WO2020091232A1 - 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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extract
atopic dermatitis
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prevention
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이윤미
김태인
성윤영
손은정
이영실
육흥주
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한국 한의학 연구원
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention, improvement or treatment of atopic dermatitis, which includes a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Atopy is a type of hypersensitivity in which the risk has been highlighted as the prevalence has increased rapidly in recent years. From an immunological point of view, it is a major symptom caused by immune responses of immunoglobulin E and allergin. It is defined as a group of allergic diseases with a strong inherited genetic tendency. In particular, atopic dermatitis, which is a typical symptom of atopy, 0.5% to 1% of the population and 5% to 10% of children complain of serious symptoms, but it is presumed to be related to genetic factors and immune system deficiency. The exact cause is unknown, and it is expected to be somewhat relieved by improving the environment and diet, and there is no fundamental treatment.
  • atopic dermatitis shows individual differences, it usually involves severe itching, dry skin, rash, swelling, swelling, scaly skin (scales), and emotional anxiety, stress, tension, frustration, etc. Along with feelings of anger, it is frequently accompanied by other allergic diseases such as urticaria, metal allergy, asthma or allergic rhinitis, and is emerging as a serious social problem that threatens public health today.
  • representative drugs that are known to be effective against atopic dermatitis to date include steroids, antihistamines, antibiotics, non-steroidal agents, and other sedatives and stabilizers.
  • the job offer is an earthworm ( Pheretima) communisima Goto et Hatai).
  • earthworm Pheretima communisima Goto et Hatai
  • catch earthworms split the belly, wash the soil, and dry it in the sun or in a drying room.
  • they may be soaked in salted water to vomit and dry.
  • the taste is salty and the properties are cold. It acts on the liver and stomach. It lowers heat, calms cramps, helps urine to come out, relieves parasites, and detoxifies.
  • Earthworm contains hemolytic component lumbritin, antipyretic lumburobuvirin, bronchial smooth muscle relaxant hypoxanthine, and toxic components. It has been found that alcohol tincture exhibits a persistent drop in blood pressure.
  • the prior art related to the job offer of the present invention discloses a composition for anti-oxidation or anti-inflammatory, which contains the extract of the wormworm as an active ingredient in Korean Registered Patent No. 1807080.
  • Health functional foods including natural cosmetic products containing fermented grapefruit extract that is excellent in moisturizing and absorbing power using this, and promoting skin regeneration, and fermented grapefruit extract having an effect of preventing vascular adult diseases, are disclosed.
  • a composition for preventing, improving or treating atopic dermatitis comprising as an active ingredient has not been disclosed.
  • the present invention has been derived by the above-mentioned needs, the present invention provides a composition for preventing, improving or treating atopic dermatitis comprising a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient, the recruitment extract and a fraction thereof of the present invention
  • a composition for preventing, improving or treating atopic dermatitis comprising a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient, the recruitment extract and a fraction thereof of the present invention
  • the present invention by confirming that it has no cytotoxicity and reduces the production of NO, as well as decreases the production of inflammation-inducing chemokine RANTES whose secretion from human skin keratinocytes (HaCaT cells) is increased by TNF-a and IFN- ⁇ .
  • HaCaT cells human skin keratinocytes
  • the present invention provides a health functional food composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis (apic dermatitis) containing an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis, which contains a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis, which comprises a job offer extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a quasi-drug for the prevention or improvement of atopic dermatitis, which includes a job offer extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition for the prevention, improvement or treatment of atopic dermatitis comprising an extract of a job and a fraction thereof as an active ingredient, the job extract and a fraction thereof are not cytotoxic and reduce the amount of NO produced, as well as TNF-a And IFN- ⁇ , which has the effect of reducing the production of inflammation-inducing chemokine RANTES with increased secretion from human skin keratinocytes (HaCaT cells).
  • LPS is a group that induces inflammation by treating LPS
  • NMMA is a positive control group
  • 50 ⁇ M of N-monomethyl arginine is treated
  • Water EX is 100 or 200 ⁇ g / ml of job water extract treatment group
  • 100% EtOH is 100 or 200 ⁇ g / ml job offer 100% ethanol extract treatment group
  • Hex, MC, EA, BuOH, and Water are solvent-specific fractions of Job Water Extracts (job-W), Hex is Hexane fraction, MC is methylene chloride fraction, and EA is ethyl acetate The fraction, BuOH is a butanol fraction, and Water is a water fraction.
