WO2021079958A1 - 抗ｇａｒｐ抗体と免疫調節剤の組み合わせ - Google Patents

抗ｇａｒｐ抗体と免疫調節剤の組み合わせ Download PDF

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WO2021079958A1
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新子 林
さおり 石田
一紀 佐藤
真人 秦
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    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
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    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
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    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating cancer and a method for treating cancer, which comprises administering a specific anti-GARP antibody and an immunomodulator in combination.
  • Tregs Regulatory T cells
  • Glycoprotein-A Repetitions Predominant is a protein having a single transmembrane structure (Non-Patent Document 2), which is expressed on the cell surface of activated Treg and is a latent TGF- ⁇ (an important molecule for inducing immune tolerance). It forms a complex with a certain TGF- ⁇ precursor) (Non-Patent Document 3).
  • Non-Patent Documents 4 and 5 Due to cell-cell interaction between Treg and cells such as DC expressing ⁇ v ⁇ 6 integrin, matured TGF- ⁇ is secreted from latent TGF- ⁇ retained on the cell surface of Treg via GARP.
  • the immunosuppressive signal of TGF- ⁇ is directly transmitted to the target cells (Non-Patent Documents 4 and 5). It has been shown that the maturation of TGF- ⁇ requires the expression of GARP on the cell membrane (Non-Patent Document 5), but on the other hand, soluble GARP lacking the transmembrane region is converted into CD4-positive T cells. Since the proliferation of CD4-positive T cells is suppressed even when directly added (Non-Patent Document 6), the existence of an immunosuppressive mechanism by GARP that does not mediate the TGF- ⁇ maturation mechanism on the cell membrane cannot be denied.
  • GARP is expressed in peripheral blood-derived activated Tregs, and clinically present in T cells (Tumor Infiltrating Tcells) that have invaded the tumor-affected area of cancer patients, and Tregs (Non-Patent Document 7). Expression is observed in Tregs present in aspirate water (Non-Patent Document 8) or Tregs present in the peripheral blood of patients (Non-Patent Document 9).
  • Non-Patent Document 10 As the anti-GARP antibody, the antibody described in WO2017 / 051888 (Patent Document 1) and MHG-8 described in WO2015 / 0150003 (Patent Document 2), WO2016 / 125017 (Patent Document 3), and WO2018 / 206790 (Patent Document 4). , LHG-10 is known (Non-Patent Document 10).
  • Immunomodulators are agents that activate anti-tumor immunity (Non-Patent Documents 11 to 13).
  • immunomodulators include anti-PD-1 antibodies (Nivolumab (Patent Document 5), Pembrolizumab (Patent Document 6), etc.) and anti-PD-L1 antibodies (atezolizumab) known as immune checkpoint inhibitors.
  • Atezolizumab) (Patent Document 7), Durvaluumab (Patent Document 8), Avelumab (Patent Document 9), etc.)
  • anti-CTLA-4 antibody Ipilimumab (Patent Document 10), Tremelimumab (Tremelimumab)
  • Patent Document 11 and the like
  • the present invention is a pharmaceutical composition for the treatment of cancer, which is characterized in that an anti-GARP antibody and an immunomodulator are administered in combination, and an anti-GARP antibody and an immunomodulator are administered in combination. Provide a characteristic cancer treatment method.
  • the present inventors have conducted diligent studies to solve the above problems, and have found that an excellent antitumor effect is exhibited by administering an anti-GARP antibody and an immunomodulator in combination.
  • the present invention relates to the following.
  • a cancer treatment wherein an antibody or an antigen-binding fragment thereof, which has the following characteristics (1) to (3), and an immunomodulator are administered in combination.
  • Glycoprotein-A Repetitions Predominant (GARP) (2) It has an inhibitory activity on the immunosuppressive function of regulatory T cells
  • ADCC antibody-dependent cellular cytotoxicity
  • the antibody comprises a heavy chain containing CDRH1, CDRH2 and CDRH3 according to (1) or (2) below, and a light chain containing CDRL1, CDRL2 and CDRL3, [1] or [2].
  • the pharmaceutical composition according to (1) Described in CDRH1 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 45 to 54 of SEQ ID NO: 13, CDRH2 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 69 to 78 of SEQ ID NO: 13, and amino acid numbers 118 to 125 of SEQ ID NO: 13.
  • CDRH3 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 15, CDRL1 consisting of the amino acid sequences of amino acid numbers 44 to 54 of SEQ ID NO: 15, CDRL2 consisting of the amino acid sequences of amino acid numbers 70 to 76 of SEQ ID NO: 15, and amino acids of SEQ ID NO: 15.
  • CDRL3 consisting of the amino acid sequences shown in Nos. 109 to 117, or (2) Described in CDRH1 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 45 to 54 of SEQ ID NO: 17, CDRH2 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 69 to 77 of SEQ ID NO: 17, and amino acid numbers 117 to 128 of SEQ ID NO: 17.
  • the antibody comprises a heavy chain constant region of human IgG1, human IgG2 or human IgG4.
  • the antibody contains N-linked glycosylation, O-linked glycosylation, N-terminal processing, C-terminal processing, deamidation, aspartic acid isomerization, methionine oxidation, and methionine at N-terminal.
  • the immunomodulator is an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L2 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-CTLA-4 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the pharmaceutical composition according to any one of [1] to [13], which is a fragment, a multispecific antibody containing the antibody or an antigen-binding fragment thereof, radiotherapy, chemoradiotherapy or a combination thereof.
  • the anti-CTLA-4 antibody is ipilimumab or tremelimumab.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of cancer which comprises the antibody according to any one of [1] to [13] for use in combination with an immunomodulator.
  • a pharmaceutical composition for treating cancer which comprises the antibody according to any one of [1] to [13] for treating a cancer patient who has been administered an immunomodulator.
  • a pharmaceutical composition for cancer treatment which comprises an immunomodulator and enhances the action of the antibody when used in combination with the antibody according to any one of [1] to [13].
  • a pharmaceutical composition for treating cancer which comprises an immunomodulator for use in combination with the antibody according to any one of [1] to [13].
  • a pharmaceutical composition for treating cancer which comprises an immunomodulator for treating a cancer patient who has been administered the antibody according to any one of [1] to [13].
  • a pharmaceutical composition for treating cancer which comprises the antibody according to any one of [1] to [13] and enhances the action of the immunomodulator when used in combination with the immunomodulator.
  • Cancers include lung cancer, renal cancer, urinary tract epithelial cancer, colon cancer, prostate cancer, polymorphic glioblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, melanoma, liver cancer, Bladder cancer, stomach cancer, esophageal cancer, head and neck cancer, blood cancer, skin cancer, thyroid cancer, biliary tract cancer, salivary adenocarcinoma, small intestine cancer, adrenal cancer, testis cancer, cervix Any one of [1] to [24] for at least one treatment selected from the group consisting of uterine body cancer, uterine sarcoma, thoracic adenoma, mesenteric tumor, sarcoma and their metastatic forms.
  • the pharmaceutical composition according to [26] Treatment of cancer, wherein an antibody or an antigen-binding fragment thereof, which has the following characteristics (1) to (3), and an immunomodulator are administered in combination.
  • the antibody comprises a heavy chain containing CDRH1, CDRH2 and CDRH3 according to (1) or (2) below, and a light chain containing CDRL1, CDRL2 and CDRL3, [26] or [27].
  • CDRL3 consisting of the amino acid sequences set forth in 109 to 117, CDRH1 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 45 to 54 in (2) SEQ ID NO: 17, and the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 69 to 77 in SEQ ID NO: 17.
  • CDRH2 and CDRH3 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acids 117-128 in SEQ ID NO: 17,
  • CDRL1 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acids 44-54 in SEQ ID NO: 19, and amino acids 70-76 in SEQ ID NO: 19.
  • CDRL2 consisting of the amino acid sequences of and CDRL3 consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 109 to 117 in SEQ ID NO: 19.
  • the therapeutic method according to [31] or [32], wherein the antibody comprises the heavy and light chains according to (1) to (3) below; (1) A heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 21 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 25.
  • the antibody is N-linked glycosylation, O-linked glycosylation, N-terminal processing, C-terminal processing, deamidation, aspartic acid isomerization, methionine oxidation, methionine at N-terminal.
  • [26] to one or more modifications selected from the group consisting of addition of residues, amidation of proline residues, and deletion of one or two amino acid residues at the carboxyl ends of the heavy chain.
  • the treatment method according to any one of [34].
  • the immunomodulator is an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L2 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-CTLA-4 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the anti-PD-1 antibody is nivolumab, pembrolizumab, rambrolizumab, MK-3475, AMP-224, pidilizumab or LOPD18.
  • the anti-PD-L1 antibody is atezolizumab, durvalumab or avelumab.
  • [45] A method for increasing the action of an antibody by using it in combination with the antibody according to any one of [26] to [38], and the immunomodulatory agent is effective for patients who require it.
  • Treatment methods including administration of doses
  • [46] A method for treating cancer, which is characterized in that it is used in combination with the antibody according to any one of [26] to [38], and is an effective amount of an immunomodulator for a patient who needs it.
  • Treatment methods including administration of [47] A method for treating a cancer patient to whom the antibody according to any one of [26] to [38] has been administered, and an effective amount of an immunomodulator is administered to the patient who needs it.
  • Treatment methods including [48] A method for increasing the action of an immunomodulator when used in combination with an immunomodulator, wherein the antibody according to any one of [26] to [38] is effective for patients who require it.
  • Treatment methods including administration of doses, [49] Cancers include lung cancer, renal cancer, urinary tract epithelial cancer, colon cancer, prostate cancer, polymorphic glioblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, melanoma, liver cancer, Bladder cancer, stomach cancer, esophageal cancer, head and neck cancer, blood cancer, skin cancer, thyroid cancer, biliary tract cancer, salivary adenocarcinoma, small intestine cancer, adrenal cancer, testis cancer, cervix Any one of [26]-[48] for at least one treatment selected from the group consisting of uterine body cancer, uterine sarcoma, thoracic adenoma, mesenteric tumor, sarcoma and their metastatic forms.
  • the treatment method described in [50] Selected from the group consisting of the antibody according to any one of [1] to [12], and the group consisting of anti-PD-1 antibody, anti-PD-L1 antibody, anti-PD-L2 antibody and anti-CTLA-4 antibody.
  • a kit formulation for the treatment of cancer which comprises one or more immunomodulators to be produced. [51] The formulation according to [50], further comprising an instruction manual for using the kit. [52] The pharmaceutical composition according to [14], wherein the anti-PD-1 antibody is nivolumab. [53] The pharmaceutical composition according to [14], wherein the anti-PD-1 antibody is pembrolizumab. [54] The therapeutic method according to [39], wherein the anti-PD-1 antibody is nivolumab.
  • the therapeutic method according to [39], wherein the anti-PD-1 antibody is pembrolizumab.
  • the immunomodulator is an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L2 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-CTLA-4 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the pharmaceutical composition according to any one of [1] to [13], which is a fragment, a multispecific antibody containing the antibody or an antigen-binding fragment thereof, radiotherapy, chemoradiotherapy, a chemotherapeutic agent, or a combination thereof.
  • the immunomodulator is an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L2 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-CTLA-4 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • a pharmaceutical composition and a therapeutic method having excellent antitumor effect and safety can be provided by administering a specific anti-GARP antibody and an immunomodulator in combination.
  • Control group in the donor A and B anti GARP antibody h151D_H1L1 single agent treated groups and anti-PD-1 antibody nivolumab monotherapy treatment groups, as well as, anti GARP antibody h151D_H1L1 and nivolumab combined treatment group [3 H] in Teff cells -thymidine It is a figure which shows the average value of the uptake amount and the standard error (6 wells / group).
  • Control group in the donor C and D anti GARP antibody h151D_H1L1 single agent treated groups and anti-PD-1 antibody nivolumab monotherapy treatment groups, as well as, anti GARP antibody h151D_H1L1 and nivolumab combined treatment group [3 H] in Teff cells -thymidine It is a figure which shows the average value of the uptake amount and the standard error (6 wells / group).
  • GARP The amino acid sequence of human GARP is set forth in SEQ ID NO: 1 (NP_001122394) in the sequence listing.
  • a protein consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted and / or added, and having a biological activity equivalent to that of the protein is also included in GARP.
  • the mature human GARP from which the signal sequence has been removed corresponds to the amino acid sequence consisting of the 20th to 662nd amino acid residues of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing, or the amino acid sequence in which the signal sequence is removed from these sequences consists of an amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted, or added.
  • a protein having a biological activity equivalent to that of GARP is also included in GARP.
  • amino acid sequence encoded by the splicing variant transcribed from the human GARP locus or the amino acid sequence one or several amino acids are substituted, deleted, or added to the amino acid sequence, which is equivalent to GARP. Proteins with biological activity are also included in GARP.
  • Anti-GARP antibody The functions of the antibody of the present invention include antigen-binding activity, activity of neutralizing antigen activity, activity of enhancing antigen activity, and effector activity (ADCC activity, antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCP) activity). And complement-dependent cellular cytotoxicity (CDC) activity, etc.), but not limited to this.
  • the antibody of the present invention preferably has any one or a combination of specific binding activity to GARP, effector activity, Treg function inhibitory activity, and cytotoxic activity (antitumor activity), and more preferably specific to GARP. It has cytotoxic activity (anti-tumor activity) due to Treg function inhibitory activity mediated by target binding activity, effector activity (preferably ADCC activity), and a combination thereof.
  • cancer in the present invention, "cancer”, “cancer” and “tumor” are used interchangeably.
  • the antibody of the present invention recognizes the GARP protein.
  • the antibodies of the invention bind to the GARP protein.
  • Such antibodies are referred to as "anti-GARP antibodies”.
  • the preferred antibody of the present invention specifically recognizes the GARP protein.
  • the preferred antibody of the invention specifically binds to the ARP protein.
  • telomere binding means a binding that is not a non-specific adsorption.
  • KD dissociation constant
  • the KD value of the preferred antibody of the present invention for the ARP protein is 1 ⁇ 10-5 M or less, 5 ⁇ 10-6 M or less, 2 ⁇ 10-6 M or less or 1 ⁇ 10-6 M or less, more preferably 5 ⁇ 10 -7 M or less, 2 ⁇ 10 -7 M or less or 1 ⁇ 10 -7 M or less, more preferably 5 ⁇ 10 -8 M or less, 2 ⁇ 10 -8 M or less or 1 ⁇ 10 -8 M or less.
  • it is 5 ⁇ 10 -9 M or less, 2 ⁇ 10 -9 M or less, or 1 ⁇ 10 -9 M or less.
  • the binding between the antigen and the antibody in the present invention can be measured or determined by an ELISA method, an RIA method, a Surface Plasmon Resonance (hereinafter referred to as “SPR”) analysis method, or the like.
  • the instruments used for SPR analysis include BIAcore TM (GE Healthcare), ProteOn TM (BioRad), SPR-Navi TM (BioNavis), Superior TM (Texas Instruments), and SPRi-PlexII TM (Manufactured by Horiba), Autolab SPR TM (manufactured by Metrohm) and the like can be exemplified.
  • the binding between the antigen expressed on the cell surface and the antibody can be measured by a flow sertometry method, a Cell ELISA method or the like.
  • ADCC antibody dependent cellular cytotoxicity
  • Fc ⁇ receptor for example, NK cells, neutrophils, macrophages, etc.
  • ADCP antibody dependent cell phagocytosis
  • phagocytic cells expressing Fc receptors for example, macrophages, neutrophils, etc.
  • Fc receptors for example, macrophages, neutrophils, etc.
  • CDC complement dependent cytotoxicity refers to the action and activity of complement to damage target cells such as tumor cells via antibodies.
  • ADCC activity, CDC activity and ADCP activity can be measured by known methods.
  • NK cells For the measurement of ADCC activity, cells expressing the target antigen (target cells) and effector cells that kill the target cells are used. Effector cells recognize the Fc region of an antibody bound to a target cell via the Fc ⁇ receptor. The signal transmitted from the Fc ⁇ receptor causes effector cells to kill target cells.
  • human NK cells When measuring ADCC activity of an antibody having a human-derived Fc region, human NK cells are used as effector cells.
  • Human NK cells can be prepared from human peripheral blood mononuclear cells (PMBC) by a known method. Alternatively, PBMC can be used as it is as an effector cell.
  • PMBC peripheral blood mononuclear cells
  • target cells For the measurement of ADCP activity, cells expressing the target antigen (target cells) and effector cells such as monocytes and macrophages that phagocytose the target cells are used.
  • effector cells can be prepared by inducing differentiation of a monosite fraction separated from human peripheral blood mononuclear cells (PMBC) by a known method into macrophages by a known method.
  • PMBC peripheral blood mononuclear cells
  • complement component binds to and activates an antibody bound to the target cell, causes a series of reactions on the cell surface, forms a complement membrane attack complex, and kills the target cell.
  • Human serum or the like can be used as this complement component.
  • ⁇ Manufacturing of anti-GARP antibody> It can be obtained by immunizing an animal with GARP or any polypeptide selected from the amino acid sequence of GARP, and collecting and purifying an antibody produced in vivo.
  • GARP can be directly purified from human tumor tissue or tumor cells and used, or can be obtained by synthesizing GARP in vitro or by genetically engineering host cells to produce it.
  • GARP cDNA is incorporated into an expressible vector and then synthesized in a solution containing the enzymes, substrates and energy substances required for transcription and translation, or other prokaryotes, or true.
  • An antigen can be obtained by expressing GARP by transforming a prokaryotic host cell.
  • an antigen as a secretory protein by expressing a fusion protein in which the extracellular region of GARP, which is a membrane protein, and the constant region of an antibody are linked in an appropriate host / vector system.
  • the antibody of the present invention can be obtained by a known means. For example, using a method usually practiced in this field, an animal is immunized with GARP as an antigen or an arbitrary polypeptide selected from the amino acid sequence of GARP, and an antibody produced in vivo is collected and purified. Can be obtained by The origin of the antigen is not limited to humans, and animals can be immunized with antigens derived from non-human animals such as mice and rats. In this case, the anti-GARP antibody applicable to human diseases can be selected by testing the cross-reactivity between the obtained antibody that binds to the heterologous antigen and the human antigen.
  • a hybridoma can be established by fusing an antibody-producing cell that produces an antibody against an antigen and a myeloma cell to obtain a monoclonal antibody (for example, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497). Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p. 365-367, Plenum Press, NY (1980)).
