WO2020096190A1 - C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물 - Google Patents

C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물 Download PDF

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fine dust
peptide
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skin
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현진원
하권수
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제주대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to a cosmetic composition for protecting skin against fine dust, a quasi-drug composition, a composition for external application for skin and a health functional food containing C-peptide as an active ingredient.
  • Skin is a part of the body that is directly exposed to the external environment. It acts not only as a protective film to protect vital organs of our body, but also regulates moisture evaporation and protects the body from external infections.
  • the external skin no matter how externally the external skin is a body part that is directly exposed to the external environment, it not only acts as a protective film protecting important organs of our body, but also regulates moisture evaporation and protects the body from external infections.
  • the stress from the outside such as excessive ultraviolet rays and a contaminated environment, causes skin irritation and eventually leads to skin aging.
  • Fine dust, yellow dust, and smog mixed with harmful substances such as heavy metals caused by industrialization in China are recognized as the main causes of skin aging and skin problems.
  • Fine dust is a very small material that is invisible to our eyes. It refers to a particulate matter with a diameter of less than 10 ⁇ m that floats or scatters in the atmosphere for a long time. It is an air pollutant that occurs when fossil fuels such as coal and petroleum are burned, or when it comes out of emissions from manufacturing industry, automobile fumes, etc., and adsorbs to the lungs through the bronchi and causes various lung diseases. According to the Ministry of Environment in March particulate matter (PM 10) in diameter or less, depending on 10 ⁇ m intellectual confusing different terms are used for fine dust in our country and internationally 2017 was dust floating in diameter 2.5 ⁇ m seconds or less particulate matter (PM 2.5 ) is defined as fine dust.
  • Contaminants such as fine dust and yellow sand cause stress in the skin, which is generated by free radicals.
  • Reactive oxygen acts as an intracellular signaling substance that plays an important role in maintaining normal cellular functions, such as activation of electron transporters and white blood cells in the mitochondria.
  • free radicals are unstable and have high oxidizing power, so they react easily with biomaterials. If they cannot be removed from the human body, they cause oxidative stress.
  • the C peptide has a skin protective effect against fine dust, and the present invention was completed.
  • An object of the present invention is to provide a cosmetic composition for protecting skin against fine dust, which includes a C-peptide as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for skin protection against fine dust, including C-peptide as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a health functional food for skin protection against fine dust, including a C-peptide as an active ingredient.
  • the present invention relates to a cosmetic composition for protecting skin against fine dust, including a C-peptide as an active ingredient, and can be used as a cosmetic composition for protecting skin against fine dust.
  • Figure 3 is a result of comparing the inhibitory effect of C-peptide on oxidative lipid modification induced by fine dust (* p ⁇ 0.05, #p ⁇ 0.05 compared to the untreated and treated fine dust groups respectively).
  • the present invention provides a cosmetic composition for skin protection against fine dust, comprising a C-peptide as an active ingredient.
  • the cosmetic composition of the present invention includes a C-peptide.
  • the cosmetic composition comprising the C-peptide has a skin protective effect against fine dust.
  • C-peptide is a peptide secreted with insulin from mammals, birds, and the like, and its precursor proinsulin is composed of insulin and C-peptide, and is produced by beta cells of the pancreatic Langerhans island like insulin. , Consisting of 21 to 31 amino acid sequences. Specifically, C-peptide is a degradation product that is released into the blood simultaneously with insulin when insulin is formed while the proinsulin is cleaved by endopeptidase.
  • amino acid sequence of the C-peptide (SEQ ID NO: 55-89 of NCBI number: NP_000198.1) is the same as SEQ ID NO: 1.
  • the C-peptide was confirmed to have no cytotoxicity in an experiment using a human keratinocyte cell line (HaCaT) (FIG. 1), and the C-peptide was a human keratinocyte cell line. It was confirmed that the inhibition of the generation of free radicals in cells caused by the treatment of particulate matter (PM) (FIG. 2) and the oxidative lipid modification (FIG. 3) and protein modification (FIG. 4). . In addition, it was confirmed that the inhibition of DNA damage induced by fine dust (FIG. 5), it was confirmed the skin protective effect on the fine dust of the C-peptide.
