WO2020196926A1

WO2020196926A1 - 細胞競合の制御剤

Info

Publication number: WO2020196926A1
Application number: PCT/JP2020/014715
Authority: WO
Inventors: 丸山　剛
Original assignee: 学校法人早稲田大学
Priority date: 2019-03-28
Filing date: 2020-03-30
Publication date: 2020-10-01
Also published as: EP3949993A4; US20220233638A1; JPWO2020196926A1; CN113939316A; EP3949993A1

Abstract

本発明は、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を含む、細胞競合の制御剤を提供する。

Description

細胞競合の制御剤

　本発明は、細胞競合の制御のための新規な剤に関する。

　細胞競合はもともと1975年にショウジョウバエで発見され（非特許文献１）、ショウジョウバエ研究者によって研究が進められてきた。哺乳類細胞においても同様の競合現象が存在するかについては最近まで明らかになっていなかったが、2009年に本発明者らのグループが哺乳類においても細胞競合が生じることを世界で初めて報告し（非特許文献２）、現在では細胞競合が様々な生理的・病理的プロセスで生じる、細胞社会の恒常性維持に必要かつ普遍的な現象であることが明らかになっている。また最近の研究によって、細胞競合において敗者となった細胞がどのようにして組織から排除されるか、その分子メカニズムについては、少しずつ知見が集積してきた（非特許文献３）。

Morata, G.ら、Dev. Biol., 1975; 42: 211-221 Hogan, C.ら、Nat Cell Biol. 2009 Apr;11(4):460-7 Maruyama T.ら、Curr Opin Cell Biol. 2017; 48: 106-112

　しかしながら、「抗原提示による上皮細胞の排除能惹起機構」という細胞間の認識機構や、細胞間コミュニケーション分子については、これまで全く不明であった。従って、本発明の課題は、哺乳類の細胞競合に関与する「抗原提示による上皮細胞の排除能惹起機構」を担う分子的実体を解明して、該機構を利用した細胞競合の制御剤や、該剤を用いた細胞競合の制御方法を提供することである。

　上述の通り、我々の体内で生じるがんの80％以上は上皮細胞由来である。そのため、「抗原提示による上皮細胞の排除能惹起機構」を医療に応用することで、「発がんする前に変異細胞を除去する」という超早期がんの治療を対象とした予防的医療へ発展できるのではないか、また、ステージが進んだがんに対しても、上記機構を利用してがん細胞を除去することで、がんの治療に適用できるのではないかとの着想を得た。上記機構を解明するため、本発明者は、まず、上皮細胞に導入することで細胞競合が促進されることが知られているがん遺伝子RasV12に着目した。該遺伝子をヒト皮膚由来細胞株に導入し、該細胞でRasV12を発現させたところ、主要組織適合遺伝子複合体（major histocompatibility complex）（以下、「MHC」という。）class Iの細胞膜発現が促進されることを見出した。この知見から、本発明者は、MHC class Iと、細胞競合とが関与しているのではないかと考え、MHC-Iの発現を抑制することが知られているTAP1欠失細胞にRasV12を発現させたところ、細胞競合が促進されないこと、即ちMHC classIの細胞膜発現が細胞競合には必要であることが示された。次に、イヌのMHC-IであるDLAに着目し、RasV12導入株に個々のDLAを欠損させたところ、MHC-IaであるDLA88が、細胞競合には必須の役割を果たすことが示された。そこで、DLA88の全長ペプチドを細胞に投与しても、細胞競合は促進されないが、細胞外ドメインを構成する３つのドメインの内、α3ドメインからなるペプチド断片を細胞に投与したところ、意外にも細胞競合が促進されること、即ち、MHC-Iaのα3ドメインが、細胞競合に重要であるとの新たな知見を見出した。

　上記知見から、MHC class Iと、それに対する受容体との相互作用が細胞競合に関与するのではないかとの推測の下、MHC class Iに対する受容体を同定を試みたところ、免疫グロブリン様受容体LILRB3（leukocyte immunoglobulin-like receptor, subfamily B, member 3）がMHC class Iの受容体として機能することを見出した。そこで、LILRB3に着目して研究を進めたところ、(i) 上皮細胞膜上の免疫グロブリン様受容体LILRB3（leukocyte immunoglobulin-like receptor, subfamily B, member 3）をノックアウトすると異常細胞排除能が低下すること、また、(ii) LILRB3のD1～D4の4つの免疫グロブリンドメインの中のD1-D2ドメインを含むリコンビナントタンパク質が、MHC class 1aのα3ドメインを含むリコンビナントタンパク質と結合すること、さらに、(iii) LILRB3のD1-D2ドメインを含むリコンビナントタンパク質が細胞競合による異常細胞に対して抑制効果を示すことを見出した。これらの知見に基づきさらに研究を進めた結果、本発明を完成するに至った。

　即ち、本発明は以下に関する。
［1］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を含む、細胞競合の制御剤。
［2］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質を含み、細胞競合の制御が、細胞競合の促進である、［1］に記載の剤。
［3］MHC class IaがHLA-B又はDLA-88である、［2］に記載の剤。
［4］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質が、以下：
　a）配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　b）配列番号1で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　c）配列番号1で示されるアミノ酸配列と少なくとも90％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　d）DLA-88のオルソログのα3ドメインを含むタンパク質
からなる群から選択される、少なくとも1つのタンパク質を含む、［2］又は［3］に記載の剤。
［5］LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である、［4］に記載の剤。
［6］該細胞競合が、非免疫系の正常細胞による異常細胞の排除である、［2］～［5］のいずれか1に記載の剤。
［7］非免疫系の正常細胞が上皮細胞である、［6］に記載の剤。
［8］異常細胞が、変異細胞、がん細胞、又はウイルス感染細胞である、［6］又は［7］に記載の剤。
［9］細胞競合の制御剤が、がん又はウイルス感染症の予防又は治療剤である、［8］に記載の剤。
［10］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を含み、細胞競合の制御が、細胞競合の抑制である、［1］に記載の剤。
［11］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質が、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質、LILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体、アプタマー、LILRB3の発現阻害薬からなる群から選択される少なくとも1種類の物質である、［10］に記載の剤。
［12］LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、以下：
　e）配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　f）配列番号8で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　g）配列番号8で示されるアミノ酸配列と少なくとも80％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質
　h）ENSCAFG00000028453のオルソログのD1及びD2ドメインを含むタンパク質
から選択される少なくとも1つのタンパク質を含む、［11］に記載の剤。
［13］該細胞競合が、非免疫系の正常細胞による移植細胞の排除である、［10］～［12］のいずれか1に記載の剤。
［14］細胞競合の抑制が、臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善、又は神経変性疾患、筋変性疾患その他の各種変性疾患の症状進展の抑制である、［10］～［12］のいずれか1に記載の剤。
［15］臓器移植が、肝臓、腎臓、心臓、肺、膵臓、甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎皮質及び副腎髄質を含む内分泌臓器、並びに幹細胞を含む器官とからなる群から選択される少なくとも１種類の臓器の移植である、［14］に記載の剤。
［16］組織移植が、皮膚と、幹細胞を含む組織、免疫細胞を含む組織からなる群から選択される少なくとも１種類の組織の移植である、［14］に記載の剤。
［17］細胞移植が、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞、脂肪組織由来細胞、リンパ球、単球及びマクロファージからなる群より選択される少なくとも１種類の細胞の移植である、［14］に記載の剤。
［18］各種変性疾患が、頚椎症性脊髄症及び／又は腰部脊柱管狭窄症である、［14］に記載の剤。
［19］神経変性疾患が、アルツハイマー病、軽度認知障害、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、クロイツフェルト－ヤコブ病、外傷誘発性神経変性、高圧神経症候群、ジストニー、オリーブ橋小脳萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、認知症、老人性認知症、ＡＩＤＳ認知症複合、及びＡＩＤＳ誘発性脳症からなる群から選択される少なくとも１種類の神経変性疾患である、［14］に記載の剤。
［20］筋変性疾患が、筋ジストロフィー症、遠位型ミオパチー、先天性ミオパチー、甲状腺中毒性ミオパチー、糖原病、ミトコンドリアミオパチー、ステロイドミオパチー、アルコール性ミオパチー、炎症性ミオパチー、内分泌性ミオパチー、脂質蓄積障害性ミオパチー、ＨＩＶのような感染症に伴うミオパチー、硝子体ミオパチー、及び、重症筋無力症のような自己免疫疾患に伴うミオパチーからなる群から選択される少なくとも１種類の筋変性疾患である、［14］に記載の剤。
［21］臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善剤、又は、神経変性疾患、筋変性疾患その他の各種変性疾患の症状進展の抑制剤である、［14］に記載の剤。
［22］他の薬剤及び／又は他の治療方法と併用される、［1］～［21］のいずれか1に記載の剤。
［23］他の薬剤が、抗がん剤又は抗ウイルス剤である、［22］に記載の剤。
［24］抗がん剤が、アルキル化剤、細胞傷害性抗生剤、プラチナ製剤、代謝拮抗剤、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、ホルモン剤、DNA修飾酵素阻害剤、プロテオソーム阻害剤、アルカロイド剤、I型及びII型トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、サイトカイン製剤、ホルモン剤、免疫チェックポイント阻害剤、ナチュラルキラー細胞活性化剤、indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO)阻害剤、モノクローナル抗体、並びに、その他の分子標的治療剤からなる群から選択される少なくとも１種類の抗がん剤である、［23］に記載の剤。
［25］抗ウイルス剤が、インターフェロン、ヌクレオシド及びヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、融合阻害剤、成熟阻害剤、グアノシン類似体、プリジン類似体、ピリミジン類似体、及び、上記のクラスのいずれにも含まれない、当技術分野で認識されている他の「未分類の」抗ウイルス剤（例えば、フォスカルネット及びミルフォホシン）からなる群から選択される少なくとも１種類の抗ウイルス剤である、［23］に記載の剤。
［26］他の治療方法が、がんの外科療法、放射線療法、レーザー照射療法、及び温熱療法からなる群から選択される少なくとも1種類の方法である、［22］に記載の剤。
［27］他の薬剤が、免疫抑制剤、移植臓器の拒絶反応抑制剤、及び移植後の生着促進剤からなる群から選択される少なくとも1種類の薬剤である、［22］に記載の剤。
［28］免疫抑制剤が、ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、アザチオプリン、タクロリムス水和物、１５－デオキシスペルグアリン、ナタリズマブ、ラパマイシン、及び、エタネルセプトからなる群から選択される少なくとも１種類の免疫抑制剤である、［27］に記載の剤。
［29］前記剤が医薬組成物である、［1］～［28］のいずれか1に記載の剤。
［30］細胞競合の制御方法であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質の治療有効量をこれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
［31］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体を投与し、細胞競合の制御が、細胞競合の促進である、［30］に記載の方法。
［32］MHC class IaがHLA-B又はDLA-88である、［31］に記載の方法。
［33］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質が、以下：
　a）配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　b）配列番号1で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質
　c）配列番号1で示されるアミノ酸配列と少なくとも90％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　d）DLA-88のオルソログのα3ドメインを含むタンパク質
からなる群から選択される、少なくとも1つのタンパク質を含む、［31］又は［32］に記載の方法。
［34］LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である、［33］に記載の方法。
［35］該細胞競合が、非免疫系の正常細胞による異常細胞の排除である、［31］～［34］のいずれか1に記載の方法。
［36］非免疫系の正常細胞が上皮細胞である、［35］に記載の方法。
［37］異常細胞が、変異細胞、がん細胞、又はウイルス感染細胞である、［35］又は［36］に記載の方法。
［38］細胞競合の制御が、がん又はウイルス感染症の予防又は治療である、［37］に記載の方法。
［39］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を投与し、細胞競合の制御が、細胞競合の抑制である、［30］に記載の方法。
［40］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質が、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質、LILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体、アプタマー、LILRB3の発現阻害薬からなる群から選択される少なくとも1種類の物質である、［39］に記載の方法。
［41］LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、以下：
　e）配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　f）配列番号8で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　g）配列番号8で示されるアミノ酸配列と少なくとも80％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　h）ENSCAFG00000028453のオルソログのD1及びD2ドメインを含むタンパク質
から選択される少なくとも1つのタンパク質を含む、［39］又は［40］に記載の方法。
［42］該細胞競合が、非免疫系の正常細胞による移植細胞の排除である、［39］～［41］のいずれか1に記載の方法。
［43］細胞競合の抑制が、臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善、又は神経変性疾患、筋変性疾患その他の各種変性疾患の症状進展の抑制である、［39］～［42］のいずれか1に記載の方法。
［44］臓器移植が、肝臓、腎臓、心臓、肺、膵臓、甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎皮質及び副腎髄質を含む内分泌臓器、並びに幹細胞を含む器官とからなる群から選択される少なくとも１種類の臓器の移植である、［43］に記載の方法。
［45］組織移植が、皮膚、幹細胞を含む組織、免疫細胞を含む組織からなる群から選択される少なくとも1種類の組織の移植である、［43］に記載の方法。
［46］細胞移植が、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞、脂肪組織由来細胞、リンパ球、単球及びマクロファージからなる群より選択される少なくとも1種類の細胞の移植である、［43］に記載の方法。
［47］各種変性疾患が、頚椎症性脊髄症及び／又は腰部脊柱管狭窄症である、［43］に記載の方法。
［48］神経変性疾患が、アルツハイマー病、軽度認知障害、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、クロイツフェルト－ヤコブ病、外傷誘発性神経変性、高圧神経症候群、ジストニー、オリーブ橋小脳萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、認知症、老人性認知症、AIDS認知症複合、及び、AIDS誘発性脳症からなる群から選択される少なくとも１種類の神経変性疾患である、［43］に記載の方法。
［49］筋変性疾患が、筋ジストロフィー症、遠位型ミオパチー、先天性ミオパチー、甲状腺中毒性ミオパチー、糖原病、ミトコンドリアミオパチー、ステロイドミオパチー、アルコール性ミオパチー、炎症性ミオパチー、内分泌性ミオパチー、脂質蓄積障害性ミオパチー、ＨＩＶのような感染症に伴うミオパチー、硝子体ミオパチー、及び重症筋無力症のような自己免疫疾患に伴うミオパチーからなる群から選択される少なくとも１種類の筋変性疾患である、［43］に記載の方法。
［50］他の薬剤の投与及び／又は他の治療方法と併用される、［30］～［49］に記載の方法。
［51］他の薬剤が、抗がん剤又は抗ウイルス剤である、［50］に記載の方法。
［52］抗がん剤が、アルキル化剤、細胞傷害性抗生剤、プラチナ製剤、代謝拮抗剤、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、ホルモン剤、DNA修飾酵素阻害剤、プロテオソーム阻害剤、アルカロイド剤、I型及びII型トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、サイトカイン製剤、ホルモン剤、免疫チェックポイント阻害剤、ナチュラルキラー細胞活性化剤、indoleamine 2,3-dioxygenase（IDO）阻害剤、モノクローナル抗体、並びにその他の分子標的治療剤からなる群から選択される少なくとも1種類の抗がん剤である、［51］に記載の方法。
［53］抗ウイルス剤が、インターフェロン、ヌクレオシド及びヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、融合阻害剤、成熟阻害剤、グアノシン類似体、プリジン類似体、ピリミジン類似体、並びに上記のクラスのいずれにも含まれない、当技術分野で認識されている他の「未分類の」抗ウイルス剤（例えば、フォスカルネット及びミルフォホシン）からなる群から選択される少なくとも１種類の抗ウイルス剤である、［51］に記載の方法。
［54］他の治療方法が、がんの外科療法、放射線療法、レーザー照射療法、及び温熱療法からなる群から選択される少なくとも1種類の方法である、［50］に記載の方法。
［55］他の薬剤が、免疫抑制剤、移植臓器の拒絶反応抑制剤、及び移植後の生着促進剤からなる群から選択される少なくとも1種類の薬剤である、［50］に記載の方法。
［56］免疫抑制剤が、ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、アザチオプリン、タクロリムス水和物、15-デオキシスペルグアリン、ナタリズマブ、ラパマイシン、及びエタネルセプトからなる群から選択される少なくとも1種類の免疫抑制剤である、［55］に記載の方法。
［57］細胞競合の制御に使用するための、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質、又はLILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質。
［58］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質であって、細胞競合の制御が、細胞競合の促進である、［57］に記載のタンパク質。
［59］MHC class IaがHLA-B又はDLA-88である、［58］に記載のタンパク質。
［60］LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質であって、細胞競合の制御が、細胞競合の抑制である、［57］に記載のタンパク質。
［61］細胞競合の制御するための医薬の製造におけるMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質の使用。
［62］MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体であって、細胞競合の制御が、細胞競合の促進である、［61］に記載の使用。
［63］MHC class IaがHLA-B又はDLA-88である、［60］に記載のタンパク質。
［64］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質であって、細胞競合の制御が、細胞競合の抑制である、［61］に記載のタンパク質の使用。
［65］MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質が、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質、LILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体、アプタマー、LILRB3の発現阻害薬からなる群から選択される少なくとも1種類の物質である、［64］に記載の方法。

