WO2021204111A1 - 作为dna-pk抑制剂的氨基嘧啶化合物及其衍生物 - Google Patents

作为dna-pk抑制剂的氨基嘧啶化合物及其衍生物 Download PDF

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WO2021204111A1
WO2021204111A1 PCT/CN2021/085643 CN2021085643W WO2021204111A1 WO 2021204111 A1 WO2021204111 A1 WO 2021204111A1 CN 2021085643 W CN2021085643 W CN 2021085643W WO 2021204111 A1 WO2021204111 A1 WO 2021204111A1
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reaction
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dna
reaction solution
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陈新海
夏尚华
陈兆国
郭祖浩
于衍新
周凯
胡伯羽
张丽
姜奋
王晶晶
胡国平
黎健
陈曙辉
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南京明德新药研发有限公司
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    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom

Definitions

  • the present invention relates to a DNA-PK inhibitor, in particular to a compound represented by formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and its application in the preparation of drugs related to DNA-PK inhibitors.
  • DNA breaks especially double-strand breaks (DSBs) are extremely serious damages that can cause loss of genetic material, gene recombination, and lead to cancer or cell death.
  • Eukaryotic cells have evolved a variety of mechanisms to deal with the serious threats caused by DNA double-strand breaks. This is the DNA damage response mechanism (DDR), which mainly includes DNA damage detection, signal transduction, and damage repair.
  • DDR DNA damage response mechanism
  • DNA double-strand break repair mainly includes homologous end joining (HR) repair and non-homologous end joining (NHEJ) repair. In higher eukaryotes, NHEJ repair, which is preferentially used during the early G1/S phase, is the main mechanism.
  • DDR initial damage factors such as MRN will detect and recognize the damage site, recruit phosphoinositide kinase family members (ATM, ATR, DNA-PK), phosphorylate H2AX to promote the formation of ⁇ H2AX, guide downstream signal transduction and recruit related proteins to complete the receptor. Repair of damaged DNA.
  • DNA-PK catalytic subunit which belongs to the PI3K-related kinase (PIKK) family, mainly targets non-homologous DNA double-strand breaks End join (NHEJ) repair is an important member of DNA damage repair.
  • NHEJ non-homologous DNA double-strand breaks End join
  • the Ku70/Ku80 heterodimer specifically connects to the double-stranded damage through a pre-formed channel, recognizes double-strand breaks and binds to the broken ends separately, and then follows the DNA in an ATP-dependent manner. The strands slid a certain distance to both ends to form a KU-DNA complex and recruit DNA-PKcs to bind to the double-strand break.
  • DNA-damaging chemotherapeutics such as bleomycin, topoisomerase II inhibitors such as etoposide and doxorubicin
  • DNA-PK DNA-damaging chemotherapeutics
  • bleomycin bleomycin
  • topoisomerase II inhibitors such as etoposide and doxorubicin
  • doxorubicin DNA-damaging chemotherapeutics
  • DNA-PK inhibitors can inhibit the activity of DNA-PKcs, thereby greatly reducing tumor DNA repair, inducing cells to enter the apoptosis process, and achieving better therapeutic effects.
  • DNA-PK inhibitors can also be used as single drugs to exert therapeutic effects in tumors with defects in other DNA repair pathways.
  • the DNA-PK small molecule inhibitor of the present invention can not only be used as a single drug to exert a therapeutic effect on tumors with defects in other DNA repair pathways. It can also be used in combination with radiotherapy and chemotherapy drugs to enhance the sensitivity of tumor tissues to radiotherapy and chemotherapy, overcome the problem of drug resistance, and enhance the inhibitory effect on a variety of solid tumors and hematomas. Such compounds have good activity and show excellent effects and functions, and have broad prospects.
  • the invention provides a compound represented by formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • T 1 and T 2 are each independently selected from CH and N;
  • E 1 is selected from -C(R 1 )(R 2 )- and -N(R 3 )-;
  • R 1 and R 2 together with the carbon atoms they are connected to form cyclopentyl, cyclohexyl, piperidinyl and The cyclopentyl, cyclohexyl, piperidinyl and Optionally substituted by one R a;
  • R 3 is selected from 8-oxa-3-azabicyclo[3.2.1]octyl, 6-oxa-3-azabicyclo[3.1.1]heptyl, 3-oxa-8-aza Heterobicyclo[3.2.1]octyl, 5-oxa-8-azaspiro[3.5]nonyl, 4-oxa-7-azaspiro[2.5]octyl and 3-azabicyclo[ 3.1.0] Hexyl;
  • R a is selected from H, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl and butyl ethylene, said C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl And epoxybutyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 R;
  • R is selected from H and F
  • Y 1 is selected from cyclopropyl and C 1-3 alkyl, the C 1-3 alkyl is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 F;
  • Y 2 is selected from F, Cl, Br, I, cyclopropyl and C 1-3 alkyl, said C 1-3 alkyl optionally substituted by OH or 4 or 5 F.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • T 1 and T 2 are each independently selected from CH and N;
  • E 1 is selected from -C(R 1 )(R 2 )- and -N(R 3 )-;
  • R 1 and R 2 together with the carbon atoms they are connected to form cyclopentyl, cyclohexyl, piperidinyl and The cyclopentyl, cyclohexyl, piperidinyl and Optionally substituted by one R a;
  • R 3 is selected from 8-oxa-3-azabicyclo[3.2.1]octyl, 6-oxa-3-azabicyclo[3.1.1]heptyl, 3-oxa-8-aza Heterobicyclo[3.2.1]octyl, 5-oxa-8-azaspiro[3.5]nonyl, 4-oxa-7-azaspiro[2.5]octyl and 3-azabicyclo[ 3.1.0] Hexyl;
  • R a is selected from H, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl and butyl ethylene, said C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl And epoxybutyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 R;
  • R is selected from H and F.
  • R a is selected from H, CH 3 O, CF 3 CH 2, Other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 and R 2 together with the carbon atom to which they are connected together form Said R a is optionally substituted by one, the other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 and R 2 together with the carbon atom to which they are connected together form Said R a is optionally substituted by one, the other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from
  • T 1, T 2, R 3 and R a are as defined in the present invention.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • T 1 and T 2 are each independently selected from CH and N;
  • E 1 is selected from -C(R 1 )(R 2 )- and -N(R 3 )-;
  • R 1 and R 2 together with the carbon atoms they are connected to form cyclohexyl, piperidinyl and The cyclohexyl, piperidinyl and Optionally substituted by one R a;
  • R 3 is selected from 8-oxa-3-azabicyclo[3.2.1]octyl, 3-oxa-8-azabicyclo[3.2.1]octyl, 5-oxa8-aza Spiro[3.5]nonyl, 4-oxa-7-azaspiro[2.5]octyl and 3-azabicyclo[3.1.0]hexyl;
  • R a is selected from H, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl and butyl ethylene, said C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, cyclopropyl And epoxybutyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 R;
  • R is selected from H and F.
  • the present invention also provides a compound represented by the following formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is used in the preparation of drugs related to DNA-PK inhibitors.
  • the above-mentioned DNA-PK inhibitor-related drugs as a single drug exert a therapeutic effect on tumors with defects in other DNA repair pathways.
  • the above-mentioned DNA-PK inhibitor-related drugs are combined with radiochemotherapeutic drugs to enhance the inhibitory effect on solid tumors and hematomas.
  • the compound of the present invention exhibits significant DNA-PK kinase inhibitory activity.
  • the compound of the present invention has a significant anti-tumor effect, and tumor-bearing mice all show good tolerance to the compound of the present invention.
  • the PK results show that the compound of the present invention has excellent pharmacokinetic properties and good brain exposure, and is a good molecule that can be developed for oral administration.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms that are within the scope of reliable medical judgment and are suitable for use in contact with human and animal tissues. , Without excessive toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of the compound of the present invention, which is prepared from a compound with specific substituents discovered in the present invention and a relatively non-toxic acid or base.
  • a base addition salt can be obtained by contacting the compound with a sufficient amount of base in a pure solution or a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salt or similar salts.
  • the acid addition salt can be obtained by contacting the compound with a sufficient amount of acid in a pure solution or a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include inorganic acid salts including, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, hydrogen carbonate, phosphoric acid, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, Hydrogen sulfate, hydroiodic acid, phosphorous acid, etc.; and organic acid salts, the organic acid includes, for example, acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, Similar acids such as fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid and methanesulfonic acid; also include salts of amino acids (such as arginine, etc.) , And salts of organic acids such as glucuronic acid. Certain specific compounds of the present invention contain basic and
  • the pharmaceutically acceptable salt of the present invention can be synthesized from the parent compound containing acid or base by conventional chemical methods. In general, such salts are prepared by reacting these compounds in free acid or base form with a stoichiometric amount of appropriate base or acid in water or organic solvent or a mixture of both.
  • the compounds of the present invention may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereomers Isomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and their racemic mixtures and other mixtures, such as enantiomers or diastereomer-enriched mixtures, all of these mixtures belong to this Within the scope of the invention.
  • Additional asymmetric carbon atoms may be present in substituents such as alkyl groups. All these isomers and their mixtures are included in the scope of the present invention.
  • enantiomer or “optical isomer” refers to stereoisomers that are mirror images of each other.
  • cis-trans isomer or “geometric isomer” is caused by the inability to rotate freely because of double bonds or single bonds of ring-forming carbon atoms.
  • diastereomer refers to a stereoisomer in which the molecule has two or more chiral centers and the relationship between the molecules is non-mirror-image relationship.
  • wedge-shaped solid line keys And wedge-shaped dashed key Represents the absolute configuration of a three-dimensional center, with a straight solid line key And straight dashed key Indicates the relative configuration of the three-dimensional center, using wavy lines Represents a wedge-shaped solid line key Or wedge-shaped dashed key Or use wavy lines Represents a straight solid line key Or straight dashed key
  • the term “enriched in one isomer”, “enriched in isomers”, “enriched in one enantiomer” or “enriched in enantiomers” refers to one of the isomers or pairs of
  • the content of the enantiomer is less than 100%, and the content of the isomer or enantiomer is greater than or equal to 60%, or greater than or equal to 70%, or greater than or equal to 80%, or greater than or equal to 90%, or greater than or equal to 95%, or 96% or greater, or 97% or greater, or 98% or greater, or 99% or greater, or 99.5% or greater, or 99.6% or greater, or 99.7% or greater, or 99.8% or greater, or greater than or equal 99.9%.
  • the term “isomer excess” or “enantiomeric excess” refers to the difference between the relative percentages of two isomers or two enantiomers. For example, if the content of one isomer or enantiomer is 90%, and the content of the other isomer or enantiomer is 10%, the isomer or enantiomer excess (ee value) is 80% .
  • optically active (R)- and (S)-isomers and D and L isomers can be prepared by chiral synthesis or chiral reagents or other conventional techniques. If you want to obtain an enantiomer of a compound of the present invention, it can be prepared by asymmetric synthesis or derivatization with chiral auxiliary agents, in which the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group is cleaved to provide pure The desired enantiomer.
