TW202304525A - 蛋白質降解劑偶聯物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及蛋白降解劑(protein degrader)偶聯物及其用途，具體地，涉及抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物及其用於治療和/或預防疾病，更詳細為過度增殖和/或血管新生疾病如癌症的用途。

Description

蛋白降解劑偶聯物及其用途
本發明涉及蛋白降解劑(protein degrader)偶聯物及其用途，更詳細地，涉及抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物及包含其的藥物組合物。
通常，藥物以結合在特定蛋白質的特定位點並抑制其蛋白質功能的方式表達藥效。換言之，新型治療劑的制藥靶點(druggable target)取決於疾病相關蛋白的特定活性位點(active site)或結合口袋(binding pocket)的攻克可能性。
根據2016年的報告顯示，美國食品藥品監督管理局(FDA)核准的用作藥物靶點的蛋白質約有400種，其中，大部分為酶、受體、遞質、各種通道及膜蛋白。然而，迄今為止，已知導致人類疾病的蛋白質約有3000種，其中，僅有13%被開發為靶蛋白。這是因為，現有的藥物開發方法無法以大部分疾病蛋白作為靶標而抑制其功能。例如，眾所周知的抗癌藥靶點c-Myc不具有藥物可以作為轉錄因數與之結合的疏水口袋(hydrophobic pocket)結構，而且，導致退行性腦部疾病的蛋白質聚集體如Tau蛋白纏結(Tau tangle)無法通過現有技 術去除蛋白質纏結。因此，持續進行所要攻克作為新型治療劑的不可成藥靶蛋白(undruggable target protein)的嘗試。
作為一例，提出了利用泛素-蛋白酶體途徑選擇性地去除靶蛋白的方法。大部分(80%)細胞蛋白通過泛素-蛋白酶體途徑被泛素(ubiquitin)標記後，通過蛋白酶體在細胞質和核中降解。這不僅實現蛋白質轉化及穩態維持，還調節細胞週期、信號調節、轉錄調節、細胞凋亡等細胞生理功能。並且，快速去除具有異常結構的蛋白、受損蛋白或因突變而具有異常結構的蛋白的作用。最近有報導稱，泛素介導的蛋白降解與各種疾病有關，尤其是阿爾茨海默病、帕金森病等退行性腦部疾病及遺傳性疾病，蛋白降解途徑的異常被認為是導致包括癌症在內的各種疾病的原因。因此，作為利用泛素-蛋白酶體途徑的活化來去除疾病誘發蛋白的治療方法，正在積極進行被稱為“蛋白降解靶向嵌合體(PROTAC，proteolysis-targeting chimaera)”的新藥開發研究。蛋白降解靶向嵌合體作為由與靶蛋白結合的配體、與E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligas)結合的配體及連接子(linker)組成的雙功能有機小分子，具有可通過在可啟動蛋白質降解系統的E3泛素連接酶附近結合作為降解受試者的靶蛋白來使得靶蛋白被輕易降解的結構。其通過使所需的疾病相關蛋白位於E3泛素連接酶附近來降解問題蛋白，從而可以期待所期望的治療功效。但由於通過PROTAC誘導降解的靶蛋白不屬於E3泛素連接酶的底物，因此存在可被具有底物特異性的E3泛素連接酶泛素化的靶蛋白有限的缺點。由此，即使PROTAC與E3泛素連接酶及靶蛋白結合，也存在靶蛋白不會被降解的可能性。並且，依然存在難以實現藥物靶向遞送的問題。
為此，作為能夠靶向遞送藥物的同時提高靶蛋白的選擇性降解效率的新藥平臺，本發明人通過開發抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物來完成了本發明。
PROTAC是最近通過靶蛋白的選擇性去除方法開發的藥物，由靶蛋白的配體-連接子-E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase)的配體組成，因此，具有結構複雜且難以發現合適的配體及連接子組合的問題。並且，存在能夠通過PROTAC誘導降解的靶蛋白有限且靶蛋白降解效率降低的問題。並且，除問題細胞外，藥物還影響正常細胞，因此，具有可能誘發毒性的問題。
因此，需要開發一種新型概念的藥物，其可以僅靶向問題細胞而不會對正常細胞產生毒性，同時可提高靶蛋白的選擇性降解效率。
本發明提供抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物，其結合可提高靶蛋白的選擇性降解效率的蛋白降解劑(protein degrader)、可向靶細胞準確遞送上述蛋白降解劑的抗原特異性鍵合部分以及即使在體內迴圈時也很穩定且使得藥物容易在靶細胞內釋放而能夠最大化藥效的連接子技術。
由此，提供抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物，其不僅可提高靶蛋白的選擇性降解效率，而且，可通過向靶細胞準確遞送上述蛋白降解劑來有效發揮藥效並大幅降低毒性，從而解決了上述問題。
在本發明的一實施方式中，本發明提供一種由以下通式I表示的偶聯物作為抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑(protein degrader)偶聯物：通式I Ab-[Linker-(B)m]n
在上述通式中，
Ab為抗原特異性鍵合部分，
Linker為連接子，
B為蛋白降解劑(protein degrader)部分，
m，n為選自1至20的整數。
並且，本發明提供用於預防和/或治療過度增殖、癌症或血管新生疾病的藥物組合物，包含本發明的抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物作為有效成分。
本發明的抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物包含與靶細胞，尤其與癌細胞的抗原結合的抗原特異性鍵合部分，從而可向靶細胞內有效、特異性且選擇性地遞送蛋白降解劑。
並且，本發明的抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物包含與E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase)結合的蛋白降解劑，從而可以誘導上述E3泛素連接酶的底物蛋白，尤其是啟動癌細胞進展的蛋白的選擇性降解，並提高降解效率。
並且，本發明的抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物包含能夠使蛋白降解劑容易在靶細胞內釋放而最大化效果的連接子，從而能夠使蛋白降解劑穩定到達靶細胞來有效發揮功效。
因此，本發明的抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物可容易用於預防或治療過度增殖、癌症或血管新生疾病。
圖1為示出本發明蛋白降解劑的反應途徑的圖。
圖2及圖3為示出本發明偶聯物的反應途徑的圖。
以下，進一步詳細說明本發明。
本發明提供蛋白降解劑(protein degrader)偶聯物，更詳細地，提供抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物。
在本發明的一實施方式中，提供由以下通式I表示的偶聯物作為抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物：通式I Ab-[Linker-(B)m]n
在上述通式中，
Ab為抗原特異性鍵合部分，
Linker為連接子，
B為蛋白降解劑(protein degrader)部分，
m，n各自獨立地為選自1至20的整數。
並且，本發明提供上述偶聯物、其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物。
在本說明書中，“偶聯物(conjugate)”是指與細胞毒性化合物的一種以上分子共價鍵合的細胞結合劑。其中，“細胞結合劑”是指具有生物靶點親和力的分子，例如可以是配體、蛋白質、抗體，具體為單克隆抗體、蛋白質或抗體片段、肽、寡核苷酸、寡糖，結合劑具有將生物活性化合物誘導至生物靶點的功能。在本發明的一實施方式中，偶聯物可被設計為通過細胞表面抗原靶向癌細胞。抗原可以為在異常細胞類型中過表達或表達的細胞表面抗原。具體地，靶抗原可以僅在增殖細胞(例如，癌細胞)上表達。通常可基於增殖組織與正常組織之間的不同表達來選擇靶抗原。
在本說明書中，“抗原特異性鍵合部分(moiety)”是指能夠與靶抗原或靶表位特異性結合的任何分子或分子的一部分。具體地，上述抗原特異性鍵合部分可以為抗體構建體或抗體樣蛋白。
在本說明書中，“抗體構建體”是指與靶細胞的抗原結合的抗體構建體，除完整的抗體形態外，還包含上述抗體分子的抗原結合片段。並且，包含具有抗原結合結構域及Fc結構域的多肽。
在本發明中所使用的術語“抗原結合結構域”是指能夠與抗原特異性結合的抗體或非抗體的結合結構域。在所製備的偶聯物或抗體構建體中存在多個抗原結合結構域(例如，第一抗原結合結構域、第二抗原結合結構域、第三抗原結合結構域等)的情況下，可以對抗原結合結構域進行編號。相同的偶聯物 或構建體中的不同的抗原結合結構域可靶向相同抗原(例如，第一抗原結合結構域及第二抗原可以與偶聯物或構建體的相同靶細胞抗原特異性結合)或不同抗原(例如，第一抗原結合結構域可以與第一靶細胞抗原特異性結合，第二抗原結合結構域可以與偶聯物或第二靶細胞抗原特異性結合)。
抗原結合結構域可以為抗體或抗體片段的抗原鍵合部分。抗原結合結構域可以為能夠保留抗原特異性結合能力的抗體的一個以上片段。抗原結合結構域可以為任何抗原結合片段。抗原結合結構域典型地識別單一抗原。例如，雖然抗體構建體典型地包含一個或兩個抗原結合結構域，但是，抗體構建體還可包含更多的抗原結合結構域。
雖然抗體構建體的抗原結合結構域包含抗體分子或非抗體分子，但是，也可選自與不限於此的抗原特異性結合的任何結構域。在一些具體例中，抗原結合結構域包含單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體或其功能片段，例如，雖然包含重鏈可變結構域VH及輕鏈可變結構域VL、Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG、scFv、hcAbs(重鏈抗體)、單域抗體、VHH、VNAR、sdAbs或納米抗體，但是，可選自與不限於此的抗原特異性結合的抗體的任何結構域。在一些具體例中，抗原結合結構域包含非抗體支架，例如，錨蛋白重複序列(DARPin)、阿非默(affimer)、高親合性多聚體(avimer)、打結素(notin)、單體、脂質運載蛋白、抗運載蛋白、“T-體”、親和體、肽體、親和鉗、胞外域、受體胞外域、受體、配體或中心體蛋白，但是可選自與不限於此的抗原特異性結合的非抗體分子的任何結構域。
抗體構建體的抗原結合結構域，例如，源自單克隆抗體的抗原結合結構域可包含輕鏈及重鏈。在一些具體例中，單克隆抗體與存在於靶細胞表面 的抗原特異性結合，包含抗-靶細胞抗原抗體的輕鏈及抗-靶細胞抗原抗體的重鏈並形成與靶細胞抗原特異性結合的抗原結合結構域。
在本說明書中，“Fc結構域”是指抗體的片段可結晶區域或尾部區域。Fc結構域作為與一個以上的Fc受體(FcR)結合的結構，與細胞表面上的Fc受體(FcR)相互作用。
FcR可結合在抗體的Fc結構域。FcR可結合在與抗原結合的抗體的Fc結構域。FcR基於FcR識別的抗體的類別(例如，組成伽馬(γ)、阿爾法(α)及艾普西隆(ε))類。FcαR類與IgA結合並具有各種同種型，包含FcαRI(CD89)及FcαμR。FcγR類與IgG結合並具有各種同種型，包含FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32a)、FcγRIIB(CD32b)、FcγRIIIA(CD16a)及FcγRIIIB(CD16b)。FcγRIIIA(CD16a)可以為FcγRIIIA(CD16a)F158變體或V158變體。
在Fc結構域的氨基酸序列中的修飾可改變FcR對Fc結構域的識別。但是，這種修飾可依然允許FcR-介導的信號轉導。修飾可以為將Fc結構域的殘基(例如，野生型)處的氨基酸用該殘基處的不同的氨基酸取代。修飾可允許FcR結合在Fc結構域上FcR可能不結合的位點。修飾可增加針對FcR的Fc結構域的結合親和度。修飾可針對可增加FcR結合親和度的Fc結構域上的位點減少FcR的結合親和度。在Fc結構域與FcR結合後，修飾可增加隨後的FcR-介導的信號轉導。
Fc結構域可以為天然發生或天然發生Fc結構域的變體，相比於野生型Fc結構域的序列，可包含至少一個氨基酸變化。在Fc結構域中的氨基酸變化可使得抗體構建體或偶聯物通過比野生型Fc結構域更大的親和度與至少一個Fc受體結合。
Fc結構域可來源於抗體。Fc結構域可來源於IgG抗體。Fc結構域可來源於IgG1抗體、IgG2抗體或IgG4抗體。Fc結構域可以與來源於抗體的Fc結構域至少80%相同。Fc結構域可以為抗體的Fc結構域的一部分。
抗體構建體可包含抗體中的Fc結構域。抗體構建體可包含支架中的Fc結構域。抗體構建體可包含抗體支架中的Fc結構域。抗體構建體可包含非抗體支架中的Fc結構域。
抗體構建體可包含抗原結合結構域及Fc結構域，其中，Fc結構域可以與抗原結合結構域共價鍵合。抗體構建體可包含第一抗原結合結構域及Fc結構域，其中，Fc結構域可以與第一抗原結合結構域共價鍵合。抗體構建體可包含抗原結合結構域及Fc結構域，其中，Fc結構域為Fc結構域-抗原結合結構域融合蛋白，可以與抗原結合結構域共價鍵合。抗體構建體可包含抗原結合結構域及Fc結構域，其中，Fc結構域可通過連接子與抗原結合結構域結合。
第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域(存在的情況下)可作為融合蛋白附著於Fc結構域。第一抗原結合結構域可在Fc結構域的N-末端附著於Fc結構域，其中，第二抗原結合結構域可在C-末端附著於Fc結構域。第一抗原結合結構域可在Fc結構域的N-末端附著於Fc結構域，其中，第二抗原結合結構域可通過多肽連接子在C-末端附著於Fc結構域。
代替性地，第一抗原結合結構域可在Fc結構域的C-末端附著於Fc結構域，其中，第二抗原結合結構域可在N-末端附著於Fc結構域。第二抗原結合結構域及Fc結構域可包含抗體，第一抗原結合結構域可包含單鏈可變片段(scFv)。單鏈可變片段可包含抗體的重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域。融合蛋白的第一抗原結合結構域可在第一抗原結合結構域的單鏈可變片段的重鏈可 變結構域附著於第二抗原結合結構域(HL方向)。代替性地，融合蛋白的第一抗原結合結構域可在第一抗原結合結構域的單鏈可變片段的輕鏈可變結構域附著於第二抗原結合結構域(LH方向)。在任何方向，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域可通過多肽連接子實現附著。
相對於第一抗原結合結構域的抗原，如本發明中所記載的抗體構建體可具有小於10nM的解離常數(Kd)。相對於第二抗原結合結構域的抗原，抗體構建體可具有小於10nM的解離常數(Kd)。相對於第一抗原結合結構域的抗原，抗體構建體可具有小於1nM、小於100pM、小於10pM、小於1pM或小於0.1pM的解離常數(Kd)。相對於第二抗原結合結構域的抗原，抗體構建體可具有小於1nM、小於100pM、小於10pM、小於1pM或小於0.1pM的解離常數(Kd)。
本發明中公開的抗體構建體可以為非天然的、被設計的和/或工程化的。
本發明中公開的抗體構建體可以為非天然的、被設計的和/或工程化的含抗原結合結構域的支架。
抗體構建體可包含具有抗原結合結構域及Fc結構域的抗體。抗體分子可由2個相同的輕鏈及2個相同的重鏈組成，均通過精確定位的二硫鍵共價鍵合。輕鏈及重鏈的N-末端區域可一同形成各個抗體的抗原識別位點。在結構上，抗體的各種功能可能僅限於個別的蛋白結構域(即，區域)。能夠識別抗原並與此結合的位點由三個互補決定區(CDR)組成，上述互補決定區(CDR)可在兩個重鏈及兩個輕鏈的N-末端存在於可變重鏈區內及可變輕鏈區內。恒定 結構域可提供抗體的普通框架，並且可不干涉抗體與抗原的直接鍵合，但是，可干涉各種效應功能，例如，抗體參與抗體依賴細胞的細胞毒性(ADCC)。
自然輕鏈可變區及重鏈可變區的結構域可具有相同的普通結構，各個結構域可包含3個高變區或4個框架區，上述4個框架區可保存部分由CDR連接的序列。4個框架區可主要採用β-折疊結構，CDR可形成環以形成β-折疊結構的一部分，並且，在部分側面形成β-折疊結構的一部分。各個鏈的CDR可通過框架區維持在接近的位置，與其他鏈的CDR一同致力形成抗原結合位點。
抗體構建體的抗體可包含任意類型的抗體，可相當於不同類別的免疫球蛋白，例如，IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。多個不同類別可進一步分為同種型，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。抗體還可包含各種鏈，例如，輕鏈及重鏈。與不同類別的免疫球蛋白相應的重鏈恒定區(Fc)可分別為α、δ、ε、γ及μ。基於恒定結構域的氨基酸序列，輕鏈可以為κ或κ及λ或λ中的一種。Fc區域可包含Fc結構域。Fc受體可結合在Fc結構域。雖然，偶聯物包含能夠與scFv、Fab、可變Fc片段、域抗體及抗原特異性結合的任何其他片段，但是，也可包含不限於此的任何片段或其重組形態。
抗體可包含抗原結合結構域，上述抗原結合結構域是指包含抗原識別部分的一部分抗體，即抗體的足以向表位賦予抗原識別部分的識別及特異性結合至靶標的抗原決定簇可變區，例如抗原，即表位。
抗體的抗原結合結構域可包含一個以上的輕鏈(LC)CDR(LCDR)及一個以上的重鏈(HC)CDR(HCDR)、一個以上的LCDR或一個以上的HCDR。例如，抗體的抗體結合結構域可包含一個以上的輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)或輕鏈互補決定區3(LCDR3)。 作為另一例，抗體結合結構域可包含一個以上的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)或重鏈互補決定區3(HCDR3)。在一些具體例中，抗體結合結構域可包含輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)、輕鏈互補決定區3(LCDR3)、重鏈互補決定區1(HCDR1)、重量互補決定區2(HCDR2)及重鏈互補決定區3(HCDR3)。除非另有說明，否則本發明中所述的CDR可根據IMGT(國際ImMunoGeneTics資訊系統)定義。抗原結合結構域可以僅包含抗體的重鏈(例如，不包含抗體的其他部分)。抗原結合結構域可以僅包含抗體的重鏈可變結構域。代替性地，抗原結合結構域可以僅包含抗體的輕鏈。抗原結合結構域可以僅包含抗體的可變輕鏈。
抗體構建體可包含抗體片段，例如，Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv片段。在本發明中所使用的抗體可以被“人源化”。人源化的非人(例如，鼠)抗體可以為完整(全長)嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其抗原結合片段(例如，Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗體的其他靶結合亞結構域)，這可包含來源於非人免疫球蛋白的最少序列。通常，人源化的抗體可包含至少一個可變結構域，典型地可包含所有兩個可變結構域，其中，所有或基本所有CDR區與非人免疫球蛋白的CDR區相對應，所有或基本所有框架(FR)區為人免疫球蛋白序列。人源化的抗體包含免疫球蛋白恒定區(Fc)的至少一部分，通常，可包含人免疫球蛋白共同序列的一部分。
本發明中所述的抗體可以為人抗體。例如，在本發明中，所使用的“人抗體”可包含具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體，可包含從人免疫球蛋白文庫或不表達內源性免疫球蛋白的一種以上人免疫球蛋白相關轉基因動物中分離的抗體。可以使用無法表達功能性內源性免疫球蛋白但能夠表達人免疫球 蛋白基因的轉基因小鼠來生成人抗體。識別所選表位的全人源抗體可通過誘導的選擇來產生。在這種接近法中，所選擇的非人單克隆抗體，例如小鼠抗體可用於誘導對識別相同表位的全人源抗體的選擇。
本發明中所述的抗體可以為雙特異性抗體或雙變域抗體(DVD)。其中，雙特異性抗體及雙變域抗體為可對至少兩種不同的抗原具有結合特異性的單克隆抗體，通常，可以為人或人源化抗體。
本發明中所述的抗體可被誘導或以其他方式修飾。例如，誘導的抗體可通過糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、用已知的保護基團/封閉基團進行的誘導化、蛋白降解切割等實現修飾。
抗體構建體可包含具有至少一個氨基酸殘基中產生的修飾的抗體。修飾可以為取代、添加、突變、缺失等。抗體修飾可以為非天然氨基酸的插入。
抗體構建體可包含IgG1同種型的Fc結構域。抗體構建體可包含IgG2同種型的Fc結構域。抗體構建體可包含IgG3同種型的Fc結構域。抗體構建體可包含IgG4同種型的Fc結構域。抗體構建體可包含具有來自兩種以上同種型的恒定區的雜合同種型。
本發明中所述的抗體可具有修飾的序列，以相對於相應的野生型序列改變至少一種恒定區介導的生物效應功能。例如，在一些具體例中，相比於未修飾的抗體，可以修飾抗體以增加或減少至少一種恒定區介導的生物效應功能，例如增加與Fc受體(FcR)的結合。例如，通過在FcR相互作用所需的特定區域中突變抗體的免疫球蛋白恒定區片段，可以減少或增加FcR結合。
例如為了增強FcγR相互作用，相比於未修飾的抗體，本發明中所述的抗體可被修飾以獲得或改善至少一種恒定區介導的生物效應功能。例如，可通過本發明中所述的方法生成具有以比相應的野生型恒定區更大的親和度與FcγRIIA、FcγRIIB和/或FcγRIIIA結合的恒定區的抗體。
本發明公開的抗體構建體可以為非天然、被設計和/或工程化的抗體。
在本說明書中，術語“抗體樣蛋白”是指經過工程化以與靶抗原特異性結合(通過誘發環的突變)的蛋白質。典型地，這種抗體樣蛋白質至少包含附著在蛋白質支架的兩末端的一個以上可變肽。這種雙重結構限制使得抗體樣蛋白的結合親和性大幅升高至與抗體的結合親和性相應的水準。可變肽環的長度典型地由10個至20個氨基酸組成。支架蛋白可以為溶解特性優秀的任何蛋白質。優選地，支架蛋白為小型球狀蛋白(globular protein)。抗體樣蛋白包含親和蛋白(affibody)、抗運載蛋白(anticalin)及設計的錨蛋白重複蛋白(designed ankyrin repeat protein)，但不限於此。抗體樣蛋白可來源於多個突變文庫，例如，可從多個噬菌體展示文庫中提取，可以與普通抗體類似地分離。並且，抗體樣結合蛋白可通過在球狀蛋白質組合誘發表面暴露型殘基的突變來獲得。
在本發明的一實施方式中，抗原特異性鍵合部分可以為抗體構建體或抗體樣蛋白。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體包含與抗原特異性結合的抗原結合結構域及Fc結構域。例如，抗體構建體可包含與第一抗原特異性結合的第一抗原結合結構域及Fc結構域。抗體構建體可包含與第一抗原特異性結合 的第一抗原結合結構域、與第二抗原特異性結合的第二抗原結合結構域及Fc結構域。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體可由抗原結合結構域與Fc結構域共價鍵合而成。例如，在抗體構建體中，第一抗原結合結構域可以與Fc結構域共價鍵合。並且，當抗體構建體包含第二抗原結合結構域時，第二抗原結合結構域可使得第二抗原結合結構域的N-末端與第一抗原結合結構域的C-末端共價鍵合，或者，可以與FC結構域的C-末端共價鍵合。
在本發明的一實施方式中，第一抗原結合結構域和/或第二抗原結合結構域可包含免疫球蛋白重鏈可變區或其抗原結合片段及免疫球蛋白輕鏈可變區或其抗原結合片段。並且，第一抗原結合結構域或第二抗原結合結構域可包含單鏈可變區片段(scFv)。
在本發明的一實施方式中，Fc結構域可以為IgG區域。Fc結構域可以為IgG1Fc區域。並且，相比於野生型IgG區域的氨基酸序列，Fc結構域可以為在IgG區域包含一個以上氨基酸取代的Fe結構域變體，相比於野生型IgG區域，上述Fc結構域變體可增加一個以上Fcγ受體的親和度。
在本發明的一實施方式中，Fc結構域可以為非抗體支架。
在本發明的一實施方式中，Fc結構域可以為a)Fc結構域-抗原結合結構域融合蛋白；或者，b)可通過第二連接子的偶聯與抗原結合結構域共價鍵合。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體還可包含與抗原呈遞細胞呈遞的抗原結合的效應(effector)抗原結合結構域。
在本發明的一實施方式中，使得抗體構建體與抗原結合的偶聯物的解離常數可小於未偶聯抗體構建體的解離常數100nM或100倍以下。例如，可小於未偶聯抗體構建體的解離常數1nM、100pM、10pM、1pM或0.1pM。並且，可小於未偶聯抗體構建體的解離常數100倍、200倍、400倍、800倍或1000倍。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體可以為抗體或抗體片段。例如，可以為單克隆抗體、dAb、scAb、Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scFv-Fc片段、單域重鏈抗體、單域輕鏈抗體、抗體變體、多聚抗體(multimeric antibody)或雙特異性抗體。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體可以為兔、小鼠、嵌合、人源化或全人單克隆抗體。
在本發明的一實施方式中，抗體構建體可以為IgG同種型。
在本發明中所公開的抗體構建體與靶細胞的抗原結合。在本發明的一實施方式中，抗體構建體與癌細胞的抗原結合。抗體可以與以至少10個、100個、1000個、1.0×105個、1.0×106個、2.5×106個、5×106個或1×107個克隆量存在於靶細胞表面上的靶抗原結合。
在本發明中所公開的抗體構建體與靶細胞的抗原結合。在本發明的一實施方式中，抗原可以為5T4、A33、ABL、ABCF1、ACVR1、ACVR1B、ACVR2、ACVR2B、ACVRL1、ADORA2A、AFP、Aggrecan、AGR2、AICDA、AIF1、AIGI、AKAP1、AKAP2、ALK、AMH、AMHR2、ANGPT1、ANGPT2、ANGPTL3、ANGPTL4、ANPEP、APC、APOCl、AR、aromatase、ATX、AX1、AZGP1(zinc-a-glycoprotein)、avB3、B7.1、B7.2、B7-H1、BAD、BAFF、BAG1、 BAI1、BCR、BCL2、BCL6、BDNF、BLNK、BLR1(MDR15)、BIyS、BMP1、BMP2、BMP3B(GDFIO)、BMP4、BMP6、BMP8、BMPR1A、BMPR1B、BMPR2、BPAG1(plectin)、BRCA1、C19orflO(IL27w)、C3、C4A、C5、C5R1、CA-125、,CA19-9CAMPATH-1、CANT1、CAPRIN-1、CASP1、CASP4、CAV1、CCBP2(D6/JAB61)、CCL1(1-309)、CCLI1(eotaxin)、CCL13(MCP-4)、CCL15(MIP-Id)、CCL16(HCC-4)、CCL17(TARC)、CCL18(PARC)、CCL19(MIP-3b)、CCL2(MCP-1)、MCAF、CCL20(MIP-3a)、CCL21(MEP-2)、SLC、exodus-2、CCL22(MDC/STC-I)、CCL23(MPIF-I)、CCL24(MPIF-2/eotaxin-2)、CCL25(TECK)、CCL26(eotaxin-3)、CCL27(CTACK/ILC)、CCL28、CCL3(MIP-Ia)、CCL4(MIPIb)、CCL5(RANTES)、CCL7(MCP-3)、CCL8(mcp-2)、CCNA1、CCNA2、CCND1、CCNE1、CCNE2、CCR1(CKR1/HM145)、CCR2(mcp-IRB/RA)、CCR3(CKR3/CMKBR3)、CCR4、CCR5(CMKBR5/ChemR13)、CCR6(CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6)、CCR7(CKR7/EBI1)、CCR8(CMKBR8/TERI/CKR-L1)、CCR9(GPR-9-6)、CCRL1(VSHK1)、CCRL2(L-CCR)、CD164、CD19、CDIC、CD2、CD20、CD21、CD200、CD-22、CD24、CD25、CD27、CD28、CD3、CD30、CD33、CD35、CD37、CD38、CD3E、CD3G、CD3Z、CD4、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD45RB、CD47、CD5、CD52、CD69、CD72、CD74、CD79A、CD79B、CD8、CD80、CD81、CD83、CD86、CD137、CD152、CD274、CDH1(E-cadherin)、CDH1O、CDH12、CDH13、CDH18、CDH19、CDH2O、CDH5、CDH7、CDH8、CDH9、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK9、CDKN1A(p21Wap1/Cip1)、CDKN1B(p27Kip1)、CDKN1C、CDKN2A(p16INK4a)、 CDKN2B、CDKN2C、CDKN3、CEA、CEBPB、CERI、CHGA、CHGB、Chitinase、CHST1O、CKLFSF2、CKLFSF3、CKLFSF4、CKLFSF5、CKLFSF6、CKLFSF7、CKLFSF8、CLDN3、CLDN7(claudin-7)、CLN3、CLU(clusterin)、CMKLR1、CMKOR1(RDC1)、CNR1、COL18A1、COLIA1、COL4A3、COL6A1、CR2、crypto、CRP、CSF1(M-CSF)、CSF2(GM-CSF)、CSF3(GCSF)、CTL8、CTNNB1(β-catenin)、CTSB(cathepsinB)、CX3CL1(SCYD1)、CX3CR1(V28)、CXCL1(GRO1)、CXCL1O(IP-IO)、CXCLI1(1-TAC/IP-9)、CXCL12(SDF1)、CXCL13、CXCL14、CXCL16、CXCL2(GRO2)、CXCL3(GRO3)、CXCL5(ENA-78/LIX)、CXCL6(GCP-2)、CXCL9(MIG)、CXCR3(GPR9/CKR-L2)、CXCR4、CXCR6(TYMSTR/STRL33/邦佐(Bonzo))、cyclinB1、CYB5、CYC1、CYSLTR1、DAB2IP、DES、DKFZp451J0118、DNCL1、DPP4、E2F1、Engel、Edge、Fennel、EFNA3、EFNB2、EGF、EGFR、ELAC2、ENG、Enola、ENO2、ENO3、EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHA9、EPHA10、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5、EPHB6、EPHRIN-A1、EPHRIN-A2、EPHRINA3、EPHRIN-A4、EPHRIN-A5、EPHRIN-A6、EPHRIN-B1、EPHRIN-B2、EPHRIN-B3、EPHB4、EPG、ERG、ERBB2(Her-2)、EREG、ERK8、Estrogenreceptor、Endosialin、Earl、ESR2、F3(TF)、FADD、farnesyltransferase、FasL、FASNf、FBP(Folate-bindingprotein)、FCER1A、FCER2、FCGR3A、FGF、FGF1(aFGF)、FGF10、FGF11、FGF12、FGF12B、FGF13、FGF14、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2(bFGF)、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3(int-2)、FGF4(HST)、FGF5、FGF6(HST-2)、FGF7(KGF)、FGF8、FGF9、FGFR3、FIGF(VEGFD)、FIL1(EPSILON)、FBL1 