7-(3-피페라진-1-일프로폭시)벤즈이미다졸-5-카복스아마이드, L-34g의 제조
EtOAc(1mL) 중 L-34f(250mg, 272 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc(4M, 4.17mL, 61.3 eq)를 첨가하였다. 이 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex C18 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 1%-25%, 8분)에 의해 정제시켜 L-34g(21mg, 25.64 umol, 9.43% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.94 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.00-5.86 (m, 1H), 5.76-5.73 (m, 1H), 5.02 (br d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.92--4.84 (m, 2H), 4.65-4.48 (m, 4H), 4.01 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.36 (br t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.02-2.98 (m, 4H), 2.80 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.18 (d, J = 9.5 Hz, 6H), 1.94-1.79 (m, 2H), 1.43-1.25 (m, 6H). HPLC: 96.66% (220 nm). LC/MS [M+H] 819.4(계산치); LC/MS [M+H] 819.4(관측치).
BBI-L-34의 제조
MeOH(1mL) 중 L-34g(50mg, 61.06 umol, 1 eq)의 용액에 2-(2,5-다이옥소피롤-1-일)-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에틸]아세트아마이드(38.87mg, 61.06 umol, 1 eq)를 0℃에서 첨가하고, 이 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서 NaBH3CN(11.51mg, 183.17 umol, 3 eq)을 첨가하고, 얻어진 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 여과시키고, 분취-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um; 이동상: [물(TFA)-ACN]; B%: 10%-40%, 8분)에 의해 정제시켜 BBI-L-34(60mg, 35.98 umol, 58.93% 수율, 2TFA)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.02-5.89 (m, 1H), 5.86-5.73 (m, 1H), 5.09-5.03 (m, 2H), 4.90-4.80 (m, 2H), 4.67-4.53 (m, 4H), 4.16 (s, 2H), 4.05 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.89-3.80 (m, 2H), 3.74-3.46 (m, 42H), 3.37-3.33 (m, 4H), 2.98-2.75 (m, 4H), 2.66 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.20 (d, J = 9.6 Hz, 6H), 1.87-1.76 (m, 2H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H). HPLC: 97.16% (220 nm). LC/MS [M+H] 1439.7(계산치); LC/MS [M+H] 1439.9(관측치).
실시예 201 면역접합체(IC)의 제조
