WO2022022360A1 - 聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途 - Google Patents

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刘念
彭永陈
曾下凡
梅刚
官盛
高扬
杨帅
尹仪枫
娄杰
陈惠渝
钱昆
卫玉松
张倩
李大军
丁小玲
阳享伟
黄力群
刘曦
刘力纬
李振威
胡凯雄
刘华
涂涛
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Definitions

  • the invention belongs to the technical field of medicine, and in particular relates to a polyethylene glycol conjugated drug, a preparation method and application thereof.
  • the polymer conjugated drug can greatly increase the water solubility of the drug molecule; it can prevent or reduce the agglomeration, immunogenicity and antigenicity of the drug; most small molecule drugs can only remain in the blood circulation for a few minutes, while the polymer
  • the conjugated drug can be maintained for tens, hundreds of hours or even longer, which is beneficial to the "enhanced penetration and retention" effect (ie, EPR effect) due to leakage of tumor capillaries; the drug is attenuated due to the increase in hydrodynamic volume
  • EPR effect enhanced penetration and retention
  • the renal elimination of the drug can protect the drug from being degraded by enzymes, prolong the half-life of the drug in the plasma, and increase the bioavailability of the drug.
  • anticancer drugs are highly enriched in cancerous organs, tissues or cells, which greatly reduces the toxic and side effects caused by the full body of small molecule anticancer drugs; It is limited to the endocytosis pathway, which is conducive to the delivery of drugs to the lysosome, thereby avoiding the drug resistance caused by the pumping of p-glycoprotein; stimulating or restoring immune function is conducive to killing cancer cells.
  • Polyethylene glycol is the most successful carrier in the field of polymer conjugated drug nanomedicine, and is called the "gold standard" carrier. In the past 30 years, great achievements have been made in PEGylated drug technology.
  • PEGylated drugs There are 17 PEGylated drugs approved by the US FDA to enter the market, 1 PEGylated drug has been approved by the Chinese NMPA for marketing, and there are also Nearly 40 new clinical drugs are undergoing Phase I, Phase II, Phase III clinical trials and entering the NDA stage, half of which are PEGylated small molecule drugs.
  • small molecules such as folic acid and RGD short peptides to create actively targeted polymer conjugated drugs is a popular strategy for targeting drugs to tumor cells.
  • Small molecule targeting accessories have the advantages of low immunogenicity, good storage stability, small size, easy modification, easy coupling with polymer carriers, good compatibility with various organic solvents and water solvents, and low cost. for antibodies and other ligands.
  • Folic acid is currently the most widely studied small molecule targeting ligand. It is a vitamin that can specifically bind to folate receptors on the cell surface. Folate receptors cannot enter healthy cells in the circulation, but are in the ovary. It is overexpressed in various cancer cells such as cancer, lung cancer, breast cancer, kidney cancer, endometrial cancer and colon cancer.
  • As an active targeting ligand folic acid has the unique advantage that it has a high binding affinity (K d ⁇ 10 -10 M) to the folate receptor. Due to its small size and simple structure, the interference with pharmacokinetics is negligible.
  • the active carboxyl groups in the structure of folic acid are highly reactive and can be easily coupled to polymer carriers containing hydroxyl or amino groups without impairing the intrinsic activity of folic acid.
  • Certain short peptides can specifically target cancer cells or tumor vascular endothelial cells, and some of these peptides are called cell-targeting peptides, which show a high degree of specificity and affinity for the corresponding target cells through interaction with receptors .
  • Cell-targeting peptides have been used in various therapeutic trials, of which the most extensively studied sequence is arginine-glycine-aspartic acid (RGD), the first homing peptide discovered.
  • RGD arginine-glycine-aspartic acid
  • RGD can bind to up-regulated integrins in tumor cells and vascular endothelial cells, and the RGD-mediated drug delivery system can improve the efficiency of targeted delivery in chemotherapy.
  • the recently developed internalizing RGD polypeptide is a tumor-targeting and cell-penetrating cyclic peptide that increases conjugate entry in a neuropeptide-1-dependent, tumor-specific manner Extravascular tumor tissue.
  • iRGD-regulated polymer-drug conjugates can significantly improve the efficacy of tumor therapy by enhancing the enrichment and penetration of drugs at tumor sites.
  • the present invention aims to solve one of the technical problems in the related art at least to a certain extent.
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug, which has excellent tumor suppressing activity.
  • the inventors used a unique chemical synthesis method to graft small molecular targeting ligands such as folic acid and iRGD polypeptides and anticancer drugs on the same polyethylene glycol polymer carrier at the same time, so as to improve the efficiency of polyethylene glycol conjugated drugs. Efficacy.
  • the polyethylene glycol conjugated drug of the present invention can be prepared efficiently and conveniently.
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (A) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • M is selected from Or PEG m
  • PEG m is a single-arm or multi-arm (such as four-arm, eight-arm, preferably four-arm) polyethylene glycol segment
  • PEG m is connected with L 1 , L 3 , L 5 or L 6 through carbonyl
  • PEG m m has a number average molecular weight of 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k or 10k;
  • j 1 , j 2 , j 3 , j 4 are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 0, 1, 2, 3 or 4, and not 0 at the same time;
  • PEG 1 , PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are single-arm polyethylene glycol segments.
  • PEG 1 , PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are respectively connected to L 1 , L 4 , L 5 and L 6 through carbonyl groups.
  • the number average molecular weights of PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are each independently 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k, 10k or 40k;
  • L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are each independently a direct bond, When L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are not direct bonds at the same time, and L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M,
  • each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2;
  • V 2 is -L 2V -T 2 ;
  • V 3 is -P 3 .
  • P 3 is -L 3V -T 3 ;
  • L 1V , L 2V , and L 3V are independently each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2;
  • T 1 , T 2 , T 3 are
  • Y 2 , Y 1 , and Y 0 are each independently r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, and each r2 is independently more preferably 1 or 2;
  • L V is r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, and each r2 is independently more preferably 1 or 2;
  • W 1 , W 2 , and W 3 are each independently
  • Z 3 , Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2, each r4 is independently is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r 4 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r 4 is independently more preferably 3 or 4, and r 5 is 1, 2, 3, 4 , 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6, r 6 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 6 is preferably 2, 3, 4 or 5, r 6 is more preferably 3 or 4;
  • Q is -N-AC
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N, N1, N2 are each independently G or GFLG;
  • AC, AC1, AC2 are anticancer drug molecules, preferably, AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT.
  • L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , L 6 are each independently a direct bond, for When L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are not direct bonds at the same time, and L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M.
  • L 1 is Each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4.
  • L 1 is N
  • L is Each r2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2.
  • L is N
  • L is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4.
  • L is N
  • L4 is Each r2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2.
  • L4 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L5 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 1 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 1 is more preferably 3 or 4, and r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6 , r 2 is preferably 1, 2, 3 or 4, and r 2 is more preferably 1 or 2.
  • L5 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L is a direct bond
  • r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4
  • r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 2 is preferably is 1, 2, 3 or 4, r 2 is more preferably 1 or 2, and when L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M.
  • L is a direct bond
  • PEG 4 does not exist
  • V3 is directly connected to M.
  • L 1V , L 2V , L 3V are each independently
  • Y 2 , Y 1 , Y 0 are each independently
  • LV is
  • Z 3 , Z 2 , Z 1 , Z 0 are each independently
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (A') or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • M is selected from Or PEG m
  • PEG m is a single-arm or multi-arm (such as four-arm, eight-arm, preferably four-arm) polyethylene glycol segment
  • PEG m is connected with L 1 , L 3 , L 5 or L 6 through carbonyl
  • PEG m m has a number average molecular weight of 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k or 10k;
  • j 1 , j 2 , j 3 , j 4 are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 0, 1, 2, 3 or 4, and not 0 at the same time;
  • PEG 1 , PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are single-arm polyethylene glycol segments.
  • PEG 1 , PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are respectively connected to L 1 , L 4 , L 5 and L 6 through carbonyl groups.
  • the number average molecular weights of PEG 2 , PEG 3 and PEG 4 are each independently 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k, 10k or 40k;
  • L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are each independently a direct bond, When L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are not direct bonds at the same time, and L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M,
  • each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2;
  • V 2 is -L 2V -T 2 ;
  • L 1V , L 2V , and L 3V are independently each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2;
  • T 1 , T 2 , T 3 are
  • Y 2 , Y 1 , and Y 0 are each independently r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, and each r2 is independently more preferably 1 or 2;
  • L V is r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, and each r2 is independently more preferably 1 or 2;
  • W 1 , W 2 , and W 3 are each independently
  • Z 3 , Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2, each r4 is independently is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r4 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r4 is independently more preferably 3 or 4 , and r5 is 1, 2, 3, 4 , 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6, r 6 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 6 is preferably 2, 3, 4 or 5, r 6 is more preferably 3 or 4;
  • Q is -N-AC
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N, N1, N2 are each independently G or GFLG;
  • AC, AC1, AC2 are anticancer drug molecules, preferably, AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT.
  • L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , L 6 are each independently a direct bond, for When L 1 , L 2 , L 3 , L 4 , L 5 , and L 6 are not direct bonds at the same time, and L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M.
  • L 1 is Each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4.
  • L 1 is N
  • L is Each r2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2.
  • L is N
  • L is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4.
  • L is N
  • L4 is Each r2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2.
  • L4 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L5 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 1 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 1 is more preferably 3 or 4, and r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6 , r 2 is preferably 1, 2, 3 or 4, and r 2 is more preferably 1 or 2.
  • L5 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L is a direct bond or r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4, and when L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M .
  • L is a direct bond or And when L 6 is a direct bond, PEG 4 does not exist, and V3 is directly connected to M.
  • L 1V , L 2V , L 3V are each independently
  • Y 2 , Y 1 , Y 0 are each independently
  • LV is
  • Z 3 , Z 2 , Z 1 , Z 0 are each independently
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • j 2 is 3 or 4;
  • PEG 2 is a single-arm polyethylene glycol segment, PEG 2 is connected to L 4 through a carbonyl group, and the number-average molecular weight of PEG 2 is 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L3 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • L4 is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • V 2 is -L 2V -T 2 ,
  • L 2V is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 3 , Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2, and r4 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 4 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 4 is more preferably 3 or 4,
  • Q is -N-AC
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N, N1, N2 are each independently G or GFLG, preferably, N, N1 and N2 are GFLG,
  • AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably, AC, AC1, AC2 are each independently LPT or PCB, more preferably, AC1 is LPT, AC and AC2 for the PCB.
  • L is N
  • L4 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L2V is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • Z is r 3 is 1 or 2, and r 4 is 3 or 4.
  • Z is
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z is
  • Z 1 is r3 is 1 or 2.
  • Z 1 is
  • Z 0 is r3 is 1 or 2.
  • Z 0 is
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • M is selected from Or PEG m , PEG m is a single-arm or multi-arm (such as four-arm, eight-arm, preferably four-arm) polyethylene glycol segment, PEG m is connected with L 1 through carbonyl, and the number-average molecular weight of PEG m is 5k-40k , preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k or 10k;
  • j 1 is 3 or 4;
  • PEG 1 is a single-arm polyethylene glycol segment, PEG 1 is connected to L 1 through a carbonyl group, and the number average molecular weight of PEG 1 is 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k, 10k or 40k ;
  • L1 is each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • L2 is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • V 1 is -L 1V -T 1 ,
  • L 1V is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2, and r4 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 4 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 4 is more preferably 3 or 4, r 5 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6, r 6 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 6 is preferably 2, 3, 4 or 5, r 6 is more preferably 3 or 4,
  • Q is -N-AC
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N, N1, N2 are each independently G or GFLG,
  • AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably, AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT or PCB, more preferably , AC is SB7, NPB or SN38, AC1 is NPB or LPT, and AC2 is PCB.
  • L 1 is N
  • L is N
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z is
  • Z 1 is Each r 3 is independently 1 or 2, r 4 is 3 or 4, and r 5 is 5 or 6.
  • Z 1 is
  • Z 0 is Each r 3 is independently 1 or 2, and r 6 is 3 or 4.
  • Z 0 is
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 3 and PEG 4 are single-arm polyethylene glycol segments, PEG 3 and PEG 4 are respectively connected to L 5 and L 6 through carbonyl groups, and the number-average molecular weights of PEG 3 and PEG 4 are independently 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 5k or 10k;
  • L 5 is r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • L6 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • V 3 is -L 3V -T 3 ,
  • L 3V is r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2 , and r5 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6,
  • N is G, or GFLG, preferably, N is G or
  • AC is SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably, AC is DOX or PTX.
  • L5 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L6 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L3V is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • Z 1 and Z 2 are Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z 1 and Z 2 are identical
  • Z 0 is r 3 is 1 or 2, and r 5 is 5 or 6.
  • Z 0 is
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 3 is a single-arm polyethylene glycol segment, PEG 3 is connected to L 5 through a carbonyl group, and the number-average molecular weight of PEG 3 is 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L 5 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • V3 is or -P 3 .
  • Y 0 is r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • L 3V is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2 , and r5 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6,
  • Q is -N-AC
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N, N1, N2 are each independently G, GFLG or Preferably, N1 and N2 are GFLG, preferably, N is G or
  • AC, AC1, AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably, AC1, AC2 are each independently PCB or LPT, preferably, AC is PTX or DOX.
  • L5 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • Y 0 is
  • L3V is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z is
  • Z 1 is r3 is 1 or 2.
  • Z 1 is
  • Z 0 is Each r 3 is independently 1 or 2 and r 5 is 5 or 6.
  • Z 0 is
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (IV') or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 3 is a single-arm polyethylene glycol segment, PEG 3 is connected to L 5 through a carbonyl group, and the number-average molecular weight of PEG 3 is 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L 5 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • V 3 is -L 3V -T 3 ,
  • L 3V is each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , and Z 0 are each independently each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2,
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N1 and N2 are each independently G or GFLG, preferably, N1 and N2 are GFLG,
  • AC1 and AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT.
  • AC1 and AC2 are each independently PCB or LPT.
  • L5 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L3V is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z is
  • Z 1 is r3 is 1 or 2.
  • Z 1 is
  • Z 0 is r3 is 1 or 2.
  • Z 0 is
  • the present invention provides the polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (V) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 1 is a single-arm polyethylene glycol segment, PEG 1 is connected to L 1 through a carbonyl group, and the number-average molecular weight of PEG 1 is 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L1 is r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4,
  • L2 is r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Y 1 and Y 0 are each r is independently 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • L V is r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Z 1 and Z 0 are independently Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2, and r4 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 4 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 4 is more preferably 3 or 4,
  • Q1 is -N1-AC1
  • Q2 is -N2-AC2
  • N1 and N2 are each independently G or GFLG, preferably, N1 and N2 are GFLG,
  • AC1 and AC2 are each independently SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT.
  • AC1 and AC2 are each independently PCB or LPT. More preferably, AC1 is LPT and AC2 is PCB.
  • L 1 is N
  • L is N
  • Y 1 , Y 0 are
  • LV is
  • Z 1 is Each r 3 is independently 1 or 2, and r 4 is 3 or 4.
  • Z 1 is
  • Z 0 is r3 is 1 or 2.
  • Z 0 is
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 3 and PEG 4 are single-arm polyethylene glycol segments, PEG 3 and PEG 4 are respectively connected to L 5 and L 6 through carbonyl groups, and the number-average molecular weights of PEG 3 and PEG 4 are independently 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L 5 and L 6 are independently Each r 1 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 3 or 4; r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, preferably 1, 2, 3 or 4, more preferably 1 or 2,
  • Y 2 , Y 1 , and Y 0 are each independently r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r2 is independently more preferably 1 or 2,
  • L V is r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r2 is independently more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , Z 0 are each independently or Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2 , and r5 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6,
  • N is G or GFLG
  • AC is SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably, AC is SB7, LPT, PTX, DOX or AXT.
  • L 5 , L 6 are each independently
  • Y 2 , Y 1 are Each r 2 is independently 1 or 2.
  • Y 2 , Y 1 are
  • Y 0 is r 0 is 5 or 6, and each r 2 is independently 1 or 2.
  • Y 0 is
  • LV is
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2 and r 5 is 5 or 6.
  • Z is
  • Z 1 is r3 is 1 or 2.
  • Z 1 is
  • Z 0 is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z 0 is
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug represented by formula (VI') or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • PEG 3 and PEG 4 are single-arm polyethylene glycol segments, PEG 3 and PEG 4 are respectively connected to L 5 and L 6 through carbonyl groups, and the number-average molecular weights of PEG 3 and PEG 4 are independently 5k-40k, preferably 5k-10k or 10k-40k, more preferably 10k;
  • L 5 and L 6 are independently r 1 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 1 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 1 is more preferably 3 or 4, and r 2 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6 , r 2 is preferably 1, 2, 3 or 4, r 2 is more preferably 1 or 2,
  • Y 2 , Y 1 , and Y 0 are each independently r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r2 is independently more preferably 1 or 2,
  • L V is r 0 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 0 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 0 is more preferably 5 or 6, and each r 2 is independently 1, 2, 3, 4, 5 or 6, each r2 is independently preferably 1, 2, 3 or 4, each r2 is independently more preferably 1 or 2,
  • Z 2 , Z 1 , Z 0 are each independently or Each r3 is independently 1, 2, 3 , 4, 5 or 6, each r3 is independently preferably 1, 2, 3 or 4 , each r3 is independently more preferably 1 or 2 , and r5 is 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r 5 is preferably 3, 4, 5 or 6, r 5 is more preferably 5 or 6,
  • N is G or GFLG
  • AC is SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, preferably AC is SB7, LPT, PTX, DOX or AXT, or preferably AC is LPT, PTX, DOX or AXT.
  • L 5 , L 6 are each independently
  • Y 2 , Y 1 are Each r 2 is independently 1 or 2.
  • Y 2 , Y 1 are
  • Y 0 is r 0 is 5 or 6, and each r 2 is independently 1 or 2.
  • Y 0 is
  • LV is
  • Z is Each r 3 is independently 1 or 2 and r 5 is 5 or 6.
  • Z is
  • Z 1 is r3 is 1 or 2.
  • Z 1 is
  • Z 0 is Each r 3 is independently 1 or 2.
  • Z 0 is
  • the present invention provides a polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the polyethylene glycol conjugated drug is selected from:
  • the present invention provides an intermediate for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, the intermediate is selected from the following:
  • the present invention provides a method for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:
  • the present invention provides a method for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:
  • the present invention provides a method for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:
  • the present invention provides a method for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:
  • the present invention provides a method for preparing the aforementioned polyethylene glycol conjugated drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:
  • the present application provides a pharmaceutical composition containing the polyethylene glycol conjugated drug of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an effective amount for treating and/or preventing diseases; the combination
  • the drug also contains one or more pharmaceutically acceptable adjuvants, such as carriers and/or excipients.
  • the carriers and/or excipients include, but are not limited to: ion exchangers, alumina, aluminum stearate, lecithin, serum albumin such as human serum albumin, buffer substances such as phosphate, glycerol, sorbic acid, potassium sorbate , Partial glyceride mixture of saturated vegetable fatty acids, water, salts or electrolytes such as protamine sulfate, disodium hydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, sodium chloride, zinc salts, colloidal silica, magnesium trisilicate, polyethylene Pyrrolidone, cellulosic material, polyethylene glycol, sodium carboxymethyl cellulose, polyacrylate, beeswax, polyethylene-polyoxypropylene block polymer and lanolin.
  • ion exchangers alumina, aluminum stearate, lecithin
  • serum albumin such as human serum albumin
  • buffer substances such as phosphate, glycerol, sorbic acid, potassium
  • the pharmaceutical composition can be formulated into any pharmaceutically acceptable dosage form.
  • the pharmaceutical composition may also be administered to an individual in need of such treatment by any suitable mode of administration, eg, oral, parenteral, rectal or pulmonary administration.
  • the pharmaceutical composition can be made into conventional solid preparations, such as tablets, capsules, pills, granules, etc.; it can also be made into oral liquid preparations, such as oral solutions, oral suspensions , syrup, etc.
  • suitable fillers, binders, disintegrants, lubricants and the like can be added.
  • parenteral administration the pharmaceutical composition can be prepared into injections, including injection solutions, sterile powders for injection and concentrated solutions for injection.
  • the injection When the injection is prepared, it can be produced by the conventional method in the existing pharmaceutical field. When the injection is prepared, no additive can be added, or an appropriate additive can be added according to the properties of the drug.
  • the pharmaceutical composition For rectal administration, the pharmaceutical composition can be formulated into suppositories and the like. When used for pulmonary administration, the pharmaceutical composition can be formulated into an inhaler or a spray or the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into injections, such as injection solutions.
  • physiological saline is used as the carrier of the injection.
  • the present application provides the use of the polyethylene glycol conjugated drug of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the manufacture of a drug for treating and/or preventing a disease (eg, cancer) , the disease is the disease treated by the active ingredient in the polyethylene glycol conjugated drug.
  • a disease eg, cancer
  • the present application provides a method of treating and/or preventing a disease (eg, cancer), comprising administering to an individual in need thereof an effective amount of the polyethylene glycol conjugated drug of the present invention or its Pharmaceutically acceptable salts.
  • Dosage regimens can be adjusted to provide the optimal desired response. For example, a single bolus may be administered, several divided doses may be administered over time, or the dose may be proportionally reduced or increased as indicated by the exigencies of the therapeutic situation. It is noted that dosage values may vary with the type and severity of the condition to be alleviated, and may include single or multiple doses. It is further understood that for any particular individual, the specific dosing regimen should be adjusted over time according to the needs of the individual and the professional judgment of the person administering or supervising the administration of the composition.
  • the present application provides the polyethylene glycol conjugated drug of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment and/or prevention of diseases (eg, cancer).
  • diseases eg, cancer
  • cancer refers to a cell proliferative disease state, including but not limited to: colon cancer, leukemia, lymphoma, bladder cancer, bone cancer, brain tumor, medulloblastoma, glioma, breast cancer, adenoma/ Carcinoid, adrenocortical carcinoma, pancreatic islet cell carcinoma, cervical cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, skin cancer, esophageal cancer, eye cancer, gallbladder cancer, stomach cancer, head and neck cancer, liver cancer, melanoma, card Posterior sarcoma, kidney cancer, oral cancer, lung cancer, nasopharyngeal cancer, neuroblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, thyroid cancer, parathyroid penile cancer, prostate cancer, urethral cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, anal cancer , sarcoma, etc., including metastasis of the aforementioned cancers.
  • colon cancer colon cancer
  • “individual” includes humans or non-human animals.
  • Exemplary human subjects include human subjects (referred to as patients) or normal subjects with a disease (eg, a disease described herein).
  • non-human animals includes all vertebrates, such as non-mammals (eg birds, amphibians, reptiles) and mammals, such as non-human primates, livestock and/or domesticated animals (eg sheep, dogs, cats, cows, pigs, etc.).
  • the term "effective amount” refers to an amount of a compound that, when administered, will alleviate to some extent one or more symptoms of the condition being treated.
  • treating means reversing, alleviating, inhibiting the progression of a disorder or condition to which such term applies or one or more symptoms of such disorder or condition, or preventing such disorder or condition or such one or more symptoms of a disorder or condition.
  • the polyethylene glycol conjugated drugs of the present invention use amino acids or polypeptides as the connecting chain, and dicarboxylic acids or polycarboxylic acids with amino groups (for example, natural amino acids with two carboxyl groups) or with diamino or polycarboxylic acids.
  • Amino carboxylic acids (eg, natural amino acids with two amino groups) or polycarboxylic acids are bridges that couple together multiple identical or different drug molecules through the formation of amide bonds.
  • the types, ratios and loadings of drugs can be adjusted.
  • the activated PEG reacts with an amino group on the backbone through a carboxyl group to form an amide bond.
  • the active ingredient suitable for coupling with polyethylene glycol can be a drug molecule with at least one amino, hydroxyl, carboxyl or acyl group, for example, one with at least one amino, hydroxyl, carboxyl or acyl group has antitumor activity , such as SB7, NPB, SN38, LPT, PCB, DOX, PTX or AXT, which represent the following meanings:
  • FA stands for folic acid
  • its structural formula is The connection site of FA and other parts of the overall structure of the polyethylene glycol conjugated drug is which is location shown.
  • PPT-iRGD The structural formula of PPT-iRGD is The connection site of PPT-iRGD and other parts of the overall structure of the polyethylene glycol conjugated drug is the terminal sulfhydryl group which is location shown.
  • connection sites of the following drug molecules and other parts of the overall structure of the polyethylene glycol conjugated drug are shown in the following table, specifically: location shown.
  • PEG polyethylene glycol
  • each arm of the multi-arm polyethylene glycol preferably has the same degree of polymerization.
  • the molecular weight means the total molecular weight of the individual arms.
  • the letter m or n in the subscript of the polyethylene glycol repeating unit represents the degree of polymerization of polyethylene glycol, and when the polyethylene glycol is multi-arm polyethylene glycol, the letter m or n represents each The degree of polymerization of the arms.
  • each independently and “...and each independently” used throughout this document are interchangeable and should be construed broadly, which It can either mean that in different groups, the specific options expressed between the same symbols do not affect each other, or it can mean that in the same group, the specific options expressed between the same symbols do not affect each other.
  • variable being a "direct bond” means that the linking group is absent.
  • pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention include acid and base addition salts of the compounds.
  • acid and base addition salts for example, hydrochloride, hexafluorophosphate, meglumine and the like.
  • the wavy line in the structural formula means the position where other groups are bonded to the structure represented by the formula.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing the growth trend of each group of tumors according to the embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 shows a schematic diagram of the tumor weight inhibition rate of each group in the examples of the present invention.
  • the sources and structures of some of the raw materials are as follows:
  • 1,2-bis(2-aminoethoxy)ethane 50g, 337.2mmol, purchased from TCI
  • triethylamine 37.6mL, 270mmol
  • the reaction was placed under -5 degrees Celsius and stirred
  • Di-tert-butyl dicarbonate (56.5g, 270mmol, purchased from Adamas) was dissolved in dichloromethane and then added dropwise to the flask, the dropwise addition was completed, stirring was continued for 10 minutes, the reaction was completed, and silica gel powder (60g) was added.
  • Fmoc-Glu(OtBu)-OH (4.93g, 11.5859mmol, purchased from Ark Pharm), 37-160 (2.74g, 11.0342mmol), HBTU (6.3g, 16.5512mmol), HOBT (2.2g, 16.5512mmol) It was added to a 500mL flask, dissolved with DMF (50mL), and the reaction was stirred at 0 degrees Celsius for about 10 minutes, and then DIEA (8.2mL, 49.6537mmol) was slowly added dropwise. After the dropwise addition, the reaction continued at 0 Stir overnight in degrees Celsius.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, deionized water (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken, and extracted.
  • the aqueous phase was washed with ethyl acetate (150 mL ⁇ 2), the organic phases were combined, washed with saturated brine (200 mL ⁇ 2), concentrated and evaporated to dryness, and dried in a vacuum oven to obtain product 36-134: 7.235 g.
  • Diethylene glycol amine (25.84mL, 260.59mmol, purchased from TCI) was put into a 1L flask, dichloromethane (50mL), triethylamine (72.64mL, 521.18mmol) were added, placed at 0 degrees Celsius and stirred for 1 hour. After being dissolved in dichloromethane, tert-butyl dicarbonate was slowly added dropwise to the flask, the dropwise addition was completed, and the stirring was continued at 0 degrees Celsius overnight.
  • reaction solution was concentrated to a minimum amount, silica gel powder (50 g) was added, and it was evaporated to dryness to obtain a powdery solid, which was dry-loaded, subjected to column chromatography, and eluted with a mixed solution of 50%-60% ethyl acetate in petroleum ether, Product 37-88:53.4861g was obtained.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, deionized water (200mL) and ethyl acetate (200mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 1), Combine the organic phases, concentrate and evaporate to dryness, add methanol (30 mL) and dichloromethane (120 mL) to dissolve, add silica gel powder (100 g), evaporate to dryness to obtain a powdery solid, dry sample, column chromatography, use 20% ethyl acetate The mixed solution of ester and petroleum ether was eluted to obtain product 37-148: 52.1 g with a yield of 68.6%.
  • Boc-Glu-OH (20.0 g, 80.89 mmol, purchased from Ark Pharm), HBTU (92.02 g, 242.66 mmol), HOBT (32.8 g, 242.66 mmol) and H-Glu(OBn) 2 ⁇ TsOH (84.861 g, 161.8 mmol, purchased from Ark Pharm) was added to a 1000 mL flask, then DMF (200 mL) was added to dissolve it, the reaction was stirred at -5 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (120.32 mL, 728 mmol) was slowly added dropwise. , After the dropwise addition, the reaction continued to be stirred at -5 degrees Celsius for 1 hour, and finally transferred to room temperature and stirred overnight.
  • reaction solution was transferred to a 2L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (600mL) and ethyl acetate (300mL) were added for extraction, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 1), and the organic The organic phase was concentrated with saturated brine (200 mL ⁇ 2), evaporated to dryness, and the product 35-82:70 g was obtained.
  • reaction solution was first transferred to a 2L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (500mL) and ethyl acetate (300mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL).
  • ⁇ 1 Wash combine the organic phases, concentrate to a minimum amount, add silica gel powder, evaporate to dryness, dry sample, column chromatography, eluted with 50%-70% ethyl acetate in petroleum ether mixed solution to obtain 35-85 : 51 g, yield: 69%.
  • reaction was finished, the reaction solution was concentrated, ethyl acetate (300mL) and saturated sodium bicarbonate solution (300mL) were added, a large amount of air bubbles were generated, the solid sodium bicarbonate was continued to be added, and the pH was greater than 7, then extracted, and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (200mL ⁇ 1) washed, combined the organic phases and evaporated to dryness to obtain 35-86: 18.2g, yield: 86%.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL).
  • 35-88 (7.0g, 5.1413mmol) was put into a 250mL flask, dichloromethane (20mL) was added to dissolve it, trifluoroacetic acid (5.7270mL, 77.1191mmol) was added under stirring, and the reaction was stirred at room temperature overnight .
  • reaction solution was concentrated, transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (300 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate Ester (150mL ⁇ 2) was washed, the organic phases were combined, washed with saturated brine (200mL ⁇ 2), concentrated and evaporated to dryness to obtain product 35-89:6.4853g.
  • 35-89 (4.2g, 3.33mmol) was put into a 250mL flask, DMF (30mL) was added to dissolve it, DIEA (4.4mL, 26.64mmol) was added dropwise, the addition was completed, stirred for 1 hour, and then added with diacetyl Anhydride (0.9997 g, 9.99 mmol), the reaction was stirred at room temperature overnight.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, deionized water (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL ⁇ 4), The organic phases were combined, washed with saturated brine (200 mL ⁇ 2), concentrated and evaporated to dryness to obtain product 37-165:4 g, yield: 89%.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (200 mL) and ethyl acetate (250 mL) were added, shaken, extracted, concentrated and evaporated to dryness, and methanol (20 mL) and dichloromethane (100 mL) were added. ) was dissolved, silica gel powder (20 g) was added, evaporated to dryness to obtain a powdery solid, dry loading, column chromatography, eluted with a mixed solution of 4%-7% methanol in dichloromethane, and dried in a vacuum oven to obtain product 37 -166: 3.9 g, yield: 75%.
  • Boc-Leu-OH.H2O (40g, 160.44mmol, purchased from Enoch), Gly-OBn.TsOH (56.837g, 168.462mmol, purchased from Ark pharm), HBTU (66.93g, 176.48mmol), HOBT ( 23.85g, 176.48mmol) was added to the 1000mL flask, DMF (250mL) was added to dissolve it, the reaction was placed at -5 degrees Celsius and stirred for about 20 minutes, then DIEA (145.85mL, 882.4356mmol) was slowly added dropwise, and after the dropwise addition was completed. , continued stirring at -5°C for 1 hour, then moved to room temperature and stirred overnight.
  • reaction solution was transferred to a 2L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (250mL) and ethyl acetate (300mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was ethyl acetate (200mL x 3) Wash, combine the organic phases, wash the organic phase with saturated brine (200mL x 2), concentrate and evaporate to dryness, dry sample, column chromatography, eluted with a mixed solution of 30%-40% ethyl acetate in petroleum ether to obtain Product 37-53: 60.7 g.
  • reaction solution was transferred to a 2L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (350mL) and ethyl acetate (300mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was ethyl acetate (200mL x 3) Wash, combine the organic phases, wash the organic phase with saturated brine (250mL x 2), concentrate and evaporate to dryness to obtain product 37-56: 84g.
  • reaction solution was transferred to a 2L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (300mL) and ethyl acetate (350mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with (200mL x 3) and combined
  • the organic phase was washed with saturated brine (250mL ⁇ 2), the organic phase was placed at room temperature for 1.5 hours, a solid was precipitated, filtered, and the filter cake was washed with ethyl acetate: petroleum ether (3:7) (150mL ⁇ 5) to obtain the product 37-62: 72.8 g.
  • Boc-Glu-OH (5.7864 g, 23.4032 mmol, purchased from Ark pharm), 37-149 (24.85 g, 51.4871 mmol), HBTU (26.626 g, 70.2096 mmol), HOBT (9.4874 g, 70.2096 mmol) were added to 500 mL In the flask, after dissolving with DMF (150 mL), the reaction was stirred at -5 degrees Celsius for about 10 minutes, and then DIEA (34.8 mL, 210.628 mmol) was slowly added dropwise. After the addition, the reaction continued at -5 degrees Celsius. Stir for 1 hour, then move to room temperature and stir overnight.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate (200 mL) and ethyl acetate (300 mL) were added, shaken and extracted.
  • the aqueous phase was washed with ethyl acetate (150 mL ⁇ 1), the organic phases were combined, concentrated and evaporated to dryness, methanol (20 mL) and dichloromethane (100 mL) were added to dissolve, silica gel powder (50 g) was added, and the solid was evaporated to dryness.
  • Boc-Gly-OH (3.4310 g, 19.5858 mmol, purchased from Ark Pharm), 37-154 (17.5 g, 16.3215 mmol), HBTU (9.2847 g, 24.4823 mmol), HOBT (3.3083 g, 24.4823 mmol) were added to 1000 mL In the flask, after dissolving with DMF (150 mL), the reaction was stirred at -5 degrees Celsius for about 10 minutes, and then DIEA (12.14 mL, 73.4468 mmol) was slowly added dropwise. After the addition, the reaction continued at -5 degrees Celsius. Stir for 1 hour, then move to room temperature and stir overnight.
  • reaction solution was transferred to a 1 L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (200 mL) and ethyl acetate (300 mL) were added, shaken, and extracted.
  • the aqueous phase was washed with ethyl acetate (150 mL ⁇ 1), the organic phases were combined, concentrated and evaporated to dryness, methanol (20 mL) and dichloromethane (100 mL) were added to dissolve, silica gel powder (50 g) was added, and the solid was evaporated to dryness.
  • Method loading column chromatography, eluted with a mixed solution of 20%-40% petroleum ether in ethyl acetate, collected and concentrated, and dried in a vacuum oven to obtain product 45-57: 7.1 g, yield: 31%.
  • reaction solution was concentrated to a minimum amount, methyl tert-butyl ether (150 mL) was added, a solid was precipitated, suction filtration, and the filter cake was washed with methyl tertiary butyl ether (50 mL x 3), and then methanol (30 mL) di Chloromethane (120mL) solution was dissolved, silica gel powder (15g) was added, evaporated to dryness, it was a powdery solid, dry loading, column chromatography, washed with a mixed solution of 1% ammonia water and 5%-10% methanol in dichloromethane Take off, collect and concentrate, evaporate to dryness to solid, and dry in a vacuum oven to obtain product 37-176: 1.143 g with a yield of 61%.
