WO2022045074A1 - 肥満症を予防又は治療するための医薬組成物 - Google Patents

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WO2022045074A1
WO2022045074A1 PCT/JP2021/030831 JP2021030831W WO2022045074A1 WO 2022045074 A1 WO2022045074 A1 WO 2022045074A1 JP 2021030831 W JP2021030831 W JP 2021030831W WO 2022045074 A1 WO2022045074 A1 WO 2022045074A1
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nfia
obesity
expression
ucp
pharmaceutical composition
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PCT/JP2021/030831
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French (fr)
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裕典 脇
敏正 山内
勇雄 平池
智香 笠井
友人 野田
耕一郎 福田
Original Assignee
国立大学法人東京大学
株式会社Ｌｔｔバイオファーマ
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity.
  • Obesity and its resulting metabolic syndrome and type 2 diabetes increase the risk of cardiovascular disease, renal disease and malignant tumors, and are said to be major obstacles in aiming to extend healthy life expectancy.
  • UCP-1 Uncoupled protein-1
  • a transcription factor called peroxisome proliferator-active recipient gamma In adipocytes, a transcription factor called peroxisome proliferator-active recipient gamma (PPAR ⁇ ) is necessary and sufficient for its differentiation, and has been considered as a master transcription factor for adipocyte differentiation.
  • PPAR ⁇ peroxisome proliferator-active recipient gamma
  • NFIA Nuclear factor I-A
  • PPAR ⁇ peroxisome proliferator-active recipient gamma
  • Non-Patent Document 6 While the brown adipose tissue of NFIA-deficient mice had significantly impaired brown adipose tissue, we introduced NFIA into muscle and white adipose tissue progenitor cells to activate the brown adipose tissue. Found to be done. Furthermore, it was also found that NFIA was highly expressed in brown adipose tissue of human adults as compared with white adipose tissue.
  • the subject of the present invention is NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , Pargcoactiveator 1 ⁇ (PGC1 ⁇ ), Cell depth-inducing DNA fragmentation factor-, which are genes related to a gene program specific to brown adipocytes or beige adipocytes.
  • PPC1 ⁇ Pargcoactiveator 1 ⁇
  • Cell depth-inducing DNA fragmentation factor- which are genes related to a gene program specific to brown adipocytes or beige adipocytes.
  • At least one selected from the group consisting of ⁇ -like effector a (CIDEA) and Cytochrome gene subunit 8b (COX8B) particularly enhancing the expression of NFIA and / or UCP-1, brown adipocytes or beige fat. It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity by increasing the number and function of cells.
  • NFIA or UCP-1 Enhances the expression of at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, which are genes associated with the specific gene program, particularly NFIA and / or UCP-1. Therefore, they have found that it is useful as a preventive or therapeutic agent for obesity by increasing the number and function of brown adipocytes or beige adipocytes, and completed the present invention.
  • a drug for preventing or treating obesity or obesity which comprises a compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B.
  • Composition [2] Compounds that increase the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B are silazoline, lornoxicum, dasatinib, chlormaginone, and sulfisoxazole.
  • the compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B is chlormaginone, sulfisoxazole, or ramatroban, or a compound thereof.
  • the compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B is silazoline, lornoxicum, dasatinib, or phenamil, or a pharmaceutical agent thereof.
  • the pharmaceutical composition described in Crab The pharmaceutical composition described in Crab.
  • the obesity is caused by the expression or activity of obesity-related genes in white adipocytes, beige adipocytes, and brown adipocytes being relatively lower than in a healthy state [1] to [4].
  • Prevention or treatment of the obesity is achieved by promoting increased expression of at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B.
  • the pharmaceutical composition according to any one of [1] to [11]. [13] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [11], wherein the prevention or treatment of the obesity is achieved by promoting the increased expression of NFIA.
  • the pharmaceutical composition according to any one of [1] to [11], wherein the prevention or treatment of the obesity is achieved by promoting the increased expression of UCP-1.
  • the pharmaceutical composition according to any one of [1] to [11], wherein the prevention or treatment of the obesity is achieved by promoting an increase in oxygen consumption.
  • Compounds that increase the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B are silazoline, lornoxicum, dasatinib, chlormaginone, and sulfisoxazole. , Ramatroban, or Fenamil, or a pharmaceutically acceptable salt, ester, solvate or hydrate thereof, according to [16].
  • Compounds that increase the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B are silazoline, lornoxicum, dasatinib, chlormaginone, and sulfisoxazole. , Ramatroban, or Fenamil, or a pharmaceutically acceptable salt, ester, solvate or hydrate thereof, according to [18].
  • NFIA nucleophilicity factor 1
  • UCP-1 PPAR ⁇
  • PGC1 ⁇ CIDEA
  • COX8B genes related to a genetic program specific to brown adipocytes or beige adipocytes.
  • the results of confirming the gene expression profile of 66 compounds with high Ucp-1 mRNA expression levels are shown.
  • the expression levels of Ucp-1 mRNA of chlormadinone acetate, sulfafurazole, ramatroban, and rosiglitazone are shown.
  • the Nfia mRNA expression levels of chlormadinone acetate, sulfafurazole, ramatroban, and rosiglitazone are shown.
  • the Pgc1 ⁇ mRNA expression levels of chlormadinone acetate, sulfafurazole, ramatroban, and rosiglitazone are shown.
  • the Cidea mRNA expression levels of chlormadinone acetate, sulfafurazole, ramatroban, and rosiglitazone are shown.
  • the expression levels of Cox8b mRNA of chlormadinone acetate, sulfafurazole, ramatroban, and rosiglitazone are shown.
  • the DNA construct for making Nfia transgenic mouse is shown.
  • the results of Nfia gene expression (A) and NFIA protein detection (B) in each organ of Nfia transgenic mice are shown.
  • the body weight (A) and food intake (B) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) under a normal diet are shown.
  • the body weight (A) and food intake (B) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) under a high-fat diet are shown.
  • the body weight (A), liver weight (B), and adipose tissue weight (C) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) under a normal diet (NCD) and a high-fat diet (HFD) are shown.
  • HE stain (A) and lipid droplet size (B) of brown adipose tissue under high-fat diet (HFD) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) are shown.
  • HE stain (A) and lipid droplet size (B) of inguinal subcutaneous white adipose tissue (iWAT) under high-fat diet (HFD) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) are shown.
  • Brown adipose tissue (A) inguinal subcutaneous white adipose tissue (B), brown adipose tissue-related in peri-genital adipose tissue (C) under high-fat diet (HFD) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) The change in mRNA expression of the gene group is shown.
  • Brown adipose tissue (A) inguinal subcutaneous white adipose tissue (B) and peri-genital adipose tissue (C) mitochondrial-related genes in high-fat diet (HFD) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) The change in mRNA expression of the group is shown.
  • the changes in body temperature of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) at room temperature (RT) and cold conditions (4 ° C., Cold) are shown.
  • the changes in oxygen consumption (A) and respiratory quotient (B) in high-fat diet (HFD) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) are shown.
  • the glucose tolerance test (A) and the insulin tolerance test (B) of Nfia transgenic mice (Tg) and wild-type mice (WT) under a high-fat diet are shown.
  • the quartile average value (IQM) of the 1st screening result regarding the effect of enhancing the expression level of Nfia mRNA is shown.
  • the results of Normalization by Z-score of the 1st screening result regarding the effect of enhancing the expression level of Nfia mRNA are shown. Phenamil mesylate sulfonate salt, Cirazoline hydrochloride, Lornoxicam, Dasatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate) Rita lydase).
  • Phenamil methane sulphonate salt Cirazoline hydrochloride, Lornoxicam, Dasatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate, Plyzone, Razin), and rosatinib monohydrate. Phenamil metease sulphonate salt, Cirazoline hydrochloride, Lornoxicam, dasatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate) lysate, lysatinib monohydrate (Dasatinib monohydrate), and satinib monohydrate.
  • the active ingredient of the pharmaceutical composition for preventing or treating obesity of the present invention increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B. It is a compound that causes obesity.
  • the "compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B" according to the present invention is preferably chlormadinone, lornoxicum ( Lornoxicam, Dasatinib, Chlormadinone, Sulfisoxazole, Ramatroban, or Phenamil, or a pharmaceutically acceptable salt, ester thereof, or ester thereof.
  • the compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B is a compound of the embodiment used in the examples of the present specification. Is.
  • Sulfisoxazole is a 4-amino-N-3,4-dimethyl-5-isooxazolyl) benzenesulfonamide represented by the following formula (1), and is one of sulfonamide-based antibacterial agents, so-called sulfa agents. It is mainly used as a therapeutic agent for conjunctivitis, blepharitis, keratitis, etc.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Chlormadinone is 6-chloro-3,20-dioxopregna-4,6-dien-17-ol, and its acetic acid ester, chlormadinone acetate, is 6-chloro-3 represented by the following formula (2). , 20-dioxopregnone-4,6-dien-17-yl acetate, which has an action as a progesterone receptor agonist and an androgen receptor antagonist, and is used as a therapeutic drug for benign prostatic hyperplasia, prostate cancer, etc. There is.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PGC1 ⁇ , PPAR ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Ramatroban is (+)-(3R) -3- (4-fluorobenzenesulfonamide) -1,2,3,4-tetrahydrocarbazole-9-propionic acid represented by the following formula (3). It is a thromboxane A2 receptor antagonist and is used as a therapeutic agent for allergic rhinitis.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Phenamil is a 3,5-diamino-6-chloro-N- [imino (phenylamino) methyl] pyrazine-2-carbamide represented by the following formula (4), and its methanesulfonate (phenamilmethane). Sulfonate) is known to induce the differentiation of fat cells and the expression of PPAR ⁇ .
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Cyrazoline is 2-[(2-cyclopropylphenoxy) methyl] -4,5-dihydro-1H-imidazole represented by the following formula (5), and cyrazoline hydrochloride has ⁇ -adrenergic action and ⁇ -adrenergic action. Has an action.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Lornoxicam is represented by the following formula (6): 6-chloro-4-hydroxy-2-methyl-N- (2-pyridyl) -2H-thieno [2,3-e] -1,2-thiazine- 3-Carboxamide 1,1-dioxide, which has a strong cyclooxygenase activity inhibitory action and is used as an oxicam-based nonsteroidal anti-inflammatory analgesic.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • Dasatinib is N- (2-chloro-6-methylphenyl) -2-((6- [4- (2-hydroxyethyl) piperazine-1-yl] -2-yl] represented by the following formula (7). Methylpyrimidine-4-yl) amino) -1,3-thiazole-5-carboxamide, which is used as a hydrate. Dasatinib is a tyrosine kinase inhibitor and is used as an antineoplastic drug.
  • the action on at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, CIDEA, and COX8B, particularly NFIA and / or UCP-1, and the action on obesity are not known.
  • salts of silazoline, lornoxicum, dasatinib, chlormaginone, sulfisoxazole, ramatroban, and phenamil depending on the properties of the compound, mineral salts such as hydrochlorides and sulfates, and organic salts such as methanesulfonates and acetates.
  • mineral salts such as hydrochlorides and sulfates
  • organic salts such as methanesulfonates and acetates.