  • Figure 2 is a result confirming that the NO production amount is reduced by the treatment of the extract of the present invention and its fractions.
  • #### is a statistically significant increase in the amount of NO generated in the LPS-treated group compared to the normal group (nor), and p ⁇ 0.0001, and *, ***, **** are the extracts of the present invention compared to the LPS-treated group
  • NMMA treated group which is a positive control group, had a statistically significant decrease in NO production
  • * is p ⁇ 0.05
  • *** is p ⁇ 0.001
  • **** is p ⁇ 0.0001.
  • Figure 3 is a result confirming the cell viability in HaCaT cells of the extract and its fractions according to the present invention.
  • Control is a normal group with no treatment
  • TI is a 10ng / ml TNF- ⁇ and 10ng / ml IFN- ⁇ treated group
  • SILY is a positive control group treated with silymarin (silymarin).
  • Figure 4 is a result confirming that the chemokine RANTES content is reduced by the treatment of the extract of the present invention and its fractions.
  • ### is a statistically significant increase in the content of RANTES in 10ng / ml TNF- ⁇ and 10ng / ml IFN- ⁇ treated group (TI) compared to the normal group (Control), p ⁇ 0.001, * , **, *** is a statistically significant decrease in the content of RANTES in the treatment of the extract of the present invention and its fraction treatment group, the positive control group silymarin (sily) treatment group compared to the TI group, * is p ⁇ 0.05 , ** is p ⁇ 0.01, *** is p ⁇ 0.001.
  • the present invention relates to a health functional food composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis, which contains a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the recruitment extract may be prepared by a method including the following steps, but is not limited to this:
  • step 3 Concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure and drying to prepare an extract.
  • the extraction solvent is preferably water, a lower alcohol of C 1 to C 4 or a mixture thereof, more preferably water or ethanol extract, but is not limited thereto.
  • the extraction of the job can use any conventional methods known in the art, such as filtration, hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction, and ultrasonic extraction.
  • the vacuum concentration in step 3) is preferably a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably dried under reduced pressure, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the fraction is any one selected from hexane fraction, methylene chloride (MC) fraction, ethyl acetate (EA) fraction, butanol (BuOH) fraction and water (Water) fraction of the water extract It is preferred, but is not limited thereto.
  • the health functional food composition is preferably prepared in any one form selected from powders, granules, pills, tablets, capsules, candy, syrups, and beverages, but is not limited thereto.
  • the health functional food composition of the present invention When used as a food additive, the above-mentioned job opening extract or a fraction thereof may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be suitably used according to a conventional method.
  • the amount of the active ingredient can be appropriately determined according to its purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the composition of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, with respect to the raw materials in the production of a food or beverage.
  • the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range.
  • the type of food There are no particular restrictions on the type of food. Examples of foods to which the extract can be added are meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, dairy products including gums, ice cream, various soups, beverages, teas, drinks, Alcoholic beverages, vitamin complexes, and the like, and include all functional foods in the ordinary sense.
  • composition of the present invention When used as a healthy beverage, it may contain various flavoring agents or natural carbohydrates, etc., as additional components, like a normal beverage.
  • natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as textrin and cyclotenstrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol.
  • sweetener natural sweeteners such as taumatin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g per 100 g of the composition of the present invention, preferably about 0.02 to 0.03 g.
  • the composition of the present invention is a variety of nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal focusing agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol , Carbonic acid used in carbonated beverages, and the like.
  • the composition of the present invention may contain flesh for the preparation of natural fruit juice, fruit juice beverages and vegetable beverages. These ingredients may be used independently or in combination. The proportion of these additives is not critical, but the composition of the present invention is generally selected from 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis, which contains a job offer extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent, in addition to the active ingredient, and may be various types of oral or parenteral formulations.
  • a pharmaceutically acceptable carrier such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents and surfactants.
  • Solid preparations for oral administration include capsules, powders, granules, tablets, pills, etc. These solid preparations include at least one excipient in one or more compounds, such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose ( lactose) and gelatin.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, may be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerol gelatin may be used.
  • parenterally administered it is preferable to select an external skin type or an intraperitoneal, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine epidural or cerebrovascular injection method, most preferably for external skin use.
  • intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine epidural or cerebrovascular injection method most preferably for external skin use.