  • hybridoma strains thus established include GARP hybridomas 151D and 198D.
  • the antibody produced by GARP hybridomas 151D and 198D is described as “151D antibody” or “198D antibody” or simply “151D” or “198D” (see US2018258184).
  • the heavy chain variable region of the 151D antibody has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3.
  • the light chain variable region of the 151D antibody has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region shown in SEQ ID NO: 3 is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the amino acid sequence of the light chain variable region shown in SEQ ID NO: 5 is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 4.
  • the heavy chain variable region of the 198D antibody has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7.
  • the light chain variable region of the 198D antibody has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region shown in SEQ ID NO: 7 is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 6.
  • the amino acid sequence of the light chain variable region shown in SEQ ID NO: 9 is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 8.
  • antibodies of the present invention include antibodies that bind to the same epitope as the 151D antibody or 198D antibody.
  • the 151D antibody (humanized 151D antibody, etc.) recognizes amino acids 352 to 392 in the sequence
  • the 198D antibody humanized 198D antibody, etc.
  • the region in the amino acid sequence of can be mentioned as an epitope.
  • the monoclonal antibody binds to a partial peptide or partial three-dimensional structure to which the 151D antibody or the like binds, it can be determined that the monoclonal antibody binds to the same epitope as the antibody such as the 151D antibody. Further, by confirming that the monoclonal antibody competes with the binding of the antibody such as the 151D antibody to GARP (that is, the monoclonal antibody interferes with the binding of GARP to the 151D antibody or the like), a specific epitope is obtained. Even if the sequence or structure of the above is not determined, it can be determined that the monoclonal antibody binds to the same epitope as the antibody such as the 151D antibody. When it is confirmed that the epitopes are the same, it is strongly expected that the monoclonal antibody has the same characteristics as the antibody such as the 151D antibody.
  • the antibody of the present invention includes a recombinant antibody artificially modified for the purpose of reducing heterologous antigenicity to humans, for example, a chimeric antibody, humanized antibody ( Humanized) antibody, human antibody and the like are also included. These antibodies can be produced using known methods.
  • Examples of the anti-GARP antibody according to the present invention include the following chimeric antibody and humanized antibody.
  • chimeric antibody examples include an antibody in which the variable region and the constant region of the antibody are different from each other, for example, a chimeric antibody in which the variable region of a mouse or rat-derived antibody is bonded to a human-derived constant region (Proc. Natl. Acad). Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984)).
  • the chimeric antibody derived from the rat anti-human GARP antibody 151D is composed of a heavy chain containing a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a light chain containing a light chain variable region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5.
  • Antibodies which may have a constant region of any human origin.
  • the chimeric antibody derived from the rat anti-human GARP antibody 198D is a light chain containing a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain containing a light chain variable region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9. It is an antibody consisting of a chain and may have a constant region derived from any human.
  • such a chimeric antibody comprises a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 13 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 15.
  • Examples thereof include an antibody and an antibody consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 469 of SEQ ID NO: 17 in the sequence listing and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 19. be able to.
  • the amino acid sequence described at positions 1 to 19 is a signal sequence
  • the amino acid sequence described at positions 20 to 136 is a variable region, which is 137 to 466.
  • the second amino acid sequence is the constant region.
  • the amino acid sequence described at positions 1 to 20 is a signal sequence
  • the amino acid sequence described at positions 21 to 129 is a variable region, 130 to 234.
  • the second amino acid sequence is the constant region.
  • the amino acid sequence described at positions 1 to 19 is a signal sequence
  • the amino acid sequence described at positions 20 to 139 is a variable region, 140 to 469.
  • the second amino acid sequence is the constant region.
  • the amino acid sequence described at positions 1 to 20 is a signal sequence
  • the amino acid sequence described at positions 21 to 129 is a variable region, 130 to 234.
  • the amino acid sequence described in the second is a constant region.
  • humanized antibodies antibodies in which only complementarity determining regions (CDRs) are incorporated into human-derived antibodies (see Nature (1986) 3211, p.522-525), and CDR sequences by the CDR transplantation method.
  • CDRs complementarity determining regions
  • amino acid residues of some frameworks can also be mentioned as antibodies (WO90 / 07861) transplanted into human antibodies.
  • the humanized antibody derived from the 151D antibody is not limited to a specific humanized antibody as long as it retains the CDR sequences of all 6 types of the 151D antibody and has antitumor activity.
  • the heavy chain variable region of the 151D antibody is derived from CDRH1 (GFTFSNYYMA) consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 26 to 35 of SEQ ID NO: 3 in the sequence listing, and the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 50 to 59 of SEQ ID NO: 3.
  • CDRH2 (SIGTVGGNTY) and CDRH3 (EDYGGFPH) consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 99 to 106 of SEQ ID NO: 3.
  • the light chain variable region of the 151D antibody is derived from the amino acid sequences of CDRL1 (KASQNVGTNVD) consisting of the amino acid sequences of amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 5 and the amino acid sequences of amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 5.
  • CDRL2 GASNRYT
  • CDRL3 LQYKYNPYT
  • the heavy chain variable region of the 198D antibody is derived from the amino acid sequences of CDRH1 (GFSLTSFHVS) consisting of the amino acid sequences of amino acid numbers 26 to 35 of SEQ ID NO: 7 and the amino acid sequences of amino acid numbers 50 to 58 of SEQ ID NO: 7.
  • CDRH2 TISSGGGTY
  • CDRH3 ISGWGHYVMV
  • the light chain variable region of the 198D antibody is derived from the amino acid sequences of CDRL1 (QASEDIYSGLA) consisting of the amino acid sequences of amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 9 and the amino acid sequences of amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 9.
  • CDRL2 GAGSLQD
  • CDRL3 QQGLKFPLT
  • Examples of the humanized antibody of rat antibody 151D include (1) the amino acid sequence shown in amino acid numbers 20 to 136 of SEQ ID NO: 21 (h151D-H1) or SEQ ID NO: 23 (h151D-H4) in the sequence listing, (2). ) An amino acid sequence having at least 95% or more homology to the sequence of the framework region other than each CDR sequence in the above sequence (1), and (3) a frame other than each CDR sequence in the above sequence (1). A heavy chain containing a heavy chain variable region consisting of any one of the amino acid sequences in which one or several amino acids are deleted, substituted or added in the sequence of the work region, and (4) SEQ ID NO: 25 (h151D-L1).
  • amino acid sequence shown in amino acid numbers 21 to 129 of SEQ ID NO: 27 (h151D-L4), (5) at least 95% or more of the sequence of the framework region other than each CDR sequence in the sequence of (4) above.
  • amino acid sequences having homology either one of the amino acid sequences having homology and (6) the amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted or added in the sequence of the framework region other than each CDR sequence in the sequence of (4) above.
  • Any combination of light chains, including the light chain variable region consisting of one, can be mentioned.
  • Examples of the humanized antibody of rat antibody 198D include (1) the amino acid sequence shown in amino acid numbers 20 to 139 of SEQ ID NO: 29 (h198D-H3) in the sequence listing, and (2) the sequence of (1) above. In, an amino acid sequence having at least 95% homology to the sequence of the framework region other than each CDR sequence, and (3) 1 or 1 in the sequence of the framework region other than each CDR sequence in the above sequence (1).
  • a heavy chain containing a heavy chain variable region consisting of any one of the amino acid sequences in which several amino acids have been deleted, substituted or added, and (4) amino acid numbers 21 to 129 of SEQ ID NO: 31 (h198D-L4).
  • a suitable combination of the heavy chain and the light chain of the humanized 151D antibody is the heavy chain having the heavy chain variable region consisting of the amino acid sequences set forth in amino acid numbers 20 to 136 of SEQ ID NO: 21 and the amino acid number 21 of SEQ ID NO: 25.
  • a more preferred combination is an antibody (h151D-) consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 21 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 25. H1L1), and an antibody (h151D-H4L4) consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 23 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 27.
  • an antibody (h151D-) consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 21 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 25.
  • an antibody (h151D-H4L4) consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 466 of SEQ ID NO: 23 and
  • a suitable combination of the heavy chain and the light chain of the humanized 198D antibody is the heavy chain having the heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 139 of SEQ ID NO: 29 and the amino acid number 21 of SEQ ID NO: 31.
  • Examples thereof include an antibody consisting of a light chain having a light chain variable region consisting of the amino acid sequence described in the 129th position.
  • a more preferred combination is an antibody (h198D-) consisting of a heavy chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 469 of SEQ ID NO: 29 and a light chain having the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 31. H3L4) can be mentioned.
  • an antibody having cytotoxic activity equivalent to that of each of the above antibodies is generally 80% or more homology, preferably 85% or more homology, more preferably 90% or more homology, and even more preferably 95% or more.
  • the homology is 99% or more, most preferably 99% or more.
  • An antibody having cytotoxic activity equivalent to that of each of the above antibodies can also be obtained by combining an amino acid sequence in which one to several amino acid residues are substituted, deleted or added to the amino acid sequence of a heavy chain or a light chain. It is possible to select.
  • severed pieces in this specification are 1 to 10 pieces, 1 to 9 pieces, 1 to 8 pieces, 1 to 7 pieces, 1 to 6 pieces, 1 to 5 pieces, 1 to 4 pieces, 1 It means ⁇ 3, or 1 or 2.
  • Blast algorithm version 2.2.2 (Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alexandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Lipman, Lipman, Zhang, Lipman, Zhang, and Zhang (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402) can be used for determination.
  • Blast algorithm is available on the Internet at www. ncbi. nlm. nih. It can also be used by accessing gov / blast.
  • the homology between the nucleotide sequence of the antibody of the present invention and the nucleotide sequence of another antibody can also be determined by Blast algorithm.
  • the amino acid sequences 1 to 19 are signal sequences, and the amino acid sequences 20 to 136 are described.
  • the amino acid sequence is a variable region, and the amino acid sequence consisting of the amino acid residues described in positions 137 to 466 is a constant region.
  • amino acid sequences described in positions 1 to 20 are signal sequences, and are described in positions 21 to 129.
  • the amino acid sequence is a variable region, and the amino acid sequences described at positions 130 to 234 are constant regions.
  • the amino acid sequence described in positions 1 to 19 is a signal sequence, and the amino acid sequence described in positions 20 to 139 is variable. It is a region, and the amino acid sequence described at positions 140 to 469 is a constant region.
  • the amino acid sequences 1 to 20 are signal sequences, and the amino acid sequences 21 to 129 are variable. It is a region, and the amino acid sequence described at positions 130 to 234 is a constant region.
  • the heavy chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21 or SEQ ID NO: 23 in the sequence listing for the humanized 151D antibody is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 20 or SEQ ID NO: 22 in the sequence listing, respectively.
  • the heavy chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 29 of the sequence listing for the humanized 198D antibody is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 28 of the sequence listing.
  • the light chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 27 of the sequence listing for the humanized 151D antibody is encoded by the nucleotide sequence set forth in SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 26 of the sequence listing, respectively.
  • the light chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 31 of the sequence listing for the humanized 198D antibody is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 30 of the sequence listing.
  • a human antibody can be mentioned as an example of the anti-GARP antibody of the present invention.
  • the human antibody is a method using a human antibody-producing mouse having a human chromosome fragment containing a gene for a heavy chain and a light chain of the human antibody (Nature Genetics (1997) 16, p. 133-143; Nucl. Acids Res. (1998). ) 26, p.3447-3448; Animal Cell Technology: Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Ijima, S. eds. .; See Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, p. 722-727, etc.).
  • a method for obtaining a human antibody derived from a phage display selected from a human antibody library (Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), p.2301-2308; Briefings in Functional Genomics and Proteo). 1 (2), p.189-203; see Ophthalmology (2002) 109 (3), p.427-431, Nature Biotechnology (2005), 23, (9), p.1105-1116, etc.). Can be done.
  • the DNA sequence encoding the variable region of the human antibody that binds to the antigen can be determined.
  • an IgG expression vector having the sequence is prepared by ligating the DNA sequence of the constant region of the antibody, and introduced into an appropriate host for expression in humans.
  • Antibodies can be obtained (WO92 / 0147, WO92 / 20791, WO93 / 06213, WO93 / 11236, WO93 / 19172, WO95 / 01438, WO95 / 15388, Annu. Rev. Immunol (1994) 12, p.433- 455, Nature Biotechnology (2005) 23 (9), p.1105-1116).
  • human antibody of the present invention examples include a human antibody that binds to the same epitope as the humanized 151D antibody or the humanized 198D antibody.
  • the antibody of the present invention also includes a modified antibody.
  • the modified product means an antibody of the present invention that has been chemically or biologically modified.
  • Chemical modifications include the binding of chemical moieties to the amino acid backbone, chemical modifications of N-linked or O-linked carbohydrate chains, and the like.
  • Biological modifications include post-translational modifications (eg, glycosylation of N- or O-bonds, N-terminal or C-terminal processing, deamidation, aspartic acid isomerization, methionine oxidation). Included, those with a methionine residue added to the N-terminal by expression using a prokaryotic host cell, and the like.
  • those labeled to enable the detection or isolation of the antibody or antigen of the present invention for example, an enzyme-labeled substance, a fluorescent-labeled substance, and an affinity-labeled substance are also included in the meaning of such modified substances.
  • modifications of the antibody of the present invention are useful for improving the stability and blood retention of the original antibody of the present invention, reducing antigenicity, detecting or isolating such antibody or antigen.
  • WO99 / 54342 WO00 / 61739, WO02 / 31140, WO2007 / 133855, and the like are known as techniques for regulating the sugar chain modification of an antibody, but the technique is not limited thereto.
  • the antibody of the present invention also includes an antibody in which the sugar chain modification has been adjusted.
  • Those used for the purpose of the present invention include “functional fragments of antibodies” or “antigen-binding fragments of antibodies”.
  • “functional fragment of an antibody” is meant an antibody fragment that performs at least a portion of the function of the original antibody.
  • Examples of the "functional fragment of the antibody” or the “antigen-binding fragment of the antibody” include, but are limited to, Fab, F (ab') 2, scFv, Fab', single-chain immunoglobulin and the like. It's not something.
  • the functional fragment of such an antibody is a recombinant protein produced in an appropriate host cell using a recombinant gene in addition to the one obtained by treating the full-length molecule of the antibody protein with an enzyme such as papain or pepsin. You may.
  • the antibody of the present invention also includes an antibody having two or more antigen binding sites. That is, it is an antibody capable of binding to two or more different epitopes on one antigen or different epitopes on two or more antigens, and wraps a plurality of different antigen-binding fragments.
  • Such multispecific antibodies include IgG multispecific antibodies, multispecific antibodies having two or more variable regions, such as tandem scFv, single chain diabodies, diabodies, and triabodies. It includes, but is not limited to, fragments, covalently or non-covalently linked antibody fragments.
  • the multispecific antibody may include Fc.
  • the antibody of the present invention is a transgenic human monoclonal antibody obtained by transforming eukaryotic cells with a cDNA encoding each of the heavy chain and the light chain of the antibody of the present invention, preferably a vector containing the cDNA, by a gene recombination technique.
  • the antibody can also be obtained from the culture supernatant by culturing the transformed cells that produce the antibody.
  • an antibody gene When an antibody gene is once isolated and then introduced into an appropriate host to prepare an antibody, a combination of an appropriate host and an expression vector can be used.
  • Specific examples of the antibody gene include a combination of a gene encoding the heavy chain sequence of the antibody described in the present specification and a gene encoding the light chain sequence.
  • the heavy chain sequence gene and the light chain sequence gene When transforming a host cell, the heavy chain sequence gene and the light chain sequence gene can be inserted into the same expression vector, or can be inserted into different expression vectors. is there.
  • animal cells When using eukaryotic cells as a host, animal cells, plant cells, and eukaryotic microorganisms can be used.
  • animal cells include mammalian cells, for example, monkey cells, COS cells (Gluzman, Y. Cell (1981) 23, p.175-182, ATCC CRL-1650), mouse fibroblasts NIH3T3 (ATCC: No). CRL-1658) and Chinese hamster ovary cells (CHO cells, ATCC CCL-61) dihydrofolate reductase deficient strains (Urlaub, G. and Chain, LA Proc. Natl. Acad. Sci. US) A. (1980) 77, p. 4126-4220).
  • Escherichia coli and Bacillus subtilis can be mentioned.
  • Antibodies can be obtained by introducing the target antibody gene into these cells by transformation and culturing the transformed cells in vitro.
  • the yield may differ depending on the sequence of the antibody, and it is possible to select an antibody having the same binding activity that is easy to produce as a drug by using the yield as an index. Therefore, the antibody of the present invention comprises a step of culturing the transformed host cell and a step of collecting the target antibody from the culture obtained in the step. Antibodies obtained from the above are also included.
  • the present invention also includes the modified antibody, which is a deletion in which one or two amino acids are deleted at the heavy chain carboxyl terminal, and the amidated deletion (for example, at the carboxyl terminal site).
  • a heavy chain in which a proline residue is amidated) and the like can be mentioned.
  • the deletion of the carboxyl end of the heavy chain of the antibody according to the present invention is not limited to the above types.
  • the two heavy chains constituting the antibody according to the present invention may be any one of the heavy chains selected from the group consisting of the full length and the above-mentioned deletion products, or a combination of the two heavy chains. It may be a thing.
  • the amount ratio of each deletion substance can be affected by the type and culture conditions of the cultured mammalian cells producing the antibody according to the present invention, but the main component of the antibody according to the present invention is carboxyl on both of the two heavy chains.
  • the case where one amino acid residue at the end is deleted can be mentioned.
  • the antibodies described in (1) to (3) below can be mentioned.
  • Examples of the isotype of the antibody of the present invention include IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), and preferably IgG1, IgG2 or IgG4.
  • the antibody of the present invention may be a large amount to enhance the affinity for the antigen.
  • the antibody to be increased in quantity may be one type of antibody or a plurality of antibodies recognizing a plurality of epitopes of the same antigen.
  • Examples of the method for increasing the amount of antibody include binding of an IgG CH3 domain to two scFv (single chain antibody), binding to streptavidin, introduction of a helix sutern-helix motif, and the like.
  • the antibody of the present invention may be a polyclonal antibody.
  • a polyclonal antibody a mixture of a plurality of types of antibodies having different CDRs can be mentioned.
  • a polyclonal antibody a mixture of cells producing different antibodies can be cultured, and an antibody purified from the culture can be used (see WO2004 / 061104).
  • an antibody bound to various molecules such as polyethylene glycol (PEG) can also be used.