  • alkali metal salts such as acid salts, sodium salts and potassium salts
  • alkaline earth metal salts such as calcium salts.
  • examples of the ester include fatty acid esters such as acetic acid esters.
  • these compounds may be used as a hydrate and a solvate.
  • Sirazolin, lornoxicum, dasatinib, chlormaginone, sulfisoxazole, ramatroban, or phenamil, or pharmaceutically acceptable salts, esters, solvates or hydrates thereof, are beige adipocytes, as shown in Examples below. Or at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, which are genes related to a brown adipocyte-specific gene program, particularly NFIA and / or UCP-1.
  • “obesity” is associated with or is associated with a health disorder caused by or related to obesity (hereinafter, also simply referred to as “health disorder”), or if the complication is predicted, medical weight loss is required. It also includes cases where obesity is accompanied by excessive accumulation of visceral fat (obesity guideline 2016 (edited by the Japan Obesity Society)). Therefore, “obesity” includes both an aspect in which a health disorder is already complicated in addition to obesity and an aspect in which only obesity is not yet complicated with a health disorder.
  • “obesity” means that in Japan, BMI (body mass index), which is a numerical value calculated by [weight (kg)] ⁇ [height (m) 2 ], is 25 or more, in particular. When the BMI is 35 or more, it can be said to be “highly obese”. Further, according to the international standard by WHO, BMI 30 or more is “obesity”, and BMI 25 or more and less than 30 is considered overweight. Therefore, in the present specification, “obesity” includes both the above-mentioned aspect of obesity and the above-mentioned aspect of having obesity and having a health disorder.
  • the above-mentioned "health disorders”, that is, health disorders caused by or related to obesity, include: 1.
  • Impaired glucose tolerance type 2 diabetes, impaired glucose tolerance, etc.
  • Lipid abnormalities 3. High blood pressure, 4. Hyperuricemia / gout, 5.
  • Coronary artery disease myocardial infarction / angina, 6.
  • Cerebral infarction Cerebral thrombosis / transient ischemic attack (TIA), 7.
  • Fatty liver (non-alcoholic fatty liver disease / NAFLD) 8.
  • Menstrual disorders infertility
  • SAS Sleep apnea syndrome
  • Musculoskeletal disorders osteoarthritis (knee, hip joint) / spondylosis osteoarthritis, osteoarthritis of fingers, 11. Obesity-related kidney disease.
  • the "health disorder” according to the present invention may be any of the above 11 types, or may be any combination.
  • “obesity” includes cases where obesity is accompanied by excessive accumulation of visceral fat.
  • “excessive accumulation of visceral fat” means that in Japan, (i) abdominal circumference measurement of 85 cm or more for men and 90 cm or more for women, or (ii) abdominal CT image of the height of the navel is used as a reference. The case where the visceral fat area is 100 cm 2 or more.
  • the following standards can be applied to "excessive accumulation of visceral fat”.
  • the term “metabolic syndrome” refers to impaired glucose tolerance (type 2 diabetes, impaired glucose tolerance, etc.), impaired glucose tolerance, and hypertension, which are included in the above-mentioned health disorders and have excessive accumulation of visceral fat. A mode that corresponds to one or more.
  • type 2 diabetes refers to multiple genetic factors including predisposing factors for decreased insulin secretion and insulin resistance, as well as environmental factors such as overeating (particularly high-fat diet), lack of exercise, obesity, and stress. Diabetes that develops with aging.
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises obesity caused by a relatively lower numerical or mass ratio of beige adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes than in a healthy state, as well as beige adipocytes or brown adipocytes.
  • obesity caused by the numerical ratio or mass ratio of beige adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes being relatively lower than that in a healthy state is beige in patients without obesity.
  • the numerical ratio or mass ratio of beige adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes in patients with obesity is lower than the numerical ratio or mass ratio of adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes.
  • Obesity caused by the numerical ratio or mass ratio of beige adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes being relatively lower than that in a healthy state can be investigated by a method known in the art.
  • the obesity can be investigated by quantifying the activity of brown adipocytes using a test called FDG-PET that quantifies glucose uptake after cold stimulation.
  • FDG-PET a test called FDG-PET that quantifies glucose uptake after cold stimulation.
  • 18 F-fluoro-2-deoxyglucose for example, available from Nippon Medical Systems Corporation
  • PET / CT system "Aquiduo; Tochigi Medical Systems, Otawara, Otawara”.
  • “Tochigi, Japan” can be used.
  • As a condition of "cold stimulus” after fasting for 6-12 hours, the person should spend 1 hour in light clothing at 19 ° C, and during that time, the legs should be cooled with ice every 5 minutes for 4 minutes. can.
  • “Activity of brown adipocytes” is quantified by determining the region in which glucose uptake above the threshold is observed in FDG-PET as brown adipocyte and the rest as white adipocyte among the regions consistent with adipose tissue in CT value. can do. Therefore, when the quantification result in an obese patient is lower than the quantification result of one healthy person or the average value of the quantification result of a plurality of healthy subjects, the beige adipocyte or the brown adipocyte with respect to the white adipocyte. It can be determined that the obesity is caused by the fact that the numerical ratio or the mass ratio is relatively lower than that in the healthy state.
  • the quantification is also to confirm that the prevention or treatment of obesity according to the present invention was achieved by promoting the differentiation of adipocytes into beige adipocytes or brown adipocytes, and to confirm that obesity according to the present invention. Can also be used to confirm that prevention or treatment of is achieved by inhibiting dedifferentiation of beige adipocytes or brown adipocytes into adipose progenitor cells.
  • obesity is preferably caused by the expression or activity of obesity-related genes in white adipocytes, beige adipocytes, and brown adipocytes being relatively lower than in a healthy state.
  • the obesity-related gene that can cause obesity due to the gene expression being relatively lower than that in the healthy state for example, a gene related to a gene program specific to brown adipocytes or beige adipocytes (preferably). , NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B), energy production-related genes, glucose metabolism-related genes, mitochondrial function maintenance-related genes, respiratory-related genes, etc. ..
  • the gene expression described in the examples of the present specification is performed. It can be performed according to the analysis method of. Accordingly, the present invention comprises a compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, and the present invention contains white adipocytes, beige adipocytes, and brown adipocytes. It is useful for the treatment or prevention of obesity caused by the expression or activity of obesity-related genes in adipocytes being relatively lower than in a healthy state.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B, which are genes related to a gene program specific to brown adipocytes or beige adipocytes.
  • NFIA and / or UCP-1 are genes related to a gene program specific to brown adipocytes or beige adipocytes.
  • NFIA and / or UCP-1 By enhancing the activity of at least one of these, especially NFIA and / or UCP-1, it is useful as a therapeutic agent for obesity, metabolic syndrome, and / or type 2 diabetes based on promotion of energy consumption rather than suppression of energy intake.
  • the prevention or treatment of obesity according to the present invention is achieved by promoting an increase in oxygen consumption.
  • the prevention or treatment of obesity achieved by promoting an increase in oxygen consumption is achieved with lornoxicam and / or dasatinib. Therefore, the disease or symptom targeted for prevention and / or treatment of the present invention is at least one selected from the group consisting of obesity, metabolic syndrome, and type 2 diabetes, and is preferably obesity.
  • Obesity with low expression of at least one (preferably NFIA or UCP-1) selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B is described in Example 2 herein.
  • the expression level of the gene in obese patients is higher than the average value of the expression level of the gene in one healthy subject or the expression level of the gene in multiple healthy subjects. Applicable when it is low.
  • tissue collection and qPCR and Western blotting methods of Example 2 herein consist of a group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B for the prevention or treatment of obesity according to the present invention. It can also be used to confirm that it is due to promoting increased expression of at least one selected (preferably NFIA or UCP-1).
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain silazoline, lornoxicum, dasatinib, chlormadinone, sulfisoxazole, ramatroban, or phenamil, or a pharmaceutically acceptable salt, ester, solvate or hydrate thereof.
  • a pharmaceutically acceptable carrier to the pharmaceutical composition in various administration forms.
  • examples of the administration form of such a pharmaceutical composition include injections, oral preparations (tablets, granules, powders, capsules), ointments, creams, patches, suppositories and the like. Of these, injections and oral preparations are particularly preferable.
  • Pharmaceutically acceptable carriers used to form these pharmaceutical compositions include, for example, solubilizing agents, excipients, binders, lubricants, disintegrants, colorants, flavoring agents, preservatives. Agents, surfactants and the like can be mentioned. More specifically, water, ethanol, propylene glycol, polyethylene glycol, lactose, glucose, D-mannitol, starch, crystalline cellulose, calcium carbonate, kaolin, starch, gelatin, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropylmethyl cellulose, polyvinylpyrrolidone, ethanol.
  • Carboxymethyl cellulose Carboxymethyl cellulose calcium salt, Magnesium stearate, Calcium stearate, Talk, Acetyl cellulose, Sucrose, Titanium oxide, benzoic acid, Paraoxybenzoic acid ester, Sodium dehydroacetate, Arabian rubber, Tragant, Methyl cellulose, Egg yolk, Nonionic interface Activator, sucrose, simple syrup, citric acid, distilled water, ethanol, glycerin, propylene glycol, macrogol, phosphate-sodium hydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, sodium phosphate, anhydrous calcium hydrogen phosphate, sodium hydrogen carbonate, Examples thereof include popidone, crospopidone, glucose, sodium chloride, phenol, thimerosal, paraoxybenzoic acid ester, sodium hydrogen sulfite, carmellose, hypromellose, macrogol and the like.
  • excipients When used as an oral preparation, excipients, binders, lubricants, disintegrants, colorants, flavoring agents and the like are used and can be produced by a conventional method.
  • oral preparation tablets, granules, powders, capsules and the like are preferable.
  • water, a solubilizing agent, etc. are used.
  • injection intravenous administration, subcutaneous injection, intramuscular administration are preferable, and lyophilized preparations and powder fillers are mentioned.
  • the composition containing chlormaginone of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, ester, solvate or hydrate thereof is preferably used. It can contain, for example, chlormaginone acetate (preferably 25 mg), as well as pregelatinized starch, carmellose calcium, crystalline cellulose, magnesium stearate, corn starch, and lactose hydrate.
  • the composition of an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • the composition of an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • sodium hydrogen carbonate, crystalline cellulose, anhydrous calcium hydrogen phosphate, low-substituted hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, calcium stearate, hypromellose, macrogol 6000 It can contain titanium oxide, talc, carnauba wax, and light anhydrous silicic acid.
  • the composition of an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • an existing drug for example, an oral preparation, preferably a tablet
  • dasatinib monohydrate preferably 20 mg or 50 mg as dasatinib
  • lactose hydrate preferably 20 mg or 50 mg as dasatinib
  • crystalline cellulose preferably croscarmellose sodium
  • hydroxypropyl cellulose preferably magnesium stearate
  • hypromellose titanium oxide
  • polyethylene polyethylene. It can contain glycol 400.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain other therapeutic agents for obesity, metabolic syndrome, therapeutic agents for type 2 diabetes, and the like, or may be used in combination with these agents.
