WO2019221639A1 - Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека - Google Patents
Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека Download PDFInfo
- Publication number
- WO2019221639A1 WO2019221639A1 PCT/RU2019/050029 RU2019050029W WO2019221639A1 WO 2019221639 A1 WO2019221639 A1 WO 2019221639A1 RU 2019050029 W RU2019050029 W RU 2019050029W WO 2019221639 A1 WO2019221639 A1 WO 2019221639A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- collagen
- laminin
- skin
- burns
- wounds
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims description 13
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 title claims description 12
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 title claims description 11
- 230000035876 healing Effects 0.000 title claims description 5
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 title description 2
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 title description 2
- 231100000075 skin burn Toxicity 0.000 title 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims 1
- XZTJQQLJJCXOLP-UHFFFAOYSA-M sodium;decyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O XZTJQQLJJCXOLP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 abstract 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 9
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 3
- 108010001781 Apligraf Proteins 0.000 description 2
- 241001417092 Macrouridae Species 0.000 description 2
- 235000009233 Stachytarpheta cayennensis Nutrition 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000006057 immunotolerant effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000000264 dermatotropic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 108010025899 gelatin film Proteins 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004393 laryngeal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- RCTGMCJBQGBLKT-PAMTUDGESA-N scarlet red Chemical compound CC1=CC=CC=C1\N=N\C(C=C1C)=CC=C1\N=N\C1=C(O)C=CC2=CC=CC=C12 RCTGMCJBQGBLKT-PAMTUDGESA-N 0.000 description 1
- 229960005369 scarlet red Drugs 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/32—Bones; Osteocytes; Osteoblasts; Tendons; Tenocytes; Teeth; Odontoblasts; Cartilage; Chondrocytes; Synovial membrane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
- C12N5/0629—Keratinocytes; Whole skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
- C12N5/0698—Skin equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/32—Materials or treatment for tissue regeneration for nerve reconstruction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking
Definitions
- the invention relates to medical biotechnology, namely, to cellular technologies and tissue engineering approaches for the tasks of regenerative medicine.
- the method consists in the fact that, along with conservative methods of treatment, substitution therapy of skin lesions with the help of polymer matrices, histotypically similar to body tissues, with biologically active agents: cell derivatives - collagens and laminins, contributing to the structure-forming function of the damaged area, is proposed.
- tissue engineering methods are used [8]. Tissue engineering is designed to solve many problems of regenerative medicine, which considers the issues of improving the duration and quality of human life by restoring lost structures and fun
- a promising method for the treatment and restoration of tissues may be the use of new materials created on the basis of cell technology [2, 3, 5, 6].
- epidermal and dermal skin equivalents consisting of bovine collagen with neonatal human fibroblasts (Apligraf), allogeneic foreskin fibroblasts on a synthetic substrate (Dermagraft), three-dimensional collagen gels with fibroblasts, however in these variations, difficulties arise with infection, immunogenicity, storage and transportation of tissue-engineering structures [8, 10].
- the claimed method is as follows. Collagen of the first type is secreted from rat tails tendons. This requires adult Wistar rats (or analogues) weighing 300 grams and contained in laboratory vivariums, eliminating the presence of infections, parasites, etc.
- rat tails can be stored for several years in freezing at -20 ° C. Before collagen is secreted, the tails are washed with standard detergents and sterilized with 70% ethanol for a day before collagen extraction. Further, all manipulations are performed under sterile conditions (in laminar cabinets of 1 or 2 biosafety class). The skin is removed from the tail with a scalpel and tweezers, the tail is cut into pieces of 2-3 cm. The pieces of the tail thus obtained are again incubated in 70% ethanol for 15 minutes. Then, with the help of tweezers, the tendons are removed from the tail, split into thin fibers and placed in a vessel with a sterile solution of 0.1% glacial acetic acid.