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ILK、INHA、INHBA、INSL3、INSL4、IRAK1、IRAK2、ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA6(α6integrin)、ITGAV、ITGB3、ITGB4(β4integrin)、JAG1、JAK1、JAK3、JTB、JUN、K6HF、KAI1、KDR、KITLG、KLF5(GCBoxBP)、KLF6、KLK10、KLK12、KLK13、KLK14、KLK15、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK9、KRT1、KRT19(Keratin19)、KRT2A、KRTHB6(hair-specifictypeIIkeratin)、LAMA5、LEP(leptin)、Lingo-p75、Lingo-Troy、LMP2、LPS、LTA(TNF-b)、LTB、LTB4R(GPR16)、LTB4R2、LTBR、MelanA/MART1、MACMARCKS、MAG、OMgp、MAGEA3、MAP2K7(c-Jun)、MCP-1、MDK、MIB1、midkine、MIF、MISRII、MJP-2、MK、MKI67(Ki-67)、ML-IAP、MMP2、MMP9、MS4A1、MSMB、MT3(metallothionectin-UI)、MMPs、mTOR、MTSS1、MUC1(mucin)、MYC、MYD88、NCK2、NA17、neurocan、NFKBI、NFKB2、NGFB(NGF)、NGFR、NgR-Lingo、NgRNogo66(Nogo)、NgR-p75、NgR-Troy、NMEI(NM23A)、NOTCH、NOTCH1、NOX5、NPPB、NROB1、NROB2、NRID1、NR1D2、NR1H2、NR1H3、NR1H4、NR112、NR113、NR2C1、NR2C2、NR2E1、NR2E3、NR2F1、NR2F2、NR2F6、NR3C1、NR3C2、NR4A1、NR4A2、NR4A3、NR5A1、NR5A2、NR6A1、NRP1、NRP2、NT5E、NTN4、NY-ESO-1、ODZI、OPRDI、P2RX7、p53及其變體、PAP、PART1、PATE、PAWR、PAX3、PCA3、PCDGF、PCNA、PDGFA、PDGFB、PDGFRA、PDGFRB、PECAMI、peg-asparaginase、PF4(CXCL4)、PGF、PGR、phosphacan、PIAS2、PI3Kinase、PIK3CG、PLAU(uPA)、PLG、PLXDCI、PKC、PKC-β、PPBP(CXCL7)、PPID、PR1、PRKCQ、PRKD1、PRL、PROC、PROK2、PSAP、PSCA、PSM、PTAFR、PTEN、PTGS2(COX-2)、PTN、RAC2(P21Rac2)、RANK、RANKligand、RARB、Ras變體、RGS1、RGS13、 RGS3、RNFI1O(ZNF144)、Ron、ROBO2、RXR、S100A2、SCGB1D2(lipophilinB)、SCGB2A1(mammaglobin2)、SCGB2A2(mammaglobin1)、SCYE1(endothelialMonocyte-activatingcytokine)、SDF2、SERPENA1、SERPINA3、SERPINB5(maspin)、SERPINEI(PAI-I)、SERPINFI、SHIP-1、SHIP-2、SHB1、SHB2、SHBG、SfcAZ、SLC2A2、SLC33A1、SLC43A1、SLIT2、SPP1、SPRR1B(Spr1)、ST6GAL1、STAB1、STATE、STEAP、STEAP2、TAG-72、TB4R2、TBX21、TCP1O、TDGF1、TEK、腱生蛋白、TGFA、TGFB1、TGFB1I1、TGFB2、TGFB3、TGFBI、TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3、THIL、THBS1(thrombospondin-1)、THBS2、THBS4、THPO、TIE(Tie-1)、TIMP3、tissuefactor、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11、TNF、TNF-a、TNFAIP2(B94)、TNFAIP3、TNFRSFI1A、TNFRSF1A、TNFRSF1B、TNFRSF21、TNFRSF5、TNFRSF6(Fas)、TNFRSF7、TNFRSF8、TNFRSF9、TNFSF1O(TRAIL)、TNFSF11(TRANCE)、TNFSF12(APO3L)、TNFSF13(April)、TNFSF13B、TNFSF14(HVEM-L)、TNFRSF14(HVEM)、TNFSF15(VEGI)、TNFSF18、TNFSF4(OX40ligand)、TNFSF5(CD40ligand)、TNFSF6(FasL)、TNFSF7(CD27ligand)、TNFSF8(CD30ligand)、TNFSF9(4-1BBligand)、TOLLIP、Toll-likereceptor、TOP2A(topoisomeraseIia)、TP53、TPM1、TPM2、TRADD、TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRKA、TREM1、TREM2、TRPC6、TSLP、TWEAK、Tyrosinase、uPAR、VEGF、VEGFB、VEGFC、versican、VHLC5、VLA-4、Wnt-1、XCL1(lymphotactin)、XCL2(SCM-Ib)、XCRI(GPR5/CCXCR1)、YY1、ZFPM2、CLEC4C(BDCA-2、DLEC、CD303、CLECSF7)、CLEC4D(MCL、CLECSF8)、CLEC4E(Mincle)、CLEC6A(Dectin- 2)、CLEC5A(MDL-1、CLECSF5)、CLEC1B(CLEC-2)、CLEC9A(DNGR-1)、CLEC7A(Dectin-1)、PDGFRa、SLAMF7、GP6(GPVI)、LILRA1(CD85I)、LILRA2(CD85H、ILT1)、LILRA4(CD85G、ILT7)、LILRA5(CD85F、ILT11)、LILRA6(CD85b、ILT8)、NCR1(CD335、LY94、NKp46)、NCR3(CD335、LY94、NKp46)、NCR3(CD337、NKp30)、OSCAR、TARM1、CD300C、CD300E、CD300LB(CD300B)、CD300LD(CD300D)、KIR2DL4(CD158D)、KIR2DS、KLRC2(CD159C、NKG2C)、KLRK1(CD314、NKG2D)、NCR2(CD336、NKp44)、PILRB、SIGLEC1(CD169、SN)、SIGLEC14、SIGLEC15(CD33L3)、SIGLEC16、SIRPB1(CD172B)、TREM1(CD354)、TREM2、WT1或KLRF1(NKp80)，但不限於此。
更具體地，抗原可以為FcRγ結合受體，作為一例，FcRγ結合受體可以為GP6(GPVI)、LILRA1(CD85I)、LILRA2(CD85H，ILT1)、LILRA4(CD85G，ILT7)、LILRA5(CD85F，ILT11)、LILRA6(CD85b，ILT8)、NCR1(CD335，LY94，NKp46)、NCR3(CD335，LY94，NKp46)、NCR3(CD337，NKp30)、OSCAR或TARM1，但不限於此。或者，抗原可以為DAP12結合受體，作為一例，DAP12結合受體可以為CD300C、CD300E、CD300LB(CD300B)、CD300LD(CD300D)、KIR2DL4(CD158D)、KIR2DS、KLRC2(CD159C，NKG2C)、KLRK1(CD314，NKG2D)、NCR2(CD336，NKp44)、PILRB、SIGLEC1(CD169，SN)、SIGLEC14、SIGLEC15(CD33L3)、SIGLEC16、SIRPB1(CD172B)、TREM1(CD354)或TREM2，但不限於此。或者，抗原可以為帶hemITAM的受體，作為一例，帶hemITAM的受體可以為KLRF1(NKp80)，但不限於此。
或者，抗原可以為CLEC4C(BDCA-2，DLEC，CD303，CLECSF7)、CLEC4D(MCL，CLECSF8)、CLEC4E(Mincle)、CLEC6A(Dectin-2)、CLEC5A(MDL-1，CLECSF5)、CLEC1B(CLEC-2)、CLEC9A(DNGR-1)或CLEC7A(Dectin-1)，但不限於此。或者，抗原可以為ATP5I(Q06185)、OAT(P29758)、AIFM1(Q9Z0X1)、AOFA(Q64133)、MTDC(P18155)、CMC1(Q8BH59)、PREP(Q8K411)、YMEL1(O88967)、LPPRC(Q6PB66)、LONM(Q8CGK3)、ACON(Q99KI0)、ODO1(Q60597)、IDHP(P54071)、ALDH2(P47738)、ATPB(P56480)、AATM(P05202)、TMM93(Q9CQW0)、ERGI3(Q9CQE7)、RTN4(Q99P72)、CL041(Q8BQR4)、ERLN2(Q8BFZ9)、TERA(Q01853)、DAD1(P61804)、CALX(P35564)、CALU(O35887)、VAPA(Q9WV55)、MOGS(Q80UM7)、GANAB(Q8BHN3)、ERO1A(Q8R180)、UGGG1(Q6P5E4)、P4HA1(Q60715)、HYEP(Q9D379)、CALR(P14211)、AT2A2(O55143)、PDIA4(P08003)、PDIA1(P09103)、PDIA3(P27773)、PDIA6(Q922R8)、CLH(Q68FD5)、PPIB(P24369)、TCPG(P80318)、MOT4(P57787)、NICA(P57716)、BASI(P18572)、VAPA(Q9WV55)、ENV2(P11370)、VAT1(Q62465)、4F2(P10852)、ENOA(P17182)、ILK(O55222)、GPNMB(Q99P91)、ENV1(P10404)、ERO1A(Q8R180)、CLH(Q68FD5)、DSG1A(Q61495)、AT1A1(Q8VDN2)、HYOU1(Q9JKR6)、TRAP1(Q9CQN1)、GRP75(P38647)、ENPL(P08113)、CH60(P63038)或CH10(Q64433)，但不限於此。或者，抗原可以為CDH1、CD19、CD20、CD29、CD30、CD38、CD40、CD47、EpCAM、MUC1、MUC16、EGFR Her2、SLAMF7或gp75，但不限於此。
與上述抗原結合的抗體構建體可以為如下抗體或Fc融合蛋白，但不限於此：阿巴伏單抗、阿巴西普(也被稱為“ORENCIATM”)、阿昔單抗(也被稱為“REOPROTM”、“c7E3 Fab”)、阿達木單抗(也被稱為“HUMIRATM”)、阿德卡單抗、阿富妥珠單抗(也被稱為“CAMPATHTM”、“阿侖單抗(MabCampath)”或“坎帕斯(Campath)-1H”)、奧妥單抗、阿非莫單抗、阿那妥單抗芬太尼、阿那妥單抗、安魯金珠單抗、阿波立珠單抗、阿西莫單抗、阿斯珠單抗、阿特珠單抗、巴平紐珠單抗、巴斯利昔單抗(也被稱為“SIMULECTTM”)、巴維妥昔單抗、貝妥莫單抗(也被稱為“LYMPHOSCANTM”)、貝利木單抗(也被稱為“LYMPHO-STAT-BTM”)、柏替木單抗、比西單抗、貝伐單抗(也被稱為“AVASTINTM”)、比西單抗溴烯比妥、比伐妥珠單抗、坎帕斯、卡納單抗(也被稱為“ACZ885”)、坎妥珠單抗美登素、卡波米單抗(也被稱為“PROSTASCINTTM”)、卡妥索單抗(也被稱為“REMOVABTM”)、賽德麗珠單抗(也被稱為“CIMZIATM”)、PEG化賽托珠單抗、西妥昔單抗(也被稱為“ERBITUXTM”)、克立昔單抗、達昔妥珠單抗、達克珠單抗(也被稱為“ZENAPAXTM”)、狄諾塞單抗(也被稱為“AMG 162”)、地莫單抗、阿托度單抗、多利昔珠單抗、度匹魯單抗、多利羅單抗、多伏羅單抗、艾克麥昔單抗、伊庫麗單抗(也被稱為“SOLIRISTM”)、埃巴單抗、依決洛單抗(也被稱為“Mab17-1A”、“PANOREXTM”)、依法珠單抗(也被稱為“RAPTIVATM”)、伊芬古單抗(也被稱為“MYCOGRABTM”)、伊斯立莫單抗、PEG化恩莫單抗、西依匹莫單抗、依帕珠單抗、依匹莫單抗、依帕珠單抗、厄利珠單抗、厄妥索單抗(也被稱為“REXOMUNTM”)、益賽普(也被稱為“ENBRELTM”)、依塔珠單抗(也被稱為“依他珠單抗”、“VITAXINTM”、“ABEGRINTM”)、艾韋單抗、凡諾來索單抗(也被稱為“NEUTROSPECTM”)、 伐拉立莫單抗、凡維珠單抗、芬托麗珠單抗(也被稱為“HUZAFTM”)、加利昔單抗、加滕那魯單抗、加維立莫單抗(也被稱為“ABXCBLTM”)、吉妥珠單抗奧唑米星(也被稱為“MYLOTARGTM”)、高利單抗(也被稱為“CNTO 148”)、高米立昔單抗、伊巴麗珠單抗(也被稱為“TNX-355”)、替坦異貝莫單抗(也被稱為“ZEVALINTM”)、伊戈伏單抗、英西單抗、英利昔單抗(也被稱為“REMICADETM”)、伊諾莫單抗、奧英妥珠單抗、伊匹單抗(也被稱為“MDX-010”、“MDX-101”)、伊瑞妥姆單抗、克立新單抗、拉貝珠單抗、勒梅爾索單抗、瑞利珠單抗、勒德立木單抗、來沙木單抗(也被稱為“HGS-ETR2”、“ETR2-ST01”)、來昔木單抗、利比韋單抗、林妥珠單抗、魯卡妥姆單抗、魯米昔單抗、馬帕木單抗(也被稱為“HGSETR1”、“TRM-1”)、馬司莫單抗、馬妥珠單抗(也被稱為“EMD72000”)、麥泊麗珠單抗(也被稱為“BOSATRIATM”)、麥特麗珠單抗、米拉妥珠單抗(也被稱為“EMD72000”)、美泊利單抗(也被稱為“BOSATRIATM”)、麥特麗珠單抗、米拉妥珠單抗、米恩瑞土莫單抗、米妥莫單抗、莫羅立木單抗、莫維珠單抗(也被稱為“NUMAXTM”)、莫羅單抗(也被稱為“OKT3”)、納考洛單抗、納布妥木單抗、那他珠單抗(也被稱為“TYSABRITM”、“ANTEGRENTM”)、奈巴庫單抗、奈瑞利莫單抗、尼妥珠單抗(也被稱為“THERACIM hR3TM”、“THERA-CIM-hR3TM”、“THERALOCTM”)、諾非特姆單抗莫噴坦(也被稱為“VERLUMATM”)、歐克裏珠單抗、奧度莫單抗、奧法木單抗、奧馬珠單抗(也被稱為“XOLAIRTM”)、歐瑞格木單抗(也被稱為“OVAREXTM”)、奧特裏希珠單抗、帕吉昔單抗、帕利珠單抗(也被稱為“SYNAGISTM”)、帕尼單抗(也被稱為“ABX-EGF”、“VECTIBIXTM”)、帕斯卡麗珠單抗、排姆妥姆單抗(也被稱為“THERAGYNTM”)、帕妥珠單抗(也被稱為“2C4”、“OMNITARGTM”)、培克珠 單抗、並妥木單抗、普立昔單抗、普托木單抗、蘭尼單抗(也被稱為“LUCENTISTM”)、瑞西巴庫單抗、瑞加韋單抗、萊斯利珠單抗、利妥昔單抗(也被稱為“RITUXANTM”、“MabTHERATM”)、羅伐麗珠單抗、魯匹麗珠單抗、沙妥莫單抗、司韋單抗、西羅妥珠單抗、西普麗珠單抗(也被稱為“MEDI-507”)、索土珠單抗、司他莫魯單抗(也被稱為“MYO-029”)、硫索單抗(也被稱為“LEUKOSCANTM”)、它卡斯珠單抗替賽坦、他度珠單抗、他利珠單抗、它普立妥姆單抗佩普托克斯、特非巴珠單抗(也被稱為“AUREXISTM”)、阿替莫單抗、替奈昔單抗、特普麗珠單抗、替西木單抗、托珠單抗(也被稱為“ACTEMRATM”)、托羅麗珠單抗、托西莫單抗、曲妥珠單抗(也被稱為“HERCEPTINTM”)、曲美單抗(也被稱為“CP-675206”)、圖庫斯珠單抗西莫白介素、妥韋單抗、烏妥薩珠單抗、優特克單抗(也被稱為“CNTO 1275”)、伐利昔單抗、維妥珠單抗、維帕莫單抗、衛斯理珠單抗(也被稱為“NUVIONTM”)、沃羅斯昔單抗(也被稱為“M200”)、伏妥莫單抗(也被稱為“HUMASPECTTM”)、紮魯土木單抗、紮木單抗(也被稱為“HuMAX-CD4”)、茲拉立木單抗、阿佐莫單抗、達雷妥尤單抗、埃羅妥珠單抗、奧比妥珠單抗、奧拉單抗、維布妥昔單抗、阿柏西普、阿巴西普、貝拉西普、阿非西普、依那西普、羅米司亭、SBT-040(序列在美國公開專利第2017/0158772號中列出)。
在本說明書中，“連接子”是指將細胞毒性化合物與配體共價鍵合的化合物。
在本發明中所述的連接子可具備切割性、非切割性、親水性或疏水性。
在細胞內條件下，切割性連接子可被切割，因而通過上述連接子的切割來在細胞內環境中從抗體構建體-蛋白降解劑偶聯物釋放蛋白降解劑。
切割性連接子可被存在於細胞內環境(例如，溶酶體或核內體或胞膜窖(caveolea)內)中的切割劑切割。例如，切割性連接子包含溶酶體的蛋白酶或核內體的蛋白酶，但不限於此，可以為被細胞內肽酶或蛋白酶切割的肽基連接子(peptidyl linker)。通常，上述肽基連接子為至少2個氨基酸長度或至少3個氨基酸長度。切割劑可包含組織蛋白酶B、組織蛋白酶D及纖維蛋白溶酶，已知這些均通過水解二肽藥物衍生物來在靶細胞內釋放活性藥物(例如，參照Dubowchik and Walker、1999、Pharm.Therapeutics 83：67-123)。最為普通的有可通過存在於抗原表達細胞內的酶切割的肽基連接子。例如，可使用能夠被癌組織中高度表達的硫醇依賴性蛋白酶組織蛋白酶-B切割的肽基連接子(例如，Phe-Leu連接子或Gly-Phe-Leu-Gly連接子)。例如，美國專利第6214345號說明的其他連接子。並且，可在細胞內被蛋白酶切割的上述肽基連接子可以為Val-Cit連接子、Phe-Lys連接子(例如，參照美國授權專利第6214345號所說明的利用Val-Cit連接子合成的多柔比星)或Val-Ala連接子。Val-Cit連接子或Val-Ala連接子可包含五氟苯基團、琥珀醯亞胺基團或馬來醯亞胺基團。或者，可包含對4-氨基苯甲酸基(PABA)及五氟苯基團，可包含4-氨基苯甲酸基團(PABA，4-Aminobenzoic acid)及馬來醯亞胺基團，可包含4-氨基苯甲酸基團及琥珀醯亞胺基團。
在本發明的說明書中，所使用的術語“細胞內切割的(intracellularly cleaved)”和“細胞內切割(intracellular cleavage)”是指對於抗體構建體-蛋白降解劑偶聯物的細胞內部代謝過程或反應，由此引起蛋白降解劑B 與抗體構建體Ab之間的共價附著，例如，因連接子被破壞而產生從游離藥物或細胞內抗體分離的偶聯物的其他代謝物。
並且，切割性連接子可對PH敏感，即，可在特定pH值輕易水解。通常，上述pH-敏感性連接子可在酸性條件下水解。例如，可在溶酶體水解的酸-不穩定性連接子(例如，腙(hydrazone)、縮氨脲(semicarbazone)、縮氨基硫脲(thiosemicarbazone)、順-烏頭酸酐(cis-aconitic amide)、原酸酯(orthoester)、縮醛、縮酮等)(例如，參照美國授權專利第5122368號；第5824805號；第5622929號；Dubowchik and Walker、1999、Pharm.Therapeutics 83：67-123；Neville et al.，1989，Biol.Chem.264：14653-14661)。在血液等中性pH條件下，雖然這種連接子相對穩定，但是，在溶酶體大致pH小於pH5.5或pH5.0條件下並不穩定。作為水解性連接子的一例有硫醚連接子(例如，通過醯腙鍵附著在治療劑的硫醚等(例如，參照美國授權專利第5622929號))。
並且，連接子可在還原條件下切割(例如，二硫鍵連接子)。例如，已知各種二硫鍵連接子，包括可以使用SATA(N-琥珀醯亞胺-5-乙醯巰基乙酸酯)、SPDP(N-琥珀醯亞胺-3-(2-吡啶二巰基)丙酸鹽)、SPDB(N-琥珀醯亞胺-3-(2-吡啶二巰基)丙酸酯)及SMPT(N-琥珀醯亞胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-硫基)甲苯)-，SPDB及SMPT來形成的各種二硫鍵連接子(例如，參照美國授權專利第4880935號，Thorpe et al.，1987，Cancer Res.47：5924-5931)。
並且，連接子可以為丙二酸連接子(Johnson et al.，1995，Anticancer Res.15：1387-93)、馬來醯亞胺苯甲醯連接子(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10)：1299-1304)、3’-N-醯胺類似物(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10)：1305-12)、β-葡萄糖苷酸(β-Glucuronide)連接子(Jeffery et al.， 2006，Bioconjug Chem.17(3)：832-40)或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)連接子(Kolodych et al.，2017，Eur J Med Chem.Dec 15；142：376-382)。
非切割性連接子可以為馬來醯亞胺基己醯連接子。馬來醯亞胺基己醯連接子可包含N-馬來醯亞胺甲基環己烷-1-羧酸鹽。馬來醯亞胺基己醯連接子可包含琥珀醯亞胺基組。馬來醯亞胺基己醯連接子可包含五氟苯基組。連接子可以為馬來醯亞胺基組與一個以上聚乙二醇分子的組合。連接子可以為馬來醯亞胺基己醯組與一個以上聚乙二醇分子的組合。連接子可以為馬來醯亞胺基-PEG4連接子。連接子可以為含琥珀醯亞胺基組的馬來醯亞胺基己醯連接子及一個以上聚乙二醇分子的組合。連接子可以為五氟苯基組及含一個以上聚乙二醇分子的馬來醯亞胺基己醯連接子的組合。連接子可包含與聚乙二醇分子連接的馬來醯亞胺基，其中，聚乙二醇可允許更多的連接子可撓性或使用更長的連接子。連接子可以為(馬來醯亞胺己醯基)-(纈氨酸-瓜氨酸)-(對氨基苄氧基羰基)連接子。
在本發明的一實施方式中，連接子可以為切割性連接子。
在本發明的一實施方式中，連接子可以為蛋白酶切割性連接子、酸-切割性連接子、二硫鍵連接子、自脫落連接子(self-immolative linker)或自穩定連接子(self-stabilizing linker)、丙二酸連接子、馬來醯亞胺基苯甲醯連接子、3’-N-醯胺類似物、β-葡萄糖苷酸(β-Glucuronide)連接子或β-半乳糖苷(β-galactoside)連接子。
在本發明的一實施方式中，上述蛋白酶切割性連接子可包含硫醇反應性間隔物(thiol-reactive spacer)或二肽，更具體地，上述蛋白酶切割性連接 子可包含硫醇反應性馬來醯亞胺基己醯間隔物、纈氨酸-瓜氨酸二肽或p-氨基-苄氧羰基間隔物。
在本發明的一實施方式中，上述酸切割性連接子可以為肼(hydrazine)連接子或季銨連接子。
在本發明的一實施方式中，上述連接子可具有通式II的結構：
Figure 111114270-A0202-12-0030-1
在上述通式中，
波浪線表示與Ab連接的位點，*表示與蛋白降解劑連接的位點，G為葡萄糖醛酸部分(glucuronic acidmoiety)或
Figure 111114270-A0202-12-0030-2
，上述R3為氫或羧基保護基，上述R4各自獨立地為氫或羥基保護基，
R1及R2各自獨立地為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基，
W為-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SONR’-或-PO2NR’-，上述C、S或P與苯環(phenyl ring)直接鍵合，上述R’ 及R”各自獨立地為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基的化合物，
Z獨立地為氫、C1-8烷基、鹵素、氰基或硝基，
n為0至3的整數，
L為共價鍵(covalent linker)。
在本發明的一實施方式中，連接子可以具有以下化學式IIa的結構：
Figure 111114270-A0202-12-0031-3
在上述化學式中，
G為糖(sugar)、糖酸(sugar acid)或糖衍生物(sugar derivatives)，
W為-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-S(O)2NR’-、-P(O)R”NR’-、-S(O)NR’-或-PO2NR’-，
當C(O)、S或P與苯環(phenyl ring)直接鍵合時，R’及R”各自獨立地為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基，
Z各自獨立地為氫、C1-8烷基、鹵素、氰基或硝基，
n為0至3的整數，
m為0或1，
L與上述定義相同，
R1及R2各自獨立地為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基，或者，
R1及R2與它們所附著的碳原子一起形成(C3-8)環烷基環，
在上述化學式中，波浪線表示與Ab連接的位點，*表示與蛋白降解劑連接的位點。
在本發明的一實施方式中，上述糖或糖酸為單糖。
在本發明的一實施方式中，上述G為葡萄糖醛酸部分(glucuronic acidmoiety)或以下化學式IIIa結構的化合物：
Figure 111114270-A0202-12-0032-4
其中，
R3為氫或羧基保護基，
各個R4各自獨立地為氫或羥基保護基。
在本發明的一實施方式中，上述R3為氫，各個R4為氫。
並且，在本發明的一實施方式中，上述R1及R2各自為氫。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Z各自獨立地為C1-8烷基、鹵素、氰基或硝基。
在本發明的一實施方式中，上述W為-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SONR’-或-PO2NR’-，上述C、S或P與苯環(phenyl ring)直接鍵合，上述R’及R”各自獨立地為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基。
並且，在本發明的一實施方式中，上述W為-C(O)-、-C(O)NR’-或-C(O)O-，更具體地，上述W為-C(O)NR’-，其中，C(O)與苯環連接，NR’與L鍵合。
並且，在本發明的一實施方式中，上述W為-C(O)NR’-，上述W的氮為親水氨基酸的氮原子。
並且，在本發明的一實施方式中，上述W為-C(O)NR’-，上述W的氮為肽的N-末端氨基酸的氮原子。並且，上述肽可包含2個至20個氨基酸。
並且，在本發明的一實施方式中，上述n為0、1、2或3，更具體為0、1或2，進一步具體為0。
更具體地，上述G為以下化學式IIIa結構的化合物：
Figure 111114270-A0202-12-0033-5
其中，
R3為氫或羧基保護基，
各個R4各自獨立地為氫或羥基保護基，
W為-C(O)NR’-，其中，C(O)與苯環連接，NR’與L鍵合，各個Z為 C1-8烷基、鹵素、氰基或硝基，n為0，m為1，R1及R2各自為氫。
在本發明的一實施方式中，上述L為非支鏈型連接子或支鏈型連接子。
在本發明的一實施方式中，至少一個L為具有1個至100個碳原子的亞烷基，其中，亞烷基的碳原子可被選自由N、O及S組成的組中的一個或一個以上的雜環原子取代，亞烷基可進一步被具有1個至20個碳原子的一個以上的烷基取代。
在本發明的一實施方式中，L為以下A)或B)中的一種，
A)C1-50亞烷基或1至50元雜亞烷基，滿足以下一個以上條件：
(i)L包含一個以上不飽和鍵；
(ii)L中的2個原子被如取代基的二價取代基取代，其完成雜亞芳基(heteroarylene)；
(iii)L為1至50元雜亞烷基；
(iv)上述亞烷基被一個以上的C1-20烷基取代；
B)包含一個以上能夠被類異戊二烯轉移酶識別的異戊二烯衍生物單元，由以下通式III表示：
Figure 111114270-A0202-12-0035-6
具體地，至少一個L為C1-50亞烷基或1至50元雜亞烷基，可滿足以下一個以上條件：
(i)包含一個以上不飽和鍵；
(ii)L中的2個原子被如取代基的二價取代基取代，其完成雜亞芳基(heteroarylene)；
(iii)L為1至50元雜亞烷基；
(iv)上述亞烷基被一個以上的C1-20烷基取代。
並且，上述至少一個L為含氮的1-50元雜亞烷基，連接子包含親水氨基酸的2個以上原子，上述氮與親水氨基酸的羰基形成肽鍵。
在本發明的一實施方式中，上述L通過硫醚鍵與抗體共價鍵合，上述硫醚鍵包含抗體的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，L為C2-50亞烷基、C2-50雜亞烷基、親水氨基酸、-C(O)-、-C(O)NR”-、-C(O)O-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-、-S(O)2NR”-、-P(O)R'''NR”-、-S(O)NR”-或-PO2NR”-，
其中，R”及R'''各自獨立地為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C5-20芳基，s、t、u及v各自獨立地為0至10的整數。
在本發明的一實施方式中，至少一個L為親水氨基酸(hydrophilic amino acid)。
在本發明的一實施方式中，親水氨基酸可以為精氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺、谷氨酸、穀氨醯胺、組氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、絲氨酸或蘇氨酸。
在本發明的一實施方式中，親水氨基酸可以為如下的氨基酸，即，包含具有在水溶液中的中性pH條件下帶電荷的殘基的側鏈。
在本發明的一實施方式中，親水氨基酸為天冬氨酸或谷氨酸。
在本發明的一實施方式中，親水氨基酸為鳥氨酸或賴氨酸。
在本發明的一實施方式中，親水氨基酸為精氨酸。
在本發明的一實施方式中，至少一個L為-C(O)-、-C(O)NR”-、-C(O)O-、-S(O)2NR”-、-P(O)R'''NR”-、-S(O)NR”-或-PO2NR”-，R”及R'''各自獨立為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基。
在本發明的一實施方式中，至少一個L為-C(O)NR”-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-或-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-，其中，R”為氫、C1-5烷基、C3-8環烷基、C1-5烷氧基、C3-20雜芳基或C6-20芳基，s、t、u及v各自獨立地為0至10的整數。
在本發明的一實施方式中，至少一個L為-C(O)NR’-，R’為氫。
在本發明的一實施方式中，上述L還可包含連接單元。
在本發明的一實施方式中，至少一個連接單元由通式VIII或通式IX表示：通式VIII -(CH2)r(V(CH2)p)q-
通式IX -(CH2CH2X)w-
上述V為單鍵、-O-、-S-、-NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-，
X為-O-、C1-8亞烷基或-NR21-，
R21至R25各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基或C1-6烷基-C3-20雜芳基，
r為0至10的整數，
p為0至10的整數，
q為1至20的整數，
w為1至20的整數。
在本發明的一實施方式中，q可以為4至20，更具體地，可以為6至20。並且，q可以為1至10或2至12，更具體地，可以為2、5或11。並且，r可以為1或2。並且，p可以為1或2。並且，V可以為-O-。
更具體地，r為2，p為2，q為2、5或11，V可以為-O-。
並且，在本發明的一實施方式中，X可以為-O-。並且，w可以為1至10或6至20的整數。
更具體地，X為-O-，w可以為1至10或6至20。
在本發明的一實施方式中，至少一個連接單元為至少一個聚乙二醇單元，其結構為
Figure 111114270-A0202-12-0038-7
或
Figure 111114270-A0202-12-0038-8
，其中，n為1至12。
在本發明的一實施方式中，至少一個連接單元為1至12-OCH2CH2-單元、3至12-OCH2CH2-單元、5至12-OCH2CH2-單元、6至12-OCH2CH2-單元或3-OCH2CH2-單元。
在本發明的一實施方式中，至少一個連接單元為-(CH2CH2X)w-，
其中，X為單鍵、-O-、C1-8亞烷基或-NR21-，
R21為氫、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基或C1-6烷基-C3-20雜芳基，w為1至20的整數，具體為1、3、6或12。
在本發明的一實施方式中，X為-O-，w為6至20的整數。