  • PEG polyethylene glycol
  • the antibody of the present invention may be an antibody in which these antibodies and other agents form a conjugate (Immunoconjugate).
  • an antibody include those in which the antibody is bound to a radioactive substance or a compound having a pharmacological action (Nature Biotechnology (2005) 23, p.1137-1146), for example, indium ( 111In) Capromab pendetide (Indium (111In) Capromab pentedide), technetium (99mTc) nofetumomab melpentan (Technetium (99mTc) Nofetumomab merpentan), indium (111In) Ibritum (111In) ) Ibritumomab), iodine (131I) tositumomab (Idine (131I) tositumomab) and the like.
  • Immunomodulators are agents that activate anti-tumor immunity, and include immune checkpoint inhibitors, immune inducers, immunostimulators, and the like.
  • the "immune checkpoint inhibitor” refers to a drug that inhibits the immunosuppressive system and activates anti-tumor immunity.
  • the immune checkpoint inhibitor used in the present invention is not particularly limited, but preferably includes an anti-PD-1 antibody, an anti-PD-L1 antibody, an anti-PD-L2 antibody, and an anti-CTLA-4 antibody. And more preferably, anti-PD-1 antibody and anti-PD-L1 antibody can be mentioned.
  • the "anti-PD-1 antibody” refers to PD-1 and its binding partner, PD-L1, by specifically binding to PD-1 (Programmed cell death-1; CD279; PDCD1). And PD-L2 show antibodies that reduce, inhibit, and / or interfere with signal transduction resulting from interaction with PD-L2.
  • the anti-PD-1 antibody used in the present invention is not particularly limited as long as its clinical efficacy and safety have been confirmed, but preferably nivolumab (WO2006 / 121168, etc.), pembrolizumab, etc.
  • the "anti-PD-L1 antibody” refers to PD-L1 and its binding partner, PD, by specifically binding to PD-L1 (Programmed cell death ligand 1; CD274; B7-H1). Indicates an antibody having an action of reducing, inhibiting, and / or interfering with signal transduction resulting from interaction with -1 or B7.1 (CD80).
  • the anti-PD-L1 antibody used in the present invention is not particularly limited as long as its clinical efficacy and safety have been confirmed, but preferably atezolizumab (International Publication No. 2010/077634). Etc.), Durvalumab (International Publication No. 2011/066389, etc.), and Avelumab (International Publication No.
  • the "anti-CTLA-4 antibody” refers to CTLA-4 and its binding partner, B7. Indicates an antibody that has the effect of reducing, inhibiting, and / or interfering with signal transduction resulting from interaction with 1 (CD80) or B7.2 (CD86).
  • the anti-CTLA-4 antibody used in the present invention is not particularly limited as long as its clinical efficacy and safety have been confirmed, but preferably Ipilimumab (International Publication No. 2001/014424). Etc.), and Tremelimumab (International Publication No. 2000/037504, etc.).
  • a commercially available research anti-CTLA-4 antibody eg, clone 9H10 or the like can also be used.
  • the immune checkpoint inhibitor used in the present invention includes a multispecific antibody.
  • Such multispecific molecules include IgG-type multispecific molecules, multispecific molecules having two or more variable regions, such as tandem scFv, single-stranded diabody, diabody, and triabody. It includes, but is not limited to, antibody fragments, covalently or non-covalently linked antibody fragments.
  • the multispecific molecule may include Fc. Specifically, an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof, an anti-PD-L2 antibody or an antigen-binding fragment thereof, and an anti-CTLA-4 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • Specific antibodies can be mentioned, but are not limited to this.
  • the "immunoinducing agent” is not particularly limited, but preferred examples thereof include radiation therapy (irradiation), chemoradiotherapy, and chemotherapeutic agents.
  • the "chemotherapeutic agent” refers to an agent that induces anti-tumor immunity such as removal of Tregs and reduction of myeloid-deved supressor cells (MDSC).
  • examples include, but are not limited to, voltezomib, ABT-737, 5-FU, temozolomide, and dacarbazine (Nat Rev Drag Discov. 2012 Feb 3; 11 (3): 215-33, Front Immunol. 2019 Jul 17; 10 :. 1654, Clin Cancer Res 2009; 15: 2148-2157, Cancer Immunol Immunother (2007) 56: 641-648).
  • the "immunostimulant” is not particularly limited, but preferably, an agonist antibody and an adjuvant can be mentioned.
  • compositions and therapeutic methods characterized in that an anti-GARP antibody according to the present invention and an immunomodulator are administered in combination, and anti-tumor immunity containing the anti-GARP antibody according to the present invention.
  • a pharmaceutical composition and a therapeutic method which are characterized by being used for the treatment of a disease improved by an activating action, will be described.
  • an anti-GARP antibody and an immunomodulator are contained as active ingredients in different preparations, or are combined with radiotherapy or chemoradiotherapy in the immunomodulator at the same time. Alternatively, it may be administered at different times, or the anti-GARP antibody and the immunomodulator may be contained as an active ingredient in a single preparation and administered. It may be. Further, the anti-GARP antibody according to the present invention may be contained and administered as an active ingredient in a single preparation for the treatment of a disease improved by an action of activating anti-tumor immunity.
  • increasing the action of an antibody means that the antitumor effect is enhanced as compared with the case where the antibody is administered as a single agent.
  • increasing the action of an immunomodulator means that the antitumor immunoactivating action is enhanced as compared with the case where the immunomodulator is administered as a single agent.
  • the pharmaceutical composition and treatment method of the present invention can be used for the treatment of cancer, preferably lung cancer, renal cancer, urinary tract epithelial cancer, colon cancer, prostate cancer, polymorphism.
  • It can be used for the treatment of at least one disease. More preferably, it can be used for the treatment of at least one disease selected from the group consisting of head and neck cancer, gastric cancer, esophageal cancer and their metastatic forms.
  • compositions and therapeutic methods of the present invention can be selectively used as agents for drug therapy, which is a major therapeutic method for cancer, and as a result, slow the growth of cancer cells and cause their growth. It can suppress and even destroy cancer cells. By these actions, it is possible to achieve relief from the symptoms caused by cancer and improvement of QOL in cancer patients, and to maintain the life of cancer patients and achieve therapeutic effects. Even if cancer cells are not destroyed, suppression and control of cancer cell growth can achieve higher quality of life and longer survival in cancer patients.
  • the pharmaceutical composition and treatment method of the present invention can also be used as a drug to be combined with other therapies in adjuvant therapy, such as surgery, radiotherapy, hormone therapy, etc. Can be combined with. Furthermore, it can be used as a drug for drug therapy in neoadjuvant therapy.
  • the pharmaceutical composition and therapeutic method of the present invention can be expected to have a preventive effect such as suppressing the growth of fine metastatic cancer cells and further destroying them.
  • a preventive effect such as suppressing the growth of fine metastatic cancer cells and further destroying them.
  • it can be expected to have an effect of suppressing and destroying cancer cells in body fluid in the process of metastasis, and an effect of suppressing and destroying minute cancer cells immediately after implantation in any tissue. Therefore, it can be expected to suppress and prevent cancer metastasis, especially after surgical removal of cancer.
  • the pharmaceutical composition and treatment method of the present invention can be applied to patients as systemic therapy, and can be locally applied to cancer tissues to expect therapeutic effects.
  • the pharmaceutical composition and therapeutic method of the present invention can be preferably used for mammals, but more preferably for humans.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered as a pharmaceutical composition containing one or more pharmaceutically compatible ingredients.
  • the substance used in the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately selected and applied from pharmaceutical additives and others usually used in this field in terms of dose and concentration.
  • the pharmaceutical composition typically comprises one or more pharmaceutical carriers (eg, sterile liquids).
  • the liquid includes, for example, water and oil (oil of petroleum, animal origin, plant origin, or synthetic origin).
  • the oil may be, for example, peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil or the like. Water is a more representative carrier when the pharmaceutical composition is administered intravenously.
  • Aqueous saline solutions as well as aqueous solutions of dextrose and glycerol, can also be used as liquid carriers, especially for injectable solutions.
  • Suitable pharmaceutical excipients can be appropriately selected from those known in the art.
  • the composition may also contain trace amounts of wetting or emulsifying agents, or pH buffering agents, if desired.
  • suitable pharmaceutical carriers include E. coli. W. Described in "Remington's Pharmaceutical Sciences" by Martin. The formulation corresponds to the mode of administration.
  • the introduction route may include, but is not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, and subcutaneous routes. Administration can be, for example, by injection or bolus injection. In certain preferred embodiments, administration of the anti-GARP antibody and immunomodulatory agent used in the present invention is by infusion. Parenteral administration is the preferred route of administration.
  • the pharmaceutical composition is formulated as a pharmaceutical composition suitable for intravenous administration to humans according to a habitual procedure.
  • the composition for intravenous administration is a solution in sterile isotonic aqueous buffer.
  • the pharmaceutical composition may also include a solubilizer and a local anesthetic (eg, lignokine) to relieve pain at the injection site.
  • the components are, for example, separately or together in a unit dosage form, as a dry lyophilized powder or anhydrous concentrate in a container sealed and sealed with an ampoule or sachet indicating the amount of activator. Mixed and supplied with either.
  • the pharmaceutical composition When the pharmaceutical composition is administered by injection, it can be administered, for example, in an infusion bottle containing sterile pharmaceutical grade water or saline solution.
  • an ampoule of sterile water for injection or saline solution may be provided, for example, so that the ingredients can be mixed prior to administration.
  • the pharmaceutical composition and therapeutic method of the present invention may contain a cancer therapeutic agent other than the anti-GARP antibody and the immunomodulator according to the present invention.
  • the pharmaceutical composition and therapeutic method of the present invention can also be administered in combination with other cancer therapeutic agents, whereby the antitumor effect can be enhanced.
  • Other cancer therapeutic agents used for such a purpose may be administered to an individual individually or continuously at the same time as the pharmaceutical composition of the present invention, or may be administered at different administration intervals. May be done.
  • cancer therapeutic agents include 5-fluorouracil (5-FU), pertuzumab (Pertuzumab), trastuzumab, paclitaxel, carboplatin, carboplatin, cisplatin, cisplatin, ginotecan, gemcitabin, and gemcitabin.
  • Capecitabine irinotecan (CPT-11), docetaxel, pemetrexed, sorafenib, sorafenib, vinbrastin, vinorelbine, vinorelbine, vinorelbine Bevacizumab, Oxaliplatin, Lapatinib, Trastuzumab emtansine (T-DM1) or International Publication No.
  • Such a pharmaceutical composition can be formulated as a lyophilized preparation or a liquid preparation as a preparation having a selected composition and a required purity.
  • a pharmaceutical composition When formulated as a lyophilized preparation, it may be a preparation containing a suitable preparation additive used in this field.
  • a liquid preparation can be formulated as a liquid preparation containing various preparation additives used in this field.
  • the antitumor effect of the pharmaceutical composition and the therapeutic method of the present invention can be confirmed by measuring the immunostimulatory activity or the tumor cell proliferation inhibitory activity. It can also be confirmed by creating a model in which a tumor is transplanted into a test animal and applying the therapeutic agent or method of the present invention.
  • the antitumor effect of the therapeutic agent and method of the present invention can be verified using a surrogate antibody when the anti-GARP antibody of the present invention does not bind to the GARP of the model animal. It is desirable that the surrogate antibody has the same or similar binding activity or functional properties as the anti-GARP antibody of the present invention.
  • the effect can be predicted by an ex vivo evaluation system such as CANscript (MITRA RXDX, INC) (Nat Commun. 2015 Feb 27 (6); 6169).
  • the immunostimulatory activity and antitumor effect can be measured by the method described in WO2017 / 051888.
  • the antitumor effect of the pharmaceutical composition and therapeutic method of the present invention can be confirmed in clinical trials. That is, the therapeutic agent or treatment method of the present invention can be applied to a cancer patient and confirmed by the Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST) evaluation method, WHO evaluation method, Macdonald evaluation method, weight measurement, and other methods. , Complete response (CR), Partial response (PR), Progressive disease (PD), Objective Response Rate (ORR), Duration of Response; It can be determined by indicators such as progression-free survival (PFS) and overall survival (OS).
  • RECIST Solid Tumors
  • the anti-GARP antibody and immunomodulator contained in the pharmaceutical composition of the present invention have an affinity for an antigen, that is, a dissociation constant (Kd value) for the antigen.
  • Kd value dissociation constant
  • the higher the affinity (lower the Kd value) the more the medicinal effect can be exhibited even with a small dose. Therefore, the doses of anti-GARP antibody and immunomodulatory agent can also be set based on the status of affinity with the antigen.
  • the anti-GARP antibody and immunomodulator according to the present invention are administered to humans, for example, about 0.001 to 100 mg / kg is administered once or multiple times at intervals of 1 to 180 days. do it.
  • the anti-GARP antibody of the present invention for example, as an administration method, a method of administering 0.01 mg / kg to 100 mg / kg once or twice or more can be mentioned.
  • the dosage is, for example, 0.01 mg / kg, 0.03 mg / kg, 0.1 mg / kg, 0.3 mg / kg, 1 mg / kg, 3 mg / kg, 5 mg / kg, 10 mg / kg, 30.0 mg / kg. kg and 100 mg / kg can be mentioned.
  • the administration may be once a week (q1w), once every two weeks (q2w), once every three weeks (q3w), or once every four weeks (q4w).
  • a method of administering 0.3 mg / kg, 1 mg / kg, 3 mg / kg, or 10 mg / kg of the antibody of the present invention once or twice or more once every three weeks can be mentioned.
  • the immune checkpoint inhibitor used in the present invention is, for example, about 1 to 20 mg / kg (body weight) at a time or about 80 to 1500 mg at a time at intervals of 2 to 6 weeks for about 30 minutes, about 60 minutes, about. It can be administered intravenously (for example, intravenous drip infusion) for 90 minutes, or for about 30 minutes or longer or about 60 minutes or longer.
  • the dose in terms of body weight per administration for example, 1 mg / kg, 2 mg / kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg, 6 mg / kg, 7 mg / kg, 8 mg / kg, 9 mg / kg, 10 mg / kg or 20 mg / kg can be mentioned, while the dose per administration is, for example, 80 mg, 200 mg, 240 mg, 250 mg, 280 mg, 300 mg, 320 mg, 350 mg, 360 mg, 400 mg, 420 mg, 450 mg, 480 mg.
  • the administration interval includes, for example, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, or 6 weeks, and the single administration time includes, for example, about 30 minutes, about 60 minutes, about 90 minutes, or about 30 minutes or more. Alternatively, it may take about 60 minutes or more.
  • the above usage / dose is an example and is not limited thereto.
  • nivolumab examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • 2 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks, or 3 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused at intervals of 2 weeks.
  • 1 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused four times at 3-week intervals, and then 3 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused at 2-week intervals. ..
  • 3 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused four times at 3-week intervals, and then 3 mg / kg (body weight) of nivolumab is intravenously infused at 2-week intervals. ..
  • 240 mg of nivolumab is intravenously infused at 2-week intervals, or 480 mg of nivolumab is intravenously infused at 4-week intervals.
  • nivolumab As another dosage and administration, for example, 80 mg of nivolumab is intravenously infused four times at 3-week intervals, and then 240 mg of nivolumab is intravenously infused at 2-week intervals or 480 mg of nivolumab is intravenously infused at 4-week intervals. .. As another dosage and administration, for example, 240 mg of nivolumab is intravenously infused four times at 3-week intervals, and then 240 mg of nivolumab is intravenously infused at 2-week intervals or 480 mg of nivolumab is intravenously infused at 4-week intervals. .. Nivolumab may be infused intravenously over 30 minutes or longer. In the case of postoperative adjuvant therapy, for example, the administration period may be up to 12 months.
  • the anti-PD-1 antibody used in the present invention is Pembrolizumab
  • examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • 2 mg / kg (body weight) of Pembrolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks.
  • 10 mg / kg (body weight) of Pembrolizumab is intravenously infused at 2-week intervals.
  • 10 mg / kg (body weight) of Pembrolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks.
  • 200 mg of Pembrolizumab is intravenously infused at 3 week intervals or 400 mg of Pembrolizumab is intravenously infused at 6 week intervals.
  • 200 mg of Pembrolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks, and then 200 mg of Pembrolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks.
  • Pembrolizumab may be administered by intravenous drip infusion over 30 minutes, for example. Therefore, as another dosage and administration, for example, 200 mg of Pembrolizumab is intravenously infused at 3-week intervals or 400 mg of Pembrolizumab is intravenously infused over 30 minutes at 6-week intervals.
  • the administration period may be up to 12 months.
  • the anti-PD-L1 antibody used in the present invention is atezolizumab
  • examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • 1200 mg of atezolizumab is intravenously infused at 3-week intervals.
  • 840 mg of atezolizumab is intravenously infused at intervals of 2 weeks.
  • 1200 mg of atezolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks, and then 1200 mg of atezolizumab is intravenously infused at intervals of 3 weeks.
  • Atezolizumab may be infused intravenously over 60 minutes, for example.
  • Atezolizumab is intravenously infused over 60 minutes at intervals of 3 weeks, or 840 mg of atezolizumab is intravenously infused over 60 minutes at intervals of 2 weeks. If the tolerability of the first administration is good, the administration time after the second administration may be shortened to 30 minutes.
  • the anti-PD-L1 antibody used in the present invention is Durvaluumab
  • examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • 10 mg / kg (body weight) of Durvalumab is intravenously infused at 2-week intervals.
  • 1500 mg of Durvaluumab is intravenously infused four times at 3-week intervals, and then 1500 mg of Durvalumab is intravenously infused at 4-week intervals.
  • Durvalumab may be infused intravenously over 60 minutes or longer. Therefore, as another dosage and administration, for example, 10 mg / kg (body weight) of Durvaluumab is intravenously infused over 60 minutes at 2-week intervals.
  • 1500 mg of Durvaluumab is intravenously infused four times at 3-week intervals over 60 minutes, and then 1500 mg of Durvalumab is once applied at 4-week intervals for 60 minutes or more. Intravenous drip.
  • the single dose may be 20 mg / kg (body weight).
  • the anti-PD-L1 antibody used in the present invention is Avelumab
  • examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • Avelumab 10 mg / kg (body weight) is intravenously infused at 2-week intervals.
  • Avelumab may be infused intravenously over an hour or longer. Therefore, as another dosage and administration, for example, as Avelumab, 10 mg / kg (body weight) is intravenously infused at intervals of 2 weeks over 1 hour or more.