  • n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (50 mL) were added, layering appeared, the upper layer liquid was poured, and the lower oily substance was continued to add n-hexane (200 mL) and methyl tert-butyl ether (100 mL), so Repeat 3 times to form a viscous oily substance, dissolve with methanol (30 mL) and dichloromethane (120 mL) solution, add silica gel powder (15 g), evaporate to dryness, and form a powdery solid, dry sample, column chromatography, use The mixed solution of 1% ammonia water and 7%-10% methanol in dichloromethane was eluted, collected and concentrated, evaporated to dryness, and dried in a vacuum oven.
  • Boc-GFLG-OBn 14.95g, 25.654mmol, obtained according to the preparation method of 37-62 was added to the reactor, 10% Pd/C (0.300g) was added, DMF (40mL) was added to dissolve it, and a water pump was used to dissolve it.
  • the air in the reaction kettle was evacuated to form a vacuum, and hydrogen was introduced, and the hydrogen pressure was 0.16 MPa, then the hydrogen was released, the water pump was pumped to a vacuum, and then the hydrogen was introduced. Repeat this for 3 times, and finally the hydrogen was introduced. Stir overnight. After the reaction was completed, the reaction solution was filtered with celite, the filter cake was washed with DMF (20 mL ⁇ 3), and the DMF solutions were combined to serve as the raw material for the next step.
  • reaction solution was concentrated to 10 mL, methyl tert-butyl ether (200 mL) was added, powder was precipitated, suction filtered, and the filter cake was washed with methyl tert-butyl ether (50 mL ⁇ 3), and then (20% methanol: 80% dichloromethane) solution (200 mL) was dissolved, silica gel powder (60 mL) was added, evaporated to dryness to form a powder solid, dry loading, column chromatography, mixed with 0.5% ammonia water: 2%-5% methanol in dichloromethane The solution was eluted, collected, concentrated and evaporated to dryness to obtain product 36-98: 8.5 g, yield: 91.4%.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, NaHCO 3 (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL ⁇ 2) and combined The organic phase was washed with saturated brine (200 mL ⁇ 2), the organic phases were combined, the organic phase was washed with saturated sodium chloride solution (100 mL ⁇ 2), and evaporated to dryness to obtain 36-134: 9.74 g.
  • Fmoc-Lys(Boc)-OH (2 g, 4.2686 mmol), NH 2 -Gly-OBn.TsOH (1.44 g, 4.2686 mmol, purchased from Enoch), HBTU (2.4 g, 6.4029 mmol), HOBT (0.9 g, 6.4029 mmol) was put into 500 mL, the reaction was placed at -5 ° C and stirred for about 20 minutes, then DIEA (3.2 mL, 19.2086 mmol) was slowly added dropwise, and the reaction was continued at -5 ° C for 1 hour, and then the reaction was moved to Stir overnight at room temperature.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, NaCl (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase.
  • the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL ⁇ 2), and the organic
  • the organic phase was washed with saturated brine (200 mL ⁇ 2), the organic phases were combined, the organic phase was washed with saturated sodium chloride solution (100 mL ⁇ 2), and evaporated to dryness to obtain 36-135: 4.04 g.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium chloride (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 2) , the organic phases were combined, the organic phase was washed with saturated brine (200 mL ⁇ 2), evaporated to dryness, dissolved in methanol:dichloromethane (1:5), added with 40 ml of silica gel powder, evaporated to dryness, and applied to the column by dry method. After separation, gradient elution was performed with (5%-10% methanol: 95%-90% dichloromethane), collection and concentration to obtain product 36-140: 1.9 g, yield: 73%.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, NaHCO 3 (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL ⁇ 2) and combined The organic phase was washed with saturated brine (200ml ⁇ 2), the organic phases were combined, the organic phase was washed with saturated sodium chloride solution (100ml ⁇ 2), evaporated to dryness to obtain 36-143: 14g, yield: 92.8% .
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate (200mL) and ethyl acetate (200mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 2) , combine the organic phases, wash the organic phase with saturated brine (200mL ⁇ 2), evaporate to dryness, add methanol:dichloromethane (1:5) to dissolve, add 30ml silica gel powder, evaporate to dryness, dry sample, column layer After analysing, carry out gradient elution with (2%-4% methanol: 98%-96% dichloromethane), collect and concentrate to obtain product 36-144: 1.398g, yield: 59.39%.
  • reaction solution was concentrated to 10 mL, methyl tert-butyl ether (200 mL) was added, powder was precipitated, suction filtered, and the filter cake was washed with methyl tert-butyl ether (50 mL ⁇ 3), and then (20% methanol: 80% dichloromethane) solution (200 mL) was dissolved, silica gel powder (60 mL) was added, evaporated to dryness to obtain a powder solid, dry loading, column chromatography, mixed with 1% ammonia water: 5%-10% methanol in dichloromethane The solution was eluted, collected, concentrated and evaporated to dryness to obtain the product 36-145: 6.2 g with a yield of 92.1%.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, NaHCO 3 (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL ⁇ 2) and combined The organic phase was washed with saturated brine (200ml ⁇ 2), the organic phases were combined, the organic phase was washed with saturated sodium chloride solution (100ml ⁇ 2), evaporated to dryness to obtain product 36-161:18g.
  • reaction solution was concentrated to 10 mL, methyl tert-butyl ether (200 mL) was added, powder was precipitated, suction filtered, and the filter cake was washed with methyl tert-butyl ether (50 mL ⁇ 3), and then (20% methanol: 80% dichloromethane) solution (200 mL) was dissolved, silica gel powder (100 mL) was added, evaporated to dryness to form a powder solid, dry loading, column chromatography, using 0.5%-1% ammonia water: 4%-7% methanol The mixed solution of methyl chloride was eluted, collected, concentrated and evaporated to dryness to obtain the product 36-169: 9.4 g with a yield of 84.7%.
  • 35-93 (0.61 g, 0.5772 mmol), 36-169 (6 g, 2.8858 mmol), HBTU (1.3 g, 3.4630 mmol), HOBT (0.46 g, 3.4630 mmol) were added to a 250 mL flask, and 30 mL of DMF was added to make it Dissolved, placed at -5 degrees Celsius and stirred for 30 min, and then slowly added DIEA (1.7 mL, 10.3889 mmol) dropwise. After the dropwise addition was completed, the reaction was continued for 1 hour, and then the reaction was stirred at room temperature overnight.
  • reaction solution was concentrated to 10 mL, methyl tert-butyl ether (200 mL) was added, powder was separated out, suction filtered, and the filter cake was washed with methyl tertiary butyl ether (50 mL ⁇ 3), and then (20% methanol: 80% dichloromethane) solution (200 mL) was dissolved, silica gel powder (40 mL) was added, evaporated to dryness to obtain a powder solid, dry loading, column chromatography, mixed with 1% ammonia water: 5%-10% methanol in dichloromethane The solution was eluted, collected, concentrated and evaporated to dryness to obtain the product 36-174: 4 g with a yield of 70.5%.
  • reaction solution was concentrated to 10 mL, methyl tert-butyl ether (200 mL) was added, powder was separated out, suction filtered, and the filter cake was washed with methyl tertiary butyl ether (50 mL ⁇ 3), and then (20% methanol: 80% dichloromethane) solution (200 mL) was dissolved, silica gel powder (40 mL) was added, evaporated to dryness to form a powder solid, dry loading, column chromatography, mixed with 1% ammonia water: 5%-8% methanol in dichloromethane The solution was eluted, collected, concentrated and evaporated to dryness to obtain the product 36-238: 2.3 g with a yield of 39.4%.
  • n-hexane 100 mL ⁇ 3 was added for sedimentation, the oily solid in the lower layer was dissolved with a small amount of dichloromethane, methyl tert-butyl ether was added, the solid was precipitated, and the filter cake was filtered with methyl tert-butyl ether (50 mL ⁇ 3).
  • the filter cake was washed with methanol/dichloromethane (1:5). ) was dissolved, 30 mL of silica gel powder was added, evaporated to dryness, dry loading, column chromatography, eluted with (1% ammonia water: 5%-10% methanol: 94%-89% dichloromethane), and collected The filtrate was concentrated and evaporated to dryness to obtain the product 36-253: 0.58g with a yield of 54.7%.
  • Gly-OtBu.HCl (3.6 g, 21.6 mmol, purchased from Accela), HBTU (12.28 g, 32.4 mmol), HOBT (4.4 g, 32.4 mmol) and Fmoc-Glu(OBn)-OH (10.12 g, 21.6 mmol) were combined , purchased from Ark Pharm) was added to a 500mL round-bottomed flask, dissolved with DMF (100mL), the reaction was stirred at 0 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (19.6mL, 118.8mmol) was slowly added dropwise, and the addition was completed. After that, the reaction was continued to stir overnight at 0 °C.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 1 ) was washed, the organic phases were combined and evaporated to dryness to obtain 43-124: 12.37g.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 1 ) was washed, the organic phases were combined and evaporated to dryness to obtain 43-135: 6.4g.
  • Pentatetramine.disulfate (1.0g, 3.05mmol, purchased from Kanglong Chemical), HBTU (6.94g, 18.3mmol), HOBT (2.47g, 18.3mmol) and tert-butyl succinate (3.72g) g, 21.34 mmol) was added to a 250 mL round-bottomed flask, dissolved with DMF (30 mL), the reaction was stirred at -5 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (9.07 mL, 54.9 mmol) was slowly added dropwise, and the dropwise addition was completed. After that, the reaction was continued to stir at 15°C for 1 hour, then moved to room temperature and stirred overnight.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL).
  • ⁇ 1 Wash combine the organic phases, evaporate to dryness, add methanol (40 mL) and dichloromethane (160 mL) to dissolve, add silica gel powder (30 g), evaporate to dryness to obtain a powdery solid, dry sample, column chromatography, use The mixed solution of 3%-6% methanol in dichloromethane was eluted to obtain product 43-134: 2.3g.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (300mL) and ethyl acetate (200mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL).
  • Boc-GFLG-OBn (9.9g, 17mmol, synthesized according to the method of 37-62) was added to the hydrogenation reactor, 10% Pd/C (0.025g) was added, DMF (40mL) was added to dissolve it, and hydrogen was introduced, The hydrogen pressure was 2.1 MPa and the reaction was stirred at room temperature overnight. After the reaction, the reaction solution was filtered with diatomaceous earth, and the diatomaceous earth was washed 3 times with DMF (20 mL x 3), and the filtrate was loaded into a 500 mL round-bottomed flask as the raw material for the next step.
  • SB-743921 (8.000g, 15.4718mmol, referred to as SB7, purchased from Nanjing Yaoshi), HBTU (8.814g, 23.2078mmol), HOBT (3.136g, 23.2078mmol) were added to the solution containing 43-116 (7.3g, 17mmol).
  • DMF 110 mL
  • DIEA 11.5 mL, 69.75 mmol
  • the dropwise addition was completed in 10 minutes, and the reaction was continued at -5 degrees Celsius for 1 hour, and then the reaction was placed in Stir overnight at room temperature.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (250mL) and ethyl acetate (300mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was treated with ethyl acetate (200mL x 2) Wash, combine the organic phases, wash the organic phase with saturated brine (200mL x 2), evaporate to dryness to solid, and dry in a vacuum oven to obtain product 43-119:15.37g.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (200mL) and ethyl acetate (300mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, which was washed with saturated brine (200mLx2) and evaporated to dryness to solid to obtain product 35-100:11.41g.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (200mL) and ethyl acetate (250mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, which was washed with saturated brine (200mLx2) and evaporated to dryness to solid to obtain product 35-102: 11.7g.
  • 35-102 (11.7 g, 5.72 mmol) was added to a 500 mL flask, dichloromethane (20 mL), trifluoroacetic acid (4.2 mL, 57.2 mmol) were added, and the reaction was stirred at room temperature overnight.
  • reaction solution was concentrated to a minimum amount, methyl tert-butyl ether (150 mL) was added, a solid was precipitated, suction filtered, the filter cake was washed with methyl tertiary butyl ether (50 mL x 3), and then methanol (30 mL) and Dichloromethane (120mL) solution was dissolved, silica gel powder (10g) was added, evaporated to dryness, it was a powdery solid, dry loading, column chromatography, mixed solution of 1% ammonia water and 7%-8% methanol in dichloromethane Elution, collection and concentration, evaporation to dryness to solid, and drying in a vacuum oven to obtain product 43-132: 2.4 g, with a yield of 51%.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (150mL) and ethyl acetate (200mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and ethyl acetate (200mL ⁇ 2) was used for the aqueous phase.
  • reaction solution was concentrated to a minimum amount, methyl tert-butyl ether (150 mL) was added, a solid was precipitated, suction filtered, the filter cake was washed with methyl tertiary butyl ether (50 mL x 3), and then methanol (30 mL) and Dichloromethane (120mL) solution was dissolved, silica gel powder (10g) was added, evaporated to dryness, it was a powdery solid, dry loading, column chromatography, mixed solution of 1% ammonia water and 7%-10% methanol in dichloromethane Elution, collection and concentration, evaporation to dryness to solid, and drying in a vacuum oven to obtain product 43-150: 0.24 g with a yield of 26%.
  • the dry method was used for sample loading, column chromatography, eluted with a mixed solution of 1% ammonia water and 6%-7% methanol in dichloromethane, collected and concentrated. Evaporate to dryness to solid, and dry in a vacuum oven to obtain the product.
  • n-hexane (100 mL) and methyl tert-butyl ether (60 mL) were added, the supernatant was poured, and n-hexane (100 mL) and methyl tert-butyl ether (60 mL) were added to the lower liquid.
  • reaction solution After the reaction, transfer the reaction solution to a 1L separatory funnel, add saturated sodium chloride solution (200mL) and ethyl acetate (200mL), shake, extract, concentrate to 100mL, use deionized water (150mL ⁇ 2) After washing, the organic phase was evaporated to dryness and dried to obtain product 37-170: 6.73 g.
  • Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (4.4 g, 11.1641 mmol, purchased from Accela), 37-175 (4.12 g, 11.7517 mmol), HBTU (6.6851 g, 17.6276 mmol), HOBT (2.3820 g, 17.6276 mmol) ) was added to a 250mL flask, the reaction was placed at 0°C and stirred for about 30 minutes, then DIEA (8.74mL, 52.8827mmol) was slowly added dropwise, the addition was completed, and the stirring was continued at 0°C overnight.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated brine (200mL) and ethyl acetate (250mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 1), The organic phases were combined, washed with saturated brine (200 mL ⁇ 1), concentrated and evaporated to dryness to obtain product 37-178: 8.94 g.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL).
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, deionized water (100mL) and ethyl acetate (150mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with dichloromethane (100mL ⁇ 3 ) washed, combined the organic phases, concentrated, added silica gel powder (10 g), evaporated to dryness to give a powdery solid, dry-loaded, column chromatography, eluted with a mixed solution of 3%-5% methanol in dichloromethane to obtain Product 37-210: 0.9 g, yield: 61%.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated sodium bicarbonate solution (200 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken and extracted to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200 mL).
  • n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (40 mL) were added for sedimentation, the upper layer liquid was poured, and n-hexane (150 mL) and methyl tertiary butyl ether (40 mL) were added to the lower oily matter, and this was repeated. 4 times, it was a viscous oily substance, added methyl tert-butyl ether (100mL) to separate out the solid, suction filtered, the filter cake was washed with methyl tert-butyl ether (50mL x 3), and the filter cake was dried to obtain the product 37- 215: 0.9767 g.
  • n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (40 mL) were added for sedimentation, the upper layer liquid was poured, and n-hexane (150 mL) and methyl tertiary butyl ether (40 mL) were added to the lower oily matter, and this was repeated. 4 times, it was a viscous oily substance. Methyl tert-butyl ether (100 mL) was added to separate out the solid, which was filtered with suction.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated; then ethyl acetate ( 200 mL), shaken, extracted, and the aqueous phase was separated.
  • the organic phases were combined, and saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated. Then, deionized water (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated. Finally, the organic phase is concentrated and evaporated to dryness, and then placed in an oven to dry. To Product 42-89: 11.3695g.
  • the filter cake was dissolved in a 20% methanol/dichloromethane mixed solvent (60 mL), silica gel powder (65 mL) was added, evaporated to dryness, and the samples were loaded by dry method and subjected to column chromatography. Elution was performed with an eluent (0%-2% methanol: 100%-98% dichloromethane), the liquid was collected, concentrated, evaporated to dryness, and dried. Product 42-90 was obtained: 8.6 g, yield: 86.6%.
  • the 44-153 solution (1.7026g, 2.6168mmol), 42-90 (8.3637g, 12.0373mmol), HBTU (5.9543g, 15.7006mmol) and HOBT (2.1215g, 15.7006mmol) were added to a 500mL round bottom flask with After DMF (80 mL) was dissolved, the reaction flask was stirred at -5 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (7.8 mL, 47.1018 mmol) was slowly added dropwise. After the addition was completed, the reaction flask was placed in -5 The reaction was stirred at degrees Celsius for 1 hour, and finally transferred to room temperature and stirred for 3 hours.
  • the filter cake was dissolved in a 20% methanol/dichloromethane mixed solvent (100 mL), silica gel powder (60 mL) was added, evaporated to dryness, sampled by dry method, and subjected to column chromatography. Elution was carried out with an eluent (1% ammonia water: 1%-8% methanol: 98%-91% dichloromethane), the liquid was collected, concentrated, evaporated to dryness, and dried. Product 44-158 was obtained: 6.8199 g, yield: 80%.
  • Fmoc-Glu-OtBu (8.0 g, 18.8027 mmol, purchased from Ark Pharm), HBTU (10.6961 g, 28.2041 mmol), HOBT (3.8110 g, 28.2041 mmol) and H-Glu(OBzl)-OBzl ⁇ TosOH (9.8631 g , 19.7429mmol, purchased from Ark Pharm), added to a 250mL round-bottomed flask, dissolved with DMF (80mL), then the reaction flask was placed at -5 degrees Celsius and stirred for about 30 minutes, and then slowly added dropwise DIEA ( 17.1 mL, 103.4150 mmol), after the dropwise addition, the reaction flask was placed at -5 degrees Celsius and stirred for 1 hour, and finally transferred to room temperature and stirred for 3 hours.
  • DIEA 17.1 mL, 103.4150 mmol
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added, shaken, extracted, and the aqueous phase and the organic phase were separated; then acetic acid was added to the aqueous phase ethyl ester (100 mL), shaken, extracted, and the aqueous and organic phases were separated. Then, the organic phases were combined, and saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase and the organic phase were separated.
  • reaction solution was then transferred to a 1L separatory funnel, saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added thereto, shaken, extracted, and the aqueous and organic phases were separated; then acetic acid was added to the aqueous phase ethyl ester (100 mL), shaken, extracted, and the aqueous and organic phases were separated. Then, the organic phases were combined, and saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) was continuously added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated.
  • reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, and saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) and ethyl acetate (200 mL) were added to it, shaken, extracted, and the water phase was separated; Ethyl acetate (100 mL) was added, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated. Then, the organic phases were combined, and a saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated. Then, deionized water (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous phase was separated. Finally, the organic phase is concentrated, evaporated to dryness and dried. Product 44-133 was obtained: 14.8895 g.
  • Fmoc-Lys(Boc)-OH (7.3415 g, 15.6689 mmol), 44-134 (10.7110 g, 18.8027 mmol), HBTU (8.9134 g, 23.5034 mmol) and HOBT (3.1758 g, 23.5034 mmol) were added to 500 mL round bottom In the flask, after dissolving it with DMF (80 mL), the reaction flask was stirred at -5 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (13.0 mL, 78.3445 mmol) was slowly added dropwise. After continuing to stir at -5°C for 1 hour, the reaction was finally transferred to room temperature and stirred overnight.
  • reaction flask was placed at -5 degrees Celsius and stirred for 1 hour. Finally, the reaction flask was transferred to room temperature and stirred. After the reaction was completed, the reaction solution was first transferred to a 1L separatory funnel, saturated aqueous sodium bicarbonate solution (400 mL) and ethyl acetate (300 mL) were added, shaken, extracted, and the aqueous phase and the organic phase were separated. Next, deionized water (300 mL) was added to the organic phase, shaken, extracted, and the aqueous and organic phases were separated.
  • reaction product solution 44-150 (0.9221g, 0.3539mmol, self-made) and 10% Pd/C (50mg) were put into the hydrogenation reactor, then DMF (30mL) was added to dissolve it, the hydrogenation reactor was closed, and hydrogen was introduced to make the inside of the reactor. The pressure reached 1.6 MPa, and the hydrogenation reactor was stirred at room temperature overnight. After the reaction, the reaction kettle was taken out, and the reaction solution was evenly added dropwise to the sand core funnel equipped with compacted diatomite, filtered with suction, and the diatomite was washed with DMF until no product was contained to obtain a reaction product solution.
  • the 44-152 solution (0.7308g, 0.3539mmol), 44-158 (7.6092g, 2.3357mmol), HBTU (1.2079g, 3.1851mmol) and HOBT (0.4304g, 3.1851mmol) were added to a 250mL round bottom flask with After DMF (80 mL) was dissolved, the reaction flask was stirred at -5 degrees Celsius for about 30 minutes, and then DIEA (1.6 mL, 9.5553 mmol) was slowly added dropwise. After the addition was completed, the reaction flask was placed in -5 The reaction was stirred at degrees Celsius for 1 hour, and finally the reaction flask was transferred to room temperature and stirred.
  • n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (20 mL) were added to the reaction solution for sedimentation, the supernatant was poured, and n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (30 mL) were added to the lower oily matter. ) sedimentation, repeated three times to obtain an oily solid.
  • the oily solid was dissolved in dichloromethane (10 mL), then methyl tert-butyl ether (60 mL) was added for sedimentation to give a powdery solid, and the solid product was obtained by filtration.
  • n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether (30 mL) were added to the reaction solution for sedimentation, the supernatant was poured, and n-hexane (150 mL) and methyl tert-butyl ether ( 30 mL) sedimentation, repeated three times to obtain an oily solid.
  • the oily solid was dissolved in dichloromethane (10 mL), then methyl tert-butyl ether (150 mL) was added for sedimentation to give a powdery solid, and the solid product was obtained by filtration. The solid product was washed with methyl tert-butyl ether (60 mL).
  • the solid product was dissolved in a mixed solvent of 20% methanol/dichloromethane (60 mL), silica gel powder (70 mL) was added, evaporated to dryness, sampled by dry method, and subjected to column chromatography. Elution was performed with an eluent (1% ammonia water: 3%-8% methanol: 96%-91% dichloromethane), the liquid was collected, concentrated, evaporated to dryness, and dried. Product 44-174 was obtained: 0.4393 g, yield: 55.21%.
  • Fmoc-Lys(Boc)-OH (2 g, 4.2686 mmol, purchased from Accela), H-Gly-OBzl.TosOH (1.44 g, 4.2686 mmol, purchased from Ark Pharm), HBTU (2.4 g, 6.4029 mmol), HOBT (0.9g, 6.4029mmol) was put into 500mL, the reaction was placed at -5 degrees Celsius and stirred for about 20 minutes, then DIEA (3.2mL, 19.2086mmol) was slowly added dropwise, and the reaction was continued at -5 degrees Celsius for 1 hour, and then the reaction was Move to room temperature and stir overnight.
  • reaction solution was transferred to a 1L separatory funnel, saturated NaCl solution (200mL) and ethyl acetate (200mL) were added, and extraction was performed to obtain an organic phase, and the aqueous phase was washed with ethyl acetate (200mL ⁇ 2), Combine the organic phases, wash the organic phases with saturated brine (200 mL ⁇ 2), combine the organic phases, wash the organic phases with saturated sodium chloride solution (100 mL ⁇ 2), and evaporate to dryness to obtain 36-135: 4.04 g.
  • Fmoc-Glu-(OtBu)(OH) (3.0 g, 7.0510 mmol, purchased from Ark Pharm)
  • Glu-OBn (3.6987 g, 7.4036 mmol, purchased from Ark Pharm)
  • HBTU (4.0110 g, 10.5765 mmol)
  • HOBT (1.4292 g, 10.5765 mmol) was added to a flask containing 500 ml, an appropriate amount of DMF (50 mL) was added to dissolve it, and the reaction was stirred at 0 degrees Celsius for 30 minutes.
  • DIEA (5.2439 mL, 31.7295 mmol) was slowly added dropwise and stirring was continued at 0 degrees Celsius overnight.
  • Morpholine and a small amount of DMF were added to a 500 ml flask containing 47-33 to dissolve and the reaction was stirred at room temperature for an additional hour. After the reaction, take out the reaction solution and add deionized water (200mL), extract with ethyl acetate (100mL ⁇ 3), combine the organic phases, add saturated sodium chloride solution (200mL) to the organic phase, wash twice, concentrate and evaporate to dryness, vacuum Oven drying to obtain crude product.
  • Morpholine and a small amount of DMF were added to a 500 ml flask containing 47-36 to dissolve and the reaction was stirred at room temperature for an additional hour. After the reaction, take out the reaction solution and add deionized water (200mL), extract with ethyl acetate (100mL ⁇ 3), combine the organic phases, add saturated sodium chloride solution (200mL) to the organic phase, wash twice, concentrate and evaporate to dryness, vacuum Oven drying to obtain crude product.
  • Morpholine (3.5 mL, 40.5884 mmol) and a small amount of DMF were added to a 500 mL flask containing 47-39 (4.6 g, 4.0588) to dissolve and the reaction was stirred at room temperature for an additional hour. After the reaction, take out the reaction solution and add deionized water (200mL), extract with ethyl acetate (100mL ⁇ 3), combine the organic phases, add saturated sodium chloride solution (200mL) to the organic phase, wash twice, concentrate and evaporate to dryness, vacuum Oven drying to obtain crude product.
  • deionized water 200mL
  • extract with ethyl acetate 100mL ⁇ 3
  • SN38 (15.00g, 38.23mmol) was placed in a 1000ml round bottom flask, 150ml of dichloromethane was added to dissolve it, tert-butyldiphenylchlorosilane (59.64ml, 229.36mmol), triethylamine (31.88ml, 229.36 mmol) and the reaction was stirred overnight in a 37°C oil bath. After the reaction was completed, the reaction solution was steamed to a viscous state, n-hexane (150 ml) was added to settle the product to a solid, suction filtration, and drying were carried out to obtain product 47-96: 23.15 g with a yield of 96%.
  • the powdery solid in the reaction solution was separated out, and the filter cake was filtered with methyl tert-butyl ether (40 mL ⁇ 3 ) cleaning, collecting the filter cake, drying in a vacuum oven to obtain a crude product 47-119:1.33g in a yield of 87%.