在本發明的一實施方式中，連接子還包含通過1，3-偶極環加成反應(1，3-dipolar cycloaddition reactions)、雜第爾斯-阿爾德反應(hetero-Diels-Alder reactions)、親核取代反應(nucleophilic substitution)、非羥醛型羰基反應(non-aldol type carbonyl reactions)、碳-碳多鍵加成反應(addition to carbon-carbonmultiple bond)、氧化反應(osidation reactions)或點擊反應(click reactions)形成的鍵合單元。
在本發明的一實施方式中，鍵合單元可通過炔基與疊氮化物之間的反應或醛或酮基與肼或烷氧基胺之間的反應形成。
在本發明的一實施方式中，鍵合單元由以下通式IVa、通式IVb、通式IVc、通式IVd或通式IVe表示：
Figure 111114270-A0202-12-0039-9
Figure 111114270-A0202-12-0039-10
Figure 111114270-A0202-12-0039-11
Figure 111114270-A0202-12-0039-12
Figure 111114270-A0202-12-0039-13
其中，
L1及L2為單鍵或具有1個至30個碳原子的亞烷基，
R11為氫或具有1個至10個碳原子的烷基，具體為甲基。
在本發明的一實施方式中，L1為單鍵或具有11個碳原子的亞烷基或具有12個碳原子的亞烷基。
並且，在本發明的一實施方式中，鍵合單元包含
Figure 111114270-A0202-12-0040-171
上述V為單鍵、-O-、-S-、-NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-，
R21至R25獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基或C1-6烷基-C3-20雜芳基，
r為1至10的整數，
p為0至10的整數，
q為1至20的整數，
L1為單鍵。
在本發明的一實施方式中，上述r可以為2或3。並且，p可以為1或2。並且，q可以為1至6。
更具體地，在上述鍵合單元中，r為2或3，p為1或2，q可以為1至6。
並且，在本發明的一實施方式中，包含上述鍵合單元的連接子可以為
Figure 111114270-A0202-12-0040-15
Figure 111114270-A0202-12-0041-16
Figure 111114270-A0202-12-0041-17
或
Figure 111114270-A0202-12-0041-19
，其中，波浪線表示與Ab連接的位點，*表示與蛋白降解劑連接的位點，n為0至20的整數。
在本發明的一實施方式中，上述L包含
Figure 111114270-A0202-12-0041-20
或
Figure 111114270-A0202-12-0041-21
。
並且，在本發明的一實施方式中，上述L還包含
Figure 111114270-A0202-12-0041-22
。並且，在上述結構中，可通過炔基與疊氮化物之間的反應形成鍵合單元，具體地，可通過點擊反應形成鍵合單元。
在本發明的一具體實施方式中，上述L包含
Figure 111114270-A0202-12-0042-23
，通過上述結構形成鍵合單元，鍵合單元包含
Figure 111114270-A0202-12-0042-24
。
並且，在本發明的一實施方式中，連接子還可包含至少一個異戊二烯單元，其結構為
Figure 111114270-A0202-12-0042-25
，其中，n至少為2以上。
在本發明的一實施方式中，至少一個異戊二烯單元為類異戊二烯轉移酶的底物或類異戊二烯轉移酶的產物。
在本發明的一實施方式中，連接子的異戊二烯單元通過硫醚鍵與Ab共價鍵合，硫醚鍵包含Ab的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，上述L通過硫醚鍵與Ab共價鍵合，上述硫醚鍵包含Ab的半胱氨酸的硫原子。
並且，在本發明的一實施方式中，上述L包含一個以上能夠被類異戊二烯轉移酶識別的異戊二烯衍生物單元，由以下通式III表示：
Figure 111114270-A0202-12-0042-26
並且，異戊二烯單元可使得連接子所包含的肟與Ab共價鍵合。
在本發明的一實施方式中，L為包含肟的3至50元雜亞烷基，
上述肟的氧原子位於與W相連的L的側面，肟的碳原子位於與Ab相連的L的側面，或者，上述肟的碳原子位於與W相連的L的側面，肟的氧原子可位於與Ab相連的L的側面。
在本發明的一實施方式中，上述L包含肟，一個以上的異戊二烯單元使得肟與Ab共價鍵合。
在本發明的一實施方式中，Ab包含被類異戊二烯轉移酶識別的氨基酸基序，硫醚鍵包含氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。並且，氨基酸基序包含於Ab的C-末端。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為選自由CXX、CXC、XCXC、XXCC及CYYX組成的組中的序列，其中，C表示半胱氨酸，Y在每種情況下獨立表示脂肪族氨基酸，X在每種情況下獨立表示穀氨醯胺、谷氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丙氨酸或亮氨酸，硫醚鍵包含氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為CYYX序列，Y在每種情況下獨立地為丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸或纈氨酸。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為CVIM序列或CVLL序列。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序之前的1至20個氨基酸中的一個以上可各自獨立地選自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸及絲氨酸。例如，在本發明的一實施方式中，氨基酸基序之前的7個氨基酸中的至少一個為甘氨酸。或者，氨基酸基序之前的7個氨基酸中的3個以上各自獨立地選自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸及絲氨酸。或者，氨基酸基序之前的1至10個氨基酸為甘氨酸， 具體地，氨基酸基序之前的至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個氨基酸為甘氨酸。
在本發明的一實施方式中，Ab可包含氨基酸序列GGGGGGGCVIM。
在本發明的一實施方式中，Linker包含與Ab共價鍵合的一個以上支鏈型連接子，
i)各個支鏈型連接子包含通過第一連接子PL與Ab共價鍵合的支鏈型單元，
ii)各個支鏈型連接子包含其中第一蛋白降解劑通過第二連接子SL及切割基團CG與支鏈型單元共價鍵合的第一支鏈B1，
iii)各個支鏈型連接子還包含：a)其中第二蛋白降解劑通過第二連接子SL及切割基團CG與支鏈型單元共價鍵合的第二支鏈B2；或者，b)聚乙二醇部分(moiety)與支鏈型單元共價鍵合的第二支鏈B2，
上述各個切割基團可以被水解以從抗原特異性鍵合部分-蛋白降解劑偶聯物釋放蛋白降解劑。
在本發明的一實施方式中，上述至少一個連接子為含氮的1-100元雜亞烷基，連接子包含親水氨基酸的2個以上原子，上述氮與親水氨基酸的羰基形成肽鍵。
在本發明的一實施方式中，上述支鏈型單元為
Figure 111114270-A0202-12-0044-27
、
Figure 111114270-A0202-12-0045-28
、
Figure 111114270-A0202-12-0045-29
或
Figure 111114270-A0202-12-0045-30
，
上述L2、L3、L4各自獨立地為直接鍵或-CnH2n-，上述n為1至30的整數，
上述G1、G2、G3獨立地為直接鍵、
Figure 111114270-A0202-12-0045-31
、
Figure 111114270-A0202-12-0045-32
、
Figure 111114270-A0202-12-0045-33
或
Figure 111114270-A0202-12-0045-34
，
上述R30為氫或C1-30烷基，
上述R40為直接鍵、C1-10烷基或L5-COOR6，
上述L5為直接鍵或-Cn’H2n’-，其中，n’為1至10的整數，R6為氫或C1-30烷基。
在本發明的一實施方式中，上述切割基可在靶細胞內切割。
在本發明的一實施方式中，上述切割基可釋放一種以上的活性劑。
在本發明的一實施方式中，上述蛋白降解劑通過切割基與第一支鏈或第二支鏈鍵合，上述切割基由以下化學式表示：
Figure 111114270-A0202-12-0046-35
(其中，對於各個部分的定義與通式II相同)
在本發明的一實施方式中，上述第一連接子包含具有1個至100個，優選1個至50個碳原子的亞烷基，或者，
亞烷基包含至少一個不飽和鍵，亞烷基包含至少一個雜亞芳基，亞烷基的碳原子被選自氮(N)、氧(O)及硫(S)的一個以上的雜環原子取代，或者，
亞烷基進一步被具有1個至20個碳原子的一個以上的烷基取代。
在本發明的一實施方式中，上述第一連接子或第二連接子的結構為-(CH2)r(V(CH2)p)q-、-((CH2)pV)q-、-(CH2)r(V(CH2)p)qY-、-((CH2)pV)q(CH2)r-、-Y((CH2)pV)q-或-(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-，其中，r為0至10的整數，p為1至10的整數，q為1至20的整數，
V及Y各自獨立地為單鍵、-O-、-S-、-NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-，R21至R25各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基或C1-6烷基-C3-20雜芳基。在一具體例中，各個支鏈型連接子包含支鏈單元，各個活性劑通過第二連接子與支鏈單元連接，支鏈單元通過第一連接子與抗體連接。在支鏈單元為醯胺的具體例中，第一連接子可包含醯胺的羰基，或者，第二連接子可包含醯胺的羰基。
在本發明的一實施方式中，包含上述支鏈型連接子的[Linker-(B)m]為
Figure 111114270-A0202-12-0047-36
上述B及B’為可各自相同或不同的蛋白降解劑，
n1及n2各自獨立地為1至20的整數，
L’表示能夠與Ab鍵合的L的部分。
具體地，在本發明的一實施方式中，上述L’為
Figure 111114270-A0202-12-0047-37
。
在本發明的一實施方式中，上述偶聯物包含Ab，
包含與Ab共價鍵合的1個、2個、3個或4個以上的支鏈型連接子，
支鏈型連接子包含1個或2個以上的蛋白降解劑。
在本發明的一實施方式中，L包含肟，至少一個聚乙二醇單元使得肟與蛋白降解劑共價鍵合。
在本發明的一實施方式中，上述切割基可在靶細胞內切割，可釋放一種以上的蛋白降解劑。
在本發明的一實施方式中，包含：一個以上的支鏈型連接子，與Ab共價鍵合；以及兩個以上的蛋白降解劑，與支鏈型連接子共價鍵合。
具體地，1個支鏈型連接子可以與Ab鍵合。
並且，2個以上的支鏈型連接子與Ab鍵合，各個支鏈型連接子可以與2個以上的蛋白降解劑結合。更具體地，3個支鏈型連接子可以與Ab鍵合。或者，4個支鏈型連接子可以與Ab鍵合。
在本發明的一實施方式中，各個支鏈型連接子可以與2個以上各自相同或不同的蛋白降解劑結合。在本發明的一實施方式中，各個蛋白降解劑可通過可切割鍵與支鏈型連接子鍵合。
在本發明的一實施方式中，各個支鏈型連接子包含支鏈型單元，各個蛋白降解劑通過第二連接子與支鏈型單元鍵合，上述支鏈型單元可通過第一連接子與Ab鍵合。
在本發明的一實施方式中，上述支鏈型單元可以為氮原子。或者，上述支鏈型單元為醯胺，第一連接子或第二連接子可包含醯胺的羰基。或者，上述支鏈型單元可以為賴氨酸單元。
在本發明的一實施方式中，鍵合單元通過硫醚鍵與Ab共價鍵合，硫醚鍵包含Ab的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，Ab包含被類異戊二烯轉移酶識別的氨基酸基序，硫醚鍵包含氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，上述類異戊二烯轉移酶為法呢基蛋白轉移酶(FTase)或二牛龍牛兒基轉移酶(GGTase)。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為選自由CXX、CXC、XCXC、XXCC及CYYX組成的組中的序列，其中，C表示半胱氨酸，Y在每種情況下獨立表示脂肪族氨基酸，X在每種情況下獨立表示穀氨醯胺、谷氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丙氨酸或亮氨酸，硫醚鍵包含氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為CYYX序列，Y在每種情況下獨立地為丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸或纈氨酸。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序為CVIM序列或CVLL序列。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序之前的7個氨基酸中的至少一個為甘氨酸。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序之前的7個氨基酸中的3個以上可各自獨立地選自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸及絲氨酸。
在本發明的一實施方式中，氨基酸基序之前的1至10個氨基酸為甘氨酸，具體地，氨基酸基序之前的至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個氨基酸為甘氨酸。
在本發明的一實施方式中，Ab可包含氨基酸序列GGGGGGGCVIM。
在本發明中所使用的術語“蛋白降解劑”是指誘導靶蛋白降解的低分子化合物，也可被稱為“擦除器蛋白(protein eraser)”。或者，在本發明中所使用的術語“蛋白降解劑”作為誘導靶蛋白調節的低分子化合物，也可被稱為“蛋白調節劑(protein modulater)”。其中，靶蛋白例為致病蛋白。
在本說明書中，“蛋白降解劑部分”是指包含蛋白降解劑的全部或一部分並與連接子的全部或一部分共價鍵合的化合物。蛋白降解劑部分並非必須包含連接子，還意味著不包含連接子的全部或一部分的情況。
在本發明中，蛋白降解劑部分可以與連接子直接鍵合，具體地，1個以上、2個以上、3個以上、4個以上的蛋白降解劑部分可以與連接子直接鍵合。
並且，在本發明中，蛋白降解劑部分可包含用於將蛋白降解劑與連接子直接鍵合的化合物單位。在一例中，蛋白降解劑部分可意味著包含以下結構及蛋白降解劑的整體，由此，可使得蛋白降解劑與連接子直接鍵合。然而，這是示例性的，並且不限於此。
Figure 111114270-A0202-12-0050-38
(其中，對於各個部分的定義與上述內容相同)
當蛋白降解劑用作誘導靶蛋白調節的低分子化合物時，可根據作用機理(MoA，Mechanism of action)分為兩種類型。具體地，分為單價調節劑(monovalent modulator)及PPI調節劑(protein-protein interaction modulator)，上述單價調節劑僅與靶蛋白結合並調節靶蛋白的活性，上述PPI調節劑均與干涉靶蛋白調節的蛋白質及靶蛋白直接鍵合來調節靶蛋白的活性。其中，靶蛋白為干涉靶蛋白調節的蛋白質的天然底物(native substrate)或非天然底物(non-native substrate)。天然底物作為蛋白質的特異內源性底物(endogenous substrate)，PPI 調節劑可均與干涉靶蛋白調節的蛋白質及其天然底物直接鍵合併穩定干涉靶蛋白調節的蛋白質及其天然底物的相互作用來調節底物的活性。非天然底物作為通過外源性配體(exogenous ligand)聚集的底物，上述非天然底物也可被稱為“新底物(neosubstrate)”。PPI調節劑可用作蛋白質的外源性配體，因此，可使得在干涉PPI調節劑及靶蛋白調節的蛋白質結合位點結合非天然底物來調節非天然底物的活性。
當蛋白降解劑用作誘導靶蛋白降解的低分子化合物時，可基於作用機理分為三種類型。具體地，可分為二階降解劑(bivalent degrader)、單價降解劑(monovalent degrader)及分子膠水降解劑(molecular glue degrader)。
細胞內蛋白降解可通過溶酶體(lysosome)和蛋白酶體(proteasome)的兩種途徑實現。大部分(80%)細胞蛋白被泛素(ubiquitin)標記後，在細胞質和核內被蛋白酶體降解，而這種過程被稱為泛素-蛋白酶體系統(ubiquitin-proteasome system)。
在泛素為了選擇性地降解蛋白質而被標記的過程(泛素化，ubiquitination)中，涉及一系列酶系統(E1泛素啟動酶(E1 ubiquitin-activating enzyme)、E2泛素結合酶(E2 ubiquitin-conjugating enzyme)、E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase))，標記的蛋白質被作為ATP依賴性蛋白降解酶複合物的26S蛋白酶體降解。泛素與底物的結合通過在底物分子的Lys與泛素-C-末端的Gly之間形成異肽鍵(isopeptide bond)來實現，與底物蛋白結合的泛素-C-末端Lys可連接其他泛素，通過反復執行這種過程，若多個泛素分子以支鏈形態與底物蛋白連接並形成多聚泛素鏈(polyubiquitin chain)，則該蛋白質因被26S蛋白酶體識別而選擇性地降解。
已知，人有600種以上的E3泛素連接酶，均與E2泛素結合酶及底物蛋白結合並提供識別泛素標記底物蛋白的底物特異性。即，降解蛋白的選擇通過泛素化過程的E3泛素連接酶確定，在此情況下，底物蛋白中存在E3泛素連接酶識別位點和泛素連接位點。
二階降解劑(bivalent degrader)作為異型雙功能低分子(heterobifunctional smallmolecule)，通過連接子使得靶蛋白特異性配體與干涉上述過程的E3泛素連接酶特異性配體連接，也被稱為“蛋白水解靶向嵌合體(proteolysis targeting chimera)”或“PROTAC”。因此，二階降解劑包含對靶蛋白特異的配體，使得上述靶蛋白位於E3泛素連接酶附近，而並非底物蛋白，從而誘導靶蛋白的降解。
單價降解劑(monovalent degrader)作為僅與靶蛋白結合並誘導結合靶蛋白降解的低分子。單價降解劑與靶蛋白結合並以靶蛋白被泛素-蛋白酶體系統輕易識別的方式引起變化來誘導其降解，例如，與靶蛋白結合並引起靶蛋白的構象改變(conformation change)或折疊變化(folding change)來誘導靶蛋白的降解，或者，通過改變靶蛋白的翻譯後修飾(PTM，post-translationalmodification)或通過改變蛋白-蛋白相互作用如靶蛋白-伴侶蛋白(chaperone)相互作用來誘導靶蛋白降解(Cornella-Taracido et al.，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 30(2020)127202)。
例如，單價降解劑的靶蛋白可以為雌激素受體(ER，estrogen receptor)或雄激素受體(AR，androgen receptor)，但不限於此。
更具體地，作為與ER結合並誘導其降解的單價降解劑可以為選擇性雌激素受體降解劑(SERD，selective estrogen receptor degrader)，作為SERD， 可以例舉fulvestrant、brilanestrant(GDC-0810)、GDC-0927、elacestrant、giredestrant、amcenestrant(SAR439859)、AZD9833、AZD9496、rintodestrant、LSZ102、LY3484356、ZN-c5、D-0502或SHR9549，但不限於此。並且，與AR結合並誘導其降解的單價降解劑可以為選擇性雄激素受體降解劑(SARD，selective androgen receptor degrader)，作為SARD，可以例舉bicalutamide、dimethylcurcumin(ASC-J9)、AZD-3514或ARN-509，但不限於此。
分子膠水降解劑可通過與E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase)和/或靶蛋白的結合來表現活性。例如，分子膠水降解劑可通過與連接酶等結合來修飾連接酶等結構，可通過在修飾的結構中誘導靶蛋白的結合來誘導蛋白降解。分子膠水降解劑作為與E3泛素連接酶的底物蛋白結合並誘導E3泛素連接酶的底物蛋白降解的低分子，也被稱為“分子膠水(molecular glue)”。其中，作為靶蛋白的E3泛素連接酶的底物具體可以為E3泛素連接酶的天然底物(native substrate)或非天然底物(non-native substrate)。
E3泛素連接酶的天然底物(native substrate)為E3泛素連接酶特異內源性底物(endogenous substrate)，分子膠水降解劑可通過與E3泛素連接酶及其天然底物結合並穩定E3泛素連接酶與其天然底物的相互作用來誘導底物的降解。
E3泛素連接酶的非天然底物(non-native substrate)為通過外源性配體(exogenous ligand)聚集的底物，上述非天然底物也可被稱為“新底物(neosubstrate)”。分子膠水降解劑用作E3泛素連接酶的外源性配體。因此，通過在分子膠水降解劑及E3泛素連接酶的結合位點結合非天然底物，可加強E3泛素連接酶與非天然底物之間的結合併誘導非天然底物的降解。更具體地，如以 下示意圖所示，若分子膠水降解劑與E3泛素連接酶的結合位點結合，則E3泛素連接酶的結構被修飾以能夠與非天然底物結合，通過非天然底物與修飾的結構結合，可加強E3泛素連接酶與非天然底物之間的結合並誘導非天然底物的降解(Essays Biochem.2017 Nov 8；61(5)：505-516)。
Figure 111114270-A0202-12-0054-39
作為與分子膠水降解劑結合的E3泛素連接酶，可以例舉VHL(von Hippel-Lindau)、cereblon、XIAP、XIAP/cIAP、E3A、MDM2.APC(Anaphase-promoting complex)、APC/cdc20、APC/cdh1、Cull-based、Cul2/5-based、Cul3-based、Cul4 based、包含Cul7-based及Cul7等的CRL(cullin ring ubiquitin ligase)、UBR5(EDD1)、beta-TrCP、SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING、LNXp80、LNX1、CBX4、CBL、CBLL1、C6orf157、CHFR、DTL、E6-AP、HACE1、HECTD1、HECTD2、HECTD3、HECW1、HECW2、HERC1、HERC2、HERC3、HERC4、HERC5、HUWE1、HYD、ITCH、mahogunin、MARCH-I、MARCH-II、MARCH-III、MARCH-IV、MARCH-VI、MARCH-VII、MARCH-VIII、MARCH-X、MEKK1、MIB1、MIB2、MycBP2、NEDD4、NEDD4L、PELI1、Pirh2、PJA1、PJA2、PPIL2、PRPF19、PIAS1、PIAS2、PIAS3、PIAS4、RANBP2、RFFL、RFWD2、Rictor、RNF4、RNF5、RNF8、RNF19、RNF190、RNF20、RNF34、RNF40、RNF125、RNF128、RNF138、RNF168、RBX1、SMURF1、SMURF2、STUB1、TOPORS、TRIP12、UBE3A、UBE3B、UBE3C、UBE4A、UBE4B、UBOX5、UBR5、WWP1、WWP2、Parkin、A20/TNFAIP3、AMFR/gp78、ARA54、beta-TrCP1/BTRC、SCF/beta- TrCP、BRCA1、CHIP、CHIP/STUB1、E6；E6AP/UBE3A、F-box protein 15/FBXO15、FBXW7/Cdc4、SCF/FBW7、GRAIL/RNF128、HOIP/RNF31、cIAP-1/HIAP-2、cIAP-2/HIAP-1、cIAP(pan)、ITCH/AIP4、KAP1、MARCH8、Mind Bomb 1/MIB1、Mind Bomb 2/MIB2、MuRF1/TRIM63、NDFIP1、NleL、Parkin、RNF2、RNF4、RNF8、RNF168、RNF43、SART1、Skp2、SCF/Skp2、SHPRH、SIAH1、SIAH2、SMURF1、SMURF2、TOPORS、TRAF-1、TRAF-2、TRAF-3、TRAF-4、TRAF-5、TRAF-6、TRAF-7、TRIM5、TRIM21、TRIM32、TRIM63、UBE3B、UBE3C、UBR1、UBR2、UHRF2、WWP1、WWP2、ZNRF1或ZNRF3，但不限於此。
並且，與分子膠水降解劑結合的E3泛素連接酶可以按類型進行分類，這可以參見PCT公開專利第WO2017/201449號中的記載，但不限於此。
並且，作為與分子膠水降解劑結合的E3泛素連接酶的天然底物或非天然底物，可以例舉NKX3.1、β-Catenin、aiolos、Akt1、Aurora A、B7-2、Bim、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、CD147、Cdc20、Cdc25A、CDH1、CHK1、CHK2、c-Jun、CK1-α、Claspin、C-Myc、CRY2、Cyclin A、Cyclin B、Cyclin E、CDK12/Cyclin K、Delta、Jagged、Dlg、DR4、DVL1、ELF、ErbB4、Erk、Fbxo45、Foxo1、Foxp3、gp190、GSPT1、GSPT2、H2A,H2AX、HIF-1a、HIF-1α、HIF-2a、HIPK2、Histone H2A、Histone H2B、HSF1、HSP70/90、ikaros、IKZF1/3、IL-1β、IL-6、iNOS、IRAK、IRS1 IκBα、JAMP、KAI1、KLFs LRRK2、Mad2、Mcl-1、MDM2、MED13、MEDL、MEIS2、MHC class I、MHC class II、MKK4、MTA1、MyBP-C、MyLC1/2、NEMO、NF-κB、N-Myc、Nrf2、NOTCH、NUMB、p21、p27、p53、p73、P-gp paxillin、PCNA、PCNP、PHD1/3、PLK1、Rbm39、Rbm23、RIP2、RhoA、RNF8、Runx1、SALL4、Securin、Skp2、Skp2-CKS1、SGK1、SMAC、 Smad2、Smads、SOD1及其變體、TCF/LEF、TNF-α、TopBP1、TP53、TRAF2、TRB3、TRIP、Troponin I、TSC2、UCK1、Wee1、WNK1或WNK4，但不限於此。
具體地，作為E3泛素連接酶，AMFR/gp78的天然底物或非天然底物可以為KAI1，APC的天然底物或非天然底物可以為Aurora A、Cyclin A、Cyclin B、Cdc20、Claspin、Securin或Skp2，C6orf157的天然底物或非天然底物可以為Cyclin B，CBLL1的天然底物或非天然底物可以為CDH1，CHFR的天然底物或非天然底物可以為Aurora A或PLK1，CHIP的天然底物或非天然底物可以為HSP70/90、iNOS、Runx1或LRRK2，DTL的天然底物或非天然底物可以為p21，E6-AP的天然底物或非天然底物可以為p53或Dlg，HECW1的天然底物或非天然底物可以為DVL1、p53或SOD1突變，HECW2的天然底物或非天然底物可以為p73，HERC2的天然底物或非天然底物可以為RNF8，HUWE1的天然底物或非天然底物可以為N-Myc、C-Myc、p53、Mcl-1或TopBP1，HYD的天然底物或非天然底物可以為CHK2，ITCH的天然底物或非天然底物可以為MKK4、RIP2或Foxp3，LNX1的天然底物或非天然底物可以為NUMB，MARCH-IV的天然底物或非天然底物可以為MHC class I，MARCH-VII的天然底物或非天然底物可以為gp190，MARCH-VIII的天然底物或非天然底物可以為B7-2或MHC class II，MDM2的天然底物或非天然底物可以為p53，MEKK1的天然底物或非天然底物可以為c-Jun或Erk，MIB1或MIB2的天然底物或非天然底物可以為Delta及Jagged，MycBP2的天然底物或非天然底物可以為Fbxo45或TSC2，NEDD4L的天然底物或非天然底物可以為Smad2，PELI1的天然底物或非天然底物可以為TRIP或IRAK，Pirh2的天然底物或非天然底物可以為TP53，PJA1 的天然底物或非天然底物可以為ELF，PJA1的天然底物或非天然底物可以為ELF，RFFL的天然底物或非天然底物可以為p53，RFWD2的天然底物或非天然底物可以為MTA1、p53或FoxO1，Rictor的天然底物或非天然底物可以為SGK1，RNF5的天然底物或非天然底物可以為JAMP或paxillin，RNF8或RNF168的天然底物或非天然底物可以為H2A或H2AX，RNF19的天然底物或非天然底物蛋白質可以為SOD1，RNF20或RNF40的天然底物或非天然底物可以為Histone H2B，RNF34的天然底物或非天然底物可以為Caspase-8或Caspase-10，RNF138的天然底物或非天然底物可以為TCF/LEF，RNF168的天然底物或非天然底物可以為Histone H2A或H2A.X，SCF/beta-TrCP的天然底物或非天然底物可以為IκBα、Wee1、Cdc25A或β-Catenin，SCF/FBW7的天然底物或非天然底物可以為Cyclin E、c-Myc或c-Jun，SCF/Skp2的天然底物或非天然底物可以為p27、p21或Fox01，SHPRH的天然底物或非天然底物可以為PCNA，SIAH1的天然底物或非天然底物可以為β-catenin、Bim或TRB3，SIAH2的天然底物或非天然底物可以為HIPK2或PHD1/3，SMURF1或SMURF2的天然底物或非天然底物可以為Smads，SMURF2的天然底物或非天然底物蛋白質可以為Mads，TOPORS的天然底物或非天然底物可以為p53或NKX3.1，TRAF-6的天然底物或非天然底物可以為NEMO或Akt1，TRIM63的天然底物或非天然底物可以為Troponin I、MyBP-C或MyLC1/2，UBR2的天然底物或非天然底物可以為Histone H2B，UHRF2的天然底物或非天然底物可以為PCNP，VHL的天然底物或非天然底物可以為HIF-1α或HIF-2α，WWP1的天然底物或非天然底物可以為Erb4，WWP2的天然底物或非天然底物可以為Oct-4，beta-TrCP的天然底物或非天然底物可以為β-Catenin或IκBα，XIAP或cIAP的天然底物或非天然底物可以為Caspase-3 或SMAC，CRL4-DCAF15的天然底物或非天然底物可以為Rbm39或Rbm23，cereblon的天然底物或非天然底物可以為aiolos、ikaros、MEIS2、ILZF1/3、CK1α、GSPT1或GSPT2，但不限於此。
更加具體地，作為E3泛素連接酶，beta-TrCP的天然底物或非天然底物可以為β-Catenin或IκBα，與beta-TrCP結合的分子膠水降解劑可以為NRX-1532、NRX-1933、NRX-2663、NRX-103094、NRX-103095、NRX-252114或NRX-252262(Nature Communications volume 10，Article number：1402(2019))，但不限於此。
並且，作為E3泛素連接酶，CRL4-DCAF15的天然底物或非天然底物可以為Rbm39或Rbm23，與CRL4-DCAF15結合的分子膠水降解劑可以為吲地磺胺(indisulam)、E7820或他斯索蘭(tasisulam)或它們的衍生物(Nature Chemical Biology volume 16，pages7-14(2020))，但不限於此。
並且，作為E3泛素連接酶，cereblon的天然底物或非天然底物可以為aiolos、ikaros、MEIS2、ILZF1/3、CK1α、GSPT1或GSPT2，與cereblon結合的分子膠水降解劑可以為沙利度胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)、泊馬度胺(pomalidomide)或它們的類似物，或者，可以為美國公開專利第2016/0058872號、美國公開專利第2015/0291562號中記載的化合物，但不限於此。