- Collagen begins to be extracted into the solution almost immediately, the solution acquires viscosity and color as a bluish-opalescent haze.
- the tendons from one tail should be dissolved in 100-150 ml of the solution. Then the solution is incubated at + 4 ° C for a month. If possible, every day you should get a bottle of solution and stir the precipitate. As a result, a thick viscous liquid forms with undissolved sediment at the bottom. Then the collagen solution is centrifuged (1 hour at 1500g ⁇ 4000 rpm. At a rotor radius of 10 cm, at room temperature) to precipitate undissolved collagen fibers. The supernatant is discharged into sterile storage containers.
- the concentration of the solution can be calculated by evaporating the aqueous fraction in a dry-air thermostat and weighing the precipitate formed.
- a collagen solution can be considered acceptable, with a collagen concentration of at least 1 mg / ml (usually 3-5 mg / ml is obtained).
- an acidic solution of acetic acid should be neutralized.
- the collagen solution is poured into a sterile Petri dish (the radius of the cup is 3 cm, 6 cm, or 10 cm, if necessary) and the corresponding amount of 0.1 M NaOH solution is added with stirring to create a total pH of ⁇ 7.0-7.2.
- the acidity of the solution can be easily determined by adding a concentrate of Ml 99 medium containing phenol red dye, the color of which varies with pH. The required color of the solution is scarlet red.
- Ml 99 medium containing phenol red dye the color of which varies with pH.
- the required color of the solution is scarlet red.
- HaCaT cells are immortalized human keratinocytes, proliferate well and are widely used in scientific research.
- the required amount of a complete growth culture medium for NaCaT cells is added from above and the composition is then incubated for several days until a dense and superdense cell monolayer is reached. During this time, HaCaT cells synthesize the laminin layer of the basement membrane on the gel surface.
- the resulting matrix is fixed with 4% paraformaldehyde, for 1 day at + 4 ° C.
- all the proteins of the composition crosslink with each other, forming an insoluble single complex, the cells are inactivated.
- the transplant is washed from formaldehyde using a sterile solution of phosphate-buffered saline (PBS), 3 times for 15 minutes with swaying on an orbital shaker.
- PBS phosphate-buffered saline
- the matrix is decellulated using a solution of detergents SDS and Triton- X-100, for 1 day at + 4 ° C.
- the bonds between lipids, lipids and proteins are broken, all intracellular components are released and washed out, DNA and RNA cells degrade.
- the transplant is washed from detergents using a sterile solution of phosphate-buffered saline (PBS), 6 times for 1 hour with swaying on an orbital shaker. The last stage of washing is carried out during the day at + 4 ° C. Further, the matrix can be stored for a month at + 4 ° C in a PBS solution, or two years dried in freezing at -20 ° C.
- PBS phosphate-buffered saline
- the resulting matrix is a protein composition consisting of two main components - collagen of the first type, and laminin of the basement membrane, which are in full histotypic similarity with the structure of human skin.
- Collagen makes up the stroma of the transplant, and laminin covers the stroma in the form of a basement membrane.
- the matrix is sterile, immunotolerant (since collagen is a highly conservative and immunotolerant protein, and laminin is of human origin), is devoid of any cellular component, which transfers it to the category of medical devices and greatly simplifies the registration procedure.
- Various additives antioxidants, growth factors, cytokines
- the NaCaT cell line can be exchanged for other immortalized cell lines of the epithelial type, producing other types of laminins, which will allow the use of the matrix for the treatment of other epithelio-mesenchymal defects (urinary tract ureter, laryngeal epithelium, intestinal epithelium, etc.).
- the proposed version of the three-dimensional matrix is a protein composition consisting of two main components - collagen of the first type, and laminin of the basement membrane, which are in full histotypic similarity with the structure of human skin.
- Collagen and laminin protein families are the two most common types of human skin proteins.
- Collagen is the basis of the mesenchymal component of the dermis of the skin, providing its mechanical strength and elasticity.
