WO2022065962A1 - Mlkl 결합 또는 분해용 화합물 및 이들의 의약 용도 - Google Patents

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김현준
문효원
김현진
하재두
조성윤
윤창수
김필호
이지수
오준교
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한국화학연구원
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Definitions

  • the present disclosure relates to a group of compounds having competitively binding (binding) to MLKL (Mixed Lineage Kinase domain-Like protein) or MLKL inhibitory or degrading activity.
  • MLKL Mated Lineage Kinase domain-Like protein
  • the present disclosure also relates to pharmaceutical compositions comprising such compounds.
  • the present disclosure relates to useful methods for treating MLKL related diseases using such compounds. That is, the present disclosure relates to the pharmaceutical use of the compounds according to the present invention for treating or preventing MLKL-related diseases.
  • MLKL Mated Lineage Kinase domain-Like protein
  • MLKL Mated Lineage Kinase domain-Like protein
  • ATPase or phosphate transfer activity is a type of pseudokinase protein, and consists of four ⁇ -helix bundles at the N-terminus and a pseudokinase domain at the C-terminus.
  • MLKL lacks ATPase or phosphate transfer activity.
  • MLKL protein is currently attracting attention as a new target for various diseases related to apoptosis and inflammatory response.
  • Necroptosis is associated with inflammation or tissue injury, traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure, (acute) pancreatitis, atherosclerosis, ischemia-reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and It is involved in various diseases including non-alcoholic) steatohepatitis, remote liver injury, Crohn's colitis, ulcerative colitis, terminal ileitis, etc.
  • the pathogenesis of solid organ injury, Cell Death and Disease, 2015, 6(11), 1-10), MLKL inhibitors are expected to be useful in the treatment, improvement or prevention of these diseases by inhibiting these necroptosis as a result.
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • necroptosis phosphorylation of MLKL and total MLKL levels and necroptosis were increased in patients with non-alcoholic steatohepatitis (NASH) and in a NASH-induced mouse pathology model (Afonso et al., Necroptosis). is a Key Pathogenic Event in Human and Experimental Murine Models of Non-Alcoholic Steatohepatitis, Clinical Science, 2015).
  • necroptosis and MLKL are important factors in liver diseases such as NASH and AIH, which are accompanied by apoptosis and inflammation, and that MLKL protein can be a new target for the development of liver disease therapeutics.
  • Catalyst Therapeutics confirmed the anti-inflammatory treatment effect related to psoriasis through the MLKL knock-out mouse model, and is developing and researching MLKL inhibitors (Catalyst Therapeutics announced in November 2015, Targeting MLKL for the development of novel anti-inflammatory therapeutics, https://www.wehi.edu.au/sites/default/files/files/Catalyst_Therapeutics-Necroptosis-MLKL-2015_Nov.pdf)
  • MLKL or necroptosis is involved in various diseases other than NASH, AIH, and psoriasis.
  • MLKL plays an important role in hepatic fat accumulation and inflammation related to NAFLD, independent of RIP3.
  • Inhibition of mixed lineage kinase domain like pseudokinase decreases fat de novo synthesis and chemokine ligand expression in non-alcholic fatty liver disase, Journal of Gastroenterology and Hepatology, 2019).
  • MLKL forms a complex with RBM6 to regulate mRNA stability and protein expression of adhesion molecules (ICAM1, VCAM1, E-selectin). It has been reported to reduce immune cell infiltration. (Dai et al., A necroptotic-independent function of MLKL in regulating endothelial cell adhesion molecule expression, Cell Death & Disease, 2020). In addition, it has been reported that MLKL is involved in necrotic core formation as well as cellular lipid metabolism in atherosclerosis by regulating lipid droplet accumulation through endosomal trafficking. Through this, it was confirmed that MLKL plays an important role in the antiatherogenic function and can also play various roles in metabolic diseases.
  • an object of the present invention is to provide a compound having MLKL binding, inhibitory and/or degrading activity, a pharmaceutical composition comprising the same as an active ingredient, and a pharmaceutical use thereof for treating or preventing MLKL-related diseases.
  • Another object to be solved by the present invention is the treatment of MLKL-related diseases, characterized in that the compound according to the present invention, which is characterized by inhibiting MLKL activity, is administered to a patient in need of treatment, improvement or prevention of MLKL-related diseases or It provides a way to improve.
  • the present invention provides a compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • X is N or CH
  • Y is S, O, NH or -N(C 1-6 alkyl)-
  • Z is a direct linkage, -NH-, -N-(C 1-4 alkyl)-, or ego,
  • A is 4-6 ring heteroaryl or heterocycloalkyl containing at least one N
  • B is a direct link (i.e. not present) or 4-7 ring heterocycloalkyl containing one or more N;
  • the present invention provides a compound of Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • X, Y, Z, R 2 and R 3 are the same as X, Y, Z, R 2 and R 3 of Formula 1 of claim 1,
  • R 1 is -(CH 2 ) n -, aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, or -A-(B)-, wherein n is an integer from 1 to 10;
  • A is 4-6 ring heteroaryl or heterocycloalkyl containing at least one N
  • B is a direct link (i.e. not present) or 4-7 ring heterocycloalkyl containing one or more N;
  • the linker may not exist, and if it does exist, it is a linker that connects R 1 and E3 Binder.
  • E3 Binder is an E3 ligase ligand.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier or additive.
  • the present invention provides a method of treating an MLKL-related disease comprising administering to an individual a therapeutically effective amount of a compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the MLKL-related Diseases include, but are not limited to, traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure, (acute) pancreatitis, arteriosclerosis, metabolic disease, ischemic reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and non-alcoholic) steatohepatitis, remote liver injury, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, ovarian cancer, renal injury, fatty liver, inflammation, Crohn's colitis, ulcerative colitis, or ileitis. That is, the present invention provides a pharmaceutical use for treating or preventing the disease of the compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the term "patient” is an animal (eg, cow, horse, sheep, pig, chicken, turkey, quail, cat, dog, mouse, rat, rabbit or guinea pig), preferably non-primates and primate-like mammals (eg, monkeys and humans), most preferably humans.
  • alkyl refers to a saturated straight-chain or branched acyclic hydrocarbon having 1 to 10 carbon atoms (when the number of carbon atoms is not specifically limited). "Lower alkyl” means straight-chain or branched alkyl having 1 to 4 carbon atoms.
  • saturated straight chain alkyls are -methyl, -ethyl, -n-propyl, -n-butyl, -n-pentyl, -n-hexyl, -n-heptyl, -n-octyl, -n-nonyl and -n- contains decyl
  • saturated branched alkyl is -isopropyl, -sec-butyl, -isobutyl, -tert-butyl, isopentyl, 2-methylhexyl, 3-methylbutyl, 2-methylpentyl, 3- Methylpentyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-
  • C 1-6 alkyl means alkyl having 1 to 6 carbon atoms.
  • halogen and “halo” refer to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • haloalkyl As used herein, the terms “haloalkyl,” “haloalkoxy,” “haloalkenyl,” or “haloalkynyl” refer to an alkyl, alkoxy, alkenyl or alkynyl group in which one or more hydrogen atoms are each replaced by a halogen atom. .
  • haloalkyl is -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, -CBr 3 , -CHBr 2 , -CH 2 Br, -CC1 3 , -CHC1 2 , -CH 2 CI, -CI 3 , -CHI 2 , -CH 2 I, -CH 2 -CF 3 , -CH 2 -CHF 2 , -CH 2 -CH 2 F, -CH 2 -CBr 3 , -CH 2 -CHBr 2 , -CH 2 -CH 2 Br, -CH 2 -CC1 3 , -CH 2 -CHC1 2 , -CH 2 -CH 2 CI, -CH 2 -CI 3 , -CH 2 -CHI 2 , -CH 2 -CH 2 I, and the like include that In one aspect of the invention, haloalkyl is CF 3 . Alkyl and halogen herein are as
  • alkanoyl or “acyl” refers to -C(O)CH 3 , -C(O)CH 2 CH 3 , -C(O)(CH 2 ) 2 CH 3 , -C(O )(CH 2 ) 3 CH 3 , —C(O)(CH 2 ) 4 CH 3 , —C(O)(CH 2 ) 5 CH 3 , and the like mean —C(O)alkyl groups
  • alkyl herein is as defined above.
  • alkanoyloxy or "acyloxy” is -OC(O)CH 3 , -OC(O)CH 2 CH 3 , -OC(O)(CH 2 ) 2 CH 3 -OC(O)(CH 2 ) 3 CH 3 , -OC(O)(CH 2 ) 4 CH 3 , -OC(O)(CH 2 ) 5 CH 3 , and the like.
  • ) means an alkyl group, wherein alkyl is as defined above.
  • alkoxy means -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -O(CH 2 ) 2 CH 3 , -O(CH 2 ) 3 CH 3 , -O(CH 2 ) 4 CH 3 , -O(CH 2 ) 5 CH 3 , including -O-(alkyl), and the like, wherein alkyl is as defined above.
  • lower alkoxy means -O- (lower alkyl), wherein lower alkyl is as defined above.
  • aryl refers to a carbocyclic aromatic group containing 5 to 10 ring atoms. Representative examples include phenyl, tolyl, xylyl, naphthyl, tetrahydronaphthyl, anthracenyl, fluorenyl, indenyl, azulenyl, etc. including, but not limited to. Carbocyclic aromatic groups may be optionally substituted.
  • aryloxy is RO—, and R is aryl as defined above.
  • Arylthio is RS- and R is aryl as defined above.
  • cycloalkyl refers to a monocyclic or polycyclic saturated ring having carbon and hydrogen atoms and no carbon-carbon multiple bonds.
  • monocyclic rings include, but are not limited to (C 3 -C 7 )cycloalkyl (eg, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and cycloheptyl).
  • polycyclic ring examples include fused bicyclic rings such as octahydropentalene, decahydronaphthalene, and the like; spiro rings such as spiro[3.3]heptane, spiro[3.4]octane, spiro[3.5]nonane, spiro[4.4]nonane, spiro[4.5]decane, spiro[5.5]undecane, and the like; and a bridged bicyclic ring such as bicyclo[2.1.1]hexane, bicyclo[2.2.1]heptane, bicyclo[2.2.2]octane, and the like. Cycloalkyl groups may be optionally substituted. In one embodiment, the cycloalkyl group is a monocyclic ring (ring).
  • mono-alkylamino as used herein is -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 , -NH(CH 2 ) 2 CH 3 , -NH(CH 2 ) 3 CH 3 , -NH(CH 2 ) 4 -NH(alkyl), including CH 3 , —NH(CH 2 ) 5 CH 3 , and the like, wherein alkyl is as defined above.
  • di-alkylamino means —N(CH 3 ) 2 , —N(CH 2 CH 3 ) 2 , —N((CH 2 ) 2 CH 3 ) 2 , —N(CH 3 ) -N(alkyl)(alkyl), including (CH 2 CH 3 ), and the like, wherein each alkyl independently of the other is alkyl as defined above.
  • alkylamino is a concept that includes mono-alkylamino and di-alkylamino as defined above.
  • aminoalkyl refers to -CH 2 -NH 2 , -(CH 2 ) 2 -NH 2 , -(CH 2 ) 3 -NH 2 , -(CH 2 ) 4 -NH 2 , -( CH 2 ) 5 -NH 2 and the like, including -(alkyl)-NH 2 , wherein alkyl is as defined above.
  • mono-alkylaminoalkyl means —CH 2 —NH—CH 3 , —CH 2 —NHCH 2 CH 3 , —CH 2 —NH(CH 2 ) 2 CH 3 , —CH 2 —NH (CH 2 ) 3 CH 3 , -CH 2 -NH(CH 2 ) 4 CH 3 , -CH 2 -NH(CH 2 ) 5 CH 3 , -(CH 2 ) 2 -NH-CH 3 , and the like including, -(alkyl)-NH(alkyl), wherein each alkyl independently of the other is alkyl as defined above.
  • heteroaryl has at least one heteroatom selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur, and includes 5 to 10 carbon atoms including at least one carbon atom, including mono- and bicyclic ring systems. It is an aromatic heterocycle ring of members.
  • heteroaryls include furan, 4H-pyran, pyrrole, imidazole, pyrazole, triazole, tetrazole, pyridine, pyrimidine, pyridazine, pyrazine, triazine, thiophene, ozaxole, isoxazole, thiazole, isothiazole, oxadiazole, 1H-azepine benzothiophene, benzothiophene, benzothiophene.
  • indole benzoxazole, benzimidazole, benzothiazole, cinnoline, phthalazine, quinazoline, purine, pyrazolopyridine, pyrazolopyrimidine, imidazopyridine, benzotriazole, indazole, triazopyridine, etc.
  • heterocycle (heterocycle) or “heterocycloalkyl” is a saturated 5- to 7-membered monocyclic containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen and sulfur. , or 7- to 12-membered bicyclic ring (ring), wherein the nitrogen and sulfur heteroatoms may be optionally oxidized and the nitrogen heteroatom may optionally be quaternized.
  • heterocycles include oxiran, oxetan, tetrahydrofuran, tetrahydropyran, 1,4-dioxane, aziridine, Azetidine, pyrrolidine, piperidine, piperazine, pyrrolidinone, hydantoine, valerolactam, thiirane ), thietane, tetrahydrothiophene, tetrahydrothiopyra, morpholine, tetrahydropyridine, tetrahydropyrimidine, and the like.
  • Heterocycles include bicyclic rings in which part of the heterocycle is fused to a benzene or cyclopenta-1,3-diene ring.
  • Heterocycles may be attached by heteroatoms or carbon atoms. Heterocycles also include fused bicyclic rings, spiro rings and bridged bicyclic rings in which one or more carbon atoms of the aforementioned polycyclic rings are replaced with nitrogen, oxygen or sulfur atoms. rings are included.
  • Examples of this include, for example, fused heterobicyclic (such as octahydrocyclopenta[c]pyrrole, octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole, decahydroisoquinoline, decahydro-2,6-naphthyridine, bicyclic) ring; 2-azaspiro[3.3]heptane, 2,6-diazaspiro[3.3]heptane, 2-azaspiro[3.4]octane, 2,6-diazaspiro[3.4]octane, 2-azaspiro[3.5]nonane, 2,7-diazaspiro[ 3.5]nonane, 2-azaspiro[4.4]nonane, 2,7-diazaspiro[4.4]nonane, 8-azaspiro[4.5]decane, 2,8-diazaspiro[4.5]decane, 3-azaspiro[5.5]undecane,
  • Heterocycle fused to phenyl means a heterocycle attached to two adjacent carbon atoms of a phenyl ring, wherein the heterocycle is as defined above.
  • hydroxyalkyl refers to —CH 2 OH, —CH 2 CH 2 OH, —(CH 2 ) 2 CH 2 OH, —(CH 2 ) 3 CH 2 0H, —(CH 2 ) 4 alkyl in which one or more hydrogen atoms are replaced by hydroxy, including CH 2 0H, -(CH 2 ) 5 CH 2 OH, -CH(OH)-CH 3 , -CH 2 CH(OH)CH 3 , and the like means, wherein alkyl is as defined above.
  • sulfonyl refers to -S0 3 H.
  • sulfonylalkyl refers to —SO 2 —CH 3 , —SO 2 —CH 2 CH 3 , —SO 2 —(CH 2 ) 2 CH 3 , —SO 2 —(CH 2 ) 3 CH 3 , -SO 2 -(CH 2 ) 4 CH 3 , and -S0 2 -(alkyl) including -S0 2 -(CH 2 ) 5 CH 3 , wherein alkyl is as defined above.
  • sulfinylalkyl is -SO-CH 3 , -SO-CH 2 CH 3 , -SO-(CH 2 ) 2 CH 3 , -SO-(CH 2 ) 3 CH 3 , -SO-(CH 2 ) 4 CH 3 , -SO-(CH 2 ) 5 CH 3 , and the like, meaning -SO-(alkyl), wherein alkyl is as defined above.
  • Thioalkyl means -S-CH 3 , -S-CH 2 CH 3 , -S-(CH 2 ) 2 CH 3 , -S-(CH 2 ) 3 CH 3 , -S-(CH 2 ) 4 CH 3 , —S—(CH 2 ) 5 CH 3 , and the like, wherein alkyl is as defined above.
  • substituted means that the hydrogen atom of the moiety being substituted (eg, alkyl, aryl, heteroaryl, heterocycle, or cycloalkyl) is replaced by a substituent.
  • each carbon atom of the group being substituted is not substituted by more than two substituents.
  • each carbon atom of the group being substituted is unsubstituted by more than one substituent.
  • the two hydrogen atoms are replaced by an oxygen attached to the carbon by a double bond.
  • R a and R b may be plural depending on a bonded atom.
  • the substituents of the present invention are halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, -OR a , -CN, di-alkylamino, aryl, or heterocycle, wherein R a is hydrogen, halogen, amino, alkyl, haloalkyl, aryl or heterocycle.
  • “Pharmaceutically acceptable salts” in the present invention include salts of the active compounds prepared with relatively non-toxic acids and bases depending on the particular substituents found on the compounds mentioned herein.
  • base addition salts can be obtained by contacting the neutral form of such compounds with a sufficient amount of the desired base, pure or with a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amino or magnesium salts or similar salts.
  • acidic addition salts can be obtained by contacting the neutral form of such compounds with a sufficient amount of the desired acid, neat or with a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts are acetic acid, propionic acid, isobutylic acid, oxalic acid, maleic, malonic, benzoic, succinic, suberic, fumaric ( fumaric), mandelic, phthalic, benzenesulfonic, p-tolylsulfonic, citric acid, tartaric acid, methanesulfonic, and the like.
  • salts derived from non-toxic organic acids hydrogen chloride, hydrogen bromide, nitric acid, carbonic acid, monohydrogencarbonic, phosphoric, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphoric acid, sulfuric acid, monohydrogensulfuric acid, hydrogen iodide or phosphorous acid ( phosphorous acid) and its analogues.
  • salts of amino acids such as arginate and analogues thereof and analogues of organic acids such as glucuronic or galactunoric acids and analogues thereof.
  • effective amount refers to an amount of a compound of the invention sufficient to slow or minimize the progression of a MLKL-related disease or to provide a therapeutic benefit in the treatment or management of an MLKL-related disease.
  • Effective amount also refers to an amount sufficient to inhibit or reduce MLKL activity, either in vitro or in vivo .
  • treatment may be any one or more of preventative treatment, palliative treatment, and/or restorative treatment.
  • the term “compound of the present invention” is meant to include compounds of Formula 1 or 2, as well as clathrates, hydrates, solvates, or polymorphs thereof.
  • the term “compound of the present invention” is meant to include a pharmaceutically acceptable salt of the compound of the present invention unless a pharmaceutically acceptable salt thereof is mentioned.
  • the compounds of the present invention are stereomerically pure compounds (e.g., substantially free of other stereoisomers (e.g., at least 85% ee, at least 90% ee, at least 95% ee, 97% ee or more, or 99% ee or more)).
  • polymorph refers to a solid crystalline form of a compound of the present invention or a complex thereof. Different polymorphs of the same compound exhibit different physical, chemical and/or spectral properties. Differences in physical properties include, but are not limited to, stability (eg, thermal or light stability), compressibility and density (important for formulation and product manufacturing), and rate of dissolution (which may affect bioavailability).
  • stability eg, thermal or light stability
  • compressibility and density important for formulation and product manufacturing
  • rate of dissolution which may affect bioavailability
  • Differences in stability may be due to changes in chemical reactivity (e.g., differential oxidation such as discoloration faster when composed of one polymorph than when composed of another polymorph) or mechanical properties (e.g., kinetically Tablet fragments stored as the preferred polymorph are converted to the thermodynamically more stable polymorph) or both (the tablet of one polymorph is more susceptible to degradation at high humidity).
  • Other physical properties of polymorphs can affect their processing. For example, one polymorph may be more likely to form a solvate than another polymorph, for example due to its shape or size distribution of particles, or it may be more difficult to filter or wash.
  • solvent compound refers to a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising a stoichiometric or non-stoichiometric amount of a solvent bound by non-covalent intermolecular forces.
  • Preferred solvents are volatile, non-toxic, and can be administered in trace amounts to humans.
  • hydrate refers to a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof comprising a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by non-covalent intermolecular forces.
  • clathrate refers to a compound of the present invention in the form of a crystal lattice containing spaces (eg, channels) that confine guest molecules (eg, solvent or water). or salts thereof.
  • prodrug refers to hydrolyzed, oxidized, and other reactions under biological conditions (either ex vivo or in vivo) to provide an active compound, particularly a compound of the present invention.
  • prodrugs include biohydrolyzable amides, biohydrolyzable esters, biohydrolyzable carbamates, biohydrolyzable carbonates, biohydrolyzable ureides ( ureides), and compounds that are biohydrolyzed to yield compounds of the invention, including biohydrolyzable moieties such as biohydrolyzable phosphate analogs.
  • the prodrug of the compound having a carboxyl group is a lower alkyl ester of a carboxylic acid.
  • Carboxylic esters are commonly formed by esterifying a moiety of a carboxylic acid present in a molecule.
  • Prodrugs can be easily prepared based on a variety of known literature.
  • purified when isolated, means that the isolate is at least 90% pure, in one embodiment at least 95% pure, in another embodiment at least 99% pure, and In another embodiment, it means at least 99.9% pure.
  • hydro refers to a single —H atom (H) and is used interchangeably with the symbol “H” or the term “hydrogen”.
  • substituent may be (1) unsubstituted or (2) substituted with one or more of the defined substituents. If the substitutable position is unsubstituted, the default substituent is a hydrido radical.
  • pharmaceutically acceptable means suitable for use as a pharmaceutical preparation, generally considered safe for such use, and is officially approved for such use by a national regulatory agency or It means being on the list of pharmacopeias.
  • the present invention provides a compound having the structure of Formula 1 below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • X is N or CH
  • Y is S, O, NH or -N(C 1-6 alkyl)-
  • Z is a direct linkage, -NH-, -N-(C 1-4 alkyl)-, or ego,
  • A is 4-6 ring heteroaryl or heterocycloalkyl containing at least one N
  • B is a direct link (i.e. not present) or 4-7 ring heterocycloalkyl containing one or more N;
  • the present invention is in Formula 1
  • X is N or CH
  • Y is S, O, NH or -N(C 1-6 alkyl)-
  • Z is a direct linkage, -NH-, -N-(C 1-4 alkyl)-, or ego,
  • R 2 is hydrogen, C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, aryl, heteroaryl, or cycloalkyl, wherein the alkyl, alkoxy, aryl, heteroaryl or cycloalkyl is unsubstituted or C 1 substituted with -6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl aryl, halogen, C 1-6 alkoxy, CN, or NO 2 ;
  • R 3 is C 1-5 alkyl, phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein R 3 is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, halo-C 1-6 alkyl, C substituted with any one or more of 1-6 alkoxy, CN, NO 2 , —N(C 1-3 alkyl)(C 1-3 alkyl), aryl, heterocycloalkyl, or heterocycloalkyl substituted with methyl;
  • Examples of the 4-6 ring heteroaryl containing one or more N as the heteroatom include pyrrole, pyrroline, pyrrolidine, imidazole, imidazoline, imidazolidine, pyrazole, pyrazoline, pyra
  • zollidine triazole, pyridine, piperidine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, piperazine, triazine, etc., among them, imidazole, triazole, pyrazole, pyridine, etc. are preferable for various purposes of the present invention. and pyrazole, triazole, pyridine and the like are more preferred for the purpose of the present invention.
  • Pyridine in the above paragraph is meant to include tetrahydropyridine.
  • piperidine As the 4 ring, 5 ring, 6 ring, or 7 ring (4-7 ring) heterocycloalkyl containing at least one N as the hetero atom, piperidine, piperazine, azetidine, pyrrolidine, etc. may be used. Among them, piperidine, piperazine, pyrrolidine, azetidine, and the like are preferable for various purposes of the present invention.
  • X is N or CH
  • Y is O, NH, or -N(C 1-6 alkyl)-;
  • Z is NH
  • R 1 is -A-(B)-R 4 , wherein A is imidazole, pyrazole, triazole, pyridine, pyreridine, piperazine, or tetrahydropyridine; B is a direct linkage, or piperidine, piperazine, azetidine, or pyrrolidine; R 4 is hydrogen, -C(O)-C 1-6 alkyl, or -C(O)OC 1-6 alkyl;
  • R 2 is C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, or phenyl, wherein the alkyl or phenyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, halogen, C 1 -6 substituted with alkoxy, CN, or NO 2 ,
  • R 3 is phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein said phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with any one or more of alkoxy;
  • the present invention is
  • X is N or CH (preferably N)
  • Y is O or NH (preferably, O),
  • Z is NH
  • R 1 is -A-(B)-R 4 , wherein A is pyrazole, triazole, tetrahydropyridine, or pyridine; B is a direct linkage, or piperidine, piperazine, pyrrolidine, or azetidine; R 4 is hydrogen, -C(O)-C 1-3 alkyl, or -C(O)OC 1-6 alkyl;
  • R 2 is C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, or phenyl, wherein the alkyl or phenyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with alkoxy;
  • R 3 is phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein said phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with any one or more of alkoxy;
  • the present invention also provides a method for preparing a compound that inhibits or degrades MLKL by using the compound according to the present invention belonging to Formula 1 above.
  • the compound that inhibits or decomposes MLKL may be a compound of Formula 2 or a salt thereof.
  • the present invention also provides a method for preparing a compound that inhibits or degrades MLKL, characterized in that the compound according to the present invention belonging to Formula 1 is formed in the overall structure.
  • the compound that inhibits or decomposes MLKL may be a compound of Formula 2 or a salt thereof.
  • the present invention also provides a compound having a structure of the following formula (2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • X, Y, Z, R 2 and R 3 are the same as X, Y, Z, R 2 and R 3 of Formula 1 of claim 1,
  • R 1 is -(CH 2 ) n -, aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, or -A-(B)-, wherein n is an integer from 1 to 10;
  • A is 4-6 ring heteroaryl or heterocycloalkyl containing at least one N
  • B is a direct link (i.e. not present) or 4-7 ring heterocycloalkyl containing one or more N;
  • the linker may not exist, and if it does exist, it is a linker that connects R 1 and E3 Binder.
  • E3 Binder is an E3 ligase ligand.
  • the present invention is in Formula 2
  • X is N or CH
  • Y is S, O, NH or -N(C 1-6 alkyl)-
  • Z is a direct linkage, -NH-, -N-(C 1-4 alkyl)-, or ego,
  • R 2 is hydrogen, C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, aryl, heteroaryl, or cycloalkyl, wherein the alkyl, alkoxy, aryl, heteroaryl or cycloalkyl is unsubstituted or C 1 substituted with -6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl aryl, halogen, C 1-6 alkoxy, CN, or NO 2 ;
  • R 3 is C 1-5 alkyl, phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein R 3 is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, halo-C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, CN, NO 2 , or substituted with any one or more of aryl,
  • R 1 is aryl, heteroaryl, or -A-(B)-, wherein A is 4-6 ring heteroaryl or heterocycloalkyl comprising at least one N; B is a direct linkage or 4-7 ring heterocycloalkyl containing one or more N;
  • Examples of the 4-6 ring heteroaryl containing one or more N as the heteroatom include pyrrole, pyrroline, pyrrolidine, imidazole, imidazoline, imidazolidine, pyrazole, pyrazoline, pyra
  • zollidine triazole, pyridine, piperidine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, piperazine, triazine, etc., among them, imidazole, triazole, pyrazole, pyridine, etc. are preferable for various purposes of the present invention. and pyrazole, triazole, pyridine and the like are more preferred for the purpose of the present invention.
  • Pyridine in the above paragraph is meant to include tetrahydropyridine.
  • piperidine, piperazine, azetidine, pyrrolidine, etc. may be used, and among them, piperidine, piperidine, for various purposes of the present invention Razine, pyrrolidine, azetidine and the like are preferred.
  • X is N or CH
  • Y is O, NH or -N(C 1-6 alkyl)-
  • Z is NH
  • R 2 is C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, or phenyl, wherein the alkyl or phenyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, halogen, C 1 -6 substituted with alkoxy, CN, or NO 2 ,
  • R 3 is phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein said phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with any one or more of alkoxy;
  • R 1 is -A-(B)-, wherein A is imidazole, pyrazole, triazole, pyridine, pyreridine, piperazine, or tetrahydropyridine; B is a direct linkage, or piperidine, piperazine, azetidine, or pyrrolidine;
  • the present invention is
  • X is N or CH (preferably N)
  • Y is O or NH (preferably, O),
  • Z is NH
  • R 2 is C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, or phenyl, wherein the alkyl or phenyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halo-C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with alkoxy;
  • R 3 is phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl, wherein said phenyl, pididyl, cyclohexyl, or piperidyl is unsubstituted or C 1-6 alkyl, halogen, or C 1-6 substituted with any one or more of alkoxy;
  • R 1 is -A-(B)-, wherein A is pyrazole, imidazole, triazole, tetrahydropyridine, or pyridine; B is a direct linkage, or piperidine, piperazine, pyrrolidine, or azetidine;
  • the linker of Formula 2 is a linker that connects the compound of Formula 1 and the E3 ligase ligand compound according to the present invention, and these linkers are aldehyde, chloride, bromide, iodide, or an alkyl bond through tosylate or , it can be linked to the MLKL binder compound through an amide bond through an acid or an amide bond through an amine.
  • linkers disclosed in prior patents US20180353501 A1, WO2019199816 A1, WO2019023553 A1, US20180125821 A1, US20190192668 A1, WO2017197056 A1, WO2019186358 A1, and/or WO2018089736 A1 can be used.
  • the contents described in the prior patent application publication are incorporated herein by reference in their entirety.
  • the linker has a chain of 2 to 14, 15, 16, 17, 18 or 20 or more carbon atoms, at least one carbon being O, N, S or P. It can be replaced by a heteroatom.
  • the chain has 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 contiguous atoms in the chain.
  • the chain may contain one or more ethylene glycol units which may be continuous, partially continuous or discontinuous (e.g., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12 ethylene glycol units).