在本發明的一實施方式中，蛋白降解劑並沒有異型雙功能(heterobifucntional)，可以為單價降解劑或分子膠水降解劑。
在本發明的一實施方式中，與分子膠水降解劑結合的E3泛素連接酶可以為VHL(von Hippel-Lindau)、cereblon、XIAP、XIAP/cIAP、E3A、 MDM2.APC(Anaphase-promoting complex)、APC/cdc20、APC/cdh1、CRL(cullin ring ubiquitin ligase)、UBR5(EDD1)、beta-TrCP、SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING、LNXp80、LNX1、CBX4、CBL、CBLL1、C6orf157、CHFR、DTL、E6-AP、HACE1、HECTD1、HECTD2、HECTD3、HECW1、HECW2、HERC1、HERC2、HERC3、HERC4、HERC5、HUWE1、HYD、ITCH、mahogunin、MARCH-I、MARCH-II、MARCH-III、MARCH-IV、MARCH-VI、MARCH-VII、MARCH-VIII、MARCH-X、MEKK1、MIB1、MIB2、MycBP2、NEDD4、NEDD4L、PELI1、Pirh2、PJA1、PJA2、PPIL2、PRPF19、PIAS1、PIAS2、PIAS3、PIAS4、RANBP2、RFFL、RFWD2、Rictor、RNF4、RNF5、RNF8、RNF19、RNF190、RNF20、RNF34、RNF40、RNF125、RNF128、RNF138、RNF168、RBX1、SMURF1、SMURF2、STUB1、TOPORS、TRIP12、UBE3A、UBE3B、UBE3C、UBE4A、UBE4B、UBOX5、UBR5、WWP1、WWP2、Parkin、A20/TNFAIP3、AMFR/gp78、ARA54、beta-TrCP1/BTRC、SCF/beta-TrCP、BRCA1、CHIP、CHIP/STUB1、E6；E6AP/UBE3A、F-box protein 15/FBXO15、FBXW7/Cdc4、SCF/FBW7、GRAIL/RNF128、HOIP/RNF31、cIAP-1/HIAP-2、cIAP-2/HIAP-1、cIAP(pan)、ITCH/AIP4、KAP1、MARCH8、Mind Bomb 1/MIB1、Mind Bomb 2/MIB2、MuRF1/TRIM63、NDFIP1、NleL、Parkin、RNF2、RNF4、RNF8、RNF168、RNF43、SART1、Skp2、SCF/Skp2、SHPRH、SIAH1、SIAH2、SMURF1、SMURF2、TOPORS、TRAF-1、TRAF-2、TRAF-3、TRAF-4、TRAF-5、TRAF-6、TRAF-7、TRIM5、TRIM21、TRIM32、TRIM63、UBE3B、UBE3C、UBR1、UBR2、UHRF2、WWP1、WWP2、ZNRF1或ZNRF3，更具體地，可以為cereblon。
在本發明的一實施方式中，與分子膠水降解劑結合的靶蛋白可以為E3泛素連接酶的天然底物或非天然底物，天然底物或非天然底物可以為NKX3.1、β-Catenin、aiolos、Akt1、Aurora A、B7-2、Bim、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、CD147、Cdc20、Cdc25A、CDH1、CHK1、CHK2、c-Jun、CK1-α、Claspin、C-Myc、CRY2、Cyclin A、Cyclin B、Cyclin E、CDK12/Cyclin K、Delta、Jagged、Dlg、DR4、DVL1、ELF、ErbB4、Erk、Fbxo45、Foxo1、Foxp3、gp190、GSPT1、GSPT2、H2A,H2AX、HIF-1a、HIF-1α、HIF-2a、HIPK2、Histone H2A、Histone H2B、HSF1、HSP70/90、ikaros、IKZF1/3、IL-1β、IL-6、iNOS、IRAK、IRS1 IκBα、JAMP、KAI1、KLFs LRRK2、Mad2、Mcl-1、MDM2、MED13、MEDL、MEIS2、MHC class I、MHC class II、MKK4、MTA1、MyBP-C、MyLC1/2、NEMO、NF-κB、N-Myc、Nrf2、NOTCH、NUMB、p21、p27、p53、p73、P-gp paxillin、PCNA、PCNP、PHD1/3、PLK1、Rbm39、Rbm23、RIP2、RhoA、RNF8、Runx1、SALL4、Securin、Skp2、Skp2-CKS1、SGK1、SMAC、Smad2、Smads、SOD1及其變體、TCF/LEF、TNF-α、TopBP1、TP53、TRAF2、TRB3、TRIP、Troponin I、TSC2、UCK1、Wee1、WNK1或WNK4，更具體地，可以為GSPT1或GSPT2。
在本發明的具體例中，使用分子膠水降解劑，其與作為E3泛素連接酶的cerelon結合，並與作為靶蛋白的E3泛素連接酶的非天然底物GSPT1結合。
在本發明的一實施方式中，分子膠水降解劑可以為化合物，由以下通式X1表示：
Figure 111114270-A0202-12-0061-40
在上述通式中，
Dx1為C(=O)或CH2，
Dx2為O、N-C=N或NH，
a1為0、1、2或3的整數，
a2為0或1的整數，
a3為0、1或2的整數，
A為C、N或O，
Rxa為氫、鹵素或C1-6烷基，
Rxb及Rxc各自獨立地為氫、鹵素、C1-10烷基、CF3或Rx10-(Rx11)a-Rx12，
或者，與Rxb及Rxc鍵合部分一同形成C5-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基或C6-10雜芳基，
其中，
Rx10為直接鍵、-NH-或-O-，
Rx11各自獨立地選自由直接鍵、-C(O)-、C1-5亞烷基、C2-5亞烯基、C6-10亞芳基、C6-10雜亞芳基、C3-8環亞烷基或C3-8雜環亞烷基組成的組，
Rx12為OH、NH2、NH-Rx12’、C6-10芳基、C6-10雜芳基、C3-8環烷基或C3-8雜環烷基，
其中，Rx12’為C1-5烷基、C2-5烯基、C6-10芳基、C6-10雜芳基、C3-8環烷基或C3-8雜環烷基，
a為1至5的整數，
Rxb或Rxc中的任一個形成單價部分並能夠與Linker鍵合，
但是，當a2為0時，NH與Linker直接鍵合。
在本發明的一實施方式中，上述Dx1為CH2。在本發明的一實施方式中，上述Dx1為C(=O)。
在本發明的一實施方式中，上述Dx2為O。在本發明的一實施方式中，上述Dx2為N-C≡N。在本發明的一實施方式中，上述Dx2為NH。
在本發明的一實施方式中，上述a1為0。在本發明的一實施方式中，上述a1為1。在本發明的一實施方式中，上述a1為2。在本發明的一實施方式中，上述a1為3。
在本發明的一實施方式中，上述a2為0。在本發明的一實施方式中，上述a2為1。
在本發明的一實施方式中，上述a3為0。在本發明的一實施方式中，上述a3為1。上述a3為2。
在本發明的一實施方式中，上述A為C或N。
在本發明的一實施方式中，上述Rxa為氫。在本發明的一實施方式中，Rxa為F、Br、Cl或I。在本發明的一實施方式中，上述Rxa為C1-6烷基。在本發明的一實施方式中，上述Rxa為甲基。
在本發明的一實施方式中，上述Rxb及Rxc中的一個以上為C1-10烷基。
在本發明的一實施方式中，上述Rxb及Rxc中的一個以上為Rx10-(Rx11)a-Rx12。其中，a為1至3的整數。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx10為直接鍵。在本發明的一實施方式中，上述Rx10為-NH-。在本發明的一實施方式中，Rx10為-O-。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx11各自獨立地選自直接鍵、-C(O)-、C1-5亞烷基或C2-5亞烯基組成的組。在本發明的一實施方式中，上述Rx11為直接鍵。在本發明的一實施方式中，上述Rx11為-C(O)-。上述Rx11為C1-3亞烷基。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx11各自獨立地選自C6-10亞芳基、C6-10雜亞芳基、C3-8環亞烷基或C3-8雜環亞烷基組成的組。在本發明的一實施方式中，上述Rx11為C5-6環亞烷基。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為NH2。在本發明的一實施方式中，上述Rx12為-NH-CH3。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為包含一個以上N原子的C6-10雜芳基或包含一個以上N原子的C3-8雜環烷基。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為
Figure 111114270-A0202-12-0063-41
、
Figure 111114270-A0202-12-0063-42
或
Figure 111114270-A0202-12-0063-43
。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為
Figure 111114270-A0202-12-0064-44
、
Figure 111114270-A0202-12-0064-45
、
Figure 111114270-A0202-12-0064-46
或
Figure 111114270-A0202-12-0064-47
。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為
Figure 111114270-A0202-12-0064-48
、
Figure 111114270-A0202-12-0064-49
或
Figure 111114270-A0202-12-0064-50
。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為
Figure 111114270-A0202-12-0064-51
或
Figure 111114270-A0202-12-0064-52
。
並且，在本發明的一實施方式中，上述Rx12為
Figure 111114270-A0202-12-0064-53
、
Figure 111114270-A0202-12-0064-54
、
Figure 111114270-A0202-12-0064-55
或
Figure 111114270-A0202-12-0064-56
。
在本發明的一實施方式中，Rxb或Rxc中的一個以上包含-NH2或-NH-Rx12’，-NH2或-NH-Rx12’形成單價部分並與Linker鍵合。
在本發明的一實施方式中，上述Rxb及Rxc與Rxb鍵合部分及Rxc鍵合部分一同形成C4-8雜環烷基或C6-10雜芳基。
在本發明的一實施方式中，上述a為1。在本發明的一實施方式中，上述a為2。在本發明的一實施方式中，上述a為3。
在本發明的一實施方式中，上述分子膠水降解劑為
Figure 111114270-A0202-12-0065-57
Figure 111114270-A0202-12-0065-58
Figure 111114270-A0202-12-0065-59
Figure 111114270-A0202-12-0065-60
Figure 111114270-A0202-12-0065-61
Figure 111114270-A0202-12-0065-62
Figure 111114270-A0202-12-0066-63
Figure 111114270-A0202-12-0066-64
Figure 111114270-A0202-12-0066-65
Figure 111114270-A0202-12-0066-66
Figure 111114270-A0202-12-0066-67
或
Figure 111114270-A0202-12-0066-68
在本發明的一實施方式中，上述分子膠水降解劑在末端NH或NH2與Linker鍵合。
在本發明的一實施方式中，與Ab鍵合的連接子-蛋白降解劑為
Figure 111114270-A0202-12-0067-69
Figure 111114270-A0202-12-0067-70
Figure 111114270-A0202-12-0067-71
Figure 111114270-A0202-12-0067-72
Figure 111114270-A0202-12-0068-73
Figure 111114270-A0202-12-0068-74
Figure 111114270-A0202-12-0068-75
Figure 111114270-A0202-12-0068-76
Figure 111114270-A0202-12-0068-77
Figure 111114270-A0202-12-0069-78
Figure 111114270-A0202-12-0069-79
Figure 111114270-A0202-12-0069-80
或
Figure 111114270-A0202-12-0070-81
本發明還提供用於預防或治療過度增殖疾病或血管新生疾病的藥物組合物，包含上述記載的偶聯物、其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物。
本發明還提供上述記載的偶聯物、其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物作為用於預防或治療過度增殖疾病或血管新生疾病的藥物組合物的用途。
並且，本發明還可包含一種以上的治療活性助劑(therapeutic co-agent)及藥學上可接受的賦形劑。
在本發明的一實施方式中，上述治療活性助劑可以為針對過度增殖疾病表現預防效果、改善效果或治療效果的助劑或可減少在給予過度增殖疾病治療劑的過程中出現的副作用表達的助劑或表現免疫增強效果的助劑等，但不限於此，其意味著能夠配合使用任何在以配合劑的形式與蛋白降解劑一起使用時，能夠表現治療上有用的效果和/或進一步提高蛋白降解劑的穩定性和/或減 少給予蛋白降解劑時有可能發生的副作用和/或通過加強免疫力來最大化治療效果的製劑。
在本發明的一實施方式中，上述過度增殖疾病是指細胞增殖相關疾病，在試驗管或活體內無法以期望方式控制過度或異常的細胞，例如，瘤形成或增生性生長。過度增殖疾病可選自由瘤形成、腫瘤、癌症、白血病、牛皮癬、骨病、纖維增殖性疾病及動脈粥樣硬化組成的組。作為瘤形成及腫瘤，可以例舉組織細胞瘤、神經膠質瘤、星形細胞瘤、骨瘤等。
在本發明的一實施方式中，癌症可選自由肺癌、小細胞肺癌、胃腸道癌、大腸癌、腸癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、胰腺癌、腦癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤及黑色素瘤組成的組，蛋白降解劑可應用於能夠表現治療效果的所有癌症。
並且，本發明提供在患有過度增值疾病的受試者中預防或治療過度增殖疾病的方法，包括向受試者給予用於治療過度增殖疾病的有效量的抗體構建體-蛋白降解劑偶聯物、其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物的步驟。
在本發明的一實施方式中，提供預防或治療癌症的方法，包括向患者給予上述藥物組合物的步驟。
在本發明的一實施方式中，提供預防或治療血管新生疾病的方法，包括向患者給予上述藥物組合物的步驟。
本發明適用於向受試者的靶位置提供蛋白降解劑。本發明的偶聯物釋放沒有任何連接子部分的活性蛋白降解劑，並且，不存在可影響蛋白降解劑的反應性物質。
定義
在本說明書中，應用以下定義：
在本說明書中，“治療劑”為對增殖性疾病、例如癌細胞或活化的免疫細胞發揮細胞毒性、細胞增殖抑制和/或免疫調節效果的作用劑。作為治療劑的示例，包含細胞毒性劑、化學治療劑、細胞增殖抑制劑及免疫調節劑。
在本說明書中，“化學治療劑”是指對治療癌症有用的化學化合物。
在本說明書中，“受試者”旨在包含人類及非人類動物、尤其哺乳動物。作為受試者的示例，可例舉人類，例如包含患有本說明書中所記載的障礙、更具體為癌症的人類患者或正常受試者。“非人類動物”包含所有脊椎動物、例如非哺乳動物(例如，雞、兩栖類、爬蟲類)及哺乳動物，哺乳動物例如有非人靈長類、家畜和/或農業動物(例如，羊、狗、貓、牛、豬等)及齧齒類(例如，小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠等)。在特定實施例中，受試者為人類患者。
在本說明書中，“治療”或“進行治療”是指治療性處理及預防學或預防性措施兩者。需要進行治療的受試者包含已患有疾病的受試者、及容易患病的受試者或需預防疾病的受試者。因此，在對患有疾病或需要進行治療的受試者使用的情況下，上述術語包含與未進行處理的受試者相比，疾病的發展受阻或減緩、預防症狀、減少疾病和/或症狀的重症度或縮短患病時間，但不限於此。
在本說明書中，“給藥”或“給藥的”是指為了實現所期望的效果而通過任意合適的路徑提供和/或接觸和/或傳遞化合物或各種化合物。給藥可包含口服給藥、舌下給藥、非口服給藥(例如，靜脈內注射、皮下注射、皮內注射、肌肉內注射、關節內注射、動脈內注射、滑膜內注射、胸骨內注射、脊椎腔內注射、病變內注射或顱骨內注射)、經皮給藥、局部給藥、頰側給藥、直腸給藥、陰道給藥、鼻腔給藥、眼內給藥、吸入給藥及通過植入物的給藥，但不限於此。
在本說明書中，“未被取代或被取代”是指可未經取代或可經取代的母基團(parent group)，“取代的”是指具有1個以上的取代基的母基團(parent group)，並且，取代基是指共價鍵合在母基團(parent group)或融合在母基團(parent group)的化學部分。
在本說明書中，“鹵素”是指氟、氯、溴、碘等。
在本說明書中，“烷基”是從脂肪族或脂環族、飽和或不飽和(不飽和、完全不飽和)烴化合物的碳原子去除氫原子而獲得的1價部分，作為飽和烷基的示例，可例舉甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基等，作為飽和直鏈型烷基的示例，可例舉甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基(戊基)、正己基、正庚基等，作為飽和支鏈型烷基的示例，可例舉異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基、新戊基等。
在本說明書中，“烷氧基”是指-OR[其中，R為烷基]，作為示例，可例舉甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
在本說明書中，“芳基”是指從具有環原子的芳香族化合物的芳香族環原子去除氫原子而獲得的1價部分。
在本說明書中，“烯基”是具有1個以上的碳-碳雙鍵的烷基，作為不飽和烯基的示例，可例舉乙烯基(vinyl、-CH=CH2)、1-丙烯基(-CH=CH-CH3)、2-丙烯基、異丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等。
在本說明書中，“炔基”是具有1個以上的碳-碳三鍵的烷基，作為不飽和炔基的示例，可例舉乙炔基及2-丙炔基等。
在本說明書中，“羧基”是指-C(=O)OH。
在本說明書中，“甲醯基”是指-C(=O)H。
在本說明書中，“芳基”是指從芳香族化合物的芳香族環原子去除氫原子而獲得的1價部分。例如，“C5-7芳基”作為部分具有5至7個環原子的芳基，是指從芳香族化合物的芳香族環原子去除氫原子而獲得的1價部分，“C5-10芳基”作為部分具有5至10個環原子的芳基，是指從芳香族化合物的芳香族環原子去除氫原子而獲得的1價部分。其中，首碼(C5-7、C5-10等)與碳原子或雜原子無關地表示環原子數或環原子數的範圍。例如，“C5-6芳基”是指具有5或6個環原子的芳基。其中，環原子可像“碳芳基”中那樣全部為碳原子。作為碳芳基的示例，包含從苯、萘、甘菊環、蒽、菲、并四苯及芘衍生的碳芳基，但不限於此。作為包含至少一個為芳香族環的稠環的芳基的示例，包含從茚滿、茚、異茚、四氫化萘、苊、芴、亞苯基、醋菲及醋蒽衍生的基團，但不限於此。或者，環原子可像“雜芳基”中那樣包含一個以上的雜原子。
在本說明書中，“雜芳基”是包含1個以上的雜原子的芳基，作為示例，可例舉吡啶、嘧啶、苯噻吩、呋喃基、二氧雜環戊烷基、吡咯基、惡唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基等，更具體地，可例舉：具有從苯并呋喃、異苯并呋喃、吲哚、異吲哚、吲哚嗪、吲哚啉、異吲哚啉、嘌呤(腺嘌呤或鳥嘌呤)、苯并咪唑、吲唑、苯并惡唑、苯并異惡唑、苯并間二氧雜環戊烯、苯并呋喃、苯并三唑、硫茚、苯并噻唑、苯并噻二唑衍生的2個稠環的C9；具有從苯并吡喃、異苯并吡喃、色烷、異色烷、苯并二惡烷、喹啉、異喹啉、喹嗪、苯并惡嗪、苯并二嗪、吡啶并吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、酞嗪、萘啶、蝶啶衍生的2個稠環的C10；具有從苯并二氮卓衍生的2個稠環的C11；具有從哢唑、二苯并呋喃、二苯噻吩、哢唑、伯啶、吡啶并吲哚衍生的3個稠環的C13；具有從吖啶、呫噸、噻噸、惡 蒽、吩惡噻、吩嗪、吩惡嗪、吩噻嗪、噻蒽、菲啶、菲咯啉、吩嗪衍生的3個稠環的C14。
在本說明書中，“環烷基”為作為環基的烷基，且為從環(cyclic)烴化合物的脂環族環原子去除氫原子而獲得的1價部分。作為環烷基的示例，包含從下述物質衍生的環烷基，但不限於此。
飽和單環烴化合物：環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、甲基環丙烷、二甲基環丙烷、甲基環丁烷、二甲基環丁烷、甲基環戊烷、二甲基環戊烷及甲基環己烷；
不飽和單環烴化合物：環丙烯、環丁烯、環戊烯、環己烯、甲基環丙烯、二甲基環丙烯、甲基環丁烯、二甲基環丁烯、甲基環戊烯、二甲基環戊烯及甲基環己烯；以及
飽和雜環烴化合物：降蒈烷、降蒎烷、降莰烷。
在本說明書中，“雜環基”是指從雜環化合物的環原子去除氫原子而獲得的1價部分。
在本說明書中，首碼(例如C1-12、C3-8等)與碳原子或雜原子無關地表示環原子數或環原子數的範圍。例如，本說明書中所使用的術語“C3-6雜環基”是指具有3至6個環原子的雜環基。
作為單環雜環基的示例，包含從下述物質衍生的單環雜環基，但不限於此。
N1：氮丙啶、吖丁啶、吡咯烷、吡咯啉、2H-或3H-吡咯、呱啶、二氫吡啶、四氫吡啶、吖庚因；
N2：咪唑啶、吡唑烷、咪唑啉、吡唑啉、呱嗪；
O1：環氧乙烷、氧雜環丁烷、氧雜環戊烷、氧雜環戊烯、惡烷、二氫吡喃、吡喃、氧雜環庚三烯；
O2：二氧雜環戊烷、二惡烷及二氧雜環庚烷；
O3：三惡烷；
N1O1：四氫惡唑、二氫惡唑、四氫異惡唑、二氫異惡唑、嗎啉、四氫惡嗪、二氫惡嗪、惡嗪；
S1：硫雜環丙烷、硫雜環丁烷、硫雜環戊烷、硫雜環己烷、硫雜環庚烷；
N1S1：噻唑啉、噻唑烷、硫嗎啉；
N2O1：惡二嗪；
O1S1：氧硫雜環戊烯、氧硫雜環己烷；以及
N1O1S1：氧雜噻嗪。
在本說明書中，“前體(prodrug)”是指能夠在體內的生理條件下(例如酶性氧化(enzymatic oxidation)、還原(reduction)和/或水解等)，通過酶、胃酸的作用直接或間接轉化成吡咯并苯并二氮雜藥物的化合物。
在本說明書中，作為“藥學上可接受的鹽”，可使用由可在藥學上可接受的游離酸(free acid)形成的酸加成鹽，作為上述游離酸，可使用有機酸或無機酸。
上述有機酸包含檸檬酸、乙酸、乳酸、酒石酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、甲酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、苯甲酸、葡萄糖酸、甲磺酸、乙醇酸、琥珀酸、4-甲苯磺酸、谷氨酸及天冬氨酸，但不限於此。另外，上述無機酸包含鹽酸、溴酸、硫酸及磷酸，但不限於此。
例如，在化合物為陰離子或具有可以為陰離子的官能團的情況下(例如，-COOH可以為-COO-)，能夠以合適的陽離子形成鹽。作為合適的無機陽離子的示例，包含如Na+及K+的鹼金屬離子、如Ca2+及Mg2+的鹼土金屬陽離子、如Al3+的其他陽離子，但不限於此。作為合適的有機陽離子的示例，包含銨離子(即，NH4 +)及經取代的銨離子(例如，NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)，但不限於此。
作為一部分合適的經取代的銨離子的示例，不僅有從乙胺、二乙胺、二環己基胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、呱嗪、苄胺、苯基苄胺、膽鹼、葡甲胺及三乙醇胺衍生的銨離子，而且有從氨基酸、例如賴氨酸及精氨酸衍生的銨離子。作為普通的季銨離子的示例，有N(CH3)4 +。
在化合物為陽離子或具有可為陽離子的作用基的情況下(例如，-NH2可為-NH3 +)，能夠以合適的陰離子形成鹽。作為合適的無機陰離子的示例，包含從下述無機酸衍生的無機陰離子，但不限於此：可列舉鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、亞硫酸、硝酸、亞硝酸、磷酸及亞磷酸等。
作為合適的有機陰離子的示例，包含從下述有機酸衍生的有機陰離子，但不限於此：可例舉2-鄰乙醯氧基苯甲酸、乙酸、抗壞血酸、冬氨酸、苯甲酸、樟腦磺酸、肉桂酸、檸檬酸、依地酸、乙二磺酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羥基順丁烯二酸、羥基萘羧酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、甲磺酸、黏液酸、反油酸、草酸、棕櫚酸、撲酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水楊酸、硬脂肪酸、琥珀酸、對氨基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸及戊酸等。作為合適的聚合物有 機陰離子的示例，包含從下述聚合物酸衍生的有機陰離子，但不限於此：可例舉丹寧酸、羧基甲基纖維素等。
在本說明書中，“溶劑化物(solvate)”是指本發明的化合物與溶劑分子(solventmolecules)之間的分子複合物(molecular complex)，作為溶劑化物的示例，包含水、異丙醇、乙醇、甲醇、二甲亞碸(dimethylsulfoxide)、乙酸乙酯、乙酸、乙醇胺或與其等的混合溶液結合的本發明的化合物，但不限於此。
製備、純化和/或處理活性化合物的等效溶劑化物會較為便利或優選。術語“溶劑化物”在本說明書中以常規含義使用，以表示溶質(例如，活性化合物、活性化合物的鹽)及溶劑的絡合物。在溶劑為水的情況下，可將溶劑化物簡便地稱為水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
本發明的上述藥物組合物可包含藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體通常可包含代謝緩慢的大分子、例如蛋白質、多糖類、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物、脂質凝聚物等，這些藥學上可接受的載體可由本發明所屬技術領域的普通技術人員適當地選擇使用。
包含藥學上可接受的載體的上述組合物可以為口服或非口服的各種劑型。在製劑化時，使用常用的填充劑、增量劑、結合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等稀釋劑或賦形劑來製備。
用於口服的固體製劑包含錠劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這種固體製劑是在一種以上的化合物中混合至少一種以上的賦形劑、例如澱粉、碳酸鈣、蔗糖或乳糖、明膠等而製備。另外，除簡單的賦形劑以外，也可使用如硬脂酸鎂、滑石等的潤滑劑。
用於口服的液體製劑有懸浮劑、內用液劑、乳劑、糖漿劑等，除常用的作為簡單稀釋劑的水、液態石蠟外，可包含如潤濕劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等的各種賦形劑。
非口服製劑包含經滅菌的水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、凍乾劑、栓劑。作為非水性溶劑、懸浮溶劑，可使用如丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄欖油的植物性油；如油酸乙酯的可注射的酯等。作為栓劑的基劑，可使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐溫(tween)61、可哥脂、月桂酸甘油酯、甘油明膠等。
上述藥物組合物可以具有選自由注射劑、錠劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、懸浮劑、內用液劑、乳劑、糖漿劑、經滅菌的水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、凍乾劑及栓劑所組成的組中的一種劑型。
為了進行靜脈內注射、皮膚注射或皮下注射等，活性成分可以為用於非口服的可接受的水溶液形態，其無熱原(pyrogen-free)且具有合適的pH值、等張性及穩定性。本發明所屬技術領域的普通技術人員例如可使用如氯化鈉水溶液、林格氏液、乳酸林格氏液等的等張性載體製備合適的溶液，並且根據需要包含保存劑、穩定劑、緩衝劑、抗氧化劑或其他添加劑。適於注射的固體形態還可製成乳液形態或多肽封裝在脂質體中的形態。
本說明書中所使用的詞語“有效量”或“治療有效量”是指實現所期望的治療效果(相對於給藥量、給藥時間及方法)所需的量。有效量為受試者產生治療效果所需的活性劑的最小量，且小於毒性量。例如，給藥量能夠以約100ng至約100mg/kg的範圍對各患者進行給藥，更典型地，能夠以約1μg/kg至約10mg/kg的範圍進行給藥。在活性化合物為鹽、酯、醯胺、前體藥物(prodrug) 等的情況下，給藥量是以母體化合物為基準進行計算，因此使用的實際重量成正比地增加。本發明的吡咯并苯二氮卓化合物能夠以如下方式劑型化，但不限於此：使單位劑型(dosage form)包含活性成分0.1mg至3000mg、1mg至2000mg、10mg至1000mg。活性成分能夠以獲得約0.05μM至100μM、1μM至50μM、5μM至30μM的活性化合物的血漿峰值濃度的方式給藥。例如，可任意通過靜脈注射生理鹽水中的活性成分為0.1w/v%至5w/v%的溶液來給藥。
藥物組合物中的活性化合物的濃度可取決於藥物的吸收、滅活化及排出率及本發明所屬技術領域的普通技術人員已知的其他因素。給藥量可能因症狀/疾病的嚴重程度而異。另外，特定患者的給藥量及給藥方案可根據給藥監督人的職業判斷，綜合考慮患者的症狀/疾病程度、必要性、年齡、對藥物的反應性等來調整，本發明中所提出的濃度範圍僅為一例，並不旨在將請求的組合物的實施方式限制於此。並且，活性成分可給藥1次，或者也能夠以更少的給藥量分數次給藥。
以下，通過實施例及實驗例進一步詳細說明本發明。
以下實施例及實驗例用於幫助理解本發明，並不旨在限定本發明的發明要求保護。
實施例1．化合物2的製備
Figure 111114270-A0202-12-0080-82
化合物1的製備
在二氯甲烷(80mL)中溶解2-甲基-5-硝基苯胺(10g，65.7mmol)後，添加在二氯甲烷(10mL)中稀釋二碳酸二叔丁酯(28.7g，131.9mmol)的溶液。在氮 氣氣氛下加入吡啶(10.7mL，131.9mmol)並將反應溶液在常溫下攪拌19小時。用二氯甲烷(100mL)稀釋反應溶液並用0.5N鹽酸水溶液(50mL)洗滌。用無水硫酸鈉乾燥所收集的有機層並將其溶解在四氫呋喃/甲醇(3：1)溶液中，隨後，在0℃、氮氣氣氛下添加4M氫氧化鈉水溶液(24.7mL，98.6mmol)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮，然後，用二氯甲烷(200mL)稀釋，用蒸餾水(100mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物1(14.8g，89%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.83(s，1H)，7.84(d，1H)，7.28(d，1H)，2.34(s，3H)，1.55(s，9H)。
化合物2的製備