  • PM particulate matter
  • FIG. 3 oxidative lipid modification
  • FIG. 4 protein modification
  • the C-peptide can be used as an active ingredient in a cosmetic composition for skin protection against fine dust.
  • skin protection means inhibiting skin damage, inhibiting skin cell death or promoting skin cell growth.
  • the C-peptide may exhibit skin protective activity through scavenging action of reactive oxygen species (ROS) generated due to fine dust, and thus skin protection against fine dust. In addition to the effect, it also has an antioxidant effect.
  • ROS reactive oxygen species
  • the cosmetic composition for skin protection against fine dust of the present invention may contain 0.001 to 100% by weight of C-peptide relative to the total weight of the composition, specifically, 0.01 to 50% by weight of C-peptide, It is not limited thereto.
  • the cosmetic composition of the present invention may include, without limitation, ingredients that are normally allowed in addition to the active ingredient, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, fragrances, and common adjuvants, and carriers. can do.
  • ingredients that are normally allowed in addition to the active ingredient for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, fragrances, and common adjuvants, and carriers. can do.
  • the cosmetic composition according to the present invention is a solution, ointment for ointment, cream, foam, nutrient longevity, softening longevity, pack, softening water, emulsion, makeup base, essence, soap, liquid detergent, bathing agent, sunscreen cream, sun oil, suspension, It can be prepared in one or more formulations selected from the group consisting of emulsions, pastes, gels, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, patches and sprays. It is not limited.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, and for example, oils, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols as common ingredients, Thickeners, chelating agents, pigments, preservatives, fragrances, etc. may be appropriately blended, but are not limited thereto.
  • the cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition of the present invention varies depending on the formulation.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for skin protection against fine dust, comprising a C-peptide as an active ingredient.
  • quasi-drug refers to articles that are used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating or preventing a disease of a person or animal, and which have less action than medicines, for example, According to the article, quasi-drugs exclude products used for the purpose of medicines, textiles and rubber products used for the treatment or prevention of disease in humans and animals, and have little or no direct action on the human body, and are similar to non-equipment or machinery. This includes sterilization and pesticides to prevent infectious diseases.
  • the type or formulation of the quasi-drug composition of the present invention is not particularly limited, but may preferably be a disinfecting cleanser, shower foam, green, wipe, detergent soap, hand wash, humidifier filler, mask, ointment or filter filler.
  • the composition of the present invention When the composition of the present invention is included in a quasi-drug for the purpose of skin protection against fine dust, the composition may be used as it is or used in combination with other quasi-drug components, and may be suitably used according to a conventional method.
  • the present invention provides a cosmetic composition for protecting skin against fine dust, comprising a C-peptide as an active ingredient.
  • the cosmetic composition of the present invention includes a C-peptide.
  • the cosmetic composition comprising the C-peptide has a skin protective effect against fine dust.
  • C-peptide is a peptide secreted with insulin from mammals, birds, and the like, and its precursor proinsulin is composed of insulin and C-peptide, and is produced by beta cells of the pancreatic Langerhans island like insulin. , Consisting of 21 to 31 amino acid sequences. Specifically, C-peptide is a degradation product that is released into the blood simultaneously with insulin when insulin is formed while the proinsulin is cleaved by endopeptidase.
  • amino acid sequence of the C-peptide (SEQ ID NO: 55-89 of NCBI number: NP_000198.1) is the same as SEQ ID NO: 1.