- Laminin is the basis of any basement membranes of organs, including the basement membrane of the skin [1, 7].
- the obtained data on the restoration of the integrity of the skin indicate that the created reparative composition has high wound healing efficiency due to the directed growth of the regenerating tissue while maintaining vascularization processes.
- the developed biocompatible collagen-laminin wound healing material based on a combination of a polymer substrate and a human keratinocyte synthesis product, devoid of the cellular component, is characterized by comparative simplicity of manufacture and long shelf life, which makes it possible to recommend the design for implementation.
- Panarin E. F. Nudga L. A., Petrova V. A., Bochk A. M., Hoffman I. V, Lebedeva M. F., Blinova M. I., Spichkina O. G., Yudintseva N. M., Pinaev G. P. Matrices for the cultivation of human skin cells based on natural polysaccharides - chitin and chitosan // Cell Transplantology and Tissue Engineering. - 2009. - Volume IV. - N ° 3 - S. 42-46.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Предполагаемое изобретение относится к медицинским биотехнологиям, а именно, к тканеинженерным подходам регенеративной медицины. Способ заключается в том, что наряду с консервативными методами лечения, предлагается заместительная терапия повреждений кожных покровов при помощи полимерных матриксов, гистотипически подобных тканям организма, с биологически активными агентами: клеточными производными – коллагенами и ламининами, способствующими структурообразовательной функции поврежденной области. Биодеградируемый ранозаживляющий композитный материал, основанный на комбинации полимерной подложки и продукта синтеза эпителиальных клеток человека, при этом лишенный клеточной составляющей, отличается сравнительной простотой изготовления, длительностью срока хранения и позволит отказаться от трансплантации кожи, например, при глубоких и обширных ожогах, трофических язвах и др.
Description
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА КОЛЛАГЕН-ЛАМИНИНОВОГО МАТРИКСА ДЛЯ ЗАЖИВЛЕНИЯ ЯЗВ, ОЖОГОВ И РАН КОЖИ
ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к медицинским биотехнологиям, а именно, к клеточным технологиям и тканеинженерным подходам для задач регенеративной медицины. Способ заключается в том, что наряду с консервативными методами лечения, предлагается заместительная терапия повреждений кожных покровов при помощи полимерных матриксов, гистотипически подобных тканям организма, с биологически активными агентами: клеточными производными - коллагенами и ламининами, способствующими структурообразовательной функции поврежденной области.
Важнейшее и быстро развивающееся направление современной регенеративной медицины - применение клеточных технологий. Задача клеточных технологий в этом случае заключается не только в трансплантации живых клеток в область дефекта, но и в полном восстановлении структуры и функции кожного покрова, в стимуляции регенеративных процессов и создании микроокружения для реализации потенциала собственных тканей и клеток. Для решения таких задач используют методы тканевой инженерии [8]. Тканевая инженерия призвана решить многие задачи регенеративной медицины, которая рассматривает вопросы улучшения продолжительности и качества жизни человека за счет восстановления утраченных структур и фун
кций органов и тканей. Перспективным способом лечения и восстановления тканей может быть применение новых материалов, созданных на основе клеточных технологий [2, 3, 5, 6].
В настоящее время для лечения длительно незаживающих ран (трофические язвы, ожоги) и восстановления или временного закрытия обширных участков кожи разрабатывают подходы, основанные на
применении дерматотропных биомедицинских клеточных продуктов. Применение клеточных технологий в стимуляции регенерации тканей заключается в использовании клеток разных типов, биоматриксов и тканеинженерных конструкций в различных вариантах и сочетаниях.
Известны способы покрытия обширных ожогов эпидермальными аутотрансплантатами. Однако при применении эпидермальных пластов для лечения ожоговых больных возникают трудности с приживаемостью, в случае аллогенных трансплантатов иммуногенностью и доступностью. Успешно применялись в доклинических и клинических исследованиях различные другие типы клеток - дермальные фибробласты, мезенхимальные стволовые клетки костного мозга, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки. Однако данный подход к терапии, как правило, требует большого количества клеточного материала. Это не является серьезной проблемой при лечении небольших ран, но может ей стать при обработке обширных повреждений [8].