在甲醇(20mL)和乙酸乙酯(200mL)中溶解化合物1(9.5g，25.9mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，1.0g)。在常溫、氫氣氛下將反應溶液攪拌18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，通過濃縮，得到化合物2(8.2g，95%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.34(s，1H)，6.89(d，1H)，6.33(d，1H)，2.12(s，3H)，1.52(s，9H)。
實施例2．化合物10的製備
Figure 111114270-A0202-12-0081-83
化合物3的製備
在二甲基甲醯胺(20mL)中溶解4-溴-2-甲基苯甲酸(3g，13.95mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加碳酸氫鈉(2.3g，27.90mmol)和碘甲烷(1.7mL，27.90mmol)並在60℃的溫度條件下攪拌3小時。隨後，用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液，用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物3(3.1g，99%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.78(d，1H)，7.41(s，1H)，7.38(d，1H)，3.88(s，3H)，2.57(s，3H)。
化合物4的製備
在二甲基甲醯(10mL)中溶解化合物3(3.1g，13.88mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加氰化鋅(Zn(CN)2，8.2g，69.44mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(3.2g，2.78mmol)並在120℃的溫度條件下攪拌17小時。將反應溶液冷卻至常溫後，利用矽藻土進行過濾。用乙酸乙酯(100mL)稀釋過濾的溶液後，用蒸餾水(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物4(2.0g，85%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.97(d，1H)，7.55-7.53(m，2H)，3.93(s，3H)，2.62(s，3H)。
化合物5的製備
在氮氣氣氛下，在苯(100mL)中溶解化合物4(2.0g，11.75mmol)後，依次添加N-溴代琥珀醯亞胺(NBS，3.1g，17.62mmol)和偶氮二異丁腈(AIBN，1.9g，11.75mmol)並加熱回流的同時攪拌17小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物5(2.5g， 84%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.04(d，1H)，7.78(s，1H)，7.66(d，1H)，4.91(s，2H)，3.98(s，3H)。
化合物6的製備
在二甲基甲醯胺(30mL)中溶解化合物5(2.5g，9.83mmol)和3-氨基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽(1.6g，9.83mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加N，N'-二異丙基乙胺(2.2mL，12.92mmol)並在常溫下攪拌16小時。經過減壓濃縮並用二氯甲烷(100mL)稀釋後，通過過濾所生成的固體，得到化合物6(1.9g，71%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.02(s，1H)，8.16(s，2H)，7.99(d，1H)，7.91(d，1H)，5.17-5.12(m，1H)，4.57-4.40(m，2H)，2.94-2.86(m，1H)，2.62-2.58(m，1H)，2.44-2.39(m，1H)，2.19-2.16(m，1H)。
化合物7的製備
在四氫呋喃(30mL)中溶解化合物6(1g，3.37mmol)後，依次添加雷尼鎳(Raney Ni，2g)和二碳酸二叔丁酯(2.1mL，9.06mmol)並將反應溶液在常溫、氫氣氛下攪拌48小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物7(576mg，45%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.96(s，1H)，7.65(d，1H)，7.49(t，1H)，7.42(s，1H)，7.35(d，1H)5.10-5.06(m，1H)，4.44-4.26(m，2H)，4.22-4.20(d，2H)，2.89-2.84(m，1H)，2.60-2.55(m，1H)，2.38-2.34(m，1H)，1.99-1.97(m，1H)，1.37(s，9H)。
化合物8的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物7(200mg，0.53mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1小時後，經過減壓濃縮，得到化合物8(181mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.00(s，1H)， 8.24(br，2H)，7.80(d，1H)，7.68(s，1H)，7.59(d，1H)5.15-5.10(m，1H)，4.51-4.33(m，2H)，4.19-4.15(m，2H)，2.99-2.87(m，1H)，2.63-2.59(m，1H)，2.43-2.40(m,1H)，2.03-2.00(m，1H)。
化合物9的製備
在無水甲苯(15mL)中溶解化合物2(159mg，0.69mmol)後，添加三光氣(82mg，0.28mmol)和三乙胺(0.15mL，1.04mmol)後，在80℃、氮氣氣氛下加熱攪拌並減壓濃縮。將該產物在無水四氫呋喃(10mL)中進行溶解後，在0℃、氮氣氣氛下，在反應溶液中添加在無水四氫呋喃(10mL)中溶解化合物8(181mg)和三乙胺(0.22mL，1.60mmol)的溶液。經過1.5小時的攪拌後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物9(222mg，79%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，8.64(s，1H)，8.41(s，1H)，7.68(d，1H)，7.51(s，1H)，7.43(d，1H)，7.40(s，1H)，7.13(d，1H)，6.98(d，1H)，6.69(t，1H)，5.12-5.08(m，1H)，4.47-4.28(m，4H)，2.92-2.86(m，1H)，2.61-2.57(m，1H)，2.40-2.35(m，1H)，2.09(s，3H)，2.00-1.97(m，1H)，1.48(s，9H)。
化合物10的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物9(50mg，0.09mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時，經過減壓濃縮，得到化合物10(44mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，8.74(s，1H)，7.69(d，1H)，7.51(s，1H)，7.48(s，1H)，7.44(d，1H)，7.06(d，1H)，6.96(d，1H)，6.82(t，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.46-4.28 (m，4H)，2.95-2.87(m，1H)，2.62-2.57(m，1H)，2.40-2.36(m，1H)，2.14(s，3H)，2.01-1.98(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+422.4。
實施例3．化合物14的製備
Figure 111114270-A0202-12-0085-85
化合物12的製備
在二甲基甲醯胺(4mL)和吡啶(1mL)中溶解化合物10(60mg，0.11mmol)和化合物11(91mg，0.10mmol，化合物11通過公開專利WO2017/089890所記載的方法製備)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加1-羥基-7-氮雜苯并三唑(6.9mg，0.05mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.04mL，0.25mmol)，隨後，在50℃的溫 度條件下攪拌16小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物12(80mg，67%)。EI-MS m/z：[M+H]+1078.59。
化合物13的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物12(80mg，0.07mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1mL)中的氫氧化鋰(8.6mg，0.20mmol)水溶液和四甲基氫氧化銨(1.1M水溶液，0.06mL，0.07mmol)，隨後，在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物13(83mg，粗品(crude))。EI-MS m/z：[M+H]+1038.63。
化合物14的製備
在二氯甲烷(4mL)中溶解化合物13(83mg，crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時後，經過濃縮並通過HPLC純化，得到化合物14(41mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，8.88(s，1H)，8.59(s，1H)，8.31(t，1H)，7.86(d，1H)，7.69(d，1H)，7.55-7.51(m，2H)，7.44-7.42(m，2H)，7.28(d，1H)，7.14(d，1H)，7.00(d，1H)，6.64(t，1H)，5.16-5.08(m，4H)，4.47-4.28(m，4H)，4.05(t，2H)，3.98(d，1H)，3.65-3.52(m，10H)2.96-2.87(m，1H)，2.65-2.58(m，1H)，2.40-2.32(m，1H)，2.09(s，3H)，2.03-1.98(m，1H)。I-MSm/z：[M+H]+938.54。
實施例4．化合物21的製備
Figure 111114270-A0202-12-0087-86
化合物15的製備
在二甲基甲醯胺(30mL)中溶解3-溴-2-甲基苯甲酸(5g，23.25mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加碳酸氫鈉(3.9g，46.50mmol)和碘甲烷(2.9mL，46.50mmol)並在60℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液並用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物15(5.2g，97%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.73-7.68(m，2H)，7.09(t，1H)，3.90(s，3H)，2.63(s，3H)。
化合物16的製備
在苯(100mL)中溶解化合物15(2.6g，11.35mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加N-溴代琥珀醯亞胺(NBS，4.4g，24.96mmol)和偶氮二異丁腈(AIBN，1.8g，11.35mmol)並加熱回流的同時攪拌17小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)、蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物16 (3.2g，91%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.88(d，1H)，7.76(d，1H)，7.23(t，1H)，5.13(s，2H)，3.95(s，3H)。
化合物17的製備
在二甲基甲醯胺(20mL)中溶解化合物16(3.2g，10.39mmol)和3-氨基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽(1.9g，11.43mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加N，N’-二異丙基乙胺(2.7mL，15.58mmol)並在常溫下攪拌16小時。隨後，通過減壓濃縮反應溶液並用二氯甲烷(100mL)進行稀釋，然後，將所生成的固體進行過濾，得到化合物17(2.2g，67%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.01(s，1H)，7.87(d，1H)，7.77(d，1H)，7.51(t，1H)，5.17-5.12(m，1H)，4.44-4.24(m，1H)，2.98-2.87(m，1H)，2.61-2.57(m，1H)，2.46-2.44(m，1H)，2.03-1.99(m，1H)。
化合物18的製備
在二甲基甲醯胺(10mL)中溶解化合物17(2.2g，6.99mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加氰化鋅(Zn(CN)2，4.1g，34.96mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(1.4g，1.39mmol)並在120℃的溫度條件下攪拌17小時。將反應溶液冷卻至常溫後，利用矽藻土進行過濾。隨後，對經過減壓濃縮並用二氯甲烷(100mL)稀釋後生成的固體進行過濾，得到化合物18(1.2g，63%)。EI-MS m/z：[M+H]+270.32。
化合物19的製備
在甲醇(20mL)和鹽酸(4M，1,4-二惡烷溶液，5mL)中溶解化合物18(1.2g，4.45mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加鈀/木炭(10%w/w，1.5g)。隨後，在 50psi、氫氣氛下攪拌反應溶液18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，通過減壓濃縮，得到化合物19(732mg，crude)。EI-MS m/z：[M+H]+273.97。
化合物20的製備
在無水甲苯(50mL)中溶解化合物2(798mg，3.48mmol)後，添加三光氣(413mg，1.39mmol)和三乙胺(0.7mL，5.22mmol)並在80℃、氮氣氣氛下攪拌1小時後進行減壓濃縮。在無水四氫呋喃(25mL)中溶解該產物後，在反應溶液中添加在0℃、氮氣氣氛下在無水四氫呋喃(25mL)中溶解化合物19(732mg)和三乙胺(1.1mL，8.03mmol)的溶液。將反應溶液攪拌1.5小時後，經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物20(160mg，11%).EI-MS m/z：[M+Na]+544.31、[M-Boc+H]+422.24。
化合物21的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物20(160mg，0.30mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時後，通過減壓濃縮，得到化合物21(157mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.01(s，1H)，8.68(s，1H)，7.63(d，1H)，7.56-7.47(m，3H)，7.04(d，1H)，6.94(d，1H)6.76(t，1H)，5.17-5.12(m，1H)，4.55-4.35(m，4H)，2.97-2.88(m，1H)，2.67-2.60(m，1H)，2.40-2.33(m，1H)，2.14(s，3H)，2.04-2.01(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+422.51。
實施例5．化合物24的製備
Figure 111114270-A0202-12-0090-87
化合物22的製備
在二甲基甲醯胺(4mL)和吡啶(1mL)中溶解化合物21(100mg，crude)和化合物11(149mg，0.16mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加1-羥基-7-氮雜苯并三唑(11mg，0.08mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.1mL，0.55mmol)並在50℃的溫度條件下攪拌16小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)、蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物22(83mg，42%).EI-MS m/z：[M+H]+1179.06。
化合物23的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物22(83mg，0.07mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1mL)中的氫氧化鋰(8.8mg， 0.21mmol)和四甲基氫氧化銨(1.1M水溶液，0.06mL，0.07mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，通過HPLC純化，得到化合物23(32mg)。EI-MS m/z：[M+H]+1038.95。
化合物24的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物23後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮後，通過高效液相色譜(HPLC)純化，得到化合物24(24mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.00(s，1H)，8.87(s，1H)，8.57(s，1H)，8.31(t，1H)，7.86(s，1H)，7.62(d，1H)，7.54-7.50(m，2H)，7.43(s，1H)，7.27(d，1H)，7.13(d，1H)，7.00(d，1H)6.63(t，1H)，5.16-5.10(m，3H)，4.55-4.35(m，4H)，4.05(t，2H)，3.98(d，1H)，3.65-3.52(m，10H)2.98-2.88(m，1H)，2.63-2.59(m，1H)，2.42-2.32(m，1H)，2.08(s，3H)，2.04-2.00(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+938.82。
實施例6．化合物26的製備
Figure 111114270-A0202-12-0091-88
化合物26通過與化合物25(來那度胺)及化合物11至化合物14的合成相似的方法合成。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ 7.95(t，1H)，7.74(t，1H)，7.57(t，2H)，7.49(t，1H)，7.34(d，1H)，5.23(s，2H)， 5.20-5.11(m，2H)，4.42-4.35(m，2H)，4.18-4.16(m，2H)，4.06(d，1H)，3.81(t，2H)，3.72-3.52(m，12H)，2.94-2.76(m，2H)，2.46-2.39(m，1H)，2.18-2.46(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+776.62。
實施例7．化合物30的製備
Figure 111114270-A0202-12-0092-89
化合物28的製備
在二甲基甲醯胺(4mL)和吡啶(1mL)中溶解化合物27(42mg，0.09mmol，化合物27通過在J.Med.Chem.2019，62，699-726中所記載的方法製備)和化合物11(92mg，0.10mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加1-羥基苯并三唑(2.5mg，0.02mmol)和N，N'-二異丙基乙胺(0.03mL，0.19mmol)並在50℃的溫度條件下攪拌16小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物28(73mg，71%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，9.98(s，2H)，7.94(t，1H)，7.84(t，1H)，7.69(d，2H)，7.61(s，1H)，7.44(d，1H)，7.33(d，2H)，7.15(d，1H)，6.95-6.93(m，1H)，6.78(d，1H)， 5.75(d，1H)，5.49(t，1H)，5.22(t，1H)，5.06(t，1H)，5.00(s，2H)4.73(d，1H)，4.21(d，2H)，3.80(t，2H)，3.63(s，3H)，3.56-3.50(m，8H)，3.39-3.36(m，2H)，2.10-1.99(m，9H)，1.38(s，9H).EI-MS m/z：[M+H]+1092.33。
化合物29的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物28(73mg，0.07mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下添加溶解在蒸餾水(1mL)中的氫氧化鋰(8.4mg，0.20mmol)並在-5℃的溫度條件下攪拌4小時。用乙酸調節pH至約4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物29(70mg)。EI-MS m/z：[M+H]+952.31
化合物30的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物29(70mg)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液2小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物30(43.6mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.03(s，1H)，10.00(s，1H)，8.31(t，1H)，7.88(t，1H)，7.80(s，1H)，7.70(d，2H)，7.48-7.46(m，2H)，7.37(d，2H)，7.25-7.22(m，2H)，6.64(t，1H)，6.79(d，1H)，5.14(d，1H)，5.01(s，3H)，4.22(d，2H)，4.06(t，2H)，3.98(d，1H)3.65-3.37(m，12H).EI-MS m/z：[M+H]+852.21。
實施例8．化合物34的製備
Figure 111114270-A0202-12-0094-90
化合物31的製備
在甲苯(5mL)中溶解化合物2-碘-4-硝基甲苯(800mg，2.59mmol)後，添加乙酸鈀(27.3mg，0.12mmol)、2-二環己基磷-2',4',6'-三異丙基聯苯(XPhos，174mg，0.36mmol)、碳酸銫(2.97g，9.12mmol)及環己胺(0.7ml，6.08mmol)並在微波反應器(microwave reactor)中在130℃的溫度條件下反應2小時。通過色譜柱將反應溶液純化，得到化合物31(160mg，22%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.45(d，1H)，7.38(s，1H)，7.13(d，1H)，3.61(br，1H)，3.42-3.40(m，1H)，2.17(s，3H)，1.77-1.71(m，2H)，1.68-.49(m，2H)，1.43-1.00(m，2H)，1.27-1.19(m，4H)。
化合物32的製備
在甲醇(10mL)和乙酸乙酯(20mL)中溶解化合物31(800mg，3.41mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，100mg)。在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，通過濃縮，得到化合物32(670mg)。EI-MS m/z：[M+H]+205.4。
化合物33的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物32(55mg，0.27mmol)後，添加雙(五氟苯基)碳酸酯(117mg，0.30mmol)和吡啶(0.03ml，0.35mmol)並在常溫下 攪拌5小時。用二氯甲烷(10mL)稀釋反應溶液後，用蒸餾水(10mL×2)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，通過減壓濃縮，得到化合物33(crude)。
化合物34的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物33(117mg，0.28mmol)後，在0℃的溫度條件下，添加N，N’-二異丙基乙胺(0.12mL，0.85mmol)和化合物8(110mg，0.28mmol)。隨後，在常溫下攪拌反應溶液2小時並濃縮後，通過製備型高效液相色譜(Prep.HPLC)純化，得到化合物34(98.7mg)。EI-MS m/z：[M+H]+504.2。
實施例9．化合物44的製備
Figure 111114270-A0202-12-0095-91
Figure 111114270-A0202-12-0096-92
化合物35的製備
在二氯甲烷(10mL)中溶解化合物32(802mg，3.42mmol)後，在-78℃的溫度條件下添加吡啶(0.42mL，5.13mmol)和氯甲酸烯丙酯(0.4mL，3.77mmol)並在氮氣氣氛下攪拌2小時。隨後，經過濃縮反應溶液並通過色譜柱純化，得到化合物35(320mg，32%)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 6.93(d，1H)，6.75(br，1H)，6.54-6.49(m，2H)，6.01-5.92(m，1H)，5.37-5.33(m，1H)，5.26-5.23(m，1H)，4.65(d，1H)，3.47(br，1H)，3.30-3.28(m，1H)，2.11-2.08(m，1H)，2.06(s，3H)，1.78-1.76(m，2H)，1.67-1.64(m，1H)，1.45-1.35(m，2H)，1.29-1.15(m，4H).EI-MS m/z：[M+H]+289.3。
化合物36的製備
在二甲基甲醯胺(50mL)中溶解叔丁基-N-叔丁氧基羰基-N-羥基氨基甲酸酯(10.02g，42.9mmol)後，在0℃的溫度條件下，添加氫化鈉(60%礦物油分散體，1.57g，39.4mmol)。隨後，在0℃、氮氣氣氛下添加1-疊氮基-2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙烷(8.52g，35.8mmol)。將反應溫度升高至常溫並在氮氣氣氛下攪拌4小時後，用乙酸乙酯(150mL)稀釋並用蒸餾水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物36(10.9g，78%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.55(s，1H)，4.05-4.03(m，2H)，3.76-3.74(m，2H)，3.74-3.69(m，6H)，3.42(t，J=4.8Hz，2H)，1.49(s，18H)。
化合物37的製備
在無水四氫呋喃(50mL)中溶解化合物36(5.52g，14.1mmol)和三苯基膦(4.08g，15.6mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加蒸餾水(2.5mL，141mmol)並攪拌10分鐘，隨後，將溫度升高至常溫並攪拌16小時。隨後經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物37(4.4g，85%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 4.04-4.01(m，2H)，3.74-3.62(m，7H)，3.55(t，J=5.2Hz，1H)，2.88(t，J=5.2Hz，1H)，2.81(t，J=5.2Hz，1H)，1.64(s，2H)，1.48(s，18H)
化合物39的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(50mL)中溶解化合物38(3.0g，6.19mmol，化合物38通過公開專利WO2017/089890所記載的方法製備)和化合物37(2.71g，7.43mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加N,N,N',N'-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU，3.52g，9.29mmol)和N,N-二異丙基乙基胺(2.2mL，12.4mmol)。在常溫下攪拌反應溶液2小時後，在反應溶液中加入飽和氯化銨水 溶液(100mL)並用乙酸乙酯(2×100mL)提取。用鹽水(200mL)洗滌所收集的有機層後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物39(2.14g，42%)。EI-MS m/z：[M+H]+831.5，[M-Boc+H]+731.4，[M-2Boc+H]+631.3。
化合物40的製備
在無水四氫呋喃(5mL)中溶解化合物39(346mg，0.42mmol)後，在-45℃的溫度條件下依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.12mL，0.69mmol)和三光氣(15%甲苯溶液，0.32mL，0.45mmol)並在氮氣氣氛下攪拌1小時。在氮氣氣氛下，在無水四氫呋喃(2mL)中溶解化合物35(100mg，0.347mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.06mL，0.347mmol)後，將該溶液添加於反應溶液中。隨後將反應溫度逐漸升高至- 15℃並攪拌1.5小時。對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物40(99mg，25%)。EI-MS m/z：[M+Na]+1167.7。
化合物41的製備
在二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物40(255mg，0.09mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加四(三苯基膦)鈀(0)(10.3mg，0.089mmol)和2-乙基己酸鈉(44.4mg，0.267mmol)並在常溫下攪拌1小時。用乙酸乙酯(30mL)稀釋反應溶液後，用蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物41(90mg，98%)。EI-MS m/z：[M+H]+1061.8。
化合物42的製備
在無水四氫呋喃(3mL)中溶解化合物41(103mg，0.97mmol)後，在-45℃的溫度條件下依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.03mL，0.19mmol)和三光氣 (15%甲苯溶液，0.01ml，0.097mmol)並在氮氣氣氛下攪拌1小時。在氮氣氣氛下，在無水四氫呋喃(1mL)中溶解化合物8(141mg，0.019mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.01mL，0.016mmol)後，將該溶液添加於反應溶液中。在- 15℃的溫度條件下攪拌1.5小時後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物42(85mg，64%)。EI-MS m/z：[M+H]+1360.9，[M+Na]+1383.7。