  • the molecule when the molecule contains a basic functional group (such as an amino group) or an acidic functional group (such as a carboxyl group), it forms a diastereomeric salt with an appropriate optically active acid or base, and then passes through a conventional method known in the art The diastereoisomers are resolved, and then the pure enantiomers are recovered.
  • the separation of enantiomers and diastereomers is usually accomplished through the use of chromatography, which uses a chiral stationary phase and is optionally combined with chemical derivatization (for example, the formation of amino groups from amines). Formate).
  • the compound of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes on one or more of the atoms constituting the compound.
  • compounds can be labeled with radioisotopes, such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I), or C-14 ( 14 C).
  • deuterium can be substituted for hydrogen to form deuterated drugs.
  • the bond formed by deuterium and carbon is stronger than the bond formed by ordinary hydrogen and carbon.
  • deuterated drugs can reduce toxic side effects and increase drug stability. , Enhance the efficacy, extend the biological half-life of drugs and other advantages. All changes in the isotopic composition of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included in the scope of the present invention.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specific atom are replaced by a substituent.
  • the substituent may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specific atom is normal and the compound after substitution Is stable.
  • Oxygen substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it can be substituted or unsubstituted. Unless otherwise specified, the type and number of substituents can be arbitrary on the basis that they can be chemically realized.
  • any variable such as R
  • its definition in each case is independent.
  • the group can optionally be substituted with up to two Rs, and R has independent options in each case.
  • combinations of substituents and/or variants thereof are only permitted if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it means that the linking group is a single bond.
  • the substituent can be bonded with any atom on the ring, for example, a structural unit It means that the substituent R can be substituted at any position on the cyclohexyl or cyclohexadiene.
  • substituents do not indicate which atom is connected to the substituted group, such substituents can be bonded via any atom.
  • a pyridyl group can pass through any one of the pyridine ring as a substituent. The carbon atom is attached to the substituted group.
  • the middle linking group L is -MW-, at this time -MW- can be formed by connecting ring A and ring B in the same direction as the reading order from left to right It can also be formed by connecting ring A and ring B in the opposite direction to the reading order from left to right
  • Combinations of the linking groups, substituents, and/or variants thereof are only permitted if such combinations result in stable compounds.
  • any one or more sites of the group can be connected to other groups through chemical bonds.
  • the connection method of the chemical bond is not positioned, and there is a H atom at the connectable site, when the chemical bond is connected, the number of H atoms at the site will correspondingly decrease with the number of chemical bonds connected to become the corresponding valence number ⁇ The group.
  • the chemical bond between the site and other groups can be a straight solid bond Straight dashed key Or wavy line Express.
  • the straight solid bond in -OCH 3 means that it is connected to other groups through the oxygen atom in the group;
  • the straight dashed bond in indicates that the two ends of the nitrogen atom in the group are connected to other groups;
  • the wavy line in indicates that the phenyl group is connected to other groups through the 1 and 2 carbon atoms;
  • C 1-3 alkyl is used to indicate a linear or branched saturated hydrocarbon group composed of 1 to 3 carbon atoms.
  • the C 1-3 alkyl group includes C 1-2 and C 2-3 alkyl groups, etc.; it can be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or multivalent (such as methine) .
  • Example C 1- 3 alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n- propyl and isopropyl) and the like.
  • C 1-3 alkoxy refers to those alkyl groups containing 1 to 3 carbon atoms that are attached to the rest of the molecule through an oxygen atom.
  • the C 1-3 alkoxy group includes C 1-2 , C 2-3 , C 3 and C 2 alkoxy groups and the like.
  • Examples of C 1-3 alkoxy include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (including n-propoxy and isopropoxy), and the like.
  • C n-n+m or C n -C n+m includes any specific case of n to n+m carbons, for example, C 1-12 includes C 1 , C 2 , C 3 , C 4, C 5, C 6, C 7, C 8, C 9, C 10, C 11, and C 12, also including any one of n + m to n ranges, for example C 1- 3 comprises a C 1-12 , C 1-6 , C 1-9 , C 3-6 , C 3-9 , C 3-12 , C 6-9 , C 6-12 , and C 9-12, etc.; similarly, from n to n +m member means that the number of atoms in the ring is from n to n+m, for example, 3-12 membered ring includes 3-membered ring, 4-membered ring, 5-membered ring, 6-membered ring, 7-membered ring, 8-membered ring, 9-membered ring , 10-membered ring, 11-member
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art Equivalent alternatives, preferred implementations include but are not limited to the embodiments of the present invention.
  • the structure of the compound of the present invention can be confirmed by conventional methods well known to those skilled in the art. If the present invention relates to the absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed by conventional technical means in the art.
  • the single crystal X-ray diffraction method uses the Bruker D8 venture diffractometer to collect the diffraction intensity data of the cultured single crystal.
  • the light source is CuK ⁇ radiation
  • the scanning method After scanning and collecting relevant data, the direct method (Shelxs97) is further used to analyze the crystal structure to confirm the absolute configuration.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • eq stands for equivalent
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • DNA stands for deoxyribonucleic acid
  • ATP adenosine triphosphate
  • PEG polyethylene glycol
  • GST glutathion Glycine S transferase
  • Balb/c represents the mouse strain.
  • N,N'-carbonyldiimidazole (1.62g, 10mmol, 2eq) was added to the acetonitrile (20mL) solution of compound 11 (1.28g, 5mmol, 1eq), and the reaction solution was added and reacted at 80°C for 2 hours.
  • N-dimethylformamide (40mL) solution of compound 2g (1.24g, 4.4mmol, 1eq) was added cesium carbonate (2.15g, 6.6mmol, 1.5eq) and methyl iodide (780mg, 5.5mmol, 1.25eq), after adding the reaction solution, react at 21°C for 4 hours.
  • reaction solution was filtered through Celite, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • reaction solution was cooled to 30°C, diluted with ethyl acetate (20 mL), filtered through Celite, and the filter cake was washed with ethyl acetate.
  • the resulting filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • reaction solution is diluted with water (300mL), extracted with dichloromethane (300mL*2), dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, the filtrate is concentrated under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography (pure petroleum ether) to obtain compound 17c .
  • reaction solution was cooled to 30°C, diluted with ethyl acetate (20 mL), filtered through a pad of diatomaceous earth, and the filter cake was washed with ethyl acetate.
  • the resulting filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Experimental example 1 DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) inhibitory activity screening experiment
  • HTRF uniform time-resolved fluorescence
  • the compound of the present invention has significant DNA-PK kinase inhibitory activity.
  • the test compound was mixed with 10% dimethyl sulfoxide/50% polyethylene glycol 200/40% water, vortexed and sonicated to prepare an approximately clear solution of 0.08 mg/mL, which was filtered through a microporous membrane for use.
  • the test compound was mixed with 10% dimethyl sulfoxide/50% polyethylene glycol 200/40% water, vortexed and sonicated to prepare a 0.2 mg/mL approximately clear solution, which was filtered with a microporous membrane for use.
  • IV intravenous injection
  • PO oral administration
  • C 0 instantaneous required concentration after intravenous injection
  • C max the highest blood concentration after administration
  • T max time required to reach peak drug concentration after administration
  • T 1/2 the time required for the blood concentration to drop by half
  • V dss the apparent volume of distribution, which refers to the proportional constant between the amount of the drug in the body and the concentration of the blood when the drug reaches dynamic equilibrium in the body.
  • the compound of the present invention exhibits a longer half-life, lower clearance rate and higher drug exposure, and has better pharmacokinetic properties in vivo.
  • test compound was mixed with 10% dimethyl sulfoxide/50% polyethylene glycol 200/40% water, vortexed and sonicated to prepare a 4 mg/mL homogeneous suspension.
  • SD male rats were selected, and the candidate compound solution was orally administered at a dose of 40 mg/kg.
  • the compound of the present invention exhibits a longer half-life, a lower clearance rate and a higher drug exposure, and has better pharmacokinetic properties in vivo. At the same time, the compound has a better brain exposure.
  • mice Female BALB/c nude mice, 6-8 weeks old, weighing 18-22 grams.
  • NCI-H1703 cells Human non-small cell lung cancer NCI-H1703 cells were cultured in vitro. RPMI1640 medium was supplemented with 10% fetal bovine serum, 100U/mL penicillin and 100 ⁇ g/mL streptomycin, and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37°C. Use pancreatin-EDTA for routine digestion and passage twice a week. When the cell saturation is 80%-90% and the number reaches the requirement, the cells are collected, counted, and inoculated.
  • NCI-H1703 cells (with matrigel, volume ratio 1:1) were subcutaneously inoculated on the right back of each mouse. When the average tumor volume reached about 131mm 3 , group administration was started .
  • the compound was formulated as a 10 mg/mL suspension solution, and the solvent was 0.5% HPMC+1% Tween 80.
  • the tumor diameter was measured with vernier calipers twice a week.
  • TGI percent of tumor growth rate
  • T/C percent of tumor proliferation rate
  • TGI (%) reflects the tumor growth inhibition rate.
  • TGI(%) [1-(Average tumor volume at the end of a certain treatment group-average tumor volume at the start of the treatment group)/(Average tumor volume at the end of treatment in the solvent control group-average tumor volume at the start of treatment in the solvent control group Tumor volume)] ⁇ 100%.
  • the tumor weight will be detected and the T/weight percentage will be calculated.
  • T weight and C weight represent the tumor weights of the administration group and the vehicle control group, respectively.
  • the statistical analysis is based on the RTV data at the end of the experiment using SPSS software for analysis.
  • the treatment group showed the best treatment effect on the 21st day after the administration at the end of the trial, so statistical analysis was performed based on this data to evaluate the differences between the groups.
  • the comparison between two groups is analyzed by T-test, and the comparison between three or more groups is analyzed by one-way ANOVA. If the variance is uniform (the F value is not significantly different), the analysis should be performed by Tukey's method; if the variance is not uniform (There is a significant difference in the F value), using the Games-Howell method to test. p ⁇ 0.05 considered a significant difference. 4.6 Experimental results and conclusions
  • the supplier of the experimental animals used in compound 2 and the blank control was Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Zhejiang Branch Company); e.
  • the supplier of the experimental animals used for compound 1 and its blank control is Shanghai Sipuer-Bikai Laboratory Animal Co., Ltd.
  • the compound of the present invention has a significant anti-tumor effect, and the tumor-bearing mice showed good tolerance to the compound, and the treatment group had no significant weight loss.