Известны способы эффективного применения для восстановления кожи дермальных компонентов - коллагеновых гелей, губок, модифицированных природными и синтетическими полимерами коллагеновых подложек, однако регенеративные процессы осложняются низкой стабильностью, биосовместимостью [9].
В клинических исследованиях с положительными результатами по закрытию относительно небольших ран показано применение эпидермальных и дермальных кожных эквивалентов, состоящих из бычьего коллагена с неонатальными фибробластами человека (Apligraf), аллогенных фибробластов крайней плоти новорожденных на синтетической подложке (Dermagraft), трехмерных коллагеновых гелей с фибробластами, однако в данных вариациях возникают сложности с инфицированностью, иммуногенностью, хранением и транспортировкой тканеинженерных конструкций [8,10].
Заявленный способ выполняют следующим образом. Коллаген первого типа выделяется из сухожилий крысиных хвостов. Для этого требуются взрослые крысы линии Вистар (или аналоги), весом от 300 грамм, содержащиеся в условиях лабораторных вивариев, исключающих наличие инфекций, паразитов и т.д. Крысиные хвосты после усыпления животных можно хранить несколько лет в заморозке при -20°С. Перед выделением коллагена, хвосты отмывают при помощи стандартных моющих средств и стерилизуют 70% этанолом в течение суток перед экстрагированием коллагена. Далее все манипуляции производят в стерильных условиях (в ламинарных шкафах 1 или 2-го класса биобезопасности). Кожу с хвоста снимают при помощи скальпеля и пинцетов, хвост разрезается на куски по 2- 3 см. Полученные таким образом куски хвоста еще раз инкубируются в 70% этаноле 15 минут. Затем при помощи пинцетов сухожилия извлекаются из хвоста, расщепляются на тонкие волокна и помещаются в сосуд со стерильным раствором 0,1% ледяной уксусной кислоты. Коллаген начинает экстрагироваться в раствор практически сразу, раствор приобретает вязкость и окрасу по типу синевато-опалесцирующей дымки. Для получения правильной концентрации и консистенции раствора, сухожилия с одного хвоста следует растворять в 100-150 мл раствора. Затем раствор инкубируется при +4°С в течении месяца. По возможности, каждый день следует доставать бутыль с раствором и размешивать осадок. В итоге образуется густая вязкая жидкость с нерастворенным осадком на дне. Далее раствор коллагена центрифугируется (1 час при 1500g~ 4000 об./мин. при радиусе ротора 10 см, при комнатной температуре) для осаждения нерастворенных волокон коллагена. Супернатант сливается в стерильные емкости для хранения. Концентрацию раствора можно посчитать, выпарив в суховоздушном термостате водную фракцию и взвесив образовавшийся осадок. Раствор коллагена можно считать приемлемым, при концентрации коллагена не ниже 1 мг/мл (обычно получается 3-5 мг/мл).
Для полимеризации коллагена следует нейтрализовать кислый раствор уксусной кислоты. Для этого раствор коллагена заливают в стерильную чашку Петри (радиус чашки по необходимости - Зсм, 6 см, либо 10 см.) и добавляют с перемешиванием соответствующее количество 0,1М раствора NaOH, для создания общего рНраствора ~ 7.0-7.2. Кислотность раствора можно легко определить, добавив концентрат среды Ml 99 содержащей краситель феноловый красный, цвет которого меняется в зависимости от pH. Необходимый цвет раствора - алый красный. Варьируя количество раствора коллагена, можно создавать матриксы различной глубины. Полимеризация коллагена происходит в течение 3-5 минут, поэтому все процедуры необходимо проводить быстро, желательно на льду. После добавления всех необходимых ингредиентов и перемешивания, чашку Петри с коллагеновым гелем ставят в инкубатор на +37 °С на несколько часов (сутки оптимально).