  • the anti-CTLA-4 antibody used in the present invention is Ipilimumab
  • examples thereof include, but are not limited to, the method of administration at the following dosage and administration.
  • 3 mg / kg (body weight) of Ipilimumab is intravenously infused four times at 3-week intervals.
  • 1 mg / kg (body weight) of Ipilimumab is intravenously infused four times at 3-week intervals.
  • Ipilimumab may be infused intravenously over 30 or 90 minutes.
  • the present invention uses the antibody of the present invention to prepare a pharmaceutical composition for the treatment of cancer, the use of the antibody of the present invention for the treatment of cancer, the use of the antibody of the present invention for the treatment of cancer including the antibody of the present invention. Also includes a kit.
  • Example 1 Combined effect of anti-GARP antibody and anti-PD-1 antibody on Teff cell proliferation activation 1) -1 Preparation of Treg, Teff and accessory cells CD4-positive T cells were isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors. After that, fluorescently labeled anti-CD4 antibody and anti-CD25 antibody were added and stained, and CD4 positive CD25 negative (Teff) cells and CD4 positive CD25 strongly positive (Treg) cells were separated by sorting using flow cytometry.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • accessory cells were prepared by irradiating X-rays with an irradiation dose of 0.35 C / kg.
  • Treg cells were further added at 1000, 500, 250, or 125 cells / well.
  • anti-CD3 antibody and anti-CD28 antibody (1 nM each)
  • anti-GARP antibody h151D_H1L1
  • anti-PD-1 antibody nivolumab
  • [3 H] -thymidine final concentration 18.5kBq / mL
  • cell recovery was measured as the correction count per minute intracellular uptake value of [3 H] -thymidine for each well using a scintillation counter (CCPM, corrected count perminute).
  • AUC (A + B x 2 + C x 2 + D x 2 + E) / 2
  • the h151D_H1L1 treatment group and the nivolumab treatment group when the media control group was used as the target group and the h151D_H1L1 treatment group and the h151D_H1L1 treatment group when the communication group was used as the target group.
  • Statistical analysis was performed on the nivolumab treatment group by parametric Dunnett's test (SAS System Release 9.2, SAS Institute Inc.).
  • the relative AUC values of the four donors and their average values are shown in FIG.
  • the average value of the relative AUC of the control IgG-treated group was 1.08 times that of the medium control group.
  • Example 2 Prediction of clinical effects when anti-GARP antibody and anti-PD-1 antibody using CANscript (registered trademark) are used in combination CANscript (registered trademark) (MITRA RXDX, INC (hereinafter referred to as "Mitra")) is used to detect cancer tissues derived from cancer patients.
  • the ex-vivo culture model used was a cancer tissue derived from a cancer patient (maintaining the cancer microenvironmental structure and containing stromal cells, immune cells, and cancer cells), and serum and PBMC derived from the same patient. It is a co-culture test with (Nat Commun. 2015 Feb 27 (6); 6169).
  • the reactivity of the drug to cancer tissue is quantified based on histopathological image and metabolic activity after co-culture for 3 days. That is, cell proliferation and apoptosis induction are evaluated by immunochemical staining of Ki67 and activated Caspase-3, and changes in cell morphology are evaluated by H & E (hematoxylin-eosin) staining. Furthermore, quantification over time is carried out by evaluation of the culture supernatant using a commercially available metabolic activity and cell viability determination assay kit. All these evaluation results are scored (M-score) using a learning algorithm (SVMpAUC algorithm) developed by Mitra.
  • SVMpAUC algorithm learning algorithm developed by Mitra.
  • anti-mouse GARP antibody (1 mg / kg) and anti-mouse PD-1 antibody (5 mg / kg) were administered to Day 9 and Day 16 to each single agent administration group and combination group.
  • the control group did not treat the drug on Day 9 and Day 16.
  • Each antibody was diluted with D-PBS and a liquid volume of 10 mL / kg was intravenously administered to the tail vein. Twice a week, the major and minor diameters of the tumor were measured with an electronic digital caliper (Mitutoyo Corp.), and the estimated tumor volume was calculated from the following formula.
  • the combination group of anti-mouse PD-1 antibody and anti-mouse GARP antibody showed a significant anti-tumor effect as compared with the anti-mouse PD-1 antibody alone administration group. It was.
  • TIL was obtained by removing the tumor on Day 14 and grinding it.
  • the proportion (%) of cytotoxic T-cell co-stimulator (ICOS) -positive cells among CD8-positive T cells was determined by flow cytometric analysis. A significant increase in ICOS-positive CD8-positive T cells was observed in the combination group for each single agent group.
  • the ratio (mean ⁇ standard error) of GARP-positive Tregs (GARP-positive FOXP3-positive CD4-positive T cells) among CD4-positive T cells was significantly reduced in the anti-mouse GARP antibody-administered group and anti-mouse.
  • a significant increase was confirmed in the PD-1 antibody administration group. Furthermore, it decreased significantly in the combination group than in the control group.
  • Example 4 Antitumor test using MC38 subcutaneously transplanted mouse model 4) -1 Combination effect of anti-GARP surrogate antibody and anti-PD-1 surrogate antibody
  • Anti-mouse GARP antibody (1 mg / kg) and anti-mouse PD-1 antibody (1 mg / kg) were administered to Day 4 and Day 10 to each single agent administration group and combination group. The control group did not treat the drug.
  • Each antibody was diluted with D-PBS and a liquid volume of 10 mL / kg was intravenously administered to the tail vein.
  • the major and minor diameters of the tumor were measured twice a week with an electronic digital caliper, and the estimated tumor volume was calculated from the following formula.
  • anti-GARP antibody of the present invention various cancers can be treated or prevented.
  • SEQ ID NO: 1 Amino acid sequence of GARP The amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of SEQ ID NO: 3: 151D, the nucleotide sequence of cDNA encoding the variable region of the heavy chain of SEQ ID NO: 2: 151D.

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Abstract

がんの治療又は予防に使用される医薬組成物等を提供する。 抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とするがんの治療のための医薬組成物又は治療方法を提供する。

Description

抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤の組み合わせ
　本発明は、特定の抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とする、がんの治療のための医薬組成物及びがんの治療方法に関する。
　制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、がん患者の腫瘍域で認められる免疫寛容をもたらす主たる原因細胞である。即ち、がん患者では、腫瘍により活性化されたＴｒｅｇによって、本来働くべき抗腫瘍免疫細胞群が抑制されている状態にあり、このことが腫瘍の増殖につながる（非特許文献１）。
　Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ　Ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ　Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ（ＧＡＲＰ）は、１回膜貫通構造を有する蛋白質であり（非特許文献２）、活性化したＴｒｅｇの細胞表面に発現し、ｌａｔｅｎｔ　ＴＧＦ－β（免疫寛容誘導の重要分子であるＴＧＦ－βの前駆体）との複合体を形成する（非特許文献３）。
　Ｔｒｅｇと、αｖβ６インテグリンを発現するＤＣ等の細胞との、細胞－細胞間相互作用により、ＧＡＲＰを介してＴｒｅｇの細胞表面に留められているｌａｔｅｎｔ　ＴＧＦ－βから成熟化ＴＧＦ－βが分泌され、ＴＧＦ－βの免疫抑制シグナルが標的細胞へ直接伝達される（非特許文献４、５）。このＴＧＦ－βの成熟化にはＧＡＲＰの細胞膜上での発現が必要であることが示されている（非特許文献５）が、一方で膜貫通領域を欠損した可溶性ＧＡＲＰをＣＤ４陽性Ｔ細胞に直接添加した場合にもＣＤ４陽性Ｔ細胞の増殖が抑制される（非特許文献６）ことから、細胞膜上でのＴＧＦ－β成熟化機構を介さない、ＧＡＲＰによる免疫抑制メカニズムの存在も否定できない。
　ＧＡＲＰは、末梢血由来活性化Ｔｒｅｇに発現が認められる他に、臨床的にはがん患者の腫瘍患部へ浸潤したＴ細胞（Ｔｕｍｏｒ　Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　Ｔｃｅｌｌｓ）中に存在するＴｒｅｇ（非特許文献７）、及び腹水中に存在するＴｒｅｇ（非特許文献８）、又は患者末梢血中に存在するＴｒｅｇでの発現が認められる（非特許文献９）。　
　抗ＧＡＲＰ抗体として、ＷＯ２０１７／０５１８８８（特許文献１）に記載の抗体やＷＯ２０１５／０１５００３（特許文献２）、ＷＯ２０１６／１２５０１７（特許文献３）、ＷＯ２０１８／２０６７９０（特許文献４）に記載のＭＨＧ－８、ＬＨＧ－１０が知られている（非特許文献１０）。
　免疫調節剤は、抗腫瘍免疫を活性化する薬剤である（非特許文献１１～１３）。免疫調節剤としては、免疫チェックポイント阻害剤として知られる、抗ＰＤ－１抗体（ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（特許文献５）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（特許文献６）等）や抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）（特許文献７）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）（特許文献８）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）（特許文献９）等）、抗ＣＴＬＡ－４抗体（イピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）（特許文献１０）、トレメリムマブ（Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）（特許文献１１）等）が知られている。
　しかしながら、抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤との具体的な併用効果は知られていない。
ＷＯ２０１７／０５１８８８ ＷＯ２０１５／０１５００３ ＷＯ２０１６／１２５０１７ ＷＯ２０１８／２０６７９０ ＷＯ２００６／１２１１６８ ＷＯ２００８／１５６７１２ ＷＯ２０１０／０７７６３４ ＷＯ２０１１／０６６３８９ ＷＯ２０１３／０７９１７４ ＷＯ２００１／０１４４２４ ＷＯ２０００／０３７５０４
Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１０　Ａｕｇ　１５；１２７（４）：７５９－６７． ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２００８；３（７）：ｅ２７０５． Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ．　２００９；１０６（３２）：１３４４５－５０． Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２００９；３９（１２）：３３１５－２２． Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｃｅｌｌ．　２０１２；２３（６）：１１２９－３９． Ｂｌｏｏｄ．　２０１３；１２２（７）：１１８２－９１． Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２０１２　Ｊｕｌ；４２（７）：１８７６－８５． Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２０１３　Ｏｃｔ；１４９（１）：９７－１１０． Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２０１３；７３：２４３５． Ｓｃｉ　Ｔｒａｎｓｌ　Ｍｅｄ．　２０１５　Ａｐｒ　２２；７（２８４） Ｃａｎｃｅｒｓ．　２０１６　Ｎｏｖ８（１２）；１０６． Ｎａｔ　Ｒｅｖ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１２　Ｍａｒ１２（４）；２５２－２６４ Ｃｅｌｌ．２０１５　Ａｕｇ　１６２（５）；９３７．
　本発明は、抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤とを組み合わせて投与されることを特徴とするがんの治療のための医薬組成物、抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤とを組み合わせて投与されることを特徴とするがんの治療方法を提供する。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤が組み合わされて投与されることにより、優れた抗腫瘍効果を示すことを見出した。
　すなわち、本発明は、以下に関するものである。
〔１〕下記（１）～（３）の特性を有することを特徴とする抗体又はその抗原結合断片、及び、免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とする、がん治療のための医薬組成物；
（１）Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ　Ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ　Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ（ＧＡＲＰ）に特異的に結合する、
（２）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有する、及び、
（３）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、
〔２〕抗体が、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を有することを特徴とする、〔１〕に記載の医薬組成物、
〔３〕抗体が、以下の（１）又は（２）に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖、並びに、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含んでなる、〔１〕又は〔２〕に記載の医薬組成物；
（１）配列番号１３のアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１３のアミノ酸番号６９～７８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１３のアミノ酸番号１１８～１２５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１５のアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１５のアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、又は、
（２）配列番号１７のアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１７のアミノ酸番号６９～７７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１７のアミノ酸番号１１７～１２８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１９のアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１９のアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１９においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、
〔４〕抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、〔１〕～〔３〕のいずれか一つに記載の医薬組成物；
（１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
（２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、又は、
（３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～１３９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
〔５〕抗体が、キメラ抗体である、〔１〕～〔４〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔６〕抗体が、ヒト化抗体である、〔１〕～〔４〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔７〕抗体が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、〔１〕～〔６〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔８〕抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖及び軽鎖を含む、〔６〕又は〔７〕に記載の医薬組成物；
（１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
（２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、又は、
（３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
〔９〕抗体が、〔２〕～〔８〕のいずれか一つに記載の抗体と、ＧＡＲＰへの結合において競合する、〔１〕に記載の医薬組成物、
〔１０〕抗体が、Ｎ－結合型糖鎖付加、Ｏ－結合型糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末におけるメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及び重鎖のカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸残基の欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む、〔１〕～〔９〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔１１〕重鎖のカルボキシル末端において１つ又は数個のアミノ酸残基が欠失している、〔１０〕に記載の医薬組成物、
〔１２〕２本の重鎖の双方でカルボキシル末端において１つのアミノ酸残基が欠失している、〔１０〕又は〔１１〕に記載の医薬組成物、
〔１３〕重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている、〔１０〕～〔１２〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔１４〕免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法又はこれらの組み合わせである、〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔１５〕抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ピジリズマブ又はＬＯＰＤ１８である、〔１４〕に記載の医薬組成物、
〔１６〕抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ又はアベルマブである、〔１４〕に記載の医薬組成物、
〔１７〕抗ＣＴＬＡ－４抗体が、イピリムマブ又はトレメリムマブである、〔１４〕に記載の医薬組成物、
〔１８〕抗体と、免疫調節剤が、それぞれ別異の製剤に有効成分として含有され、同時に又は異なる時間に投与されることを特徴とする、〔１〕～〔１７〕のいずれか一つに記載のがん治療のための医薬組成物、
〔１９〕免疫調節剤と併用するための、〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体を含む、がん治療のための医薬組成物、
〔２０〕免疫調節剤を投与されたがん患者を治療するための、〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体を含む、がん治療のための医薬組成物、
〔２１〕免疫調節剤を含み、〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体と併用することにより、該抗体の作用を上昇させる、がん治療のための医薬組成物、
〔２２〕〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体と併用するための、免疫調節剤を含む、がん治療のための医薬組成物、
〔２３〕〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体を投与されたがん患者を治療するための、免疫調節剤を含む、がん治療のための医薬組成物、
〔２４〕〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の抗体を含み、免疫調節剤と併用することにより、免疫調節剤の作用を上昇させる、がん治療のための医薬組成物、
〔２５〕がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、血液がん、皮膚がん、甲状腺がん、胆道がん、唾液腺がん、小腸がん、副腎がん、精巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、胸腺腫、中皮腫、肉腫及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの治療のための、〔１〕～〔２４〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔２６〕下記（１）～（３）の特性を有することを特徴とする抗体又はその抗原結合断片、及び、免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とする、がんの治療方法；
（１）Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ　Ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ　Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ　（ＧＡＲＰ）に特異的に結合する、
（２）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有する、及び、
（３）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、
〔２７〕抗体が、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を有することを特徴とする、がんの治療方法、
〔２８〕抗体が、以下の（１）又は（２）に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖、並びに、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含んでなる、〔２６〕又は〔２７〕に記載の治療方法；
（１）配列番号１３においてアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１３においてアミノ酸番号６９～７８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１３においてアミノ酸番号１１８～１２５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに配列番号１５においてアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１５においてアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１５においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、又は