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Abstract

一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途，具体涉及式（A）所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的制备方法，用于制备所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的中间体，包含所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。

Description

聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途 技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途。
背景技术
高分子偶联药物可以大幅度增加药物分子的水溶性；可以防止或减少药物产生结块、免疫原性和抗原性；大多数的小分子药物在血液循环中只能保持数分钟，而高分子偶联药物可以保持几十、几百小时甚至更长，这有利于因肿瘤毛细血管的渗漏而产生的“增强渗透和保留”效应(即EPR效应)；由于流体力学体积增加而减弱了药物的肾消除，保护药物不被酶降解，延长药物在血浆内的半衰期，增加药物的生物利用度。此外，通过主动靶向或EPR被动靶向使抗癌药高度富集在癌变的器官、组织或细胞，大幅度地降低因为小分子抗癌药充满全身而导致的毒副作用；将药物的细胞吸收局限于内吞路径，有利于向溶酶体方向的药物传输，从而避开p-糖蛋白泵出而导致的抗药性；刺激或恢复免疫功能，利于杀灭癌细胞。聚乙二醇是高分子偶联药物纳米医学领域最成功的载体，被称之为“黄金标准”载体。过去30年来，聚乙二醇化药物技术取得了巨大的成就，已经有17个聚乙二醇化药物被美国FDA批准进入市场销售，有1个聚乙二醇化药物被中国NMPA批准上市，此外还有近40个临床新药在进行一期、二期、三期临床试验和进入NDA阶段，其中半数为聚乙二醇化小分子药物。
利用如叶酸、RGD短肽等小分子创造主动靶向的高分子偶联药物是目前流行的将药物靶向肿瘤细胞的策略。小分子靶向配件由于具有免疫原性低、贮存稳定性好、体积小、易于修饰、易于与高分子载体偶联、与各种有机溶剂和水溶剂相容性好、成本低等优点，优于抗体及其他配体。
叶酸(FA)是目前研究最广泛的小分子靶向配体，它是一种维生素，能特异性地与细胞表面的叶酸受体结合，叶酸受体在循环中不能进入健康细胞，但在卵巢癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、子宫内膜癌和结肠癌等多种癌细胞中过表达。作为一种活性靶向配体，叶酸具有独特的优势，它与叶酸受体有很高的结合亲和力(K d～10 -10M)。由于其体积小、结构简单，对药物动力学的干扰可以忽略不计。此外，叶酸结构中的活性羧基具有高度的反应性，很容易与含有羟基或氨基的聚合物载体偶联，而这种偶联不会损害叶酸的内在活性。
某些短肽能够特异性地靶向癌细胞或肿瘤血管内皮细胞，其中一些肽被称为细胞靶向肽，通过与受体的相互作用，对相应的靶细胞表现出高度的特异性和亲和力。细胞靶向肽已经被用于各种治疗试验，其中研究最广泛的序列是精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)，这是第一个发现的归巢肽。RGD可以与肿瘤细胞和血管内皮细胞中上调的整合蛋白结合，RGD介导的药物传递系统能够提高化疗中靶向传递的效率。最近开发出来的内化RGD多肽(iRGD，CRGDK/RGPD/EC)，是一种肿瘤靶向和细胞穿透的环肽，可通过依赖于神经肽-1的、肿瘤特异的方式增加结合物进入血管外肿瘤组织。与传统的环肽相比，iRGD调节的高分子偶联药物可以通过增强药物在肿瘤部位的富集和穿透性来显著提高肿瘤治疗的效果。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提供了一种聚乙二醇偶联药物，其具有优异的肿瘤抑制活性。另外，发明人运用独特的化学合成方法，将小分子靶向配体如叶酸和iRGD多肽与抗癌药同时接枝在同一聚乙二醇高分子载体上，以提高聚乙二醇偶联药物的疗效。通过本发明的制备方法，可以高效、方便地制备本发明的聚乙二醇偶联药物。
为此，在本发明的第一方面，本发明提供了式(A)所示的聚乙二醇偶联药物或其药 学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000001
其中：
M选自
Figure PCTCN2021107625-appb-000002
Figure PCTCN2021107625-appb-000003
Figure PCTCN2021107625-appb-000004
或PEG m，PEG m为单臂或多臂(如四臂、八臂，优选四臂)聚乙二醇链段，PEG m通过羰基与L 1、L 3、L 5或L 6相连，PEG m的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
j 1、j 2、j 3、j 4各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，优选为0、1、2、3或4，且不同时为0；
PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 1、L 4、L 5、L 6相连，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k、10k或40k；
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000005
Figure PCTCN2021107625-appb-000006
Figure PCTCN2021107625-appb-000007
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连，
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
V 1为-L 1V-T 1或
Figure PCTCN2021107625-appb-000008
V 2为-L 2V-T 2；
V 3为-P 3、
Figure PCTCN2021107625-appb-000009
P为-L V-T；
P 3为-L 3V-T 3；
L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000010
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
T 1、T 2、T 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000011
Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000012
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000013
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
T为
Figure PCTCN2021107625-appb-000014
W 1、W 2、W 3各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000015
Figure PCTCN2021107625-appb-000016
Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000017
Figure PCTCN2021107625-appb-000018
Figure PCTCN2021107625-appb-000019
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，各r 4独立地为1、2、3、4、5或6，各r 4独立地优选为1、2、3或4，各r 4独立地更优选为3或4，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，r 6为1、2、3、4、5或6，r 6优选为2、3、4或5，r 6更优选为3或4；
Q为-N-AC；
Q1为-N1-AC1；
Q2为-N2-AC2；
N、N1、N2各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000020
G或GFLG；
AC、AC1、AC2为抗癌药物分子，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、 SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT。
在一些实施方案中，L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000021
Figure PCTCN2021107625-appb-000022
为
Figure PCTCN2021107625-appb-000023
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000024
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000025
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000026
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000027
在一些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000028
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4。
在一些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000029
在一些实施方案中，L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000030
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000031
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000032
r 1为1、2、3、4、5或6，r 1优选为1、2、3或4，r 1更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000033
在一些实施方案中，L 6为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000034
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 6为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000035
且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000036
在一些实施方案中，Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000037
Figure PCTCN2021107625-appb-000038
在一些实施方案中，L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000039
在一些实施方案中，Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000040
Figure PCTCN2021107625-appb-000041
在本发明的第二方面，本发明提供了式(A’)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000042
其中：
M选自
Figure PCTCN2021107625-appb-000043
Figure PCTCN2021107625-appb-000044
Figure PCTCN2021107625-appb-000045
或PEG m，PEG m为单臂或多臂(如四臂、八臂，优选四臂)聚乙二醇链段，PEG m通过羰基与L 1、L 3、L 5或L 6相连，PEG m的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
j 1、j 2、j 3、j 4各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，优选为0、1、2、3或4，且不同时为0；
PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 1、L 4、L 5、L 6相连，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k、10k或40k；
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000046
Figure PCTCN2021107625-appb-000047
Figure PCTCN2021107625-appb-000048
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连，
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
V 1为-L 1V-T 1或
Figure PCTCN2021107625-appb-000049
V 2为-L 2V-T 2；
V 3为-L 3V-T 3或
Figure PCTCN2021107625-appb-000050
P为-L V-T；
L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000051
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
T 1、T 2、T 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000052
Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000053
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000054
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
T为
Figure PCTCN2021107625-appb-000055
W 1、W 2、W 3各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000056
Figure PCTCN2021107625-appb-000057
Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000058
Figure PCTCN2021107625-appb-000059
Figure PCTCN2021107625-appb-000060
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，各r 4独立地为1、2、3、4、 5或6，各r 4独立地优选为1、2、3或4，各r 4独立地更优选为3或4，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，r 6为1、2、3、4、5或6，r 6优选为2、3、4或5，r 6更优选为3或4；
Q为-N-AC；
Q1为-N1-AC1；
Q2为-N2-AC2；
N、N1、N2各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000061
G或GFLG；
AC、AC1、AC2为抗癌药物分子，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT。
在一些实施方案中，L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
Figure PCTCN2021107625-appb-000062
Figure PCTCN2021107625-appb-000063
为
Figure PCTCN2021107625-appb-000064
L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000065
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000066
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000067
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000068
在一些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000069
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4。
在一些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000070
在一些实施方案中，L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000071
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000072
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000073
r 1为1、2、3、4、5或6，r 1优选为1、2、3或4，r 1更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2。
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000074
在一些实施方案中，L 6为直接键或
Figure PCTCN2021107625-appb-000075
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 6为直接键或
Figure PCTCN2021107625-appb-000076
且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连。
在一些实施方案中，L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000077
在一些实施方案中，Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000078
Figure PCTCN2021107625-appb-000079
在一些实施方案中，L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000080
在一些实施方案中，Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000081
Figure PCTCN2021107625-appb-000082
在本发明的第三方面，本发明提供了式(I)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000083
其中：
M选自
Figure PCTCN2021107625-appb-000084
j 2为3或4；
PEG 2为单臂聚乙二醇链段，PEG 2通过羰基与L 4相连，PEG 2的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000085
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000086
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
V 2为-L 2V-T 2，
L 2V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000087
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000088
W 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000089
Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000090
Figure PCTCN2021107625-appb-000091
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，
Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
N、N1、N2各自独立地为G或GFLG，优选地，N、N1和N2为GFLG，
AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为LPT或PCB，更优选地，AC1为LPT，AC和AC2为PCB。
在一些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000092
在一些实施方案中，L 4为
Figure PCTCN2021107625-appb-000093
在一些实施方案中，L 2V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000094
在一些实施方案中，Z 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000095
r 3为1或2，r 4为3或4。
在一些实施方案中，Z 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000096
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000097
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000098
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000099
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000100
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000101
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000102
在本发明的第四方面，本发明提供了式(II)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000103
其中：
M选自
Figure PCTCN2021107625-appb-000104
Figure PCTCN2021107625-appb-000105
或PEG m，PEG m为单臂或多臂(如四臂、八臂，优选四臂)聚乙二醇链段，PEG m通过羰基与L 1相连，PEG m的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
j 1为3或4；
PEG 1为单臂聚乙二醇链段，PEG 1通过羰基与L 1相连，PEG 1的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k、10k或40k；
L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000106
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000107
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
V 1为-L 1V-T 1，
L 1V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000108
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000109
W 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000110
Figure PCTCN2021107625-appb-000111
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000112
Figure PCTCN2021107625-appb-000113
Figure PCTCN2021107625-appb-000114
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，r 6为1、2、3、4、5或6，r 6优选为2、3、4或5，r 6更优选为3或4，
Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
N、N1、N2各自独立地为G或GFLG，
AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT或PCB，更优选地，AC为SB7、NPB或SN38，AC1为NPB或LPT，AC2为PCB。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000115
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000116
在一些实施方案中，L 1V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000117
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000118
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000119
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000120
Figure PCTCN2021107625-appb-000121
各r 3独立地为1或2，r 4为3或4，r 5为5或6。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000122
Figure PCTCN2021107625-appb-000123
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000124
各r 3独立地为1或2，r 6为3或4。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000125
在本发明的第五方面，本发明提供了式(III)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000126
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000127
PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 5、L 6相连，PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000128
r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
L 6为
Figure PCTCN2021107625-appb-000129
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
V 3为-L 3V-T 3，
L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000130
r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000131
W 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000132
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000133
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
Q为-N-AC，
N为G、
Figure PCTCN2021107625-appb-000134
或GFLG，优选地，N为G或
Figure PCTCN2021107625-appb-000135
AC为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC为DOX或PTX。
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000136
在一些实施方案中，L 6为
Figure PCTCN2021107625-appb-000137
在一些实施方案中，L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000138
在一些实施方案中，Z 1和Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000139
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 1和Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000140
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000141
r 3为1或2，r 5为5或6。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000142
在本发明的第六方面，本发明提供了式(IV)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000143
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000144
PEG 3为单臂聚乙二醇链段，PEG 3通过羰基与L 5相连，PEG 3的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000145
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
V 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000146
或-P 3，
Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000147
r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
P 3为-L 3V-T 3，L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000148
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000149
W 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000150
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000151
Figure PCTCN2021107625-appb-000152
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
N、N1、N2各自独立地为G、GFLG或
Figure PCTCN2021107625-appb-000153
优选地，N1、N2为GFLG，优选地，N为G或
Figure PCTCN2021107625-appb-000154
AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC1、AC2各自独立地为PCB或LPT，优选地，AC为PTX或DOX。
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000155
在一些实施方案中，Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000156
在一些实施方案中，L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000157
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000158
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000159
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000160
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000161
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000162
各r 3独立地为1或2，r 5为5或6。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000163
在本发明的第七方面，本发明提供了式(IV’)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000164
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000165
PEG 3为单臂聚乙二醇链段，PEG 3通过羰基与L 5相连，PEG 3的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000166
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
V 3为-L 3V-T 3，
L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000167
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000168
W 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000169
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000170
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，
Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
N1、N2各自独立地为G或GFLG，优选地，N1、N2为GFLG，
AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC1、AC2各自独立地为PCB或LPT。
在一些实施方案中，L 5为
Figure PCTCN2021107625-appb-000171
在一些实施方案中，L 3V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000172
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000173
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000174
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000175
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000176
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000177
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000178
在本发明的第八方面，本发明提供了式(V)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000179
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000180
PEG 1为单臂聚乙二醇链段，PEG 1通过羰基与L 1相连，PEG 1的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000181
r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000182
r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
V 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000183
Y 1、Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000184
各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
P为-L V-T，
L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000185
r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
T为
Figure PCTCN2021107625-appb-000186
W 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000187
Z 1、Z 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000188
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，
Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
N1、N2各自独立地为G或GFLG，优选地，N1、N2为GFLG，
AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC1、AC2各自独立地为PCB或LPT，更优选地，AC1为LPT，AC2为PCB。
在一些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000189
在一些实施方案中，L 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000190
在一些实施方案中，Y 1、Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000191
在一些实施方案中，L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000192
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000193
各r 3独立地为1或2，r 4为3或4。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000194
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000195
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000196
在本发明的第九方面，本发明提供了式(VI)所示聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000197
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000198
PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 5、L 6相连，PEG 3、 PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 5、L 6各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000199
各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4；r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
V 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000200
Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000201
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
P为-L V-T，
L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000202
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
T为
Figure PCTCN2021107625-appb-000203
W 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000204
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为或
Figure PCTCN2021107625-appb-000205
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
Q为-N-AC，
N为
Figure PCTCN2021107625-appb-000206
G或GFLG，
AC为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC为SB7、LPT、PTX、DOX或AXT。
在一些实施方案中，L 5、L 6各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000207
Figure PCTCN2021107625-appb-000208
在一些实施方案中，Y 2、Y 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000209
各r 2独立地为1或2。
在一些实施方案中，Y 2、Y 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000210
在一些实施方案中，Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000211
r 0为5或6，各r 2独立地为1或2。
在一些实施方案中，Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000212
在一些实施方案中，L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000213
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000214
各r 3独立地为1或2，r 5为5或6。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000215
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000216
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000217
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000218
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000219
在本发明的第十方面，本发明提供了式(VI’)所示聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021107625-appb-000220
其中：
M为
Figure PCTCN2021107625-appb-000221
PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 5、L 6相连，PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
L 5、L 6各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000222
r 1为1、2、3、4、5或6，r 1优选为1、2、3或4，r 1更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2，
V 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000223
Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000224
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
P为-L V-T，
L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000225
r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
T为
Figure PCTCN2021107625-appb-000226
W 3为
Figure PCTCN2021107625-appb-000227
Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为或
Figure PCTCN2021107625-appb-000228
各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
Q为-N-AC，
N为
Figure PCTCN2021107625-appb-000229
G或GFLG，
AC为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC为SB7、LPT、PTX、DOX或AXT，或者优选地，AC为LPT、PTX、DOX或AXT。
在一些实施方案中，L 5、L 6各自独立地为
Figure PCTCN2021107625-appb-000230
在一些实施方案中，Y 2、Y 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000231
各r 2独立地为1或2。
在一些实施方案中，Y 2、Y 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000232
在一些实施方案中，Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000233
r 0为5或6，各r 2独立地为1或2。
在一些实施方案中，Y 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000234
在一些实施方案中，L V为
Figure PCTCN2021107625-appb-000235
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000236
各r 3独立地为1或2，r 5为5或6。
在一些实施方案中，Z 2为
Figure PCTCN2021107625-appb-000237
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000238
r 3为1或2。
在一些实施方案中，Z 1为
Figure PCTCN2021107625-appb-000239
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000240
各r 3独立地为1或2。
在一些实施方案中，Z 0为
Figure PCTCN2021107625-appb-000241
在本发明的第十一方面，本发明提供了聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure PCTCN2021107625-appb-000242
Figure PCTCN2021107625-appb-000243
Figure PCTCN2021107625-appb-000244
Figure PCTCN2021107625-appb-000245
Figure PCTCN2021107625-appb-000246
Figure PCTCN2021107625-appb-000247
Figure PCTCN2021107625-appb-000248
Figure PCTCN2021107625-appb-000249
Figure PCTCN2021107625-appb-000250
Figure PCTCN2021107625-appb-000251
Figure PCTCN2021107625-appb-000252
Figure PCTCN2021107625-appb-000253
在本发明的第十二方面，本发明提供了中间体，其用于制备前述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，所述中间体选自以下：
Figure PCTCN2021107625-appb-000254
Figure PCTCN2021107625-appb-000255
Figure PCTCN2021107625-appb-000256
Figure PCTCN2021107625-appb-000257
Figure PCTCN2021107625-appb-000258
Figure PCTCN2021107625-appb-000259
Figure PCTCN2021107625-appb-000260
Figure PCTCN2021107625-appb-000261
Figure PCTCN2021107625-appb-000262
Figure PCTCN2021107625-appb-000263
在本发明的第十三方面，本发明提供了制备前述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
(1)制备中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000264
其中，M、L 3、L 4、W 2、j 2如前所述，且
Figure PCTCN2021107625-appb-000265
的末端带有羧基和氨基；
制备中间体V 2-H，其中，V 2如前所述，且V 2-H的末端带有氨基；
(2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000266
发生酰胺化反应，得到中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000267
(3)使带有氨基的中间体V 2-H与中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000268
发生酰胺化反应，得到前 述的聚乙二醇偶联药物。
在本发明的第十四方面，本发明提供了制备前述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
(1)制备中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000269
其中，M、L 1、L 2、W 1、j 1如前所述，且
Figure PCTCN2021107625-appb-000270
的末端带有氨基，
Figure PCTCN2021107625-appb-000271
的末端带有羧基；
制备中间体V 1-H，其中，V 1如前所述，且V 1-H的末端带有氨基；
(2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000272
发生酰胺化反应，得到中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000273
(3)使带有氨基的中间体V 1-H与中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000274
发生酰胺化反应，得到前述的聚乙二醇偶联药物。
在本发明的第十五方面，本发明提供了制备前述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
(1)制备中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000275
其中，M、L 5、W 3如前所述，且
Figure PCTCN2021107625-appb-000276
的末端带有氨基，
Figure PCTCN2021107625-appb-000277
的末端带有羧基；
制备中间体V 3-H，其中，V 3如前所述，且V 3-H的末端带有氨基；
(2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000278
发生酰胺化反应，得到中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000279
(3)使带有氨基的中间体V 3-H与中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000280
发生酰胺化反应，得到前述的聚乙二醇偶联药物。
在本发明的第十六方面，本发明提供了制备前述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
(1)制备中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000281
其中，M、L 1、L 2、PEG 1、W 1、Y 1、Y 0、r 2如前所述；
(2)使中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000282
与
Figure PCTCN2021107625-appb-000283
发生加成反应，得到前述的聚乙二醇偶联药物。
在本发明的第十七方面，本发明提供了制备前述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
(1)制备中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000284
Figure PCTCN2021107625-appb-000285
其中，M、L 5、L 6、PEG 3、PEG 4、W 3、Y 2、Y 1、Y 0、r 0、r 2如前所述；
(2)使中间体
Figure PCTCN2021107625-appb-000286
Figure PCTCN2021107625-appb-000287
与
Figure PCTCN2021107625-appb-000288
发生加成反应，得到前述的聚乙二醇偶联药物。
在本发明的一个方面，本申请提供了一种药物组合物，其含有治疗和/或预防疾病有效量的本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；所述组合物还含有一种或多种药学上可接受的辅料，例如载体和/或赋形剂。所述载体和/或赋形剂包括但不限于:离子交换剂,氧化铝,硬脂酸铝,卵磷脂,血清蛋白如人血清蛋白,缓冲物质如磷酸盐,甘油,山梨酸,山梨酸钾,饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。
所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。所述药物组合物还可以以任何合适的给药方式，例如口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的个体。用于口服给药时，所述药物组合物可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，所述药物组合物可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。优选地，本发明的药物组合物可以被制成注射剂，例如注射液。可选地，以生理盐水作为所述注射液的载体。
在本发明的另一个方面，本申请提供了本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐在制备治疗在制备治疗和/或预防疾病(例如癌症)的药物中的用途，所述疾病为所述聚乙二醇偶联药物中的活性成分所治疗的疾病。
在本发明的另一个方面，本申请提供了一种治疗和/或预防疾病(例如癌症)的方法，包括对有此需要的个体给予有效量的本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐。可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
在本发明的另一个方面，本申请提供了本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防疾病(例如癌症)。
本发明中，癌症是指细胞增殖性疾病状态，包括但不限于：结肠癌、白血病、淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、腺瘤/类癌、肾上腺皮质癌、胰岛细胞癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠直肠癌、皮肤癌、食管癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肝癌、黑色素瘤、卡波氏肉瘤、肾癌、口腔癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺阴茎癌、前列腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴 癌、肛门癌、肉瘤等，包括前述癌症的转移。
本发明中，“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中，“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
如本文中所使用的，术语“有效量”指被给药后会在一定程度上缓解所治疗病症的一或多种症状的化合物的量。
如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状。
本发明的聚乙二醇偶联药物，以氨基酸或多肽等为连接链，以带有氨基的二羧酸或多羧酸(例如带有两个羧基的天然氨基酸)或者带有二氨基或多氨基的羧酸(例如带有两个氨基的天然氨基酸)或者多羧酸为连接桥，通过形成酰胺键将多个相同或不同的药物分子偶联在一起。药物的种类、比例和载药量可以调节。在某些实施方案中，活化的PEG通过羧基与主链上的氨基发生反应，形成酰胺键。
本发明中，适于与聚乙二醇偶联的活性成分可以是带有至少一个氨基、羟基、羧基或者酰基的药物分子，例如带有至少一个氨基、羟基、羧基或者酰基的具有抗肿瘤活性的药物分子，例如SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，其代表的含义如下：
缩写 名称 CAS号或结构式
LPT 拉帕替尼 231277-92-2
PCB 帕布惜利布 571190-30-2
SB7 SB-743921 940929-33-9
NPB Niraparib(MK-4827) 1038915-60-4
SN38 7-乙基-10-羟基喜树碱 86639-52-3
DOX 阿霉素 23214-92-8
PTX 紫杉醇 33069-62-4
AXT Axitinib 319460-85-0
另外，FA代表叶酸，其结构式为
Figure PCTCN2021107625-appb-000289
FA与聚乙二醇偶联药物整体结构的其他部分的连接位点为
Figure PCTCN2021107625-appb-000290
即
Figure PCTCN2021107625-appb-000291
所示位置。
PPT-iRGD的结构式为
Figure PCTCN2021107625-appb-000292
PPT-iRGD与聚乙二醇偶联药物整体结构的其他部分的连接位点为末端巯基
Figure PCTCN2021107625-appb-000293
即
Figure PCTCN2021107625-appb-000294
所示位置。
另外，以下药物分子与聚乙二醇偶联药物整体结构的其他部分的连接位点如下表所示，具体即
Figure PCTCN2021107625-appb-000295
所示位置。
Figure PCTCN2021107625-appb-000296
Figure PCTCN2021107625-appb-000297
如本文中所使用，“PEG”为聚乙二醇的缩写，是指重复单元为-CH 2CH 2O-的均聚物，包括单臂聚乙二醇、多臂聚乙二醇及其衍生物，例如端基带有氨基或羧基等反应官能团的衍生物。本发明中，多臂聚乙二醇的各个臂优选地具有相同的聚合度。当提及多臂聚乙二醇的分子量时，所述分子量意指各个臂的总的分子量。本发明的结构式中，聚乙二醇重复单元下角标的字母m或n代表聚乙二醇的聚合度，当所述聚乙二醇为多臂聚乙二醇时，字母m或n代表每个臂的聚合度。
如本文中所使用，除非以其他方式明确指出，在本文中通篇采用的描述方式“各…独立地为”和“…和…各自独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
如本文中所使用，某一变量为“直接键”指的是该连接基团不存在。
如本文中所使用，本发明的化合物的“药学上可接受的盐”包括化合物的酸加成盐及碱加成盐。例如盐酸盐、六氟磷酸盐、葡甲胺盐等。
如本文中所使用，结构式中的波浪线
Figure PCTCN2021107625-appb-000298
意指其他基团与结构式所代表的结构发生键连的位置。
附图说明
图1表示本发明实施例的各组肿瘤增长趋势示意图。
图2表示本发明实施例的各组肿瘤重量抑制率示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例中各缩写的含义如下：
Figure PCTCN2021107625-appb-000299
部分原料的来源和结构如下：
M-SCM-5K
键凯，
Figure PCTCN2021107625-appb-000300
M-SCM-10K
键凯，
Figure PCTCN2021107625-appb-000301
4ARM-SCM-40K
键凯，
Figure PCTCN2021107625-appb-000302
4ARM-SCM-10K
键凯，
Figure PCTCN2021107625-appb-000303
下面结合具体的实施例对本发明进行进一步的解释说明。
实施例1 化合物的制备
37-184合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000304
Figure PCTCN2021107625-appb-000305
Figure PCTCN2021107625-appb-000306
37-160
Figure PCTCN2021107625-appb-000307
将1，2-二(2-氨基乙氧基)乙烷(50g,337.2mmol,购于TCI)投入1L烧瓶中，加入三乙 胺(37.6mL,270mmol),反应置于-5摄氏度下搅拌10分钟，将Di-tert-butyl dicarbonate(56.5g,270mmol,购于Adamas)用二氯甲烷溶解然后滴加到烧瓶中，滴加完毕，继续搅拌10分钟，反应结束，加入硅胶粉(60g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品37-160:28.7g，产率34％。
37-162
Figure PCTCN2021107625-appb-000308
将叶酸(9.776g,22.1488mmol,购于damas-beta)投入500mL的烧瓶中，加入DMSO(300mL)使其溶解，加入吡啶(16.285mL,201.35mmol),反应在室温下搅拌1小时，再加入37-160(5g,20.135mmol)和DCC(2.07g,201.35mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，向反应液中加入乙酸乙酯(200mL)和正己烷(300mL)、甲基叔丁基醚(150mL),分层，倾倒上层液体，下层油状物加入乙酸乙酯(200mL)和正己烷(300mL),析出固体，过滤，滤饼干燥，得37-162：11.4g。
37-163
Figure PCTCN2021107625-appb-000309
将37-162(11.4g,16.972mmol)投入500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)，使其溶解，加入三氟乙酸(12.6mL,169.72mmol)，反应在室温下搅拌过夜，反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×2)清洗，滤饼干燥，得产品37-163:9.9g。
36-134
Figure PCTCN2021107625-appb-000310
将Fmoc-Glu(OtBu)-OH(4.93g,11.5859mmol,购于Ark Pharm)、37-160(2.74g,11.0342mmol)、HBTU(6.3g，16.5512mmol)，HOBT(2.2g，16.5512mmol)加入到500mL烧瓶中，用DMF(50mL)溶解后，在将反应置于0摄氏度条件下搅拌约10分钟，然后缓慢滴加DIEA(8.2mL，49.6537mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取。水相用乙酸乙酯(150mL×2)清洗，合并有机相，用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品36-134：7.235g。
36-137
Figure PCTCN2021107625-appb-000311
将36-134(7.235g,11.0342mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(9.6mL,110.3415mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，加入甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％-5％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品36-137:4.2g，产率88％。
37-88
Figure PCTCN2021107625-appb-000312
将二甘醇胺(25.84mL,260.59mmol,购于TCI)投入1L的烧瓶中，加入二氯甲烷(50mL)、三乙胺(72.64mL,521.18mmol),置于0摄氏度搅拌1小时，将二碳酸叔丁酯用二氯甲烷溶解后缓慢滴加到烧瓶中，滴加完毕，继续于0摄氏度搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入硅胶粉(50g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用50％-60％乙酸乙酯的石油醚混合溶液洗脱，得产品37-88:53.4861g。
37-148
Figure PCTCN2021107625-appb-000313
将37-88(53.4861g,260.59mmol)投入1L烧瓶中，置于0摄氏度搅拌30分钟，缓慢滴加叔丁醇钾(286.64mL,1mol/L,286.64mmol)的四氢呋喃溶液，滴加完毕，继续搅拌1小时，再缓慢滴加溴乙酸乙酯(28.82mL,260.59mmol),滴加完毕，继续于0摄氏度搅拌30分钟，然后移到室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶解，加入硅胶粉(100g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用20％乙酸乙酯的石油醚的混合溶液洗脱，得产品37-148:52.1g，产率68.6％。
37-151
Figure PCTCN2021107625-appb-000314
将37-148(52.1g,178.8mmol)投入到1L的烧瓶中，加入1，4-二氧六环(100mL),再加入氢氧化锂(9.4g,393.4mmol)，反应于室温下搅拌30分钟，再加入纯水(200mL)，继续搅拌2小时。反应结束，将反应液转移至1L的分液漏斗中，加入正己烷(125mL)和甲基叔丁基醚(125mL)，进行萃取，水相用浓盐酸调PH至2，然后加入乙酸乙酯(200mL×2),合并有机相，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用50％-60％乙酸乙酯的石油醚混合溶液洗脱，得37-151：45.1g,产率：96％。
35-82
Figure PCTCN2021107625-appb-000315
将Boc-Glu-OH(20.0g，80.89mmol，购于Ark Pharm)，HBTU(92.02g，242.66mmol)，HOBT(32.8g，242.66mmol)和H-Glu(OBn) 2·TsOH(84.861g，161.8mmol，购于Ark Pharm)加入到1000mL烧瓶中，然后加入DMF(200mL)使其溶解，再将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，接着缓慢滴加DIEA(120.32mL，728mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌反应1小时，最后转移至室温下搅拌反应过夜。反应结束后，将反应液转移到2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(600mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)，浓缩蒸干，，得产品35-82:70g。
35-84
Figure PCTCN2021107625-appb-000316
将35-82(70g，80.89mmol)投入到1000mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(50mL)使其溶解，然后在搅拌状态下加入三氟乙酸(300mL，4044.5mmol)，最后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入乙酸乙酯(300mL)和饱和碳酸氢钠溶液(300mL),产生大量气泡，继续加入碳酸氢钠固体，至pH大于7，然后萃取，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，得35-84：62g。
35-85
Figure PCTCN2021107625-appb-000317
将37-151(19.36g，73.5364mmol)，HBTU(41.83g，110.3045mmol)，HOBT(14.91g，110.3045mmol)和35-84(61.95g，80.89mmol)加入到1000mL圆底烧瓶中，用DMF(200mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(54.69mL，330.9136mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌反应1小时后，转移至室温下搅拌反应过夜。反应结束后，先将反应液转移到2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(500mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，浓缩至少量，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用50％-70％乙酸乙酯的石油醚混合溶液洗脱，得35-85：51g,产率：69％。
35-86
Figure PCTCN2021107625-appb-000318
将35-85(23.4g，23.14mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，然后在搅拌状态下加入三氟乙酸(85.93mL，1157.13mmol)，最后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入乙酸乙酯(300mL)和饱和碳酸氢钠溶液(300mL),产生大量气泡，继续加入碳酸氢钠固体，至PH大于7，然后萃取，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，得35-86：18.2g，产率：86％。
35-88
Figure PCTCN2021107625-appb-000319
将35-86(18.2g，19.98mmol)，HBTU(11.36g，29.97mmol)，HOBT(4.05g，29.97mmol)和Boc-Lys(Fmoc)-OH(8.5g，18.16mmol，购于Accela)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(100mL)溶解后，反应置于0摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(14.86mL，89.90mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌反应过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，浓缩至少量，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用80％-100％乙酸乙酯的石油醚混合溶液洗脱，得35-88：19.6g,产率：79％。
35-89
Figure PCTCN2021107625-appb-000320
将35-88(7.0g,5.1413mmol)投入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入三氟乙酸(5.7270mL,77.1191mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩,将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(150mL×2)清洗，合并有机相，用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，得产品35-89:6.4853g。
37-165
Figure PCTCN2021107625-appb-000321
将35-89(4.2g,3.33mmol)投入到250mL烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解,滴加DIEA(4.4mL,26.64mmol),滴加完毕，搅拌1个小时，再加入丁二酸酐(0.9997g,9.99mmol),反应于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×4)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，得产品37-165:4g,产率：89％。
37-166
Figure PCTCN2021107625-appb-000322
将37-165(4g,2.938mmol)、36-137(1.2737g,2.938mmol)、HBTU(1.6713g，4.407mmol)，HOBT(0.5955g，4.407mmol)加入到500mL烧瓶中，用DMF(50mL)溶解 后，在将反应置于0摄氏度条件下搅拌约10分钟，然后缓慢滴加DIEA(2.18mL，13.221mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，浓缩蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用4％-7％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱真空烘箱中干燥，得到产品37-166：3.9g,产率:75％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.62–8.43(d,J＝7.4Hz,1H),8.40–8.24(d,J＝7.4Hz,1H),8.08–7.85(m,7H),7.75–7.62(m,3H),7.46–7.23(m,24H),6.75(s,1H),5.19–5.00(m,8H),4.48–4.13(m,9H),4.00–3.79(m,3H),3.66–3.45(dd,J＝8.7,4.3Hz,2H),3.52–3.49(d,J＝4.3Hz,2H),3.47(s,4H),3.40–3.36(m,6H),3.23–3.14(m,4H),3.09–3.02(m,2H),2.97–2.92(m,2H),2.46–2.35(m,8H),2.24–2.15(m,4H),2.04(m,2H),1.97–1.82(m,4H),1.78–1.61(m,3H),1.47–1.23(t,J＝7.8Hz,18H),1.27–1.18(m,3H).
37-53
Figure PCTCN2021107625-appb-000323
将Boc-Leu-OH.H2O(40g,160.44mmol,购于伊诺凯)、Gly-OBn.TsOH(56.837g,168.462mmol，购于Ark pharm)、HBTU(66.93g，176.48mmol)、HOBT(23.85g，176.48mmol)加入到1000mL烧瓶中，加入DMF(250mL)使其溶解，将反应置于-5摄氏度搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(145.85mL,882.4356mmol),滴加完毕后，继续于-5摄氏度搅拌1小时，然后移至室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL x 3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL x 2)清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用30％-40％乙酸乙酯的石油醚混合溶液洗脱，得产品37-53：60.7g。
37-54
Figure PCTCN2021107625-appb-000324
将37-53(60.7g,160.44mmol)投入到1000mL烧瓶中，加入二氯甲烷(40mL)，和TFA(95mL，1283.52.9mmol),反应在室温下搅拌过夜，反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(350mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(1500mL x 2)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，得产品37-54:45g。
37-56
Figure PCTCN2021107625-appb-000325
将37-54(45g,160.44mmol)、Boc-Phe-OH(40.438g,152.42mmol,购于aladdin)、HBTU(66.93g，1276.48mmol)、HOBT(23.85g，176.48mmol)加入到1000mL烧瓶中，加入DMF(250mL)使其溶解，将反应置于-5摄氏度搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(119.85mL,722mmol),滴加完毕后，继续于-5摄氏度搅拌1小时，然后移至室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(350mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL x 3)清洗，合并 有机相，有机相用饱和食盐水(250mL x 2)清洗，浓缩蒸干，得产品37-56：84g。
37-59
Figure PCTCN2021107625-appb-000326
将37-56(84g,160.44mmol)投入到1000mL烧瓶中，加入二氯甲烷(40mL)，和TFA(95mL，1283.52.9mmol),反应在室温下搅拌过夜，反应结束，将反应液转移到2L的锥形瓶中，加入饱和碳酸氢钠溶液(350mL)，产生大量气泡，在慢慢加入碳酸氢钠固体，到pH>7,析出固体，过滤，滤饼用纯水(100mLx2)滤饼干燥，得产品37-59:68g。
37-62
Figure PCTCN2021107625-appb-000327
将37-59(68.27g,152.42mmol)、Boc-Gly-OH(25.37g,144.799mmol,购于aladdin)、HBTU(63.58g，167.66mmol)、HOBT(63.58g，167.66mmol)加入到1000mL烧瓶中，加入DMF(250mL)使其溶解，将反应置于-5摄氏度搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(113.3mL,685.89mmol),滴加完毕后，继续于-5°搅拌1小时，然后移至室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(350mL)，进行萃取，得有机相，水相用(200mL x 3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(250mL x 2)清洗，有机相于室温放置1.5小时，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯:石油醚(3：7)(150mLx5)清洗，得产品37-62：72.8g。
37-149
Figure PCTCN2021107625-appb-000328
将37-62(30g,51.4871mmol)投入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入三氟乙酸(30.6mL,411.9mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入饱和碳酸氢钠(200mL)，产生大量气泡，再慢慢加入碳酸氢钠固体，调节pH大于7，析出固体，过滤，滤饼用去离子水(150mL×4)清洗，滤饼干燥，得产品37-149:24.85g。
37-152
Figure PCTCN2021107625-appb-000329
将Boc-Glu-OH(5.7864g,23.4032mmol,购于Ark pharm)、37-149(24.85g,51.4871mmol)、HBTU(26.626g，70.2096mmol)，HOBT(9.4874g，70.2096mmol)加入到 500mL烧瓶中，用DMF(150mL)溶解后，在将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约10分钟，然后缓慢滴加DIEA(34.8mL，210.628mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌1小时，然后移至室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取。水相用乙酸乙酯(150mL×1)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(50g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用4％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱真空烘箱中干燥，得到产品37-152：19.2g,产率:69.8％。
37-154
Figure PCTCN2021107625-appb-000330
将37-152(19.2g,16.3215mmol)加入到1000mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)、三氟乙酸(9.6966mL,130.5722mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，滤饼干燥，得产品37-154：17.5g。
37-156
Figure PCTCN2021107625-appb-000331
将Boc-Gly-OH(3.4310g,19.5858mmol，购于Ark Pharm)、37-154(17.5g,16.3215mmol)、HBTU(9.2847g，24.4823mmol)，HOBT(3.3083g，24.4823mmol)加入到1000mL烧瓶中，用DMF(150mL)溶解后，在将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约10分钟，然后缓慢滴加DIEA(12.14mL，73.4468mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌1小时，然后移至室温下搅拌过夜。反应结束后，加入乙酸乙酯(200mL)、甲基叔丁基醚(200mL)、正己烷(300mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，滤饼干燥，得产品37-156：19.2g。
37-158
Figure PCTCN2021107625-appb-000332
将37-156(10.499g，8.5125mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.10g)，再加入DMF(50mL)使之溶解，通入氢气，压力为1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
37-159
Figure PCTCN2021107625-appb-000333
将37-158(8.965g,0.4390mmol)、Palbociclib(8g,17.8763mmol,中文名帕布昔利布，简称PCB)、HBTU(9.6848g,25.5375mmol)、HOBT(3.4509g,25.5375mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入DMF(130mL)使其溶解,将反应置于-5摄氏度，搅拌20分钟后,缓慢滴加DIEA(12.6626mL,76.6125mmol)，滴加完毕，反应在-5摄氏度搅拌1小时，然后在室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL×3)清洗，滤饼干燥，得产品37-159:16.3g。
37-161
Figure PCTCN2021107625-appb-000334
将37-159(16.3g,8.5125mmol)投入500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)，使其溶解，加入三氟乙酸(18.964mL,255.375mmol)，反应在室温下搅拌过夜，反应结束,加入甲基叔丁基醚(250mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，滤饼用二氯甲烷(240mL)和甲醇(60mL)溶解，加入硅胶粉(50g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩干燥，得产品37-161:11.2g,产率73％。
37-168
Figure PCTCN2021107625-appb-000335
将37-166(0.7801g，0.4390mmol)投入氢化反应釜中，再加入Pd/C(0.0500g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力为1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
37-169
Figure PCTCN2021107625-appb-000336
将37-168(0.6218g,0.4390mmol)、37-161(3.5g,1.9315mmol)、HBTU(0.9988g,2.6338mmol)、HOBT(0.3559g,2.6338mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)使其溶解,将反应置于-5摄氏度，搅拌20分钟后,缓慢滴加DIEA(1.306mL,7.9015mmol)，滴加完毕，反应在-5摄氏度搅拌40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(40mL),沉降2次，呈粘稠油状物，加入甲基叔丁基醚(100mL)， 析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×2)清洗，滤饼干燥，得产品37-169:3.772g。
37-171
Figure PCTCN2021107625-appb-000337
将37-169(3.7772g,0.4390mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(7.6mL,87.8mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，出现分层，倒掉上层下层油状物继续加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，如此重复3次，最后呈少量油状物，加入甲基叔丁基醚(250mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL×2)清洗，滤饼用二氯甲烷(160mL)和甲醇(40mL)溶解，加入硅胶粉(30g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩干燥，得产品37-171:1.94g,产率53％。
45-57
Figure PCTCN2021107625-appb-000338
将季戊四醇(2.5g,31.2344mmol)投入500mL的烧瓶中，加入四氢呋喃(150mL)，呈浑浊状，反应置于-5摄氏度，搅拌30分钟，缓慢滴加叔丁醇钾(1mol/L)的四氢呋喃溶液(149mL,149mmol),滴加完毕，继续搅拌5小时，再缓慢滴加溴乙酸苄酯(20.782mL,131.184mmol),滴加完毕，继续于-5摄氏度搅拌2小时，然后移到室温搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取。水相用乙酸乙酯(150mL×1)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(50g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用20％-40％石油醚的乙酸乙酯的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品45-57：7.1g,产率:31％。
37-172
Figure PCTCN2021107625-appb-000339
将45-57(0.0412g，0.0565mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.10g)，再加入DMF(50mL)使之溶解，通入氢气，压力为1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
37-173
Figure PCTCN2021107625-appb-000340
将37-172(0.0208g,0.0565mmol)、37-171(1.94g,0.2318mmol)、HBTU(0.1287g,0.3393mmol)、HOBT(0.0458g,0.3393mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(120mL)使其溶解,将反应置于-5摄氏度，搅拌15分钟后,缓慢滴加DIEA(0.169mL,1.0177mmol)，滴加完毕，反应在-5摄氏度搅拌60分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(300mL)呈絮状物析出，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL×2)清洗，滤饼干燥，得产品37-173:1.91g。
37-176
Figure PCTCN2021107625-appb-000341
将37-173(1.91g,0.05654mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)、三氟乙酸(8.3976mL,113.08mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，再用甲醇(30mL)二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品37-176：1.143g,产率61％。
37-179
Figure PCTCN2021107625-appb-000342
将37-176(1.1435g,0.0345mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(80mL)使其溶解，缓慢滴加DIEA(0.479mL,2.898mmol),滴加完毕，再加入M-SCM-10K(2.19g,0.2069mmol，购于键凯),反应移到室温下低速避光搅拌7天。反应结束，向反应液中加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(100mL)，出现分层，倾倒上层液体，下层油状物继续加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(100mL)，如此重复3次，呈油状物，用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品37-179：1.05g，产率：42％.
37-184
Figure PCTCN2021107625-appb-000343
将37-179(1.05g,0.0140mmol)、37-163(0.1599g,0.2798mmol)、HBTU(0.32g,0.84mmol)、HOBT(0.1135g,0.84mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(35mL)使其溶解,将反应置于-5摄氏度，搅拌20分钟后,缓慢滴加DIEA(0.196mL,1.1190mmol)，滴加完毕，反应在-5摄氏度搅拌40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL),出现分层，倾倒上层液体，下层油状物继续加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(100mL)，如此重复3次，呈粘稠油状物，用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和7％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，加入乙醇(5mL)和二氯甲烷(15mL),使其溶解,加入甲基叔丁基醚(50mL),析出固体，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×2)清洗，滤饼干燥，得产品37-184：0.36g，产率：33％.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ11.52-11.23(m,10H),11.15–11.02(m,2H),10.76–10.41(m,3H),10.25-10.01(m,28H),9.22-8.86(m,29H),8.75-8.46(m,10H),8.23-8.04(m,256H),7.76–7.45(m,60H),7.37–6.91(m,179H),6.73–6.45(m,22H),5.92-5.74(m,26H),4.73–4.53(m,48H),4.39–4.21(m,68H),4.11–3.91(m,72H),3.72–3.65(m,221H),3.61–3.43(m,3847H),3.25–3.12(m,161H),3.05–2.92(m,46H),2.83–2.71(m,67H),2.62–2.53(m,11H),2.52–2.43(m,93H),2.40–2.34(m,89H),2.23-2.18(m,59H),2.12–2.04(m,49H),1.92–1.75(m,180H),1.64–1.46(m,152H),1.40–1.36(m,16H),1.31–1.24(m, 139H),1.21–0.91(m,22H),0.95–0.78(m,178H).