예시적인 절차에서, 라이신-기반 접합체의 제조를 위하여, 항체를 Zeba™ 스핀 탈염 칼럼(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 100mM 붕산염, 50mM 염화나트륨, 1mM 에틸렌다이아민테트라아세트산(pH 8.3)을 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환한다. 접합 완충액을 사용하여 완충액-교환된 항체의 농도를 대략 5 내지 25 mg/ml로 조정하고 멸균-여과시켰다. 화학식 II의 비스-벤즈이미다졸-링커(BBI-L) 중간 화합물을 다이설폭사이드(DMSO) 또는 다이메틸아세트아마이드(DMA)에 5 내지 20mM의 농도로 용해시킨다. 접합을 위하여, 항체를 4 내지 20 몰 당량의 BBI-L과 혼합한다. 일부 경우에, 추가의 DMA 또는 DMSO를 최대 20% (v/v)까지 첨가하여 접합 완충제 중 BBI-L의 용해도를 향상시킨다. 반응은 20℃ 또는 30℃ 또는 37℃에서 대략 30분 내지 4시간 동안 진행되게 된다. 얻어진 접합체를 2개의 연속적인 Zeba™ 스핀 탈염 칼럼을 사용하여 미반응 BBI-L로부터 정제한다. 칼럼을 인산염-완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 사전 평형을 이룬다. 보조제 대 항체비(DAR)는 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분광계(Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-클래스(Waters Corporation, 매사추세츠주 밀포드 소재) 상의 C4 역상 칼럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분광 분석에 의해 추정된다.
예시적인 절차에서, 시스테인-기반 접합을 위한 제조를 위하여, 항체를 Zeba™ 스핀 탈염 칼럼(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 2mM EDTA가 포함된 PBS(pH 7.2)를 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환한다. 사슬간 다이설파이드를 37℃에서 30분 내지 2시간 동안 2 내지 4 몰 과잉의 트리스 (2-카복시에틸) 포스핀(TCEP) 또는 다이티올트레이톨(DTT)을 사용하여 환원시킨다. 접합 완충액으로 사전 평형을 이룬 Zeba™ 스판 탈염 칼럼을 사용하여 과잉의 TCEP 또는 DTT를 제거하였다. 완충액-교환된 항체의 농도는 접합 완충액을 사용하여 대략 5 내지 20 mg/ml로 조정하고 멸균-여과시켰다. BBI-L을 다이설폭사이드(DMSO) 또는 다이메틸아세트아마이드(DMA)에 5 내지 20mM의 농도로 용해시킨다. 접합을 위하여, 항체를 10 내지 20 몰 당량의 BBI-L과 혼합한다. 일부 경우에, 추가의 DMA 또는 DMSO를 최대 20% (v/v)까지 첨가하여 접합 완충제 중 BBI-L의 용해도를 향상시킨다. 반응은 20℃에서 대략 30분 내지 4시간 동안 진행되게 된다. 얻어진 접합체를 2개의 연속적인 Zeba™ 스핀 탈염 칼럼을 사용하여 미반응 BBI-L로부터 정제한다. 칼럼을 인산염-완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 사전 평형을 이룬다. 보조제 대 항체비(DAR)는 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분광계(Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-클래스(Waters Corporation, 매사추세츠주 밀퍼드 소재) 상의 C4 역상 칼럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분광 분석에 의해 추정된다.
접합 후, 미반응 BBI-L 및/또는 고분자량 응집물을 잠재적으로 제거하기 위하여, 접합체는 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심 한외여과, 접선 유동 여과 및 이들의 조합을 사용하여 더욱 정제될 수 있다.
또 다른 예시적인 절차에서, 항체를 G-25 SEPHADEX™ 탈염 칼럼(Sigma-Aldrich, 미주리주 세인트 루이스 소재)을 사용하여 100mM 붕산, 50mM 염화나트륨, 1mM 에틸렌다이아민테트라아세트산(pH 8.3)을 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환하였다. 이어서, 용리액을 각각 완충액을 사용하여 약 1 내지 10 mg/ml의 농도로 조정하고, 이어서 멸균 여과시킨다. 항체를 20 내지 30℃로 사전 가온시키고, 2 내지 20(예를 들어, 7 내지 10) 몰 당량의 화학식 II의 비스-벤즈이미다졸-링커(BBI-L) 중간 화합물과 신속하게 혼합한다. 반응은 30℃에서 약 16시간 동안 진행되게 하고, pH 7.2의 인산염 완충 식염수(PBS)로 평형을 이룬 2개의 연속적인 G-25 탈염 칼럼을 가동시킴으로써 면역접합체(IC)를 반응물로부터 분리시켜 표 2의 면역접합체(IC)를 제공한다. 보조제-항체비(DAR)를 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분광계(Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-클래스(Waters Corporation, 매사추세츠주 밀퍼드 소재) 상의 C4 역상 칼럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분광 분석에 의해 결정된다.
