WO2022215817A1 - 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치, 이를 이용한 액적 크기 제어방법 및 액적 생성 자가진단 장치 - Google Patents

액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치, 이를 이용한 액적 크기 제어방법 및 액적 생성 자가진단 장치 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to an active droplet generating device capable of controlling the size of droplets, a droplet size control method using the same, and a droplet generating self-diagnosis device, and more particularly, the droplet size can be adjusted to a desired size so that the number of droplets can be varied
  • the present invention relates to an active droplet generating device capable of self-diagnosing droplet generation, a droplet size control method, and a self-diagnostic device.
  • PCR polymerase chain reaction
  • agarose gel electrophoresis Compared to the second generation
  • the digital PCR method is evaluated as a very sensitive next-generation PCR detection method because it is possible to detect an absolute quantitative detection of a target gene in real time without a standard material.
  • micro air bubbles that may occur in the microfluidic channel interfere with precise fluid control and flow, thereby reducing the reproducibility of the lab-on-a-chip, which is one of the main reasons that makes automation and commercialization of the lab-on-a-chip difficult.
  • An object of the present invention is to provide a disposable digital PCR active droplet generating device capable of controlling the size of the droplet in a feedback control method.
  • an object of the present invention is to provide a disposable droplet generator at an affordable price without using the existing expensive equipment by manufacturing a low-cost, high-performance, disposable active droplet generator using disposable film chip technology.
  • An object of the present invention is to provide a disposable droplet generating apparatus capable of uniformly generating droplets.
  • Another object of the present invention is to provide a droplet size control method capable of controlling the size of droplets in a feedback control method by measuring the size and number of droplets in real time using a capacitive impedance measurement technique.
  • a PID Proportional-Integral-Derivative
  • a pneumatic flow rate control system enables the detection of droplets of various sizes.
  • the purpose of this is to provide a real-time self-diagnostic device that can control uniformly, optimize the speed and sensitivity of digital PCR genetic analysis through droplet generation number control, and can self-diagnose droplet generation.
  • a sample inlet through which a sample is introduced, an oil inlet through which oil is introduced, a microchannel through which the fluid introduced through the inlets passes, and the fluid passing through the microchannel is discharged.
  • a removable functional polymer film, a droplet measuring electrode that is patterned on the upper surface of the lower plate and measures the size of a droplet through the voltage value of the fluid passing through the microchannel, and the upper and lower plates are combined or separated by vacuum
  • a flow rate sensing electrode for sensing a flow rate of a fluid flowing through the microchannel may be integrally formed on the multifunctional lower plate.
  • the flow rate sensing electrode may be separately formed at the sample inlet, the oil inlet, the second oil inlet, the droplet outlet, and the oil outlet.
  • the flow rate control device includes a microcontroller for controlling the flow rates of the oil and the sample by receiving a feedback of the voltage value measured by the droplet measuring electrode, and the oil and sample supplied to the microchannel by the control from the microcontroller. It may include a pneumatic regulator for adjusting the size of the droplet to a desired size by adjusting the flow rate.
  • a plurality of the pneumatic regulators are installed to be respectively connected to the sample inlet and the oil inlet, and a pneumatic pump and a valve may be connected to the pneumatic regulator to adjust the air pressure of the pneumatic regulator.
  • the disposable microchannel upper plate further includes a second oil inlet, and a droplet outlet and an oil outlet may be separately formed to separate and discharge the fluid passing through the microchannel into droplets and oil.
  • the microchannel is formed at a point where a '+' type droplet generating structure for droplet generation meets the oil and the sample, and the second between the '+' type droplet generating structure and the droplet measuring electrode to widen the gap between the droplets. It may be configured to introduce oil through an oil inlet.
  • the fluid introduced through the inlets is a microchannel Measuring the voltage value of the droplet initially created when flowing through the droplet measuring electrode, (c) feeding back the measured voltage value of the droplet to the microcontroller, (d) the voltage of the droplet fed back to the microcontroller comparing the value with the voltage value of the droplet having a desired size; (e) when the voltage value of the feedback droplet is not the desired value, the microcontroller controls the speed of the fluid flowing through the microchannel to adjust the size of the droplet step, (f) measuring the voltage value of the size-adjusted droplet in real time using a droplet measuring electrode, (g) feeding back the measured voltage value of the droplet to the microcontroller, and measuring the voltage value of the feedback droplet adjusting the size of the droplets by controlling the speed of the fluid flowing through the microchannel
  • the droplet can be adjusted to a desired size by using a pneumatic regulator that adjusts the flow rates of the oil and the sample supplied to the microchannel under the control of the microcontroller.
  • a plurality of the pneumatic regulators are installed to be respectively connected to the sample inlet and the oil inlet, and a pneumatic pump and a valve may be connected to the pneumatic regulator to adjust the air pressure of the pneumatic regulator.
  • a disposable microchannel upper plate having an outlet for discharging the fluid passing through the channel is formed, a multifunctional lower plate that is separated from the disposable microchannel upper plate and can be used permanently, and a lower plate provided on the lower surface of the upper plate to separate the upper plate and the lower plate
  • a plurality of flow rate sensing electrodes integrally formed on the upper surface to measure the flow rates of the sample and oil flowing through the microchannel in real time, and between the upper and lower plates so that the upper and lower plates can be combined or separated by vacuum.
  • a negative pressure forming means for applying a negative pressure
  • a flow rate control device for controlling the flow rates of the oil and the sample by receiving a feedback of the voltage value measured by the droplet measuring electrode to adjust the size of the droplet to a desired size, the flow rate
  • a droplet generating self-diagnostic device capable of diagnosing in real time whether the operation of the droplet generating device is performed normally or abnormally by measuring the flow rates of all inlets and outlets through the sensing electrode is provided.
  • the disposable microchannel upper plate further includes a second oil inlet, and a droplet outlet and an oil outlet are separately formed to separate and discharge the fluid that has passed through the microchannel into droplets and oil, and the flow rate sensing electrode is It is formed separately at the sample inlet, oil inlet, second oil inlet, droplet outlet and oil outlet, so that self-diagnosis is possible through flow velocity sensing and control of all inputs and outputs.
  • the droplet size is quickly and accurately measured using the capacitive impedance technique to control the droplet size by a feedback control method. There is an effect that can be done.
  • a number of integrated flow rate sensing electrodes that can measure the flow rates of bio samples and oil used for droplet generation in real time are formed on the multifunctional lower plate, so that the PID (Proportional-Integral-Derivative) feedback control method together with the pneumatic flow rate control system can uniformly control droplets of various sizes, and it has the effect of optimizing the speed and sensitivity of digital PCR genetic analysis by controlling the number of droplets generated.