На следующий день на коллагеновый гель высаживают клетки линии НаСаТ в плотности 10-40 тысяч клеток на см2. Клетки линии НаСаТ являются иммортализованными кератиноцитами человека, хорошо пролиферируют и широко используются в научных исследованиях. Сверху доливается необходимое количество полной ростовой культуральной среды для клеток НаСаТ и композиция далее инкубируется в течении нескольких суток до достижения плотного и сверхплотного клеточного монослоя. В течение этого времени клетки НаСаТ синтезируют ламининовый слой базальной мембраны на поверхности геля.
После достижения необходимой плотности клеток, получившийся матрикс фиксируют при помощи 4% параформальдегида, в течение 1 суток при +4°С. Таким образом, все белки композиции сшиваются между собой, образуя нерастворимый единый комплекс, клетки инактивируются. После фиксации, трансплант отмывают от формальдегида при помощи стерильного раствора фосфатно-солевого буфера (PBS), 3 раза по 15 минут с покачиванием на орбитальном шейкере. Далее проводят этап децеллюлирования матрикса при помощи раствора детергентов SDS и Triton-
X-100, в течении 1 суток при +4°С. Во время этого процесса нарушаются связи между липидами, липидами и белками, высвобождаются и вымываются все внутриклеточные компоненты, происходит деградация ДНК и РНК клеток. После децеллюлирования, трансплант отмывают от детергентов при помощи стерильного раствора фосфатно-солевого буфера (PBS), 6 раз по 1 часу с покачиванием на орбитальном шейкере. Последний этап промывки проводят в течение суток при +4°С. Далее матрикс можно хранить в течении месяца при +4°С в растворе PBS, либо два года высушенным в заморозке при -20°С.
Получившийся матрикс представляет собой белковую композицию, состоящую из двух основных компонентов - коллагена первого типа, и ламинина базальной мембраны, находящихся в полном гистотипическом подобии со строением кожи человека. Коллаген составляет строму транспланта, а ламинин покрывает строму в виде базальной мембраны. Матрикс стерильный, иммунотолерантный (поскольку коллаген является высоко консервативным и иммунотолерантным белком, а ламинин - человеческого происхождения), лишен какой-либо клеточной составляющей, что переводит его в разряд изделий медицинского назначения и сильно упрощает процедуру регистрации. В конечную композицию матрикса можно добавлять различные добавки (антибиотики, факторы роста, цитокины) что делает его удобной базовой моделью с большим потенциалом развития. Клеточную линию НаСаТможно поменять на другие иммортализованные клеточные линии эпителиального типа, производящие ламинины других типов, что позволит использовать матрикс для лечения других эпителио- мезенхимных дефектов (уротелия мочеточника, эпителия гортани, эпителия кишечника и т.д.).
Проведенные исследования in vitro позволили, с помощью клеточных технологий и применения биполимерного субстрата, получить данные о возможности образования устойчивой тканеинженерной гистотипической композиции на основе экстрагированного в виде гелевой пленки
коллагеновой матрицы с децеллюлированной ламининовой поверхностью. Иммуногистохимический флуоресцентный анализ идентифицировал экспрессию композитных белков - коллагена I типа и ламинина, а также панцитокератина - маркера эпителиальных клеток. Таким образом, предлагаемый вариант трехмерной матрицы представляет собой белковую композицию, состоящую из двух основных компонентов - коллагена первого типа, и ламинина базальной мембраны, находящихся в полном гистотипическом подобии со строением кожи человека. Семейства белков коллагенов и ламининов являются двумя самыми распространёнными типами белков кожного покрова человека. Коллаген является основой мезенхимного компонента дермы кожи, обеспечивая ее механическую прочность и упругость. Ламинин является основой любых базальных мембран органов, в том числе и базальной мембраны кожи [1, 7].