  • it is preferable to prepare in the form of an ointment, patch or spray applied to the skin but is not limited thereto.
  • a pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the level of the effective amount is the type of patient's disease, severity, and activity of the drug , Sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of excretion, duration of treatment, factors including co-drugs and other factors well known in the medical field.
  • the composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent, and may be administered single or multiple. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the dosage of the composition of the present invention varies in range depending on the patient's weight, age, sex, health status, diet, administration time, administration method, excretion rate and disease severity, and the daily dosage is a recruitment extract or a fraction thereof. It is 0.01 to 2,000 mg / kg based on the amount, preferably 30 to 500 mg / kg, more preferably 50 to 300 mg / kg, and can be administered 1 to 6 times a day.
  • the composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormonal therapy, chemotherapy, and biological response modifiers.
  • the present invention relates to a cosmetic composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • composition is prepared in a formulation selected from solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsions, foundations, wax foundations and sprays It is preferred, but is not limited thereto.
  • a solvent, solvating agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, and propylene Glycols, 1, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.
  • liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol
  • suspensions such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester
  • Microcrystalline cellulose aluminum metahydroxide, bentonite, agar or trakant, etc.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a paste, cream or gel, animal fibers, plant fibers, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide as carrier components Etc.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a powder or a spray
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in the case of a spray, additionally, chlorofluorohydro Propellants such as carbon, propane-butane or dimethyl ether.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, acethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate as a carrier component , Fatty acid amide ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linoline derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like.
  • the cosmetic composition of the present invention may further contain at least one component capable of improving atopic dermatitis that exhibits the same or similar function in addition to the active ingredient.
  • the present invention relates to a quasi-drug for the prevention or improvement of atopic dermatitis, which includes a recruitment extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the term 'quasi-drug' is a fiber, rubber product or the like used for the purpose of treating, alleviating, treating or preventing a disease of a person or animal, has a weak effect on the human body or does not act directly on the human body, Or a non-machine or similar product, one of the agents used for sterilization, pesticide and similar purposes for the prevention of infection, for the purpose of diagnosing, treating, alleviating, treating or preventing a human or animal disease Means of items that are not used as devices, machines or devices, and those used for purposes of pharmacologically affecting the structure and function of a person or animal, except those that are not devices, machinery or devices.
  • the quasi-drug includes an external preparation for skin.
  • the above-mentioned extract or a fraction thereof can be added as it is or used with other quasi-drug or quasi-drug components, and can be suitably used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined according to the purpose of use.
  • the external preparation for skin is not particularly limited.
  • Dry recruitment was refluxed by adding water or 70% (v / v) ethanol, 100% ethanol, filtered, concentrated, and dried to prepare a recruitment extract (Water Ex., 70% EtOH, 100% EtOH).
  • Water extract (Water Ex.) was fractionated by solvent to prepare hexane (Hexane), methylene chloride (MC), ethyl acetate (ethyl acetate, EtOAc), butanol (BuOH) and water (Water) fractions.
  • the extract of the present invention and its fraction were treated with concentrations (100, 200 ⁇ g / ml) and cultured for 24 hours. After the MTT solution was added to the cultured cells and reacted for 4 hours, the absorbance of 540 nm was measured using an ELISA reader, and then the relative cell viability (% of control) was calculated through comparison with the control group.
  • LPS 400 ng / ml
  • RAW 274.7 cells dispensed at a suitable concentration in a 96-well plate
  • concentrations 100, 200 ⁇ g / ml
  • the amount of NO was measured according to the manufacturer's method using Griess reagent.
  • the present invention extract and fractions thereof reduced the amount of NO produced by LPS in a concentration-dependent manner.
  • Human keratinocyte HaCaT cells were added with 10% heat-inactivated Fetal Bovine Serum (FBS), 100 units / mL penicillin, and 100 ⁇ g / mL streptomycin with DMEM medium at 37 ° C., 5% CO Cultured in 2 environments.
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • penicillin 100 units / mL
  • streptomycin 100 ⁇ g / mL
  • Cell counting Kit-8 (CCK-8) assay was performed to confirm the cytotoxicity in the HaCaT cells for the extract.
  • HaCaT cells were treated with samples at concentrations of 25, 50, and 100 ⁇ g / ml, and cultured for 24 hours. After 24 hours, CCK-8 was added to the medium at a concentration of 10%, followed by reaction at 37 ° C. for 2 hours, and then absorbance at 450 nm using a microplate spectrophotometer (Biorad, Hercules, CA, USA). Measurement was made, and relative cell viability (%) was calculated through comparison with a control group.
