WO2020209277A1 - Ｐｄ－ｌ１発現抑制作用を有する新規化合物 - Google Patents

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WO2020209277A1
WO2020209277A1 PCT/JP2020/015771 JP2020015771W WO2020209277A1 WO 2020209277 A1 WO2020209277 A1 WO 2020209277A1 JP 2020015771 W JP2020015771 W JP 2020015771W WO 2020209277 A1 WO2020209277 A1 WO 2020209277A1
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WO
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cancer
compound
cells
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
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PCT/JP2020/015771
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晴久 菊地
大島　吉輝
俊夫 服部
山田　修
張菁 周
進也 喜田
新也 村瀬
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国立大学法人東北大学
学校法人順正学園
扶桑薬品工業株式会社
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    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
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    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants

Definitions

  • the present invention relates to a novel compound having a PD-L1 expression inhibitory effect, particularly a 1-benzoyl-N- (4-phenoxyphenyl) piperidine-3-carboxamide compound.
  • the present invention may be useful in the treatment of diseases caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1 binding.
  • the living body has an immune mechanism to protect the body from foreign pathogens and cancer cells generated in the body, and at the same time, it also has an immune control mechanism to prevent the living body from being damaged by excessive immunity. ing.
  • cancer cells escape from the immune system of a living body by inducing an immune control mechanism in the tumor microenvironment.
  • One of the mechanisms is immune escape of cancer by the action of PD-1 or PD-L1 called “immune checkpoint molecule" (Non-Patent Document 1).
  • killer T cells which are one of the immunocompetent cells
  • IFN- ⁇ interferon- ⁇
  • IL-2 interleukin-2
  • T cells undergo apoptosis (cells). Death) is induced so that the cancer cells escape the attack of T cells.
  • IL-2 interleukin-2
  • a new type of anticancer drug that can specifically bind to PD-1 or PD-L1 and prevent PD-1 / PD-L1 binding between T cells and cancer cells has already been approved. These are called immune checkpoint inhibitors.
  • Surgical treatment, chemotherapy, and radiation therapy are the main treatments for cancer, but a treatment method that is sufficiently effective has not yet been established, and a new treatment method has been established. It has been demanded.
  • PD-1 and PD-L1 are new targets for cancer treatment as molecules that suppress immunity (“immune checkpoint molecules”).
  • killer T cells become highly expressive of PD-1 in the late stage of infection, and antigen-presenting cells. It has been reported that when PD-L1 is expressed by (macrophages and dendritic cells), PD-1 / PD-L1 binding is formed, and the binding causes a decrease in immunocompetence, leading to infectious diseases (non-). Patent Documents 2 to 8). Therefore, targeting PD-1 and / or PD-L1 is thought to lead to the treatment of diseases caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1 binding, such as cancer and infectious diseases.
  • anti-PD-1 antibodies nivolumab, pembrolizumab
  • anti-PD-L1 antibodies atezolizumab, durvalumab
  • these drugs are antibody drugs, and unlike small molecule drugs, they cannot be orally administered and are expensive in terms of cost. Therefore, it is expected to develop a low-molecular-weight immune checkpoint inhibitor targeting PD-1 or PD-L1, which can be orally administered and can be formulated at low cost (Non-Patent Document 9).
  • Non-Patent Document 9 Non-Patent Document 9
  • the present invention examines low-molecular-weight compounds having an inhibitory activity on PD-L1 expression and decreased IL-2 production, and diseases (eg, cancer and infection) caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1 binding. It is an object of the present invention to provide a medicine (for example, an immune checkpoint inhibitor) and a vaccine adjuvant (adjuvant) useful for treating a disease.
  • a medicine for example, an immune checkpoint inhibitor
  • a vaccine adjuvant adjuvant
  • the present inventors may refer to the compound represented by the following formula (I) and a pharmaceutically acceptable salt thereof (hereinafter, referred to as "the compound of the present invention”).
  • the compound of the present invention Has an effect of suppressing PD-L1 expression and an effect of suppressing decrease in IL-2 production, and completed the present invention.
  • the present invention by acting as an immune checkpoint inhibitor due to its PD-L1 expression inhibitory action, it treats diseases caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1 binding, such as cancer and infectious diseases. can do.
  • Equation (I) [During the ceremony: R 1 and R 2 are independently halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1 Selected from the group consisting of -6 hydroxyalkoxy, nitro, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino, pentafluorosulfanyl, aryl, and heteroaryl, wherein the aryl and heteroaryl are substitutable.
  • the compound indicated by or a pharmaceutically acceptable salt thereof is
  • R 1 and R 2 are independently halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, and C 1-6 haloalkoxy. , C 1-6 hydroxyalkoxy, nitro, and pentafluorosulfanyl;
  • R 1 is independently selected from hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, or nitro; and R 2 is independently halogen, C 1-6 alkyl, respectively.
  • a pharmaceutical composition comprising any of the compounds [1] to [6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Cancers include skin cancer including malignant melanoma, brain tumor including glioblastoma, lung cancer, gastric cancer, colon cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, adrenal cancer, and biliary tract. Hmm, esophageal cancer, pharyngeal cancer, laryngeal cancer, oral cancer, bladder cancer, tongue cancer, thyroid cancer, breast cancer, prostate cancer, testis cancer, uterine cancer, cervical cancer, ovary
  • the pharmaceutical composition according to [9] or [10] which is a cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, horizontal print myoma, smooth myoma, leukemia including adult T-cell leukemia, malignant lymphoma, or multiple myeloma.
  • Infectious diseases include tuberculosis, hepatitis B, hepatitis C, human immunodeficiency virus (HIV) infection, human papillomavirus (HPV) infection, Epstein-Barrvirus (EBV) infection, human cytomegalovirus (The pharmaceutical composition of [9] or [12], which is a CMV) infection, a herpesvirus infection, or a human T-cell leukemia virus type 1 (HTLV-1) infection.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • HPV human papillomavirus
  • EBV Epstein-Barrvirus
  • cytomegalovirus The pharmaceutical composition of [9] or [12], which is a CMV) infection, a herpesvirus infection, or a human T-cell leukemia virus type 1 (HTLV-1) infection.
  • An immune checkpoint inhibitor comprising any of the compounds [1] to [6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention also provides the following aspects.
  • An immune checkpoint molecule comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of any of the compounds [1]-[6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Method of suppressing the expression of.
  • the method of [22], wherein the immune checkpoint molecule is PD-L1.
  • IL-2 production characterized in that a therapeutically effective amount of any of the compounds [1]-[6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered to a patient in need of treatment. How to control the decline.
  • a T cell function enhancer comprising any compound of [1] to [6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a T cell function characterized by administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of any of the compounds [1] to [6] or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Augmentation method.
  • the compound of the present invention has a PD-L1 expression inhibitory effect and an IL-2 production decrease inhibitory effect, and diseases caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1, particularly cancer (for example, malignant black color).
  • Skin cancer including tumor, brain tumor including glioblastoma, lung cancer, stomach cancer, colon cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, adrenal cancer, biliary tract cancer, esophageal cancer, pharyngeal cancer , Laryngeal cancer, oral cancer, bladder cancer, tongue cancer, thyroid cancer, breast cancer, prostate cancer, testicular cancer, uterine cancer, cervical cancer, ovarian cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, Lacterial myoma, smooth myoma, leukemia including adult T-cell leukemia, malignant lymphoma, multiple myeloma) and infections (eg, tuberculosis, hepatitis B, hepatitis C, human immunode
  • FIG. 1 is a diagram analyzing the expression of PD-L1 and PD-1 on the cell surface.
  • FIG. 1A is a diagram analyzing the expression of CD274 (PD-L1) on the surface of A549 cells after addition of IFN- ⁇ and culturing for 2 days
  • FIG. 1B is a diagram showing the surface of Jurkat cells after addition of PMA / PHA and culturing for 2 days. It is a figure which analyzed the expression of CD279 (PD-1) of.
  • FIG. 1 is a diagram analyzing the expression of PD-L1 and PD-1 on the cell surface.
  • FIG. 1A is a diagram analyzing the expression of CD274 (PD-L1) on the surface of A549 cells after addition of IFN- ⁇ and culturing for 2 days
  • FIG. 1B is a diagram showing the surface of Jurkat cells after addition of PMA / PHA and culturing for 2 days. It is a figure which analyzed the expression of CD279 (PD-1)
  • FIG. 2 is a diagram showing the inhibitory effect of the compound of Example 5 on apoptosis (Caspase3 / 7 activity) of Jurkat cells after PD-1 / PD-L1 binding, and shows the control Caspase3 / 7 activity in Jurkat cells. The percentage (%) of Caspase 3/7 activity in the compounds of Example 5 (0.25 ⁇ M, 0.5 ⁇ M and 1 ⁇ M) when 100% is shown.
  • FIG. 3 is a diagram showing the inhibitory effect of the compound (Example 5) on the decrease in IL-2 production caused by PD-1 / PD-L1 binding, and is a control (DMSO) in A549 cells (without IFN- ⁇ addition).
  • the ratio (%) of the luciferase activity of the control (DMSO) and the compound of Example 5 (0.5 ⁇ M and 1 ⁇ M) in A549 cells (IFN- ⁇ addition) when the luciferase activity of the above is 100% is shown.
  • halogen means fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • C 1-6 alkyl means a linear or branched-chain saturated hydrocarbon having 1 to 6 carbon atoms. These may be optionally substituted with one or more substituents included in the present invention at substitutable positions.
  • the "C 1-6 alkyl” may preferably have 1 to 5, 1 to 4 or 1 to 3 carbon atoms. Examples thereof include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, hexyl and the like.
  • C 1-6 haloalkyl means the above-mentioned alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen atoms (s). ..
  • the number of hydrogen atoms being replaced can range from one to a maximum of the total number of other hydrogen atoms that can be present in the parent alkyl group.
  • it may be substituted with the same or different halogen atoms. Examples thereof include, but are not limited to, chloromethyl, trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl and the like.
  • C 1-6 hydroxyalkyl means the above-mentioned alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in which one or more hydrogen atoms are replaced by hydroxy groups (s). To do.
  • the number of hydrogen atoms being replaced can range from one to a maximum of the total number of other hydrogen atoms that can be present in the parent alkyl group. Examples thereof include, but are not limited to, hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, 2-hydroxypropyl, 3-hydroxypropyl, 4-hydroxybutyl and the like.
  • C 1-6 alkoxy means a group in which the above-mentioned alkyl group having 1 to 6 carbon atoms is bonded via an oxygen atom. Examples thereof include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butyloxy, pentyloxy, isopentyloxy, neopentyloxy, hexyloxy and the like.
  • C 1-6 haloalkoxy means the above-mentioned alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen atoms (s). To do.
  • the number of hydrogen atoms being replaced can range from one to a maximum of the total number of other hydrogen atoms that can be present in the parent alkyl group.
  • it may be substituted with the same or different halogen atoms. Examples thereof include, but are not limited to, chloromethoxy, trifluoromethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy and the like.
  • C 1-6 hydroxyalkoxy means the above-mentioned alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms in which one or more hydrogen atoms are replaced by hydroxy (s). ..
  • the number of hydrogen atoms being replaced can range from one to a maximum of the total number of other hydrogen atoms that can be present in the parent alkyl group. Examples thereof include, but are not limited to, hydroxymethoxy, 2-hydroxyethoxy, 2-hydroxypropoxy, 3-hydroxypropoxy, 4-hydroxybutoxy and the like.
  • mono- or di-C 1-6 alkylamino is an amino in which one or two hydrogen atoms are replaced by the above-mentioned alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. Means the group. When two are substituted with an alkyl group, they may be substituted with the same or different alkyl groups. Examples thereof include, but are not limited to, methylamino, ethylamino, dimethylamino, diethylamino and the like.
  • aryl means a monocyclic or bicyclic aromatic hydrocarbon group having 6 or more carbon atoms, excluding one hydrogen atom bonded to the aromatic ring. These may be optionally substituted with one or more substituents included in the present invention at substitutable positions. Examples thereof include, but are not limited to, phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl, anthracenyl and the like.
  • heteroaryl is a monocyclic or bicyclic aromatic in which at least one of the ring carbons is replaced with a hetero atom selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur atoms. It means a heterocyclic group. These may be optionally substituted with one or more substituents included in the present invention at substitutable positions.
  • Preferred heteroaryls include 3- to 10-membered heteroaryls, 3- to 6-membered heteroaryls, and 5- to 6-membered heteroaryls.
  • “5- to 6-membered heteroaryl” refers to a 5- to 6-membered monocyclic heterocyclic group containing at least one heteroatom selected from nitrogen, sulfur or oxygen atoms.
  • Examples thereof include, but are not limited to, thiophene, furan, pyrrole, imidazole, pyrazole, thiazole, oxazole, isothiazole, isoxazole, pyridine, pyrimidine, pyrazine, pyridazine, triazine, indol, purine, quinoline, isoquinoline and the like. Can be mentioned.
  • “may be substituted” includes the case where the substitutable position of the group is not substituted (unsubstituted) and the case where it is substituted.
  • "Unsubstituted” means that all substitutable positions of the group are hydrogen atoms. When substituted, it may be substituted with a plurality of substituents if possible, and the substituents may be the same or different.
