WO2021149672A1 - 細菌、組成物及びその製造方法、並びにプレバイオティクス組成物 - Google Patents

細菌、組成物及びその製造方法、並びにプレバイオティクス組成物 Download PDF

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WO2021149672A1
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bifidobacterium
milk
nite
present
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PCT/JP2021/001644
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早紀子 原
俊孝 小田巻
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森永乳業株式会社
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
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    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
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    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • the present invention relates to bacteria, compositions and methods for producing them, and prebiotic compositions.
  • the present application claims priority based on Japanese Patent Application No. 2020-007102 filed in Japan on January 20, 2020, the contents of which are incorporated herein by reference.
  • probiotics aimed at suppressing the outbreak of diseases or promoting health by actively ingesting bacteria that have a positive effect on animals (hereinafter, also referred to as "good bacteria") and adjusting the intestinal environment.
  • prebiotics such as ingredients that support the growth of good bacteria
  • Probiotics refer to bacteria that have a beneficial effect in the intestine
  • prebiotics refer to substances that serve as a selective nutrient source for these probiotics and promote their growth. It is known that prebiotics have beneficial effects on human health such as lactic acid bacteria / bifidobacteria bacterial growth promoting action, intestinal regulating action, and preventive / ameliorating action on inflammatory bowel disease.
  • Human milk oligosaccharides (hereinafter, also referred to as "HMOs") are contained in breast milk at 10 to 20 g / L, and are said to be a mixture of 130 or more types of oligosaccharides. These structures have 13 types of core structures with fucose and sialic acid added. In human milk, the proportion of fucosylated neutral sugar is high, and 2'-fucosyl lactose, lacto-N-fucopentaose I, lacto-N-difucohexaose I and lacto-N-tetraose are typical. These four types of oligosaccharides alone account for 1/3 to 1/4 of the total human milk oligosaccharides.
  • Oligosaccharides containing lacto-N-biose are referred to as type I, and oligosaccharides containing N-acetyllactosamine (LacNAc) are referred to as type II.
  • type I lacto-N-tetraose and lacto-N-fucopentaose I are higher in content than type II lacto-N-neotetraose and lacto-N-fucopentaose III.
  • the coexistence of type I and type II, and the priority of type I are distinctive features of human milk oligosaccharides that are different from other milk oligosaccharides (Non-Patent Documents 1 and 2).
  • 2'-FL and LNT which are HMOs contained in breast milk, have bifidobacteria growth activity.
  • 2'-FL and LNT are known to act as growth factors for bifidobacteria by being selectively used by bifidobacteria, and are important for the formation of bifidobacteria-dominant intestinal flora.
  • HMOs can be synthesized and can be used industrially (Patent Document 1).
  • Bifidobacterium metabolizes some HMOs using the GNB / LNB pathway specific to bifidobacteria. This pathway is present in many of the species commonly found in the human intestine, but not in most of the bifidobacteria commonly found in the intestines of non-human animals and insects.
  • Bifidobacterium longum subspecies longum which is a bifidobacteria commonly found in infants, and bifidobacteria longum can grow by using HMOs as a single carbon source.
  • Typical examples are four bacterial species, Bifidobacterium longum subspecies infantis, Bifidobacterium breve, and Bifidobacterium bifidum.
  • Bifidobacterium longum subspecies infantis Bifidobacterium breve
  • Bifidobacterium bifidum Bifidobacterium bifidum.
  • bacteria that have no or low ability to assimilate HMOs While bifidobacteria longum subspecies infantis and bifidobacteria.
  • bacteria that have assimilation properties for two or more types of HMOs such as bifidobacteria.
  • An object of the present invention is to provide a novel Bifidobacterium bacterium having the ability to assimilate two or more kinds of HMOs.
  • At least one bacterium selected from the following (a) to (c) is provided.
  • Bacteria selected from (a) to (c) have the ability to assimilate 2'-fucosyl lactose and / or 3'-sialyl lactose and lacto-N-tetraose.
  • the present invention then provides a composition comprising at least one bacterium selected from the above (a)-(c).
  • the composition according to the present invention can be a probiotic composition.
  • the composition according to the present invention can be used for at least one application selected from the group consisting of infants, adults and the elderly.
  • the composition according to the present invention can be at least one composition selected from the group consisting of an intestinal regulating composition, a food and drink composition and a nutritional composition.
  • the composition according to the present invention may further contain 2'-fucosyl lactose and / or both of 3'-sialyl lactose and lacto-N-tetraose.
  • a prebiotic composition used for promoting the growth of at least one bacterium selected from the following (a) to (c), and the above composition is 2'-fucosyllactose.
  • a prebiotic composition comprising 3'-sialyl lactose and / or both of lacto-N-tetraose.
  • B Bifidobacterium Longum Subspecies Infantis
  • B Bifidobacterium Bifidum
  • C Bifidobacterium Bifidum (NITE BP-0367)
  • the present invention further provides a method for producing a composition containing at least one bacterium selected from the following (a) to (c).
  • a composition containing at least one bacterium selected from the following (a) to (c).
  • the novel Bifidobacterium bacterium according to the present invention is at least one type of bacterium selected from the above (a) to (c), and can exert assimilation ability against two or more types of HMOs. can. Specifically, 2'-fucosyl lactose (hereinafter, also referred to as "2'-FL”), 3'-sialyl lactose (hereinafter, also referred to as "3'-SL”) and lacto-N-tetraose (hereinafter, also referred to as "3'-SL”). Hereinafter, it also has the ability to assimilate either one or both of "LNT”). Therefore, the novel Bifidobacterium bacterium according to the present invention can be easily propagated in the intestine by using either or both of 2'-FL and 3'-SL and LNT. ..
  • Bifidobacterium spp. Have been reported to have various physiological functions, which are reported to be due to substances that grow and produce in the intestine (for example, acetic acid). Therefore, the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention is also highly safe and can be expected to be effective by the generally-called Bifidobacterium genus bacterium in a wide range of age groups. Therefore, the bacterium of the genus Bifidobacterium of the present invention can be used in a wide range of compositions (for foods and drinks, functional foods, pharmaceuticals, feeds, etc.).
  • the bacterium of the genus Bifidobacterium of the present invention can be expected to have a probiotic effect, it should be used for the purpose of improving health, improving eating habits, improving the intestinal environment, or preventing / treating intestinal infection. Is also possible.
  • each bacterium will be described in detail.
  • Bifidobacterium Longum Subspecies Infantis (NITE BP-03068) Bifidobacterium longum subspecies infantis (NITE BP-03068) is also referred to as 2'-FL, 3'-fucosyllactoce (hereinafter, also referred to as "3'-FL"), as shown in Examples described later. ), LNT, and lacto-N-neotetraose (hereinafter, also referred to as “LNnT”) have an assimilation ability of OD 0.3 or more in the ⁇ method for determining assimilation of sugar source> described later. Yes and excellent.
  • Bifidobacterium longum subspecies infantis (NITE BP-03068) is a novel bifidobacteria longum subspecies infantis, which is a novel strain based on the following mycological properties and characteristics.
  • NPMD Patent Microorganisms Depositary Center
  • the strain is generally available from the above storage institutions.
  • "Bifidobacterium infantis” is reclassified as "Bifidobacterium longum subspecies infantis” and has a synonym.
  • Bifidobacterium Bifidum (NITE BP-03058) Bifidobacterium bifidam (NITE BP-03058) is a 2'-FL, 3'-FL, 3'-SL, 6'-sialyl lactose (hereinafter, "6'-SL") as shown in Examples described later. ”), LNT, and LNnT have excellent assimilation abilities of 0.3 or more, respectively, in the ⁇ method for determining assimilation of sugar source> described later.
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-03058) is a novel bifidobacteria bifidam, and as a new strain based on the following mycological properties and characteristics, the National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) (Address: 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan 292-0818) Internationally deposited as a Bifidobacterium bifidum (trust number: NITE BP-03058) strain on November 8, 2019. Was done. The strain is generally available from the above storage institutions.
  • Bifidobacterium Bifidum (NITE BP-0367) Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) has the ability to assimilate 2'-FL, 3'-FL, 3'-SL, 6'-SL, LNT, and LNnT, as shown in Examples described later.
  • the OD is 0.3 or more, which is excellent.
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) is a novel bifidobacteria bifidam, and as a new strain based on the following mycological properties and characteristics, the National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) (Address: 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan 292-0818) Internationally deposited as a Bifidobacterium bifidum (trust number: NITE BP-0367) strain on November 20, 2019. Was done. The strain is generally available from the above storage institutions.
  • the present invention it is also possible to use a strain having substantially the same quality as each strain described above.
  • the strain substantially the same as each strain according to the present invention is, for example, a bacterium of the same genus, and the base sequence of the 16S rRNA gene is preferably 99.9% of the base sequence of the 16S rRNA gene of each of these bacteria. As described above, it is more preferably a strain having 100% homology and preferably having the same mycological properties as each of these bacteria.
  • the bifidobacteria have properties that can achieve the object of the present invention (for example, properties capable of assimilating either or both of 2'-FL and 3'-SL and LNT).
  • Mutant strains of genus bacteria can also be used.
  • the mutant strain has the same mycological properties as the above-mentioned Bifidobacterium genus bacterium, and is equal to or higher than the above-mentioned Bifidobacterium genus bacterium, 2'-FL, and 3'-SL and LNT.
  • Bacteria having the ability to assimilate either or both of the above are preferable.
  • a mutant strain has "the ability to assimilate 2'-FL and / or 3'-SL and LNT equal to or higher than the above-mentioned Bifidobacterium bacterium" will be described later, for example. It can be confirmed by the method of the example.
  • Such a mutant strain may be constructed by artificially introducing a mutation into the above-mentioned Bifidobacterium genus bacterium. Further, the mutation may be introduced into the bacterium by treatment using a mutagen such as UV to construct the bacterium, or the mutation may be introduced into the strain by various genetic manipulation methods to construct the strain.
  • strain specified by the above-exemplified strain name is not limited to the strain itself that has been deposited and registered with a predetermined institution under the strain name (hereinafter, also referred to as "deposited strain” for convenience of explanation).
  • Strains substantially equivalent thereto also referred to as “derivative strain” or “inducible strain” are also included (the same applies to the following strains).
  • "a strain substantially equivalent to the above-mentioned deposited strain” means a strain that belongs to the same species as the above-mentioned deposited strain and can obtain the characteristics of the present invention equal to or higher than that of the Deposited Strain.
  • the strain substantially equivalent to the deposited strain may be, for example, a derivative strain having the deposited strain as a parent strain.
  • Derivative strains include strains bred from the deposited strain or strains naturally occurring from the deposited strain.
  • strains and derivatives examples include the following strains.
  • the turbidity (OD600) was measured 16 hours after culturing, and the value obtained by subtracting the turbidity of the control in which the medium not inoculated with the strain was similarly cultured was compared with the following criteria to determine the presence or absence of assimilation and the assimilation ability. Determine the degree.
  • OD600 is 0.3 or more "good assimilation", 0.4 or more “better assimilation”, and 0.5 or more “even better assimilation”. "Yes” and 0.6 or more are “very good assimilation”.
  • Each strain according to the present invention can be grown, for example, by culturing the strain.
  • the method for culturing is not particularly limited as long as the bacterium of the genus Bifidobacterium of the present invention can grow, and the method usually used for culturing the bacterium of the genus Bifidobacterium can be appropriately modified and used as necessary.
  • the culture temperature may be 30 to 50 ° C, preferably 35 to 45 ° C.
  • the culture is preferably carried out under anaerobic conditions, and for example, the culture can be carried out while aerating an anaerobic gas such as carbon dioxide.
  • the cells may be cultured under microaerobic conditions such as liquid static culture.
  • the medium for culturing the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention is not particularly limited, and a medium usually used for culturing the Bifidobacterium genus bacterium can be appropriately modified and used as necessary. That is, as carbon sources other than various HMOs, for example, saccharides such as galactose, glucose, fructose, mannose, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, starch hydrolysate, and waste sugar honey can be used depending on the assimilation property. ..
  • ammonium salts such as ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride or ammonium nitrate or nitrates
  • inorganic salts for example, sodium chloride, potassium chloride, potassium sulfate, magnesium sulfate, calcium chloride, calcium nitrate, manganese chloride or ferrous sulfate
  • organic components such as peptone, soybean flour, defatted soybean meal, meat extract or yeast extract may be used.
  • MRS medium can be used as the prepared medium.
  • Preferred assimilation components of the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention include 2'-FL, 3'-SL and LNT, and preferably contain at least 2'-FL, for the assimilation ability of each strain. It is more preferred to further include either or both of 3'-SL and LNT, depending on the situation.
  • various HMOs such as 3'-FL, 6'-SL and LNnT can be included depending on the assimilation ability of each strain.
  • the 2'-FL used in the present invention has a growth promoting effect on the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention. Further, by combining 2'-FL and either one or both of 3'-SL and LNT depending on the assimilation ability of each strain, the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention can be more stably obtained. It can exert a growth promoting effect. Furthermore, by combining various HMOs such as 3'-FL, 6'-SL and LNnT according to the assimilation ability of each strain, the growth promoting action of the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention is more stably exhibited. Can be made to.
  • HMOs used as assimilation components in the present invention may be commercially available products, may be prepared from milk, or may be obtained by a known method such as organic synthesis or enzyme treatment.
  • milk containing various HMOs for example, breast milk, powdered milk, milk or dairy products
  • milk containing various HMOs for example, breast milk, powdered milk, milk or dairy products
  • a composition in which various HMOs are blended with milk for example, milk, powdered milk or infant formula
  • milk containing HMOs for example, milk, powdered milk or infant formula
  • the HMOs that can be used as assimilation components in the present invention preferably contain 2'-FL, and may further contain either or both of 3'-SL and LNT depending on the assimilation ability of each strain. More preferred. In addition, it is more preferable to further contain 3'-FL, 6'-SL and LNnT depending on the assimilation ability of each strain.
  • generally HMOs include, for example, 3-difucosyl lactose, 3-fucosyl-3'-sialyl lactose, lacto-N-fucopentaose I, lacto-N-fucopentaose II, lacto-N.
  • oligosaccharide of the above HMOs can be obtained by a known production method.
  • at least one human milk oligosaccharide selected from the group consisting of these can also be used.
  • Prebiotics for promoting the growth of Bifidobacterium genus bacteria of the present invention One or both of the above-mentioned 2'-FL and 3'-SL and LNT have a growth promoting effect on the bifidobacteria genus bacteria shown in the above (a) to (c), and are prebiotics. Can be used as a tics. Further, various HMOs such as 3'-FL, 6'-SL and LNnT can be used alone or in combination of two or more depending on the assimilation ability of each strain. In addition, any component suitable for various uses can be appropriately used, and the product can be manufactured by a known manufacturing method suitable for each use.
  • HMOs such as 2'-FL, 3'-SL, LNT, 3'-FL, 6'-SL and LNnT in the prebiotic composition of the present invention are described in the above (a) to With respect to 100 parts by mass of each Bifidobacterium bacterium shown in (c), 1 to 1,000,000 parts by mass is preferable, and 10 to 10,000 parts by mass is more preferable.
  • composition of the present invention is meant to include a probiotic composition, a food and drink composition, a pharmaceutical composition, and the like. Further, the composition of the present invention is preferably a probiotic composition.
  • composition containing each of the Bifidobacterium spp. Shown in (a) to (c) above may be used for human or non-human animals (preferably mammals) to be applied, and humans or pets are preferable. , Humans are more preferred.
  • the subject of application of the present invention is not particularly limited as long as it desires a probiotic effect, and examples thereof include infants, children, adults, healthy persons, middle-aged and elderly people, elderly people, and persons with poor intestinal environment. Be done. Of these, the present invention is preferably used for at least one application selected from the group consisting of infants, adults and the elderly.
  • each of the Bifidobacterium spp. Used in the present inventions (a) to (c) is derived from humans, it has few side effects and is highly safe, so that it can be continuously ingested for a long period of time. Is. In addition, it can be used for a wide range of products such as pharmaceuticals and foods and drinks.
  • the compositions of the present invention can also be effectively used for symptoms or diseases that can be prevented, ameliorated or treated by probiotics.
  • each Bifidobacterium bacterium shown in the above (a) to (c) can be included in the probiotic composition as an active ingredient, and also shown in the above (a) to (c).
  • Each bifidobacteria can also be used for the production of these various formulations or compositions.
  • each of the bacteria of the genus Bifidobacterium shown in (a) to (c) above can also be used as a bacterium for probiotics.
  • the Bifidobacterium genus bacterium of the present invention can be used as it is.
  • the bacterium of the genus Bifidobacterium of the present invention can be mixed and used together with a usual carrier or diluent which is physiologically, pharmaceuticalally or food and drink acceptable.
  • each of the Bifidobacterium spp. Shown in (a) to (c) above is preferably taken for at least one week, more preferably for at least four consecutive weeks, and to be taken daily. More preferred.
  • each Bifidobacterium genus bacterium shown in (a) to (c) above is not particularly limited because it is highly safe, but for example, 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 CFU / kg body weight / day.
  • 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 CFU / kg body weight / day is more preferred, and 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 CFU / kg body weight / day is even more preferred.
  • the amount (dose) used per individual (Body weight) is preferably 10 7 to 10 14 CFU / day, more preferably 10 8 to 10 13 CFU / day, and 10 9 to 10 12 CFU / day. Is even more preferable.
  • CFU means a colony forming unit and represents a colony forming unit. If the bacterium is dead, the CFU can be replaced with individual cells.
  • the amount of each Bifidobacterium genus bacterium shown in (a) to (c) above is preferably 0.01 to 100 mL / kg body weight / day, and 0.1 to 10 mL / kg body weight / day. Is more preferable.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it contains the bacteria of the genus Bifidobacterium shown in (a) to (c) above.
  • the pharmaceutical composition can also be used as an intestinal regulating composition or the like containing each of the bifidobacteria genus bacteria shown in (a) to (c) above.
  • the bacteria of the genus Bifidobacterium shown in the above (a) to (c) may be used as they are, and a physiologically acceptable liquid or solid pharmaceutical carrier is blended and prepared. It may be used as a product.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains each of the Bifidobacterium genus bacteria shown in (a) to (c) above, which can be obtained from the human intestine as an ingredient of the oral composition, as an active ingredient, various diseases. It can be safely administered to patients suffering from.
  • Bifidobacteria are also present in the intestines of animals, it is expected that the present invention is unlikely to cause side effects even when continuously administered for a long period of time. Bifidobacterium can also be safely administered to infants and children. Therefore, the present invention is also suitable for the prevention, amelioration and / or treatment of diseases or symptoms thereof for infants and children.
  • Non-therapeutic purpose is a concept that does not include medical treatment, that is, treatment of the human body by treatment. For example, health promotion, cosmetology, etc. can be mentioned.
  • “Amelioration” means improvement of a disease, symptom or condition; prevention, delay of exacerbation of the disease, symptom or condition; reversal, prevention or delay of progression of the disease or symptom.
  • "Prevention” means the prevention or delay of the onset of a disease or symptom in the subject of application, or the reduction of the risk of the disease or symptom of the subject of application.
  • the dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and specifically, tablets, pills, powders, liquids, suspensions, emulsions, granules, capsules, syrups, suppositories, injections, etc. Examples thereof include ointments, patches, eye drops, and nasal drops.
  • additives such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, diluents, surfactants or solvents for injections, which are usually used as pharmaceutical carriers. Can be used.
  • components such as excipients, pH adjusters, colorants and flavoring agents usually used in the formulation can be used in the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention contains components having preventive, ameliorating and / or therapeutic effects on known or future diseases or symptoms related to the present invention. Can also be used.
  • the formulation can be carried out by a known method as appropriate depending on the dosage form. At the time of formulation, a formulation carrier may be blended and formulated as appropriate.
  • each bifidobacteria shown in (a) to (c) above in the pharmaceutical composition of the present invention includes dosage form, usage, age, sex of patient, type of disease, degree of disease, and others. Although it is appropriately set according to the above conditions, it is usually preferably in the range of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g or 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / mL, and 1 ⁇ 10 7 More preferably, it is in the range of ⁇ 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ 10 7 ⁇ 1 ⁇ 10 11 cfu / mL.
  • the administration time of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and the administration time can be appropriately selected according to the treatment method for the target symptom or disease. In addition, it may be administered prophylactically or may be used for maintenance therapy. Moreover, it is preferable that the administration form is determined according to the formulation form, the age, sex, other conditions of the patient, the degree of symptoms of the patient, and the like. In any case, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered once a day or in a plurality of times, or may be administered once every few days or weeks.
  • the food or drink composition of the present invention may be produced by adding each of the bifidobacteria bacteria shown in (a) to (c) above to known foods and drinks, or the above (a) to (c). ) Can be mixed with the raw materials of foods and drinks to produce a new food and drink composition.
  • the food and drink composition of the present invention is not particularly limited as long as it contains the Bifidobacterium spp. Beverages shown in the above (a) to (c), and the food and drink composition includes soft drinks, carbonated drinks, nutritional drinks, and the like.
  • Beverages such as fruit juice beverages or lactic acid bacteria beverages (including concentrated stock solutions and preparation powders of these beverages); iced confectioneries such as ice cream, sherbet or shaved ice; candy, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snack confectionery, biscuits, jelly, Confectionery such as jams, creams or baked goods; dairy products such as processed milk, dairy beverages, fermented milk, drink yogurt or butter; bread; liquid foods such as enteric nutritional foods or porridge, baby foods, baby milk or sports beverages ; And other functional foods are exemplified.
  • the food and drink may be a supplement, for example, a tablet-shaped supplement.
  • each of the bifidobacteria genus bacteria shown in (a) to (c) above can be ingested without being affected by other foods in terms of daily dietary amount and calorie intake.
  • the food and drink composition in the present invention includes various proteins such as whey protein, casein protein, soybean protein, or pea protein (pea protein) or mixtures thereof, and decomposition products; amino acids such as leucine, valine, isoleucine or glutamine; It can be prepared by combining a component such as vitamins such as vitamin B6 or vitamin C; creatin; citric acid; or fish oil and each of the Bifidobacterium genus bacteria shown in the above (a) to (c).
  • various proteins such as whey protein, casein protein, soybean protein, or pea protein (pea protein) or mixtures thereof, and decomposition products; amino acids such as leucine, valine, isoleucine or glutamine; It can be prepared by combining a component such as vitamins such as vitamin B6 or vitamin C; creatin; citric acid; or fish oil and each of the Bifidobacterium genus bacteria shown in the above (a) to (c).
  • the food and drink composition defined in the present invention can be provided and sold as a food or drink whose use (including health use) such as probiotics is displayed.
  • food and drink intake targets "people who want to live with Bifidobacterium spp.”, "People who want to improve the intestinal environment”, “people who want to improve their abdominal condition”, or "good intestinal condition”. It is possible to provide and sell by displaying "People who want to form an environment”.
  • the act of "displaying” includes all actions for informing the consumer of the above-mentioned use, and if it is an expression that can recall or infer the above-mentioned use, the purpose of display, the content of display, and display Regardless of the object, medium, etc., all fall under the "display" act of the present invention.
  • the "display" is performed by an expression that allows the consumer to directly recognize the above-mentioned use.
  • the act of transferring a product related to food and drink or the packaging of the product with the above purpose described, displaying it for delivery, transfer or delivery, and importing it, advertising on the product, price list or transaction documents Examples include the act of describing the above-mentioned use and displaying or distributing it, or describing the above-mentioned use in the information containing these and providing it by an electromagnetic (Internet, etc.) method.
  • the display content is a display approved by the government or the like (for example, a display obtained based on various systems established by the government and performed in a manner based on such approval).
  • labeling includes health foods, functional foods, enteric nutritional foods, special purpose foods, health functional foods, specified health foods, nutritional functional foods, functional foods, or non-medicinal products.
  • the display of is also mentioned.
  • labeling approved by the Consumer Affairs Agency for example, a system related to foods for specified health use, nutritionally functional foods, or functional foods, or labeling approved by a system similar to these can be mentioned.
  • labeling as a food for specified health use labeling as a food for specified health use with conditions, labeling to the effect that it affects the structure and function of the body, labeling for reducing the risk of illness, or functionality based on scientific evidence.
  • foods for specified health use stipulated in the Cabinet Office Ordinance (Cabinet Office Ordinance No. 57, August 31, 2001) regarding permission for special use labeling prescribed in the Health Promotion Law. (Especially the indication for health use) and similar indications are typical examples.
  • each Bifidobacterium genus bacterium shown in the above (a) to (c) in the food or drink composition of the present invention is appropriately set depending on the mode of the food or drink composition, but is usually contained in the food or drink. It is preferably in the range of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g or 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / mL, 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ 10. More preferably, it is in the range of 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / mL.
  • the food and drink composition according to the present invention can be used as a nutritional composition.
  • the "nutritional composition” refers to a food or drink that is orally ingested.
  • the type of nutritional composition that can be used in the present invention is not particularly limited, but is preferably a prepared milk or a liquid diet, and more preferably a prepared milk.
  • the ingestion target may be infants, toddlers, children and adults, but is preferably infants and toddlers.
  • the prepared milk includes prepared milk powder and prepared liquid milk. Prepared milk powder is required for infants by processing raw milk, milk, special milk, or foods manufactured from these as raw materials, or as the main raw material, in the ministerial ordinance (Ministry Ordinance on Milk, etc.) concerning the component standards of milk and dairy products.
  • Prepared liquid milk is defined in the above ministerial ordinance as "raw milk, milk, special milk, or processed foods made from these as raw materials, or made into liquid by adding nutrients necessary for infants.” ..
  • the prepared milk contains various nutritional components such as proteins, fats and oils, carbohydrates, minerals and vitamins, and includes those processed into powder or liquid.
  • the prepared milk further includes "prepared milk powder for babies", “prepared liquid milk for babies” and “powdered milk for pregnant women and lactating women” in special-purpose foods stipulated by the Health Promotion Law, and is 0 to 12.
  • the food and drink composition (including the nutritional composition) according to the present invention can be applied to a food with health claims or a food for the sick.
  • the health functional food system was established not only for ordinary foods but also for foods in the shape of tablets, capsules, etc., based on internal and external trends and consistency with the conventional food system for specified health uses. It consists of two types: foods for specified health use (individual permission type) and foods with nutritional function (standard standard type).
  • An example of a method for producing a composition is a method for producing a composition, which comprises the following steps A and B.
  • Step A A culture or product containing each of the bifidobacteria shown in (a) to (c) above in a medium and containing each of the bifidobacteria shown in (a) to (c) above.
  • Step B A step of subjecting the culture or product to drying to obtain bacterial powder or dried product.
  • each Bifidobacterium genus bacterium shown in (a) to (c) above or a culture containing the same is not particularly limited and may be either liquid or solid, but the form is a dry form (for example, for example. Bacterial powder or dried culture product) is suitable from the viewpoint of easy handling during production and storage.
  • examples of the culture include, as described above, the cells themselves from which the culture solution has been separated, the culture containing the cells, and the culture from which the cells have been removed.
  • the above drying method is also not particularly limited as long as the effect of the present invention is not impaired, but is limited to a spray drying method (spray drying method), a retort sterilization method, a freeze sterilization method, a UHT sterilization method, a pressure sterilization method, a high pressure steam sterilization method, and drying.
  • Heat sterilization method, distribution steam sterilization method, electromagnetic wave sterilization method, electron beam sterilization method, high frequency sterilization method, radiation sterilization method, ultraviolet sterilization method, ethylene oxide gas sterilization method, hydrogen peroxide gas plasma sterilization method, and chemical sterilization method ( Alcohol sterilization method, formalin fixing method and electrolyzed water treatment method) and the like can be mentioned.
  • freeze-drying or spray-drying is preferable.
  • the cells may be crushed, and the crushed product may be a bacterium obtained by crushing a live bacterium, a bacterium obtained by crushing a dead bacterium, or a bacterium which has been heated or freeze-dried after being crushed.
  • the culture from the viewpoint of increasing the viable cell rate, it is preferable to subject the culture to freeze-drying, and from the viewpoint of increasing the production efficiency, it is preferable to subject the culture to spray-drying.
  • An example of a method for producing a composition is a method for producing a composition, which comprises at least one of step C and step D.
  • Step C Mixing the bifidobacteria shown in the above (a) to (c) and prebiotics
  • Step D The bifidobacteria shown in the above (a) to (c), And the step of mixing the milk components
  • the Bifidobacterium bacterium shown in (a) to (c) above a composition containing each Bifidobacterium bacterium shown in (a) to (c) above is used. You may use it.
  • the composition may further contain other probiotics such as bifidobacteria and lactic acid bacteria.
  • the milk component is preferably powder, and it is more preferable to mix it with the bacterial powder of each Bifidobacterium genus shown in (a) to (c) above.
  • the milk component is not particularly limited as long as the effect of the present invention is not impaired, and for example, milk, buffalo milk, sheep milk, goat milk, horse milk, defatted milk, defatted concentrated milk, defatted powdered milk, concentrated milk, whole fat powder.
  • Milk, cream, butter, butter milk, condensed milk, milk protein and the like can be mentioned, and one or more selected from the group consisting of these can be used.
  • the milk protein is not particularly limited, and examples thereof include whey, casein, and hydrolysates thereof, and one or more selected from the group consisting of these can be used.
  • milk-derived components are preferable.
  • the hydrolyzate can produce a whey hydrolyzate, a casein hydrolyzate, or the like by hydrolyzing the milk component (preferably milk protein).
  • the hydrolysis include acid / alkali hydrolysis and enzyme hydrolysis. Of these, enzyme hydrolysis is preferable, and proteolytic enzyme is preferable as the enzyme. Examples of the proteolytic enzyme include protease, trypepsin, chymotrypsin, plasmin, pepsin, papain, peptidase, aminopeptidase and the like.
  • the pH at the time of the hydrolysis reaction can be appropriately adjusted to the optimum pH of the enzyme to be used, and can be carried out at, for example, pH 2 to 6.
  • the temperature at the time of the hydrolysis reaction is not particularly limited, and it is usually preferably carried out in the range of 30 to 60 ° C., and the reaction time is preferably 2 to 10 hours.
  • a mixture is obtained by mixing a culture containing each bifidobacteria bacterium shown in (a) to (c) above with an excipient or the like.
  • a step, a step of molding into the predetermined shape can be included. Examples of the molding step include tableting, and examples of tableting include, for example, compression molding of a mixture of powder or granules to obtain a tablet.
  • the method for producing the composition of the present invention there is a method for producing a fermented food or drink (preferably fermented milk) containing each of the Bifidobacterium spp.
  • the bacterial powder obtained by the above production method is added to a fermented milk raw material, and fermentation containing the bifidobacteria using each of the bifidobacteria shown in (a) to (c) above.
  • a step of mixing the above-mentioned bacterial powder and fermented milk to obtain fermented milk containing each of the Bifidobacterium genus bacteria shown in the above (a) to (c) is performed.
  • Fermentation conditions and blending amounts are adjusted so that the amount of cells of the bacterium of the present invention in the composition becomes a predetermined amount of cells. This makes it possible to provide fermented foods and drinks (preferably fermented milk or fermented products) containing the bacteria of the genus Bifidobacterium shown in the above (a) to (c).
  • the sugar source was changed to 6 types of human milk oligosaccharides (manufactured by Jennewein Biotechnologie GmbH) shown in Table 1.
  • MRS de Man-Rogosa-Sharpe liquid medium (composition: Table 2) was prepared, and 200 ⁇ L of the medium degassed for 16 hours was inoculated with 1 v / v% of the bacterial solution and cultured at 37 ° C. under anaerobic conditions. did.
  • the turbidity (OD660) after 16 hours of culturing was measured to determine the presence or absence of assimilation and the degree of assimilation ability. OD600 judges that 0.3 or more is “good assimilation", 0.5 or more is “better assimilation”, and 0.8 or more is “very good assimilation”. did.
  • Bifidobacterium breve (JCM 1192) and Bifidobacterium Longum Subspecies Infantis (ATCC 15697) were used as comparison targets. Table 1 shows the average of the measured values of turbidity (OD660) after 16 hours of culturing.
  • composition of the present invention examples of production of the composition of the present invention, the pharmaceutical composition, the fermented milk, the prepared milk powder and the food and drink composition are shown below, but the composition of the present invention is not limited thereto.
  • Bifidobacterium longum subspecies infantis (NITE BP-03068) was added to 3 mL of MRS liquid medium, anaerobically cultured at 37 ° C. for 16 hours, the culture solution was concentrated, lyophilized, and bacteria were used. Obtain a lyophilized powder (bacterial powder). The bacterial powder, Whey protein concentrate (WPC), and prebiotics (2'-FL and LNT) are uniformly mixed to obtain a composition. 20 g of the composition is dissolved in 200 g of water to obtain a composition containing Bifidobacterium longum subspecies infantis (NITE BP-03068).
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-03058) was added to 3 mL of MRS liquid medium, and after anaerobic culture at 37 ° C. for 16 hours, the culture solution was concentrated, lyophilized, and lyophilized powder of bacteria (bacterial powder). ).
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) was added to 3 mL of MRS liquid medium, and after anaerobic culture at 37 ° C. for 16 hours, the culture solution was concentrated, lyophilized, and Bifidobacterium bifidam (NITE). A lyophilized powder (bacterial powder) of bacteria containing BP-0367) is obtained. Next, prebiotics (2'-FL, 3'-SL and LNT) and crystalline cellulose are put into a stirring granulator and mixed.
  • granulated product pharmaceutical composition
  • purified water is added to granulate and the granulated product is dried to obtain a granulated product (pharmaceutical composition) containing fermented bacterial components and prebiotics and containing an excipient.
  • granulated products containing Bifidobacterium bifidam NITE BP-0367
  • Example 4 The method for producing fermented milk to which Bifidobacterium Bifidum (NITE BP-0367) is added is shown below.
  • a dairy raw material, water if necessary, and other components are mixed, preferably homogenized, and heat sterilized.
  • the homogenization treatment and the heat sterilization treatment can be carried out by a conventional method.
  • a lactic acid bacterium starter is added (inoculated) to a heat-sterilized sterilized emulsion and fermented at a predetermined fermentation temperature to obtain a fermented product. Fermentation forms curds.
  • lactic acid bacterium starter for example, lactic acid bacteria usually used for yogurt production such as Lactobacillus bulgaricus, Lactococcus lactis or Streptococcus thermophilus can be used.
  • the pH reaches the target value
  • the formed curd is crushed by stirring and cooled to 10 ° C. or lower to obtain a fermented product.
  • the activity of lactic acid bacteria can be reduced and the production of acid can be suppressed.
  • the fermented product obtained in the fermentation step is heat-treated to obtain a fermented product after heating (fermented product after heat treatment).
  • a fermented product after heating By appropriately heating the fermented product, it is possible to suppress the production of acid by lactic acid bacteria in the fermented product after heating. As a result, it is possible to suppress a decrease in pH during the subsequent production process and / or during storage of the concentrated fermented milk containing bifidobacteria, and as a result, the survivability of bifidobacteria can be improved.
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) and prebiotics (2'-FL, 3'-SL and LNT) are then added to the post-heated fermented product obtained in the heat treatment step.
  • the amount of Bifidobacterium Bifidum (NITE BP-0367) added is preferably 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 CFU / mL with respect to the fermented product after heating, and 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 CFU /. mL is more preferred. If Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) is dead, CFU / mL can be replaced with individual cells / mL.
  • Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) and prebiotics are added to the fermented product after heating, and then concentration is performed.
  • concentration step can be carried out by appropriately using a known concentration method.
  • a centrifugation method or a membrane separation method can be used.
  • whey in the concentrate (bifidobacteria and fermented product after heating to which prebiotics are added) is removed to increase the solid content of bifidobacteria and concentrated fermented milk containing prebiotics. can get.
  • Fermented milk containing Bifidobacterium bifidam (NITE BP-0367) obtained as described above can be produced.
  • the resulting formula milk is dissolved in water, the total solids concentration of 14% with a standard milk formula Concentration (w / V) when the tone emulsions, tone number of bifidobacteria in the emulsion is 2.7 ⁇ 10 9 cfu / 100 mL can be obtained.
  • the human intestinal environment can be improved by ingesting or administering prepared milk powder containing Bifidobacterium longum subspecies infantis (NITE BP-03068) obtained as described above. ..
  • the bacterial powder is ingested before, during, or after a meal when eating. Since dietary fiber is inevitably ingested when a regular meal (staple food, side dish, meal with main dish) is taken, the dried bacterial powder product of the present invention is taken together with the meal to ingest the intestines of adults. The effect of improving the internal environment can be expected. By continuously ingesting the intestinal environment-improving diet of the present invention for those who have intestinal problems such as constipation or diarrhea, the effect of improving the intestinal environment can be expected.
  • the bifidobacteria genus bacterium of the present invention having the ability to assimilate 2'-FL, 3'-SL, or LNT, and the composition containing the bifidobacteria genus bacterium, the bi.
  • the composition for promoting the growth of Bifidobacterium bacteria can support the growth of Bifidobacterium bacteria in the intestine, and is effectively used for the formation of a good intestinal flora and the improvement of the intestinal environment. can do.

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Abstract

本発明によれば、２種以上のＨＭＯｓの資化能を有する新規ビフィドバクテリウム属細菌が提供される。この細菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）及びビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）からなる群より選択される。

Description

細菌、組成物及びその製造方法、並びにプレバイオティクス組成物
　本発明は、細菌、組成物及びその製造方法、並びにプレバイオティクス組成物に関する。
　本願は、２０２０年１月２０日に、日本に出願された特願２０２０－００７１０２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　近年、動物に良い影響を与える細菌（以下、「善玉菌」ともいう。）を積極的に摂取して腸内環境を整えることで、病気の発生抑制又は健康増進等を目的とするプロバイオティクス及び善玉菌の増殖を助ける成分等のプレバイオティクスの研究が盛んに行われるようになってきている。プロバイオティクスは、腸内で有益な働きをする細菌をいうのに対して、プレバイオティクスは、これらのプロバイオティクスの選択的な栄養源となり、それらの増殖を促進する物質をいう。プレバイオティクスにより、乳酸菌・ビフィドバクテリウム属細菌増殖促進作用、整腸作用及び炎症性腸疾患への予防・改善作用等のヒトの健康に有益な効果があることが知られている。
　ヒトミルクオリゴ糖（以下、「ＨＭＯｓ」ともいう。）は、母乳中に１０～２０ｇ／Ｌ含まれ、１３０種類以上のオリゴ糖の混合物と言われている。それらの構造は、１３種類のコア構造にフコース及びシアル酸が付加した構造をとる。ヒトミルクにおいては、フコシル化された中性糖の割合が高く、２’－フコシルラクトース、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩ、ラクト－Ｎ－ジフコヘキサオースＩ及びラクト－Ｎ－テトラオースが代表的である。これら４種類のオリゴ糖だけで全ヒトミルクオリゴ糖の１／３～１／４を占めている。ラクト－Ｎ－ビオースを含むオリゴ糖をタイプＩ型といい、Ｎ－アセチルラクトサミン（ＬａｃＮＡｃ）を含むオリゴ糖をタイプＩＩ型という。ヒトミルク中では、タイプＩ型のラクト－Ｎ－テトラオース及びラクト－Ｎ－フコペンタオースＩが、タイプＩＩ型のラクト－Ｎ－ネオテトラオース及びラクト－Ｎ－フコペンタオースＩＩＩよりも、含有量が高い。タイプＩ型及びタイプＩＩ型の共存、並びにタイプＩ型の優先性は、他種ミルクオリゴ糖とは異なるヒトミルクオリゴ糖の際だった特徴である（非特許文献１及び２）。
　母乳に含まれるＨＭＯｓである２’－ＦＬ及びＬＮＴは、ビフィズス菌増殖活性を有する。２’－ＦＬ及びＬＮＴは、ビフィズス菌に選択的に利用されることによりビフィズス菌の増殖因子として作用することが知られており、ビフィズス菌優勢な腸内フローラの形成に重要である。また、ＨＭＯｓは合成が可能で、工業的に利用できる状況にある（特許文献１）。
　ビフィズス菌は一部のＨＭＯｓをビフィズス菌に特異的なＧＮＢ／ＬＮＢ経路を利用して代謝している。この経路はヒト腸管でよく見られる種の多くが持っているが、ヒト以外の動物及び昆虫の腸管でよく見られるビフィズス菌のほとんどは持っていない。ＨＭＯｓを単独の炭素源として利用し、生育可能な菌種としては、乳児によく見られるビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（Bifidobacterium longum subspecies longum）、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（Bifidobacterium longum subspecies infantis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）及びビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）の４菌種が代表例として挙げられる。これらのなかでも、特にビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス及びビフィドバクテリウム・ビフィダムの２菌種は様々なＨＭＯｓを利用することが報告されている（非特許文献３）。
国際公開第２０１４／０８６３７３号
Japanese Journal of Lactic Acid Bacteria Vol. 22, No. 1, pp15-25 2011 Milk Science Vol. 56，No.4, pp155-176 2008 Milk Science Vol. 61，No.2, pp115-124 2012
　ＨＭＯｓを代謝するに当たり、上述の通り、ビフィズス菌の中でも、ＨＭＯｓの資化能がない又は低い菌が存在する一方で、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス及びビフィドバクテリウム・ビフィダムのように、２種以上のＨＭＯｓに資化性を有する菌も存在する。
　本発明は、２種以上のＨＭＯｓの資化能を有する新規ビフィドバクテリウム属細菌を提供することを課題とする。
　本発明では、まず、下記の（ａ）～（ｃ）から選択される少なくとも１種の細菌を提供する。
　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
　前記（ａ）～（ｃ）から選択される細菌は、２’－フコシルラクトース、並びに３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方の資化能を有する。
　本発明では、次に、上記（ａ）～（ｃ）から選択される少なくとも１種の細菌を含む、組成物を提供する。
　本発明に係る組成物は、プロバイオティクス組成物とすることができる。
　本発明に係る組成物は、乳幼児用、大人用及び高齢者用からなる群より選択される少なくとも一つの用途に用いることができる。
　本発明に係る組成物は、整腸用組成物、飲食品組成物及び栄養組成物からなる群より選択される少なくとも１種の組成物とすることができる。
　本発明に係る組成物には、２’－フコシルラクトースと、３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方とをさらに含ませることができる。
　本発明では、また、下記の（ａ）～（ｃ）から選択される少なくとも１種の細菌の増殖の促進に使用されるプレバイオティクス組成物であり、上記組成物が、２’－フコシルラクトースと、３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方とを含む、プレバイオティクス組成物を提供する。
　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
　本発明では、さらに、下記の（ａ）～（ｃ）から選択される少なくとも１種の細菌を含む組成物の製造方法を提供する。
　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
　本発明によれば、２種以上のＨＭＯｓの資化能を有する新規ビフィドバクテリウム属細菌を提供できる。
　なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本明細書中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
　以下、本発明を実施するための実施形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本開示の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。なお、本明細書において、数値範囲を「下限～上限」で表現するものに関しては、上限は「以下」であっても「未満」であってもよく、下限は「以上」であっても「超」であってもよい。また、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
　＜新規なビフィドバクテリウム属細菌＞
　本発明に係る新規ビフィドバクテリウム属細菌は、上記（ａ）～（ｃ）から選択される少なくとも１種の細菌であって、２種以上のＨＭＯｓに対し、資化能を発揮することができる。具体的には、２’－フコシルラクトース（以下、「２’－ＦＬ」ともいう。）、並びに３’－シアリルラクトース（以下、「３’－ＳＬ」ともいう。）及びラクト－Ｎ－テトラオース（以下、「ＬＮＴ」ともいう。）のいずれか一方又は両方の資化能を有する。このため、本発明に係る新規ビフィドバクテリウム属細菌は、２’－ＦＬ、並びに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方を使用することで、腸内でも容易に増殖することができる。
　ビフィドバクテリウム属細菌は、様々な生理機能が報告されており、その機能は腸内での増殖及び産生する物質（例えば、酢酸）によるものであると報告されている。従って、本発明のビフィドバクテリウム属細菌も、安全性が高く、かつ幅広い年齢層において、一般的に云われているビフィドバクテリウム属細菌による効能を期待することができる。このため、本発明のビフィドバクテリウム属細菌は、幅広い組成物（飲食品用、機能性食品用、医薬品用又は飼料用等）に用いることが可能である。また、本発明のビフィドバクテリウム属細菌は、プロバイオティクス効果を期待することができるので、健康増進、食生活改善、腸内環境改善又は腸内感染予防・治療等の目的に使用することも可能である。以下、各細菌について、詳細に説明する。
　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）は、後述する実施例で示す通り、２’－ＦＬ、３’－フコシルラクトース（以下、「３’－ＦＬ」ともいう。）、ＬＮＴ、及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（以下、「ＬＮｎＴ」ともいう。）の資化能が、後述の＜糖源の資化性の判定方法＞において、それぞれＯＤ０．３以上であり優れている。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）は、新規なビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスであり、以下の菌学的性質及び特性から新規菌株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１９年１１月２０日に、Bifidobacterium infantis（受託番号：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）株として国際寄託された。当該菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。なお、「ビフィドバクテリウム・インファンティス」は、「ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス」に再分類されており、同義のものである。
　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）は、後述する実施例で示す通り、２’－ＦＬ、３’－ＦＬ、３’－ＳＬ、６’－シアリルラクトース（以下、「６’－ＳＬ」ともいう。）、ＬＮＴ、及びＬＮｎＴの資化能が、後述の＜糖源の資化性の判定方法＞において、それぞれＯＤ０．３以上であり優れている。
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）は、新規なビフィドバクテリウム・ビフィダムであり、以下の菌学的性質及び特性から新規菌株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１９年１１月８日に、Bifidobacterium bifidum（受託番号：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）株として国際寄託された。当該菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）は、後述する実施例で示す通り、２’－ＦＬ、３’－ＦＬ、３’－ＳＬ、６’－ＳＬ、ＬＮＴ、及びＬＮｎＴの資化能が、後述の＜糖源の資化性の判定方法＞において、それぞれＯＤ０．３以上であり優れている。
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）は、新規なビフィドバクテリウム・ビフィダムであり、以下の菌学的性質及び特性から新規菌株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１９年１１月２０日に、Bifidobacterium bifidum（受託番号：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）株として国際寄託された。当該菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
　本発明では、以上説明した各菌株と実質的に同質の菌株を用いることも可能である。本発明に係る各菌株と実質的に同質の菌株とは、例えば、同属の細菌であって、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、これら各細菌の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と好ましくは９９．９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、かつ、好ましくはこれら各細菌と同一の菌学的性質を有する菌株をいう。
　本発明では、本発明の目的を達成できる特性（例えば、２’－ＦＬ、並びに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方の資化能を持つ特性）を有する限り、上記ビフィドバクテリウム属細菌の変異株を用いることもできる。また、当該変異株は、上記ビフィドバクテリウム属細菌と同一の菌学的性質を有し、かつ、上記ビフィドバクテリウム属細菌と同等以上の２’－ＦＬ、並びに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方の資化能を有する細菌が好ましい。ある変異株が上記ビフィドバクテリウム属細菌と「同等以上の２’－ＦＬ、並びに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方の資化能」を有するか否かは、例えば、後述する実施例の方法により確認することができる。
　このような変異株は、上記ビフィドバクテリウム属細菌に非人為的に変異が導入されることで構築されてもよい。また、ＵＶ等の変異原を用いた処理により上記細菌に変異を導入して構築してもよく、種々の遺伝子操作法により上記株に変異を導入して構築してもよい。
　なお、上記例示した菌株名で特定される菌株には、当該菌株名で所定の機関に寄託及び登録がなされている株そのもの（以下、説明の便宜上、「寄託菌株」ともいう。）に限られず、それと実質的に同等な株（「派生株」又は「誘導株」ともいう。）も包含される（以下の菌株も同様）。菌株について、「上記寄託菌株と実質的に同等の株」とは、上記寄託菌株と同一の種に属し、本件寄託菌株と同等以上の本発明の特性が得られる株を意味する。上記寄託菌株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託菌株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託菌株から育種された株又は寄託菌株から自然に生じた株が挙げられる。
　実質的に同一の菌株、派生株は下記のような株が挙げられる。
　（１）Randomly Amplified Polymorphic DNA法又はPulsed-field gel electrophoresis法により同一の菌株と判定される菌株（Probiotics in food/Health and nutritional properties and guidelines for evaluation 85 Page43に記載）
　（２）当該寄託菌株由来の遺伝子のみ保有し、外来由来の遺伝子を持たず、ＤＮＡの同一性が９５％以上（好適には９８％以上）である菌株
　（３）当該菌株から育種された株（遺伝子工学的改変、突然変異又は自然突然変異を含む）、同一の形質を有する株
　＜糖源の資化性の判定方法＞
　糖源を含むＭＲＳ（de Man-Rogosa-Sharpe）液体培地２００μＬに、菌株１ｖ／ｖ％ずつ接種し、嫌気条件下で３７℃にて培養する。培養１６時間後に濁度（ＯＤ６００）を測定し、菌株を接種しなかった培地を同様に培養したコントロールの濁度を差し引いた値を以下の基準に照らし、資化性の有無及び資化能の程度を判定する。コントロールとの差でＯＤ６００が、０．３以上を「良好な資化性あり」、０．４以上を「より良好な資化性あり」、０．５以上を「よりさらに良好な資化性あり」、０．６以上を「非常に良好な資化性あり」とする。
　本発明に係る各菌株は、例えば、同菌株を培養することにより増殖させることができる。
　培養する方法は、本発明のビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は３０～５０℃でよく、３５～４５℃であることが好ましい。また培養は嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。また、液体静置培養等の微好気条件下で培養してもよい。
　本発明のビフィドバクテリウム属細菌を増殖させるために培養する培地としては、特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地を必要により適宜修正して用いることができる。すなわち、各種ＨＭＯｓ以外の炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン加水分解物又は廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム若しくは硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩類又は硝酸塩類を使用できる。また、無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン又は硫酸第一鉄を用いることができる。また、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス又は酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、調製済みの培地としては、例えば、ＭＲＳ培地を用いることができる。
　本発明のビフィドバクテリウム属細菌の好ましい資化成分としては、２’－ＦＬ、３’－ＳＬ及びＬＮＴが挙げられ、２’－ＦＬを少なくとも含むことが好ましく、各菌株の資化能に応じて３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方をさらに含むことがより好ましい。加えて、各菌株の資化能に応じて３’－ＦＬ、６’－ＳＬ及びＬＮｎＴ等の各種ＨＭＯｓを含ませることもできる。
　本発明において用いる２’－ＦＬは、本発明のビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進作用を有する。また、２’－ＦＬと、各菌株の資化能に応じて３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方と、を組み合わせることで、より安定的に本発明のビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進作用を発揮させることができる。さらに、各菌株の資化能に応じて３’－ＦＬ、６’－ＳＬ及びＬＮｎＴ等の各種ＨＭＯｓを組み合わせることで、さらに安定的に本発明のビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進作用を発揮させることができる。
　本発明において資化成分として使用する各種ＨＭＯｓは、市販品を使用してもよいし、乳から調製してもよいし、公知の有機合成又は酵素処理等の方法によって得ても良い。また、各種ＨＭＯｓを含む乳（例えば、母乳、粉ミルク、牛乳又は乳製品）を使用してもよい。また、各種ＨＭＯｓを乳（例えば、牛乳、粉ミルク又は育児用ミルク）に配合した組成物（すなわち、ＨＭＯｓを含む乳）を使用してもよい。
　本発明において資化成分として使用できるＨＭＯｓには、２’－ＦＬを含むことが好ましく、各菌株の資化能に応じてさらに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方をさらに含むことがより好ましい。加えて、各菌株の資化能に応じてさらに３’－ＦＬ、６’－ＳＬ及びＬＮｎＴを含むことがさらに好ましい。これらの各種ＨＭＯｓの他に、一般的にＨＭＯｓとしては、例えば、３－ジフコシルラクトース、３－フコシル－３’－シアリルラクトース、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩＩＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＶ、ラクト－Ｎ－ジフコシルヘキサオースＩ、ラクト－Ｎ－ジフコシルヘキサオースＩＩ、ラクト－Ｎ－シアリルペンタオース、ＬＳＴａ、ＬＳＴｂ及びＬＳＴｃが挙げられる。上記ＨＭＯｓの各オリゴ糖は公知の製造方法で得ることができる。本発明では、これらからなる群から選択される少なくとも１種のヒトミルクオリゴ糖も使用することができる。
　＜本発明のビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進用のプレバイオティクス＞
　前述した２’－ＦＬ、並びに３’－ＳＬ及びＬＮＴのいずれか一方又は両方は、上記（ａ）～（ｃ）に示すビフィドバクテリウム属細菌に対して増殖促進作用を有し、プレバイオティクスとして使用できる。また、各菌株の資化能に応じて３’－ＦＬ、６’－ＳＬ及びＬＮｎＴ等の各種ＨＭＯｓを、１種単独で、又は２種以上組み合わせて使用することも可能である。その他、各種用途に適合した任意成分を適宜用い、各用途に適合した公知の製造方法によって、製造することができる。
　本発明のプレバイオティクス組成物における、２’－ＦＬ、３’－ＳＬ、ＬＮＴ、３’－ＦＬ、６’－ＳＬ及びＬＮｎＴ等の各種ＨＭＯｓの使用量又は含有量は、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌１００質量部に対して、それぞれ、１～１,０００,０００質量部が好ましく、１０～１０,０００質量部がより好ましい。
　当該プレバイオティクスの使用により、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌による、整腸作用、ミネラル吸収促進作用、又は炎症性腸疾患への予防・改善作用等といったヒトの健康に有益なプロバイオティクス効果も期待できる。
　＜本発明のビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物＞
　本発明の組成物は、プロバイオティクス組成物、飲食品組成物及び医薬組成物等を含む意味である。また、本発明の組成物は、プロバイオティクス組成物が好適である。
　上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物は、適用対象であるヒト又は非ヒト動物（好適には哺乳類）に使用してもよく、ヒト又はペットが好ましく、ヒトがより好ましい。さらに、本発明の適用対象者は、プロバイオティクス効果を望む者であれば特に限定されず、例えば、乳幼児、小児、大人、健常者、中高年、高齢者又は腸内環境の優れない者が挙げられる。このうち、本発明は、乳幼児用、大人用及び高齢者用からなる群より選択される少なくとも一つの用途に使用することが好ましい。
　また、本発明に用いられる上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌は、ヒト由来であるため副作用が少なく安全性が高いので、継続して長期間摂取することも可能である。また、医薬品及び飲食品等の幅広い用途の製品に使用できる。そして、本発明の組成物は、プロバイオティクスによって予防、改善又は治療可能な症状又は疾患に有効に使用することもできる。
　このように、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌は、有効成分としてプロバイオティクス組成物に含ませることもでき、また、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌は、これら各種製剤又は各種組成物等の製造のために使用することもできる。さらに、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌は、プロバイオティクス用の細菌として使用することも可能である。
　本発明のビフィドバクテリウム属細菌は、そのまま用いることが可能である。また、本発明のビフィドバクテリウム属細菌は、生理的、医薬品的又は飲食品的に許容される通常の担体又は希釈剤等と共に混合して用いることもできる。
　上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の投与又は摂取は、少なくとも１週間摂取することが好ましく、少なくとも４週間継続して摂取することがより好ましく、毎日摂取することがさらに好ましい。
　上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の使用量は、安全性が高いので特に制限されないが、例えば、１×１０６～１×１０１２ＣＦＵ／ｋｇ体重／日が好ましく、１×１０７～１×１０１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がより好ましく、１×１０８～１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がさらに好ましい。また、１個体（Ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ）あたりの使用量（投与量）としては、１０７～１０１４ＣＦＵ／日が好ましく、１０８～１０１３ＣＦＵ／日がより好ましく、１０９～１０１２ＣＦＵ／日がさらに好ましい。なお、本発明において、ＣＦＵとは、Colony forming unitの意味であり、コロニー形成単位を表す。上記細菌が死菌の場合、ＣＦＵは、個細胞（cells）と置き換えることができる。
　また、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の使用量は、０．０１～１００ｍＬ／体重ｋｇ／日であることが好ましく、０．１～１０ｍＬ／体重ｋｇ／日であることがより好ましい。
　＜医薬組成物＞
　本発明の医薬組成物は、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む限り特に制限されない。当該医薬組成物は、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む、整腸用組成物等としても使用できる。
　本発明の医薬組成物としては、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌をそのまま使用してもよく、生理的に許容される液体又は固体の製剤担体を配合し製剤化して使用してもよい。
　また、本発明の医薬組成物は、経口組成物成分としてヒト腸内より得ることができる上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とするため、種々の疾患を罹患した患者に対しても安心して投与できる。また、ビフィドバクテリウム属細菌は、動物の腸内にも存在するため、本発明は、長期間、連続的に投与しても副作用が生じにくいことが期待される。また、ビフィドバクテリウム属細菌は、乳幼児及び小児にも安全に投与することができる。したがって、本発明は、乳幼児及び小児に対する疾患又はその症状の予防、改善及び／又は治療にも好適である。
　本発明は、治療目的使用であっても、非治療目的使用であってもよい。
　「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、美容行為等が挙げられる。
　「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転；疾患、症状又は状態の悪化防止、遅延；疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
　「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止若しくは遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
　本発明の医薬組成物の剤形は特に制限されず、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤及び点鼻剤等を例示できる。また、製剤化にあたっては、製剤担体として通常使用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤又は注射剤用溶剤等の添加剤を使用することができる。
　また、製剤化に際しては、本発明に係る医薬組成物には、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤及び矯味剤等の成分を用いることができる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明に係る医薬組成物には、公知の又は将来的に見出される本発明に関連する疾患又は症状に対する予防、改善及び／又は治療の効果を有する成分を使用することもできる。
　加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
　本発明の医薬組成物における上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、剤形、用法、患者の年齢、性別、疾患の種類、疾患の程度、及びその他の条件等により適宜設定されるが、通常、１×１０６～１×１０１２ｃｆｕ／ｇ又は１×１０６～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０７～１×１０１１ｃｆｕ／ｇ又は１×１０７～１×１０１１ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌が死菌の場合、ｃｆｕ／ｇ又はｃｆｕ／ｍＬは、個細胞／ｇ又は個細胞／ｍＬと置き換えることができる。
　本発明の医薬組成物の投与時期は特に限定されず、対象となる症状又は疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、予防的に投与してもよく、維持療法に用いてもよい。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、又は患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。なお、本発明の医薬組成物は、いずれの場合も１日１回又は複数回に分けて投与することができ、また、数日又は数週間に１回の投与としてもよい。
　＜飲食品組成物＞
　本発明の飲食品組成物は、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を公知の飲食品に添加することによって製造してもよいし、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を飲食品の原料中に混合して新たな飲食品組成物として製造することもできる。
　本発明の飲食品組成物は、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む限り特に制限されず、飲食品組成物としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料又は乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む）；アイスクリーム、シャーベット又はかき氷等の氷菓；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム又は焼き菓子等の菓子類；加工乳、乳飲料、発酵乳、ドリンクヨーグルト又はバター等の乳製品；パン；経腸栄養食若しくはおかゆ等の流動食、離乳食、育児用ミルク又はスポーツ飲料；及び、その他機能性食品が例示される。また、飲食品は、サプリメントであってもよく、例えばタブレット状のサプリメントであってもよい。サプリメントである場合には、一日当りの食事量及び摂取カロリーについて他の食品に影響されることなく、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を摂取できる。
　また、本発明における飲食品組成物には、本発明の効果を損なわない限り、前述のプロバイオティクス効果を有する成分又はプロバイオティクス効果を補助する成分を使用することができる。例えば、本発明における飲食品組成物は、ホエイタンパク質、カゼインタンパク質、大豆タンパク質、若しくはエンドウ豆タンパク質（ピープロテイン）等の各種タンパク質若しくはその混合物、分解物；ロイシン、バリン、イソロイシン若しくはグルタミン等のアミノ酸；ビタミンＢ６若しくはビタミンＣ等のビタミン類；クレアチン；クエン酸；又はフィッシュオイル等の成分と、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌とを組合せて調製することができる。
　また、本発明で定義される飲食品組成物は、プロバイオティクス等の用途（保健用途を含む）が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。また、飲食品の摂取対象として、「ビフィドバクテリウム属細菌と暮らす生活を望む方」、「腸内環境を改善したい方」、「お腹の調子を整えたい方」、又は「良好な腸内環境を形成したい方」等と表示して提供・販売されることが可能である。
　「表示」行為には、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、上記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
　また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
　一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、若しくはＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、又はその他の書類等へ付することが好ましい。
　また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、又は医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、若しくは機能性表示食品に係る制度、又はこれらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造及び機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示、又は科学的根拠に基づいた機能性の表示が挙げられる。より具体的には、健康増進法に規定する特別用途表示の許可等に関する内閣府令（平成二十一年八月三十一日内閣府令第五十七号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
　本発明の飲食品組成物における上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、飲食品組成物の態様によって適宜設定されるが、通常、飲食品中に、１×１０６～１×１０１２ｃｆｕ／ｇ又は１×１０６～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０７～１×１０１１ｃｆｕ／ｇ又は１×１０７～１×１０１１ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。
　本発明に係る飲食品組成物は、栄養組成物として用いることができる。本発明において、「栄養組成物」は、経口摂取される飲食品を指す。本発明で用いることができる栄養組成物の種類は特に限定されないが、好ましくは調製乳又は流動食等であり、より好ましくは調製乳である。摂取対象は、乳児、幼児、小児及び成人を問わないが、好ましくは乳児及び幼児である。
　調製乳には、調製粉乳及び調製液状乳が含まれる。
　調製粉乳は、乳及び乳製品の成分規格等に関する省令（乳等省令）において、「生乳、牛乳、特別牛乳、又はこれらを原料として製造した食品を加工し、又は主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え粉末状にしたもの」として定義される。
　調製液状乳は、上記省令において、「生乳、牛乳、特別牛乳、又はこれらを原料として製造した食品を加工し、又は主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え液状にしたもの」として定義される。
　また、調製乳は、各種の蛋白質、油脂、炭水化物、ミネラル類又はビタミン類等の栄養成分が配合されたものであって、粉末状又は液状に加工されたものも含まれる。
　また、調製乳にはさらに、健康増進法で規定される特別用途食品における「乳児用調製粉乳」、「乳児用調製液状乳」及び「妊産婦、授乳婦用粉乳」が含まれ、０～１２か月の乳児を対象とする乳幼児用調製粉乳、６～９か月以降の乳児及び年少幼児（３歳まで）を対象とするフォローアップミルク、出生時の体重が２５００ｇ未満の新生児（低出生体重児）を対象とする低出生体重児用調製粉乳、牛乳アレルギー又は乳糖不耐症等の病的状態を有する乳幼児の治療に用いられる各種治療用ミルク、幼児向け調製粉乳、成人用栄養粉末、及び高齢者用栄養粉末等の態様も含まれる。
　また、本発明に係る飲食品組成物（栄養組成物を含む）は、保健機能食品又は病者用食品に適用することができる。保健機能食品制度は、内外の動向、及び従来からの特定保健用食品制度との整合性を踏まえて、通常の食品のみならず錠剤、又はカプセル等の形状をした食品を対象として設けられたもので、特定保健用食品（個別許可型）と栄養機能食品（規格基準型）の２種類の類型からなる。
　＜組成物の製造方法＞
　本発明の組成物の製造方法について、以下に説明する。本発明の組成物の製造方法において、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の添加工程は、組成物の製造工程におけるいずれの段階で行ってもよい。
　組成物の製造方法の一例として、下記工程Ａ及び工程Ｂを含む、組成物の製造方法が挙げられる。
　工程Ａ：培地で上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を培養し、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む培養物又は生産物を得る工程
　工程Ｂ：上記培養物又は生産物を乾燥に供し、菌末又は乾燥物を得る工程
　上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌又はこれを含む培養物の形態は、特に限定されず、液体又は固体の何れでもよいが、当該形態は、乾燥形態（例えば、菌末状又は培養乾燥物）が、製造時及び保管時の取扱が容易な観点から、好適である。また、当該培養物として、上述のように、培養液が分離された菌体自体、菌体を含む培養物、及び、菌体が除去された培養物などが挙げられる。
　上記乾燥方法も、本発明の効果を損なわない限り特に限定されないが、噴霧乾燥法（スプレードライ法）、レトルト殺菌法、凍結乾燥法、ＵＨＴ殺菌法、加圧殺菌法、高圧蒸気滅菌法、乾熱滅菌法、流通蒸気消毒法、電磁波殺菌法、電子線滅菌法、高周波滅菌法、放射線滅菌法、紫外線殺菌法、酸化エチレンガス滅菌法、過酸化水素ガスプラズマ滅菌法、及び化学的殺菌法（アルコール殺菌法、ホルマリン固定法及び電解水処理法）等が挙げられる。本発明では、凍結乾燥又は噴霧乾燥が好適である。
　また、菌体は破砕されていてもよく、当該破砕物は、生菌を破砕した菌体でも死菌を破砕した菌体でもよく、破砕後に加熱又は凍結乾燥等を施した菌体でもよい。
　このうち、生菌率を高くする観点から、上記培養物を凍結乾燥に供するのが好適であり、また、生産効率を高くする観点から、上記培養物を噴霧乾燥に供するのが好適である。
　組成物の製造方法の一例として、工程Ｃ、又は工程Ｄの少なくともいずれかを含む、組成物の製造方法が挙げられる。
　工程Ｃ：上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌、及びプレバイオティクスを混合する工程
　工程Ｄ：上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌、及び乳成分を混合する工程
　このとき上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌として、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物を使用してもよい。さらに、当該組成物に、これ以外のビフィドバクテリウム属細菌及び乳酸菌等のプロバイオティクスをさらに含んでもよい。
　当該プレバイオティクスを混合する場合、当該製造工程のいずれの工程であってもよい。
　また、乳成分は粉体が好適であり、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の菌末と混合することがより好適である。
　上記乳成分としては、本発明の効果を損なわない限り特に限定されないが、例えば、牛乳、水牛乳、羊乳、山羊乳、馬乳、脱脂乳、脱脂濃縮乳、脱脂粉乳、濃縮乳、全脂粉乳、クリーム、バター、バターミルク、練乳及び乳タンパク質等を挙げることができ、これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を使用することができる。また、乳タンパク質として、特に限定されないが、例えば、ホエイ、カゼイン、及びこれらの加水分解物等が挙げられ、これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を用いることができる。乳成分のうち、牛乳由来の成分が好適である。
　上記加水分解物は、上記乳成分（好適には乳タンパク質）を加水分解することで、ホエイ加水分解物又はカゼイン加水分解物等を製造することができる。当該加水分解として、例えば、酸・アルカリ加水分解、及び酵素加水分解等が挙げられる。このうち、酵素加水分解が好適であり、当該酵素として、タンパク質分解酵素が好適である。上記タンパク質分解酵素として、例えば、プロテアーゼ、トリペプシン、キモトリプシン、プラスミン、ペプシン、パパイン、ペプチダーゼ及びアミノペプチダーゼ等が挙げられる。加水分解反応の際のｐＨは、使用する酵素の至適ｐＨに適宜調整して、例えばｐＨ２～６等で行うことができる。加水分解反応の際の温度は、特に限定されず、通常３０～６０℃の範囲で行うことが好適であり、また、反応時間は、２～１０時間が好ましい。