접합을 위하여, 항체는 항체의 안정성 또는 항원-결합 특이성에 악영향을 미치지 않을 당업계에 공지된 수성 완충 시스템에 용해될 수 있다. 인산염 완충 식염수가 사용될 수 있다. BBI-L을 본 명세서의 어딘가에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매를 포함하는 용매계에 용해시킨다. 일부 이러한 양상에서, BBI-L을 pH 8 Tris 완충액(예를 들어, 50mM Tris) 중 약 5mM, 약 10mM, 약 20mM, 약 30mM, 약 40mM 또는 약 50mM, 약 5mM 내지 약 50mM 또는 약 10mM 내지 약 30mM의 범위의 농도로 용해시킨다. 일부 양상에서, BBI-L을 DMSO(다이설폭사이드), DMA(다이메틸아세트아마이드) 또는 아세토나이트릴, 또는 다른 적합한 쌍극성 비양성자성 용매에 용해시킨다.
대안적으로, 접합 반응에서, 동등한 과량의 BBI-L 용액을 희석시키고 항체 용액과 합할 수 있다. BBI-L 용액을 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매 및 적어도 하나의 극성 양성자성 용매로 적절하게 희석시킬 수 있으며, 여기서 용매의 예는 물, 메탄올, 에탄올, n-프로판올 및 아세트산을 포함한다. 티에노아제핀-링커 중간체 대 항체의 몰 당량은 약 1.5:1, 약 3:1, 약 5:1, 약 10:1, 약 15:1, 또는 약 20:1, 및 이들의 범위, 예컨대, 약 1.5:1 내지 약 20:1, 약 1.5:1 내지 약 15:1, 약 1.5:1 내지 약 10:1, 약 3:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 15:1 또는 약 5:1 내지 약 10:1일 수 있다. 반응은 LC-MS와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 완료에 대해 적절하게 모니터링될 수 있다. 접합 반응은 전형적으로 약 1시간 내지 약 16시간의 범위에서 완료된다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물에 시약을 첨가하여 반응을 중지시킬 수 있다. 항체 티올기가 BBI-L의 말레이미드와 같은 티올-반응성기와 반응하는 경우, 미반응 항체 티올기는 캐핑 시약과 반응할 수 있다. 적합한 캐핑 시약의 예는 에틸말레이미드이다.
접합 후, 면역접합체는 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심분리 한외여과, 접선유동여과 및 이들의 조합과 같은 당업계에 공지된 정제 방법에 의해 정제되고 미접합 반응물 및/또는 접합체 응집물로부터 분리될 수 있다. 예를 들어, 정제는 20mM 석신산나트륨(pH 5)에서 면역접합체를 희석함으로써 진행될 수 있다. 희석된 용액을 양이온 교환 칼럼에 적용한 후, 예를 들어, 적어도 10 컬럼 부피의 20mM 석신산나트륨(pH 5)으로 세척한다. 접합체는 PBS와 같은 완충액으로 적절하게 용출될 수 있다.
실시예 202 면역접합체의 기능성 평가
본 발명의 면역접합체는 표적 항원-발현 종양 세포와 공동배양된 1차 인간 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 사용하는 공동배양 검정으로 평가될 수 있다. 간단히 말하면, PBMC는 밀도 원심분리에 의해 건강한 인간 기증자 혈액(Stanford Blood Center)으로부터 새롭게 단리된다. 이어서, PBMC를 완전 배지(10% FBS가 보충된 RPMI)에서 10:1 효과기 대 표적비로 항원-발현 종양 세포와 공동 배양하고 다양한 농도의 표시된 테스트 물품과 함께 하룻밤 인큐베이션한다. 활성화는 BioLegend LEGENDPLEX™ 사이토카인 비드 어레이에 의해 IFNλ 1 및 TNFα와 같은 전염증성 사이토카인의 분비에 의해 측정된다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 출원 및 특허를 포함한 모든 참고 문헌은 마치 각 참고 문헌이 개별적으로 그리고 구체적으로 참조에 의해 원용되는 것으로 표시되고 그 전체가 본 명세서에 기재된 바와 동일한 정도로 참조에 의해 원용된다.