  • the C-peptide was confirmed to have no cytotoxicity in an experiment using a human keratinocyte cell line (HaCaT) (FIG. 1), and the C-peptide was a human keratinocyte cell line. It was confirmed that the inhibition of the generation of free radicals in cells caused by the treatment of particulate matter (PM) (FIG. 2) and the oxidative lipid modification (FIG. 3) and protein modification (FIG. 4). . In addition, it was confirmed that the inhibition of DNA damage induced by fine dust (FIG. 5), it was confirmed the skin protective effect on the fine dust of the C-peptide.
  • PM particulate matter
  • FIG. 3 oxidative lipid modification
  • FIG. 4 protein modification
  • the C-peptide can be used as an active ingredient in a cosmetic composition for skin protection against fine dust.
  • skin protection means inhibiting skin damage, inhibiting skin cell death or promoting skin cell growth.
  • the C-peptide can exhibit skin protective activity through scavenging action of reactive oxygen species (ROS) generated due to fine dust, and thus skin protection against fine dust. In addition to the effect, it also has an antioxidant effect.
  • ROS reactive oxygen species
  • the cosmetic composition for skin protection against fine dust of the present invention may contain 0.001 to 100% by weight of C-peptide relative to the total weight of the composition, specifically, 0.01 to 50% by weight of C-peptide, It is not limited thereto.
  • the cosmetic composition of the present invention may include, without limitation, ingredients that are normally allowed in addition to the active ingredient, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, fragrances, and common adjuvants, and carriers. can do.
  • ingredients that are normally allowed in addition to the active ingredient for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, fragrances, and common adjuvants, and carriers. can do.
  • the cosmetic composition according to the present invention is a solution, ointment for ointment, cream, foam, nutrient longevity, softening longevity, pack, softening water, emulsion, makeup base, essence, soap, liquid detergent, bathing agent, sunscreen cream, sun oil, suspension, It can be prepared in one or more formulations selected from the group consisting of emulsions, pastes, gels, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, patches and sprays. It is not limited.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, and for example, oils, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols as common ingredients, Thickeners, chelating agents, pigments, preservatives, fragrances, etc. may be appropriately blended, but are not limited thereto.
  • the cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition of the present invention varies depending on the formulation.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for skin protection against fine dust, comprising a C-peptide as an active ingredient.
  • quasi-drug refers to articles with less action than pharmaceuticals among articles used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals, for example According to the report, quasi-drugs exclude products used for the purpose of medicines, and fiber and rubber products used for the treatment or prevention of disease in humans and animals, which have little or no direct action on the human body and are similar to those that are not instruments or machinery. This includes sterilization and pesticides to prevent infectious diseases.
  • the type or formulation of the quasi-drug composition of the present invention is not particularly limited, but may preferably be a disinfecting cleanser, shower foam, green, wipe, detergent soap, hand wash, humidifier filler, mask, ointment or filter filler.
  • the composition of the present invention When the composition of the present invention is included in a quasi-drug for the purpose of skin protection against fine dust, the composition may be used as it is or used in combination with other quasi-drug components, and may be suitably used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use, and the quasi-drug composition according to the present invention may contain the C-peptide in an amount of 0.01 to 20% by weight based on the total weight of the composition.
  • the present invention provides a health functional food for skin protection against fine dust, including C-peptide as an active ingredient.
  • the health functional food for skin protection against the fine dust may provide various types of food additives or functional food.
  • a health functional food for the fine dust for example, it can be processed into leach tea, liquid tea, beverage, fermented milk, cheese, yogurt, juice, probiotic preparations and health supplements, and other food additives depending on the purpose. It can be used in the form.
  • the formulation of the dietary supplement may be in various forms such as solutions, emulsions, viscous mixtures, tablets, powders, pills, etc., which may be administered by various methods such as simple drinking, injection, spray or squeeze. .
  • the health functional food for skin protection against fine dust has an advantage of having a better skin protection effect against fine dust by ingesting it in the form of an inner beauty food.