　また、本発明の組成物として、サプリメント又はタブレットを製造する場合、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む培養物と賦形剤等を混合して混合物を得る工程、当該所定の形状に成形する工程を含むことができる。成形工程として、例えば、打錠等が挙げられ、打錠の一例としては、例えば、粉末又は顆粒の混合物を圧縮成形してタブレットを得ること等が挙げられる。
　さらに、本発明の組成物の製造方法の一例として、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵飲食品（好適には発酵乳）の製造方法が挙げられる。
　上述の製造法で得られた上記菌末を、発酵乳原料に添加し、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を用いてこのビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る工程を行う。又は、上記菌末と、発酵乳とを混合して上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る工程を行う。当該組成物中の本発明の細菌の菌体量は、所定の菌体量になるように発酵条件及び配合量を調整する。これにより、上記（ａ）～（ｃ）に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵飲食品（好適には発酵乳又は発酵製品）を提供することができる。
　以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明する。なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
　森永乳業株式会社所有のビフィドバクテリウム属細菌４株（以下、「候補菌株」とする）について、糖源を表１に記載の６種類のヒトミルクオリゴ糖（Jennewein Biotechnologie GmbH社製）に変更したMRS(de Man-Rogosa-Sharpe)液体培地（組成：表２）を作成し、１６時間脱気した培地２００μＬに菌液を１ｖ／ｖ％ずつ接種し、嫌気条件下で３７℃にて培養した。培養１６時間後の濁度（ＯＤ６６０）を測定し、資化性の有無及び資化能の程度を判定した。ＯＤ６００が、０．３以上を「良好な資化性あり」、０．５以上を「より良好な資化性あり」、０．８以上を「非常に良好な資化性あり」、と判断した。
　また、比較対象として、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（ＪＣＭ　１１９２）及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＡＴＣＣ　１５６９７）を用いた。培養１６時間後の濁度（ＯＤ６６０）の測定値の平均を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　以上の結果より、４種の候補菌株はいずれも比較対象より２’－ＦＬの資化性が高く、菌株によって、他のヒトミルクオリゴ糖も資化することが判明した。
　［製造例］
　下記に本発明の組成物、医薬組成物、発酵乳、調製粉乳及び飲食品組成物の製造例を示すが、本発明の組成物は、これに限定されない。
　〔製造例１〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）を、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。菌末と、ホエイタンパク質濃縮物（Whey protein concentrate；ＷＰＣ）と、プレバイオティクス（２’－ＦＬ及びＬＮＴ）を均一に混合して組成物を得る。当該組成物２０ｇを２００ｇの水に溶かし、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）を含む組成物を得る。
　〔製造例２〕
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）を、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。菌末と、乳タンパク質濃縮物の乾燥粉末（ＭＰＣ４８０、フォンテラ社製、タンパク質含量８０質量％、カゼインタンパク質：ホエイタンパク質＝約８：２）と、プレバイオティクス（２’－ＦＬ、３’－ＳＬ及びＬＮＴ）を均一に混合して、組成物を得る。当該組成物２０ｇを２００ｇの水に溶かし、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）を含む組成物を得る。
　〔製造例３〕
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）を、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）を含む細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。次に、プレバイオティクス（２’－ＦＬ、３’－ＳＬ及びＬＮＴ）、結晶セルロースを撹拌造粒機に投入し混合する。その後、精製水を加え造粒、造粒物を乾燥し、細菌の発酵成分及びプレバイオティクスを含み、賦形剤を含んでなる造粒物（医薬組成物）を得る。このようにして、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）を含む造粒物を得ることができる。
　〔製造例４〕
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）を添加した発酵乳の製造法を下記に示す。
　まず、乳原料、必要に応じた水、及びその他の成分等を混合し、好ましくは均質化処理を行い、加熱殺菌処理する。均質化処理及び加熱殺菌処理は常法により行うことができる。加熱殺菌された殺菌調乳液に乳酸菌スターターを添加（接種）し、所定の発酵温度に保持して発酵させ、発酵物を得る。発酵によりカードが形成される。
　乳酸菌スターターとしては、例えば、ラクトバチルス・ブルガリクス（Lactobacillusbulgaricus）、ラクトコッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）又はストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）等のヨーグルト製造に通常用いられている乳酸菌を用いることができる。ｐＨが目標の値に達したら、形成されたカードを撹拌により破砕し、１０℃以下に冷却して発酵物を得る。１０℃以下に冷却することにより、乳酸菌の活性を低下させて酸の生成を抑制することができる。
　次いで、発酵工程で得られた発酵物を加熱処理して加熱後発酵物（加熱処理後の発酵物）を得る。発酵物を適度に加熱することにより、加熱後発酵物中の乳酸菌による酸の生成を抑えることができる。これによって、その後の製造工程中及び／又はビフィズス菌入り濃縮発酵乳の保存中のｐＨの低下を抑えることができ、その結果、ビフィズス菌の生残性を向上させることができる。
　次いで、加熱処理工程で得られた加熱後発酵物に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）及びプレバイオティクス（２’－ＦＬ、３’－ＳＬ及びＬＮＴ）を添加する。ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）の添加量は、加熱後発酵物に対して１×１０７～１×１０１１ＣＦＵ／ｍＬが好ましく、１×１０８～１×１０１０ＣＦＵ／ｍＬがより好ましい。ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）が死菌の場合、ＣＦＵ／ｍＬは、個細胞／ｍＬと置き換えることができる。
　加熱後発酵物に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）及びプレバイオティクスを添加した後、濃縮を行う。濃縮工程は公知の濃縮方法を適宜用いて行うことができる。例えば遠心分離法又は膜分離法を用いることができる。
　遠心分離法では、被濃縮物（ビフィズス菌及びプレバイオティクスが添加された加熱後発酵物）中のホエイが除去されて、固形分濃度が高められたビフィズス菌及びプレバイオティクス入り濃縮発酵乳が得られる。
　上述のようにして得られたビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）を含む発酵乳を製造することができる。
　〔製造例５〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）を添加した調製粉乳の製造法を下記に示す。
　脱塩牛乳乳清蛋白質粉末（ミライ社製）１０ｋｇ、牛乳カゼイン粉末（フォンテラ社製）６ｋｇ、乳糖（ミライ社製）４８ｋｇ、ミネラル混合物（富田製薬社製）９２０ｇ、ビタミン混合物（田辺製薬社製）３２ｇ、ラクチュロース（森永乳業社製）５００ｇ、ラフィノース（日本甜菜製糖社製）５００ｇ及びガラクトオリゴ糖液糖（ヤクルト薬品工業社製）９００ｇを温水３００ｋｇに溶解し、さらに９０℃で１０分間加熱溶解し、調製脂肪（太陽油脂社製）２８ｋｇを添加して均質化した。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約９５ｋｇを調製した。これに、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）の菌体粉末（１．８×１０１１ｃｆｕ／ｇ、森永乳業株式会社製）１００ｇを加えてビフィズス菌・オリゴ糖配合調製粉乳約９５ｋｇを調製する。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度１４％（ｗ／Ｖ）の調乳液としたとき、調乳液中のビフィズス菌数は２．７×１０９ｃｆｕ／１００ｍＬを得ることができる。
　上述のようにして得られたビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）を含む調製粉乳を摂取又は投与することにより、ヒトの腸内環境を改善することができる。
　〔製造例６〕
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）を添加した腸内環境改善食の製造法を下記に示す。
　ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）を、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得、本発明の組成物を得る。セルロースが多く含む食品（野菜、サラダ等）に本発明の菌末を加えて調理することもでき、これにより本発明の組成物を得ることもできる。
　もしくは、菌末を、食事をする際に、食前、食中又は食後に摂取する。規則正しい食事（主食、副菜、主菜のある食事）を行えば必然的に食物繊維を摂取するため、本発明の乾燥菌末製品を、食事の際に一緒に摂取することで、大人の腸内環境の改善効果が期待できる。
　本発明の腸内環境改善食を、便秘又は下痢等の腸に問題を感じる方が継続摂取することで、より腸内環境の改善効果が期待できる。
　以上のことから、２’－ＦＬ、及び、３’－ＳＬ、又はＬＮＴの資化能を有する本発明のビフィドバクテリウム属細菌、及び当該ビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物、当該ビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用組成物は、腸内でのビフィドバクテリウム属細菌の増殖を手助けすることができ、また、良好な腸内フローラ形成、腸内環境の改善等に有効に使用することができる。

Claims (9)

  1. 　下記の（ａ）～（ｃ）から選択される細菌。
    　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
    　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
    　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
  2. 　２’－フコシルラクトース、並びに
    　３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方
    の資化能を有する、請求項１に記載の細菌。
  3. 　請求項１又は２に記載の細菌を含む組成物。
  4. 　前記組成物が、プロバイオティクス組成物である、請求項３に記載の組成物。
  5. 　前記組成物が、乳幼児用、大人用及び高齢者用からなる群より選択される少なくとも一つの用途に用いられる、請求項３又は４に記載の組成物。
  6. 　前記組成物が、整腸用組成物、飲食品組成物及び栄養組成物からなる群より選択される少なくとも１種の組成物である、請求項３～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 　２’－フコシルラクトースと、
    　３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方と
    をさらに含む、請求項３～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 　下記の（ａ）～（ｃ）から選択される細菌の増殖の促進に使用されるプレバイオティクス組成物であり、
    　前記プレバイオティクス組成物が、
    　２’－フコシルラクトースと、
    　３’－シアリルラクトース及びラクト－Ｎ－テトラオースのいずれか一方又は両方と
    を含む、プレバイオティクス組成物。
    　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
    　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
    　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
  9. 　下記の（ａ）～（ｃ）から選択される細菌を含む組成物の製造方法。
    　（ａ）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６８）
    　（ｂ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０５８）
    　（ｃ）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０６７）
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