化合物43的製備
在2-丙醇(0.5mL)和四氫呋喃(0.5mL)中溶解化合物42(51mg，0.038mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(0.5mL)中的氫氧化鋰(6.4mg，0.15mmol)和四甲基氫氧化銨(1.1M水溶液，0.038mL，0.038mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節PH至約4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物43(crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1220.8，[M+Na]+1242.4。
化合物44的製備
在二氯甲烷(1mL)中溶解上述中得到的化合物43(crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。隨後，在常溫下攪拌反應溶液3小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物44(10mg)。EI-MS m/z：[M+H]+1020.7，[M+Na]+1042.6。
實施例10．化合物48的製備
Figure 111114270-A0202-12-0099-93
化合物45的製備
在甲苯(5mL)中溶解化合物2-碘-4-硝基甲苯(600mg，2.28mmol)後，添加乙酸鈀(20.5mg，0.09mmol)、2-二環己基磷-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(XPhos，131mg，0.27mmol)、碳酸絕(2.22g，6.84mmol)及正丙胺(0.28mL，3.42mmol)並在微波反應器(microwave reactor)中在130℃的溫度條件下反應2小時。隨後，通過色譜柱將反應溶液純化，得到化合物45(111mg，25%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.49(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.13(d，1H)，3.71(br，1H)，3.20(q，2H)，2.19(s，3H)，1.75-1.70(m，2H)，1.05(t，3H).EI-MS m/z：[M+H]+195.1。
化合物46的製備
在甲醇(3mL)和乙酸乙酯(6mL)中溶解化合物45(111mg，0.57mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，50mg)。在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過濃縮，得到化合物46(crude 93mg)。EI-MS m/z：[M+H]+165.2。
化合物47的製備
在二氯甲烷(1mL)中溶解化合物46(20mg，0.12mmol)後，添加雙(五氟苯基)碳酸酯(53mg，0.13mmol)和吡啶(0.01ml，0.16mmol)並在常溫下攪拌5小時。用二氯甲烷(10mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(10mL×2)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮，得到化合物47(crude 40mg)。EI-MS m/z：[M+H]+375.3。
化合物48的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物47(40mg，0.107mmol)後，在0℃的溫度條件下添加N，N’-二異丙基乙胺(0.057mL，0.32mmol)和化合物8(42mg，0.107mmol)。在常溫下攪拌反應溶液2小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物48(43mg，68%)。EI-MS m/z：[M+H]+464.3。
實施例11．化合物52的製備
Figure 111114270-A0202-12-0101-94
化合物49的製備
在二氯甲烷(10mL)中溶解6-硝基二氫吲哚(500mg，3.04mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加二碳酸二叔丁酯(798mg，3.65mmol)、4-二甲氨基吡啶(74mg，0.61mmol)及三乙胺(0.85mL，6.09mmol)。在常溫下攪拌反應溶液17小時，用二氯甲烷(100mL)稀釋並用蒸餾水(50mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物49(673mg，83%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6：δ 7.82(d，1H)，7.25(d，1H)，4.08(t，2H)，3.17(t，2H)，1.59(s，9H)。
化合物50的製備
在甲醇(5mL)中溶解化合物49(50mg，0.19mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，10mg)。隨後，在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液3小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過濃縮，得到化合物50(45mg，quant.)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)：δ 6.89(d，1H)，6.27(dd，1H)，3.93(t，2H)，2.96(t，2H)，1.55(s，9H)。
化合物51的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物50(21mg，0.09mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加雙(五氟苯基)碳酸酯(41mg，0.11mmol)和吡啶(0.01mL，0.15mmol)。在常溫下攪拌反應溶液3小時後，在二甲基甲醯胺(1mL)中溶解添加化合物8(29mg，0.08mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.03mL，0.15mmol)並在常溫下攪拌1小時。減壓濃縮反應溶液並用乙酸乙酯(50mL)稀釋後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物51(22mg，55%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，8.60(m，1H)，7.86(m，1H)，7.69(d，1H)，7.51(s，1H)，7.44(d，1H)，7.00(m，2H)，6.64(m，1H)，5.12-5.08(dd，1H)，4.47-4.28(m，4H)，3.87(t，2H)2.97-2.91(m，3H)，2.62-2.57(m，1H)，2.43-2.37(m，1H)，2.09-1.84(m，1H)，1.49(s，9H)。
化合物52的製備
在二氯甲烷(1.5mL)中溶解化合物51(22mg，0.01mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(0.5mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物52(14mg，62%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，8.76(s，1H)，7.69(d，1H)，7.51-7.43(m，3H)，7.21-7.08(m，1H)，6.95-6.90(m，1H)，6.77(t，1H)，5.12-5.08(dd，1H)，4.46-4.28(m，4H)，3.59(t，2H)，3.00(t，2H)，2.98-2.88(m，1H)2.67- 2.57(m，1H)，2.40-2.36(m，1H)，2.00-1.90(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+434.42。
實施例12．化合物59的製備
Figure 111114270-A0202-12-0103-95
Figure 111114270-A0202-12-0104-96
化合物53的製備
在二氯甲烷(10mL)中溶解化合物50(261mg，1.11mmol)後，在-78℃的溫度條件下添加吡啶(0.13ml，1.67mmol)和氯甲酸烯丙酯(0.13ml，1.22mmol)並在氮氣氣氛下攪拌17小時。隨後，對反應溶液進行濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物53(268mg，75%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.63(s，1H)，7.06(d，1H)，6.54(br，1H)，5.99-5.92(m，1H)，5.37(d，1H)，5.26(d，1H)，4.65(d，2H)，3.97(t，2H)，3.03(t，2H).1.5(s，9H)。
化合物54的製備
在二氯甲烷(4mL)中溶解化合物53(145mg，0.455mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液3小時後，經過濃縮，得到化合物54(140mg)。EI-MS m/z：[M+H]+219.2。
化合物55的製備
在無水四氫呋喃(5mL)中溶解化合物39(203mg，0.24mmol)後，在-45℃的溫度條件下，依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.07mL，0.41mmol)和三光氣(15%甲苯溶液，0.18mL，0.26mmol)並在氮氣氣氛下攪拌1小時。在氮氣氣氛下，在無水四氫呋喃(2mL)中溶解化合物54(67mg，0.20mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.04mL、0.20mmol)後，將其添加於反應溶液中。隨後將反應溫 度逐漸升高至- 15℃並攪拌1.5小時。隨後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物55(138mg，63%)。EI-MS m/z：[M+Na]+1076.7。
化合物56的製備
在二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物55(138mg，0.13mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加四(三苯基膦)鈀(0)(15.0mg，0.01mmol)和2-乙基己酸鈉(64.0mg，0.39mmol)並在常溫下攪拌1小時。用乙酸乙酯(10mL)稀釋反應溶液後，用蒸餾水(20mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物56(105mg，83%)。EI-MS m/z：[M+Na]+991.7。
化合物57的製備
在無水四氫呋喃(2mL)中溶解化合物56(40mg，0.04mmol)後，在-45℃的溫度條件下，依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.01mL，0.08mmol)和三光氣(15%甲苯溶液，0.03ml，0.03mmol)並在氮氣氣氛下攪拌1小時。在氮氣氣氛下，在無水四氫呋喃(1mL)中溶解化合物8(17.2mg，0.04mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.01mL、0.08mmol)後，將其添加於反應溶液中。在- 15℃的溫度條件下攪拌1.5小時後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物57(32mg，60%)。EI-MS m/z：[M+H]+1291.6。
化合物58的製備
在2-丙醇(0.5mL)和四氫呋喃(0.5mL)中溶解化合物57(32mg，0.02mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(0.5mL)中的氫氧化鋰(4.2mg，0.10mmol)和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.02mL，0.02mmol)並在- 10℃ 的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物58(crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1150.7。
化合物59的製備
在二氯甲烷(1mL)中溶解上述中得到的化合物58(crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液3小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物59(14mg)。EI-MS m/z：[M+H]+950.5。
實施例13．化合物64的製備
Figure 111114270-A0202-12-0106-97
化合物60的製備
在蒸餾水(60mL)中溶解5-硝基-1H-吲唑-3(2H)-酮(4.46g，24.9mmol)後，添加碳酸氫鈉並攪拌40分鐘直至變成弱鹼(pH9)。隨後，在反應溶液中添加二碳酸二叔丁酯(10mL，49.8mmol)並在常溫下攪拌。經過4小時後，添加碳酸氫鈉(10g，119mmol)和二碳酸二叔丁酯(5mL，24.9mmol)並在常溫下攪拌16小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(30mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物60(700mg，10%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 12.62(brs，1H)，8.61(d，1H)，8.44-8.41(m，1H)，8.17(d，1H)，1.62(s，9H)。
化合物61的製備
在四氫呋喃(10mL)中溶解化合物60(200mg，0.72mmol)後，添加碳酸絕(257mg，0.79mmol)和碘甲烷(0.07mL，1.07mmol)並在常溫下攪拌12小時。隨後，用乙酸乙酯(40mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(20mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物61(85mg，40%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 8.57(m，1H)，8.51(d，1H)，8.04(d，1H)，3.57(s，3H)，1.63(s，9H)。
化合物62的製備
在四氫呋喃(2mL)和甲醇(2mL)中溶解化合物61(85mg，0.29mmol)並添加鈀/木炭(46mg)後，在氫氣氛下攪拌2小時。隨後，用矽藻土過濾反應溶液後，經過減壓濃縮，得到化合物62(75mg，99%)。
化合物63的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解雙(五氟苯基)碳酸酯(63mg，0.16mmol)後，在反應溶液中添加在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物8(35mg，0.13mmol)和吡啶(0.03mL，0.40mmol)的溶液。反應30分鐘後，在反應溶液中添加在二甲基甲醯胺(2mL)中溶解化合物62(57mg，0.15mmol)的溶液並在常溫下攪拌1小時。隨後，用乙酸乙酯(30mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(15mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物63(9.4mg，12%)。EI-MS m/z：[M+H]+563.5。
化合物64的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物63(9.4mg，0.017mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(0.5mL)並在常溫下攪拌2小時。隨後，減壓濃縮反應溶液並通過HPLC純化，得到化合物64(2mg)。EI-MS m/z：[M+H]+463.4。
實施例14．化合物69的製備
Figure 111114270-A0202-12-0108-98
化合物65的製備
在甲苯(14mL)中溶解2-碘-4-硝基甲苯(800mg，3.04mmol)後，添加乙酸鈀(27.3mg，0.12mmol)、2-二環己基磷-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(XPhos，174mg，0.36mmol)、碳酸絕(2.97g、9.12mmol)及1-(叔丁氧基羰基)呱嗪(1.7g，9.12mmol)並在微波反應器(microwave reactor)中在130℃的溫度條件下反應2小時。隨後，通過色譜柱將反應溶液純化，得到化合物65(315mg，32%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.88-7.82(m，2H)，7.32(d，1H)，3.61-3.59(m，4H)，2.91-2.89(m，4H)，2.40(s，3H)，1.49(s，9H)。
化合物66的製備
在甲醇(5mL)和乙酸乙酯(2mL)中溶解化合物65(315mg，0.98mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w、65mg)。隨後，在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過濃縮，得到化合物66(crude 280mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 6.95(d，1H)，6.40-6.35(m，2H)，3.56-3.53(m，4H)，2.83-2.17(m，4H)，2.18(s，3H)，1.48(s，9H)。
化合物67的製備
在二氯甲烷(1.5mL)中溶解化合物66(70mg，0.24mmol)後，添加雙(五氟苯基)碳酸酯(104mg，0.26mmol)和吡啶(0.02ml，0.31mmol)並在常溫下攪拌3小時。將反應溶液濃縮後，得到的化合物67直接用於下一反應。
化合物68的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中溶解化合物8(92mg，0.24mmol)後，添加N，N’-二異丙基乙胺(0.13mL，0.72mmol)。在反應溶液中添加化合物67(crude)後，在常溫下攪拌16小時。隨後，用乙酸乙酯(20mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(20mL×2)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物68(93mg，65%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.25(s，1H)，7.68(d，1H)，7.44(s，1H)，7.32-7.30(d，1H)，7.10-7.08(d，1H)，7.01(s，1H)，6.95-6.93(d，1H)，6.90(s，1H)，5.56-5.52(t，1H)，5.15-5.10(m，1H)，4.56-4.44(m，2H)，4.44-4.24(m，2H)，4.16-4.08(m，1H)，3.55-3.52(m，4H)，2.92-2.72(m，6H)，2.40-2.16(m，5H)，1.48(s，9H)。
化合物69的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物68(9.4mg，0.017mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(0.5mL)並在常溫下攪拌2小時。隨後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過HPLC純化，得到化合物69(2mg)。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ 7.77(s，1H)，7.55(s，1H)，7.50(d，1H)，7.43(d，1H)，7.09(d，1H)，6.81(d，1H)，5.15(d，1H)，4.54-4.43(m，4H)，3.37-3.31(m，4H)，3.13-3.10(m，4H)，2.91-2.86(m，1H)，2.81-2.79(m，1H)，2.51-2.47(m，1H)，2.25(s，3H)，2.20-2.12(m，1H)。
實施例15．化合物74的製備
Figure 111114270-A0202-12-0110-99
化合物71的製備
在二氯甲烷(14mL)中溶解化合物70(2.0g，2.74mmol，化合物70通過公開專利WO2017/089890所記載的方法製備)後，在0℃、氮氣氣氛下添加雙(五氟苯基)碳酸酯(1.2g，3.01mmol)和吡啶(0.44ml，5.47mmol)。在常溫下攪拌5小時後，用二氯甲烷(20mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(30mL×2)洗滌，隨後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物71(2g，77%)。
化合物72的製備
在N，N-二甲基甲醯胺(2mL)中溶解化合物69(40mg，0.066mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.24mL，0.13mmol)和化合物71(68mg，0.073mmol)並在常溫下攪拌2小時。隨後，用乙酸乙酯(30mL)稀釋反應溶液並用鹽水(20mL×2)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物72(62mg，75%)。EI-MS m/z：[M+H]+1247.90。
化合物73的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物72(62mg，0.049mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1mL)中的氫氧化鋰(6.2mg，0.15mmol)和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.05mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，經過濃縮，得到化合物73(crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1107.76。
化合物74的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解上述中得到的化合物73(crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。隨後，在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物74(18mg)。EI-MS m/z：[M+H]+1007.68，1/2[M+H]+504.60。
實施例16．化合物80的製備
Figure 111114270-A0202-12-0112-100
化合物75的製備
在氮氣氣氛下，在二甲基亞碸(15mL)中溶解溴二氟乙酸乙酯(2.02g，9.98mmol)、4-碘-1-甲基-2-硝基苯(2.6g，9.98mmol)及銅粉(1.6g，25.95mmol)後，在60℃的溫度條件下攪拌12小時。將溫度降低至常溫後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋並用矽藻土過濾，隨後，依次用1N鹽酸水溶液(15mL)和鹽水(2×15mL)洗滌濾液後，用無水硫酸鈉進行乾燥。經過過濾及濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物75(1.07g，41%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.21(s，1H)，7.75(d，1H)，7.48(d，1H)，4.31(q，2H)，2.67(s，3H)，1.32(t，3H)。
化合物76的製備
在乙醇(35mL)中溶解化合物75(1.07g，4.12mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，100mg)。並且，在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液18小時。隨後，用矽藻土過濾反應溶液並經過濃縮，得到化合物76(0.92g，98%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.07(d，1H)，6.92(d，1H)，6.89(s，1H)，4.31(q，2H)，2.18(s，3H)，1.32(t，3H)。
化合物77的製備
在甲苯(10mL)中溶解化合物76(444mg，1.94mmol)後，添加二碳酸二叔丁酯(0.53mL，2.33mmol)並在100℃、氮氣氣氛下攪拌反應溶液16小時。隨後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物77(624mg，98%)。EI-MS m/z：[M+H]+484.45。
化合物78的製備
在四氫呋喃(1mL)、甲醇(2.5mL)及蒸餾水(2mL)中溶解化合物77(200mg，0.61mmol)後，添加碳酸鉀(120mg，0.87mmol)並在常溫下攪拌3小時。隨後，對反應溶液進行減壓濃縮並用0.1N鹽酸水溶液調節pH至3後，用乙酸乙酯(10mL)提取並用無水硫酸鈉進行乾燥後，通過過濾及濃縮，得到化合物78(163mg crude)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.98(br，1H)，7.26-7.21(m，3H)，2.28(s，3H)，1.52(s，9H)。
化合物79的製備
在二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物78(163mg，0.54mmol)和化合物8(167mg，0.54mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加N，N’-二異丙基乙胺(0.29mL，1.62mmol)和1-[雙(二甲氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑並[4,5-雙]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(HATU，226mg，0.595mmol)並在常溫下攪拌16小時。隨後，用乙酸乙酯(10mL)稀釋反應溶液並依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)和蒸餾水(10mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物79(72mg，23%)。EI-MS m/z：[M+H]+557.3。
化合物80的製備
在二氯甲烷(1mL)中溶解化合物79(72mg，0.13mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。隨後，在常溫下攪拌反應溶液3小時，並且，經 過濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物80(53mg)。EI-MS m/z：[M+H]+457.2。
實施例17．化合物83的製備
Figure 111114270-A0202-12-0114-101
化合物81的製備
在無水四氫呋喃(3mL)中溶解化合物39(130mg，0.160mmol)後，在-40℃、氮氣氣氛下添加光氣(15%甲苯溶液，0.02mL，0.18mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.047mL，0.13mmol)並攪拌40分鐘。在0℃、氮氣氣氛下，在反應溶液中添加溶解於無水四氫呋喃(1mL)的化合物80(76mg，0.13mmol)。 攪拌12小時後，對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物81(70mg，40%)。EI-MS m/z：[M+Na]+1335.8。
化合物82的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物81(32mg，0.025mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1mL)中的氫氧化鋰(4.2mg，0.099mmol)和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.025mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，經過濃縮，得到化合物82(crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1173.7。
化合物83的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解上述中得到的化合物82(crude 21mg)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物83(17mg)。EI-MS m/z：[M+H]+973.7。
實施例18．化合物88的製備
Figure 111114270-A0202-12-0115-102
化合物84的製備
在甲苯(10mL)中溶解偶氮二甲酸二乙酯(40%甲苯溶液，273mg，1.57mmol)和4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯(289mg，1.44mmol)後，在常溫、氮氣氣氛下添加三苯基膦(411mg，1.57mmol)和2-甲基-5-硝基苯酚(200mg，1.31mmol)。攪拌4小時後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋並用蒸餾水(50mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾並減壓濃縮後，通過色譜柱純化，得到化合物84(331mg，75%)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.76-7.74(m，1H)，7.66(s，1H)，7.27(d，1H)，4.64-4.62(m，2H)，3.67-3.61(m，2H)，3.49-3.43(m，2H)，2.30(s，3H)，1.99-1.94(m，2H)，1.83-1.81(m，2H)，1.48(s，9H)。
化合物85的製備
在甲醇(10mL)中溶解化合物84(350mg，1.04mmol)後，添加鈀/木炭(10%w/w，70mg)。在常溫、氫氣氛下，攪拌反應溶液18小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過濃縮，得到化合物85(325mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 6.74(d，1H)，6.23(s，1H)，6.06(d，1H)，4.78(s，2H)，4.33(s，1H)，3.60-3.50(m，2H)，3.30-3.25(m，2H)，1.99(s，3H)，1.90-1.80(m，2H)，1.60-1.45(m，2H)，1.40(s，9H).