  • a known therapeutic agent for type 2 diabetes is more preferable, and examples thereof include mazindol, which is an appetite suppressant, and a diabetes therapeutic agent that targets fat cells like the compound according to the present invention, and in particular, thiazolidine. Rosiglitazone or pioglitazone, which are therapeutic agents for type (glycazone) diabetes, are more preferable.
  • the content of the active ingredient of the present invention in the pharmaceutical composition of the present invention varies greatly depending on the active ingredient and the administration form, and is not particularly limited, but is usually 0.01 to 0.01 to the total amount of the composition. It is 100% by mass, preferably 1 to 100% by mass. In the case of an oral preparation, the active ingredient is usually preferably contained in an amount of about 5% by mass to 70% by mass per administration unit.
  • the dose of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the active ingredient, the symptom of the patient to be administered, the age, and the administration method, but the amount of the active ingredient is 1.0 ⁇ g to 500 mg per day for an adult. preferable. In addition, this dose can be divided into 1 to 4 times a day. In the case of chlormadinone acetate, it is usually preferable to administer 25 mg to 50 mg once to an adult 1 to 3 times a day. In the case of ramatroban, it is usually preferable to administer 75 mg to 100 mg once to an adult 1 to 3 times a day. In the case of sulfafurazole, it is usually preferable to administer 200 mg to 800 mg at a time, 1 to 3 times a day, to an adult.
  • lornoxicam it is usually preferable to administer 4 to 8 mg at a time, 3 times a day, to an adult.
  • dasatinib it is usually preferable to administer 1000 mg to 140 mg once a day or 70 mg to 90 mg twice a day to an adult.
  • Another preferred embodiment of the invention increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B for preventing or treating obesity. It is a compound that causes obesity. Another preferred embodiment of the invention is at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B for producing pharmaceutical compositions for the prevention or treatment of obesity.
  • the use of compounds that increase the expression of a species gene is selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B for producing pharmaceutical compositions for the prevention or treatment of obesity.
  • Another preferred embodiment of the invention is characterized by administering a compound that increases the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B.
  • a method of preventing or treating obesity the compounds that increase the expression of at least one gene selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B include silazoline, lornoxicum, and dasatinib. , Chlormaginone, sulfisoxazole, ramatroban, or phenamil, or pharmaceutically acceptable salts, esters, solvates or hydrates thereof are preferred.
  • the obesity is preferably obesity caused by a relatively lower numerical ratio or mass ratio of beige adipocytes or brown adipocytes to white adipocytes than in a healthy state.
  • Is preferably obesity due to low expression of at least one selected from the group consisting of NFIA, UCP-1, PPAR ⁇ , PGC1 ⁇ , CIDEA, and COX8B.
  • prevention or treatment of the obesity is preferably achieved by promoting differentiation of adipose progenitor cells into beige adipocytes or brown adipocytes, and adipose progenitor cells or brown adipocytes to adipose precursor cells.
  • Test Example 1 Anti-obesity effect of chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban
  • Increased expression of UCP-1 is thought to induce an increase in basal metabolism due to increased heat production in adipocytes and contribute to an anti-obesity effect. Therefore, in order to search for compounds that contribute to the anti-obesity effect, a cell experiment in which immortalized cells derived from mouse inguinal stromal vascular cells, which are a mixture of white adipocyte precursor cells and beige adipocyte precursor cells, are induced to differentiate into adipocytes.
  • Various compounds were added to the system to screen for compounds that increased UCP-1 mRNA expression.
  • Differentiation medium 1 was replaced with differentiation medium 2 (basic medium containing 5 ⁇ g / mL Insulin, 1 nM T3) on Day 2, and a screening compound was added to a final concentration of 10 ⁇ M.
  • the differentiation medium 2 was replaced with a new differentiation medium 2 on Day 4, and a screening compound was added so that the final concentration was 10 ⁇ M.
  • 1 ⁇ M Rosiglitazone was added up to day0-day7 while exchanging the medium in the same manner as the screening compound.
  • RNA extraction, reverse transcription reaction RNA lysate was prepared from the cells of Day7 using SuperPrepII Cell Lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO), and RiverTra Ace qPCR RT Master MixOvth DNA Rem did.
  • RNA extraction and reverse transcription reaction RNA was extracted from the cells of Day 7 using RNeasy mini kit (QIAGEN), and cDNA was prepared using RiverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (TOYOBO).
  • qPCR QPCR was performed on a ViiA7 real-time PCR system (Applied Biosystems) using KOD SYBR qPCR Mix (TOYOBO), and the amounts of Nfia, Ucp-1, Pgc1 ⁇ , Cidea, and Cox8b mRNA were measured. Rplp0 was used for the endogenous control.
  • the primers are shown in Table 2.
  • the 1.1st screening result is shown in FIG.
  • a differentiation induction experiment was performed again using 66 compounds having a high Ucp-1 mRNA expression level, and the gene expression profile was confirmed.
  • Confirmation of gene expression profile It was revealed that the expression level of Ucp-1 mRNA was increased in the cells supplemented with chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban as compared with the control group (Fig. 2).
  • the expression levels of Nfia, Pgc1 ⁇ , Cidea, and Cox8b mRNA were also measured by qPCR in the same manner, and the gene expression profile of each compound was clarified (FIGS. 3-FIG. 6).
  • Chlormadinone acetate, thermogeninone acetate, sulfisoxazole and ramatroban showed increased expression of Ucp-1 mRNA in cells supplemented with their respective compounds (Fig. 2), and thus have an anti-obesity effect due to the thermogenic effect of UCP-1. it is conceivable that.
  • chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban increased Nfia mRNA expression (Fig. 3).
  • NFIA promotes transcription of these genes by promoting binding of PPAR ⁇
  • a master transcription factor for adipocyte differentiation to a brown adipocyte-specific gene enhancer and induces a weight-reducing effect (see Test Example 2), chlormaginone.
  • Acetate esters, sulfisoxazole and ramatroban may have anti-obesity effects through induction of NFIA and / or induction of UCP-1 expression.
  • chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban have anti-obesity action by a route different from that of rosiglitazone. It may be. Chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban also increased the expression of Pgc1 ⁇ , Cidea and Cox8b. PGC1 ⁇ induces brown adipocyte-specific gene expression as a transcriptional conjugate factor of PPAR ⁇ , and CIDEA is involved in the maintenance of lipid droplets in brown adipocytes.
  • COX8B is a component of the mitochondrial cytochrome c oxidase enzyme complex
  • each compound contributes to the induction of beigeization of white adipocytes and anti-obesity.
  • chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban have a characteristic profile of increased expression of Nfia, Ucp-1, Pgc1 ⁇ , Cidea and Cox8b.
  • chlormadinone acetate, sulfisoxazole and ramatroban have different profiles of increased expression of brown adipocytes and / or beige adipocytes, thereby optimizing for different causes or types of obesity. May be used as an obesity drug.
  • Test Example 2 (Examination of the effect of controlling the expression of NFIA gene in adipocytes on body weight and systemic metabolism)
  • NFIA brown adipose tissue-specific transcription program by open chromatin analysis of brown adipose tissue of mice. Since NFIA regulates the transcription of brown adipose-specific genes, it is expected that by increasing the expression of NFIA in adipose tissue, it will enhance systemic energy metabolism and become a therapeutic strategy for obesity or obesity. Will be done. In order to investigate this, a model mouse that increases the expression of NFIA in the adipose tissue of the mouse was prepared by a gene modification technique, and the effect on the body weight and metabolism of the whole body was examined.
  • Method 1. Development of Nfia transgenic mouse 1) Preparation of DNA construct (Fig. 7) A deoxyribonucleic acid (cDNA) sequence encoding the mouse Nfia gene was inserted downstream of the Fabp4 gene promoter (-5.4 kb) selectively expressed in adipose tissue.
  • cDNA deoxyribonucleic acid
  • mice Preparation of mice The above DNA construct was injected into fertilized eggs of C57BL / 6 by microinjection to obtain mouse pups randomly integrated into genomic DNA.
  • mRNA was extracted from various organs of trussogenic mice using TRI reagent (Cosmobio) and Quant Studios using Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). Quantitative PCR (qPCR) was performed by Flex Real-Time PCR System (Applied Biosystems), and the amount of mRNA of the Nfia gene was measured. The Rplp0 gene was used for endogenous control. Western blotting was performed using an NFIA antibody (abcam 41851) for the detection of NFIA protein.
  • RNA analysis of adipose tissue and other organs Organ samples were homogenized with a beaded cell disruptor (Tomy Seiko), mRNA was extracted using TRI reagent (Cosmo Bio), and RiverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover ( CDNA was prepared using TOYOBO). Further, using Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), Quant Studio 7 Flex Real-Time PCR System (Applied Biosystems) was used to perform quantitative PCR (applied Biosystems), and quantitative PCR was performed. The primers used are shown in Tables 3 to 5.
  • Glucose tolerance test and insulin tolerance test A small amount of blood was collected from the tail vein, and blood glucose was measured using a glutest sensor (Sanwa Kagaku Co., Ltd.). A prescribed amount (2 g / kg) of an aqueous glucose solution was orally ingested using a sonde, and the measurement was performed with a small amount of blood obtained from the tail vein after the described time. Aqueous insulin solution was administered intraperitoneally at a dose of 0.75 U / kg and was measured with a small amount of blood obtained from the tail vein after the stated time, similar to the glucose tolerance test.
  • Nfia transgenic mice In Nfia transgenic mice, it was confirmed from the mRNA analysis results that the expression levels of Nfia gene mRNA and protein were selectively increased in adipose tissue (FIG. 8). Under normal diet, there was no difference in body weight and food intake between Nfia transgenic mice and wild-type mice (Fig. 9), but there was no difference in food intake when loaded with a high-fat diet. Regardless, weight gain was significantly suppressed in Nfia transgenic mice (Fig. 10).
  • tissue weight at autopsy revealed a significant reduction in organ weight in white adipose tissue in Nfia transgenic mice compared to wild-type mice under a high-fat diet (Fig. 11).
  • adipose tissue Although there was no change in brown adipose tissue, adipocyte enlargement due to a high-fat diet was suppressed in inguinal subcutaneous white adipose tissue (FIGS. 12 and 13).
  • Nfia transgenic mice At the genetic level, in the white adipose tissue (subcutaneous in the inguinal region and around the genital organs) of Nfia transgenic mice, brown adipose-related genes such as Ppargc1a, Cidea, Cox8b, Dio2, and S100b and (Fig. 14), it was found that a group of mitochondrial-related genes (Fig. 15) was induced. Furthermore, compared to wild-type mice, Nfia transgenic mice significantly suppressed the decrease in body temperature in a cold environment (Fig. 16), and the oxygen consumption was measured by the metabolic cage. Significantly higher (Fig. 17) suggests that Nfia transgenic mice have increased energy consumption due to heat production.
  • Nfia transgenic mice had higher glucose tolerance and insulin sensitivity as compared with the wild type, and the exacerbation of diabetes due to a high-fat diet was suppressed (FIG. 18).
  • Test Example 3 NFIA-increasing action of phenamilmethanesulfonate, silazoline hydrochloride, lornoxicam and dasatinib monohydrate (overview) Since NFIA regulates the transcription of brown adipose-specific genes, it is expected that by increasing the expression of NFIA in adipose tissue, it will enhance systemic energy metabolism and become a therapeutic strategy for obesity or obesity. Will be done. Therefore, in order to search for compounds that contribute to the anti-obesity effect, we screened compounds that increase Nfia mRNA expression using white adipocytes.