  • the chain is independently alkyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, alkenyl or alkynyl, aliphatic, heteroaliphatic, cycloalkyl or heterocycloalkyl substituents at least 1, 2, 3, It has 4, 5, 6, 7 or 8 continuous chains.
  • the linker may comprise or consist of one or more of ethylene glycol, propylene glycol, lactic acid and/or glycolic acid.
  • propylene glycol adds hydrophobicity
  • ethylene glycol adds hydrophilicity.
  • the lactic acid segment has a longer half-life than the glycolic acid segment.
  • Ethylene glycol and propylene glycol as well as block and random lactic acid-glycolic acid moieties are known in the art to be pharmaceutically acceptable and can be modified or arranged to obtain the desired half-life and hydrophilicity.
  • these units are flanked by other moieties, including alkyl, heteroaliphatic, aryl, heteroaryl, heterocyclic, cycloalkyl, etc., as necessary to achieve appropriate drug properties; or may be interspersed.
  • the linker of Formula 2 may have a direct linkage or a structure of Formula 6 below.
  • a 1 is a direct linkage, -C(O)-, -C(O)NH-, or -S(O) 2 -;
  • a 2 is a direct linkage, O, -C(O)-, -CH(OH)-, -N(C 1-3 alkyl)-, -(OCH 2 CH 2 ) q3 -, C 3-8 cycloalkyl, heterocycle or heteroaryl (preferably imidazole, triazole, piperidine, piperazine, pyrrolidine, azetidine or , more preferably cyclohexane, imidazole, or triazole),
  • a 3 is a direct linkage, CO, NH, CC, heterocycloalkyl having a bicyclic structure (preferably, , ), , , or wherein X 1 is N, CH or C(OH), X 2 is O or CH, R 1 is hydrogen, —C 1-3 alkyl, or —C 1-3 alkyl-OH,
  • q1, q2 and q3 are each independently an integer from 0 to 12 (preferably, q3 is an integer from 0 to 5).
  • the left * means linked to the MLKL binder moiety
  • the right * means linked to the E3 ligase ligand compound.
  • the linker of Formula 2 has the following structure.
  • the Linker is a form comprising at least one ring composed of 5 or more elements rather than a structure such as straight chain alkyl, PEG, or the like.
  • the E3 binder of Formula 2 refers to an E3 ligase ligand, and after the MLKL binder moiety of Formula 1 according to the present invention binds to MLKL, the role of linking the target protein of MLKL with the E3 ligase (Step 1), ubiquitin from E2 complexed with E3 ligase is poly-ubiquitinated to lysin of the target protein (Step 2), and then degraded by the proteasome It plays a role in decomposing or inhibiting MLKL through the process (step 3). This degrader can be recycled in the same way (step 4).
  • Such E3 ligase binder compounds include, for example, M. Toure, CM Crews, Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 1966, T. Uehara et al. Nature Chemical Biology 2017, 13, 675, WO 2017/176708, US 2017/0281784, WO 2017/161119, WO 2017/176957, WO 2017/176958, WO 2015/160845, US 2015/0291562, WO 2016/197032, WO 2016/105518, US 2018/0009779, WO 2017/007612, 2018/0134684, WO 2013/106643, US 2014/0356322, WO 2002/020740, US 2002/0068063, WO 2012/078559, US 2014/0302523, WO 2012 /003281, US 2013/0190340, US 2016/0022642, WO 2014/063061, US 2015/0274738, WO 2016/118666, US 2016/0214972, WO 2016/149668, US 2016/02726
  • This E3 binder compound for example, may be linked to a linker through an alkyl or amide bond through an amine, but the present invention is not limited to this preparation method.
  • E3 ligase binder compound for example, compounds disclosed in US 2019/0192668 A1, US 2018-0155322 A1, or WO 2017-197056 A1 may be used.
  • the contents disclosed in the prior patent publications or papers are incorporated herein by reference in their entirety.
  • This E3 binder compound for example, may be linked to a linker through an alkyl or amide bond through an amine, but the present invention is not limited to this preparation method.
  • the E3 Binder is *-(Formula X)-Formula Y,
  • Formula Y is a CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, a VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, or an IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety.
  • Formula Y according to the present invention is a CRBN (cereblon) E3 Ubiquitin Ligase binding moiety
  • CRBN cereblon
  • US 2019-0192668 the CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety disclosed in US 2019-0192668 may be used.
  • the contents disclosed in the prior patent publications or papers are incorporated herein by reference in their entirety.
  • the CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety according to the present invention that is, Chemical Formula Y is the following Chemical Formula 3.
  • X is C(O) or C(R 3 ) 2 ;
  • each R 1 is, independently of one another, halogen, nitro, NH 2 , OH, C(O)OH, C 1 -C 6 alkyl, or C 1 -C 6 alkoxy;
  • each R 3 independently of the other is H or C 1 -C 3 alkyl, wherein the alkyl is unsubstituted or optionally substituted with C 6 -C 10 aryl or 5- to 10-membered heteroaryl;
  • each R 3 ′ is independently of each other C 1 -C 3 alkyl
  • each R 4 independently of the other is H or C 1 -C 3 alkyl; or two R 4 are linked to each other by the carbons constituting them, 4-, 5-, or C(O), C 3 -C 6 cycloalkyl or one or two heteroatoms selected from N and O 6-membered heterocycle;
  • R 5 is D (deuterium), H, C 1 -C 3 alkyl, F, or Cl;
  • t 0, 1, or 2;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • n and n' are independently of each other 0, 1 or 2.
  • Chemical Formula 3 has the following structure.
  • Formula Y according to the present invention is a VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety
  • the VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety disclosed in US 2019-0192668 may be used.
  • the contents disclosed in the prior patent publications or papers are incorporated herein by reference in their entirety.
  • VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety according to the present invention, that is, Chemical Formula Y is represented by Chemical Formula 4 below.
  • each R 5 and R 6 is independently of the other OH, SH, alkyl, or substituted alkyl, or R 5 and R 6 may be joined to form a carbonyl;
  • R 7 is H, alkyl or substituted alkyl
  • M is aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocycle, substituted heterocycle, or ;
  • each R 9 and R 10 is independently of one another H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, hydroxyalkyl, substituted hydroxyalkyl, thioalkyl, substituted thioalkyl, disulfide linked to a linker or X (disulphide), heteroaryl, substituted heteroaryl, or haloalkyl; or R 9 and R 10 may be joined with their carbons to form a cycloalkyl, or a substituted cycloalkyl;
  • R 11 is heterocycle, substituted heterocycle, alkoxy, substituted alkoxy, heteroaryl, substituted heteroaryl, aryl, substituted aryl, or ;
  • R 12 is H, alkyl, or substituted alkyl
  • R 13 is H, alkyl, substituted alkyl, alkylcarbonyl, substituted alkylcarbonyl, (cycloalkyl)alkylcarbonyl, substituted (cycloalkyl)alkylcarbonyl, aralkylcarbonyl, substituted aralkylcarbonyl, aryl, substituted aryl carbonyl, (heterocycle)carbonyl, substituted (heterocyclyl)carbonyl, aralkyl, substituted aralkyl, (oxoalkyl)carbamate or substituted (oxoalkyl)carbamate;
  • each R 14 is independently of one another H, haloalkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, alkyl, substituted alkyl, heterocycle or substituted heterocycle;
  • each R 15 is H, heteroaryl, substituted heteroaryl, haloalkyl, aryl, substituted aryl, alkoxy, substituted alkoxy, heterocycle, or substituted heterocycle;
  • each R 16 is independently of one another halogen, alkyl, substituted alkyl, haloalkyl, substituted haloalkyl, CN, haloalkoxy, or substituted haloalkoxy;
  • each R 25 is independently of one another H or alkyl, substituted alkyl; or two R 25 are joined together to form an oxo or cycloalkyl, substituted cycloalkyl group;
  • R 23 is H or OH
  • Z 1 , Z 2 , Z 3 , and Z 4 are each independently C or N;
  • o 0, 1, 2, 3, or 4.
  • M is aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocycle, substituted heterocycle or ;
  • each R 9 and R 10 is independently of each other H; alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, hydroxyalkyl, substituted hydroxyalkyl, thioalkyl, substituted thioalkyl, disulfide linked to a linker or X, heteroaryl, substituted heteroaryl, or haloalkyl; or R 9 and R 10 may be joined with their carbons to form a cycloalkyl, or a substituted cycloalkyl;
  • R 11 is heterocycle, substituted heterocycle, alkoxy, substituted alkoxy, heteroaryl, substituted heteroaryl, aryl, substituted aryl, or ;
  • R 12 is H, alkyl, or substituted alkyl
  • R 13 is H, alkyl, substituted alkyl, alkylcarbonyl, substituted alkylcarbonyl, (cycloalkyl)alkylcarbonyl, substituted (cycloalkyl)alkylcarbonyl, aralkylcarbonyl, substituted aralkylcarbonyl, aryl, substituted aryl carbonyl, (heterocycle)carbonyl, substituted (heterocyclyl)carbonyl, aralkyl, substituted aralkyl, (oxoalkyl)carbamate or substituted (oxoalkyl)carbamate;
  • X is O or S
  • Y is H, methyl or ethyl
  • R 17 is H, methyl, ethyl, hydroxymethyl or cyclopropyl.
  • Chemical Formula 4 has the following structure.
  • R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , X, Y and R 17 are the same as mentioned in formula 4a.
  • Chemical Formula 4 has the following structure.
  • Formula Y according to the present invention is a CRBN (cereblon) E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, for example, the CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety disclosed in wo2019/186358 may be used.
  • CRBN cereblon
  • the contents disclosed in the prior patent publications or papers are incorporated herein by reference in their entirety.
  • CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety according to the present invention, that is, Chemical Formula Y is the following Chemical Formula 5.
  • X is CH or N
  • B is a direct linkage or -C(O)NH-.
  • R 6 and R 7 are each independently hydrogen, halogen, —C 1-3 alkyl, or —C 1-3 alkoxy.
  • Formula Y according to the present invention is an IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety
  • the IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety disclosed in WO 2018/118598 may be used.
  • the contents disclosed in the prior patent publications or papers are incorporated herein by reference in their entirety.
  • the IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, ie, Formula Y, according to the present invention may have the following structure.
  • R 1 is H or alkyl
  • R 2 is H or alkyl
  • R 3 is H, alkyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl
  • R 4 is alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl, or heteroarylalkyl, optionally substituted with the 1-3 substituents described above,
  • R 5 and R 6 are independently of each other H, alkyl, cycloalkyl, or heterocycloalkyl, more preferably, R 5 and R 6 together form a pyrrolidine or piperidine ring, which are optionally with 1-2 substituents substituted, wherein the substituents are cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl, wherein the substituents may fuse to form other cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl or heteroaryl rings;
  • R 7 is -C(O)NH-R 4 .
  • Chemical Formula X present in the structure (*-(Formula X)-Formula Y) of the E3 Binder is a direct linkage or Chemical Formula 7.
  • a 1 is a direct linkage, CO, or -C(O)NH-,
  • a 2 and A 3 are independently of each other a direct linkage, O, CO, NH, CC, phenyl, heterocycloalkyl (preferably piperidine, piperazine, pyrrolidine, or azetidine),
  • q1, q2 and q3 are each independently an integer of 0 to 3.
  • Formula X in the structure of the E3 Binder may be a direct linkage or the following structure.
  • the present inventors have particularly excellent MLKL inhibitory, degradation and/or binding activity and high selectivity therefor, and preferably effectively degrade MLKL, resulting in therapeutic or prophylactic effect on MLKL-related diseases.
  • various evaluation experiments were performed after synthesizing various compounds.
  • the present invention was completed by confirming that the compounds of the present invention are suitable for the purpose of the present invention.
  • Non-limiting examples of the compound of Formula 1 according to the present invention include the compounds of Table 1 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • Non-limiting examples of the compound of Formula 2 according to the present invention include the compound of Table 2 below and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the present invention provides a treatment for a disease or condition comprising administering to an individual in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Methods are provided for treating the disease or condition, wherein the disease or condition is traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure, (acute) pancreatitis, arteriosclerosis, metabolic disease (e.g., For example, diabetes, hypertension, hyperlipidemia, heart disease, etc.), ischemia-reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and non-alcoholic) steatohepatitis, distant liver injury, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, ovarian cancer, kidney damage, fatty liver, inflammation, Crohn's colitis, ulcerative colitis, or ileitis.
  • metabolic disease e.g., For example, diabetes, hypertension, hyperlipid
  • the disease or condition is nonalcoholic steatohepatitis, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, stroke, ovarian cancer, renal injury, fatty liver or inflammation.
  • the present invention provides a pharmaceutical use characterized in that the compound of Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention is used as an active ingredient.
  • the pharmaceutical use of the present invention is the use for the treatment or prophylaxis of a disease or condition described herein.
  • the present invention further provides a method of treating the following disease or condition in a subject having or prone to have the following disease or condition by administering to the subject a therapeutically effective amount of one or more of such compounds.
  • the treatment is a preventative treatment.
  • the treatment is a palliative treatment.
  • the treatment is a restorative treatment.
  • the compounds for inhibiting MLKL activity of the present invention are useful for various therapeutic or prophylactic uses. These compounds can be used to inhibit or inhibit MLKL activity, and can also be used to inhibit MLKL-mediated apoptosis. It can also be used for the treatment of MLKL-related diseases or to prevent exacerbation of these diseases. Accordingly, the present invention provides a method for inhibiting, inhibiting, or degrading intracellular MLKL activity. In such a method, the cells are contacted with an effective amount of a compound of the invention. In one embodiment, the cell is present in a subject. The method of the present invention comprises administering to an individual in need of treatment or prevention a pharmaceutical composition comprising a therapeutically or prophylactically effective amount of an MLKL activity inhibitor.
  • the present invention provides a method of inhibiting, degrading or inhibiting MLKL activity in a cell of an MLKL-related disease.
  • the present invention relates to traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure, (acute) pancreatitis, arteriosclerosis, metabolic disease (eg, diabetes, hypertension, hyperlipidemia, heart disease, etc.), ischemia-reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and non-alcoholic) steatohepatitis, remote liver injury, autoimmune hepatitis, psoriasis , hypoxic-ischemic encephalopathy, ovarian cancer, renal injury, fatty liver, inflammation, Crohn's colitis, ulcerative colitis, ileitis, etc.
  • metabolic disease eg, diabetes, hypertension, hyperlipidemia, heart disease, etc.
  • ischemia-reperfusion injury transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote
  • the present invention provides a method for inhibiting MLKL activity in cells of nonalcoholic steatohepatitis, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, stroke, ovarian cancer, renal injury, fatty liver or inflammation. can be used for
  • the compounds of the present invention may be administered to the subject in the form of the pharmaceutical compositions described herein.
  • the present invention provides a method for treating or preventing an MLKL-related disease in a subject, wherein the MLKL-related disease includes traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure. , (acute) pancreatitis, atherosclerosis, metabolic disease, ischemia-reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and non-alcoholic) steatohepatitis, remote liver injury, autologous Autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, ovarian cancer, renal damage, fatty liver, inflammation, Crohn's colitis, ulcerative colitis, ileitis, etc.
  • the MLKL-related disease is nonalcoholic steatohepatitis, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, stroke, ovarian cancer, renal injury, fatty liver or inflammation.
  • Such methods comprise administering to a subject in need thereof an amount of a compound of the invention sufficient to inhibit MLKL activity, ie, a therapeutically effective amount.
  • Suitable subjects to be treated according to the present invention include mammalian subjects.
  • Mammals according to the present invention include, but are not limited to, humans, canine, feline, bovine, goat (caprine), equine, sheep (ovine), pig (porcine), rodents (rodents), lagomorphs (lagomorphs), primates (primates), and the like, including in utero ( in utero ) mammals.
  • An individual may be of both sexes and may be at any stage of development.
  • a suitable individual to be treated according to the invention is a human.
  • the compounds of the present invention are generally administered in a therapeutically effective amount.
  • the compounds of the present invention may be administered by any suitable route, in the form of a pharmaceutical composition suitable for such route, and in an effective dosage for the intended treatment.
  • An effective dosage is generally from about 0.001 to about 100 mg/kg body weight/day, preferably from about 0.01 to about 50 mg/kg/day, in single or divided doses. Depending on the age, species, and disease or condition to be treated, dosage levels below the lower limit of this range may be suitable. In other cases, still larger doses can be used without deleterious side effects. The larger dose may be divided into several smaller doses for administration throughout the day.
  • the compound described herein or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be administered as follows.
  • the compound of the present invention may be administered orally, and the oral cavity is a concept including swallowing.
  • oral administration the compound of the present invention may enter the gastrointestinal tract, or may be absorbed directly from the mouth into the bloodstream, such as, for example, by buccal or sublingual administration.
  • compositions for oral administration may be in solid, liquid, gel, or powder form, and may have formulations such as tablets, lozenges, capsules, granules, and powders. .
  • compositions for oral administration may optionally be enteric coated and may exhibit delayed or sustained release through the enteric coating. That is, the composition for oral administration according to the present invention may be a formulation having an immediate or modified release pattern.
  • the compounds of the present invention may be administered directly into the bloodstream, muscle, or intestine.
  • Suitable methods for parenteral administration include intravenous, intra-muscular, subcutaneous intraarterial, intraperitoneal, intrathecal, intracranial injection, and the like.
  • Suitable devices for parenteral administration include injectors (including needle and needleless syringes) and infusion methods.
  • compositions for parenteral administration may be formulations with an immediate or modified release pattern, and the modified release pattern may be a delayed or sustained release pattern.
  • liquid compositions are liquid compositions, and the liquid composition is an aqueous solution containing the active ingredient according to the present invention, a salt, a buffer, an isotonic agent, and the like.
  • Parenteral formulations may also be prepared in dried form (eg, lyophilized) or as sterile non-aqueous solutions. These formulations may be used with a suitable vehicle such as sterile water. Solubility-enhancing agents may also be used in the preparation of parenteral solutions.
  • compositions of the present invention may be administered topically dermally or transdermally.
  • Formulations for topical administration include lotions, solutions, creams, gels, hydrogels, ointments, foams, implants, patches, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable carriers for topical dosage forms may include water, alcohol, mineral oil, glycerin, polyethylene glycol, and the like. Topical administration may also be performed by electroporation, iontophoresis, phonophoresis, and the like.
  • compositions for topical administration may be formulations with an immediate or modified release pattern, and the modified release pattern may be a delayed or sustained release pattern.
  • the present invention provides a compound capable of exhibiting various pharmacological activities by inhibiting or degrading MLKL activity, a pharmaceutical composition comprising the same as an active ingredient, and their pharmaceutical use (especially traumatic brain injury, stroke, bone marrow) Bone marrow failure, (acute) pancreatitis, arteriosclerosis, ischemic reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic and non-alcoholic) steatohepatitis, distant liver Injury, autoimmune hepatitis, psoriasis, hypoxic ischemic encephalopathy, ovarian cancer, renal damage, fatty liver, inflammation, Crohn's colitis, ulcerative colitis, ileitis, etc.) and treatment or prevention thereof Methods of treatment are provided comprising administering to a subject in need thereof.
  • the compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is excellent in various aspects such as safety and stability, and has high selectivity in terms
  • 1 is a diagram showing the necroptosis signaling mechanism related to MLKL.
  • Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (3.0 g, 13 mmol, 1 eq.) was dissolved in DMF (50 mL), Pd(dppf)Cl 2 (946 mg, 1.3 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (7.3 g, 19 mmol, 1.5 eq.), and potassium carbonate (7.1 g, 52 mmol, 4.0 eq.) were added and reacted overnight at 80 °C in the presence of nitrogen.
  • Acetic acid (0.002 mL, 0.036 mmol, 1 eq.) was dissolved in DMF (0.15 mL), and EDCI .
  • HCl (7.6 mg, 0.040 mmol, 1.1 eq.
  • HOBt 6.0 mg, 0.040 mmol, 1 eq.
  • DIPEA 0.031 mL, 0.18 mmol, 5 eq.
  • (R)-2-( (4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.036 mmol, 1 eq.) was added and reacted overnight at room temperature.
  • Methyl 2-amino-5-bromonicotinate 500 mg, 2.16 mmol, 1.0 eq.
  • tert-butyl 4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-3 ,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxylate 1.0 g, 3.25 mmol, 1.5 eq.
  • K 2 CO 3 1.2 g, 8.66 mmol, 4.0 eq.
  • Pd(dppf) 2 Cl 2 158 mg , 0.22 mmol, 0.1 eq.
  • Methyl 2-amino-5-bromonicotinate 200 mg, 0.87 mmol, 1.0 eq. was dissolved in DMF (17 mL), Pd(dppf)Cl 2 (64 mg, 0.087 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4 -(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate Borane (490 mg, 1.3 mmol, 1.5 eq.), potassium carbonate (478 mg, 3.5 mmol, 4.0 eq.) was added and reacted overnight at 80 °C in the presence of nitrogen.
  • Pd(dppf)Cl 2 64 mg, 0.087 mmol, 0.1 eq.
  • Methyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate (281 mg, 0.73 mmol, 1 eq.) was mixed with THF/MeOH/ After dissolving in H 2 O (2 mL/1 mL/1 mL), LiOH ⁇ H 2 O (153 mg, 3.7 mmol, 5 eq.) was added and reacted at room temperature for 5 hours. After completion of the reaction, the reaction solvent was concentrated, diluted with EtOAc, and extracted with water. The aqueous layer was adjusted to pH 4-5 with 1N HCl aqueous solution, followed by extraction with EtOAc.
  • reaction solvent was concentrated and dissolved in water, neutralized using saturated NaHCO 3 aqueous solution, extracted with EA, and concentrated to the desired (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate was obtained.
  • Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (40 mg, 0.17 mmol, 1 eq.) was dissolved in DMF (1 mL), Pd(dppf)Cl 2 (13 mg, 0.017 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4-(5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate (101 mg, 0.26 mmol, 1.5 eq.), and potassium carbonate (95 mg, 0.69 mmol, 4.0 eq.) were added and reacted overnight at 80 °C in the presence of nitrogen.
  • Methyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg, 0.23 mmol, 1 eq.) was mixed with THF/MeOH After dissolving in /H 2 O (1.0 mL/0.2 mL/0.2 mL), LiOH ⁇ H 2 O (48 mg, 1.1 mmol, 5.0 eq.) was added and reacted at room temperature for 1 hour. After completion of the reaction, the reaction solvent was concentrated, diluted with EtOAc, and extracted with water.
  • the aqueous layer was adjusted to pH 4-5 with 1N HCl aqueous solution, followed by extraction with EtOAc.
  • the collected organic layers were washed with brine, and then the residue was removed through anhydrous Na 2 SO 4 and filtered.
  • the organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain the desired 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (45 mg, 49%). got it
  • Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (40 mg, 0.17 mmol, 1 eq.) was dissolved in DMF (1 mL), Pd(dppf)Cl 2 (13 mg, 0.017 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)azetidine-1-carboxylate (90 mg, 0.26 mmol, 1.5 eq.), and potassium carbonate (95 mg, 0.69 mmol, 4.0 eq.) were added, and then reacted at 80° C.
  • the aqueous layer was adjusted to pH 4-5 with 1N HCl aqueous solution, followed by extraction with EtOAc. The collected organic layers were washed with brine, and then the residue was removed through anhydrous Na 2 SO 4 and filtered. The organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain the desired 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (38 mg, 83 %) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert) -butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (68 mg, 0.11 mmol, 75%) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography and purified as a yellow solid (R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-) butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (80 mg, 0.13 mmol, quant.) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-) butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (119 mg, 0.19 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-) butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (96 mg, 0.16 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1) -(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (96 mg, 0.134 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1) -(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg, 0.14 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin- 4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (101 mg, 0.17 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1) -(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (77 mg, 0.12 mmol, 82%) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography and purified as a yellow solid (R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1) -(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (102 mg, 0.16 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-) butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (110 mg, 0.18 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(1) -(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (131 mg, 0.23 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-) butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (39 mg, 0.065 mmol, mixture) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography and purified as a yellow solid (R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-( tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (92 mg, 0.15 mmol, 69%) was obtained.
  • the concentrate was separated and purified by silica gel column chromatography to obtain a yellow solid 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-(p-tolyl)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert) -butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (93 mg, 0.15 mmol, 69%) was obtained.
  • tert-butyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate 50 mg, 0.23 mmol, 1.5 eq.
  • NaBH(OAc) 3 44 mg, 0.21 mmol, 1.34 eq.
  • the reaction was conducted at room temperature overnight.
  • the mixture was diluted with water and extracted with DCM.
  • the collected organic layers were filtered through anhydrous Na 2 SO 4 to remove residual water.
  • the organic layer was concentrated under reduced pressure.

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Abstract

본 개시는 MLKL과 결합하거나, MLKL을 저해 또는 분해하는 활성을 갖는 특정 화학구조의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 본 개시는 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시는 본 발명에 따른 화합물, 이의 염 및 이들을 포함하는 조성물의 MLKL 관련 질환의 치료 또는 예방용 의약 용도를 제공한다. 본 개시는 또한 본 발명에 따른 화합물, 이의 염 또는 이들을 포함하는 조성물의 유효한 양을 치료가 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 MLKL 관련 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

Description

MLKL 결합 또는 분해용 화합물 및 이들의 의약 용도
본 출원은 2020년 9월 28일에 출원된 한국특허출원 제10-2020-0126423호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
본 개시는 MLKL (Mixed Lineage Kinase domain-Like protein)에 경쟁적으로 결합하거나(결합하고) MLKL 저해 또는 분해 활성을 가지는 일 군의 화합물에 관한 것이다. 본 개시는 또한 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본 개시는 이러한 화합물을 이용하여, MLKL 관련 질환을 치료하는 유용한 방법에 관한 것이다. 즉, 본 개시는 본 발명에 따른 화합물들의 MLKL 관련 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약 용도에 관한 것이다.
MLKL (Mixed Lineage Kinase domain-Like protein)은 pseudokinase 단백질의 일종으로, N-말단의 4개의 α-helix 다발 구조와 C-말단의 pseudokinase 도메인으로 구성된다. MLKL은 일반 인산화 효소와는 다르게 ATPase 또는 인산기 전달 활성이 결여되어 있다.
도 1에 개시된 바와 같이, 다양한 신호전달물질에 의해 necroptosis가 유도되면 신호전달의 마지막 단계에서 MLKL 단백질의 인산화가 일어나고 올리고머화가 진행되며, 올리고머화된 MLKL이 세포막으로 이동하여 구멍을 형성함으로써 Necroptosis를 유도하게 된다. MLKL 단백질은 현재 세포사멸 및 염증 반응과 관련된 다양한 질환의 새로운 타깃으로 주목받고 있다.
Necroptosis는 염증이나 tissue injury와 관계되는, traumatic brain injury, stroke, bone marrow failure, (acute) pancreatitis, atherosclerosis, ischemia-reperfusion injury, transplantation, infection, chronic obstructive pulmonary disease, remote lung injury, hepatotoxicity, (alcoholic 및 non-alcoholic) steatohepatitis, remote liver injury, Crohn’s colitis, ulcerative colitis, terminal ileitis 등을 포함하는 다양한 질병에 관여하여, 우수한 치료제 개발시 파급효과는 클 것으로 기대되는데 (H Zhao et al., Role of necroptosis in the pathogenesis of solid organ injury, Cell Death 및 Disease, 2015, 6(11), 1-10), MLKL 저해제는 결과적으로 이러한 necroptosis를 억제하여 상기 질병들의 치료, 개선 또는 예방에 유용할 것으로 기대된다.
예를 들어, 비알코올성 지방간염 (non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 환자와 NASH 유도 마우스 병리 모델에서 MLKL의 인산화 및 총 MLKL level이 증가해 있고 Necroptosis가 증가되어 있는 것이 보고되었다 (Afonso et al., Necroptosis is a Key Pathogenic Event in Human 및 E xperimental Murine Models of Non-Alcoholic Steatohepatitis, Clinical Science, 2015).
또, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis, AIH) 환자와 AIH 유도 마우스 병리 모델의 간 조직에서 MLKL의 발현과 활성이 크게 증가되었고 이에 따라 Necroptosis가 증가한 것이 관찰되었으며 (Gunther et al., The pseudokinase MLKL mediates programmed hepatocellular necrosis independently of RIPK3 during hepatitis, The journal of Clinical Investigation, 2016.), AIH 유도 마우스 병리 모델에서 MLKL 유전자의 결손을 유발하자 간 손상 수치인 ALT와 AST가 정상 수준으로 감소하고 세포사멸이 억제되는 것이 확인되었다 (Gunther et al., The pseudokinase MLKL mediates programmed hepatocellular necrosis independently of RIPK3 during hepatitis, The journal of Clinical Investigation, 2016).
따라서 세포사멸과 염증반응을 동반하는 NASH, AIH 등의 간 질환에서 necroptosis와 MLKL이 중요한 인자라는 사실과 MLKL 단백질이 간 질환 치료제 개발을 위한 새로운 타깃이 될 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
한편, Catalyst Therapeutics사는 MLKL knock-out 마우스 모델을 통해 건선 (psoriasis)과 관련된 항염증 치료 효과를 확인하고, MLKL 저해제를 개발 연구하고 있다 (Catalyst Therapeutics사 2015년 11월 발표 자료, Targeting MLKL for the development of novel anti-inflammatory therapeutics, https://www.wehi.edu.au/sites/default/files/files/Catalyst_Therapeutics-Necroptosis-MLKL-2015_Nov.pdf)
상기 NASH, AIH, 건선 이외에도 다양한 질병에서 MLKL 또는 necroptosis가 관여하고 있다는 연구들이 발표되고 있다.