Результаты контролируемых исследований динамики течения моделируемого раневого процесса в течение 21 суток, полученные на модели лоскутной кожно-мышечной раны у крыс-самцов линии Вистар, свидетельствуют о том, что в группах с применением коллаген-ламининовой матрицы на 7, 14 сутки ускорялась динамика сокращения площади раневых дефектов. Рост грануляционной ткани наблюдали со дна раны, в новообразованиях соединительной ткани отмечали васкуляризацию.
Полученные данные по восстановлению целостности кожного покрова свидетельствуют о том, что созданная репаративная композиция обладает высокой эффективностью ранозаживления, благодаря направленному росту регенерирующей ткани с поддержанием процессов васкуляризации. Разработанный биосовместимый коллаген-ламининовый ранозаживляющий материал, основанный на комбинации полимерной подложки и продукта синтеза кератиноцитов человека, при этом лишенный клеточной составляющей, отличается сравнительной простотой изготовления, длительностью срока хранения, что позволяет рекомендовать конструкцию к внедрению.
Литература
1. Алексеева Н.Т. Морфологические особенности раневого процесса в коже при региональном лечебном воздействии. - дисс. на соиск. д.м.н. -
2015. -327 с.
2. Григорян А. С., Кругляков П. В. Применение в тканевой инженерии крупных сосудов трансплантантов на основе аутогенных мононуклеарных клеток костного мозга // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2009. - Том IV.- К°3. _ с. 37-41.
3. Капорская А. Н., Синицына Т.Ю., Азизов И.Г. Создание биополимерных матриц для регенеративного тканегенеза. - Актуальные вопросы биомедицинской инженерии. Сборник материалов VI Всероссийской научной конференции для молодых ученых. - 2017. - С. 39.
4. Обзор рынка биотехнологий в России и оценка перспектив его развития, аналитический обзор компании «FrostandSullivan». - 2014. - 69 с.
5. Панарин Е. Ф., Нудьга Л. А., Петрова В. А., Бочек А. М., Гофман И. В, Лебедева М. Ф., Блинова М. И., Спичкина О. Г., Юдинцева Н. М., Пинаев Г. П. Матрицы для культивирования клеток кожи человека на основе природных полисахаридов - хитина и хитозана // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2009. -Том IV. - N°3 - С. 42-46.
6. Шаповалова Е.Ю., Бойко Т.А., Барановский Ю.Г., Каракулькина О.А., Барановский А.Г. Оптимизация типа коллагена каркаса в биоинженерных конструкциях для заживления язв кожи с учетом эмбриогенеза кожи у эмбрионов человека // Вестник Уральской медицинской академической науки - 2014. - N° 5- С.107-110.
7. Gould L. J. Topical Collagen-Based Biomaterals for Chronic Wounds: Rationale and Clinical Application. // Advances in wound care (New Rochelle). -
2016. - Volume 5. - JST°1. - P. 19-31.
8. Meleshina A.V., Bystrova A.S., Rogovaya O.S., Vorotelyak E.A., Vasiliev A.V., Zagaynova E.V. Tissue-engineered skin constructs and application of stem
cells for creation of skin equivalents (review). //Sovremennye tehnologii v medicine. - 2017 - 9(1) - P. 198 - 218.
9. Still J., Glat P., Silverstein P., Griswold J., Mozingo D. The use of a collagen sponge/living cell composite material to treat donor sites in bum patients. //Bums. - 2003 - 29(8) - P. 837-841.
10. Waymack P., Duff R.G., Sabolinski M. The effect of a tissue engineered bilayered living skin analog, over meshed split-thickness autografts on the healing of excised bum wounds. The Apligraf Bum Study Group. // Bums. - 2000 - 26(7) - P. 609-619.