  • Substituents to be substituted include halogen, alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, cycloalkyl group, haloalkyl group, hydroxyalkyl group, alkoxy group, haloalkoxy group, hydroxyalkoxy group, amino group, nitro group, cyano group, Examples thereof include a hydroxy group, a carbamoyl group, a carboxyl group, a morpholinyl group, a formyl group, an acetyl group, a mesyl group, a benzoyl group and an acylamino group.
  • R 1 and R 2 include halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, and C 1-6 hydroxyalkoxy.
  • R 1 preferably halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1-6 hydroxyalkoxy, nitro , Or pentafluorosulfanyl, more preferably hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, or nitro, still more preferably hydroxy, C 1-6 alkoxy, or nitro, most preferably hydroxy. , Methoxy, or nitro.
  • R 2 preferably halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1-6 hydroxyalkoxy, nitro , Or pentafluorosulfanyl, more preferably halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, or pentafluorosulfanyl, still more preferably C 1-6 haloalkyl or pentafluorosulfanyl. Most preferably trifluoromethyl or pentafluorosulfanyl.
  • M and n are integers of 0 to 5, preferably integers of 1 to 4, more preferably integers of 1 to 3, and most preferably integers of 1 to 2.
  • Examples of the "pharmaceutically acceptable salt” of the compound represented by the formula (I) include a salt with an inorganic acid, a salt with an organic acid, and the like.
  • Examples of the salt with the inorganic acid include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like.
  • Salts with organic acids include acetic acid, oxalic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, malic acid, citric acid, tartaric acid, adipic acid, gluconic acid, glucoheptoic acid, glucuronic acid, terephthalic acid, methanesulfonic acid, and alanine.
  • Lactic acid horse uric acid, 1,2-ethanedisulfonic acid, isethionic acid, lactobionic acid, oleic acid, gallic acid, pamoic acid, polygalacturonic acid, stearic acid, tannic acid, trifluoromethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p- Examples thereof include salts with toluene sulfonic acid, naphthalene sulfonic acid, sulfosalicylic acid and the like.
  • the compounds of the present invention may exist in the form of hydrates and / or solvates, these hydrates and / or solvates are also included in the compounds of the present invention.
  • the solvate include ethanol solvates and the like.
  • the representative compound of the present invention represented by the formula (I) can be produced by the following production method:
  • the compound (1-1) a commercially available product or a compound produced by a known synthetic method can be used.
  • Step 1 Production step of compound (1-2)
  • Compound (1-2) is prepared with compound (1-1) in a suitable solvent in the presence of a base, 4-chlorobenzotrifluoride or 4-fluorophenylsulferpentafluoride. Manufactured by reacting with a compound.
  • Step 2 Production of Compound (1-3)
  • Compound (1-3) is a compound (1-2) and 1- (tert-butoxycarbonyl) -4-piperidincarboxylic acid in a suitable solvent in the presence of a base. It is produced by reacting with.
  • Step 3 Production of Compound (1-4)
  • Compound (1-4) is produced by reacting compound (1-3) with carboxylic acid A in an appropriate solvent under acidic (HCl) conditions. ..
  • the solvent used in each step of the above production method should be selected in a timely manner depending on the reaction, the type of raw material compound, etc., for example, alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol, ketones such as acetone and methyl ketone, and chloride.
  • Halogenized hydrocarbons such as methylene and chloroform, ethers such as tetrahydrofuran (THF) and dioxane, aromatic hydrocarbons such as toluene and benzene, aliphatic hydrocarbons such as hexane and heptane, ethyl acetate, propyl acetate and the like.
  • esters dimethylformamide (DMF), amides such as N-methyl-2-pyrrolidone, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide (DMSO), nitriles such as acetonitrile, and these solvents are used alone or in combination of two or more. It can be mixed and used.
  • DMF dimethylformamide
  • amides such as N-methyl-2-pyrrolidone
  • sulfoxides such as dimethyl sulfoxide (DMSO)
  • nitriles such as acetonitrile
  • the base used in each step of the above production method should be selected in a timely manner depending on the reaction, the type of raw material compound, etc., for example, potassium carbonate, sodium carbonate, cesium carbonate, potassium-tert-butoxide, sodium hydride, etc.
  • Examples thereof include potassium hydroxide, sodium bis (trimethylsilyl) amide, lithium diisopropylamide, and the like, and these bases can be used alone or in combination of two or more.
  • cancer in the present specification is not particularly limited to a cancer type, and examples thereof include solid cancer, blood cancer, and metastatic cancer.
  • solid cancers include skin cancers (eg, malignant melanoma), brain tumors (eg, glioma), lung cancer, gastric cancer, colon cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, and adrenal gland.
  • Hematological cancers include, for example, multiple myeloma, malignant lymphoma (eg, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's lymphoma), leukemia (eg, adult T-cell leukemia, acute myelogenous leukemia, chronic myelogenous leukemia).
  • malignant lymphoma eg, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's lymphoma
  • leukemia eg, adult T-cell leukemia, acute myelogenous leukemia, chronic myelogenous leukemia.
  • metastatic cancer examples include metastatic lung cancer, metastatic gastric cancer, metastatic colon cancer, metastatic liver cancer, metastatic pancreatic cancer, metastatic kidney cancer, metastatic adrenal cancer, and metastatic esophagus.
  • examples include cancer, metastatic bladder cancer, metastatic thyroid cancer, metastatic breast cancer, metastatic prostate cancer, metastatic uterine cancer and the like.
  • infectious disease in the present specification is not particularly limited to a pathogen, but includes bacterial infections, viral infections, and the like. Examples thereof are not particularly limited, but are tuberculosis, hepatitis B, hepatitis C, human immunodeficiency virus (HIV) infection, human papillomavirus infection, epstein barvirus infection, cytomegalovirus infection, and herpesvirus. Infectious diseases, human T-cell leukemia virus type 1 (HTLV-1) infectious diseases and the like can be mentioned.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • immune checkpoint inhibitor refers to inhibiting the function of one or more immune checkpoint molecules (eg, PD-1, PD-L1) or the formation of PD-1 / PD-L1 binding. , Means a drug that releases the suppression of T cells, activates them, and exerts an immunostimulatory effect.
  • An immune checkpoint molecule is a protein that inhibits the activation of killer T cells and acts suppressively against immunity against cancer cells or pathogens.
  • the term "PD-L1 expression inhibitor” refers to a T cell that suppresses the expression of PD-L1 in cancer cells or antigen-presenting cells, inhibits the formation of PD-1 / PD-L1 binding, and suppresses the formation of PD-1 / PD-L1 binding. It means a drug that releases the suppression of and activates, and exerts an immunostimulatory effect on cancer cells or pathogens.
  • IL-2 production-inhibiting agent refers to the inhibition of PD-1 / PD-L1 binding formation and suppression of IL-2 production-inhibiting, thereby suppressing T cell apoptosis. , Means a drug that activates T cells and exerts an immunostimulatory effect on cancer cells or pathogens.
  • treatment means any cure and / or amelioration of a disease or disorder and associated symptoms in mammals, especially humans. It also includes prevention, alleviation or alleviation of diseases caused by immunosuppression due to PD-1 / PD-L1 binding. For example, in the treatment of cancer, completely removing the cancer tumor, eliminating the cancer cells, suppressing the growth of the cancer cells, preventing the recurrence of the cancer, and the symptoms associated with the cancer.
  • the life of cancer patients include improving quality, prolonging the survival of cancer patients, preventing or delaying the onset of cancer and its symptoms, and reducing the risk of developing cancer and its symptoms.
  • the pathogen that causes the infectious disease should be completely removed, the growth of the pathogen should be suppressed, the recurrence of the infectious disease should be prevented, and the symptoms associated with the infectious disease should be alleviated or alleviated. , Preventing or delaying the exacerbation of symptoms, and preventing or delaying the progression of the symptoms.
  • Patient means humans and animals, such as dogs, cats, horses, etc. Among them, human is preferable.
  • a “therapeutically effective amount” is an amount that provides cure, improvement, prevention and / or reduction of a disease and its symptoms caused by immunocompromised due to PD-1 / PD-L1 binding as compared with an untreated subject. Alternatively, it means an amount that prevents or delays the progression of cancer symptoms. The term also includes, within that range, an amount effective in promoting normal physiological function.
  • therapeutically effective amounts of the compounds of the invention can be administered as compound precursors.
  • the compound of the present invention is usually effective in the range of 0.001 to 1000 mg / kg (body weight) per day.
  • Such effective amounts include the amount of the compound of the present invention alone, the amount of the compound of the present invention in combination and / or the amount of the compound of the present invention in combination with other active ingredients useful for cancer treatment.
  • Enhancement of T cell function refers to PD-1 expression in T cells, PD-L1 expression in cancer cells, and T cell function suppressed by PD-1 / PD-L1 binding. It means to activate. Enhancement of T cell function includes, for example, increased cytokine (IL-2) production, promotion of T cell proliferation, release of tolerance of T cells in suppressive states such as anergy (non-responsiveness) and resting states, and Suppression (transition of T cells from a suppressive state to a state of responding to an external stimulus) and the like can be mentioned.
  • IL-2 cytokine
  • the pharmaceutical composition of the present invention an immune checkpoint inhibitor, a PD-L1 expression inhibitor, an IL-2 production decrease inhibitor, a vaccine adjunct, and a T cell function enhancer (hereinafter referred to as an agent) are the present invention. It may contain the compound of the above as an active ingredient, and may further contain other components as long as it does not interfere with the action of inhibiting the immune checkpoint molecule. Therefore, the proportion of the compound of the present invention in the pharmaceutical composition or drug of the present invention is not particularly limited.
  • the pharmaceutical composition or agent of the present invention may contain 0.1% by weight or more, 0.5% by weight or more, or 1.0% by weight or more of the compound of the present invention.
  • the amount of the compound of the present invention may be in the range of 0.1 to 90% by weight, 0.5 to 70% by weight, or 1.0 to 60% by weight.
  • the pharmaceutical composition or drug of the present invention may consist only of the compound of the present invention.
  • the pharmaceutical composition or drug of the present invention can be administered orally or parenterally (for example, intravenous, topical, nasal, pulmonary, rectal, etc.).
  • the dosage form of the present invention can be appropriately selected and prepared according to the physical condition, health condition, etc. of the subject.
  • oral administrations such as tablets, capsules, granules, powders, solutions, syrups, or injections, dialysis agents, inhalants, suppositories, eye drops, eye ointments, ear drops, nasal drops.
  • External preparations, sprays, ointments, creams, gels, patches and other parenteral preparations can be prepared by conventional methods.
  • compositions or agents of the present invention include excipients (eg, lactose, sucrose, D-mannitol and microcrystalline cellulose), disintegrants (eg, carmellose, sodium carmellose and low-substituted hydroxypropyl cellulose).
  • excipients eg, lactose, sucrose, D-mannitol and microcrystalline cellulose
  • disintegrants eg, carmellose, sodium carmellose and low-substituted hydroxypropyl cellulose.
  • Excipients eg, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropylmethyl cellulose, povidone and crystalline cellulose
  • lubricants eg magnesium stearate, calcium stearate and talc
  • solvents eg water, ethanol and propylene glycol
  • buffers Agents eg, trisodium phosphate, sodium hydrogen phosphate and sodium dihydrogen phosphate
  • suspending agents eg, gum arabic, tragant and sodium carboxymethyl cellulose
  • emulsifiers eg, glycerin fatty acid esters and sorbitan fatty acid esters
  • It may contain one or more pharmaceutically acceptable carriers such as.
  • the dose of the compound of the present invention is appropriately selected depending on the administration method, the age of the subject, the degree of the disease, the symptoms, the dosage form, etc., and for example, 0.01 mg to 0.1 mg, 0.1 mg to per day.
  • Oral doses of 1 mg, 1 mg to 5 mg, 5 mg to 10 mg, 10 mg to 50 mg, 50 mg to 100 mg, 100 mg to 500 mg, 500 mg to 1 g, 1 g to 1.5 g, 1.5 g to 2 g, 2 g to 5 g, 5 g to 10 g. Can be administered.
  • the amount of the compound of the present invention per day may be administered in 1 to several divided doses.
  • the present invention will be described in more detail with reference to reference examples, examples and test examples below, but these are not limited to the present invention.
  • the compound was identified by an NMR spectrum method, a mass spectrometry method, or the like.
  • s is a single line
  • d is a double line
  • dd is a double double line
  • ddd is a double double double line
  • dt is a double triple line
  • t is a double line.
  • Triple line, td is triple double line
  • q is quadruple line
  • m is multiple line
  • br is wide
  • brs is wide single line
  • J means coupling constant.
  • Reference example 1 4- (4- (trifluoromethyl) phenoxy) aniline Dissolve p-aminophenol (303 mg, 2.78 mmol), 4-chlorobenzotrifluoride (505 mg, 2.80 mmol) and potassium hydroxide (304 mg, 5.42 mmol) in dimethyl sulfoxide (5 mL) at 100 ° C. for 12 hours. Stirred. Water (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL). All the extracted ethyl acetate layers were combined, washed with water (20 mL) and saturated brine (20 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • Reference example 2 4- (4- (Pentafluorosulfanilic) phenoxy) aniline N, p-aminophenol (189 mg, 1.78 mmol), 4-fluorophenyl sulfer pentafluoride (258 mg, 1.16 mmol) and sodium hydride (60%, dispersed in liquid paraffin) (70 mg, 1.75 mmol). It was dissolved in N-dimethylformamide (4 mL) and stirred at 100 ° C. for 18 hours. Water (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 4 times with ethyl acetate (10 mL).