（２）配列番号１７においてアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１７においてアミノ酸番号６９～７７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１７においてアミノ酸番号１１７～１２８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに配列番号１９においてアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１９においてアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１９においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、
〔２９〕抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、〔２６〕～〔２８〕のいずれか一つに記載の治療方法；
（１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
（２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、又は、
（３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～１３９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
〔３０〕抗体が、キメラ抗体である、〔２６〕～〔２９〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔３１〕抗体が、ヒト化抗体である、〔２６〕～〔２９〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔３２〕抗体が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、〔２６〕～〔３１〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔３３〕抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖及び軽鎖を含む、〔３１〕又は〔３２〕に記載の治療方法；
（１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
（２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、又は、
（３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
〔３４〕抗体が、〔２７〕～〔３３〕のいずれか一つに記載の抗体と、ＧＡＲＰへの結合において競合する、〔２６〕に記載の治療方法、
〔３５〕抗体が、Ｎ－結合型糖鎖付加、Ｏ－結合型糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末におけるメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及び重鎖のカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸残基の欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む、〔２６〕～〔３４〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔３６〕重鎖のカルボキシル末端において１つ又は数個のアミノ酸残基が欠失している、〔３５〕に記載の治療方法、
〔３７〕２本の重鎖の双方でカルボキシル末端において１つのアミノ酸残基が欠失している、〔３５〕又は〔３６〕に記載の治療方法、
〔３８〕重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている、〔３５〕～〔３６〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔３９〕免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法又はこれらの組み合わせである、〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔４０〕抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ピジリズマブ又はＬＯＰＤ１８である、〔３９〕に記載の治療方法、
〔４１〕抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ又はアベルマブである、〔３９〕に記載の治療方法、
〔４２〕抗ＣＴＬＡ－４抗体が、イピリムマブ又はトレメリムマブである、〔３９〕に記載の治療方法、
〔４３〕免疫調節剤と併用することを特徴とするがんの治療方法であって、それを必要とするがん患者に、〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４４〕免疫調節剤を投与されたがん患者の治療方法であって、それを必要とする患者に、〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４５〕〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体と併用することにより、該抗体の作用を上昇させる方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４６〕〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体と併用することを特徴とするがんの治療方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４７〕〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体を投与されたがん患者の治療方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４８〕免疫調節剤と併用することにより、免疫調節剤の作用を上昇させる方法であって、それを必要とする患者に〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法、
〔４９〕がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、血液がん、皮膚がん、甲状腺がん、胆道がん、唾液腺がん、小腸がん、副腎がん、精巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、胸腺腫、中皮腫、肉腫及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの治療のための、〔２６〕～〔４８〕のいずれか一つに記載の治療方法、
〔５０〕〔１〕～〔１２〕のいずれか一つに記載の抗体、及び、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体及び抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群より選択される１又は２以上の免疫調節剤を含む、がん治療のためのキット製剤、
〔５１〕キットを使用するための取扱説明書をさらに含む、〔５０〕に記載の製剤。
〔５２〕抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、〔１４〕に記載の医薬組成物。
〔５３〕抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブである、〔１４〕に記載の医薬組成物。
〔５４〕抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、〔３９〕に記載の治療方法。
〔５５〕抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブである、〔３９〕に記載の治療方法、
〔５６〕免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法、化学療法剤又はこれらの組み合わせである、〔１〕～〔１３〕のいずれか一つに記載の医薬組成物、
〔５７〕免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法、化学療法剤又はこれらの組み合わせである、〔２６〕～〔３８〕のいずれか一つに記載の治療方法。
　本発明により、特定の抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤が組み合わされて投与されることにより、抗腫瘍効果と安全性面に優れる医薬組成物及び治療方法を提供することができる。
ｃ１５１Ｄ抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号１３）を示す図である。 ｃ１５１Ｄ抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１５）を示す図である。 ｃ１９８Ｄ抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号１７）を示す図である。 ｃ１９８Ｄ抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１９）を示す図である。 ｈ１５１Ｄ－Ｈ１重鎖のアミノ酸配列（配列番号２１）を示す図である。 ｈ１５１Ｄ－Ｌ１軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２５）を示す図である。 ｈ１５１Ｄ－Ｈ４重鎖のアミノ酸配列（配列番号２３）を示す図である。 ｈ１５１Ｄ－Ｌ４軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２７）を示す図である。 ｈ１９８Ｄ－Ｈ３重鎖のアミノ酸配列（配列番号２９）を示す図である。 ｈ１９８Ｄ－Ｌ４軽鎖のアミノ酸配列（配列番号３１）を示す図である。 ドナーＡ及びＢにおけるｃｏｎｔｒｏｌ群、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１単剤処理群及び抗ＰＤ－１抗体ｎｉｖｏｌｕｍａｂ単剤処理群、並びに、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ併用処理群の[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅのＴｅｆｆ細胞内取り込み量の平均値及び標準誤差（６ウェル/群）を示す図である。 ドナーＣ及びＤにおけるｃｏｎｔｒｏｌ群、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１単剤処理群及び抗ＰＤ－１抗体ｎｉｖｏｌｕｍａｂ単剤処理群、並びに、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ併用処理群の[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅのＴｅｆｆ細胞内取り込み量の平均値及び標準誤差（６ウェル/群）を示す図である。 ４名のドナーにおけるｃｏｎｔｒｏｌ群、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１単剤投与群及び抗ＰＤ－１抗体ｎｉｖｏｌｕｍａｂ単剤投与群、並びに、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１及び抗ＰＤ－１抗体ｎｉｖｏｌｕｍａｂ併用投与群のＴｅｆｆ細胞増殖賦活化の指標である相対的ＡＵＣ値を示す図である。 ＣＡＮｓｃｒｉｐｔ（登録商標）を用いた抗ＧＡＲＰ抗体（ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１）と抗ＰＤ－１抗体ｎｉｖｏｌｕｍａｂの併用時臨床効果予測を示す図である。
　以下、本発明を実施するための好適な形態について図面を参照しながら説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これによって本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
１．ＧＡＲＰ
　ヒトＧＡＲＰのアミノ酸配列は配列表の配列番号１（ＮＰ＿００１１２２３９４）に記載されている。
　また、上記ＧＡＲＰのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が置換、欠失及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、当該蛋白質と同等の生物活性を有する蛋白質もＧＡＲＰに含まれる。
　シグナル配列が除かれた成熟ヒトＧＡＲＰは、配列番号１に示されるアミノ酸配列の２０番目から６６２番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列に相当する。
　また、配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列、又はこれらの配列からシグナル配列が除かれたアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列からなり、且つＧＡＲＰと同等の生物活性を有する蛋白質もＧＡＲＰに含まれる。更に、ヒトＧＡＲＰ遺伝子座から転写されるスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列からなり、且つＧＡＲＰと同等の生物活性を有する蛋白質もＧＡＲＰに含まれる。
２．抗ＧＡＲＰ抗体
本発明の抗体の機能としては、抗原結合活性、抗原の活性を中和する活性、抗原の活性を増強する活性、エフェクター活性（ＡＤＣＣ活性、抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）活性及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性等）を挙げることができるが、これに限らない。
　本発明の抗体は、好ましくはＧＡＲＰに対する特異的結合活性、エフェクター活性、Ｔｒｅｇ機能阻害活性、細胞傷害活性（抗腫瘍活性）のいずれか一つ又はそれらの組み合わせを有し、より好ましくはＧＡＲＰに対する特異的結合活性、エフェクター活性（好ましくは、ＡＤＣＣ活性）を介したＴｒｅｇ機能阻害活性による細胞傷害活性（抗腫瘍活性）及びそれらの組み合わせを有する。
　本発明において「がん」、「癌」及び「腫瘍」は同じ意味で用いられる。
　本発明の抗体は、ＧＡＲＰ蛋白質を認識する。言い換えれば、本発明の抗体はＧＡＲＰ蛋白質に結合する。かかる抗体は「抗ＧＡＲＰ抗体」と表記される。また、本発明の好適な抗体はＧＡＲＰ蛋白質を特異的に認識する。言い換えれば、本発明の好適な抗体はＧＡＲＰ蛋白質に特異的に結合する。
　本発明において「特異的な認識」、すなわち「特異的な結合」とは、非特異的な吸着ではない結合を意味する。結合が特異的であるか否かの判定基準としては、例えば、解離定数（Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　Ｃｏｎｓｉｔａｎｔ：以下、「ＫＤという」）をあげることができる。本発明の好適な抗体のＧＡＲＰ蛋白質に対するＫＤ値は１×１０－５Ｍ以下、５×１０－６Ｍ以下、２×１０－６Ｍ以下または１×１０－６Ｍ以下、より好適には５×１０－７Ｍ以下、２×１０－７Ｍ以下または１×１０－７Ｍ以下、より一層好適には５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下または１×１０－８Ｍ以下、更により一層好適には５×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下または１×１０－９Ｍ以下である。
　本発明における抗原と抗体の結合は、ＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、Ｓｕｒｆａｃｅ　Ｐｌａｓｍｏｎ　Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ（以下、「ＳＰＲ」という）解析法等により測定または判定することができる。ＳＰＲ解析に用いる機器としては、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ（ＧＥヘルスケア社製）、ＰｒｏｔｅＯｎＴＭ（ＢｉｏＲａｄ社製）、ＳＰＲ－ＮａｖｉＴＭ（ＢｉｏＮａｖｉｓ社製）、ＳｐｒｅｅｔａＴＭ（Ｔｅｘａｓ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）、ＳＰＲｉ－ＰｌｅｘＩＩＴＭ（ホリバ社製）、Ａｕｔｏｌａｂ　ＳＰＲＴＭ（Ｍｅｔｒｏｈｍ社製）等を例示することができる。細胞表面上の発現している抗原と抗体との結合は、フローサートメトリー法、Ｃｅｌｌ　ＥＬＩＳＡ法等により測定することができる。
　本発明においてＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）とは、Ｆｃγレセプターを発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えばＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ等）が標的細胞上に結合した抗体を認識して、その後にターゲット細胞の溶解を起こす細胞介在性反応をいう。
　本発明においてＡＤＣＰ（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｌ　ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）は、Ｆｃレセプターを発現する貪食細胞（例えばマクロファージ、好中球等）が標的細胞上に結合した抗体を認識して、その後、ターゲット細胞を細胞内に貪食する細胞介在性反応をいう。
　本発明においてＣＤＣ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）は、補体が抗体を介して腫瘍細胞等の標的細胞を傷害する作用活性をいう。
　ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性およびＡＤＣＰ活性は公知の方法により測定することができる。
　ＡＤＣＣ活性の測定には、目的とする抗原を発現する細胞（標的細胞）と、その標的細胞を殺傷するエフェクター細胞が用いられる。エフェクター細胞はＦｃγ受容体を介して、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識する。Ｆｃγ受容体から伝達されるシグナルにより、エフェクター細胞が標的細胞を殺傷する。ヒト由来のＦｃ領域を有する抗体のＡＤＣＣ活性を測定する場合、エフェクター細胞としてヒトＮＫ細胞が用いられる。ヒトＮＫ細胞はヒト末梢血単核球（ＰＭＢＣ)から公知の方法により調製することができる。あるいはＰＢＭＣをそのままエフェクター細胞として用いることもできる。
　ＡＤＣＰ活性の測定には、目的とする抗原を発現する細胞（標的細胞）と、その標的細胞を貪食する単球やマクロファージなどのエフェクター細胞が用いられる。これらのエフェクター細胞は、ヒト末梢血単核球（ＰＭＢＣ)から公知の方法により分離したモノサイト画分を公知の方法によりマクロファージへと分化誘導させて調製することができる。
　ＣＤＣ活性の測定には、目的とする抗原を発現する細胞（標的細胞）と補体成分を用いる。補体成分は、標的細胞に結合した抗体と結合して活性化され、細胞表面で一連の反応を起こし、膜侵襲複合体を形成して標的細胞を殺傷する。この補体成分として、ヒト血清等を用いることができる。
＜抗ＧＡＲＰ抗体の製造＞
ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰのアミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。
（１）抗原の調製
　抗ＧＡＲＰ抗体を作製するための抗原としては、ＧＡＲＰ又はその少なくとも６個の連続した部分アミノ酸配列からなるポリペプチド、あるいはこれらに任意のアミノ酸配列や担体が付加された誘導体を挙げることができる。
　ＧＡＲＰは、ヒトの腫瘍組織あるいは腫瘍細胞から直接精製して使用することができ、また、ＧＡＲＰをｉｎ　ｖｉｔｒｏにて合成する、あるいは遺伝子操作により宿主細胞に産生させることによって得ることができる。
遺伝子操作では、具体的には、ＧＡＲＰのｃＤＮＡを発現可能なベクターに組み込んだ後、転写と翻訳に必要な酵素、基質及びエネルギー物質を含む溶液中で合成する、あるいは他の原核生物、又は真核生物の宿主細胞を形質転換させることによってＧＡＲＰを発現させることにより、抗原を得ることができる。
　また、膜蛋白質であるＧＡＲＰの細胞外領域と抗体の定常領域とを連結した融合蛋白質を適切な宿主・ベクター系において発現させることによって、分泌蛋白質として抗原を得ることも可能である。
（２）抗ＧＡＲＰモノクローナル抗体の製造
本発明の抗体は、公知の手段によって取得することができる。例えば、この分野で通常実施される方法を用いて、抗原となるＧＡＲＰ又はＧＡＲＰのアミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。抗原の由来はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来する抗原を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種抗原に結合する抗体とヒト抗原との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗ＧＡＲＰ抗体を選別できる。
　また、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７５）　２５６，　ｐ．４９５－４９７；Ｋｅｎｎｅｔ，　Ｒ．　ｅｄ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，　ｐ．３６５－３６７，　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎ．Ｙ．（１９８０））。
　このようにして樹立されたハイブリドーマ株の例としては、ＧＡＲＰハイブリドーマ１５１Ｄ及び１９８Ｄを挙げることができる。なお、本明細書中においては、ＧＡＲＰハイブリドーマ１５１Ｄ及び１９８Ｄが産生する抗体を、「１５１Ｄ抗体」若しくは「１９８Ｄ抗体」又は単に「１５１Ｄ」若しくは「１９８Ｄ」と記載する（ＵＳ２０１８２５８１８４参照）。
　１５１Ｄ抗体の重鎖可変領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。また、１５１Ｄ抗体の軽鎖可変領域は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有する。なお、配列番号３に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。また、配列番号５に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。
　１９８Ｄ抗体の重鎖可変領域は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有する。また、１９８Ｄ抗体の軽鎖可変領域は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する。なお、配列番号７に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号６に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。また、配列番号９に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号８に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。
（３）その他の抗体
本発明の抗体として、前記１５１Ｄ抗体又は１９８Ｄ抗体と同一のエピトープに結合する抗体を挙げることができる。１５１Ｄ抗体（ヒト化１５１Ｄ抗体等）は当該配列においてアミノ酸番号３５２～３９２を認識し、及び１９８Ｄ抗体（ヒト化１９８Ｄ抗体等）は当該配列においてアミノ酸番号１８～１１２を認識して結合するので、ＧＡＲＰのアミノ酸配列における当該領域をエピトープとして挙げることができる。
　新たに作製されたモノクローナル抗体が、上記１５１Ｄ抗体等の結合する部分ペプチド又は部分立体構造に結合すれば、当該モノクローナル抗体が上記１５１Ｄ抗体等の抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。　
また上記１５１Ｄ抗体等の抗体のＧＡＲＰに対する結合に対して当該モノクローナル抗体が競合する（即ち、当該モノクローナル抗体が、上記１５１Ｄ抗体等とＧＡＲＰの結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、当該モノクローナル抗体が上記１５１Ｄ抗体等の抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。エピトープが同一であることが確認された場合、当該モノクローナル抗体が上記１５１Ｄ抗体等の抗体と同等の特性を有していることが強く期待される。
　本発明の抗体には、上記ＧＡＲＰに対するモノクローナル抗体に加え、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、ヒト化（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体、及びヒト抗体等も含まれる。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
　また本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体としては、下記のキメラ抗体及びヒト化抗体を挙げることができる。
　キメラ抗体としては、抗体の可変領域と定常領域が互いに異種である抗体、例えばマウス又はラット由来抗体の可変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体を挙げることができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，６８５１－６８５５，（１９８４）参照）。
　ラット抗ヒトＧＡＲＰ抗体１５１Ｄ由来のキメラ抗体は、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号５に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖からなる抗体であり、任意のヒト由来の定常領域を有していて良い。
　また、ラット抗ヒトＧＡＲＰ抗体１９８Ｄ由来のキメラ抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖からなる抗体であり、任意のヒト由来の定常領域を有していて良い。
　このようなキメラ抗体の例として、配列番号１３のアミノ酸番号２０～４６６番目に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号１５のアミノ酸番号２１～２３４番目に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる抗体、及び配列表の配列番号１７のアミノ酸番号２０～４６９番目に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号１９のアミノ酸番号２１～２３４番目に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる抗体を挙げることができる。
　なお、配列表の配列番号１３に示される重鎖配列中で、１～１９番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１３６番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３７～４６６番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　また、配列表の配列番号１５に示される軽鎖配列中で、１～２０番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３０～２３４番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　更に、配列表の配列番号１７に示される重鎖配列中で、１～１９番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１３９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１４０～４６９番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　また、配列表の配列番号１９に示される軽鎖配列中で、１～２０番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３０～２３４番目のに記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　ヒト化抗体としては、相補性決定領域（ＣＤＲ；ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ）のみをヒト由来の抗体に組み込んだ抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２－５２５参照）、ＣＤＲ移植法によって、ＣＤＲの配列に加え一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体（ＷＯ９０／０７８６１）を挙げることができる。
　但し、１５１Ｄ抗体由来のヒト化抗体としては、１５１Ｄ抗体の６種全てのＣＤＲ配列を保持し、抗腫瘍活性を有する限り、特定のヒト化抗体に限定されない。
　なお、１５１Ｄ抗体の重鎖可変領域は、配列表の配列番号３のアミノ酸番号２６～３５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１（ＧＦＴＦＳＮＹＹＭＡ）、配列番号３のアミノ酸番号５０～５９に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２（ＳＩＧＴＶＧＧＮＴＹ）、及び配列番号３のアミノ酸番号９９～１０６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３（ＥＤＹＧＧＦＰＨ）を保有している。
　また、１５１Ｄ抗体の軽鎖可変領域は、配列表の配列番号５のアミノ酸番号２４～３４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１（ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＤ）、配列番号５のアミノ酸番号５０～５６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２（ＧＡＳＮＲＹＴ）、及び配列番号５のアミノ酸番号８９～９７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３（ＬＱＹＫＹＮＰＹＴ）を保有している。
　更に、１９８Ｄ抗体の重鎖可変領域は、配列表の配列番号７のアミノ酸番号２６～３５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１（ＧＦＳＬＴＳＦＨＶＳ）、配列番号７のアミノ酸番号５０～５８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２（ＴＩＳＳＧＧＧＴＹ）、及び配列番号７のアミノ酸番号９８～１０９に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３（ＩＳＧＷＧＨＹＹＶＭＤＶ）を保有している。
　また、１９８Ｄ抗体の軽鎖可変領域は、配列表の配列番号９のアミノ酸番号２４～３４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１（ＱＡＳＥＤＩＹＳＧＬＡ）、配列番号９のアミノ酸番号５０～５６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２（ＧＡＧＳＬＱＤ）、及び配列番号９のアミノ酸番号８９～９７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３（ＱＱＧＬＫＦＰＬＴ）を保有している。
　ラット抗体１５１Ｄのヒト化抗体の実例としては、（１）配列表の配列番号２１（ｈ１５１Ｄ－Ｈ１）又は配列番号２３（ｈ１５１Ｄ－Ｈ４）のアミノ酸番号２０～１３６番目に記載のアミノ酸配列、（２）上記（１）の配列において各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、及び（３）上記（１）の配列における各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列のいずれか一つからなる重鎖可変領域を含む重鎖、並びに（４）配列番号２５（ｈ１５１Ｄ－Ｌ１）又は配列番号２７（ｈ１５１Ｄ－Ｌ４）のアミノ酸番号２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列、（５）上記（４）の配列において各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、及び（６）上記（４）の配列における各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列のいずれか一つからなる軽鎖可変領域を含む軽鎖の任意の組合せを挙げることができる。
