WO2022129651A1 - Moléculas inhibidoras de tirosinasa y composición dermofarmaceútica o cosmética que las incluye - Google Patents

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dermopharmaceutical
double bond
cosmetic composition
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Alfredo MARTÍNEZ GUTIÉRREZ
Alexandra BERTRAN JUNQUÉ
María del Carmen GONZÁLEZ RODRÍGUEZ
Sergio PASCUAL DEL PRADO
Luís Shotze LUIS GARCÍA
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Mesoestetic Pharma Group, S.L
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Definitions

  • the present invention relates to new tyrosinase inhibitor molecules, as well as to a dermopharmaceutical or cosmetic composition that includes at least one of said tyrosinase inhibitor molecules.
  • the invention provides new tyrosinase inhibitor molecules with the following general formula (I): where R 1 and R 2 are selected, independently of each other, from H, HSO 3 or one of their salts with a physiologically acceptable cation and represents a single or double bond, where R 1 and R 2 do not both represent H. which have a high solubility in water compared to other molecules that share the same structure.
  • the invention provides a dermopharmaceutical or cosmetic composition
  • a dermopharmaceutical or cosmetic composition comprising at least one tyrosinase inhibitor molecule of general formula (I) as described above in combination with suitable excipients for its formulation.
  • Hypermelanosis Skin pigmentation disorders consisting of hyperproduction of melanins or hypermelanosis are common. Hypermelanosis appear more frequently in certain periods of life and are usually responsible, among others, for exogenous factors, such as excessive exposure to sunlight. These hypermelanoses they are characterized by the appearance on the skin, particularly in uncovered areas, of dark and colored spots that give it a certain degree of visual heterogeneity; It is usually an aesthetic problem. These spots are caused by melanocytic hypertrophy or by a greater accumulation of melanins in the keratinocytes located in the superficial part of the epidermis.
  • various dysfunctions of melanogenesis due to the effect of exogenous aggressions for example hormonal alterations or aging, cause the appearance of spots of melanic origin, brown, mamon or blackish in color, in the form of melasmas, ephelides, senescence spots, lentigines , etc.
  • melasma is a topical condition that consists of an increase in pigmentation in the form of irregular and asymmetric macules in localized areas of the skin, mainly in areas exposed to the sun. It is an acquired hypermelanosis characterized by asymmetric, brownish, irregular and reticulated macules on sun-exposed areas of the skin, especially on the face.
  • UV chronic ultraviolet
  • tyrosinase In the pigmentation process, the enzyme tyrosinase is key in the synthesis of melanin, and tyrosinase inhibitors are a widely used approach to treat hyperpigmentary conditions (Zolghadri S, et al. A comprehensive review on tyrosinase inhibitors. J Enzyme Inhib Med Chem 2019;34(1):279-309). Thus, since tyrosinase plays a key role in the process of melanin production, inhibitors of this enzyme are often used as skin depigmenting agents.
  • EP 1857109 A2 describes phenylthiourea derivatives as inhibitors of mammalian tyrosinase in acellular extracts of mammalian melanocytes or melanoma cells.
  • EP 2117498 B1 discloses 4-hydroxyphenoxyacetic acid derivatives for skin lightening and/or whitening and/or for pigmentation reduction and/or for hyperpigmentation reduction and/or for melanogenesis inhibition .
  • chalcones have shown promising results, exerting a powerful inhibitory activity on tyrosinase (Kostopoulou I, et al.
  • the objective of the present invention is to find molecules that meet these conditions based on the efficacy of chalcones as depigmenting agents.
  • the present invention provides new tyrosinase inhibitor molecules with the following general formula (I): where R 1 and R 2 are independently selected from H, HSO 3 or one of their salts with a monovalent cation, M ⁇ SO3-, or with any physiologically acceptable cation, and represents a single or double bond, with the proviso that R 1 and R 2 do not both represent H simultaneously, which have a high solubility in water compared to other molecules that share the same structure and, therefore, are useful for use as depigmentants in skin products.
  • R 1 and R 2 are independently selected from H, HSO 3 or one of their salts with a monovalent cation, M ⁇ SO3-, or with any physiologically acceptable cation, and represents a single or double bond, with the proviso that R 1 and R 2 do not both represent H simultaneously, which have a high solubility in water compared to other molecules that share the same structure and, therefore, are useful for use as depigmentants in skin products.
  • R 1 and R 2 are both HSO 3 and is a double bond, according to formula (II):
  • R 1 and R 2 are both M + SO 3 ' and is a single bond, according to formula (IV):
  • M + is a sodium, potassium or triethylammonium cation.