저산소허혈성뇌병증을 지닌 신생아 랫드 모델을 이용한 실험을 통해 MLKL이 저산소허혈능뇌병증으로 인한 뇌 발달 시 손상을 약화시키는 효과를 확인하였으며(Qu Y et al., MLKL inhibition attenuates hypoxia-ischemia induced neuronal damage in developing brain, Exp Neurol, 2016), 뇌졸중 마우스 모델에서 MLKL Signaling과 관련된 Necroptosis를 억제하여 허혈성백질변성을 완화시키고, long-term neurological function을 회복시켰다(Chen Y et al., Necrostatin-1 Improves Long-term Functional Recovery Through Protecting Oligodendrocyte Precursor Cells After Transient Focal Cerebral ischemia in Mice. Neuroscience. 2018).
또, Ovalian cancer cell(in vitro), Ovalian cancer 마우스 모델(in vivo)을 이용한 실험을 통해 MLKL이 Systemic CNL(cramide nanoliposome)에 의한 Ovalian cancer의 전이를 억제시키는 효과를 확인하였다(Zhang X et al., Ceramide Nanoliposomes as a MLKL-Dependent, Necroptosis-Inducing, Chemotherapeutic Reagent in Ovarian Cancer, Mol Cancer Ther. 2018).
miR-500a-3P 과발현시 phosphorylated MLKL을 줄이고, RIP1, RIPK3를 감소시켜 MLKL singaling 억제를 통한 급성 신손상 치료의 가능성을 확인하였다 (Jiang L et al., hsa-miR-500a-3P alleviates kidney injury by targeting MLKL-mediated necroptosis in renal epithelial cells, FASEB J. 2019).
추가적으로, MLKL-KO 마우스 모델을 이용한 실험을 통해 RIP3와는 별개로 MLKL이 NAFLD와 관련된 hepatic fat accumulation 및 inflammation에서 중요한 역할을 하는 것을 확인하였다. (Jun et al., Inhibition of mixed lineage kinase domain like pseudokinase decreases fat de novo synthesis and chemokine ligand expression in non-alcholic fatty liver disase, Journal of Gastroenterology 및 Hepatology, 2019).
최근 MLKL이 RBM6와 복합체를 이루어 adhesion molecules (ICAM1, VCAM1, E-selectin)의 mRNA 안정성 (stability) 및 단백질 발현 (protein expression)을 조절하며, MLKL 억제 (inhibition)가 급성 염증 (Acute inflammation)의 면역세포침투 (immune cell infiltration)를 감소시키는 것이 보고되었다. (Dai et al., A necroptotic-independent function of MLKL in regulating endothelial cell adhesion molecule expression, Cell Death & Disease, 2020). 또한, MLKL이 necrotic core 형성에 관여할 뿐만 아니라, endosomal trafficking을 통한 지방구 축적 (lipid droplet accumulation)을 조절하여 동맥경화 (atherosclerosis)에서 세포지질대사 (cellular lipid metabolism)에 관여하고 있음이 보고되었다. 이를 통해 MLKL이 항동맥경화 (antiatherogenic) 기능에 중요한 역할을 하며, 이외에도 대사성 질환 (metabolic diseases)에 다양한 역할을 할 수 있음을 확인하였다. (Rasheed et al., Loss of MLKL (Mixed Lineage Kinase Domain-Like Protein) Decreases Necrotic Core but Increases Macrophage Lipid Accumulation in Atherosclerosis, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2020).
한편, 기존 표적치료제는 표적단백질에 강하게 결합하여 하위신호전달 기능을 억제하여 질병을 치료할 수 있지만, 효능을 발휘하기 위해서는 고농도의 약물을 지속적으로 투여해야 하는 단점을 갖고 있으며, 이에 따른 내성이 발현되어 치료제로 사용이 불가능한 경우가 다수 발생한다. 또한 일부 표적단백질들의 경우 undruggable 표적(target)이며, 이러한 undruggable 표적들은 대부분 표적에 잘 결합할 수 있는 부위 (binding pocket)가 존재하지 않아 저해제 개발에 많은 어려움이 있다. 이러한 문제점들을 극복하기 위해, 단백질 분해제 (PROTAC 또는 degrader) 기술이 새로운 대안으로 급부상하고 있다(CP Tinworth et al., Small molecule-mediated protein knockdown as a new approach to drug discovery, MedChemComm, 2016).
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 MLKL 결합, 저해 및/또는 분해 활성을 가지는 화합물, 이들을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물, 및 이들의 MLKL 관련 질환 치료 또는 예방용 의약 용도를 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 MLKL 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 화합물을 MLKL 관련 질환의 치료, 개선 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는 MLKL 관련 질환의 치료 또는 개선 방법을 제공하는 것이다.
요약
상기 해결하고자 하는 과제를 달성하기 위하여, 일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000001
상기 화학식 1에서,
X는 N 또는 CH이며,
Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000002
이고,
R1은 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-R4이고, 여기에서 R1은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이고,
A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
R4는 수소, (저급)알킬, 할로-C1-6알킬, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -C(=O)NRaRb, -NRaSO2Rb, -SO2Ra, -S(O)Ra, 또는 -SO(N)Ra이며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며,
R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이며,
R3는 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기에서 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6알콕시, CN, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(O)NRaRb, -SO2Ra, -S(O)Ra, -SO(N)Ra, NO2, -N(Ra)(Rb), 아릴, 메틸로 치환된 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 메틸로 치환된 헤테로사이클로알킬 중 어느 하나 이상으로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬임.
상기 해결하고자 하는 과제를 달성하기 위하여, 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000003
상기 화학식 2에서,
X, Y, Z, R2 및 R3는 제1항의 화학식 1의 X, Y, Z, R2 및 R3와 동일하며,
R1은 -(CH2)n-, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-이고, 여기에서 n은 1 내지 10의 정수이고,
A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
linker은 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우 R1과 E3 Binder를 연결해주는 연결기이며,
E3 Binder는 E3 ligase 리간드임.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 포함하는 약학 조성물이 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적으로 유효한 양을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 MLKL 관련 질환을 치료하는 방법이 제공하며, 상기 MLKL 관련 질환은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환, 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 또는 회장염이다. 즉, 본 발명은 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 상기 질병을 치료 또는 예방하기 위한 의약 용도를 제공한다.
상기 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 이들의 의약 용도에 대해서는 다음의 상세한 설명에 더욱 충분하게 기재되어 있다.
상세한 설명
하기의 설명은 단지 예시적인 것에 불과하며, 본 발명, 출원, 또는 용도를 한정하려는 것이 아니다.
정의
본 명세서에서 사용된 하기 용어들은 다음과 같이 정의된다.
본 명세서에서 용어 "치환기(substituent)", "라디칼(radical)", "기(group)", "모이어티(moiety)", 및 "절편(fragment)"은 서로 바꾸어 사용할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것과 같이, 용어 "환자"는 동물(예를 들어, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 생쥐, 쥐, 토끼 또는 기니피그)이고, 바람직하게는 비-영장류 및 영장류와 같은 포유류(예를 들어, 원숭이 및 인간)이고, 가장 바람직하게는 인간이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬"은 (탄소수가 특별히 한정되지 않은 경우) 탄소수 1 내지 10을 가진 포화된 직쇄상 또는 분지상의 비-고리(cyclic) 탄화수소를 의미한다. "저급 알킬"은 탄소수가 1 내지 4인 직쇄상 또는 분지상 알킬을 의미한다. 대표적인 포화 직쇄상 알킬은 -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸, -n-펜틸, -n-헥실, -n-헵틸, -n-옥틸, -n-노닐 과 -n-데실을 포함하고, 반면에 포화 분지상 알킬은 -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, -tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5- 메틸헥실, 2,3-디메틸부틸, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸펜틸, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, 2-데틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, 2-메틸-4-에틸펜틸, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2-메틸-4-에틸헥실, 2,2-디에틸펜틸, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실, 및 3,3-디에틸헥실을 포함한다.
본 명세서에서 “C1-6”, "C1-C6", "C1-6", 또는 "C1-C6"와 같이 기재될 경우 이는 탄소수가 1 내지 6개임을 의미한다. 예를 들어, C1-6 알킬은 탄소수가 1 내지 6인 알킬을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "할로겐" 및 "할로"는 플루오린, 클로린, 브로민 또는 아이오딘을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "할로알킬", “할로알콕시”, “할로알케닐” 또는 “할로알키닐”은 각각 하나 이상의 수소 원자가 할로겐 원자로 치환된 알킬, 알콕시, 알케닐 또는 알키닐 그룹을 의미한다. 예를 들어, 할로알킬은 -CF3, -CHF2, -CH2F, -CBr3, -CHBr2, -CH2Br, -CC13, -CHC12, -CH2CI, -CI3, -CHI2, -CH2I, -CH2-CF3, -CH2-CHF2, -CH2-CH2F, -CH2-CBr3, -CH2-CHBr2, -CH2-CH2Br, -CH2-CC13, -CH2-CHC12, -CH2-CH2CI, -CH2-CI3, -CH2-CHI2, -CH2-CH2I, 및 이와 유사한 것을 포함한다. 본 발명의 일 태양에서, 할로알킬은 CF3이다. 여기에서 알킬 및 할로겐은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 “알카노일” 또는 “아실”은 -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)(CH2)2CH3, -C(O)(CH2)3CH3, -C(O)(CH2)4CH3, -C(O)(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는 -C(O)알킬 그룹을 의미하여, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 “알카노일옥시” 또는 "아실옥시(Acyloxy)"는 -OC(O)CH3, -OC(O)CH2CH3, -OC(O)(CH2)2CH3, -OC(O)(CH2)3CH3, -OC(O)(CH2)4CH3, -OC(O)(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는 -OC(O)알킬 그룹을 의미하여, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알콕시"는 -OCH3, -OCH2CH3, -O(CH2)2CH3, -O(CH2)3CH3, -O(CH2)4CH3, -O(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는 -O-(알킬)을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "저급알콕시"는 -O-(저급알킬)을 의미하며, 여기에서 저급 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "아릴"은 5 내지 10의 고리 원자를 함유하는 탄소고리 방향족 그룹을 의미한다. 대표적인 예는 페닐, 톨일(tolyl), 자이릴(xylyl), 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 안트라세닐(anthracenyl), 플루오레닐(fluorenyl), 인데닐(indenyl), 아주레닐(azulenyl) 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 탄소고리 방향족 그룹은 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "아릴옥시"는 RO-이며, R은 상기 정의된 아릴이다. "아릴씨오"는 RS-이며, R은 상기 정의된 아릴이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "사이클로알킬(cycloalkyl)"은 탄소 및 수소 원자를 가지며 탄소-탄소 다중 결합을 가지지 않는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 포화 고리(ring)를 의미한다. 모노사이클릭 고리의 예는 (C3-C7)사이클로알킬 (예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸)을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 폴리사이클릭 고리의 예는 octahydropentalene, decahydronaphthalene 등과 같은 융합된(fused) 바이사이클릭(bicyclic) 고리; spiro[3.3]heptane, spiro[3.4]octane, spiro[3.5]nonane, spiro[4.4]nonane, spiro[4.5]decane, spiro[5.5]undecane 등과 같은 스피로 고리; 및 bicyclo[2.1.1]hexane, bicyclo[2.2.1]heptane, bicyclo[2.2.2]octane 등과 같은 가교된(bridged) 바이사이클릭 고리를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 사이클로알킬 그룹은 선택적으로 치환될 수 있다. 일 실시예에서, 사이클로알킬 그룹은 모노사이클릭 링(고리)이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "모노-알킬아미노"는 -NHCH3, -NHCH2CH3, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)3CH3, -NH(CH2)4CH3, -NH(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는, -NH(알킬)을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "디-알킬아미노"는 -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, -N((CH2)2CH3)2, -N(CH3)(CH2CH3), 및 이와 유사한 것을 포함하는 -N(알킬)(알킬)을 의미하며, 여기에서 각 알킬은 서로 독립적으로 위에서 정의된 알킬이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬아미노"는 위에서 정의된 모노-알킬아미노 및 디-알킬아미노를 포함하는 개념이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "카르복실" 및 "카르복시"는 -COOH를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "아미노알킬"은 -CH2-NH2, -(CH2)2-NH2, -(CH2)3-NH2, -(CH2)4-NH2, -(CH2)5-NH2 및 이와 유사한 것을 포함하는 -(알킬)-NH2을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "모노-알킬아미노알킬"은 -CH2-NH-CH3, -CH2-NHCH2CH3, -CH2-NH(CH2)2CH3, -CH2-NH(CH2)3CH3, -CH2-NH(CH2)4CH3, -CH2-NH(CH2)5CH3, -(CH2)2-NH-CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는, -(알킬)-NH(알킬)을 의미하며, 여기에서 각 알킬은 서로 독립적으로 위에서 정의된 알킬이다.
본 명세서에서 사용된 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 헤테로원자를 가지고, 모노- 및 바이사이클릭 링 시스템을 포함하는 적어도 하나의 탄소 원자를 포함하는 5 내지 10 멤버의 방향족 헤테로고리(heterocycle) 링이다. 대표적인 헤테로아릴은 furan, 4H-pyran, pyrrole, imidazole, pyrazole, triazole, tetrazole, pyridine, pyrimidine, pyridazine, pyrazine, triazine, thiophene, ozaxole, isoxazole, thiazole, isothiazole, oxadiazole, 1H-azepine benzofuran, benzothiophene, quinoline, indole, benzoxazole, benzimidazole, benzothiazole, cinnoline, phthalazine, quinazoline, purine, pyrazolopyridine, pyrazolopyrimidine, imidazopyridine, benzotriazole, indazole, triazopyridine 등이다.
본 명세서에서 사용된 "헤테로사이클(헤테로고리)" 또는 “헤테로사이클로알킬”은 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4의 헤테로원자를 함유하는 포화된 5- 내지 7-멤버의 모노사이클릭, 또는 7- 내지 12-멤버의 바이사이클릭 링(고리)를 의미하며, 여기에서 질소 및 황 헤테로원자는 선택적으로 산화될 수 있고, 질소 헤테로원자는 선택적으로 사가화(quaternized)될 수 있다. 대표적인 헤테로고리는 옥시란(oxiran), 옥세탄(oxetan), 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran), 테트라하이드로피란(tetrahydropyran), 1,4-디옥산(1,4-dioxane), 아지리딘(aziridine), 아제티딘(azetidine), 피롤리딘(pyrrolidine), 피페리딘(piperidine), 피페라진(piperazine), 피롤리디논(pyrrolidinone), 히단토인(hydantoine), 발레롤락탐(valerolactam), 티이란(thiirane), 티에탄(thietane), 테트라하이드로티오펜(tetrahydrothiophene), 테트라하이드로티오피란(tetrahydrothiopyra), 모포린(morpholine), 테트라하이드로피리딘(tetrahydropyridine), 테트라하이드로피리미딘(tetrahydropyrimidine) 등을 포함한다. 헤테로사이클에는 헤테로고리 중 일부가 벤젠 또는 cyclopenta-1,3-diene 고리에 융합한 바이사이클릭 링이 포함된다. 헤테로고리는 헤테로원자 또는 탄소 원자에 의하여 부착될 수 있다. 또한, 헤테로사이클에는 앞서 언급된 폴리사이클릭 고리의 1개 이상의 탄소 원자가 질소, 산소 또는 황 원자로 치한된 융합된(fused) 바이사이클릭(bicyclic) 고리, 스피로 고리 및 가교된(bridged) 바이사이클릭 고리가 포함된다. 이러한 예로는, 예를 들어, 헤테로원자가 질소일 경우 octahydrocyclopenta[c]pyrrole, octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole, decahydroisoquinoline, decahydro-2,6-naphthyridine 등과 같은 융합된(fused) 헤테로바이사이클릭(bicyclic) 고리; 2-azaspiro[3.3]heptane, 2,6-diazaspiro[3.3]heptane, 2-azaspiro[3.4]octane, 2,6-diazaspiro[3.4]octane, 2-azaspiro[3.5]nonane, 2,7-diazaspiro[3.5]nonane, 2-azaspiro[4.4]nonane, 2,7-diazaspiro[4.4]nonane, 8-azaspiro[4.5]decane, 2,8-diazaspiro[4.5]decane, 3-azaspiro[5.5]undecane, 3,9-diazaspiro[5.5]undecane 등과 같은 헤테로스피로 고리; 및 2-azabicyclo[2.1.1]hexane, 2-azabicyclo[2.2.1]heptane, 2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane, 2-azabicyclo[2.2.2]octane, 2,5-diazabicyclo[2.2.2]octane 등과 같은 가교된(bridged) 헤테로바이사이클릭 고리를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.
"페닐에 융합된 헤테로고리"는 페닐 고리의 두 개의 인접한 탄소 원자에 부착된 헤테로고리를 의미하며, 여기에서 헤테로고리는 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "하이드록시알킬"은 -CH2OH, -CH2CH2OH, -(CH2)2CH2OH, -(CH2)3CH20H, -(CH2)4CH20H, -(CH2)5CH2OH, -CH(OH)-CH3, -CH2CH(OH)CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는, 하나 이상의 수소 원자가 하이드록시로 치환된 알킬을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "설포닐"은 -S03H를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "설포닐알킬"은 -SO2-CH3, -SO2-CH2CH3, -SO2-(CH2)2CH3, -SO2-(CH2)3CH3, -SO2-(CH2)4CH3, 및 -S02-(CH2)5CH3을 포함하는 -S02-(알킬)을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "설피닐알킬(sulfinylalkyl)"은 -SO-CH3, -SO-CH2CH3, -SO-(CH2)2CH3, -SO-(CH2)3CH3, -SO-(CH2)4CH3, -SO-(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하는, -SO-(알킬)을 의미하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
"티오알킬"은 -S-CH3, -S-CH2CH3, -S-(CH2)2CH3, -S-(CH2)3CH3, -S-(CH2)4CH3, -S-(CH2)5CH3, 및 이와 유사한 것을 포함하며, 여기에서 알킬은 위에서 정의된 것과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치환된"(substituted)은 치환되는 부분(예를 들어, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클 또는 사이클로알킬)의 수소 원자가 치환기로 대체되는 것을 의미한다. 일 실시예에서, 치환되는 그룹의 각각의 탄소원자는 2개의 치환기 이상 치환되지 않는다. 다른 실시예에서, 치환되는 그룹의 각각의 탄소원자는 1개의 치환기 이상 치환되지 않는다. 케토치환기의 경우, 두개의 수소원자는 이중결합에 의해 탄소에 부착되는 산소로 치환된다. 치환체와 관련하여 별도의 기재가 없는 한, 본 발명의 치환체로는 할로겐, 하이드록실, (저급)알킬, 할로알킬, 모노- 또는 디-알킬아미노, 아릴, 헤테로사이클, -NO2, -NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, -NRaSO2Rb, -ORa, -CN, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRb, -OC(=O)Ra, -OC(=O)ORa, -OC(=O)NRaRb, -NRaSO2Rb, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -SO2Ra, -S(O)Ra, -SO(N)Ra (예를 들어, sulfoximine), -(Ra)S=NRb (예를 들어, sulfilimine) 및 -SRa가 이용될 수 있으며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 하이드로겐, 할로겐, 아미노, 알킬, 할로알킬, 아릴 또는 헤테로사이클이고, 또는 부착된 질소원자와 같이 Ra와 Rb는 헤테로사이클 형태가 될 수 있다. 여기서 Ra와 Rb는 결합된 원자에 따라 복수 개일 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어 치환체와 관련된 별도의 기재가 없는 한, 본 발명의 치환체는 할로겐, 하이드록실, C1-3알킬, -ORa, -CN, 디-알킬아미노, 아릴, 또는 헤테로사이클이며, 여기에서 Ra는 하이드로겐, 할로겐, 아미노, 알킬, 할로알킬, 아릴 또는 헤테로사이클이다.
본 발명에 있어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 여기서 언급한 화합물들에서 발견되는 특정 치환체에 의존하는 비교적 비독성 산 및 염기로 제조된 활성 화합물의 염들을 포함한다. 본 발명의 화합물들은 상대적으로 산성 기능성을 포함할 때, 염기(base) 부가 염들은 충분한 양의 원하는 염기, 순수한 또는 적당한 비활성(inert) 용매로 그러한 화합물들의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가 염의 예들은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노 또는 마그네슘 염 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물들은 상대적으로 염기성 기능성을 포함할 때, 산성 부가 염들은 충분한 양의 원하는 산, 순수한 또는 적당한 비활성(inert) 용매로 그러한 화합물들의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산성 부가 염의 예들은 초산, 프로피온산, 이소부틸산, 옥살릭산(oxalic), 마레익(maleic), 말로닉(malonic), 안식향성, 숙신산, 수버릭(suberic), 푸마릭(fumaric), 만데릭(mandelic), 프탈릭(phthalic), 벤젠설포닉(benzenesulfonic), p-토릴설포닉(tolylsulfonic), 구연산, 주석산, 메탄솔포닉(methanesulfonic), 및 그 유사체를 포함하는 상대적으로 비독성 유기산에서 유래한 염들 뿐만 아니라, 염화수소, 브롬화 수소, 질산, 탄산, 일수소탄산(monohydrogencarbonic), 인산(phosphoric), 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소 또는 아인산(phosphorous acid) 및 그 유사체를 포함한다. 또한 알긴네이트(arginate)와 그 유사체와 같은 아미노산의 염 및 글루쿠로닉(glucuronic) 또는 갈락투노릭(galactunoric) 산들과 그 유사체와 같은 유기산의 유사체를 포함한다. 본 발명의 일부 특정한 화합물들은 화합물들을 염기성 또는 산성 부가(addition) 염들로 전환하게 하는 염기성 및 산성 기능성 모두를 갖는다.
본 명세서에서 사용된 "유효량"은 MLKL 관련 질환의 진행을 늦추거나 또는 최소화하거나, MLKL 관련 질환의 치료 또는 관리에서 치료상 이점을 제공하기에 충분한 본 발명의 화합물의 양을 말한다. "유효량"은 또한 생체외(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 어떤 쪽이든 MLKL 활성을 억제 또는 줄이기에 충분한 양을 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 “치료”는 예방 치료(preventative treatment), 완화 치료(palliative treatment), 및/또는 회복 치료(restorative treatment) 중 어느 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어인 "본 발명의 화합물"은 화학식 1 또는 2 각각의 화합물들뿐만 아니라, 이들의 클라드레이트(clathrates), 수화물, 용매화물, 또는 다형체를 포함하는 의미이다. 또한 용어 “본 발명의 화합물”은 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 언급되지 않을 경우 본 발명 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염도 포함하는 의미이다. 일 실시예에 본 발명의 화합물은 입체이성질체적으로 순수한 화합물들(예를 들어, 다른 입체이성질체가 실질적으로 없는(예를 들어, 85% ee 이상, 90% ee 이상, 95% ee 이상, 97% ee 이상, 또는 99% ee 이상))로 존재할 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 그의 염이 호변이성적(tautomeric) 이성질체 및/또는 입체이성질체(예를 들어, 기하이성질체(geometrical는omer) 및 배좌 이성질체(conformational는omers))일 경우 그들의 분리된 이성질체 및 혼합물 각각 또한 본 발명의 화합물의 범주에 포함된다. 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 구조 내에 비대칭 탄소(asymmetric carbon)를 가지고 있는 경우에, 그들의 광학 활성 화합물 및 라세믹 혼합물들 또한 본 발명의 화합물의 범위에 포함된다.
본 명세서에서 사용될 경우, 용어 "결정다형(polymorph)"은 본 발명의 화합물의 고체 결정 형태 또는 그것의 복합체를 의미한다. 같은 화합물의 다른 결정다형은 다른 물리적, 화학적 그리고/또는 스펙트럼적 특성을 보인다. 물리적 특성 측면의 차이점으로는 안정성(예를 들어, 열 또는 빛 안정성), 압축성과 밀도(제제화 및 생산물 제조에 중요함), 그리고 용해율(생물학적 이용률에 영향을 줄 수 있음)을 포함하나, 이에 한정되지 아니한다. 안정성에서 차이는 화학반응성 변화들(예를 들어, 또 다른 다형으로 구성되었을 때보다 하나의 다형으로 구성되었을 때 더 빠르게 변색이 되는 것 같은 차별적 산화) 또는 기계적인 특징들(예를 들어 동역학적으로 선호된 다형체로서 저장된 정제 파편들이 열역학 적으로 더 안정된 다형으로 변환) 또는 둘 다(하나의 다형의 정제는 높은 습도에서 더 분해에 예민)를 야기한다. 결정다형의 다른 물리적 성질들은 그들의 가공에 영향을 줄 수 있다. 예를 들어, 한 결정다형은 또 다른 결정다형에 비하여, 예를 들어, 그것의 형태 또는 입자의 크기 분포에 기인하여 용매화합물을 형성할 가능성이 많을 수 있거나, 여과 또는 세척이 더 어려울 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "용매 화합물"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 용매를 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다. 바람직한 용매들은 휘발성이고, 비독성이며, 인간에게 극소량 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "수화물(hydrate)"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "클라드레이트(clathrate)"은 게스트 분자(예를 들어, 용매 또는 물)를 가두어 놓은 공간(예를 들어, 채널(channel))을 포함한 결정 격자의 형태의 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다.
만약 어떠한 화합물(프로드러그(prodrug))이 체내에서 분리되어 본 발명의 화합물 또는 이의 염을 생성하게 된다면, 그러한 화합물 또한 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에서 사용되고 다르게 지적되지 않는다면, 용어 "프로드러그(prodrug)"는 활성 화합물, 특히 본 발명의 화합물을 공급하기 위해 가수분해되고, 산화되고, 생물학 조건(생체 외 또는 생체 내)하에 다른 반응을 할 수 있는 본 발명의 화합물을 의미한다. 프로드러그의 예들은, 생가수분해될수 있는(biohydrolyzable) 아미드, 생가수분해될수 있는 에스테르, 생가수분해될수 있는 카르바메이트(carbamates), 생가수분해될수 있는 탄산염, 생가수분해될수 있는 우레이드(ureides), 그리고 생가수분해될수 있는 인산염 유사체들 같은 생가수분해될수 있는 부분을 포함하는, 생가수분해되어 본 발명의 화합물을 생성하는 화합물들을 포함하나, 이러한 구체적 태양에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는 카르복시기 작용기를 가지고 있는 화합물의 프로드러드는 카르복실릭 산의 저급 알킬 에스테르이다. 카르복실릭 에스테르는 분자에 존재하는 카르복실릭 산 일부분을 에스테르화 함으로서 통상적으로 형성된다. 프로드러그는 공지된 다양한 문헌을 기초로 용이하게 제조될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "정제된(purified)"은 분리될 때, 분리체는 90% 이상 순수한 것을 의미하며, 일 실시예에서는 95% 이상 순수하고, 다른 실시 예에서는 99% 이상 순수하고, 또 다른 실시예에서는 99.9% 이상 순수한 것을 의미한다.
용어 "하이드리도(hydrido)"는 단일 -H 원자(H)를 의미하고, 기호 "H" 또는 용어 "수소"와 서로 바꾸어 사용할 수 있다.
만약 치환기가 "임의로 치환된" 또는 “선택적으로 치환된”으로 설명된다면, 상기 치환기는 (1) 치환되지 않거나 (2) 또는 정의된 치환기들 중 하나 이상으로 치환될 수 있다. 만약 치환 가능한 위치가 치환되지 않은 경우 기본(default) 치환기는 하이드리도 라디칼이다.
본 명세서에 사용된, 단수 "하나의(a)" 및 "하나의(an)"는 맥락에서 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수형 형태를 포함할 수 있다.
용어 "약학적으로 허용 가능한"은 약학적 제제로 사용하기에 적합한 것을 의미하며, 일반적으로 이러한 사용을 위하여 안전한 것으로 간주되며, 이러한 사용을 위하여 국가의 관리 기관에 의하여 공식적으로 승인되거나 한국 약전 또는 미국 약전의 명단에 있는 것을 의미한다.
본 발명의 화합물
본 발명은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000004
상기 화학식 1에서,
X는 N 또는 CH이며,
Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000005
이고,
R1은 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-R4이고, 여기에서 R1은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이고,
A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
R4는 수소, (저급)알킬, 할로-C1-6알킬, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -C(=O)NRaRb, -NRaSO2Rb, -SO2Ra, -S(O)Ra, 또는 -SO(N)Ra이며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며,
R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이며,
R3는 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기에서 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6알콕시, CN, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(O)NRaRb, -SO2Ra, -S(O)Ra, -SO(N)Ra, NO2, -N(Ra)(Rb), 아릴, 메틸로 치환된 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 메틸로 치환된 헤테로사이클로알킬 중 어느 하나 이상으로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬임.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 1에서
X는 N 또는 CH이며,
Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000006
이고,
R1은 아릴, 헤테로아릴, 또는 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며; B는 직접 연결, 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고; R4는 수소, (저급)알킬, 할로-C1-6알킬, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -SO2Ra, -S(O)Ra, 또는 -SO(N)Ra이며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 C1-6알킬, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며,
R2는 수소, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬 아릴, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
R3는 C1-5알킬, 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 R3는 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6알콕시, CN, NO2, -N(C1-3알킬)(C1-3알킬), 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 메틸로 치환된 헤테로사이클로알킬 중 어느 하나 이상으로 치환된,
화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
상기 헤테로원자로 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴로는, 예를 들어, 피롤, 피롤린, 피롤리딘, 이미다졸, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 피라졸, 피라졸린, 피라졸리딘, 트리아졸, 피리딘, 피페리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 피페라진, 트리아진 등이 있으며, 이들 중에서 본 발명의 여러 목적 상 이미다졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘 등이 바람직하며, 피라졸, 트리아졸, 피리딘 등이 본 발명의 목적상 더욱 바람직하다.
상기 문단에 있어 피리딘은 테트라하이드로피리딘을 포함하는 의미이다.
상기 헤테로원자로 하나 이상의 N을 포함하는 4환, 5환, 6환, 또는 7환(4-7환)의 헤테로사이클로알킬로는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 피롤리딘 등이 사용될 수 있으며, 이들 중에서 본 발명의 여러 목적 상 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 아제티딘 등이 바람직하다.