化合物86的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物85(70mg，0.23mmol)後，添加雙(五氟苯基)碳酸酯(99mg，0.25mmol)和吡啶(0.024ml，0.29mmol)並在常溫下攪拌3小時。將反應溶液減壓濃縮後，得到的化合物86直接用於下一反應。
化合物87的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(1.5mL)中溶解化合物8(85mg，0.22mmol)後，依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.12mL，0.66mmol)。添加上述中得到的化合物 86後，在常溫下攪拌16小時。用二氯甲烷(10mL)稀釋反應溶液並用蒸餾水(2×10mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物87(65mg，49%)。
化合物88的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物87(65mg，0.11mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液3小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物88(40mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，8.61(s，1H)，7.69(d，1H)，7.50(s，1H)，7.43(d，1H)，7.32(s，1H)，6.79(t，1H)，6.73(d，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.60-4.50(m，1H)，4.47-4.28(m，4H)，2.96-2.87(m，1H)，2.62-2.50(m，1H)，2.45-2.36(m，1H)，2.09-1.96(m，5H)，1.87-1.82(m，2H)。
實施例19．化合物89的製備
Figure 111114270-A0202-12-0117-103
化合物89通過與化合物88及化合物71至化合物74的合成相似的方法合成。EI-MS m/z：[M+H]+1022.03，1/2[M+H]+512.25。
實施例20．化合物91的製備
Figure 111114270-A0202-12-0118-104
化合物90的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中溶解化合物10(100mg，0.19mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加N-(叔丁氧羰基)-N-甲基甘氨酸(53mg，0.28mmol)、O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基硫尿六氟磷酸鹽(HBTU，127mg，0.34mmol)及N，N’-二異丙基乙胺(0.1mL，0.56mmol)並在常溫下攪拌2小時。用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌，隨後，用無水硫酸鈉盡心乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物90(64mg，58%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，9.23-9.20(m，1H)，8.59(s，1H)，7.68(d，1H)，7.51-7.48(m，2H)，7.43(d，1H)，7.16(d，1H)，7.03(d，1H)，6.64(m，1H)，5.12-5.08(m，1H)，4.46-4.28(m，4H)，3.96(m，2H)，2.94-2.86(m，4H)，2.61-2.57(m，1H)，2.40-2.35(m，1H)，2.10(s，3H)，2.00-1.97(m，1H)，1.41-1.34(m，9H)。
化合物91的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物90(13mg，0.02mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液2小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物91(8mg，60%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.97(s，1H)，9.78(s，1H)，8.74(br，2H)，8.65(s，1H)7.69(d，1H)， 7.64(s，1H)，7.51(s，1H)，7.44(d，1H)，7.08(s，2H)，6.72(t，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.46-4.28(m，4H)，3.94(t，2H)，2.96-2.87(m，1H)，2.67-2.57(m，4H)，2.40-2.36(m，1H)，2.14(s，3H)，2.01-1.98(m，1H).EI-MS m/z：[M+6H]+493.48。
實施例21．化合物92的製備
Figure 111114270-A0202-12-0119-105
化合物92通過與化合物91及化合物71至化合物74的合成相似的方法合成。EI-MS m/z：[M+H]+1009.65。
實施例22．化合物94的製備
Figure 111114270-A0202-12-0119-106
化合物93的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物10(164mg，0.31mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加1-(t-丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-羧酸(92mg， 0.46mmol)、O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基硫尿六氟磷酸鹽(HBTU，209mg，0.55mmol)及N，N’-二異丙基乙胺(0.16mL，0.91mmol)並在常溫下攪拌2小時。用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌，隨後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物93(117mg，63%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，9.35(s，1H)，8.60(s，1H)，7.69(d，1H)，7.51-7.50(m，2H)，7.44(d，1H)，7.16(d，1H)，7.04(d，1H)，6.67(t，1H)，5.12-5.08(m，1H)，4.47-4.28(m，4H)，4.00-3.91(m，4H)，3.55-3.50(m，1H)，2.94-2.86(m，1H)，2.61-2.57(m，1H)，2.40-2.32(m，1H)，2.08(s，3H)，2.00-1.97(m，1H)，1.38-1.35(m，9H).EI-MS m/z：[M+H]+605.58.
化合物94的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物93(13mg，0.02mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液2小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物94(8mg，60%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，9.45(s，1H)，8.74-8.68(m，3H)，7.69(d，1H)，7.61(s，1H)，7.51(s，1H)，7.44(d，1H)，7.08(s，2H)，6.71(t，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.46-4.28(m，4H)，4.00-3.91(m，4H)，3.81-3.71(m，1H)，2.94-2.86(m，1H)，2.67-2.58(m，1H)，2.40-2.36(m，1H)，2.09(s，3H)，2.01-1.98(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+505.52。
實施例23．化合物95的製備
Figure 111114270-A0202-12-0121-107
化合物95通過與化合物94及化合物71至化合物74的合成相似的方法合成。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.98(s，1H)，9.38(s，1H)8.60(s，1H)，8.32(t，1H)，7.78(d，1H)，7.68(d，1H)，7.51-7.49(m，3H)，7.43(d，1H)，7.25(d，2H)，7.16(d，1H)，7.04(d，1H)6.67(t，1H)，5.15-5.02(m，4H)，4.47-4.28(m，4H)，4.10-3.96(m，7H)，3.65-3.52(m，12H)2.95-2.86(m，1H)，2.67-2.57(m，1H)，2.40-2.32(m，1H)，2.07(s，3H)，2.03-1.98(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+1021.72。
實施例24．化合物100的製備
Figure 111114270-A0202-12-0121-108
化合物96的製備
在四氫呋喃(5mL)中溶解偶氮二甲酸二乙酯(40%甲苯溶液，297mg，1.47mmol)和叔丁基(反式-4-羥基環己基)氨基甲酸酯(230mg，1.08mmol)後，在常溫、氮氣氣氛下添加三苯基膦(385mg，1.47mmol)和2-甲基-5-硝基苯酚(150mg，0.98mmol)。回流攪拌16小時後，經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物96，將其未經過純化直接用於下一反應。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.73(d，1H)，7.64(s，1H)，7.25(d，1H)，4.45(s，1H)，4.35-4.25(m，1H)，3.70(s，1H)，2.27(s，3H)，2.17-2.09(t，4H)，1.67-1.55(m，2H)，1.46(s，9H)，1.38-1.25(m，2H)。
化合物97的製備
在甲醇(3mL)和乙酸乙酯(2mL)中溶解上述中得到的化合物96後，添加鈀/木炭(10%w/w，35mg)。在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液1小時。隨後，用矽藻土過濾反應溶液並濃縮，並且，通過色譜柱純化，得到化合物97(90mg，28%，2步(2 steps))。
化合物98的製備
在二氯甲烷(2mL)中溶解化合物97(85mg，0.27mmol)後，添加雙(五氟苯基)碳酸酯(115mg，0.29mmol)和吡啶(0.028ml，0.35mmol)並在常溫下攪拌3小時。隨後，將反應溶液減壓濃縮後，得到的化合物98直接用於下一反應。
化合物99的製備
在N,N-二甲基甲醯胺(1.5mL)中溶解化合物8(103mg，0.27mmol)並依次添加N，N’-二異丙基乙胺(0.14mL，0.80mmol)。在反應溶液中添加化合物98後，在常溫下攪拌16小時。隨後，用乙酸乙酯(20mL)稀釋反應溶液並用蒸 餾水(2×10mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物99(147mg，88%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，7.69(d，1H)，7.51(s，1H)，7.43(d，1H)，7.18(s，1H)，6.94(d，1H)，6.81-6.75(m，2H)，6.70-6.65(m，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.50-4.29(m，4H)，4.09(s，1H)，2.99-2.85(m，1H)，2.62-2.36(m，2H)，2.10-1.98(m，5H)，1.85-1.75(d，2H)，1.47-1.15(m，15H)。
化合物100的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物99(147mg，0.23mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液3小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物100(75mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，8.58(s，1H)，7.80(s，2H)，7.70(d，1H)，7.51(s，1H)，7.43(d，1H)，7.29(s，1H)，6.95(d，1H)，6.76-6.71(m，2H)，5.13-5.08(m，1H)，4.09(s，1H)，3.09(s，1H)，2.93-2.88(m，1H)，2.62-2.36(m，2H)，2.10-1.98(m，8H)，1.49-1.41(m，4H).EI-MS m/z：[M+H]+520.56。
實施例25．化合物101的製備
Figure 111114270-A0202-12-0123-109
化合物101通過與化合物100及化合物71至化合物74的合成相似的方法合成。EI-MS m/z：[M+H]+1036.75，1/2[M+H]+519.16。
實施例26．化合物105的製備
Figure 111114270-A0202-12-0124-110
化合物102的製備
在二氯甲烷(40mL)中溶解2-(甲氨基)乙醇(1g，13.3mmol)後，添加二碳酸二叔丁酯(3.0mL，13.3mmol)並在常溫、氮氣氣氛下攪拌反應溶液1小時。用鹽水洗滌反應溶液並用無水硫酸鈉進行乾燥後，經過減壓濃縮，得到化合物102(2.29g，98%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 3.75(q，2H)，3.40(t，2H)，2.92(s，3H)，1.46(s，9H)。
化合物103的製備
在甲苯(10mL)中溶解偶氮二甲酸二乙酯(40%甲苯溶液，3.92mmol)和化合物102(629mg，3.59mmol)後，在常溫的氮氣氣氛下添加三苯基後汀(1.03g，3.92mmol)和2-甲基-5-硝基苯酚(500mg，3.26mmol)。在常溫下攪拌18小時後，添加蒸餾水(50mL)並用乙酸乙酯(50mL)提取，隨後，用無水硫酸鈉乾燥有機層。過濾後，經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物103(780mg， 77%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.78(d，1H)，7.64(s，1H)，7.27(s，1H)，4.15-4.13(m，2H)，3.69-3.65(m，2H)，3.02(d，3H)，2.30(s，3H)，1.46(s，9H)。
化合物104的製備
化合物104通過化合物103至化合物87的合成相似的方法合成。EI-MS m/z：[M+H]+580.6。
化合物105的製備
在二氯甲烷(4mL)中溶解化合物104(145mg，0.455mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液3小時並濃縮，隨後，通過HPLC純化，得到化合物105(150mg，56%)。EI-MS m/z：[M+H]+480.4。
實施例27．化合物109的製備
Figure 111114270-A0202-12-0125-111
Figure 111114270-A0202-12-0126-112
化合物106的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物39(150mg，0.18mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加雙(五氟苯基)碳酸酯(78mg，0.19mmol)和吡啶(0.019mL、0.235mmol)。在常溫下攪拌反應溶液3小時後，經過濃縮，得到化合物106(180mg)。EI-MS m/z：[M+H]+1042.1。
化合物107的製備
在二甲基甲醯胺(2mL)中溶解化合物106(175mg，0.168mmol)和化合物105(100mg，0.168mmol)後，添加N，N’-二異丙基乙胺(0.07mL，0.50mmol)並在常溫下攪拌2小時。減壓濃縮反應溶液並用乙酸乙酯(50mL)稀釋後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物107(181mg，80%)。EI-MS m/z：[M+H]+1337.0。
化合物108的製備
在2-丙醇(2mL)和四氫呋喃(2mL)中溶解化合物107(181mg，0.13mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(2mL)中的氫氧化鋰(23mg，0.54mmol)水溶液和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.13mL，0.13mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，經過濃縮，得到化合物108(crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1196.8。
化合物109的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解上述中得到的化合物108(crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮，隨後，通過HPLC純化，得到化合物109(70.4mg)。EI-MS m/z：[M+H]+996.7。
實施例28．化合物117的製備
Figure 111114270-A0202-12-0127-113
化合物110的製備
在0℃、氮氣氣氛下，在磷醯氯(15mL)中溶解2-甲基-6-氧代-1H-吡啶-3-羧酸乙酯(1.48g，8.17mmol)。將反應溫度升高至100℃並在氮氣氣氛下攪拌2小時。將其冷卻至0℃後，緩慢滴加冰水(50mL)。隨後，使用氨水溶液調節pH至7並過濾，得到化合物110(1.52g，93%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.16(d，1H)，7.23(d，1H)，4.38(q，2H)，2.82(s，3H)，1.40(t，3H).EI-MS m/z：[M+H]+200.25。
化合物111的製備
在苯(20mL)中溶解化合物110(1.52g，7.61mmol)後，在氮氣氣氛下依次添加N-溴代琥珀醯亞胺(NBS，2.17g，12.18mmol)和偶氮二異丁腈(AIBN，1.62g，9.90mmol)並加熱回流的同時攪拌17小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋 反應溶液後，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)、蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物111(1.18g，56%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.24(d，1H)，7.35(d，1H)，4.96(s，2H)，4.43(q，2H)，1.44(t，3H)。
化合物112的製備
在二甲基甲醯胺(20mL)中溶解化合物111(1.18g，4.24mmol)和3-氨基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽(836mg，5.08mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加N，N’-二異丙基乙胺(2.2mL，12.71mmol)並在80℃的溫度條件下攪拌16小時。隨後，對經過減壓濃縮並用二氯甲烷(100mL)稀釋後生成的固體進行過濾，得到化合物112(970mg，82%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.03(s，1H)，8.20(d，2H)，7.68(d，1H)，5.19-5.15(m，1H)，4.57-4.36(m，2H)，2.92-2.87(m，1H)，2.58-2.56(m，1H)，2.47-2.33(m，1H)，2.05-1.99(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+280.32。
化合物113的製備
在二甲基甲醯胺(10mL)中溶解化合物112(970mg，3.47mmol)後，在氮氣氣氛下添加氰化鋅(Zn(CN)2，2.03g，17.34mmol)。用氮氣鼓泡20分鐘後，添加四(三苯基膦)鈀(0)(801mg，0.69mmol)。在120℃的溫度條件下，攪拌反應溶液17小時。將反應溶液冷卻至常溫並減壓濃縮後，針對用二氯甲烷(5mL)和乙醚(20mL)稀釋後生成的固體進行過濾，得到化合物113(603mg，82%)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.06(s，1H)，8.42(d，2H)，8.21(d，1H)，5.24-5.19(m，1H)，4.66-4.45(m，2H)，2.96-2.87(m，1H)， 2.59-2.56(m，1H)，2.46-2.40(m，1H)，2.06-2.02(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+271.35。
化合物114的製備
在二甲基甲醯胺(15mL)和甲醇(5mL)中溶解化合物113(603mg，2.23mmol)後，依次添加雷尼鎳(Raney Ni，2g)和二碳酸二叔丁酯(0.61mL，2.67mmol)並在常溫、氫氣氛下攪拌反應溶液48小時。用矽藻土過濾反應溶液後，經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物114(209mg，25%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.00(s，1H)，8.13(d，1H)，7.57(t，1H)，7.41(d，1H)5.19-5.14(m，1H)，4.45-4.29(m，4H)，2.95-2.87(m，1H)，2.61-2.58(m，1H)，2.47-2.40(m，1H)，2.03-1.98(m，1H)，1.40(s，9H).EI-MS m/z：[M+H]+375.43。
化合物115的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物114(209mg，0.55mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並經過減壓濃縮，得到化合物115(210mg crude)。EI-MS m/z：[M+H]+275.40。
化合物116的製備
在二氯甲烷(5mL)中溶解化合物2(156mg，0.70mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加雙(五氟苯基)碳酸酯(319mg，0.81mmol)和吡啶(0.09mL，1.08mmol)。在常溫下攪拌反應溶液3小時後，在二甲基甲醯胺(1mL)中溶解添加化合物115(210mg，0.54mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.29mL，1.62mmol)並在常溫下攪拌2小時。隨後，減壓濃縮反應溶液並用乙酸乙酯(50mL)稀釋後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾 水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物116(192mg，67%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.99(s，1H)，8.73(s，1H)，8.39(s，1H)，8.12-8.09(m，1H)，7.48-7.46(m，1H)，7.39(s，1H)，7.12-7.11(m，1H)，6.98-6.96(m，1H)，6.74-6.72(m，1H)，5.17-5.14(m，1H)，4.49-4.30(m，4H)，3.01-2.86(m，1H)，2.71-2.56(m，1H)，2.33-2.31(m，1H)2.08-1.96(m，4H)，1.43(s，9H).EI-MS m/z：[M+H]+523.55。
化合物117的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物116(17mg，0.03mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並經過減壓濃縮，得到化合物117(12mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.01(s，1H)，8.83(s，1H)，8.13(d，1H)，7.48(d，1H)，7.42(br，1H)，7.04(d，1H)，6.93-6.85(m，2H)，5.20-5.15(m，1H)，4.52-4.32(m，4H)，2.97-2.88(m，1H)，2.67-2.59(m，1H)，2.45-2.42(m，1H)，2.13(s，3H)，2.04-2.01(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+423.49。
實施例29．化合物120的製備
Figure 111114270-A0202-12-0130-114
Figure 111114270-A0202-12-0131-115
化合物118的製備
在二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物117(76mg，0.14mmol)和化合物71(146mg，0.16mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加1-羥基-7-氮雜苯并三唑(9.5mg，0.07mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.08mL，0.42mmol)並在常溫下攪拌3小時。用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液後，依次用飽和氯化銨水溶液(50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)及蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物118(154mg，92%)。EI-MS m/z：[M+H]+1179.76。
化合物119的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物118(154mg，0.13mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1.5mL)中的氫氧化鋰(27mg，0.39mmol)水溶液和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.12mL，0.13mmol)並在- 10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，經過濃縮，得到化合物119(130mg crude)。EI-MS m/z：[M+H]+1039.71。
化合物120的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解化合物119(130mg crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(1mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮後，通過HPLC純化，得到化合物120(56mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 11.01(s，1H)，8.88(s，1H)，8.76(s，1H)，8.31(t，1H)，8.31(d，1H)，7.92 (d，1H)，7.61-7.45(m，3H)，7.27(d，1H)，7.15(d，1H)，7.00(d，1H)，6.78(t，1H)，5.19-5.10(m，4H)，4.53-4.05(m，4H)，3.98-3.97(m，2H)，3.72-3.63(m，2H)，3.50-3.36(m，8H)，2.97-2.87(m，1H)，2.67-2.58(m，1H)，2.49-2.44(m，1H)，2.04(s，3H)，2.04-1.90(m，1H).EI-MS m/z：[M+H]+939.66。
實施例30．化合物122的製備
Figure 111114270-A0202-12-0132-116
化合物121的製備
在無水二甲基甲醯胺(10mL)中溶解甲基2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)酸乙酯(573mg，3.23mmol)和2-(叔丁氧基羧基氨基)氧基-2-甲基-丙酸(779mg，3.56mmol)後，在氮氣氣氛下添加O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基硫尿六氟磷酸鹽(HBTU，1.35g，3.56mmol)。在常溫下攪拌反應溶液5小時。隨後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液並用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物121(510mg，42%)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 4.13(s，1H)，3.64(s，3H)，3.45-3.20(m，6H)，1.49(q，2H)，1.42(s，3H)，1.39(s，9H)，1.30(s，3H)。
化合物122的製備
在甲醇(1mL)和四氫呋喃(3mL)中溶解化合物121(150mg，0.40mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下添加溶解在蒸餾水(1mL)的氫氧化鈉(24mg，0.60mmol)水溶液並在常溫下攪拌3小時。用1N鹽酸水溶液調節pH至4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物122(135mg，92%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 9.38(brs、1H)、4.01(s、1H)、3.62-3.48(m、4H)、3.42(t、2H)、3.23(t、2H)、1.42(s、3H)、1.39(s、9H)、1.30(s、3H).EI-MS m/z：[M+H]+364.50。
實施例31．化合物125的製備
Figure 111114270-A0202-12-0133-117
化合物124的製備
在無水二甲基甲醯胺(3mL)中溶解化合物123(149mg，0.30mmol)和化合物122(110mg，0.30mmol)後，在氮氣氣氛下添加O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基硫尿六氟磷酸鹽(HBTU，126mg，0.33mmol)和N，N’-二異 丙基乙胺(0.16mL，0.91mmol)。在常溫下攪拌反應溶液7小時。隨後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液並用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌後，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物124(100mg，48%)。EI-MS m/z：[M+H]+806.63。
化合物125的製備
在四氫呋喃(5mL)和水(1mL)中溶解化合物124(100mg，0.30mmol)後，在常溫下添加三苯基膦(78mg，0.30mmol)並在60℃的溫度條件下攪拌7小時。對反應溶液進行減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物125(82mg，88%)。EI-MS m/z：[M+H]+754.62。
實施例32．化合物131的製備
Figure 111114270-A0202-12-0134-118
Figure 111114270-A0202-12-0135-119
化合物127的製備
在無水四氫呋喃(9mL)中溶解化合物126(478mg，0.82mmol)後，在-40℃、氮氣氣氛下添加光氣(15%甲苯溶液，0.089mL，0.82mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.36mL，1.04mmol)並攪拌40分鐘。40分鐘後，在0℃、氮氣氣氛下，在反應溶液中添加溶解於無水四氫呋喃(5mL)的化合物35(200mg，0.68mmol)。隨後，攪拌12小時並對經過減壓濃縮並通過色譜柱純化，得到化合物127(320mg，50%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.52(brs，1H)，7.42-7.30(m，6H)，7.15-7.02(m，3H)，6.02-5.90(m，1H)，5.40-5.24(m，5H)，5.20-5.10(m，2H)，5.06-4.92(m，1H)，4.72-4.60(m，2H)，4.20-4.16(m，1H)，3.71(s，3H)，2.12-1.96(m，12H)，1.80-1.62(m，3H)，1.44-1.28(m，3H)，0.92-1.26(m，2H)。
化合物128的製備
在無水二甲基甲醯胺(4mL)中溶解化合物127(140mg，0.16mmol)後，在0℃、氮氣氣氛下依次添加四(三苯基膦)鈀(0)(9mg，0.008mmol)和吡咯烷(0.04mL，0.48mmol)，隨後，將溫度升高至常溫並攪拌5小時。用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液後，用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌並用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物128(70mg，55%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 7.55(brs，1H)，7.46-7.30(m，5H)，8.10-7.04(m，1H)，6.88-6.96(m，1H)，6.56-6.50(m，1H)，6.38(s，1H)，5.38-5.24(m，5H)，5.18-5.08(m，1H)，5.04-4.92(m，2H)，4.18-4.14(m，1H)，3.72(s，3H)，3.53(s，2H)，2.08-2.00(m，9H)，1.96-1.92(m，2H)，1.78-1.62(m，3H)，1.36-1.24(s，2H)，1.10-0.92(m，2H)，EI-MS m/z：[M+H]+805.56。