  • RNA extraction and reverse transcription reaction Total RNA is extracted from the cells of Day 11 using RNeasy 96 Universal Tissue Kit (QIAGEN) or RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (QIAGEN), and Total RNA is extracted from the cells of Day11.
  • a cDNA was prepared using.
  • qPCR QPCR was performed on the ViiA7 real-time PCR system (Applied Biosystems) using PowerUp SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems), and the amount of Nfia mRNA was measured. ⁇ -actin was used for endogenous control.
  • the primers used are the same as in Table 2.
  • PPAR ⁇ is a master transcription factor for adipocyte differentiation, and NFIA promotes transcription of these genes by promoting binding of PPAR ⁇ to a brown adipocyte-specific gene enhancer, and induces a weight-reducing effect (Test Example). 2), phenamilmethanesulfonate, silazoline hydrochloride, lornoxicum may have anti-obesity effects through induction of NFIA or induction of PPAR ⁇ expression. Since phenamilmethanesulfonate, silazoline hydrochloride, and lornoxicum increase the mRNA expression of Fabp4 (Fig. 23), which is an adipocyte differentiation marker, and Cidea (Fig.
  • Cox8b is a component of the mitochondrial cytochrome c oxidase enzyme complex, each compound is white. It is suggested that it contributes to the induction of adipocyte beige and the activation of mitochondria. Based on the above, phenamilmethanesulfonate, silazoline hydrochloride, lornoxicum and dasatinib monohydrate may be used as anti-obesity drugs having different gene profiles.
  • Test Example 4 Lornoxicam and dasatinib monohydrate increase oxygen consumption (overview)
  • Test Example 2 it was clarified that when the expression of the Nfia gene in adipocytes increased, oxygen consumption increased, and weight gain and abnormal glucose metabolism under a high-fat diet were alleviated.
  • the compound hit in Test Example 3 affected the expression level of mitochondria-related genes (Pgc1 ⁇ , Cox8b). From this, it is possible that the hit compound increases the oxygen consumption of cells through the activation of mitochondria and contributes to the anti-obesity effect. Therefore, changes in extracellular oxygen consumption in adipocytes when the hit compound was added were investigated.
  • Oxygen consumption rate assay (OCR) 1) Induction of differentiation 1. Same as the 1st screening. However, the drug was added so that the final concentration was 0.1 to 100 ⁇ M. 2) OCR Day 11 was replaced with a fresh differentiation medium, the drug was added again, and the mixture was allowed to stand in a 37 ° C./5% CO 2 incubator for 30 minutes. Phosphorescent Oxygen Technology solution (Cayman Chemical) and Mineral Oil were added, and time-resolved fluorescence measurement (excitation 380 nm, emission 650 nm) was performed with a plate reader (PerkinElmer, Nivo). Antimycin A was used as the Negative control.
  • OCR Oxygen consumption rate assay
  • Test Example 2 it has been clarified that when the expression of the Nfia gene in adipocytes is increased, oxygen consumption is increased, and weight gain and abnormal glucose metabolism under a high-fat diet are alleviated. Therefore, the results of Test Example 4 suggest that lornoxicam and dasatinib monohydrate may induce an increase in oxygen consumption of adipocytes through increased expression of the Nfia gene and exhibit an anti-obesity effect. ..

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Abstract

本発明は、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現を増強させて、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞の数や働きを高めることによる肥満症の予防又は治療するための医薬組成物を提供する。

Description

肥満症を予防又は治療するための医薬組成物
　本発明は、肥満症を予防又は治療するための医薬組成物に関する。
　肥満症とそれに起因するメタボリックシンドロームや２型糖尿病は、心血管疾患、腎疾患や悪性腫瘍のリスクを高めることから、健康寿命の延伸を目指す上で大きな障害と言われている。近年、エネルギーの貯蔵を担う白色脂肪組織以外に、細胞が使うエネルギーを生産する細胞内小器官であるミトコンドリアにおけるＵｎｃｏｕｐｌｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ－１（ＵＣＰ－１）というタンパク質による熱産生を介してエネルギーを消費する褐色脂肪組織が、ヒト成人にも存在することがわかってきた。リニエージトレーシングの結果から（古典的）褐色脂肪細胞が実は骨格筋細胞と同一のＭｙｆ５陽性前駆細胞から分化し、白色脂肪細胞とは前駆細胞が異なることが報告されている一方、寒冷刺激や交感神経刺激に応じて白色脂肪細胞の一部もＵＣＰ－１陽性で発熱能を持つ「ベージュ脂肪細胞（誘導型褐色脂肪細胞）」に変化し得ることが知られている。既に肥満の度合いと褐色脂肪組織の活性が負に相関すること、加齢に伴い褐色脂肪組織の活性が低下することが報告されており、褐色脂肪組織の数や働きを高めることが肥満症の新しい治療につながり得るとして期待されている（非特許文献１～５）。
Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５００－１５０８（２００９）． Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５０９－１７（２００９）． Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５１８－２５（２００９）． Ｄｉａｂｅｔｅｓ　５８，１５２６－１５３１（２００９）． Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３，３４０４－３４０８　（２０１３）． Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．２０１７　Ｓｅｐ；１９（９）：１０８１－１０９２
　脂肪細胞においてはこれまで、ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ（ＰＰＡＲγ）と呼ばれる転写因子がその分化に必要十分であり、脂肪細胞分化のマスター転写因子と考えられてきた。しかし、本発明者らは、褐色脂肪組織に特異的なＤＮＡ上のオープンクロマチン領域の解析から、褐色脂肪組織の新規制御因子としてＮｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　Ｉ－Ａ　（ＮＦＩＡ）を同定した。ＮＦＩＡがＰＰＡＲγに先行してＤＮＡへ結合し、かつＰＰＡＲγのＤＮＡへの結合を促進することで、ＮＦＩＡとＰＰＡＲγが協調的に褐色脂肪細胞の遺伝子プログラムを活性化することを見出した。すなわち、褐色脂肪特異的な遺伝子プログラムの活性化はＰＰＡＲγのみでは達成できず、ＮＦＩＡの存在が必須であることを明らかにした（非特許文献６）。
　本発明者らは、ＮＦＩＡを欠損させたマウスの褐色脂肪組織では褐色脂肪の遺伝子プログラムが著しく障害されていた一方、筋肉や白色脂肪の前駆細胞にＮＦＩＡを導入すると褐色脂肪の遺伝子プログラムが活性化されることを見出した。さらに、ヒト成人の褐色脂肪組織でも白色脂肪組織と比較してＮＦＩＡが高発現していることも見出した。
　従って、本発明の課題は、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、Ｐｐａｒｇ　ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ　１α（ＰＧＣ１α）、Ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ－α－ｌｉｋｅ　ｅｆｆｅｃｔｏｒ　ａ（ＣＩＤＥＡ）、及びＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｃ　ｏｘｉｄａｓｅ　ｓｕｂｕｎｉｔ　８ｂ（ＣＯＸ８Ｂ）からなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現を増強させて、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞の数や働きを高めることによる肥満症の予防又は治療するための医薬組成物を提供することにある。
　そこで本発明者らは、白色脂肪細胞前駆細胞から脂肪細胞へと分化誘導する実験系でＮＦＩＡ又はＵＣＰ－１の発現を増加させる化合物をスクリーニングし、特定の化合物が、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現を増強させて、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞の数や働きを高めることによる肥満症の予防又は治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は、次の発明［１］～［２１］を提供するものである。
［１］ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を含む、肥満又は肥満症を予防又は治療するための医薬組成物。
［２］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［１］記載の医薬組成物。
［３］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、若しくはラマトロバン、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［２］記載の医薬組成物。
［４］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［２］記載の医薬組成物。
［５］前記肥満症が、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する、［１］～［４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［６］前記肥満症が、白色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、及び褐色脂肪細胞における肥満症関連遺伝子の発現又は活性が健常状態よりも相対的に低いことに起因する、［１］～［４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［７］前記肥満症が、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現が低いことに起因する、［１］～［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［８］前記肥満症が、ＮＦＩＡの発現が低いことに起因する、［１］～［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［９］前記肥満症が、ＵＣＰ－１の発現が低いことに起因する、［１］～［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１０］前記肥満症を予防又は治療することが、脂肪前駆細胞からベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞への分化を促進することにより達成される、［１］～［９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１１］前記肥満症を予防又は治療することが、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞から脂肪前駆細胞への脱分化を阻害することにより達成される、［１］～［９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１２］前記肥満症を予防又は治療することが、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現増加を促進することにより達成される、［１］～［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１３］前記肥満症を予防又は治療することが、ＮＦＩＡの発現増加を促進することにより達成される、［１］～［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１４］前記肥満症を予防又は治療することが、ＵＣＰ－１の発現増加を促進することにより達成される、［１］～［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１５］前記肥満症を予防又は治療することが、酸素消費量の増加を促進することにより達成される、［１］～［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１６］肥満症を予防又は治療するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物。