바람직하게, 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 1에서
X는 N 또는 CH이며,
Y는 O, NH, 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 NH이고,
R1은 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피리딘, 피레리딘, 피페라진, 또는 테트라하이드로피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 또는 피롤리딘이며; R4는 수소, -C(O)-C1-6알킬, 또는 -C(O)O-C1-6알킬이며,
R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환된,
화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
보다 바람직하게, 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 1에서
X는 N 또는 CH (바람직하게는, N)이며,
Y는 O 또는 NH (바람직하게는, O)이고,
Z은 NH이고,
R1은 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 피라졸, 트리아졸, 테트라하이드로피리딘, 또는 피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘이며; R4는 수소, -C(O)-C1-3 알킬, 또는 -C(O)O-C1-6 알킬이며,
R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시로 치환되며,
R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환된,
화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 화학식 1에 속하는 본 발명에 따른 화합물을 이용하여 MLKL을 저해 또는 분해하는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 MLKL을 저해 또는 분해하는 화합물은 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염일 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 화학식 1에 속하는 본 발명에 따른 화합물이 전체 구조 내에 형성되도록 하는 것을 특징으로 하는, MLKL을 저해 또는 분해하는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 MLKL을 저해 또는 분해하는 화합물은 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염일 수 있다.
본 발명은 또한 하기 화학식 2의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000007
상기 화학식 2에서,
X, Y, Z, R2 및 R3는 제1항의 화학식 1의 X, Y, Z, R2 및 R3와 동일하며,
R1은 -(CH2)n-, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-이고, 여기에서 n은 1 내지 10의 정수이고,
A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
linker은 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우 R1과 E3 Binder를 연결해주는 연결기이며,
E3 Binder는 E3 ligase 리간드임.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 2에서
X는 N 또는 CH이며,
Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000008
이고,
R2는 수소, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬 아릴, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
R3는 C1-5알킬, 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 R3는 치환되지 않거나 또는 C1-6 알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6 알콕시, CN, NO2, 또는 아릴 중 어느 하나 이상으로 치환되며,
R1은 아릴, 헤테로아릴, 또는 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며; B는 직접 연결, 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬인,
화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
상기 헤테로원자로 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴로는, 예를 들어, 피롤, 피롤린, 피롤리딘, 이미다졸, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 피라졸, 피라졸린, 피라졸리딘, 트리아졸, 피리딘, 피페리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 피페라진, 트리아진 등이 있으며, 이들 중에서 본 발명의 여러 목적 상 이미다졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘 등이 바람직하며, 피라졸, 트리아졸, 피리딘 등이 본 발명의 목적상 더욱 바람직하다.
상기 문단에 있어 피리딘은 테트라하이드로피리딘을 포함하는 의미이다.
상기 헤테로원자로 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬로는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 피롤리딘 등이 사용될 수 있으며, 이들 중에서 본 발명의 여러 목적 상 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 아제티딘 등이 바람직하다.
바람직하게, 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 2에서
X는 N 또는 CH이며,
Y는 O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
Z은 NH이고,
R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환되고,
R1은 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피리딘, 피레리딘, 피페라진, 또는 테트라하이드로피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 또는 피롤리딘인,
화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
보다 바람직하게, 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 화학식 2에서
X는 N 또는 CH (바람직하게는, N)이며,
Y는 O 또는 NH (바람직하게는, O)이고,
Z은 NH이고,
R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시로 치환되며,
R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환되고,
R1은 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 피라졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라하이드로피리딘, 또는 피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘인,
화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 2의 linker은 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물과 E3 ligase ligand 화합물을 연결해주는 링커로, 이러한 링커들은 알데히드, chloride, bromide, iodide, 또는 tosylate를 통한 알킬결합이나, acid를 통한 아마이드 결합 또는 amine을 통한 아마이드 결합을 통해 MLKL binder 화합물과 연결될 수 있다. 이러한 linker으로는 예를 들어, 선행 특허 US20180353501 A1, WO2019199816 A1, WO2019023553 A1, US20180125821 A1, US20190192668 A1, WO2017197056 A1, WO2019186358 A1, 및/또는 WO2018089736 A1에 개시된 링커들이 사용될 수 있다. 상기 선행 특허출원 공보에 기재된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
전형적인 일 양태에서, 링커는 2 개 내지 14 개, 15 개, 16 개, 17 개, 18 개 또는 20 개 이상의 탄소 원자의 사슬을 가지며, 이 중 하나 이상의 탄소가 O, N, S 또는 P와 같은 헤테로 원자로 대체 될 수 있다. 특정 구체 예에서, 사슬은 사슬에 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 인접 원자를 갖는다. 예를 들어, 사슬은 연속적이거나, 부분적으로 연속적이거나 비연속적일 수 있는 1 개 이상의 에틸렌 글리콜 단위를 포함 할 수있다 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 에틸렌 글리콜 단위). 특정 구체 예에서, 사슬은 독립적으로 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알케닐 또는 알키닐, 지방족, 헤테로지방족, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬 치환체인 분지를 가질 수 있는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 개의 연속 사슬을 갖는다.
다른 구체 예에서, 링커는 하나 이상의 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 락트산 및/또는 글리콜 산을 포함하거나 이러한 단위들로 구성될 수 있다. 일반적으로, 프로필렌 글리콜은 소수성을 첨가하는 반면, 에틸렌 글리콜은 친수성을 첨가한다. 젖산 세그먼트는 글리콜 산 세그먼트보다 반감기가 더 길다. 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜뿐만 아니라 블록 및 랜덤 락트산-글리콜산 모이어티는 당업계에 약학적으로 허용되는 것으로 공지되어 있으며, 원하는 반감기 및 친수성을 얻기 위해 변형 또는 배열될 수있다. 특정 측면에서, 이들 단위(unit)는 적절한 약물 특성을 달성하기 위해 필요에 따라 알킬, 헤테로지방족, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 사이클로알킬 등을 비롯한 다른 모이어티 측면에 존재하거나(flanked) 또는 산재(interspersed)될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에서, 상기 화학식 2의 linker은 직접 연결 또는 하기 화학식 6의 구조를 가질 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000009
상기 화학식 6에 있어서,
A1은 직접 연결, -C(O)-, -C(O)NH-, 또는 -S(O)2-이고,
A2는 직접 연결, O, -C(O)-, -CH(OH)-, -N(C1-3알킬)-, -(OCH2CH2)q3-, C3-8사이클로알킬, 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 (바람직하게는, 이미다졸, 트리아졸, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 아제티딘 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000010
, 더욱 바람직하게는 사이클로헥산, 이미다졸, 또는 트리아졸)이고,
A3는 직접 연결, CO, NH, CC, 바이사이클릭 구조를 가지는 헤테로사이클로알킬(바람직하게는,
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000011
,
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000012
),
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000013
,
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000014
, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000015
이고, 여기에서, X1은 N, CH 또는 C(OH)이며, X2는 O 또는 CH이고, R1은 수소, -C1-3알킬, 또는 -C1-3알킬-OH이고,
q1, q2 및 q3는 서로 독립적으로 0 내지 12의 정수 (바람직하게, q3는 0 내지 5의 정수임)임.
본 명세서에 있어, "*", "
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000016
", 또는 "L"은 다른 moiety와 연결되어 있는 것을 의미한다.
상기 linker에 있어, 왼쪽 *는 MLKL binder moiety와 연결되어 있는 것을 의미하며, 오른쪽 *는 E3 ligase ligand 화합물와 연결되어 있음을 의미한다.
바람직하게, 본 발명의 다른 양태에서, 상기 화학식 2의 linker은 하기 구조를 가진다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000017
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000018
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000019
본 발명의 바람직한 일 태양에 있어, 상기 Linker는 직쇄 알킬, PEG 등과 같은 구조보다는 5개 이상의 원소로 구성된 적어도 하나 이상의 고리를 포함하는 형태이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 2의 E3 binder는 E3 리가제 리간드를 의미하며, 본 발명에 따른 화학식 1의 MLKL binder moiety가 MLKL에 결합하고 난 후에 MLKL인 표적 단백질과 E3 ligase를 연결시키는 역할을 하고 (1 단계), E3 ligase와 복합체를 이룬 E2로부터 유비퀴틴이 표적 단백질의 라이신 (lysin)에 다중-유비퀴틴화 (poly-ubiquitination)된 후 (2 단계), 프로테아좀 (proteasome)에 의해 분해하는 과정 (3 단계)을 통해 MLKL을 분해 또는 저해하는 역할을 하게 된다. 이러한 degrader는 동일한 방법으로 재활용될 수 있다 (4 단계).
이러한 E3 ligase binder 화합물로는 예를 들어, M. Toure, C. M. Crews, Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 1966, T. Uehara et al. Nature Chemical Biology 2017, 13, 675, WO 2017/176708, US 2017/0281784, WO 2017/161119, WO 2017/176957, WO 2017/176958, WO 2015/160845, US 2015/0291562, WO 2016/197032, WO 2016/105518, US 2018/0009779, WO 2017/007612, 2018/0134684, WO 2013/106643, US 2014/0356322, WO 2002/020740, US 2002/0068063, WO 2012/078559, US 2014/0302523, WO 2012/003281, US 2013/0190340, US 2016/0022642, WO 2014/063061, US 2015/0274738, WO 2016/118666, US 2016/0214972, WO 2016/149668, US 2016/0272639, WO 2016/169989, US 2018/0118733, WO 2016/197114, US 2018/0147202, WO 2017/011371, US 2017/0008904, WO 2017/011590, US 2017/0037004, WO 2017/079267, US 2017/0121321, WO 2017/117473, WO 2017/117474, WO 2013/106646, WO 2014/108452, WO 2017/197036, WO 2017/197046, WO 2017/197051, WO 2017/197055, US 2019/0192668, US 2018/0155322, WO2021/053555 또는 WO2017-197056에 개시된 화합물들이 사용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다. 이러한 E3 binder 화합물은, 예를 들어, amine을 통한 알킬 또는 아마이드 결합을 통해 링커와 연결될 수 있으나, 본 발명은 이러한 제조 방법에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게, 본 발명에 따른 E3 ligase binder 화합물로는 예를 들어, US 2019/0192668 A1, US 2018-0155322 A1, 또는 WO 2017-197056 A1에 개시된 화합물들이 사용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다. 이러한 E3 binder 화합물은, 예를 들어, amine을 통한 알킬 또는 아마이드 결합을 통해 링커와 연결될 수 있으나, 본 발명은 이러한 제조 방법에 한정되는 것은 아니다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 E3 Binder는 *-(화학식 X)-화학식 Y이며,
여기에서 화학식 X는 존재하지 않거나 또는 화학식 Y와 상기 화학식 2의 나머지 부분을 연결해주는 moiety이고,
화학식 Y는 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 또는 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety이다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에서, 본 발명에 따른 화학식 Y는 CRBN (cereblon) E3 Ubiquitin Ligase binding moiety이며, 예를 들어, US 2019-0192668에 개시된 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety가 이용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 본 발명에 따른 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 즉, 화학식 Y는 하기 화학식 3이다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000020
상기 화학식 3에서,
상기
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000021
는 하기들 중 어느 하나이며,
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000022
X는 C(O) 또는 C(R3)2;
X1-X2는 N=N, C(R3)=N 또는 C(R3)2―C(R3)2;
각 R1은 서로 독립적으로, 할로겐, 니트로, NH2, OH, C(O)OH, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 알콕시;
각 R3는 서로 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이고, 이때 알킬은 치환되지 않거나, 선택적으로 C6-C10 아릴 또는 5- to 10-멤버 헤테로아릴로 치환되고;
각 R3′는 서로 독립적으로 C1-C3 알킬;
각 R4는 서로 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬; 또는 2개의 R4는 그들을 구성하는 탄소로 서로 연결되어 C(O), C3-C6 사이틀로알킬, 또는 N 및 O 중에서 선택된 하나 또는 둘의 헤테로원자를 포함하는 4-, 5-, 또는 6-멤버 헤테로사이클;
R5는 D (deuterium), H, C1-C3 알킬, F, 또는 Cl;
t는 0, 1, 또는 2;
m는 0, 1, 2 또는 3; 및
n 및 n'는 서로 독립적으로는 0, 1 또는 2임.
예를 들어, 상기 화학식 3으로는 하기 구조를 가진 moiety들이 이용될 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000023
보다 바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 화학식 3은 하기 구조를 가진다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000024
바람직하게, 본 발명의 일 태양에서, 본 발명에 따른 화학식 Y는 VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety이며, 예를 들어, US 2019-0192668에 개시된 VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety가 이용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 본 발명에 따른 VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 즉, 화학식 Y는 하기 화학식 4이다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000025
상기 화학식 4에서,
각 R5 및 R6는 서로 독립적으로 OH, SH, 알킬, 또는 치환된 알킬이며, 또는 R5 및 R6는 결합되어 카르보닐을 형성할 수 있고;
R7는 H, 알킬 또는 치환된 알킬;
E는 직접결합(bond), C=O, 또는 C=S;
G는 직접결합(bond), 알킬, 치환된 알킬, -COOH, CO, 또는 C=N-R8, 여기에서, R8는 H, CN, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시 또는 치환된 알콕시;
M는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000026
;
각 R9 및 R10는 서로 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 하이드록시알킬, 치환된 하이드록시알킬, 티오알킬, 치환된 티오알킬, 링커 또는 X에 연결된 디설파이드(disulphide), 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 또는 할로알킬; 또는 R9 및 R10는 그들의 탄소로 연결되어 사이클로알킬, 또는 치환된 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R11는 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 알콕시, 치환된 알콕시, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 아릴, 치환된 아릴, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000027
;
R12는 H, 알킬, 또는 치환된 알킬;
R13는 H, 알킬, 치환된 알킬, 알킬카보닐, 치환된 알킬카보닐, (사이클로알킬)알킬카보닐, 치환된 (사이클로알킬)알킬카보닐, aralkylcarbonyl, 치환된 aralkylcarbonyl, 아릴, 치환된 아릴카보닐, (헤테로사이클)카보닐, 치환된 (heterocyclyl)carbonyl, aralkyl, 치환된 aralkyl, (oxoalkyl)carbamate 또는 치환된 (oxoalkyl)carbamate;
각 R14는 서로 독립적으로 H, 할로알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알킬, 치환된 알킬, 헤테로사이클 또는 치환된 헤테로사이클;
각 R15는 H, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 알콕시, 치환된 알콕시, 헤테로사이클, 또는 치환된 헤테로사이클;
각 R16는 서로 독립적으로 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 할로알킬, 치환된 할로알킬, CN, 할로알콕시, 또는 치환된 할로알콕시;
각 R25는 서로 독립적으로 H 또는 알킬, 치환된 알킬; 또는 2개의 R25는 서로 연결되어 oxo 또는 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬 그룹을 형성하고;
R23는 H 또는 OH;
Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 서로 독립적으로 C 또는 N; 및
o는 0, 1, 2, 3, 또는 4임.
예를 들어, 상기 화학식 4로는 하기 구조를 가진 moiety가 이용될 수 있다.
[화학식 4a]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000028
상기 화학식 4a에 있어,
M는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000029
;
각 R9 및 R10는 서로 독립적으로 H; 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 하이드록시알킬, 치환된 하이드록시알킬, 티오알킬, 치환된 티오알킬, 링커 또는 X에 연결된 디설파이드(disulphide), 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 또는 할로알킬; 또는 R9 및 R10는 그들의 탄소로 연결되어 사이클로알킬, 또는 치환된 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R11는 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 알콕시, 치환된 알콕시, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 아릴, 치환된 아릴, 또는
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000030
;
R12는 H, 알킬, 또는 치환된 알킬;
R13는 H, 알킬, 치환된 알킬, 알킬카보닐, 치환된 알킬카보닐, (사이클로알킬)알킬카보닐, 치환된 (사이클로알킬)알킬카보닐, aralkylcarbonyl, 치환된 aralkylcarbonyl, 아릴, 치환된 아릴카보닐, (헤테로사이클)카보닐, 치환된 (heterocyclyl)carbonyl, aralkyl, 치환된 aralkyl, (oxoalkyl)carbamate 또는 치환된 (oxoalkyl)carbamate;
X는 O 또는 S;
Y는 H, 메틸 또는 에틸;
R17는 H, 메틸, 에틸, 하이드록시메틸 또는 사이클로프로필임.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 화학식 4는 하기 구조를 가진다.
[화학식 4b]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000031
상기 화학식 4b에 있어,
R9, R10, R11, R12, R13, X, Y 및 R17의 정의는 화학식 4a에서 언급된 바와 동일함.
보다 바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 화학식 4는 하기 구조를 가진다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000032
바람직하게, 본 발명의 일 태양에서, 본 발명에 따른 화학식 Y는 CRBN (cereblon) E3 Ubiquitin Ligase binding moiety이며, 예를 들어, wo2019/186358에 개시된 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety가 이용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 본 발명에 따른 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 즉, 화학식 Y는 하기 화학식 5이다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000033
상기 화학식 5에서,
X는 CH 또는 N이고,
A는 C1-3알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기에서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 치환되지 않거나 하나 이상의 수소가 =O, C1-3알콕시, C1-3알킬, 할로겐, 니트릴, 니트로, 디-C1-2알킬아민, -COOH, 및 -COO-C1-2알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 치환기로 치환되며,
B는 직접 연결 또는 -C(O)NH-임.
본 발명의 바람직한 일 태양에서, 상기 화학식 5로는 다음의 구조를 가진 화합물들이 이용될 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000034
상기 구조들에 있어, R6 및 R7은 서로 독립적으로 수소, 할로겐, -C1-3알킬, 또는 -C1-3알콕시임.
본 발명의 바람직한 일 태양에 있어, 상기 화학식 5로는 하기 구조를 가진 moiety가 이용될 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000035
바람직하게, 본 발명의 일 태양에서, 본 발명에 따른 화학식 Y는 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety이며, 예를 들어, WO 2018/118598에 개시된 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety가 이용될 수 있다. 상기 선행 특허 공보 또는 논문들에 개시된 내용들은 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 본 발명에 따른 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 즉, 화학식 Y는 하기와 같은 구조를 가질 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000036
상기 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety에 있어,
R1는 H 또는 알킬;
R2는 H 또는 알킬;
R3는 H, 알킬, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬;
R4는 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬이며, 이들은 선택적으로 앞서 설명된 1-3 치환체들로 치환되고,
R5 및 R6는 서로 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이고, 보다 바람직하게, R5 및 R6는 함께 pyrrolidine 또는 piperidine 고리를 형성하고, 이들은 선택적으로 1-2개의 치환체로 치환되며, 치환체는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기에서 치환체들은 융합하여 다른 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며;
R7는 -C(O)NH-R4임.
바람직하게, 본 발명의 일 태양에 있어, 상기 E3 Binder의 구조(*-(화학식 X)-화학식 Y) 내에 존재하는 화학식 X는 직접 연결 또는 화학식 7이다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000037
상기 화학식 7에 있어서,
A1은 직접 연결, CO, 또는 -C(O)NH-이고,
A2 및 A3는 서로 독립적으로 직접 연결, O, CO, NH, CC, 페닐, 헤테로사이클로알킬 (바람직하기는, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘)이고,
q1, q2 및 q3는 서로 독립적으로 0 내지 3의 정수임.
본 발명의 일 태양에 있어, 바람직하게, 상기 E3 Binder의 구조 내의 화학식 X는 직접 연결이거나 하기 구조일 수 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000038
본 발명자들은 앞서 언급한 목적을 달성하기 위하여, 특히 MLKL 저해, 분해 및/또는 결합 활성이 우수하고 이들에 대한 선택성 또한 높으며, 바람직하게는 MLKL을 효과적으로 분해하여 결과적으로 MLKL 관련 질환의 치료 또는 예방 효과는 좋고 다른 부작용이 감소한 화합물들 및 이들의 용도를 확보하기 위하여 다양한 화합물들을 합성 후 다양한 평가실험을 수행하였다. 최종적으로 본 발명의 화합물들이 본 발명의 목적에 적합함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
비-한정적인, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물의 예로는 하기 표 1의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염이 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000039
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000040
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000041
비-한정적인, 본 발명에 따른 화학식 2의 화합물의 예로는 하기 표 2의 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 있다.
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000042
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000043
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000044
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000045
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000046
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000047
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000048
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000049
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000050
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000051
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000052
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000053
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000054
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또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적으로 유효한 양, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적으로 유효한 양을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 질병(disease) 또는 상태(condition)를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 질병 또는 상태(condition)는 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환(예를 들어, 당뇨병, 고혈압, 고지혈병, 심장병 등), 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 또는 회장염이다. 본 발명의 다른 양태에서, 상기 질병 또는 상태(condition)는 비알코올성 지방간염, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 뇌졸증, 난소암, 신 손상, 지방간 또는 염증이다.
즉, 본 발명은 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 이용하는 것을 특징으로 하는 의약 용도를 제공한다. 일 양태에서, 본 발명의 의약 용도는 본 명세서에서 설명된 질병 또는 상태의 치료 또는 예방 용도이다.
본 발명 화합물의 의약 용도 및 치료 방법
본 발명은 하나 이상의 상기와 같은 화합물의 치료적으로 유효한 양을 개체에게 투여함으로써 하기 질병 또는 상태(condition)를 갖거나 갖기 쉬운 개체에서 하기 질병 또는 상태(condition)를 치료하는 방법을 더 제공한다. 일 양태에서, 상기 치료는 예방 치료(preventative treatment)이다. 또 다른 양태에서, 상기 치료는 완화 치료(palliative treatment)이다. 또 다른 양태에서, 상기 치료는 회복 치료(restorative treatment)이다.
1. 질병 또는 상태(Condition)
본 발명의 MLKL 활성 저해용 화합물들은 다양한 치료학적 또는 예방학적 용도에 유용하다. 이러한 화합물들은 MLKL 활성을 억제 또는 저해하기 위하여 사용될 수 있으며, 더불어 MLKL로 매개되는 세포괴사를 억제하기 위해 사용될 수 있다. 또한 MLKL 관련 질환의 치료를 위해서 또는 이러한 질병의 악화를 방지하기 위하여 사용될 수 있다. 따라서 본 발명은 세포 내 MLKL 활성을 저해, 억제, 또는 분해하는 방법을 제공한다. 이러한 방법에서 상기 세포는 본 발명의 화합물의 유효한 양과 접촉하게 된다. 일 실시예에서, 상기 세포는 개체 내에 존재한다. 본 발명의 방법은 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 치료적으로 또는 예방학적으로 유효한 양의 MLKL 활성 저해제를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 MLKL 관련 질환의 세포 내에서 MLKL 활성을 저해, 분해 또는 억제하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환(예를 들어, 당뇨병, 고혈압, 고지혈증, 심장병 등), 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 회장염 등의 세포 내에서 MLKL 활성을 저해하기 위하여 이용될 수 있다. 본 발명의 다른 태양에서, 본 발명은 비알코올성 지방간염, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 뇌졸증, 난소암, 신 손상, 지방간 또는 염증의 세포 내에서 MLKL 활성을 저해하기 위하여 이용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 본 명세서에서 설명되는 약학 조성물의 형태로 상기 개체에 투여될 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 개체 내에서 MLKL 관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 이러한 MLKL 관련 질환으로는 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환, 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 회장염 등을 예시할 수 있다. 본 발명의 다른 태양에서, 상기 MLKL 관련 질환은 비알코올성 지방간염, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 뇌졸증, 난소암, 신 손상, 지방간 또는 염증이다. 이러한 방법은 MLKL 활성을 저해하기 위해 충분한 양, 즉, 치료학적으로 유효한 양의 본 발명 화합물을 치료가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
2. 개체 (Subjects)
본 발명에 따라 치료될 적합한 개체는 포유동물 개체를 포함한다. 본 발명에 따른 포유동물은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 인간, 개(canine), 고양잇과동물(feline), 소(bovine), 염소(caprine), 말(equine), 양(ovine), 돼지(porcine), 설치류(rodents), 토끼목(lagomorphs), 영장류(primates) 등을 포함하고, 자궁 내의(in utero) 포유동물을 포함한다. 개체는 양쪽 성(性) 모두 일 수 있고 발생(development)의 임의의 단계일 수 있다.
일 양태에서, 본 발명에 따른 치료될 적합한 개체는 인간이다.
3. 투여 및 투여량 (Administration 및 Dosing)
본 발명의 화합물은 일반적으로 치료적으로 유효한 양이 투여된다.
본 발명의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의하여 이러한 경로에 적당한 약학 조성물의 형태, 그리고 의도된 치료를 위하여 효과적인 투여량으로 투여될 수 있다. 효과적인 투여량은 단일 또는 분할 투여로 일반적으로 약 0.001 내지 약 100 mg/체중kg/일이고, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 50 mg/kg/일이다. 나이, 종, 및 치료될 질병 또는 상태(condition)에 따라 이 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 적합할 수 있다. 다른 경우에는, 여전히 더 큰 투여량이 해로운 부작용없이 사용될 수 있다. 더 큰 투여량은 하루 동안 투여를 위하여, 여러 작은 투여량으로 분할될 수 있다.
약학 조성물, 제형 및 투여 경로
상기 설명된 질병 또는 상태(condition)의 치료를 위하여, 본 명세서에서 설명된 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 다음과 같이 투여될 수 있다.
구강 투여(Oral administration)
본 발명의 화합물은 구강으로 투여될 수 있으며, 구강은 연하(swallowing)를 포함하는 개념이다. 구강 투여에 의하여 본 발명의 화합물이 위장관(gastrointestinal tract)에 들어가거나, 예를 들어, 구강(buccal) 또는 설하(sublingual) 투여와 같이, 입으로부터 혈류로 직접적으로 흡수될 수 있다.
구강 투여를 위한 적합한 조성물은 고형상, 액상, 겔(gel), 또는 파우더 형상일 수 있으며, 정제(tablet), 로젠지(lozenge), 캡슐(capsule), 과립제, 산제 등의 제형을 가질 수 있다.
구강 투여를 위한 조성물은 선택적으로 장용 코팅(enteric coating)될 수 있으며, 장용 코팅을 통하여 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출을 나타낼 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 구강 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된(modified) 방출 패턴을 가진 제형일 수 있다.
비경구 투여(Parenteral Administration)
본 발명의 화합물은 혈류, 근육, 또는 내장 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여를 위한 적합한 방법은 정맥내(intravenous), 근육내(intra-muscular), 피하 동맥내(subcutaneous intraarterial), 복강내(intraperitoneal), 척추강내(intrathecal), 두개내(intracranial) 주사 등을 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치는 (바늘 및 바늘 없는 주사기를 포함하는) 주사기(injector) 및 주입 방법(infusion method)을 포함한다.
비경구 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다.
대부분의 비경구 제형은 액상 조성물이며, 이러한 액상 조성물은 본 발명에 따른 약효 성분, 염, 완충제, 등장화제 등을 포함하는 수용액이다.
비경구 제형은 또한 건조된 형태(예를 들어, 동결 건조) 또는 멸균 비-수용액으로서 제조될 수 있다. 이들 제형은 멸균수(sterile water)와 같은 적합한 비히클(vehicle)과 함께 사용될 수 있다. 용해도 증강제(solubility-enhancing agents) 또한 비경구 용액의 제조에 사용될 수 있다.
국소 투여(Topical Administration)
본 발명의 화합물은 피부 또는 경피로 국소적으로 투여될 수 있다. 이 국소 투여를 위한 제형은 로션, 용액, 크림, 젤, 하이드로젤, 연고, 폼(foam), 임플란트(implant), 패치 등을 포함한다. 국소 투여 제형을 위한 약학적으로 허용 가능한 담체는 물, 알코올, 미네랄 오일, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜 등을 포함할 수 있다. 국소 투여는 또한 전기천공법(electroporation), 이온도입법(iontophoresis), 음파영동(phonophoresis) 등에 의하여 수행될 수 있다.
국소 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다.
본 발명은 MLKL 활성을 저해, 또는 분해하여 다양한 약리 활성을 나타낼 수 있는 화합물, 이들을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물, 이들의 의약 용도(특히 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 회장염 등의 치료 또는 예방 용도) 및 이들을 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염은 안전성, 안정성 등이 다양한 측면에서 우수하고, MLKL 활성 저해, 또는 분해 측면에서의 선택성이 높아 우수한 의약 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 MLKL과 관련된 necroptosis 신호 기전을 보여주는 그림이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명이 속한 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
본 발명 화합물들의 제조
이하, 본 발명 일부 화합물들의 합성 과정을 기재하며, 하기 언급되지 않은 화합물들의 경우 출발 물질, 중간체 및/또는 반응 물질을 대체하여 유사한 방법으로 제조될 수 있다.
TDH-069 및 TDH-097의 합성
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Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 (1단계)
Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (3.0 g, 13 mmol, 1 eq.)을 DMF (50 mL)에 녹이고, Pd(dppf)Cl2 (946 mg, 1.3 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (7.3 g, 19 mmol, 1.5 eq.), 및 potassium carbonate (7.1 g, 52 mmol, 4.0 eq.)을 넣은 후 질소 존재하 80 ℃에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축하여 제거한 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4.5 g, 86%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 6.48 (s, 2H), 4.31-4.16 (m, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.86 (t, J = 12.7 Hz, 2H), 2.17-2.07 (m, 2H), 1.98-1.84 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
3-Aamino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid의 합성 (2단계)
Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4.5 g, 11 mmol, 1 eq.)을 THF/MeOH/H2O (40 mL/10 mL/10 mL)에 녹인 후, LiOH·H2O (2.3 g, 55 mmol, 5.0 eq.)을 넣고 상온에서 3 시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 반응 용매는 농축시키고 EtOAc로 희석 후 물로 추출하였다. 물층은 1N HCl 수용액으로 pH를 4~5정도로 맞춘 후, EtOAc로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 3-Aamino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (4.1 g, 96%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.41 (s, 2H), 4.47-4.28 (m, 1H), 4.13-3.97 (m, 2H), 3.07-2.82 (m, 2H), 2.13-1.97 (m, 2H), 1.88-1.64 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
(R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성
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(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (10 g, 65 mmol, 1 eq.)을 DMF (150 mL)에 녹인 후, 4-fluoroanilin (8.0 mL, 85 mmol, 1.3 eq.), HATU (37 g, 98 mmol, 1.5 eq.), 및 DIPEA (57 mL, 328 mmol, 5.0 eq.)을 넣고 상온에서 12시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축시킨 후, EA로 희석시키고 물로 씻어 주었다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼 크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (11 g, 69%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.02 (s, 1H), 7.79-7.68 (m, 2H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.43-7.27 (m, 4H), 7.17-7.08 (m, 2H), 6.49-6.43(m,1H), 5.13-5.07 (m, 1H).