化合物129的製備
在無水四氫呋喃(9mL)中溶解化合物128(70mg，0.087mmol)後，在-45℃、氮氣氣氛下依次添加光氣(15%甲苯溶液，0.009mL，0.087mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.046mL，0.26mmol)並攪拌30分鐘。30分鐘後，在-45℃的溫度條件下，在反應溶液中添加溶解於無水四氫呋喃(5mL)的化合物8(36mg，0.096mmol)。將溫度緩慢升高至常溫並攪拌反應溶液5小時。隨後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液並用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌，並且，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物129(84mg，87%)。EI-MS m/z：[M+H]+1104.83。
化合物130的製備
在甲醇(3mL)和乙酸乙酯(2mL)中溶解化合物129(84mg，0.087mmol)後，添加鈀/木炭(5%w/w，10mg)。在常溫、氫氣氛下，攪拌反應溶液5小時。隨後，用矽藻土過濾反應溶液並經過濃縮，得到化合物130(60mg，78%)。
化合物131的製備
在無水二甲基甲醯胺(5mL)中溶解化合物130(135mg，0.134mmol)和化合物125(42mg，0.056mmol)後，在氮氣氣氛下添加O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基硫尿六氟磷酸鹽(HBTU，50mg，0.134mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(30uL，0.17mmol)。在常溫下攪拌反應溶液7小時。隨後，用乙酸乙酯(50mL)稀釋反應溶液並用飽和氯化銨水溶液(50mL)和蒸餾水(50mL)洗滌，並且，用無水硫酸鈉進行乾燥。過濾後，經過減壓濃縮並通過柱色譜純化，得到化合物131(58mg，38%)。EI-MS m/z：[M+2H]+2747.39，1/2[M+H]+1374.09。
實施例33．化合物133的製備
Figure 111114270-A0202-12-0138-120
Figure 111114270-A0202-12-0139-121
化合物132的製備
在2-丙醇(1mL)和四氫呋喃(1mL)中溶解化合物131(58mg，0.02mmol)後，在-50℃、氮氣氣氛下依次添加溶解在蒸餾水(1.5mL)中的氫氧化鋰(6.2mg，0.15mmol)水溶液和四甲基氫氧化銨(1.1m水溶液，0.04mL，0.042mmol)並在-10℃的溫度條件下攪拌3小時。用乙酸調節pH至約4~5後，通過冷凍乾燥，得到化合物132(27mg crude)。EI-MS m/z：1/2[M+H]+1234.46。
化合物133的製備
在二氯甲烷(3mL)中溶解上述中得到的化合物132(27mg crude)後，在0℃、氮氣氣氛下添加三氟乙酸(0.5mL)。在常溫下攪拌反應溶液1.5小時並濃縮，隨後，通過HPLC純化，得到化合物133(14mg)。EI-MS m/z：[M+NH4]+2368.37，1/2[M+H]+1184.10。
實施例34．抗體藥物偶聯物(ADC)的製備
ADC通過如下兩個步驟製備，作為類異戊二烯(isoprenoid)共同使用的LCB14-0511、LCB14-0512及LCB14-0606通過韓國公開專利第10-2014-0035393號所記載的方法製備。LCB14-0511、LCB14-0512及LCB14-0606的結構式如下：
Figure 111114270-A0202-12-0140-122
第一步驟：異戊二烯化抗體(prenylated antibody)的製備
在本發明中，抗體的異戊二烯化(prenylation)反應利用了含有24μM抗體、600nM FTase和0.144mM或0.250mM類異戊二烯(LCB14-0511、LCB14-0512或LCB14-0606)的緩衝溶液[50mM Tris鹽酸鹽(Tris-HCl)、5mM氯化鎂(MgCl2)、10μM氯化鋅(ZnCl2)、0.250mM二硫蘇糖醇(DTT)]的反應混合物。結束反應後，利用PBS緩衝液平衡的G25 Sepharose柱(AKTA purifier，GE Healthcare)來對異戊二烯化的抗體進行脫鹽。
第二步驟：藥物-偶聯(drug-conjugation)反應
利用肟鍵反應的ADC通過如下步驟製備，即，通過混合300mM乙酸鈉(NaOAc)緩衝液(pH5.2)、10%二甲基亞碸(DMSO)、24uM異戊二烯化抗體及240uM連接子-藥物來製備反應混合物並在30℃的溫度條件下輕輕攪拌。反應6小時或24小時後，使用G25 Sepharose柱去除過量的低分子化合物並收 集濃縮蛋白質分餾物。代表性地，利用肟鍵反應的ADC相關反應途徑如圖2所示。
利用無銅(Copper-free)點擊(click)鍵合反應的ADC通過如下步驟製備，即，通過混合PBS緩衝液(pH7.4)、1%二甲基亞碸(DMSO)、10uM異戊二烯化抗體及100uM連接子-藥物製備反應混合物並在25℃的溫度條件下反應6小時後，使用G25 Sepharose柱去除過量的低分子化合物並收集濃縮蛋白質分餾物。
使用銅點擊鍵合反應的ADC通過混合20uM異戊二烯化抗體、200uM連接子-藥物、10%二甲基亞碸(DMSO)、1mM五水硫酸銅、2mM(BimC4A)3(Sigma-Aldrich)、10mM抗壞血酸鈉(sodium ascorbate)及10mM氨基胍鹽酸鹽來製備，並在25℃的溫度條件下反應3小時後，用20mM EDTA處理並反應30分鐘。結束反應後，使用G25 Sepharose柱去除過量的低分子化合物並收集濃縮蛋白質分餾物。代表性地，利用點擊鍵合反應的ADC相關反應途徑如圖3所示。
表1
Figure 111114270-A0202-12-0142-123
實施例35．體外(In vitro)細胞毒性評估
以下，測定實施例34中製備的anti-EGFR-ADC和藥物本身對於癌細胞的細胞增殖抑制活性。為此，使用市售的癌細胞株(HCC827(NSCLC，非小細胞肺癌細胞株)，MDA-MB-468(TNBC，三陰性乳腺癌細胞株))。各個癌細胞株以每孔1500個~10000個接種在96孔板中，並培養24小時後，連續稀釋處理ADC和藥物試樣。72小時後，使用SRB測定法(SRB assay)定量活細胞的數量。對於癌細胞的細胞毒性結果如表2所示。
表2
Figure 111114270-A0202-12-0143-124
在抗原過表達的癌細胞株中，ADC1的IC50值分別為1nM(HCC827)、0.7nM(MDA-MB-468)，而藥物本身的化合物10表現850nM(HCC827)、35.3nM(MDA-MB-468)的細胞毒性。以上結果表明，在細胞毒性上，本發明的ADC1比藥物本身優秀約50倍~850倍以上。並且，相比於藥物本身活性非常弱的化合物69、化合物88、化合物91、化合物94、化合物105及化合物117，其ADC的細胞毒性表現出比化合物本身活性優秀數百倍以上的活性。
相比於引入兩分子化合物34的ADC3，引入四分子化合物34的ADC14的細胞毒性表現顯著提高的活性(5.5倍~34倍以上)。
相反，應用了作為對照物質的具有不同支架(scaffold)結構的化合物27的ADC13表現出顯著降低數百nM以上的結果。

Claims (54)

  1. 一種偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述偶聯物由以下通式I表示：
    通式I Ab-[Linker-(B)m]n
    在上述通式中，
    Ab為抗原特異性鍵合部分(moiety)，
    Linker為連接子，
    B為蛋白降解劑(protein degrader)部分，
    m、n各自獨立地為選自1至20的整數。
  2. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述抗原特異性鍵合部分為抗體構建體或抗體樣蛋白。
  3. 如請求項2所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述抗體構建體包含與抗原結合的抗原結合結構域及Fc結構域。
  4. 如請求項2所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述抗體構建體還包含抗原呈遞細胞呈遞的抗原結合的效應(effector)抗原結合結構域。
  5. 如請求項2所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述抗體構建體選自由單克隆抗體(monoclonal antibody)、域抗體(dAb，domain antibody)、單鏈抗體(scAb，single chain antibody)、Fab片段、F(ab’)2片段、單鏈可變抗體(scFv，single chain variable fragment)、scFv-Fc片段、單域重鏈抗體(single domain heavy chain antibody)、單域輕鏈抗體(single domain light chain antibody)、抗體變體(variant antibody)、多聚抗體(multimeric antibody)及雙特異性抗體(bispecific antibody)組成的組。
  6. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述連接子為切割性連接子。
  7. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述連接子選自由蛋白酶切割性連接子(protease cleavable linker)、酸-切割性連接子(acid-cleavable linker)、二硫鍵連接子、自脫落連接子(self-immolative linker)或自穩定連接子(self-stabilizing linker)、丙二酸連接子、馬來醯亞胺苯甲醯連接子、3’-N-醯胺類似物、β-葡萄糖苷酸(β-Glucuronide)連接子及β-半乳糖苷(β-galactoside)連接子組成的組，
    其中，上述蛋白酶切割性連接子包含硫醇反應性馬來醯亞胺基己醯間隔物、纈氨酸-瓜氨酸二肽或p-氨基-苄氧羰基間隔物，
    上述酸切割性連接子為肼連接子或季銨連接子。
  8. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述連接子具有以下通式II的結構：
    Figure 111114270-A0202-13-0002-125
    在上述通式中，
    波浪線表示與Ab連接的位點，*表示與蛋白降解劑連接的位點，
    G為葡萄糖醛酸部分(glucuronic acidmoiety)或
    Figure 111114270-A0202-13-0003-126
    ，上述R3為氫或羧基保護基，上述R4各自獨立地為氫或羥基保護基，
    R1及R2各自獨立地為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基，
    W為-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SONR’-或-PO2NR’-，上述C、S或P與苯環(phenyl ring)直接鍵合，上述R’及R”各自獨立地為氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基的化合物，
    Z獨立地為氫、C1-8烷基、鹵素、氰基或硝基，
    n為0至3的整數，
    L為非支鏈型連接子或支鏈型連接子。
  9. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述G為
    Figure 111114270-A0202-13-0003-127
    ，上述R3為氫或羧基保護基，上述R4各自獨立地為氫或羥基保護基。
  10. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述R1及R2均為氫，
    n為0，
    上述W為-C(O)NR’-，上述C與苯環(phenyl ring)直接鍵合，上述R’各自獨立地為C1-8烷基、C3-8環烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、單-C1-8烷氨基或雙-C1-8烷氨基、C3-20雜芳基或C6-20芳基，NR’與L鍵合。
  11. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述L通過硫醚鍵與Ab共價鍵合，
    上述硫醚鍵包含Ab的半胱氨酸的硫原子。
  12. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述Ab在Ab的C-末端包含能夠被類異戊二烯轉移酶識別的氨基酸基序，
    上述硫醚鍵包含上述氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
  13. 如請求項12所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述氨基酸基序為CYYX序列，C為半胱氨酸，Y為脂肪族氨基酸，X為選自由穀氨醯胺、谷氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丙氨酸及亮氨酸組成的組中的一種以上，
    上述硫醚鍵包含上述氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
  14. 如請求項12所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述氨基酸基序為CYYX序列，Y為選自由丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸及纈氨酸組成的組中的一種，或者，
    上述氨基酸基序為CVIM序列或CVLL序列。
  15. 如請求項12所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述氨基酸基序之前的1至20個氨基酸中的至少一個為甘氨酸。
  16. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述Ab在C-末端包含氨基酸序列GGGGGGGCVIM。
  17. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述L為包含肟的3至50元雜亞烷基，
    上述肟的氧原子位於與W相連的L的側面，
    肟的碳原子位於與Ab相連的L的側面，或者，
    上述肟的碳原子位於與W相連的L的側面，
    肟的氧原子位於與Ab相連的L的側面。
  18. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述L包含肟，一個以上的異戊二烯單元使得肟與Ab共價鍵合。
  19. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述L還包含連接單元，由以下通式VIII或通式IX表示：
    通式VIII -(CH2)r(V(CH2)p)q-
    通式IX -(CH2CH2X)w-
    上述V為單鍵、O-、-S-、-NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-，
    X為-O-、C1-8亞烷基或-NR21-，
    R21至R25各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基或C1-6烷基-C3-20雜芳基，
    r為0至10的整數，
    p為0至10的整數，
    q為1至20的整數，
    w為1至20的整數。
  20. 如請求項19所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述q為1至10的整數，
    r及p各自為1或2，
    V為-O-。
  21. 如請求項19所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述X為-O-，
    w為1至10的整數。
  22. 如請求項19所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述L包含由
    Figure 111114270-A0202-13-0006-128
    或
    Figure 111114270-A0202-13-0006-129
    表示的至少一個聚乙二醇單元。
  23. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述L還包含鍵合單元，由炔基與疊氮化物的反應、醛基或酮基與肼或羥胺的反應形成。
  24. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述L還包含鍵合單元，由以下通式IVa、通式IVb、通式IVc、通式IVd或通式IVe表示：
    Figure 111114270-A0202-13-0006-130
    Figure 111114270-A0202-13-0006-131
    Figure 111114270-A0202-13-0007-132
    Figure 111114270-A0202-13-0007-133
    Figure 111114270-A0202-13-0007-134
    在上述通式中，
    上述L1及L2各自獨立地為單鍵或C1-30亞烷基，
    R11為氫或C1-10烷基。
  25. 如請求項24所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述L1及L2各自獨立地為單鍵或C11亞烷基或C12亞烷基。
  26. 如請求項8所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述類異戊二烯轉移酶為法呢基蛋白轉移酶(FTase)或二牛龍牛兒基轉移酶(GGTase)。
  27. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述連接子包含與Ab共價鍵合的一個以上支鏈型連接子，
    i)各個支鏈型連接子包含通過第一連接子(PL)與Ab共價鍵合的支鏈型單元，
    ii)各個支鏈型連接子包含其中第一蛋白降解劑通過第二連接子(SL)及切割基(CG)與支鏈型單元共價鍵合的第一支鏈(B1)，
    iii)各個支鏈型連接子包含：a)第二蛋白降解劑通過第二連接子(SL)及切割基(CG)與支鏈型單元共價鍵合的第二支鏈(B2)，或者b)聚乙二醇部分(moiety)與支鏈型單元共價鍵合的第二支鏈，
    上述各個切割基被水解以從偶聯物釋放蛋白降解劑。
  28. 如請求項27所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述連接子為含氮的1-100元雜亞烷基，
    上述連接子包含親水氨基酸的2個以上的原子，
    上述氮與親水氨基酸的羰基形成肽鍵。
  29. 如請求項27所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述支鏈型單元為
    Figure 111114270-A0202-13-0008-135
    、
    Figure 111114270-A0202-13-0008-136
    、
    Figure 111114270-A0202-13-0008-137
    或
    Figure 111114270-A0202-13-0008-138
    ，
    上述L2、L3、L4各自獨立地為直接鍵或-CnH2n-，上述n為1至30的整數，
    上述G1、G2、G3各自獨立地為直接鍵、
    Figure 111114270-A0202-13-0009-139
    、
    Figure 111114270-A0202-13-0009-140
    、
    Figure 111114270-A0202-13-0009-141
    或
    Figure 111114270-A0202-13-0009-142
    ，
    上述R30為氫或C1-30烷基，
    上述R40為氫或L5-COOR6，
    上述L5為直接鍵或-Cn’H2n’-，其中，n’為1至10的整數，R6為氫或C1-30烷基。
  30. 如請求項27所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述切割基能夠在靶細胞內切割或能夠釋放一種以上的活性劑。
  31. 如請求項27所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述偶聯物包含Ab，
    包含與Ab共價鍵合的1個、2個、3個或4個以上的支鏈型連接子，
    支鏈型連接子包含1個或2個以上的蛋白降解劑。
  32. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述蛋白降解劑用於誘導靶蛋白降解或靶蛋白的調節。
  33. 如請求項27所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述蛋白降解劑不具備異型雙功能(heterobifunctional)。
  34. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述蛋白降解劑為單價降解劑(monovalent degrader)或分子膠水降解劑(molecular glue degrader)。
  35. 如請求項34所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述單價降解劑僅與靶蛋白結合來誘導靶蛋白降解。
  36. 如請求項34所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述分子膠水降解劑與E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase)及靶蛋白結合來誘導靶蛋白降解，或者，與E3泛素連接酶(E3 ubiquitin ligase)或靶蛋白結合來誘導靶蛋白降解，
    其中，靶蛋白為E3泛素連接酶的天然底物(native substrate)或非天然底物(non-native substrate)。
  37. 如請求項36所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述E3泛素連接酶選自由VHL(vonHippel-Lindau)、cereblon、XIAP、XIAP/cIAP、E3A、MDM2.APC(Anaphase-promotingcomplex)、APC/cdc20、APC/cdh1、CRL(cullinringubiquitinligase)、UBR5(EDD1)、beta-TrCP、SOCS/BCbox/eloBC/CUL5/RING、LNXp80、LNX1、CBX4、CBL、CBLL1、C6orf157、CHFR、DTL、E6-AP、HACE1、HECTD1、HECTD2、HECTD3、HECW1、HECW2、HERC1、HERC2、HERC3、HERC4、HERC5、HUWE1、HYD、ITCH、mahogunin、MARCH-I、MARCH-II、MARCH-III、MARCH-IV、MARCH-VI、MARCH-VII、MARCH-VIII、MARCH-X、MEKK1、MIB1、MIB2、MycBP2、NEDD4、NEDD4L、PELI1、Pirh2、PJA1、PJA2、PPIL2、PRPF19、PIAS1、PIAS2、PIAS3、PIAS4、RANBP2、RFFL、RFWD2、Rictor、RNF4、RNF5、RNF8、RNF19、RNF190、RNF20、RNF34、RNF40、RNF125、RNF128、RNF138、RNF168、RBX1、SMURF1、SMURF2、STUB1、TOPORS、TRIP12、UBE3A、UBE3B、UBE3C、UBE4A、UBE4B、UBOX5、UBR5、WWP1、WWP2、Parkin、A20/TNFAIP3、AMFR/gp78、ARA54、beta- TrCP1/BTRC、SCF/beta-TrCP、BRCA1、CHIP、CHIP/STUB1、E6；E6AP/UBE3A、F-boxprotein15/FBXO15、FBXW7/Cdc4、SCF/FBW7、GRAIL/RNF128、HOIP/RNF31、cIAP-1/HIAP-2、cIAP-2/HIAP-1、cIAP(pan)、ITCH/AIP4、KAP1、MARCH8、MindBomb1/MIB1、MindBomb2/MIB2、MuRF1/TRIM63、NDFIP1、NleL、Parkin、RNF2、RNF4、RNF8、RNF168、RNF43、SART1、Skp2、SCF/Skp2、SHPRH、SIAH1、SIAH2、SMURF1、SMURF2、TOPORS、TRAF-1、TRAF-2、TRAF-3、TRAF-4、TRAF-5、TRAF-6、TRAF-7、TRIM5、TRIM21、TRIM32、TRIM63、UBE3B、UBE3C、UBR1、UBR2、UHRF2、WWP1、WWP2ZNRF1及ZNRF3組成的組。
  38. 如請求項36所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述E3泛素連接酶為小腦蛋白(cereblon)。
  39. 如請求項36所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述E3泛素連接酶的天然底物或非天然底物選自由NKX3.1、β-Catenin、aiolos、Akt1、AuroraA、B7-2、Bim、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、CD147、Cdc20、Cdc25A、CDH1、CHK1、CHK2、c-Jun、CK1-α、Claspin、C-Myc、CRY2、CyclinA、CyclinB、CyclinE、CDK12/CyclinK、Delta、Jagged、Dlg、DR4、DVL1、ELF、ErbB4、Erk、Fbxo45、Foxo1、Foxp3、gp190、GSPT1、GSPT2、H2A,H2AX、HIF-1α、HIF-2α、HIPK2、HistoneH2A、HistoneH2A.X、HistoneH2B、HSF1、HSP70/90、ikaros、IKZF1/3、IL-1β、IL-6、iNOS、IRAK、IRS1IBα、IκBα、JAMP、KAI1、KLFs、LRRK2、Mad2、Mcl-1、MDM2、MED13、MEDL、MEIS2、MHCclassI、MHCclassII、MKK4、MTA1、MyBP-C、MyLC1/2、NEMO、NF-κB、N-Myc、Nrf2、NOTCH、NUMB、p21、p27、p53、p73、P-gp、paxillin、PCNA、PCNP、 PHD1/3、PLK1、Rbm39、Rbm23、RIP2、RhoA、RNF8、Runx1、SALL4、Securin、Skp2、Skp2-CKS1、SGK1、SMAC、Smad2、Smads、SOD1及其變體、TCF/LEF、TNF-α、TopBP1、TP53、TRAF2、TRB3、TRIP、TroponinI、TSC2、UCK1、Wee1、WNK1及WNK4組成的組。
  40. 如請求項36所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述E3泛素連接酶的天然底物或非天然底物為GSPT1或GSPT2。
  41. 如請求項34所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述分子膠水降解劑為由以下通式X1表示的化合物：
    Figure 111114270-A0202-13-0012-143
    在上述通式中，
    Dx1為C(=O)或CH2，
    Dx2為O、N-C≡N或NH，
    a1為0、1、2或3的整數，
    a2為0或1的整數，
    a3為0、1或2的整數，
    A為C、N或0，
    Rxa為氫、鹵素或C1-6烷基，
    Rxb及Rxc各自獨立地為氫、鹵素、C1-10烷基、CF3或Rx10-(Rx11)a-Rx12，
    或者，與Rxb及Rxc結合的部分一起形成C5-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基或C6-10雜芳基，
    其中，
    Rx10為直接鍵、-NH-或-O-，
    Rx11各自獨立地選自由直接鍵、-C(O)-、C1-5亞烷基、C2-5亞烯基、C6-10亞芳基、C6-10雜亞芳基、C3-8環亞烷基或C3-8雜環亞烷基組成的組，
    Rx12為OH、NH2、NH-Rx12’、C6-10芳基、C6-10雜芳基、C3-8環烷基或C3-8雜環烷基，
    其中，Rx12’為C1-5烷基、C2-5烯基、C6-10芳基、C6-10雜芳基、C3-8環烷基或C3-8雜環烷基，
    a為1至5的整數，
    Rxb或Rxc中的一個能夠形成單價部分來與連接子鍵合，
    但是在a2為0的情況下，NH與連接子直接鍵合。
  42. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述Dx1為CH2，Dx2為0。
  43. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述Rxa為氫或鹵素，A為C或N。
  44. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述Rxb及Rxc中的一個以上為C1-10烷基。
  45. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述Rxb及Rxc中的一個以上為Rx10-(Rx11)a-Rx12，
    a為1至3的整數。
  46. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述Rxb及Rxc中的一個以上為Rx10-(Rx11)a-Rx12，
    Rx10及Rx11為直接鍵。
  47. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述Rxb及Rxc中的一個以上為Rx10-(Rx11)a-Rx12，
    上述Rx11各自獨立地選自由直接鍵、-C(O)-、C1-5亞烷基或C2-5亞烯基組成的組，
    a為1至3的整數。
  48. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，
    上述Rxb及Rxc中的一個以上為Rx10-(Rx11)a-Rx12，
    上述Rx12為NH2或包含一個以上N原子的C6-10雜芳基或包含一個以上N原子的C3-8雜環烷基。
  49. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述Rxb及Rxc與Rxb及Rxc的鍵合部分一起形成C4-8雜環烷基或C6-10雜芳基。
  50. 如請求項41所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述分子膠水降解劑為
    Figure 111114270-A0202-13-0014-144
    、
    Figure 111114270-A0202-13-0014-145
    Figure 111114270-A0202-13-0015-146
    Figure 111114270-A0202-13-0015-147
    Figure 111114270-A0202-13-0015-148
    Figure 111114270-A0202-13-0015-149
    Figure 111114270-A0202-13-0015-150
    Figure 111114270-A0202-13-0015-151
    Figure 111114270-A0202-13-0015-152
    Figure 111114270-A0202-13-0016-153
    或
    Figure 111114270-A0202-13-0016-154
  51. 如請求項1所述之偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中，上述[Linker-(B)m]為
    Figure 111114270-A0202-13-0016-155
    Figure 111114270-A0202-13-0016-156
    Figure 111114270-A0202-13-0016-157
    Figure 111114270-A0202-13-0017-158
    Figure 111114270-A0202-13-0017-159
    Figure 111114270-A0202-13-0017-160
    Figure 111114270-A0202-13-0017-161
    Figure 111114270-A0202-13-0017-162
    Figure 111114270-A0202-13-0017-163
    Figure 111114270-A0202-13-0018-164
    Figure 111114270-A0202-13-0018-165
    Figure 111114270-A0202-13-0018-166
    或
    Figure 111114270-A0202-13-0018-167
  52. 一種用於預防或治療過度增殖、癌症及血管新生疾病的藥物組合物，其中，包含請求項1所述之偶聯物作為有效成分。
  53. 如請求項52所述之藥物組合物，其中，還包含藥學有效量的化學治療劑(chemotherapeutic agent)。
  54. 如請求項52所述之藥物組合物，其中，上述癌症選自由肺癌、小細胞肺癌、胃腸道癌、大腸癌、腸癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、胰腺癌、腦癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤及黑色素瘤組成的組中的一種。
TW111114270A 2021-04-14 2022-04-14 蛋白質降解劑偶聯物及其用途 TW202304525A (zh)

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