Abstract

一种DNA-PK抑制剂，具体公开了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐，及其在制备DNA-PK抑制剂相关药物中的应用。

Description

作为DNA-PK抑制剂的氨基嘧啶化合物及其衍生物
本发明主张如下优先权：
CN202010283554.2，申请日2020年04月10日；
CN202011264387.3，申请日2020年11月12日；
CN202110343826.8，申请日2021年03月30日。
发明领域
本发明涉及DNA-PK抑制剂，具体涉及式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐，及其在制备DNA-PK抑制剂相关药物中的应用。
背景技术
DNA断裂尤其是双链断裂(DSBs)是一种极为严重的损伤，会造成遗传物质的丢失、基因重组，从而导致癌症或细胞死亡。真核细胞进化出了多种机制来应对DNA双链断裂造成的严重威胁，这便是DNA损伤应答机制(DDR)，主要包括DNA损伤的检测、信号传导以及损伤修复。DNA双链断裂修复主要包括同源末端连接(HR)修复和非同源末端连接(NHEJ)修复。在高等真核生物中，主要以优先地在早期G1/S期期间使用的NHEJ修复为主要机制。DDR初期损伤因子如MRN等会检测识别损伤位点，募集膦酯酰肌醇激酶家族成员(ATM、ATR、DNA-PK)，磷酸化H2AX促进γH2AX形成，引导下游信号传导并募集相关蛋白完成受损DNA的修复。
DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-PK catalytic subunit,DNA-PKcs)，属于磷酸肌醇-3-激酶相关蛋白(PI3K-related kinase，PIKK)家族，主要针对DNA双链断裂的非同源末端连接(NHEJ)修复，是DNA损伤修复的重要成员。DNA双链损伤修复时，Ku70/Ku80异源二聚体通过一个预先形成的通道特异性地连接到双链损伤处，识别双链断裂并与断裂端分别结合，然后以ATP依赖的方式沿DNA链分别向两端滑动一段距离，形成KU-DNA复合物并招募DNA-PKcs到双链断裂处与之结合，随后Ku二聚体向内移动，激活DNA-PKcs并使其自身磷酸化，最后，磷酸化的DNA-PKcs引导损伤信号传导并招募DNA末端加工相关蛋白如PNKP、XRCC4、XLF、Pol X和DNA连接酶IV等参与完成双链断裂修复。
目前，肿瘤治疗中常用的DNA损伤性化疗药物(如博来霉素，拓扑异构酶II抑制剂如依托泊苷和多柔比星)和放疗发挥作用的主要机制就是造成DNA分子的致死性的双链断裂，进而诱导肿瘤细胞的死亡。研究表明，经过放化疗治疗的肿瘤组织中均发现DNA-PK的高表达，而DNA-PKcs活性的增加在一定程度上增强了受损DNA的修复，阻止了肿瘤细胞死亡，导致了对放化疗产生耐受。此外，放化疗治疗后肿瘤组织中存活的细胞往往是对治疗不敏感的高DNA-PKcs活性细胞，这也是疗效不好和预后差的原因。通过与放化疗药物联用，DNA-PK抑制剂可以抑制DNA-PKcs活性，从而大大减少肿瘤DNA修复，诱导细胞进入凋亡程序，达到更佳的治疗效果。
ATM在同源末端链接(HR)修复中起到重要作用，当肿瘤细胞因缺陷缺乏ATM时，DNA断裂修复会更加依赖于DNA-PKcs主导的NHEJ修复以使其存活。因此，DNA-PK抑制剂同样可以作为单一药物在具有其他DNA修复途径缺陷时的肿瘤中发挥治疗效果。
本发明的DNA-PK小分子抑制剂，不仅可以作为单一药物在具有其他DNA修复途径缺陷时的肿瘤中发挥治疗效果。也可以通过与放化疗药物联用，增强肿瘤组织对放化疗的敏感性，克服耐药问题，增强对多种实体瘤和血液瘤的抑制作用。此类化合物具有良好的活性，并表现出了优异的效果和作用，具有广阔的前景。
发明内容
本发明提供了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐,
Figure PCTCN2021085643-appb-000001
其中，
T 1、T 2各自独立地选自CH和N；
E 1选自-C(R 1)(R 2)-和-N(R 3)-；
R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成环戊基、环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000002
所述环戊基、环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000003
任选被1个R a取代；
R 3选自8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷基、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、5-氧杂8-氮杂螺[3.5]壬烷基、4-氧杂-7-氮杂螺[2.5]辛烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己烷基；
R a选自H、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基任选被1、2或3个R取代；
R选自H和F；
Y 1选自环丙基和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2、3、4或5个F取代；
Y 2选自F、Cl、Br、I、环丙基和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被OH或1、2、3、4或5个F取代。
本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021085643-appb-000004
其中，
T 1、T 2各自独立地选自CH和N；
E 1选自-C(R 1)(R 2)-和-N(R 3)-；
R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成环戊基、环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000005
所述环戊基、环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000006
任选被1个R a取代；
R 3选自8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷基、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、5-氧杂8-氮杂螺[3.5]壬烷基、4-氧杂-7-氮杂螺[2.5]辛烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己烷基；
R a选自H、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基任选被1、2或3个R取代；
R选自H和F。
本发明的一些方案中，上述R a选自H、CH 3O、CF 3CH 2、
Figure PCTCN2021085643-appb-000007
其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成
Figure PCTCN2021085643-appb-000008
所述
Figure PCTCN2021085643-appb-000009
任选被1个R a取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成
Figure PCTCN2021085643-appb-000010
所述
Figure PCTCN2021085643-appb-000011
任选被1个R a取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成
Figure PCTCN2021085643-appb-000012
Figure PCTCN2021085643-appb-000013
其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 3选自
Figure PCTCN2021085643-appb-000014
其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 3选自
Figure PCTCN2021085643-appb-000015
其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其选自
Figure PCTCN2021085643-appb-000016
其中，T 1、T 2、R 3和R a如本发明所定义。
本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2021085643-appb-000017
其中，
T 1、T 2各自独立地选自CH和N；
E 1选自-C(R 1)(R 2)-和-N(R 3)-；
R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000018
所述环己基、哌啶基和
Figure PCTCN2021085643-appb-000019
任选被1个R a取代；
R 3选自8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、5-氧杂8-氮杂螺[3.5]壬烷基、4-氧杂-7-氮杂螺[2.5]辛烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己烷基；
R a选自H、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基任选被1、2或3个R取代；
R选自H和F。
本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。
本发明还提供了下式所示化合物或其药学上可接受的盐。
Figure PCTCN2021085643-appb-000020
Figure PCTCN2021085643-appb-000021
本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐在制备DNA-PK抑制剂相关药物上的应用。
本发明的一些方案中，上述DNA-PK抑制剂相关药物作为单一药物在具有其他DNA修复途径缺陷的肿瘤中发挥治疗效果。
本发明的一些方案中，上述DNA-PK抑制剂相关药物通过与放化疗药物联用，增强对实体瘤和血液瘤的抑制作用。
技术效果
本发明化合物作为一类DNA-PK抑制剂，展示了显著的DNA-PK激酶抑制活性。本发明化合物具有显著的抑瘤作用，且荷瘤鼠对本发明化合物均显示出良好的耐受性。PK结果显示，本发明的化合物药代动力学性质优良且具有较好的脑部暴露量，是很好的可开发口服给药的分子。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应 或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000022
和楔形虚线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000023
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000024
和直形虚线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000025
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure PCTCN2021085643-appb-000026
表示楔形实线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000027
或楔形虚线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000028
或用波浪线
Figure PCTCN2021085643-appb-000029
表示直形实线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000030
或直形虚线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000031
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％， 或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当一个取代基数量为0时，表示该取代基是不存在的，比如-A-(R) 0表示该结构实际上是-A。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两一个以上原子时，这种取代基可以与这个环上的任意 原子相键合，例如，结构单元
Figure PCTCN2021085643-appb-000032
表示其取代基R可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2021085643-appb-000033
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2021085643-appb-000034
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2021085643-appb-000035
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在H原子时，则连接化学键时，该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000036
直形虚线键
Figure PCTCN2021085643-appb-000037
或波浪线
Figure PCTCN2021085643-appb-000038
表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2021085643-appb-000039
中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；
Figure PCTCN2021085643-appb-000040
中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2021085643-appb-000041
表示该哌啶基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团相连，至少包括
Figure PCTCN2021085643-appb-000042
Figure PCTCN2021085643-appb-000043
这4种连接方式，即使-N-上画出了H原子，但是
Figure PCTCN2021085643-appb-000044
仍包括
Figure PCTCN2021085643-appb-000045
这种连接方式的基团，只是在连接1个化学键时，该位点的的H会对应减少1个变成相应的一价哌啶基。
除非另有规定，术语“C 1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1-12包括C 1- 3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等
除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用
Figure PCTCN2021085643-appb-000046
表示，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2021085643-appb-000047
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：eq代表当量；DMSO代表二甲基亚砜，EDTA代表乙二胺四乙酸，DNA代表脱氧核糖核酸，ATP代表三磷酸腺苷；PEG代表聚乙二醇；GST代表谷胱甘肽S转移酶；Balb/c代表小鼠品系。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用
Figure PCTCN2021085643-appb-000048
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1
Figure PCTCN2021085643-appb-000049
第一步
向化合物1a(2g,9.95mmol,1eq)的乙醇(30mL)溶液中加入乙二醛(2.16g,14.92mmol,1.5eq)(40％水溶液)，加毕，于100℃下反应1小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，过滤，所得固体用乙醇(3mL)洗涤，干燥，得到化合物1c。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.81(d,J＝1.6Hz,1H),8.78(d,J＝1.6Hz,1H),8.35(s,1H),7.97(s,1H),2.65(s,3H)。
第二步