36-257化学合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000344
Figure PCTCN2021107625-appb-000345
Figure PCTCN2021107625-appb-000346
Figure PCTCN2021107625-appb-000347
36-81
Figure PCTCN2021107625-appb-000348
将Boc-GFLG-OBn(14.95g,25.654mmol,按37-62的制备方法获得)加入到反应釜中，加入10％Pd/C(0.300g)，加入DMF(40mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.16MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液,作为下一步的原料。
36-84
Figure PCTCN2021107625-appb-000349
将36-81(5.3g,10.7255mmol)，Palbociclib(4g,8.9380mmol,简称：PCB)、HBTU(5g,13.4069mmol)、HOBT(1.8g,13.4069mmol)投入500mL中，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(6.6mL,40.2208mmol)，继续在-5℃反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL),进行沉降，倾倒上层液体，下层油状继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，如此重复3次，呈油状物，加入甲基叔丁基醚(200mL)析出固体，抽滤，烘干，得36-84：15.9g。
36-98
Figure PCTCN2021107625-appb-000350
将36-84(15.9g,8.938mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)，再加入TFA(6.6mL,89.38mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用0.5％氨水：2％-5％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-98：8.5g收率：91.4％。
36-134
Figure PCTCN2021107625-appb-000351
将37-160(2.74g,11.0341mmol)，Fmoc-Glu(OH)(OtBu)(4.93g,11.5858mmol，购于伊诺凯)、HBTU(6.3g,16.5512mmol)、HOBT(2.2g,16.5512mmol)投入500mL中，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(8.2mL,49.6537mmol)，继续在-5℃反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入NaHCO 3(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用 乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-134：9.74g。
36-135
Figure PCTCN2021107625-appb-000352
将Fmoc-Lys(Boc)-OH(2g,4.2686mmol)，NH 2-Gly-OBn.TsOH(1.44g,4.2686mmol，购于伊诺凯)、HBTU(2.4g,6.4029mmol)、HOBT(0.9g,6.4029mmol)投入500mL中，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(3.2mL,19.2086mmol)，继续在-5℃反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入NaCl(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-135：4.04g。
36-140
Figure PCTCN2021107625-appb-000353
将36-136(2.7g，4.2686mmol)加入到250mL烧瓶中，加入20mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(3.5mL，21.3429mmol)，滴加完毕，等反应液温度为室温时再加入丁二酸酐(1.28g，12.8057mmol)，然后搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和氯化钠(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，蒸干，在加入甲醇:二氯甲烷(1:5)溶解，加入40ml硅胶粉，蒸干，干法上柱，柱层析，用(5％-10％甲醇：95％-90％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得产品36-140：1.9g，产率:73％。
36-143
Figure PCTCN2021107625-appb-000354
将36-81(8.45g,17.1618mmol)，Lapatinib(8.3g,14.3015mmol,简称：LPT)、HBTU(8.1g,21.4522mmol)、HOBT(2.9g,21.4522mmol)投入500mL中，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(10.6mL,64.3567mmol)，继续在-5℃反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入NaHCO 3(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-143：14g，收率:92.8％。
36-144
Figure PCTCN2021107625-appb-000355
将36-140(1.41g，2.2838mmol)、36-137(1g，3.3066mmol)、HBTU(1.3g，3.4256mmol)、HOBT(0.5g，3.4256mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(1.7mL，10.2769mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，蒸干，在加入甲醇:二氯甲烷(1:5)溶解，加入30ml硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用(2％-4％甲醇：98％-96％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得产品36-144：1.398g，产率:59.39％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.34(s,1H),8.09–8.00(m,2H),7.89(m,3H),7.69(m,2H),7.41(s,2H),7.35(m,7H),7.25(s,1H),6.75(s,1H),5.12(s,2H),4.25(m,5H),3.86(s,2H),3.48(s,4H),3.36(s,4H),3.18(m,2H),3.06(m,2H),2.94(m,2H),2.38(s,4H),2.19(s,2H),1.86(s,1H),1.68(m,2H),1.56–1.42(m,1H),1.37(m,18H),1.23(s,4H).
36-145
Figure PCTCN2021107625-appb-000356
将36-143(14g,14.3015mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(10.6mL,143.015mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-145：6.2g,产率92.1％。
36-161
Figure PCTCN2021107625-appb-000357
将36-145(12.6g，13.1870mmol)、Boc-Glu-OH(1.55g，6.2795mmol)、HBTU(7.1g，18.8385mmol)、HOBT(2.5g，18.8385mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(9.3mL，56.5155mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入NaHCO 3(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL ×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得产品36-161：18g。
36-162
Figure PCTCN2021107625-appb-000358
将36-161(13.3g,6.2795mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(4.66mL,62.795mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，收集固体，得产品36-162：9.3g,产率70％。
36-168
Figure PCTCN2021107625-appb-000359
将36-162(10.8g，5.3410mmol)、Boc-Gly-OH(1.03g，5.8751mmol)、HBTU(3g，8.0115mmol)、HOBT(1.08g，8.0115mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(4mL，24.0347mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品36-168：13.6g。
36-169
Figure PCTCN2021107625-appb-000360
将36-168(13.6g,5.3410mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(3.8mL,53.410mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用0.5％-1％氨水：4％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-169：9.4g,产率84.7％。
36-171
Figure PCTCN2021107625-appb-000361
将35-93(0.61g，0.5772mmol)、36-169(6g，2.8858mmol)、HBTU(1.3g，3.4630mmol)、HOBT(0.46g，3.4630mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(1.7mL，10.3889mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品36-171：7.1g。
36-172
Figure PCTCN2021107625-appb-000362
将36-171(5.4g,0.5772mmol)投入250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，加入TFA(0.4mL,5.772mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，抽滤，烘干，得产品36-172：8g。
36-173
Figure PCTCN2021107625-appb-000363
将36-98(0.6g，0.6926mmol)、36-172(5.3g，0.5772mmol)、HBTU(0.3g，0.8658mmol)、HOBT(0.1g，0.8658mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.5mL，3.1746mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100 mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品36-173：9g。
36-174
Figure PCTCN2021107625-appb-000364
将36-173(9g,0.5772mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF，使其溶解，再加入吗啉(0.5mL,5.772mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL x 3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(40mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-174：4g,产率70.5％。
36-236
Figure PCTCN2021107625-appb-000365
将36-144(0.5g,0.4848mmol)加入到反应釜中，加入10％Pd/C(0.0200g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.16MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液,作为下一步的原料。
36-237
Figure PCTCN2021107625-appb-000366
将36-236(0.32g，0.3469mmol)、36-174(3.1g，0.3154mmol)、HBTU(0.18g，0.4731mmol)、HOBT(0.06g，0.4731mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.23mL，1.4194mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品36-237：3.5g。
36-238
Figure PCTCN2021107625-appb-000367
将36-237(3.5g,0.3154mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF，使其溶解，再加入吗啉(0.27mL,3.1543mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL x 3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(40mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-238：2.3g,产率39.4％。
36-242
Figure PCTCN2021107625-appb-000368
将45-91(0.5g,0.9318mmol，按照37-172方法进行制备，将其中的季戊四醇换成甘油即可)加入到反应釜中，加入10％Pd/C(0.0200g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.16MPa,然后放掉氢气，水泵抽至 真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液,作为下一步的原料。
36-248
Figure PCTCN2021107625-appb-000369
将36-238(1.3g，0.1235mmol)、36-242(0.0082g，0.03087mmol)、HBTU(0.05g，0.1389mmol)、HOBT(0.02g，0.1389mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.07mL，0.4167mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(40mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-248：0.54g,产率55％。
36-251
Figure PCTCN2021107625-appb-000370
将36-248(0.54g,0.01698mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(0.12mL,1.6983mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，烘干，得产品36-251：0.58g,
36-253
Figure PCTCN2021107625-appb-000371
将36-251(0.53g,0.01698mmol)加入到500mL烧瓶，再加10mL DMF使之溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.3mL，1.698mmol)，滴加完毕，再加入M-SCM-10K(0.7g),将反应置于常温下低速搅拌反应一周。反应结束后，先加入正己烷(50mL×3),下层油状只有很少的量时，加入甲基叔丁基醚(20mL)沉降，析出固体，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶解，加入30mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(1％氨水：5％-10％甲醇：94％-89％二氯甲烷)进行洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品36-253:0.58g,产率54.7％。
36-257
Figure PCTCN2021107625-appb-000372
将36-253(0.58g，0.00924mmol)、37-163(0.08g，0.1386mmol)、HBTU(0.35g，0.4758mmol)、HOBT(0.11g，0.4758mmol)加入到250mL烧瓶中，加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.2mL，1.3401mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚，析出固体，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶解，加入30mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(1％氨水：5％-10％甲醇：94％-89％二氯甲烷)进行洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品36-257:0.14g,产率23.8％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.83–9.08(m,26H),8.72–8.61(m,25H),8.55–8.24(m,28H),8.21–7.93(m,249H),7.81–7.68(m,75H),7.46–7.40(m,36H),7.27–7.11(m,191H),6.67–6.42(m,18H),5.24–5.11(m,61H),4.68–4.43(m,96H),4.23–4.01(m,136H),3.74–3.64(m,235H),3.51–3.32(m,2465H),3.25–3.22(m,59H),3.20–2.95(m,259H),2.89–2.83(m,36H),2.80–2.68(m,82H),2.62–2.56(m,13H),2.45–2.28(m,92H),2.12–2.06(m,85H),1.81–1.77(m,90H),1.54–1.48(m,151H),1.17–1.09(m,70H),0.90–0.75(m,241H).
43-154合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000373
Figure PCTCN2021107625-appb-000374
Figure PCTCN2021107625-appb-000375
43-124
Figure PCTCN2021107625-appb-000376
将Gly-OtBu.HCl(3.6g，21.6mmol，购于Accela)，HBTU(12.28g，32.4mmol)，HOBT(4.4g，32.4mmol)和Fmoc-Glu(OBn)-OH(10.12g，21.6mmol，购于Ark Pharm)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(100mL)溶解后，反应置于0摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(19.6mL，118.8mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌反应过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和食盐水(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，得43-124：12.37g。
43-125
Figure PCTCN2021107625-appb-000377
将43-124(12.37g,21.6mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(18.82mL,216mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，得产品43-125:5.6g,产率：74％。
43-135
Figure PCTCN2021107625-appb-000378
将43-125(2.8g，8.0mmol)，HBTU(4.5g，12mmol)，HOBT(1.6g，12mmol)和Fmoc-Lys(Boc)-OH(3.7g，8.0mmol，购于Accela)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(40mL)溶解后，反应置于0摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(4.6mL，96.4mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌反应过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和食盐水(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，得43-135：6.4g。
43-136
Figure PCTCN2021107625-appb-000379
将43-135(6.4g,8.0mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(6.9mL,80mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和2％-3％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-136:1.6g，产率35％。
43-134
Figure PCTCN2021107625-appb-000380
将季戊四胺.二硫酸盐(1.0g，3.05mmol，购于康龙化成)，HBTU(6.94g，18.3mmol)，HOBT(2.47g，18.3mmol)和丁二酸单叔丁酯(3.72g，21.34mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(30mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(9.07mL，54.9mmol)，滴加完毕后，反应继续在15摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，加入甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-6％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-134:2.3g。
43-137
Figure PCTCN2021107625-appb-000381
将43-134(2.31g,3.05mmol)投入500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)，使其溶解，加入三氟乙酸(11.3mL,152.5mmol)，反应在室温下搅拌过夜，反应结束,加入甲基叔丁基醚(50mL)和正己烷(200mL)，振摇，静置，出现分层，倾倒上层液体，下层油状物继续加入甲基叔丁基醚(50mL)和正己烷(200mL)，如此重复4次，最后呈半固体，干燥，得产品43-137:1.6g。
43-140
Figure PCTCN2021107625-appb-000382
将43-136(1.6g，2.7mmol)，HBTU(1.44g，3.6mmol)，HOBT(0.48g，3.6mmol)和43-137(0.32g，0.6mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(100mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.84mL，10.8mmol)，滴加完毕后，反应继续在15摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，蒸干，加入甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-6％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-140:1.28g，产率 60％。
43-116
Figure PCTCN2021107625-appb-000383
将Boc-GFLG-OBn(9.9g,17mmol，按37-62方法合成)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.025g)，加入DMF(40mL)使其溶解，通入氢气，氢气压力为2.1MPa,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL ⅹ 3)清洗3次,滤液装入500mL的圆底烧瓶中,作为下一步反应的原料。
43-119
Figure PCTCN2021107625-appb-000384
将SB-743921(8.000g,15.4718mmol，简称SB7，购于南京药石)、HBTU(8.814g，23.2078mmol)、HOBT(3.136g，23.2078mmol)加入到含有43-116(7.3g,17mmol)的DMF(110mL)中，将反应置于-5摄氏度搅拌20分钟,然后缓慢滴加DIEA(11.5mL,69.75mmol),10分钟滴加完毕，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL ⅹ 2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL ⅹ 2)清洗，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品43-119:15.37g。
35-99
Figure PCTCN2021107625-appb-000385
将43-119(15.37g,15.5mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，再加入TFA(11.51mL,155.0mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(300mL)，析出粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL ⅹ 2)清洗，再用甲醇(60mL)和二氯甲烷(240mL)溶液溶解，加入硅胶粉(50g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品35-99：10.7g,产率78％。
35-100
Figure PCTCN2021107625-appb-000386
将35-99(10.7g,12.0mmol)、Boc-Glu-OH(1.413g,5.72mmol)、HBTU(6.5g，17.15mmol)、HOBT(2.32g，17.15mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(40mL)使其溶解，将反应置于-5摄氏度搅拌10分钟,然后缓慢滴加DIEA(8.5mL,51.44mmol),滴加完毕，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，用饱和食盐水(200mL ⅹ 2)清洗，蒸干至固体，得产品35-100:11.41g。
35-101
Figure PCTCN2021107625-appb-000387
将35-100(11.41g,5.72mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)使其溶解，再加入TFA(4.2mL,57.2mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(30mL ⅹ 3)清洗，真空烘箱干燥，得产品35-101：10.8g。
35-102
Figure PCTCN2021107625-appb-000388
将35-101(10.8g,5.72mmol)、Boc-Gly-OH(1.202g,6.864mmol)、HBTU(3.25g，8.58mmol)、HOBT(1.16g，8.58mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，将反应置于-5摄氏度搅拌10分钟,然后缓慢滴加DIEA(4.25mL,25.74mmol),滴加完毕，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到 1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，进行萃取，得有机相，用饱和食盐水(200mL ⅹ 2)清洗，蒸干至固体，得产品35-102:11.7g。
35-103
Figure PCTCN2021107625-appb-000389
将35-102(11.7g,5.72mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)、三氟乙酸(4.2mL,57.2mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，滤饼用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶解，加入硅胶粉(20g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：4％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干，干燥，得35-103：9.0g,产率81％。
43-129
Figure PCTCN2021107625-appb-000390
将35-85(0.7g，0.69mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.030g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力为1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
43-131
Figure PCTCN2021107625-appb-000391
将43-129(0.449g,0.69mmol),HBTU(1.5g，4.14mmol)，HOBT(0.559g，4.14mmol)和35-103(3g，1.5377mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(30mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(2.0mL，6.2905mmol)，滴加完毕后，反应继续在15摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(120mL),使其溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-6％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-131:4.8g，产率83％。
43-132
Figure PCTCN2021107625-appb-000392
将43-131(4.8g,0.57mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)、三氟乙酸(6.35mL,85.5mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，再用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和7％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品43-132：2.4g,产率51％。
43-144
Figure PCTCN2021107625-appb-000393
将43-140(0.076g，0.0465mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.0320g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力为1.6MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，将反应液通过硅藻土过滤，用DMF(20mL×3)清洗。得到产品43-144的DMF溶液。
43-146
Figure PCTCN2021107625-appb-000394
将43-132(1.0g,0.121mmol),HBTU(0.067g，0.178mmol)，HOBT(0.024g，0.178mmol)和43-144(0.066g，0.027mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(60mL)溶解后，反 应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.143mL，0.8694mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，浓缩蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(120mL),使其溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-146:1.07g，产率63％。
43-150
Figure PCTCN2021107625-appb-000395
将43-146(0.957g,0.027mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)、三氟乙酸(10mL,134.98mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，再用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和7％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品43-150：0.24g,产率26％。
43-152
Figure PCTCN2021107625-appb-000396
将43-150(0.24g,0.0069mmol)投入250mL中，加入DMF(30mL)使其溶解，缓慢滴加DIEA(0.11mL,0.688mmol),滴加完毕，继续搅拌20分钟，再加入M-SCM-10K(0.4374g,0.0413mmol)，超声溶解，反应于室温下避光低速搅拌7天。反应结束，加入正己烷(120mL)和甲基叔丁基醚(40mL),倾倒上层清液，下层液体加入正己烷(120mL)和甲基叔丁基醚(40mL)，如此重复3次，呈粘稠油状物，加入甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和6％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品。
43-154
Figure PCTCN2021107625-appb-000397
将43-152(0.84g,0.0116mmol),HBTU(0.264g，0.696mmol)，HOBT(0.094g，0.696mmol)和37-163(0.1167g，0.232mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(60mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.345mL，2.085mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。应结束，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(60mL),倾倒上层清液，下层液体加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(60mL)，如此重复3次，呈粘稠油状物，加入甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(120mL),使其溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品43-154:0.67g，产率72％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.18–8.00(m,182H),7.80-7.75(m,33H),7.5-7.47(m,46H),7.32–7.08(m,726H),4.24-4.15(m,165H),3.51-3.49(m,6260H),3.12–2.70(m,331H),2.39-2.11(m,296H),1.59-1.46(m,182H),0.90-0.78(m,384H).
37-221合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000398
Figure PCTCN2021107625-appb-000399
Figure PCTCN2021107625-appb-000400
Figure PCTCN2021107625-appb-000401
37-170
Figure PCTCN2021107625-appb-000402
将Gly-OBn.HCl(2.3697g，11.7517mmol，购于韶远)，HBTU(6.6851g，17.6276mmol)，HOBT(2.3820g，17.6276mmol)和Fmoc-Glu(OtBu)-OH(5g，11.7517mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(50mL)溶解后，在将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(8.7405mL，52.8827mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌反应过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，浓缩至100mL,用去离子水(150mL×2)清洗，有机相蒸干，干燥，得到产品37-170：6.73g。
37-175
Figure PCTCN2021107625-appb-000403
将37-170(6.73g,11.7517mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，加入吗啉(4.1mL,47.0068mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×5)清洗，合并有机相，浓缩至约100mL,有机相用饱和食盐水(200mL×1)清洗，浓缩蒸干，烘箱干燥，得产品37-175:4.12g。
37-178
Figure PCTCN2021107625-appb-000404
将Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(4.4g,11.1641mmol，购于Accela)、37-175(4.12g,11.7517mmol)、HBTU(6.6851g，17.6276mmol)、HOBT(2.3820g，17.6276mmol)加入到250mL烧瓶中，将反应置于0摄氏度搅拌约30分钟,然后缓慢滴加DIEA(8.74mL,52.8827mmol),滴加完毕，继续于0摄氏度下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×1)清洗，浓缩蒸干，得产品37-178:8.94g。
37-181
Figure PCTCN2021107625-appb-000405
将37-178(8.94g,11.7517mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，加入吗啉(10.226mL,117.517mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×1)清洗，浓缩蒸干，加入硅胶粉(30g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-5％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干，烘箱干燥，得产品37-181:4.0g，产率59％。
37-205
Figure PCTCN2021107625-appb-000406
将37-160(1g，4.027mmol)，HBTU(2.08g，1.35mmol)，HOBT(0.742g，1.35mmol)和43-137(0.487g，0.915mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(40mL)溶解后，反应置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.24mL，7.4819mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5摄氏度搅拌1小时,然后移至室温下搅拌过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，浓缩至约100mL,将其用去离子水(150mL×1)清洗，蒸干，加入甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-5％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品37-205:1.3g。
37-209
Figure PCTCN2021107625-appb-000407
将37-205(1.3g,0.915mmol)加入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)溶解,加入三氟乙酸(4.1mL，54.9mmol)，滴加完毕后，反应于室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(80mL)和甲基叔丁基醚(30mL),倾倒上层清液，下层液体加入正己烷(80mL)和甲基叔丁基醚(30mL)，如此重复5次，呈粘稠油状物，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(120mL),使其溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用5％-10％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品37-209:1g。
37-210
Figure PCTCN2021107625-appb-000408
将37-209(1.02g，0.965mmol)加入到250mL烧瓶中，用二氯甲烷(30mL)溶解，加入三乙胺(1.26mL,8.9736mmol)反应置于0摄氏度条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加氯甲酸苯酯(0.85mL，6.730mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入去离子水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用二氯甲烷(100mL×3)清洗，合并有机相，浓缩，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-5％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品37-210:0.9g，产率：61％。
37-212
Figure PCTCN2021107625-appb-000409
将37-210(0.9g，0.5868mmol)和37-181(1.494g，2.582mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(40mL)溶解后，反应置于110摄氏度条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(3.1mL，18.778mmol)，滴加完毕后，反应继续在110摄氏度搅拌过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取,得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，浓缩至约100mL,将其用去离子水(150mL×1)清洗，蒸干，加入甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)溶 解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用4％-7％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，得产品37-212:0.8g，40％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.48–8.34(m,5H),8.13–7.88(m,6H),7.54–7.24(m,20H),6.87–6.64(m,6H),6.46–6.25(m,2H),6.18–6.01(m,9H),4.39–4.20(m,5H),4.18–4.03(m,5H),3.95–3.91(m,4H),3.90–3.79(m,5H),3.68–3.59(m,4H),3.57–3.45(m,34H),3.21–3.03(m,11H),2.98–2.83(m,13H),2.75–2.61(m,2H),2.63(m,17H),2.29–2.13(m,9H),2.04-1.91(m,5H),1.80–1.67(m,5H),1.61–1.48(m,16H),1.46–1.33(m,72H),1.35–1.31(m,9H),1.27–1.15(m,17H).37-214
Figure PCTCN2021107625-appb-000410
将37-212(0.0953g，0.0823mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.0270g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力Pa＝1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
37-215
Figure PCTCN2021107625-appb-000411
将37-214(0.084g,0.027mmol)，43-132(1.0g,0.1207mmol)、HBTU(0.6144g,1.62mmol)、HOBT(0.2189g,1.62mmol)投入250mL中，将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约10分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.8mL,4.86mmol)，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(40mL),进行沉降，倾倒上层液体，下层油状物继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(40mL)，如此重复4次，呈粘稠状油状物，加入甲基叔丁基醚(100mL)析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，滤饼干燥，得产品37-215：0.9767g。
37-218
Figure PCTCN2021107625-appb-000412
将37-215(0.9767g,0.027mmol)加入到100mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)，再加入TFA(4mL,27mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至少量，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)混合溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：6％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品37-218：0.66g,产率69％。
37-220
Figure PCTCN2021107625-appb-000413
将37-218(0.66g，0.0186mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(40mL)使之溶解，将反应置于-5摄氏度反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.153mL，1.49mmol)，继续低温下搅拌10分钟后，加入M-SCM-10K(1.18g，0.1114mmol，购于键凯)，反应置于室温下避光低速搅拌一周。反应结束后，再加甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(70mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析,用1％氨水和4％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品37-220:0.98g,产率：70％。
37-221
Figure PCTCN2021107625-appb-000414
将37-220(1.27g,0.0164mmol)，37-163(0.1874g,0.367mmol)、HBTU(0.373g,0.984mmol)、HOBT(0.133g,0.984mmol)投入250mL中，将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约10分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.488mL,2.952mmol)，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(40mL),进行沉降，倾倒上层液体，下层油状物继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(40mL)，如此重复4次，呈粘稠状油状物，加入甲基叔丁基醚(100mL)析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 3)清洗，滤饼用甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)混合溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品37-221：0.65g,产率65％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.19–8.14(m,59H),8.12–8.03(m,108H),8.01–7.96(m,24H),7.91–7.77(m,29H),7.64–7.54(m,32H),7.50–7.47(m,16H),7.34–7.27(m,118H),7.24–7.15(m,230H),7.14–7.01(m,208H),4.63–4.42(m,52H),4.29–4.03(m,130H),3.98–3.85(m,76H),3.78–3.58(m,211H),3.56–3.43(m,3817H),3.34–3.13(m,17H),3.11–3.05(m,85H),2.92–2.73(m,63H),2.69–2.52(m,60H),2.41–2.38(m,30H),2.36–2.27(m,80H),2.22–2.09(m,45H),1.83–1.73(m,47H),1.60–1.43(m,102H),1.34–1.23(m,190H),1.19–1.13(m,136H),1.08–1.97(m,9H),0.95–0.87(m,87H),0.85–0.82(m,99H),0.81–0.73(m,90H),0.60–0.54(m,73H).
44-174路线图：
Figure PCTCN2021107625-appb-000415
Figure PCTCN2021107625-appb-000416
42-89
Figure PCTCN2021107625-appb-000417
将43-116的DMF溶液(8.4534g，17.1618mmol)，Niraparib(4.5821g，14.3015mmol，简称NPB)，HBTU(8.1356g，21.4523mmol)和HOBT(2.8986g，21.4523mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(60mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(10.6mL，64.3568mmol)，滴加完毕后，反应烧瓶继续于-5摄氏度搅拌反应1小时后，最后转移至室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相；再水相中加入乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相。合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相。然后，向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相。最后，有机相浓缩蒸干，然后放入烘箱中干燥。到产品42-89：11.3695g。
42-90
Figure PCTCN2021107625-appb-000418
将42-89(11.3695g，14.3015mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(15.9mL，214.5225mmol)，将反应烧瓶置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，先将反应液浓缩蒸干除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼。滤饼用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(60mL)溶解，加入硅胶粉(65mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(0％-2％甲醇：100％-98％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品42-90：8.6g，产率：86.6％。
44-153
Figure PCTCN2021107625-appb-000419
将35-85(1.1433g，0.6586mmol，自制)和10％Pd/C(120mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(40mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到2.0MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土至不含产物为止，得到反应产物溶液。
44-155
Figure PCTCN2021107625-appb-000420
将44-153溶液(1.7026g，2.6168mmol)，42-90(8.3637g，12.0373mmol)，HBTU(5.9543g，15.7006mmol)和HOBT(2.1215g，15.7006mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(7.8mL，47.1018mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后转移至室温下搅拌反应3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-155：8.7868g。44-158
Figure PCTCN2021107625-appb-000421
将44-155(8.7868g，2.6168mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(15.6mL，209.3440mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼。滤饼用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：1％-8％甲醇：98％-91％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-158：6.8199g，产率：80％。
44-130
Figure PCTCN2021107625-appb-000422
将Fmoc-Glu-OtBu(8.0g，18.8027mmol，购于Ark Pharm)，HBTU(10.6961g，28.2041mmol)，HOBT(3.8110g，28.2041mmol)和H-Glu(OBzl)-OBzl·TosOH(9.8631g，19.7429mmol，购于Ark Pharm)，加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(17.1mL，103.4150mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后转移至室温下搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品44-130：13.8168g。
44-132
Figure PCTCN2021107625-appb-000423
将44-130(13.8168g，18.8027mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(14.0mL，188.027mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。然后将反应液转移到1L分液漏斗中，向其中加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；接着在水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，并向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相。其次，向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品44-132：12.7620g。
44-133
Figure PCTCN2021107625-appb-000424
将44-132(12.7620g，18.8027mmol)，H-Gly-OtBu·HCl(3.3095g，19.7428mmol，购于Accela)，HBTU(10.6961g，28.2041mmol)和HOBT(3.8109g，28.2041mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后向其中缓慢滴加DIEA(21.8mL，131.6189mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶继续于-5摄氏度搅拌。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，并向其中加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相；再在水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相。接着，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相。然后，向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相。最后，有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品44-133：14.8895g。
44-134
Figure PCTCN2021107625-appb-000425
将44-133(14.8895g，18.8027mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，在搅拌状态下加入哌啶(18.6mL，188.027mmol)，将反应烧瓶置于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，向其中加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相；再在水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相。接着，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相。然后，向有机相中加入去离子水(300 mL)，振摇，萃取，分离水相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品44-134：10.7110g。
44-140
Figure PCTCN2021107625-appb-000426
将Fmoc-Lys(Boc)-OH(7.3415g，15.6689mmol)，44-134(10.7110g，18.8027mmol)，HBTU(8.9134g，23.5034mmol)和HOBT(3.1758g，23.5034mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(13.0mL，78.3445mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶继续置于-5摄氏度搅拌1小时后，最后转移至室温下搅拌反应过夜。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-140：15.9849g。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.27–8.13(m,3H),8.05–7.94(m,3H),7.89(s,1H),7.76–7.69(m,2H),7.49–7.46(m,1H),7.44–7.41(m,2H),7.37–7.29(m,11H),2.47–2.37(m,1H),5.18–5.02(m,4H),4.38–4.18(m,5H),3.81–3.54(m,6H),3.19–3.11(m,4H),2.38-2.4(m,2H),2.23–2.18(m,2H),2.04–1.73(m,4H),1.67–1.47(m,3H),1.39–1.36(m,18H).44-141
Figure PCTCN2021107625-appb-000427
将44-140(7.6g，7.4474mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，在搅拌状态下加入吗啉(9.7mL，111.7110mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌2小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-141：6.3g，产率：50.39％。
44-150
Figure PCTCN2021107625-appb-000428
将36-186的DMF溶液(0.5551g，2.0853mmol，按照制备37-172的方法合成，只需将其中的季戊四醇换成甘油即可)，44-141(5.99g，7.5069mmol)，HBTU(3.5586g，9.3836mmol)和HOBT(1.2679g，9.3836mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(4.7mL，28.1516mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将反应烧瓶转移至室温下搅拌。反应结束，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。接着，在有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，在有机相中加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩蒸干。将有机相用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％-6％甲醇：99％-94％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-150：3.8827g，产率：71.45％。
1H–NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.65–8.08(m,15H),7.73–7.16(m,30H),5.25–4.92(m,12H),4.63–4.25(m,15H),3.86–3.64(m,11H),3.22-3.18(m,6H),2.47–2.38(m,12H),2.07–2.05(m,12H),1.84–1.47(m,12H),1.4–1.21(m,60H).
44-152
Figure PCTCN2021107625-appb-000429
将44-150(0.9221g，0.3539mmol，自制)和10％Pd/C(50mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到1.6MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土至不含产物为止，得到反应产物溶液。
44-163
Figure PCTCN2021107625-appb-000430
将44-152溶液(0.7308g，0.3539mmol)，44-158(7.6092g，2.3357mmol)，HBTU(1.2079g，3.1851mmol)和HOBT(0.4304g，3.1851mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.6mL，9.5553mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将反应烧瓶转移至室温下搅拌。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-163：7.6101g。
44-164
Figure PCTCN2021107625-appb-000431
将44-163(7.6101g，0.3539mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(3.9mL，503.085mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼。滤饼用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：2％-8％甲醇：97％-91％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-164：1.2542g，产率：26.27％。
1H–NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.30–9.26(m,20H),8.57–8.52(m,24H),8.33–7.79(m,217H),7.74–7.63(m,10H),7.60–7.44(m,46H),7.35–6.95(m,190H),4.57–4.36(m,75H),4.03-3.82(m,78H),3.76–3.45(m,76H),3.23–2.92(m,74H),2.70–2.57(m,26H),2.30(s,15H),2.24–1.39(m,263H),1.35–1.34(m,20H),1.31–1.13(m,71H),0.86–0.81(m,144H).
44-170
Figure PCTCN2021107625-appb-000432
将44-164(1.2542g，0.0596mmol)和M-SCM-10K(2.8419g，0.2683mmol，购于键凯)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(10mL)使其溶解后，在将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.2mL，7.1549mmol)，滴加完毕后，继续在-5摄氏度搅拌反应10分钟后，转移至室温下反应一周。反应结束后，向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(20mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(60mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。滤饼用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入50mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：4％-12％甲醇：95％-87％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-170：1.0155g，产率：32.48％。
1H–NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.31–9.27(m,14H),8.58–8.51(m,15H),8.34–7.70(m,137H),7.56–7.47(m,27H),7.32–7.07(m,100H),4.70–4.29(m,47H),4.03–3.84(m,68H),3.66–3.33(m,2880H),3.28–3.22(m,12H),3.06–2.02(m,23H),2.89–2.72(m,40H),2.62–2.60(m,17H),2.19–2.12(m,24H),2.01–1.85(m,40H),1.79–1.75(m,41H),1.50–1.44(m,68H),1.37–1.06(m,504H),0.85–0.81(m,144H).
44-174
Figure PCTCN2021107625-appb-000433
将44-170(0.7714g，0.0147mmol)，37-163(0.1681g，0.2941mmol)，HBTU(0.3346g，0.8822mmol)和HOBT(0.1192g，0.8822mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(50mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.1mL，0.5516mmol)，滴加完毕后，将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将反应烧瓶转移至室温下搅拌。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物。将固体产物用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(60mL)溶解，加入硅胶粉(70mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：3％-8％甲醇：96％-91％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-174：0.4393g，产率：55.21％。
1H–NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.32–9.26(m,22H),8.61–8.57(m,22H),8.19–7.88(m,238H),7.56–7.48(m,48H),7.32–6.94(m,284H),4.66–4.32(m,78H),4.27–3.78(m,122H),3.65–3.61(m,37H),3.59–3.43(m,2802H),3.25–3.01(m,88H),2.92–2.87(m,12H),2.80–2.74(m,74H),2.65–2.61(m,39H),2.39–2.37(m,7H),2.12–1.41(m,280H),0.86–0.81(m,144H).
化合物49-199的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000434
Figure PCTCN2021107625-appb-000435
Figure PCTCN2021107625-appb-000436
49-17
Figure PCTCN2021107625-appb-000437
称取6-氨基己酸(4.61g，35.1407mmol)置于1L烧瓶中，加入150mL THF:H 2O＝1:1混合溶液，使其完全溶解，置于0摄氏度下搅拌，再加入碳酸钠固体(7.45g，70.2814mmol)，超声溶解，于0摄氏度下搅拌。反应30分钟后，将Fmoc-Cl(10g，38.6548mmol)溶于30mL THF中，并将其缓慢滴加到反应液中，滴毕，取出置于室温下搅拌反应。反应结束后，称取50g柠檬酸溶于450mL去离子水中，加入反应液，调节pH至3，再转移到1L分液漏斗中，加入EA(300mL×3)萃取，收集有机相，浓缩蒸干，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用2％甲醇/二氯甲烷溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(7.7g，86.51％)
49-106
Figure PCTCN2021107625-appb-000438
称取FA(2.2g，5.0mmol)加入1L烧瓶中，加入DMSO(80mL)使其完全溶解，加入Boc-乙二胺(0.78g，5.0mmol)，DCC(1.68g，8.14mmol)，吡啶(32mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，过滤，收集反应液，置于0摄氏度下，往反应液中缓慢滴加甲基叔丁基醚并快速搅拌，直到出现大量黄色固体。过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(60mL)清洗两次，收集滤饼，干燥，得产品(2.75g，94.48％)
49-110
Figure PCTCN2021107625-appb-000439
将TFA(6.99ml，94.166mmol)加入装有49-106(2.75g，4.7083mmol)的烧瓶中，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，减压浓缩反应液，加入少量无水DMF溶解，然后在0摄氏度下缓慢滴加吡啶，加入少量甲基叔丁基醚，有黄色固体析出，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(60mL)清洗两次，收集滤饼，干燥，得产品(2.18g，96.03％)
49-15
Figure PCTCN2021107625-appb-000440
称取Fmoc-Glu(OtBu)-OH(3g，7.0510mmol)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.42g，10.5765mmol)加入装有H-Gly-OBn(2.38g，7.0510mmol，购于韶远)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.2mL，31.7295mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(7.5g，超产)
49-16
Figure PCTCN2021107625-appb-000441
在装有49-15(4.03g，7.0510mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(6.14mL，70.510mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶 液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5.6g，超产)
49-20
Figure PCTCN2021107625-appb-000442
称取Fmoc-Gly-OH(2.09g，7.0510mmol，购于Accela)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.42g，10.5765mmol)加入装有49-16(2.47g，7.0510mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.2mL，31.7295mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.64g，59.45％)
49-24
Figure PCTCN2021107625-appb-000443
将49-20(2g，3.1761mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
36-135
Figure PCTCN2021107625-appb-000444
将Fmoc-Lys(Boc)-OH(2g,4.2686mmol，购于Accela)，H-Gly-OBzl.TosOH(1.44g,4.2686mmol，购于Ark Pharm)、HBTU(2.4g,6.4029mmol)、HOBT(0.9g,6.4029mmol)投入500mL中，将反应置于-5摄氏度条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(3.2mL,19.2086mmol)，继续在-5摄氏度反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和NaCl溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-135：4.04g。
36-136
Figure PCTCN2021107625-appb-000445
将36-135(11.8271g，19.2086mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(40mL)使之溶解，在搅拌状态下加入TFA(21.4mL，288.129mmol)，最后反应烧瓶置于 室温下搅拌过夜。反应结束，先将反应液浓缩蒸干除去二氯甲烷，再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼，最后将滤饼置于烘箱中干燥。到产品9.9040g。
49-25
Figure PCTCN2021107625-appb-000446
称取36-136(1.80g，3.4937mmol)，HBTU(1.80g，4.7642mmol)，HOBT(0.64g，4.7642mmol)加入装有49-24(1.71g，3.1761mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(12.36mL，14.2925mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，再加入饱和NaCl(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用含3％甲醇的二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.5g，45.59％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.40–8.38(m,1H),8.16–8.13(m,1H),8.09–7.85(m,7H),7.76–7.60(m,4H),7.52–7.49(m,1H),7.44–7.29(m,13H),7.25–7.21(m,1H),5.11(s,2H),4.36–4.09(m,8H),3.93–3.85(m,2H),3.80–3.57(m,5H),2.99–2.71(m,3H),2.21–2.16(m,2H),2.01–1.88(m,1H),1.84–1.72(m,2H),1.68–1.63(m,1H),1.45–1.36(m,9H),1.28–1.22(m,3H).
49-43
Figure PCTCN2021107625-appb-000447
在装有49-25(0.6g，0.5785mmol)的烧瓶中加入二氯甲烷，超声振荡至完全溶解后加入TFA(0.43mL，5.785mmol)，放于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，蒸干二氯甲烷和大部分TFA，再加入饱和NaCl(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(3.95g，超产)
49-127
Figure PCTCN2021107625-appb-000448
称取49-17(4g，11.32mmol)，HBTU(6.44g，16.98mmol)，HOBT(2.29g，16.98mmol)加入装有H-Glu-(OtBu) 2(3.35g，11.32mmol，购于乐妍)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(8.41mL，50.93mmol)，滴毕，反应半小时后 取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(8.9g，超产)
49-130
Figure PCTCN2021107625-appb-000449
在装有49-127(6.73g，11.32mmol)的烧瓶中加入二氯甲烷，超声振荡至完全溶解后加入TFA(8.40mL，113.2mmol)，放于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤，收集固体产物，真空烘箱干燥，得到产品(7.6g，超产)。
49-131
Figure PCTCN2021107625-appb-000450
称取甘氨酸甲酯盐酸盐3.12g，24.90mmol，购于damas-beta)，HBTU(12.88g，33.96mmol)，HOBT(4.59g，33.96mmol)加入装有49-130(5.45g，11.32mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(19.48mL，117.8361mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用6～10％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(5.2g，73.55％)。
49-140
Figure PCTCN2021107625-appb-000451
在装有49-131(5.2g，8.33mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(7.26mL，83.33mmol)，放于室温下搅拌反应过夜2h。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，收集，真空烘箱干燥，得到产品(5.1g，超产)。
30-182
Figure PCTCN2021107625-appb-000452
称取Fmoc-Glu-OH(2.5g，7.1551mmol，购于Aladdin)，HBTU(8.1405g，21.4654mmol)， HOBT(2.9g，21.4654mmol)加入装有H-Glu-(OBn) 2(7.86g，15.7412mmol，购于Ark Pharm)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(10.64mL，64.3961mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用2～4％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(6.6g，83.54％)
49-139
Figure PCTCN2021107625-appb-000453
将30-182(6.6g，5.9945mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
49-141
Figure PCTCN2021107625-appb-000454
称取49-140(5g，11.5207mmol)，HBTU(5.95g，15.7101mmol)，HOBT(2.12g，15.7101mmol)加入装有49-139(1.64g，2.6183mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(7.79mL，47.1303mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体， 干法上样，柱层析，用2～4％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(3.2g，53.33％)
49-147
Figure PCTCN2021107625-appb-000455
在装有49-141(3.2g，1.3968mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(1.21mL，13.968mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5.6g，超产)
49-152
Figure PCTCN2021107625-appb-000456
称取49-43(1.64g，1.6761mmol)，HBTU(0.79g，2.0952mmol)，HOBT(0.28g，2.0952mmol)加入装有49-147(2.89g，1.3968mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(1.04mL，6.2856mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3～7％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.8g，66.19％)
49-165
Figure PCTCN2021107625-appb-000457
将49-152(2.8g，0.9232mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
49-168
Figure PCTCN2021107625-appb-000458
在装有49-165(2.60g，0.9232mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入哌啶(1.57mL，18.464mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入过量的DIEA和甲苯，减压浓缩反应液，得到产品的DMF溶液，作为下一步反应原料。
49-170
Figure PCTCN2021107625-appb-000459
将49-168(0.31g，0.1311mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(20mL)使之溶解，在-5摄氏度下缓慢滴加DIEA(1.38mL,8.3904mmol)，滴毕，反应30分钟后加入M-SCM-5K(1.44g，0.2884mmol，购于键凯)，超声振荡使之溶解后，将反应置于室温下避光低速搅拌反应一周。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用1％氨水，6～10％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(0.81g，48.21％)。
49-190
Figure PCTCN2021107625-appb-000460
称取49-170(0.81g，0.0630mmol)，HBTU(0.04g，0.0945mmol)，HOBT(0.01g，0.0945mmol)加入装有49-110(0.06g，0.1260mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(1.04mL，6.2856mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇溶解，干法上样，柱层析，用5～12％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集、浓缩、干燥，得到产品(0.66g，78.57％)
49-194
Figure PCTCN2021107625-appb-000461
将49-190(0.66g,0.0495mmol)置于干燥的250mL圆底烧瓶中，加入水合肼(0.003g，0.7452mmol)，加入甲醇使其完全溶解，在室温下搅拌反应过夜。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，收集，浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.23g，超产)
49-199
Figure PCTCN2021107625-appb-000462
将49-194(0.66g,0.0495mmol)置于干燥的500mL的圆底烧瓶中，加入无水甲醇溶解，然后加入冰醋酸(0.28mL,4.968mmol)、阿霉素(0.43g，0.7452mmol，简称DOX)于室温下搅拌反应过夜。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇溶解，干法上样，柱层析，用5～12％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集、浓缩、干燥，得到产品(0.52g，49.05％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.02–7.93(m,16H),7.84–7.74(m,15H),7.71–7.63(m,13H),7.51–7.30(m,25H),5.53–5.39(m,22H),5.01–4.78(m,29H),4.59–4.52(m,13H),4.17–3.98(m,59H),3.64–3.61(m,39H),3.51(s,1254H),3.24(s,36H),2.64–2.62(m,13H),2.39–2.37(m,12H),1.57–1.55(m,29H),1.50–1.39(m,58H),1.25–1.10(m,35H).
化合物47-122的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000463
Figure PCTCN2021107625-appb-000464
Figure PCTCN2021107625-appb-000465
47-31
Figure PCTCN2021107625-appb-000466
将Fmoc-Glu-(OtBu)(OH)(3.0g，7.0510mmol，购于Ark Pharm)、Glu-OBn(3.6987g，7.4036mmol，购于Ark Pharm)、HBTU(4.0110g,10.5765mmol)、HOBT(1.4292g、10.5765mmol)加入到装有500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(5.2439mL、31.7295mmol)，继续在0摄氏度下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-32
Figure PCTCN2021107625-appb-000467
将47-31(7.0510mmol)加入500ml烧瓶中，加入适量的二氯甲烷和TFA(7.8557mL,105.7050mmol)使之溶解，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液蒸至油状，加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至碱性，再用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-33
Figure PCTCN2021107625-appb-000468
将47-32(7.0510mmol)、H-Gly-OtBu(1.2411g，7.4036mmol，购于Accela)、HBTU(4.0110g,10.5765mmol)、HOBT(1.4292g、10.5765mmol)加入到装有500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(5.2439mL、31.7295mmol)，继续在0摄氏度下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-35
Figure PCTCN2021107625-appb-000469
将吗啉和少量DMF加入到装有47-33的500ml烧瓶中，使之溶解，反应再室温下搅拌1小时。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-36
Figure PCTCN2021107625-appb-000470
将47-35(7.0510mmol)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(3.4689g，7.4036mmol)、HBTU(4.0110g,10.5765mmol)、HOBT(1.4292g、10.5765mmol)加入到装有500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(5.2439mL、31.7295mmol)，继续在0摄氏度下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-38
Figure PCTCN2021107625-appb-000471
将吗啉和少量DMF加入到装有47-36的500ml烧瓶中，使之溶解，反应再室温下搅拌1小时。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-39
Figure PCTCN2021107625-appb-000472
将47-38(7.0510mmol)、49-17(2.6165g，7.4036mmol)、HBTU(4.0110g,10.5765mmol)、HOBT(1.4292g，10.5765mmol)加入到500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(2.2439mL，31.7295mmol)，在0摄氏度下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(1％-3％CH 3OH,其余CH 2Cl 2)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品47-39:4.6g，产率57％。
MALDI-TOF MS:[M+Na +]1155.56
47-42
Figure PCTCN2021107625-appb-000473
将吗啉(3.5ml，40.5884mmol)和少量DMF加入到装有47-39(4.6g，4.0588)的500ml烧瓶中，使之溶解，反应再室温下搅拌1小时。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
47-44
Figure PCTCN2021107625-appb-000474
将47-42(4.0588mmol)、37-172(0.9225mmol)、HBTU(2.0991g,5.5350mmol)、HOBT(0.7479g，5.5350mmol)加入到装有500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置 于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(2.7443mL，16.6050mmol)，在-5摄氏度下搅拌1小时后，移至室温下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(2％-5％CH 3OH,其余CH 2Cl 2)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品47-44:1.6g，产率43％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.09–7.70(m,24H),7.37–7.33(m,40H),5.12–5.06(m,16H),4.55–4.50(m,8H),4.36–4.17(m,13H),3.88–3.84(m,8H),3.79–3.63(m,9H),3.17–2.59(m,28H),2.45–1.70(m,50H),1.38–1.35(m,72H),1.24–1.21(m,24H).
47-108
Figure PCTCN2021107625-appb-000475
将47-44(0.2964g，0.0752mmol)和10％Pd/C(0.02g)投入到氢化反应釜中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充，后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗，得到产品47-108,产率100％。
47-96
Figure PCTCN2021107625-appb-000476
将SN38(15.00g，38.23mmol)置于1000ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷150ml使之溶解，加入叔丁基二苯基氯硅烷(59.64ml，229.36mmol)、三乙胺(31.88ml，229.36mmol)，反应在37摄氏度油浴下搅拌过夜。反应结束后,将反应液蒸至粘稠状，加入正己烷(150ml)将产物沉降至固体，抽滤、烘干，得到产品47-96：23.15g，产率96％。
47-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000477
将47-96(23.15g,36.70mmol)、Boc-Gly-OH(8.71g，49.70mmol)、DMAP(0.94g,7.65mmol)置于1000mL圆底烧瓶中，然后加入二氯甲烷(150mL)，使其溶解，将混合液置于0摄氏度条件下搅拌30分钟。然后分三次共加入DCC(39.41g,191.15mmol)，每次加入DCC间隔时间为30min，结束后0摄氏度下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(200mL)和石油醚(50mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，放入真空箱中干燥，得到产品47-97：27.53g，产率94％。
47-98
Figure PCTCN2021107625-appb-000478
将47-97(27.53g，34.50mmol)置于1000ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(50ml)溶解后，加入三氟乙酸(28.40ml，382.30mmol)，将反应至于室温下进行。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL×2)清洗，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(1％-3％CH 3OH,其余CH 2Cl 2)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品47-98:16.98g，产率72％。
47-115
Figure PCTCN2021107625-appb-000479
将35-85(3.0g，2.9670mmol)和10％Pd/C(0.08g)投入到氢化反应釜中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充，后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗，得到产品47-115,产率100％。
47-116
Figure PCTCN2021107625-appb-000480
将47-115(0.2964mmol)、47-98(8.58g，12.4614mmol)、HBTU(6.76g,17.8020mmol)、HOBT(2.41g，17.8020mmol)加入到500ml烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(10.79mL，65.2740mmol)，在-5摄氏度下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(1％-2％CH 3OH,其余CH 2Cl 2)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品47-116:4.97g，产率50％。
47-117
Figure PCTCN2021107625-appb-000481
将47-116(4.97g，1.4925mmol)置于1000ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(50ml)溶解后，加入三氟乙酸(1.11ml，14.93mmol)，将反应至于室温下进行。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(400mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷(100mL)和甲醇(10mL)溶解，干法上样，柱层析，用1％-3％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品47-117：3.5g，产率73％。
47-118
Figure PCTCN2021107625-appb-000482
将47-108(0.0752mmol)、47-117(2.04g，0.6317mmol)、HBTU(0.3423g,0.9024mmol)和HOBT(0.1220g,0.9024mmol)置于250mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(50mL)，使其溶解，将混合液置于-5摄氏度条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.5469mL,3.3088mmol)，滴加完毕后-5摄氏度下反应2小时，然后将反应装置放到-5摄氏度条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(400mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷(100mL)和甲醇(10mL)溶解，干法上样，柱层析，用4％-15％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品47-118：1.5655g，产率72％。
47-119
Figure PCTCN2021107625-appb-000483
将47-118(1.5655g，0.0541mmol)加入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(8mL)和TFA(0.33ml，4.33mmol)使之溶解，反应在室温下避光搅拌过夜。反应结束，用旋转蒸发仪将反应液蒸至油状，再加入甲基叔丁基醚(60mL)，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，真空烘箱干燥，得到粗产品47-119:1.33g产率87％。
47-120
Figure PCTCN2021107625-appb-000484
将M-SCM-5K(1.0450g，0.2073mmol)置于250ml圆底烧瓶中，加入适量DMF(50mL)使其溶解，加入DIEA(0.7785ml，4.71mmol)，置于-5摄氏度下搅拌30分钟，后缓慢滴加溶于DMF(50ml)中的47-119(1.33g,0.0471mmol)的溶液。移至室温下低速避光搅拌7天。反应结束，用正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(80mL)沉降得固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用3％-18％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品47-120:1.8g，产率79％。
47-121
Figure PCTCN2021107625-appb-000485
将47-120(1.8g，0.0373mmol)、37-163(0.1066g，0.1864mmol)，HBTU(0.0849g,0.2238mmol)和HOBT(0.0302g,0.2238mmol)置于250mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(50mL)，使其溶解，将混合液置于-5摄氏度条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.1110mL,0.6714mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束，用正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(80mL)沉降得固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用3％-18％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品47-121:1.44g，产率76％。
47-122
Figure PCTCN2021107625-appb-000486
向装有47-121(0.0284mmol)的250ml的烧瓶中，加入THF(8ml)和稀盐酸(8ml，0.05mmol/L)使之溶解，再加TBAF(4.75g，18.1427mmol)，反应在室温下避光搅拌3小时。反应结束后，将反应液蒸干，用DMF(8ml)溶解，再用异丙醇沉降，重复三次；再用无水乙醇和少量二氯甲烷溶解，加甲基叔丁基醚沉降，重复三次，收集固体，真空箱干燥，得到产品47-122:1.09g，产率84％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.64–6.70(m,220H),5.72–4.90(m,108H),4.71–3.57(m,320H),3.54–3.46(m,1681H),3.25–2.67(m,170H),2.40–1.32(m,238H),1.29–1.17(m,96H),1.04–0.69(m,86H).
化合物49-166的合成(对照)
Figure PCTCN2021107625-appb-000487
Figure PCTCN2021107625-appb-000488
Figure PCTCN2021107625-appb-000489
Figure PCTCN2021107625-appb-000490
39-80
Figure PCTCN2021107625-appb-000491
称取Boc-Glu-OH(5.0g，20.22mmol，购于阿拉丁)、H-Glu(OBzl)-OBzl·TsOH(21.2g，42.46mmol，购于Ark Pharm)、HOBT(8g,60.66mmol)、HBTU(23g,60.66mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(30mL，181mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-84
Figure PCTCN2021107625-appb-000492
取39-80(19.2mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(14mL，192mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。
47-96
Figure PCTCN2021107625-appb-000493
将7-乙基-10-羟基喜树碱(15.00g，38.23mmol,简写为SN38)置于1000ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷150ml使之溶解，加入叔丁基二苯基氯硅烷(59.64ml，229.36mmol，购于韶远)、三乙胺(31.88ml，229.36mmol)，反应在37℃油浴下搅拌过夜。反应结束后,将反应液蒸至粘稠状，加入正己烷(150ml)将产物沉降至固体，抽滤、烘干，得到产品(23.15g，96％)。
47-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000494
将47-96(23.15g,36.70mmol)、Boc-Gly-OH(8.71g，49.70mmol，购于阿拉丁)、DMAP(0.94g,7.65mmol)置于1000mL圆底烧瓶中，然后加入二氯甲烷(150mL)，使其溶解，将混合液置于0℃条件下搅拌30分钟。然后分三次共加入DCC(39.41g,191.15mmol)，每次加入DCC间隔时间为30min，结束后0℃下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(200mL)和石油醚(50mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，放入真空箱中干燥，得到产品(27.53g，94％)。
47-98
Figure PCTCN2021107625-appb-000495
将47-97(27.53g，34.50mmol)置于1000ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(50ml)溶解后，加入三氟乙酸(28.40ml，382.30mmol)，将反应至于室温下进行。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL×2)清洗，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(1％-3％CH 3OH,其余CH 2Cl 2)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品(16.98g，72％)。
29-242
Figure PCTCN2021107625-appb-000496
将Fmoc-Lys(Boc)-OH(5.0g，10.6714mmol，购于阿拉丁)、H-Gly-OBn(3.7802g，11.2050mmol,购于innochem)、HBTU(6.0705g,16.0072mmol)、HOBT(2.1630g，16.0072mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(7.9371mL，48.0215mmol)，继续在0摄氏度下搅拌反应过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
29-243
Figure PCTCN2021107625-appb-000497
将29-242(6.57g，10.6714mmol)加入500ml烧瓶中，加入适量的二氯甲烷和TFA(7.9248mL，106.714mmol)使之溶解，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液蒸至油状，加饱和碳酸氢钠溶液调节PH至碱性，再用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
29-245
Figure PCTCN2021107625-appb-000498
将Boc-Lys(Boc)-OH(4.2805g，11.7385mmol，购于Ark Pharm)、29-243(5.50g，10.6714mmol)、HBTU(6.0705g,16.0072mmol)、HOBT(2.1630g、16.0072mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于0摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA (7.9371mL，48.0215mmol)，继续在0摄氏度下反应过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩蒸干，真空箱干燥，得到粗产品。
29-246
Figure PCTCN2021107625-appb-000499
将吗啉(9.24mL，106.714mmol)和DMF(10mL)加入到装有29-245(9.0g，10.6714mmol)的500ml烧瓶中，使之溶解，反应在室温下搅拌1小时。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(1％氨水，4％-5％甲醇,其余二氯甲烷)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品29-246:3.7g.产率56％。
29-248
Figure PCTCN2021107625-appb-000500
将38-120(0.39g，1.0966mmol)、29-246(3.0g，4.8249mmol)、HBTU(2.4951g,6.5795mmol)、HOBT(0.8891g,6.5795mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(3.2624mL，19.7384mmol)，在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，移至室温下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(50％-80％乙酸乙酯,其余石油醚)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品(1.6g，53％)。
49-79
Figure PCTCN2021107625-appb-000501
将29-248(0.52g，0.1878mmol)和10％Pd/C(0.0,5g)投入到氢化反应釜中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗，得到产品的DMF溶液，作为下一部反应原料。
49-80
Figure PCTCN2021107625-appb-000502
将49-79(0.45g，0.1878mmol)、M-NH 2HCl-5K(4.91g，0.9389mmol，购于键凯)、HBTU(0.43g,1.1237mmol)、HOBT(0.15g,1.1267mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(60mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(0.56mL，3.3780mmol)，在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，移至室温下低速避光搅拌三天。反应结束，用正己烷(100mL)震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，再加甲基叔丁基醚(80mL)和少量正己烷(10mL)震荡，倒掉上清液，重复三次，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(3.2g，73.73％)。
49-153
Figure PCTCN2021107625-appb-000503
将49-80(3.2g，0.1383mmol)加入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(5mL)和TFA(0.82mL,11.0640mmol)使之溶解，反应在室温下低速避光搅拌过夜。反应结束，用旋转蒸发仪将反应液蒸至油状，再加入甲基叔丁基醚(60mL)，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用3％-12％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.74g，56.35％)。
49-157
Figure PCTCN2021107625-appb-000504
将39-84(5.16g，6.7433mmol)、单叔丁基琥珀酸(1.40g，8.0920mmol，购于Accela)、HBTU (3.84g,10.1149mmol)、HOBT(1.36g，10.1149mmol)加入500ml烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(10.03mL，60.6897mmol)，在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，移至室温下搅拌过夜。反应结束后,取出反应液加入去离子水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(200mL)清洗两次，浓缩，加入硅胶粉，蒸干至粉末状，柱层析，用(50％-90％乙酸乙酯,其余石油醚)梯度洗脱，收集浓缩，得到产品(5.66g，90.99％)。
49-158
Figure PCTCN2021107625-appb-000505
将49-157(2.8g，3.0367mmol)和10％Pd/c(0.08g)投入到氢化反应釜中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗，得到产品的DMF溶液,作为下一部反应原料。
49-159
Figure PCTCN2021107625-appb-000506
将49-158(1.71g，3.0367mmol)、47-98(8.77g，12.7541mmol)、HBTU(6.90g,18.2202mmol)、HOBT(2.46g,18.2202mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(60mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(13mL，78.9542mmol)，在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，移至室温下搅拌过夜。反应结束，用正己烷(100mL)震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，再加甲基叔丁基醚(80mL)和少量正己烷(10mL)震荡，倒掉上清液，重复三次，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(60g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用3％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(11.3g，超产)。
49-161
Figure PCTCN2021107625-appb-000507
将49-159(9.84g，3.0367mmol)加入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(8mL)和TFA(8mL)使之溶解，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，用旋转蒸发仪将反应液蒸至油状，再加入甲基叔丁基醚(60mL)，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(60g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用1％-4％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.7g，27.92％)。
49-162
Figure PCTCN2021107625-appb-000508
将49-153(1.19g，0.0535mmol)、49-161(1.5g，0.4710mmol)、HBTU(0.24g,0.6422mmol)、HOBT(0.08g,0.6422mmol)加入到500ml烧瓶中，加入DMF(60mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(0.60mL，3.6395mmol)，在-5摄氏度下搅拌 反应1小时后，移至室温下低速避光搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(100mL)震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，再加甲基叔丁基醚(80mL)和少量正己烷(10mL)震荡，倒掉上清液，重复三次，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干至粉末状，干法上样，柱层析，用3％-15％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(0.95g，37.25％)。
49-166
Figure PCTCN2021107625-appb-000509
向装有49-162(0.95g，0.0199mmol)的500ml烧瓶中，加入THF(10ml)和稀盐酸(10ml，0.05mmol/L)，超声使之溶解，再加入TBAF(0.5g,1.9133mmol)，反应在室温下避光搅拌3小时。反应结束后，将反应液蒸干，用DMF(5ml)溶解，再用异丙醇沉降，重复三次；再用无水乙醇和少量二氯甲烷溶解，加甲基叔丁基醚沉降，重复三次，收集固体，真空箱干燥，得到产品(0.75g，93.75％)。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.44–8.22(m,24H),8.05–7.89(m,46H),7.44–7.27(m,78H),5.53–5.34(m,50H),5.31–5.08(m,52H),4.55–4.44(m,15H),4.29–4.13(m,31H),4.11–3.89(m,71H),3.89–3.80(m,23H),3.78–3.60(m,82H),3.55–3.44(m,1892H),3.11–2.75(m,100H),2.36–2.21(m,28H),2.20–1.97(m,91H),1.61–1.49(m,34H),1.31–1.16(m,136H),0.97–0.91(m,30H),0.90–0.76(m,79H).
39-226合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000510
45-158
Figure PCTCN2021107625-appb-000511
称取PTX(10g,11.71mmol)、咪唑(3.986g,58.5mmol)投入500mL反应瓶中，加入DMF(100mL)溶解，在氮气保护下加入DCC(10.59g,70.26mmol)，常温下搅拌反应。反应结束，用饱和氯化铵溶液与二氯甲烷萃取处理，浓缩有机相，蒸干得产品11.3g。
41-139
Figure PCTCN2021107625-appb-000512
将45-158(11.34g，11.71mmol,)、Fmoc-Gly-OH(3.48g,11.71mmol，)、、DMAP(0.285，2.34mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入无水二氯甲烷(50mL)和无水DMF(25mL)使其溶解在0摄氏度下加入DCC，然后在室温下搅拌反应30min。反应完成后，加入二氯甲烷稀释反应液，加入饱和NH 4Cl清洗1次，收集有机相；然后加入去离子水洗一次，收集有机相；再加入饱和氯化钠清洗1次，收集有机相，再用无水硫酸钠干燥，干法上样，柱层析用3％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集、浓缩、干燥，得到产品14.1g，产率90％
41-142
Figure PCTCN2021107625-appb-000513
装有41-139(14.1g，11.3mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(19.6mL，226mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL*3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1/4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％～5％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品9.3g,93％。
49-22
Figure PCTCN2021107625-appb-000514
称取H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl(4.08g，13.8116mmol，购于乐妍)，HBTU(7.85g，20.7174mmol)，HOBT(2.80g，20.7174mmol)加入装有49-17(3.5g，9.9035mmol)的烧 瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(10.27mL，62.1522mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，将反应液中的二氯甲烷蒸干，再加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(9.73g，超产)
49-23
Figure PCTCN2021107625-appb-000515
在装有49-22(5.89g，9.9035mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(8.62mL，99.035mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水:3％甲醇/二氯甲烷溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(3.48g，94.56％)
49-28
Figure PCTCN2021107625-appb-000516
称取49-23(3.48g，9.3423mmol)，HBTU(5.06g，13.3461mmol)，HOBT(1.80g，13.3461mmol)加入装有Fmoc-Glu-OH(1.64g，4.4487mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(6.62mL，40.0383mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，再加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(6.5g，超产)
49-30
Figure PCTCN2021107625-appb-000517
在装有49-28(4.80g，4.4487mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入 吗啉(3.87mL，44.487mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5.8g，超产)
49-37
Figure PCTCN2021107625-appb-000518
称取Fmoc-Glu-OH(0.71g，1.9342mmol)，HBTU(2.2g，5.8027mmol)，HOBT(0.78g，5.8027mmol)加入装有49-30(3.8g，4.4487mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(2.88mL，17.4079mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，再加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(4.5g，超产)
49-40
Figure PCTCN2021107625-appb-000519
在装有49-37(3.96g，1.9342mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(1.68mL，19.342mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％～5％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.7668g，50.47％)
49-44
Figure PCTCN2021107625-appb-000520
称取49-40(0.77g，0.4206mmol)，HBTU(0.24g，0.6308mmol)，HOBT(0.08g，0.6308mmol)加入装有49-43(0.49g，0.5047mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.1mL，1.8925mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用3～5％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(0.68g，58.12％)。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.46–7.96(m,12H),7.93–7.83(m,4H),7.79–7.59(m,6H),7.53(s,1H),7.46–7.17(m,14H),5.11(s,2H),4.32–4.06(m,15H),3.95–3.78(m,3H),3.11–2.90(m,11H),2.26–2.03(m,23H),1.92–1.66(m,16H),1.47(s,10H),1.38(s,72H),1.29–1.10(m,25H).
49-48
Figure PCTCN2021107625-appb-000521
将49-44(0.68g，0.2440mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
39-221
Figure PCTCN2021107625-appb-000522
在装有49-48(0.79g，0.2440mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入49-110(0.1g，0.2440mmol)、HBTU(0.138g，0.366mmol)，HOBT(0.0.049g，0.366mmol)，放于室温下搅拌反应。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将 得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用1％氨水，8～12％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品。
39-222
Figure PCTCN2021107625-appb-000523
称取39-221(0.1248mmol)，置于250mL烧瓶中，再加入适量二氯甲烷(5mL)、TFA(2.22mL，29.952)使其溶解，搅拌反应。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤，收集固体产物，得到产品(0.35g)。
39-223
Figure PCTCN2021107625-appb-000524
称取39-222(0.1248mmol)，置于250mL烧瓶中，吗啉(2.6mL，29.952)使其溶解，搅拌反应。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤，收集固体产物，得到产品(0.35g)。
39-224
Figure PCTCN2021107625-appb-000525
将39-223(0.35g，0.1248mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(20mL)使之溶解，加入M-SCM-10K(2.75g，0.2745mmol，购于键凯)，超声振荡使之溶解后，加入DIEA(1mL)将反应置于室温下避光低速搅拌反应一周。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷-1％氨水:10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.38g)。
39-225
Figure PCTCN2021107625-appb-000526
称取39-224(1.38g，0.0625mmol)，HBTU(0.035g，0.0938mmol)，HOBT(0.012g，0.0938mmol)加入装有41-142(1.66g，0.6250mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.046mL，0.2813mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤，收集固体产物，得到产品(0.76g，40.21％)。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ7.99–7.37(m,133H),7.24–7.11(m,20H),6.74–6.60(m,10H),5.46–5.38(m,16H),4.98–4.92(m,8H),4.80–4.73(m,16H),4.31–4.17(m,19H),4.03(s,21H),3.51–3.50(m,1836H),3.24–3.23(m,10H),3.18–2.57(m,16H),2.48–1.71(m,130H),1.66–1.49(m,72H),1.48–1.39(m,29H),1.04–0.94(m,48H),0.79(s,73H),0.03(s,48H).
39-226
Figure PCTCN2021107625-appb-000527
将39-225(0.76g，0.0251mmol)、TBAF(0.13g,0.5228mmol，)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入THF(10mL)使其溶解，然后将反应置于室温下搅拌反应1.5h。反应完成后，将反应液减压浓缩，得固体产物，再加入DMF(5mL)溶解，加入异丙醇沉降，重复三次，过滤，得固体产物；再加入二氯甲烷(10mL)溶解，加入甲基叔丁基醚沉降，重复3次，得固体产物。干燥，得产品(0.65g，89.04％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.17–7.86(m,59H),7.75–7.19(m,104H),5.43–5.40(m,16H),4.95(s,8H),4.86–4.50(m,16H),4.32–3.83(m,44H),3.52–3.50(m,1978H),3.24–3.23(m,10H),3.01–2.87(m,16H),2.42–2.02(m,120H),1.95–1.59(m,119H),1.05–0.96(m,48H).
45-145的合成：
Figure PCTCN2021107625-appb-000528
Figure PCTCN2021107625-appb-000529
Figure PCTCN2021107625-appb-000530
41-92
Figure PCTCN2021107625-appb-000531
取Fmoc-Glu(OtBu)-OH(3.3522g，7.7879mmol，购于Ark Pharm)、36-98(6.8g，8.2728mmol)、HBTU(4.7061g，12.4092mmol)、HOBT(1.6767g，12.4092mmol)加入到250mL反应瓶中，加DMF(20mL)溶解，于-5摄氏度低温恒温条件下搅拌反应半小时，再缓缓滴加DIEA(6.2mL，37.2276mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。反应结束，加甲基叔丁基醚(30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，加20％甲醇/二氯甲烷溶解，加入硅胶粉，蒸干，进行柱层析。用2％甲醇/二氯甲烷洗脱得产物8.9g，产率100％。
41-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000532
取41-92(8.9g,7.2447mmol)，量取而二氯甲烷(20mL)加入到反应瓶中，再加TFA(8mL，108.6709mmol)。常温条件下搅拌反应3小时，反应结束，现将反应蒸干，除去二氯甲烷，加甲基叔丁基醚(30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，蒸干得产品8.5g，产率100％。
41-93
Figure PCTCN2021107625-appb-000533
取Fmoc-Glu-OH(1.6433g，4.4485mmol，购于Aladdin)、GFLG-NPB(按42-90方法合成，6.8g，9.7867mmol)、HBTU(5.0615g，13.3455mmol)、HOBT(1.8032g，13.3455mmol)加入到250mL反应瓶中，加DMF(50mL)溶解，于-5摄氏度低温恒温条件下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(6.6mL，40.0365mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。反应结束，加甲基叔丁基醚(30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，蒸干得产品10.2g，产率100％。
41-95
Figure PCTCN2021107625-appb-000534
取41-93(7.6g,4.4485mmol)，加DMF(40mL)溶解，加入吗啉(7.8mL，88.97mmol)，于常温条件下搅拌反应1小时。反应结束，加乙酸乙酯(100mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，加入硅胶粉，蒸干，进行柱层析。用3％甲醇/二氯甲烷洗脱得产物4.4g，产率65.7％。
41-98
Figure PCTCN2021107625-appb-000535
取41-95(4.4g,2.9319mmol)、41-97(3.6121g,3.0785mmol)、HBTU(1.6679g，4.3979mmol)、HOBT(0.5492g，4.3979mmol)加入到250mL反应瓶中，加DMF(20mL)溶解，于低温0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(2.2mL，13.1936mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。反应结束，加甲基叔丁基醚(30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至2L圆底烧瓶，蒸干得产品7.7873g。
41-103
Figure PCTCN2021107625-appb-000536
取41-98(6.2g,2.3343)，加DMF(20mL)溶解，加入吗啉(6mL，70.0298mmol)，于常温条件下搅拌反应1小时。反应结束，加甲基叔丁基醚(100mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，蒸干得产品5.68g。
41-104
Figure PCTCN2021107625-appb-000537
取41-103(5.5g,2.2598mmol)、Boc-Gly-OH(0.4157g，2.3728mmol，购于Aladdin)、HBTU(1.2855g，3.3897mmol)、HOBT(0.4580g，3.3897mmol)加入到250mL反应瓶中，加DMF(20mL)溶解，于-5摄氏度低温恒温条件下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(1.7mL，10.1692mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。反应结束，加乙酸乙酯(30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤重复多次并转移固体粉末至2L圆底烧瓶，蒸干，进行下一步反应。
41-105
Figure PCTCN2021107625-appb-000538
取41-104(5.8g,2.2598mmol)，量取二氯甲烷(20mL)加入到反应瓶中，再缓慢滴加TFA(5mL， 67.2110mL)。常温条件下搅拌反应3小时，反应结束，旋转蒸发仪除去二氯甲烷，加乙酸乙酯30mL)与正己烷沉降(200mL)，抽滤重复多次并转移固体粉末至500mL圆底烧瓶，蒸干，得产品5.5g，产率98％。
39-81
Figure PCTCN2021107625-appb-000539
称取N-Boc-L-谷氨酸-5-苄基酯(10g，29.6mmoL，购于阿拉丁)、H-Glu(Obzl)-Obzl·TsOH(16.2g，32.6mmol，购于Ark Pharm)、HOBT(6g,44.4mmoL)、HBTU(16.8g,44.4mmoL)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(22mL，133.4mmoL)，该条件下反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗两次(100mL×2)，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，洗脱剂用30％乙酸乙酯/石油醚洗脱，收集产品，浓缩蒸干得产品。
39-83
Figure PCTCN2021107625-appb-000540
取39-81(29.6mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(22mL，296mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。
39-87
Figure PCTCN2021107625-appb-000541
称取Boc-Glu(OtBu)-OH(12.6g，29.6mmoL，购于Accela)、39-83(29.6mmol)、HOBT(5.9g,44.4mmoL)、HBTU(16.8g,133.2mmoL)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(22mL，86.85mmoL)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-88
Figure PCTCN2021107625-appb-000542
取39-87(29.6mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(22mL，296mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干有机相得26克。
45-89
Figure PCTCN2021107625-appb-000543
取反应物39-88(26g，29.6mmol)、NH 2-Gly-OtBu·HCl(4.96g,29.6mmol，购于Accela)、HBTU(16.8383g,44.4mmol)、HOBT(5.999g,44.4mmol)放入250mL反应瓶中，加入DMF(30mL)溶解，置于-5摄氏度，搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(22mL，133.2mmol)，低温反应至结束。反应结束后，将反应液移入1L分液漏斗，加乙酸乙酯(200mL)与去离子水(150mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取2次(100mL×2)，水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗1次(100mL)，浓缩，蒸干得产品29.9g。
45-90
Figure PCTCN2021107625-appb-000544
反应物45-89(29.9g,29.6mmol)置于250mL烧瓶中，加DMF溶液(20mL)，加入吗啉(63.162mL,725mmol)，常温搅拌反应，3小时后，反应结束。将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和食盐水(150mL)和乙酸乙酯(200mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗2次(50mL×2)，有机相蒸干得产品23克。
45-95
Figure PCTCN2021107625-appb-000545
称取Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(15.256g,32.56mmol，购于Accela)、45-90(23g,29.6mmol)、HBTU(16.838g,44.4mmol)、HOBT(5.999g,44.4mmol)投入500mL反应瓶中，加入DMF(50mL)溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(22.1mL，133.2mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，用纯水与乙酸乙酯萃取处理反应，浓缩有机相，干 法上样，柱层析。用1％-4％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品25g克。
45-103
Figure PCTCN2021107625-appb-000546
取反应物45-95(25g,20.17mmol)置于250mL烧瓶中，加DMF溶液(20mL)，加入吗啉(35mL,403.3mmoL)，常温搅拌反应，3小时后，反应结束。饱和食盐水(150mL)和乙酸乙酯(200mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗2次(50mL×2)，有机相蒸干。柱层析。用2％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品18.8克，产率91.7％。
45-105
Figure PCTCN2021107625-appb-000547
称取49-17(4g,8.822mmol)、45-103(8.97g,8.822mmol)、HBTU(5.018g,13.233mmol)、HOBT(1.788g,13.233mmol)投入500mL反应瓶中，加入DMF(40mL)溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(6.5869mL，39.699mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，加纯水析出固体，抽滤，烘干，柱层析，用20％-50％乙酸乙酯/石油醚、0.5％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得产品10.3克，产率86％。
45-116
Figure PCTCN2021107625-appb-000548
取反应物45-105(10.3g,7.615mmol)置于250mL烧瓶中，加DMF溶液(50mL)，加入吗啉(13.27mL,152.3mmoL)，常温搅拌反应。反应结束，在反应液中加入纯水，抽滤，烘干，得产品4.3克，产率50％。
45-122
Figure PCTCN2021107625-appb-000549
称取45-116(4.304g,3.808mmol)、HBTU(1.6247g,4.284mmol)、HOBT(0.5789g,4.284mmol)投入250mL反应瓶中，加入36-186(0.952mmol，按照制备37-172的方法合成，只需将季戊四醇替换为甘油即可)的DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(2.1mL，12.852mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，在反应液中加纯水，抽滤，干法上样，柱层析。用4％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品2g，产率58.82％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.45-8.44(m,2H),8.17-8.16(m,2H),7.95-7.94(m,5H),7.86-7.85(m,3H),7.75-7.74(m,2H),7.35-7.30(m,49H),6.72-6.70(m,2H),5.10-5.08(m,16H),4.53-4.52(m,4H),4.32-4.30(m,6H),4.21-4.20(m,5H),3.86(s,4H),3.75-3.73(m,3H),3.67-3.65(m,2H),3.06-3.04(m,5H),2.86-2.83(m,6H),2.44-2.37(m,22H),2.11-2.04(m,14H),1.89-1.88(m,8H),1.75-1.74(m,5H),1.62-1.60(m,3H),1.54–1.14(m,88H).
45-129
Figure PCTCN2021107625-appb-000550
称45-122(0.1736g,0.0850mmol)与10％Pd/C(75mg)投入氢化反应釜中，缓慢加入DMF(35mL)搅拌溶解，通入氢气(300psi)，常温搅拌过夜。次日，用装有硅藻土的砂芯漏斗抽滤反应液，除去Pd/C，得产品的DMF溶液，直接投下一步反应。
45-130
Figure PCTCN2021107625-appb-000551
称取41-105(1.2g,0.4818mmol)、HBTU(0.2467g,0.6507mmol)、HOBT(0.0879g,0.6507mmol)投入500mL反应瓶中，加入45-129(0.0482mmol)的DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.3227mL，1.9521mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，加纯水析出固体，抽滤，烘干得产品1.2克。
45-132
Figure PCTCN2021107625-appb-000552
称取45-130(1.3g,0.0519mmol)投入250mL反应瓶中，加入二氯甲烷(30mL)超声溶解，然后加入TFA(0.15mL,2.076mmol)，常温下搅拌过夜。次日，先将反应液蒸干，除去二氯甲烷，再加甲基叔丁基醚沉降，抽滤得产品1.2克。
45-133
Figure PCTCN2021107625-appb-000553
称取45-132(1.2g，0.028mmol)加入DMF(30mL)溶解后滴加DIEA(0.3226mL,1.952mmol)，再加M-SCM-10K(1.5g，0.1462mmol)，超声溶解。低速避光反应。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(150mL)，正己烷(70mL)析出固体，抽滤，加20％甲醇/二氯甲烷溶解，加硅胶粉(10g)，蒸干，柱层析。用5％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.4g，产 率51％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.28-9.26(m,13H),9.07–8.72(m,98H),8.57-8.55(m,12H),8.36–7.78(m,223H),7.73–7.45(m,23H),7.39–7.01(m,147H),4.23-4.01(m,38H),3.78-3.76(m,162H),3.51-3.49(m,2727H),2.89-2.87(m,88H),2.70-2.68(m,92H),2.45-2.44(m,46H),2.31-2.27(m,57H),1.91-1.48(m,136H),1.31-1.18(m,293H),0.90-0.84(m,144H).
45-145
Figure PCTCN2021107625-appb-000554
称取45-133(1.4g,0.025mmol)、37-163(0.0643g,0.1125mmol)、HBTU(0.0427g,0.1125mmol)、HOBT(0.0152g,0.0025mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.0560mL，0.3375mmol)，-5摄氏度条件下反应2小时后将反应移至常温下。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚与正 己烷沉降，抽滤，干法上样，柱层析。用5％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.5g，产率35.7％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ10.10-10.07(m,10H),9.32-9.27(m,23H),8.94-8.93(m,12H),8.56-8.53(m,18H),8.18-7.89(m,260H),7.65-7.50(m,57H),7.28-7.14(m,150H),4.57-4.37(m,49H),4.05-3.85(m,61H),3.74–3.60(m,43H),3.51-3.49(m,2702H),3.17-3.06(m,100H),2.89-2.73(m,198H),2.28-2.14(m,138H),1.91-1.48(m,318H),0.90-0.81(m,172H).
化合物39-138的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000555
Figure PCTCN2021107625-appb-000556
Figure PCTCN2021107625-appb-000557
39-80
Figure PCTCN2021107625-appb-000558
称取Boc-Glu-OH(5.0g，20.22mmol)、H-Glu(OBzl)-OBzl·TsOH(21.2g，42.46mmol，购于Ark Pharm)、HOBT(8g,60.66mmol)、HBTU(23g,60.66mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(30mL，181mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-84
Figure PCTCN2021107625-appb-000559
取39-80(19.2mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(14mL，192mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。
39-86
Figure PCTCN2021107625-appb-000560
称取Fmoc-Glu(OH)-OtBu(8.2g，19.3mmol，购于键凯)、39-84(19.2mmol)、HOBT(3.9g,28.95mmol)、HBTU(10.9g,28.95mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(14.3mL，86.85mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-89
Figure PCTCN2021107625-appb-000561
取39-86(19.2mmol)，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(25mL，289.5mmol)，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-92
Figure PCTCN2021107625-appb-000562
称取Fmoc-Lys(Boc)-OH(9.04g，19.3mmol)、39-89(19.2mmol)、HOBT(3.9g,28.95mmol)、HBTU(10.9g,28.95mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(14.3mL，86.85mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
39-93
Figure PCTCN2021107625-appb-000563
取39-92(19.2mmol)，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(25mL，289.5mmol)，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用80％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干。
41-82
Figure PCTCN2021107625-appb-000564
取丁二酸酐、H-Glu(OBzl)-OBzl(5g，10.0084mmol，购于Ark Pharm)、加入到250mL反应瓶中，加DMF(20mL)溶解，于低温0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应0.5小时，再缓缓滴加DIEA(8.3mL，50.0420mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。取出、常温搅拌反应。取样对照点TLC，确定反应完全。进行下一步反应。
41-83
Figure PCTCN2021107625-appb-000565
取41-82，H-Gly-OBzl(4.0521g，12.0108mmol,购于Innochem)，HBTU(5.6934g，15.0126mmol)、HOBT(2.0285g，15.6934mmol)加入到250mL反应瓶中，加DMF 20mL溶 解，于低温0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应0.5小时，再缓缓滴加DIEA(7.5mL，45.0378mmol)，于此条件下继续搅拌反应3小时。取出、常温搅拌反应。取样对照点TLC，确定反应完全。加入乙酸乙酯(150mL)，去离子水(200mL)与饱和碳酸氢钠溶液(200mL)萃取，分离有机相，水相再进行萃取分离，重复多次，直至有机相无产物终止。合并有机相，用饱和食盐水(300mL)清洗，收集有机相进行浓缩，蒸干，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，以40％乙酸乙酯/石油醚进行柱层析，得产物：2.4g。
39-96
Figure PCTCN2021107625-appb-000566
将41-83(1.5g，2.61mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％Pd/C(0.07g)，加入DMF(20mL)，通入氢气，氢气压强为300Psi，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗，滤液装入250mL的圆底烧瓶中，作为下一步原料。
39-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000567
称取39-93(6.0g，5.08mmol)、39-96(1.54mmol)、HOBT(0.84g,6.28mmol)、HBTU(2.38g,6.28mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(30mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(3.1mL，18.85mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，干法上样，柱层析，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱收集产品，浓缩蒸干得产品2.0克。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.27–7.89(m,20H),7.38–7.27(m,60H),5.14–5.02(m,24H),4.36–4.22(m,12H),3.08(s,2H),2.91–2.78(m,18H),2.74–2.59(m,18H),2.24–1.82(m,48H),1.36–1.32(m,54H),1.10(s,6H).
39-111
Figure PCTCN2021107625-appb-000568
称取Boc-Asp-OH(1.32g，5.68mmol，购于damas-beta)、GFLG-NPB(按42-90方法合成8.3g,11.94mmol)、HOBT(2.29g,17.0mmol)、HBTU(6.4g,17.0mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(8.4mL，51.1mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品。
39-112
Figure PCTCN2021107625-appb-000569
取39-111(5.68mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(6.3mL，85.2mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，反应液浓缩，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品5.3克。
39-119
Figure PCTCN2021107625-appb-000570
称取39-112(5.3g，3.62mmol)、41-97(3.2g,3.62mmol)、HOBT(0.73g,5.43mmol)、HBTU(2.0g,5.43mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(2.69mL，16.29mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品7克。
39-120
Figure PCTCN2021107625-appb-000571
取39-119(3.6mmol)，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(6.2mL，72mmol)，常温搅拌反应。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)沉降，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品7克。
39-121
Figure PCTCN2021107625-appb-000572
称取39-120(3.62mmol)、Boc-Gly-OH(0.63g,3.62mmol,购于阿拉丁)、HOBT(0.73g,5.43mmol)、HBTU(2.0g,5.43mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(2.69mL，16.29mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品。
39-122
Figure PCTCN2021107625-appb-000573
取39-121(3.62mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(8.0mL，108.6mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，反应液浓缩，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)沉降，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品3.0克。
39-123
Figure PCTCN2021107625-appb-000574
称取反应物39-97(0.5g，0.13mmol)投入微型反应釜中，加入10％Pd/C(70mg)，加DMF(30mL)溶解，通入H 2(300psi)，搅拌反应。反应结束，用硅藻土作为滤饼，抽滤反应液，除去Pd/C，再用DMF清洗3-4遍硅藻土得产品的DMF溶液，投下一步反应。
39-125
Figure PCTCN2021107625-appb-000575
称取39-122(3.0g,1.17mmol)、39-123(0.09mmol)、HOBT(0.21g,1.62mmol)、HBTU(0.61g,1.58mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(0.80mL，4.86mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产 品，抽滤，真空干燥得产品。
39-131
Figure PCTCN2021107625-appb-000576
取39-125(0.09mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(0.20mL，2.7mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，反应液浓缩，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品1g。
39-132
Figure PCTCN2021107625-appb-000577
取化合物39-131(1g，0.029mmol)，M-SCM-10K(0.90g，0.0907mmol,购于键凯)置于250mL反应瓶中。用DMF(30mL)溶解，加入DIEA(1mL)。低速避光搅拌反应。反应结束，反应液浓缩，加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，蒸干得产品1.2克。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ10.15–10.00(m,10H),9.36–8.47(m,62H),8.40–7.74(m,302H),7.63–7.07(m,265H),7.01–6.87(m,3H),6.74–6.62(m,6H),4.64–4.29(m,122H),4.25–3.75(m,185H),3.74–3.60(m,178H),3.51–3.50(m,2923H),3.44–3.37(m,37H),3.26–3.22(m,8H),3.21–3.01(m,74H),2.92–2.86(m,12H),2.85–2.56(m,112H),2.46–1.42(m,410H),0.88–0.79(m,216H).
39-138
Figure PCTCN2021107625-appb-000578
称取39-132(1.2g,0.018mmol)、37-163(0.0579mmol)、HOBT(0.035g,0.26mmol)、HBTU(0.098g,0.26mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(70mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(0.129mL，0.78mmol)，低温反应至结束。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品0.4克。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ10.15–10.00(m,10H),9.31–9.25(m,22H),8.96–8.92(m,10H),8.58–8.54(m,23H),8.24–7.99(m,246H),7.98–7.92(m,8H),7.89–7.87(m,25H),7.29–6.96(m,325H),4.63–4.32(m,119H),4.11–3.71(m,256H),3.51–3.50(m,2776H),3.25–2.97(m,268H),2.71–2.58(m,90H),2.44–2.02(m,150H),1.98–1.35(m,330H),0.91–0.77(m,216H).
45-80的合成：
Figure PCTCN2021107625-appb-000579
Figure PCTCN2021107625-appb-000580
45-50
Figure PCTCN2021107625-appb-000581
称取Fmoc-Glu-OH(0.766g,2.0747mmol，购于阿拉丁)、44-157(5.2g,4.5642mmol)、HBTU(2.36g,6.22mmol)、HOBT(0.84g,6.22mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF(40mL)溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(3mL，18.6723mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，用纯水与乙酸乙酯萃取处理反应，浓缩有机相，干法上样，柱层析。用2％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品5.4g，产率96％。
45-53
Figure PCTCN2021107625-appb-000582
称取45-50(5.2g,1.99mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF(20mL)超声溶液，然后加入吗啉(3.4689mL,39.8mmol)，常温下搅拌反应。2小时后，用乙酸乙酯与纯水萃取处理反应液，浓缩有机相，干法上样，柱层析。用1％氨水：4％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱蒸干得产品2.6g，产率55％。
45-54
Figure PCTCN2021107625-appb-000583
称取单叔丁基琥珀酸酯(0.0383g,0.22mmol，购于Accela)、45-53(0.5g,0.2mmol)、HBTU(0.1138g,0.3mmol)、HOBT(0.04g,0.3mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF(20mL)溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.0653mL，0.9mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，用纯水与乙酸乙酯萃取处理反应，浓缩有机相，干法上样，柱层析。用2％-4％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.32g，产率64％。
15-164
Figure PCTCN2021107625-appb-000584
取Fmoc-Glu-OtBu(1.0870g，2.5548mmol，购于Accela)、GFLG-PCB(按36-98方法合成，2g，2.4332mmol)、HBTU(2.7683g，7.2996mmol)、HOBT(0.9863g，7.2996mmol)依次加入到250mL反应瓶中，加DMF(20ml)溶解，于0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应30分钟，再缓缓滴加DIEA(1.8mL，10.9494mmol)，0摄氏度条件下反应过夜。反应结束，加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷沉降(50mL)，抽滤，蒸干进行下一步反应。
15-166
Figure PCTCN2021107625-appb-000585
取15-164，量取二氯甲烷(25mL)加入到反应瓶中，再加TFA(5.4mL，72.9960mmol)。常温条件下搅拌反应3小时，反应结束，加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷沉降(50mL)，抽滤，蒸干进行下一步反应。
15-167
Figure PCTCN2021107625-appb-000586
取15-166、GFLG-LPT(按36-145方法合成，2.3g，2.4332mmol)、HBTU(1.3842g，3.6498mmol)、HOBT(0.4932g，3.6498mmol)依次加入到250mL反应瓶中，加DMF(25ml)溶解，于低温0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应0.5h，再缓缓滴加DIEA(1.8mL，10.9494mmol)，取出、常温搅拌反应3h。取样对照点板。再取出反应瓶，加甲基叔丁基醚(300mL)与正己烷沉降(50mL)，抽滤，蒸干进行下一步反应。
41-44
Figure PCTCN2021107625-appb-000587
取15-167，加DMF溶解，加入吗啉(6.4mL，72.9960mmol)，于常温条件下搅拌反应1h。取样对照点板，确定反应完全。取出反应瓶，加甲基叔丁基醚(100mL)与正己烷沉降(50mL)，抽滤，干燥，加硅胶粉、溶解、蒸干进行柱层析。用1％氨水+5％甲醇/二氯甲烷洗脱得产物3.1g。
41-47
Figure PCTCN2021107625-appb-000588
取41-44(3.1g，1.6415mmol)、Boc-Gly-OH(0.2876g，1.6415mmol)、HBTU(0.9338g，2.4622mmol)、HOBT(0.3327g，2.4622mmol)依次加入到250mL反应瓶中，加DMF(15ml)溶解，于低温0摄氏度低温恒温条件下搅拌反应0.5h，再缓缓滴加DIEA(1.2mL，7.3866mmol)，取出、常温搅拌反应3h。取样对照点板。再取出反应瓶，加甲基叔丁基醚(300mL)与正己烷沉降(50mL)，抽滤，加硅胶粉、溶解、蒸干进行柱层析用1％氨水+3％甲醇/二氯甲烷洗脱得产物得产物：1.9g。
41-49
Figure PCTCN2021107625-appb-000589
取41-47，量取CH 2Cl 2(20mL)加入到反应瓶中，再缓慢滴加TFA(2mL，26.3966mmol)。取出、常温条件下搅拌反应3h，取样对照点板，确定反应完全。加甲基叔丁基醚(300mL) 与正己烷沉降(50mL)，抽滤，蒸干，加硅胶粉、溶解、蒸干进行柱层析。用1％氨水+3％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产物：1.2g。
45-59
Figure PCTCN2021107625-appb-000590
称45-54(0.1025mg,0.04026mmol)与10％Pd/C(40mg)投入氢化反应釜中，缓慢加入DMF(30mL)搅拌溶解，通入氢气(300psi)，常温搅拌过夜。次日，用装有硅藻土的砂芯漏斗抽滤反应液，除去Pd/C，得45-59的DMF溶液，直接投下一步反应。
45-60
Figure PCTCN2021107625-appb-000591
称取41-49(0.7g,0.3623mmol)、HBTU(0.1832g,0.4831mmol)、HOBT(0.0653g,0.4831mmol)投入250mL反应瓶中，加入45-59的DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.2396mL，1.4494mmol)，-5摄氏度条件下反应过夜。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚与正己烷沉降，抽滤，干法上样，柱层析。用1％氨水：5％-6％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.4g，产率58％。
45-69
Figure PCTCN2021107625-appb-000592
称取45-60(0.4g,0.073mmol)投入250mL反应瓶中，加入二氯甲烷(10mL)超声溶解，然后加入TFA(0.0854mL,1.15mmol)，常温下搅拌过夜。次日，在反应液中加甲基叔丁基醚与正己烷沉降，抽滤，干法上样，柱层析。用1％氨水+8％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.28克，产率72％。
45-70
Figure PCTCN2021107625-appb-000593
称取45-69(0.2g，0.01177mmol)加入DMF(15mL)溶解后滴加DIEA(0.0195mL,0.1177mmol)，再加M-SCM-10K(0.25g，0.0241mmol，购于键凯)，超声溶解。低速避光反应。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(150mL)，正己烷(70mL)析出固体，抽滤，加20％甲醇/二氯甲烷溶解，加硅胶粉(3g)，蒸干，柱层析。用1％氨水+5％-7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.3g，产率67％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ10.13-9.92(m,25H),9.05-8.95(m,21H),8.82-8.78(m,9H),8.56-8.54(m,9H),8.20-7.75(m,142H),7.48-7.10(m,200H),7.07-6.90(m,10H),6.70-6.68(m,15H),6.53-6.44(m,10H),5.81-5.76(m,10H),5.28-5.26(m,10H),4.75-4.71(m,6H),4.57-4.52(m,7H),4.36-4.23(m,18H),3.80-3.78(m,32H),3.51-3.49(m,1963H),3.24-3.22(m,35H),2.90-2.88(m,63H),2.74-2.68(m,65H),5.42-2.39(m,21H),2.30-2.28(m,12H),1.34-1.30(m,58H),1.24-1.22(m,131H),0.90-0.86(m,96H).
45-80
Figure PCTCN2021107625-appb-000594
称取45-70(0.25g,0.00659mmol)、37-163(0.006g,0.0105mmol)、HBTU(0.0062g,0.0165mmol)、HOBT(0.0022g,0.0165mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.027mL，0.1648mmol)，-5摄氏度条件下反应2小时后将反应移至常温下。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚与正己烷沉降，抽滤，干法上样，柱层析。用1％氨水+6％-10％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.22g，产率88％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ10.11-10.10(m,6H),9.84-9.82(m,6H),9.04-8.98(m,20H),8.75-8.54(m,14H),8.28–7.94(m,91H),7.95-7.73(m,33H),7.47-7.42(m,10H),7.40–6.99(m,259H),6.90-6.88(m,2H),6.69-6.67(m,26H),5.33–5.24(m,20H),4.74-4.58(m,21H),4.25-4.22(m,20H),3.81-3.79(m,18H),3.51-3.49(m,1900H),3.26-3.24(m,28H),2.41-2.39(m,12H),2.30–2.29(m,13H),1.99 1.95(m,30H),1.39-1.34(m,96H),1.30-1.23(m,212H),0.90-0.86(m,96H).
化合物49-137的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000595
Figure PCTCN2021107625-appb-000596
49-87
Figure PCTCN2021107625-appb-000597
称取Fmoc-Glu(OtBu)(OH)(3g，7.0510mmol，购于Ark Pharm)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.43g，10.5765mmol)加入装有H-Glu(OBzl)·OBzl·TosOH(3.70g，7.4036mmol，购于Ark Pharm)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.24mL，31.7296mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(7.32g，超产)
49-88
Figure PCTCN2021107625-appb-000598
在装有49-87(5.18g，7.0510mmol)的烧瓶中加入二氯甲烷，超声振荡至完全溶解后加入TFA(5.23mL，70.510mmol)，放于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，蒸干二氯甲烷和大部分TFA，再加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(6.89g，超产)
49-89
Figure PCTCN2021107625-appb-000599
称取49-88(4.78g，7.0510mmol)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.43g，10.5765mmol)加入装有H-Gly-OtBu(1.24g，7.4036mmol，购于Accela)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.24mL，31.7296mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(6.38g，超产)
49-92
Figure PCTCN2021107625-appb-000600
在装有49-89(5.58g，7.0510mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(6.14mL，70.510mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5.6g，超产)
49-95
Figure PCTCN2021107625-appb-000601
称取49-92(4.01g，7.0510mmol)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.43g，10.5765mmol)加入装有Fmoc-Lys(Boc)-OH(3.6g，7.7561mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.24mL，31.7296mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(8.69g，超产)
49-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000602
在装有49-95(7.19g，7.0510mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(6.14mL，70.510mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5.6g，超产)
49-100
Figure PCTCN2021107625-appb-000603
称取49-97(5.62g，7.0510mmol)，HBTU(4.01g，10.5765mmol)，HOBT(1.43g，10.5765mmol)加入装有Boc-Gly-OH(1.36g，7.7561mmol，购于阿拉丁)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(5.24mL，31.7296mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％～3％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.5g，37.15％)
49-102
Figure PCTCN2021107625-appb-000604
将49-100(1.5g，1.5705mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
49-101
Figure PCTCN2021107625-appb-000605
称取39-84(8g，10.4459mmol)，HBTU(5.94g，15.6689mmol)，HOBT(2.12g，15.6689mmol)加入装有49-17(3.69g，10.4459mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(7.77mL，47.0066mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用100％二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(9.6g，83.48％)
49-104
Figure PCTCN2021107625-appb-000606
在装有49-101(9.6g，8.7193mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(7.59mL，87.193mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％～5％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(5.3g，69.19％)
49-103
Figure PCTCN2021107625-appb-000607
称取49-102(1.21g，1.5705mmol)，HBTU(0.89g，2.3558mmol)，HOBT(0.32g，2.3558mmol)加入装有49-104(3.03g，3.4551mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(2.34mL，14.1345mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用2％～4％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.6g，66.49％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.42–8.26(m,4H),8.20–8.10(m,1H),7.99–7.72(m,6H),7.40–7.26(m,40H),6.96(s,1H),6.71(s,1H),5.17–4.99(m,17H),4.39–4.13(m,9H),3.82–3.50(m,3H),3.10–2.81(m,7H),2.65–2.57(m,2H),2.48–2.30(m,9H),2.22–1.59(m,31H),1.46–1.32(m,27H),1.28–1.05(m,10H).
49-107
Figure PCTCN2021107625-appb-000608
将49-103(2.6g，1.0416mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
49-108
Figure PCTCN2021107625-appb-000609
称取47-98(6.02g，8.7494mmol)，HBTU(0.89g，2.3558mmol)，HOBT(0.32g，2.3558mmol)加入装有49-107(1.85g，1.0416mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(1.55mL，9.3744mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用2％～6％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩， 真空烘箱干燥，得到产品(7.43g，100％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.10–7.85(m,15H),7.79–7.70(m,33H),7.55–7.38(m,61H),7.13–6.95(m,17H),5.55–5.29(m,17H),5.26–4.90(m,18H),4.34–3.81(m,24H),3.17–2.54(m,43H),2.22–1.98(m,36H),1.93–1.52(m,15H),1.50–1.05(m,99H),0.94–0.58(m,53H).
49-115
Figure PCTCN2021107625-appb-000610
在装有49-108(7.43g，1.0416mmol)的烧瓶中加入二氯甲烷，超声振荡至完全溶解后加入TFA(0.77mL，10.416mmol)，放于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，蒸干二氯甲烷和大部分TFA，再加入甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用3～5％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.9g，40.50％)。
49-116
Figure PCTCN2021107625-appb-000611
将49-115(1g，0.1454mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(20mL)使之溶解，加入M-SCM-5K(1.70g，0.3198mmol，购于键凯)，超声振荡使之溶解后，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.72mL，4.3512mmol)，滴毕，反应半小时后取出,将反应置于室温下避光低速搅拌反应一周。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200 mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用6～10％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.3g，51.79％)。 1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.59–7.85(m,67H),7.59–6.88(m,67H),5.58–5.16(m,47H),4.15–3.93(m,37H),3.51–3.49(m,1093H),3.26–3.23(m,15H),3.11–2.70(m,59H),2.07(s,32H),1.50–1.11(m,60H),0.93–0.80(m,26H).
49-132
Figure PCTCN2021107625-appb-000612
称取49-110(0.09g，0.1506mmol)，HBTU(0.04g，0.1129mmol)，HOBT(0.02g，0.1129mmol)加入装有49-116(1.3g，0.0753mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.35mL，2.1084mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(100mL)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用2％～8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(0.9g，67.16％)
49-137
Figure PCTCN2021107625-appb-000613
将49-132(0.9g，0.0505mmol)、TBAF(0.21g,0.8080mmol，)、THF(20mL)和稀HCl溶液(20mL)置于500mL圆底烧瓶中，然后将反应置于室温下搅拌反应过夜。反应完成后，将反应液减压浓缩，得固体产物，再加入DMF(5mL)溶解，加入异丙醇沉降，重复三次，过滤，得固体产物；再加入二氯甲烷(10mL)溶解，加入甲基叔丁基醚沉降，重复3次，得固体产物。干燥，得产品(0.68g,83.95％)。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.48–8.28(m,35H),8.04–7.86(m,34H),7.44–7.28(m,32H),7.05–6.89(m,26H),6.64–6.52(m,16H),5.48–5.35(m,30H),5.28–5.12(m,28H),4.15–3.98(m,34H),3.51(s,1091H),2.07(s,51H),1.48–1.09(m,84H),0.93–0.78(m,40H).
43-197的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000614
Figure PCTCN2021107625-appb-000615
36-200
Figure PCTCN2021107625-appb-000616
将35-84(8.99g，11.7386mmol)，Boc-L-Lys(Fmoc)-OH(5.0g，10.6714mmol)，HBTU(6.0706g，16.0072mmol)和HOBT(2.1629g，16.0072mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(10.6mL，64.0287mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)， 振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品36-200：12.9804g。
44-207
Figure PCTCN2021107625-appb-000617
将36-200(11.9g，9.7832mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(10.9mL，146.748mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(100mL)洗涤固体产物。得到产品44-207：8.351g，产率：76.47％。
44-208
Figure PCTCN2021107625-appb-000618
称取单叔丁基琥珀酸酯(1.5638g，8.9775mmol)，44-207(8.351g，7.4812mmol)，HBTU(4.2558g，11.2218mmol)和HOBT(1.5163g，11.2218mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(9.9mL，59.8499mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干。将有机相用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(2％-8％甲醇：98％-92％二氯甲烷)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-208：2.5268g，产率：35.85％。
44-212
Figure PCTCN2021107625-appb-000619
将44-208(2.5268g，1.9858mmol)和10％Pd/C(60mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到2.2MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装 有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土至不含产物为止，得到反应产物溶液。
44-213
Figure PCTCN2021107625-appb-000620
将44-212溶液(1.0846g，1.1893mmol)，36-145(5.0g，5.2329mmol)，HBTU(2.7062g，7.1358mmol)和HOBT(0.9642g，7.1358mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(3.5mL，21.4074mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-213：5.5443g。
44-215
Figure PCTCN2021107625-appb-000621
将44-213(5.5443g，1.1893mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(1.3mL，17.8395mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(100mL)洗涤固体产物。得到产品44-215：5.0g，产率：91.28％。
44-218
Figure PCTCN2021107625-appb-000622
将44-215(5.0g，1.0856mmol)，36-98(1.16g，1.4113mmol)，HBTU(0.6176g，1.6284mmol)和HOBT(0.22g，1.6284mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.1mL，6.5136mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-218：5.8728g。
44-219
Figure PCTCN2021107625-appb-000623
将44-218(5.8728g，1.0856mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(20mL)使之溶解，在搅拌状态下加入吗啉(1.9mL，21.7120mmol)，并将反应烧瓶置于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复五次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物。将固体产物用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：3％-15％甲醇：96％-84％二氯甲烷)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-219：0.8841g，产率：15.7％
40-141
Figure PCTCN2021107625-appb-000624
称取N-Fmoc-D-Glutamic Acid 5-Benzyl Ester(5g，10.8mmol,购于damas-beta)，HBTU(6.14g，16.2mmol)，HOBT(2.1g，16.2mmol)加入装有H-Gly-OtBu(1.81g，10.8mmol,购于Accela)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(8mL，48.6mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(6.38g，超产)
40-142
Figure PCTCN2021107625-appb-000625
在装有40-141(6g，10.8mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(19mL，216mmol)，放于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(5g，超产)
40-143
Figure PCTCN2021107625-appb-000626
称取40-142(4g，10.8mmol)，HBTU(6.14g，16.2mmol)，HOBT(2.12g，16.2mmol)加入装有Fmoc-Lys(Boc)-OH(5g，10.8mmol，购于Accela)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(8mL，48.6mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品(8.69g，超产0.05g)
40-144
Figure PCTCN2021107625-appb-000627
在装有40-143(8.6g，10.8mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(28mL，324mmol)，放于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，加入饱和NaCl溶液(200mL)，EA(200mL)，萃取，静置分层后收集有机相；水相再用EA(200mL×3)清洗，合并有机相，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品6g，产率96.15％。
43-177
Figure PCTCN2021107625-appb-000628
称取Fmoc-Gly-OH(1.0275g，3.456mmol，购于Accela)、40-144(2g，3.456mmol)、HBTU(1.9660g，5.184mmol)，HOBT(0.7004g，5.184mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(50mL)溶解后，反应置于0摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(2.5705mL，15.5520mmol)，滴加完毕后，反应继续在0摄氏度搅拌反应过夜。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取1次(100mL)，合并有机相，浓缩至少量，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用50％-100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱得2.3g,产率79.31％。
43-178
Figure PCTCN2021107625-appb-000629
将43-177(0.3308g，0.3855mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(20mg)，再加入DMF(35mL)使之溶解，通入氢气(2MPa)，在室温条件下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用装有硅藻土的砂芯漏斗过滤，硅藻土用DMF清洗3次(20mL×3),合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
43-179
Figure PCTCN2021107625-appb-000630
将44-219(2g,0.3855mmol)、HBTU(0.2193g,0.5783mmol)、HOBT(0.0781g,0.5783mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入43-178的DMF溶液(150mL)使反应物溶解,将反应置于-5摄氏度条件下，搅拌30分钟后,缓慢滴加DIEA(0.2878mL,1.7348mmol)，滴加完毕，反应在-5摄氏度条件下搅拌过夜。反应结束，加入甲基叔丁基醚(100mL)与正己烷(100mL),析出固体，抽滤，用甲醇清洗得产品1.5g产率68.18％。
43-181
Figure PCTCN2021107625-appb-000631
取43-179(1.5g,0.2526mmol)加入到500mL的烧瓶中，加DMF(30mL)，再加入吗 啉(0.4402mL,5.0528mmol)，超声使完全溶解，常温搅拌反应。反应结束后，反应液中加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，滤饼用甲醇清洗得产品1.2g产率83.13％。
43-182
Figure PCTCN2021107625-appb-000632
称取43-181(1.2g，0.2100mmol)加入500mL的烧瓶中，加DMF(20mL)溶解，加DIEA(0.1445mL，0.874mmol)，再加4ARM-SCM-10K(0.4766g，0.0437mmol，购于Jenkem Technology)，超声溶解。低速避光反应。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，加20％甲醇/二氯甲烷溶解，加硅胶粉(5g)，蒸干，柱层析。用10％-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.9g，产率64.29％。
43-189
Figure PCTCN2021107625-appb-000633
取43-182(0.9g,0.0270mmol)投入500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)，再加入TFA(0.1606mL，2.1625mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束，将反应液蒸干，除去二氯甲烷，加甲基叔丁基醚(150mL)，超声2分钟，析出固体产品，抽滤，固体产品用20％甲醇/二氯甲烷溶剂溶解，加入硅胶粉(5g)，用旋转蒸发仪蒸干，干法上样，柱层析，用1％氨水+5％-15％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.6g，产率68.03％。
43-190
Figure PCTCN2021107625-appb-000634
称取43-189(0.6g，0.0184mmol)加入250mL的烧瓶中，加DMF(20mL)溶解，加DIEA(0.0608mL，0.3680mmol)，再加M-SCM-5K(0.4044g，0.0773mmol,购于Jenkem Technology)，超声溶解，低速避光反应。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(100mL)，析出固体，抽滤，加10％甲醇/二氯甲烷溶解，加硅胶粉，蒸干，柱层析。用1％氨水+5％-7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.8g，产率81.63％。
43-197
Figure PCTCN2021107625-appb-000635
称取43-190(0.8g,0.0149mmol)、37-163(0.0376g,0.0658mmol)、HBTU(0.0339g,0.0894mmol)、HOBT(0.0121g,0.0894mmol)投入250mL反应瓶中，加入DMF溶液溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟后。缓慢滴加DIEA(0.0443mL，0.2682mmol)，-5摄氏度条件下反应2小时后将反应移至常温下避光搅拌。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚与正己烷沉降，抽滤，干法上样，柱层析。用1％氨水+6％-10％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.5g，产率62.5％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.87-9.82(m,10H),9.31-9.27(m,2H),8.57-8.71(m,10H),8.57-8.52(m,13H),8.22-8.13(m,32H),8.13-8.01(m,54H),8.00-7.91(m,48H),7.90-7.83(m,16H),7.80-7.73(m,19H),7.72-7.69(m,13H),7.65-7.61(m,3H),7.60-7.57(m,3H),7.53-7.40(m,20H),7.39-7.26(m,56H),7.25-7.18(m,142H),7315-7.09(m,62H),6.72-6.62(m,10H),6.55-6.50(m,5H),5.29-5.21(m,32H),4.79-4.66(m,40H),4.62-4.50(m,41H),4.41-4.31(m,42H),4.27-4.17(m,52H),4.16-4.08(m,55H),4.06-3.99(m,46H),3.83-3.78(m,146H),3.53-3.45(m,3010H),3.10-2.98(m,52H),2.93-2.87(m,15H),2.82-2.77(m,15H),2.64-2.59(m,60H),2.41-2.35(m,31H),2.17-2.07(m,9H),189-1.76(m,13H),1.64-1.55(m,23H),1.52-1.45(m,38H),1.36-1.31(m,17H),1.26-1.17(m,16H),1.11-1.05(m,4H),0.93-0.73(m,120H).