  • the water extract of the present invention (Water Ex.), Job ethanol extract (100% EtOH or 70% EtOH) and ethyl acetate fraction of the water extract (EA), of the water extract Cytotoxicity was not observed in the butanol fraction (BuOH) or the water fraction of the water extract of the job.

Abstract

본 발명은 구인 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구인 추출물 및 이의 분획물은 세포독성이 없으며, NO 생성량을 감소시킬 뿐만 아니라, TNF-a와 IFN-γ에 의해 인간피부각질세포(HaCaT cell)로부터 분비가 증가된 염증 유발 케모카인 RANTES의 생성량을 감소시키므로, 다양한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
아토피는 최근 들어, 유병률이 급격히 증가함에 따라 그 위험성이 크게 부각되고 있는 과민증(hypersensitivity)의 일종으로, 면역학적 관점에서는 면역글로불린 E(immunoglobulin E)와 알레르겐(allergin)의 면역반응에 의한 주요증상을 동반하는 유전경향이 강한 알레르기성 질환군으로 정의된다. 특히, 아토피의 대표적 증상인 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 전 인구의 0.5~1%, 어린이의 5~10%가 심각한 증상을 호소하고 있지만, 유전적인 요인과 면역계 결핍에 관련 있는 것으로 추정될 뿐 아직 정확한 원인은 밝혀진 바 없고, 환경 및 식생활 개선을 통해 다소 완화되는 것으로 기대될 뿐 근본적인 치료방법이 전무한 실정이다.
그러나 아토피 피부염은 개인차를 보이기는 하지만, 대부분 극심한 가려움증을 비롯한 피부 건조증, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘) 등을 수반하며, 이로 인한 정서적 불안, 스트레스, 긴장, 좌절, 분노의 감정과 함께 기타 알레르기 질환인 두드러기, 금속 알레르기, 천식이나 알레르기성 비염 등을 동반하는 경우가 빈번한 바, 오늘날 국민건강을 위협하는 심각한 사회문제로 떠오르고 있다. 한편, 현재까지 아토피 피부염에 효과가 있는 것으로 알려진 대표적 약물로는 스테로이드제(steroid), 항히스타민제(antihistamine), 항생제(antibiotic), 비스테로이드제를 비롯한 기타 진정제와 신경안정제 등을 들 수 있다.
한편, 구인은 지렁이과 동물인 지렁이( Pheretima communisima Goto et Hatai)를 말린 것이다. 봄부터 가을 사이에 지렁이를 잡아 배를 갈라 흙을 씻어내고 햇볕이나 건조실에서 말린다. 또는 소금물에 담가 먹은 것을 토하게 하고 말리기도 한다. 맛은 짜고 성질은 차다. 간경(肝經) · 위경(胃經)에 작용한다. 열을 내리고 경련을 진정시키며 소변이 잘 나오게 하고 기생충을 구제하며 독을 제거한다. 지렁이에는 용혈(溶血) 성분인 룸부리틴, 해열 성분인 룸부로페부린, 기관지 평활근 이완 성분인 히포크산틴, 독성분 등이 들어 있다. 알콜팅크가 지속적인 혈압 강하 작용을 나타낸다는 것이 밝혀졌다. 열이 몹시 나면서 경련이 있는 데 주로 쓰며, 황달, 후두염, 배뇨 장애, 관절통, 반신불수, 기관지 천식, 고혈압증, 회충증에도 쓴다. 하루 6~12g을 탕제 · 산제 · 환제 형태로 만들어 먹는다.
본 발명의 구인 관련 종래기술로는 한국등록특허 제1807080호에 갯지렁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염용 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2018-0057906호는 발효 구인 추출물 및 이의 제조방법, 이를 사용한 보습력 및 흡수력이 뛰어나며 피부 재생을 도모하는 발효 구인 추출물을 포함하는 천연 화장품 및 혈관계 성인병 예방 효과가 있는 발효 구인 추출물을 포함하는 건강기능성 식품이 개시되어 있으나, 본 발명의 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물은 세포독성이 없으며, NO 생성량을 감소시킬 뿐만 아니라, TNF-a와 IFN-γ에 의해 인간피부각질세포(HaCaT cell)로부터 분비가 증가된 염증 유발 케모카인 RANTES의 생성량을 감소시킨다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염(atopic dermatitis)의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품을 제공한다.