(R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (3단계)
3-Aamino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (1.5 g, 3.9 mmol, 1 eq.)을 DCM (15 mL)에 녹이고, (R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (0.85 g, 3.9 mmol, 1 eq.), DCC (800 mg, 3.9 mmol, 1 eq.), DMAP (236 mg, 1.9 mmol, 0.5 eq.)을 넣은 후 상온에서 6시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DCM으로 희석시키고 물로 씻어 주었다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼 크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1.6 g, 67%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.94 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.68-7.64 (m, 2H), 7.61-7.53 (m, 2H), 7.46-7.41 (m, 3H), 7.03 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.46 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.41-4.21 (m, 5H), 2.97-2.90 (m, 2H), 2.20-2.16 (m, 2H), 1.63 (s, 9H).
(R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-069, 4단계)
(R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1.6 g, 2.5 mmol)을 DCM (15 mL)에 녹이고, 4 N HCl in dioxane (5 mL)을 천천히 첨가한후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (1.6 g)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-acetylpiperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate의 합성 (TDH-097, 5단계)
Acetic acid (0.002 mL, 0.036 mmol, 1 eq.)을 DMF (0.15 mL)에 녹이고, EDCI.HCl (7.6 mg, 0.040 mmol, 1.1 eq.), HOBt (6.0 mg, 0.040 mmol, 1 eq.), 및 DIPEA (0.031 mL, 0.18 mmol, 5 eq.)을 넣은 후, (R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.036 mmol, 1 eq.)을 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-acetylpiperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate (12 mg, 60%)를 얻었다.
TDH-066 및 TDH-070의 합성
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1'-(tert-Butyl) 5-methyl 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate의 합성 (1단계)
Methyl 2-amino-5-bromonicotinate (500 mg, 2.16 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxylate (1.0 g, 3.25 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (1.2 g, 8.66 mmol, 4.0 eq.), 및 Pd(dppf)2Cl2 (158 mg, 0.22 mmol, 0.1 eq.)을 DMF (10 mL)에 녹인 후 질소 존재하에 80 ℃에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축하여 제거한 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 1'-(tert-Butyl) 5-methyl 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate (587 mg, 82%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 4.12-4.01 (m, 2H), 3.94-3.87 (m, 3H), 3.69-3.59 (m, 2H), 2.52-2.42 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
6-Amino-1'-(tert-butoxycarbonyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylic acid의 합성 (2단계)
1'-(tert-Butyl) 5-methyl 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate (587 mg, 1.8 mmol, 1 eq.)을 THF/MeOH/H2O (8 mL/4 mL/4 mL)에 녹인후, LiOH·H2O (369 mg, 8.8 mmol, 5 eq.)을 넣고 상온에서 1 시간 반응 시켰다. 반응 종결 후 반응 용매는 농축시키고 EtOAc로 희석 후 물로 추출하였다. 모은 물층은 1N HCl 수용액으로 pH를 4~5정도로 맞춘 후, EtOAc로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 6-Amino-1'-(tert-butoxycarbonyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylic acid (585 mg)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.38 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 4.16-4.03 (m, 2H), 3.73-3.61 (m, 2H), 2.59-2.44 (m, 2H), 1.51 (s, 9H).
(R)-1'-(tert-Butyl) 5-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl) 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate (TDH-066, 3 단계)
6-Amino-1'-(tert-butoxycarbonyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylic acid (100 mg, 0.31 mmol, 1 eq.), (R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (77 mg, 0.31 mmol, 1 eq.), EDCI-HCl (66 mg, 0.34 mmol, 1.1 eq.), HOBt (53 mg, 0.34 mmol, 1.1 eq.), 및 DIPEA (0.27 mL, 1.6 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.5 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-1'-(tert-Butyl) 5-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl) 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate (35 mg, 21%)을 얻었다.
(R)-2-((4-Fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride (TDH-070, 4단계)
(R)-1'-(tert-Butyl) 5-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl) 6-amino-3',6'-dihydro-[3,4'-bipyridine]-1',5(2'H)-dicarboxylate (20 mg, 0.036 mmol)을 DCM (0.5 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 ARG-18-507 (12 mg)을 얻었고 정제없이 다음반응에서 사용하였다.
TDH-098 및 TDH-099의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000070
tert-Butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamate의 합성 (1단계)
(R)-2-((tert-Butoxycarbonyl)amino)-2-phenylacetic acid(1.00 g, 3.979 mmol)를 DCM (40 mL)에 녹이고 TEA(0.61 mL, 5.5 mmol)와 HBTU(1.66 g, 4.377 mmol) 을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-Fluoroaniline (0.37 mL, 3.97 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NH4Cl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 흰색 고체 tert-butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamate (915 mg, 2.65 mmol, 66%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 7.45 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 7.41-7.32 (m, 2H), 6.98-6.89 (m, 2H), 5.78 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 1.43 (s, 9H).
(R)-2-Amino-N-(4-fluorophenyl)-2-phenylacetamide의 합성 (2단계)
tert-butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamate (915 mg, 2.65 mmol) 를 DCM(10.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (5.0 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 흰색 고체 (R)-2-Amino-N-(4-fluorophenyl)-2-phenylacetamide (880 mg, crude)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 8.87 (s, 3H), 7.70-7.62 (m, 4H), 7.51-7.42 (m, 3H), 7.22-7.14 (m, 2H), 5.26 (s, 1H).
tert-Butyl (R)-4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamoyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate의 합성 (TDH-098, 3단계)
3-Aamino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (300 mg, 0.772 mmol)을 DMF에 녹인 후 (R)-2-Amino-N-(4-fluorophenyl)-2-phenylacetamide (216 mg, 0.772 mmol), HATU (440 mg, 1.15 mmol), 및 DIPEA (0.293 mL, 1.68 mmol)를 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 EtOAc로 희석시킨고 물로 씻은 후, 무수 MgSO4로 건조시킨 여과하였다. 유기용매는 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노란색 고체 tert-Butyl (R)-4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamoyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (427 mg, 0.694 mmol, 89%)를 얻었다.
(R)-3-Amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide의 합성 (TDH-099, 4단계)
tert-Butyl (R)-4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)carbamoyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (315 mg, 0.514 mmol)를 DCM (4 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (2 mL)을 넣은 후 상온에서 한 시간 반응시켰다. 반응종결 후 농축하고 sat. NaHCO3 용액으로 중화하여 침전물은 여과한 후 물로 씻어주었다. 여과된 물층은 EtOAc로 추출하고 농축한 뒤 침전물과 모아서 노란색 고체 (R)-3-Amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide (208 mg, 0.404 mmol, 78%)을 얻었다.
TDH-112의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000071
Methyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate의 합성 (1단계)
Methyl 2-amino-5-bromonicotinate (200 mg, 0.87 mmol, 1.0 eq.)을 DMF (17 mL)에 녹이고, Pd(dppf)Cl2 (64 mg, 0.087 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate Borane (490 mg, 1.3 mmol, 1.5 eq.), potassium carbonate (478 mg, 3.5 mmol, 4.0 eq.)을 넣은 후 질소 존재하 80 ℃에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축하여 제거한 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 Methyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate (291 mg, 84%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39-8.35 (m, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.62 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.33-4.19 (m, 1H), 3.92 (s, 1H), 2.98-2.87 (m, 1H), 2.23-2.11 (m, 1H), 2.03-1.88 (m, 1H), 1.51-1.48 (m, 1H).
2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinic acid의 합성 (2단계)
Methyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate (281 mg, 0.73 mmol, 1 eq.)을 THF/MeOH/H2O (2 mL/1 mL/1 mL)에 녹인 후, LiOH·H2O (153 mg, 3.7 mmol, 5 eq.)을 넣고 상온에서 5 시간 반응시켰다. 반응 종결 후, 반응 용매는 농축시키고 EtOAc로 희석 후 물로 추출하였다. 물층은 1N HCl 수용액으로 pH를 4~5정도로 맞춘 후, EtOAc로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinic acid (259 mg, 92%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 8.49-8.40 (m, 1H), 8.31-8.21 (m, 1H), 8.21-8.15 (m, 1H), 7.89-7.78 (m, 1H), 4.45-4.26 (m, 1H), 4.14-3.98 (m, 1H), 3.39-3.18 (m, 2H), 3.04-2.81 (m, 2H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.86-1.71 (m, 2H), 1.54-1.28 (m, 2H), 1.41 (d, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate의 합성 (3단계)
2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinic acid (50 mg, 0.13 mmol, 1 eq.)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고, (R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (32 mg, 0.13 mmol, 1 eq.), DCC (27 mg, 0.13 mmol, 1 eq.), DMAP (8 mg, 0.07 mmol, 0.5 eq.)을 넣은 후 상온에서 6 시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DCM으로 희석시키고 물로 씻어 주었다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼 크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate (71 mg, 92%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43-8.39 (m, 1H), 8.28-8.25 (m, 1H), 8.24-8.21 (m, 1H), 7.99-7.92 (m, 1H), 7.72-7.68 (m, 1H), 7.62-7.58 (m, 2H), 7.49-7.44 (m, 4H), 7.04-6.96 (m, 2H), 6.50-6.48 (m, 1H), 6.40-6.33 (m, 2H), 4.36-4.19 (m, 3H), 2.97-2.83 (m, 2H), 2.21-2.09 (m, 2H), 2.02-1.87 (m, 3H), 1.51 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 2-amino-5-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate hydrochloride의 합성 (TDH-112, 4단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 2-amino-5-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate (60 mg, 0.098 mmol)을 DCM (1.5 mL)에 녹이고, 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한후 상온에서 30 분간 교반하였다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 2-amino-5-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)nicotinate hydrochloride (55 mg)을 얻었다.
TDH-180, 181, 및 182의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000072
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000073
methyl 3-amino-6-((trimethylsilyl)ethynyl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1 단계)
methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (2 g, 8.66 mmol)를 DMF (10 mL)에 녹이고, Pd(PPh3)4 (508 mg, 0.44 mmol), CuI (84 mg, 0.44 mmol), 및 TEA (4.82 mL, 34.64 mmol)를 넣어주었다. Ethylnyltrimethylsilane (1.80 mL, 12.98 mmol)를 넣어준 다음 질소 존재하에서 120 ℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 종결 후 혼합물은 물로 희석하고 DCM (50 mLＸ4)로 추출을 하였다. 모은 유기용매층은 소금물로 씻은 후 무수 MgSO4로 건조 한 후 여과하였다. 유기층은 감압농축한 후, 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 methyl 3-amino-6-((trimethylsilyl)ethynyl)pyrazine-2-carboxylate을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.36 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 0.30-0.25(m, 9H)
methyl 3-amino-6-ethynylpyrazine-2-carboxylate의 합성 (2 단계)
methyl 3-amino-6-((trimethylsilyl)ethynyl)pyrazine-2-carboxylate (1.73 g, 6.94 mmol)를 MeOH(10 mL)에 녹이고, K2CO3 (719 mg, 5.20 mmol)를 넣어준 다음 상온에서 1시간 동안 반응하였다. 반응 종결 후 용매를 농축한 후, 남아있는 K2CO3를 여과하고 MeOH로 씼어 주었다. 여과액은 농축 후 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 methyl 3-amino-6-ethynylpyrazine-2-carboxylate을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.37 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.19 (s, 1H).
tert-butyl 4-azidopiperidine-1-carboxylate의 합성 (3 단계)
tert-butyl 4-bromopiperidine-1-carboxylate (1 g, 3.79 mmol)를 DMF (1 mL)에 녹이고, Sodium azide (984 mg, 15.14 mmol) 넣어준 다음 80℃에서 12시간 반응시켰다. 반응 종결 후, 물로 희석하고 EtOAc로 추출 한후, 소금물로 씻어주었다. 모은 유기층에 무수 MgSO4로 잔류 물을 건조해준 후 여과 하였다. 유기층을 농축한 후, 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 (EtOAc/Hexane=10%) 목적하는 tert-butyl 4-azidopiperidine-1-carboxylate을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 3.90-3.74 (m, 2H), 3.62-3.50 (m, 1H), 3.15-3.02 (m, 2H), 1.95-1.78 (m, 2H), 1.61-1.46(m, 2H), 1.45-1.35 (m, 9H).
methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (4 단계)
methyl 3-amino-6-ethynylpyrazine-2-carboxylate (819 mg, 4.62 mmol)과 tert-butyl 4-azidopiperidine-1-carboxylate (1.25 g, 5.55 mmol)를 물과 1-butanol 혼합용액에 녹이고, Sodium ascorbate (366 mg, 1.85 mmol), 및 CuSO4 (146 mg, 0.92 mmol)를 가한 후 12시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후 EtOAc로 희석시키고 물로 씻어주었다. 모은 유기층은 무수 MgSO4로 잔류 물을 건조한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 (EtOAc/Hexane=70%) 목적하는 methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 9.12-9.09 (m, 1H), 8.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.74-4.66 (m, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.03-4.01 (s, 3H), 2.98 (s, 2H), 2.29-2.21 (m, 2H), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.28 (m, 9H).
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid의 합성 (5 단계)
methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1.67 g, 4.14 mmol)를 Methanol (5 mL), H2O (5 mL), 및 THF(15 mL)의 혼합 용매에 녹이고, Lithium hydroxide monohydrate (521 mg, 12.4 mmol) 를 넣어준 다음 상온에서 1시간 동안 반응하였다. 반응용액을 농축한 후, 물에 녹인 후 1N HCl를 이용하여 pH를 3으로 맞춰준다. EtOAc로 추출한 후, 무수 MgSO4로 잔류 물을 건조하고 여과하였다. 유기층은 농축하여 목적하는 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid 얻었다.
1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 9.16 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 4.80-4.45 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.30-2.88 (m, 2H), 2.32-2.25 (m, 2H), 2.10-1.85 (m, 3H), 1.51 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (TD-180, 6 단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (30 mg, 0.08 mmol)를 DCM(2 mL)에 녹이고, ARG-19-146 (20 mg, 0.08 mmol), DMAP(5 mg, 0.04 mmol), 및 DCC(16 mg, 0.08 mmol)를 넣어준 다음 12시간 동안 상온에서 반응하였다. 반응 종결 후 DCM과 H2O으로 추출을 한 후, 유기층은 무수 MgSO4로 잔류 물은 건조 하고 여과 하였다. 유기층을 농축한 후, 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 (EtOAc/Hexane=50%)목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (TD-181, 7 단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (361 mg, 0.59 mmol)를 DCM (1 mL)에 녹이고, 4 M HCl in dioxane(2.0 mL)를 넣은 후 상온에서 1 h 동안 교반하였다. 반응용매를 농축하고 물에 녹인 후 포화 NaHCO3 수용액을 이용하여 중화한 후 EA로 추출하였고, 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 를 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-methylpiperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (TD-182, 8 단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 0.03 mmol)을 MeOH(0.40 mL)에 녹이고, formaldehyde (0.001 mL, 0.05 mmol), 및 AcOH (0.10 mL)를 넣어주고 1시간 동안 교반하였다. NaBH3CN (11 mg, 0.18 mmol)를 넣어주고 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 5% K2CO3 를 넣어 반응 종결 시킨 후, EtOAc으로 추출하고, 모은 유기층은 무수 MgSO4으로 잔류 물을 건조해준 후 여과하였다. 유기층을 농축한 후, 실리카겔 컬럼그로마토그래피로 분리 정제하여 (DCM/MeOH=6%) 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-methylpiperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 얻었다.
TDH-183의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000074
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000075
Methyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (40 mg, 0.17 mmol, 1 eq.)을 DMF (1 mL)에 녹이고, Pd(dppf)Cl2 (13 mg, 0.017 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 4-(5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate (101 mg, 0.26 mmol, 1.5 eq.), 및 potassium carbonate (95 mg, 0.69 mmol, 4.0 eq.)을 넣은 후 질소 존재하 80 ℃에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축하여 제거한 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 Methyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.79-8.70 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.17-8.05 (m, 1H), 6.78-6.71 (m, 1H), 6.43 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.66-3.58 (m, 8H), 1.51 (s, 9H).
3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylic acid의 합성 (2단계)
Methyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg, 0.23 mmol, 1 eq.)을 THF/MeOH/H2O (1.0 mL/0.2 mL/0.2 mL)에 녹인 후, LiOH·H2O (48 mg, 1.1 mmol, 5.0 eq.)을 넣고 상온에서 1 시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 반응 용매는 농축시키고 EtOAc로 희석 후 물로 추출 하였다. 물층은 1N HCl 수용액으로 pH를 4~5정도로 맞춘 후, EtOAc로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (45 mg, 49%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.75 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.31-8.20 (m, 1H), 6.95 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.71-3.50 (m, 8H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (3단계)
3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (45 mg, 0.11 mmol, 1 eq.)을 DCM (1 mL)에 녹이고, ARG (28 mg, 0.11 mmol, 1 eq.), DCC (23 mg, 0.11 mmol, 1 eq.), 및 DMAP (7 mg, 0.06 mmol, 0.5 eq.)을 넣은 후 상온에서 6 시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DCM으로 희석시키고 물로 씻어 주었다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼 크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (46 mg, 68%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.99 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.16-8.05 (m, 1H), 7.70-7.62 (m, 2H), 7.63-7.55 (m, 2H), 7.47-7.39 (m, 3H), 7.06-6.96 (m, 2H), 6.83-6.72 (m, 1H), 6.41 (d, J = 23.0 Hz, 3H), 3.69-3.58 (m, 8H), 1.52 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (4단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (46 mg, 0.07 mmol)을 DCM (1.5 mL)에 녹이고, 4 N HCl in dioxane (1 mL)을 천천히 첨가한후 상온에서 1 시간 교반하였다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (47 mg)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.87 (s, 1H), 8.82-8.75 (m, 1H), 8.68-8.64 (m, 1H), 7.80-7.72 (m, 2H), 7.65-7.55 (m, 3H), 7.55-7.44 (m, 3H), 7.13-7.02 (m, 2H), 6.33 (s, 1H), 4.13-4.05 (m, 4H), 3.55-3.50 (m, 4H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(4-ethylpiperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (TDH-183, 5단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (8 mg, 0.015 mmol, 1 eq.)을 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, K2CO3 (4 mg, 0.03 mmol, 2.0 eq.)을 넣는다. 위 용액에 iodoethane (0.002 mL, 0.0023 mmol, 1.5 eq.)을 넣은 후, 상온에서 4 시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(4-ethylpiperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate (5 mg, 60%)를 얻었다.
TDH-184의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000076
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(6-(piperazin-1-yl)pyridin-3-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (8 mg, 0.015 mmol, 1 eq.)을 DMF (1 mL)에 녹인 후, acetic acid (0.001 mL, 0.015 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.017 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3mg, 0.017 mmol, 1.1 eq.), 및 DIPEA (0.0013 mL, 0.076 mmol, 5 eq.)를 넣고, 이후 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(6-(4-acetylpiperazin-1-yl)pyridin-3-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate (6 mg, 59%)를 얻었다.
TDH-185의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000077
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000078
Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
Methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (40 mg, 0.17 mmol, 1 eq.)을 DMF (1 mL)에 녹이고, Pd(dppf)Cl2 (13 mg, 0.017 mmol, 0.1 eq.), tert-butyl 3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)azetidine-1-carboxylate (90 mg, 0.26 mmol, 1.5 eq.), 및 potassium carbonate (95 mg, 0.69 mmol, 4.0 eq.)을 넣은 후 질소 존재하 80 ℃에서 6 시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DMF를 감압 농축하여 제거한 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (50 mg, 79%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 6.42 (s, 2H), 5.16-5.05 (m, 1H), 4.47-4.37 (m, 4H), 4.02 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid의 합성 (2단계)
Methyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (50 mg, 0.13 mmol, 1 eq.)을 THF/MeOH/H2O (0.5 mL/0.1 mL/0.1 mL)에 녹인 후, LiOH·H2O (28 mg, 0.67 mmol, 5.0 eq.)을 넣고 상온에서 1 시간 반응시켰다. 반응 종결 후, 반응 용매는 농축시키고 EtOAc로 희석 후 물로 추출 하였다. 물층은 1N HCl 수용액으로 pH를 4~5정도로 맞춘 후, EtOAc로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (38 mg, 83%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.58 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 5.32-5.19 (m, 1H), 4.50-4.38 (m, 2H), 4.38-4.28 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (3단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (38 mg, 0.11 mmol, 1 eq.)을 DCM (1 mL)에 녹이고, (R)-N-(4-Fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (26 mg, 0.11 mmol, 1 eq.), DCC (22 mg, 0.11 mmol, 1 eq.), 및 DMAP (7 mg, 0.05 mmol, 0.5 eq.)을 넣은 후 상온에서 6시간 반응시켰다. 반응 종결 후, DCM으로 희석시키고 물로 씻어 주었다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼 크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (41 mg, 65%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.88 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.11-8.06 (m, 1H), 8.04-7.97 (m, 1H), 7.70-7.62 (m, 2H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.47-7.37 (m, 3H), 7.09-6.99 (m, 2H), 6.51-6.30 (m, 3H), 5.19-5.05 (m, 1H), 4.48-4.34 (m, 4H), 1.49 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (4단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (41 mg, 0.07 mmol)을 DCM (1.5 mL)에 녹이고, 4 N HCl in dioxane (0.8 mL)을 천천히 첨가한후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (42 mg)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.60 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.77-7.71 (m, 2H), 7.63-7.55 (m, 2H1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.63-8.51 (m, 1H), 8.25-8.14 (m, 2H), 7.74-7.67 (m, 1H), 7.61-7.50 (m, 3H), 7.47-7.38 (m, 2H), 7.37-7.28 (m, 1H), 7.08-6.96 (m, 2H), 6.31 (s, 1H), 5.51-5.43 (m, 1H), 4.61-4.51 (m, 4H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-acetylazetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate의 합성 (TDH-185, 5단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(azetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (6 mg, 0.012 mmol, 1 eq.)을 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, Acetic acid (0.001 mL, 0.012 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.014 mmol, 1.1 eq.), HOBt (2 mg, 0.014 mmol, 1.1 eq.), 및 DIPEA (0.0011 mL, 0.06 mmol, 5 eq.)를 넣은 후, 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 농축한 후, 컬럼크래마토그래피를 이용하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-acetylazetidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate (2 mg, 31%)를 얻었다.
TDH-227 및 TDH-228의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000079
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000080
methyl (S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 (1단계)
methyl 3-amino-6-bromopyrazine-2-carboxylate (200 mg, 0.861 mmol), tert-butyl (S)-3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate (469 mg, 1.29 mmol), 및 Potassium carbonate (475 mg, 3.44 mmol)를 DMF (7 mL)에 녹이고 질소 가스를 충전해주었다. 그 후, Pd(dppf)Cl2 (63 mg, 0.086 mmol) 를 넣고 80 ℃에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 물로 희석하고 EtOAc로 추출하여 MgSO4로 건조시킨 다음 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 (EtOAc/Hex = 80%) 분리 정제하여 노란색 고체 methyl (S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (328 mg, 0.844 mmol, 98%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.43 (s, 2H), 5.02-4.87 (m, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.97-3.73 (m, 2H), 3.73-3.49 (m, 2H), 2.56-2.37 (m, 2H), 1.51 (s, 9H).
(S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid 의 합성 (2단계)
methyl (S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (328 mg, 0.844 mmol) 를 MeOH (2 mL), THF (6 mL), 및 water (2 mL)에 녹이고 LiOH·H2O (88 mg, 2.11 mmol)을 넣어 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 유기용매는 농축시키고1 N HCl를 이용하여 pH 4로 맞춰 준 후 EtOAc (50 mL X 2)로 추출하였다. 유기 용매는 무수 MgSO4로 잔류 물을 건조하고 농축하여 노란색 고체 (S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (304 mg, 0.811 mmol, 96%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.58 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.38 (s, 2H), 5.05-4.89 (m, 1H), 3.82-3.68 (m, 2H), 3.63-3.52 (m, 2H), 2.42-2.25 (m, 3H), 1.40 (s, 9H).
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 (TDH-227, 3단계)
(S)-3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (304 mg, 0.812 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 CHS-19-135 (199 mg, 0.812 mmol), DCC (167 mg, 0.812 mmol), 및 DMAP (49 mg, 0.405 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 (EtOAc/Hex = 65%)로 분리 정제하여 노란색 고체 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (319 mg, 0.530 mmol, 62%)를 얻었다.
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 (4단계)
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (319 mg, 0.530 mmol)를 DCM (6 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (2 mL) 을 0 ℃에서 천천히 넣은 후 상온에서 30분 반응시켰다. 반응 종결 후 농축하고 Ether로 씻어 노란색 고체 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (173 mg, 0.321 mmol, 60%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.76 (s, 1H), 9.38 (s, 2H), 8.72 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.80-7.72 (m, 2H), 7.69-7.58 (m, 2H), 7.55-7.40 (m, 3H), 7.25-7.10 (m, 2H), 6.27 (s, 1H), 5.33-5.17 (m, 1H), 3.72-3.63 (m, 2H).
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-((S)-1-acetylpyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate 의 합성 (TDH-228, 5단계)
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-((S)-pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 0.023 mmol) 를 DMF에 녹이고, acetic acid (0.002 mL, 0.023 mmol), EDCI HCl (5 mg, 0.025 mmol), HOBt H2O (4 mg, 0.025 mmol)와 DIPEA (0.016 mL, 0.092 mmol)를 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 물로 희석 시킨 후, EtOAc로 추출 하고 MgSO4로 잔류 물을 건조, 여과 및 농축한 뒤, 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 (DCM/MeOH = 6%) 분리 정제하여 노란색 고체 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-((S)-1-acetylpyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate (10 mg, 0.018 mmol, 79%)을 얻었다.
TDH-229의 합성
TDH-228의 합성법 1 단계에서 (S)-3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate 대신 (R)-3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate을 사용한 것을 제외하고 동일한 방법으로 목적하는 화합물 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-((R)-1-acetylpyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)amino)acetamido)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate 의 합성 [TDH-072]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000081
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride (104 mg, 0.22 mmol, 1 eq.), 6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexanoic acid (50 mg, 0.22 mmol, 1 eq.), HATU (90 mg, 0.24 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.19 mL, 1.1 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (130 mg, 90%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36-8.25 (m, 1H), 8.22-8.09 (m, 2H), 7.65-7.57 (m, 2H), 7.52-7.39 (m, 5H), 6.98 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44 (s, 2H), 6.35 (s, 1H), 5.94 (d, J = 20.5 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.13-4.08 (m, 1H), 3.85-3.76 (m, 1H), 3.72-3.63 (m, 1H), 3.19-3.10 (m, 2H), 2.59-2.46 (m, 2H), 2.42-2.29 (m, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.73-1.61 (m, 2H), 1.56-1.47 (m, 2H), 1.46-1.41 (m, 9H), 1.40-1.33 (m, 2H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-aminohexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (130 mg, 0.20 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-aminohexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride (120 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)amino)acetamido)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (TDH-072, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-aminohexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride (25 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (18 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), HATU (18 mg, 0.046 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.21 mmol, 4 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)amino)acetamido)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (15 mg, 42%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate의 합성 [TDH-073]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000082
R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-aminohexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate hydrochloride 24 (25 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), 4-fluorothalidomide (12 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.21 mmol, 5 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한 후 컬럼으로 분리하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-amino-1'-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexanoyl)-1',2',3',6'-tetrahydro-[3,4'-bipyridine]-5-carboxylate (2 mg, 6%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetamido)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 [TDH-165]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000083
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylatehydrochloride (400 mg, 0.78 mmol, 1 eq.), 6-(Boc-amino)hexyl bromide (0.19 mL, 0.78 mmol, 1 eq.), K2CO3 (322 mg, 2.3 mmol, 3.0 eq.)를 DMF (3.0 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (512 mg, 92%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.94 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.61-7.53 (m, 2H), 7.51-7.40 (m, 3H), 7.06 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.33 (s, 2H), 4.62-4.46 (m, 1H), 4.34-4.18 (m, 1H), 3.21-3.02 (m, 4H), 2.56-2.38 (m, 2H), 2.32-1.99 (m, 6H), 1.68-1.44 (m, 13H), 1.41-1.33 (m, 4H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-aminohexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-((tert-butoxycarbonyl)amino)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (512 mg, 0.72 mmol)을 DCM (1.5 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-aminohexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (510 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetamido)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (TDH-165, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-aminohexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetamido)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-119]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000084
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-aminohexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (25 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), 4-fluorothalidomide (11 mg, 0.042 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.21 mmol, 5 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한 후 컬럼으로 분리하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(6-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)hexyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (7 mg, 22%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamido)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 [TDH-189]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000085
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2,2-dimethyl-4-oxo-3,8,11-trioxa-5-azatridecan-13-oyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylatehydrochloride (200 mg, 0.39 mmol, 1 eq.), 2,2-dimethyl-4-oxo-3,8,11-trioxa-5-azatridecan-13-oic acid (102 mg, 0.39 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (82 mg, 0.43 mmol, 1.1 eq.), HOBt (65 mg, 0.43 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.3 mL, 1.9 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.5 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2,2-dimethyl-4-oxo-3,8,11-trioxa-5-azatridecan-13-oyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (251 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2,2-dimethyl-4-oxo-3,8,11-trioxa-5-azatridecan-13-oyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (200 mg, 0.26 mmol)을 DCM (1.5 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (180 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamido)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (TDH-189, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamido)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 60%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-104]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000086
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 4-fluorothalidomide (8 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.21 mmol, 5 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한 후 컬럼으로 분리하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (7 mg, 27%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-148]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000087
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylatehydrochloride (300, 0.54mol, 1 eq.), K2CO3 (223 mg, 1.62 mmol, 3 eq.)를 DMF (10 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 ((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (78 mg, 20%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.98 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.99 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.67 (td, J = 7.5, 2.9 Hz, 2H), 7.62-7.54 (m, 2H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.05 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.33 (s, 2H), 4.18 (d, J = 18.7 Hz, 3H), 3.02 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 2.72 (t, J = 12.7 Hz, 2H), 2.30-1.94(m, 10H), 1.84-1.62 (m, 6H), 1.48 (s, 11H), 1.24-1.01 (m, 3H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (131 mg, 0.18 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (113 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (TDH-148, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (25 mg, 0.040 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (8 mg, 0.044 mmol, 1.1 eq.), HOBt (6 mg, 0.044 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.17 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 35%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-149]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000088
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.03 mmol, 1 eq.), 4-fluorothalidomide (9 mg, 0.03 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한 후 컬럼으로 분리하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4 mg, 14%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamido)ethoxy)ethoxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 [TDH-277]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000089
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylatehydrochloride (250 mg, 0.45 mmol, 1 eq.), 1-(tert-butoxycarbonyl)piperidine-4-carboxylic acid (104 mg, 0.45 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (96 mg, 0.50 mmol, 1.1 eq.), HOBt (76 mg, 0.50 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.40 mL, 2.3 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.8 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 ((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (339 mg, quant.)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.96 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.66-7.60 (m, 2H), 7.55-7.49 (m, 2H), 7.45-7.36 (m, 3H), 7.03-6.95 (m, 2H), 6.42 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.84-4.71 (m, 1H), 4.44-4.35 (m, 1H), 4.22-4.02 (m, 4H), 3.30-3.18 (m, 1H), 2.84-2.72 (m, 4H), 2.69-2.60 (m, 1H), 2.34-2.14 (m, 3H), 2.07-1.89 (m, 3H), 1.45 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (339 mg, 0.47 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (309 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (TDH-277, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 58%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-279]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000090
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.03 mmol, 1 eq.), 4-fluorothalidomide (8 mg, 0.03 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.04 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한 후 컬럼으로 분리하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 96%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 의 합성 [TDH-358]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000091
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (103 mg, 0.20 mmol, 1 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperazine-1-carboxylate (105 mg, 0.30 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (56 mg, 040 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (45 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (165 mg, 0.49 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (155 mg)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (TDH-358, 3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (40 mg, 0.059 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (20 mg, 0.059 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (13 mg, 0.065 mmol, 1.1 eq.), HOBt (10 mg, 0.065 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.12 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (35 mg, 62%)을 얻었다.