50-47化学合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000636
Figure PCTCN2021107625-appb-000637
Figure PCTCN2021107625-appb-000638
36-200
Figure PCTCN2021107625-appb-000639
将35-84(8.99g，11.7386mmol)，Boc-L-Lys(Fmoc)-OH(5.0g，10.6714mmol,购于Aladdin)，HBTU(6.0706g，16.0072mmol)和HOBT(2.1629g，16.0072mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(10.6mL，64.0287mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱 和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品36-200：12.9804g。
44-251
Figure PCTCN2021107625-appb-000640
将36-200(6.921g，5.6899mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(6.3mL，85.3482mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷，再加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗涤3次，滤饼干燥，得到产品44-251：6.35g.
44-252
Figure PCTCN2021107625-appb-000641
称取单叔丁基琥珀酸酯(1.1893g，6.8279mmol，购于Accela)，44-251(6.3574g，5.6899mmol)，HBTU(3.2368g，8.5348mmol)和HOBT(1.1532g，8.5348mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(60mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(5.6mL，34.1394mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干。将有机相用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(50％乙酸乙酯和50％石油醚)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-252：5.4136g，产率：75％。
44-262
Figure PCTCN2021107625-appb-000642
将44-252(1.737g，1.3651mmol)和10％Pd/C(80mg)投入氢化反应釜中，再加入 DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到2.2MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土至不含产物为止，得到反应产物溶液。
44-263
Figure PCTCN2021107625-appb-000643
将44-262(1.2449g，1.3651mmol)，36-145(6.0g，6.2795mmol)，HBTU(3.1062g，8.1905mmol)和HOBT(1.1067g，8.1905mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(4.1mL，24.5720mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-263：6.36g。
44-264
Figure PCTCN2021107625-appb-000644
将44-263(6.3639g，1.3651mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(1.5mL，20.4765mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(100mL)洗涤固体产物，干燥。得到产品44-264：6.4g。
44--265
Figure PCTCN2021107625-appb-000645
将44-264(6.2873g，1.3651mmol)，36-98(1.6831g，2.0477mmol)，HBTU(0.7766g，2.0477mmol)和HOBT(0.2767g，2.0477mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(50mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.4mL，8.1906mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲 基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-265：7.3848g。
44-266
Figure PCTCN2021107625-appb-000646
将44-265(7.3848g，1.3651mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(30mL)使之溶解，在搅拌状态下加入吗啉(1.8mL，20.4765mmol)，并将反应烧瓶置于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复五次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物。将固体产物用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(20％甲醇：80％二氯甲烷)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-266：2.0g，产率：28.4％。
44-87
Figure PCTCN2021107625-appb-000647
将Fmoc-Glu-OH(5.0g，13.5355mmol，购于阿拉丁)，HBTU(15.3996g，40.6064mmol)，HOBT(5.4867g，40.6064mmol)和L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(8.8083g，29.7780mmol，购于Innochem)加入到1L圆底烧瓶中，用DMF(100mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(26.8mL，162.4256mmol)， 滴加完毕后，反应烧瓶继续于-5摄氏度搅拌反应2小时后，最后将烧瓶转移至室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到2L分液漏斗中，向其中加入饱和氯化钠溶液(400mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，静置，萃取，分离水相和有机相；水相中加入乙酸乙酯(200mL)，振摇，静置，萃取，分离水相和有机相。合并有机相，向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。有机相浓缩蒸干，干燥。得到产品44-87：11.5325g。
42-86
Figure PCTCN2021107625-appb-000648
将44-87(11.5325g，13.5355mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，在搅拌状态下加入吗啉(17.7mL，203.0325mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌2小时。反应结束后，先将反应液转移到1L分液漏斗中，向其中加入饱和氯化钠水溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相。合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠水溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相。然后，向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相。最后，有机相浓缩蒸干。将其用20％甲醇/二氯甲烷(30mL)混合溶剂溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(0％-6％甲醇：100％-98％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品42-86：6.2281g，产率：73.0％。
42-158
Figure PCTCN2021107625-appb-000649
将Fmoc-Glu(OBzl)-OH(5.0g，10.8816mmol，购于Ark Pharm)，42-86(7.5383g，11.9698mmol)，HBTU(6.1901g，16.3224mmol)和HOBT(2.2055g，16.3224mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(8.1mL，48.9673mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(400mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取， 分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品42-158：13.1818g。
44-225
Figure PCTCN2021107625-appb-000650
将42-158(13.1818g，12.3050mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(30mL)使之溶解，在搅拌状态下加入吗啉(16mL，184.575mmol)，并将反应烧瓶置于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品44-225：10.4472g。
44-239
Figure PCTCN2021107625-appb-000651
将44-225(10.4472g，12.3050mmol)，Fmoc-Lys(Boc)-OH(4.1181g，8.7893mmol，购于Accela)，HBTU(4.9999g，13.1839mmol)和HOBT(1.7814g，13.1839mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(100mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(8.0mL，48.3411mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(400mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥,加入20％甲醇的二氯甲烷的混合溶液，使其溶解，加入硅胶粉，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用20％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集，浓缩，干燥，得到产品44-239：11.42g
44-243
Figure PCTCN2021107625-appb-000652
将44-239(11.42g，10.3mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入DMF(10mL)使之溶解，在搅拌状态下加入吗啉(13.5mL，154.6mmol)，并将反应烧瓶置于室温下搅拌反应2小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)和乙酸乙酯(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入去离子水(400mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干。将固体产物用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(20％-90％乙酸乙酯的石油醚混合溶液)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-243：7.219g，产率：65％。
44-245
Figure PCTCN2021107625-appb-000653
将44-243(6.1723g，5.7294mmol)，36-242溶液(0.4237g，1.5915mmol)，HBTU(2.7160g，7.1617mmol)和HOBT(0.9677g，7.1617mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(100mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(3.7mL，22.5437mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入去离子水(400mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最 后，将有机相浓缩，蒸干。将固体产物用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(80mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％-8％甲醇：99％-92％二氯甲烷)进行洗脱。收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品44-245：2.3346g，产率：43％。50-27
Figure PCTCN2021107625-appb-000654
将44-245(0.4023g，0.1168)和10％Pd/C(50mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到2.0MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土至不含产物为止，得到反应产物溶液。
50-28
Figure PCTCN2021107625-appb-000655
将50-27溶液(0.3707g，0.1168mmol)，44-266(2.0g，0.3855mmol)，HBTU(0.2g，0.5256mmol)和HOBT(0.07g，0.5256mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(50mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.7mL，4.4982mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下搅拌3小时。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复六次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，最后置于烘箱中干燥。得到产品50-28：2.18g。
50-30
Figure PCTCN2021107625-appb-000656
将50-28(2.18g，0.1168mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(10mL，134.65mmol)，最后将反应烧瓶置于室温下搅拌。反应结束后，先将反应液减压浓缩除去二氯甲烷。再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(100mL)洗涤固体产物，干燥。得到产品50-30：2.06。
50-38
Figure PCTCN2021107625-appb-000657
将50-30(1.0g，0.056mmol)和M-SCM-10K(1.98g，0.1863mmol,购于键凯)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(30mL)使其溶解后，在将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.5mL，2.8305mmol)，滴加完毕后，继续在-5摄氏度搅拌反应10分钟后，转移至室温下反应一周。反应结束后，向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(20mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(60mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物。滤饼用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(100mL)溶解，加入50mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(3％-8％的二氯甲烷混合溶液)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品50-38：0.72g，产率：27％。
50-46
Figure PCTCN2021107625-appb-000658
将50-38(0.72g，0.01477mmol)，N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺盐酸盐(0.052g，0.2954mmol)，HBTU(0.1g，0.2659mmol)和HOBT(0.036g，0.2659mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，用DMF(20mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5摄氏度条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.16mL，0.9748mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5摄氏度搅拌反应1小时，最后将其转移至室温下避光搅拌过夜。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(60mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，反复三次得到油状固体。将油状固体用二氯甲烷(10mL)溶解，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，干燥。得到产品50-46：0.3g，产率：41％。
50-47
Figure PCTCN2021107625-appb-000659
将50-46(0.3g，0.006mmol)和PPT-iRGD(0.16g，0.089mmol，南京肽业)，加入到250mL圆底烧瓶中，用DMSO(30mL)使其溶解后，将反应烧瓶置于40摄氏度油浴下避光搅拌两天。反应结束后，先向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL)沉降，倾倒上层清液，下层油状物中加入正己烷(200mL)和甲基叔丁基醚(60mL)沉降，反复五次得到粉末状固体，过滤得到固体产物，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤固体产物，用20％甲醇/二氯甲烷混合溶剂(60mL)溶解，加入硅胶粉(65mL)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂(1％氨水：6％-8％甲醇：91％-93％二氯甲烷)进行洗脱，收集液体，浓缩蒸干，干燥。得到产品50-47：0.19g，产率：46％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.85–9.72(m,19H),9.15–9.03(m,3H),8.94–8.85(m,3H),8.84–8.76(m,19H),8.65–8.46(m,19H),8.30–8.24(m,37H),8.16–8.09(m,48H),8.00–7.93(m,41H),7.89–7.81(m,19H),7.72–7.52(m,16H),7.47–7.42(m,29H),7.35–7.26(m,69H),7.22–7.16(m,152H),7.11–7.01(m,72H),4.82–4.72(m,32H),4.68–4.43(m,27H),4.40–4.09(m,102H),4.01–3.74(m,56H),3.66–3.58(m,109H),3.51–3.42(m,2901H),3.30–3.25(m,47H),3.13–2.97(m,128H),2.98–2.68(m,127H),2.45–2.18(m,101H),2.17–1.93(m,68H),1.94–1.73(m,90H),1.54–1.46(m,172H),1.36–1.11(m, 346H),0.93–0.77(m,257H).
50-65化学合成
50-65合成路线图
Figure PCTCN2021107625-appb-000660
Figure PCTCN2021107625-appb-000661
Figure PCTCN2021107625-appb-000662
Figure PCTCN2021107625-appb-000663
Figure PCTCN2021107625-appb-000664
50-29
Figure PCTCN2021107625-appb-000665
将Fmoc-Glu(OH) 2(2.425g,6.5647mmol，购于Aladdin)、Glu(OtBu).HCl(3.9g,13.129mmol,购于乐研)、HBTU(7.5g，19.7mmol)，HOBT(2.6g，19.7mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(35mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(9.7mL，59.1mmol)，滴加完毕后，反应继续在0℃搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入纯水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品50-29：5.6g。
50-31
Figure PCTCN2021107625-appb-000666
将50-29(5.6g,6.5647mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，再加入TFA(9.8mL,131.294mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(50mL)和正己烷(150mL)，多次沉降，得到油状物，干燥，得产品50-31：4.1g。
50-32
Figure PCTCN2021107625-appb-000667
将Fmoc-6-氨基-己酸(4.53g,12.81mmol，由Fmoc-Cl与6-氨基己酸在DIEA条件下在DMF溶剂中反应制备)、Glu(OtBu) 2.HCl(3.64g,12.81mmol，购于乐研)、HBTU(7.3g，19.215mmol)，HOBT(2.6g，19.215mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(50mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(11.6mL，70.455mmol)，滴加完毕后，反应继续在0℃搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入纯水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品50-32：7.6g。
50-33
Figure PCTCN2021107625-appb-000668
将50-32(7.6g,12.81mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，再加入吗啉(11.1mL,128.1mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入纯水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL x 1)清洗，合并有机相，浓缩，烘干,得产品50-33:4.8g。
50-35
Figure PCTCN2021107625-appb-000669
将50-31(1.83g,2.911mmol)、50-33(4.8g,12.81mmol)、HBTU(6.6g，17.46mmol)，HOBT(2.36g，17.46mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(40mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(11.6mL，70.455mmol)，滴加完毕后，反应继续在0℃搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入 饱和氯化钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-5％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-35：2.2g,产率:42％。
50-36
Figure PCTCN2021107625-appb-000670
将50-35(2.2g,1.0756mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，再加入吗啉(1.87mL,21.51mmol),反应在室温下搅拌约一个小时。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL),沉降3次，析出固体，过滤，清洗，滤饼真空烘箱中干燥，得到产品50-36：1.96g。
35-117
Figure PCTCN2021107625-appb-000671
将Fmoc-Glu(OtBu)(3.4g,8.0mmol，购于Ark pharm)、Gly-OBn.HCl(1.8g,8.8mmol，购于韶远)、HBTU(4.6g，12mmol)，HOBT(1.6g，12mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(50mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(7.3mL，44mmol)，滴加完毕后，反应继续在0℃搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入纯水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品35-117：4.5g。
35-118
Figure PCTCN2021107625-appb-000672
将35-117(4.5g,8mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解，再加入TFA(9mL,120mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲 基叔丁基醚(5100mL),析出固体，过滤滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，过滤，滤饼干燥，得产品35-118：4g。
50-37
Figure PCTCN2021107625-appb-000673
将50-36(1.96g,1.0756mmol)、35-118(0.4g,0.8605mmol)、HBTU(0.6g，1.6314mmol)，HOBT(0.218g，1.6314mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(45mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(2.1mL，12.5865mmol)，滴加完毕后，反应继续在0℃搅拌过夜。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),沉降3次，析出固体，过滤，清洗，真空烘箱中干燥，得到产品50-37：3.8g。
50-39
Figure PCTCN2021107625-appb-000674
将50-37(1.997g,0.8605mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，再加入吗啉(1.87mL,21.5125mmol),反应在室温下搅拌约一个小时。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL),沉降4次，析出固体，过滤，清洗，滤饼真空烘箱中干燥，得到产品50-39：1.8g。
50-40
Figure PCTCN2021107625-appb-000675
将50-39(1.8g,0.8605mmol)、Boc-Gly-OH(0.18g,1.0326mmol，购于Ark pharm)、HBTU(0.49g，1.2908mmol)，HOBT(0.17g，1.2908mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(35mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.6mL，3.8723mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5℃搅拌过夜。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),沉降3次，析出固体，过滤，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用6％-10％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-40：0.6g,产率:32％。
50-43
Figure PCTCN2021107625-appb-000676
将50-40(0.6g，0.266mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.021g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力Pa＝1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
35-204
Figure PCTCN2021107625-appb-000677
将Boc-Glu-OH(7g,28.3mmol,购于Ark pharm)、Glu(OBn) 2.TosOH(31g,62.6mmol,购于Ark pharm)、HBTU(32g，84.9mmol)，HOBT(11.5g，84.9mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(200mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(42mL，254.7mmol)，滴加完毕后，然后移到室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品35-204：24.8g。
35-218
Figure PCTCN2021107625-appb-000678
将35-204(24.5g,28.3mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使其溶解，再加入TFA(30mL,404.2mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(200mL),析出固体，过滤滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，过滤，滤饼干燥，得产品35-218：21.7g。
35-220
Figure PCTCN2021107625-appb-000679
将35-218(21.7g,28.3mmol)、N-Boc-6-氨基己酸(5.9g,25.7mmol，由Boc 2O与6-氨基己酸在三乙胺条件下在二氯甲烷溶剂中反应制备)、HBTU(14.6g，38.55mmol)，HOBT(5.2g，38.55mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(200mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(19mL，115.65mmol)，滴加完毕后，然后移到室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，真空烘箱中干燥，得到产品35-220：25.2g。
50-82
Figure PCTCN2021107625-appb-000680
将35-220(6g,6.128mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解， 再加入TFA(4.6mL,61.28mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(200mL),析出固体，过滤滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，过滤，滤饼干燥，得产品50-82：4.5g，产率：83％。
36-262
Figure PCTCN2021107625-appb-000681
将50-82(4.5g,5.119mmol)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(2g,4.266mmol,购于Aladdin)、HBTU(2.4g，6.4mmol)，HOBT(0.86g，6.4mmol)加入到250mL烧瓶中，用DMF(100mL)溶解后，在将反应置于0℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(19mL，115.65mmol)，滴加完毕后，继续搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，振摇，萃取，蒸干，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用5％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品36-262：4.8g,产率:84％。
36-263
Figure PCTCN2021107625-appb-000682
将36-262(4.8g,3.6mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)，使其溶解，再加入吗啉(6.3mL,72mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入纯水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL x 1)清洗，合并有机相，浓缩，烘干,得产品36-263:4g。
50-44
Figure PCTCN2021107625-appb-000683
将50-43(0.576g,0.266mmol)、36-263(0.383g,0.3458mmol)、HBTU(0.151g，0.399mmol)，HOBT(0.054g，0.399mmol)加入到100mL烧瓶中，用DMF(30mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.197mL，1.197mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5℃搅拌1小时，然后移到室温下过夜。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),沉降4次，析出固体，过滤，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-44：0.46g,产率:53％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.38(d,J＝7.3Hz,1H),8.37–8.24(m,1H),8.19–8.05(m,6H),7.96–7.86(m,9H),7.73–7.64(m,1H),7.57–7.54(m,2H),7.44–7.40(m,1H),7.36–7.32(m,19H),5.14–5.00(m,9H),4.64–4.53(m,1H),4.43–4.25(m,4H),3.92–3.72(m,3H),3.72–3.58(m,15H),3.50–3.42(m,6H),3.34–3.16(m,14H),3.06–2.92(m,12H),2.89–2.84(m,6H),2.79–2.65(m,6H),2.62(s,1H),2.55–2.49(m,2H),2.46–2.36(m,5H),2.23–2.02(m,7H),1.92–1.83(m,4H),1.71–1.63(m,4H),1.51–1.42(m,3H),1.40–1.33(m,14H),1.31–1.21(m,90H),1.24–1.21(m,12H),1.12(t,J＝4.8Hz,1H).
50-48
Figure PCTCN2021107625-appb-000684
将50-44(0.46g，0.1413mmol)投入氢化反应釜中，再加入10％Pd/C(0.02g)，再加入DMF(30mL)使之溶解，通入氢气，压力Pa＝1.8MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL×3)清洗,合并DMF溶液，作为下一步反应的原料。
50-49
Figure PCTCN2021107625-appb-000685
将50-48(0.409g,0.1413mmol)、50-45(1.34g,0.6783mmol,按35-103方法合成)、HBTU(0.32g，0.8478mmol)，HOBT(0.11g，0.8478mmol)加入到100mL烧瓶中，用DMF(20mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.16mL，0.9748mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5℃搅拌1.5小时，然后移到室温下过夜。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),沉降3次，析出固体，过滤，滤饼加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-10％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-49：0.86g,产率:57％。
50-50
Figure PCTCN2021107625-appb-000686
将50-49(0.86g,0.08mmol)加入到100mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解，再加入TFA(15mL,202.1mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(50mL),析出固体，过滤滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，过滤，滤饼干燥，得产品50-50：0.78g。
50-51
Figure PCTCN2021107625-appb-000687
50-50(0.5g,0.0497mmol)投入到2100mL烧瓶中，加入DMF(25mL)使其溶解，加入DIEA(1.5mL,8.946mmol),搅拌20分钟，加入M-SCM-10K(1.16g,0.1095mmol),反应于室温下低速避光搅拌一周。反应结束，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(50mL),沉降3次，呈油状，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-8％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-51：0.8g,产率:53％。
50-61
Figure PCTCN2021107625-appb-000688
将50-51(0.8g,0.0257mmol)、N-马来酰亚胺-乙二胺(0.04g,0.2264mmol)、HBTU(0.117g，0.3084mmol)，HOBT(0.042g，0.3084mmol)加入到100mL烧瓶中，用DMF(60mL)溶解后，在将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.19mL，1.1308mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5℃搅拌1小时，然后移到室温下过夜。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),沉降4次，析出固体，过滤，滤饼干燥，得到产品50-61：0.75g。
50-65
Figure PCTCN2021107625-appb-000689
将50-61(0.51g,0.0159mmol)投入到100mL的烧瓶中，加入PPT-IRGD(0.224g,0.14mmol),加入DMSO(35mL)使其溶解，反应置于40℃搅拌2天。反应结束，向反应液中加入乙酸乙酯(40mL)和正己烷(200mL),沉降5次，呈粘稠状，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲醇(20mL)和二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-10％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱，收集浓缩，真空烘箱中干燥，得到产品50-65：0.16g,产率:23％。 1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.16–9.05(m,4H),8.29–8.18(m,25H),8.13–8.04(m,49H),7.94–7.76(m,13H),7.63–7.45(m,25H),7.32–7.24(m,139H),7.22–7.06(m,79H),6.79–6.64(m,4H),4.61–4.43(m,18H),4.27–4.12(m,44H),3.99–3.86(m,21H),3.77–3.58(m,80H),3.51–3.49(m,1945H),3.45–3.41(m,22H),3.38–3.26(m,42H),3.24–3.19(m,13H),3.17–3.15(m,9H),3.12–3.07(m,15H),3.08–2.96(m,32H),2.88–2.76(m,79H),2.72–2.68(m,52H),2.62–2.59(m,20H),2.53–2.45(m,48H),2.38–2.26(m,38H),2.22–2.01(m,45H),1.87–1.67(m,53H),1.60–1.48(m,73H),1.44–1.35(m,65H),1.28–1.05(m,125H),0.95–0.75(m,172H),0.63–0.48(m,37H).
化合物60-43的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000690
Figure PCTCN2021107625-appb-000691
Figure PCTCN2021107625-appb-000692
49-180
Figure PCTCN2021107625-appb-000693
称取Fmoc-Glu-OH(3g，8.1219mmol，购于阿拉丁)，HBTU(9.23g，24.3658mmol)，HOBT(3.28g，24.3658mmol)加入装有Boc-NHNH 2(2.25g，17.0560mmol，购于Innochem)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.81mL，4.9216mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，收集，真空烘箱干燥，得到产品(6.2g，超产)。
49-202
Figure PCTCN2021107625-appb-000694
在装有49-180(4.80g，8.1219mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(7.07mL，81.219mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用3～8％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.3g，75.66％)。
49-204
Figure PCTCN2021107625-appb-000695
称取49-202(2.3g，6.1265mmol)，HBTU(3.17g，8.3543mmol)，HOBT(1.13g，8.3543mmol)加入装有49-139(0.87g，1.3924mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(4.14mL，25.0632mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，收集，真空烘箱干燥，得到产品(3.6g，超产)。
49-214
Figure PCTCN2021107625-appb-000696
在装有49-204(2.86g，1.3924mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(1.21mL，13.924mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用4～8％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(2.2g，86.27％)。
46-143
Figure PCTCN2021107625-appb-000697
称取Boc-Gly-OH(5.25g，30mmol，购于阿拉丁)、H-Glu(OBzl)-OBzl·TsOH(15g，30mmol，购于Ark Pharm)、HOBT(6.08g,45mmol)、HBTU(17.08g,45mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(22.3mL，135mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用20％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干得产品13克，产率89％。
60-51
Figure PCTCN2021107625-appb-000698
取46-143(19.2mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(22mL，300mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，取出反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干得产品13克。
60-53
Figure PCTCN2021107625-appb-000699
称取60-51(10g，26.01mmol)、49-139(5.91mmol)、HOBT(4.79g,35.4mmol)、HBTU(13.45g,35.4mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(17.5mL，106.2mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用20％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干得产品8克，产率66％。
60-60
Figure PCTCN2021107625-appb-000700
取60-53(8g，3.82mmol)，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(3.3mL，38.2mmol)，常温搅拌反应。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)沉降，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品7.1克。
60-65
Figure PCTCN2021107625-appb-000701
将49-25(3.96g，3.82mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％的Pd/C(0.07g)，加入DMF(20mL)，通入氢气，氢气压强为300Psi，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗，滤液装入250mL的圆底烧瓶中，作为下一步原料。
60-68
Figure PCTCN2021107625-appb-000702
称取60-65(3.82mmol)、60-60(7.1g，3.82mmol)、HOBT(0.77g,5.73mmol)、HBTU(2.17g,5.73mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5摄氏度条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(2.8mL，17.19mmol)，低温反应至结束。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干。干法上样，柱层析，用20％乙酸乙酯/石油醚-50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱收集产品，浓缩蒸干得产品8克，产率75％。
60-71
Figure PCTCN2021107625-appb-000703
取60-68(8.0g，2.85mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(6.3mL，85.7mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束后，反应液浓缩，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)，析出固体产品，抽滤，真空干燥得产品7.8克。
49-244
Figure PCTCN2021107625-appb-000704
称取60-71(3g，1.0937mmol)，HBTU(0.62g，1.6405mmol)，HOBT(0.22g，1.6405mmol)加入装有49-187(2.55g，1.3124mmol)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.81mL，4.9216mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用3～5％甲醇和二氯甲烷 混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(3.2g，62.74％)。
49-260
Figure PCTCN2021107625-appb-000705
将49-244(2g，0.4284mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.05g)，加入DMF(20mL),通入氢气，氢气压强为300Psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗3次,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到产品,作为下一步原料。
49-261
Figure PCTCN2021107625-appb-000706
在装有49-260(1.69g，0.4284mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入哌啶(0.73mL，8.568mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压浓缩反应液，得到产品的DMF溶液，作为下一步反应原料。
60-2
Figure PCTCN2021107625-appb-000707
将49-261(0.5g，0.1427mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(20mL)使之溶解，再缓慢滴加入装有DIEA(0.42mL,2.5686mmol)和M-SCM-10K(3.14g，0.3139mmol，购于键凯)的DMF溶液中，将反应置于室温下避光低速搅拌反应一周。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，收集，真空烘箱干燥，得到产品(3.7g，超产)。
60-8
Figure PCTCN2021107625-appb-000708
称取60-2(3.35g，0.1427mmol)，HBTU(0.65g，1.7124mmol)，HOBT(0.23g，1.7124mmol)加入装有DAE-MI(0.18g，1.2558mmol，购于上海雷祺生物)的烧瓶中，再加入适量DMF使其溶解，置于-5摄氏度下，缓慢滴加DIEA(0.85mL，5.1372mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，干法上样，柱层析，用3～5％甲醇和二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(1.3g，37.25％)。
60-28
Figure PCTCN2021107625-appb-000709
将60-8(0.21g,0.0082mmol)置于干燥的250mL圆底烧瓶中，加入PPT-iRGD(0.12g，0.0721mmol),DMSO(20mL)使其完全溶解，在40摄氏度下搅拌反应3天。反应完成后，加入乙酸乙酯(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，收集，浓缩，真空烘箱干燥，得到产品(0.32g，超产)
60-40
Figure PCTCN2021107625-appb-000710
将60-28(0.13g,0.0034mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(3mL),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，减压浓缩反应液，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，烘干，得产品0.42g，超产。
60-43
Figure PCTCN2021107625-appb-000711
将60-40(0.13g,0.0034mmol)置于干燥的500mL的圆底烧瓶中，加入无水甲醇溶解， 然后加入醋酸(0.12mL,2.124mmol)、DOX(0.02g，0.034mmol)于室温下搅拌反应过夜。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷和甲醇溶解，干法上样，柱层析，用5～12％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集、浓缩、干燥，得到产品(0.07g，49.29％)
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.81–8.10(m,41H),8.06–7.66(m,33H),7.62–6.81(m,136H),4.72–4.05(m,106H),4.01–3.61(m,133H),3.59–3.43(m,1260H),3.26–3.04(m,68H),2.95–2.70(m,54H),2.67–2.53(m,367H),2.44–2.36(m,13H),2.19–1.83(m,77H),1.64–1.43(m,78H),1.41–1.18(m,60H),0.93–0.78(m,80H).