본 발명은 구인 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구인 추출물 및 이의 분획물은 세포독성이 없으며, NO 생성량을 감소시킬 뿐만 아니라, TNF-a와 IFN-γ에 의해 인간피부각질세포(HaCaT cell)로부터 분비가 증가된 염증 유발 케모카인 RANTES의 생성량을 감소시키는 효과가 있는 것이다.
도 1은 본 발명에 따른 구인 추출물 및 이의 분획물의 RAW 264.7 세포에서의 세포생존율을 확인한 결과이다. nor은 아무것도 처리하지 않은 정상군이고, LPS는 LPS를 처리하여 염증을 유도한 군이며, NMMA는 양성대조군으로, 50μM의 N-모노메틸 아르기닌(N-monomethyl arginine)을 처리한 것이고, Water EX는 100 또는 200㎍/㎖의 구인 물 추출물 처리군이며, 100% EtOH은 100 또는 200㎍/㎖의 구인 100% 에탄올 추출물 처리군이고, 70% EtOH는 100 또는 200㎍/㎖의 구인 70%(v/v) 에탄올 추출물 처리군이다. Hex, MC, EA, BuOH, Water은 구인 물 추출물(구인-W)의 용매별 분획으로, Hex는 헥산(Hexane) 분획물, MC는 염화메틸렌(methylene chloride) 분획물, EA는 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물, BuOH는 부탄올(Butanol) 분획물, Water는 물(Water) 분획물이다.
도 2는 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물 처리에 의해 NO 생성량이 감소한 것을 확인한 결과이다. ####은 정상군(nor) 대비 LPS 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의하게 증가했다는 것으로 p<0.0001이고, *, ***, ****은 LPS 처리군 대비 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물의 처리군, 양성 대조군인 NMMA 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, ***는, p<0.001이고, ****는 p<0.0001이다.
도 3은 본 발명에 따른 구인 추출물 및 이의 분획물의 HaCaT 세포에서의 세포생존율을 확인한 결과이다. Control은 아무것도 처리하지 않은 정상군이고, TI는 10ng/㎖의 TNF-α와 10ng/㎖의 IFN-γ 처리군이며, SILY는 양성대조군으로 실리마린(silymarin)을 처리한 군이다.
도 4는 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물 처리에 의해 케모카인 RANTES 함량이 감소한 것을 확인한 결과이다. ###은 정상군(Control) 대비 10ng/㎖의 TNF-α와 10ng/㎖의 IFN-γ 처리군(TI)에서 RANTES의 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이고, *, **, ***은 TI 군 대비 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물 처리군, 양성대조군인 실리마린(sily) 처리군의 RANTES의 함량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, *은 p<0.05이고, **은 p<0.01이며, ***은 p<0.001이다.
본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염(atopic dermatitis)의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 구인 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:
1) 구인 건조 분말에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.
상기 단계 1)에서 추출용매는 물, C 1~C 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물 또는 에탄올 추출물이지만 이에 한정하지 않는다.
상기 제조방법에 있어서, 구인의 추출은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 분획물은 구인 물 추출물의 헥산(hexane) 분획물, 염화메틸렌(methylene chloride, MC) 분획물, 에틸아세테이트(ethyl acetate, EA) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(Water) 분획물 중에서 선택된 어느 하나인 것이 바람직하지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 구인 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100중량부 당 0.01~0.1중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 피부 외용으로 사용한다. 피부 외용으로 사용하는 경우, 피부에 도포하는 연고제, 첩부제 또는 분무제의 제형으로 제조하는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 구인 추출물 또는 이의 분획물의 양을 기준으로 0.01~2,000mg/kg이고, 바람직하게는 30~500mg/kg이고, 더욱 바람직하게는 50~300mg/kg이며, 하루 1~6회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1, 3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 아토피 피부염을 개선할 수 있는 성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품에 관한 것이다.
본 발명에서 용어, '의약외품'은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미한다. 또한, 상기 의약외품은 피부외용제를 포함한다.