((R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-455)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000092
(R)-2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-phenylethan-1-one의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 10 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 1-Methylpiperazine (0.3 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 주황색 고체 (R)-2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-phenylethan-1-one (421 mg, 1.8 mmol, 90%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.46-7.30 (m, 5H), 5.22 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 3.90-3.79 (m, 1H), 3.69-3.57 (m, 1H), 3.37-3.26 (m, 1H), 3.26-3.16 (m, 1H), 2.52-2.42 (m, 1H), 2.32-2.23 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.83-1.73 (m, 1H).
(R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-1-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-phenylethan-1-one (37 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (68 mg, 0.11 mmol, 75%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.62-7.55 (m, 2H), 7.49-7.39 (m, 3H), 6.66 (s, 1H), 6.49 (s, 2H), 4.36-4.20 (m, 3H), 3.80-3.61 (m, 2H), 3.61-3.53 (m, 1H), 3.50-3.39 (m, 1H), 2.97-2.85 (m, 2H), 2.51-2.41 (m, 1H), 2.36-2.27 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20-2.11 (m, 2H), 2.01-1.87 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
((R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-455, 3단계)
(R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 ((R)-2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (1.7 mg, 0.003 mmol, 10%)를 얻었다.
(R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-456)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000093
(R)-N-(3-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (200 mg, 1.3 mmol)를 DMF (5 mL)에 녹이고 DIPEA (1.2 mL, 6.6 mmol)와 HATU(748 mg, 2.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 3-fluoroanilin (0.16 mL, 1.7 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 주황색 고체 (R)-N-(3-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (187 mg, 0.76 mmol, mixture) 를 얻었다.
(R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (50 mg, 0.13 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(3-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (32 mg, 0.13 mmol), DCC (27 mg, 0.13 mmol), 및 DMAP (8 mg, 0.06 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (80 mg, 0.13 mmol, quant.)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.04 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.24-8.19 (m, 0.5H), 8.01 (s, 1H), 7.96-7.91 (m, 1H), 7.68-7.63 (m, 2H), 7.53-7.40 (m, 4H), 7.27-7.20 (m, 1H), 7.18-7.09 (m, 1H), 6.53-6.49 (m, 0.5H), 6.45 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.40-4.24 (m, 3H), 2.99-2.86 (m, 2H), 2.25-2.13 (m, 2H), 1.98 (dd, J = 12.3, 4.3 Hz, 2H).
(R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-456, 3단계)
(R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (16 mg, 0.03 mmol, 97%)를 얻었다.
(R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-457)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000094
(R)-N-(4-fluorobenzyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 10 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-Fluorobenzylamine (0.30 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 노랑색 고체 (R)-N-(4-fluorobenzyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (527 mg, 2.0 mmol, quant.) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.46-7.33 (m, 5H), 7.21-7.13 (m, 2H), 7.04-6.96 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 5.10 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 3.6 Hz, 1H).
(R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(4-fluorobenzyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (40 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (119 mg, 0.19 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-457, 3단계)
(R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorobenzyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (8 mg, 0.01 mmol, 44%)를 얻었다.
(R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-458)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000095
(R)-N-(2-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 10 mmol)와 HATU (1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 2-fluoroanilin (0.25 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 투명한 오일 (R)-N-(2-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (108 mg, 0.44 mmol, 22%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.50 (s, 1H), 8.38-8.29 (m, 1H), 7.56-7.49 (m, 2H), 7.48-7.36 (m, 3H), 7.18-7.05 (m, 3H), 5.26 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 3.37 (d, J = 3.4 Hz, 1H).
(R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(2-fluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (38 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (96 mg, 0.16 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-458, 3단계)
(R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((2-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.03 mmol, 85%)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-459)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000096
(R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-(trifluoromethyl)aniline (0.33 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 주황색 고체 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide (105 mg, 0.35 mmol, 18%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54-7.47 (m, 2H), 7.47-7.38 (m, 3H), 5.25 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 3.2 Hz, 1H).
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide (46 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (96 mg, 0.134 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-459, 3단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((4-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (19 mg, 0.03 mmol, quant.)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-460)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000097
(R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(3-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 3-(trifluoromethyl)aniline (0.33 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 주황색 고체 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(3-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide (155 mg, 0.52 mmol, 26%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.43 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.54-7.48 (m, 2H), 7.47-7.37 (m, 5H), 5.25 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 3.29 (s, 1H).
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(3-(trifluoromethyl)phenyl)acetamide (46 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg, 0.14 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-460, 3단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-((3-(trifluoromethyl)phenyl)amino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.02 mmol, 66%)를 얻었다.
(R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-461)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000098
(R)-2-hydroxy-N-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-(4-methylpiperazin-1-yl)aniline (497 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 진한 주황색 고체 (R)-2-hydroxy-N-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide (297 mg, 0.91 mmol, 46%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.93 (s, 1H), 7.53-7.49 (m, 2H), 7.46-7.38 (m, 5H), 6.94-6.86 (m, 2H), 5.21 (s, 1H), 3.22-3.13 (m, 4H), 2.64-2.56 (m, 4H), 2.37 (s, 3H).
(R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-N-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide (50 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (80 mg, 0.12 mmol, 77%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.50-7.40 (m, 5H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.45 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.37-4.23 (m, 3H), 3.19 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 2.97-2.85 (m, 2H), 2.59 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.02-1.92 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-461, 3단계)
(R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (19 mg, 0.03 mmol, quant.)를 얻었다.
(R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-462)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000099
(R)-2-hydroxy-N-(3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 3-(4-methylpiperazin-1-yl)aniline (497 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 고체 (R)-2-hydroxy-N-(3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide (638 mg, 1.96 mmol, 98%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.08 (s, 1H), 7.55-7.48 (m, 2H), 7.47-7.37 (m, 4H), 7.25-7.16 (m, 1H), 6.89-6.83 (m, 1H), 6.74-6.68 (m, 1H), 5.22 (s, 1H), 3.30-3.20 (m, 4H), 2.67-2.57 (m, 4H), 2.38 (s, 3H).
(R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-N-(3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)-2-phenylacetamide (50 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (71 mg, 0.10 mmol, 68%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.89 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.51-7.47 (m, 1H), 7.47-7.37 (m, 3H), 7.21-7.14 (m, 1H), 6.85-6.80 (m, 1H), 6.73-6.67 (m, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 4.36-4.20 (m, 3H), 3.25-3.15 (m, 4H), 2.98-2.86 (m, 2H), 2.59-2.51 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.23-2.14 (m, 2H), 2.01-1.92 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-462, 3단계)
(R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (18 mg, 0.03 mmol, quant.)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-463)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000100
(R)-2-hydroxy-N,2-diphenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. Aniline (0.24 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 오일 (R)-2-hydroxy-N,2-diphenylacetamide (386 mg, 1.70 mmol, 85%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.01 (s, 1H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.41-7.29 (m, 5H), 7.21-7.12 (m, 1H), 5.54 (s, 1H), 5.07 (s, 1H).
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-N,2-diphenylacetamide (35 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (101 mg, 0.17 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-463, 3단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (25 mg, 0.04 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(phenylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.022 mmol, 54%)를 얻었다.
(R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-464)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000101
(R)-N-(4-fluoro-3-methylphenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-fluoro-3-methylaniline (325 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 하얀색 고체 (R)-N-(4-fluoro-3-methylphenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (362 mg, 1.40 mmol, 70%) 를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.98 (s, 1H), 7.47-7.38 (m, 2H), 7.36-7.28 (m, 4H), 7.27-7.19 (m, 1H), 6.96-6.85 (m, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 3.29 (s, 3H).
(R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(4-fluoro-3-methylphenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (39 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (77 mg, 0.12 mmol, 82%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.91 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.74-7.64 (m, 2H), 7.50-7.40 (m, 4H), 7.34-7.29 (m, 1H), 7.00-6.90 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.40-4.21 (m, 3H), 3.02-2.86 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.21-2.13 (m, 2H), 2.03-1.88 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-464, 3단계)
(R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (25 mg, 0.04 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluoro-3-methylphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (18 mg, 0.03 mmol, 81%)를 얻었다.
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-465)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000102
(R)-2-(2-chlorophenyl)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-(2-chlorophenyl)-2-hydroxyacetic acid (373 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-fluoroaniline (0.3 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 하얀색 고체 (R)-2-(2-chlorophenyl)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide (239 mg, 0.86 mmol, 43%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.13 (s, 1H), 7.80-7.70 (m, 2H), 7.59-7.52 (m, 1H), 7.52-7.42 (m, 1H), 7.42-7.30 (m, 2H), 7.23-7.07 (m, 2H), 6.67 (s, 1H), 5.47 (s, 1H).
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-(2-chlorophenyl)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide (42 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (102 mg, 0.16 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-465, 3단계)
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (25 mg, 0.04 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (21 mg, 0.036 mmol, 94%)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-468)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000103
(R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-3-yl)acetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. pyridin-3-amine (244 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 하얀색 고체 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-3-yl)acetamide (174 mg, 0.76 mmol, 38%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.20 (s, 1H), 8.90-8.87 (m, 1H), 8.30-8.24 (m, 1H), 8.16-8.10 (m, 1H), 7.56-7.50 (m, 2H), 7.40-7.29 (m, 4H), 6.55 (s, 1H), 5.14 (s, 1H).
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-3-yl)acetamide (34 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (110 mg, 0.18 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-468, 3단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (30 mg, 0.05 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-3-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (11 mg, 0.02 mmol, 41%)를 얻었다.
(R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-469)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000104
(R)-N-(3-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. N1,N1-dimethylbenzene-1,3-diamine (354 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 노랑색 고체 (R)-N-(3-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (507 mg, 1.88 mmol, 96%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 9.67 (s, 1H), 7.56-7.48 (m, 2H), 7.42-7.28 (m, 3H), 7.16-7.11 (m, 1H), 7.11-7.02 (m, 2H), 6.50-6.35 (m, 2H), 5.08 (s, 1H), 2.86 (s, 6H).
(R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(3-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (41 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (127 mg, 0.20 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-469, 3단계)
(R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (50 mg, 0.08 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.02 mmol, 26%)를 얻었다.
(R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-470)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000105
(R)-N-(4-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. N1,N1-dimethylbenzene-1,4-diamine (354 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 연한 노랑색 고체 (R)-N-(4-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (507 mg, 1.88 mmol, 94%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 9.62 (s, 1H), 7.56-7.45 (m, 4H), 7.39-7.25 (m, 3H), 6.72-6.62 (m, 2H), 6.33 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 2.84 (s, 6H).
(R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(4-(dimethylamino)phenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (41 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (94 mg, 0.15 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-470, 3단계)
(R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (50 mg, 0.08 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((4-(dimethylamino)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.02 mmol, 26%)를 얻었다.
(R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-471)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000106
(R)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxy-3-methylbutanamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-3-methylbutanoic acid (373 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-fluoroaniline (0.3 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 오일 (R)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxy-3-methylbutanamide (209 mg, 0.99 mmol, 50%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 9.71 (s, 1H), 7.78-7.68 (m, 2H), 7.21-7.10 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.81 (s, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
(R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(4-fluorophenyl)-2-hydroxy-3-methylbutanamide (32 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (131 mg, 0.23 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-471, 3단계)
(R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (60 mg, 0.10 mmol) 를 DCM(2.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (1.0 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (18 mg, 0.035 mmol, 35%)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 2,2,2-trifluoroacetate (TDH-479)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000107
(R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-4-yl)acetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. pyridin-4-amine (244 mg, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 오일 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-4-yl)acetamide (209 mg, 0.99 mmol, 50%) 를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 9.71 (s, 1H), 7.78-7.68 (m, 2H), 7.21-7.10 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.81 (s, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-2-hydroxy-2-phenyl-N-(pyridin-4-yl)acetamide (34 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (39 mg, 0.065 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 2,2,2-trifluoroacetate의 합성 (TDH-479, 3단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (30 mg, 0.05 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(pyridin-4-ylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate 2,2,2-trifluoroacetate (8 mg, 0.013 mmol, 43%)를 얻었다.
(R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-488)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000108
(R)-N-(3,4-difluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide의 합성 (1단계)
(R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid (304 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 3,4-difluoroaniline (0.26 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 고체 (R)-N-(3,4-difluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (68 mg, 0.26 mmol, 13%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.68-7.58 (m, 1H), 7.50-7.35 (m, 5H), 7.18-7.02 (m, 2H), 5.16 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.53 (d, J = 3.2 Hz, 1H).
(R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (80 mg, 0.21 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(3,4-difluorophenyl)-2-hydroxy-2-phenylacetamide (55 mg, 0.21 mmol), DCC (42 mg, 0.21 mmol), 및 DMAP (13 mg, 0.10 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (92 mg, 0.15 mmol, 69%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.68-7.61 (m, 3H), 7.47-7.39 (m, 3H), 7.25-7.17 (m, 1H), 7.14-7.05 (m, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 4.40-4.35 (m, 1H), 2.99-2.90 (m, 2H), 2.24-2.17 (m, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.88-1.79 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-488, 3단계)
(R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (30 mg, 0.047 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3,4-difluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.035 mmol, 75%)를 얻었다.
1-(4-fluorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (TDH-489)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000109
N,2-bis(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide의 합성 (1단계)
2-(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetic acid (373 mg, 2.0 mmol)를 DMF (8 mL)에 녹이고 DIPEA (1.7 mL, 6.6 mmol)와 HATU(1.14 g, 3.0 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-fluoroaniline (0.25 mL, 2.6 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 오일 N,2-bis(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide (50 mg, 0.19 mmol, mixture)를 얻었다.
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-(p-tolyl)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (2단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (80 mg, 0.21 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 N,2-bis(4-fluorophenyl)-2-hydroxyacetamide (55 mg, 0.21 mmol), DCC (42 mg, 0.21 mmol), 및 DMAP (13 mg, 0.10 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-(p-tolyl)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (93 mg, 0.15 mmol, 69%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.99 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.66-7.59 (m, 2H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.15-7.09 (m, 2H), 7.08-6.99 (m, 2H), 6.43 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 4.36-4.28 (m, 3H), 2.96-2.90 (m, 2H), 2.21-2.16 (m, 2H), 2.00-1.95 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
1-(4-fluorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (TDH-489, 3단계)
2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-(p-tolyl)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (30 mg, 0.05 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 1-(4-fluorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (18 mg, 0.032 mmol, 67%)를 얻었다.
(R)-3-amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-N-methyl-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide hydrochloride (TDH-490)의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000110
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000111
(R)-2-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)-2-phenylacetic acid의 합성 (1단계)
(R)-2-(methylamino)-2-phenylacetic acid (330 mg, 2 mmol)를 THF (8 mL)에 녹이고 TEA (0.42 mL, 3.0 mmol)를 넣는다. 0 ℃에서 위 용액에 di-tert-butyl dicarbonate (0.55 mL, 2.4 mmol)를 천천히 넣은 후 상온에서 1시간 반응한다. 용매를 농축 시킨 후, 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 노랑색 오일 (R)-2-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)-2-phenylacetic acid (404 mg, 1.5 mmol, mixture)를 얻었다.
tert-butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)(methyl)carbamate 의 합성 (2단계)
(R)-2-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)-2-phenylacetic acid (404 mg, 1.5 mmol)를 DMF (6 mL)에 녹이고 DIPEA (0.53 mL, 3.0 mmol)와 HATU (868 mg, 2.3 mmol)을 넣은 후 20분 동안 교반하였다. 4-fluoroaniline (0.19 mL, 2.0 mmol)을 추가하고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 용매를 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 하얀색 고체 tert-butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)(methyl)carbamate (69 mg, 0.19 mmol, 13%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53-7.47 (m, 2H), 7.44-7.35 (m, 5H), 7.06-6.98 (m, 2H), 5.91 (s, 1H), 2.83 (s, 3H), 1.50 (s, 9H).
(R)-N-(4-fluorophenyl)-2-(methylamino)-2-phenylacetamide hydrochloride의 합성 (3단계)
tert-butyl (R)-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)(methyl)carbamate (69 mg, 0.19 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 주황색 고체 (R)-N-(4-fluorophenyl)-2-(methylamino)-2-phenylacetamide hydrochloride (60 mg, 0.20 mmol, quant.)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.25-11.11 (m, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 7.70-7.61 (m, 4H), 7.56-7.46 (m, 3H), 7.23-7.14 (m, 2H), 5.14 (s, 1H), 3.58 (s, 3H).
tert-butyl (R)-4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)(methyl)carbamoyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate의 합성 (4단계)
3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylic acid (60 mg, 0.15 mmol) 을 DCM 에 녹인 후 (R)-N-(4-fluorophenyl)-2-(methylamino)-2-phenylacetamide hydrochloride (46 mg, 0.15 mmol), DCC (32 mg, 0.15 mmol), 및 DMAP (10 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 넣고 상온에서 밤새 반응시켰다. 반응 종결 후 DCM으로 희석한 후 물로 씻어주고, 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-1-((4-fluorophenyl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl 3-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (60 mg, 0.096 mmol, mixture)를 얻었다.
(R)-3-amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-N-methyl-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide hydrochloride의 합성 (TDH-490, 5단계)
tert-butyl (R)-4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)(methyl)carbamoyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (20 mg, 0.03 mmol) 를 DCM(1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-3-amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-N-methyl-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide hydrochloride (8 mg, 0.014 mmol, 47%)를 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-445]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000112
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.023 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.023 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.025 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.025 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.12 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 51%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-450]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000113
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (50 mg, 0.08 mmol, 1 eq.), 2-(1-(2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)acetic acid (32 mg, 0.08 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (16 mg, 0.09 mmol, 1.1 eq.), HOBt (13 mg, 0.09 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.07 mL, 0.39 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 16%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-515]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000114
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (12 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (7 mg, 23%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-516]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000115
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (11 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 50%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-519]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000116
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (9 mg, 0.029 mmol, 0.95 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.092 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 38%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-521]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000117
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (68 mg, 0.11 mol, 1.5 eq.), 3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (20 mg, 0.07 mmol, 1.0 eq.), TEA (0.03 mL, 0.21 mmol, 3 eq.)를 1,4-dioxane (1.0 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 23%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-523]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000118
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (10 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (5 mg, 18%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-473]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000119
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (100 mg, 0.15 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.0 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.04 mL, 0.23 mmol, 1.5 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate (50 mg, 0.23 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (44 mg, 0.21 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (99 mg, 81%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.99 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.02-7.97 (m, 1H), 7.97-7.90 (m, 1H), 7.70-7.62 (m, 2H), 7.62-7.53 (m, 2H), 7.50-7.37 (m, 3H), 7.11-6.99 (m, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 4.27-4.04 (m, 4H), 3.42-3.14 (m, 3H), 3.07-2.96 (m, 3H), 2.79-2.68 (m, 3H), 2.62-2.49 (m, 2H), 2.38-2.29 (m, 3H), 2.24-2.14 (m, 4H), 1.93-1.83 (m, 4H), 1.76-1.65 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.31-1.25 (m, 1H), 1.25-1.21 (m, 1H), 1.20-1.16 (m, 1H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (99 mg, 0.12 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (78 mg, 87%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 10.40 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.78-7.70 (m, 2H), 7.63-7.56 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.14-7.01 (m, 3H), 6.35 (s, 1H), 3.90-3.82 (m, 2H), 3.80-3.72 (m, 2H), 3.58-3.55 (m, 1H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.47-3.41 (m, 2H), 3.27-3.19 (m, 2H), 3.19-3.04 (m, 6H), 2.49-2.44 (m, 2H), 2.40-2.25 (m, 3H), 2.21-2.10 (m, 4H), 1.90-1.81 (m, 2H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.56-1.53 (m, 1H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-473]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoroisoindoline-1,3-dione (7 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.013 mL, 0.077 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 41%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-477]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000120
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (5 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 52%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-527]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000121
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (9 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 19%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-533]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000122
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (8 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (5 mg, 22%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-539]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000123
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (8 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 54%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-546]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000124
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (8 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 46%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-550]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000125
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (8 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 60%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-555]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000126
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (8 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 46%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-501]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000127
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.31 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.2 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol, 5.0 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-(2-oxoethyl)piperidine-1-carboxylate (105 mg, 0.46 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (88 mg, 0.41 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (150 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (150 mg, 0.18 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (130 mg, mixture) 을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-501]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 54%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-502]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000128
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (10 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 41%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-507]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000129
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (10 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 51%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-513]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000130
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (7 mg, 0.025 mmol, 0.95 eq.), DIPEA (0.014 mL, 0.079 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 58%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-503]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000131
tert-butyl (R)-2-(4-((4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.31 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.2 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol, 5.0 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl tert-butyl 2-oxo-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (111 mg, 0.46 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (88 mg, 0.41 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl (R)-2-(4-((4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (49 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-((1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
tert-butyl (R)-2-(4-((4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (49 mg, 0.09 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-((1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (34 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-503]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-((1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 43%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(7-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성(TDH-508)
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000132
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-((1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.016 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (6 mg, 0.016 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.018 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3 mg, 0.018 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.01 mL, 0.08 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(7-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (8 mg, 49%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-506]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000133
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.31 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(2-iodoethoxy)piperidine-1-carboxylate (164 mg, 0.46 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (86 mg, 0.62 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.2 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (33 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (33 mg, 0.04 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (32 mg, mixture) 을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-506]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 39%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (TDH-512)
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000134
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.016 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (6 mg, 0.016 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.018 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3 mg, 0.018 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.01 mL, 0.08 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-((1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 34%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-447]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000135
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (9 mg, 0.014 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (4 mg, 0.014 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.015 mmol, 1.1 eq.), HOBt (2 mg, 0.015 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.01 mL, 0.07 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (8 mg, 72%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-476]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000136
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 43%)을 얻었다.
3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-N-((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)pyrazine-2-carboxamide의 합성 [TDH-491]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000137
(R)-3-amino-N-(2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxamide hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoroisoindoline-1,3-dione (8 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.015 mL, 0.089 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-N-((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)pyrazine-2-carboxamide (11 mg, 38%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-492]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000138
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (21 mg, 73%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-493]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000139
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 52%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-495]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000140
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, 67%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-525]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000141
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (67 mg, 0.098 mmol, 1 eq.), 2-((2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (34 mg, 0.098 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (21 mg, 0.11 mmol, 1.1 eq.), HOBt (17 mg, 0.11 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.09 mL, 0.49 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(1-methyl-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (39 mg, 42%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-526]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000142
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (10 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 34%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-530]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000143
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (9 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 ((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 46%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-532]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000144
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (10 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (8 mg, 28%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-535]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000145
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 43%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-540]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000146
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-4-carboxylic acid (11 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (2 mg, 6%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-542]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000147
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 57%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-551]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000148
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (9 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 64%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-440]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000149
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (90 mg, 0.13 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.0 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.04 mL, 0.20 mmol, 1.5 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate (43 mg, 0.20 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (38 mg, 0.18 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (85 mg, 78%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.00 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.68-7.63 (m, 2H), 7.61-7.55 (m, 2H), 7.47-7.40 (m, 3H), 7.09-7.01 (m, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.37 (s, 2H), 4.29-4.19 (m, 2H), 4.10 (s, 3H), 3.73-3.63 (m, 1H), 3.18-3.11 (m, 2H), 2.77-2.70 (m, 4H), 2.66-2.62 (m, 4H), 2.54-2.50 (m, 2H), 2.28-2.24 (m, 4H), 2.15-2.09 (m, 2H), 1.93-1.87 (m, 2H), 1.77-1.69 (m, 3H), 1.66-1.62 (m, 1H), 1.51-1.50 (m, 2H), 1.48-1.47 (m, 9H), 1.15-1.06 (m, 2H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (85 mg, 0.10 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (70 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [3단계, TDH-440]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 59%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-441]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000150
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 62%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-474]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000151
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoroisoindoline-1,3-dione (7 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.013 mL, 0.077 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-N-((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl)pyrazine-2-carboxamide (8 mg, 34%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-478]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000152
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (5 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 30%)을 얻었다.
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-485]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000153
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperazine-1-carboxylate (14 mg, 0.040 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (7 mg, 0.053 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 69%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.04 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.71-7.67 (m, 1H), 7.67-7.62 (m, 2H), 7.49-7.39 (m, 4H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.14-7.08 (m, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 4.32-4.13 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 4H), 3.21-3.05 (m, 2H), 2.52-2.40 (m, 8H), 2.25-2.03 (m, 6H), 1.82-1.71 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (2단계)
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 0.014 mmol)를 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-485]
(R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (12 mg, 0.017 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (6 mg, 0.017 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (4 mg, 0.019 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3 mg, 0.019 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.086 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((3-chlorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 67%)을 얻었다.
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-486]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000154
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
(R)-2-((3-((λ1-oxidaneyl)-λ5-methyl)phenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperazine-1-carboxylate (14 mg, 0.040 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (7 mg, 0.053 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 29%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.95 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.48-7.38 (m, 4H), 7.28-7.18 (m, 1H), 7.06-7.00 (m, 1H), 6.74-6.67 (m, 1H), 6.43 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 4.27-4.19 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.49-3.44 (m, 4H), 3.15-3.06 (m, 2H), 2.46-2.41 (m, 6H), 2.31-2.14 (m, 8H), 1.79-1.73 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (2단계)
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 0.008 mmol)를 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (7 mg, mixture)를 얻었다.
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-486]
(R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (7 mg, 0.011 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (4 mg, 0.011 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (3 mg, 0.012 mmol, 1.1 eq.), HOBt (2 mg, 0.012 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.01 mL, 0.056 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((3-methoxyphenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-487]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000155
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperazine-1-carboxylate (14 mg, 0.040 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (7 mg, 0.053 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (21 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (2단계)
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (21 mg, 0.028 mmol)를 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (1.0 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (21 mg, mixture)를 얻었다.
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-487]
(R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (21 mg, 0.031 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.031 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (7 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.034 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.16 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-oxo-1-phenyl-2-(m-tolylamino)ethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 37%)을 얻었다.
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-582]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000156
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 (1단계)
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (13 mg, 0.02 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperazine-1-carboxylate (12 mg, 0.03 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (6 mg, 0.04 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride의 합성 (2단계)
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, 0.026 mmol)를 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 M HCl in dioxane (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 ((R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (16 mg, mixture)를 얻었다.
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-582]
(R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (16 mg, 0.022 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.022 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.025 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.025 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.11 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxoethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(4-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperazin-1-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 76%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-442]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000157
tert-butyl (R)-2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.36 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.5 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.1 mL, 0.54 mmol, 1.5 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 2-oxo-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (130 mg, 0.54 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (103 mg, 0.48 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl (R)-2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (176 mg, 66%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.98 (s, 2H), 7.71-7.62 (m, 2H), 7.62-7.54 (m, 2H), 7.50-7.37 (m, 3H), 7.10-6.99 (m, 2H), 6.48-6.35 (m, 3H), 4.43-4.27 (m, 2H), 3.44-3.36 (m, 3H), 3.36-3.26 (m, 3H), 3.26-3.16 (m, 3H), 3.16-3.05 (m, 8H), 2.41-2.17 (m, 6H), 2.17-2.09 (m, 6H), 1.47 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
tert-butyl (R)-2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (176 mg, 0.24 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (104 mg, 64%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.62 (s, 1H), 8.32-8.26 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.78-7.69 (m, 2H), 7.62-7.54 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.13-7.03 (m, 2H), 6.35 (s, 1H), 4.66-4.58 (m, 1H), 3.74-3.67 (m, 2H), 3.25-3.20 (m, 2H), 3.19-3.14 (m, 2H), 3.12-3.04 (m, 2H), 2.49-2.37 (m, 6H), 2.32-2.19 (m, 3H), 1.97-1.90 (m, 4H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (3단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (104 mg, 0.15 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.0 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.04 mL, 0.23 mmol, 1.5 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate (50 mg, 0.23 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (44 mg, 0.21 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (104 mg, 83%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.99 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.61-7.54 (m, 2H), 7.49-7.38 (m, 3H), 7.10-7.02 (m, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.38 (s, 2H), 4.35-4.19 (m, 2H), 4.18-4.04 (m, 3H), 3.72-3.63 (m, 2H), 3.15-3.03 (m, 4H), 2.76-2.66 (m, 4H), 2.46-2.37 (m, 2H), 2.30-2.23 (m, 2H), 2.14-2.07 (m, 4H), 1.91-1.76 (m, 10H), 1.47 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (4단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (104 mg, 0.12 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 목적하는 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (80 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [5단계, TDH-442]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (9 mg, 45%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-443]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000158
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (7 mg, 37%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-472]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000159
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoroisoindoline-1,3-dione (7 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.013 mL, 0.077 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (9 mg, 38%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-499]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000160
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 47%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-500]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000161
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (9 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (8 mg, 29%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-528]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000162
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (9 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (6 mg, 18%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-534]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000163
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (9 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (2 mg, 9%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-537]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000164
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (8 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-544]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000165
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (8 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (9 mg, 34%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-548]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000166
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (8 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 59%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-553]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000167
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-(piperidin-4-ylmethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (8 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(7-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-446]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000168
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (300 mg, 0.54 mmol, 1 eq.)를 DCM (3.0 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.15 mL, 0.81 mmol, 1.5 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-(2-oxoethyl)piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.81 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (150 mg, 0.78 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (433 mg, mxiture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (433 mg, 0.60 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (352 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [3단계, TDH-446]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (8 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, 74%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-475]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000169
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 43%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-517]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000170
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (11 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4 mg, 16%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-518]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000171
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (11 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 45%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-520]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000172
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (9 mg, 0.029 mmol, 0.95 eq.), DIPEA (0.015 mL, 0.089 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 41%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-522]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000173
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (73 mg, 0.11 mmol, 1.5 eq.), 3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (20 mg, 0.07 mmol, 1.0 eq.), TEA (0.03 mL, 0.21 mmol, 3 eq.)를 1,4-dioxane (1.0 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (7 mg, 13%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-524]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000174
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (11 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (9 mg, 32%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성[TDH-531]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000175
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (9 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4 mg, 17%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-536]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000176
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 36%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-543]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000177
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 60%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-547]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000178
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (9 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, 71%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-552]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000179
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (9 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 64%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-504]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000180
tert-butyl (R)-2-(4-(2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)ethyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.30 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.2 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol, 5.0 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 2-oxo-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (108 mg, 0.45 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (85 mg, 0.40 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl (R)-2-(4-(2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)ethyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (62 mg, mxiture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(2-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
tert-butyl (R)-2-(4-(2-(4-(4-(5-amino-6-((2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)ethyl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate (62 mg, 0.07 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(2-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (49 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [3단계, TDH-504]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(2-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.025 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.025 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.028 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(7-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (13 mg, 55%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(7-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [TDH-509]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000181
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(2-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.020 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (7 mg, 0.020 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (4 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), HOBt (3 mg, 0.022 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.017 mL, 0.10 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(7-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 42%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-505]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000182
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.30 mmol, 1 eq.)를 DCM (1.2 mL)에 녹인 후 0 oC에서 DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol, 5.0 eq.)를 넣는다. 10분 후, tert-butyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate (96 mg, 0.45 mmol, 1.5 eq.)을 위의 용액에 넣고 상온에서 4시간 반응 시켰다. 0 oC에서 NaBH(OAc)3 (85 mg, 0.40 mmol, 1.34 eq.)을 넣은 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 DCM으로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (229 mg, mxiture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (229 mg, 0.28 mmol)을 DCM (5.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (2.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (182 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate [3단계, TDH-505]
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (7 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 70%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-510]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000183
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (10 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 72%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-511]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000184
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carboxylic acid (10 mg, 0.026 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.029 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.13 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 36%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-514]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000185
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.026 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (7 mg, 0.025 mmol, 0.95 eq.), DIPEA (0.014 mL, 0.079 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 58%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-481]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000186
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.036 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(3-iodopropyl)piperidine-1-carboxylate (19 mg, 0.054 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (10 mg, 0.072 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (20 mg, 78%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.61-7.55 (m, 2H), 7.51-7.37 (m, 3H), 7.09-7.01 (m, 2H), 6.45 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 4.31-4.22 (m, 1H), 4.19-3.98 (m, 2H), 3.16-3.07 (m, 2H), 2.75-2.64 (m, 2H), 2.46-2.39 (m, 2H), 2.28-2.16 (m, 4H), 2.16-2.03 (m, 3H), 1.73-1.66 (m, 2H), 1.63-1.54 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.45-1.36 (m, 2H), 1.18-1.05 (m, 3H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (140 mg, 0.045 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (114 mg, 89%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.64-8.58 (m, 1H), 8.34-8.30 (m, 1H), 8.09-8.04 (m, 1H), 7.77-7.72 (m, 2H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.11-7.04 (m, 2H), 6.37 (s, 1H), 4.69-4.61 (m, 1H), 3.82-3.76 (m, 2H), 3.44-3.40 (m, 2H), 3.25-3.20 (m, 2H), 3.05-2.99 (m, 3H), 2.49-2.39 (m, 4H), 2.04-1.99 (m, 2H), 1.92-1.84 (m, 2H), 1.77-1.68 (m, 1H), 1.52-1.37 (m, 6H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-481]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000187
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoroisoindoline-1,3-dione (8 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), DIPEA (0.015 mL, 0.089 mmol, 3 eq.)를 DMSO (1.0 mL)에 녹인 후, 90 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 61%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-482]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000188
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 52%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-483]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000189
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 38%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-484]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000190
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (10 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.033 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)propanoyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 42%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-448]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000191
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.38 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(2-iodoethoxy)piperidine-1-carboxylate (204 mg, 0.58 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (106 mg, 0.77 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.5 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (255 mg, 90%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.97 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.68-7.62 (m, 2H), 7.61-7.54 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 3H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 4.23 (s, 1H), 3.84-3.75 (m, 2H), 3.70-3.62 (m, 2H), 3.52-3.44 (m, 1H), 3.17-3.05 (m, 4H), 2.73-2.63 (m, 2H), 2.36-2.25 (m, 2H), 2.25-2.15 (m, 2H), 2.12-2.02 (m, 2H), 1.91-1.83 (m, 2H), 1.57-1.51 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (255 mg, 0.34 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (171 mg, 74%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.62 (s, 1H), 8.36-8.28 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.78-7.72 (m, 2H), 7.63-7.56 (m, 2H), 7.53-7.44 (m, 3H), 7.08 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.36 (s, 1H), 4.69-4.56 (m, 1H), 3.99-3.89 (m, 2H), 3.89-3.80 (m, 3H), 3.66-3.54 (m, 2H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.46-3.38 (m, 2H), 3.21-3.11 (m, 2H), 2.52-2.38 (m, 4H), 2.18-2.08 (m, 2H), 2.03-1.91 (m, 2H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-448]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000192
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (8 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 62%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-496]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000193
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (11 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (16 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-529]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000194
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (10 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 47%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-538]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000195
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (18 mg, 64%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-541]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000196
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (10 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (4 mg, 15%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-545]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000197
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (9 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 ((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (19 mg, 68%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-549]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000198
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (9 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (22 mg, 78%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-554]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000199
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(piperidin-4-yloxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.029 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (9 mg, 0.029 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-((1-(3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carbonyl)piperidin-4-yl)oxy)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (18 mg, 65%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-451]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000200
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (200 mg, 0.38 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 4-(4-(2-(tosyloxy)ethyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate (260 mg, 0.58 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (106 mg, 0.77 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.5 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (98 mg, 31%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.99 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.48-7.38 (m, 4H), 7.09-7.02 (m, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.64-4.54 (m, 1H), 4.34-4.19 (m, 3H), 3.23-3.13 (m, 2H), 3.03-2.92 (m, 4H), 2.85-2.74 (m, 2H), 2.31-2.17 (m, 6H), 2.13-2.05 (m, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (98 mg, 0.12 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (70 mg, 80%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.62 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.76-7.72 (m, 2H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.11-7.04 (m, 2H), 6.36 (s, 1H), 3.95-3.87 (m, 2H), 3.66-3.55 (m, 5H), 3.32-3.23 (m, 7H), 2.50-2.37 (m, 8H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-451]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000201
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (10 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (15 mg, 57%)을 얻었다.
((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-452]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000202
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.027 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (9 mg, 0.027 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.030 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.14 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(2-(1-(1-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)piperidin-4-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)ethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (17 mg, 63%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-453]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000203
tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (79 mg, 0.14 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 5-(3-iodopropyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylate (79 mg, 0.22 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (40 mg, 0.29 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylate (36 mg, 34%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.06 (s, 1H), 8.56-8.53 (m, 1H), 8.02-7.98 (m, 1H), 7.96-7.93 (m, 1H), 7.69-7.64 (m, 2H), 7.62-7.55 (m, 2H), 7.48-7.38 (m, 3H), 7.10-7.01 (m, 2H), 6.47-6.43 (m, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.38 (s, 0.5H), 4.25 (s, 0.5H), 4.24-4.19 (m, 1H), 3.62-3.48 (m, 2H), 3.21-3.15 (m, 1H), 3.13-3.06 (m, 2H), 3.05-2.99 (m, 1H), 2.97-2.91 (m, 0.5H), 2.85-2.78 (m, 0.5H), 2.70-2.57 (m, 2H), 2.52-2.44 (m, 2H), 2.26-2.12 (m, 4H), 2.12-2.02 (m, 2H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.91-1.81 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(3-(2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylate (36 mg, 0.047 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(3-(2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (29 mg, 89%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.62 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.76-7.72 (m, 2H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.52-7.43 (m, 3H), 7.11-7.05 (m, 2H), 6.36 (s, 1H), 4.75-4.71 (m, 1H), 4.70-4.60 (m, 2H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.89-3.81 (m, 2H), 3.64-3.56 (m, 3H), 3.50-3.43 (m, 2H), 3.42-3.36 (m, 2H), 2.76-2.58 (m, 2H), 2.55-2.42 (m, 4H), 2.42-2.29 (m, 4H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-453]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000204
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(3-(2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.022 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (8 mg, 0.022 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.024 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.024 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.11 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (12 mg, 56%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-454]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000205
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 6-(1-(1-(3-(2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-aminopyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.022 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (8 mg, 0.022 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.024 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.024 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.11 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (10 mg, 47%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-466]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000206
tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (30 mg, 0.06 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl 5-(3-iodopropyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate (34 mg, 0.09 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (16 mg, 0.12 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate (39 mg, 85%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.11-6.98 (m, 2H), 6.45 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 4.29-4.18 (m, 1H), 3.60-3.49 (m, 3H), 3.33-3.21 (m, 2H), 3.16-3.06 (m, 2H), 2.88-2.74 (m, 4H), 2.54-2.44 (m, 4H), 2.44-2.36 (m, 2H), 2.26-2.00 (m, 7H), 1.48 (s, 9H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
tert-butyl 5-(3-(4-(4-(5-amino-6-(((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethoxy)carbonyl)pyrazin-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidin-1-yl)propyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate (39 mg, 0.051 mmol)을 DCM (1.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (0.5 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (35 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-466]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000207
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.021 mmol, 1 eq.), 2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetic acid (7 mg, 0.021 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.023 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.023 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.11 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)oxy)acetyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 68%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-467]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000208
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (15 mg, 0.021 mmol, 1 eq.), (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycine (7 mg, 0.021 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (5 mg, 0.023 mmol, 1.1 eq.), HOBt (4 mg, 0.023 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.02 mL, 0.11 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)glycyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (11 mg, 53%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-methylene-3-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-480]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000209
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (4 mg, 0.006 mmol, 1 eq.), 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (2 mg, 0.006 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (2 mg, 0.007 mmol, 1.1 eq.), HOBt (1 mg, 0.007 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.005 mL, 0.03 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 ((R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(3-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-methylene-3-oxoisoindolin-5-yl)propanoyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)propyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (3 mg, 53%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-((3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzamido)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-497]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000210
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (1단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (300 mg, 0.57 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl (((1r,4r)-4-(iodomethyl)cyclohexyl)methyl)carbamate (305 mg, 0.86 mmol, 1.5 eq.), K2CO3 (158 mg, 1.14 mmol, 2.0 eq.)를 DMF (2.3 mL)에 녹인 후, 50 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (282 mg, 67%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.98 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.61-7.54 (m, 2H), 7.48-7.38 (m, 3H), 7.09-7.01 (m, 2H), 6.44 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.05-2.97 (m, 4H), 2.23-2.17 (m, 3H), 2.12-2.02 (m, 4H), 1.89-1.84 (m, 2H), 1.84-1.73 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.04-0.84 (m, 5H).
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(aminomethyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (2단계)
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (282 mg, 0.38 mmol)을 DCM (2.0 mL)에 녹이고 4 N HCl in dioxane (1.0 mL)을 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 반응 시켰다. 반응 종결 후, 침전물은 여과하여 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(aminomethyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (250 mg, mixture)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-((3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzamido)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [3단계, TDH-497]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000211
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(aminomethyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (8 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-((3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzamido)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (18 mg, 68%)을 얻었다.
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-((2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetamido)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate의 합성 [TDH-498]
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000212
(R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-(aminomethyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate hydrochloride (20 mg, 0.030 mmol, 1 eq.), 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (11 mg, 0.030 mmol, 1.0 eq.), EDCI-HCl (6 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), HOBt (5 mg, 0.032 mmol, 1.1 eq.), DIPEA (0.03 mL, 0.15 mmol, 5 eq.)를 DMF (1.0 mL)에 녹인 후, 상온에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 (R)-2-((4-fluorophenyl)amino)-2-oxo-1-phenylethyl 3-amino-6-(1-(1-(((1r,4r)-4-((2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetamido)methyl)cyclohexyl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazol-4-yl)pyrazine-2-carboxylate (14 mg, 49%)을 얻었다.
앞선 제조 방법들에서 사용된 E3 ligase binder 모이어티들은 다음과 같은 방법을 통해 제조하였다.
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000213
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylate (1단계)
3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (20 mg, 0.07 mol, 1.0 eq.), tert-butyl piperidine-4-carboxylate (0.02 mL, 0.11 mmol, 1.5 eq.), TEA (0.03 mL, 0.21 mmol, 3 eq.)를 1,4-dioxane (1.0 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylate (26 mg, 95%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.00 (s, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.92 - 4.81 (m, 1H), 3.26 - 3.12 (m, 2H), 2.90 - 2.77 (m, 1H), 2.62 - 2.52 (m, 3H), 2.44 - 2.33 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 3H), 1.67 - 1.52 (m, 2H), 1.49 - 1.34 (m, 9H).
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (2단계)
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylate (396 mg, 1.0 mmol) 를 DCM (5.0 mL)에 녹이고 TFA (2.0 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)piperidine-4-carboxylic acid (333 mg, quant.)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 12.41 (s, 1H), 11.08-10.91 (m, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.89-4.81 (m, 1H), 3.28-3.14 (m, 2H), 3.00-2.72 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 2H), 2.02-1.84 (m, 4H), 1.71-1.57 (m, 2H).
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000214
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (1단계)
3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (400 mg, 1.4 mol, 1.0 eq.), tert-butyl azetidine-3-carboxylate hydrochloride (405 mg, 2.1 mmol, 1.5 eq.), TEA (1.2 mL, 8.4 mmol, 6 eq.)를 1,4-dioxane (5.6 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축한다. 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (413 mg, 81%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.99 (s, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.87 - 4.77 (m, 1H), 4.57 - 3.95 (m, 4H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 2.91 - 2.76 (m, 1H), 2.60 - 2.54 (m, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 1.96 - 1.85 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (2단계)
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (100 mg, 0.27 mmol) 를 DCM (2.0 mL)에 녹이고 TFA (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 노란색 고체 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (109 mg, mixture)를 얻었다.
3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000215
3-(5-bromo-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione의 합성 (1단계)
methyl 4-bromo-2-(bromomethyl)benzoate (850 mg, 2.8 mmol, 1.0 eq.), 3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (500 mg, 3.0 mmol, 1.1 eq.), K2CO3 (1.14 g, 0.94 mmol, 3 eq.)를 DMF (11 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 상온으로 온도를 낮추고 물을 넣은 후 30분간 교반한다. 이후 물로 filter하여 목적하는 연한 노란색 고체인 3-(5-bromo-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione (589 mg, 65%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.00 (s, 1H), 7.90 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.78 - 7.61 (m, 2H), 5.17 - 5.04 (m, 1H), 4.48 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.97 - 2.84 (m, 1H), 2.65 - 2.56 (m, 1H), 2.44 - 2.33 (m, 1H), 2.06 - 1.95 (m, 1H).
tert-butyl (E)-3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)acrylate (2단계)
3-(5-bromo-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione (50 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl acrylate (0.048 mL, 0.32 mmol, 2.1 eq.), Pd(PPh3)4 (25 mg, 0.022 mmol, 0.14 eq.), TEA (0.02 mL, 0.15 mmol, 1.0 eq.)을 DMF (1 mL)에 녹인 후, microwave reactor로 130 oC에서 30분 반응한다. 실온으로 식힌 후, mixture를 celite filter한다. 용액을 농축시킨 후, 농축물은 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 노란색 고체인 tert-butyl (E)-3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)acrylate (62 mg, mixture)을 얻었다.
tert-butyl 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoate (3단계)
tert-butyl (E)-3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)acrylate (62 mg, 1.7 mmol, 1.0 eq.)을 DMF (7 mL)에 녹인 후, 10% Pd/C (200 mg)을 넣은 후, H2 (g) 풍선을 꽂는다. 실온에서 16 시간 반응한다. 반응 종결 후, celite filter 한다. 용액을 농축하여 검은색 고체 tert-butyl 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoate (38 mg, mixture)을 얻었다.
3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (4단계)
tert-butyl 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoate (38 mg, 0.10 mmol, 1.0 eq.)를 DCM(1.5 mL)에 녹이고 TFA (0.7 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 하얀색 고체 3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)propanoic acid (23 mg, 73%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.98 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.39 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.99-2.89 (m, 3H), 2.66-2.56 (m, 3H), 2.44-2.34 (m, 1H), 2.05-1.97 (m, 1H).
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000216
3-(5-bromo-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione (300 mg, 0.93 mmmol, 1.0 eq.), formic acid (0.5 mL, 65 mmmol, 7.0 eq.), Pd(OAc)2 (6 mg, 0.028 mmol, 0.03 eq.), Xantphos (316 mg, 0.028 mmol, 0.03 eq.), DCC (38 mg, 0.19 mmmol, 0.2 eq.), TEA (0.26 mL, 1.9 mmmol, 2.0 eq.)를 DMF (3.7 mL)에 녹인 후, 100 oC에서 20 시간 반응시킨다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 소금물로 씻은 후, 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 연한 갈색 고체 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindoline-5-carboxylic acid (110 mg, %)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.03 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.21 - 5.10 (m, 1H), 4.55 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 3.01 - 2.84 (m, 1H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.45 - 2.32 (m, 1H), 2.10 - 1.97 (m, 1H).
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000217
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (1단계)
3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (400 mg, 1.4 mmol, 1.0 eq.), tert-butyl azetidine-3-carboxylate hydrochloride (405 mg, 2.1 mmol, 1.5 eq.), TEA (1.2 mL, 8.4 mmol, 6 eq.)를 1,4-dioxane (5.6 mL)에 녹인 후, 70 oC에서 밤새 반응 시켰다. 반응 종료 후, 물로 희석 시키고 EA로 추출하였다. 모은 유기층은 무수 Na2SO4을 통해 잔류 물을 제거한 후 여과하였다. 유기층은 감압 농축하여 목적하는 노란색 고체 tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (413 mg, 81%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.99 (s, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.87 - 4.77 (m, 1H), 4.57 - 3.95 (m, 4H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 2.91 - 2.76 (m, 1H), 2.60 - 2.54 (m, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 1.96 - 1.85 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (2단계)
tert-butyl 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylate (100 mg, 0.27 mmol, 1.0 eq.)를 DCM(2.0 mL)에 녹이고 TFA (0.5 mL)를 넣어준 다음 상온에서 2 h 반응시켰다. 반응 용매를 농축하여 하얀색 고체 1-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)azetidine-3-carboxylic acid (109 mg, mixture)를 얻었다.
4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000218
4-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid의 합성 (1단계)
Terephthalic acid (2 g, 12.10 mmol, 2 eq)을 tert-butanol/THF (3:1, (20 mL)에 녹이고, Di-tert-butyl dicarbonate (1.389 mL, 1.2 eq), DMAP (348 mg, 0.3 eq)을 가하고 reflux 조건에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 감압 농축 후 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리 정제하여 목적하는 하얀색 고체 4-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid (330 mg, 1.485 mmol, 24%)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 8.00 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 1.57 (s, 9H).
tert-butyl 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate의 합성 (2단계)
3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (40.7 mg, 0.247 mmol, 1.1 eq), 4-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid (50 mg, 1 eq), EDCI-HCl (43.1 mg, 1 eq), HOBt (34.5 mg, 1 eq)을 DMF (1 mL)에 녹이고, DIPEA (98 μL, 2.5 eq)을 가한 후 상온에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 여과액은 감압 농축 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제하여 목적하는 하얀색 고체 tert-butyl 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate (35 mg, 0.105 mmol, 46%)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.89 (s, 1H), 8.96 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.86-4.76 (m, 1H), 2.89-2.75 (m, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.57 (s, 9H).
4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid의 합성 (3단계)
Tert-butyl 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate (20 mg, 0.060 mmol, 1 eq)에 50% TFA/DCM (2 mL)을 녹이고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응물은 감압 농축 후 목적하는 하얀색 고체 4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (10 mg, 0.036 mmol, 60%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.91 (s, 1H), 8.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08-8.03 (m, 2H), 8.01-7.95 (m, 2H), 4.85-4.78 (m, 1H), 2.87-2.78 (m, 1H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.18-2.09 (m, 1H), 2.04-1.97 (m, 1H).
3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000219
3-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid의 합성 (1단계)
Isophthalic acid (152 mg, 0.916 mmol, 2 eq)을 tert-butanol/THF (3:1, (4 mL)에 녹이고, Di-tert-butyl dicarbonate (105 μL, 1 eq), DMAP (26.4 mg, 0.3 eq)을 가하고 reflux 조건에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 감압 농축 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제하여 목적하는 하얀색 고체 3-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid (50 mg, 0.458 mmol, 49%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.29 (s, 1H), 8.43 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 8.17 (dt, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 8.13 (dq, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 1.57 (s, 9H).
tert-butyl 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate의 합성 (2단계)
3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (40.7 mg, 0.247 mmol, 1.1 eq), 3-(tert-butoxycarbonyl)benzoic acid (50 mg, 1 eq), EDCI-HCl (43.1 mg, 1 eq), HOBt (34.5 mg, 1 eq)을 DMF (1 mL)에 녹이고, DIPEA (98 μL, 2.5 eq)을 가한 후 상온에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 여과액은 감압 농축 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제하여 목적하는 연한 파란색 고체 tert-butyl 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate (50 mg, 0.150 mmol, 66%)을 얻었다
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.91 (s, 1H), 9.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.15-8.05 (m, 2H), 7.72-7.59 (m, 1H), 4.87-4.75 (m, 1H), 2.90-2.74 (m, 1H), 2.60-2.54 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 1H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.58 (s, 9H).
3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid의 합성 (3단계)
Tert-butyl 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoate (50 mg, 0.150 mmol, 1 eq)에 50% TFA/DCM (2 mL)을 녹이고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응물은 감압 농축 후 목적하는 고체 3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)benzoic acid (40 mg, 0.145 mmol, 96%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.89 (s, 1H), 9.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.48 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 7.8, 1.7 Hz, 2H), 7.82-7.56 (m, 1H), 4.92-4.77 (m, 1H), 2.89-2.73 (m, 1H), 2.59-2.52 (m, 1H), 2.19-2.06 (m, 1H), 2.02-1.97 (m, 1H).
5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000220
5-(tert-butoxycarbonyl)nicotinic acid의 합성 (1단계)
Pyridine-3,5-dicarboxylic acid (153 mg, 0.916 mmol, 2 eq)을 tert-butanol/THF (3:1, (4 mL)에 녹이고, Di-tert-butyl dicarbonate (105 μL, 1 eq), DMAP (26.4 mg, 0.3 eq)을 가하고 reflux 조건에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 모은 유기용매는 감압 농축 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제하여 목적하는 하얀색 고체 5-(tert-butoxycarbonyl)nicotinic acid (12 mg, 0.054 mmol, 11%)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.22 (dd, J = 11.1, 2.1 Hz, 2H), 8.58 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 1.58 (s, 9H).
tert-butyl 5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinate의 합성 (2단계)
3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (324 mg, 0.247 mmol, 1.1 eq), 5-(tert-butoxycarbonyl)nicotinic acid (400 mg, 1 eq), EDCI-HCl (344 mg, 1 eq), HOBt (274 mg, 1 eq)을 DMF (7 mL)에 녹이고, DIPEA (780 μL, 2.5 eq)을 가한 후 상온에서 16시간 교반하였다. 반응물을 농축하고 EtOAc로 희석 시키고 포화 NaCl 수용액으로 씻어준 뒤 무소 MgSO4로 건조시키고 여과하였다. 여과액은 감압 농축 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제하여 목적하는 연한 파란색 고체 tert-butyl 5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinate (350 mg, 1.050 mmol, 58%)을 얻었다
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.94 (s, 1H), 9.25-9.21 (m, 2H), 9.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.65 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 4.90-4.79 (m, 1H), 2.89-2.79 (m, 1H), 2.61-2.55 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 1H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.60 (s, 9H).
5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinic acid의 합성 (3단계)
tert-butyl 5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinate (350 mg, 1.050 mmol, 1 eq)에 50% TFA/DCM (8 mL)을 녹이고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응물은 감압 농축 후 목적하는 하얀색 고체 5-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)carbamoyl)nicotinic acid (290 mg, 1.046 mmol, 100%)을 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.93 (s, 1H), 9.30-9.12 (m, 3H), 8.73 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 4.92-4.80 (m, 1H), 2.86-2.77 (m, 1H), 2.59-2.53 (m, 1H), 2.17-2.08 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 1H).
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000221
5,6-difluoroisobenzofuran-1,3-dione (10 g, 54.3 mmol)를 아세트산(70 mL)에 넣고 3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (8.94 g, 54.3 mmol)과 아세트산칼륨 (16 g, 163 mmol)을 상온에서 추가 한 후, 환류 조건 하에 밤새 16 시간 반응 시켰다. 반응 용매를 농축하고 증류수로 씻어준 후 여과하여 목적하는 보라색 고체 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (12.5 g 42.5 mmol, 78%) 를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.16 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.17 (dd, J = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 2.98-2.80 (m, 1H), 2.68-2.56 (m, 1H), 2.48-2.42 (m, 1H), 2.12-2.00 (m, 1H).
2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000222
tert-butyl 2-(3-nitrophenyl)acetate의 합성 (1단계)
2-(3-nitropheny)lacetic acid(10 g, 55.2 mmol,1 eq), di-tert-butyl dicarbonate (24.1 g, 110 mmol, 2eq), DMAP(2.023 g, 16.56 mmol 0.3eq)를 t-BuOH 150 mL에 첨가한다. 3 시간 동안 상온에서 교반한다. 반응 종결 후 감압 농축 한다. 모은 유기용매는 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 노란색 오일 tert-butyl 2-(3-nitrophenyl)acetate (10.64 g 44.8 mmol, 81%)를 얻는다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.13-8.11 (m, 1H), 7.64-7.61 (m, 1H), 7.50 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 3.66 (s, 2H), 1.46 (s, 9H).
tert-butyl 2-(3-aminophenyl)acetate의 합성 (2단계)
tert-butyl 2-(3-nitrophenyl)acetate (10.36g. 43.7mmol, 1eq), 5% Pd/C (1.5 g, 14.10 mmol, 0.323 eq)를 ethanol (70 mL)에 첨가한다. Hydrogen Parr Shaker 를 사용하여 2 시간 동안 상온에서 교반한다. 반응 종결 후 celite filter를 사용하여 금속 촉매를 제거한다. 유기층을 모아 감압 농축 하여 tert-butyl 2-(3-aminophenyl)acetate (9 g, 43.4 mmol, 99%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl-3) δ 7.09 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.70-6.63 (m, 1H), 6.61 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.57-6.56 (m,, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.43 (s, 2H), 1.44 (s, 9H).
tert-butyl 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetate의 합성 (3단계)
3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (5 g, 17.42 mmol, 1eq), tert-butyl 2-(3-aminophenyl)acetate (5.42 g, 26.1 mmol, 1.5 eq), triethylamine hydrochloride (7.19 g, 52.3 mmol, 3eq)를 1,4-dioxane (50 mL)에 넣는다. 12 시간동안 70°C에서 반응한다. 반응 종결 후 물로 희석 시킨 후 에틸 아세테이트로 추출한다. 무수 황산 마그네슘을 첨가하여 건조 시킨 후 필터한다. 유기층을 모아 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 tert-butyl 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetate (3 g 7.26 mmol, 41%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H), 7.38 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.62 (s, 1H), 4.85 (m, 1H), 2.95-2.83 (m, 1H), 2.82-2.69 (m, 2H), 2.18-2.11 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid의 합성 (4단계)
tert-butyl 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3 yl)amino)phenyl)acetate (50 mg, 0.121 mmol)을 50% TFA/DCM 1 ml에 첨가한 후 3 시간 동안 교반한다. 반응 종결 후 감압 농축 한다. Ether 로 씻은 후 건조 하여 목표 화합물 2-(3-((1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)amino)phenyl)acetic acid (39 mg, 0.108mmol, 90%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.07 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 7.39-7.27 (m, 3H), 7.12 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 7.03-7.00 (m, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 3.61 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 2.92-2.82 (m, 1H), 2.60-2.54 (m, 2H), 2.01 (s, 1H).
3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione의 합성
3-aminopiperidine-2,6-dione hydrochloride (5 g, 30.4 mmol, 1.0eq), 3-bromofuran-2,5-dione (3.10 mL, 33.4 mmol, 1.1 eq)를 1,4-dioxane (50 mL)에 넣은 후 1 h 동안 교반한 후 sodium acetate (2.74 g, 33.4 mmol, 1.1 eq)를 첨가한다. 5 h 동안 교반한 후 acetic anhydride (2.87 mL, 30.4 mmol, 1eq)를 첨가하여 15 h 동안 교반한다. 반응 용매를 DCM으로 희석한 후 물로 씻어 주고 무수 MgSO4로 건조시킨 다음, 여과 및 농축하였다. 농축물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리 정제하여 노란색 고체 3-(3-bromo-2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)piperidine-2,6-dione (2.53 g, 8.81 mmol, 29%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.89 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.92-4.82 (m, 1H), 2.93-2.84 (m, 1H), 2.82-2.66 (m, 2H), 2.15-2.06 (m, 1H).
3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid의 합성
Figure PCTKR2021013161-appb-img-000223
Ethyl benzofuran-6-carboxylate의 합성 (1단계)
Benzofuran-6-carboxylic acid (3.91 g, 24.11 mmol, 1 eq), methyl iodide (2.252 mL, 36.2 mmol, 1.5 eq), K2CO3 (6.67 g, 48.2 mmol, 2 eq)를 DMF (30 mL)에 넣은 후 상온에서 16 시간 동안 교반한다. 반응 종결 후 반응물을 물로 희석시킨후 에틸아세테이트를 사용하여 추출한다. 유기층을 모은 후 무수 황산 마그네슘을 넣어 건조시킨 후 여과한다. 유기층을 모아 감압 농축한다. 추가 정제 과정 없이 다음 과정을 진행한다. methyl benzofuran-6-carboxylate (3.73 g, 21.17 mmol, 88%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.21 (dd, J = 1.6, 0.8 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 8.2, 0.7 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 2.2, 1.0 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H).
methyl 3-bromobenzofuran-6-carboxylate의 합성 (2단계)
ethyl benzofuran-6-carboxylate (3.73 g, 21.17 mmol, 1 eq), bromine (2.17 mL, 42.3 mmol, 2 eq)를 DCM (30 mL)에 넣은 후 15분간 교반한다. 반응 종결 후 Na2S2O3으로 희석 시킨 후 DCM을 사용하여 추출한다. 유기층을 모은 후 무수황산 마그네슘을 첨가하여 건조한다. 유기층을 모아 감압 농축한다. 그 후 Cs2CO3 (13.8 g, 42.3 mmol, 2 eq)을 첨가한 후 THF (30 mL), MeOH (6 mL)에 녹인다. 반응물을 2 시간 동안 상온에서 교반 한다. 반응 종결 후 반응물을 물로 희석시킨후 EA를 사용하여 추출한다. 유기층을 모아 무수 황산 마그네슘을 사용하여 건조한다. 필터한 후 유기층을 모아 감압 농축 한다. 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 목표 화합물을 분리하여 methyl 3-bromobenzofuran-6-carboxylate (3.14 g, 12.31 mmol, 58%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.18 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H).
Methyl 3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl) benzofuran-6-carboxylate 의 합성 (3단계)
methyl 3-bromobenzofuran-6-carboxylate (1.00 g, 3.92 mmol, 1 eq), 3-(4-methoxybenzyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione (1.19 g, 5.10 mmol, 1.3 eq), Potassium phosphate (1.66 g, 7.84 mmol, 2 eq), CuI (373 mg, 1.96 mmol, 0.5 eq)를 1,4-Dioxane (20 mL)에 첨가한다. (1R,2R)-cyclohexane-1,2-diamine (235 uL, 1.96 mmol, 0.5 eq)를 첨가한 후 5분간 nitrogen purging 한다. 120 ℃에서 12 시간 동안 교반한다. 반응 종결 후 반응물을 celite filter 한 후 MeOH로 씻어준다. 유기층을 모아 감압 농축 후 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리하여 Methyl 3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl) benzofuran-6-carboxylate (810 mg, 1.98 mmol, 51%)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.19 (s, 1H), 7.98 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.96 (t, J = 6.7 Hz, 2H).
3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid의 합성 (4단계)
Methyl 3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylate (500 mg, 1.224 mmol, 1 eq)을 1,4 dioxane (5 mL)에 첨가 한다. 0 ℃에서 concentrated HCl (5 mL)을 dropwise 하여 첨가한다. 0 ℃에서 50℃ 올린 후 12 시간 동안 교반한다. 반응 종결 후 반응물을 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (182 mg, 0.461 mmol, 38%)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.16 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.95 (dd, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.90 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H).
3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid의 합성 (5단계)
3-(3-(4-methoxybenzyl)-2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-2,3-dihydrobenzofuran-6-carboxylic acid (182 mg, 0.461 mmol, 1 eq)를 TFA (1 mL)에 첨가 한 후 TfOH (0.5 mL)을 첨가한다. 상온에서 1시간 동안 반응한다. 반응 종결 후 NaHCO3 수용액으로 희석시킨 후 EA를 사용해 추출한다. 유기층을 모은 후 무수 황산 마그네슘을 첨가하여 물을 건조 한 후 필터한다. 유기층을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)benzofuran-6-carboxylic acid (81 mg, 0.295 mmol, 64%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.87 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 6.7 Hz, 2H).
3-(4-methoxybenzyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione의 합성
dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione (5 g, 43.8 mmol, 1 eq), 4-methoxybenzyl chloride (7.72 mL, 57 mmol,. 1.3 eq), cesium carbonate (17.13 g, 52.6 mmol, 1.2 eq)를 DMF 20 mL에 넣은 후 상온에서 12 h 동안 교반한다. 반응 종결 후 반응물을 filter 한 후 DMF로 씻어준다. 반응물을 감압 농축한 후 물을 첨가한다. Solid 화 된 화합물을 filter 한 후 화합물을 EA/Hexane 1:1, DCM로 씻어 준 후 건조하여 3-(4-methoxybenzyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione (6.2 g, 26.5 mmol, 60%)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (s, 1H), 7.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.21 (td, J = 6.8, 2.7 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid의 합성
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3-((2-carboxyethyl)amino)-4-methoxybenzoic acid (1단계)
3-amino-4-methoxybenzoic acid (5.0 g, 29 mmol)에 acrylic acid (8.05 mL, 117 mmol) 를 첨가한 후 3시간 동안 100 ℃에서 교반한다. 반응 종결 후 반응물을 상온까지 식힌 후 grey 현탁액을 얻어 정제과정 없이 다음 반응을 진행한다.
3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (2단계)
3-((2-carboxyethyl)amino)-4-methoxybenzoic acid에 Acetic acid (35 ml)을 첨가 한 후 100 ℃에서 10분간 교반한다. Urea (11.3 g, 188 mmol, 6.5eq)을 첨가 한 후 120 ℃에서 12 시간 동안 교반한다. 시킨다. 반응 종결 후 반응물을 상온까지 식힌 후 1 N HCl (150 mL) 과 H2O (50 mL)을 첨가한다. 반응물을 5 ℃에서 12 시간 유지한다. 생성된 solid를 필터한 후 0.05 N HCl, 물로 씻어 준다. 생성된 고체를 건조 시켜 연한 노랑색의 3-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)-4-methoxybenzoic acid (6.64 g 25.1 mmol, 84%)를 얻는다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.75 (s, 1H), 10.37 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.60 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
앞선 제조 방법들과 동일 또는 유사하게 상기 표 1 및 2의 화합물들을 제조하였다.
본 발명에 따라 만들어진 실시예 또는 비교예 화합물들의 NMR 측정 결과를 하기 표 3에 종합하여 나타내었다.
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본 발명 화합물들의 평가
MLKL 수용체와의 결합친화도 측정(Competitive Binding Assay)
다음과 같은 방법으로 Kd 값을 측정하여 결합 친화도를 평가하였다.
BL21 종(strain)에서 유래된 대장균 균주(E.coli host)에서 kinase-tagged T7 phage strains을 제작하기 위하여, 대장균을 log-phage까지 배양한 뒤 박테리오파지 T7를 감염(infection)시키고, 세포 용해(Lysis)전까지 32℃에서 진탕(shaking)하며 배양하였다. 용해물(Lysate)은 원심분리 후 세포 잔해물(debris)를 제거하기 위해 여과하였다. Kinase 생성을 위하여 인간배아신장 세포주 (HEK 293 세포주)에서 발현시키고, 이후 qPCR 확인을 위해 DNA와 tagging였다.
키나아제 어세이를 위한 친화성 수지(affinity resins)을 제작하기 위하여, Streptavidin-coated magnetic beads에 Biotinylated small molecule ligand를 처리하여 실온에서 30분간 방치하였다. 리간드가 결합된 beads에 excess biotin으로 blocking 한 뒤, 결합되지 않은 리간드 제거 및 비특이적인 결합 감소를 위하여 blocking buffer (SeaBlock (Pierce), 1% BSA, 0.05% Tween 20, 1 mM DTT)로 세척하였다. 1x binding buffer (20% SeaBlock, 0.17x PBS, 0.05% Tween 20, 6 mM DTT)에 combining kinases, liganded affinity beads, 및 시험 화합물들을 처리하여 결합 반응을 진행하였다. 시험 화합물은 100% DMSO에 111X stocks가 되도록 준비하였다. 결합 친화도(Kd)는 DMSO 농도 기준점과 화합물의 3배 연속희석법으로 제작한 11개의 농도를 이용하여 구하였다.
결합 친화도를 측정하려는 모든 화합물은 100% DMSO에서 acoustic transfer (non-contact dispensing)의해 분배하였다. 그리고 화합물들은 최종 DMSO 농도가 0.9%가 되도록 assay reaction에 희석하였다. 모든 반응들은 polypropylene 384-well plate에서 수행하며, 각각의 반응들의 최종 부피(volume)은 0.02ml이었다. Assay plate는 실온에서 진탕하며 1시간동안 방치하고, wash buffer (1x PBS, 0.05% Tween 20)로 affinity beads를 세척하였다. Beads는 elution buffer (1x PBS, 0.05% Tween 20, 0.5 μM non-biotinylated affinity ligand)에 현탁시킨 뒤, 실온에서 혼화시키며 30분간 방치시켰다. 용출물의 키나아제 농도는 qPCR로 측정하였다.
Degradation Assay
다음과 같은 방법으로 MLKL 분해능을 평가하였다.
인간간암세포주 (HepG2 세포주) 또는 인간피부세포주 (HaCaT 세포주)를 12 well cell culture plate에 2.0 X 105 cells/mL으로 1 mL씩 각 well에 동일하게 분주하였다. 다음 날, 화합물의 최종 농도가 1, 10 μM이 되도록 만든 배지를 이용하여 배지를 교체하고 (1 mL/well), 20-24시간 동안 5% CO2, 37℃ 배양기 (Thermo scientific, Forma steri-cycle)에서 배양하였다.
배양이 끝난 후 단백질 준비를 위하여, 세포를 1 x TBST로 세척한 뒤, Halt™ Protease 및 Phosphatase Inhibitor Cocktail가 포함된 RIPA lysis buffer를 각 well에 60 μL씩 분주하였다. Scraper로 세포를 긁은 후, 세포를 회수하여 pallet을 균질화 (homogenization)후, 얼음에서 30분간 반응시켰다. 세포를 13,000 rpm, 10분, 4℃에서 원심분리 시킨 뒤, 상층액을 새로운 E-tube로 옮겼다. 단백질 정량을 위하여, 96 well plate에 sample 및 BCA (0-4 mg/ml)을 분주한 뒤, BCA를 100μL씩 분주하고 37℃ 배양기에서 30분 동안 반응시켰다. 흡광도 (SpectraMax, M5e, 562 nm)를 측정한 뒤, 동일한 농도의 단백질과 4X Laemmli sample buffer, DW로 샘플의 양을 맞추고 100℃에서 5분간 반응시켰다.
Mini-PROTEAN Tetra Cell에 MP TGX Precast Gel을 조립 후, 각 well 당 동일한 단백질 (10~15 μg)을 8~10 μL volume으로 넣은 뒤, 1x Tris-Glycine Buffer을 넣고, 로딩을 진행하였다. 로딩 완료 후, Pierce G2 Fast Blotter 기기와 Pierce 1-Step Transfer Buffer를 이용하여 Transfer를 진행하였다. Transfer 완료 후, SuperBlockTM Blocking Buffer 10ml을 분주한 뒤 10분간 상온에서 반응시켰다. 1차 항체를 넣은 5% BSA를 분주하여 4℃에서 O/N 동안 반응시켰다. 다음 날, 1 x TBST로 상온에서 10분, 3번 반복하여 세척을 진행하였다. 2차 항체를 넣은 5% BSA를 분주하여 상온에서 1시간 반응시켰다. 1x TBST로 상온에서 10분, 3번 반복하여 세척을 진행하였다. 화학 발광 (Chemiluminescence)을 이용하여 단백질의 발현양을 측정 (LuminoGraph, ATTO)하였다.
Necroptosis Inhibition Assay
다음과 같은 방법으로 세포괴사 억제를 평가하였다.
FADD 유전자가 결손된 인간 T 림프구 세포(FADD-/- Jurkat cell)를 밑이 투명한 하얀색의 96-well plate에 5.0x105 cells/mL으로 80 μL씩 각 well에 동일하게 분주하였다. 화합물의 최종 농도가 0.1, 1, 10 μM가 되도록 화합물이 포함된 배지를 각 well에 20 μL을 처리하고 상온에서 30분간 반응시켰다. 30분 반응이 끝난 후, 세포괴사를 유발하기 위하여 해당하는 well에 종양괴사인자(Tumor necrosis factor)-α을 최종농도가 15 ng/mL가 되도록 처리하였다. 20~24시간 동안 5% CO2, 37℃ 배양기에서 배양하였다.
배양이 끝난 후, 96-well plate을 상온에서 30분간 방치시켰다. 30분 후, ATP 양을 측정하여 세포생존율을 확인하기 위해 Promega社의 CellTiter-Glo 2.0 시약을 PBS와 1:3으로 희석하여 각 well에 100 μL씩 처리하였다. 처리 후, plate을 차광하여 상온에서 궤도 흔들림(Orbital shaking)으로 2분간 배양 후, 상온에서 흔들림 없이 10분간 방치하였다. Plate 스캐너를 이용하여 well당 0.5초로 발광 측정 후, 측정값을 이용하여 화합물에 대한 세포 독성 및 세포괴사 억제율을 계산하였다.
본 발명에 따라 만들어진 실시예 또는 비교예 화합물들의 MLKL 결합친화도(kd) 평가 결과, Degradation 평가 결과 및 Necroptosis inhibition 평가 결과를 하기 표 4에 종합하여 나타내었다.
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* ND: Not detected.
앞서 기술한 바와 같이, MLKL Signaling으로 매개되는 관련 질환에 대한 약리적 활성효과는 MLKL 수용체와의 결합력, MLKL 단백질에 대한 분해능 및/또는 세포괴사(Necroptosis)에 대한 억제능을 측정한 결과를 통해 판단할 수 있다.
상기 표 4를 살펴보면, 본 발명의 화합물들은 대부분 MLKL 수용체와 우수한 결합력을 보였고 MLKL 분해능과 세포괴사억제능에 대해서도 유의미한 활성을 보이는 것을 알 수 있다. 상세하게, 특히 일부 화합물들의 경우에는 50 % 이상의 높은 세포괴사 억제율을 보이는 것을 확인하였다.
따라서 이의 결과를 통해, 본 발명에 따른 실시예의 화합물을 유효성분으로 함유하는 MLKL매개 질환 대상의 약학적 조성물이 제공될 수 있음을 알 수 있다.
본 명세서에서 언급된 모든 문헌은 그 내용이 본 명세서에 기재된 것처럼 본 명세서에 참조로 포함된다. 본 발명 또는 이의 바람직한 태양(들)의 요소를 도입할 때, 관사 "하나의(a)", "하나의(an)", "그(the)" 및 "상기(said)"는 하나 이상의 요소가 있는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "포함하는(comprising)", "포함하는(including)" 및 "갖는(having)"은 포괄적인 것으로 의도되고, 나열된 요소 이외의 추가적인 요소가 있을 수 있다는 것을 의미한다. 비록 본 발명이 특정 양태 또는 태양에 관하여 설명되었지만, 이들 양태의 세부 사항을 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

Claims (27)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000278
    상기 화학식 1에서,
    X는 N 또는 CH이며,
    Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
    Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000279
    이고,
    R1은 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-R4이고, 여기에서 R1은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이고,
    A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
    B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
    R4는 수소, (저급)알킬, 할로-C1-6알킬, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -C(=O)NRaRb, -NRaSO2Rb, -SO2Ra, -S(O)Ra, 또는 -SO(N)Ra이며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며,
    R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 아미노, 알콕시, 니트로, 시아노, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, 또는 -NRaSO2Rb로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이며,
    R3는 C1-10알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기에서 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6알콕시, CN, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(O)NRaRb, -SO2Ra, -S(O)Ra, -SO(N)Ra, NO2, -N(Ra)(Rb), 아릴, 메틸로 치환된 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 메틸로 치환된 헤테로사이클로알킬 중 어느 하나 이상으로 치환되며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬임.
  2. 제1항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH이며,
    Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
    Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000280
    이고,
    R1은 아릴, 헤테로아릴, 또는 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며; B는 직접 연결, 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고; R4는 수소, (저급)알킬, 할로-C1-6알킬, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -PO3Ra, -PO(ORa)(ORb), -SO2Ra, -S(O)Ra, 또는 -SO(N)Ra이며, 여기에서 Ra와 Rb는 같거나 다르고 서로 독립적으로 C1-6알킬, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬이며,
    R2는 수소, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬 아릴, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
    R3는 C1-5알킬, 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 R3는 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6알콕시, CN, NO2, -N(C1-3알킬)(C1-3알킬), 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 메틸로 치환된 헤테로사이클로알킬 중 어느 하나 이상으로 치환된,
    화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제2항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH이며,
    Y는 O, NH, 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
    Z은 NH이고,
    R1은 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피리딘, 피레리딘, 피페라진, 또는 테트라하이드로피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 또는 피롤리딘이며; R4는 수소, -C(O)-C1-6알킬, 또는 -C(O)O-C1-6알킬이며,
    R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
    R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환된,
    화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제3항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH (바람직하게는, N)이며,
    Y는 O 또는 NH (바람직하게는, O)이고,
    Z은 NH이고,
    R1은 -A-(B)-R4이고, 여기에서 A는 피라졸, 트리아졸, 테트라하이드로피리딘, 또는 피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘이며; R4는 수소, -C(O)-C1-3 알킬, 또는 -C(O)O-C1-6 알킬이며,
    R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시로 치환되며,
    R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환된,
    화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기 화합물들 중 어느 하나인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000281
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000282
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000283
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 화합물을 이용하여 MLKL을 저해 또는 분해하는 화합물을 제조하는 방법.
  7. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000284
    상기 화학식 2에서,
    X, Y, Z, R2 및 R3는 제1항의 화학식 1의 X, Y, Z, R2 및 R3와 동일하며,
    R1은 -(CH2)n-, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -A-(B)-이고, 여기에서 n은 1 내지 10의 정수이고,
    A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며,
    B는 직접 연결(즉, 존재하지 않음), 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬이고,
    linker은 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우 R1과 E3 Binder를 연결해주는 연결기이며,
    E3 Binder는 E3 ligase 리간드임.
  8. 제7항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH이며,
    Y는 S, O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
    Z은 직접 연결, -NH-, -N-(C1-4알킬)-, 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000285
    이고,
    R2는 수소, C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬 아릴, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
    R3는 C1-5알킬, 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 R3는 치환되지 않거나 또는 C1-6 알킬, 할로겐, 할로-C1-6알킬, C1-6 알콕시, CN, NO2, 또는 아릴 중 어느 하나 이상으로 치환되며,
    R1은 아릴, 헤테로아릴, 또는 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 하나 이상의 N을 포함하는 4-6환의 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이며; B는 직접 연결, 또는 하나 이상의 N을 포함하는 4-7환의 헤테로사이클로알킬인,
    화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제8항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH이며,
    Y는 O, NH 또는 -N(C1-6알킬)-이고,
    Z은 NH이고,
    R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, C1-6알콕시, CN, 또는 NO2로 치환되며,
    R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환되고,
    R1은 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피리딘, 피레리딘, 피페라진, 또는 테트라하이드로피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 아제티딘, 또는 피롤리딘인,
    화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제9항에 있어서, 상기
    X는 N 또는 CH (바람직하게는, N)이며,
    Y는 O 또는 NH (바람직하게는, O)이고,
    Z은 NH이고,
    R2는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 또는 페닐이고, 여기에서, 알킬 또는 페닐은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로-C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시로 치환되며,
    R3는 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜이고, 여기에서 상기 페닐, 피디딜, 사이클로헥실, 또는 피페리딜은 치환되지 않거나 또는 C1-6알킬, 할로겐, 또는 C1-6알콕시 중 어느 하나 이상으로 치환되고,
    R1은 -A-(B)-이고, 여기에서 A는 피라졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라하이드로피리딘, 또는 피리딘이고; B는 직접 연결, 또는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘인,
    화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  11. 제7항에 있어서, 상기 링커는 직접 연결 또는 하기 화학식 6이며,
    [화학식 6]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000286
    상기 화학식 6에 있어서,
    A1은 직접 연결, -C(O)-, -C(O)NH-, 또는 -S(O)2-이고,
    A2는 직접 연결, O, -C(O)-, -CH(OH)-, -N(C1-3알킬)-, -(OCH2CH2)q3-, C3-8사이클로알킬, 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 (바람직하게는, 이미다졸, 트리아졸, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 아제티딘 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000287
    , 더욱 바람직하게는 사이클로헥산, 이미다졸, 또는 트리아졸)이고,
    A3는 직접 연결, CO, NH, CC, 바이사이클릭 구조를 가지는 헤테로사이클로알킬(바람직하게는,
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000288
    ,
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000289
    ),
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000290
    ,
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000291
    , 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000292
    이고, 여기에서, X1은 N, CH 또는 C(OH)이며, X2는 O 또는 CH이고, R1은 수소, -C1-3알킬, 또는 -C1-3알킬-OH이고,
    q1, q2 및 q3는 서로 독립적으로 0 내지 12의 정수 (바람직하게, q3는 0 내지 5의 정수임)인,
    화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제11항에 있어서, 상기 linker는 하기들 중 어느 하나인 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000293
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000294
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000295
  13. 제7항에 있어서, 상기 E3 Binder는 *-(화학식 X)-화학식 Y이며,
    여기에서 화학식 X는 존재하지 않거나 또는 화학식 Y와 상기 화학식 2의 나머지 부분을 연결해주는 moiety이고,
    화학식 Y는 CRBN E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, VHL E3 Ubiquitin Ligase binding moiety, 또는 IAP E3 Ubiquitin Ligase binding moiety인,
    화학식 2 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  14. 제13항에 있어서, 상기 화학식 Y는 하기 화학식 3 내지 5 중 어느 하나의 화합물인, 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000296
    상기 화학식 3에서,
    상기
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000297
    는 하기들 중 어느 하나이며,
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000298
    X는 C(O) 또는 C(R3)2;
    X1-X2는 N=N, C(R3)=N 또는 C(R3)2―C(R3)2;
    각 R1은 서로 독립적으로, 할로겐, 니트로, NH2, OH, C(O)OH, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 알콕시;
    각 R3는 서로 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이고, 이때 알킬은 치환되지 않거나, 선택적으로 C6-C10 아릴 또는 5- to 10-멤버 헤테로아릴로 치환되고;
    각 R3′는 서로 독립적으로 C1-C3 알킬;
    각 R4는 서로 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬; 또는 2개의 R4는 그들을 구성하는 탄소로 서로 연결되어 C(O), C3-C6 사이틀로알킬, 또는 N 및 O 중에서 선택된 하나 또는 둘의 헤테로원자를 포함하는 4-, 5-, 또는 6-멤버 헤테로사이클;
    R5는 D (deuterium), H, C1-C3 알킬, F, 또는 Cl;
    t는 0, 1, 또는 2;
    m는 0, 1, 2 또는 3; 및
    n 및 n'는 서로 독립적으로는 0, 1 또는 2이며,
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000299
    상기 화학식 4에서,
    각 R5 및 R6는 서로 독립적으로 OH, SH, 알킬, 또는 치환된 알킬이며, 또는 R5 및 R6는 결합되어 카르보닐을 형성할 수 있고;
    R7는 H, 알킬 또는 치환된 알킬;
    E는 직접결합(bond), C=O, 또는 C=S;
    G는 직접결합(bond), 알킬, 치환된 알킬, -COOH, CO, 또는 C=N-R8, 여기에서, R8는 H, CN, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시 또는 치환된 알콕시;
    M는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000300
    ;
    각 R9 및 R10는 서로 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 하이드록시알킬, 치환된 하이드록시알킬, 티오알킬, 치환된 티오알킬, 링커 또는 X에 연결된 디설파이드(disulphide), 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 또는 할로알킬; 또는 R9 및 R10는 그들의 탄소로 연결되어 사이클로알킬, 또는 치환된 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
    R11는 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 알콕시, 치환된 알콕시, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 아릴, 치환된 아릴, 또는
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000301
    ;
    R12는 H, 알킬, 또는 치환된 알킬;
    R13는 H, 알킬, 치환된 알킬, 알킬카보닐, 치환된 알킬카보닐, (사이클로알킬)알킬카보닐, 치환된 (사이클로알킬)알킬카보닐, aralkylcarbonyl, 치환된 aralkylcarbonyl, 아릴, 치환된 아릴카보닐, (헤테로사이클)카보닐, 치환된 (heterocyclyl)carbonyl, aralkyl, 치환된 aralkyl, (oxoalkyl)carbamate 또는 치환된 (oxoalkyl)carbamate;
    각 R14는 서로 독립적으로 H, 할로알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알킬, 치환된 알킬, 헤테로사이클 또는 치환된 헤테로사이클;
    각 R15는 H, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 알콕시, 치환된 알콕시, 헤테로사이클, 또는 치환된 헤테로사이클;
    각 R16는 서로 독립적으로 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 할로알킬, 치환된 할로알킬, CN, 할로알콕시, 또는 치환된 할로알콕시;
    각 R25는 서로 독립적으로 H 또는 알킬, 치환된 알킬; 또는 2개의 R25는 서로 연결되어 oxo 또는 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬 그룹을 형성하고;
    R23는 H 또는 OH;
    Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 서로 독립적으로 C 또는 N; 및
    o는 0, 1, 2, 3, 또는 4이며,
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000302
    상기 화학식 5에서,
    X는 CH 또는 N이고,
    A는 C1-3알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기에서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 치환되지 않거나 하나 이상의 수소가 =O, C1-3알콕시, C1-3알킬, 할로겐, 니트릴, 니트로, 디-C1-2알킬아민, -COOH, 및 -COO-C1-2알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 치환기로 치환되며,
    B는 직접 연결 또는 -C(O)NH-임.
  15. 제14항에 있어서, 상기 화학식 3은 하기 구조들 중 어느 하나인, 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000303
  16. 제14항에 있어서, 상기 화학식 4은 하기 구조인, 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000304
  17. 제14항에 있어서, 상기 화학식 5는 하기 구조들 중 어느 하나인, 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000305
  18. 제13항에 있어서, 상기 화학식 X는 하기 화학식 7이며,
    [화학식 7]
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000306
    상기 화학식 7에 있어서,
    A1은 직접 연결, CO, 또는 -C(O)NH-이고,
    A2 및 A3는 서로 독립적으로 직접 연결, O, CO, NH, CC, 페닐, 헤테로사이클로알킬 (바람직하기는, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 또는 아제티딘)이고,
    q1, q2 및 q3는 서로 독립적으로 0 내지 3의 정수인,
    화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  19. 제18항에 있어서, 상기 화학식 X는 하기들 중 하나인 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000307
  20. 제7항에 있어서, 상기 화합물은 하기 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000308
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000309
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000310
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000311
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000312
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000313
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000314
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000315
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000316
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000317
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000318
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000319
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000320
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000321
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000322
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000323
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000324
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000325
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000326
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000327
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000328
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000329
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000330
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000331
    Figure PCTKR2021013161-appb-img-000332
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물.
  22. 유효 성분으로 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, MLKL (Mixed Lineage Kinase domain-Like protein) 억제, 분해 또는 결합을 위한 약학 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 약학 조성물은 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환, 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 또는 회장염의 치료 또는 예방용인, 약학 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 상기 약학 조성물은 비알코올성 지방간염, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 뇌졸증, 난소암, 신 손상, 지방간 또는 염증의 치료 또는 예방용인, 약학 조성물.
  25. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적으로 유효한 양을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, MLKL (Mixed Lineage Kinase domain-Like protein) 관련 질환의 치료 또는 예방 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 MLKL 관련 질환은 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury), 뇌졸증(stroke), 골수 부전(bone marrow failure), (급성) 췌장염, 동맥 경화, 대사성 질환, 허혈 재관류 손상, 이식, 감염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 원격 폐 손상(remote lung injury), 간독성, (알코올성 및 비 알코올성) 지방간염, 원격 간 손상, 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 난소암, 신 손상, 지방간, 염증, 크론성 대장염, 궤양성 대장염, 또는 회장염인, 치료 또는 예방 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 MLKL 관련 질환은 비알코올성 지방간염, 자가면역간염 (autoimmune hepatitis), 건선, 저산소허혈능뇌병증, 뇌졸증, 난소암, 신 손상, 지방간 또는 염증인, 치료 또는 예방 방법.
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