48-124化学合成路线
Figure PCTCN2021107625-appb-000712
Figure PCTCN2021107625-appb-000713
36-202
Figure PCTCN2021107625-appb-000714
将Axitinib(6g，15.5251mmol,简称：AXT)、4-nitrophenyl chloroformate(9.38g，46.5754mmol)加入到500mL双口烧瓶中，加入300mL THF使其成为均相，置于70摄氏度油浴中，用冷凝管回流溶剂，然后搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用0％-20％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-202：4.7g,产率55％。
36-204
Figure PCTCN2021107625-appb-000715
将36-202(4.7g，8.5251mmol)、37-160(2.1g，8.5251mmol)加入到500mL双口烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于室温下，加入三乙胺(3.6mL，25.5634mmol)，然后室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-204：7g。
36-211
Figure PCTCN2021107625-appb-000716
将36-204(7g,8.5211mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(6mL,85.2110mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用1％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-211：4.5g,产率94.3％。
36-228
Figure PCTCN2021107625-appb-000717
将6-马来酰亚胺基己酸(3g，14.2032mmol，购于安耐吉)、37-160(3.9g，15.6235mmol)、HBTU(8g，21.3048mmol)、HOBT(2.8g，21.3048mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(10.5mL，63.9144mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-228：10.6g。
36-229
Figure PCTCN2021107625-appb-000718
将36-228(10.6g,14.2032mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(10.5mL,142.032mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用4％-40％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品36-229：1.5g,产率30.9％。
36-239
Figure PCTCN2021107625-appb-000719
称取Fmoc-Glu-OtBu(4.2g，9.9182mmol)、H-Gly-OBzl·HCl(2g，9.9182mmol，购于伊诺凯)、HBTU(5.6g，14.8773mmol)、HOBT(2g，14.8773mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(9mL，54.5499mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，取出反应液加入去离子水(100mL)，用乙酸乙酯萃取多次(100mL×3)，合并有机相，有机相加入饱和氯化钠溶液(100mL)清洗两次，最后浓缩蒸干,得产品：36-239：7.8g。
36-240
Figure PCTCN2021107625-appb-000720
将36-239(7.8g,9.9182mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF，使其溶解，再加入吗啉(8.6mL,99.182mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得产品：36-240：5.4g。
36-241
Figure PCTCN2021107625-appb-000721
将36-240(5.4g，9.9182mmol)、Fmoc-Gly-OH(2.6g，8.9264mmol)、HBTU(5.6g，14.8773mmol)、HOBT(2g，14.8773mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(7.3mL，44.6319mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得36-241：4.86g，收率：78.3％。
36-244
Figure PCTCN2021107625-appb-000722
将36-241(4.86g,9.9182mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(7.36mL,99.182mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，烘干，得产品36-244：3.45g,产率86.6％。
48-63
Figure PCTCN2021107625-appb-000723
将Fmoc-Gly-OH(10.74g，36.32566mmol)，L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(10.8g，36.3256mmol)，HBTU(15.2g，39.9580mmol)，HOBT(5.4g，39.9580mmol)加入适量DMF使其溶解，置于-5℃下，缓慢滴加DIEA(10.27mL，62.1522mmol)，滴毕，反应半小时后取出，在室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，再用二氯甲烷(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用20％-40％乙酸乙酯的石油醚混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-63：19.4g，收率：99.5％。
48-66
Figure PCTCN2021107625-appb-000724
在装有48-63(9.5g，36.0173mmol)的烧瓶中加入DMF，超声振荡至完全溶解后加入吗啉(31.4mL，360.1730mmol)，放于室温下搅拌反应2h。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得产品：48-66：6.8g。
48-67
Figure PCTCN2021107625-appb-000725
称取48-66(5.5g，17.5270mmol)、50-31(2.2mmol，3.5054mmol)、HBTU(7.9g，21.0324mmol)、HOBT(2.8g,21.0324mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(12.8mL，77.1188mmol)，低温反应至结束。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得产品48-67：11g。
48-69
Figure PCTCN2021107625-appb-000726
取48-67(11g，6.0402mmol)，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(5.3mL，60.4020mmol)，常温搅拌反应。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，再用二氯甲烷(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用0.5％氨水：4％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-69：3.9g，收率：70％。
48-70
Figure PCTCN2021107625-appb-000727
将36-244(1.31g，2.4392mmol)、48-69(3.9g，2.4392mmol)、HBTU(1.4g，3.6588 mmol)、HOBT(0.5g，3.6588mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(2.2mL，13.4157mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，得48-70：6g。
48-85
Figure PCTCN2021107625-appb-000728
称取Boc-Gly-OH(3g，17.1252mmol)、H-Glu(OBzl)-OBzl·TsOH(8.5g，17.1252mmol)、HOBT(3.4g,25.1878mmol)、HBTU(9.7g,25.6878mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(12.7mL，77.0634mmol)，低温反应至结束。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，再用二氯甲烷(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用30％-40％乙酸乙酯的石油醚混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-85：8.5g。
48-86
Figure PCTCN2021107625-appb-000729
取48-85(8.5mmol，17.1296mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(12.7mL，171.2960mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，呈粘稠状固体，再加入2-3mL二氯甲烷溶解，加入正己烷和甲基叔丁基醚沉降，重复上述步骤2次，过滤，烘干，得产品48-86：8.5g。
48-88
Figure PCTCN2021107625-appb-000730
称取48-86(5.95g，15.4876mmol)、50-31(2.43，3.8719mmol)、HOBT(3.15g,23.2314mmol)、HBTU(8.8g,23.2314mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(16.7mL，100.6694mmol)，低温反应至结束。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，再用二氯甲烷(200mL)溶解，加入硅胶粉(50mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用4.5％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-88：4.4g，收率：54％。
48-90
Figure PCTCN2021107625-appb-000731
取48-88(2.7g，1.2898mmol)，加入DMF(20mL)溶解，再加入吗啉(1.13mL，12.8986mmol)，常温搅拌反应。反应结束后，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)沉降，析出固体产品，抽滤，烘干，得产品48-90：3g。
48-91
Figure PCTCN2021107625-appb-000732
称取48-90(2.4g，1.2827mmol)、Boc-Lys(Fmoc)-OH(0.6g，1.2827mmol)、HOBT(0.26g,1.9241mmol)、HBTU(0.73g,1.9241mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(40mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(1mL，5.7721mmol)，低温反应至结束。反应结束，加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(30mL),进行沉降，倾倒上层液体，下层油状继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，如此重复3次，呈油状物，加入甲基叔丁基醚(200mL)析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL×3)清洗，再用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(60mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用4％-5％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-91：2.3g,产率79.5％。
48-93
Figure PCTCN2021107625-appb-000733
取48-91(2.3g，0.9907mmol)，加入二氯甲烷(5mL)，再加入TFA(0.75mL，9.9072mmol)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束，反应液加甲基叔丁基醚(150mL)与正己烷(100mL)沉降，析出固体产品，抽滤，烘干，得产品48-93：2.4g。
48-95
Figure PCTCN2021107625-appb-000734
将48-70(1.2g，0.5570mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％的Pd/C(0.07g)，加入DMF(20mL)，通入氢气，氢气压强为1.4MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗，滤液装入250mL的圆底烧瓶中，作为下一步原料。
48-97
Figure PCTCN2021107625-appb-000735
称取48-95(1.15g，0.5570mmol)、48-93(1.25g，0.5570mmol)、HOBT(0.12g,0.8355mmol)、HBTU(0.32g,0.8355mmol)投入250mL反应瓶中，加DMF溶液(80mL)溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃条件下搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(0.5mL，3.0635mmol)，低温反应至结束。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和食盐水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(100ml×2)清洗，蒸干，再用二氯甲烷(200mL)溶解，加入硅胶粉(30mL)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用3％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品48-97：1.3g，收率：54.8％。
48-98
Figure PCTCN2021107625-appb-000736
将48-97(1g，0.2343mmol)加入到氢化反应釜中，加入含量为10％的Pd/C(0.07g)，加入DMF(20mL)，通入氢气，氢气压强为1.4MPa，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(15mL×3)清洗，滤液装入250mL的圆底烧瓶中，作为下一步原料。
48-107
Figure PCTCN2021107625-appb-000737
将48-98(0.89g，0.2331mmol)、36-211(1.05g，1.8644mmol)、HBTU(1.06g，2.7966mmol)、HOBT(0.38g，2.7966mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(1.38mL，8.3899mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品48-107：1.9g。
48-108
Figure PCTCN2021107625-appb-000738
将48-107(1.9g,0.2282mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF，使其溶解，再加入吗啉(0.39mL,4.5639mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(100mL×3)沉降，下层油状固体用少量二氯甲烷溶解，加入甲基叔丁基醚，析出固体，烘干，得产品48-108：1.5g收率：88％。
48-109
Figure PCTCN2021107625-appb-000739
将48-108(1.5g,0.2270mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，再加入TFA(1.35mL,18.1635mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩至10mL，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出粉末，抽滤，烘干，得产品48-109：1.5g。
48-110
Figure PCTCN2021107625-appb-000740
将48-109(0.6g,0.08544mmol)加入到250mL的烧瓶中，再加20mL DMF使之溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.28mL，1.7088mmol)，滴加完毕，再加入M-SCM-10K(2g),将反应置于常温下低速搅拌反应一周。反应结束后，先加入正己烷(50mL×3),下层油状只有很少的量时，加入甲基叔丁基醚(20mL)沉降，析出固体，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶解，加入30mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(5％-10％甲醇：95％-90％二氯甲烷)进行洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品48-110:0.42g,产率17.5％。
48-120
Figure PCTCN2021107625-appb-000741
将48-110(0.42g，0.01498mmol)、36-229(0.1g，0.2996mmol)、HBTU(0.7g，1.7970mmol)、HOBT(0.2g，1.7970mmol)加入到250mL烧瓶中，加入30mL DMF使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.9mL，5.3920mmol)，滴加完毕，继续反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束后，先加入正己烷(50mL×3),下层油状只有很少的量时，加入甲基叔丁基醚(20mL)沉降，析出固体，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶解，加入30mL硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(5％-10％甲醇：95％-90％二氯甲烷)进行洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品48-120:0.39g,产率85％。
48-124
Figure PCTCN2021107625-appb-000742
将48-120(0.39g,0.01274mmol)投入500mL中，加入DMSO(30mL)使其溶解，再加入PPT-IRGD(0.2g,0.1274mmol)，将反应移到40摄氏度下避光低速搅拌2天。反应结束，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL),倾倒上层清液，下层液体入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL)，如此重复3次，呈油状，加入甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(30mL×3)清洗，再用甲醇(40mL)和二氯甲烷(160mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用5％-20％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，得产品48-124:0.18g,收率：32.7％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ9.04–9.00(m,1H),7.95–7.85(m,90H),7.81–7.76(m,90H),7.70–7.66(m,5H),7.51–7.44(m,93H),7.40–7.31(m,5H),7.13–7.11(m,2H),7.00–6.96(m, 2H),6.67–6.60(m,2H),6.21–6.19(m,43H),4.10–3.96(m,73H),3.58–3.45(m,417H),3.40–3.36(m,1031H),3.27–3.21(m,155H),3.18–3.06(m,281H),2.90–2.77(m,563H),2.58–2.51(m,54H),2.06–2.01(m,92H),1.61–1.42(m,193H),1.35–1.33(m,22H),1.24–1.22(m,144H).
43-226的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000743
Figure PCTCN2021107625-appb-000744
43-162
Figure PCTCN2021107625-appb-000745
将35-84(8.99g，11.7386mmol,)，Fmoc-Lys(Boc)-OH(5.0g，10.6714mmol,购于Aladdin)，HBTU(6.0706g，16.0072mmol)和HOBT(2.1629g，16.0072mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(80mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅 拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(10.6mL，64.0287mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。最后，将有机相浓缩，蒸干，干燥。得到产品：12.98g。
43-166
Figure PCTCN2021107625-appb-000746
将43-162(3g，2.4664mmol)和10％Pd/C(100mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到1.8MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土3次，得到反应产物溶液。
43-169
Figure PCTCN2021107625-appb-000747
将43-166(2.4664mmol)，49-23(4.04g，10.8522mmol)，HBTU(5.61g，14.7984mmol)和HOBT(2.00g，14.7984mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(150mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(7.34mL， 44.3952mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束后，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相；再向水相中加入乙酸乙酯(100mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。然后，合并有机相，再向有机相中继续加入饱和氯化钠溶液(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。再向有机相中加入去离子水(300mL)，振摇，萃取，分离水相和有机相。将有机相浓缩，蒸干，加入甲醇(30mL)和二氯甲烷(120mL)溶解，加入硅胶粉(50g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用3％-7％甲醇的二氯甲烷的混合溶液洗脱。得到产品：4.9g。
43-176
Figure PCTCN2021107625-appb-000748
将43-169(4.43g,1.95mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(1.7mL,19.5mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析。用5％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品:4.3g。
43-183
Figure PCTCN2021107625-appb-000749
将43-176(4.0g,1.95mmol)投入到250mL烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解,滴加DIEA(4.4mL,26.64mmol),滴加完毕，搅拌1个小时，再加入丁二酸酐(0.59g,5.85mmol),反应于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×4)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)清洗，浓缩蒸干，得产品：3.6g。
51-34
Figure PCTCN2021107625-appb-000750
将Fmoc-Lys(Fmoc)-OH(5g，8.46mmol，购于伊诺凯)，HBTU(4.8g，12.6mmol)，HOBT(1.7g，12.6mmol)和H-Glu(OBzl)-OBzl·TOsOH(4.22g，8.46mmol，购于Ark Pharm)加入到1000mL烧瓶中，然后加入DMF(200mL)使其溶解，再将反应置于-5℃条件下搅拌约30分钟，接着缓慢滴加DIEA(12.51mL，75.69mmol)，滴加完毕后，反应继续在-5℃搅拌反应1小时，最后转移至室温下搅拌反应过夜。反应结束后，将反应液转移到2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(600mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，水相用乙酸乙酯(200mL×1)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2)，浓缩蒸干，得产品:7.6g。
51-66
Figure PCTCN2021107625-appb-000751
将51-34(1.5g，1.66mmol)和10％Pd/C(70mg)投入氢化反应釜中，再加入DMF(30mL)使之溶解，封闭氢化反应釜，通入氢气，使釜内压力达到1.8MPa，将氢化反应釜置于室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应釜取出，再将反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的砂芯漏斗中，抽滤，用DMF清洗硅藻土3次，得到反应产物溶液。
51-72
Figure PCTCN2021107625-appb-000752
将51-66(1.66mmol)，37-163(1.95g，3.41mmol)，HBTU(1.25g，3.32mmol)和HOBT(0.44g，3.32mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(150mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.64mL，9.96mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，析出固体，过滤，滤饼用二氯甲烷(10mL×2)清洗，真空干燥得产品2.0克g。
51-82
Figure PCTCN2021107625-appb-000753
将51-72(2.0g,1.09mmol)投入250mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)，使其溶解，加入吗啉(2.8mL,32.8mmol)，反应在室温下搅拌1小时，反应结束，加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，析出固体，过滤，滤饼用二氯甲烷(10mL×2)清洗，真空干燥得产品1.0克。
43-184
Figure PCTCN2021107625-appb-000754
将43-183(0.3424g，0.159mmol)，51-82(0.1g，0.0072mmol)，HBTU(0.08g，0.2169mmol)和HOBT(0.029g，0.2169mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(150mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.1mL，0.65mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL×2)清洗，干燥，得产品0.3g，产率75％。
43-186
Figure PCTCN2021107625-appb-000755
将43-184(0.3g，0.053mmol)投入到500mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)使之溶解，在搅拌状态下加入TFA(1mL，14.33mmol)，最后反应烧瓶置于室温下搅拌过夜。反应结束，先将反应液浓缩蒸干除去二氯甲烷，再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼，最后将滤饼置于烘箱中干燥。到产品0.2g，产率83％。
43-187
Figure PCTCN2021107625-appb-000756
将43-186(0.087g，0.019mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(40mL)使之溶解，将反应置于-5℃反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.31mL，1.9mmol)，继续低温下搅拌10分钟后，加入M-SCM-10K(0.45g，0.04mmol，购于键凯)，反应置于室温下避光低速搅拌一周。反应结束后，再加甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(70mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，真空烘箱干燥，得到产品0.44g，产率91％。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.71-8.52(m,4H),8.35-7.66(m,42H),7.417-7.22(m,6H),6.99-6.64(m,15H),4.51-4.03(m,53H),3.86-3.68(m,34H),3.51-3.47(m,1864H),3.01-2.88(m,12H),2.78-2.57(m,10H),2.27–2.02(m,28H),1.91–1.67(m,18H),1.49–1.34(m,27H),1.26–1.07(m,60H).
43-195
Figure PCTCN2021107625-appb-000757
将41-142(0.3g，0.3mmol)，43-187(0.44g，0.017mmol)，HBTU(0.15g，0.408mmol)和HOBT(0.055g，0.408mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(150mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.25mL，1.53mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL×2)清洗，滤饼用二氯甲烷(160mL)和甲醇(40mL)溶解，加入硅胶粉(30g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％三乙胺+5％-10％甲醇/二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩干燥，得产品0.2g。
43-226
Figure PCTCN2021107625-appb-000758
将43-195(0.2g，0.0059mmol)、TBAF(0.44g,1.42mmol，)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入THF(20mL)使其溶解，然后将反应置于室温下搅拌反应过夜。反应完成后，将反应液减压浓缩，再加入DMF(5mL)溶解，加入异丙醇沉降，重复三次，过滤，得固体产物，干法上样，柱层析。用10％-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品0.1g。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.97-8.77(m,14H),8.27-7.84(m,103H),7.75-7.18(m,190H),7.10-6.99(m,16H),6.20-5.86(m,45H),5.49–5.37(m,48H),4.95-4.81(m,33H),4.60-4.40(m,10H),4.26-4.04(m,22H),3.86-3.70(m,24H),3.51-3.47(m,1864H),3.11–2.90(m,54H),2.77-2.62(m,29H),2.41-2.37(m,43H),2.24-2.10(m,120H),1.90-1.59(m,194H),1.46-1.20(m,82H),1.06-0.90(m,114H).
51-103的合成
Figure PCTCN2021107625-appb-000759
51-100
Figure PCTCN2021107625-appb-000760
将43-187(0.535g，0.021mmol)，甘氨酸甲酯盐酸盐(0.047g，0.0378mmol)，HBTU(0.19g，0.504mmol)和HOBT(0.068g，0.504mmol)加入到500mL圆底烧瓶中，用DMF(150mL)使其溶解后，再将反应烧瓶置于-5℃条件下搅拌约30分钟，然后缓慢滴加DIEA(0.249mL，1.512mmol)，滴加完毕后，并将反应烧瓶置于-5℃搅拌3小时。反应结束,加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，出现分层，倒掉上层下层油状物继续加入甲基叔丁基醚(200mL)和正己烷(300mL)，如此重复3次，最后呈少量油状物，加入甲基叔丁基醚(250mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(150mL×2)清洗，滤饼用二氯甲烷(160mL)和甲醇(40mL)溶解，加入硅胶粉(30g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用5％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩干燥，得产品0.5590g。
51-101
Figure PCTCN2021107625-appb-000761
将51-100(0.021mmol)投入到250mL圆底烧瓶中，加入甲醇(80mL)使之溶解，加入水合肼(0.08mL，1.68mmol)，最后反应烧瓶置于室温下搅拌过夜。反应结束，先将反应液浓缩蒸干，再向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降，呈粉末状固体，过滤，用甲基叔丁基醚(60mL)洗涤滤饼，最后将滤饼置于烘箱中干燥。。
51-103
Figure PCTCN2021107625-appb-000762
将51-101(0.021mmol)置于干燥的500mL的圆底烧瓶中，加入无水甲醇溶解，然后加入TFA(0.249mL,3.36mmol)、DOX(0.219g，18mmol)于室温下搅拌反应过夜。反应完成后，加入正己烷(25mL)和甲基叔丁基醚(200mL)沉降，倾倒上清液，再加入正己烷与甲基叔丁基醚沉降，重复3次，抽滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲 烷和甲醇溶解，干法上样，柱层析，用6～10％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集、浓缩、干燥，得到产品：0.2g。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ7.99–7.61(m,121H),6.32–4.81(m,82H),4.65–4.04(m,57H),4.02–3.85(m,65H),3.87–3.60(m,68H),3.50(s,1404H),3.26–2.59(m,95H),2.42–1.31(m,200H),1.23(s,48H),1.20–0.94(m,76H).
实施例2聚乙二醇偶联药物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型的药效试验
1、配制方法
供试品：
1)量取适量的本发明合成的作为对照的聚乙二醇偶联药物如49-166，加入适量的生理盐水，配制成合适浓度的溶液。
2)量取适量的待测聚乙二醇偶联药物如47-122，加入适量的生理盐水，配制成合适浓度的溶液。
阴性对照：直接使用生理盐水。
配制好的供试品和对照品给药前于2～8℃或冰盒保存，给药剩余的供试品和对照品按医疗垃圾处理。
2、细胞及实验动物
人乳腺癌细胞MDA-MB-231：来源于中国医学科学院基础所细胞资源中心，培养条件为RPMI1640+10％FBS，37℃、5％CO 2培养。
动物种属&品系：BALB/C裸鼠
动物等级：SPF级
实验动物来源：北京维通利华实验动物技术有限公司
肿瘤接种时周龄：约4-5周。
肿瘤接种时体重：约15～18g。同性别动物的体重在平均体重的80％～120％之间。
性别与数量：雌性，订购96只小鼠，筛选成模动物48只用于最终实验，剩余动物转交兽医或安乐死。
动物饲养于独立通风系统(IVC)中，每笼最多饲养同组6只动物，SPF级动物房，环境条件控制在室温20～26℃，相对湿度40％～70％，光照12小时明暗交替。在检疫驯养期间和试验期间，每天提供合格的鼠料(生产单位：北京科澳协力饲料有限公司)，动物均自由摄食并自由饮水。
3、模型的建立
复苏MDA-MB-231细胞，进行细胞传代扩增，待扩增至足量细胞数时，收集处于对数生长期的细胞，准备进行细胞接种。
根据实际细胞数，调整细胞浓度在1×10 8个/mL，与基质胶(Matrigel Basement Membrance Matrix，BD公司)按1:1体积混合，得到浓度为5×10 7个/mL的细胞悬液，以0.2mL/只接种于96只小鼠右侧腋窝皮下。在接种后观察肿瘤生长情况，最终筛选得到肿瘤体积为77.30～292.27mm 3的48只成瘤动物用于试验。
4、动物分组和给药剂量
根据瘤体积和体重随机分为7组，其中，1组(阴性对照组，生理盐水)、6组(49-166，48mg/kg)、7组(47-122，51mg/kg)，每组6只。静脉注射，各组在D1、D4、D7、D10、D13、D18、D21、D24给药，D27动物实施安乐死。
5、实验结果
5.1一般临床观察
观察频率及时间：实验期间，所有动物每天进行两次大体观察。
观察内容：包括动物精神状态、行为活动、摄食情况等。
5.2体重
检测动物：所有动物
检测时间：接收后、接种前、分组(即首次给药前)(D1)、以后每周2次、安乐死前称取动物体重。动物发生意外死亡或濒死安乐死时也称重。
5.3瘤径的测量
检测动物：所有动物
检测时间：分组(即首次给药当天为D1)、首次给药后每周2次、安乐死前，游标卡尺测量并记录肿瘤长、短径，计算肿瘤体积。
按照以下公式计算肿瘤体积：
V＝1/2×长径×短径 2
试验期间每天2次观察动物一般临床症状，共进行10次体重和瘤径测量，安乐死后剥取肿瘤，称量肿瘤重量。计算瘤体积、相对肿瘤体积RTV、相对肿瘤增殖率T/C％、瘤重抑制率IR TW％。
6、结果分析与评价
统计分析：本试验使用统计学软件SPSS13.0对数据进行处理，计量资料以平均值±标准误来表示。具体分析过程如下：
用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析，如果ANOVA有统计学意义(P≤0.05)且方差齐性，用Tukey test进行组间比较分析，若方差不齐性，则用Dunnett’s T3test进行组间比较分析。
6.1根据肿瘤体积进行疗效评价
按照以下公式计算相对肿瘤体积(RTV)和相对肿瘤增殖率T/C％：
RTV＝V t/V 0
V t：每天测量肿瘤得到的瘤体积
V 0：初始瘤体积(给药前)
T/C％＝给药组的RTV平均值/对照组的RTV平均值×100％
以给药组相对肿瘤增殖率T/C％≤40％且该组RTV与阴性对照组RTV相比P≤0.05为有效，有肿瘤增长抑制作用；反之，如果T/C％>40％，则为对肿瘤增长无抑制作用。
6.2根据肿瘤重量进行疗效评价
实验结束后，剥离肿瘤结节并进行称重，比较各组间肿瘤重量的差异以进一步计算肿瘤抑制率IR TW，以IR TW≥60％为有效性辅助参考指标，计算公式如下：
IR TW(％)＝(W 模型组-W 给药组)/W 模型组×100％
6.3大体解剖观察
对实验期间死亡动物以及观察期结束后安乐死动物进行大体解剖，对主要脏器进行观察，看是否有肉眼可见明显异常。
6.4照片记录
对安乐死动物及肿瘤进行照相。
具体结果如下：
整个试验过程中，各组动物未见明显异常。各组动物体重试验期间缓慢增长，各供试品组与第1组间未见显著性差异(P>0.05)。
阴性对照组(1组)整个试验中，肿瘤逐渐增长，至试验结束时(D27)，1组平均瘤体积为2962.92±2176.59mm 3，平均RTV为19.14±12.01；6、7组的平均肿瘤体积分别为1690.27±785.04mm 3、1041.24±291.96mm 3，平均RTV分别为13.03±5.43、8.12±2.34。
各组肿瘤增长趋势见图1。
至实验结束时(D27)，6、7组T/C％值分别为68.08％、42.41％，其IR TV％分别为31.92％、57.59％。
试验结束时，动物安乐死后称量瘤重，1、6、7组的平均瘤重分别为2.555±2.207g、 0.990±0.399g、0.544±0.127g。6、7组的IR TW％分别为61.24％、78.71％。
各组肿瘤重量抑制率示意图见图2。
结论：在本实验条件下，49-166在48mg/kg剂量下、47-122在51mg/kg剂量下，尾静脉注射给药对人乳腺癌MDA-MB-231细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的生长均有明显的抑制作用，但47-122抑瘤作用显著优于49-166。
发明人通过以上实验和结果发现，本发明的聚乙二醇偶联药物对皮下移植瘤(例如，人乳腺癌MDA-MB-231细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤)的抗肿瘤作用显著。

Claims (16)

  1. 式(A)所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100001
    其中：
    M选自
    Figure PCTCN2021107625-appb-100002
    Figure PCTCN2021107625-appb-100003
    Figure PCTCN2021107625-appb-100004
    或PEG m，PEG m为单臂或多臂(如四臂、八臂，优选四臂)聚乙二醇链段，PEG m通过羰基与L 1、L 3、L 5或L 6相连，PEG m的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
    j 1、j 2、j 3、j 4各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，优选为0、1、2、3或4，且不同时为0；
    PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 1、L 4、L 5、L 6相连，PEG 1、PEG 2、PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k、10k或40k；
    L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100005
    Figure PCTCN2021107625-appb-100006
    Figure PCTCN2021107625-appb-100007
    L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连，
    各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
    优选地，L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6各自独立地为直接键、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100008
    为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100009
    L 1、L 2、L 3、L 4、L 5、L 6不同时为直接键，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连；
    或者优选地，L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100010
    各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4；
    更优选地，L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100011
    或者优选地，L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100012
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
    更优选地，L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100013
    或者优选地，L 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100014
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4；
    更优选地，L 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100015
    或者优选地，L 4为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100016
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
    更优选地，L 4为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100017
    或者优选地，L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100018
    r 1为1、2、3、4、5或6，r 1优选为1、2、3或4，r 1更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2；
    更优选地，L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100019
    或者优选地，L 6为直接键、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100020
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，r 2为1、2、3、4、5或6，r 2优选为1、2、3或4，r 2更优选为1或2，且L 6为直接键时，PEG 4不存在，V3与M直接相连；
    更优选地，L 6为直接键、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100021
    且L 6为直接键时，PEG 4 不存在，V3与M直接相连；
    V 1为-L 1V-T 1或
    Figure PCTCN2021107625-appb-100022
    V 2为-L 2V-T 2；
    V 3为-P 3、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100023
    P为-L V-T；
    P 3为-L 3V-T 3；
    L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100024
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2；
    优选地，L 1V、L 2V、L 3V各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100025
    T 1、T 2、T 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100026
    Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100027
    r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
    优选地，Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100028
    L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100029
    r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2；
    优选地，L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100030
    T为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100031
    W 1、W 2、W 3各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100032
    Figure PCTCN2021107625-appb-100033
    Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100034
    Figure PCTCN2021107625-appb-100035
    Figure PCTCN2021107625-appb-100036
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，各r 4独立地为1、2、3、4、5或6，各r 4独立地优选为1、2、3或4，各r 4独立地更优选为3或4，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，r 6为1、2、3、4、5或6，r 6优选为2、3、4或5，r 6更优选为3或4；
    优选地，Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100037
    Figure PCTCN2021107625-appb-100038
    Figure PCTCN2021107625-appb-100039
    Q为-N-AC；
    Q1为-N1-AC1；
    Q2为-N2-AC2；
    N、N1、N2各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100040
    G或GFLG；
    AC、AC1、AC2为抗癌药物分子，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT。
  2. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(I)所示结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100041
    其中：
    M选自
    Figure PCTCN2021107625-appb-100042
    j 2为3或4；
    PEG 2为单臂聚乙二醇链段，PEG 2通过羰基与L 4相连，PEG 2的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
    L 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100043
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    优选地，L 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100044
    L 4为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100045
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 4为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100046
    V 2为-L 2V-T 2，
    L 2V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100047
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 2V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100048
    T 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100049
    W 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100050
    Z 3、Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100051
    Figure PCTCN2021107625-appb-100052
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，
    优选地，Z 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100053
    r 3为1或2，r 4为3或4，
    更优选地，Z 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100054
    优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100055
    各r 3独立地为1或2，
    更优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100056
    优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100057
    r 3为1或2，
    更优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100058
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100059
    r 3为1或2，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100060
    Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
    N、N1、N2各自独立地为G或GFLG，优选地，N、N1和N2为GFLG，
    AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为LPT或PCB，更优选地，AC1为LPT，AC和AC2为PCB。
  3. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(II)所示结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100061
    其中：
    M选自
    Figure PCTCN2021107625-appb-100062
    Figure PCTCN2021107625-appb-100063
    或PEG m，PEG m为单臂或多臂(如四臂、八臂，优选四臂)聚乙二醇链段，PEG m通过羰基与L 1相连，PEG m的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
    j 1为3或4；
    PEG 1为单臂聚乙二醇链段，PEG 1通过羰基与L 1相连，PEG 1的数均分子量为5k-40k， 优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k、10k或40k；
    L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100064
    各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    优选地，L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100065
    L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100066
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100067
    V 1为-L 1V-T 1，
    L 1V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100068
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 1V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100069
    T 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100070
    W 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100071
    Figure PCTCN2021107625-appb-100072
    Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100073
    Figure PCTCN2021107625-appb-100074
    Figure PCTCN2021107625-appb-100075
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，r 6为1、2、3、4、5或6，r 6优选为2、3、4或5，r 6更优选为3或4，
    优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100076
    各r 3独立地为1或2，
    更优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100077
    优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100078
    Figure PCTCN2021107625-appb-100079
    各r 3独立地为1或2，r 4为3或4，r 5为5或6，
    更优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100080
    Figure PCTCN2021107625-appb-100081
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100082
    各r 3独立地为1或2，r 6为3或4，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100083
    Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
    N、N1、N2各自独立地为G或GFLG，
    AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT或PCB，更优选地，AC为SB7、NPB或SN38，AC1为NPB或LPT，AC2为PCB。
  4. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(III)所示的结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100084
    其中：
    M为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100085
    PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 5、L 6相连，PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为5k或10k；
    L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100086
    r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100087
    L 6为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100088
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    优选地，L 6为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100089
    V 3为-L 3V-T 3，
    L 3V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100090
    r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 3V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100091
    T 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100092
    W 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100093
    Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100094
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
    优选地，Z 1和Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100095
    各r 3独立地为1或2，
    更优选地，Z 1和Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100096
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100097
    r 3为1或2，r 5为5或6，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100098
    Q为-N-AC，
    N为G、
    Figure PCTCN2021107625-appb-100099
    或GFLG，优选地，N为G或
    Figure PCTCN2021107625-appb-100100
    AC为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC为DOX或PTX。
  5. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(IV)所示结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100101
    其中：
    M为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100102
    PEG 3为单臂聚乙二醇链段，PEG 3通过羰基与L 5相连，PEG 3的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
    L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100103
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    优选地，L 5为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100104
    V 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100105
    或-P 3；
    Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100106
    r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100107
    P 3为-L 3V-T 3，
    L 3V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100108
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 3V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100109
    T 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100110
    W 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100111
    Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100112
    Figure PCTCN2021107625-appb-100113
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
    优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100114
    各r 3独立地为1或2，
    更优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100115
    优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100116
    r 3为1或2，
    更优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100117
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100118
    各r 3独立地为1或2，r 5为5或6，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100119
    Q为-N-AC，Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
    N、N1、N2各自独立地为G、GFLG或
    Figure PCTCN2021107625-appb-100120
    优选地，N1、N2为GFLG，优选地，N为G或
    Figure PCTCN2021107625-appb-100121
    AC、AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC1、AC2各自独立地为PCB或LPT，优选地，AC为PTX或DOX。
  6. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(V)所示结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100122
    其中：
    M为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100123
    PEG 1为单臂聚乙二醇链段，PEG 1通过羰基与L 1相连，PEG 1的数均分子量为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
    L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100124
    r 1为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4，
    优选地，L 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100125
    L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100126
    r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100127
    V 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100128
    Y 1、Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100129
    各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，Y 1、Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100130
    P为-L V-T，
    L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100131
    r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100132
    T为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100133
    W 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100134
    Z 1、Z 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100135
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 4为1、2、3、4、5或6，r 4优选为1、2、3或4，r 4更优选为3或4，
    优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100136
    各r 3独立地为1或2，r 4为3或4，
    更优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100137
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100138
    r 3为1或2，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100139
    Q1为-N1-AC1，Q2为-N2-AC2，
    N1、N2各自独立地为G或GFLG，优选地，N1、N2为GFLG，
    AC1、AC2各自独立地为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC1、AC2各自独立地为PCB或LPT，更优选地，AC1为LPT，AC2为PCB。
  7. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物具有式(VI)所示结构，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100140
    其中：
    M为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100141
    PEG 3、PEG 4为单臂聚乙二醇链段，PEG 3、PEG 4分别通过羰基与L 5、L 6相连，PEG 3、PEG 4的数均分子量各自独立地为5k-40k，优选为5k-10k或10k-40k，更优选为10k；
    L 5、L 6各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100142
    各r 1独立地为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为3或4；r 2为1、2、3、4、5或6，优选为1、2、3或4，更优选为1或2，
    优选地，L 5、L 6各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100143
    V 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100144
    Y 2、Y 1、Y 0各自独立地为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100145
    r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
    优选地，Y 2、Y 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100146
    各r 2独立地为1或2，
    更优选地，Y 2、Y 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100147
    优选地，Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100148
    r 0为5或6，各r 2独立地为1或2，
    更优选地，Y 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100149
    P为-L V-T，
    L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100150
    r 0为1、2、3、4、5或6，r 0优选为3、4、5或6，r 0更优选为5或6，各r 2独立地为1、2、3、4、5或6，各r 2独立地优选为1、2、3或4，各r 2独立地更优选为1或2，
    优选地，L V为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100151
    T为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100152
    W 3为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100153
    Z 2、Z 1、Z 0各自独立地为或
    Figure PCTCN2021107625-appb-100154
    各r 3独立地为1、2、3、4、5或6，各r 3独立地优选为1、2、3或4，各r 3独立地更优选为1或2，r 5为1、2、3、4、5或6，r 5优选为3、4、5或6，r 5更优选为5或6，
    优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100155
    各r 3独立地为1或2，r 5为5或6，
    更优选地，Z 2为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100156
    优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100157
    r 3为1或2，
    更优选地，Z 1为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100158
    优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100159
    各r 3独立地为1或2，
    更优选地，Z 0为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100160
    Q为-N-AC，
    N为
    Figure PCTCN2021107625-appb-100161
    G或GFLG，
    AC为SB7、NPB、SN38、LPT、PCB、DOX、PTX或AXT，优选地，AC为SB7、LPT、PTX、DOX或AXT。
  8. 权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，所述聚乙二醇偶联药物选自：
    Figure PCTCN2021107625-appb-100162
    Figure PCTCN2021107625-appb-100163
    Figure PCTCN2021107625-appb-100164
    Figure PCTCN2021107625-appb-100165
    Figure PCTCN2021107625-appb-100166
    Figure PCTCN2021107625-appb-100167
    Figure PCTCN2021107625-appb-100168
    Figure PCTCN2021107625-appb-100169
    Figure PCTCN2021107625-appb-100170
    Figure PCTCN2021107625-appb-100171
    Figure PCTCN2021107625-appb-100172
    Figure PCTCN2021107625-appb-100173
  9. 中间体，其用于制备权利要求1-8任一项所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，所述中间体选自以下：
    Figure PCTCN2021107625-appb-100174
    Figure PCTCN2021107625-appb-100175
    Figure PCTCN2021107625-appb-100176
    Figure PCTCN2021107625-appb-100177
    Figure PCTCN2021107625-appb-100178
    Figure PCTCN2021107625-appb-100179
    Figure PCTCN2021107625-appb-100180
    Figure PCTCN2021107625-appb-100181
    Figure PCTCN2021107625-appb-100182
    Figure PCTCN2021107625-appb-100183
  10. 制备权利要求2所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
    (1)制备中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100184
    其中，M、L 3、L 4、W 2、j 2如权利要求2所限定，且
    Figure PCTCN2021107625-appb-100185
    的末端带有羧基和氨基；
    制备中间体V 2-H，其中，V 2如权利要求2所限定，且V 2-H的末端带有氨基；
    (2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100186
    发生酰胺化反应，得到中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100187
    (3)使带有氨基的中间体V 2-H与中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100188
    发生酰胺化反应，得到权利要求2所述的聚乙二醇偶联药物。
  11. 制备权利要求3所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
    (1)制备中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100189
    其中，M、L 1、L 2、W 1、j 1如权利要求3所限定，且
    Figure PCTCN2021107625-appb-100190
    的末端带有氨基，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100191
    的末端带有羧基；
    制备中间体V 1-H，其中，V 1如权利要求3所限定，且V 1-H的末端带有氨基；
    (2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100192
    发生酰胺化反应，得到中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100193
    (3)使带有氨基的中间体V 1-H与中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100194
    发生酰胺化反应，得到权利要求3所述的聚乙二醇偶联药物。
  12. 制备权利要求5所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
    (1)制备中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100195
    其中，M、L 5、W 3如权利要求5所限定，且
    Figure PCTCN2021107625-appb-100196
    的末端带有氨基，
    Figure PCTCN2021107625-appb-100197
    的末端带有羧基；
    制备中间体V 3-H，其中，V 3如权利要求5所限定，且V 3-H的末端带有氨基；
    (2)使带有羧基或活化的羧基的PEG与所述中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100198
    发生酰胺化反应，得到中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100199
    (3)使带有氨基的中间体V 3-H与中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100200
    发生酰胺化反应，得到权利要求5所述的聚乙二醇偶联药物。
  13. 制备权利要求6所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
    (1)制备中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100201
    其中，M、L 1、L 2、PEG 1、W 1、Y 1、Y 0、r 2如权利要求6所限定；
    (2)使中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100202
    发生加成反应，得到权利要求6所述的聚乙二醇偶联药物。
  14. 制备权利要求7所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其包括：
    (1)制备中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100203
    Figure PCTCN2021107625-appb-100204
    其中，M、L 5、L 6、PEG 3、PEG 4、W 3、Y 2、Y 1、Y 0、r 0、r 2如权利要求7所限定；
    (2)使中间体
    Figure PCTCN2021107625-appb-100205
    Figure PCTCN2021107625-appb-100206
    与
    Figure PCTCN2021107625-appb-100207
    发生加成反应，得到权利要求7所述的聚乙二醇偶联药物。
  15. 药物组合物，其包含权利要求1-8任一项所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；任选地，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
  16. 权利要求1-8任一项所述的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防疾病的药物中的用途，所述疾病为所述聚乙二醇偶联药物中的活性成分所治疗的疾病；
    优选地，所述疾病为癌症，所述癌症选自：结肠癌、白血病、淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、腺瘤/类癌、肾上腺皮质癌、胰岛细胞癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠直肠癌、皮肤癌、食管癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肝癌、黑色素瘤、卡波氏肉瘤、肾癌、口腔癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺阴茎癌、前列腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴癌、肛门癌、肉瘤，以及所述癌症的转移。
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