　本発明によれば、細胞競合の制御剤、細胞競合を制御する方法、細胞競合を制御する方法に使用するためのタンパク質、及び細胞競合の制御する医薬の製造におけるタンパク質の使用等を提供することができる。本発明の剤は、MHC class Iaと、それに対する受容体であるLILRB3との相互作用を制御することで、細胞競合を制御し、その結果、神経変性疾患（例：筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病等）、筋変性疾患（例：筋ジストロフィー症）、がん（前がん状態も含む）（例：膵がん、肺がん、皮膚がん、子宮がん等）、細菌感染若しくはウイルス感染（例：ヒトパピローマウイルス（HPV）等）、細胞移植生着不全（例：人工多能性幹細胞（iPS細胞）移植、心筋細胞移植、角膜移植、皮膚移植等）の予防や治療が可能となる。

RasV12発現細胞のTAP1欠損突然変異が正常細胞（MDCK）による排除を促進するかを検討した、正常細胞によるFilaminの集積を観察した蛍光顕微鏡の写真の図。上段（TAP-WT）：野生型TAP1を有するRasV12発現細胞を用いた場合。中段(TAP1-KO#1)と下段(TAP1-KO#2)：TAP1欠損型RasV12発現細胞を用いた場合。＊はRasV12発現細胞を表す。 Filamin集積を計測して比較した図。データは、平均値±SDで表す(n=3)。**：p<0.01（Studentのt検定）。細胞排除能を表すapical extrusiionの割合を表す。データは、平均値±SDで表す(n=3)。*：p<0.05、***：p<0.001（Studentのt検定）。 MDCK-RasV12-WT又は-TAP^KO細胞を、コラーゲンゲル上で正常なMDCK細胞と混合し、単層形成後、ドキシサイクリンで24時間処理した。細胞を固定し、ファロイジンとヘキストで染色した。正常及びRasV12細胞の代表的なXZ画像。スケールバー：10μm。各種DLAファミリーをRasV12発現細胞から欠損させた場合の正常細胞（MDCK）によるRasV12発現細胞の排除への影響を評価した結果を表す図。***：ｐ＜0.001、****：p<0.0001、ns.:有意差なし、を表す（Studentのt検定）。共焦点顕微鏡でRasV12発現細胞の挙動を解析した画像。 DLA-88の完全長タンパク質（FL）と、DLA88のα1及びα2ドメインのみを含むタンパク質（DLA88-α1/2）及びDLA88のα3ドメインのみを含むタンパク質（DLA88-α3）との構造を表した模式図。 MDCK正常細胞：RasV12発現MDCK細胞=50:1の細胞比で混和し単一細胞層を形成させた後に、ドキシサイクリンと組換えタンパク質DLA88-α3を同時に添加し、処理した場合のRasV12発現細胞の排除を観察した結果を表す図。**：p<0.01、***：p<0.01を表す（Studentのt検定）。正常細胞：DLA88欠損RasV12発現細胞=50:1の条件で、ドキシサイクリンと組換えタンパク質DLA88-α3を同時に添加し処理した場合のDLA88欠損RasV12発現細胞の排除を観察した結果を表す図。*：p<0.05、**：p<0.01を表す（Studentのt検定）。 MDCK正常細胞：RasV12発現MDCK細胞=50:1の細胞比で混和し単一細胞層を形成させた後に、ドキシサイクリンのみ、ドキシサイクリンと組換えタンパク質DLA88-α1/2、又はドキシサイクリンと組換えタンパク質DLA88-α3を同時に添加し、処理した場合のRasV12発現細胞の排除を観察した結果を表す図。**：p<0.01を表す（Studentのt検定）。 MHC class Iに結合する細胞膜タンパク質LILRB3（ENACAFG000028453）の遺伝子欠損RasV12発現細胞の排除効率を表す図。 LILRB3（ENACAFG000028453）の完全長タンパク質（28453-FL）と、実験に使用したD1及びD2ドメインのみの組換えタンパク質（28453-D1/2）との構造を表した模式図。 LILRB3のD1/D2ドメインを含む組換えタンパク質（28453-D1/2）とDLA88-α3ドメインを含む組換えタンパク質（DLA88-α3）とが試験管内で結合することを表すブロット図。 RasV12発現MDCK細胞に対する正常MDCK細胞による排除効果へのLILRB3のD1/D2ドメインの組換えタンパク質（28453-D1/2）を含む組換えタンパク質の添加の影響を評価した結果を表す図。バイオレイヤー干渉法を使用した、DLA88とLILRB3との間の速度論的分析。（b）で使用した組換えタンパク質DLA88-α3及びLILRB3-D1/D2を個別に37℃で2時間インキュベートした。DLA88-α3をリガンドとしてBLIセンサー上に5分間固定化した。LILRB3-D1/2Dは、示した濃度で検体としてローディングした。Kd = 6.54±0.28μM。上図：独自に単離したHaCaT細胞での変異細胞の排除の様子を示す。左下図：HaCaT-RasV12細胞をHaCaT-WT又はHaCaT-LILRB3KOと混合し、ドキシサイクリンでα3の有り／無しにより処理した。ライブイメージング分析は、8時間から56時間の時点で、5分ごとに1つの画像の割合で実行した。押し出された細胞を、表示した時間でカウントし、apical extrusionの効率をグラフで示す。本実験条件では、n≧538細胞。データは3回の独立した実験からの平均±SEMである。 * P <0.05、** P <0.01（Studentのoneway anova）。右下図：RasV12細胞におけるHLAのノックアウトは、apical extrusionの効率を消失させた。HaCaT-RasV12-WT又は-HLAトリプルノックアウト（HLAtKO）細胞を、コラーゲンゲル上の正常なHaCaT細胞と混合し、単層の形成後、ドキシサイクリンで16時間処理した。細胞を固定し、ファロイジンとヘキストで染色した。正常細胞及びRasV12細胞の代表的なXZ画像。スケールバー：10μm。ヒトHaCaT正常細胞：LILRB3WT遺伝子欠損のないRasV12発現ヒトHaCat細胞（LILRB3^WT-RasV12）=30:1の条件で、ドキシサイクリンと組換えタンパク質28453-D1/2を同時に添加し処理した場合（LILRB3^WT+28453-D1/2）と、ドキシサイクリンのみを添加し処理した場合（LILRB3^WT）のRasV12発現HaCat細胞の正常HaCat細胞による排除を観察した結果を表す図。****：p<0.01を表す。左上図：皮下注入の位置。左下図：注入の条件。中央図：腫瘍の画像。腫瘍を、1cm×1cmの正方形に分割したボード上に置いた。右図：2週間後に形成された腫瘍塊の全重量又は全体積を測定した結果。ns.:有意差なし、*：p<0.05、**：p<0.01及び***：p<0.005を表す（Studentのt検定）。ヒトHaCat正常細胞（HaCat）：RasV12発現ヒトHaCat細胞（RasV12）を3:1、10:1又は30:1の条件でDLA88-α3存在下又は非存在下でマトリジェルに混合した細胞のペレットをヌードマウスの腹部に移植して、２週間後に形成された腫瘍塊の全体積を測定した結果。ヒトHaCat正常細胞（HaCat）：RasV12発現ヒトHaCat細胞（RasV12）を3:1、10:1又は30:1の条件でマトリジェルに混合した細胞のペレットをヌードマウスの腹部に移植して、2週間後に形成された腫瘍塊の重量を測定した結果。ns.:有意差なし、*：p<0.05、**：p<0.01及び***：p<0.005を表す（Studentのt検定）。左図：腫瘍の組織切片。腫瘍を固定し、凍結切片を作製した。切片はファロイジンとヘキストで染色した。スケールバー：200μm。右図：腫瘍切片におけるGFP陽性率。画像解析ソフトウェアを使用してGFP陽性領域を定量化し、各腫瘍の全領域を使用して領域の割合を計算した。ns.:有意差なし、*：p<0.05を表す（Studentのt検定）。左図：腫瘍の画像。腫瘍を、1cm×1cmの正方形に分割したボード上に置いた。中央図及び右図：2週間後に形成された腫瘍塊の全重量又は全体積を測定した結果。**：p<0.01及び***：p<0.005を表す（Studentのt検定）。左上図：HaCaT-RasV12細胞の蛍光画像。左下図：粒子画像流速測定（PIV）の画像。正常なHaCaT及びRasV12細胞を30：1の割合で薄いコラーゲンゲル上に播種した。細胞が単層を形成した後、細胞をドキシサイクリンで培養した。インキュベーションの8時間後、48時間ライブイメージング分析を行った。PIVパラメータは、各セルの動きから計算した。矢印は、目的の細胞の最大（5ピクセル/秒）と最小（0ピクセル/秒）の移動度を意味する。28時間での動画とPIVの代表的な画像を示す。右図：α3ドメインを添加した場合に（+）、排除された細胞でアポトーシスが誘導されていることを示す。左図：ヒトパピローマウイルス（HPV）は細胞に感染後、癌抑制遺伝子であるScribbleを分解することで、がん化を引き起こすことが知られている。