  • PID Proportional-Integral-Derivative
  • FIG. 1 is an overall configuration diagram showing an embodiment of an active droplet generating apparatus according to the present invention.
  • FIG. 2 is an exploded perspective view illustrating an embodiment of a droplet generating chip according to the present invention.
  • FIG. 3 is a combined perspective view of the droplet generating chip of FIG. 2 .
  • FIG. 4 is a plan view of the droplet generating chip of FIG. 3 .
  • FIG. 5 is a conceptual diagram of a capacitive impedance-based droplet size measurement technique showing a detection signal output according to a droplet position in the present invention.
  • FIG. 6 is a conceptual diagram of a digital PCR active droplet generating chip self-diagnosis in the present invention.
  • FIG. 7 is a diagram showing the relationship between genetic analysis speed and sensitivity through the variable number of droplets according to the present invention.
  • FIG. 8 is an exploded perspective view illustrating another embodiment of a droplet generating chip according to the present invention.
  • FIG. 1 is an overall configuration diagram illustrating an embodiment of an active droplet generating apparatus according to the present invention
  • FIG. 2 is an exploded perspective view illustrating an embodiment of a droplet generating chip according to the present invention
  • FIG. 3 is FIG. It is a combined perspective view of the droplet generating chip of
  • the active droplet generating device of the present invention is largely a disposable microchannel upper plate 200, a multifunctional lower plate 100, a functional polymer film 300, a droplet measuring electrode 110, and negative pressure forming. means 240 and a flow rate control device.
  • the disposable microchannel upper plate 200 and the multifunctional lower plate 100 of the present invention are separately configured, and the functional polymer film 300 is attached to the lower surface of the disposable microchannel upper plate 200 so that the fluid and the electrode flowing through the microchannel are separated.
  • the functional polymer film 300 is attached to the lower surface of the disposable microchannel upper plate 200 so that the fluid and the electrode flowing through the microchannel are separated.
  • the disposable microchannel upper plate 200 has a sample inlet 210 through which a sample is introduced, an oil inlet 212 through which oil is introduced, a microchannel 220 through which the fluid introduced through the inlets passes, and the microchannel An outlet through which the fluid passing through the channel 220 is discharged is formed.
  • the microchannel 220 in the present invention is formed so that the sample flowing in from the sample inlet 210 and the oil flowing in the oil inlet 212 meet in a direction orthogonal to the merging point. do.
  • a '+' type droplet generating structure for droplet generation is formed at the point where oil and sample meet, and the direction in which the sample flows and the oil joins at the confluence point is orthogonal. Droplets may form.
  • the functional polymer film 300 is attached to the lower surface of the upper plate 200 so that the sample flowing through the microchannel 220 can measure the voltage value at the electrode without directly touching the electrode of the lower plate 100 . do.
  • the film 300 should be sized to include all of the microchannel 220, and be formed as thin as, for example, 4 ⁇ m so that an electric field, magnetic force, etc. can be well transmitted to the sample flowing through the microchannel 220. it is preferable
  • the functional polymer film 300 has a function of trapping foreign substances and air bubbles in the channel to remove the air bubbles in the microchannel in real time.
  • a multifunctional lower plate 100 that can be used permanently is provided separately from the disposable microchannel upper plate 200, and the multifunctional lower plate 100 that can be used permanently has droplet measuring electrodes 110 for measuring the size and number of droplets. ) and a plurality of flow rate sensing electrodes 122 and 124 are integrally formed, and the lower surface of the multifunctional lower plate 100 is provided with a substrate 10 on which a driving circuit is formed.
  • the droplet measuring electrode 110 is patterned on the upper surface of the lower plate 100 and measures the length of the droplet with a voltage value measured by the capacitance value of the fluid passing through the microchannel, and is located below the point where the droplet is formed.
  • the droplet measuring electrode 110 is disposed so that the droplet measuring electrode can measure the length of the droplet of the sample passing through the channel.
  • the length of the droplet can be measured.
  • FIG. 5 is a conceptual diagram of a capacitive impedance-based droplet size measurement technique showing a detection signal output according to a droplet position in the present invention. It indicates signal output, the moment the droplet enters the C1 area (1), the moment the droplet enters the C1 area completely (2), the moment the droplet leaves the C1 area and enters the C2 area (3), the droplet completely enters the C2 area You can see the moment of entry (4), the moment the droplet starts to leave the C2 area (5), and the moment the droplet completely departs from the C2 area (6).
  • the multifunctional lower plate 100 is integrally formed with a flow rate sensing electrode for sensing the flow rate of the fluid flowing through the microchannel.
  • the flow velocity sensing electrodes 122 and 124 are formed to separately measure the flow velocity of the fluid flowing through the sample inlet and the oil inlet.
  • the upper plate 200 and the lower plate 100 include a negative pressure forming means for applying a negative pressure between the upper plate and the lower plate so that the coupling or separation by vacuum, the negative pressure forming means is the lower plate ( 100) and a negative pressure applying hole 240 for adsorbing the lower plate 100 and the upper plate 200 by applying a negative pressure in communication with the surface of the upper plate 200.
  • the negative pressure application hole 240 may be connected to an external device to apply negative pressure, and in the present invention, it is connected to a vacuum pump and a valve to be described later to form a negative pressure.
  • the present invention includes a flow rate control device for adjusting the size of the droplet to a desired size by receiving a feedback of the voltage value measured by the droplet measuring electrode 110 to control the flow rates of the oil and the sample.
  • the flow rate control device includes a microcontroller for controlling the flow rates of the oil and the sample by receiving feedback from the voltage value measured by the droplet measuring electrode 110, and by the control in the microcontroller. and a pneumatic regulator for adjusting the size of the droplets to a desired size by controlling the flow rates of the oil and the sample supplied to the microchannel 220 .
  • the pneumatic regulator is installed in plurality to be connected to the sample inlet 210 and the oil inlet 212 and 214, respectively, and adjusts the air pressures P1 and P2 in each pneumatic regulator to control the sample inlet 210. and control the flow rates of the oil and the sample sent to the oil inlets 212 and 214 .
  • a pneumatic pump and a valve may be connected to the pneumatic regulator to adjust the air pressures P1 and P2 of the pneumatic regulator.
  • the microcontroller is connected to a pneumatic regulator for discharging oil discharged through the oil outlet 232 after flowing through the microchannel 220 to control it, and the pneumatic regulator is connected to a vacuum pump and a valve to supply oil can be ejected.
  • FIG. 8 is an exploded perspective view illustrating another embodiment of the droplet generating chip according to the present invention.
  • two oil inlets through which oil is introduced are formed so that the second oil is separate from the oil inlet 212.
  • An inlet 214 is provided, and a droplet outlet 234 and an oil outlet 232 are separately formed to separate and discharge the fluid that has passed through the microchannel 220 into droplets and oil.
  • the microchannel 220 is at the point where the sample flowing in from the sample inlet 210 and the oil flowing in from the oil inlet 212 and the second oil inlet 214 meet. It is formed so as to meet in an orthogonal direction.
  • a '+' type droplet generating structure for droplet generation is formed at the point where oil and sample meet, and the direction in which the sample flows and the oil joins at the confluence point is orthogonal. Droplets may form.
  • oil is introduced through the second oil inlet 214 between the '+'-type droplet generating structure and the droplet measuring electrode 110 to widen the gap between the droplets so that they are joined.
  • the multifunctional lower plate 100 has a droplet measuring electrode 110 for measuring the size and number of droplets and a plurality of flow rate sensing electrodes 120, 122, 124, 132, and 134 are integrally formed, ,
  • the flow rate sensing electrodes 120, 122, 124, 132, and 134 are formed to separately measure the flow rates of the fluid flowing through the sample inlet, oil inlet, second oil inlet, droplet outlet, and oil outlet.
  • a method of controlling the size of a droplet using the active droplet generating apparatus of the present invention configured as described above is as follows.
  • each sample and oil are introduced into the sample inlet 210 and the oil inlet 212 to form droplets.
  • the voltage value of the first droplet is measured using the droplet measuring electrode 110 .
  • the measured voltage value of the droplet is fed back to the microcontroller, and the voltage value of the droplet fed back to the microcontroller is compared with the voltage value of the droplet having a desired size.
  • the microcontroller adjusts the size of the droplet by controlling the speed of the fluid flowing through the microchannel using a pneumatic regulator.
  • the voltage value of the size-adjusted droplet is measured in real time using the droplet measuring electrode 110 .
  • the measured voltage value of the droplet is fed back to the microcontroller, and the size of the droplet is adjusted by controlling the speed of the fluid flowing through the microchannel in the microcontroller until the desired droplet size comes out through the feedback voltage value of the droplet. .
  • the sample is maintained until the desired number of droplets is formed, and the desired number of droplets of the desired size is obtained.
  • the size of the droplet can be controlled and a desired number of droplets can be obtained.
  • the voltage value of the droplet is first measured. Since the voltage value varies according to the volume of the droplet, the voltage value measured for each size of the droplet is determined.
  • This measured voltage value is fed back to the microcontroller.
  • the voltage is not equal to 1nl, if the pneumatic pressure is adjusted using a pneumatic regulator, the flow of oil or sample is changed, thereby adjusting the size of the droplet to the desired size.
  • FIG. 7 is a view showing the relationship between genetic analysis speed and sensitivity through variable number of droplets according to the present invention.
  • the flow rate sensing electrodes 120, 122, 124, 132, and 134 separately measure the flow rates of the fluid flowing through the sample inlet, oil inlet, second oil inlet, droplet outlet, and oil outlet.
  • the flow rate sensing electrodes 120, 122, 124, 132, and 134 separately measure the flow rates of the fluid flowing through the sample inlet, oil inlet, second oil inlet, droplet outlet, and oil outlet.
  • FIG. 6 is a conceptual diagram of the digital PCR active droplet generation chip self-diagnosis in the present invention, and the flow rate sensing electrodes 120, 122, and 124 respectively installed at the sample inlet, oil inlet, second oil inlet, droplet outlet and oil outlet. ) (132, 134) through the inflow amount and the exhaust amount can be measured, respectively.
  • the droplet size can be uniformly and actively controlled.

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Abstract

본 발명은 액적 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치, 이를 이용한 액적 크기 제어방법 및 액적 생성 자가진단 장치에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 정전용량 임피던스 기법으로 액적 크기를 빠르고 정확하게 측정하여 피드백 제어방식으로 액적을 원하는 크기로 조절할 수 있어 액적 개수를 가변할 수 있으면서도 액적 생성에 대한 자가진단이 가능한 효과를 갖는다.

Description

액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치, 이를 이용한 액적 크기 제어방법 및 액적 생성 자가진단 장치
본 발명은 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치, 이를 이용한 액적 크기 제어방법 및 액적 생성 자가진단 장치에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 액적의 크기를 원하는 크기로 조절할 수 있어서 액적 개수를 가변할 수 있으면서도 액적 생성에 대한 자가진단이 가능한 능동형 액적 생성장치, 액적 크기 제어방법 및 자가진단 장치에 관한 것이다.
중합효소 연쇄반응(PCR)과 agarose gel 전기영동을 이용해 목표 유전자의 존재를 확인하는 기존의 PCR 방법(1세대), 형광물질을 이용하여 목표 유전자의 증폭을 실시간 확인할 수 있는 real-time PCR 방법(2세대)과 비교하여 디지털 PCR 방법은 표준물질 없이도 실시간으로 목표 유전자의 절대 정량 검출이 가능하여 매우 민감도가 높은 차세대 PCR 검출 방식으로 평가되고 있다.
디지털 PCR의 구현을 위한 상용화된 장비를 판매하는 회사는 전 세계 5개 회사에 불과하며, 이들 회사의 디지털 PCR 구현 방식은 크게 칩과 open-array 평판을 사용하는 미세 격벽 형태와 emulsion PCR을 위한 액적(droplet) 형태 등 2가지로 구분된다.
그러나, 현재 상용화된 디지털 PCR 기술의 문제점은 고가의 장비(2-5억원)와 소모칩(3-100만원)으로 인해 일반 대학연구실이나 공공연구 시설로의 도입이 제한적이고, 수동식 액적 생성으로 인해 생성된 액적 개수의 모니터링이 불가능한 단점이 있었다.
이와 같은 수동식 액적 생성방식의 경우 채널 내 공기 방울이나 환경변화에 따른 액적 크기의 불균일로 인한 실험 결과의 정확도가 저하되고, 수동식 액적 생성 시 작동의 이상 유무를 판단할 수 있는 자가진단이 불가능한 문제점이 있었다.
또한, 능동식 액적 생성을 위해 고가의 유속센서를 반복 사용할 경우 바이오 시료 간 오염이 발생하는 문제점이 있다. 이러한 문제점은 미세유체 기반의 디지털 PCR 기술뿐만 아니라 대부분의 고성능 랩온어칩(Lab-on-a-Chip)에도 해당하는데, 즉, 랩온어칩은 재사용 시 바이오 시료 간의 오염으로 인해 분석 결과의 오류가 발생할 수 있으므로 반드시 일회용으로 개발 및 사용되어야 한다.
그러나 많은 경우 랩온어칩은 다양하고 정밀한 성능을 구현하기 위해 복잡한 기능들을 요구하게 되며, 이로 인해 제작과정이 복잡하여 칩의 제작비용이 상승하게 됨으로써, 이는 필수적으로 일회용으로 사용되어야 하는 랩온어칩의 상용화에 큰 걸림돌이 된다.
또한, 미세유체 채널 내에 발생할 수 있는 미세 공기 방울은 정밀한 유체 제어 및 흐름을 방해하여 랩온어칩의 재현성을 떨어뜨리며, 이는 랩온어칩의 자동화 및 상용화를 어렵게 하는 주요 원인 중 하나이다.
현재 세계적으로 이러한 기존의 수동식 액적 생성칩(랩온어칩)이 가지는 문제를 해결하여 미세유체칩 사용의 경제적 부담을 줄이고 바이오 시료 간의 오염을 근본적으로 차단하려는 기술개발이 이루어지고 있으나, 아직은 기술적으로 초기 단계 수준으로서, 본 출원인은 최근 일회용 마이크로채널 상판과 영구사용 가능한 다기능성 하판을 제작하고 진공 결합(또는 분리)하여 사용할 수 있는 일회용 필름칩 기술을 개발(국내 특허등록: 10-1852719, 미국 특허출원: 16/603,013)하였으며, 이를 이용하여 일회용 디지털 PCR 능동 액적 생성장치를 간편하고 저렴하게 제작하고자 본 발명을 제안하게 되었다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출한 것으로서, 일회용 마이크로채널 상판과 영구사용 가능한 다기능성 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리될 수 있으면서도 정전용량 임피던스 기법으로 액적 크기를 빠르고 정확하게 측정하여 피드백 제어방식으로 액적의 크기를 제어할 수 있는 일회용 디지털 PCR 능동형 액적 생성장치를 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 일회용 필름칩 기술을 이용한 저가형 고성능 일회용 능동 액적 생성장치를 제작하여 기존의 고가의 장비를 사용하지 않고 부담 없는 가격의 일회용 액적 생성장치를 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 일회용 필름칩 제작기술과 바이오 시료와 오일의 유전율 차이를 이용하여 액적의 크기를 정확하고 빠르게 측정할 수 있는 정전용량 임피던스 측정기술을 개발하고, 이를 기반으로 오일의 유속을 제어함으로써 다양한 크기의 균일한 액적 생성을 할 수 있는 일회용 액적 생성장치를 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 정전용량 임피던스 측정기술을 이용한 실시간 액적 크기 및 개수를 측정하여 피드백 제어방식으로 액적의 크기를 제어할 수 있는 액적 크기 제어방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
아울러, 액적 생성에 사용되는 바이오 시료와 오일의 유속을 실시간으로 측정할 수 있는 일체형 유속 감지전극을 이용하여 공압식 유속제어시스템과 함께 PID(Proportional-Integral-Derivative) 피드백 제어방식으로 다양한 크기의 액적을 균일하게 제어할 수 있으며, 액적 생성개수 제어를 통해 디지털 PCR 유전분석 속도와 민감도를 최적화하고 액적 생성에 대한 자가진단이 가능한 실시간 자가 진단장치를 제공하는데 그 목적이 있다.
상기와 같은 목적들을 달성하기 위하여 본 발명에서는 시료가 유입되는 시료 유입구와, 오일이 유입되는 오일 유입구와, 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 통과하는 마이크로채널과, 상기 마이크로채널을 통과한 유체가 배출되는 배출구가 형성되는 일회용 마이크로채널 상판과, 상기 일회용 마이크로채널 상판과 별도로 분리되어 영구사용이 가능한 다기능성 하판과, 상기 상판의 하면에 구비되어 상판과 하판을 분리하면서 마이크로채널 내 공기 방울을 실시간으로 제거할 수 있는 기능성 고분자 필름과, 상기 하판의 상면에 패터닝되어 상기 마이크로채널을 통과하는 유체의 전압 값을 통해 액적의 크기를 측정하는 액적 측정전극과, 상기 상판과 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리 가능하도록 상기 상판과 하판 사이에 음압을 인가하기 위한 음압형성수단과, 상기 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 유속제어장치를 포함하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치가 제공된다.
한편, 상기 다기능성 하판에는 상기 마이크로채널을 흐르는 유체의 유속을 감지하기 위한 유속 감지전극이 일체형으로 집적형성될 수 있다.
상기 유속 감지전극은 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구에 각각 별도로 형성될 수 있다.
또한, 상기 유속제어장치는 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하기 위한 마이크로 콘트롤러와, 상기 마이크로 콘트롤러에서의 제어에 의해 상기 마이크로채널에 공급되는 오일과 시료의 유속을 조절하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 공압 레귤레이터를 포함할 수 있다.
여기서, 상기 공압 레귤레이터는 상기 시료 유입구와 오일 유입구에 각각 연결되도록 복수개로 설치되며, 공압 레귤레이터의 공기압을 조절하도록 상기 공압 레귤레이터에는 공압펌프와 밸브가 연결될 수 있다.
본 발명에서 상기 일회용 마이크로채널 상판은 제2 오일 유입구가 더 포함되며, 상기 마이크로채널을 통과한 유체를 액적과 오일로 구분하여 배출하도록 액적 배출구와 오일 배출구가 별도로 형성될 수 있다.
여기서, 상기 마이크로채널은 액적 생성을 위한 '+'형 액적 생성구조가 오일과 시료가 만나는 지점에 형성되고, 액적 간의 간격을 넓히기 위해 '+'형 액적 생성구조와 액적 측정전극 사이에 상기 제2 오일 유입구를 통한 오일을 유입하도록 형성될 수 있다.
한편, 상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 (a) 액적을 만들기 위해 시료 유입구와 오일 유입구에 각각의 시료와 오일을 유입시키는 단계, (b) 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 마이크로채널을 흐를 때 처음 만들어지는 액적의 전압 값을 액적 측정전극을 이용하여 측정하는 단계, (c) 액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하는 단계, (d) 상기 마이크로 콘트롤러에 피드백 받은 액적의 전압 값을 원하는 크기의 액적의 전압 값과 비교하는 단계, (e) 피드백 받은 액적의 전압 값이 원하는 값이 아닐 경우, 상기 마이크로 콘트롤러에서 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절하는 단계, (f) 크기가 조절된 액적의 전압 값을 액적 측정전극을 이용하여 실시간으로 측정하는 단계, (g) 액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하고, 피드백 받은 액적의 전압 값을 통해 원하는 액적의 크기가 나올 때까지 상기 마이크로 콘트롤러에서 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절하는 단계, (h) 원하는 액적의 크기가 나오면 시료를 원하는 개수의 액적을 만들 때까지 유지하는 단계를 포함하는 능동형 액적 생성장치를 이용한 액적 크기 제어방법이 제공된다.
상기 (e) 및 (g) 단계에서, 상기 마이크로 콘트롤러에서의 제어에 의해 상기 마이크로채널에 공급되는 오일과 시료의 유속을 조절하는 공압 레귤레이터를 이용하여 액적을 원하는 크기로 조절할 수 있다.
또한, 상기 (e) 및 (g) 단계에서, 상기 공압 레귤레이터는 상기 시료 유입구와 오일 유입구에 각각 연결되도록 복수개로 설치되며, 공압 레귤레이터의 공기압을 조절하도록 상기 공압 레귤레이터에는 공압펌프와 밸브가 연결될 수 있다.
한편, 상기와 같은 목적을 달성하기 위한 자가진단 장치로서, 본 발명에서는 시료가 유입되는 시료 유입구와, 오일이 유입되는 오일 유입구와, 상기 유입구를 통해 유입된 유체가 통과하는 마이크로채널과, 상기 마이크로채널을 통과한 유체가 배출되는 배출구가 형성되는 일회용 마이크로채널 상판과, 상기 일회용 마이크로채널 상판과 별도로 분리되어 영구사용이 가능한 다기능성 하판과, 상기 상판의 하면에 구비되어 상기 상판과 하판을 분리하면서 마이크로채널 내 공기 방울을 실시간으로 제거할 수 있는 기능성 고분자 필름과, 상기 하판의 상면에 패터닝되어 상기 마이크로채널을 통과하는 유체의 전압 값을 통해 액적의 크기를 측정하는 액적 측정전극과, 상기 하판의 상면에 일체형으로 집적형성되어 상기 마이크로채널을 흐르는 시료와 오일의 유속을 실시간으로 측정할 수 있는 다수개의 유속 감지전극과, 상기 상판과 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리 가능하도록 상기 상판과 하판 사이에 음압을 인가하기 위한 음압형성수단과, 상기 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 유속제어장치를 포함하며, 상기 유속 감지전극을 통한 모든 유입구와 배출구의 유속 측정으로 액적 생성장치의 동작이 정상적으로 이루어지는지 또는 비정상적으로 이루어지는지를 실시간으로 진단할 수 있는 액적 생성 자가진단 장치가 제공된다.
본 발명에서, 상기 일회용 마이크로채널 상판은 제2 오일 유입구가 더 포함되며, 상기 마이크로채널을 통과한 유체를 액적과 오일로 구분하여 배출하도록 액적 배출구와 오일 배출구가 별도로 형성되고, 상기 유속 감지전극은 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구에 각각 별도로 형성되어 모든 입력과 출력의 유속감지 및 제어를 통해 자가진단이 가능하다.
상기와 같은 본 발명에 의하면, 일회용 마이크로채널 상판과 영구사용 가능한 다기능성 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리될 수 있으면서도 정전용량 임피던스 기법으로 액적 크기를 빠르고 정확하게 측정하여 피드백 제어방식으로 액적의 크기를 제어할 수 있는 효과가 있다.
또한, 일회용 필름칩 기술을 이용한 저가형 고성능 일회용 능동 액적 생성장치를 제작하여 기존의 고가의 장비를 사용하지 않고 부담 없는 가격의 일회용 액적 생성장치를 제공할 수 있다.
아울러, 다기능성 하판에는 액적 생성에 사용되는 바이오 시료와 오일의 유속을 실시간으로 측정할 수 있는 일체형 유속 감지전극이 다수 형성되어 있어 공압식 유속제어시스템과 함께 PID(Proportional-Integral-Derivative) 피드백 제어방식으로 다양한 크기의 액적을 균일하게 제어할 수 있으며, 액적 생성개수 제어를 통해 디지털 PCR 유전분석 속도와 민감도를 최적화할 수 있는 효과가 있다.
또한, 정전용량 임피던스 측정기술을 이용하여 실시간으로 액적의 크기뿐만 아니라 생성된 액적의 개수를 측정할 수 있어 PCR 전에 액적 생성과정의 이상 유무를 판단할 수 있고, 유전자 증폭 전 디지털 PCR 유전검사의 신뢰성을 조기 판단할 수 있으며, 이를 통해 사용자는 디지털 PCR의 유전분석 오류를 사전에 인지할 수 있어 시간적, 금전적 피해를 최소화 할 수 있다.
또한, 일체형 유속감지 기술을 이용하여 바이오 시료와 오일의 입력 및 출력 유속을 모두 제어하고 측정함으로써 실시간으로 능동 액적 생성칩 작동의 이상 유무를 자가진단 할 수 있다.
더 나아가, 디지털 생명공학은 경제적 부가가치가 매우 큰 분야로써 포스트 (post) 코로나 시대에 세계 시장규모가 폭발적으로 증가할 것으로 예상되며, 따라서, 본 발명을 통해 저가형 고성능 디지털 PCR 기술개발이 원활히 수행될 경우 국가적인 경제발전과 함께 나노기술기반 첨단의료기기 기술발전에 크게 이바지할 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명에 따른 능동형 액적 생성장치의 일실시예를 도시한 전체 구성도이다.
도 2는 본 발명에 따른 액적 생성칩의 일실시예를 도시한 분해 사시도이다.
도 3은 도 2에서의 액적 생성칩의 결합 사시도이다.
도 4는 도 3에서의 액적 생성칩의 평면도이다.
도 5는 본 발명에서, Droplet 위치에 따른 감지신호 출력모습을 나타내는 정전용량 임피던스 기반 액적 크기 측정기술의 개념도이다.
도 6은 본 발명에서, 디지털 PCR 능동 액적 생성칩 자가진단 개념도이다.
도 7은 본 발명의 액적 개수 가변을 통한 유전분석 속도 및 민감도 관계를 나타내는 도면이다.
도 8은 본 발명에 따른 액적 생성칩의 다른 실시예를 도시한 분해 사시도이다.
도 1은 본 발명에 따른 능동형 액적 생성장치의 일실시예를 도시한 전체 구성도이고, 도 2는 본 발명에 따른 액적 생성칩의 일실시예를 도시한 분해 사시도이며, 도 3은 도 2에서의 액적 생성칩의 결합 사시도이다.
본 발명의 능동형 액적 생성장치는 도 1 내지 도 2에서 보는 바와 같이, 크게 일회용 마이크로채널 상판(200), 다기능성 하판(100), 기능성 고분자 필름(300), 액적 측정전극(110), 음압형성수단(240) 및 유속제어장치를 포함한다.
본 발명의 일회용 마이크로채널 상판(200)과 다기능성 하판(100)은 분리 구성되며, 상기 일회용 마이크로채널 상판(200)의 하면에 기능성 고분자 필름(300)이 부착되어 마이크로채널을 흐르는 유체와 전극이 직접 접촉하는 것을 방지함으로써, 전극이 일체로 형성된 다기능성 하판(100)을 영구사용 가능하게 한다.
상기 일회용 마이크로채널 상판(200)에는 시료가 유입되는 시료 유입구(210)와, 오일이 유입되는 오일 유입구(212)와, 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 통과하는 마이크로채널(220)과, 상기 마이크로채널(220)을 통과한 유체가 배출되는 배출구가 형성된다.
본 발명에서의 마이크로채널(220)은 도 4에서 바와 같이, 시료 유입구(210)에서 유입되는 시료와, 상기 오일 유입구(212)에서 유입되는 오일이 합류되는 지점에서 직교하는 방향으로 만날 수 있도록 형성된다.
즉, 상기 마이크로채널(220)은 액적 생성을 위한 '+'형 액적 생성구조가 오일과 시료가 만나는 지점에 형성되고, 합류지점에서 시료가 흘러가는 방향과 오일이 합류되는 방향이 직교하게 됨으로써, 액적이 형성될 수 있다.
한편, 마이크로채널(220)을 통해 흐르는 시료가 상기 하판(100)의 전극에 직접 닿지 않으면서도 전극에서 전압 값을 측정할 수 있도록 상기 상판(200)의 하면에는 상기 기능성 고분자 필름(300)이 부착된다.
여기서, 상기 필름(300)은 상기 마이크로채널(220)을 모두 포함하는 크기로 이루어져야 하며, 마이크로채널(220)에 흐르는 시료에 전기장, 자기력 등이 잘 전달될 수 있도록 예컨대, 4㎛ 정도로 얇게 형성되는 것이 바람직하다.
또한, 기능성 고분자 필름(300)은 채널 내의 이물질 포획, 공기 방울을 포획하여 마이크로채널 내 공기 방울을 실시간으로 제거할 수 있는 기능을 갖는다.
한편, 상기 일회용 마이크로채널 상판(200)과 별도로 분리되어 영구사용이 가능한 다기능성 하판(100)이 구비되는데, 영구사용 가능한 다기능성 하판(100)에는 액적 크기 및 개수 측정하기 위한 액적 측정전극(110)과 복수개의 유속 감지전극(122)(124)이 일체형으로 집적형성되고, 다기능성 하판(100)의 하면에는 구동회로가 형성된 기판(10)이 구비된다.
상기 액적 측정전극(110)은 상기 하판(100)의 상면에 패터닝되어 상기 마이크로채널을 통과하는 유체의 캐패시턴스 값에 의해 측정된 전압 값으로 액적의 길이를 측정하며, 액적이 형성되는 지점의 하부에 상기 액적 측정전극(110)가 위치하도록 배치되어 채널을 통과하는 시료의 액적 길이를 액적 측정전극이 측정할 수 있다.
본 발명에서는 상기 액적 측정전극(110)을 액적이 지나갈 때 액적의 길이가 길수록 전극에서 측정되는 전압 값이 높아지므로, 상기 액적 측정전극(110)에서 측정되는 전압 값을 통해 액적의 길이를 측정하는 원리로 액적의 길이를 측정할 수 있다.
즉, 채널에 평소에는 전기장이 형성되고 있는데, 오일이 지나가면 유전율이 낮아서 전류 측정이 안되다가 시료가 흐르면 전류가 흐르게 되고 이를 액적 측정전극(110)에서 감지하여 액적의 길이를 측정할 수 있는 것이다.
도 5는 본 발명에서, Droplet 위치에 따른 감지신호 출력모습을 나타내는 정전용량 임피던스 기반 액적 크기 측정기술의 개념도로서, 도 5에서의 그림과 그래프는 전정용량형 전극(capacitive electrode)를 지나면서 변하는 감지신호 출력을 나타내며, Droplet이 C1영역에 돌입하는 순간(1), Droplet이 C1영역에 완전히 들어온 순간(2), Droplet이 C1영역에서 벗어나고 C2영역에 들어가는 순간(3), Droplet이 C2영역에 완전히 들어온 순간(4), Droplet이 C2영역에서 벗어나기 시작한 순간(5), Droplet이 C2영역에서 완전히 벗어난 순간(6)을 알 수 있다.
한편, 상기 다기능성 하판(100)에는 상기 마이크로채널을 흐르는 유체의 유속을 감지하기 위한 유속 감지전극이 일체형으로 집적형성된다.
상기 유속 감지전극(122)(124)은 시료 유입구 및 오일 유입구를 흐르는 유체의 유속을 각각 별도로 측정하도록 형성된다.
한편, 본 발명에서는 상기 상판(200)과 하판(100)이 진공에 의해 결합 또는 분리 가능하도록 상기 상판과 하판 사이에 음압을 인가하기 위한 음압형성수단을 포함하며, 상기 음압형성수단은 상기 하판(100)과 상판(200)의 접하는 면에 연통되어 음압을 인가함으로써, 상기 하판(100)과 상판(200)을 흡착시키는 음압인가홀(240)을 포함한다.
상기 음압인가홀(240)은 외부의 기기에 연결되어 음압을 인가할 수 있으며, 본 발명에서는 후술할 진공펌프와 밸브에 연결되어 음압을 형성하도록 한다.
또한, 본 발명에서는 상기 액적 측정전극(110)에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 유속제어장치를 포함한다.
상기 유속제어장치는 도 1에 도시한 바와 같이, 액적 측정전극(110)에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하기 위한 마이크로 콘트롤러와, 상기 마이크로 콘트롤러에서의 제어에 의해 상기 마이크로채널(220)에 공급되는 오일과 시료의 유속을 조절하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 공압 레귤레이터를 포함한다.
여기서, 상기 공압 레귤레이터는 상기 시료 유입구(210)와 오일 유입구(212)(214)에 각각 연결되도록 복수개로 설치되며, 각각의 공압 레귤레이터에서 공기압(P1)(P2)을 조절하여 시료 유입구(210)와 오일 유입구(212)(214)에 보내지는 오일과 시료의 유속을 조절한다.
상기 공압 레귤레이터의 공기압(P1)(P2)을 조절하도록 상기 공압 레귤레이터에는 공압펌프와 밸브가 연결될 수 있다.
또한, 상기 마이크로 콘트롤러는 마이크로채널(220)을 흐른 후 오일 배출구(232)를 통해 배출되는 오일을 배출하기 위한 공압 레귤레이터가 연결되어 이를 제어하며, 상기 공압 레귤레이터는 진공펌프와 밸브로 연결되어 오일을 배출할 수 있게 된다.
도 8은 본 발명에 따른 액적 생성칩의 다른 실시예를 도시한 분해 사시도로서, 본 발명의 다른 실시예는 오일이 유입되는 오일 유입구가 2개 형성되어 상기 오일 유입구(212)와는 별도로 제2 오일 유입구(214)가 구비되며, 상기 마이크로채널(220)을 통과한 유체를 액적과 오일로 구분하여 배출하도록 액적 배출구(234)와 오일 배출구(232)가 별도로 형성된다.
이와 같은 본 발명에서의 다른 실시예는 마이크로채널(220)이 시료 유입구(210)에서 유입되는 시료와, 상기 오일 유입구(212)와 제2 오일 유입구(214)에서 유입되는 오일이 합류되는 지점에서 직교하는 방향으로 만날 수 있도록 형성된다.
즉, 상기 마이크로채널(220)은 액적 생성을 위한 '+'형 액적 생성구조가 오일과 시료가 만나는 지점에 형성되고, 합류지점에서 시료가 흘러가는 방향과 오일이 합류되는 방향이 직교하게 됨으로써, 액적이 형성될 수 있다.
본 발명에서는 액적 간의 간격을 넓히기 위해 '+'형 액적 생성구조와 액적 측정전극(110) 사이에 상기 제2 오일 유입구(214)를 통한 오일을 유입하여 합류되도록 한다.
이 경우, 다기능성 하판(100)에는 액적 크기 및 개수 측정하기 위한 액적 측정전극(110)과 복수개의 유속 감지전극(120)(122)(124)(132)(134)이 일체형으로 집적형성되어, 상기 유속 감지전극(120)(122)(124)(132)(134)은 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구를 흐르는 유체의 유속을 각각 별도로 측정하도록 형성된다.
이와 같이 구성된 본 발명의 능동형 액적 생성장치를 이용하여 액적의 크기를 제어하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 액적을 만들기 위해 상기 시료 유입구(210)와 오일 유입구(212)에 각각의 시료와 오일을 유입시킨다.
이후, 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 마이크로채널(220)을 흐를 때 처음 만들어지는 액적의 전압 값을 상기 액적 측정전극(110)을 이용하여 측정한다.
액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하여, 상기 마이크로 콘트롤러에 피드백 받은 액적의 전압 값을 원하는 크기의 액적의 전압 값과 비교한다.
피드백 받은 액적의 전압 값이 원하는 값이 아닐 경우, 상기 마이크로 콘트롤러에서 공압 레귤레이터를 이용하여 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절한다.
이후, 크기가 조절된 액적의 전압 값을 액적 측정전극(110)을 이용하여 실시간으로 측정한다.
액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하고, 피드백 받은 액적의 전압 값을 통해 원하는 액적의 크기가 나올 때까지 상기 마이크로 콘트롤러에서 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절한다.
원하는 액적의 크기가 나오면 시료를 원하는 개수의 액적을 만들 때까지 이를 유지하여 원하는 크기의 액적을 원하는 개수만큼 얻는다.
이와 같은 방법에 의해, 액적의 크기를 제어할 수 있으며 원하는 개수만큼의 액적을 얻을 수 있다.
예를 들어, 20ul의 시료로 액적 2만개를 만들고 싶다고 한다면, 1nl의 부피를 가지는 액적을 만들어야 한다.
이를 만들기 위해 먼저 처음에 만들어지는 액적의 voltage 전압 값을 측정하는데, 상기 전압 값은 액적의 부피에 따라 다르므로 액적의 사이즈 별로 측정되는 voltage 값은 정해져 있다.
이렇게 측정된 voltage 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하는 것이다.
만약 1nl에 해당하는 voltage가 아닐 경우 공압 레귤레이터를 이용하여 공압을 조절하면 오일 또는 시료의 흐름이 바뀌고, 이를 통해 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하는 것이다.
그래서 만약 1nl에 해당하는 voltage가 나오게 되면, 이 상태를 20ul의 시료를 2만개의 액적을 만들 때까지 유지하여 액적 2만개를 만든다.
이를 ddPCR 리더기를 이용하여 분석하는데 사용할 수 있다.
액적 2만개와 10만개의 유전분석을 비교했을 때, 10만개로 유전분석한 데이터의 민감도가 더 좋으므로, 액적의 개수를 조절할 필요가 있다.
도 7은 본 발명의 액적 개수 가변을 통한 유전분석 속도 및 민감도 관계를 나타내는 도면으로서, 동일한 시료의 양으로 액적을 만들 경우 액적 크기 감소하면, 액적 개수가 증가하게 되고 액적의 개수가 많을수록 민감도가 증가한다.
또한, 액적 크기 증가하게 되면, 액적 개수가 감소하고, 액적의 개수가 적을수록 민감도가 감소하고 유전분석 속도는 증가하므로 본 발명을 이용하면 다양한 크기의 액적을 균일하게 제어할 수 있으며, 액적 생성개수 제어를 통해 디지털 PCR 유전분석 속도와 민감도를 최적화할 수 있다.
한편, 본 발명의 능동형 액적 생성장치를 이용하면, 액적 생성에 대한 자가진단이 가능하다.
즉, 본 발명은 상기 유속 감지전극(120)(122)(124)(132)(134)은 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구를 흐르는 유체의 유속을 각각 별도로 측정하도록 형성되어 있으므로, 상기 유속 감지전극을 통해 모든 유입구와 배출구의 유속을 측정함으로써, 액적 생성장치의 동작이 정상적으로 이루어지는지 또는 비정상적으로 이루어지는지를 실시간으로 진단할 수 있다.
도 6은 본 발명에서, 디지털 PCR 능동 액적 생성칩 자가진단 개념도로서, 상기 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구에 각각 설치되는 유속 감지전극(120)(122)(124)(132)(134)을 통해 유입되는 양과 배출되는 양을 각각 측정할 수 있다.
여기서, 마이크로채널에 유입되는 양(Qin1+Qin2+Qin3)과 배출되는 양(Qout1+Qout2)이 같으면 정상 작동인 것을 알 수 있고, 마이크로채널에 유입되는 양(Qin1+Qin2+Qin3)과 배출되는 양(Qout1+Qout2)이 다르면 비정상 작동인 것을 알 수 있다.
따라서, 상기 유속 감지전극(122)(124)을 통해 유입되는 양과 배출되는 양을 각각 측정함으로써, 사용 중 이상 유무를 실시간으로 판단할 수 있는 자가진단이 가능하고, 이와 같은 자가진단 기능이 포함되어 액적 크기를 균일하고 능동적으로 제어할 수 있는 것이다.
본 발명의 권리는 위에서 설명된 실시예에 한정되지 않고 청구범위에 기재된 바에 의해 정의되며, 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 청구범위에 기재된 권리범위 내에서 다양한 변형과 개작을 할 수 있다는 것은 자명하다.

Claims (12)

  1. 시료가 유입되는 시료 유입구와, 오일이 유입되는 오일 유입구와, 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 통과하는 마이크로채널과, 상기 마이크로채널을 통과한 유체가 배출되는 배출구가 형성되는 일회용 마이크로채널 상판;
    상기 일회용 마이크로채널 상판과 별도로 분리되어 영구사용이 가능한 다기능성 하판;
    상기 상판의 하면에 구비되어 상판과 하판을 분리하면서 마이크로채널 내 공기 방울을 실시간으로 제거할 수 있는 기능성 고분자 필름;
    상기 하판의 상면에 패터닝되어 상기 마이크로채널을 통과하는 유체의 전압 값을 통해 액적의 크기를 측정하는 액적 측정전극;
    상기 상판과 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리 가능하도록 상기 상판과 하판 사이에 음압을 인가하기 위한 음압형성수단; 및
    상기 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 유속제어장치;
    를 포함하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 유속제어장치는 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하기 위한 마이크로 콘트롤러와,
    상기 마이크로 콘트롤러에서의 제어에 의해 상기 마이크로채널에 공급되는 오일과 시료의 유속을 조절하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 공압 레귤레이터를 포함하는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  3. 청구항 2에 있어서,
    상기 공압 레귤레이터는 상기 시료 유입구와 오일 유입구에 각각 연결되도록 복수개로 설치되며, 공압 레귤레이터의 공기압을 조절하도록 상기 공압 레귤레이터에는 공압펌프와 밸브가 연결되는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 다기능성 하판에는 상기 마이크로채널을 흐르는 유체의 유속을 감지하기 위한 유속 감지전극이 일체형으로 집적형성되는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 유속 감지전극은 시료 유입구 및 오일 유입구에 각각 별도로 형성되는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  6. 청구항 1에 있어서,
    상기 일회용 마이크로채널 상판은 제2 오일 유입구가 더 포함되며,
    상기 마이크로채널을 통과한 유체를 액적과 오일로 구분하여 배출하도록 액적 배출구와 오일 배출구가 별도로 형성되는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 마이크로채널은 액적 생성을 위한 '+'형 액적 생성구조가 오일과 시료가 만나는 지점에 형성되고,
    액적 간의 간격을 넓히기 위해 '+'형 액적 생성구조와 액적 측정전극 사이에 상기 제2 오일 유입구를 통한 오일을 유입하도록 형성되는 것을 특징으로 하는 액적의 크기 제어가 가능한 능동형 액적 생성장치.
  8. (a) 액적을 만들기 위해 시료 유입구와 오일 유입구에 각각의 시료와 오일을 유입시키는 단계;
    (b) 상기 유입구들을 통해 유입된 유체가 마이크로채널을 흐를 때 처음 만들어지는 액적의 전압 값을 액적 측정전극을 이용하여 측정하는 단계;
    (c) 액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하는 단계;
    (d) 상기 마이크로 콘트롤러에 피드백 받은 액적의 전압 값을 원하는 크기의 액적의 전압 값과 비교하는 단계;
    (e) 피드백 받은 액적의 전압 값이 원하는 값이 아닐 경우, 상기 마이크로 콘트롤러에서 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절하는 단계;
    (f) 크기가 조절된 액적의 전압 값을 액적 측정전극을 이용하여 실시간으로 측정하는 단계;
    (g) 액적의 측정된 전압 값을 마이크로 콘트롤러에 피드백하고, 피드백 받은 액적의 전압 값을 통해 원하는 액적의 크기가 나올 때까지 상기 마이크로 콘트롤러에서 상기 마이크로채널에 흐르는 유체의 속도를 조절하여 액적의 크기를 조절하는 단계; 및
    (h) 원하는 액적의 크기가 나오면 시료를 원하는 개수의 액적을 만들 때까지 유지하는 단계;
    를 포함하는 능동형 액적 생성장치를 이용한 액적 크기 제어방법.
  9. 청구항 8에 있어서,
    상기 (e) 및 (g) 단계에서, 상기 마이크로 콘트롤러에서의 제어에 의해 상기 마이크로채널에 공급되는 오일과 시료의 유속을 조절하는 공압 레귤레이터를 이용하여 액적을 원하는 크기로 조절하는 것을 특징으로 하는 능동형 액적 생성장치를 이용한 액적 크기 제어방법.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 (e) 및 (g) 단계에서, 상기 공압 레귤레이터는 상기 시료 유입구와 오일 유입구에 각각 연결되도록 복수개로 설치되며, 공압 레귤레이터의 공기압을 조절하도록 상기 공압 레귤레이터에는 공압펌프와 밸브가 연결되는 것을 특징으로 하는 능동형 액적 생성장치를 이용한 액적 크기 제어방법.
  11. 시료가 유입되는 시료 유입구와, 오일이 유입되는 오일 유입구와, 상기 유입구를 통해 유입된 유체가 통과하는 마이크로채널과, 상기 마이크로채널을 통과한 유체가 배출되는 배출구가 형성되는 일회용 마이크로채널 상판;
    상기 일회용 마이크로채널 상판과 별도로 분리되어 영구사용이 가능한 다기능성 하판;
    상기 상판의 하면에 구비되어 상기 상판과 하판을 분리하면서 마이크로채널 내 공기 방울을 실시간으로 제거할 수 있는 기능성 고분자 필름;
    상기 하판의 상면에 패터닝되어 상기 마이크로채널을 통과하는 유체의 전압 값을 통해 액적의 크기를 측정하는 액적 측정전극;
    상기 하판의 상면에 일체형으로 집적형성되어 상기 마이크로채널을 흐르는 시료와 오일의 유속을 실시간으로 측정할 수 있는 다수개의 유속 감지전극;
    상기 상판과 하판이 진공에 의해 결합 또는 분리 가능하도록 상기 상판과 하판 사이에 음압을 인가하기 위한 음압형성수단; 및
    상기 액적 측정전극에서 측정한 전압 값을 피드백받아 상기 오일과 시료의 유속을 제어하여 액적의 사이즈를 원하는 크기로 조절하기 위한 유속제어장치;
    를 포함하며,
    상기 유속 감지전극을 통한 모든 유입구와 배출구의 유속 측정으로 액적 생성장치의 동작이 정상적으로 이루어지는지 또는 비정상적으로 이루어지는지를 실시간으로 진단할 수 있는 액적 생성 자가진단 장치.
  12. 청구항 11에 있어서,
    상기 일회용 마이크로채널 상판은 제2 오일 유입구가 더 포함되며,
    상기 마이크로채널을 통과한 유체를 액적과 오일로 구분하여 배출하도록 액적 배출구와 오일 배출구가 별도로 형성되고,
    상기 유속 감지전극은 시료 유입구, 오일 유입구, 제2 오일 유입구, 액적 배출구 및 오일 배출구에 각각 별도로 형성되어 모든 입력과 출력의 유속감지 및 제어를 통해 자가진단이 가능한 액적 생성 자가진단 장치.
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