  • the inner beauty is an inner beauty food called 'eating cosmetics or beauty foods', and refers to foods that absorb various ingredients that are good for the skin into the body and change the skin constitution to be healthy. You can choose the inner beauty food that suits you and take it into consideration, considering the skin condition and lifestyle. More preferably, when the cosmetics containing the cosmetic composition and the inner beauty food containing the C-peptide are mixed, the skin protection effect against fine dust is significantly higher than that of using only cosmetics, and the skin against more effective fine dust It has the advantage of being able to see the protective effect.
  • Fine dust Diesel particulate matter: NIST 1650b was purchased from Sigma-Aldrich, Inc. Fine dust standard stock solution (25mg / ml) was added to dimethyl sulfoxide (DMSO) and subjected to ultrasonic treatment for 30 minutes to prevent suspended substances from agglomerating and used in the experiment.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Human keratinocytes HaCaT (Cell Lines Service, Heidelberg, Germany) was tested for 5% carbon dioxide (CO 2 ) using RPMI-1640 medium containing 10% heat-inactivated fetal calf serum. It was incubated at 37 ° C in an incubator.
  • an MTT assay was performed.
  • Cells were inoculated into 24-well plates at a density of 1.0 x 10 5 cells / well, and after 16 hours of incubation, cells were treated with 10, 20, 40, 80 and 100 nM C-peptide.
  • MTT solution (2 mg / ml) to each well and dissolving formazan crystals in DMSO, cell viability was evaluated by measuring absorbance at 540 nm using a multi-well spectrophotometer.
  • Intracellular ROS Intracellular reactive oxygen species
  • DCF-DA The inhibitory effect on the production of intracellular free radicals caused by fine matter (PM) of C-peptide was confirmed using DCF-DA.
  • Cells were seeded in 96-well plates at a density of 1 ⁇ 10 5 cells / well and treated with 10, 20, 40, 80 or 100 nM C-peptide after 16 hours. After incubating the cells for 1 hour, 50 ⁇ g / ml of fine dust was treated.
  • DCF-DA 25 ⁇ M was treated in each well and reacted for 10 minutes, and fluorescence of 2 ', 7'-dichlorofluorescein was analyzed using a flow cytometer.
  • the cells were treated with 40 nM C-peptide for 1 hour, and then exposed to 50 ⁇ g / ml of fine dust for 24 hours.
  • the lipid peroxidation index 8-isoprostane was measured using an enzyme immunoassay kit (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI, USA).
  • the oxidative DNA damage marker 8-Hydroxy-2-deoxyguanosine (8-OHdG) levels were measured to analyze oxidative DNA damage caused by fine dust.
  • a Bioxytech 8-OHdG ELISA kit coated with 8-hydroxy-2-deoxyguanosine (8-OHdG) was used.

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Abstract

본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물로 이용할 수 있다.

Description

C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물
본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물, 의약외품 조성물, 피부외용제 조성물 및 건강기능성 식품에 관한 것이다.
피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 아무리 외부로부피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 아무리 외부로부터의 바이러스 침투를 막아내는 피부일지라도 과도한 자외선, 오염된 환경 등 외부로부터 받는 스트레스는 피부 자극을 유발하게 되고, 결국에는 피부 노화로 이어지게 된다.
최근 중국의 산업화로 인해 발생하고 있는 중금속 등의 유해물질이 섞인 미세먼지, 황사, 스모그는 피부 노화 및 피부 트러블의 주요 원인으로 인식되고 있다.
미세먼지는 우리 눈에 보이지 않는 아주 작은 물질로 대기 중에 오랫동안 떠다니거나 흩날려 내려오는 직경 10㎛ 이하의 입자상 물질을 말한다. 석탄, 석유 등의 화석연료가 연소될 때 또는 제조업ㆍ자동차 매연 등의 배출가스에서 나오며, 기관지를 거쳐 폐에 흡착되어 각종 폐질환을 유발하는 대기오염물질이다. 환경부에 따르면 2017년 3월 우리나라와 국제적으로 사용하는 미세먼지에 대한 용어가 달라 혼란스럽다는 지적에 따라 지름이 10㎛ 이하인 미세먼지(PM10)는 부유먼지, 지름이 2.5㎛ 이하인 초미세먼지(PM2.5)는 미세먼지로 정의한다.