一方で、Scribbleの発現抑制細胞は、周辺正常細胞によって、アポトーシスを誘導されながら排除されることが知られている。右図：α3（ECA-1-ex3）ECARを介して、Scribbleノックダウン細胞の排除を促進する。テトラサイクリン誘導性ScribbleノックダウンMDCK細胞（GFP陽性細胞）を、正常細胞若しくは28453（ECAR）と1:10（MDCK:SCRB^KD = 10:1）の割合で混合播種した。単相を形成した後に、テトラサイクリンとα3を添加し、その24時間後における顕微鏡視野中の細胞数に対するGFP陽性細胞（Scribbleノックダウン細胞）の割合を算出した。ns.: not significant, **P< 0.01。 HPV全ゲノム安定細胞MCF10A細胞の排除は、α3処理によって促進する。HPVの全ゲノム（HPV18ゲノム）を安定的に保持するMCF10A（HPV18）細胞をCMFDA（緑蛍光染色）によって混合培養後に識別可能とした後に、正常MCF10Aと10:1の割合（Normal MCF10A : HPV18 = 10:1）で混合したのち、播種した。その24時間後における顕微鏡視野中の細胞数に対するGFP陽性細胞（HPV18細胞）の割合を算出した。Cont:HPV18の上皮細胞層における残存率、a3:α3処理時のHPV18細胞の残存率。ns.: not significant, **P< 0.01。左上図：LILRB3は、定量的PCR分析の混合条件でアップレギュレートされた。正常なMDCK又はMDCK-RasV12細胞を単独で（単一）播種する、又はMDCK-RasV12細胞を正常なMDCK細胞と1：1（混合）の割合でシリコンプレート（弾性率：0.5 kPa）上で混合し、単層の形成後8時間ドキシサイクリンで処理した。細胞を溶解し、サンプルを定量的PCR分析に供した。混合条件での発現レベルを、正常条件及びRasV12単一の条件での平均値と比較される。データは、5つの独立した実験からの平均±SDである。** P <0.01（Studentのt検定）。左下図：LILRB3誘導の定量化データ。データは、3回の独立した実験の平均値±SDである。各実験条件で、n=60細胞。* P <0.05（Studentのt検定）。右図：正常なMDCK又はMDCK-RasV12細胞を単独で（単一）、又はMDCK-RasV12細胞を、コラーゲンゲル上で正常なMDCK細胞と混合した。ドキシサイクリン処理の24時間後、細胞を透過処理せずに固定し、抗LILRB3抗体と抗HLA-B抗体で染色した。正常細胞及びRasV12細胞の代表的なXY画像。スケールバー：10μm。左上図：正常なMDCK細胞由来のLILRB3の欠失は、apical eliminationを弱める。MDCK-RasV12細胞をコラーゲンゲル上で通常のMDCK-WT又は-LILRB3KO-OEと混合し、単層の形成後、ドキシサイクリンを用いて24時間培養した。細胞を固定し、ファロイジンとヘキスト）で染色した。正常細胞及びRasV12細胞の代表的なXZ画像。スケールバー：10μm。左下図：RasV12のapical extrusionの定量化データ。各実験条件において、n≧100細胞。データは、4回の独立した実験からの平均値±SDである。* P <0.05、** P <0.01（Studentのt検定）。右上図：通常のHaCaT細胞におけるLILRB3のノックアウトは、apical extrusionを抑制する。HaCaT -RasV12細胞をコラーゲンゲル上で、正常なHaCat-WT、-LILRB3KO又は-LILRB5KO細胞と混合し、単層の形成後、ドキシサイクリンを用いて16時間培養した。細胞を固定し、ファロイジンとヘキストで染色した。正常細胞及びRasV12細胞の代表的なXZ画像。スケールバー：10μm。右下図：RasV12のapical extrusionの定量化データ。各実験条件において、n≧100細胞。データは3回の独立した実験からの平均値±SDである。 ** P <0.01（Studentのt-検定）。

（1）本発明の制御剤
　本発明の実施形態は、細胞競合の制御剤であり、より具体的には、細胞競合の促進剤、又は細胞競合の抑制剤である。該促進剤は、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質又はLILRB3に対するアゴニスト抗体を含み、該抑制剤は、MHC class IaとLILRB3との結合、より具体的には、MHC class Iaのα3ドメインとLILRB3のD1及びD2ドメインとの結合を阻害する物質を含む。

　本明細書において、「細胞競合」とは、組織において適応度（状態）の異なる2種類の細胞が近接すると、適応度のより高い細胞が生き残り、より低い細胞が排除される現象をいう。リンパ球等の免疫系の細胞が、変異細胞を排除することが知られているが、免疫系細胞以外の上皮細胞等の正常細胞によっても、細胞競合により、変異細胞を排除することが解明されてきている。

　細胞競合による変異細胞に対する細胞排除の駆動力としてアクトミオシンやフィラミン、ビメンチンといった細胞骨格系の分子を介した機械的な力が機能することが明らかとされている。上皮細胞による変異細胞の細胞競合においては、変異細胞を取り囲む正常上皮細胞側にこれらの細胞骨格形成因子が集積することによって、変異細胞が正常上皮細胞の頭頂側（管腔側）に押し出されて離脱する。変異細胞が浸潤・転移するには細胞は頭頂側とは反対の基底側に離脱する必要があるため、該変異細胞の頭頂側への逸脱は正常上皮細胞による転移を阻害する抗腫瘍的な現象であると考えられている（梶田美穂子ら、日薬理誌 2012; 140: 76-80）。また、この細胞競合の過程で押し出された細胞がアポトーシスを開始していない場合は、付着の喪失により、アノイキス（anoikis）と呼ばれるプログラム細胞死を起こすことも知られている（VanHook M. A.、Sci. Signal. 2017； Vol. 10, Issue 478, eaan5866 DOI: 10.1126/scisignal.aan5866）。

　本明細書において、「被排除細胞」とは、細胞競合の対象となる適応度の異なる2種類の細胞のうち、細胞競合で負けて排除される細胞を指し、「正常細胞」とは、細胞競合の対象となる適応度の異なる2種類の細胞のうち、細胞競合で勝って被排除細胞を排除する細胞を指す。また、本明細書において、被排除細胞に含まれる細胞のうち、臓器移植、組織移植又は細胞移植等により移植される細胞（以下、「移植細胞」という。）以外の細胞を「異常細胞」という。異常細胞には、内在遺伝子の突然変異又は外来遺伝子の発現により正常細胞と適応度が異なる突然変異細胞の他、遺伝子発現のエピジェネティックな変化のために正常細胞と適応度が異なる細胞が含まれる。また、異常細胞には、がん細胞及びがん化が進行中の細胞（前がん状態の細胞を含む）、ウイルスその他の病原体に感染した細胞、該病原体感染が進行中の細胞、疾患特異的なタンパク質発現変異を有する細胞、物理的な損傷を被った細胞、神経、筋、脊椎その他の変性疾患における変性した細胞及び変性が進行中の細胞を含むが、これらに限定されない。本発明において、細胞競合の制御が促進的な制御の場合には、非排除細胞は、異常細胞である。また、本発明において、細胞競合の制御が抑制的な制御の場合には、非排除細胞は、移植細胞である。

　本発明における細胞競合の促進的な制御とは、例えば、がん又はウイルス感染症の予防又は治療、あるいはそれらの促進又は強化が挙げられる。また、本発明における細胞競合の抑制的な制御とは、例えば、臓器移植、組織移植又は細胞移植により移植される細胞の非免疫系の正常細胞による排除の抑制又は軽減が挙げられる。

　本明細書における細胞競合は、免疫系細胞による異常細胞や移植細胞の排除に限定されるものではなく、非免疫系の正常細胞による異常細胞や移植細胞の排除であってもよい。

　本明細書において、「免疫系細胞」とは、T細胞、B細胞及びNK（ナチュラルキラー）細胞等のリンパ球、並びに、樹状細胞及びマクロファージなどの免疫機能に関与する細胞をいう。

　本明細書において、移植される臓器としては、例えば、肝臓、腎臓、心臓、肺、膵臓、又は甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎皮質若しくは副腎髄質を含む内分泌臓器、幹細胞を含む器官等が挙げられる。

　本明細書において、移植される組織としては、例えば、皮膚、幹細胞を含む組織、免疫細胞を含む組織等が挙げられる。

　本明細書において、移植される細胞としては、例えば、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞、脂肪組織由来細胞、リンパ球、単球、マクロファージ等が挙げられる。あるいは、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞及び脂肪組織由来細胞からなる群より選択される１種又は複数種を含む細胞;リンパ球、単球及びマクロファージからなる群より選択される１種又は複数種を含む細胞；から選択される細胞が挙げられる。