본 발명의 구인 추출물 또는 이의 분획물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 구인 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 피부 외용제는 특별히 이에 제한되지 않는다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
1. 구인 추출물 및 이의 분획물의 제조
건조 구인은 물 또는 70%(v/v) 에탄올, 100% 에탄올을 가하여 환류 추출하고 여과, 농축, 건조하여 구인 추출물을 제조하였다(Water Ex., 70% EtOH, 100% EtOH). 구인 물 추출물(Water Ex.)을 용매별 분획하여 헥산(Hexane), 염화메틸렌(methylene chloride, MC), 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc), 부탄올(BuOH) 및 물(Water) 분획물을 제조하였다.
2. RAW 264.7 세포에서 구인 추출물 및 이의 분획물의 항염증 효능 평가
1) MTT 어세이
생쥐 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 적정 농도로 분주한 후, 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물을 농도별(100, 200㎍/㎖)로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 세포에 MTT 용액을 첨가, 4시간 반응시킨 후 ELISA 리더를 이용하여 540nm의 흡광도를 측정하였고, 이후 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포생존율(% of control)을 계산하였다.
그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 구인 추출물 및 이의 분획물은 세포독성이 없어 세포생존율(%)에 영향을 미치지 않는다는 것을 확인하였다.
2) NO 측정
96웰 플레이트에 적정 농도로 분주한 RAW 274.7 세포에 LPS(400ng/㎖)를 처리하고, 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물을 농도별(100, 200㎍/㎖)로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 취한 후 Griess 시약을 사용하여 제조사의 방법에 따라 NO 양을 측정하였다.
그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물은 LPS에 의해 증가된 NO 생성량을 농도 의존적으로 감소시켰다.
3. 세포 배양
인간 각질세포(human keratinocyte) HaCaT 세포를 10% heat-inactivated Fetal Bovine Serum(FBS), 100units/㎖ 페니실린(penicillin), 100μg/㎖ 스트렙토마이신(streptomycin)을 첨가한 DMEM 배지로 37℃, 5% CO 2 환경에서 배양하였다.
4. 세포 독성 실험
구인 추출물에 대한 HaCaT 세포에서의 세포독성을 확인하고자 Cell Counting Kit-8(CCK-8) assay를 실시하였다. 96 웰 플레이트(well plate)에서 HaCaT 세포에 시료를 농도별 25, 50, 100㎍/㎖로 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 배지에 CCK-8을 10% 농도로 첨가한 다음 2시간 동안 37℃에서 반응시킨 후, 마이크로플레이트 스펙트로미터(microplate spectrophotometer)(Biorad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하고, 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포 생존율(%)을 계산하였다.
그 결과 도 3에 개시한 바와 같이, 본 발명의 구인 물 추출물(Water Ex.), 구인 에탄올 추출물(100% EtOH 또는 70% EtOH) 및 구인 물 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EA), 구인 물 추출물의 부탄올 분획물(BuOH), 구인 물 추출물의 물 분획물(Water)에서 세포 독성이 나타나지 않았다.
5. 케모카인 분비 억제 효능 실험
배양된 keratinocyte 인간 각질 세포를 6-웰 플레이트(well plate)에 접종하여 시료를 농도별 25, 50, 100㎍/㎖로 1시간 전처리한 후, 10ng/㎖의 TNF-α와 10ng/㎖의 IFN-γ를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 양성대조군으로 silymarin(25㎍/㎖)을 각각 처리하였다. 24시간 후에 배지에 분비된 케모카인 RANTES의 분비량을 ELISA kit (R&D systems Inc., Minneapolis, MN, USA)로 측정하였다.
모든 측정 결과는 평균(mean)과 표준편차(standard deviation; SD)로 나타내었으며, 실험군 간의 차이는 Student's t-test를 사용하여 통계학적 분석을 수행하였고, p < 0.05 값인 경우에 통계적으로 유의성이 있는 것으로 판정하였다.
그 결과, 도 4에 개시한 바와 같이, 케모카인 RANTES의 분비량이 TNF-α 및 IFN-γ의 처리(TI)에 의해 통계적으로 유의하게 증가하였고, 본 발명의 구인 추출물 및 이의 분획물을 처리한 경우, 통계적으로 유의미하게 감소한 것을 확인하였다.

Claims (9)

  1. 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염(atopic dermatitis)의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 구인 추출물의 추출용매는 물, C 1~C 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 구인 물 추출물의 헥산(hexane) 분획물, 염화메틸렌(methylene chloride) 분획물, 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(Water) 분획물 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  5. 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 구인 추출물 또는 이의 분획물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 피부에 도포하는 연고제, 첩부제 또는 분무제의 제형인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  9. 구인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품.
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