  • N, N-diisopropylethylamine 200 ⁇ L, 1.14 mmol
  • (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy) dimethylamino-morpholino-carbenium hexafluorophosphate 220 mg, 0.514 mmol.
  • the mixture was stirred at room temperature for 6 hours.
  • 0.5M hydrochloric acid (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL).
  • Example 1 4-Hydroxybenzoyl) -N- (4- (4- (trifluoromethyl) phenoxy) phenyl) piperidine-3-carboxamide
  • the compound of Reference Example 3 (30.2 mg, 0.065 mmol) was dissolved in a hydrogen chloride-methanol reagent (5-10%) (2 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours.
  • the reaction mixture was distilled off under reduced pressure, the residue was dissolved in dichloromethane (2 mL), p-hydroxybenzoic acid (11.5 mg, 0.083 mmol), N, N-diisopropylethylamine (60 ⁇ L, 0.344 mmol) and (1).
  • Example 2 1- (4-nitrobenzoyl) -N- (4- (4- (trifluoromethyl) phenoxy) phenyl) piperidine-3-carboxamide Compounds of Example 2 were obtained according to the method described in Example 1, except that p-nitrobenzoic acid was used instead of p-hydroxybenzoic acid.
  • Example 3 1- (4-Hydroxy-3-methoxybenzoyl) -N- (4- (4- (trifluoromethyl) phenoxy) phenyl) piperidin-3-carboxamide Compounds of Example 3 were obtained according to the method described in Example 1, except that 4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid was used instead of p-hydroxybenzoic acid.
  • Example 4 1- (4-Hydroxybenzoyl) -N- (4- (4-pentafluorosulfanyl) phenoxy) phenyl) piperidine-3-carboxamide
  • the compound of Reference Example 4 (42.2 mg, 0.080 mmol) was dissolved in a hydrogen chloride-methanol reagent (5-10%) (2 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours. The reaction mixture was evaporated under reduced pressure, the residue was dissolved in dichloromethane (2 mL), p-hydroxybenzoic acid (13.4 mg, 0.097 mmol), N, N-diisopropylethylamine (60 ⁇ L, 0.344 mmol) and (1).
  • Example 5 1- (4-nitrobenzoyl) -N- (4- (4- (pentafluorosulfanyl) phenoxy) phenyl) piperidine-3-carboxamide A compound of Compound 5 was obtained according to the same method as in Example 4 except that p-nitrobenzoic acid was used instead of p-hydroxybenzoic acid.
  • Example 6 1- (4-Hydroxy-3-methoxybenzoyl) -N- (4- (4- (pentafluorosulfanyl) phenoxy) phenyl) piperidine-3-carboxamide
  • the compound of Example 6 was obtained according to the same method as in Example 4 except that 4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid was used instead of p-hydroxybenzoic acid.
  • Comparative Example 1 N- (3- (4-chlorophenoxy) phenyl) -1- (4-hydroxyphenylcarbonyl) piperidine-3-carboxamide
  • the compound of Comparative Example 1 was prepared according to the following method. 3- (4-Chlorophenoxy) aniline (55 mg, 0.250 mmol) dissolved in dichloromethane (3 mL) 1- (tert-butoxycarbonyl) piperidine-3-carboxylic acid (59 mg, 0.312 mmol), N, N- Diisopropylethylamine (130 ⁇ L, 0.776 mmol) and (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy) dimethylaminomorpholinocarbenium (145 mg, 0.339 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours.
  • 0.3M hydrochloric acid (20 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (20 mL). The obtained ethyl acetate layers were combined, washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (40 mL) and saturated brine (40 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • tert-butyl 3- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl carbamate ( 61 mg, 0.155 mmol, 62%).
  • tert-Butyl 3- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl carbamate (53 mg, 0.135 mmol) was dissolved in methanol (1.5 mL) and hydrochloric acid-methanol reagent (5-10%). ) (1.5 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours.
  • Test Example 1 Evaluation of luciferase expression inhibitory effect under PD-L1 promoter control Reporter vector pPD- in which human PD-L1 promoter sequence (-2097 to 51) was incorporated into the multicloning site of pGL-3 vector basic (Promega).
  • L1luc When L1luc is transfected into animal cells, it expresses luciferase under the control of the PD-L1 promoter.
  • the pPD-L1luc was transfected into human non-small cell lung cancer-derived cell line A549 together with pPUR (Clontech) expressing a puromycin resistance gene (puromycin-N-acetyl-transferase gene), and proliferated in a puromycin-added medium.
  • Possible cells expressing luciferase were selected.
  • the selected cells were referred to as "A549 / PD-L1luc cells" and used in the luciferase assay described below.
  • the test compound was added to the culture medium of A549 / PD-L1luc cells, and the effect on the intracellular luciferase expression level was observed.
  • the test compound has a cytotoxic or cell growth inhibitory effect
  • the total luciferase expression level decreases due to the decrease in the number of living cells depending on the concentration of the test compound, and the PD-L1 promoter of the test compound It is considered that the effect of suppressing luciferase expression under control cannot be evaluated correctly. Therefore, the total protein amount of cells cultured with the addition of the test compound was measured using the BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific), and the measured total protein amount was used as an index of the number of cells.
  • the compounds of Examples 1 to 6 and Comparative Example 1 were prepared into a 50 mmol / L solution with dimethyl sulfoxide (DMSO) and stored at -80 ° C.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the compound solution was diluted with DMSO as a 2-fold dilution series (usually in the range of 0.04 mmol / L to 10 mmol / L), and test compound solutions with 2-fold different concentrations were prepared for the luciferase assay.
  • DMSO alone (control) or diluted test compound (sample) solution was dispensed into each well to which the cell suspension was added (200-fold dilution). After mixing with a vortex mixer, 96-well plates were cultured in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 conditions) for 48 ⁇ 4 hours.
  • the Luciferase Assay Substrate (hereinafter referred to as LAS) contained in Luciferase Assay Systems (Promega: Cat # E1500) was dissolved in the Luciferase Assay Buffer (LAB) to prepare a luciferase reagent.
  • 5xCell Culture Lysis Reagent (hereinafter referred to as CCLR) was diluted 5-fold with water to prepare 1xCCLR.
  • Working Reagent was prepared by mixing BCA reagent A and BCA reagent B (50: 1) included in the protein measurement kit. 25 ⁇ L of calibration curve samples (vials I to VI) and 10-fold diluted samples were dispensed into each well of the 96-well plate. 25 ⁇ L of samples from the control group and the test compound-added group at each concentration were dispensed into 2 wells, respectively.
  • the regression line was obtained by the least squares method, and the total protein concentration of the diluted sample in each well was calculated. Further, the total protein concentration was multiplied by a dilution factor (10 times) to calculate the total protein concentration of each sample.
  • the percentage obtained from the RLU of each sample was divided by the percentage of the total protein concentration corresponding thereto, and the correction value based on the amount of protein of the percentage obtained from the RLU was obtained. From each of the corrected values, a regression line was obtained by the least squares method, and a 50% luciferase expression inhibition concentration (IC 50 value) was calculated.
  • Test Example 2 Evaluation of PD-L1 expression-suppressing effect by cell staining using a fluorescent antibody-labeled anti-PD-L1 antibody
  • the PD-L1 expression-suppressing effect was evaluated according to the following procedure. ..
  • THP-1 cells derived from acute monocytic leukemia cells were added to RPMI medium (hereinafter referred to as RPMI medium) supplemented with 10% FCS and 1% P / S. Suspended to 5x10 5 cells / mL and dispensed 3 mL into each well of a 6-well plate.
  • IFN- ⁇ PEPROTECH, Cat.No.300-02-100UG,> 2e + 7U / mg
  • IFN- ⁇ is 25 ng / mL (> 500 U / mL) to activate THP-1 cells and express PD-L1.
  • RPMI medium RPMI medium
  • IFN- ⁇ PEPROTECH, Cat.No.300-02-100UG,> 2e + 7U / mg
  • test compound A solution of 50 mmol / L of test compound was diluted with medium (usually in the range of 0.025 mmol / L to 1 mmol / L) and 60 ⁇ L of it was added to the wells.
  • the cells were cultured in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 conditions) for 24 ⁇ 2 hours. As a control, only DMSO was added in place of the compound.
  • a part of the cell culture medium was collected, and the cells were counted with a cell counter (BIORAD TC-20). The cell culture medium was centrifuged at 300 xg for 5 minutes, and the supernatant was removed.
  • BSA bovine serum albumin
  • PBS- calcium magnesium added free phosphate buffered saline solution
  • Foxp3 / Transcription Factor Fix / Perm Concentrate (4X) (Cat.No.TNB-1020-L050) (Liquid A) included in FOXP3 / Transcription Factor Staining kit (TONBO biosciences) is Foxp3 / Transcription Factor Fix / Perm.
  • Diluent (1X) (Cat.No.TNB-1022-L160) (A dilution solution) was used to prepare a 1xA solution.
  • 1xA solution was added to each tube, and the mixture was lightly pipette and stirred.
  • the peak intermediate fluorescence value (MFI) of PD-L1 and the peak intermediate fluorescence value of IgG1 were obtained from the histogram of fluorescence intensity and the number of cells, and the intermediate fluorescence value of IgG1 was subtracted from the intermediate fluorescence value of PD-L1 to obtain subMFI.
  • Test Example 3 Evaluation of inhibitory effect of the compound of the present invention on T cell apoptosis caused by PD-1 / PD-L1 binding According to Test Examples 1 and 2, the compound of the present invention has a PD-L1 expression inhibitory effect. Since it was proved to be present, it was evaluated whether or not the PD-L1 expression inhibitory effect of the compound could suppress the apoptosis of T cells caused by PD-1 / PD-L1 binding.
  • A549 cells expressing PD-L1 precultured by adding IFN- ⁇ , Phorbol 12-myristate 13-Acetate (hereinafter referred to as PMA: Sigma Cat # 1585) and phytohemagglutinin-L (hereinafter referred to as PHA-L: Roche Cat # 11249738001) was added to remove the culture supernatant of each Jurkat cell derived from human acute T-cell leukemia cells expressing PD-1, which was pre-cultured, and then co-cultured in a new medium. By measuring the Caspase 3/7 activity of Jurkat cells after co-culture, it was used as an index of apoptosis. The test compound was added to the culture medium of A549 cells in preculture.
  • IFN- ⁇ 25 ng / mL
  • a test compound were added to 3 mL of a culture solution of A549 cells, and the culture was continued.
  • a 50 mmol / L DMSO solution was diluted 100-fold with DMEM medium, and then 3 ⁇ L, 6 ⁇ L or 12 ⁇ L thereof was added (final concentration 0.5 ⁇ mol / L, 1.0 ⁇ mol / L, 2 ⁇ mol / L).
  • 12 ⁇ L of DMSO diluted 100-fold with DMEM medium was added.
  • PMA final concentration 12.5 ng / mL
  • PHA final concentration 250 ng / mL
  • the A549 cells peeled cells with Cell Dissociation Solution Non-enzymatic (Sigma Cat No.C5914-100ML), so as to be 4x10 5 cells / mL in RPMI medium after removing the supernatant by centrifugation for 5 minutes at 300xg Suspended.
  • Jurkat cells were centrifuged at 300 xg for 5 minutes to remove the supernatant, and then suspended in RPMI medium to 4 x 10 4 cells / mL. To each well of the 24-well plate was added 0.25 mL A549 cell suspension and 0.25 mL Jurkat cell suspension (cell number ratio 10: 1).
  • A549 blank in which only A549 cells were not co-cultured with Jurkat cells, 0.25 mL of A549 cells and 0.25 mL of RPMI medium were added and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 .
  • PD-L1 expression in A549 cells and PD-1 expression in Jurkat cells stimulated with PMA and PHA 2 days after IFN- ⁇ treatment were measured by anti-CD274-PC7 antibody (PD-L1) according to the same method as in Test Example 2.
  • the cells were stained with an anti-CD279-FITC antibody (PD-1, eBioscience Cat No. 11-9969-42) and measured with a flow cytometer to confirm the expression.
  • IF-Comp- Co-culture of pre-cultured A549 cells and Jurkat cells without adding IFN- ⁇ and test compound together
  • IF + Comp- Co-culture of pre-cultured A549 cells and Jurkat cells with the addition of IFN- ⁇ but no test compound
  • IF + Comp + Co-culture of pre-cultured A549 cells and Jurkat cells with the addition of IFN- ⁇ and the test compound.
  • A: IF-Comp- Culture of only pre-cultured A549 cells without addition of IFN- ⁇ and test compound
  • A: IF + Comp- Culture of only A549 cells pre-cultured with IFN- ⁇ added but no test compound added
  • A: IF + Comp + Culture of only A549 cells pre-cultured by adding IFN- ⁇ and the test compound.
  • a culture solution (containing floating Jurkat cells but not adherent A549 cells) was collected from each well and used as a sample for measuring Caspase 3/7 activity by Caspase-Glo® 3/7 Assay Systems. ..
  • FIGS. 1A and 1B The FCM analysis results (diaphragms) are shown in FIGS. 1A and 1B. Furthermore, Caspase3 at each concentration of the compound of Example IC 50 values of 2, 3, 5 and compound 6 are shown in Table 4, in the case of a 100% Caspase3 / 7 activity of the control (DMSO), Example 5 The effect of suppressing the activity of / 7 is shown in Table 5 and FIG.