向化合物1c(1.3g,5.83mmol,1eq)的二氧六环(10mL)溶液中加入二苯甲酮亚胺(1.16g,6.41mmol,1.1eq)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(362.88mg,0.582mmol,0.1eq)，醋酸钯(130.84mg,0.582mmol,0.1eq)和碳酸铯(2.85g,8.74mmol,1.5eq)，加毕，在氮气保护条件下于100℃下反应6小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，加乙酸乙酯(20mL)稀释，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物1e。MS:m/z.324.0[M+H] +。
第三步
向化合物1e(1.9g,5.88mmol,1eq)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入10％盐酸(10mL)，加毕在20℃下反应1小时。反应完全后，将反应液加石油醚(20mL)洗涤，水相用碳酸氢钠固体调节pH至8，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，萃取相合并，无水硫酸钠干躁，过滤，滤液减压浓缩得粗品；粗品经在乙酸乙酯/石油醚(1mL:10mL)混合溶液中搅拌(20℃,15分钟)，过滤得化合物1f。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.61(d,J＝2.0Hz,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.15(s,1H),4.19(br s,2H),2.40(s,3H)。
第四步
0℃下，向化合物1g(2.99g,20mmol,1eq,盐酸盐)的乙酸(30mL)和水(9mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(1.52g,22mmol,1.1eq)的水(3mL)溶液，加毕反应液于20℃反应3小时。反应完全后，反应液加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯300mL(100mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物1h。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 5.08(br d,J＝7.03Hz,1H),4.89(br d,J＝6.27Hz,1H),3.77-3.93(m,2H),3.54-3.68(m,2H),2.05-2.22(m,3H),1.78-1.94(m,1H)。
第五步
0℃下，向化合物1h(2.56g,18mmol,1eq)的甲醇(20mL)溶液中依次加入锌粉(4.71g,72mmol,4eq)和乙酸(20mL)，加毕反应液在20℃反应4小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤并用乙酸乙酯(200mL)洗涤，滤液减压浓缩得粗品化合物1i(醋酸盐)。
第六步
0℃下，向化合物1j(6.21g,32mmol,2eq)的二氧六环(150mL)溶液中依次加入化合物1i(3.01g,粗品,1eq，醋酸盐)和三乙胺(8.10g,80mmol,5eq,11.14mL)，加毕反应液于20℃下反应5小时。反应完全后，反应液加入水(100mL)稀释，乙酸乙酯300mL(100mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物1k。
MS:m/z 285.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.29(br s,1H),9.04(s,1H),4.02(d,J＝11.13Hz,2H),3.64(dd,J＝11.32,1.94Hz,2H),3.48(br d,J＝2.88Hz,2H),2.07-2.21(m,4H)。
第七步
向化合物1k(2.03g,6.4mmol,1eq)的乙醇(16mL)和水(4mL)混合溶液中依次加入铁粉(1.79g,32mmol,5eq)和氯化铵(1.71g,32mmol,5eq)，加毕反应液于75℃下反应3小时。反应完全后，反应液冷却至室温并向其中加入乙酸乙酯(300mL)稀释，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物1l。MS:m/z256.0[M+H] +。
第八步
向化合物1l(1.28g,5mmol,1eq)的乙腈(20mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(1.62g,10mmol,2eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩的粗品，先经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:0)纯化，所得产物再于甲醇/二氯甲烷(2mL/10mL)混合溶液中搅拌(25℃，15分钟)，过滤并干燥得化合物1m。
MS:m/z 281.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.63(br s,1H),8.09(s,1H),3.76-3.86(m,4H),3.59(br d,J＝8.63Hz,2H),2.27-2.36(m,2H),1.90-1.99(m,2H)。
第九步
向化合物1m(0.282g,1mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入碳酸铯(0.489g,1.5mmol,1.5eq)和碘甲烷(0.177g,1.25mmol,1.25eq)，加毕反应液于21℃下反应4小时。反应完全后，反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯90mL(30mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干 燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～4:1)纯化得化合物1n。
MS:m/z 295.9[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.99(s,1H),4.10(d,J＝10.51Hz,2H),3.83-3.91(m,2H),3.68(dd,J＝10.63,2.00Hz,2H),3.42(s,3H),2.39-2.47(m,2H),2.12-2.20(m,2H)。
第十步
向化合物1f(30.19mg,189.63μmol,1.1eq)的二氧六环(5mL)溶液中加入化合物1n(50.98mg,172.39μmol,1eq)，碳酸铯(84.25mg,258.59μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(31.25mg,34.48μmol,0.2eq),在氮气保护下换气三次，随后在氮气保护下于100℃反应2小时。反应完全后，反应液冷却到30℃,用乙酸乙酯(10mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩，粗品经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物1。
MS:m/z 419.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.14(s,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.65(d,J＝1.6Hz,1H),7.95(s,1H),7.89(s,1H),7.14(s,1H),4.20(d,J＝10.8Hz,2H),3.95-4.00(m,2H),3.72(d,J＝9.2Hz,2H),3.41(s,3H),2.61(s,3H),2.40-2.50(m,2H),2.10-220(m,2H)。
实施例2
Figure PCTCN2021085643-appb-000050
第一步
0℃下，向化合物2a(4.49g,30mmol,1eq,盐酸盐)的乙酸(50mL)和水(18mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(2.28g,33mmol,1.1eq)的水(4.5mL)溶液，加毕反应液于20℃反应3小时。反应完全后， 反应液加水(50mL)稀释，乙酸乙酯150mL(50mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物2b。MS:m/z.143.0[M+H] +。
第二步
0℃下，向化合物2b(3.70g,26mmol,1eq)的甲醇(20mL)溶液中依次加入锌粉(6.80g,104mmol,4eq)和乙酸(20mL)，加毕反应液在20℃反应4小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤并用乙酸乙酯(200mL)洗涤，滤液减压浓缩得粗品化合物2c(醋酸盐)。
第三步
0℃下，向化合物1j(10.09g,52mmol,2eq)的二氧六环(150mL)溶液中依次加入化合物2c(4.89g,粗品,1eq，醋酸盐)和三乙胺(13.15g,130mmol,5eq,18.09mL)，加毕反应液于20℃下反应5小时。反应完全后，反应液加水(100mL)稀释，乙酸乙酯(100mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物2e。
MS:m/z 285.9[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.05(s,1H)8.97(br s,1H)4.43(br dd,J＝4.44,2.06Hz,2H)2.94-3.06(m,4H)2.19-2.28(m,2H)1.90-2.03(m,2H)。
第四步
向化合物2e(2.43g,8.5mmol,1eq)的乙醇(120mL)和水(30mL)混合溶液中依次加入铁粉(2.37g,42.5mmol,5eq)和氯化铵(2.27g,42.5mmol,5eq)，加毕反应液于75℃下反应3小时。反应完全后，反应液冷却至室温并向其中加入乙酸乙酯(200mL)稀释，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物2f。MS:m/z 256.0[M+H] +。
第五步
向化合物2f(2.17g,8.5mmol,1eq)的乙腈(30mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(2.76g,17mmol,2eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～1:0)纯化得化合物2g。
MS:m/z 281.9[M+H] +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.61(br s,1H),8.12(s,1H),4.38(br d,J＝2.01Hz,2H),3.73(dd,J＝9.91,1.63Hz,2H),2.81(d,J＝9.54Hz,2H),1.99-2.09(m,2H),1.78-1.87(m,2H)。
第六步
向化合物2g(1.24g,4.4mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液中依次加入碳酸铯(2.15g,6.6mmol,1.5eq)和碘甲烷(780mg,5.5mmol,1.25eq)，加毕反应液于21℃下反应4小时。反应完全后，反应液加水(50mL)稀释，乙酸乙酯(60mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0:1～4:1)纯化得化合物2h。
MS:m/z 295.9[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.98-8.05(m,1H),4.45(br d,J＝2.25Hz,2H),3.99(dd,J＝9.69,1.81Hz,2H),3.41(s,3H),2.80(br d,J＝9.51Hz,2H),2.23-2.31(m,2H),1.94-2.04(m,2H)。
第七步
将化合物2h(59.14mg,0.2mmol,1eq)，化合物1f(28.65mg,0.18mmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(36.26mg,0.04mmol,0.2eq)和碳酸铯(130.33mg,0.4mmol,2eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2.5mL)并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经薄层制备色谱(甲醇:二氯甲烷＝1:12)纯化得化合物2。
MS:m/z 419.4[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.23(s,1H),8.74(d,J＝1.76Hz,1H),8.66(d,J＝1.76Hz,1H),7.96(s,1H),7.90(s,1H),7.18(s,1H),4.46-4.54(m,2H),4.04-4.10(m,2H),3.41(s,3H),2.85-2.91(m,2H),2.63(s,3H),2.34-2.42(m,2H),1.99-2.06(m,2H)。
实施例3
Figure PCTCN2021085643-appb-000051
第一步
0℃下，向化合物3a(800mg,6.29mmol,1eq)的乙酸(8mL)和水(3.2mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(477.39mg,6.92mmol,1.1eq)，加毕反应液于20℃反应3小时。反应完全后，反应液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物3b。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.18-4.23(m,2H),3.86(s,1H),3.78-3.83(m,2H),3.53-3.59(m,1H),2.0-2.12(m,3H),1.63-1.95(m,3H)。
第二步
0℃下，向化合物3b(895mg,5.73mmol,1eq)的乙酸(5mL)和甲醇(5mL)混合溶液中加入锌粉(1.5g,22.92mmol,4eq)，加毕反应液在20℃反应1小时。反应完全后，加入乙酸乙酯(100mL)稀释，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物3c(醋酸盐)。
第三步
0℃下，向化合物1j(2.22g,11.44mmol,2eq)的二氧六环(50mL)溶液中依次加入化合物3c(813.37mg,粗品,1eq，醋酸盐)，加毕反应液于20℃下反应1小时。反应完全后，反应液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物3e。
MS:m/z 299.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.07(s,1H),9.03(s,1H),3.80-3.83(m,2H),2.93-2.98(m,4H),2.08-2.22(m,4H),1.83-1.94(m,1H),1.61-1.74(m,1H)。
第四步
向化合物3e(140mg,467.11μmol,1eq)的乙醇(3mL)和水(3mL)混合溶液中依次加入铁粉(130.43mg,2.34mmol,5eq)和氯化铵(124.93mg,2.34mmol,5eq)，加毕反应液于75℃下反应1小时。反应完全后，反应液冷却至室温，用硅藻土过滤并用乙醇(20mL)洗涤，洗涤液减压浓缩得粗品，粗品在二氯甲烷/甲醇(10mL:1mL)混合溶液中搅拌(25℃,15分钟)，过滤并干燥得化合物3f。
第五步
向化合物3f(145mg,537.57μmol,1eq)的乙腈(4mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(174.33mg,1.08mmol,2eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩并经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0:1～1:10)纯化得化合物3g。MS:m/z 295.8[M+H] +。
第六步
向化合物3g(125mg,422.69μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中依次加入碳酸铯(275.44mg,845.38μmol,2eq)和碘甲烷(71.9mg,507.22μmol,1.2eq)，加毕反应液于20℃下反应1小时。反应完全后，加水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0:1～1:10)纯化得化合物3h。
MS:m/z 309.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.02(s,1H),3.83-3.84(m,2H),3.40-3.44(m,7H),2.10-2.24(m,4H),1.81-1.90(m,1H),1.56-1.63(m,1H)。
第七步