미세먼지, 황사 등과 같은 오염 물질들은 피부 내 스트레스를 야기하는데, 이러한 스트레스는 활성산소에 의해 생성된다. 활성산소는 미토콘드리아 내 전자전달체 및 백혈구 세포의 활성화 등 정상적인 세포기능을 유지하는데 중요한 역할을 담당하는 세포 내 신호전달 물질로 작용한다. 그러나 활성산소들은 불안정하고 산화력이 높아 생체물질과 쉽게 반응하기 때문에 인체 내에서 제거되지 못하면 산화적 스트레스(oxidative stress)를 유발하게 된다.
이에 본 발명에서는, 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 가지는 화장료 조성물을 개발하고자 하였다.
이에 본 발명에서는, C 펩타이드가 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 C-펩타이트를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성식품을 제공하는 것이다.
본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물로 이용할 수 있다.
도 1은 HaCaT 세포에서 C-펩타이드의 농도에 따른 세포독성을 확인한 결과이다.
도 2는 C-펩타이드의 농도에 따른 미세먼지에 의해 유도되는 세포내 활성산소종의 억제효과를 분석한 결과이다(*p < 0.05 , #p < 0.05 미세먼지 비처리군과 처리군를 각기 비교함).
도 3은 미세먼지에 의해 유도되는 산화적 지질 변형에 대한 C-펩타이드의 억제 효과를 비교한 결과이다 (*p < 0.05 , #p < 0.05 미세먼지 비처리군과 처리군를 각기 비교함).
도 4는 미세먼지에 의해 유도되는 산화적 단백질 변형에 대한 C-펩타이드의 억제 효과를 분석한 결과이다. (*p < 0.05 , #p < 0.05 미세먼지 비처리군과 처리군를 각기 비교함).
도 5는 미세먼지에 의해 유도되는 DNA 손상에 대한 C-펩타이드의 보호 효과를 측정한 결과이다(*p < 0.05 , #p < 0.05 미세먼지 비처리군과 처리군를 각기 비교함).
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 유효성분으로, C-펩타이드를 포함한다.
상기 C-펩타이드를 포함하는 화장료 조성물은 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 가진다.
본 발명에서 "C-펩타이드"는 포유류, 조류 등에서 인슐린과 함께 분비되는 펩타이드로서, 그의 전구체인 프로인슐린은 인슐린과 C-펩타이드로 구성되어 있으며, 인슐린과 같이 췌장의 랑게르한스섬의 베타세포에서 생성되는 것으로, 21 내지 31개의 아미노산 서열로 구성된다. 구체적으로, C-펩타이드는 엔도펩티다제에 의해 프로인슐린이 절단되면서 인슐린이 형성될 때 인슐린과 함께 동시에 혈액으로 방출되는 분해 산물이다.
상기 C-펩타이드(NCBI 번호: NP_000198.1 의 55번-89번 서열)의 아미노산 염기서열은 서열번호 1과 같다.
서열번호 1: RREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQKR
본 발명의 일실시예에서, C-펩타이드는 인간 각질형성세포 세포주(human keratinocyte cell line, HaCaT)를 이용한 실험에서 세포독성이 없음을 확인하였고(도 1), C-펩타이드가 인간 각질형성세포 세포주에서 미세먼지(PM, particulate matter) 처리에 의해 유발된 세포내의 활성산소종의 생성을 억제하고(도 2), 산화적 지질 변형(도 3)과 단백질 변형(도 4)을 억제함을 확인하였다. 또한, 미세먼지에 의해 유도된 DNA 손상을 억제함을 확인였는 바(도 5), C-펩타이드의 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 확인하였다.