  • Test Example 4 Evaluation of the inhibitory effect of the compound of the present invention on the decrease in IL-2 production of T cells caused by PD-1 / PD-L1 binding Due to the PD-L1 expression inhibitory effect of the compound of the present invention, PD-1 It was evaluated whether or not the decrease in IL-2 production of T cells caused by / PD-L1 binding was suppressed.
  • Jurkat cells were pre-transfected with pIL-2luc, which incorporated the human IL-2 promoter sequence (-945 to 53) into the multicloning site of the pGL-3 vector basic (Promega). PMA and PHA-L were added to the Jurkat cells and precultured. At the same time, IFN- ⁇ was added to pre-culture A549.
  • the cells After removing the culture supernatant from the pre-culture of each cell, the cells were co-cultured in a new medium. The luciferase activity of Jurkat cells after co-culture was measured. The test compound was added to the culture medium of A549 cells in preculture.
  • A549 cells were cultured in DMEM medium at a concentration of 3x10 5 cells / mL in 5 mL each in a T25 flask (under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 ).
  • 5 ⁇ g of pIL-2luc DNA and 15 ⁇ L of TransIT-Jurkat reagent were added to 500 ⁇ L of serum-free medium, and the mixture was left at room temperature for 15 minutes. The entire amount was added to Jurkat cells (3x10 5 cells / 5 mL RPMI medium / T25 flask).
  • IFN- ⁇ 25 ng / mL
  • the compound of Example 5 were added to 5 mL of a culture solution of A549 cells, and the culture was continued.
  • a 50 mmol / L DMSO solution was diluted 100-fold with DMEM medium, and then 5 ⁇ L or 10 ⁇ L thereof was added (final concentration 0.5 ⁇ mol / L, 1.0 ⁇ mol / L).
  • 10 ⁇ L of DMSO diluted 100-fold with DMEM medium was added.
  • luciferase Assay System was dissolved in LAB to prepare a luciferase reagent. 10 ⁇ L of the sample and 50 ⁇ L of the luciferase reagent were mixed, and chemiluminescence (relative emission intensity: RLU) was measured with GloMax20 / 20 (Promega).
  • IFN- ⁇ -added control DMSO
  • IL-2luc activity IL-2 promoter-controlled luciferase activity
  • the compound of the present invention can suppress a decrease in luciferase activity under the control of the IL-2 promoter of Jurkat cells derived from PD-1 / PD-L1 binding. That is, it is recognized that the compound of the present invention has an inhibitory effect on the decrease in IL-2 production of T cells caused by PD-1 / PD-L1 binding.
  • the compound of the present invention represented by the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof has a PD-L1 expression inhibitory effect and / or an IL-2 production decrease inhibitory effect, and PD-1 / PD-L1 It is useful in the treatment of diseases caused by binding-induced immunosuppression (eg, cancer and infectious diseases).
  • diseases caused by binding-induced immunosuppression eg, cancer and infectious diseases.

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Abstract

本発明は、ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用およびＩＬ－２産生低下抑制作用を有する、式（Ｉ）： ［式中：Ｒ１、Ｒ２、ｍおよびｎは、本明細書に定義される通りである。］ で表される化合物またはその医薬的に許容される塩およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患の治療に有用な医薬を提供する。

Description

ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用を有する新規化合物
　本発明は、ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用を有する新規化合物、特に１－ベンゾイル－Ｎ－（４－フェノキシフェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド化合物に関する。また、本発明は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患の治療に有用でありうる。
　生体は、外来からの病原体および自身の体で生じたがん細胞から体を守るための免疫機構を備えていると同時に、過剰の免疫により生体自身が障害を起こさないように免疫制御機構も備えている。近年、がん細胞は、腫瘍微小環境において免疫制御機構を誘導することで生体の免疫機構から逃避することが明らかとなってきた。その仕組みの一つとして、「免疫チェックポイント分子」と呼ばれるＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の作用によるがんの免疫逃避が挙げられる（非特許文献１）。
　がん細胞は、免疫担当細胞の一つであるキラーＴ細胞から繰り返し攻撃を受けると、キラーＴ細胞が産生するインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）を受容することにより細胞表面にＰＤ－Ｌ１を発現するようになり、これがＴ細胞の有しているＰＤ－１に結合すると、Ｔ細胞の増殖を促進するインターロイキン－２（ＩＬ－２）の産生量が低下し、またＴ細胞にアポトーシス（細胞死）が誘発されるのでがん細胞はＴ細胞の攻撃から逃れるようになる。これに対し、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合してＴ細胞とがん細胞のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を防ぐことができる新しいタイプの抗がん剤がすでに承認されており、これらは免疫チェックポイント阻害剤と呼ばれている。
　がんに対しては外科的治療、化学療法、放射線療法が主な治療法として行われているが、十分な効果が得られる治療法はいまだ確立されておらず、新たな治療法の確立が求められている。ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１は、免疫に抑制的に作用する分子（「免疫チェックポイント分子」）として、がんの治療法の新たな標的となっている。
　さらに、結核などの細菌およびＢ型肝炎ウイルス、パピローマウイルスなどのウイルスなどの病原体が引き起こす感染症の場合、感染後期になるとキラーＴ細胞がＰＤ－１を高発現するようになり、また抗原提示細胞（マクロファージや樹状細胞）がＰＤ－Ｌ１を発現することで、ＰＤ－１/ＰＤ－Ｌ１結合が形成され、その結合による免疫能低下が起こり、感染症にいたることが報告されている（非特許文献２～８）。
　そのため、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１を標的にすることにより、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患、例えばがんおよび感染症の治療につながると考えられる。
　これまでに、免疫チェックポイント阻害剤として、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とする、抗ＰＤ－１抗体（ニボルマブ、ペンブロリズマブ）および抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブ、デュルバルマブ）が創薬されている。しかしながら、これらの薬剤は抗体医薬品であり、低分子医薬品とは異なり、経口投与できず、コスト的にも高額である。そこで、経口投与が可能であり、コスト的にも安価で製剤化できる、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とした低分子の免疫チェックポイント阻害剤の開発が期待されている（非特許文献９）。しかしながら、それらを標的とした免疫チェックポイント阻害剤として有用な低分子化合物は知られていない。
He, J. et al. Sci Rep 5 (2015), 13110, pp 1-9 Sakai,S. et al. Int Immunol 22 (2010), pp.915-925 Boni, C. et al. J Vorol 81 (2007), pp.4215-4225 Liu, C. et al. Mol Med Rep (2015), pp.1063-1070 Yao, Z. Q. et al. Viral Immunol 20 (2007), pp276-286 Motobe, Y. K. et al. Front Immunol 9 (2018), doi:10.3389 Kato, T. et al. Blood 116 (2010), pp3912 Ma, S-D.et al. Plos Pathog 12 (2016), e1005642 Skalniak, L. et al., Oncotarget 8 (2017), pp.72167-72181
　本発明は、ＰＤ－Ｌ１発現およびＩＬ－２産生低下の抑制活性を有する低分子化合物を検討すると共に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患（例えば、がんおよび感染症）の治療に有用な医薬（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）およびワクチンの補助剤（アジュバント）を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、下式（Ｉ）で表される化合物およびその医薬的に許容される塩（以下、「本発明の化合物」と称することもある）が、ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用およびＩＬ－２産生低下抑制作用を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明によれば、そのＰＤ－Ｌ１発現抑制作用により免疫チェックポイント阻害剤として作用することで、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患、例えばがんおよび感染症を治療することができる。
　すなわち、本発明は、以下の態様を提供する。
［１］　式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 ［式中：
　Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、ペンタフルオロスルファニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、前記アリールおよびヘテロアリールは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、Ｃ１－４アシル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、およびＣ１－６ヒドロキシアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
　ｍは、０～５の整数であり；および
　ｎは、０～５の整数である］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
［２］　Ｒ１およびＲ２が、各々独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、およびペンタフルオロスルファニルからなる群から選択され；
　ｍが、１または２であり；および
　ｎが、１または２である、［１］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
［３］　Ｒ１が、各々独立して、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはニトロから選択され；および
　Ｒ２が、各々独立して、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはペンタフルオロスルファニルから選択される、［１］または［２］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
［４］　Ｒ１が、ベンゼン環の３位および／または４位に結合し、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシまたはニトロである、［１］～［３］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。
［５］　Ｒ２が、ベンゼン環の４位に結合し、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキルまたはペンタフルオロスルファニルである、［１］～［４］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。
［６］　１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
　１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
　１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
　１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
　１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、または
　１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
から選択される、［１］～［５］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。
［７］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
［８］　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患を治療するための、［７］の医薬組成物。
［９］ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患が、がんまたは感染症である、［８］の医薬組成物。
［１０］　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患が、がんである、［８］または［９］の医薬組成物。
［１１］　がんが、悪性黒色腫を含む皮膚がん、神経膠芽腫を含む脳腫瘍、肺がん、胃がん、大腸がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、副腎がん、胆道がん、食道がん、咽頭がん、喉頭がん、口腔がん、膀胱がん、舌がん、甲状腺がん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫、または多発性骨髄腫である、［９］または［１０］の医薬組成物。
［１２］　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患が、感染症である、［８］または［９］の医薬組成物。
［１３］　感染症が、結核、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染症、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染症、ヘルペスウイルス感染症、またはヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ－１）感染症である、［９］または［１２］の医薬組成物。
［１４］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、免疫チェックポイント阻害剤。
［１５］　免疫チェックポイント分子が、ＰＤ－Ｌ１である、［１４］の免疫チェックポイント阻害剤。
［１６］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ＰＤ－Ｌ１発現抑制剤。
［１７］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ＩＬ－２産生低下抑制剤。
［１８］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ワクチンの補助剤（アジュバント）。
　さらに、本発明は、以下の態様も提供する。
［１９］　治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患の治療方法。
［２０］　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患の治療に使用する、［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。
［２１］　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患の治療剤を製造するための、［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩の使用。
［２２］　治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、免疫チェックポイント分子の発現を抑制する方法。
［２３］　免疫チェックポイント分子が、ＰＤ－Ｌ１である、［２２］の方法。
［２４］　治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、ＩＬ－２産生低下を抑制する方法。
［２５］　［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、Ｔ細胞機能増強剤。
［２６］　治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］～［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、Ｔ細胞機能の増強方法。
　本発明の化合物は、ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用およびＩＬ－２産生低下抑制作用を有しており、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１による免疫能低下に起因する疾患、特にがん（例えば、悪性黒色腫を含む皮膚がん、神経膠芽腫を含む脳腫瘍、肺がん、胃がん、大腸がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、副腎がん、胆道がん、食道がん、咽頭がん、喉頭がん、口腔がん、膀胱がん、舌がん、甲状腺がん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫）および感染症（例えば、結核、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染症、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染症、ヘルペスウイルス感染症、またはヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ－１）感染症）の新規な治療剤として有用である。また、免疫チェックポイント分子を抑制することから、ワクチンの補助剤（アジュバント）としても有用である。
図１は、細胞表面のＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－１の発現を解析した図である。図１Ａは、ＩＦＮ－γ添加、２日間培養後のＡ５４９細胞表面のＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）の発現を解析した図であり、図１Ｂは、ＰＭＡ／ＰＨＡ添加、２日間培養後のＪｕｒｋａｔ細胞表面のＣＤ２７９（ＰＤ－１）の発現を解析した図である。 図２は、実施例５の化合物によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合後のＪｕｒｋａｔ細胞のアポトーシス（Ｃａｓｐａｓｅ３／７活性）の抑制効果を示す図であり、Ｊｕｒｋａｔ細胞における、対照のＣａｓｐａｓｅ３／７活性を１００％とした場合の実施例５の化合物（０．２５μＭ、０．５μＭおよび１μＭ）におけるＣａｓｐａｓｅ３／７活性の割合（％）を示す。 図３は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因するＩＬ－２産生低下に対する化合物（実施例５）の抑止効果を示す図であり、Ａ５４９細胞（ＩＦＮ－γ無添加）における対照（ＤＭＳＯ）のルシフェラーゼ活性を１００％とした場合の、Ａ５４９細胞（ＩＦＮ－γ添加）における対照（ＤＭＳＯ）および実施例５の化合物（０．５μＭおよび１μＭ）のルシフェラーゼ活性の割合（％）を示す。
　本明細書における用語について、以下に説明する。
　本明細書における、「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
　本明細書における、「Ｃ１－６アルキル」とは、１～６個の炭素原子を有する、直鎖状または分枝鎖状の飽和炭化水素を意味する。これらは、置換可能な位置で、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。「Ｃ１－６アルキル」は、好ましくは炭素数が１～５、１～４、または１～３であってもよい。その例として、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－６ハロアルキル」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１～６個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。その例として、限定されるものではないが、クロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－６ヒドロキシアルキル」とは、１個以上の水素原子がヒドロキシ基（複数可）によって置き換えられている、１～６個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。その例として、限定されるものではないが、ヒドロキシメチル、２－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシプロピル、３－ヒドロキシプロピル、４－ヒドロキシブチル等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－６アルコキシ」とは、１～６個の炭素原子を有する上記のアルキル基が酸素原子を介して結合している基を意味する。その例として、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－６ハロアルコキシ」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１～６個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。その例として、限定されるものではないが、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２，２－トリフルオロエトキシ等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ」とは、１個以上の水素原子がヒドロキシ（複数可）によって置き換えられている、１～６個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。その例として、限定されるものではないが、ヒドロキシメトキシ、２－ヒドロキシエトキシ、２－ヒドロキシプロポキシ、３－ヒドロキシプロポキシ、４－ヒドロキシブトキシ等が挙げられる。
　本明細書における、「モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ」とは、１個または２個の水素原子が１～６個の炭素原子を有する上記のアルキル基によって置き換えられている、アミノ基を意味する。アルキル基によって２個置換される場合は、同一または異なるアルキル基で置換されていてもよい。その例として、限定されるものではないが、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等が挙げられる。
　本明細書における、「Ｃ１－４アシル」とは、１～３個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、カルボニル基（－Ｃ（＝Ｏ））を意味する。その例として、限定されるものではないが、ホルミル、アセチル、プロピオニル等が挙げられる。
　本明細書における、「アリール」とは、芳香族環に結合する１個の水素原子が除外された、６個以上の炭素原子を有する単環または二環の芳香族炭化水素基を意味する。これらは、置換可能な位置で、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。その例として、限定されるものではないが、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、アントラセニル等が挙げられる。
　本明細書における、「ヘテロアリール」とは、環炭素の少なくとも１個が窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられている、単環または二環の芳香族複素環基を意味する。これらは、置換可能な位置で、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。好ましいヘテロアリールは、３～１０員のヘテロアリール、３～６員のヘテロアリール、５～６員のヘテロアリールが挙げられる。例えば、「５～６員のヘテロアリール」は、窒素原子、硫黄原子または酸素原子から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、５～６員の単環式複素環基を示す。その例として、限定されるものではないが、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアジン、インドール、プリン、キノリン、イソキノリン等が挙げられる。
　本明細書における、「置換されていてもよい」とは、基の置換可能な位置が置換されていない場合（無置換）と置換されている場合を含む。「無置換」とは、基の置換可能な位置が全て水素原子であることを意味する。置換されている場合は、可能であれば複数の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一であっても異なっていてもよい。置換される置換基としては、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロアルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、カルバモイル基、カルボキシル基、モルホリニル基、ホルミル基、アセチル基、メシル基、ベンゾイル基、アシルアミノ基等が挙げられる。
　式（Ｉ）で表される本発明の化合物の中のＲ１、Ｒ２、ｍ、およびｎに関して、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げられた化合物の範囲に限定されるものではない。
　Ｒ１およびＲ２としては、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、ペンタフルオロスルファニル、アリール、およびヘテロアリール（該アリールおよびヘテロアリールは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、Ｃ１－４アシル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、およびＣ１－６ヒドロキシアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい）が挙げられる。
　Ｒ１として、好ましくはハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、またはペンタフルオロスルファニルであり、より好ましくはヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはニトロであり、さらに好ましくはヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、またはニトロであり、最も好ましくはヒドロキシ、メトキシ、またはニトロである。
　Ｒ２として、好ましくはハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、またはペンタフルオロスルファニルであり、より好ましくはハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはペンタフルオロスルファニルであり、さらに好ましくはＣ１－６ハロアルキルまたはペンタフルオロスルファニルであり、最も好ましくはトリフルオロメチルまたはペンタフルオロスルファニルである。
　ｍおよびｎは、０～５の整数であり、好ましくは１～４の整数であり、より好ましくは１～３の整数であり、最も好ましくは１～２の整数である。
　式（Ｉ）で表される化合物の「医薬的に許容される塩」として、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩等が挙げられる。無機酸との塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、酢酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、アジピン酸、グルコン酸、グルコヘプト酸、グルクロン酸、テレフタル酸、メタンスルホン酸、アラニン、乳酸、馬尿酸、１，２－エタンジスルホン酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸、オレイン酸、没食子酸、パモ酸、ポリガラクツロン酸、ステアリン酸、タンニン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、スルホサリチル酸等との塩が挙げられる。
　本発明の化合物は、水和物および／または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および／または溶媒和物もまた本発明の化合物に包含される。溶媒和物としてはエタノール溶媒和物等が挙げられる。
　以下、本発明の化合物の製造方法について、例を挙げて説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。式（Ｉ）で表される本発明の代表的な化合物は、以下の製造方法によって製造することができる：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　化合物（１－１）は、市販品または既知の合成法により製造したものを用いることができる。
工程１：化合物（１－２）の製造工程
　化合物（１－２）は、適当な溶媒中、塩基存在下、化合物（１－１）と４－クロロベンゾトリフルオライドまたは４－フルオロフェニルサルファーペンタフルオリドとを反応させることにより製造される。
工程２：化合物（１－３）の製造工程
　化合物（１－３）は、適当な溶媒中、塩基存在下、化合物（１－２）と１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－ピペリジンカルボン酸とを反応させることにより製造される。
工程３：化合物（１－４）の製造工程
　化合物（１－４）は、適当な溶媒中、酸性（ＨＣｌ）条件下、化合物（１－３）とカルボン酸Ａと反応させることにより製造される。
　上記製造方法の各工程において使用される溶媒は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、アセトン、メチルケトン等のケトン類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン等のエーテル類、トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピル等のエステル類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドン等のアミド類、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等のスルホキシド類、アセトニトリル等のニトリル類が挙げられ、これらの溶媒は単独または２種類以上混合して用いることができる。
　上記製造方法の各工程において使用される塩基は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えば炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、カリウム－ｔｅｒｔ－ブトキシド、水素化ナトリウム、水酸化カリウム、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムジイソプロピルアミド等が挙げられ、これらの塩基は単独または２種類以上混合して用いることができる。
　本明細書における、「がん」は、特にがん種は問わないが、固形がん、血液がん、転移性がん等が挙げられる。
　固形がんとしては、例えば、皮膚がん（例えば、悪性黒色腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠芽腫）、肺がん、胃がん、大腸がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、副腎がん、胆のう・胆道がん、食道がん、咽頭がん、喉頭がん、口腔がん、膀胱がん、舌がん、甲状腺がん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫等が挙げられる。
　血液がんとしては、例えば、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、白血病（例えば、成人Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病）が挙げられる。
　転移性がんとしては、例えば、転移性肺がん、転移性胃がん、転移性大腸がん、転移性肝臓がん、転移性膵臓がん、転移性腎臓がん、転移性副腎がん、転移性食道がん、転移性膀胱がん、転移性甲状腺がん、転移性乳がん、転移性前立腺がん、転移性子宮がん等が挙げられる。
　本明細書における、「感染症」は、特に病原体は問わないが、細菌感染症、ウイルス感染症等が挙げられる。その例としては、特に限定されないが、結核、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、エプステイン・バーウイルス感染症、サイトメガロウイルス感染症、ヘルペスウイルス感染症、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ－１）感染症等が挙げられる。
　本明細書における、「免疫チェックポイント阻害剤」とは、１つ以上の免疫チェックポイント分子（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１）の機能またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合の形成を阻害し、Ｔ細胞の抑制を解除して活性化し、免疫賦活効果を発揮する薬剤を意味する。免疫チェックポイント分子とは、キラーＴ細胞の活性化を阻害し、がん細胞または病原体に対する免疫に対して抑制的に作用するタンパク質である。
　本明細書における、「ＰＤ－Ｌ１発現抑制剤」とは、がん細胞または抗原提示細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現を抑制して、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合の形成を阻害し、Ｔ細胞の抑制を解除して活性化し、がん細胞または病原体に対する免疫賦活効果を発揮する薬剤を意味する。
　本明細書における、「ＩＬ－２産生低下抑制剤」とは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合の形成を阻害して、ＩＬ－２産生低下を抑制することにより、Ｔ細胞のアポトーシスが抑制され、Ｔ細胞を活性化し、がん細胞または病原体に対する免疫賦活効果を発揮する薬剤を意味する。
　本明細書における、「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける、疾患または障害およびそれに伴う症状のあらゆる治癒および／または改善を意味する。また、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患を予防、緩和または軽減することも含まれる。例えば、がんの治療については、がん腫瘍を完全に取り除くこと、がん細胞を消滅させること、がん細胞の増殖を抑制すること、がんの再発を阻止すること、がんに伴う症状を取り除くこと、がんに伴う症状を緩和または軽減すること、がんおよびその症状の悪化を防止もしくは遅延すること、がんおよびその症状の進行を防止もしくは遅延すること、がん患者の生活の質を向上させること、がん患者の生存を延長させること、がんおよびその症状の発症を防止もしくは遅延すること、がんおよびその症状の発症の危険性を低下させること等が挙げられる。また、感染症の治療については、感染症の原因である病原体を完全に取り除くこと、病原体の増殖を抑制すること、感染症の再発を防止すること、感染症に伴う症状を緩和または軽減すること、症状の悪化を防止もしくは遅延すること、およびその症状の進行を防止もしくは遅延すること等が挙げられる。
　「患者」とは、ヒトおよび動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等を意味する。その中でも、ヒトが好ましい。
　「治療上の有効量」とは、未治療対象と比べて、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患およびその症状の治癒、改善、予防および／または軽減をもたらす量、あるいはがん症状の進行の防止または遅延をもたらす量を意味する。該用語は、その範囲内に、正常な生理的機能を促進するのに有効な量も含む。療法における使用では、本発明の化合物の治療上の有効量を、化合物原体として投与することが可能である。特に限定するものではないが、通常、本発明の化合物として、１日当たり０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲が有効である。
　かかる有効量として、本発明の化合物単独の量、本発明の化合物の組み合わせの量および／またはがん治療に有用な他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が挙げられる。
　本明細書における、「Ｔ細胞機能の増強」とは、Ｔ細胞におけるＰＤ－１発現、がん細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現、そして、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合により抑制されたＴ細胞機能を活性化することを意味する。Ｔ細胞機能の増強として、例えば、サイトカイン（ＩＬ－２）産生量の増加、Ｔ細胞の増殖の促進、アネルギー（不応答性）状態、休止状態などの抑制状態にあるＴ細胞のトレランスの解除および抑制（Ｔ細胞を抑制状態から外部の刺激に対して応答する状態へ移行させること）等が挙げられる。
　本発明の医薬組成物ならびに免疫チェックポイント阻害剤、ＰＤ－Ｌ１発現抑制剤、ＩＬ－２産生低下抑制剤、ワクチンの補助剤、およびＴ細胞機能増強剤（以下、薬剤と称する）は、本発明の化合物を有効成分として含むものであればよく、免疫チェックポイント分子を阻害する作用を妨げない限り、他の成分をさらに含むものであってもよい。したがって、本発明の医薬組成物または薬剤中の本発明の化合物の割合は特に限定されるものではない。例えば、本発明の医薬組成物または薬剤は、本発明の化合物を０．１重量％以上、０．５重量％以上、または１．０重量％以上含みうる。また、本発明の化合物の量は、０．１～９０重量％、０．５～７０重量％、または１．０～６０重量％の範囲であってもよい。あるいは、本発明の医薬組成物または薬剤は、本発明の化合物のみからなるものであってもよい。
　本発明の医薬組成物または薬剤は、経口または非経口（例えば、静脈、局所、経鼻、経肺、直腸等）投与することができる。本発明の剤形は、対象の身体状況、健康状態などに応じて適宜選択することができ、調製することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤などの経口投与剤、または注射剤、透析用剤、吸入剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤、外用剤、スプレー剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤などの非経口投与剤の剤形に、常法により調製されうる。
　本発明の医薬組成物または薬剤は、必要に応じ、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトールおよび微結晶セルロース）、崩壊剤（例えば、カルメロース、カルメロースナトリウムおよび低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドンおよび結晶セルロース）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルク）、溶剤（例えば、水、エタノールおよびプロピレングリコール）、緩衝剤（例えば、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム）、懸濁化剤（例えば、アラビアゴム、トラガントおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステルおよびソルビタン脂肪酸エステル）など１種以上の医薬的に許容される担体を含んでいてもよい。
　本発明の化合物の投与量は、投与方法、対象の年齢、疾患の程度、症状、剤形等により適宜選択されるが、例えば、一日あたり、０．０１ｍｇ～０．１ｍｇ、０．１ｍｇ～１ｍｇ、１ｍｇ～５ｍｇ、５ｍｇ～１０ｍｇ、１０ｍｇ～５０ｍｇ、５０ｍｇ～１００ｍｇ、１００ｍｇ～５００ｍｇ、５００ｍｇ～１ｇ、１ｇ～１．５ｇ、１．５ｇ～２ｇ、２ｇ～５ｇ、５ｇ～１０ｇの用量で、経口投与されうる。１日あたりの本発明の化合物の量を、１回～数回に分けて投与してもよい。
　以下に参考例、実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。なお、化合物の同定は、ＮＭＲスペクトル法、質量分析法等により行った。
　明細書の記載を簡略化するために実施例において以下に示すような略号を用いることもある。ＮＭＲに用いられる記号としては、ｓは一重線、ｄは二重線、ｄｄは二重の二重線、ｄｄｄは二重の二重の二重線、ｄｔは二重の三重線、ｔは三重線、ｔｄは三重の二重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広い、ｂｒｓは幅広い一重線およびＪは結合定数を意味する。
参考例１
４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）アニリン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 　ｐ－アミノフェノール（３０３ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）、４－クロロベンゾトリフルオライド（５０５ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（３０４ｍｇ、５．４２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（５ｍＬ）に溶かし，１００℃で１２時間撹拌した。反応液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、水（２０ｍＬ）、飽和食塩水（２０ｍＬ）でそれぞれ洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン－酢酸エチル（７：３）で溶出した画分より４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）アニリンを得た（１８１ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ、２６％）。
参考例２
４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）アニリン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 　ｐ－アミノフェノール（１８９ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、４－フルオロフェニルサルファーペンタフルオリド（２５８ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（６０％、流動パラフィンに分散）（７０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶かし、１００℃で１８時間撹拌した。反応液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で４回抽出した。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、水（２０ｍＬ）、飽和食塩水（２０ｍＬ）でそれぞれ洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン－酢酸エチル（３：１）で溶出した画分より４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）アニリンを得た（１１０ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ、３０％）。
参考例３
ｔｅｒｔ－ブチル　３－（（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）カルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 　４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）アニリン（９５．０ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かし、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－ピペリジンカルボン酸（１０８ｍｇ、０．４７１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ、１．１４ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウム ヘキサフルオロホスファート（２２０ｍｇ、０．５１４ｍｍｏｌ）を加え、室温にて６時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、飽和重曹水（２０ｍＬ）、飽和食塩水（２０ｍＬ）でそれぞれ洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン－酢酸エチル（３：１）で溶出した画分よりｔｅｒｔ－ブチル　３－（（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）カルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレートを得た（１３４ｍｇ、０．２８９ｍｍｏｌ、７７％）。
参考例４
ｔｅｒｔ－ブチル　３－（（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）カルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 　４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）アニリン（７０．１ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶かし、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－ピペリジンカルボン酸（６６．２ｍｇ、０．２８９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２０μＬ、０．６６９ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウム ヘキサフルオロホスファート（１４１ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１０時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、飽和重曹水（２０ｍＬ）、飽和食塩水（２０ｍＬ）でそれぞれ洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を減圧留去した．残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン－酢酸エチル（４：１）で溶出した画分よりｔｅｒｔ－ブチル ３－（（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）カルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレートを得た（６１．０ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ、５２％）。
実施例１
１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 　参考例３の化合物（３０．２ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を、塩化水素－メタノール試薬（５～１０％）（２ｍＬ）に溶解し、室温にて４時間撹拌した。反応液を減圧留去し、その残渣をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ｐ－ヒドロキシ安息香酸（１１．５ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６０μＬ、０．３４４ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウム ヘキサフルオロホスファート（３８．５ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を加え、室温にて４時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を全て合わせて、飽和重曹水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（２０ｍＬ）でそれぞれ洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム－メタノール（３９：１）で溶出した画分より表題化合物を得た（１６．１ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、５１％）。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１４－９．３２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．３８－８．５６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．５６－７．６６（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．５０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．８８－７．１８（４Ｈ，ｍ），６．６８－６．８３（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．１２－４．２７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．５９－３．７８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．３３－３．５１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．６１－２．７９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．０８－２．２７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．９２－２．０８（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．５７－１．７４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．４３－１．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１７１．３，１６０．７，１５８．８，１５１．８，１３４．７，１２９．４（２Ｃ），１２７．１（２Ｃ，ｑ，３ＪＣ－Ｆ＝３．８Ｈｚ），１２５．８，１２４．７（ｑ，２ＪＣ－Ｆ＝３２．８Ｈｚ），１２４．２（ｑ，１ＪＣ－Ｆ＝２７３．０Ｈｚ），１２１．９（２Ｃ），１２０．５（２Ｃ），１１７．４（２Ｃ），１１５．６（２Ｃ），４９．１，４５．２，４３．５，２７．２，２４．７。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　４８４［Ｍ］＋（１００），３６３（４２），２５３（３５），２３２（３０），２０４（９３），１２１（９１）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　４８４．１６１４（Ｃ２６Ｈ２３Ｏ４Ｎ２Ｆ３の計算値４８４．１６０８）。
実施例２
１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 　ｐ－ヒドロキシ安息香酸の代わりにｐ－ニトロ安息香酸を用いること以外は、実施例１に記載の方法にしたがって、実施例２の化合物を得た。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４８－８．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５３－７．６２（４Ｈ，ｍ），６．９５－７．０８（４Ｈ，ｍ），４．１４（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ），３．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．１，３．５Ｈｚ），３．３４－３．５１（２Ｈ，ｍ），２．７７－２．８８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．２３－２．３７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．９２－２．０４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．６２－１．７３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．４８－１．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１６８．８，１６０．６，１５１．８，１４８．６，１４１．２，１３４．６，１２８．０（２Ｃ），１２７．０（２Ｃ，ｑ，３ＪＣ－Ｆ＝３．９Ｈｚ），１２４．７（ｑ，２ＪＣ－Ｆ＝３３．１Ｈｚ），１２４．４（ｑ，１ＪＣ－Ｆ＝２７０．８Ｈｚ），１２４．０（２Ｃ），１２１．９（２Ｃ），１２０．６（２Ｃ），１１７．４（２Ｃ），４８．５，４４．４，４３．２，２７．２，２４．６。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　５１３［Ｍ］＋（８５），２６１（２６），２５３（６６），２３３（１００），１５０（８８）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　５１３．１５０７（Ｃ２６Ｈ２２Ｏ５Ｎ３Ｆ３の計算値５１３．１５１２）。
実施例３
１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 　ｐ－ヒドロキシ安息香酸の代わりに４－ヒドロキシ－３－メトキシ安息香酸を用いること以外は、実施例１に記載の方法にしたがって、実施例３の化合物を得た。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０２－９．１８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．６６－７．８２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．９１－７．０８（７Ｈ，ｍ），５．９５－６．０２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．０６－４．２２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．８１－３．９７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．８３（３Ｈ，ｓ），３．４７－３．６３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．６１－２．７５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．２３－２．３６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．８６－１．９８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．４７－１．７８（３Ｈ，ｍ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１７０．５，１６０．６，１５１．８，１４９．６，１４８．９，１３４．６，１３１．２，１２７．０（２Ｃ，ｑ，３ＪＣ－Ｆ＝３．９Ｈｚ），１２４．７（ｑ，２ＪＣ－Ｆ＝３３．１Ｈｚ），１２４．４（ｑ，１ＪＣ－Ｆ＝２７０．８Ｈｚ），１２１．９（２Ｃ），１２０．９，１２０．６（２Ｃ），１１７．４（２Ｃ），１１６．５，１１４．７，５６．０，４９．２，４５．２，４３．３，２７．２，２４．７。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　５１４［Ｍ］＋（６１），３６３（２４），２６２（２５），２３４（９６），１５１（１００）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　５１４．１６７５（Ｃ２７Ｈ２５Ｏ５Ｎ２Ｆ３の計算値５１４．１７１６）。
実施例４
１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 　参考例４の化合物（４２．２ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を塩化水素－メタノール試薬（５～１０％）（２ｍＬ）に溶解し、室温にて６時間撹拌した。反応液を減圧留去し、その残渣をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ｐ－ヒドロキシ安息香酸（１３．４ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６０μＬ、０．３４４ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウム ヘキサフルオロホスファート（４５．０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出を行った。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、飽和重曹水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム－メタノール（４９：１）で溶出した画分より表題化合物を得た（２２．７ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、５３％）。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．２３－９．３４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．６５－８．７６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．６８（４Ｈ，ｍ），７．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），６．９８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．９１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．１５－４．２８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．７２－３．８８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．３０－３．４３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．６８－２．８２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．０８－２．２３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．８７－２．０２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．５３－１．７０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．４０－１．５３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１７１．３，１６０．１，１５８．９，１５１．４，１４８．０（ｑｕｉｎｔ，２ＪＣ－Ｆ＝１７．８Ｈｚ），１３５．０，１２９．４（２Ｃ），１２７．８（２Ｃ，ｑｕｉｎｔ，３ＪＣ－Ｆ＝４．４Ｈｚ），１２５．６，１２２．０（２Ｃ），１２０．７（２Ｃ），１１６．８（２Ｃ），１１５．６（２Ｃ），４９．１，４５．２，４３．５，２７．２，２４．８。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　５４２［Ｍ］＋（４２），４２１（２０），３１１（２０），２３２（３０），２０４（１００），１２１（９３）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　５４２．１２６９（Ｃ２５Ｈ２３Ｏ４Ｎ２Ｆ５Ｓの計算値５４２．１２９９）。
実施例５
１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 　ｐ－ヒドロキシ安息香酸の代わりにｐ－ニトロ安息香酸を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物５の化合物を得た。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４８－８．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５６－７．６８（６Ｈ，ｍ），６．８８－７．０２（２Ｈ，ｍ），６．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），４．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ），３．９４－４．０３（１Ｈ，ｍ），３．３３－３．４９（２Ｈ，ｍ），２．７８－２．８８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．２５－２．３８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．９２－２．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．６３－１．７４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．４８－１．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１６８．９，１５９．１，１５１．３，１４８．６，１４８．１（ｑｕｉｎｔ，２ＪＣ－Ｆ＝１７．２Ｈｚ），１４１．０，１３５．０，１２８．１（２Ｃ），１２７．８（２Ｃ，ｑｕｉｎｔ，３ＪＣ－Ｆ＝４．３Ｈｚ），１２４．０（２Ｃ），１２２．０（２Ｃ），１２０．５（２Ｃ），１１６．８（２Ｃ），４８．７，４４．４，４３．２，２７．３，２４．８。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　５７１［Ｍ］＋（１００），４２１（１０），３１１（４２），２６１（２０），２３３（６４），１５０（４８）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　５７１．１１９７（Ｃ２５Ｈ２２Ｏ５Ｎ３Ｆ５Ｓの計算値５７１．１２００）。
実施例６
１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 　ｐ－ヒドロキシ安息香酸の代わりに４－ヒドロキシ－３－メトキシ安息香酸を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、実施例６の化合物を得た。
　生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０８－９．２１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．６０－７．８３（４Ｈ，ｍ），７．０２－７．１０（５Ｈ，ｍ），６．９２－７．０２（２Ｈ，ｍ），６．００－６．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．０３－４．１５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．８４－３．９７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．８３（３Ｈ，ｓ），３．４９－３．６０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．７１－２．８０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．２８－２．４０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．８８－２．００（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），１．５１－１．８２（３Ｈ，ｍ）。
１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．８，１７０．３，１５９．０，１５１．１，１４９．８，１４８．６，１４８．０（ｑｕｉｎｔ，２ＪＣ－Ｆ＝１７．２Ｈｚ），１３５．１，１３１．０，１２７．７（２Ｃ，ｑｕｉｎｔ，３ＪＣ－Ｆ＝４．１Ｈｚ），１２２．０（２Ｃ），１２１．３，１２０．７（２Ｃ），１１６．７（２Ｃ），１１６．５，１１４．４，５６．１，４９．０，４５．０，４３．６，２７．２，２４．６。
ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　（ｒｅｌ．ｉｎｔ）　５７２［Ｍ］＋（１００），４２１（４２），３１１（１９），２６２（２６），２３４（９４），１５１（８８）。
ＨＲＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　５７２．１３８８（Ｃ２６Ｈ２５Ｏ５Ｎ２Ｆ５Ｓの計算値５７２．１４０４）。
比較例１
Ｎ－（３－（４－クロロフェノキシ）フェニル）－１－（４－ヒドロキシフェニルカルボニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 　比較例１の化合物を、以下の方法にしたがって調製した。３－（４－クロロフェノキシ）アニリン（５５ｍｇ，０．２５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－３－カルボン酸（５９ｍｇ，０．３１２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３０μＬ，０．７７６ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（１４５ｍｇ，０．３３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル（３：７）で溶出）で精製し、ｔｅｒｔ－ブチル ３－（３－（４－クロロフェノキシ）フェニルアミノ）－３－オキソプロピルカルバメートを得た（６１ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ，６２％）。
　ｔｅｒｔ－ブチル ３－（３－（４－クロロフェノキシ）フェニルアミノ）－３－オキソプロピルカルバメート（５３ｍｇ，０．１３５ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）に溶解し、塩酸－メタノール試薬（５～１０％）（１．５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、４－（メトキシメトキシ）安息香酸（３２ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ，０．５７４ｍｍｏｌ）および（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（９０ｍｇ，０．２１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１２時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール（３９：１）で溶出）で精製し、Ｎ－（３－（３－（４－クロロフェノキシ）フェニルアミノ）－３－オキソプロピル）－４－（メトキシメトキシ）ベンズアミドを得た（３８ｍｇ，０．０８２ｍｍｏｌ，６１％（２工程））。
　Ｎ－（３－（３－（４－クロロフェノキシ）フェニルアミノ）－３－オキソプロピル）－４－（メトキシメトキシ）ベンズアミド（２８ｍｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、塩酸－メタノール試薬（５～１０％）（１ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール（１９：１）で溶出）で精製し、比較例１の化合物を得た（９ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ，３５％）。
試験例１：ＰＤ－Ｌ１プロモーター制御下におけるルシフェラーゼ発現抑制効果の評価
　pGL-3ベクター basic （Promega）のマルチクローニング部位にヒトＰＤ－Ｌ１プロモーター配列（-2097から51）を組み込んだ、レポーターベクターｐＰＤ－Ｌ１ｌｕｃは、動物細胞にトランスフェクションするとＰＤ－Ｌ１プロモーターの制御によりルシフェラーゼを発現する。該ｐＰＤ－Ｌ１ｌｕｃを、ピューロマイシン耐性遺伝子（ピューロマイシン－Ｎ－アセチル－トランスフェラーゼ遺伝子）を発現するｐＰＵＲ（Clontech）と共にヒト非小細胞肺癌由来細胞株Ａ５４９にトランスフェクトし、ピューロマイシン添加培地において増殖が可能である、ルシフェラーゼを発現する細胞を選択した。選択された細胞を「Ａ５４９／ＰＤ－Ｌ１ｌｕｃ細胞」と称し、後述のルシフェラーゼアッセイに使用した。
　被験化合物をＡ５４９／ＰＤ－Ｌ１ｌｕｃ細胞の培養液中に添加し、細胞内のルシフェラーゼ発現量に対する影響を観察した。ここで、被験化合物が細胞毒性または細胞増殖抑制効果を有している場合には、被験化合物の濃度に依存した生細胞数の減少により総ルシフェラーゼ発現量が低下し、被験化合物のPD-L1プロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現抑制効果を正しく評価できないことが考えられる。このため、被験化合物を添加して培養した細胞の総蛋白量をBCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific）を使用して測定し、その測定した総タンパク量を細胞数の指標とした。
（１－１）ルシフェラーゼアッセイ
　Ａ５４９／ＰＤ－Ｌ１ｌｕｃ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および１％ペニシリン・ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を添加したＤＭＥＭ（以下、ＤＭＥＭ培地と称する）に３ｘ１０４細胞／ｍＬとなるよう懸濁し、これを９６ウェルプレートの各ウェルに１００μＬずつ分注した。対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ３ウェルずつ準備して、試験をトリプリケートで実施した。分注後、９６ウェルプレートを炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ２条件下）で２４±４時間培養した。
　実施例１～６および比較例１の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）によって５０ｍｍｏｌ／Ｌ溶液とし、－８０℃で保存した。該化合物溶液を、ＤＭＳＯによって２倍希釈系列として希釈し（通常は０．０４ｍｍｏｌ／Ｌ～１０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲）、２倍ずつ濃度の異なった被験化合物溶液をルシフェラーゼアッセイのために準備した。
　細胞懸濁液を加えた各ウェルに、ＤＭＳＯのみ（対照）または希釈した被験化合物（検体）溶液を０．５μＬずつ分注した（２００倍希釈）。ボルテックスミキサーで混和した後、９６ウェルプレートを炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ２条件下）で４８±４時間培養した。Luciferase Assay Systems（Promega：Cat# E1500）に含まれるLuciferase Assay Substrate（以下、LASと表記する）をLuciferase Assay Buffer（LAB）で溶解し、ルシフェラーゼ試薬を調製した。５ｘCell Culture Lysis Reagent（以下、CCLRと表記する）を水で５倍希釈し、１ｘCCLRを調製した。
　培養４８±４時間後、各ウェルの培地を完全に取り除き、１ｘCCLRを５０μＬずつ分注した。室温で３０分間静置した後、各ウェル内の１ｘCCLRをルシフェラーゼおよび総蛋白量の測定用試料とした。化学発光測定用のチューブにルシフェラーゼ試薬を１００μＬ加え、これに測定用試料２０μＬを添加して混和し、GloMax20/20（Promega）を用いて、化学発光（相対発光強度：ＲＬＵ）を測定した。
（１－２）細胞中の総タンパク量の測定
　上記測定用試料１０μＬと水９０μＬを混和し、１０倍希釈した。検量線サンプルを、表１に示されるように、ＢＳＡ溶液を水で希釈して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　タンパク測定用キットに含まれているＢＣＡ試薬ＡとＢＣＡ試薬Ｂ（５０：１）を混和し、Working Reagentを調製した。９６ウェルプレートの各ウェルに検量線サンプル（バイアルI～VI）および１０倍希釈した試料を２５μＬずつ分注した。対照群および各濃度の被験化合物添加群の試料をそれぞれ、２ウェルに２５μＬずつ分注した。
　Working Reagentを検量線サンプルまたは試料の入った各ウェルに２００μＬずつ添加し、ボルテックスミキサーで３０秒間混和した。６０℃で３０分間加温した後、室温で１５分間静置した。続いて、マイクロプレートリーダー（Bio-Rad；BenchmarkまたはThermo Scientific；Varioskan Flash）を用いて吸光値（５５０ｎｍ）を測定した。
　検量線サンプルの吸光値から、最小二乗法により回帰直線を求め、各ウェルの希釈した試料の総タンパク濃度を算出した。さらに、総タンパク濃度に希釈倍率（１０倍）を乗算し、各試料の総タンパク濃度を算出した。
（１－３）ＰＤ－Ｌ１ｌｕｃ活性の５０％発現阻害濃度（ＩＣ５０）の算出
　ルシフェラーゼアッセイで求めた対照のＲＬＵおよび各濃度の検体のＲＬＵをそれぞれエクセルファイルに入力し、対照のＲＬＵの平均値に対する各濃度の検体のＲＬＵのパーセントを求めた。
　また、細胞中の総タンパク量の測定で求めた対照の総タンパク濃度および各濃度の検体の総タンパク濃度をそれぞれエクセルファイルに入力し、対照の総タンパク濃度の平均値に対する各検体の総タンパク濃度のパーセントを求めた。
　次いで、各検体のＲＬＵから求めたパーセントをそれに該当する総タンパク濃度のパーセントで除し、ＲＬＵから求めたパーセントのタンパク量による補正値を求めた。補正した各値から、最小二乗法により回帰直線を求め、５０％ルシフェラーゼ発現阻害濃度（ＩＣ５０値）を算出した。
　算出された各化合物のＩＣ５０値を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
　実施例１～６および比較例１の化合物をルシフェラーゼ発現抑制試験で評価したところ、本発明の化合物がＰＤ－Ｌ１プロモーター制御下のルシフェラーゼ発現を抑制することが確認された。
試験例２：蛍光抗体標識抗ＰＤ－Ｌ１抗体を用いた細胞染色によるＰＤ－Ｌ１発現抑制効果の評価
　実施例１～６の化合物について、以下の手順にしたがって、ＰＤ－Ｌ１発現抑制効果を評価した。
（２－１）ＰＤ－Ｌ１発現阻害アッセイ
（１）急性単球性白血病細胞由来のＴＨＰ－１細胞を１０％ＦＣＳおよび１％Ｐ／Ｓを添加したＲＰＭＩ培地（以下、ＲＰＭＩ培地と称する）に５ｘ１０５細胞／ｍＬとなるよう懸濁し、６ウェルプレートの各ウェルに３ｍＬずつ分注した。ＴＨＰ－１細胞を活性化し、ＰＤ－Ｌ１を発現させるためにＩＦＮ－γ（PEPROTECH社、Cat.No.300-02-100UG、＞２ｅ＋７Ｕ／ｍｇ）を２５ｎｇ／ｍＬ（＞５００Ｕ／ｍＬ）となるよう各ウェルに加えた。５０ｍｍｏｌ／Ｌの被験化合物の溶液を培地で希釈し（通常は０．０２５ｍｍｏｌ／Ｌ～１ｍｍｏｌ／Ｌの範囲）、その６０μＬをウェルに加えた。炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ２条件下）で２４±２時間培養した。対照として、化合物の代わりにＤＭＳＯのみを加えた。
（２）細胞培養液の一部を採取し、セルカウンター（BIORAD TC-20）で細胞を計数した。細胞培養液を３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を除去した。細胞濃度が１～２ｘ１０７細胞／ｍＬとなるように１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）添加カルシウム・マグネシウム不含リン酸緩衝生理的食塩液（ＰＢＳ－）で懸濁した。
（３）５ｍＬチューブに、（２）で調製した細胞懸濁液を各２５μＬ加えた。これに２％正常マウス血清／ＰＢＳ－を２μＬ加え、軽くピペッティングした。続いて、室温で１５分間静置した。
（４）抗ＣＤ２７４－ＰＣ７抗体（BECKMAN COULTER、Cat.No.A78884）または対照のマウスＩｇＧ１－ＰＣ７抗体（BECKMAN COULTER、737662）を１０μＬ加え、軽く撹拌した。続いて、暗所にて氷浴上３０分間静置した。
（５）FOXP3/Transcription Factor Staining kit(TONBO biosciences)に含まれるFoxp3/Transcription Factor Fix/Perm Concentrate（４Ｘ）（Cat.No.TNB-1020-L050）（Ａ液）をFoxp3/Transcription Factor Fix/Perm Diluent（１Ｘ）（Cat.No.TNB-1022-L160）（Ａ希釈用液）で希釈し、１ｘＡ液を調製した。
（６）１ｘＡ液を各チューブに１ｍＬずつ加え、軽くピペッティングして撹拌した。続いて、暗所にて室温で３０分間放置し、３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を捨てた。
（７）１％ＢＳＡ／ＰＢＳ－の２ｍＬを各チューブに加えて軽く撹拌後、３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を捨てた。
（８）０．５ｍＬの１％ＢＳＡ／ＰＢＳ－に懸濁させ、フローサイトメーター（ソニー：Cell Sorter SH800）で２時間以内に測定した。結果は、ソフトウエアのＦｌｏｗＪｏ（Tree Star Inc.）で解析した。蛍光強度と細胞数のヒストグラムからＰＤ－Ｌ１のピーク中間蛍光値（ＭＦＩ）とＩｇＧ１のピーク中間蛍光値を求め、ＰＤ－Ｌ１の中間蛍光値からＩｇＧ１の中間蛍光値を引き、ｓｕｂＭＦＩを求めた。実験はｎ＝２で行った。
（２－２）ＰＤ－Ｌ１ｌｕｃ活性の５０％発現阻害濃度（ＩＣ５０）の算出
　ＦｌｏｗＪｏによる解析で求めた対照細胞のｓｕｂＭＦＩおよび各濃度の被験化合物を添加して培養した細胞（被験細胞）のｓｕｂＭＦＩをそれぞれエクセルファイルに入力し、対照細胞のｓｕｂＭＦＩの平均値に対する各濃度の被験細胞のｓｕｂＭＦＩのパーセントを求めた。各濃度の被験細胞のｓｕｂＭＦＩのパーセントから最小二乗法により回帰直線を求め、各化合物の５０％ＰＤ－Ｌ１発現阻害濃度（ＩＣ５０値）を算出した。
　算出された各化合物のＩＣ５０値を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
　実施例１～６の化合物をＴＨＰ－１細胞の抗ＰＤ－Ｌ１抗体染色により評価したところ、本発明の化合物がＰＤ－Ｌ１発現抑制効果を示すことが確認された。
試験例３：ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因するＴ細胞のアポトーシスに対する本発明の化合物の抑制効果の評価
　試験例１および２により本発明の化合物がＰＤ－Ｌ１発現抑制効果を有していることが立証されたことから、当該化合物のＰＤ－Ｌ１発現抑制効果によりＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因するＴ細胞のアポトーシスを抑制できるか否かを評価した。
　ＩＦＮ－γを加えて前培養したＰＤ－Ｌ１を発現したＡ５４９細胞およびPhorbol 12-myristate 13-Acetate（以下、ＰＭＡと称する:Sigma Cat#1585）とphytohemagglutinin-L（以下、ＰＨＡ－Ｌと称する:Roche Cat#11249738001）を加えて前培養したＰＤ－１を発現したヒト急性Ｔ細胞性白血病細胞由来のＪｕｒｋａｔ細胞それぞれの培養上清を除いた後、新しい培地で共培養した。共培養後のＪｕｒｋａｔ細胞のＣａｓｐａｓｅ３／７活性を測定することにより、アポトーシスの指標とした。被験化合物は前培養中のＡ５４９細胞の培養液中に添加した。
（３－１）Ｃａｓｐａｓｅ３／７アッセイ
［１日目］
（１）ＤＭＥＭ培地で１ｘ１０５細胞／ｍＬに調製したＡ５４９細胞の懸濁液を３ｍＬずつ６ウェルプレートの各ウェルに分注した。
（２）別途、ＲＰＭＩ培地で３ｘ１０５細胞／ｍＬに調製したＪｕｒｋａｔ細胞の懸濁液を５ｍＬずつＴ２５フラスコに分注した。
（３）（１）の６ウェルプレートおよび（２）のＴ２５フラスコを共に炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ２条件下）で２４±２時間培養した。
［２日目］
（１）３ｍＬのＡ５４９細胞の培養液にＩＦＮ－γ（２５ｎｇ／ｍＬ）と被験化合物を加えて培養を継続した。被験化合物は、５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＤＭＳＯ溶液をＤＭＥＭ培地で１００倍希釈した後、その３μＬ、６μＬまたは１２μＬを加えた（終濃度０．５μｍｏｌ／Ｌ、１．０μｍｏｌ／Ｌ、２μｍｏｌ／Ｌ）。対照は、ＤＭＥＭ培地で１００倍希釈したＤＭＳＯを１２μＬ加えた。
（２）別途、Ｊｕｒｋａｔ細胞の培養液にＰＭＡ（終濃度１２．５ｎｇ／ｍＬ）とＰＨＡ（終濃度２５０ｎｇ／ｍＬ）を加えて培養を継続した。
［３日目］
　状態の観察を行った。
［４日目］
　Ａ５４９細胞については、Cell Dissociation Solution Non-enzymatic（Sigma Cat No.C5914-100ML）で細胞を剥がし、３００ｘｇで５分間遠心分離して上清を除いた後にＲＰＭＩ培地で４ｘ１０５細胞／ｍＬとなるよう懸濁した。
　Ｊｕｒｋａｔ細胞は３００ｘｇで５分間遠心分離して上清を除いた後にＲＰＭＩ培地で４ｘ１０４細胞／ｍＬとなるよう懸濁した。
　２４ウェルプレートの各ウェルに、０．２５ｍＬのＡ５４９細胞懸濁液と０．２５ｍＬのＪｕｒｋａｔ細胞懸濁液を加えた（細胞数の比は１０：１）。Ａ５４９細胞のみでＪｕｒｋａｔ細胞と共培養しないＡ５４９ブランクとして、０．２５ｍＬのＡ５４９細胞とＲＰＭＩ培地０．２５ｍＬを加えて、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。ＩＦＮ－γ処理２日後のＡ５４９細胞のＰＤ－Ｌ１発現とＰＭＡとＰＨＡで刺激したＪｕｒｋａｔ細胞のＰＤ－１発現は、試験例２と同様な方法にしたがって、抗ＣＤ２７４－ＰＣ７抗体（ＰＤ－Ｌ１）または抗ＣＤ２７９－ＦＩＴＣ抗体（ＰＤ－１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　Cat No.11-9969-42）で染色し、フローサイトメーターで測定して発現を確認した。
　以下の６つの条件での培養を行った。
(IF-Comp-)：ＩＦＮ－γおよび被験化合物を共に添加しないで前培養したＡ５４９細胞とＪｕｒｋａｔ細胞の共培養
(IF+Comp-)：ＩＦＮ－γを添加するが被験化合物は添加せずに前培養したＡ５４９細胞とＪｕｒｋａｔ細胞の共培養
(IF+Comp+)：ＩＦＮ－γを添加し、被験化合物も添加して前培養したＡ５４９細胞とＪｕｒｋａｔ細胞の共培養
(A:IF-Comp-)：ＩＦＮ－γおよび被験化合物を共に添加しないで前培養したＡ５４９細胞のみの培養
(A:IF+Comp-)：ＩＦＮ－γを添加するが被験化合物は添加せずに前培養したＡ５４９細胞のみの培養
(A:IF+Comp+)：ＩＦＮ－γを添加し、被験化合物も添加して前培養したＡ５４９細胞のみの培養
［５日目］
　各ウェルから培養液（浮遊細胞のJurkat細胞を含むが、接着細胞のＡ５４９細胞は含まない）を採取し、Caspase-Glo（登録商標） 3/7 Assay SystemsによるＣａｓｐａｓｅ３／７活性測定の試料とした。
（３－２）化学発光の測定
（１）ルシフェラーゼ試薬の調製
　Caspase-Glo（登録商標） 3/7 Assay Systems (Promega、G8091)に含まれるCaspase-Glo（登録商標） BufferとCaspase-Glo（登録商標） substrateを室温に戻した。２．５ｍＬのCaspase-Glo（登録商標） BufferをCaspase-Glo（登録商標） substrateのバイアルに加え、混合して溶解した。
（２）発光測定
　Ｃａｓｐａｓｅ３／７活性測定用に採取した試料２５μＬと上記（１）で調製したルシフェラーゼ試薬２５μＬを混和し、室温で1時間のインキュベーション後にGloMax20/20（Promega）を用いて化学発光を測定した。
（３－３）Ｃａｓｐａｓｅ３／７活性の５０％発現阻害濃度（ＩＣ５０）の算出
　得られたLuminescence(CPS)から各値を求めて、下式にしたがって被験化合物のＣａｓｐａｓｅ３／７活性抑制率を求めた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000018
 ［式中：
sub(IF+Comp+)＝(IF+Comp+)－(A:IF+Comp+)、
sub(IF+Comp-)＝(IF+Comp-)－(A:IF+Comp-)、および
sub(IF-Comp-)-＝(IF-Comp-)－(A:IF-Comp-)］
　被験化合物の各濃度とそれぞれのＣａｓｐａｓｅ３／７活性抑制率をエクセルファイルに入力し、最小二乗法で回帰直線を求め、５０％発現阻害濃度（ＩＣ５０値）を計算した。
　抗ＣＤ２７４－ＰＣ７抗体またはＩｇＧ１－ＰＣ７抗体（アイソタイプコントロール）染色したＡ５４９細胞（ＩＦＮ－γ処理２日後）および抗ＣＤ２７９－ＦＩＴＣ抗体またはＩｇＧ１κ－ＦＩＴＣ抗体染色したＪｕｒｋａｔ細胞（ＰＭＡ／ＰＨＡ処理２日後）のＦＣＭ解析結果（ヒストグラム）を、図１Ａおよび１Ｂに示す。
　さらに、実施例２、３、５および６の化合物のＩＣ５０値を表４に示し、対照（ＤＭＳＯ）のＣａｓｐａｓｅ３／７活性を１００％とした場合の、実施例５の化合物の各濃度におけるＣａｓｐａｓｅ３／７活性抑制効果を表５および図２に示す。
　また、Ａ５４９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞の共培養によるアポトーシスがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因することを確認するために、ＩＦＮ－γ処理Ａ５４９細胞と共培養する前のＰＭＡ／ＰＨＡ処理Ｊｕｒｋａｔ細胞を抗ＰＤ－１抗体（Ｒ＆Ｄ．ＡＦ１０８６；１０ｍｇ／ｍＬ）で予め処理した後、処理されたＪｕｒｋａｔ細胞とＡ５４９細胞を３時間共培養して、共培養後のＪｕｒｋａｔ細胞のＣａｓｐａｓｅ３／７活性を測定した。抗ＰＤ－１抗体におけるＣａｓｐａｓｅ３／７活性抑制効果もまた、表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
　上記結果により、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合をほぼ抑制できることをあらかじめ確認した量の抗ＰＤ－１抗体で処理することで、Ｃａｓｐａｓｅ３／７活性が大きく低下することが示された。すなわち、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合の形成を阻害するとＣａｓｐａｓｅ３／７活性を抑制できることが示され、Ａ５４９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞の共培養によるアポトーシス誘導がＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の結合に起因するものであることが立証された。さらに、本発明の化合物においても、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に由来するＪｕｒｋａｔ細胞のアポトーシスが抑制されることが示された。この結果、本発明の化合物は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因するＴ細胞のアポトーシス（Ｃａｓｐａｓｅ３／７の活性化）の抑制効果を有するものと認められる。
試験例４：ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因したＴ細胞のＩＬ－２産生量低下に対する本発明の化合物の抑止効果の評価
　本発明の化合物のＰＤ－Ｌ１発現抑制効果により、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因するＴ細胞のＩＬ－２産生量低下が抑止されるか否かを評価した。
　Ｊｕｒｋａｔ細胞にpGL-3ベクター basic (Promega)のマルチクローニング部位にヒトＩＬ－２プロモーター配列(-945から53)を組み込んだ、ｐＩＬ－２ｌｕｃをあらかじめトランスフェクションした。このＪｕｒｋａｔ細胞にＰＭＡとＰＨＡ－Ｌを加えて前培養した。また同時にＩＦＮ－γを加えてＡ５４９を前培養した。それぞれの細胞の前培養時の培養上清を除いた後、新しい培地で共培養した。共培養後のＪｕｒｋａｔ細胞のルシフェラーゼ活性を測定した。被験化合物は前培養中のＡ５４９細胞の培養液中に添加した。
［１日目］
　Ａ５４９細胞をＤＭＥＭ培地にて３ｘ１０５細胞／ｍＬの濃度でＴ２５フラスコにて５ｍＬずつ培養した（３７℃、５％ＣＯ２の条件）。
　別途、無血清培地５００μＬに５μｇのｐＩＬ－２ｌｕｃ　ＤＮＡ、１５μＬのＴｒａｎｓＩＴ－Ｊｕｒｋａｔ試薬（タカラバイオ：Cat# V2124）を加え、室温で１５分間放置した。その全量をＪｕｒｋａｔ細胞（３ｘ１０５細胞／５ｍＬ ＲＰＭＩ培地／Ｔ２５フラスコ）に加えた。
［２日目］
　５ｍＬのＡ５４９細胞の培養液中にＩＦＮ－γ（２５ｎｇ／ｍＬ）と実施例５の化合物を加えて培養を継続した。化合物５は５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＤＭＳＯ溶液をＤＭＥＭ培地で１００倍希釈した後、その５μＬまたは１０μＬを加えた（終濃度０．５μｍｏｌ／Ｌ、１．０μｍｏｌ／Ｌ）。対照はＤＭＥＭ培地で１００倍希釈したＤＭＳＯを１０μＬ加えた。
［３日目］
　Ａ５４９細胞をＨｙＱＴａｓｅで剥がし、３００ｘｇで５分間遠心分離した後に上清を捨て、ＲＰＭＩ培地で４ｘ１０６細胞／ｍＬの濃度とした。
　Ｊｕｒｋａｔ細胞を３００ｘｇで５分間遠心分離した後に上清を捨て、ＲＰＭＩ培地で４ｘ１０５細胞／ｍＬの濃度とした。
　６ウェルプレートの各ウェルにＡ５４９細胞の細胞懸濁液１ｍＬとＪｕｒｋａｔ細胞の細胞懸濁液１ｍＬ加えて共培養した（細胞数の比は１０：１、培養条件は３７℃、５％ＣＯ２）。
［４日目］
　Ｊｕｒｋａｔ細胞を含む培養上清を回収し、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を捨て、ペレットにLysis buffer（５ｘＣＣＬＲを水で希釈した１ｘＣＣＬＲ）を１００μＬ加えて室温で１５分間放置して測定用試料を作製した。
　Luciferase Assay SystemのLASをLABで溶解し、ルシフェラーゼ試薬を調製した。試料10μＬとルシフェラーゼ試薬50μＬを混和し、GloMax20/20（Promega）で化学発光（相対発光強度：ＲＬＵ）を測定した。
　ＩＦＮ－γ無添加の対照（ＤＭＳＯ）のＩＬ－２プロモーター制御下のルシフェラーゼ活性（以下、ＩＬ－２ｌｕｃ活性と称する）を１００％とした場合の、ＩＦＮ－γ添加の対照（ＤＭＳＯ）および実施例５の化合物の各濃度におけるＩＩＬ－２ｌｕｃ活性（％）を表６および図３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
　上記結果により、本発明の化合物が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に由来するＪｕｒｋａｔ細胞のＩＬ－２プロモーター制御下のルシフェラーゼ活性の低下を抑制できることが示された。すなわち、本発明の化合物は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合に起因したＴ細胞のＩＬ－２産生量低下の抑止効果を有するものと認められる。
　式（Ｉ）で表される本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩は、ＰＤ－Ｌ１発現抑制作用および／またはＩＬ－２産生低下抑制作用を有し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患（例えば、がんおよび感染症）の治療に有用である。

Claims (18)

  1. 　式（Ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中：
    　Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、ペンタフルオロスルファニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、前記アリールおよびヘテロアリールは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ－もしくはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ、Ｃ１－４アシル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、およびＣ１－６ヒドロキシアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
    　ｍは、０～５の整数であり；および
    　ｎは、０～５の整数である］
    で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
  2. 　Ｒ１およびＲ２が、各々独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６ヒドロキシアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－６ヒドロキシアルコキシ、ニトロ、およびペンタフルオロスルファニルからなる群から選択され；
    　ｍが、１または２であり；および
    　ｎが、１または２である、請求項１記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  3. 　Ｒ１が、各々独立して、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはニトロから選択され；および
    　Ｒ２が、各々独立して、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－６アルコキシ、またはペンタフルオロスルファニルから選択される、請求項１または２記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  4. 　Ｒ１が、ベンゼン環の３位および／または４位に結合し、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、またはニトロである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  5. 　Ｒ２が、ベンゼン環の４位に結合し、Ｃ１－６ハロアルキルまたはペンタフルオロスルファニルである、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  6. 　１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
    　１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
    　１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
    　１－（４－ヒドロキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、
    　１－（４－ニトロベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド、または
    　１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシベンゾイル）－Ｎ－（４－（４－（ペンタフルオロスルファニル）フェノキシ）フェニル）ピペリジン－３－カルボキサミド
    から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  7. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  8. 　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患を治療するための、請求項７記載の医薬組成物。
  9. 　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患が、がんまたは感染症である、請求項８記載の医薬組成物。
  10. 　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫能低下に起因する疾患が、がんである、請求項８または９記載の医薬組成物。
  11. 　がんが、悪性黒色腫を含む皮膚がん、神経膠芽腫を含む脳腫瘍、肺がん、胃がん、大腸がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、副腎がん、胆道がん、食道がん、咽頭がん、喉頭がん、口腔がん、膀胱がん、舌がん、甲状腺がん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項９記載の抗がん剤。
  12. 　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合による免疫低下に起因する疾患が、感染症である、請求項８または９記載の医薬組成物。
  13. 　感染症が、結核、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染症、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染症、ヘルペスウイルス感染症、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ－１）感染症である、請求項９または１２記載の医薬組成物。
  14. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、免疫チェックポイント阻害剤。
  15. 　免疫チェックポイント分子が、ＰＤ－Ｌ１である、請求項１４記載の免疫チェックポイント阻害剤。
  16. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ＰＤ－Ｌ１発現抑制剤。
  17. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ＩＬ－２産生低下抑制剤。
  18. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、ワクチンの補助剤（アジュバント）。
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