　また、ラット抗体１９８Ｄのヒト化抗体の実例としては、（１）配列表の配列番号２９（ｈ１９８Ｄ－Ｈ３）のアミノ酸番号２０～１３９番目に記載のアミノ酸配列、（２）上記（１）の配列において各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、及び（３）上記（１）の配列における各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列のいずれか一つからなる重鎖可変領域を含む重鎖、並びに（４）配列番号３１（ｈ１９８Ｄ－Ｌ４）のアミノ酸番号２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列、（５）上記（４）の配列において各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、及び（６）上記（４）の配列における各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列のいずれか一つからなる軽鎖可変領域を含む軽鎖の任意の組合せを挙げることができる。
　ヒト化１５１Ｄ抗体の重鎖及び軽鎖の好適な組合せとしては、配列番号２１のアミノ酸番号２０～１３６番目に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を有する軽鎖からなる抗体、並びに配列番号２３のアミノ酸番号２０～１３６番目に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を有する軽鎖からなる抗体を挙げることができる。
　更に好適な組合せとしては、配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる抗体（ｈ１５１Ｄ－Ｈ１Ｌ１）、並びに配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる抗体（ｈ１５１Ｄ－Ｈ４Ｌ４）を挙げることができる。
　ヒト化１９８Ｄ抗体の重鎖及び軽鎖の好適な組合せとしては、配列番号２９のアミノ酸番号２０～１３９番目に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を有する軽鎖からなる抗体を挙げることができる。
　更に好適な組合せとしては、配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる抗体（ｈ１９８Ｄ－Ｈ３Ｌ４）を挙げることができる。
　上記の重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列と高い相同性を示す配列を組み合わせることによって、上記の各抗体と同等の細胞傷害性活性を有する抗体を選択することが可能である。このような相同性は、一般的には８０％以上の相同性であり、好ましくは８５％以上の相同性であり、より好ましくは９０％以上の相同性であり、さらにより好ましくは９５％以上の相同性であり、最も好ましくは９９％以上の相同性である。また、重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列に１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を組み合わせることによっても、上記の各抗体と同等の細胞傷害性活性を有する抗体を選択することが可能である。
　なお、本明細書中における「数個」とは、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、又は１若しくは２個を意味する。
　二種類のアミノ酸配列間の相同性は、Ｂｌａｓｔ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍ　ｖｅｒｓｉｏｎ　２．２．２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，　Ｓｔｅｐｈｅｎ　Ｆ．，Ｔｈｏｍａｓ　Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，Ａｌｅｊａｎｄｒｏ　Ａ．Ｓｃｈａｆｆｅｒ，　Ｊｉｎｇｈｕｉ　Ｚｈａｎｇ，　Ｚｈｅｎｇ　Ｚｈａｎｇ，　Ｗｅｂｂ　Ｍｉｌｌｅｒ，　ａｎｄ　Ｄａｖｉｄ　Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７），「Ｇａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴ　ａｎｄ　ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄａｔａｂａｓｅ　ｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒａｍｓ」，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２）のデフォルトパラメーターを使用することによって決定することができる。Ｂｌａｓｔ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍは、インターネットでｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔにアクセスすることによっても使用することができる。なお、本発明の抗体に係るヌクレオチド配列と他の抗体のヌクレオチド配列との間の相同性についてもＢｌａｓｔ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍによって決定することができる。
　なお、ヒト化１５１Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２１又は配列番号２３に示される重鎖アミノ酸配列中で、１～１９番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１３６番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３７～４６６番目に記載のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。
　また、ヒト化１５１Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２５又は配列番号２７に示される軽鎖アミノ酸配列中で、１～２０番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３０～２３４番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　更に、ヒト化１９８Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２９に示される重鎖アミノ酸配列中で、１～１９番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１３９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１４０～４６９番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　また、ヒト化１９８Ｄ抗体に係る配列表の配列番号３１に示される軽鎖アミノ酸配列中で、１～２０番目に記載のアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２９番目に記載のアミノ酸配列は可変領域であり、１３０～２３４番目に記載のアミノ酸配列は定常領域である。
　ヒト化１５１Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２１又は配列番号２３に示される重鎖アミノ酸配列は、各々配列表の配列番号２０又は配列番号２２に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。　
　ヒト化１９８Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２９に示される重鎖アミノ酸配列は、配列表の配列番号２８に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。　　
　ヒト化１５１Ｄ抗体に係る配列表の配列番号２５又は配列番号２７に示される軽鎖アミノ酸配列は、各々配列表の配列番号２４又は配列番号２６に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。
　ヒト化１９８Ｄ抗体に係る配列表の配列番号３１に示される軽鎖アミノ酸配列は、配列表の配列番号３０に示されるヌクレオチド配列によってコードされている。　
　本発明の抗ＧＡＲＰ抗体の一例として、ヒト抗体を挙げることができる。ヒト抗体は、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いた方法（Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１６，ｐ．１３３－１４３；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．（１９９８）２６，ｐ．３４４７－３４４８；Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｖｏｌ．１０，ｐ．６９－７３（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．，Ｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ａｎｄ　Ｉｉｊｉｍａ，Ｓ．ｅｄｓ．），Ｋｌｕｗｅｒ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９．；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７，ｐ．７２２－７２７等を参照）によって取得することができる。
　また、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイ由来のヒト抗体を取得する方法（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ　＆　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００２）４３（７），ｐ．２３０１－２３０８；Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ　ｉｎ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９－２０３；Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９（３），ｐ．４２７－４３１、Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５－１１１６等参照。）により得ることができる。
　抗原に結合することで選択されたファージの遺伝子を解析することによって、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかになれば、抗体の定常領域のＤＮＡ配列を連結することにより、当該配列を有するＩｇＧ発現ベクターを作製し、適当な宿主に導入して発現させることによりヒト抗体を取得することができる（ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９３／０６２１３、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９３／１９１７２、ＷＯ９５／０１４３８、ＷＯ９５／１５３８８、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３－４５５、Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５－１１１６）。
　本発明のヒト抗体としては、更にヒト化１５１Ｄ抗体又はヒト化１９８Ｄ抗体と同一のエピトープに結合する、ヒト抗体を挙げることができる。
　本発明の抗体には抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明の抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合又はＯ－結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ－結合又はＯ－結合への糖鎖付加、Ｎ末又はＣ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによりＮ末にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。また、本発明の抗体又は抗原の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾物の意味に含まれる。このような本発明の抗体の修飾物は、元の本発明の抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、かかる抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。
　本発明の抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、ＷＯ９９／５４３４２、ＷＯ００／６１７３９、ＷＯ０２／３１１４０、ＷＯ２００７／１３３８５５等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明の抗体には当該糖鎖修飾を調節された抗体も含まれる。
　本発明の目的に使用するものとしては、「抗体の機能断片」もしくは「抗体の抗原結合断片」が含まれる。「抗体の機能断片」とは、元の抗体が奏する機能の少なくとも一部を奏する抗体断片を意味する。「抗体の機能断片」もしくは「抗体の抗原結合断片」としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、一本鎖免疫グロブリン等をあげることができるが、それらに限定されるものではない。かかる抗体の機能断片は、抗体蛋白質の全長分子をパパイン、ペプシン等の酵素で処理することによって得られたものに加え、組換え遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された組換え蛋白質であってもよい。　
　本発明の抗体は、２つ以上の抗原結合部位を持つ抗体も含まれる。すなわち、１つの抗原上の２つ以上の互いに異なるエピトープ又は２つ以上の抗原上の互いに異なるエピトープに結合することが可能な抗体であり、複数の互いに異なる抗原結合断片を包む。このような多重特異的抗体には、ＩｇＧ型多重特異性抗体、２種類以上の可変領域を有する多重特異性抗体、例えばタンデムｓｃＦｖ、一本鎖ダイアボディ、ダイアボディ、及びトリアボディのような抗体断片、共有結合又は非共有結合して連結されている抗体断片を含むが、これらに限定されない。多重特異的抗体はＦｃを含んでいてもよい。　
　本発明の抗体は、遺伝子組換え技術により、本発明の抗体の重鎖及び軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡ、好ましくは当該ｃＤＮＡを含むベクターにより真核細胞を形質転換し、遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養することにより、当該抗体を培養上清中から得ることもできる。
　抗体遺伝子を一旦単離した後、適当な宿主に導入して抗体を作製する場合には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。抗体遺伝子の具体例としては、本明細書に記載された抗体の重鎖配列をコードする遺伝子、及び軽鎖配列をコードする遺伝子を組み合わせたものを挙げることができる。宿主細胞を形質転換する際には、重鎖配列遺伝子と軽鎖配列遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入されていることが可能であり、又別々の発現ベクターに挿入されていることも可能である。
　真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真核微生物を用いることができる。特に動物細胞としては、哺乳類細胞、例えば、サルの細胞であるＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．Ｃｅｌｌ（１９８１）２３，ｐ．１７５－１８２、ＡＴＣＣ　ＣＲＬ－１６５０）、マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ：Ｎｏ．ＣＲＬ－１６５８）やチャイニーズ・ハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞、ＡＴＣＣ　ＣＣＬ－６１）のジヒドロ葉酸還元酵素欠損株（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ　Ｃｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８０）７７，ｐ．４１２６－４２２０）を挙げることができる。
　原核細胞を使用する場合は、例えば、大腸菌、枯草菌を挙げることができる。
　これらの細胞に目的とする抗体遺伝子を形質転換により導入し、形質転換された細胞をｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養することにより抗体が得られる。当該培養においては抗体の配列によって収量が異なる場合があり、同等な結合活性を持つ抗体の中から収量を指標に医薬としての生産が容易なものを選別することが可能である。したがって、本発明の抗体には、上記形質転換された宿主細胞を培養する工程、及び当該工程で得られた培養物から目的の抗体を採取する工程を含むことを特徴とする当該抗体の製造方法により得られる抗体も含まれる。
　哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリジン残基が欠失することが知られており（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，７０５：１２９－１３４（１９９５））、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リジンの２アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６０：７５－８３（２００７））。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞障害作用など）には影響を及ぼさない。　
従って、本発明には当該修飾を受けた抗体も含まれ、重鎖カルボキシル末端において１又は２つのアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体（例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖）等を挙げることができる。但し、抗原結合能及びエフェクター機能が保たれている限り、本発明に係る抗体の重鎖のカルボキシル末端の欠失体は上記の種類に限定されない。
本発明に係る抗体を構成する２本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群から選択される重鎖のいずれか一種であっても良いし、いずれか二種を組み合わせたものであっても良い。各欠失体の量比は本発明に係る抗体を産生する哺乳類培養細胞の種類及び培養条件に影響を受け得るが、本発明に係る抗体の主成分としては２本の重鎖の双方でカルボキシル末端の１つのアミノ酸残基が欠失している場合を挙げることができる。具体的には、下記（１）～（３）に記載の抗体を挙げることができる。
（１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
（２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、又は、
（３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖。
　本発明の抗体のアイソタイプとしては、例えばＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）等を挙げることができるが、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４を挙げることができる。
　本発明の抗体は、多量化して抗原に対する親和性を高めたものであってもよい。多量化する抗体としては、１種類の抗体であっても、同一の抗原の複数のエピトープを認識する複数の抗体であってもよい。抗体を多量化する方法としては、ＩｇＧ　ＣＨ３ドメインと２つのｓｃＦｖ（一本鎖抗体）との結合、ストレプトアビジンとの結合、へリックスーターン－へリックスモチーフの導入等を挙げることができる。
　本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であってもよい。ポリクローナル抗体の一例としては、ＣＤＲが異なる複数種類の抗体の混合物を挙げることができる。そのようなポリクローナル抗体としては、異なる抗体を産生する細胞の混合物を培養し、当該培養物から精製された抗体を用いることが出来る（ＷＯ２００４／０６１１０４号参照）。
　抗体の修飾物として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を使用することもできる。
　本発明の抗体は、更にこれらの抗体と他の薬剤がコンジュゲートを形成しているもの（Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）でもよい。このような抗体の例としては、該抗体が放射性物質や薬理作用を有する化合物と結合している物を挙げることができ（Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３，ｐ．１１３７－１１４６）、例えば、インジウム（１１１Ｉｎ）カプロマブ　ペンデチド（Ｉｎｄｉｕｍ（１１１Ｉｎ）Ｃａｐｒｏｍａｂ　ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）ノフェツモマブ　メルペンタン（Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ（９９ｍＴｃ）Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ　ｍｅｒｐｅｎｔａｎ）、インジウム（１１１Ｉｎ）イブリツモマブ（Ｉｎｄｉｕｍ（１１１Ｉｎ）Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、イットリウム（９０Ｙ）イブリツモマブ（Ｙｔｔｒｉｕｍ（９０Ｙ）Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、ヨード（１３１Ｉ）トシツモマブ（Ｉｏｄｉｎｅ（１３１Ｉ）Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）等を挙げることができる。
２．免疫調節剤
　本発明において「免疫調節剤」は、抗腫瘍免疫を活性化する薬剤であり、免疫チェックポイント阻害剤、免疫誘導剤もしくは免疫刺激剤等が含まれる。
　本発明において「免疫チェックポイント阻害剤」とは、免疫抑制系を阻害し、抗腫瘍免疫を活性化する薬剤を示す。
　本発明において使用される免疫チェックポイント阻害剤は、特に制限はないが、好適には、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、及び、抗ＣＴＬＡ－４抗体を挙げることができ、より好適には、抗ＰＤ－１抗体、及び、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を挙げることができる。
　本発明において「抗ＰＤ－１抗体」とは、ＰＤ－１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ－１；　ＣＤ２７９；　ＰＤＣＤ１）に特異的に結合することにより、ＰＤ－１と、その結合相手である、ＰＤ－Ｌ１やＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、阻害、及び／又は干渉する作用を有する抗体を示す。本発明において使用される抗ＰＤ－１抗体としては、臨床での有効性と安全性が確認されていれば特に制限はないが、好適には、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（ＷＯ２００６／１２１１６８等）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＷＯ２００８／１５６７１２等）、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ピジリズマブ、ＬＯＰＤ１８等を、より好適には、ニボルマブ、ペムブロリズマブを挙げることができる。また、本発明において使用される抗ＧＡＲＰ抗体との併用効果を前臨床研究において確認する目的で、市販の研究用抗ＰＤ－１抗体（例：ｃｌｏｎｅ　ＲＭＰ１－１４）等を用いることもできる。
　本発明において「抗ＰＤ－Ｌ１抗体」とは、ＰＤ－Ｌ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ　ｌｉｇａｎｄ　１；　ＣＤ２７４；　Ｂ７－Ｈ１）に特異的に結合することにより、ＰＤ－Ｌ１と、その結合相手である、ＰＤ－１やＢ７．１（ＣＤ８０）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、阻害、及び／又は干渉する作用を有する抗体を示す。本発明において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、臨床での有効性と安全性が確認されていれば特に制限はないが、好適には、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）（国際公開第２０１０／０７７６３４号等）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）（国際公開第２０１１／０６６３８９号等）、及び、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）（国際公開第２０１３／０７９１７４号等）を挙げることができる。また、本発明において使用される抗ＧＡＲＰ抗体との併用効果を前臨床研究において確認する目的で、市販の研究用抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例：ｃｌｏｎｅ　１０Ｆ．９Ｇ２）等を用いることもできる。
　本発明において「抗ＣＴＬＡ－４抗体」とは、ＣＴＬＡ－４（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　４；　ＣＤ１５２）に特異的に結合することにより、ＣＴＬＡ－４と、その結合相手である、Ｂ７．１（ＣＤ８０）やＢ７．２（ＣＤ８６）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、阻害、及び／又は干渉する作用を有する抗体を示す。本発明において使用される抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、臨床での有効性と安全性が確認されていれば特に制限はないが、好適には、イピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）（国際公開第２００１／０１４４２４号等）、及びトレメリムマブ（Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）（国際公開第２０００／０３７５０４号等）を挙げることができる。また、本発明において使用される抗ＧＡＲＰ抗体との併用効果を前臨床研究において確認する目的で、市販の研究用抗ＣＴＬＡ－４抗体（例：ｃｌｏｎｅ　９Ｈ１０）等を用いることもできる。
　本発明において使用される免疫チェックポイント阻害剤は多重特異的抗体を含む。このような多重特異的な分子には、ＩｇＧ型多重特異性分子、２種類以上の可変領域を有する多重特異性分子、例えばタンデムｓｃＦｖ、一本鎖ダイアボディ、ダイアボディ、及びトリアボディのような抗体断片、共有結合又は非共有結合して連結されている抗体断片を含むが、これらに限定されない。多重特異的な分子はＦｃを含んでいてもよい。具体的には、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、及び、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片からなる群より選択される２以上の抗体もしくはその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、より好ましくは、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片と抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体を挙げることができるが、これに限らない。
　本発明において「免疫誘導剤」とは、特に制限はないが、好適には、放射線療法（放射線照射）や化学放射線療法、化学療法剤を挙げることができる。本発明において「化学療法剤」とは、Ｔｒｅｇの除去やｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ（ＭＤＳＣ）の減少等抗腫瘍免疫を惹起する薬剤をいう。例えば、スニチニブ、シクロホスファミド、オキサリプラチン、シスプラチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ダウノルビシン、メトトレキセート、ミトキサントロン、ゲムシタビン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、ビノレルビン、エルロチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、ボルテゾミブ、ＡＢＴ－７３７、５－ＦＵ、テモゾロミド、ダカルバジンが挙げられるが、これに限らない（Ｎａｔ　Ｒｅｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｉｓｃｏｖ．　２０１２　Ｆｅｂ　３；１１（３）：２１５－３３、Ｆｒｏｎｔ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２０１９　Ｊｕｌ　１７；１０：１６５４、Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　２００９；１５：２１４８－２１５７、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ　（２００７）　５６：６４１－６４８）。
　本発明において「免疫刺激剤」とは、特に制限はないが、好適には、アゴニスト抗体、アジュバントを挙げることができる。
３．医薬
　以下、本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体と免疫調節剤が組み合わされて投与されることを特徴とする医薬組成物及び治療方法、並びに、本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体を含有する、抗腫瘍免疫を活性化する作用により改善される疾患の治療に用いることを特徴とする医薬組成物及び治療方法について説明する。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、抗ＧＡＲＰ抗体と、免疫調節剤が、それぞれ別異の製剤に有効成分として含有される、もしくは免疫調節剤における放射線療法もしくは化学放射線療法と組み合わされ、同時に又は異なる時間に投与されることを特徴とするものであってもよいし、抗ＧＡＲＰ抗体と、免疫調節剤が、単一の製剤に有効成分として含有され、投与されることを特徴とするものであってもよい。また、抗腫瘍免疫を活性化する作用により改善される疾患の治療用に、本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体が単一の製剤に有効成分として含有され、投与されるものであってもよい。
　本発明において、「抗体の作用を上昇させる」とは、当該抗体が単剤で投与される場合に比べて、抗腫瘍効果が増強されることを示す。
　本発明において、「免疫調節剤の作用を上昇させる」とは、当該免疫調節剤が単剤で投与される場合に比べて、抗腫瘍免疫活性化作用が増強されることを示す。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、がんの治療のために使用することができ、好適には、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、血液がん、皮膚がん、甲状腺がん、胆道がん、唾液腺がん、小腸がん、副腎がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、胸腺腫、中皮腫、肉腫及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの疾患の治療のために使用することができる。より好適には、頭頸部がん、胃がん、食道がん及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの疾患の治療のために使用することができる。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、がんの主要な治療法である薬物療法のための薬剤として選択して使用することができ、その結果として、がん細胞の成長を遅らせ、増殖を抑え、更にはがん細胞を破壊することができる。これらの作用によって、がん患者において、がんによる症状からの解放や、QOLの改善を達成でき、がん患者の生命を保って治療効果が達成される。がん細胞の破壊には至らない場合であっても、がん細胞の増殖の抑制やコントロールによってがん患者においてより高いQOLを達成しつつより長期の生存を達成させることができる。
　このような薬物療法においての薬物単独での使用の他、本発明の医薬組成物及び治療方法は、アジュバント療法において他の療法と組み合わせる薬剤としても使用でき、外科手術や、放射線療法、ホルモン療法等と組み合わせることができる。更にはネオアジュバント療法における薬物療法の薬剤として使用することもできる。
　以上のような治療的使用の他、本発明の医薬組成物及び治療方法は、微細な転移がん細胞の増殖を押さえ、更には破壊するといった予防効果も期待することができる。例えば、転移過程で体液中にあるがん細胞を抑制し破壊する効果や、いずれかの組織に着床した直後の微細ながん細胞に対する抑制、破壊等の効果が期待できる。したがって、特に外科的ながんの除去後においてのがん転移の抑制、予防効果が期待できる。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、患者に対しては全身療法として適用する他、がん組織に局所的に適用して治療効果を期待することができる。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、哺乳動物に対して好適に使用することができるが、より好適にはヒトに対して使用することができる。
　本発明の医薬組成物は、1種以上の薬学的に適合性の成分を含む薬学的組成物として投与され得る。本発明の医薬組成物において使用される物質としては、投与量や投与濃度において、この分野において通常使用される製剤添加物その他から適宜選択して適用することができる。例えば、上記薬学的組成物は、代表的には、1種以上の薬学的キャリア（例えば、滅菌した液体）を含む。ここで液体には、例えば、水及び油（石油、動物起源、植物起源、又は合成起源の油）が含まれる。油は、例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等であってよい。水は、上記薬学的組成物が静脈内投与される場合に、より代表的なキャリアである。食塩水溶液、並びにデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液もまた、液体キャリアとして、特に、注射用溶液のために使用され得る。適切な薬学的賦形剤は、この分野で公知のものから適宜選択することができる。上記組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はpH緩衝化剤を含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。その処方は、投与の態様に対応する。
　種々の送達システムが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用され得る。導入経路としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、及び皮下の経路を挙げることができるが、これらに限定されることはない。投与は、例えば、注入又はボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態において、本発明において使用される抗ＧＡＲＰ抗体及び免疫調節剤の投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
　代表的実施形態において、上記医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した薬学的組成物として、常習的手順に従って処方される。代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌の等張性の水性緩衝液中の溶液である。必要である場合、上記薬学的組成物はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般に、上記成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプル又はサシェ等に密封してシールされた容器中の乾燥凍結乾燥粉末又は無水の濃縮物として、別個に、又は単位剤形中で一緒に混合して、のいずれかで供給される。上記薬学的組成物が注入によって投与される形態の場合、それは、例えば、滅菌の製薬グレードの水又は食塩水を含む注入ボトルで投薬され得る。上記薬学的組成物が注射によって投与される場合、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルは、例えば、上記成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。
　本発明の医薬組成物及び治療方法は、本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体及び免疫調節剤以外のがん治療剤を含んでいてもよい。本発明の医薬組成物及び治療方法は、他のがん治療剤と併用して投与することもでき、これによって抗腫瘍効果を増強させることができる。この様な目的で使用される他のがん治療剤は、本発明の医薬組成物と同時に、別々に、或は連続して個体に投与されてもよいし、それぞれの投与間隔を変えて投与されてもよい。この様ながん治療剤として、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（ＣＰＴ－１１）、ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ペメトレキセド（Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ビンブラスチン（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、ビノレルビン（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｓ）、タネスピマイシン（Ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、オキサリプラチン（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、トラスツズマブエムタンシン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ　ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）（Ｔ－ＤＭ１）又は国際公開第２００３／０３８０４３号に記載の薬剤、更にＬＨ－ＲＨアナログ（リュープロレリン（Ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）、ゴセレリン（Ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）等）、エストラムスチン・フォスフェイト（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、エストロジェン拮抗薬（タモキシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）等）、アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール（Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、レトロゾール（Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、エキセメスタン（Ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）等）等を挙げることができるが、抗腫瘍活性を有する薬剤であれば限定されることはない。
　この様な医薬組成物は、選択された組成と必要な純度を持つ製剤として、凍結乾燥製剤或は液状製剤として製剤化することができる。凍結乾燥製剤として製剤化する際には、この分野において使用される適当な製剤添加物が含まれる製剤であってもよい。また液剤においても同様にして、この分野において使用される各種の製剤添加物を含む液状製剤として製剤化することができる。
　本発明の医薬組成物及び治療方法の抗腫瘍効果は、免疫賦活化活性もしくは腫瘍細胞増殖抑制活性等を測定することにより確認することができる。また、腫瘍を被検動物に移植したモデルを作成し、本発明の治療剤又は治療方法を施すことによっても確認することができる。本発明の治療剤及び治療方法の抗腫瘍効果は、本発明の抗ＧＡＲＰ抗体が前記モデル動物のＧＡＲＰに結合しない場合、サロゲート抗体を用いて検証することができる。サロゲート抗体は本発明の抗ＧＡＲＰ抗体と同一又は類似の結合活性又は機能特性を有することが望ましい。
更に、ＣＡＮｓｃｒｉｐｔ（ＭＩＴＲＡ　ＲＸＤＸ，ＩＮＣ）等のｅｘ　ｖｉｖｏ評価系によって効果を予測することができる（Ｎａｔ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１５　Ｆｅｂ　２７（６）；　６１６９）。
免疫賦活化活性ならびに抗腫瘍効果はＷＯ２０１７／０５１８８８に記載の方法により測定することができる。
　更に、本発明の医薬組成物及び治療方法の抗腫瘍効果は、臨床試験においても確認することができる。すなわち、がん患者に本発明の治療剤又は治療方法を施し、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　Ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｉｎ　Ｓｏｌｉｄ　Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）評価法、ＷＨＯ評価法、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ評価法、体重測定、及びその他の手法により確認することができ、完全奏効（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＣＲ）、部分奏効（Ｐａｒｔｉａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＰＲ）、進行（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅ；ＰＤ）、客観的奏効率（Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｒａｔｅ；ＯＲＲ）、奏効期間（Ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＤｏＲ）、無憎悪生存期間（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ－Ｆｒｅｅ　Ｓｕｒｖｉｖａｌ；ＰＦＳ）、全生存期間（Ｏｖｅｒａｌｌ　Ｓｕｒｖｉｖａｌ；ＯＳ）等の指標により判定することができる。
　医薬組成物の組成及び濃度は投与方法によっても変化するが、本発明の医薬組成物に含まれる抗ＧＡＲＰ抗体及び免疫調節剤は、抗原に対する親和性、すなわち、抗原に対する解離定数（Ｋｄ値）の点において、親和性が高い（Ｋｄ値が低い）ほど、少量の投与量であっても薬効を発揮させことができる。したがって、抗ＧＡＲＰ抗体及び免疫調節剤の投与量は、抗原との親和性の状況に基づいて設定することもできる。本発明に係る抗ＧＡＲＰ抗体及び免疫調節剤をヒトに対して投与する際には、例えば、約０．００１～１００ｍｇ／ｋｇを１回或は１～１８０日間に１回の間隔で複数回投与すればよい。
　本発明の抗ＧＡＲＰ抗体の場合、例えば投与方法として、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇを１又は２回以上投与する方法を挙げることができる。投与量は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０．０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇを挙げることができる。また、投与は、１週に１度（ｑ１ｗ）、２週に１度（ｑ２ｗ）、３週に１度（ｑ３ｗ）、または４週に１度（ｑ４ｗ）であってもよい。好ましい投与方法として、例えば、本発明の抗体を３週に１度、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、もしくは１０ｍｇ／ｋｇを１又は２回以上投与する方法が挙げられる。
　本発明において使用される免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、１回約１～２０ｍｇ／ｋｇ（体重）又は１回約８０～１５００ｍｇを２～６週間間隔で、約３０分間、約６０分間、約９０分間、又は約３０分間以上若しくは約６０分間以上かけて静脈内投与（例えば、点滴静注）することができる。投与１回当たりの体重換算における投与量として、例えば、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇが挙げられ、一方、投与１回当たりの投与量としては、例えば、８０ｍｇ、２００ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２８０ｍｇ、３００ｍｇ、３２０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４５０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、６００ｍｇ、６４０ｍｇ、７００ｍｇ、７２０ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８４０ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１０８０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１２０ｍｇ、１２００ｍｇ、又は１５００ｍｇが挙げられる。投与間隔としては、例えば、２週間、３週間、４週間、又は６週間が挙げられ、１回の投与時間としては、例えば、約３０分間、約６０分間、約９０分間、又は約３０分間以上若しくは約６０分間以上が挙げられる。
上記の用法・用量は、例示であり、これらに限定されない。
　本発明において使用される抗ＰＤ－１抗体がＮｉｖｏｌｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回２ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で点滴静注し、又はＮｉｖｏｌｕｍａｂとして１回３ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回１ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で４回点滴静注し、その後、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回３ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回３ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で４回点滴静注し、その後、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回３ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回２４０ｍｇを２週間間隔で、又はＮｉｖｏｌｕｍａｂとして１回４８０ｍｇを４週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回８０ｍｇを３週間間隔で４回点滴静注し、その後、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回２４０ｍｇを２週間間隔又は１回４８０ｍｇを４週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回２４０ｍｇを３週間間隔で４回点滴静注し、その後、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂとして１回２４０ｍｇを２週間間隔又は１回４８０ｍｇを４週間間隔で点滴静注する。
Ｎｉｖｏｌｕｍａｂは、３０分以上かけて点滴静注される場合がある。
術後補助療法の場合は、例えば、投与期間は１２ ヵ月間までとする場合がある。
　本発明において使用される抗ＰＤ－１抗体がＰｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１回２ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１回２００ｍｇを３週間間隔で又は１回４００ｍｇを６週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１回２００ｍｇを３週間間隔で点滴静注し、その後、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１回２００ｍｇを３週間間隔で点滴静注する。
Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂは、例えば、３０分かけて点滴静注投与される場合がある。したがって、別の用法・用量として、例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとして１回２００ｍｇを３週間間隔又は１回４００ｍｇを６週間間隔で３０分間かけて点滴静注する。
術後補助療法の場合は、例えば、投与期間は１２ヶ月までとする場合がある。
　本発明において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回１２００ｍｇを３週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回８４０ｍｇを２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回１２００ｍｇを３週間間隔で点滴静注し、その後、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回１２００ｍｇを３週間間隔で点滴静注する。
Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂは、例えば、６０分かけて点滴静注される場合がある。したがって、例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回１２００ｍｇを６０分かけて３週間間隔で点滴静注し、又はＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとして１回８４０ｍｇを６０分かけて２週間間隔で点滴静注する。
なお、初回投与の忍容性が良好であれば、２回目以降の投与時間は３０分間まで短縮できる場合がある。
　本発明において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＤｕｒｖａｌｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１５００ｍｇを３週間間隔で４回、点滴静注し、その後、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１５００ｍｇを４週間間隔で点滴静注する。
Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂは、６０分間以上かけて点滴静注される場合がある。したがって、別の用法・用量として、例えば、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で６０分間以上かけて点滴静注する。また、別の用法・用量として、例えば、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１５００ｍｇを３週間間隔で４回、６０分間以上かけて点滴静注し、その後、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂとして１回１５００ｍｇを４週間間隔で６０分間以上かけて点滴静注する。
体重３０ｋｇ以下の場合の1回投与量は２０ｍｇ／ｋｇ（体重）とする場合がある。
　本発明において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＡｖｅｌｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ａｖｅｌｕｍａｂとして、１回１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で点滴静注する。
Ａｖｅｌｕｍａｂは、１時間以上かけて点滴静注される場合がある。したがって、別の用法・用量として、例えば、Ａｖｅｌｕｍａｂとして、１回１０ｍｇ／ｋｇ（体重）を２週間間隔で１時間以上かけて点滴静注する。
　本発明において使用される抗ＣＴＬＡ－４抗体がＩｐｉｌｉｍｕｍａｂの場合には、次の用法・用量にて投与する方法が例として挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂとして１回３ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で４回点滴静注する。
別の用法・用量として、例えば、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂとして１回１ｍｇ／ｋｇ（体重）を３週間間隔で４回点滴静注する。
Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂは、３０分かけて又は９０分かけて点滴静注される場合がある。
　本発明は、がん治療のための医薬組成物を調整するための本発明の抗体の使用、がん治療のための本発明の抗体の使用、本発明の抗体を含むがん治療のためのキットも含む。
　以下に示す例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、これらはいかなる意味においても限定的に解釈されるものではない。
参考例１．抗ＧＡＲＰ抗体の作製
　ＷＯ２０１７／０５１８８８に記載の製造方法に従って、抗ＧＡＲＰ抗体ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ４Ｌ４、ｈ１９８Ｄ＿Ｈ３Ｌ４を作製した。
実施例１．抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－１抗体のＴｅｆｆ細胞増殖賦活化に対する併用効果
１）－１　Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ及びアクセサリー細胞の調製
　健常人ドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）より、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を分離後、蛍光標識した抗ＣＤ４抗体及び抗ＣＤ２５抗体を添加して染色し、ＣＤ４陽性ＣＤ２５陰性（Ｔｅｆｆ）細胞及びＣＤ４陽性ＣＤ２５強陽性（Ｔｒｅｇ）細胞をｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙを用いたソーティングにより分離した。
　また、ＰＢＭＣからＣＤ３陽性細胞を除去後、照射線量０．３５ Ｃ／ｋｇのＸ線を照射してアクセサリー細胞を調製した。
１）－２　共培養アッセイ
　Ｔｅｆｆ細胞（２０００ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とアクセサリー細胞（２００００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を混合した後、さらにＴｒｅｇ細胞を１０００、５００、２５０、又は１２５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように添加した。抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（各1 ｎＭ）存在下で、抗ＧＡＲＰ抗体（ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１）、及び抗ＰＤ－１抗体（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）をそれぞれ終濃度1μｇ／ｍＬで添加し、３７℃、５％　ＣＯ２の条件下で５日間培養した。その後、[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを添加し（終濃度１８．５ｋＢｑ／ｍＬ）、さらに２０時間培養を継続した。細胞回収後、シンチレーションカウンターを用いて各ウェルの[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの細胞内取込値を１分間あたりの補正計数値（ＣＣＰＭ、ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ　ｃｏｕｎｔ　ｐｅｒｍｉｎｕｔｅ）として計測した。
　４名の各ドナーの各培養条件による [３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ細胞内取り込み量の平均値及び標準誤差（６ウェル/群）を図１１－１及び図１１－２に示した。Ｔｅｆｆ細胞に対するＴｒｅｇ細胞の存在比が大きくなるに従って、[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ細胞内取り込み量が小さくなり、Ｔｒｅｇ細胞によりＴｅｆｆ細胞の増殖が抑制されること、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１処理群及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ処理群で[３Ｈ]－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ細胞内取り込み量が増加し、併用群でさらに増加することが示され、抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用効果が確認された。
１）－３　相対活性の算出及び統計解析
　１）－２において得られた、各ドナーにおけるｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔｒｏｌ群のＴｅｆｆ：Ｔｒｅｇ＝１：０（Ｔｒｅｇ細胞非添加）の平均カウントに対するそれぞれの相対的平均カウントを算出した。Ｔｅｆｆ細胞とＴｒｅｇ細胞の共培養比 (Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇ) が１：０、１：１／１６、１：１／８、１：１／４、１：１／２のそれぞれの培養で得られる相対的平均カウントがＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅである際に、相対的ＡＵＣを次の式で求めた。
ＡＵＣ＝（Ａ＋B×２＋Ｃ×２＋Ｄ×２＋Ｅ)／２
　得られた４名のドナーの相対的ＡＵＣ値を用いて、ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔｒｏｌ群を対象群とした際のｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１処理群及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ処理群について、並びに、ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ群を対象群とした際のｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１処理群及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ処理群について、ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ　Ｄｕｎｎｅｔｔ‘ｓ　ｔｅｓｔにより統計解析を実施した（ＳＡＳ Ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２、ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ.）。
　４名のドナーの相対的ＡＵＣ値及びその平均値を図１２に示す。Ｔｅｆｆ細胞増殖賦活化の指標である相対的ＡＵＣ値はｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較し、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１処理群（Ｐ＝０．０１０２）及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ処理群（Ｐ＝０．００６５）で有意な増加が認められた。さらに、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１処理群（Ｐ＝０．０１２３）及びｎｉｖｏｌｕｍａｂ処理群（Ｐ＝０．０１８０）と比較して併用群で有意な増加が認められた。なお、相対的ＡＵＣの平均値において、ｃｏｎｔｒｏｌ　ＩｇＧ処理群はｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔｒｏｌ群の１．０８倍であった。
実施例２．ＣＡＮｓｃｒｉｐｔ（登録商標）を用いた抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用時臨床効果予測
ＣＡＮｓｃｒｉｐｔ（登録商標）（ＭＩＴＲＡ　ＲＸＤＸ，ＩＮＣ（以下、Ｍｉｔｒａ社））は、がん患者由来がん組織を用いたｅｘ－ｖｉｖｏ培養モデルであり、がん患者由来のがん組織（がん微小環境構造を維持し、ストローマ細胞、免疫細胞、及びがん細胞を含む）、及び同一患者由来の血清とＰＢＭＣとの共培養試験である（Ｎａｔ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１５　Ｆｅｂ　２７（６）；　６１６９）。がん組織に対する薬剤の反応性は、３日間の共培養後、病理組織像及び代謝活性に基づき定量化される。すなわち、細胞増殖及びアポトーシス誘導は、Ｋｉ６７及び活性化Ｃａｓｐａｓｅ－３の免疫化学染色により、また、細胞形態の変化は、Ｈ＆Ｅ（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ）染色により評価される。さらに、市販の代謝活性及び細胞生存率判定アッセイキットを用いた培養上清の評価により、経時的な定量化が実施される。これらすべての評価結果は、Ｍｉｔｒａ社で開発された学習アルゴリズム（ＳＶＭｐＡＵＣ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を用いてスコア化（Ｍ－ｓｃｏｒｅ）される。ＳＶＭｐＡＵＣでは、同一患者の実際の臨床での薬剤反応性とＣＡＮｓｃｒｉｐｔから得られた定量化された結果を比較学習することで、各薬剤の臨床効果を予測することが可能である。これまでに、４０００症例以上のデータを解析しており、Ｍ－ｓｃｏｒｅが２５より高い場合、臨床において、ＣＲ（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）あるいはＰＲ（ｐａｒｔｉａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示す確率（ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ）は、８７％である。　　
　頭頚部扁平上皮がん患者２０名から入手したサンプルを用い、抗ＧＡＲＰ抗体（ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１）、抗ＰＤ－１抗体（ニボルマブ）、及びｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１とニボルマブの併用時の臨床効果をＣＡＮｓｃｒｉｐｔアッセイにより評価、予測した。共培養開始前に、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ　ＩＯ３６０パネルを用いたＲＮＡ発現解析により、がん組織内に浸潤している免疫細胞の割合と組成を解析した結果、免疫プロファイルは患者ごとで大きく異なっていた。これら多様性のあるＨＮＳＣＣ患者由来サンプルに対し、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１及びニボルマブ単独作用時、Ｍ－ｓｃｏｒｅが２５より大きい値を示した患者サンプルの割合は、それぞれ、２０％（４／２０）及び１５％（３／２０）であったのに対し、ｈ１５１Ｄ＿Ｈ１Ｌ１とニボルマブの併用時では、３０％（６／２０）と増加が認められ、頭頚部扁平上皮がんに対する抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用効果が予測された（図１３）。
実施例３：ＣＴ２６.ＷＴ皮下移植マウスモデルを用いた抗腫瘍試験及びＴｕｍｏｒ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｅｕｃｏｃｙｔｅｓ（ＴＩＬ）の解析
３）－１　抗腫瘍試験における抗ＧＡＲＰサロゲート抗体及び抗ＰＤ－1サロゲート抗体との併用効果
Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入したマウス大腸がん細胞株ＣＴ２６.ＷＴを生理食塩水に懸濁し、２．０×１０5ｃｅｌｌｓを雌ＣＤ２Ｆ１マウス（日本チャールス・リバー社）の右側腹部に皮下移植した（Ｄａｙ０）。Ｄａｙ３及びＤａｙ６に抗マウスＰＤ－1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を投与し、Ｄａｙ９に無作為に群分けを実施した(各群ｎ＝９)。さらに、Ｄａｙ９及びＤａｙ１６に抗マウスＧＡＲＰ抗体（１ｍｇ／ｋｇ）及び抗マウスＰＤ－1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を各単剤投与群及び併用群に投与した。コントロール群はＤａｙ９及びＤａｙ１６において薬物を処置しなかった。なお、各抗体はＤ－ＰＢＳで希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量を尾静脈内投与した。１週間に２回、腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパー（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ　Ｃｏｒｐ．）で測定し、以下の計算式より推定腫瘍体積を計算した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
　Ｄａｙ２０の推定腫瘍体積（平均値±標準誤差）において、抗マウスＰＤ－１抗体と抗マウスＧＡＲＰ抗体との併用群は、抗マウスＰＤ－1抗体単独投与群に対して有意な抗腫瘍効果を示した。
３）－２　ＴＩＬに対する抗ＧＡＲＰサロゲート抗体及び抗ＰＤ－1サロゲート抗体との併用効果
　ＣＴ２６.ＷＴを生理食塩水に懸濁し、２．０×１０5ｃｅｌｌｓを雌ＣＤ２Ｆ１マウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ６に無作為に群分けを実施した(各群ｎ＝１０)。Ｄａｙ６及びＤａｙ１０に抗マウスＧＡＲＰ抗体（１ｍｇ／ｋｇ）及び抗マウスＰＤ－1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を各単剤投与群及び併用群に投与した。コントロール群は薬物を処置しなかった。なお、各抗体はＤ－ＰＢＳで希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量を尾静脈内投与した。Ｄａｙ１４に腫瘍を摘出し、すりつぶすことによりＴＩＬを得た。がん免疫賦活化の指標として、ＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　Ｔ－ｃｅｌｌ　ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ＩＣＯＳ）陽性細胞の割合（％）をｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓにより求めた。各単剤群に対する併用群のＩＣＯＳ陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞の有意な増加が認められた。このとき、ＣＤ４陽性Ｔ細胞におけるＧＡＲＰ陽性Ｔｒｅｇ（ＧＡＲＰ陽性ＦＯＸＰ３陽性ＣＤ４陽性Ｔ細胞）の割合（平均値±標準誤差）について、ＧＡＲＰ陽性Ｔｒｅｇの抗マウスＧＡＲＰ抗体投与群での有意な減少と抗マウスＰＤ－1抗体投与群での有意な増加を確認した。さらに、併用群においてはコントロール群より有意に減少した。
３）－３　抗腫瘍試験における抗ＧＡＲＰサロゲート抗体及び抗ＰＤ－Ｌ1サロゲート抗体との併用効果
ＣＴ２６.ＷＴを生理食塩水に懸濁し、２．０×１０5ｃｅｌｌｓを雌ＣＤ２Ｆ１マウスの右側腹部に皮下移植した（Ｄａｙ０）。Ｄａｙ６に無作為に群分けを実施した(各群ｎ＝１０)。さらに、Ｄａｙ６及びＤａｙ１１に抗マウスＧＡＲＰ抗体（１ｍｇ／ｋｇ）及び抗マウスＰＤ－Ｌ1抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）を各単剤投与群及び併用群に投与した。コントロール群は薬物を処置しなかった。なお、各抗体はＤ－ＰＢＳで希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量を尾静脈内投与した。１週間に２回、腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパーで測定し、以下の計算式より推定腫瘍体積を計算した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
　Ｄａｙ１８において、併用群では、抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体それぞれ単剤群に比べた推定腫瘍体積の縮小が確認された。
実施例４：ＭＣ３８皮下移植マウスモデルを用いた抗腫瘍試験
４）－１　抗ＧＡＲＰサロゲート抗体及び抗ＰＤ－1サロゲート抗体との併用効果
Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）から入手したマウス大腸がん細胞株ＭＣ３８を生理食塩水に懸濁し、５．０×１０５ｃｅｌｌｓを雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本チャールス・リバー社）の右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ４に無作為に群分けを実施した(各群ｎ＝１０)。Ｄａｙ４及びＤａｙ１０に抗マウスＧＡＲＰ抗体（１ｍｇ／ｋｇ）及び抗マウスＰＤ－1抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を各単剤投与群及び併用群に投与した。コントロール群は薬物を処置しなかった。なお、各抗体はＤ－ＰＢＳで希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量を尾静脈内投与した。１週間に２回、腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパーで測定し、以下の計算式より推定腫瘍体積を計算した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000003
　Ｄａｙ１８において、併用群では、抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＰＤ－１抗体それぞれ単剤群に比べた推定腫瘍体積の縮小が確認された。
４）－２　抗ＧＡＲＰサロゲート抗体及び抗ＣＴＬＡ－４サロゲート抗体との併用効果
ＭＣ３８を生理食塩水に懸濁し、５．０×１０５ｃｅｌｌｓを雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に皮下移植し（Ｄａｙ０）、Ｄａｙ４に無作為に群分けを実施した(各群ｎ＝１０)。Ｄａｙ４及びＤａｙ１１に抗マウスＧＡＲＰ抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を、Ｄａｙ４、Ｄａｙ７、Ｄａｙ１１、及びＤａｙ１４に抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）を各単剤投与群及び併用群に投与した。なお、各抗体はＤ－ＰＢＳで希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量を尾静脈内投与した。コントロール群は薬物を処置しなかった。１週間に２回、腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパーで測定し、以下の計算式より推定腫瘍体積を計算した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000004
　Ｄａｙ１８において、併用群では、抗ＧＡＲＰ抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体それぞれ単剤群に比べた推定腫瘍体積の縮小が確認された。
　本発明の抗ＧＡＲＰ抗体を用いることにより、各種がんの治療又は予防が可能となる。
配列番号１：ＧＡＲＰのアミノ酸配列
配列番号２：１５１Ｄの重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列
配列番号３：１５１Ｄの重鎖の可変領域のアミノ酸配列　
配列番号４：１５１Ｄの軽鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列
配列番号５：１５１Ｄの軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号６：１９８Ｄの重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列
配列番号７：１９８Ｄの重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号８：１９８Ｄの軽鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列
配列番号９：１９８Ｄの軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号１０：ヒト軽鎖シグナル配列及びヒトκ鎖定常領域のアミノ酸をコードする配列を含むＤＮＡ断片のヌクレオチド配列
配列番号１１：ヒト重鎖シグナル配列及びヒトＩｇＧ１定常領域のアミノ酸をコードする配列を含むＤＮＡ断片のヌクレオチド配列
配列番号１２：ヒトキメラ抗体ｃ１５１Ｄ重鎖のヌクレオチド配列
配列番号１３：ヒトキメラ抗体ｃ１５１Ｄ重鎖のアミノ酸配列
配列番号１４：ヒトキメラ抗体ｃ１５１Ｄ軽鎖のヌクレオチド配列
配列番号１５：ヒトキメラ抗体ｃ１５１Ｄ軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１６：ヒトキメラ抗体ｃ１９８Ｄ重鎖のヌクレオチド配列
配列番号１７：ヒトキメラ抗体ｃ１９８Ｄ重鎖のアミノ酸配列
配列番号１８：ヒトキメラ抗体ｃ１９８Ｄ軽鎖のヌクレオチド配列
配列番号１９：ヒトキメラ抗体ｃ１９８Ｄ軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２０：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｈ１のヌクレオチド配列
配列番号２１：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｈ１のアミノ酸配列
配列番号２２：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｈ４のヌクレオチド配列
配列番号２３：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｈ４のアミノ酸配列
配列番号２４：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｌ１のヌクレオチド配列
配列番号２５：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｌ１のアミノ酸配列
配列番号２６：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｌ４のヌクレオチド配列
配列番号２７：ヒト化抗体ｈ１５１Ｄ－Ｌ４のアミノ酸配列
配列番号２８：ヒト化抗体ｈ１９８Ｄ－Ｈ３のヌクレオチド配列
配列番号２９：ヒト化抗体ｈ１９８Ｄ－Ｈ３のアミノ酸配列
配列番号３０：ヒト化抗体ｈ１９８Ｄ－Ｌ４のヌクレオチド配列
配列番号３１：ヒト化抗体ｈ１９８Ｄ－Ｌ４のアミノ酸配列

Claims (55)

  1. 　下記（１）～（３）の特性を有することを特徴とする抗体又はその抗原結合断片、及び、免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とする、がん治療のための医薬組成物；
    （１）Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ　Ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ　Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ（ＧＡＲＰ）に特異的に結合する、
    （２）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有する、及び、
    （３）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。
  2. 　抗体が、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を有することを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 　抗体が、以下の（１）又は（２）に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖、並びに、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含んでなる、請求項１又は２に記載の医薬組成物；
    （１）配列番号１３のアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１３のアミノ酸番号６９～７８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１３のアミノ酸番号１１８～１２５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１５のアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１５のアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、又は、
    （２）配列番号１７のアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１７のアミノ酸番号６９～７７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１７のアミノ酸番号１１７～１２８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１９のアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１９のアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１９においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３。
  4. 　抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１～３のいずれか一つに記載の医薬組成物；
    （１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
    （２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、又は、
    （３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～１３９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
  5. 　抗体が、キメラ抗体である、請求項１～４のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  6. 　抗体が、ヒト化抗体である、請求項１～４のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  7. 　抗体が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、請求項１～６のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  8. 　抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖及び軽鎖を含む、請求項６又は７に記載の医薬組成物；
    （１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
    （２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、又は、
    （３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖。
  9. 　抗体が、請求項２～８のいずれか一つに記載の抗体と、ＧＡＲＰへの結合において競合する、請求項１に記載の医薬組成物。
  10. 　抗体が、Ｎ－結合型糖鎖付加、Ｏ－結合型糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末におけるメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及び重鎖のカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸残基の欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む、請求項１～９のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  11. 　重鎖のカルボキシル末端において１つ又は数個のアミノ酸残基が欠失している、請求項１０に記載の医薬組成物。
  12. 　２本の重鎖の双方でカルボキシル末端において１つのアミノ酸残基が欠失している、請求項１０又は１１に記載の医薬組成物。
  13. 　重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている、請求項１０～１２のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  14. 　免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法、化学療法剤又はこれらの組み合わせである、請求項１～１３のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  15. 　抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ピジリズマブ又はＬＯＰＤ１８である、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 　抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ又はアベルマブである、請求項１４に記載の医薬組成物。
  17. 　抗ＣＴＬＡ－４抗体が、イピリムマブ又はトレメリムマブである、請求項１４に記載の医薬組成物。
  18. 　抗体と、免疫調節剤が、それぞれ別異の製剤に有効成分として含有され、同時に又は異なる時間に投与されることを特徴とする、請求項１～１７のいずれか一つに記載のがん治療のための医薬組成物。
  19. 　免疫調節剤と併用するための、請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体を含む、がん治療のための医薬組成物。
  20. 　免疫調節剤を投与されたがん患者を治療するための、請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体を含む、がん治療のための医薬組成物。
  21. 　免疫調節剤を含み、請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体と併用することにより、該抗体の作用を上昇させる、がん治療のための医薬組成物。
  22. 　請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体と併用するための、免疫調節剤を含む、がん治療のための医薬組成物。
  23. 　請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体を投与されたがん患者を治療するための、免疫調節剤を含む、がん治療のための医薬組成物。
  24. 　請求項１～１３のいずれか一つに記載の抗体を含み、免疫調節剤と併用することにより、免疫調節剤の作用を上昇させる、がん治療のための医薬組成物。
  25. 　がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、血液がん、皮膚がん、甲状腺がん、胆道がん、唾液腺がん、小腸がん、副腎がん、精巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、胸腺腫、中皮腫、肉腫及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの治療のための、請求項１～２４のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  26. 　下記（１）～（３）の特性を有することを特徴とする抗体又はその抗原結合断片、及び、免疫調節剤が、組み合わされて投与されることを特徴とする、がんの治療方法；
    （１）Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ　Ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ　Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ　（ＧＡＲＰ）に特異的に結合する
    （２）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有する、及び、
    （３）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。
  27. 　抗体が、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を有することを特徴とする、請求項２６に記載の治療方法。
  28. 　抗体が、以下の（１）又は（２）に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖、並びに、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含んでなる、請求項２６又は２７に記載の治療方法；
    （１）配列番号１３においてアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１３においてアミノ酸番号６９～７８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１３においてアミノ酸番号１１８～１２５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに配列番号１５においてアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１５においてアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１５においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３、又は
    （２）配列番号１７においてアミノ酸番号４５～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１７においてアミノ酸番号６９～７７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１７においてアミノ酸番号１１７～１２８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３、並びに配列番号１９においてアミノ酸番号４４～５４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１９においてアミノ酸番号７０～７６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１９においてアミノ酸番号１０９～１１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３。
  29. 　抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項２６～２８のいずれか一つに記載の治療方法；
    （１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、
    （２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～１３６に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、又は、
    （３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～１３９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
  30. 　抗体が、キメラ抗体である、請求項２６～２９のいずれか一つに記載の治療方法。
  31. 　抗体が、ヒト化抗体である、請求項２６～２９のいずれか一つに記載の治療方法。
  32. 　抗体が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、請求項２６～３１のいずれか一つに記載の治療方法。
  33. 　抗体が、以下の（１）～（３）に記載の重鎖及び軽鎖を含む、請求項３１又は３２に記載の治療方法；
    （１）配列番号２１のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２５のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、
    （２）配列番号２３のアミノ酸番号２０～４６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２７のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖、又は、
    （３）配列番号２９のアミノ酸番号２０～４６９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３１のアミノ酸番号２１～２３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖。
  34. 　抗体が、請求項２７～３３のいずれか一つに記載の抗体と、ＧＡＲＰへの結合において競合する、請求項２６に記載の治療方法。
  35. 　抗体が、Ｎ－結合型糖鎖付加、Ｏ－結合型糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末におけるメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、及び重鎖のカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸残基の欠失からなる群より選択される１又は２以上の修飾を含む、請求項２６～３４のいずれか一つに記載の治療方法。
  36. 　重鎖のカルボキシル末端において１つ又は数個のアミノ酸残基が欠失している、請求項３５に記載の治療方法。
  37. 　２本の重鎖の双方でカルボキシル末端において１つのアミノ酸残基が欠失している、請求項３５又は３６に記載の治療方法。
  38. 　重鎖のカルボキシル末端のプロリン残基が更にアミド化されている、請求項３５～３７のいずれか一つに記載の治療方法。
  39. 　免疫調節剤が、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ－４抗体もしくはその抗原結合断片、前記抗体又はその抗原結合断片を含む多重特異性抗体、放射線療法、化学放射線療法、化学療法剤又はこれらの組み合わせである、請求項２６～３８のいずれか一つに記載の治療方法。
  40. 　抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ピジリズマブ又はＬＯＰＤ１８である、請求項３９に記載の治療方法。
  41. 　抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ又はアベルマブである、請求項３９に記載の治療方法。
  42. 　抗ＣＴＬＡ－４抗体が、イピリムマブ又はトレメリムマブである、請求項３９に記載の治療方法。
  43. 　免疫調節剤と併用することを特徴とするがんの治療方法であって、それを必要とするがん患者に、請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法。
  44. 　免疫調節剤を投与されたがん患者の治療方法であって、それを必要とする患者に、請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法。
  45. 　請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体と併用することにより、該抗体の作用を上昇させる方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法。
  46. 　請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体と併用することを特徴とするがんの治療方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法。
  47. 　請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体を投与されたがん患者の治療方法であって、それを必要とする患者に、免疫調節剤の有効量を投与することを含む、治療方法。
  48. 　免疫調節剤と併用することにより、免疫調節剤の作用を上昇させる方法であって、それを必要とする患者に請求項２６～３８のいずれか一つに記載の抗体の有効量を投与することを含む、治療方法。
  49. 　がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、血液がん、皮膚がん、甲状腺がん、胆道がん、唾液腺がん、小腸がん、副腎がん、精巣がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、胸腺腫、中皮腫、肉腫及びそれらの転移性形態からなる群より選択される少なくとも一つの治療のための、請求項２６～４８のいずれか一つに記載の治療方法。
  50. 　請求項１～１２のいずれか一つに記載の抗体、及び、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体及び抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群より選択される1又は２以上の免疫調節剤を含む、がん治療のためのキット製剤。
  51. 　キットを使用するための取扱説明書をさらに含む、請求項５０に記載の製剤。
  52. 　抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、請求項１４に記載の医薬組成物。
  53. 　抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブである、請求項１４に記載の医薬組成物。
  54. 　抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、請求項３９に記載の治療方法。
  55. 　抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブである、請求項３９に記載の治療方法。
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