将化合物3h(50mg,161.42μmol,1eq)，化合物1f(23.13mg,145.28μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(29.27mg,32.28μmol,0.2eq)和碳酸铯(78.89mg,242.13μmol,1.5eq)置于反应瓶并置换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2mL)并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液减压浓缩并经薄层制备色谱(甲醇:二氯甲烷＝1:20)纯化得化合物3。
MS:m/z 433.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.21(s,1H),8.73(d,J＝1.76Hz,1H),8.66(d,J＝2.01Hz,1H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.17(s,1H),3.87(t,J＝4.77Hz,2H),3.48(s,4H),3.43(s,3H),2.63(s,3H), 2.23-2.35(m,2H),2.11-2.21(m,2H),1.80-1.90(m,1H),1.61-1.71(m,1H)。
实施例4
Figure PCTCN2021085643-appb-000052
第一步
0℃下，向化合物4a(1g,1.29mmol,1eq,盐酸盐)的乙酸(12mL)和水(4mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(507.3mg,7.35mmol,1.1eq)的水(1mL)溶液，加毕反应液于20℃反应4小时。反应完全后，反应液加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物4b。
第二步
0℃下，向化合物4b(860mg,6.05mmol,1eq)的甲醇(5mL)溶液中依次加入锌粉(1.58g,24.2mmol,4eq)和乙酸(5mL)，加毕反应液在20℃下反应4小时。反应完全后，反应液加乙酸乙酯(100mL)稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物4c(醋酸盐)。
第三步
0℃下，向化合物1j(1.75g,9mmol,2eq)的二氧六环(60mL)溶液中加入化合物4c(1.41g,粗品,1eq,醋酸盐)和三乙胺(910.7mg,9mmol,2eq)，加毕反应液于20℃下反应5小时。反应完全后，反应液加水(100mL)稀释，乙酸乙酯(100mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物4e。
MS:m/z 285.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.32(br s,1H),9.07(s,1H),3.90-3.99(m,2H),3.12- 3.22(m,2H),3.03(s,2H),0.89-0.97(m,2H),0.64-0.75(m,2H)。
第四步
向化合物4e(160mg,560.05μmol,1eq)的乙醇(8mL)和水(2mL)混合溶液中依次加入铁粉(156.38mg,2.8mmol,5eq)和氯化铵(149.79mg,2.8mmol,5eq)，加毕反应液于75℃下反应3小时。反应完全后，反应液冷却至室温，经硅藻土过滤并用乙醇(100mL)洗涤，洗涤液减压浓缩得粗品4f。
第五步
向化合物4f(150mg,586.62μmol,1eq)的乙腈(4mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(190.24mg,1.17mmol,2eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩，经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:0)纯化得化合物4g。MS:m/z 281.8[M+H] +。
第六步
向化合物4g(140mg,496.99μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中依次加入碳酸铯(242.89mg,745.48μmol,1.5eq)和碘甲烷(88.18mg,624.23μmol,1.25eq)，加毕反应液于21℃下反应4小时。反应完全后，反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:0)纯化得化合物4h。
MS:m/z 296.0[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.02(s,1H),3.92-4.00(m,2H),3.52-3.64(m,2H),3.39-3.46(m,5H),0.84-0.97(m,2H),0.64-0.71(m,2H)。
第七步
将化合物4h(30mg,101.45μmol,1eq)，化合物1f(14.53mg,91.30μmol,0.9eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(9.29mg,10.14μmol,0.1eq)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11.74mg,20.29μmol,0.2eq)和碳酸铯(49.58mg,152.17μmol,1.5eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2mL)并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤后减压浓缩得粗品，粗品经薄层制备色谱(甲醇:二氯甲烷＝1:10)纯化得化合物4。
MS:m/z 419.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.19(s,1H),8.74(s,1H),8.66(s,1H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.21(s,1H),3.98-4.05(m,2H),3.63-3.72(m,2H),3.45-3.51(m,2H),3.43(s,3H),2.64(s,3H),0.92-0.97(m,2H),0.67-0.77(m,2H)。
实施例5
Figure PCTCN2021085643-appb-000053
第一步
向化合物5a(1.5g,6.75mmol,1eq)的二氧六环(5mL)溶液中加入二苯甲酮亚胺(1.47g,8.11mmol,1.2eq)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(420.57mg,0.675mmol,0.1eq)，醋酸钯(151.64mg,0.675mmol,0.1eq)和碳酸铯(3.08g,9.46mmol,1.5eq)，在氮气保护条件下于100℃下反应16小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，加乙酸乙酯(20mL)稀释,经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物5c。MS:m/z.323.1[M+H] +。
第二步
向化合物5c(2.2g,6.82mmol,1eq)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入10％盐酸(10mL)，加毕在20℃下反应1小时。反应完全后，反应液加石油醚(50mL)洗涤，水相用碳酸氢钠固体调节pH至8，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，萃取相合并，无水硫酸钠干躁，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品在乙酸乙酯/石油醚(1mL:10mL)混合溶液中搅拌(20℃,15分钟)，过滤并干燥得化合物5d。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.63(d,J＝2.8Hz,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(s,1H),7.20-7.25(m,1H),6.92(s,1H),3.93(br s,2H),2.40(s,3H)。
第三步
向化合物5d(30mg,189.63μmol,1.1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物1n(50.98mg,172.39μmol,1eq)，碳酸铯(84.25mg,258.59μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(31.25mg,34.48μmol,0.2eq),加毕在氮气保护下换气三次，然后在氮气保护下100℃下反应2小时。反应完全后，反应液冷却至室温,用乙酸乙酯(10mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩并经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物5。
MS:m/z 418.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.75-8.80(m,2H),8.50(d,J＝8.8Hz,1H),7.92(s,2H),7.30-7.40(m,1H),7.12(s,1H),4.17(d,J＝10.4Hz,2H),3.90-4.00(m,2H),3.71(dd,J＝9.6,1.6Hz,2H),3.40(s,3H),2.58(s,3H),2.40-2.50(m,2H),2.10-220(m,2H)。
实施例6
Figure PCTCN2021085643-appb-000054
第一步
向化合物5d(30mg,189.63μmol,1eq)的二氧六环(5mL)溶液中加入化合物2h(56.08mg,189.63μmol,1eq)，碳酸铯(92.68mg,284.45μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(34.38mg,37.93μmol,0.2eq),在氮气保护下换气三次，然后在氮气保护下100℃下反应3小时。反应完全后，反应液冷却至室温,用乙酸乙酯(10mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩并经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物6。
MS:m/z 418.4[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.96(s,1H),8.75-8.80(m,1H),8.21(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.92(s,1H),7.30-7.38(m,1H),7.19(s,1H),4.50-4.55(m,2H),4.14(d,J＝8.4Hz,2H),3.40(s,3H),2.85-2.95(m,2H),2.60(s,3H),2.30-2.40(m,2H),2.00-2.10(m,2H)。
实施例7
Figure PCTCN2021085643-appb-000055
第一步
将化合物3h(50mg,161.42μmol,1eq)，化合物5d(22.98mg,145.28μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(29.27mg,32.28μmol,0.2eq)和碳酸铯(78.89mg,242.13μmol,1.5eq)置于反应瓶并置换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2mL)并在100℃下反应1.5小时。反应完全后，反应液减压浓缩，随后经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得化合物7。
MS:m/z 432.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.91(s,1H),8.76(dd,J＝4.27,1.51Hz,1H),8.12(br d,J＝8.53Hz,1H),7.97(s,1H),7.94(s,1H),7.33(dd,J＝8.16,4.14Hz,1H),7.16(s,1H),3.88(t,J＝4.77Hz,2H),3.53(s,4H),3.42(s,3H),2.60(s,3H),2.23-2.33(m,2H),2.16-2.23(m,2H),1.85-1.95(m,1H),1.63-1.68(m, 1H)。
实施例8
Figure PCTCN2021085643-appb-000056
第一步
将化合物4h(25mg,84.54μmol,1eq)，化合物5d(12.04mg,76.08μmol,0.9eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(7.74mg,8.45μmol,0.1eq)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(9.78mg,16.91μmol,0.2eq)和碳酸铯(41.32mg,126.81μmol,1.5eq)置于反应瓶并置换三次氮气，随后向混合物中加入2mL无水二氧六环并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液减压浓缩并经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0:1～1:9)纯化得化合物8。
MS:m/z 418.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.92(s,1H),8.73-8.79(m,1H),8.13-8.19(m,1H),7.98(s,1H),7.93(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.17(s,1H),3.99-4.04(m,2H),3.68-3.73(m,2H),3.50-3.59(m,2H),3.42(s,3H),2.61(s,3H),0.92-1.00(m,2H),0.67-0.75(m,2H)。
实施例9
Figure PCTCN2021085643-appb-000057
第一步
向化合物9a(10g,66.15mmol,1eq)的醋酸(30mL)溶液中加入乙酸酐(7.43g,72.77mmol,1.1eq)，在70℃反应3小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，加水(100ml)稀释，过滤，所得固体减压干燥得粗品化合物9b。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 10.83(s,1H),8.50(s,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),2.35(s,3H),2.19(s,3H)。
第二步
0℃下，向化合物9b(11g,56.94mmol,1eq)的浓硫酸(30mL)溶液中加入浓硝酸(7.0g,72.21mmol,5mL,1.27eq)与浓硫酸(5mL)溶液。加毕在0℃下反应2小时。反应完全后，将反应液倒入冰水(200ml)，过滤，所得固体用水(30mL)洗涤，减压干燥得化合物9c。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.29(s,1H),8.59(s,1H),8.57(s,1H),2.60(s,3H),2.20(s,3H)。
第三步
向化合物9c(12g,50.38mmol,1eq)中加入盐酸(60mL,6N)，加毕在100℃下反应2小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，过滤，所得固体用水(30ml)洗涤，减压干燥得化合物9d。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 13.13(br s,1H),8.56(s,1H),7.63(br s,2H),6.68(s,1H),2.50(s,3H)。
第四步
向化合物9d(2g,10.2mmol,1eq)中加入醋酸铵(3.93g,50.98mmol,5eq)和原甲酸三甲酯(32.25g,303.93mmol,33.32mL,30eq),加毕在80℃下反应16小时。反应完全后，反应液冷却10℃，过滤，所得固体用 乙酸乙酯(10mL)洗涤，减压干燥得化合物9e。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.62(br s,1H),8.62(s,1H),8.26(s,1H),7.76(s,1H),2.66(s,3H)。
第五步
向化合物9e(0.4g,1.95mmol,1eq)中加入氯化亚砜(7.87g,66.17mmol,4.8mL,33.94eq)和N,N-二甲基甲酰胺(71.25mg,0.97mmol,75μL,0.5eq)，加毕在80℃反应2小时。反应完全后，反应液冷却到20℃，减压浓缩得粗品化合物9f。
第六步
向化合物9f(0.2g,0.89mmol,1eq)的乙酸乙酯(30mL)溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.23g,1.79mmol,2eq)和干钯碳(50mg,10％)，加毕反应液在20℃下于氢气(15Psi)氛围反应10小时，反应完全后，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经薄层制备色谱(乙酸乙酯:石油醚＝1:0)纯化得化合物9g。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 9.15(s,1H),8.87(s,1H),7.63(s,1H),6.96(s,1H),5.71(s,2H),2.33(s,3H)。