따라서, 상기 C-펩타이드는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.
본 발명에서 피부보호는 피부손상 억제, 피부세포 사멸 억제 또는 피부 세포 성장 촉진을 의미한다.
따라서, 본 발명에서, 상기 C-펩타이드는 미세먼지로 인해 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 소거(scavenging) 작용을 통해 피부보호 활성을 나타낼 수 있는 바, 미세먼지에 대한 피부보호 효과와 더불어, 항산화 효과도 가진다.
본 발명의 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물은 전체 조성물 중량에 대하여 0.001 내지 100 중량％의 C-펩타이드를 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 50 중량％의 C-펩타이드를 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 허용되는 성분들을 제한없이 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패치 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 C-펩타이드, 미세먼지에 대한 피부보호에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 섬유ㆍ고무 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염병을 막기 위한 살균ㆍ살충제 등이 이에 포함된다.
본 발명의 의약외품 조성물의 종류나 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제 비누, 핸드 워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제 등일 수 있다.
본 발명의 조성물을 미세먼지에 대한 피부보호 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 유효성분으로, C-펩타이드를 포함한다.
상기 C-펩타이드를 포함하는 화장료 조성물은 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 가진다.
본 발명에서 "C-펩타이드"는 포유류, 조류 등에서 인슐린과 함께 분비되는 펩타이드로서, 그의 전구체인 프로인슐린은 인슐린과 C-펩타이드로 구성되어 있으며, 인슐린과 같이 췌장의 랑게르한스섬의 베타세포에서 생성되는 것으로, 21 내지 31개의 아미노산 서열로 구성된다. 구체적으로, C-펩타이드는 엔도펩티다제에 의해 프로인슐린이 절단되면서 인슐린이 형성될 때 인슐린과 함께 동시에 혈액으로 방출되는 분해 산물이다.
상기 C-펩타이드(NCBI 번호: NP_000198.1 의 55번-89번 서열)의 아미노산 염기서열은 서열번호 1과 같다.
서열번호 1: RREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQKR
본 발명의 일실시예에서, C-펩타이드는 인간 각질형성세포 세포주(human keratinocyte cell line, HaCaT)를 이용한 실험에서 세포독성이 없음을 확인하였고(도 1), C-펩타이드가 인간 각질형성세포 세포주에서 미세먼지(PM, particulate matter) 처리에 의해 유발된 세포내의 활성산소종의 생성을 억제하고(도 2), 산화적 지질 변형(도 3)과 단백질 변형(도 4)을 억제함을 확인하였다. 또한, 미세먼지에 의해 유도된 DNA 손상을 억제함을 확인였는 바(도 5), C-펩타이드의 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 확인하였다.
따라서, 상기 C-펩타이드는 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.
본 발명에서 피부보호는 피부손상 억제, 피부세포 사멸 억제 또는 피부 세포 성장 촉진을 의미한다.
따라서, 본 발명에서, 상기 C-펩타이드는 미세먼지로 인해 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 소거(scavenging) 작용을 통해 피부보호 활성을 나타낼 수 있는 바, 미세먼지에 대한 피부보호 효과와 더불어, 항산화 효과도 가진다.
본 발명의 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물은 전체 조성물 중량에 대하여 0.001 내지 100 중량％의 C-펩타이드를 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 50 중량％의 C-펩타이드를 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 허용되는 성분들을 제한없이 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패치 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 C-펩타이드, 미세먼지에 대한 피부보호에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 섬유ㆍ고무 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염병을 막기 위한 살균ㆍ살충제 등이 이에 포함된다.
본 발명의 의약외품 조성물의 종류나 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제 비누, 핸드 워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제 등일 수 있다.
본 발명의 조성물을 미세먼지에 대한 피부보호 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있으며, 본 발명에 의한 의약외품 조성물은 상기 C-펩타이드를 조성물 총 중량에 대하여 0.01~20 중량%로 함유할 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성 식품을 제공한다.
상기 C-펩타이드, 미세먼지에 대한 피부보호에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
상기 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성 식품은 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 제공할 수 있다. 상기 미세먼지에 대한 건강기능성 식품으로 예를 들면, 침출차, 액상차, 음료, 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균 제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 목적에 따라 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 건강기능성 식품의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말, 환 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
바람직하게는, 상기 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성 식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty) 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티푸드’로 일컬어지는 이너뷰티 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 상기 C-펩타이드를 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 미세먼지에 대한 피부보호 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 미세먼지에 대한 피부보호 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<재료와 방법>
미세먼지의 준비
미세먼지(디젤 입자 물질(Diesel particulate matter): NIST 1650b)는 Sigma-Aldrich, Inc.에서 구매하였다. 미세먼지 표준원액(25㎎/㎖)을 다이메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)에 넣고 30분간 초음파(sonication) 처리하여 부유물질이 응집되지 않도록 하여 실험에 이용 하였다.
세포 배양
인간 각질 형성세포 HaCaT(Cell Lines Service, 하이델베트크, 독일)는 10% 열-비활성화된 소태아혈청(fetal calf serum)을 포함하는 RPMI-1640 배지를 이용하여 5% 이산화탄소(CO2) 조건의 배양기에서 37℃에서 배양하였다.
세포 생존력 분석
C-펩타이드의 세포 독성을 평가하기 위해서, MTT 어세이를 수행하였다. 세포를 1.0Х105 세포/웰(well)의 밀도로 24-웰 플레이트에 접종하고, 16시간 배양 후 세포에 10, 20, 40, 80 및 100 nM의 C-펩타이트를 처리하였다. 각 웰에 MTT 용액(2㎎/㎖)을 첨가하고, DMSO에 포르마잔 결정을 용해한　후, 멀티-웰 분광 광도계(spectrophotometer)를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하여 세포 생존력을 평가하였다.
세포내 활성산소종(intracellular reactive oxygen species, intracellular ROS) 분석
C-펩타이드(C-peptide)의 미세먼지(particulate matter, PM)에 의해 유발되는 세포내(intracellular) 활성산소종 생성에 대한 억제 효과를 DCF-DA를 이용하여 확인하였다. 세포를 1Х105 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 접종하고, 16시간 뒤 10, 20, 40, 80 또는 100 nM의 C-펩타이드(C-peptide)를 처리하였다. 세포를 1시간 배양 후, 50 ㎍/㎖의 미세먼지를 처리하였다. DCF-DA 25μM을 각 웰에 처리하고 10분간 반응시키고, 유세포 분석기(flow cytometer)를 이용하여 2', 7'-디클로로플루오레신(2',7'-dichlorofluorescein)의 형광을 분석하였다.
지질과산화 분석(Lipid peroxidation assay)
세포에 40nM C-펩타이드를 1시간 처리 후, 미세먼지 50㎍/㎖에 24시간 동안 노출시켰다. 효소 면역 어세이 키트(Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI, USA)를 이용하여 지질과산화 지표인 8-isoprostane를 측정하였다.
단백질 카르보닐화 분석(Protein carbonylation assay)
세포에 40nM C-peptide의 1시간 처리 후, 미세먼지 50㎍/㎖에 24시간 동안 노출시켰다. 단백질 분해 완충액(50mM Tris(pH 7.5), 10mM EDTA(pH 8), 1mM PMSF)을 사용하여 전체 세포 단백질을 분리하여, 분광 광도계로 정량하고, OxiSelect™ 단백질 카르보닐 ELISA 키트를 사용하여 단백질 카르보닐화를 측정하였다
DNA 손상 분석
산화성 DNA 손상 마커인 8-Hydroxy-2-deoxyguanosine(8-OHdG) 수준을 측정하여 미세먼지에 의한, 산화성 DNA 손상을 분석하였다. 분석에는 8-hydroxy-2-deoxyguanosine(8-OHdG)가 웰에 코팅된 Bioxytech 8-OHdG ELISA 키트를 사용하였다.
통계 분석
데이터는 평균 ± 표준 오차로 나타내며 Tukey의 검정 및 분산 분석 (ANOVA)을 사용하여 Sigma Stat (v12) 소프트웨어 (SPSS, Chicago, IL, USA)로 분석하였다. P-value <0.05는 통계적으로 유의하다고 간주하였다.
<결과>
세포독성 분석결과
10, 20, 40, 80 및 100nM C-펩타이드를 처리한 세포 모두 생존률이 91% 이상으로 측정되어, C-펩타이드가 세포독성이 없음을 확인하였다(도 1).
다음으로 C-펩타이드의 미세먼지에 의해 세포내에 유발되는 활성산소종 생성 억제효과를 분석하였다. 세포에 미세먼지를 처리하면 비처리군과 비교하여 현저하게 ROS의 생성이 증가함을 확인하였으며, 미세먼지와 C-펩타이드를 처리한 세포에서 미세먼지에 의해 증가한 ROS의 생성이 억제됨을 확인하였다. 구체적으로 C-펩타이드 20nM 이상 처리한 세포에서 미세먼지 비처리군과 유사한 수준으로 ROS의 생성이 억제됨을 확인하였고, 40nM를 처리하였을 때 ROS 생성 억제효과가 가장 우수하였다(도 2). 따라서, 이후 실험에서는 40nM의 C-펩타이드를 사용하였다.
산화적 지질과산화를 분석하고자, 지질과산화 지표인 8-이소프로스탄(8-isoprostane)의 농도를 분석한 결과 미세먼지를 처리한 경우 8-isoprostane의 농도가 미세먼지 비처리군과 비교하여 현저하게 증가하는 것을 확인하였으며, C-펩타이드 전처리한 경우 미세먼지에 의해 증가된 8-isoprostane의 농도가 감소하는 것을 확인하였다. 따라서 C-펩타이드가 미세먼지에 의한 지질과산화를 억제함을 확인하였다(도 3).
다음으로 카르보닐화 단백질을 확인하여 산화적 단백질 변형을 분석하였다. 미세먼지에 의해 카르보닐화 단백질의 농도가 증가하였으나, C-펩타이드 전처리한 세포에서 미세먼지에 의해 증가하는 카르보닐화 단백질 농도가 감소함을 확인하였다(도 4). 따라서 C-펩타이드가 미세먼지에 의한 산화적 단백질 변형을 억제함을 확인하였다.
산화적 DNA 손상을 확인하고자, 8-OHdG를 확인한 결과, 미세먼지에 의해 세포에서 8-OHdG의 농도가 현저하게 증가하는 것을 확인하였으며, C-펩타이드 처리시 미세먼지에 의해 증가한 8-OHdG의 농도가 감소하여, C-펩타이드가 미세먼지에 의한 DNA 손상을 억제함을 확인하였다(도5).
종합하면, C-펩타이드가 미세먼지의 의해 유발되는 산화스트레스를 억제하고 세포내 성분이 손상되지 않도록 세포를 보호함을 확인하였다.

Claims (7)

  1. C-펩타이드를 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 C-펩타이드의 아미노산 염기서열이 서열번호1인 것을 특징으로 하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 C-펩타이드는 미세먼지로 인해 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 소거(scavenging) 작용을 통해 피부보호 활성을 나타내는 것인, 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 C-펩타이드는 미세먼지에 노출된 세포의 DNA 손상을 저해하는 작용을 통해 피부보호 활성을 나타내는 것인, 화장료 조성물.
  5. C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 의약외품 조성물.
  6. C-펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성 식품 조성물
  7. 제6항에 있어서,
    상기 건강기능성 식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)인 것을 특징으로 하는 미세먼지에 대한 피부보호용 건강기능성 식품 조성물.
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