Claims (45)

  1. 면역접합체로서, 링커에 의해 하나 이상의 STING 효능제 모이어티(agonist moiety)에 공유 부착된 항체를 포함하고 하기 화학식 I을 갖는, 면역접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:

    식 중,
    Ab는 상기 항체이고;
    p는 1 내지 8의 정수이고;
    D는 하기 화학식:

    을 갖는 상기 STING 효능제 모이어티이고;
    Xa 및 Xb는 독립적으로 R5로 선택적으로 치환된 5-원 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R1 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, -CN, -OH, -O-(C1-C6 알킬) 및 R5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2a 및 R2b는 독립적으로 H, -C(=O)N(R6)2 및 R5로부터 선택되고;
    Xa, Xb, R1, R4, R2a 및 R2b 중 하나는 R5로 치환되고;
    R3은, F, Cl, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C1-C6 알킬다이일, -(C1-C3 알킬다이일)-O-(C1-C3 알킬다이일)-, C2-C6 알켄일다이일 및 C2-C6 알킨일다이일로부터 선택되고;
    R5는,
    -(C1-C12 알킬다이일)-*;
    -(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
    -(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
    -(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-*;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-N(R6)-*;
    -OC(=O)N(R6)-*;
    -OC(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
    -N(R6)-*;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-*;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
    -C(=O)N(R6)-*;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-*;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-*
    로 이루어진 군으로부터 선택되되; 별표 *는 L의 부착부위를 나타내고;
    R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    L은,
    -C(=O)-PEG-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
    -C(=O)-PEG-O-;
    -C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R5)-C(=O);
    -C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-; 및
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-
    로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고;
    PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 50의 정수이고;
    Gluc는 하기 화학식을 갖고:
    ;
    PEP는 하기 화학식을 갖고:

    여기서 AA는 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄로부터 선택되거나, 또는 AA 중 하나 이상과, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    Cyc는, F, Cl, NO2, -OH, -OCH3 및 하기 구조를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C6-C20 아릴다이일 및 C1-C20 헤테로아릴다이일로부터 선택되고:
    ;
    R7은 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)- 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되되, R8은 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, R9는 독립적으로 H, C1-C12 알킬 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 선택되고, m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이거나, 2개의 R9기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    y는 2 내지 12의 정수이고;
    z는 0 또는 1이고; 그리고
    알킬, 알킬다이일, 알켄일, 알켄일다이일, 알킨일, 알킨일다이일, 아릴, 아릴다이일, 카보사이클릴, 카보사이클릴다이일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴다이일, 헤테로아릴 및 헤테로아릴다이일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환된다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 항체는 아테졸리주맙, 두르발루맙 및 아벨루맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체는 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항체는 트라스투주맙 및 퍼투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항체는 라베투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인, 면역접합체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항체는 Trop2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항체는 사시투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인, 면역접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Xa 및 Xb는 독립적으로 이미다졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 퓨릴, 티엔일, 아이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴, 옥사졸릴, 아이소티아졸릴, 피롤릴, 옥사다이아졸릴 및 티아다이아졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  11. 제10항에 있어서, Xa 및 Xb는 각각 -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2 및 -CH2CH(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된 피라졸릴인, 면역접합체.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Xa 및 Xb 중 하나는 R5로 치환되는, 면역접합체.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH 및 -OCH2CH2N(CH3)2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  14. 제13항에 있어서, R1은 -OCH3인, 면역접합체.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 F인, 면역접합체.
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R2a 및 R2b는 각각 -C(=O)NH2인, 면역접합체.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R2a 및 R2b 중 하나는 R5로 치환되는, 면역접합체.
  18. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 -CH2CH2-, -CH=CH- 및 -C≡C-로부터 선택되는, 면역접합체.
  19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 F, -OH 및 -OCH3로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환된 C2-C4 알켄일다이일인, 면역접합체.
  20. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-*인, 면역접합체.
  21. 제20항에 있어서, C1-C12 알킬다이일은 프로필다이일이고 C2-C20 헤테로사이클릴다이일은 피페리다이일(piperidiyl)인, 면역접합체.
  22. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R4 중 하나는 R5로 치환되는, 면역접합체.
  23. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인, 면역접합체.
  24. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 상기 항체의 시스테인 티올에 부착되는, 면역접합체.
  25. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, PEG에 대해서, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인, 면역접합체.
  26. 제25항에 있어서, n은 10인, 면역접합체.
  27. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 다이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    .
  28. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 트라이펩타이드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    .
  29. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 테트라펩타이드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    .
  30. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기 구조로부터 선택되는, 면역접합체:

    여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
  31. 하기 화학식 II를 갖는 STING 효능제-링커 중간 화합물:

    식 중,
    Xa 및 Xb는 독립적으로 R5로 선택적으로 치환된 5-원 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R1 및 R4는 독립적으로 F, Cl, Br, I, -CN, -OH, -O-(C1-C6 알킬) 및 R5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2a 및 R2b는 독립적으로 -C(=O)N(R6)2 및 R5로부터 선택되고;
    Xa, Xb, R1, R4, R2a 및 R2b 중 하나는 R5로 치환되고;
    R3은, F, Cl, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C1-C6 알킬다이일, -(C1-C3 알킬다이일)-O-(C1-C3 알킬다이일)-, C2-C6 알켄일다이일 및 C2-C6 알킨일다이일로부터 선택되고;
    R5는,
    -(C1-C12 알킬다이일)-L;
    -(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
    -(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
    -(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-L;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
    -O-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-N(R6)-L;
    -OC(=O)N(R6)-L;
    -OC(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
    -N(R6)-L;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-L;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
    -N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
    -C(=O)N(R6)-L;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-L;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L;
    -C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-O-L;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-L; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴다이일)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)-L
    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    L은,
    Q-C(=O)-PEG-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
    Q-C(=O)-PEG-O-;
    Q-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R5)-C(=O);
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-Gluc-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬다이일)-OC(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)-C(=O)-PEP-;
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-; 및
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬다이일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴다이일)-
    로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고;
    PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 50의 정수이고;
    Gluc는 하기 화학식을 갖고:
    ;
    PEP는 하기 화학식을 갖고:

    여기서 AA는 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄로부터 선택되거나, 또는 AA 중 하나 이상과, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    Cyc는, F, Cl, NO2, -OH, -OCH3 및 하기 구조를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된, C6-C20 아릴다이일 및 C1-C20 헤테로아릴다이일로부터 선택되고:
    ;
    R7은 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)- 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되되, R8은 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, R9는 독립적으로 H, C1-C12 알킬 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 선택되고, m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이거나, 2개의 R9기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    y는 2 내지 12의 정수이고;
    z는 0 또는 1이고;
    Q는, F, Cl, NO2 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된, N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드 및 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    알킬, 알킬다이일, 알켄일, 알켄일다이일, 알킨일, 알킨일다이일, 아릴, 아릴다이일, 카보사이클릴, 카보사이클릴다이일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴다이일, 헤테로아릴 및 헤테로아릴다이일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환된다.
  32. 제31항에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, STING 효능제-링커 중간 화합물:
    .
  33. 제31항에 있어서, Q는 F, Cl, NO2 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페녹시인, STING 효능제-링커 중간 화합물.
  34. 제31항에 있어서, Q는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인, STING 효능제-링커 중간 화합물.
  35. 제31항에 있어서, Q는 2,3,5,6-테트라플루오로-4-설포나토-페녹시인, STING 효능제-링커 중간 화합물.
  36. 제31항에 있어서, Q는 말레이미드인, STING 효능제-링커 중간 화합물.
  37. 제31항에 있어서, L은 하기 구조로부터 선택되는, STING 효능제-링커 중간 화합물:

    여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
  38. 표 1로부터 선택되는 STING 효능제-링커 중간 화합물.
  39. 항체를 제31항 내지 제38항 중 어느 한 항의 STING 효능제-링커 중간 화합물과 접합시켜 제조된 면역접합체.
  40. 약제학적 조성물로서, 치료학적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 면역접합체 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  41. 암을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 암은 STING 효능작용에 의해 유도된 전염증성 반응에 민감한, 방법.
  43. 제41항에 있어서, 상기 암은 방광암, 침샘암, 자궁내막암, 요로암, 요로상피 암종, 폐암, 비소세포 폐암, 머켈세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암 및 유방암으로부터 선택되는, 방법.
  44. 암을 치료하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 용도.
  45. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화학식 I의 면역접합체를 제조하는 방법으로서, 제31항의 STING 효능제-링커 중간 화합물은 상기 항체와 접합되는, 방법.
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