第七步
将化合物1n(50mg,169.08μmol,1eq)，化合物9g(24.22mg,152.17μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(30.65mg,33.82μmol,0.2eq)和碳酸铯(82.63mg,253.61μmol,1.5eq)置于反应瓶并置换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2mL)并在100℃下反应1.5小时。反应完全后，反应液减压浓缩，经两次薄层制备色谱(石油醚:乙酸乙酯＝0:1，二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得化合物9。
MS:m/z 419.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.30(s,1H),9.18(s,1H),9.01(s,1H),7.96(s,1H),7.88(s,1H),7.18(s,1H),4.17(d,J＝10.54Hz,2H),3.91(br s,2H),3.70-3.75(m,2H),3.41(s,3H),2.63(s,3H),2.45-2.50(m,2H),2.13-2.20(m,2H)。
实施例10
Figure PCTCN2021085643-appb-000058
第一步
向化合物9g(26.91mg,169.08μmol,1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物2h(50mg,169.08μmol,1.2eq)，碳酸铯(82.63mg,253.6μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(30.65mg,33.82μmol,0.2eq),加毕在氮气保护下换气三次，然后在 氮气保护下100℃下反应2小时。反应完全后，反应液冷却到20℃,用乙酸乙酯(20mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩并经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得化合物10。
MS:m/z 419.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.38(s,1H),9.17(s,1H),9.12(s,1H),7.97(s,1H),7.86(s,1H),4.45-4.55(m,2H),4.05-4.15(m,2H),3.41(s,3H),2.88(d,J＝9.6Hz,2H),2.63(s,3H),2.30-2.40(m,2H),2.05-2.10(m,2H)。
实施例11
Figure PCTCN2021085643-appb-000059
第一步
0℃下，向化合物11a(1g,8.36mmol,1eq,盐酸盐)的乙酸(10mL)和水(3.5mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(634.66mg,9.20mmol,1.1eq)的水(1mL)溶液，加毕反应液于20℃反应3小时。反应完全后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)淬灭，乙酸乙酯(100mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:4)纯化得化合物11b。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.51(d,J＝12.05Hz,1H),4.31(dd,J＝11.92,4.14Hz,1H),4.08(d,J＝14.4Hz,1H),3.38(ddd,J＝14.31,4.64,1.13Hz,1H),1.57-1.73(m,2H),0.83-0.95(m,1H),0.08-0.20(m,1H)。
第二步
0℃下，向化合物11b(0.73g,6.51mmol,1eq)的乙酸(3mL)和甲醇(3mL)混合溶液中加入锌粉(1.70g,26.04mmol,4eq)，加毕反应液在25℃反应1小时。反应完全后，加入乙酸乙酯(50mL)稀释，反应液 经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得化合物11c。
第三步
0℃下，向化合物1j(4.35g,22.42mmol,1eq)的乙醇(30mL)溶液中依次加入化合物11c(2.2g,22.42mmol,1eq)和二异丙基乙基胺(14.49g,112.08mmol,5eq,19.52mL)，加毕反应液于0℃下反应1小时。反应完全后，加入水(100mL)淬灭，二氯甲烷(100mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:9)纯化得化合物11e。
MS:m/z 255.7[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.03(s,1H),8.99(br s,1H),3.37(d,J＝8.25Hz,2H),3.09(br d,J＝7.88Hz,2H),1.55-1.58(m,2H),0.87(q,J＝4.17Hz,1H),0.58-0.68(m,1H)。
第四步
向化合物11e(100mg,391.14μmol,1eq)的乙醇(2mL)和水(2mL)混合溶液中依次加入铁粉(87.37mg,1.56mmol,4eq)和氯化铵(83.69mg,1.56mmol,4eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液冷却至室温，硅藻土过滤并用乙醇(50mL)洗涤，滤液减压浓缩得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇(50mL:10mL)溶液中搅拌15分钟，过滤并干燥得化合物11f。
第五步
向化合物11f(100mg,443.11μmol,1eq)的乙腈(2mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(71.85mg,443.11μmol,1eq)，加毕反应液于80℃下反应1小时。反应完全后，乙酸乙酯(20mL*2)萃取，水(20mL*2)洗涤，经薄层制备色谱(乙酸乙酯:石油醚＝1:2)纯化得化合物11g。
MS:m/z 252.0[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 8.12(s,1H),3.73(d,J＝7.03Hz,2H),3.11(d,J＝7.78Hz,2H),1.55-1.61(m,2H),0.73-0.77(m,1H),0.57-0.65(m,1H)。
第六步
向化合物11g(20mg,79.47μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中依次加入碳酸铯(51.78mg,158.94μmol,2eq)和碘甲烷(11.28mg,79.47μmol,1eq)，加毕反应液于25℃下反应3小时。反应完全后，加水(50mL)稀释，乙酸乙酯(20mL*2)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物11h。
第七步
将化合物11h(40mg,150.55μmol,1eq)，化合物1f(21.57mg,135.49μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(27.29mg,30.11μmol,0.2eq)和碳酸铯(73.58mg,225.82μmol,1.5eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(2mL)并在100℃下反应1.5小时。反应完全后，反应液减压浓缩，粗品经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1和石油醚:乙酸乙酯＝0:1)纯化得化合物11。
MS:m/z 389.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.19(s,1H),8.74(d,J＝1.76Hz,1H),8.65(d,J＝2.01Hz,1H),7.97(s,1H),7.89(s,1H),7.20(s,1H),3.87-3.95(m,2H),3.41(s,3H),3.28-3.35(m,2H),2.61(s,3H),1.61-1.66(m,2H),1.04-1.10(m,1H),0.68-0.75(m,1H)。
实施例12和13
Figure PCTCN2021085643-appb-000060
第一步
0℃下，向化合物12a(2.30g,15mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(80mL)溶液中加入钠氢(0.78g,19.5mmol,60％纯度,1.3eq)，并在0℃下搅拌0.5小时，随后加入碘甲烷(2.66g,18.74mmol,1.17mL,1.25eq)，加毕，反应液于15℃反应1.5小时。反应完全后，0℃下向反应液中加水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(200mL*3)萃取，饱和食盐水(80mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品12b。MS:m/z.167.8[M+H] +。
第二步
向化合物12b(2.51g,15mmol,1eq)的叔丁醇(90mL)和水(30mL)的混合溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(8.01g,45mmol,3eq)，在15℃下反应2小时。反应完全后，反应液加水(70mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:2)纯化得化合物12c。
MS:m/z.263.8[M+H-Br+2] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.23(s,1H),3.34(s,3H)。
第三步
向化合物12c(1.71g,4mmol,80％纯度,1eq)的四氢呋喃(50mL)溶液中依次加入锌粉(5.23g,80mmol,20eq)和乙酸(4.80g,80mmol,4.58mL,20eq)，反应液于15℃下反应1小时。反应完全后，反应液加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤 液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝3:1)纯化得化合物12d。
第四步
0℃下，向化合物12e(0.83g,6.19mmol,1eq)的四氢呋喃(30mL)溶液中依次加入咪唑(0.926g,13.61mmol,2.2eq)，三苯基膦(3.25g,12.37mmol,2eq)和单质碘(3.14g,12.37mmol,2eq)，反应液先于0℃下反应1小时，然后于15℃下反应5小时。反应完全后，向其中加入饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1:4)纯化得化合物12f。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 3.42(s,3H),3.34-3.39(m,1H),3.17-3.29(m,4H),1.94-2.12(m,4H)。
第五步
向化合物12d(0.138g,0.75mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(25mL)溶液中依次加入碳酸铯(0.977g,3mmol,4eq)和化合物12f(0.796g,4mmol,3eq)，加毕，于50℃反应6小时。反应完全后，反应液加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:3)纯化得化合物12g。MS:m/z 281.8[M+H] +。
第六步
向化合物12g(30mg,106.48μmol,1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物1f(16.95mg,106.48μmol,1.0eq)，碳酸铯(52.04mg,159.72μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(19.31mg,21.3μmol,0.2eq),在氮气保护下换气三次，然后在氮气保护下100℃下反应8小时。反应完全后，反应液冷却到30℃,用乙酸乙酯(20mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩得粗品，粗品先经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，再经制备高效液相色谱(柱子：Xtimate C18100*30mm*3μm:流动相：水(0.225％甲酸)-乙腈；乙腈％:33％-43％)纯化得化合物12和13。
化合物12，保留时间2.76分钟(乙腈/水:10％-80％,7分钟)，MS:m/z 405.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.17(s,1H),8.74(s,1H),8.66(s,1H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.25(s,1H),3.45-3.50(m,1H),3.45(s,3H),3.26(s,3H),2.63(s,3H),2.05-2.20(m,4H),1.80-1.95(m,4H)。
化合物13，保留时间2.85分钟(乙腈/水:10％-80％,7分钟)，MS:m/z 405.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.12(s,1H),8.74(d,J＝1.6Hz,1H),8.66(d,J＝1.6Hz,1H),7.98(s,1H),7.90(s,1H),7.22(s,1H),3.60-3.48(m,1H),3.45(s,3H),3.25(s,3H),2.62(s,3H),2.20-2.30(m,2H),2.05-2.20(m,4H),1.60-1.70(m,2H)。
实施例14
Figure PCTCN2021085643-appb-000061
第一步
0℃下，向化合物14a(20g,190.23mmol,18.35mL,1eq)的无水二氯甲烷(200mL)溶液中依次加入三乙胺(115.50g,1.14mol,158.87mL,6eq)和对甲苯磺酰氯(362.67g,1.90mol,10eq)，加毕在25℃下反应60小时。反应完全后，减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化得化合物14b。MS:m/z.568.0[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 7.74(d,J＝8.3Hz,4H),7.58(d,J＝8.3Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,4H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),4.01(t,J＝5.9Hz,4H),3.30(t,J＝5.9Hz,4H),2.44(s,6H),2.39(s,3H)。
第二步
向化合物14b(10g,17.62mmol,1eq)的丙酮(100mL)溶液中加入碘化钠(13.20g,88.08mmol,5eq)，在70℃下反应20小时。反应完全后，减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:4)纯化得化合物14c。MS:m/z 479.7[M+H] +。
第三步
向化合物12d(345.5mg,1.88mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)溶液中加入碳酸铯(2.45g,7.53mmol,4eq)和化合物14c(2.70g,5.65mmol,3eq)，在50℃下反应15小时。反应完全后，减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝4:1)纯化得化合物14d。MS:m/z 407.0[M+H] +。
第四步
将化合物14d(340mg,835.62μmol,1eq)，化合物1f(119.72mg,752.05μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(151.50mg,167.12μmol,0.2eq)和碳酸铯(544.52mg,1.67mmol,2eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(6mL)并在100℃下反应2.5小时。反应完全后，减压浓缩得粗品，经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得化合物14e。MS:m/z 530.2[M+H] +。
第五步