　本明細書において、神経変性疾患としては、例えば、アルツハイマー病、軽度認知障害、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、クロイツフェルト－ヤコブ病、外傷誘発性神経変性、高圧神経症候群、ジストニー、オリーブ橋小脳萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、認知症、老人性認知症、AIDS認知症複合、AIDS誘発性脳症等が挙げられる。

　本明細書において、筋変性疾患としては、例えば、筋ジストロフィー症、遠位型ミオパチー、先天性ミオパチー、甲状腺中毒性ミオパチー、糖原病、ミトコンドリアミオパチー、ステロイドミオパチー、アルコール性ミオパチー、炎症性ミオパチー、内分泌性ミオパチー、脂質蓄積障害性ミオパチー、HIVのような感染症に伴うミオパチー、硝子体ミオパチー、及び、重症筋無力症のような自己免疫疾患に伴うミオパチー等が挙げられる。

　MHCは、高等動物の染色体上の主要組織適合性抗原複合体（MHC）領域にコード化される免疫反応に必要な多くの多型性タンパク質の遺伝子ファミリーである。このMHCファミリーのタンパク質は抗原提示を行うことで細菌やウイルスなどの感染病原体の排除や、がん細胞の拒絶、臓器移植の際の拒絶反応などに関与し、免疫にとって非常に重要な働きをする。その他、ペプチドの輸送に関与するTAP (transporter associated with antigen processing)といった、免疫に関するさまざまなタンパク質群もこのMHC領域にコードされている。

　MHC class Iタンパク質は、核のあるすべての細胞に存在・発現している。そして、MHC class Iタンパク質は、細胞内の内因性抗原を結合する。つまり、ウイルスのように感染した細胞内で増殖する病原体に対して、あるいはがん細胞内で産生されるがん抗原に対しては、MHCクラスIを介した抗原提示により免疫反応を起こす。MHC class Iタンパク質は、さらに古典的class Iタンパク質（class Ia）と非古典的class Iタンパク質（class Ib）に分けられる。MHC class Iタンパク質は、糖鎖が付加した分子量45 kDaの重鎖（α鎖）と、分子量12 kDaのβ2ミクログロブリン軽鎖の2つが非共有結合した二量体であり、これにペプチド抗原が結合して三量体として細胞表面に発現する。class I重鎖はα1～α3の3つの細胞外ドメインと、細胞膜貫通ドメイン、細胞内ドメインからなる。α1領域とα2領域の間に大きな溝状の構造があり、ここに抗原を結合し提示する。

　ウイルスのように感染した細胞内で増殖する病原体や、あるいはがん細胞内で産生されるタンパク質など、細胞質内のタンパク質はユビキチン化された後、プロテアソームによって5～15アミノ酸程度のペプチドにまで分解される。分解されたペプチドは、小胞体（ER）膜上にあるTAP（transporter associated with antigen processing）というATP駆動型トランスポーターによって小胞体（ER）内部に輸送される。なおTAPの構造は、膜貫通型であり、TAP1とTAP2からなるヘテロ二量体である。MHC class Iα鎖とβ2ミクログロブリンは小胞体（ER）内で合成され、小胞体（ER）内でMHC class Iα鎖、β2ミクログロブリン、そしてペプチドの3つが結合してMHC-ペプチド複合体を作る。その後、MHC-ペプチド複合体は、より小さな小胞体の内部に置かれて、小胞輸送によって細胞膜を目指して運ばれる途中でゴルジ体を通り、糖鎖修飾を受けた後、細胞膜上に到達して発現する。

　本発明において、細胞競合の制御に関与するMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質の例として、MHC class Iのα3ドメイン、MHC class Iのα3ドメインのフラグメントを挙げることができる。MHC class Iのα3ドメインのフラグメントとは、MHC class Iのα3ドメインの全長を除く如何なる断片であってもよい。本明細書中において、用語「タンパク質」と、用語「ペプチド」は、互換的に使用してもよい。

　さらに、本発明において、前記MHC class Iaの例として、HLA-A、HLA-B、HLA-C又はDLA-88を挙げることができ、好ましくは、HLA-B又はDLA-88である。

　また、本発明における前記MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質（MHC class Iaのα3ドメインフラグメントタンパク質）の例は、以下：
　a）配列番号1（DLA88のα3ドメインのアミノ酸配列）で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　b）配列番号1で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　c）配列番号1で示されるアミノ酸配列と少なくとも90％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　d）DLA-88のオルソログのα3ドメインを含むタンパク質
から選択される少なくとも１つのタンパク質である。

　本明細書において「類似性」とは、当該技術分野において公知の数学的アルゴリズムを用いて2つのアミノ酸配列をアラインさせた場合の、最適なアラインメント（好ましくは、該アルゴリズムは最適なアラインメントのために配列の一方若しくは両方へのギャップの導入を考慮し得るものである）における、オーバーラップする全アミノ酸残基に対する同一アミノ酸及び類似アミノ酸残基の割合（％）を意味する。
　本明細書におけるアミノ酸配列の同一性／類似性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST（National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool）を用い、以下の条件（期待値＝10；ギャップを許す；マトリクス＝BLOSUM62；フィルタリング＝OFF）にて計算することができる。アミノ酸配列の相同性を決定するための他のアルゴリズムとしては、例えば、Karlinら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA，90：5873－5877（1993）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはNBLAST及びXBLASTプログラム(version 2.0)に組み込まれている(Altschulら，Nucleic Acids Res.,25：3389－3402（1997）)]、Needlemanら，J．Mol．Biol．，48：444－453（1970）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはGCGソフトウェアパッケージ中のGAPプログラムに組み込まれている］、Myers及びMiller，CABIOS，4：11－17（1988）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはCGC配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるALIGNプログラム（version 2.0）に組み込まれている]、Pearsonら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，85：2444－2448（1988）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはGCGソフトウェアパッケージ中のFASTAプログラムに組み込まれている］等が挙げられ、それらも同様に好ましく用いられ得る。

　また、本発明のclass Iaのα3ドメインを含むタンパク質は、ILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する限り、該α3ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号1で示される、DLA88のα3ドメインのアミノ酸配列）中の1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、該α3ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号1で示されるアミノ酸配列）に、1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、該α3ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号1で示されるアミノ酸配列）中の1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、又はそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含むあるいはからなるタンパク質であってもよい。性質の似たアミノ酸（例：グリシンとアラニン、バリンとロイシンとイソロイシン、セリンとトレオニン、アスパラギン酸とグルタミン酸、アスパラギンとグルタミン、リシンとアルギニン、システインとメチオニン、フェニルアラニンとチロシン等）同士の置換等であれば、さらに多くの個数の置換等があり得る。

　本発明のclass Iaのα3ドメインを含むタンパク質は、ILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する限り、該class Iaのα3ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号1で示されるアミノ酸配列）との類似性が80％以上のアミノ酸配列を含むあるいはからなるタンパク質であってもよく、85％以上（86％、87％、88％、又は89％以上）が好ましく、90％以上（91％、92％、93％、又は94％以上）がより好ましく、95％以上（96％、97％、又は98％以上）がさらに好ましく、99％以上がさらに一層好ましい。

　本発明において、LILRB3に対するアゴニスト抗体とは、LILRB3（より具体的には、LILRB3のD1及びD2ドメイン）と結合し、細胞競合を制御（より具体的には、細胞競合を促進）し得る抗体であれば、特に限定されない。該抗体は、例えば、国際公開第2003/091424号、国際公開第2005/056602等に記載の方法に基づいて、当業者が適宜、スクリーニングし取得し得るものである。

　MHC class Iaの受容体として機能するLILRB3は、ENSCAFG00000028453、CD85a、ILT5又はLIR3とも呼ばれる。LILRB3は、免疫グロブリン様受容体の1種であり、D1～D4の細胞外免疫グロブリンドメイン、細胞膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを有し、免疫プロフェッショナル細胞での発現が良く知られているが、上皮細胞においても発現している。その機能については、必ずしも十分に解明されているとは言えない。

　本明細書において、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質の例として、LILRB3のD1及びD2ドメイン、LILRB3のD1及びD2ドメインのフラグメントを挙げることができる。LILRB3のD1及びD2ドメインのフラグメントとは、LILRB3のD1及びD2ドメインの全長を除く如何なる断片であってもよい。

　本発明において、DLA-88（配列番号13で示されるDLA-88の全長のアミノ酸配列からなるタンパク質）のオルソログ、及びイヌLILRB3（ENSCAFG00000028453）（配列番号14で示されるENSCAFG00000028453の全長のアミノ酸配列からなるタンパク質）のオルソログは、例えば、イヌ以外の哺乳動物におけるものであり、好ましくは霊長類（例：類人猿、ヒト等）であり、より好ましくは、ヒト（例：配列番号11：ヒトMHC Ibのα3ドメインのアミノ酸配列、配列番号15：ヒトMHC Bの全長のアミノ酸配列、配列番号12：ヒトLILRB3のD1及びD2ドメインのアミノ酸配列、配列番号16：ヒトLILRB3の全長のアミノ酸配列）。

　本発明において、前記LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質の例は、以下：
　e）配列番号8（ENSCAFG00000028453のD1及びD2ドメインのアミノ酸配列）で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　f）配列番号8で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　g）配列番号8で示されるアミノ酸配列と少なくとも80％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　h）ENSCAFG00000028453のオルソログのD1及びD2ドメインを含むタンパク質から選択される少なくとも１つのタンパク質である。

　また、本発明のLILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質は、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する限り、該D1及びD2ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号8で示される、ENSCAFG00000028453のD1及びD2ドメインのアミノ酸配列）中の1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、該D1及びD2ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号8で示されるアミノ酸配列）に、1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、該D1及びD2ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号8で示されるアミノ酸配列）中の1～20個、好ましくは1～10個、より好ましくは1～数（5、4、3若しくは2）個のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、又はそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含むあるいはからなるタンパク質であってもよい。性質の似たアミノ酸（例：グリシンとアラニン、バリンとロイシンとイソロイシン、セリンとトレオニン、アスパラギン酸とグルタミン酸、アスパラギンとグルタミン、リシンとアルギニン、システインとメチオニン、フェニルアラニンとチロシン等）同士の置換等であれば、さらに多くの個数の置換等があり得る。

　本発明のLILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質は、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する限り、該LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質のアミノ酸配列（例：配列番号8で示されるアミノ酸配列）との類似性が80％以上のアミノ酸配列を含むあるいはからなるタンパク質であってもよく、85％以上（86％、87％、88％、又は89％以上）が好ましく、90％以上（91％、92％、93％、又は94％以上）がより好ましく、95％以上（96％、97％、又は98％以上）がさらに好ましく、99％以上がさらに一層好ましい。

　本発明で用いるMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質やLILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質は、それらの塩、水和物、溶媒和物等であってもよい。

　本発明で用いる「MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質」（以下、「本発明の物質」と略記する場合がある。）は、MHC class IaとLILRB3との結合、より具体的には、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と、（細胞に発現している）LILRB3のD1及びD2ドメインとの結合が阻害される限り、特に限定されない。具体的には、例えば、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質（ドミナントネガティブ変異体等を含む）、LILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体（中和抗体等を含む）、アプタマー、LILRB3の発現阻害薬等が挙げられる。

　本発明で用いるLILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体は、自体公知の手段を用いてポリクローナル又はモノクローナル抗体として得ることができる。あるいは、市販品を用いてもよい。本発明で使用される抗体の由来は特に限定されるものではないが、好ましくは哺乳動物由来であり、より好ましくはヒト由来の抗体である。哺乳動物由来のモノクローナル抗体としては、ハイブリドーマに産生されるもの、及び遺伝子工学的手法により抗体遺伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主に産生されるもののいずれもでよい。抗体産生ハイブリドーマは、自体公知の方法により作製することができ、例えば、LILRB3のD1及びD2ドメイン又はその一部を抗原として使用して、該抗原を通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞をスクリーニングすることによって作製することができる。

　本発明で用いるアプタマーは、核酸アプタマーであっても、ペプチドアプタマーであってもよい。核酸アプタマーの場合、該核酸は、DNAであってもRNAであってもよく、あるいはDNA/RNAキメラであってもよい。また、リボース、リン酸骨格、核酸塩基、アミノ酸残基、両末端部分に修飾が加えられた核酸又はペプチドであってもよい。核酸アプタマーは、二本鎖であっても一本鎖であってもよいが、好ましくは一本鎖である。本発明のアプタマーは、当業者において周知の方法を用いて選別することができる。限定はしないが、例えば、SELEX法（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）（Tuerk, C. and Gold, L., 1990, Science, 249: 505-510）や酵母のTwo-hybrid法により選別することができる。

　本発明で用いるLILRB3の発現阻害薬は、LILRB3をコードする遺伝子の転写レベル、転写後調節のレベル、タンパク質への翻訳レベル、翻訳後修飾のレベル等の如何なる段階で作用するものであってもよい。従って、LILRB3の発現阻害薬としては、例えば、LILRB3をコードする遺伝子の転写を阻害する核酸（例：アンチジーン）、初期転写産物からmRNAへのプロセッシングを阻害する核酸、mRNAからタンパク質への翻訳を阻害するか（例：アンチセンス核酸、miRNA）あるいはmRNAを分解する（例：siRNA、リボザイム、マイクロRNA(miRNA)）核酸などが含まれる。

　siRNAは、LILRB3遺伝子のcDNA配列情報に基づいて、例えば、Elbashirら（Genes Dev., 15, 188-200 (2001)）の提唱する規則に従って設計することができる。また、siRNAの前駆体であるショートヘアピンRNA（shRNA）は、ループ構造を形成し得る任意のリンカー配列（例えば、5～25塩基程度）を適宜選択し、siRNAのセンス鎖とアンチセンス鎖とを該リンカー配列を介して連結することにより設計することができる。

　siRNA及び／又はshRNAの配列は、種々のwebサイト上に無料で提供される検索ソフトを用いて検索が可能である。このようなサイトとしては、例えば、Dharmaconが提供するsiDESIGN Center（http://dharmacon.horizondiscovery.com/jp/design-center/?rdr=true&LangType=1041&pageid=17179928204）、GenScriptが提供するsiRNA Target Finder（https://www.genscript.com/tools/sirna-target-finder）等が挙げられるが、これらに限定されない。

　miRNAは、種々のwebサイト上に無料で提供される標的予測ソフトを用いて検索が可能である。このようなサイトとしては、例えば、米国ホワイトヘッド研究所が公開しているTargetScan（http://www.targetscan.org/vert_72/）、ギリシアのアレクサンダー・フレミング生体医科学研究センターが公開しているDIANA-micro-T-CDS（http://diana.imis.athena-innovation.gr/DianaTools/index.php?r=microT_CDS/index）等が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、チェザレー大学・パスツール研究所等が公開している、標的mRNAに作用することが実験的に証明されているmiRNAに関するデータベースであるTarBase（http://carolina.imis.athena-innovation.gr/diana_tools/web/index.php?r=tarbasev8/index）を用いて、LILRB3をコードするmRNAを標的とするmiRNAを検索することもできる。

　siRNAは、mRNA上の標的配列のセンス鎖及びアンチセンス鎖をDNA/RNA自動合成機でそれぞれ合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約90～約95℃で約1分程度変性させた後、約30～約70℃で約1～約8時間アニーリングさせることにより調製することができる。また、siRNAの前駆体となるshRNAを合成し、これをダイサー（dicer）を用いて切断することにより調製することもできる。miRNA及びpre-miRNAは、それらの配列情報に基づいて、DNA/RNA自動合成機で合成することができる。

　アンチセンス核酸は、DNAであってもRNAであってもよく、あるいはDNA/RNAキメラであってもよい。アンチセンス核酸がDNAの場合、標的RNAとアンチセンスDNAとによって形成されるRNA:DNAハイブリッドは、内在性RNase Hに認識されて標的RNAの選択的な分解を引き起こすことができる。アンチセンス核酸の標的領域は、該アンチセンス核酸がハイブリダイズすることにより、結果としてタンパク質への翻訳が阻害されるものであればその長さに特に制限はなく、タンパク質をコードするmRNAの全配列であっても部分配列であってもよく、短いもので約10塩基程度、長いものでmRNA若しくは初期転写産物の全配列が挙げられる。また、アンチセンス核酸は、標的mRNAや初期転写産物とハイブリダイズしてタンパク質への翻訳を阻害するだけでなく、二本鎖DNAであるこれらの遺伝子と結合して三重鎖（トリプレックス）を形成し、RNAへの転写を阻害し得るもの（アンチジーン）であってもよい。

　アンチセンス核酸は、標的遺伝子のcDNA配列若しくはゲノミックDNA配列に基づいてmRNA若しくは初期転写産物の標的配列を決定し、市販のDNA/RNA自動合成機を用いて、これに相補的な配列を合成することにより調製することができる。

　本発明の剤は、非経口（例：静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、膣内、筋肉内、経鼻、直腸内、口腔内、眼内、耳内、舌下等）用製剤、又は経口用製剤として調製され、使用される。経口的に投与する場合には、食前、食後、食間を問わない。本発明の剤は、例えば、生理食塩水等の溶媒で所定の濃度及び用量に希釈して、薬学的に許容可能な添加剤を加えた製剤として調製され、使用される。本発明の剤は、医薬組成物として調製されてもよい。

　本発明の剤の剤形としては、例えば、水、生理食塩水等の希釈液又は分散媒に有効量のMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質、あるいはMHC class IaとLILRB3のとの結合を阻害する物質を溶解、分散、乳化させた注射剤、クリーム、軟膏、飲料剤、エアロゾル、皮膚ゲル、点眼剤、点鼻剤等の液剤；錠剤、カプセル剤、散剤、粉末製剤、顆粒剤、錠剤、徐放剤、坐薬等の固形剤などを用いることができ、これらは有効成分がリポソームや徐放性材料等に封入された封入体や担体に担持された担持体などの形態であってもよい。本発明の剤の剤形は、単位用量形態の製剤であってもよく、複数投与形態の製剤であってもよい。

　経口剤としては、錠剤、散剤、粉末製剤、顆粒剤、細粒剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤、チュワブル剤、液剤、乳剤、マイクロカプセル剤、懸濁剤、エリキシル剤、シロップ剤、徐放性製剤等が挙げられ、これらは有効成分がリポソームや徐放性材料等に封入された封入体や担体に担持された担持体などの形態であってもよい。

　非経口剤としては、水、生理食塩水等の希釈液又は分散媒に有効量のアドレノメデュリン若しくはその修飾体、若しくはそれらの誘導体、又はそれらの塩を溶解、分散、乳化させた注射剤、輸液、クリーム、軟膏、エアロゾル、皮膚ゲル、点眼剤、点鼻剤等の液剤が挙げられる。或いは、粉末製剤、経皮パッチ剤、ローション剤、軟膏剤、パップ剤又は坐剤の形態であってもよい。

　前記薬学的に許容可能な医薬品添加剤は、当業者に公知の、安定化剤、抗酸化剤、pH調整剤、緩衝剤、懸濁剤、乳化剤、界面活性剤等の添加物を添加して、調製することができる。これらの医薬品添加剤の種類及びその用法・用量は、医薬品添加物事典2007（日本医薬品添加剤協会編、薬事日報社、2007年7月）などに記載され、これらの記載に従って調製し、使用することができる。

　具体的には、安定化剤として、例えば、酒石酸、クエン酸、コハク酸、フマル酸等の有機酸が、抗酸化剤として、例えば、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン又は没食子酸プロピル等が、pH調整剤として、例えば、希塩酸又は水酸化ナトリウム水溶液等が、緩衝剤として、例えば、クエン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸若しくはアスコルビン酸又はその塩類、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、アスパラギン酸、アラニン若しくはアルギニン又はその塩類、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、水酸化マグネシウム、リン酸若しくはホウ酸又はその塩類が、懸濁剤又は乳化剤として、例えば、レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート又はポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン共重合物等が、界面活性剤として、例えば、ポリソルベート80、ラウリル硫酸ナトリウム又はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が、使用できるが、これらに限定されない。

　本発明の剤の投与対象としては、ヒト、ヒト以外の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル等）等が挙げられる。なお、ヒト以外の哺乳動物に適応する場合、本発明の剤の投与量は、動物の体重や大きさに応じて適宜加減すればよい。

　本発明の剤について、成人1日あたりの有効成分であるMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、あるいはMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質の投与量は、性別、年齢、体重、その症状、投与経路、剤型等によって適宜調整することができる。例えば、有効成分がタンパク質の場合、通常、約0.0001 mg/kg～約1,000 mg/kgの範囲で選択し得る。あるいは、対象（患者）あたり、例えば、約0.001 mg/body～約1,00000 mg/bodyの範囲で選択し得る。しかしながら、本発明の剤は、上記投与量に制限されるものではない。

　本発明の剤は、上記１日あたりの投与量を、一度に、又は複数回に分けて投与してもよい。また、投与のタイミングは、食前、食後、食間を問わない。また投与間隔は特に限定されないが、毎日でも、隔日でも、間欠投与であってもよい。投与期間は特に限定されないが、長期投与が可能である。

　本発明の細胞競合の制御剤が、細胞競合を促進するものである場合、該細胞競合により排除される細胞（例：変異細胞等）は、後述する実施例にて示すように、caspase陽性細胞となっており、細胞死（例：アポトーシス）が誘導され得る。そのため、該制御剤は、単独で、がん（前がん状態も含む）の予防や治療に適している。また、がんの治療（例：外科的治療）後においても、該がんの転移や再発に関わる細胞を、該制御剤にて排除することができ、該排除される細胞は、上記同様にcaspase陽性細胞となっており、細胞死（例：アポトーシス）が誘導され得る。そのため、該制御剤は、単独で、がんの転移や再発の予防や治療にも適している。
　さらに、上述した通り、本発明の細胞競合の制御剤により排除される細胞は、細胞死（例：アポトーシス）が誘導されている可能性が高く、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例：抗PD-1抗体等）に耐性を持つようながんにおいても、本発明の細胞競合の制御剤と後述するような薬剤とを併用することで、より優れたがんの予防あるいは治療効果が期待され得る。
　本発明の細胞競合の制御剤が、細胞競合を抑制するものである場合、後述する実施例からも理解されるように、例えば、移植細胞を所望する場所に維持させる等のために適している。また、例えば、細胞移植の効率をさらに高めるために、後述するような薬剤と併用してもより。

　上述の通り、本発明の剤は、他の薬剤及び/又は他の治療方法と併用（併用剤）、即ち、組み合わせて使用してもよい。併用に際しては、本発明の剤と、他の薬剤とが単一の医薬の形態で提供されてもよく、別々に製剤化された複数の製剤を含む医薬組合せ又はキットの形態で提供されてもよい。本発明の剤と併用する薬剤の投与時期は限定されず、本発明の剤と併用する薬剤とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、別々に（例：連続、時間を置いて等）投与してもよい。併用する薬剤の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与経路、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。

　本発明の剤が、細胞競合の促進剤の場合、前記他の薬剤は、例えば、抗がん剤又は抗ウイルス剤の場合がある。本発明の剤が、細胞競合を抑制剤の場合、前記他の薬剤は、免疫抑制剤、移植臓器の拒絶反応抑制剤、及び／又は移植後の生着促進剤の場合がある。

　本発明の細胞競合の促進剤において、前記他の薬剤としての抗がん剤は、アルキル化剤、細胞傷害性抗生剤、プラチナ製剤、代謝拮抗剤、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、ホルモン剤、DNA修飾酵素阻害剤、プロテオソーム阻害剤、アルカロイド剤、I型及びII型トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、サイトカイン製剤、ホルモン剤、免疫チェックポイント阻害剤、ナチュラルキラー細胞活性化剤、indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO)阻害剤、モノクローナル抗体、並びに、その他の分子標的治療剤を含むが、これらに限られない。

　前記抗がん剤は、より具体的には、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、オキザリプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、イリノテカン、SN-38、アクチノマイシンＤ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、アザチオプリン、フルオロウラシル、マイトマイシンC、ドセタキセル、シクロホスファミド、カペシタビン、エピルビシン、ゲムシタビン、ミトキサントロン、ロイコボリン、ビノレルビン、トラスツズマブ、エトポシド、エストラムスチン、プレドニゾン、インターフェロンα、インターロイキン-2、ブレオマイシン、イホスファミド、メスナ、アルトレタミン、トポテカン、シタラビン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、メルカプトプリン、チオグアニン、フルダラビン、ゲムツズマブ、イダルビシン、ミトキサントロン、トレチノイン、アレムツズマブ、クロランブシル、クラドリビン、イマチニブ、エピルビシン、ダカルバジン、プロカルバジン、メクロレタミン、リツキシマブ、デニロイキンジフチトクス、トリメトプリム／スルファメトキサゾール、アロプリノール、カルムスチン、タモキシフェン、フィルグラスチム、テモゾロマイド、メルファラン、ビノレルビン、アザシチジン、サリドマイド、マイトマイシン、レゴラフェニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ラムシルマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、クリゾチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、レンバチニブ、ラパチニブ、ペルツズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ベムラフェニブ、エベロリムス、テムシロリムス、ベバシズマブ、ゲルダナマイシンなどを含むが、これらに限定されない。

　本発明の細胞競合の促進剤、前記他の薬剤としての抗ウイルス剤は、インターフェロン、ヌクレオシド及びヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、融合阻害剤、成熟阻害剤、グアノシン類似体、プリジン類似体、ピリミジン類似体、及び、上記のクラスのいずれにも含まれない、当技術分野で認識されている他の「未分類の」抗ウイルス剤（例えば、フォスカルネット及びミルフォホシン）を含むが、これらに限定されない。

　前記抗ウイルス剤は、より具体的には、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アムドキソビル、アンプレナビル、アプラビロク、アプリシタビン、アルビドール、アタザナビル、ベビリマット、BMS-488043、ボセプレビル、ブリブジン、シドフォビル、DCM205、ドコサノール、デラビルジン、ジダノシン、ダルナビル、エファビレンツ、エルビテグラビル、エルブシタビン、エムトリシタビン、エンフビルチド、没食子酸エピガロカテキン、エトラビリン、ファムシクロビル、フォサムプレナビル、ガンシクロビル、グロボイドナンＡ、グリフィスシン、イバリズマブ、イドクスウリジン、インジナビル、ラミブジン、ロピナビル、ロビリデ（loviride）、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、オセルタミビル、ペグ化インターフェロンα-2a、ペグ化インターフェロンα-2b、ペンシクロビル、ペラミビル、プレリキサフォル、PRO 140、ラシビル、ラルテグラビル、リトナビル、リバビリン、リマンタジン、ルリピビリン、サキナビル、スタンピジン、スタブジン、テノフォビル、チプラナビル、TNX-355、トリフルリジン、トロマンタジン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビオン、ビラミジン、ビベコン、ザルシタビン、ザナミビル、及びジドブジンなどを含むが、これらに限定されない。

　本発明の細胞競合の抑制剤において、前記他の薬剤としての免疫抑制剤は、ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、アザチオプリン、タクロリムス水和物、15-デオキシスペルグアリン、ナタリズマブ、ラパマイシン、エタネルセプトを含むが、これらに限られない。

　本発明において上記併用剤の投与量は、副作用が問題とならない範囲でどのような量を設定することも可能である。併用する薬剤の1日投与量は、症状の程度、投与対象の年齢、性別、体重、感受性差、投与の時期、間隔、医薬製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類などによて異なり、特に限定されない。

（2）本発明の制御方法等
　本発明の他の実施形態は、細胞競合の制御方法であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合（より具体的には、MHC class Iaのα3ドメインとLILRB3のD1及びD2ドメインとの結合）を阻害する物質の治療有効量をこれを必要とする対象に投与することを含む、方法である。
　また、該細胞競合の制御方法において、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質又はLILRB3に対するアゴニスト抗体が投与される場合、該制御方法は、がん又はウイルス感染症の予防又は治療であり得る。
　さらに、細胞競合の制御方法において、MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質が投与される場合、該制御方法は、臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善、又は神経変性疾患、筋変性疾患その他の各種変性疾患の症状進展の抑制であり得る。
　また、本発明のさらなる実施形態は、細胞競合の制御するための医薬の製造におけるMHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3のとの結合を阻害する物質の使用である。
　上記本発明の制御方法等については、上記（1）本発明の制御剤の内容を全て援用し得る。

　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。本明細書の詳細な説明及び実施例は本発明の実施形態を例示するものであり、本発明の権利範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

　本明細書の実施例におけるクローニング、ゲノム編集、細胞培養、顕微鏡観察や、タンパク質の発現、誘導及び精製等は、商業的に入手可能なベクター、試薬及びキット等を用いて製造者の指示書に従って行った。

＜RasV12発現細胞での抗原提示の抑制によるMDCK正常細胞の異常細胞の排除能の抑制＞
1．実験方法
RasV12発現細胞の樹立
　イヌの腎臓尿細管上皮細胞由来の株細胞のMDCK細胞にpTRE3G-GFP-RasV12とHyper PiggyBac transposase発現ベクターをNucleofectionにより遺伝子導入した。遺伝子導入したMDCK細胞をBlasticidin選別し、生存細胞コロニーを単離することで、モノクローナルなpTRE3G-GFP-RasV12発現MDCK安定細胞株を得た。さらにドキシサイクリン（200 ng/mL）を添加してから24時間後に、蛍光顕微鏡でGFPの蛍光の有無を指標として、全ての細胞でより均一にGFP-RasV12が発現しているRasV12発現MDCK細胞を最終的に使用可能な安定細胞株として得た。以下の実施例では前記RasV12発現MDCK細胞を異常細胞として正常MDCK細胞との間での細胞競合を検討した。

TAPl遺伝子欠損型のRasV12発現細胞の樹立
　テトラサイクリン誘導性Cas9安定MDCK細胞株（pCW-Cas9-MDCK）に、配列番号3のガイド配列（標的配列（gRNA））を挿入したpCDH-QC-sgRNA（Maruyama et al.,Nat. Biotechnol.2015）を遺伝子導入した。

　遺伝子導入後、doxicycline（200 ng/mL）にてCas9を誘導した。さらに、hygromycin （400 μg/mL）存在下で7日間培養することで、pCDH-QC-sgRNAを持つ細胞のみを選択した。選択された細胞は、ウェルあたり細胞０．５個の濃度にて限界希釈することで、単一クローンを得た。その後、シーケンス解析により遺伝子欠損を持つクローンをTAPl遺伝子のKO細胞とした。Clonal effectを排除するため、2つのクローンの細胞（TAP-KO#1及びTAP-KO#2）を選択し、上記RasV12発現細胞樹立と同様の操作でPB-pTRE3G-RasV12ベクターを用いて、TAPl遺伝子欠損型RasV12発現MDCK細胞を樹立した。

正常細胞と異常細胞との間での細胞非自律的効果の評価
　Type I-A Collagen及び5X DMEM溶液、pH調整緩衝溶液とを7:2:1の比率で氷上で混合し、コラーゲンゲル溶液を作製した。12ウェルプレートに15 mmカバースリップを入れ、その上に500 μLのコラーゲンゲル溶液を入れ、37℃で30分間静置して固めた。

　MDCK正常細胞と、RasV12発現MDCK細胞（TAPl遺伝子野生型細胞（TAP-WT-RasV12）又はTAPl遺伝子欠損型細胞（TAP-KO#1-RasV12又はTAP-KO#2-RasV12））とを50:1の比率になるように、それぞれ1×10⁶個と2×10⁴個とを混合し、コラーゲンゲル上に播種し、単層を形成するまで37℃で8-12時間培養した後、ドキシサイクリン処理（200 ng/mL）を24時間行った。

　ドキシサイクリン処理を24時間行った後、4% Paraformaldehyde/ PBSを加え、遮光しながら15分間室温でインキュベーションし、細胞を固定した。固定後、0.1% Triton X-100/ PBSを加え、遮光しながら15分間室温でインキュベーションし、膜透過処理した。1% BSA/ PBSで遮光しながら1時間室温で静置することでブロッキングをおこなった。続いて、1% BSA/PBSで200倍に希釈したAlexa-Fluor-568-conjugated phalloidinと室温で1時間反応させた。さらにPBS洗浄を5分×3回おこなった後に、PBSで4,000倍に希釈したHoechst 33342を室温で10分間反応させた。最後にMowiolを用いてスライドガラス上に封入した。

　Filaminの集積は、オープンソースImageJを用いて統計処理した(図1B)。Filaminの集積から起こるRasV12発現細胞（TAP-WT-RasV12、TAP-KO#1-RasV12及びTAP-KO#2-RasV12）の排除効率は、共焦点顕微鏡下で、細胞2から8個からなるGFP蛍光陽性細胞のコロニーを探し出し、そのなかで頭頂側へ抜け出した数をカウントし、最終的にRasV12発現細胞の総数に対する抜け出した細胞の数の割合で示した。

　RasV12発現MDCK細胞の抗原提示がMDCK正常細胞の排除能を促進するかを検討するために、TAPl遺伝子野生型のRasV12発現細胞（TAP-WT-RasV12）のMDCK正常細胞による排除効率と、TAPl遺伝子欠損型のRasV12発現細胞（TAP-KO#1-RasV12及びTAP-KO#2-RasV12）のMDCK正常細胞による排除効率とを比較した。

2．実験結果
　RasV12発現細胞（TAP-WT-RasV12、TAP-KO#1又はTAP-KO#2）とMDCK正常細胞を共培養すると、正常細胞と異常細胞との間での細胞非自律的効果によってMDCK正常細胞側でのFilaminの集積が確認された(図1A)。一方でTAPl遺伝子欠損型のRasV12発現細胞（TAP-KO#1及びTAP-KO#2）を取り囲むMDCK正常細胞でのFilaminの集積は、TAPl遺伝子野生型のRasV12発現細胞（TAP-WT-RasV12）を取り囲むMDCK正常細胞でのFilaminの集積より統計学的有意に抑制された(図1B)。また、Filaminの集積から起こるRasV12発現細胞の排除効率を検討したところRasV12発現細胞（TAP-WT-RasV12）における排除効率と比較してTAPl遺伝子欠損型のRasV12発現細胞（TAP-KO#1-RasV12及びTAP-KO#2-RasV12）における排除効率が抑制が確認された(図1C、1D)。

＜DLAファミリーのDLA88による異常細胞の排除促進の正への制御＞
１．実験方法
　DLA88-KO細胞、DLA79-KO細胞、DLA64-KO細胞及びDLA12-KO細胞の樹立
　抗原提示に関与するタンパク質としてMHC class Iタンパク質のイヌにおけるオルソログであるDLAファミリーのDLA12、DLA64、DLA79及びDLA88に注目した。テトラサイクリン誘導性Cas9安定MDCK細胞株（pCW-Cas9-MDCK）に、配列番号4～7（それぞれ、DLA88、DLA79、DLA64、及びDLA 12）のガイド配列（標的配列（gRNA））を挿入したpCDH-QC-sgRNA（Maruyama et al.,Nat. Biotechnol.2015）を遺伝子導入した。

　遺伝子導入後、doxicycline（200 ng/mL）にてCas9を誘導した。さらに、hygromycin （400 μg/mL）存在下で7日間培養することで、pCDH-QC-sgRNAを持つ細胞のみを選択した。選択された細胞は、ウェルあたり細胞0.5個の濃度にて限界希釈することで、単一クローンを得た。その後、シーケンス解析により遺伝子欠損を持つクローンをそれぞれの遺伝子のKO細胞とした。以下では、DLA88遺伝子欠損型RasV12発現細胞、DLA79遺伝子欠損型RasV12発現細胞、DLA64遺伝子欠損型RasV12発現細胞及びDLA12遺伝子欠損型RasV12発現細胞を、それぞれ、DLA88-KO-RasV12、DLA79-KO-RasV12、DLA64-KO-RasV12及びDLA12-KO-RasV12という。

　Clonal effectを排除するため、各遺伝子欠損型RasV12発現細胞について2つのクローンの細胞を選択し、上記RasV12発現細胞樹立と同様の操作でPB-pTRE3G-RasV12ベクターを用いて、遺伝子欠損型RasV12発現細胞を樹立した。

　実施例１と同様に、Filaminの集積を測定し、Filaminの集積から起こる異常細胞（DLA88-KO-RasV12、DLA79-KO-RasV12、DLA64-KO-RasV12及びDLA12-KO-RasV12）の排除効率を算出した。また、実施例１と同様に、細胞を固定した後、蛍光顕微鏡で観察した。

２．実験結果
　DLA12、DLA64、DLA79及びDLA88をCRISPR/Cas9システムによって遺伝子欠損させた結果、DLA88の遺伝子欠損RasV12発現細胞（DLA88-KO-RasV12）でのみ、MDCK正常細胞による排除効率が抑制された(図2A)。このことから、DLA88がRasV12発現細胞の排除を正に制御していることが示された。さらに、共焦点顕微鏡によって異常細胞（DLA88-KO-RasV12、DLA79-KO-RasV12、DLA64-KO-RasV12及びDLA12-KO-RasV12）の挙動を解析したところ、DLA88の遺伝子欠損RasV12発現細胞（DLA88-KO-RasV12）は、DLA88遺伝子が欠損していないRasV12発現細胞（DLA-WT-RasV12、DLA79-KO-RasV12、DLA64-KO-RasV12及びDLA12-KO-RasV12）で見られるapical extrusionではなく、基底側へ潜り込むbasal protrusionを示した(図2B)。

＜DLA88の細胞外ドメインタンパク質による異常細胞の排除の促進＞
1．実験方法
組換えタンパク質の作製
DLA88 α(alpha)3
　DLA88の細胞外ドメインは3つのαドメインから構成されている（図3A）。そこで、α1及びα2ドメインの組換えタンパク質（DLA88-alpha1/2）と、α3ドメインの組換えタンパク質（DLA88-alpha3）とを作製した。DLA88-alpha3の組換えタンパク質（配列番号1）及びDLA88-alpha1/2の組換えタンパク質を作製するために、DLA88-alpha3をコード化するDNA断片（配列番号２）及びDLA88-alpha1/2をコード化するDNA断片をpGEX-6p-1のEcoRI/XhoI制限酵素サイトに挿入することで、発現用プラスミドpGEX-6p-1-DLA88-alpha3及びpGEX-6p-1-DLA88-alpha1/2を作製した。

　pGEX-6p-1-DLA88-alpha3又はDLA88-alpha1/2によって形質転換したBL21の培養液中にIPTG(終濃度0.1 mM)を加え、25℃で2時間、組換えタンパク質の発現を誘導した。集菌した大腸菌を可溶化し、抽出液からGluthatione Sepharose 4Bを用いて、DLA88-alpha3（配列番号１）及びDLA88-alpha1/2の組換えタンパク質を精製した。

正常細胞と異常細胞との間での細胞非自律的効果の評価
　ドキシサイクリン処理に加えて、組換えタンパク質処理（30 nM又は300 nM）を行った以外は、実施例1と同様に、細胞非自律的効果を評価した。

2．実験結果
　DLA88の細胞外ドメインは3つのαドメインから構成されている。そこで、α3ドメインの組換えタンパク質を作製した。また、正常細胞:変異細胞=50:1の細胞比で混和し単一細胞層を形成させた後に、ドキシサイクリンでGFP-RasV12タンパク質を発現させた。ドキシサイクリンと同時に組換えタンパク質DLA88-α3を処理すると、濃度依存的に変異細胞の排除が促進された(図3A及び図3B）。また、正常細胞:DLA88欠損変異細胞=50:1の条件でも同組換えタンパク質の存在下では異常細胞の排除を促進した。このことから、DLA88は異常細胞の排除を促進しており、細胞外ドメインの組換えタンパク質は異常細胞の排除を促進する(図3C、図3D）。

LILRB3のノックアウト
1．実験方法
　イヌLILRB3（ENSCAFG00000028453、以下「28453」とも記載）遺伝子をノックアウトするために、実施例2と同様の方法で、配列番号10に記載のLILRB3のガイド配列（標的配列）を用いてゲノム編集を行った。

2．実験結果
　LILRB3（ENSCAFG00000028453、以下「28453」とも記載）をノックアウトすることにより、正常細胞（MDCK細胞）による異常細胞（LILRB3遺伝子欠損型RasV12発現MDCK細胞、28453-KO-RasV12）の排除効率が統計学的有意に低下した（図4A）。

28453の細胞外ドメインD1-D2組換えタンパク質の製造
1．実験方法
28453 D1-D2
　28453 D1-D2の組換えタンパク質（配列番号8）を作製するために、28453 D1-D2をコード化するDNA断片（配列番号9）をpGEX-6p-1のEcoRI/XhoI制限酵素サイトに挿入することで、発現用プラスミドpGEX-6p-1-28453 D1-D2を作製した（図4B）。

　pGEX-6p-1-DLA88-alpha3によって形質転換したBL21の培養液中にIPTG(終濃度0.1 mM)を加え、25℃で2時間、組換えタンパク質の発現を誘導した。集菌した大腸菌を可溶化し、抽出液からGluthatione Sepharose 4Bを用いて、28453 D1-D2（配列番号8）の組換えタンパク質を精製した。

2．実験結果
　目的とする「28453-D1/2」（配列番号８）の組換えタンパク質が得られた。

28453-D1/2とDLA88-α3との結合性評価
1．実験方法
　GST-28453-D1/2-HA及びGST-DLA88-α3-Flagを0.1% TritonX-100を含むPBS（0.1%TritonX-100-PBS）中で1:1に混合した。その後、37℃で2時間静置し、抗Flag抗体の担持されたビーズ（以下、「Flagビーズ」という。）を加え30分間、4℃にて転倒混和した。Flagビーズを0.1% TritonX-100-PBSにて3回洗浄した後に、SDS-PAGEにて展開分離した。免疫沈降したGST-DLA88-α3-Flagは抗Flag抗体にて、また共沈してきたGST-28453-D1/2-HAは、抗HA抗体にて検出した。

2．実験結果
　HAで標識した28453-D1/2とFLAGで標識したDLA88-α3とを混合後、免疫沈降させるとHA及びFLAGの両標識を観察した。本結果より、28453-D1/2とDLA88-α3とが結合活性を有することが示された（図4C）。

正常細胞と変異細胞との間での細胞非自律的効果の評価
１．実験方法
　ドキシサイクリン処理に加えて、組換えタンパク質処理（300 nM又は1,000 nM）を行った以外は、実施例1及び3と同様に、細胞非自律的効果を評価した。

2．実験結果
　正常細胞（MDCK細胞）と異常細胞（RasV12発現細胞）との混合培養に300 nM及び1,000 nMの28453-D1/2を添加すると、1,000 nM添加群で統計学的有意な変異細胞の排除率の低下を認めた（図4D）。

DLA88のα3ドメインのみを含む組換えタンパク質と、LILRB3のD1/D2ドメインの組換えタンパク質との結合の化学反応論的解析
1．実験方法
　BLItz^TM（PRIMETECH）を使用して、DLA88-α3とLILRB3-D1/D2の間の動態を分析した。GSTセンサー、抗GST抗体固定化センサー（PRIMETECH）を使用した。GST-DLA88-α3とGST-LILRB3-D1/D2を個別に37℃で2時間インキュベートしました。GST-DLA88-α3をリガンド分子としてGSTセンサーに5分間固定化し、GSTセンサーで完全に覆った。PBS-T（5％Tween-PBS）で30秒間洗浄した後、GST-LILRB3 D1/D2を2分間振動させながら検体としてローディングした。会合動力学（association kinetics）に加えて、解離動力学（dissociation kinetics）をPBS-Tバッファーで2分間評価した。組換えタンパク質GST-GFPを対照として使用した。

２．実験結果
　上記測定の結果、結合定数Ｋｄは6.54±0.28μＭと決定された。

ヒト細胞での細胞競合実験
1．実験方法
　これまでの実施例ではイヌ腎臓尿細管上皮細胞由来の株細胞のMDCK細胞を上皮細胞の競合現象のモデル実験系として用いた。本実施例では、ヒトへの応用を考慮して、ヒト表皮角化細胞の株細胞のHaCaT細胞を用いて検討した。

　MDCK細胞での実施例と同様に、遺伝子導入によりGFP-RasV12が発現しているRasV12発現HaCaT細胞（LILRB3^WT-RasV12）を作成した。正常HaCaT細胞とRasV12発現HaCaT細胞（LILRB3^WT-RasV12）とを30:1の比で混合してRasV12発現HaCaT細胞が異常細胞として細胞競合により頭頂側に排除される効率を実施例1と同様にRasV12発現細胞の総数に対する抜け出した細胞の数の割合として播種20時間後にドキシサイクリン添加後から2時間ごとに測定した。

2．実験結果
　結果を図6に示す。ドキシサイクリンと組換えタンパク質28453-D1/2を同時に添加し処理した場合（LILRB3^WT+28453-D1/2）のRasV12発現HaCat細胞の正常HaCat細胞による排除効率は、ドキシサイクリンの添加後単調増加し、播種44時間後には40％に達した。これに対し、ドキシサイクリンのみを添加した場合（LILRB3^WT）のRasV12発現HaCat細胞の正常HaCat細胞による排除効率はわずかに増えただけであった。この結果から、イヌのLILRB3のD1/D2ドメインの組換えタンパク質はヒトHaCat細胞での細胞競合を促進することが示された。また、LILRB3-KO細胞では、α3処理により排除効率はレスキューされなかった。

ヌードマウスに移植したヒトHaCat細胞及びRasV12発現HaCat細胞の腫瘍形成
1．実験方法
　ヒトHaCat正常細胞（HaCat）：RasV12発現ヒトHaCat細胞（RasV12）を3:1、10:1又は30:1の条件でDLA88-α3存在下又は非存在下でマトリジェルに混合した細胞のペレットをヌードマウスの腹部に移植して、２週間後に形成された腫瘍塊の全体積及び重量を測定した。

2．実験結果
　結果を図７に示す。正常細胞率の増加は腫瘍増殖を抑制したが、これは正常細胞が腫瘍形成に阻害的役割を果たすことを示す。さらに、α3組換えタンパク質の同時注入は、混合条件下で特異的に腫瘍形成を実質的に抑制した。α3の抑制効果は混合割合30:1では観察されなかったが、10:1の割合で最も明確に観察された。10:1の割合では、RasV12細胞は主に凍結切片の腫瘍領域を占め、正常細胞は、α3をなぞるモザイク状の領域を支配的に占めていた。HLA-tKOに対するα３の阻害効果をさらに試験した。RasV12 HLA6tKO細胞の腫瘍サイズは、RasV12 WT細胞よりもわずかに小さかったが、RasV12細胞は腫瘍領域を優位に占めていた。α3処理は、統計的に有意な抑制を示した。これらの結果から、正常細胞を取り巻くLILRB3がα３によって刺激され、排除力（eliminating force）を促進することが示唆される。

HLA-B/LILRB3相互作用による、正常細胞を取り巻く隣接正常細胞の極移動（polar migration）の誘導
1．実験方法
ライブイメージングと粒子画像速度測定
　正常なHaCaT及びHaCaT-RasV12細胞をコラーゲンコーティングしたボトムディッシュ上で30：1の割合で混合し、細胞が単層を形成するまで37℃で16時間培養した。細胞をドキシサイクリン存在下でインキュベートした。インキュベーションの8時間後、JuLI^TMステージ（NanoEntek）を使用して、48時間5分ごとにライブイメージングムービーを取得した。粒子画像速度測定（PIV）分析の場合、2時間あたりの動画はImageJプラグインのPIVにより分析した。PIVパラメータセットは次の通り：NMTの正規化された中央値検定パラメータノイズ（0.3）及びNMTのしきい値（0.8）、DMTの力学平均値検定（Dynamics mean testパラメータC1（0.5）、パラメーターC2（0.3）。

Caspase-3活性の評価
　正常HaCaT細胞とHaCaT-RasV12細胞を50:1で混合し、コラーゲンゲル上に播種した。単相を形成した後に、テトラサイクリン及びα3を添加した。16時間後における細胞を固定化し、切断型Caspase-3を認識する抗体とActinをPallodinにて染色した。サンプルは、共焦点顕微鏡にて観察した。その時のXZ画像を示す。（-）:無処理、(+):α3処理。

2．実験結果
　結果を図8に示す。RasV12細胞は16時間と36時間の間にほとんど除去されるため、16時間から36時間の画像をPIV分析に供した。興味深いことに、正常な細胞の一部は、32時間でのapical extrusionの前に、28時間でRasV12細胞に向かって移動し、4時間後、RasV12細胞は上皮単層から押し出される。RasV12細胞付近の正常細胞のこの極移動は、α3処理で増加したが、極性正常細胞の数はLILRB3ノックアウトによりほとんど消失した（左図）。これらの結果から、MHC-IとLILRB3との相互作用が、隣接正常細胞の極移動を誘導して、RasV12細胞を排除することが示唆される。また、α3ドメインの添加により排除された細胞では、アポトーシスが誘導されていることが実証された（右図）。

　α3を処理したときの正常細胞に囲まれる変異細胞のアポトーシスをCaspase-3の活性化依存的な切断を検出できる抗体で検出した。α3の処理で、共培養時に排除される細胞が増加するとともに、排除された細胞において切断されたCaspase-3陽性細胞が増加した（図8右図）。

　ヒトパピローマウイルス（HPV）は細胞に感染後、癌抑制遺伝子であるScribbleを分解することで、がん化を引き起こすことが知られている。一方で、Scribbleの発現抑制細胞は、周辺正常細胞によって、アポトーシスを誘導されながら排除されることが知られている（図9左図）。

1．実験方法
α3（ECA-1-ex3）ECARを介したScribbleノックダウン細胞の排除
　α3（ECA-1-ex3）ECARを介して、Scribbleノックダウン細胞の排除を促進する。テトラサイクリン誘導性ScribbleノックダウンMDCK細胞（GFP陽性細胞）を、正常細胞もしくは28453（ECAR）と1:10（MDCK:SCRB^KD = 10:1）の割合で混合播種した。単相を形成した後に、テトラサイクリンとα3を添加し、その24時間後における顕微鏡視野中の細胞数に対するGFP陽性細胞（Scribbleノックダウン細胞）の割合を算出した。ns.: not significant, **P< 0.01。

2．実験結果
　結果を図9に示す。SCRB^KD細胞は、35%程度の残存率であったが、α3を処理することで20%程度の残存率となった。これは、α3の効果によってSCRBKD細胞の排除が促進されたためである。また、ECARのノックアウト細胞では、α3の有無に関わらず残存率が増加した。これらのことから、α3はECARを介してSCRB^KD細胞の排除を促進することが示唆された。

1．実験方法
　HPV全ゲノム安定細胞MCF10A細胞の排除は、α3処理によって促進する。
HPVの全ゲノム（HPV18ゲノム）を安定的に保持するMCF10A（HPV18）細胞をCMFDA（緑蛍光染色）によって混合培養後に識別可能とした後に、正常MCF10Aと10:1の割合（Normal MCF10A : HPV18 = 10:1）で混合したのち、播種した。その24時間後における顕微鏡視野中の細胞数に対するGFP陽性細胞（HPV18細胞）の割合を算出した。Cont:HPV18の上皮細胞層における残存率、a3:α3処理時のHPV18細胞の残存率。ns.: not significant, **P< 0.01。

2．実験結果
　結果を図10に示す。HPVの全ゲノムを安定的に保持する細胞(HPV18)の残存率は、α3の処理によって低下した。このことは、HPVの全ゲノムを持つ細胞も、α3によって排除が促進することを意味している。

細胞競合調節因子としての新規細胞膜タンパク質の同定
1．実験方法
LILRB3の誘導レベル及び細胞の除去効率の検証
　LILRB3は共培養特異的に誘導される。正常細胞とRasV12細胞を1:1の比率で0.5 kPaの硬さのシリコーンプレート上で共培養し、単相を形成した後に、テトラサイクリンで8時間処理した。細胞を回収し、定量的PCRにて、LILRB3の誘導レベルを測定し、グラフとして示した。*P < 0.05, **P < 0.01, ****P < 0.001 by Student’s t-test（図11左上図）。

　LILR3は共培養条件下にてタンパク質レベルで正常細胞側で誘導される。正常細胞のみ、RasV12細胞のみ、さらに正常―変異細胞を混和したものをコラーゲンゲル上に播種した後、単相を形成した時点で、テトラサイクリンを加えた。その後、24時間で、細胞を固定化し、膜透過処理を行うことなく、細胞を染色した。抗LILRB3抗体染色、HLA-B。代表的XYイメージ（図１１左図）LILRB3のタンパク質誘導レベルの定量（図11左下図）。Scale bars: 10 μm. *P < 0.05, **P < 0.01, ****P < 0.001 by Student’s t-test。

　MDCKにおけるLILRB3の欠損は、変異細胞の排除を抑制する。MDCKのRasV12細胞をそれぞれ、MDCK-WT, -AltR-KO or -AltR-KO-OE細胞と混和し、コラーゲン上で単相を形成させた後、テトラサイクリンを加えた。その後、24時間での細胞の排除効率を算出した。細胞は、Phalloidin、Hoechstで染色されている。代表的なXZ画像(図12左上図)と排除効率定量化の結果（図12左下図）を示す。 Scale bars: 10 μm. *P < 0.05, **P < 0.01, ****P < 0.001 by Student’s t-test。

　HaCaT正常細胞におけるLILRB3のノックアウトは、変異細胞の排除を抑制する。RasV12 HaCaT細胞を正常なHaCaT-WT, -LILRB3-KO (LILRB3^KO)又は-LILRB5-KO (LILRB5^KO)細胞と混和し、コラーゲン上で単相を形成させた後に、テトラサイクリンを添加した。その後、16時間で細胞を固定化し、Phalloidin及びHoechstで染色した。代表的なXZ画像を示す(図12右上図)。また、排除効率の定量的なデータをグラフとして示す(図12右下図)。 Scale bars: 10 μm. *P < 0.05, **P < 0.01, ****P < 0.001 by Student’s t-test。

2．実験結果
　結果を図１１及び図12に示す。混合条件でのLILRB3 mRNAの非細胞自律的誘導と、RasV12細胞を取り巻く正常細胞で最も相同なLILRB3タンパク質レベルを確認した。正常細胞におけるLILRB3-KOは、apical extrusionを抑制した。

　本発明は、日本国で出願された特願2019-063594（出願日：2019年3月28日）及び特願2019-069777（出願日：2019年4月1日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

　本発明は、がん及びウイルス感染に対する予防又は治療のための医薬として利用できる。また本発明は、臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善、又は神経変性疾患の症状進展の抑制のための医薬としても利用できる。

Claims

　MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質若しくはLILRB3に対するアゴニスト抗体、又はMHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を含む、細胞競合の制御剤。
　前記MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質又はLILRB3に対するアゴニスト抗体を含み、前記細胞競合の制御が、細胞競合の促進である、請求項1に記載の剤。
　前記MHC class IaがHLA-B又はDLA-88である、請求項2に記載の剤。
　前記MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質が、以下：
　a）配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　b）配列番号1で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　c）配列番号1で示されるアミノ酸配列と少なくとも90％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、並びに
　d）DLA-88のオルソログのα3ドメインを含むタンパク質
からなる群から選択される、少なくとも1つのタンパク質を含む、請求項2又は3に記載の剤。
　前記LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である、請求項4に記載の剤。
　前記細胞競合が、非免疫系の正常細胞による異常細胞の排除である、請求項2～5のいずれか1項に記載の剤。
　前記異常細胞が、変異細胞、がん細胞、又はウイルス感染細胞である、請求項6に記載の剤。
　前記細胞競合の制御剤が、がん又はウイルス感染症の予防又は治療剤である、請求項7に記載の剤。
　MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質を含み、前記細胞競合の制御が、細胞競合の抑制である、請求項1に記載の剤。
　前記MHC class IaとLILRB3との結合を阻害する物質が、LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質、LILRB3のD1及びD2ドメインに対する抗体、アプタマー、LILRB3の発現阻害薬からなる群から選択される少なくとも1種類の物質である、請求項9に記載の剤。
　前記LILRB3のD1及びD2ドメインを含むタンパク質が、以下：
　e）配列番号8で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、
　f）配列番号8で示されるアミノ酸配列において1～数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質、
　g）配列番号8で示されるアミノ酸配列と少なくとも80％の類似性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であって、MHC class Iaのα3ドメインを含むタンパク質と特異的に結合する、タンパク質
　h）ENSCAFG00000028453のオルソログのD1及びD2ドメインを含むタンパク質
から選択される少なくとも1つのタンパク質を含む、請求項10に記載の剤。
　前記細胞競合が、非免疫系の正常細胞による移植細胞の排除である、請求項9～11のいずれか1項に記載の剤。
　前記細胞競合の抑制が、臓器移植、組織移植若しくは細胞移植の生着不全の改善、又は神経変性疾患、筋変性疾患の症状進展の抑制である、請求項9～12のいずれか1項に記載の剤。
　他の薬剤及び／又は他の治療方法と併用される、請求項1～13のいずれか1項に記載の剤。