［１７］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［１６］記載の化合物。
［１８］肥満症の予防又は治療用の医薬組成物を製造するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物の使用。
［１９］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［１８］記載の使用。
［２０］ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を投与することを特徴とする、肥満症を予防又は治療する方法。
［２１］前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、［２０］記載の方法。
　本発明によれば、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現を増強させて、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞の数や働きを高めることによる、全く新しい肥満症の予防又は治療剤を提供できる。
Ｕｃｐ－１　ｍＲＮＡ発現量が高い６６化合物の遺伝子発現プロファイルの確認の結果を示す。 クロルマジノン酢酸エステル（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）のＵｃｐ－１　ｍＲＮＡ発現量を示す。 クロルマジノン酢酸エステル（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）のＮｆｉａ　ｍＲＮＡ発現量を示す。 クロルマジノン酢酸エステル（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）のＰｇｃ１α　ｍＲＮＡ発現量を示す。 クロルマジノン酢酸エステル（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）のＣｉｄｅａ　ｍＲＮＡ発現量を示す。 クロルマジノン酢酸エステル（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）のＣｏｘ８ｂ　ｍＲＮＡ発現量を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス作成のためのＤＮＡコンストラクトを示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウスの各臓器におけるＮｆｉａ遺伝子発現（Ａ）及びＮＦＩＡタンパク質の検出（Ｂ）結果を示す。 普通食下におけるＮｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の体重（Ａ）及び摂餌量（Ｂ）を示す。 高脂肪食下におけるＮｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の体重（Ａ）及び摂餌量（Ｂ）を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の普通食下（ＮＣＤ）及び高脂肪食下（ＨＦＤ）における体重（Ａ）、肝臓重量（Ｂ）、脂肪組織重量（Ｃ）を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の高脂肪食下（ＨＦＤ）における褐色脂肪組織のＨＥ染色（Ａ）及び脂肪滴サイズ（Ｂ）を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の高脂肪食下（ＨＦＤ）における鼠径部皮下白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）のＨＥ染色（Ａ）及び脂肪滴サイズ（Ｂ）を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の高脂肪食下（ＨＦＤ）における褐色脂肪組織（Ａ）鼠径部皮下白色脂肪組織（Ｂ）、生殖器周囲脂肪組織（Ｃ）における褐色脂肪関連遺伝子群のｍＲＮＡ発現変化を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の高脂肪食下（ＨＦＤ）における褐色脂肪組織（Ａ）鼠径部皮下白色脂肪組織（Ｂ）、生殖器周囲脂肪組織（Ｃ）におけるミトコンドリア関連遺伝子群のｍＲＮＡ発現変化を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の室温（ＲＴ）及び寒冷条件（４℃、Ｃｏｌｄ）における体温の変化を示す。 Ｎｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）の高脂肪食下（ＨＦＤ）における酸素消費量（Ａ）と呼吸商（Ｂ）の変化を示す。 高脂肪食下におけるＮｆｉａトランスジェニックマウス（Ｔｇ）と野生型マウス（ＷＴ）のブドウ糖負荷試験（Ａ）及びインスリン負荷試験（Ｂ）を示す。 Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ発現量増強作用に関する１ｓｔスクリーニング結果の四分位平均値（ＩＱＭ）によるＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ結果を示す。 Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ発現量増強作用に関する１ｓｔスクリーニング結果のＺ－ｓｃｏｒｅによるＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ結果を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のNｆｉａ　ｍRＮＡ発現量を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のＰｐａｒγ　ｍRＮＡ発現量を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のＦａｂｐ４　ｍRＮＡ発現量を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のＣｉｄｅａ　ｍRＮＡ発現量を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のＰｇｃ１α　ｍRＮＡ発現量を示す。 フェナミルメタンスルホン酸塩（Ｐｈｅｎａｍｉｌ　ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ　ｓａｌｔ）、シラゾリン塩酸塩（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）及びロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）のＣｏｘ８ｂ　ｍRＮＡ発現量を示す。 ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）の脂肪細胞の細胞外酸素消費量に対する影響を示す。 ダサチニブ一水和物（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ　ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）の脂肪細胞の細胞外酸素消費量に対する影響を示す。
　本発明の肥満症を予防又は治療するための医薬組成物の有効成分は、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物である。
　本発明に係る「ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物」は、好ましくは、シラゾリン（Ｃｉｒａｚｏｌｉｎｅ）、ロルノキシカム（Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ）、ダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、クロルマジノン（Ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ）、サルフイソキサゾール（Ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、ラマトロバン（Ｒａｍａｔｒｏｂａｎ）、若しくはフェナミル（Ｐｈｅｎａｍｉｌ）、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である。より好ましくは、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物は、本願明細書の実施例で用いた態様の化合物である。
　サルフイソキサゾールは、次の式（１）で表される４－アミノ－Ｎ－３，４－ジメチル－５－イソオキサゾリル）ベンゼンスルホンアミドであり、スルホンアミド系抗菌薬、いわゆるサルファ剤の１種であり、主として結膜炎、眼瞼炎、角膜炎などの治療薬として用いられている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　クロルマジノンは、６－クロロ－３，２０－ジオキソプレグナ－４，６－ジエン－１７－オールであり、その酢酸エステルであるクロルマジノン酢酸エステルは、次の式（２）で表される６－クロロ－３，２０－ジオキソプレグナ－４，６－ジエン－１７－イル　アセテートであり、プロゲステロン受容体作動薬、アンドロゲン受容体拮抗薬としての作用を有し、前立腺肥大症、前立腺癌などの治療薬として用いられている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＧＣ１α、ＰＰＡＲγ、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　ラマトロバンは、次の式（３）で表される（＋）－（３Ｒ）－３－（４－フルオロベンゼンスルホンアミド）－１，２，３，４－テトラヒドロカルバゾール－９－プロピオン酸であり、トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤であり、アレルギー性鼻炎治療薬として用いられている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　フェナミルは、次の式（４）で表される３，５－ジアミノ－６－クロロ－Ｎ－[イミノ(フェニルアミノ)メチル]ピラジン－２－カルボアミドであり、そのメタンスルホン酸塩（フェナミルメタンスルホン酸塩）が脂肪細胞の分化とＰＰＡＲγの発現を誘導することが知られている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　シラゾリンは、次の式（５）で表される２－［（２－シクロプロピルフェノキシ）メチル]－４,５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾールであり、シラゾリン塩酸塩はαアドレナリン作動作用、βアドレナリン作動作用を有している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　ロルノキシカムは、次の式（６）で表される６－クロロ－４－ヒドロキシ－２－メチル－Ｎ－（２－ピリジル）―２Ｈ－チエノ［２，３－ｅ］－１，２－チアジン－３－カルボキサミド　１，１－ジオキシドであり、強力なシクロオキシゲナーゼ活性阻害作用を有しオキシカム系の非ステロイド性消炎鎮痛剤として用いられている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　ダサチニブは、次の式（７）で表されるＮ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－２－（（６－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］－２－メチルピリミジン－４－イル）アミノ）－１，３－チアゾール－５－カルボキサミドであり、水和物として用いられる。ダサチニブは、チロシンキナーゼ阻害剤であり、抗悪性腫瘍薬として用いられている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　しかし、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１に対する作用、並びに肥満症に対する作用は知られていない。
　シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、及びフェナミルの塩としては、化合物の性状に応じて、塩酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩などの有機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩などが挙げられる。また、エステルとしては酢酸エステルなどの脂肪酸エステルが挙げられる。また、これらの化合物は、水和物、溶媒和物として用いてもよい。
　シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物は、後記実施例に示すように、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現増加を促進する作用を有し、ベージュ脂肪細胞若しくは褐色脂肪細胞から脂肪前駆細胞への脱分化を阻害し及び／又は脂肪前駆細胞からベージュ脂肪細胞若しくは褐色脂肪細胞への分化を促進し、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の数や働きを高めることによって、肥満症の予防又は治療作用を発揮する。
　本明細書において、「肥満症」とは、肥満に起因ないし関連する健康障害（以下、単に「健康障害」ともいう）を合併するか、その合併が予測される場合で医学的に減量を必要とする病態をいい、更に、肥満に内臓脂肪の過剰蓄積が伴う場合も含まれる（肥満症ガイドライン２０１６（日本肥満症学会編））。従って、「肥満症」には、肥満に加えて健康障害を既に合併している態様と、健康障害を未だ合併していない肥満のみの態様の両方の態様が含まれる。
　ここで、「肥満」とは、日本においては、［体重（ｋｇ）］÷［身長（ｍ）２］で算出される数値であるＢＭＩ（ｂｏｄｙ　ｍａｓｓ　ｉｎｄｅｘ）が２５以上であることをいい、特にＢＭＩが３５以上の場合には「高度肥満」ということができる。また、ＷＨＯによる国際基準に従う場合、ＢＭＩ３０以上が「肥満」であり，ＢＭＩ２５以上３０未満は過体重（ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ）とされる。
　従って、本明細書において、「肥満症」には、上記肥満の態様と、上記肥満を有しかつ健康障害を有する態様の両方が含まれる。
　上記「健康障害」、すなわち肥満に起因ないし関連する健康障害には、以下が挙げられる：１．耐糖能障害（２型糖尿病・耐糖能異常など）、２．脂質異常症、３．高血圧、４．高尿酸血症・痛風、５．冠動脈疾患：心筋梗塞・狭心症、６．脳梗塞：脳血栓症・一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、７．脂肪肝（非アルコール性脂肪性肝疾患／ＮＡＦＬＤ）、８．月経異常，不妊、９．睡眠時無呼吸症候群（ＳＡＳ）・肥満低換気症候群、１０．運動器疾患：変形性関節症（膝、股関節）・変形性脊椎症，手指の変形性関節症、１１．肥満関連腎臓病。本発明に係る「健康障害」は、上記１１種類のいずれかであってよく、又は任意の組み合わせであってもよい。
　また、「肥満症」には、肥満に内臓脂肪の過剰蓄積を伴う場合も含まれる。ここで、「内臓脂肪の過剰蓄積」とは、日本においては、（ｉ）腹囲測定において男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上の場合、又は（ii）へその高さの腹部ＣＴ画像を基準にして内臓脂肪面積が１００ｃｍ2以上の場合をいう。また、海外の基準に従う場合、「内臓脂肪の過剰蓄積」については、以下の基準を適用することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　但し、腹囲については、人種や地域等の違いを考慮することができ、例えば、中近東の場合には、男性８９～９８ｃｍ以上、女性９１～９６ｃｍ以上が内臓脂肪の過剰蓄積に該当し、アフリカの場合には、男性８５ｃｍ以上、女性８５ｃｍ以上が内臓脂肪の過剰蓄積に該当し、アジアの場合には、男性８０～９０ｃｍ以上、女性８０～８５ｃｍ以上が内臓脂肪の過剰蓄積に該当するということもできる。
　本明細書において、「メタボリックシンドローム」とは、前記内臓脂肪の過剰蓄積があり、かつ前記健康障害に含まれる耐糖能障害（２型糖尿病・耐糖能異常など）、脂質異常症、及び高血圧の２つ以上に該当する態様をいう。
　本明細書において、「２型糖尿病」とは、インスリン分泌低下やインスリン抵抗性をきたす素因を含む複数の遺伝因子に、過食(特に高脂肪食)、運動不足、肥満、ストレスなどの環境因子及び加齢が加わり発症する糖尿病をいう。
　本発明の医薬組成物は、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症、さらにベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の発現が低いことに起因して、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低くなっている肥満症に対して有効である。
　本明細書において、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症には、肥満症を有しない患者におけるベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率よりも、肥満症を有する患者におけるベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が低い場合に該当する。
　ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症については、当該技術分野において公知の方法で調べることができる。例えば、上記肥満症は、寒冷刺激をかけた上でＦＤＧ－ＰＥＴと呼ばれるグルコースの取り込みを定量する検査を用いて褐色脂肪細胞の活性を定量することにより、調べることができる。
　この検査において、ＦＤＧとしては、１８Ｆ－ｆｌｕｏｒｏ－２－ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ（例えば、日本メジフィジックス株式会社から入手可能）を用いることができ、ＰＥＴ／ＣＴ　ｓｙｓｔｅｍについては、「Ａｑｕｉｄｕｏ；　Ｔｏｓｈｉｂａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ，　Ｏｔａｗａｒａ，　Ｔｏｃｈｉｇｉ，　Ｊａｐａｎ」を用いることができる。
　「寒冷刺激」の条件としては、６－１２時間の絶食後、１時間に渡って軽装で１９℃で過ごしてもらい、その間、脚は５分ごとに４分間ずつ氷で冷やすことにより行うことができる。
　「褐色脂肪細胞の活性」は、ＣＴ値において脂肪組織として矛盾しない領域のうち、ＦＤＧ－ＰＥＴにおいて閾値以上のグルコース取り込みを認める領域を褐色脂肪細胞、残りを白色脂肪細胞と判定することにより、定量することができる。
　従って、１人の健常者の上記定量結果、又は複数の健常者の上記定量結果の平均値よりも、肥満症患者における上記定量結果が低い場合、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症であると判断することができる。
　また、前記定量は、本発明による肥満症の予防又は治療が脂肪前駆細胞からベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞への分化を促進することにより達成されたことを確認するため、及び本発明による肥満症の予防又は治療がベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞から脂肪前駆細胞への脱分化を阻害することにより達成されたことを確認するためにも用いることができる。
　本発明において、肥満症は、白色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、及び褐色脂肪細胞における肥満症関連遺伝子の発現又は活性が健常状態よりも相対的に低いことに起因することが好ましい。ここで、遺伝子発現が健常状態よりも相対的に低いことにより肥満症を引き起こし得る肥満症関連遺伝子としては、例えば、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子（好ましくは、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種）、エネルギー産生関連遺伝子、糖代謝関連遺伝子、ミトコンドリア機能維持関連遺伝子、呼吸関連遺伝子などが挙げられる。また、白色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、及び褐色脂肪細胞における肥満症関連遺伝子の発現又は活性が健常状態よりも相対的に低いか否かの確認は、本願明細書の実施例に記載の遺伝子発現の解析方法に従って行うことができる。
　従って、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、 ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を含む本発明は、白色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、及び褐色脂肪細胞における肥満症関連遺伝子の発現又は活性が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症の治療又は予防に有用である。
　さらには、本発明の医薬組成物は、褐色脂肪細胞又はベージュ脂肪細胞に特異的な遺伝子プログラムに関連する遺伝子であるＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種、特にＮＦＩＡ及び／又はＵＣＰ－１の働きを高めることによって、エネルギー摂取の抑制ではなく、エネルギー消費の促進に基づく肥満症、メタボリックシンドローム、及び／又は２型糖尿病の治療薬として有用である。
　好ましくは、本発明による肥満症の予防又は治療は、酸素消費量の増加を促進することにより達成される。好ましくは、酸素消費量の増加を促進することにより達成される肥満症の予防又は治療は、ロルノキシカム及び／又はダサチニブにより達成される。
　従って、本発明の予防及び／又は治療の対象となる疾患又は症状は、肥満症、メタボリックシンドローム、及び２型糖尿病からなる群から選択される少なくとも１種であり、好ましくは肥満症である。
　ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種（好ましくは、ＮＦＩＡ又はＵＣＰ－１）の発現が低い肥満症は、本明細書の実施例２の組織採取並びにｑＰＣＲ及びＷｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇの方法に従って、１人の健常者における当該遺伝子の発現量、又は複数の健常者における当該遺伝子の発現量の平均値よりも、肥満症患者における当該遺伝子の発現量が低い場合に該当する。
　また、本明細書の実施例２の組織採取並びにｑＰＣＲ及びＷｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇの方法は、本発明による肥満症の予防又は治療が、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種（好ましくは、ＮＦＩＡ又はＵＣＰ－１）の発現増加を促進することによるものであることを確認することにも用いることができる。
　本発明の医薬組成物は、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物を含有すればよいが、これに薬学的に許容される担体を配合して種々の投与形態の医薬組成物とするのが好ましい。
　このような医薬組成物の投与形態としては、注射剤、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤）、軟膏剤、クリーム剤、貼付剤、坐剤等が挙げられる。このうち、注射剤、経口剤が特に好ましい。
　これらの医薬組成物の形態とするために用いられる薬学的に許容される担体としては、例えば、溶解補助剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤、防腐剤、界面活性剤などが挙げられる。
　より具体的には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、乳糖、ブドウ糖、Ｄ－マンニトール、澱粉、結晶セルロース、炭酸カルシウム、カオリン、デンプン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、エタノール、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム塩、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、アセチルセルロース、白糖、酸化チタン、安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル、デヒドロ酢酸ナトリウム、アラビアゴム、トラガント、メチルセルロース、卵黄、非イオン界面活性剤、白糖、単シロップ、クエン酸、蒸留水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、マクロゴール、リン酸－水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸水素ナトリウム、ポピドン、クロスポピドン、ブドウ糖、塩化ナトリウム、フェノール、チメロサール、パラオキシ安息香酸エステル、亜硫酸水素ナトリウム、カルメロース、ヒプロメロース、マクロゴール等が挙げられる。
　経口剤とする場合には、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤などが用いられ、常法によって製造できる。経口剤としては、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などが好ましい。
　注射剤とする場合には、水、溶解補助剤などが用いられる。注射剤としては、静脈内投与剤、皮下注射剤、筋肉内投与剤が好ましく、凍結乾燥製剤、粉末充填剤の形態が挙げられる。
　本発明のクロルマジノン又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物を含有する医薬組成物としては、既存薬の組成（例えば経口剤、好ましくは錠剤）を好ましく使用することができ、例えば、クロルマジノン酢酸エステル（好ましくは２５ｍｇ）に加えて、アルファー化デンプン、カルメロースカルシウム、結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、及び乳糖水和物を含有することができる。
　本発明のラマトロバン又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物を含有する医薬組成物としては、既存薬の組成（例えば経口剤、好ましくは錠剤）を好ましく使用することができ、例えば、ラマトロバン（好ましくは５０ｍｇ又は７５ｍｇ）に加えて、乳糖水和物、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース、マクロゴール（好ましくはマクロゴール６０００）、及び酸化チタンを含有することができる。
　本発明のロルノキシカム又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物を含有する医薬組成物としては、既存薬の組成（例えば経口剤、好ましくは錠剤）を好ましく使用することができ、例えば、ロルノキシカム（好ましくは２ｍｇ又は４ｍｇ）に加えて、炭酸水素ナトリウム、結晶セルロース、無水リン酸水素カルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸カルシウム、ヒプロメロース、マクロゴール６０００、酸化チタン、タルク、カルナウバロウ、及び軽質無水ケイ酸を含有することができる。
　本発明のダサチニブ又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物を含有する医薬組成物としては、既存薬の組成（例えば経口剤、好ましくは錠剤）を好ましく使用することができ、例えば、ダサチニブ一水和物（好ましくはダサチニブとして２０ｍｇ又は５０ｍｇ）に加えて、乳糖水和物、結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース、酸化チタン、ポリエチレングリコール４００を含有することができる。
　本発明の医薬組成物には、他の肥満症治療剤、メタボリックシンドローム治療剤、２型糖尿病治療剤などを配合してもよく、これらの薬剤と併用してもよい。
　併用可能な薬剤としては、公知の２型糖尿病治療剤がより好ましく、例えば、食欲抑制剤のマジンドールや、本発明に係る化合物と同じく脂肪細胞を標的とする糖尿病治療薬などが挙げられ、特にチアゾリジン系（グリタゾン系）糖尿病治療薬であるロシグリタゾン又はピオグリタゾンが更に好ましい。
　本発明の医薬組成物中における本発明の有効成分の含有量は、有効成分、投与形態によって大きく変動し、特に限定されるものではないが、通常は、組成物全量に対して０．０１～１００質量％、好ましくは１～１００質量％である。
　有効成分は、経口剤の場合には、通常一投与単位当たり、５質量％～７０質量％程度含有するのが好ましい。
　本発明の医薬組成物の投与量は、有効成分、投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるが、前記有効成分量として、成人に対して１日あたり１．０μｇ～５００ｍｇであるのが好ましい。またこの投与量は１日に１～４回に分けて投与することもできる。
　クロルマジノン酢酸エステルの場合には、通常成人に対し１回２５ｍｇ～５０ｍｇを１日１～３回投与するのが好ましい。また、ラマトロバンの場合には、通常成人に対し１回７５ｍｇ～１００ｍｇを１日１～３回投与するのが好ましい。スルフイソキサゾールの場合には、通常成人に対し、１回２００ｍｇ～８００ｍｇを１日１～３回投与するのが好ましい。ロルノキシカムの場合には、通常成人に対し、１回４～８ｍｇを１日３回投与するのが好ましい。ダサチニブの場合は、通常成人に対し、１日１回１０００ｍｇ～１４０ｍｇ投与するか、１回７０ｍｇ～９０mｇを１日２回投与するのが好ましい。
　本発明の好ましい別の実施態様は、肥満症を予防又は治療するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物である。
　本発明の好ましい別の実施態様は、肥満症の予防又は治療用の医薬組成物を製造するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物の使用である。
　本発明の好ましい別の実施態様は、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を投与することを特徴とする、肥満症を予防又は治療する方法である。
　これら３種の実施態様においても、前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物としては、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物であるのが好ましい。
　また、前記肥満症は、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する肥満症であることが好ましく、具体的には、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現が低いことに起因する肥満症であることが好ましい。
　また、前記肥満症を予防又は治療することが、脂肪前駆細胞からベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞への分化を促進することにより達成されることが好ましく、脂肪前駆細胞又は褐色脂肪細胞から脂肪前駆細胞への脱分化を阻害することにより達成されることが好ましく、さらには、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現増加を促進することにより達成されることが好ましく、さらに、ＵＣＰ－１の発現増加及び／又はＮＦＩＡの発現増加を促進することにより達成されることが好ましい。
　次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
試験例１（クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾール及びラマトロバンの抗肥満作用）
　ＵＣＰ－１発現の増加は、脂肪細胞における熱産生増加による基礎代謝の増加を誘導し、抗肥満効果に寄与すると考えられている。そこで、抗肥満効果に寄与する化合物を探索するため、白色脂肪細胞前駆細胞およびベージュ脂肪細胞前駆細胞の混合物であるマウス鼠径部間質血管細胞由来不死化細胞を脂肪細胞へと分化誘導する細胞実験系において種々の化合物を添加し、ＵＣＰ－１　ｍＲＮＡ発現を増加させる化合物のスクリーニングを行った。
（方法）
１．１ｓｔスクリーニング
１）分化誘導
　マウス鼠径部間質血管細胞由来不死化細胞を基本培地（１０％ＦＢＳおよび１％Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｅ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ含有ＤＭＥＭ／Ｆ－１２　ＧｌｕｔａＭＡＸ，　ＧＩＢＣＯ）を用いてゼラチンコートをしたｐｌａｔｅに播種し、コンフルエント（ｄａｙ０）になるまで培養を行った。培地を分化培地１（基本培地に１μＭ　Ｄｅｘａｍｅｔｈａｚｏｎｅ，　０．５ｍＭ　Ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ，　５μｇ／ｍＬ　Ｉｎｓｕｌｉｎ，　１ｎＭ　Ｔ３，　１２５μＭ　Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎを含む）に置換し、終濃度１０μＭとなるようにスクリーニング化合物を添加した。Ｄａｙ２に分化培地１を分化培地２（基本培地に５μｇ／ｍＬ　Ｉｎｓｕｌｉｎ，　１ｎＭ　Ｔ３を含む）に置換し、終濃度１０μＭとなるようにスクリーニング化合物を添加した。Ｄａｙ４に分化培地２を新しい分化培地２に置換し、終濃度１０μＭとなるようにスクリーニング化合物を添加した。ポジティブコントロールとして１μＭ　Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅをスクリーニング化合物と同様に培地交換を行いながらｄａｙ０―ｄａｙ７まで添加した。
２）ＲＮＡ抽出、逆転写反応
　Ｄａｙ７の細胞からＳｕｐｅｒＰｒｅｐＩＩ　Ｃｅｌｌ　Ｌｙｓｉｓ　＆　ＲＴ　Ｋｉｔ　ｆｏｒ　ｑＰＣＲ（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてＲＮＡ　ｌｙｓａｔｅを作製し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ　（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作製した。
３）ｑＰＣＲ
　Ｐｏｗｅｒ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＱｕａｎｔ　Ｓｔｕｄｉｏ　７　Ｆｌｅｘ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＰＣＲを行い、ＵＣＰ－１　ｍＲＮＡ量を測定した。内在性コントロールにはＲｐｌｐ０を用いた。用いたプライマーを表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
２．遺伝子発現プロファイルの確認
１）分化誘導
　前記１．１ｓｔスクリーニング　に同じ。
２）ＲＮＡ抽出、逆転写反応
　Ｄａｙ７の細胞からＲＮｅａｓｙ　ｍｉｎｉ　ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ　（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作製した。
３）ｑＰＣＲ
　ＫＯＤ　ＳＹＢＲ　ｑＰＣＲ　Ｍｉｘ（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてＶｉｉＡ７　リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＰＣＲを行い、Ｎｆｉａ、Ｕｃｐ－１、Ｐｇｃ１α、Ｃｉｄｅａ、　Ｃｏｘ８ｂ　ｍＲＮＡ量を測定した。内在性コントロールにはＲｐｌｐ０を用いた。プライマーは表２。
（結果）
１．１ｓｔスクリーニング
　結果は図１に示す。Ｕｃｐ－１　ｍＲＮＡ発現量が高い６６化合物を用いて再度分化誘導実験を行い、遺伝子発現プロファイルの確認を行った。
２．遺伝子発現プロファイルの確認
　クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾールおよびラマトロバンを添加した細胞において、Ｕｃｐ－１　ｍＲＮＡ発現量が対照群に比べて増加することが明らかとなった（図２）。なお、Ｎｆｉａ、Ｐｇｃ１α、Ｃｉｄｅａ、Ｃｏｘ８ｂ　ｍＲＮＡ発現量も同様にｑＰＣＲで測定を行い、各化合物の遺伝子発現プロファイルを明らかにした（図３－図６）。
（解釈）
　クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾールおよびラマトロバンは、それぞれの化合物を添加した細胞においてＵｃｐ－１　ｍＲＮＡ発現の増加を示したことから（図２）、ＵＣＰ－１の熱産生効果による抗肥満効果をもつと考えられる。
　また、クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾール及びラマトロバンはＮｆｉａ　ｍＲＮＡ発現を増加した（図３）。ＮＦＩＡは脂肪細胞分化のマスター転写因子ＰＰＡＲγの褐色脂肪細胞特異的遺伝子エンハンサーへ結合を促進することでこれら遺伝子の転写を促進し、体重減少作用を誘導することから（試験例２を参照）、クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾール及びラマトロバンはＮＦＩＡの誘導及び／又はＵＣＰ－１発現の誘導を介して、抗肥満効果を持つ可能性がある。なお、Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ増加作用は肥満に伴う糖尿病治療薬であるロシグリタゾンには認められなかったことから、少なくともクロルマジノン酢酸エステルとサルフイソキサゾールとラマトロバンはロシグリタゾンとは異なる経路で抗肥満作用を有している可能性がある。
　また、クロルマジノン酢酸塩、サルフイソキサゾールおよびラマトロバンはＰｇｃ１α、Ｃｉｄｅａ、Ｃｏｘ８ｂの発現も増加した。ＰＧＣ１αはＰＰＡＲγの転写共役因子として褐色脂肪細胞特異的遺伝子発現を誘導し、ＣＩＤＥＡは褐色脂肪細胞の脂肪滴の維持に関与する。また、ＣＯＸ８Ｂはミトコンドリアのシトクロームｃオキシダーゼ酵素複合体の構成要素であることから、各化合物は白色脂肪細胞のベージュ化誘導及び抗肥満に寄与することが示唆される。
　なお、クロルマジノン酢酸塩、サルフイソキサゾール及びラマトロバンは、Ｎｆｉａ、Ｕｃｐ－１、Ｐｇｃ１α、Ｃｉｄｅａ及びＣｏｘ８ｂの発現増加の強弱に特徴的なプロファイルを有することが示されている。
　以上のことから、クロルマジノン酢酸エステル、サルフイソキサゾールおよびラマトロバンはそれぞれ異なる褐色脂肪細胞及び／又はベージュ脂肪細胞関連遺伝子の発現増加プロファイルを持つことにより、異なる原因又はタイプの肥満に最適化された抗肥満薬として利用できる可能性がある。
試験例２（脂肪細胞のＮＦＩＡ遺伝子の発現制御による体重および全身代謝に与える作用の検討）
（概要）
　褐色脂肪細胞はミトコンドリアに富み、エネルギー消費が高く、ヒト成人において鎖骨上窩や深部頸部などに存在することが知られている。本発明者らはマウスの褐色脂肪組織のオープンクロマチン解析により、転写因子ＮＦＩＡが褐色脂肪細胞特異的な転写プログラムの重要な制御因子であることを明らかにし報告した（非特許文献４）。ＮＦＩＡは褐色脂肪特異的な遺伝子群の転写を制御することから、脂肪組織におけるＮＦＩＡの発現を増加させることにより、全身のエネルギー代謝を亢進させ、肥満もしくは肥満症の治療戦略となる可能性が期待される。このことを検討するために、遺伝子改変技術で、マウスの脂肪組織のＮＦＩＡ発現を増加させるモデルマウスを作製し、全身の体重および代謝に与える影響を検討した。
（方法）
１．Ｎｆｉａトランスジェニックマウスの開発
１）ＤＮＡコンストラクトの作成（図７）
　脂肪組織に選択的に発現するＦａｂｐ４遺伝子のプロモーター（－５．４ｋｂ）の下流に、マウスＮｆｉａ遺伝子をコードするデオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）配列を挿入した。
２）マウスの作成
　Ｃ５７ＢＬ／６の受精卵に、上記ＤＮＡコンストラクトをマイクロインジェクションにより注入し、ゲノムＤＮＡにランダムインテグレーションされたマウス仔を得た。脂肪組織に選択的なＮｆｉａ遺伝子の過剰発現は、トラスジェニックマウスの各種臓器からＴＲＩ　ｒｅａｇｅｎｔ（コスモバイオ）を用いてｍＲＮＡを抽出し、Ｐｏｗｅｒ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＱｕａｎｔ　Ｓｔｕｄｉｏ　７　Ｆｌｅｘ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行い、Ｎｆｉａ遺伝子のｍＲＮＡ量を測定した。内在性コントロールにはＲｐｌｐ０遺伝子を用いた。ＮＦＩＡタンパクの検出にはＮＦＩＡ抗体（Ａｂｃａｍ社ａｂ４１８５１）を用いて、Ｗｅｓｔｅｒｎブロッティングを施行した。
２．体重や摂餌量の影響の検討
　マウスは東京大学医学部動物実験委員会の承認された実験計画のもと、温度、湿度、照明、Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｒｅｅ（ＳＰＦ）が制御された動物舎で飼育し、通常の普通食、もしくは図に記載された週数、高脂肪食（Ｈｉｇｈ　Ｆａｔ　Ｄｉｅｔ　３２、日本クレア）を与え、体重および摂餌量を測定した。
３．脂肪組織および他の臓器の解析
　マウスは頸椎脱臼による安楽死を行い、解剖の後、各種臓器重量を測定した。特に脂肪組織はホルマリン固定を行い、組織切片のＨＥ染色を施行した。脂肪細胞のサイズは、組織切片の脂肪滴もしくは脂肪細胞の画像をＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ）で解析した。
４．脂肪組織および他の臓器のＲＮＡ解析
　臓器サンプルは、ビーズ式細胞破砕装置（トミー精工）でホモジナイズし、ＴＲＩ　ｒｅａｇｅｎｔ（コスモバイオ）を用いてｍＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作製した。さらにＰｏｗｅｒ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＱｕａｎｔ　Ｓｔｕｄｉｏ　７　Ｆｌｅｘ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行い、各種遺伝子のｍＲＮＡ量を測定した。用いたプライマーを表３～表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
５．寒冷耐性の検討
　マウスを小動物用温度調節機能付チャンバー（シンファクトリー、ＨＣ－１０）で４℃の寒冷環境でモニターしながら、記載された時間間隔で直腸温をマイクロプローブ・サーモメータ（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ　ＢＡＴ－１２Ｒ）で測定した。
６．酸素消費量および呼吸商の測定
　マウスを代謝ケージ（小動物用代謝計測システム、室町機械株式会社　Ｍｏｄｅｌ　ＭＫ－５０００）内で飼育し、酸素消費量と二酸化炭素排出量を測定した。
７．ブドウ糖負荷試験とインスリン負荷試験
　尾静脈から少量の血液を採取し、血糖はグルテストセンサー（三和化学株式会社）を用いて測定した。ブドウ糖水溶液をゾンデを用いて規定量（２ｇ／ｋｇ）経口摂取させ、記載された時間後に尾静脈から得た少量の血液で測定した。インスリン水溶液は０．７５Ｕ／ｋｇの用量で腹腔内投与を行い、ブドウ糖負荷試験と同様に、記載された時間後に尾静脈から得た少量の血液で測定した。
（結果）
１．Ｎｆｉａトランスジェニックマウスの解析結果
　Ｎｆｉａトランスジェニックマウスにおいては、ｍＲＮＡの解析結果から、脂肪組織において選択的にＮｆｉａ遺伝子のｍＲＮＡおよび蛋白の発現量が増加していることを確認した（図８）。普通食下においては、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスと野生型に体重と摂餌量には差が認められなかったが（図９）、高脂肪食を負荷すると、摂餌量には差がないにもかかわらず、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスにおいて体重の増加が有意に抑制された（図１０）。解剖時の組織重量の検討では、高脂肪食下ではＮｆｉａトランスジェニックマウスは野生型と比較して、白色脂肪組織で有意な臓器重量の減少が認められた（図１１）。脂肪組織のＨＥ染色では、褐色脂肪組織では変化はないものの、鼠径部皮下白色脂肪では高脂肪食による脂肪細胞の肥大化が抑制されていた（図１２、１３）。遺伝子レベルにおいても、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスの白色脂肪組織（鼠径部皮下および生殖器周囲）では、野生型マウスと比較して、Ｐｐａｒｇｃ１ａ、Ｃｉｄｅａ、Ｃｏｘ８ｂ、Ｄｉｏ２、Ｓ１００ｂなどの褐色脂肪関連遺伝子群や（図１４）、ミトコンドリア関連遺伝子群（図１５）が誘導されていることが分かった。更に、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスは、野生型マウスと比較して、寒冷環境下における体温低下が有意に抑制されていること（図１６）、また代謝ケージによる酸素消費量の測定で、酸素消費量が有意に高いことから（図１７）、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスは、熱産生によるエネルギー消費が増加していることが示唆された。更に、ブドウ糖負荷試験、インスリン負荷試験の結果から、Ｎｆｉａトランスジェニックマウスは野生型と比較して、耐糖能ならびにインスリン感受性が高く、高脂肪食による糖尿病の悪化が抑制されていた（図１８）。
（解釈）
　遺伝子改変技術で、マウスの脂肪細胞のＮｆｉａ発現を増加させるモデルマウスを作製した。脂肪細胞におけるＮｆｉａ遺伝子の発現が増加すると、酸素消費量が増大し、高脂肪食下の体重増加や糖代謝の異常を緩和することが明らかとなった。このことから、脂肪組織のＮｆｉａ遺伝子の発現量を増加させることで、高脂肪食により悪化する肥満や２型糖尿病を改善することが示唆された。
　従って、本発明の医薬組成物を高脂肪食による肥満患者や２型糖尿病患者に投与することにより、当該患者における脂肪組織のＮＦＩＡ遺伝子の発現量を増加させ、当該肥満や２型糖尿病を予防及び／又は治療できることが示唆された。
試験例３：フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカム及びダサチニブ一水和物のＮＦＩＡ増加作用
（概要）
　ＮＦＩＡは褐色脂肪特異的な遺伝子群の転写を制御することから、脂肪組織におけるＮＦＩＡの発現を増加させることにより、全身のエネルギー代謝を亢進させ、肥満もしくは肥満症の治療戦略となる可能性が期待される。そこで、抗肥満効果に寄与する化合物を探索するため、白色脂肪細胞を用いてＮｆｉａ ｍＲＮＡ発現を増加させる化合物のスクリーニングを行った。
（方法）
１．１stスクリーニング
１）分化誘導
　マウス白色脂肪前駆細胞である３Ｔ３－Ｆ４４２Ａ細胞を基本培地（１０％ＦＢＳおよび１％Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｅ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ含有ＤＭＥＭ（ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ）,ＧＩＢＣＯ）を用いてゼラチンコートをしたｐｌａｔｅに播種し、コンフルエント（ｄａｙ０）になるまで培養を行った。培地を分化培地（基本培地に５μｇ／ｍＬ Ｉｎｓｕｌｉｎを含む）に置換し、培地交換をしながらｄａｙ９まで分化させた。その後、細胞を回収しｐｌａｔｅに撒き直した。２４時間後、ｆｒｅｓｈな分解培地に置換したのち、終濃度１０μＭとなるようにスクリーニング化合物を添加し（ｄａｙ１０）、さらに２４時間インキュベートした。
２）ＲＮＡ抽出、逆転写反応
　Ｄａｙ１１の細胞からＲＮｅａｓｙ　９６　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）もしくはＲＮｅａｓｙ　Ｌｉｐｉｄ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてｔｏｔａｌ　ＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ　（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作製した。
３）ｑＰＣＲ
　ＰｏｗｅｒＵｐ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＶｉｉＡ７　リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＰＣＲを行い、Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ量を測定した。内在性コントロールにはβ－ａｃｔｉｎを用いた。用いたプライマーは表２と同じ。
２．遺伝子発現プロファイルの確認
１）分化誘導
１．１ｓｔスクリーニングに同じ。ただし、終濃度０．１～１００μＭとなるように薬物を添加した。
２）ＲＮＡ抽出、逆転写反応
　Ｄａｙ１１の細胞からＲＮｅａｓｙ　Ｌｉｐｉｄ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてｔｏｔａｌ　ＲＮＡを作製し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ　（ＴＯＹＯＢＯ）を用いてｃＤＮＡを作製した。
３）ｑＰＣＲ
　ＰｏｗｅｒＵｐ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＶｉｉＡ７　リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＰＣＲを行い、Ｎｆｉａ、Ｐｐａｒγ、Ｐｇｃ１α、Ｃｉｄｅａ、Ｆａｂｐ４、Ｃｏｘ８ｂ　ｍＲＮＡ量を測定した。内在性コントロールにはβ－ａｃｔｉｎを用いた。用いたプライマーは表２と同じ。
（結果）
１．１ｓｔ　スクリーニング
　スクリーニング結果の解析は四分位平均値（ＩＱＭ）によるＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ（図１９）及びＺ－ｓｃｏｒｅによるＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ（図２０）を行った。Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ発現量を高めた化合物を用いて再現性の確認を行い、４種のヒット化合物を見出した。
２．遺伝子発現プロファイルの確認
　フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカム及びダサチニブ一水和物を添加した細胞において、Ｎｆｉａ　ｍＲＮＡ発現量が対照群に比べて増加することが明らかとなった（図２１）。なお、Ｎｆｉａ、Ｐｐａｒγ、Ｆａｂｐ４、Ｃｉｄｅａ、Ｐｇｃ１α、Ｃｏｘ８ｂ　ｍＲＮＡ発現量も同様にｑＰＣＲで測定を行い、各化合物の遺伝子発現プロファイルを明らかにした（図２１～図２６）。
（解釈）
　フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカム及びダサチニブ一水和物は、それぞれの化合物を添加した細胞においてＮｆｉａ　ｍＲＮＡ発現の増加を示したことから（図２１）、ＮＦＩＡによる抗肥満効果をもつと考えられる。
　また、フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカムはＰｐａｒγ　ｍＲＮＡ発現を増加した（図２２）。ＰＰＡＲγは、脂肪細胞分化のマスター転写因子であり、ＮＦＩＡはＰＰＡＲγの褐色脂肪細胞特異的遺伝子エンハンサーへ結合を促進することでこれら遺伝子の転写を促進し、体重減少作用を誘導することから（試験例２を参照）、フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカムはＮＦＩＡの誘導又はＰＰＡＲγ発現の誘導を介して、抗肥満効果を持つ可能性がある。なお、フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカムは脂肪細胞分化マーカーであるＦａｂｐ４（図２３）、マウス褐色脂肪細胞マーカーであるＣｉｄｅａ（図２４）のｍＲＮＡ発現を増加していることから、白色脂肪細胞前駆細胞の脂肪細胞への分化、そして白色脂肪細胞のベージュ化が起きていると考えられる。
　フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩およびダサチニブ一水和物はＰｇｃ１αの発現を増加し（図２５）、フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカム及びダサチニブ一水和物はＣｏｘ８ｂの発現を増加した（図２６）。ＰＧＣ１αはＰＰＡＲγの転写共役因子として褐色脂肪細胞特異的遺伝子発現を誘導する他、ミトコンドリアの生合成にも関わり、Ｃｏｘ８ｂはミトコンドリアのシトクロームｃオキシダーゼ酵素複合体の構成要素であることから、各化合物は白色脂肪細胞のベージュ化の誘導およびミトコンドリアの活性化に寄与することが示唆される。
　以上のことから、フェナミルメタンスルホン酸塩、シラゾリン塩酸塩、ロルノキシカム及びダサチニブ一水和物はそれぞれ異なる遺伝子プロファイルを持つ抗肥満薬として利用できる可能性がある。
試験例４：ロルノキシカムおよびダサチニブ一水和物の酸素消費量増加作用
（概要）
　試験例２において、脂肪細胞におけるＮｆｉａ遺伝子の発現が増加すると、酸素消費量が増大し、高脂肪食下の体重増加や糖代謝の異常を緩和することが明らかとなった。さらに、前記試験例３でヒットした化合物は、ミトコンドリア関連遺伝子（Ｐｇｃ１α、Ｃｏｘ８ｂ）の発現量に影響を与えていた。このことから、前記ヒット化合物は、ミトコンドリアの活性化を介して細胞の酸素消費量を増加し、抗肥満効果に寄与している可能性がある。そこで、前記ヒット化合物添加時の脂肪細胞における細胞外酸素消費量の変化を検討した。
（方法）
１．Ｏｘｙｇｅｎ　ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｓｓａｙ（ＯＣＲ）
１）分化誘導
１．前記１ｓｔ　スクリーニングに同じ。ただし、終濃度０．１～１００μＭとなるように薬物を添加した。
２）ＯＣＲ
　Ｄａｙ１１にｆｒｅｓｈな分化培地に置換し、再度薬物を添加して３０分間３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターに静置した。Ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｓｃｅｎｔ　Ｏｘｙｇｅｎ　Ｐｒｏｂｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）及びＭｉｎｅｒａｌ　Ｏｉｌを添加し、プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ，　Ｎｉｖｏ）で時間分解蛍光測定（ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ　３８０ｎｍ，　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　６５０ｎｍ）を行った。Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌとしてＡｎｔｉｍｙｃｉｎＡを使用した。
（結果）
　１００μＭ　ロルノキシカム、１、１０μＭ　ダサチニブ一水和物の処置によって脂肪細胞の細胞外酸素消費量の増加が認められた（図２７、２８）。
（解釈）
　試験例２において、脂肪細胞におけるＮｆｉａ遺伝子の発現が増加すると、酸素消費量が増大し、高脂肪食下の体重増加や糖代謝の異常を緩和することが明らかとなっている。そのため、試験例４の結果は、ロルノキシカムおよびダサチニブ一水和物がＮｆｉａ遺伝子の発現増加を介して、脂肪細胞の酸素消費量の増加を誘導し、抗肥満効果を示す可能性を示唆している。

Claims (21)

  1. 　ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を含む、肥満症を予防又は治療するための医薬組成物。
  2. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項１記載の医薬組成物。
  3. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、若しくはラマトロバン、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項２記載の医薬組成物。
  4. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項２記載の医薬組成物。
  5. 　前記肥満症が、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞の白色脂肪細胞に対する数的比率又は質量的比率が健常状態よりも相対的に低いことに起因する、請求項１～４のいずれか１項記載の医薬組成物。
  6. 　前記肥満症が、白色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、及び褐色脂肪細胞における肥満症関連遺伝子の発現又は活性が健常状態よりも相対的に低いことに起因する、請求項１～４のいずれか１項記載の医薬組成物。
  7. 　前記肥満症が、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現が低いことに起因する、請求項１～６のいずれか１項記載の医薬組成物。
  8. 　前記肥満症が、ＮＦＩＡの発現が低いことに起因する、請求項１～６のいずれか１項記載の医薬組成物。
  9. 　前記肥満症が、ＵＣＰ－１の発現が低いことに起因する、請求項１～６のいずれか１項記載の医薬組成物。
  10. 　前記肥満症を予防又は治療することが、脂肪前駆細胞からベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞への分化を促進することにより達成される、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  11. 　前記肥満症を予防又は治療することが、ベージュ脂肪細胞又は褐色脂肪細胞から脂肪前駆細胞への脱分化を阻害することにより達成される、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  12. 　前記肥満症を予防又は治療することが、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の発現増加を促進することにより達成される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  13. 　前記肥満症を予防又は治療することが、ＮＦＩＡの発現増加を促進することにより達成される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  14. 　前記肥満症を予防又は治療することが、ＵＣＰ－１の発現増加を促進することにより達成される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  15. 　前記肥満症を予防又は治療することが、酸素消費量の増加を促進することにより達成される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  16. 　肥満症を予防又は治療するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物。
  17. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項１６記載の化合物。
  18. 　肥満症の予防又は治療用の医薬組成物を製造するための、ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物の使用。
  19. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項１８記載の使用。
  20. 　ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物を投与することを特徴とする、肥満症を予防又は治療する方法。
  21. 　前記ＮＦＩＡ、ＵＣＰ－１、ＰＰＡＲγ、ＰＧＣ１α、ＣＩＤＥＡ、及びＣＯＸ８Ｂからなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現を増加させる化合物が、シラゾリン、ロルノキシカム、ダサチニブ、クロルマジノン、サルフイソキサゾール、ラマトロバン、若しくはフェナミル、又はその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物若しくは水和物である、請求項１８記載の方法。
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