将化合物14e(120mg,226.58μmol,1eq)溶于溴化氢的乙酸溶液(5mL,33％)，随后滴加苯酚(138.60mg, 1.47mmol,129.54μL,6.5eq)，在20℃下反应6小时。反应完全后，减压浓缩得粗品，粗品在乙酸乙酯(20mL)中搅拌(20℃，15分钟)，过滤干燥得化合物14f。MS:m/z 376.1[M+H] +。
第六步
向化合物14f(30mg,79.91μmol,1eq)的乙腈(1.5mL)溶液中依次加入化合物14g(22.26mg,95.89μmol,1eq)和三乙胺(16.17mg,159.82μmol,22.24μL,2eq)。加毕在20℃下反应18小时。反应完全后，减压浓缩并经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得化合物14。
MS:m/z 458.1[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.20(s,1H),8.73(d,J＝1.76Hz,1H),8.67(d,J＝2.01Hz,1H),8.01(s,1H),7.91(s,1H),7.27(br s,1H),3.23-3.33(m,7H),3.06-3.15(m,2H),2.63(s,3H),2.15(ddd,J＝13.49,9.72,3.89Hz,2H),1.80-1.90(m,2H)。
实施例15
Figure PCTCN2021085643-appb-000062
第一步
向化合物14f(30mg,79.91μmol,1eq)的二氯甲烷(5mL)和乙酸(0.02mL)混合溶液中加入化合物15a(17.28mg,239.73μmol,3eq)，加毕在20℃下反应2小时，后加入醋酸硼氢化钠(50.81mg,239.73μmol,3eq)并在20℃下反应41小时。反应完全后，反应液加入水(1mL)淬灭，减压浓缩并经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得化合物15。
MS:m/z 432.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.07(s,1H),8.71(d,J＝1.76Hz,1H),8.62(d,J＝2.01Hz,1H),7.94(s,1H),7.84(s,1H),7.18(s,1H),4.64(quin,J＝6.53Hz,4H),3.85(quin,J＝6.46Hz,1H),3.20(s,3H),2.76-2.85(m,2H),2.67-2.74(m,2H),2.55(s,3H),2.01-2.13(m,2H),1.75-1.90(m,2H)。
实施例16
Figure PCTCN2021085643-appb-000063
第一步
向化合物14f(30mg,79.91μmol,1eq)的甲醇(1.5mL)溶液中依次加入乙酸(47.99mg,799.10μmol,45.70μL,10eq)和化合物16a(195.01mg,1.12mmol,14eq)，加毕在20℃下反应0.5小时，随后加入氰基硼氢化钠(22.60mg,359.60μmol,4.5eq)并升温至50℃下反应16小时。反应完全后，反应液减压浓缩得粗品，经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得化合物16。
MS:m/z 416.1[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.17(s,1H),8.70(s,1H),8.65(s,1H),8.01(s,1H),7.90(s,1H),7.31(br s,1H),3.10-3.35(m,8H),2.62(s,3H),2.10-2.25(m,2H),1.85-2.00(m,2H),0.50-0.65(m,4H)。
实施例17
Figure PCTCN2021085643-appb-000064
第一步
0℃下，向化合物17a(10g,49.94mmol,9.52mL,1eq)的无水四氢呋喃(200mL)溶液中加入四氢铝锂(5.69g,149.83mmol,3eq)，加毕，反应液转移至30℃下反应3小时。反应完全后，加入四氢呋喃(200mL)稀释并冷却至0℃，向反应液中依次加入水(5.7mL)，20％氢氧化钠溶液(5.7mL)，水(17mL)，随后在室温下搅拌30分钟，过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物17b。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 3.73(d,J＝5.2Hz,4H),2.62(t,J＝5.2Hz,2H),1.90-2.10(m,2H),1.70-1.80(m,4H)。
第二步
0℃下，向咪唑(31.88g,468.33mmol,8eq)和三苯基膦(61.42g,234.16mmol,4eq)的二氯甲烷(300mL)溶液中加入单质碘(59.43g,234.16mmol,47.17mL,4eq)。加毕，在0℃下反应1小时，随后加入化合物 17b(6.8g,58.54mmol,1eq)的二氯甲烷(10mL)溶液。加毕，反应液转移至30℃下反应2小时。反应完全后，反应液加水(300mL)稀释，二氯甲烷(300mL*2)萃取，无水硫酸钠干躁，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(纯石油醚)纯化得化合物17c。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δppm 3.53(s,4H),1.90-2.00(m,4H),1.75-1.85(m,2H)。
第三步
向化合物17c(5g,14.88mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液中加入氰化钾(4.15g,63.73mmol,2.73mL,4.28eq)，加毕，在80℃下反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(80mL*3)萃取，依次用水(80mL*3)和饱和食盐水(80mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物17d。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δppm 2.65(s,4H),2.10-2.20(m,4H),2.00-2.10(m,2H)。
第四步
向化合物17d(2g,14.91mmol,1eq)中加入浓盐酸(10mL)，加毕，在100℃下反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至30℃，过滤，滤饼干燥得化合物17e。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δppm 12.04(br s,2H),2.55-2.60(m,4H),1.90-2.00(m,4H),1.80-1.90(m,2H)。
第五步
0℃下，向化合物17e(1.8g,10.45mmol,9.52mL,1eq)的无水四氢呋喃(200mL)溶液中加入四氢铝锂(1.59g,41.82mmol,4eq)，加毕，反应液转移至30℃反应3小时。反应完全后，加四氢呋喃(200mL)稀释。将反应液冷却至0℃，依次加入水(1.6mL)，20％氢氧化钠溶液(1.6mL)，水(5mL)，加毕于室温搅拌30分钟，过滤，滤液减压浓缩得粗品化合物17f。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δppm 3.65-3.75(m,4H),1.95-2.05(m,2H),1.85-1.95(m,2H),1.75-1.85(m,8H)。
第六步
0℃下，向咪唑(5.29g,77.66mmol,8eq)和三苯基膦(10.19g,38.83mmol,4eq)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入单质碘(9.86g,38.83mmol,7.82mL,4eq)。加毕在0℃下反应1小时。随后向反应液中加入化合物17f(1.4g,9.71mmol,1eq)，加毕转移至30℃下反应2小时。反应完全后，加水(40mL)稀释，二氯甲烷(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经硅胶柱层析(纯石油醚)纯化得化合物17g。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δppm 3.00-3.10(m,4H),2.10-2.20(m,4H),1.85-1.95(m,2H),1.75-1.85(m,4H)。
第七步
向化合物12d(150mg,817.02μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中依次加入化合物17g(594.8mg,1.63mmol,2eq)和碳酸铯(532.4mg,1.63mmol,2eq)，加毕，在100℃下反应16小时。反应完全后，反应液冷却至30℃，加水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，依次用水(50mL*3)和饱和食盐 水(30mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品用薄层制备色谱纯化(甲醇:二氯甲烷＝1:10)得化合物17h。
MS:m/z.291.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δppm 8.01(s,1H),3.23(s,3H),2.00-2.10(m,2H),1.90-2.00(m,8H),1.75-1.85(m,2H),1.60-1.70(m,2H)。
第八步
向化合物17h(21mg,71.97μmol,1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物1f(10.31mg,64.78μmol,0.9eq)，碳酸铯(35.18mg,107.96μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(13.05mg,14.39μmol,0.2eq)，加毕氮气保护下换气三次，在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液冷却至室温，经硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(50mL)洗涤，所得滤液减压浓缩得粗品，经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得化合物17。
MS:m/z 415.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.14(s,1H),8.74(d,J＝2.01Hz,1H),8.66(d,J＝2.01Hz,1H),7.98(s,1H),7.90(s,1H),7.22(s,1H),3.26(s,3H),2.64(s,3H),2.08-2.20(m,2H),1.90-1.98(m,10H),1.64-1.74(m,2H)。
实施例18和19
Figure PCTCN2021085643-appb-000065
第一步
向化合物12g(30mg,106.48μmol,1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物5d(16.85mg,106.48μmol,1.2eq)，碳酸铯(52.04mg,159.72μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(19.31mg,21.3μmol,0.2eq),在氮气保护下换气三次，然后在氮气保护下100℃下反应8小时。反应完全后，反应液冷却到30℃,用乙酸乙酯(20mL)稀释，垫硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩得粗品，先经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，再经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物18和19。
化合物18，R f＝0.19(二氯甲烷:甲醇＝10:1),MS:m/z 404.4[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.78(d,J＝2.8Hz,1H),8.74(s,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.93(s,1H),7.30-7.40(m,1H),7.15(s,1H),3.60-3.68(m,1H),3.41(s,3H),3.25(s,3H),2.59(s,3H),2.22-2.38(m,2H),2.05-2.22(m,4H),1.55-1.60(m,2H)。
化合物19，R f＝0.15(二氯甲烷:甲醇＝10:1),MS:m/z 404.4[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.96(s,1H),8.70-8.75(m,1H),8.32(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.91(s,1H),7.28-7.35(m,1H),7.24(s,1H),3.45-3.55(m,4H),3.27(s,3H),2.60(s,3H),2.15-2.40(m,4H),1.92-2.02(m,2H),1.80-1.90(m,2H)。
实施例20和21
Figure PCTCN2021085643-appb-000066
第一步
向化合物12g(50mg,177.47μmol,1eq)的二氧六环(2mL)溶液中加入化合物9g(28.25mg,177.47μmol,1.0eq)，碳酸铯(86.74mg,266.21μmol,1.5eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(32.18mg,35.49μmol,0.2eq),在氮气保护下换气三次，然后在氮气保护下100℃下反应2小时。反应完全后，反应液冷却到30℃,用乙酸乙酯(20mL)稀释，经硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，所得滤液减压浓缩蒸干溶剂，所得粗品经薄层制备色谱(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物20和化合物21。
化合物20，R f＝0.19(二氯甲烷:甲醇＝10:1),MS:m/z 405.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.27(s,1H),9.18(s,1H),8.93(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.20(s,1H),3.60-3.70(m,1H),3.42(s,3H),3.26(s,3H),2.63(s,3H),2.05-2.35(m,6H),1.60-1.70(m,2H)。
化合物21，R f＝0.15(二氯甲烷:甲醇＝10:1),MS:m/z 405.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.50(s,1H),9.18(s,1H),9.09(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.30(s,1H),3.52(s,3H),3.45-3.50(m,1H),3.27(s,3H),2.64(s,3H),2.15-2.35(m,4H),1.92-2.02(m,2H),1.80-1.90(m,2H)。
实施例22
Figure PCTCN2021085643-appb-000067
第一步
0℃下，向化合物22a(350mg,1.29mmol,1eq,对甲苯磺酸盐)的乙酸(5mL)和水(1mL)混合溶液中缓慢加入亚硝酸钠(97.90mg,1.42mmol,1.1eq)的水(1mL)溶液，加毕反应液于20℃反应3小时。反应完全后，反应液加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯60mL(20mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物22b。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.79-4.87(m,1H),4.68-4.76(m,2H),4.59-4.66(m,1H),4.20(d,J＝15.26Hz,1H),3.61-3.73(m,1H),3.29-3.40(m,1H),1.79(d,J＝9.51Hz,1H)。
第二步
0℃下，向化合物22b(625mg,4.88mmol,1eq)的甲醇(7mL)溶液中依次加入锌粉(1.28g,19.51mmol,4eq)和乙酸(7mL)，加毕反应液在20℃下反应4小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤并用乙酸乙酯(100mL)洗涤，滤液减压浓缩得粗品化合物22c(醋酸盐)。
第三步
0℃下，向化合物1j(1.72g,8.89mmol,2.5eq)的二氧六环(35mL)溶液中加入化合物22c(1.92g,粗品,1eq，醋酸盐)，加毕反应液于20℃下反应1小时。反应完全后，反应液加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0:1～1:1)纯化得化合物22e。MS:m/z 271.9[M+H] +。
第四步
向化合物22e(228mg,839.28μmol,1eq)的乙醇(5mL)和水(5mL)混合溶液中依次加入铁粉(234.35mg,4.2mmol,5eq)和氯化铵(224.47mg,4.2mmol,5eq)，加毕反应液于75℃下反应1小时。反应完全后，反应液冷却至室温，用硅藻土过滤并用乙醇(20mL)洗涤，洗涤液减压浓缩得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇(20mL:2mL)混合溶液中搅拌15分钟，过滤，滤液减压浓缩-得化合物22f。
第五步
向化合物22f(155mg,641.35μmol,1eq)的乙腈(6mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(207.99mg,1.28mmol,2eq)，加毕反应液于80℃下反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩，经柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0:1～1:9)纯化得化合物22g。
MS:m/z 267.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 9.00(s,1H),5.38(d,J＝6.13Hz,2H),4.76(d,J＝10.13Hz,2H),4.04-4.13(m,2H),3.80-3.91(m,1H),3.21(d,J＝8.38Hz,1H)。
第六步
向化合物22g(105mg,392.27μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中依次加入碳酸铯(255.62mg,784.54μmol,2eq)和碘甲烷(0.58g,4.09mmol,1.2eq)，加毕反应液于20℃下反应1小时。反应完全后，反应液加入水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩并经柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0:1～1:9)纯化得化合物22h。
MS:m/z 281.8[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 8.38(s,1H),4.54(d,J＝6.13Hz,2H),3.90(d,J＝10.13Hz,2H),3.35(s,3H),3.23-3.28(m,2H),2.96-3.03(m,1H),2.37(d,J＝8.38Hz,1H)。
第七步
将化合物22h(30mg,106.50μmol,1eq)，化合物1f(15.16mg,95.85μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(19.31mg,21.30μmol,0.2eq)和碳酸铯(69.40mg,212.99μmol,2eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(3mL)并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤后减压浓缩得粗品，经薄层制备色谱(二氯甲烷：甲醇＝15:1)纯化得化合物22。
MS:m/z 405.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 9.21(s,1H),8.74(s,1H),8.66(s,1H),8.01(s,1H),7.89(s,1H),7.26(s,1H),4.67(d,J＝6.0Hz,2H),4.21-4.27(m,2H),3.45-3.50(m,5H),3.19-3.25(m,1H),2.74(d,J＝8.4Hz,1H),2.62(s,3H)。
实施例23
Figure PCTCN2021085643-appb-000068
第一步
将化合物22h(30mg,106.50μmol,1eq)，化合物5d(15.16mg,95.85μmol,0.9eq)，甲磺酸(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(19.31mg,21.30μmol,0.2eq)和碳酸铯(69.40mg,212.99μmol,2eq)置于反应瓶并抽换三次氮气，随后向混合物中加入无水二氧六环(3mL)并在100℃下反应3小时。反应完全后，反应液经硅藻土过滤后减压浓缩得粗品，经薄层制备色谱(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得化合物23。
MS:m/z 404.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.98(s,1H),8.74(s,1H),8.28(d,J＝7.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.92(s,1H),7.30-7.38(m,1H),7.24(s,1H),4.72(d,J＝6.0Hz,2H),4.36(d,J＝10.0Hz,2H),3.42-3.55(m,5H),3.21-3.30(m,1H),2.75(d,J＝8.4Hz,1H),2.60(s,3H)。
生物测试数据：
实验例1：DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)抑制活性筛选实验
本实验测试于Eurofins
实验材料及方法：
人源DNA-PK；Mg/ATP；GST-cMyc-p53；EDTA；Ser15抗体；ATP:10μM。
实验方法(Eurofins Pharma Discovery Service)：
将DNA-PK(h)在含有50nM GST-cMyc-p53和Mg/ATP(根据需要的浓度)的测定缓冲液中温育。通过添加Mg/ATP混合物引发反应。在室温下温育30分钟后，加入含有EDTA的终止溶液终止反应。最后，添加检测缓冲液(含有标记的抗GST单克隆抗体和针对磷酸化p53的铕标记的抗磷酸Ser15抗体)。然后以时间分辨荧光模式读板，并根据公式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620nm)测定均匀时间分辨荧光(HTRF)信号。
实验结果：
表1 DNA-PK激酶活性测试结果
供试品 DNA-PK激酶抑制活IC 50(nM) 供试品 DNA-PK激酶抑制活IC 50(nM)
化合物1 0.8 化合物14 0.5
化合物2 0.7 化合物15 2
化合物3 0.5 化合物16 2
化合物4 0.4 化合物17 1
化合物5 0.4 化合物18 2
化合物6 0.4 化合物19 0.5
化合物9 0.3 化合物20 2
化合物10 0.4 化合物21 0.8
化合物12 9 化合物22 5
化合物13 3 化合物23 1
结论：本发明化合物具有显著的DNA-PK激酶抑制活性。
实验例2：小鼠药代动力学评价
实验方法：
受试化合物与10％二甲基亚砜/50％聚乙二醇200/40％水混合，涡旋并超声，制备得到0.08mg/mL近似澄清溶液，微孔滤膜过滤后备用。选取18至20克的Balb/c雄性小鼠，静脉注射给予候选化合物溶液，剂量为0.4mg/kg。受试化合物与10％二甲基亚砜/50％聚乙二醇200/40％水混合，涡旋并超声，制备得到0.2mg/mL近似澄清溶液，微孔滤膜过滤后备用。选取18至20克的Balb/c雄性小鼠，口服给予候选化合物溶液，剂量为2mg/kg。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。
各参数定义：
IV:静脉注射；PO:口服给药；C 0：静脉注射后瞬时的需要浓度；C max：给药后出现的血药浓度最高值；T max：给药后达到药峰浓度所需的时间；T 1/2：血药浓度下降一半所需的时间；V dss：表观分布容积，指药物在体内达到动态平衡时体内药量与血药浓度的比例常数。Cl：清除率，指单位时间从体内清除的药物表观分布容积数；T last：最后一个检测点的时间；AUC 0-last：药时曲线下面积，指血药浓度曲线对时间轴所包围的面积；F(生物利用度)：药物被吸收进入血液循环的速度和程度的一种量度，是评价药物吸收程度的重要指标。
测试结果见表2。
表2 实施例化合物血浆中的PK参数
Figure PCTCN2021085643-appb-000069
Figure PCTCN2021085643-appb-000070
“--”是指不存在或未获得数据。
结论：本发明化合物展现了较长的半衰期、较低的清除率和较高的药物暴露量，具有较优的体内药物代谢动力学性质。
实验例3：大鼠药代动力学及脑部暴露量评价
实验方法：
受试化合物与10％二甲基亚砜/50％聚乙二醇200/40％水混合，涡旋并超声，制备得到4mg/mL均一混悬液。选取SD雄性大鼠，口服给予候选化合物溶液，剂量40mg/kg。收集一定时间的全血，脑脊液，脑组织，制浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。
测试结果：
实验结果见表3。
表3 化合物血浆、脑脊液，脑组织中的PK测试结果
Figure PCTCN2021085643-appb-000071
ND:未检测。
a:单位nmol/kg；b:单位h*nmol/kg。
结论：本发明化合物展现了较长的半衰期、较低的清除率和较高的药物暴露量，具有较优的体内药物代谢动力学性质，同时，该化合物具有较好的脑部暴露量。
实验例4：人非小细胞肺癌NCI-H1703细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学研究实验目的：研究待测化合物对人小细胞肺癌NCI-H1703细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学
实验动物:雌性BALB/c裸小鼠,6～8周龄，体重18-22克。
实验方法与步骤：
4.1细胞培养
人非小细胞肺癌NCI-H1703细胞体外培养，RPMI1640培养基中加10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，37℃5％CO 2孵箱培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种。
4.2肿瘤细胞接种(肿瘤接种)
将0.2mL(5×10 6个)NCI-H1703细胞(加基质胶，体积比为1:1)皮下接种于每只小鼠的右后背，肿瘤平均体积达到约131mm 3时开始分组给药。
4.3受试物的配制:
化合物配制成10mg/mL的混悬溶液，溶媒为0.5％HPMC+1％Tween 80。
4.4肿瘤测量和实验指标
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％(T RTV：治疗组RTV平均值；C RTV：阴性对照组RTV平均值)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(RTV)，计算公式为RTV＝V t/V 0，其中V 0是分组给药时(即第0天)测量所得肿瘤体积，V t为某一次测量时的肿瘤体积，T RTV与C RTV取同一天数据。
TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。在实验结束后将检测肿瘤重量，并计算T/重量百分比，T重量和C重量分别表示给药组和溶媒对照组的瘤重。
4.5统计分析
统计分析基于试验结束时RTV的数据运用SPSS软件进行分析。治疗组在试验结束时给药后第21天表现出最好的治疗效果，因此基于此数据进行统计学分析评估组间差异。两组间比较用T-test进行分析，三组或多组间比较用one-way ANOVA进行分析，如果方差齐(F值无显著性差异)，应用Tukey‘s法进行分析；如果方差不齐(F值有显著性差异)，应用Games-Howell法进行检验。p<0.05认为有显著性差异。 4.6实验结果和结论
化合物2在100mg/kg剂量下(一天两次给药)的实验结果见表4。化合物1在90mg/kg剂量下(一天两次给药)的实验结果见表5。
注：a.平均值±SEM，n＝6；b.肿瘤生长抑制由T/C和TGI(TGI(％)＝[1-(T 21-T 0)/(V 21-V 0)]×100)计算；c.p值运用one-way ANOVA进行分析肿瘤体积相对值(RTV)所得；d.化合物2及其空白对照所用实验动物的供应商为北京维通利华实验动物技术有限公司(浙江分公司)；e.化合物1及其空白对照所用所用实验动物的供应商为上海西普尔-必凯实验动物有限公司。
表4 化合物2对人肺癌NCI-H1703异种移植瘤模型的抑瘤效果 d
Figure PCTCN2021085643-appb-000072
表5 化合物1对人肺癌NCI-H1703异种移植瘤模型的抑瘤效果 e
Figure PCTCN2021085643-appb-000073
结论：在本实验中，与对照组相比，本发明化合物具有显著的抑瘤作用，且荷瘤鼠对化合物均显示出良好的耐受性，治疗组无明显体重下降。

Claims (11)

  1. 式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2021085643-appb-100001
    其中，
    T 1、T 2各自独立地选自CH和N；
    E 1选自-C(R 1)(R 2)-和-N(R 3)-；
    R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成环戊基、环己基、哌啶基和
    Figure PCTCN2021085643-appb-100002
    所述环戊基、环己基、哌啶基和
    Figure PCTCN2021085643-appb-100003
    任选被1个R a取代；
    R 3选自8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷基、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、5-氧杂8-氮杂螺[3.5]壬烷基、4-氧杂-7-氮杂螺[2.5]辛烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己烷基；
    R a选自H、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、环丙基和环氧丁基任选被1、2或3个R取代；
    R选自H和F；
    Y 1选自环丙基和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2、3、4或5个F取代；
    Y 2选自F、Cl、Br、I、环丙基和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被OH或1、2、3、4或5个F取代。
  2. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2021085643-appb-100004
    其中，T 1、T 2和E 1如权利要求1所定义。
  3. 根据权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R a选自H、CH 3O、CF 3CH 2、
    Figure PCTCN2021085643-appb-100005
    Figure PCTCN2021085643-appb-100006
  4. 根据权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成
    Figure PCTCN2021085643-appb-100007
    所述
    Figure PCTCN2021085643-appb-100008
    任选被1个R a取代。
  5. 根据权利要求1～4任一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1和R 2与它们共同连接的碳原子一起组成
    Figure PCTCN2021085643-appb-100009
  6. 根据权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 3选自
    Figure PCTCN2021085643-appb-100010
    Figure PCTCN2021085643-appb-100011
  7. 根据权利要求1～6任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
    Figure PCTCN2021085643-appb-100012
    其中，T 1、T 2、R 3和R a如权利要求1～6任意一项所定义。
  8. 下式所示化合物或其药学上可接受的盐。
    Figure PCTCN2021085643-appb-100013
    Figure PCTCN2021085643-appb-100014
  9. 根据权利要求1～8任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备DNA-PK抑制剂相关药物上的应用。
  10. 根据权利要求9所述的应用，其中，所述DNA-PK抑制剂相关药物作为单一药物在具有其他DNA修复途径缺陷的肿瘤中发挥治疗效果。
  11. 根据权利要求9所述的应用，所述DNA-PK抑制剂相关药物通过与放化疗药物联用，增强对实体瘤和血液瘤的抑制作用。
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