Claims
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека, включающий получение тканеинженерной раневой композиции при помощи сочетания методик экстрагирования коллагена из сухожилий хвоста крыс, формирования коллагеновых матриц, культивирования иммортализованных кератиноцитов кожи линии НаСаТ на коллагеновой подложке, отличающийся тем, что при помощи раствора детергентов SDS (до децил сульфат натрия) и Triton-X-100 (октилфенилполиоксиэтилен) проводится децеллюлирование (выведение клеток из конечного продукта) образованной коллагеновой пленки с сохранением на ее поверхности ламинина (основного белка базальной мембраны), синтезированного клетками линии НаСаТ.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US17/250,058 US20210220518A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-03-20 | Producing method of the collagen-laminin matrix for healing ulcers, burns and wounds of a human skin |
| CN201980032852.XA CN112118860B (zh) | 2018-05-15 | 2019-03-20 | 用于治疗人体皮肤溃疡、烧伤以及创面的胶原蛋白-层粘连蛋白基质的生产方法 |
| DE112019002479.5T DE112019002479B4 (de) | 2018-05-15 | 2019-03-20 | Verfahren zur herstellung einer kollagen-laminin-matrix zur heilung von hautgeschwüren, verbrennungen und wunden beim menschen |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018117999A RU2736480C2 (ru) | 2018-05-15 | 2018-05-15 | Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека |
| RU2018117999 | 2018-05-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2019221639A1 true WO2019221639A1 (ru) | 2019-11-21 |
Family
ID=68540932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2019/050029 WO2019221639A1 (ru) | 2018-05-15 | 2019-03-20 | Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210220518A1 (ru) |
| CN (1) | CN112118860B (ru) |
| DE (1) | DE112019002479B4 (ru) |
| RU (1) | RU2736480C2 (ru) |
| WO (1) | WO2019221639A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116019982A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-04-28 | 杭州华迈医疗科技有限公司 | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4485096A (en) * | 1982-02-26 | 1984-11-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue-equivalent and method for preparation thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU5574101A (en) * | 2000-04-28 | 2001-11-12 | Univ Emory | Decellularized vascular prostheses |
| JP2004262861A (ja) * | 2003-03-03 | 2004-09-24 | Naris Cosmetics Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| JP2009542348A (ja) * | 2006-07-07 | 2009-12-03 | サーモディクス，インコーポレイティド | 治癒前コーティングを備える、移植可能な医療物品 |
| KR101833895B1 (ko) * | 2016-01-29 | 2018-03-05 | 주식회사 바이오에프디엔씨 | 미코스포린―유사 아미노산을 함유한 창상 치유용 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법 |
-
2018
- 2018-05-15 RU RU2018117999A patent/RU2736480C2/ru active
-
2019
- 2019-03-20 CN CN201980032852.XA patent/CN112118860B/zh active Active
- 2019-03-20 WO PCT/RU2019/050029 patent/WO2019221639A1/ru active Application Filing
- 2019-03-20 DE DE112019002479.5T patent/DE112019002479B4/de active Active
- 2019-03-20 US US17/250,058 patent/US20210220518A1/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4485096A (en) * | 1982-02-26 | 1984-11-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue-equivalent and method for preparation thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| AKHMEDOV SH. D. ET AL.: "Tkanevaia inzheneriia v eksperimentalnoi serdechno-sosudistoi khirurgii", KLETOCHNAIA TRANSPLANTOLOGIIA I TKANEVAIA INZHENERIIA, vol. 6, no. 1, 2011, pages 69 - 72 * |
| BOELSMA E. ET AL.: "Reconstruction of a human skin equivalent using a spontaneously transformed keratinocyte cell line (HaCaT).", JOURNAL OF INVESTIGATIVE DERMATOLOGY, 1999, pages 489 - 498, XP002213712 * |