  • R 1 is M + SO 3 - and R 2 is H, it is a double bond, according to formula (V):
  • M is a sodium, potassium or triethylammonium cation.
  • R 1 and R 2 are both M + SO 3 - and is a double bond, according to formula (VI):
  • M is a sodium, potassium or triethylammonium cation.
  • a dermopharmaceutical or cosmetic composition comprising at least one tyrosinase inhibitor molecule of general formula (I) as described above in combination with suitable excipients for its formulation.
  • embodiments of the dermopharmaceutical or cosmetic composition of the invention include the tyrosinase inhibitory molecules of formula (I) or of formulas (II) to (VI), alone or in combination of at least two of them, together with suitable excipients for their formulation.
  • the tyrosinase inhibitor molecule is present in the dermopharmaceutical or cosmetic composition in a concentration of 0.001-25% by weight.
  • the dermopharmaceutical or cosmetic composition of the invention includes suitable excipients for its formulation for administration.
  • excipients can be selected from oily solvents, anhydrous solvents, hydroalcoholic solvents, aqueous solvents, fillers, preservatives, gelling agents, perfumes, surfactants, sunscreens, antioxidants, viscosifiers, emulsifiers, silicones, as well as any of the ingredients used in the field.
  • cosmetic or dermatological in the usual concentrations of use, provided that said excipients do not interfere with the tyrosinase inhibitory activity of the combination described.
  • composition of the invention can be presented in any galenic or cosmetic form of those usually used for application, for example in the form of an aqueous, hydroalcoholic, hydroglycolic or oily solution. It can also be included in oil-in-water or water-in-oil emulsions or multiple emulsions or formulated as a serum, foam or spray.
  • Fig. 1 Graph showing the tyrosinase activity, in percentage, of the molecules of formulas (II) to (VI) at a concentration of 1mM.
  • Fig. 2 Graph showing the percentage decrease in melamine content in samples of human melanoids treated with the molecules of formulas (II) and (III).
  • Tyrosinase inhibition To evaluate the possible inhibition of tyrosinase by these molecules, a computational model of human tyrosinase was initially developed based on known structures of tyrosinases from other organisms, since human tyrosinase has not crystallized and, therefore, is not available. of its actual three-dimensional structure.
  • human meianocytes were cultured in culture medium (#PCS-200-013, ATCC) and L-tyrosine (2 mM) for 3 days. After the stimulation treatment, the cells were trypsinized and used in PBS pH 7.0 with 1% Triton X-100. The cell lysate, which contains tyrosinase, was incubated together with the molecules of the invention at different concentrations (0.1 and 1 mM), L-DOPA and MBTH (Winder AJ and Harris H. New assays for tile tyrosine hydroxylase and dopa oxidase activities of tyrosinase Eur J Biodiem 1991;198(2): 317-26).
  • L-DOPA acts as a substrate for tyrosinase in the enzymatic reaction
  • MBTH is a compound that binds to the hydroquinone formed by the oxidation of L-DOPA, generating a color complex.
  • Each of the conditions used was prepared in triplicate. Finally, the absorbance at 492 nm was monitored using a spectrophotometer every 10 min for 2-5 h.
  • L-tyrosine (2 mM) was added along with the treatment molecules. All conditions were prepared in triplicate. After incubating the cells with the treatments for 3 days, they were trypsinized and lysed in 1M NaOH. The absorbance of cell lysates was measured at 340 nm using a spectrophotometer. The absorbance value is directly proportional to the melanin content.
  • the area of the peak obtained by HPLC of the sample dissolved in water and in DMSO is determined.
  • the results are given in percentage of solubility of the compound dissolved in water between the compound dissolved in DMSO.
  • Table 3 shows the results obtained. It is observed that the reference molecule is completely insoluble in water at a concentration of 50 mg/ml. Molecules (II) and (III) are very soluble at this concentration and molecules of formulas (IV) to (VI) are completely soluble in water at the concentration tested.
  • aqueous tese was extracted twice with 20 ml of ethyl acetate, the combined organic phases were washed with 10 ml of water and concentrated to dryness, to obtain 2.017 g of a solid containing áddo 5-[(E)- 2-(4-hydroxy-3-sulfobenzoyl)-1-ethenii]-2-hydroxybenzenesulfonic acid (86.3% HPLC area).
  • the product obtained was purified on a silica gel column eluting with a gradient 100% didoromethane to didoromethane/methanol 8:2 to obtain 230 mg (yield 27.6%) of áddo 5-[(E)-3-(p- hydroxyphenyl)acryloyl)-2-hydroxybenzenesulfonic acid.
  • the aqueous phase obtained was extracted twice with 500 ml of ethyl acetate, the combined organic phases were washed with 250 ml of water and concentrated to dryness to obtain 60.66 g of a product containing 66% 5-[ (E)-2-(4-hydroxy-3-sulfobenzoyl)-1-ethenyl]-2-hydroxybenzenesulfanic acid. 60.1 g of this product was suspended in 230 ml of water and an equimolecular amount of potassium carbonate was slowly added to obtain a complete solution. 600 ml of 2-propanol was added to obtain a suspension.

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Abstract

La presente invención proporciona moléculas inhibidoras de tirosinasa de fórmula general (I), así como una composición dermofarmacéutica o cosmética que incluye al menos una de dichas moléculas inhibidoras de tirosinasa.

Description

DESCRIPCIÓN
MOLÉCULAS INHIBIDORAS DE TIROSINASA Y COMPOSICIÓN DERMOFARMACEÚTICA O COSMÉTICA QUE LAS INCLUYE
La presente invención se refiere a nuevas moléculas inhibidoras de tirosinasa, así como a una composición dermofarmacéutica o cosmética que incluye al menos una de dichas moléculas inhibidoras de tirosinasa.
Más concretamente, en un primer aspecto, la invención proporciona nuevas moléculas inhibidoras de tirosinasa con la siguiente fórmula general (I):
Figure imgf000002_0001
donde R1 y R2 se seleccionan, independientemente entre sí, de entre H, HSO3 o una de sus sales con un catión fisiológicamente aceptable y representa un enlace simple o doble, donde R1 y R2 no representan ambos H. que presentan una alta solubilidad en agua en comparación con otras moléculas que comparten la misma estructura.
En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición dermofarmacéutica o cosmética que comprende al menos una molécula inhibidora de la tirosinasa de fórmula general (I) tal como se ha descrito anteriormente en combinación con excipientes adecuados para su formulación.
Son frecuentes los trastornos de la pigmentación de la piel consistentes en la hiperproducción de melaninas o hipermelanosis. Las hipermel an osis aparecen con mayor frecuencia en ciertos periodos de la vida y suelen ser responsables, entre otros, factores exógenos, tales como la exposición excesiva a la luz solar. Estas hipermelanosis se caracterizan por !a aparición en la piel, particularmente en zonas descubiertas, de manchas oscuras y coloreadas que le confieren cierto grado de heterogeneidad visual; generalmente se trata de un problema estético. Estas manchas están ocasionadas por una hipertrofia melanocítica o bien por un mayor acumulo de melaninas en los queratinocitos situados en la parte superficial de la epidermis. Igualmente, diversas disfunciones de la melanogénesis debidas ai efecto de agresiones exógenas, por ejemplo alteraciones hormonales o envejecimiento, provocan la aparición de manchas de origen meláníco, de color pardo, mamón o negruzco, en forma de melasmas, efélides, manchas de senescencia, lentigos, etc.
Asi, por ejemplo el melasma es una afección tópica que consiste en un incremento de la pigmentación en forma de máculas irregulares y asimétricas en zonas localizadas de la piel, principalmente en las áreas expuestas al sol. Se trata de una hipermelanosis adquirida caracterizada por máculas asimétricas, de color marrón, irregulares y reticuladas en las áreas de la piel expuestas al sol, especialmente en la cara. Hasta la fecha, la patogenia del melasma no se ha dilucidado por completo; Sin embargo, se ha propuesto que la exposición crónica a los rayos ultravioleta (UV), la estimulación hormonal femenina y los antecedentes genéticos desempeñan un papel en el desarrollo del melasma (O. A. Ogbechie-Godec, N. Elbuluk. Dermatol Ther (Heidelb) 2017, 7(3), 305). El manejo del melasma es un gran desafio, especialmente porque es propenso a recaídas frecuentes (Kwon SH, et al. Melasma: Updates and perspectives. Exp Dermatol. 2019; 28(6): 704-708).
En el proceso de pigmentación, la enzima tirosínasa es clave en la síntesis de melanina, siendo los inhibidores de tirosínasa una aproximación ampliamente utilizada para tratar las afecciones hiperpigmentarias (Zolghadri S, et al. A comprehensive review on tyrosinase inhibitors. J Enzyme Inhib Med Chem. 2019; 34(1): 279-309). Así, dado que la tirosínasa juega un papel clave en el proceso de la producción de melanina, a menudo se utilizan inhibidores de esta enzima como agentes despigmentantes de la piel.
En la EP 1857109 A2, por ejemplo, se describen derivados de feniltiourea como inhibidores de la tirosinasa de mamíferos en extractos acelulares de melanocitos o células de melanoma de mamíferos. La EP 2117498 B1 da a conocer derivados de ácido 4-hidroxifenoxiacético para el aclarado y/o blanqueo de la piel y/o para la reducción de la pigmentación y/o para la reducción de la hiperpigmentación y/o para la inhibición de la melanogénesis. De entre las diferentes familias químicas que actúan sobre esta enzima, las chalconas han mostrado resultados prometedores, ejerciendo una potente actividad inhibidora sobre la tirosinasa (Kostopoulou I, et al. Recent Developments on Tyrosinase Inhibitors based on the Chaicone and Aurone Scaffolds. Current Enzyme Inhibition. 2018; 14: 3-17; Khatib S, et al. Chaicones as potent tyrosinase inhibitors: the importance of a 2,4-substituted resorcinol moiety. Bioorg Med Chem. 2005; 13(2): 433-41).
Sin embargo, estas moléculas conocidas por ser inhibidoras de la tirosinasa son muy insolubles en agua, lo que limita su uso en formulaciones cosméticas.
En este contexto, resultaría esencial encontrar moléculas que sean efectivas a la hora de inhibir la tirosinasa y que a la vez sean solubles en agua y, por tanto, aptas para su uso en productos para la piel.
Así, el objetivo de la presente invención es encontrar moléculas que cumplan estas condiciones en base a la eficacia de las chalconas como despigmentantes.
Partiendo de la subestructura de la familia de las chalconas y la posición de los grupos hidroxilo, dado que se ha demostrado que la localización de estos grupos hidroxilo es clave en la inhibición de la tirosinasa por parte de las chalconas (Nerya O, et al., "Chalcones as potent tyrosinase inhibitors: the effect of hydroxyl positions and numbers". Phytochemistry. 2004; 65(10): 1389-95), la presente invención proporciona nuevas moléculas inhibidoras de tirosinasa con la siguiente fórmula general (I):
Figure imgf000004_0001
donde R1 y R2 se seleccionan, independientemente entre sí, de entre H, HSO3 o una de sus sales con un catión monovalente, M^SO3-, o con cualquier catión fisiológicamente aceptable, y
Figure imgf000004_0002
representa un enlace simple o doble, con la condición de que R1 y R2 no representen ambos H simultáneamente, que presentan una alta solubilidad en agua en comparación con otras moléculas que comparten la misma estructura y, por tanto, son útiles para su uso como despigmentantes en productos para la piel.
En una realización, en la molécula de fórmula general (I), R1 y R2 son ambos HSO3 y es un enlace doble, de acuerdo con la fórmula (II):
Figure imgf000005_0004
En otra realización, en la molécula de fórmula general (I), donde uno de R1 o R2 es HSO3, y el otro de R1 y R2 es H y
Figure imgf000005_0002
es un enlace doble, de acuerdo con las fórmulas (III):
Figure imgf000005_0001
En otra realización, en la molécula de fórmula general (I), R1 y R2 son ambos M+SO3‘ y es un enlace simple, de acuerdo con la fórmula (IV):
Figure imgf000005_0003
Figure imgf000005_0005
En una realización preferente del compuesto de fórmula (IV), M+ es un catión sodio, potasio o trietilamonio.
Igualmente, en otra realización, en la molécula de fórmula general (I), R1 es M+SO3- y R2 es H, es un enlace doble, de acuerdo con la fórmula (V):
Figure imgf000006_0001
En una realización preferente del compuesto de fórmula (V), M es un catión sodio, potasio o trietilamonio.
En una última realización, en la molécula de fórmula general (I), R1 y R2 son ambos M+SO3- y es un enlace doble, de acuerdo con la fórmula (VI):
Figure imgf000006_0002
En una realización preferente del compuesto de fórmula (VI), M es un catión sodio, potasio o trietilamonio.
De acuerdo con el segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición dermofarmacéutica o cosmética que comprende al menos una molécula inhibidora de la tirosínasa de fórmula general (I) tal como se ha descrito anteriormente en combinación con excipientes adecuados para su formulación.
En este contexto, realizaciones de la composición dermofarmacéutica o cosmética de la invención incluyen las moléculas inhibidoras de la tirosinasa de fórmula (I) o de fórmulas (II) a (VI), solas o en combinación de ai menos dos de las mismas, junto con excipientes adecuados para su formulación.
Preferentemente, la molécula inhibidora de la tirosinasa está presente en la composición dermofarmacéutica o cosmética en una concentración de un 0,001 - 25% en peso.
Tal como se ha mencionado anteriormente, la composición dermofarmacéutica o cosmética de la invención incluye excipientes adecuados para su formulación para la administración. Tales excipientes se pueden seleccionar de entre disolventes oleosos, disolventes anhidros, disolventes hidroalcohólicos, disolventes acuosos, cargas, conservantes, gelificantes, perfumes, tensioactivos, filtros solares, antioxidantes, viscosizantes, emulsionantes, siliconas, así como cualquiera de los ingredientes utilizados en el campo cosmético o dermatológico, en las concentraciones habituales de uso, con la condición de que dichos excipientes no interfieran en la actividad inhibidora de la tirosinasa de la combinación descrita.
La composición de la invención puede presentarse en cualquier forma galénica o cosmética de las habitualmente utilizadas para la aplícadón, por ejemplo en forma de solución acuosa, hidroalcohólíca, hidroglicólica u oleosa. También puede induirse en emulsiones de aceite en agua o de agua en aceite o en una emulsión múltiple o formularse como un suero, una espuma o un aerosol.
A continuación la invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos, que son ilustrativos y no limitativos de la misma y en referenda a las figuras adjuntas, en las cuales:
Fig. 1: Gráfico que muestra la actividad tirosinasa, en porcentaje, de las moléculas de fórmulas (II) a (VI) a una concentración 1mM.
Fig. 2: Gráfico que muestra el porcentaje de disminución del contenido de melamina en muestras de melanodtos humanos tratadas con las moléculas de fórmulas (II) y (III).
Eficacia de las moléculas de fórmula general (I)
Inhibición de la tirosinasa Para evaluar la posible inhibición de tirosinasa por parte de estas moléculas, inicialmente se desarrolló un modelo computadonal de tirosinasa humana en base a estructuras conocidas de tirosinasas de otros organismos, dado que la tirosinasa humana no se ha cristalizado y, por tanto, no se dispone de su estructura tridimensional real.
Este modelo computadonal se utilizó con el fin de realizar una valoración virtual de la afinidad de diferentes estructuras de fórmula (I). También se hizo un estudio de solubilidad teórica utilizando el logP en paralelo con un estudio de la viabilidad sintética de cada una de ellas.
En la Tabla 1 siguiente se muestran los resultados obtenidos.
Figure imgf000008_0001
Dado los resultados, se realizó un ensayo in vitro en meianocitos humanos. Para estimular la actividad melanogénica en las células, se trataron éstas con L-tirosina. Este compuesto, además de ser un sustrato de la enzima tirosinasa, clave en la síntesis de melanína, es capaz de activar receptores celulares que activan las vías de señalización reguladoras de la melanogénesis (Slomínskí A, et al. L-tyrosine and L- dihydroxyphenylalanine as hormone-like regulators of melanocyte functions. Pigment Cell Melanoma Res. 2012; 25(1): 14-27). Con esta condición se pretende estimular la melanogénesis en los meianocitos con el objetivo de extraer la tirosinasa y testar el efecto de las moléculas de la invención.
Así, se cultivaron meianocitos humanos en medio de cultivo (#PCS-200-013, ATCC) y L- tirosina (2 mM) durante 3 días. Después del tratamiento de estimulación, las células se tripsínizaron y Usaron en PBS pH 7,0 con 1% Triton X-100. El lisado celular, que contiene tirosinasa, se incubó junto con las moléculas de la invención a diferentes concentraciones (0,1 y 1 mM), L-DOPA y MBTH (Winder AJ y Harris H. New assays for tile tyrosine hydroxylase and dopa oxidase activities of tyrosinase Eur J Biodiem 1991; 198(2): 317-26). La L-DOPA actúa como sustrato de la tirosinasa en la reacción enzimática y el MBTH es un compuesto que se une a la hidroquinona formada por la oxidación de L- DOPA, generando un complejo de color. Cada una de las condiciones usadas se preparó por triplicado. Finalmente, se monitorizó la absorbancia a 492 nm mediante el uso de un espectrofotómetro cada 10 min durante 2 - 5 h.
Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 2 y la figura 1. El control estimulado con L-tirosina se considera 100% para establecer un valor de referenda. En el caso de las muestras tratadas con las diferentes moléculas, la molécula (III) es la que presenta una menor actividad de tirosinasa (82% a 0,1 mM y 44% a 1 mM) seguida de la molécula de fórmula (II) (97% a 0,1 mM y 55% a 1 mM). En presencia de las moléculas de fórmulas (IV) a (VI), la actividad tirosinasa se ve reducida (97%, 82%, 83% y 91% respectivamente, a 1 mM), pero en menor medida en comparación con las dos primeras moléculas.
Tabla 1. Porcentaje de la actividad tirosinasa de las moléculas sintetizadas a dos concentraciones distintas (0,1 y 1 mM)
Figure imgf000009_0001
Inhibición melanina
Con el fin de estudiar la inhibición de las moléculas en melanina, se realizó un ensayo in vitro en melanocitos humanos usando condiciones similares a las descritas en el ensayo de inhibición tirosinasa. Se usa L-tirosina para estimular la actividad melanogénica en las células con el objetivo de extraer la melanina. Aquí se testaron solo las moléculas con mejor inhibición frente a la actividad tirosinasa (fórmulas (II) y (III)). En este experimento la concentración de las moléculas usada es las más alta posible teniendo en cuenta el valor de dtotoxicidad en melanocitos, 1,25 mM para la molécula de fórmula (II) y 0,33 mM para la molécula de fórmula (III). Así, se cultivan melanocitos humanos en medio de cultivo (#PCS-200-013, ATCC). Se añadió la L-tirosina (2 mM) juntamente con el tratamiento de las moléculas. Todas las condiciones se prepararon por triplicado. Después de incubar las células con los tratamientos durante 3 días, éstas se tripsinizaron y lisaron en NaOH 1M. Se midió la absorbancia de los lisados celulares a 340 nm mediante el uso de un espectrofotómetro. El valor de absorbancia es directamente proporcioné al contenido de melanina.
Tal como se observa en la figura 2, que muestra el contenido de melarana de las muestras preparadas, el control estimulado con L-tirosina se considera 100% para establecer un valor de referencia. La diferencia entre el contenido de melanina de las muestras tratadas con las moléculas de fórmulas (II) (78 ± 7%) y (III) (49 ± 7%) y la muestra tratada solo con L-tirosina (100 ± 3%) es significativa, de acuerdo con el test t de Student.
Solubilidad de las moléculas sintetizadas
Con el fin de estudiar y comparar la solubilidad de las moléculas en agua, se realiza el siguiente ensayo.
Para cada una de las moléculas, se preparan soluciones en DMSO y en agua. Todas las muestras se preparan a una concentración final de 50 mg/ml. Después de una hora de agitación a temperatura ambiente, las muestras se filtran y se realiza una HPLC.
Para calcular el porcentaje de solubilidad de cada una de las moléculas, se determina el área del pico obtenido por HPLC de la muestra disuelta en agua y en DMSO. Los resultados se dan en porcentaje de solubilidad dé compuesto disuelto en agua entre el compuesto disuelto en DMSO.
En la tabla 3 se muestran los resultados obtenidos. Se observa que la molécula de referencia es totalmente insoluble en agua a una concentración 50 mg/ml. Las moléculas (II) y (III) son muy solubles a esta concentración y las moléculas de fórmulas (IV) a (VI) son totalmente solubles en agua a la concentración testada.
Tabla 2. Porcentaje de solubilidad en agua comparados con las muestras disueltas en DMSO
Figure imgf000010_0001
Síntesis de las moléculas de la invención Fórmula (II): áddo 5-[(E)-2-(4-hídroxi-3-sulfdbenzoil)-1-etenil]-2-hidroxibencenosulfónico
Bajo atmósfera de nitrógeno, se añadieron lentamente 1 ,039 g (4,33 mmol) de (E)-1 ,3- bis(p-hidroxifenil)-2-propen-1-ona a 5,04 g (43,3 mmol) de áddo clorosulfónico a 0 °C. La reacdón se mantuvo a temperatura ambiente durante 22 h y la mezcla resultante se añadió lentamente a 25 ml de agua fría. La tese acuosa obtenida se extrajo dos veces con 20 ml de acetato de etilo, las fases orgánicas combinadas se lavaron con 10 ml de agua y se concentraron hasta sequedad, para obtener 2,017 g de un sólido que contenía áddo 5-[(E)-2-(4-hidroxi-3-sulfobenzoil)-1-etenii]-2-hidroxibencenosulfónico (86,3% área HPLC).
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 5 6,86 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,86 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,21 (s, 1H).
Fórmula (ill): ácido 5-((E)-3-(p-hidroxifenil)acriloil]-2-hidroxibencenosulfónico
Ácido 5-acetil-2-hidroxibencenosulfónico (intermedio de síntesis)
2 g (14,69 mmol) de 1-(p-hidroxifenii)-1-etanona se añadieron lentamente a 17,6 g (146,9 mmol) de áddo clorosulfónico a 0 °C. Después de 18 h a temperatura ambiente, a la mezcla de añadieron a 75 ml de agua fría y la mezda se extrajo dos veces con 50 ml de acetato de etilo. La fase orgánica se concentró hasta sequedad bajo vacío para obtener 1,95 g de un producto crudo que contenía 1,71 g (rendimiento 54%) áddo 5-acetil-2- hídroxibencenosulfónico y 0,24 g de 1-(p-hidroxifenil)-1-etanona.
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 62,50 (3H), 6,88 (d, 1H), 7,84 (d, 1H), 8,06 (s, 1H).
Ácido 5-[(E)-3-(p-hidroxífeníl)acriloil]-2-hidroxíbencenosulfónico
Se añadieron lentamente 1 ,61 ml (26 mmol) de ácido sulfúrico al 98% a una mezcla de 563 mg (2,60 mmol) del producto crudo anterior y 362 mg (2,60 mmol) de p- hidroxibenzaldehído en 6,4 mL of etanol a 0 °C. La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 21 h y la mezcla obtenida se añadió lentamente a una solución de 2 g cloruro sódico en 10 ml de agua a 0 °C. Se extrajo la suspensión dos veces con 20 ml de acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se trataron con sulfato sódico anhidro y se concentraron hasta sequedad. El producto obtenido se purificó en columna con gel de sílice eluyendo con un gradiente 100% didorometano a didorometano/metanol 8:2 para obtener 230 mg (rendimiento 27,6%) de áddo 5-[(E)-3-(p-hidroxifenil)acriloil)-2- hidroxibencenosulfónico.
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 66,80-6,88 (2H), 6,91-6,97 (1H), 7,61-7,69 (2H), 7,69-7,78 (1H), 8,06-8,15 (1H), 8,18-8,25 (1H).
Figure imgf000012_0001
hidroxibencenosutfonato, sal dipotásica
Bajo atmósfera de nitrógeno, se añadieron lentamente 20,8 g (86,63 mmol) de (E)-1 ,3- bis(p-hidroxifenil)-2-propen-1-ona a 138,25 g (1,18 mol) de ácido clorosulfónico a 0 °C. La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 19 h y la mezcla resultante se añadió lentamente a 650 ml de agua fría. La fase acuosa obtenida se extrajo dos veces con 500 ml de acetato de etilo, las fases orgánicas combinadas se lavaron con 250 ml de agua y se concentraron a sequedad para obtener 60,66 g de un producto conteniendo un 66% de ácido 5-[(E)-2-(4-hidroxi-3-sulfobenzoil)-1-eteníl]-2-hidroxibencenosulfáníco. 60,1 g de este producto se suspendieron en 230 ml de agua y se añadió lentamente una cantidad equimolecular de carbonato de potasio para obtener una solución completa. Se añadieron 600 ml de 2-propanol para obtener una suspensión. El sólido se filtró, se lavó dos veces con 200 ml de 2-propanol y se secó al vacío a 100 °C hasta peso constante, para obtener 19 g (rendimiento 46%) de sal dipotásica de 5-{(E)-2-(4-hidroxi-3- sulfonatobenzoil)-1-eten¡l}-2-hídroxibencenosulfonato.
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 5 6,86 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,87 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 10,98 (brs, 1H), 11,18 (brs, 1H).
Fórmula (V) (M = Na): 5-[(E)-3-(p-hidroxifenil)acriloil]-2-hídro)dbencenosulfonato de sodio
Se disolvió 1 g de ácido 5-[(E)-3-(4-hidroxifenil)acriloil]-2-hidroxibencenosuffónico (3,12 mmol) en 10 ml de 2-propanol y se añadió lentamente una cantidad equimolar de bicarbonato sódico. El sólido se filtró, se lavó dos veces con 2 ml de 2-propanol y se secó bajo vacío a 50 °C hasta peso constante, obteniéndose 284 mg (rendimiento 27%) de 5- [(E)-3-(p-hidroxifenil)acriloilj-2-hidroxibencenosulfonato de sodio.
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 66,80-6,88 (2H), 6,91-6,97 (1H), 7,61-7,69 (2H), 7,69-7,78 (1H), 8,06-8,15 (1H), 8,18-8,25 (1H), 10,98 (brs, 1H).
Fórmula (V) (M = (C2H5)3N): 2-hidroxi-5-[2-(4-hidroxi-3-sulfonatobenzoil)etil]- bencenosulfonato de trietilamonio
Se disolvieron 10 g de ácido 5-[(E)-3-(4-hidroxifenil)acriloil]-2-hidroxibencenosulfónico (31,23 mmol) en 70 ml de 2-propanol y se añadieron lentamente 13,05 ml de trimetilamina (93,69 mmol). El sólido se filtró, se lavó dos veces con 20 ml de 2-propanol y se secó bajo vado a 50 °C hasta peso constarte, obteniéndose 10,6 g (rendimiento 81%) de 5-[(E)-3-(p-hidroxifenil)acriloil)-2-hidroxibencenosulfonato de trietilamonio.
1H NMR (d-DMSO, 360 mHz): 6 1,06 (t, 9H), 2,80 (q, 6H), 6,83 (d, 2H), 6,93 (d, 1H), 7,66 (s, 2H), 7,73 (d, 2H), 8,09 (dd, 1H), 8,21 (d, 1H). Fórmula (Vi) (M = K): 2-hidroxi-5-[2-(4-hidroxi-3-sulfonatobenzoil)etil)bencenosulfonato, sal dipotásica
En un reactor de alta presión se disolvió 1 g (2,10 mmol) de 5-[(E)-2-(4-hidroxi-3- sulfonatobenzoil)-1-etenil]-2-hidroxfcencenosulfonato, sal de dipotado, en 10 ml de agua. Se añadieron 150 mg de Pd/C 10% y la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica y 1500 RPM durante 72h a temperatura ambiente. La reacción se controló por 1H NMR. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite® y se concentró hasta sequedad, obteniéndose 2-hidroxí-5-(2-(4-hídroxi-3- sulfonatobenzoil)etiljbencenosulfónato, sal dipotásica.
1H NMR (d-DMSO, 360 MHz): 6 2,80 (t, 2H), 3,20 (t, 2H), 6,66 (d, 1H), 6,86 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 8,08 (s, 1H), 10,36 (brs, 1H), 11 ,12 (brs, 1H).
Molécula de referencia: (E)-1,3-bis(p-hidroxifenil)-2-propen-1-ona
A una mezcla de 2 g (16,38 mmol) de p-hidroxibenzaldehído y 2,23 g (16,38 mmol) de 1- (p-hídroxifenil)-1-etanona en 20 ml de etanol, a temperatura ambiente, se añadieron lentamente 16,06 g (164 mmol) ) de ácido sulfúrico al 98%. La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 23 h y la mezcla obtenida se adicionó lentamente a una solución de 10 g de cloruro de sodio en 33 ml de agua a 0 °C. La suspensión se extrajo tres veces con 16 ml de acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se lavaron dos veces con 16 ml de agua. Después de tratar con sulfato de sodio anhidro, la fase orgánica se concentró al vacío hasta sequedad para obtener 3,58 g (rendimiento 91%, 97,4% área HPLC) de (E>-1,3-bis(p-hidroxifenil)-2-propen-1-ona.
1H NMR (d-DMSO, 360 mHz): 66,33 (d, 1H), 6,71 (d, 2H), 7,45 (s, 2H), 7,51 (d, 2H), 7,76 (dd, 1H), 8,21 (d, 1H).
Ejemplo de composiciones de la invención en forma de crema
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
Ejemplo de composiciones de la invención en forma de serum
Figure imgf000014_0002

Claims

REIVINDICACIONES
1. Moléculas inhibidoras de tirosinasa de la siguiente fórmula general (I):
Figure imgf000015_0001
donde R1 y R2 se seleccionan, independientemente entre sí, de entre H, HSO3 o una de sus sales con un catión monovalente, M+SO3", o con cualquier catión fisiológicamente aceptable, y representa un enlace simple o doble, con la
Figure imgf000015_0002
condición de que R1 y R2 no representen ambos H simultáneamente.
2. Moléculas inhibidoras de tirosinasa según la reivindicación 1 seleccionadas de entre las siguientes fórmulas (II) a (VI): II R1 y R2 son ambos HSO3 y
Figure imgf000015_0004
es un enlace doble
Figure imgf000015_0003
uno de R1 o R2 es HSO3, y el otro de R1 y R2 es H y
Figure imgf000016_0006
es un enlace doble
Figure imgf000016_0001
IV R1 y R2 son ambos M+SO3- y es un enlace simple
Figure imgf000016_0005
V R1 es M+SO3-y R2 es H,
Figure imgf000016_0004
es un enlace doble
VI R1 y R2 son ambos M+SO3- y es un enlace doble
Figure imgf000016_0003
Figure imgf000016_0002
3. Moléculas inhibidoras de tirosinasa según la reivindicación 1 o 2, donde M es sodio, potasio o trietilamonio.
Composición dermofarmacéutica o cosmética que comprende al menos una molécula inhibidora de la tirosinasa de fórmula general (I) según la reivindicación 1 , en combinación con excipientes adecuados para su formulación.
5. Composición dermofarmacéutica o cosmética que comprende al menos una molécula inhibidora de la tirosinasa seleccionada de las fórmulas (II) a (VI) según la reivindicación 2, en combinación con excipientes adecuados para su formulación.
6. Composición dermofarmacéutica o cosmética según las reivindicaciones 4 o 5, donde la molécula inhibidora de la tirosinasa está presente en la composición dermofarmacéutica o cosmética en una concentración de un 0,001 - 25% en peso.
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