| CHANDRAKASAN G. ET AL.: "Preparation of intact monomeric collagen from rat tail tendon and skin and the structure of the nonhelical ends in solution", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 1976, pages 6062 - 6067, XP055529930 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018117999A (ru) | 2019-11-15 |
| CN112118860B (zh) | 2024-10-18 |
| CN112118860A (zh) | 2020-12-22 |
| DE112019002479T5 (de) | 2021-03-04 |
| DE112019002479B4 (de) | 2021-12-30 |
| RU2736480C2 (ru) | 2020-11-17 |
| RU2018117999A3 (ru) | 2019-11-15 |
| US20210220518A1 (en) | 2021-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Loh et al. | Development of a bacterial cellulose-based hydrogel cell carrier containing keratinocytes and fibroblasts for full-thickness wound healing | |
| Zhang et al. | Use of extracellular matrix hydrogel from human placenta to restore hair-inductive potential of dermal papilla cells | |
| CN105999414B (zh) | 制备人造微环境的方法及其应用 | |
| EP3326660B1 (en) | A ready to use biodegradable and biocompatible artificial skin substitute and a method of preparation thereof | |
| KR100298846B1 (ko) | 중화키토산스폰지또는중화키토산/콜라겐혼합스폰지를이용한인공진피 | |
| US20200078492A1 (en) | Process for obtaining a functional dermal substitute of decellurized amniotic membrane from the placenta combination with keratinocytes and its use as an agent for tissue regeneration of the skin | |
| Anton-Sales et al. | Bacterial nanocellulose and titania hybrids: cytocompatible and cryopreservable cell carriers | |
| RU2483756C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОДЕГРАДИРУЕМОГО КОМПОЗИТНОГО МАТРИКСА НА ОСНОВЕ РЕГЕНЕРИРОВАННОГО ФИБРОИНА ШЕЛКА Bombyx mori И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | |
| WO2021012677A1 (zh) | 一种仿生的预脉管化材料及其制备方法和应用 | |
| CN107683148B (zh) | 皮肤重建方法 | |
| Ríos-Galacho et al. | An overview on the manufacturing of functional and mature cellular skin substitutes | |
| KR101859654B1 (ko) | 각막 탈세포화 세포외 기질을 함유하는 각막 유래 세포의 지지체 및 이를 포함하는 인공 각막 시트 | |
| Lee et al. | Three-dimensional artificial skin construct bioprinted with a marine-based biocomposite | |
| US20030202965A1 (en) | Methods and compositions for the preparation of cell transplants | |
| JPH06503735A (ja) | 創傷用包帯剤およびその製造法 | |
| RU2736480C2 (ru) | Способ производства коллаген-ламининового матрикса для заживления язв, ожогов и ран кожи человека | |
| AU2015355187C1 (en) | Methods for development and use of minimally polarized function cell micro-aggregate units in tissue applications using LGR4, LGR5 and LGR6 expressing epithelial stem cells | |
| US20200282107A1 (en) | Sterile clear concentrated solution of biocompatible collagen, process for the preparation and use thereof | |
| JP2009518091A (ja) | 非無機化（ｎｏｎ‐ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ）結合組織の工学のためのビブリオ・ディアボリカス（Ｖｉｂｒｉｏｄｉａｂｏｌｉｃｕｓ）種により分泌される多糖の使用 | |
| US20230069065A1 (en) | Novel corneal tissues and methods of making the same | |
| Shved et al. | Interaction of cultured skin cells with the polylactide matrix coved with different collagen structural isoforms | |
| RU2795904C1 (ru) | Способ изготовления бесклеточного матрикса из пуповины человека для создания высокорегенеративного раневого покрытия | |
| RU2817370C1 (ru) | Матрикс адгезионный биоактивный для работы с культурами клеток и способ его применения | |
| CN1327911C (zh) | 组织工程表皮替代物及其制备方法 | |
| CA2682453C (en) | Method for obtaining three-dimensional structures for tissue engineering |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 19803371 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 19803371 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |