WO2019031425A1 - 運動ニューロン疾患治療剤 - Google Patents

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WO2019031425A1
WO2019031425A1 PCT/JP2018/029333 JP2018029333W WO2019031425A1 WO 2019031425 A1 WO2019031425 A1 WO 2019031425A1 JP 2018029333 W JP2018029333 W JP 2018029333W WO 2019031425 A1 WO2019031425 A1 WO 2019031425A1
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src
sbma
substituent
motor neuron
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PCT/JP2018/029333
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円 飯田
雅央 勝野
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国立大学法人名古屋大学
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Definitions

  • the present invention belongs to the technical field of therapeutic agents for neuromuscular diseases.
  • the present invention relates to a therapeutic agent for motor neuron disease.
  • the present invention relates to a therapeutic agent for motor neuron disease comprising an Src inhibitor as an active ingredient.
  • Motor neurons are nerve cells that control skeletal muscle. Neurons that leave the cerebrum to the spinal cord or brainstem are called upper neurons, and neurons that continue from the spinal cord or brainstem to the muscles are called lower neurons. Motor neuron disease is a general term for diseases in which muscles of the whole body are gradually atrophy and motor function is lost by degeneration or death of the motor neurons. It usually follows a fatal course due to respiratory failure etc. Specific motor neuron diseases include, for example, upper and lower motor neuron diseases, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), and lower motor neuron diseases, bulbar and muscular atrophy ( SBMA: Spinal and bulbar muscular atrophy (SMA) and spinal muscular atrophy (SMA).
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • SBMA bulbar and muscular atrophy
  • SMA Spinal and bulbar muscular atrophy
  • SMA spinal muscular atrophy
  • ALS develops after middle age, and symptoms include tendon hyperreflexia, pathological reflex, progressive muscle atrophy and muscle weakness, and motor function disappears in several months to several years. About 5 to 10% are heritable. SBMA occurs in only 1 or 2 adults per 100,000, and affects only adult males. Symptoms include progressive muscle atrophy, muscle weakness, gynecomastia, and glucose intolerance.
  • Pathogenesis includes abnormal elongation of the CAG sequence of the androgen receptor gene (AR). All are intractable, the full spectrum of their molecular pathogenesis is unknown, and no radical treatment has been found.
  • Patent Literature 1 is an example of a therapeutic agent for motor neuron diseases such as ALS.
  • Patent Document 1 discloses a motor neuron disease therapeutic agent containing an oligopeptide represented by Ser-Ala-Leu-Arg-Ser-Ile-Pro-Ala as an active ingredient.
  • Patent Document 2 discloses, for SBMA, a bulbo-spinal muscular atrophy therapeutic agent containing triptan as an active ingredient.
  • Src is known as a proto-oncogene and is a non-receptor tyrosine kinase protein.
  • Src also exists in mammalian genes, and it became known that mutations in the Src gene possessed by normal cells cause canceration of cells.
  • Src gene mutations are rarely seen in human tumors, Src activation is seen in tumors such as colon, liver, lung, breast, pancreas, prostate, blood, etc., and promotes the angiogenesis, proliferation, and invasion pathways.
  • the inhibitor of Src is being developed as a therapeutic agent for chronic myelogenous leukemia (CML) and acute lymphocytic leukemia (ALL).
  • CML chronic myelogenous leukemia
  • ALL acute lymphocytic leukemia
  • motor neuron diseases are intractable diseases that have a fatal course due to respiratory failure and the like. Its molecular pathology is unknown and no fundamental treatment has been found. As one of the factors, although various molecular abnormalities occur in motor neuron disease, it is considered that the essential molecular mechanism contributing to the root of the pathological condition has not been clarified.
  • the present invention relates to treating motor neuron diseases with compounds that identify intracellular signals that strongly contribute to the early pathology of motor neuron diseases and correct the abnormal signals. As a specific object of the present invention, for example, it can be mentioned to provide a novel therapeutic agent for motor neuron disease.
  • the present inventors conducted a timely and comprehensive signal analysis of the spinal cord and skeletal muscle of a disease model mouse exhibiting motor neuron disease using the Bio-Plex multiplex system, and in the spinal cord of the SBMA model mouse, That Src phosphorylation is consistently elevated from before onset to late onset, that it is also elevated in skeletal muscle before onset and early onset, and further that phosphorylation of Stat3 present downstream of Src is not onset It was elevated in the spinal cord and skeletal muscle, and it was found that Src signal is closely related to the pathogenesis of SBMA. In addition, in the spinal cord and skeletal muscle of ALS model mice, increased phosphorylation was observed before onset. Based on these findings, as a result of intensive studies, they have found that Src inhibitors are effective for the treatment of motor neuron diseases, and have completed the present invention.
  • a therapeutic agent for motor neuron disease which comprises an Src inhibitor as an active ingredient.
  • the therapeutic agent according to the above-mentioned [1], wherein the motor neuron disease is bulbar and spinal muscular atrophy (SBMA), amyotrophic lateral sclerosis (ALS), or spinal muscular atrophy (SMA) .
  • SBMA bulbar and spinal muscular atrophy
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • SMA spinal muscular atrophy
  • the therapeutic agent according to the above [1] or [2], wherein the Src inhibitor is a compound represented by the following general formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 represents H, an alkyl which may have a substituent, an aryl which may have a substituent, or a heteroaryl which may have a substituent.
  • R 2 represents H.
  • R 3 represents H or alkyl which may have a substituent.
  • R 4 represents H, aryl which may have a substituent, or heterocycloalkyloxy which may have a substituent.
  • R 5 , R 6 and R 7 are the same or different and each represents H or alkoxy which may have a substituent.
  • R 8 represents H, alkyl which may have a substituent, or cycloalkyl which may have a substituent.
  • [5] A method for treating motor neuron disease, comprising administering a Src inhibitor to a human.
  • SBMA bulbar and spinal muscular atrophy
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • SMA spinal muscular atrophy
  • motor neuron diseases (particularly, SBMA and ALS) can be effectively treated.
  • a figure is an electrophoresis photograph by Western blot using mouse spinal cord.
  • the upper three rows show the results before onset (6 weeks old), the middle 3 rows show the results of early onset period (9 weeks old), and the lower three rows show the results after late onset period (13 weeks old).
  • the left 4 columns show the results of wild type mice, and the right 4 columns show the results of SBMA model mice (AR-97Q).
  • Panel B represents the results of quantification of bands in the Western blot in panel A.
  • the vertical axis represents the ratio of the amount of phosphorylated Src protein per total amount of Src protein (p-Src / Src).
  • the left graph shows the results before onset (6 weeks old), the middle graph shows the results before onset (9 weeks old), and the right graph shows the results after late onset (13 weeks old).
  • the left column shows the results of wild type mice, and the right column shows the results of SBMA model mice (AR-97Q).
  • C is a photograph of immunostaining of phosphorylated Src in pre-morbid (6 weeks old) SBMA model mice (AR-97Q).
  • the left picture shows the result of wild type mouse, and the right picture shows the result of SBMA model mouse (AR-97Q).
  • a figure is an electrophoresis photograph by Western blot using mouse skeletal muscle.
  • the upper three rows show the results before onset (6 weeks old), the middle 3 rows show the results of early onset period (9 weeks old), and the lower three rows show the results after late onset period (13 weeks old).
  • the left 4 columns show the results of wild type mice, and the right 4 columns show the results of SBMA model mice (AR-97Q).
  • Panel B represents the results of quantification of bands in the Western blot in panel A.
  • the vertical axis represents the ratio of the amount of phosphorylated Src protein per total amount of Src protein (p-Src / Src).
  • the left graph shows the results before onset (6 weeks old), the middle graph shows the results before onset (9 weeks old), and the right graph shows the results after late onset (13 weeks old).
  • the upper two figures are electrophoresis photographs by western blot using the SBMA cell model (NSC34).
  • the left 4 columns show the results of the control cell model (AR-24Q), and the right 4 columns show the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • the lower graph shows the quantification results of the western blot bands in the upper two figures.
  • the vertical axis represents the ratio of the amount of phosphorylated Src protein per total amount of Src protein (p-Src / Src).
  • the left two columns show the results of the control cell model (AR-24Q), and the right two columns show the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • the upper two figures are electrophoresis photographs by western blot using the SBMA cell model (C2C12).
  • the center-left column shows the results of the control cell model (AR-24Q)
  • the center-right column shows the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • the lower graph shows the quantification results of the western blot bands in the upper two figures.
  • the vertical axis represents the ratio of the amount of phosphorylated Src protein per total amount of Src protein (p-Src / Src).
  • the left two columns show the results of the control cell model (AR-24Q), and the right two columns show the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • FIG. 10 depicts the effects of Src inhibitors in the SBMA cell model (NSC34).
  • the left end graph shows the result of SKI-1
  • the second graph from the left shows the result of PP2
  • the second graph from the right shows the result of A419259 trihydrochloride
  • the right end graph shows the result of saracatinib.
  • the vertical axis shows the cell survival rate.
  • the left end column shows the result of the control cell model (AR-24Q)
  • the middle and right columns show the result of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • FIG. 10 depicts the effects of Src inhibitors in the SBMA cell model (C2C12).
  • the left end graph shows the result of SKI-1
  • the second graph from the left shows the result of PP2
  • the second graph from the right shows the result of A419259 trihydrochloride
  • the right end graph shows the result of saracatinib.
  • the vertical axis shows the cell survival rate.
  • the left end column shows the result of the control cell model (AR-24Q)
  • the middle and right columns show the result of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • FIG. 16 depicts the results of transient forced expression of Src in the SBMA cell model (NSC34).
  • the two figures on the right are electrophoresis photographs by Western blot. Among them, the upper figure shows the result of the control cell model (AR-24Q), and the lower figure shows the result of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • the graph on the left represents the effect of transient forced expression of Src in control and SBMA cell models.
  • the vertical axis shows the cell survival rate.
  • the left 2 columns show the results of the control cell model (AR-24Q)
  • the right 2 columns show the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • FIG. 16 depicts the results of transient forced expression of Src in the SBMA cell model (C2C12).
  • the two figures on the right are electrophoresis photographs by Western blot. Among them, the upper figure shows the result of the control cell model (AR-24Q), and the lower figure shows the result of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • the graph on the left represents the effect of transient forced expression of Src in control and SBMA cell models.
  • the vertical axis shows the cell survival rate.
  • the left 2 columns show the results of the control cell model (AR-24Q)
  • the right 2 columns show the results of the SBMA cell model (AR-97Q).
  • FIG. 1 It is an electrophoresis photograph by western blot.
  • the left 3 columns show the results in the spinal cord of the SBMA model mouse
  • the right 3 columns show the results in the skeletal muscle of the SBMA model mouse.
  • the left row (0) shows the results for the H 2 O administration group
  • the middle row (B) shows the results for the 0.5 mg / kg / day A419259 trihydrochloride group
  • the right row (A) shows the results.
  • the results for the 5 mg / kg / day A419259 trihydrochloride group are shown respectively.
  • Figure 6 depicts the effect of Src inhibitor (A419259 trihydrochloride) in the SBMA mouse model.
  • the left end graph represents the transition of weight.
  • the vertical axis represents weight (g), and the horizontal axis represents time (week).
  • the second graph from the left shows the transition of grip strength.
  • the vertical axis indicates the grip strength (g) and the horizontal axis indicates the time (week).
  • the second graph from the right represents the transition of motor function.
  • the vertical axis indicates time (seconds) and the horizontal axis indicates time (weeks).
  • the rightmost graph shows the transition of the cumulative survival rate.
  • the horizontal axis shows time (weeks).
  • the left graph shows the results in the spinal cord, and the right graph shows the results in skeletal muscle.
  • the vertical axis indicates the percentage (%) of polyglutamine (1C2) positive cells.
  • the left column shows the result of the control group of the SBMA mouse model, and the right column shows the result of the Src inhibitor administration group to the SBMA mouse model.
  • the agent for treating motor neuron diseases according to the present invention (hereinafter also referred to as “the agent for the present invention”) is characterized by containing an Src inhibitor as an active ingredient.
  • the motor neuron diseases targeted by the therapeutic agent of the present invention are not particularly limited whether they are upper and lower motor neuron diseases or lower motor neuron diseases alone. Specifically, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), bulbar and spinal muscular atrophy (SBMA), and spinal muscular atrophy (SMA) can be mentioned.
  • the therapeutic agents of the invention are particularly preferred for the treatment of SBMA.
  • the Src inhibitor contained in the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited as long as it effectively inhibits Src.
  • a compound represented by the above general formula (1) hereinafter referred to as “Src compound (1 ) Can be mentioned.
  • aryl include an aromatic hydrocarbon group having 6 to 12 carbon atoms, and specific examples include phenyl, tolyl, xylyl and naphthyl.
  • substituents in the “aryl optionally having substituent (s)” include alkoxy, halogen, phenoxy, a divalent group such as methylenedioxy and ethylenedioxy, which are adjacent to each other on aryl. And those substituted with two carbon atoms. One or more of these may be substituted at any position.
  • Specific examples of the substituted aryl group include 5-chloro-2,3-benzodioxol-4-yl.
  • heteroaryl examples include those having 3 to 10 carbon atoms, 0 to 1 oxygen atom, 0 to 1 sulfur atom and 0 to 2 nitrogen atoms, and specifically, for example, Mention may be made of 2-pyridyl, 2-furyl, 1,3-thiazol-2-yl.
  • substituent of “optionally substituted heteroaryl” include the same as the substituents of the above-mentioned “optionally substituted aryl”, and more specifically, for example, And N- (2-chloro-6-methylphenyl) -1,3-thiazole-5-carboxamido-2-yl.
  • alkyl for example, linear or branched alkyl having 1 to 4 carbon atoms can be mentioned, and specifically, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, propyl, n-butyl, Examples include isobutyl, sec-butyl and tert-butyl.
  • substituent of "the alkyl which may have a substituent" a hydroxyl group, alkoxy, a halogen atom etc. are mentioned, for example.
  • cycloalkyl examples include cycloalkyl having 3 to 8 carbon atoms, and specific examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl.
  • substituent in the “optionally substituted cycloalkyl” include alkyl, piperidyl, piperazinyl, 4-methyl-1-piperazinyl. One or more of these may be substituted at any position.
  • heterocycloalkyl for example, those in which one or more of the constituent carbon atoms of a cycloalkyl having 3 to 8 carbon atoms is replaced with a heteroatom such as nitrogen, oxygen or sulfur can be mentioned.
  • a heteroatom such as nitrogen, oxygen or sulfur
  • tetrahydrofuranyl, oxanyl, oxolanyl, morpholinyl, tetrahydro-2H-pyran-4-yl, piperazinyl can be mentioned.
  • an alkyl is mentioned, for example, and the said alkyl may be substituted by the hydroxyl group, the halogen atom, etc.
  • Heterocycloalkyloxy represents a group in which the above heterocycloalkyl is bonded to one of oxygen atoms, and examples of the substituent in “optionally substituted heterocycloalkyloxy” include Alkyl and alkoxy can be mentioned.
  • alkoxy for example, linear or branched alkyl having 1 to 4 carbon atoms can be mentioned, and specifically, methoxy, ethoxy, propoxy can be mentioned.
  • substituent of “optionally substituted alkoxy” include 4-methyl-1-piperazinyl. One or more of these may be substituted at any position.
  • halogen for example, fluorine, chlorine, bromine and iodine can be mentioned.
  • Src compounds (1) for example, SKI-1, PP2, A419259, saracatinib (Saracatinib), dasatinib (Dasatinib) can be mentioned. These are all known compounds known to have Src inhibitory activity, and have the following structures, respectively.
  • Stereoisomers and optical isomers may exist in the Src compound (1).
  • the pharmaceutically acceptable salt of Src compound (1) is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable, but, for example, hydrochloride, sulfate, nitrate, phosphate, carbonate, hydrogen carbonate Salt, hydrobromide, mineral acid salt such as hydroiodide, formate, acetate, propionate, trifluoroacetate, citrate, lactate, tartrate, oxalate, maleic acid Salt, fumarate, mandelate, glutarate, malate, benzoate, phthalate, ascorbate, methanesulfonate, ethanesulfonate, isethionate, benzenesulfonate, p Mention may be made of organic acid salts such as toluene sulfonate, aspartate, glutamate and the like.
  • the pharmaceutically acceptable salts also include hydrates and solvates. Hereinafter, these salts are also referred to as Src compound (1).
  • the Src compound (1) and pharmaceutically acceptable salts thereof can be produced by a conventional method using a compound known per se as a starting material. Further, some Src compounds (1) can be purchased from a reagent maker or the like.
  • the therapeutic agent of the present invention is, for example, preferably in the range of 0.01 to 99.5% by weight, preferably 0.5, of the Src inhibitor used, as it is or in a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier. It can be produced by blending in the range of ⁇ 90% by weight.
  • the carrier include solid, semi-solid or liquid diluents, fillers, and other formulation aids. One or more of these can be used.
  • the dosage form of the therapeutic agent of the present invention varies depending on the Src inhibitor and the like used, it is, for example, a solid or liquid dose unit, powder, capsule, tablet, sugar coating, granule, powder, suspension, solution
  • the composition can be in any form of orally administered preparations such as syrups, elixirs and troches, parenteral preparations such as injections, drip preparations and suppositories. It may be a sustained release preparation.
  • the injection may be a ready-to-use injection kit or a drip kit.
  • Powdered powder can be prepared by appropriately sizing the Src inhibitor. Powders can be prepared by mixing the Src inhibitor with appropriate fineness and then similarly finely divided pharmaceutical carriers such as starch, edible carbohydrates such as mannitol. Flavoring agents, preservatives, dispersing agents, coloring agents, flavoring agents and the like can be optionally added.
  • the capsule is first produced by filling the powdery powder as described above or the granulated powder as described in the section of powder or tablet into, for example, a capsule shell such as a gelatin capsule. can do.
  • Lubricants and fluidizers for example, colloidal silica, talc, magnesium stearate, calcium stearate, polyethylene glycol in solid form may be mixed with the powdery ones and then subjected to a filling operation.
  • Disintegrants and solubilizers such as carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, low-substituted hydroxypropylcellulose, croscarmellose sodium, carboxymethylstarch sodium, calcium carbonate and sodium carbonate, when the capsule is ingested
  • a fine powder of Src inhibitor may be suspended in vegetable oil, polyethylene glycol, glycerin, surfactant, and dispersed, and then wrapped in a gelatin sheet to make a soft capsule.
  • Tablets can be prepared by adding excipients to form a powder mixture, granulating or slugging, and adding a disintegrant or lubricant followed by compression.
  • Powder mixtures can be prepared by mixing the suitably powdered material with the above-described diluents and bases.
  • a binder eg, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropyl methylcellulose, gelatin, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol
  • a dissolution delaying agent eg, paraffin
  • a resorbing agent eg, quaternary salt
  • An adsorbent eg bentonite, kaolin
  • the powder mixture can be first wetted with a binder such as syrup, starch paste, gum arabic, cellulose solution or polymer solution, stirred and mixed, dried and ground into granules.
  • a binder such as syrup, starch paste, gum arabic, cellulose solution or polymer solution
  • stearic acid, a stearate, a talc, mineral oil etc. as a lubricant to the granules produced in this way, it can prevent adhering to each other.
  • Tablets can also be made by direct compression after mixing the Src inhibitor with a flowable inert carrier, without going through the granulation and slugging steps as described above.
  • the tablets thus produced can be film-coated and sugar-coated.
  • a clear or translucent protective coating consisting of a sealing coat of shellac, a coating of sugar or polymeric material and a polishing coating consisting of wax can also be used.
  • compositions such as solutions, syrups, troches and elixirs, can also be in dosage unit form so that a fixed amount contains a fixed amount of the Src inhibitor.
  • Syrups can be prepared by dissolving the Src inhibitor in a suitable aqueous flavor solution.
  • Elixirs can be prepared by using non-toxic alcoholic carriers.
  • Suspension agents can be prepared by dispersing Src inhibitors etc. in a nontoxic carrier. If necessary, solubilizers and emulsifiers (for example, ethoxylated isostearyl alcohols, polyoxyethylene sorbitol esters), preservatives, flavor imparting agents (for example, peppermint oil, saccharin), etc. may be added. it can.
  • dosage unit formulations for oral administration can be microencapsulated. The formulation can also provide extended duration of action and sustained release by coating, embedding in polymers, waxes and the like.
  • the parenteral preparation can take the form of liquid dosage units, for example solutions or suspensions, for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection.
  • the parenteral dosage form is prepared by suspending or dissolving a fixed amount of the Src inhibitor in a non-toxic liquid carrier compatible with the purpose of injection, such as an aqueous or oily vehicle, and then sterilizing the suspension or solution. It can be manufactured by carrying out. Non-toxic salts and salt solutions can be added to render the injection isotonic. In addition, stabilizers, preservatives, emulsifiers and the like can be added. Similarly, it can be an infusion preparation.
  • Suppositories are Src inhibitors soluble or insoluble in water with a low melting point, such as polyethylene glycol, cacao butter, semi-synthetic fats and oils [eg Witepsol (registered trademark)], higher esters (eg palmitic acid) It can be prepared by dissolving or suspending it in myristyl ester) or a mixture thereof.
  • a low melting point such as polyethylene glycol, cacao butter, semi-synthetic fats and oils [eg Witepsol (registered trademark)], higher esters (eg palmitic acid) It can be prepared by dissolving or suspending it in myristyl ester) or a mixture thereof.
  • the dose of the Src inhibitor in the therapeutic agent of the present invention varies depending on the type of Src inhibitor, type of disease or disorder, patient's condition such as body weight and age, dosage form, administration method, administration route, degree of symptoms and the like.
  • the dose of Src inhibitor is suitably in the range of 0.1 mg / kg to 10 mg / kg per day, and in the range of 0.5 mg / kg to 5 mg / kg
  • the range of 1 mg / kg to 3 mg / kg is more preferable. In some cases, below this may be sufficient, and conversely more doses may be required.
  • administration method of the therapeutic agent of the present invention for example, oral administration, intravenous administration, intraportal administration, subcutaneous administration, intravenous administration, topical administration (eg, transmucosal administration, nasal administration, inhalation administration, transdermal administration)
  • topical administration eg, transmucosal administration, nasal administration, inhalation administration, transdermal administration
  • the number of times of administration varies depending on the type and dose of the active ingredient, dosage form, condition of the patient, etc., it can be administered, for example, once to several times daily or at intervals of one day to several days.
  • the therapeutic agent of the present invention can also be used to prevent or alleviate or improve motor neuron disease. Therefore, the term “therapeutic agent” according to the present invention also includes concepts as “preventive agent”, “improvement agent” and the like.
  • the present invention also includes a method for treating a motor neuron disease (hereinafter referred to as "the treatment method of the present invention"), which comprises administering an Src inhibitor to a human.
  • the treatment method of the present invention although the Src therapeutic agent varies depending on the type of the Src therapeutic agent used, etc., it can be prepared in an appropriate dosage form and administered to humans. As the dosage or the dosage, the administration method, etc., those mentioned above can be mentioned.
  • 18 types of antibody beads were prepared including GAPDH control enzyme.
  • the spinal cord and skeletal muscle were frozen in dry ice-cold acetone immediately after collection from the mouse, and the protocol for sample preparation and assay followed that of the manufacturer. After all the reactions were completed, the fluorescence intensity was measured with Luminex® 200 ⁇ PONET® 3.1 system (Merck Millipore).
  • Immobilon-P transfer membrane manufactured by Merck Millipore
  • a tank blotting apparatus manufactured by Bio-rad
  • ECL TM Rabbit IgG GE Healthcare Co., NA9340
  • ECL TM Mouse IgG GE Healthcare Co., NA9310
  • ECL TM Prime Western Blotting Detection Reagent GE Healthcare Co., RPN2232
  • the signal was amplified and detected by LAS-3000 imaging system (manufactured by Fujifilm Corporation). Thereafter, the band was quantified with IMAGE GAUGE software version 4.22 (manufactured by Fuji Film), and statistically analyzed by SPSS Statistics 24 (manufactured by IBM). The results are shown in FIG. 1 (B) (spinal cord) and FIG. 2 (B) (skeletal muscle).
  • FIG. 2 (A) and FIG. 2 (B) in the analysis of skeletal muscle by Western blot, Src phosphorylation is increased at 6 weeks and 9 weeks in comparison with wild type mice, 13 weeks It was decreasing with age.
  • FIG. 2 (C) in immunostaining of phosphorylated Src, in skeletal muscle of skeletal muscle in skeletal muscle of 6-week-old SBMA mouse model (AR-97Q) compared to control (Wt) The expression of phosphorylated Src was stronger.
  • DHT 5 ⁇ -Dihydrotestosterone
  • SBMA cell model and control cell model are adjusted to a concentration of 2.0 ⁇ 10 5 cells / mL for NSC34 and 1.5 ⁇ 10 5 cells / mL for C2C12, using D-MEM medium supplemented with 10% FCS And seeded in a 24-well plate.
  • NSC34 was replaced with D-MEM medium supplemented with 1% FCS
  • C2C12 was replaced with D-MEM medium supplemented with 2% horse serum, and the cells were cultured for 48 hours. After culture for an additional 24 hours with the addition of 10 nM DHT (ethanol was used as a control), the cells were harvested and subjected to Western blotting.
  • SKI Src kinase inhibitor
  • SKI-1 Abcams, ab 120839
  • PP2 Cayman, 13198
  • A419259 trihydrochloride Tocris, 3914
  • Saracatinib ChemScene, 379231-04
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • Control group using control cell model and SBMA cell model 1 ⁇ L of DMSO was administered to 500 ⁇ L of D-MEM medium.
  • DHT was further added to a final concentration of 10 nM and cultured for 24 hours.
  • 50 ⁇ l of Cell Counting Kit-8 manufactured by Dojin Science Laboratories
  • the absorbance was measured by multimode plate reader Enspire (manufactured by PerkinElmer). The protocol followed that of the manufacturer. The results are shown in FIG. 5 and FIG.
  • NSC34 was replaced with D-MEM medium supplemented with 1% FCS
  • C2C12 was replaced with D-MEM medium supplemented with 2% horse serum.
  • DHT was added to a final concentration of 10 nM and allowed to differentiate for another 24 hours.
  • 50 ⁇ L of Cell Counting Kit-8 manufactured by Dojin Science Laboratories
  • 50 ⁇ L of Cell Counting Kit-8 was mixed dropwise to each well, and cultured at 37 ° C. for 4 hours, and then the absorbance was measured by multimode plate reader Enspire (manufactured by PerkinElmer). Under the same conditions, cells were recovered and subjected to Western blotting to confirm the expression level of phosphorylated Src. The results are shown in FIG. 7 and FIG.
  • the therapeutic agent of the present invention is useful, for example, in the treatment of motor neuron diseases such as SBMA, ALS, SMA, etc., and thus, may be used, for example, in the pharmaceutical industry.

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Abstract

本発明は、新規な運動ニューロン疾患治療剤を提供することを主な課題とする。　本発明として、例えば、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９三塩酸塩、サラカチニブ、ダサチニブなどのＳｒｃ阻害薬を有効成分として含有することを特徴とする運動ニューロン疾患治療剤や、当該Ｓｒｃ阻害薬をヒトに投与することを含む運動ニューロン疾患の治療方法を挙げることができる。本発明治療剤等は、特に球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）や筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ)といった運動ニューロン疾患に対して有用である。

Description

運動ニューロン疾患治療剤
　本発明は、神経筋疾患の治療剤の技術分野に属する。本発明は、運動ニューロン疾患治療剤に関するものである。詳しくは、本発明は、Ｓｒｃ阻害薬を有効成分として含有する運動ニューロン疾患治療剤に関するものである。
　運動ニューロンは、骨格筋を支配する神経細胞である。大脳から出て脊髄または脳幹に至るまでの神経単位を上位ニューロンといい、脊髄または脳幹から筋肉まで続いている神経単位を下位ニューロンという。
　運動ニューロン疾患は、当該運動ニューロンが変性ないし死滅することによって、全身の筋肉が徐々に萎縮し、運動機能が失われていく病気の総称である。通常、呼吸不全などにより致命的な経過を辿る。具体的な運動ニューロン疾患としては、例えば、上位および下位の運動ニューロン疾患である筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ：Amyotrophic lateral sclerosis）、下位運動ニューロンのみの疾患である球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ：Spinal and bulbar muscular atrophy）や脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ：Spinal muscular atrophy)が挙げられる。この中、ＡＬＳは、中年以降に発症し、症状としては、腱反射亢進、病的反射、進行性の筋萎縮や筋力低下をきたし、数ヶ月から数年で運動機能が廃絶する。５～１０％程度が遺伝性である。ＳＢＭＡは、１０万人に一人か二人の割合で、成人男性のみに発症し、症状としては、進行性の筋萎縮や筋力低下、女性化乳房、耐糖能異常を呈する。病因としては、アンドロゲン受容体遺伝子（ＡＲ）のＣＡＧ配列の異常伸長が挙げられる。いずれも難治性であり、その分子病態の全容は不明であり、根本的治療法は見出されていない。
　運動ニューロン疾患に対して、これまで動物モデルを用いた解析により低分子化合物などを用いた分子標的治療が開発され前臨床試験では有効性が示されている。しかし、その殆どについて臨床試験では有効性が示されていない。このような状況において、リルゾール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ、リルテック（登録商標））がＡＬＳ治療剤として製造承認されている。
　ＡＬＳなどの運動ニューロン疾患の治療剤を開示するものとして、例えば、特許文献１が挙げられる。特許文献１には、Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａで示されるオリゴペプチドを有効成分として含有する運動ニューロン疾患治療剤が開示されている。また、特許文献２には、ＳＢＭＡについて、トリプタンを有効成分として含有する球脊髄性筋萎縮症治療薬が開示されている。
　一方、Ｓｒｃは、がん原遺伝子として知られており、非受容体体型チロシンキナーゼタンパク質である。１９７０年代に、哺乳動物の遺伝子にもＳｒｃが存在することが発見され、正常細胞が持つＳｒｃ遺伝子の変異が細胞の癌化を引き起こすことが知られるようになった。
　ヒトの腫瘍ではＳｒｃの遺伝子変異はほとんどみられないものの、結腸、肝臓、肺、乳房、膵臓、前立腺、血液などの腫瘍でＳｒｃの活性化がみられ、血管新生、増殖、浸潤経路を促進する。そのＳｒｃの阻害剤は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）や急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の治療剤として開発されている。
　このように、Ｓｒｃは、癌との関係では一般に知られているが、運動ニューロン疾患との関係は知られていない。
国際公開第２００５／０９９７４１号 国際公開第２０１１／０６８２０８号
　前記の通り、運動ニューロン疾患は呼吸不全などにより致命的な経過を辿る難治性疾患である。その分子病態は不明であり、根本的治療法は見出されていない。その一つの要因として、運動ニューロン疾患では様々な分子異常が生じているものの、病態の根幹に寄与する本質的分子メカニズムが明らかになっていないことが考えられる。
　本発明は、運動ニューロン疾患の早期病態に強く寄与する細胞内シグナルを同定し、その異常シグナルを是正する化合物により、運動ニューロン疾患を治療することに関するものである。本発明の具体的な課題としては、例えば、新規な運動ニューロン疾患治療剤を提供することを挙げることができる。
　本発明者らは、Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘマルチプレックスシステムを用いて、運動ニューロン疾患を呈する病態モデルマウスの脊髄および骨格筋の経時的かつ網羅的なシグナル解析を行ったところ、ＳＢＭＡモデルマウスの脊髄において、Ｓｒｃのリン酸化が発症前から発症後期まで一貫して上昇していること、骨格筋においても発症前や発症前期で上昇していること、さらにＳｒｃの下流に存在するＳｔａｔ３のリン酸化が発症前から脊髄や骨格筋で上昇し、ＳｒｃシグナルがＳＢＭＡの病態に大きく関連していることを突き止めた。また、ＡＬＳモデルマウスの脊髄や骨格筋でも発症前にリン酸化の上昇を認めた。こうした知見に基づき、鋭意研究を重ねた結果、Ｓｒｃ阻害薬が運動ニューロン疾患の治療に有効であることを見出し、本発明を完成するに到った。
　本発明として、例えば、下記を挙げることができる。
［１］Ｓｒｃ阻害薬を有効成分として含有することを特徴とする、運動ニューロン疾患治療剤。
［２］運動ニューロン疾患が、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）である、上記［１］に記載の治療剤。
［３］Ｓｒｃ阻害薬が、次の一般式（１）で表される化合物またはその医薬上許容される塩である、上記［１］または［２］に記載の治療剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　式（１）中、Ｒ１は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、置換基を有していてもよいアリール、または置換基を有していてもよいヘテロアリールを表す。Ｒ２は、Ｈを表す。Ｒ３は、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルキルを表す。
　ＸおよびＹは、ＸがＨを表し、Ｙが置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキルを表すか、またはＸとＹとが一緒になって－Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ５）－Ｃ（Ｒ６）＝Ｃ（Ｒ７）－、－Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ５）－Ｎ（Ｒ８）－、または－Ｃ（Ｒ４）＝Ｎ－Ｎ（Ｒ８）－を表す。Ｒ４は、Ｈ、置換基を有していてもよいアリール、または置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキルオキシを表す。Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、同一または異なって、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルコキシを表す。Ｒ８は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、または置換基を有していてもよいシクロアルキルを表す。
［４］Ｓｒｃ阻害薬が、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９、サラカチニブ（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、もしくはダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、またはそれらの医薬上許容される塩である、上記［１］～［３］のいずれか一項に記載の治療剤。
［５］Ｓｒｃ阻害薬をヒトに投与することを含む、運動ニューロン疾患の治療方法。
［６］運動ニューロン疾患が、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ)である、上記［５］に記載の治療方法。
［７］Ｓｒｃ阻害薬が、前記一般式（１）で表される化合物またはその医薬上許容される塩である、上記［５］または［６］に記載の治療方法。
［８］Ｓｒｃ阻害薬が、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９、サラカチニブ（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、もしくはダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、またはそれらの医薬上許容される塩である、上記［５］～［７］のいずれか一項に記載の治療方法。
　本発明によれば、運動ニューロン疾患（特にＳＢＭＡやＡＬＳ）を効果的に治療することができる。
Ａ図は、マウス脊髄を用いたウエスタンブロットによる電気泳動写真である。上３段は発症前（６週齢）の結果を、中３段は発症前期（９週齢）の結果を、下３段は発症後期（１３週齢）の結果を、それぞれ示す。また、各バンドにおいて、左４列は野生型マウスの結果を、右４列はＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。Ｂ図は、Ａ図におけるウエスタンブロットのバンドの定量結果を表す。縦軸は、Ｓｒｃの総タンパク量あたりのＳｒｃのリン酸化タンパク量の比を示す（ｐ－Ｓｒｃ／Ｓｒｃ）。左グラフは発症前（６週齢）の結果を、中グラフは発症前期（９週齢）の結果を、右グラフは発症後期（１３週齢）の結果を、それぞれ示す。各グラフにおいて、左カラムは野生型マウスの結果を、右カラムはＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。Ｃ図は、発症前（６週齢）のＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）におけるリン酸化Ｓｒｃの免疫染色の写真である。左写真は野生型マウスの結果を、右写真はＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。 Ａ図は、マウス骨格筋を用いたウエスタンブロットによる電気泳動写真である。上３段は発症前（６週齢）の結果を、中３段は発症前期（９週齢）の結果を、下３段は発症後期（１３週齢）の結果を、それぞれ示す。また、各バンドにおいて、左４列は野生型マウスの結果を、右４列はＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。Ｂ図は、Ａ図におけるウエスタンブロットのバンドの定量結果を表す。縦軸は、Ｓｒｃの総タンパク量あたりのＳｒｃのリン酸化タンパク量の比を示す（ｐ－Ｓｒｃ／Ｓｒｃ）。左グラフは発症前（６週齢）の結果を、中グラフは発症前期（９週齢）の結果を、右グラフは発症後期（１３週齢）の結果を、それぞれ示す。各グラフにおいて、左カラムは野生型マウスの結果を、右カラムはＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。Ｃ図は、発症前（６週齢）のＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）におけるリン酸化Ｓｒｃの免疫染色の写真である。左写真は野生型マウスの結果を、右写真はＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。
上側の２図は、ＳＢＭＡ細胞モデル（ＮＳＣ３４）を用いたウエスタンブロットによる電気泳動写真である。当該２図において、左４列はコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、右４列はＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。下側のグラフは、上側の２図におけるウエスタンブロットのバンドの定量結果を表す。縦軸は、Ｓｒｃの総タンパク量あたりのＳｒｃのリン酸化タンパク量の比を示す（ｐ－Ｓｒｃ／Ｓｒｃ）。左２カラムはコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、右２カラムはＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。
上側の２図は、ＳＢＭＡ細胞モデル（Ｃ２Ｃ１２）を用いたウエスタンブロットによる電気泳動写真である。当該２図において、中央から左の列はコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、中央から右列はＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。下側のグラフは、上側の２図におけるウエスタンブロットのバンドの定量結果を表す。縦軸は、Ｓｒｃの総タンパク量あたりのＳｒｃのリン酸化タンパク量の比を示す（ｐ－Ｓｒｃ／Ｓｒｃ）。左２カラムは、コントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、右２カラムは、ＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。 ＳＢＭＡ細胞モデル（ＮＳＣ３４）におけるＳｒｃ阻害薬の効果を表す。左端グラフはＳＫＩ－１の結果を、左から２番目のグラフはＰＰ２の結果を、右から２番目のグラフはＡ４１９２５９三塩酸塩の結果を、右端グラフはサラカチニブの結果を、それぞれ示す。各グラフにおいて、縦軸は細胞生存割合を示す。また、各グラフにおいて、左端カラムはコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、真ん中と右カラムはＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。 ＳＢＭＡ細胞モデル（Ｃ２Ｃ１２）におけるＳｒｃ阻害薬の効果を表す。左端グラフはＳＫＩ－１の結果を、左から２番目のグラフはＰＰ２の結果を、右から２番目のグラフはＡ４１９２５９三塩酸塩の結果を、右端グラフはサラカチニブの結果を、それぞれ示す。各グラフにおいて、縦軸は細胞生存割合を示す。また、各グラフにおいて、左端カラムはコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、真ん中と右カラムはＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。
ＳＢＭＡ細胞モデル（ＮＳＣ３４）におけるＳｒｃの一過性強制発現の結果を表す。右側の２図は、ウエスタンブロットによる電気泳動写真である。その中、上側の図はコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、下側の図はＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。左側のグラフは、コントロール細胞モデルとＳＢＭＡ細胞モデルにおけるＳｒｃの一過性強制発現の効果を表す。縦軸は細胞生存割合を示す。また、当該グラフにおいて、左２カラムはコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、右２カラムはＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。 ＳＢＭＡ細胞モデル（Ｃ２Ｃ１２）におけるＳｒｃの一過性強制発現の結果を表す。右側の２図は、ウエスタンブロットによる電気泳動写真である。その中、上側の図はコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、下側の図はＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。左側のグラフは、コントロール細胞モデルとＳＢＭＡ細胞モデルにおけるＳｒｃの一過性強制発現の効果を表す。縦軸は細胞生存割合を示す。また、当該グラフにおいて、左２カラムはコントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）の結果を、右２カラムはＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）の結果を、それぞれ示す。
ウエスタンブロットによる電気泳動写真である。当該バンドにおいて、左３列はＳＢＭＡモデルマウスの脊髄における結果を、右３列はＳＢＭＡモデルマウスの骨格筋における結果を、それぞれ示す。当該２図において、左列（０）はＨ２Ｏ投与群の結果を、中列（Ｂ）は０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのＡ４１９２５９三塩酸塩投与群の結果を、右列（Ａ）は５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのＡ４１９２５９三塩酸塩投与群の結果を、それぞれ示す。 ＳＢＭＡマウスモデルにおけるＳｒｃ阻害薬（Ａ４１９２５９三塩酸塩）の効果を表す。左端グラフは、体重の推移を表す。縦軸は体重（ｇ）を、横軸は時間（週）を、それぞれ示す。左から２つ目のグラフは、握力の推移を表す。縦軸は握力（ｇ）を、横軸は時間（週）を、それぞれ示す。右から２つ目のグラフは、運動機能の推移を表す。縦軸は時間（秒）を、横軸は時間（週）を、それぞれ示す。右端グラフは、累積生存率の推移を表す。横軸は時間（週）を示す。また、各グラフにおいて、淡実線はＳｒｃ阻害薬の投与群（Ｎ＝２１）の結果を、濃実線は対照群（Ｎ＝１９）の結果を、それぞれ示す。
免疫染色の写真である。左側の２写真はＳＢＭＡマウスモデルの対照群の結果を、右側の２写真はＳＢＭＡマウスモデルへのＳｒｃ阻害薬投与群の結果を、それぞれ示す。 ポリグルタミン（１Ｃ２）陽性細胞の増加度合いを表す。右側の４写真は、免疫染色の写真である。当該写真において、左２写真はＳＢＭＡマウスモデルの対照群（脊髄および骨格筋）の結果を、右２写真はＳＢＭＡマウスモデルへのＳｒｃ阻害薬投与群（脊髄および骨格筋）の結果を、それぞれ示す。左側の２つのグラフは、上記免疫染色写真の結果をグラフに表したものである。左グラフは脊髄での結果を、右グラフは骨格筋での結果を、それぞれ示す。各グラフにおいて、縦軸はポリグルタミン（１Ｃ２）陽性細胞の割合（％）を示す。また、各グラフにおいて、左カラムはＳＢＭＡマウスモデルの対照群の結果を、右カラムはＳＢＭＡマウスモデルへのＳｒｃ阻害薬投与群の結果を、それぞれ示す。
　本発明に係る運動ニューロン疾患治療剤（以下、「本発明治療剤」ともいう。）は、Ｓｒｃ阻害薬を有効成分として含有することを特徴とする。
　本発明治療剤が対象とする運動ニューロン疾患は、上位および下位の運動ニューロン疾患であっても、下位運動ニューロンのみの疾患であっても特に制限されない。具体的には、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ)を挙げることができる。本発明治療剤は、特にＳＢＭＡの治療に好ましい。
　本発明治療剤に含まれるＳｒｃ阻害薬としては、Ｓｒｃを効果的に阻害するものであれば特に制限されないが、例えば、前記一般式（１）で表される化合物（以下、「Ｓｒｃ化合物（１）」という。）を挙げることができる。
　ここで、Ｓｒｃ化合物（１）における置換基について、以下に説明する。
　「アリール」としては、例えば、炭素数６～１２の芳香族炭化水素基を挙げることができ、具体的には、フェニル、トリル、キシリル、ナフチルを挙げることができる。「置換基を有していてもよいアリール」における置換基としては、例えば、アルコキシ、ハロゲン、フェノキシの他、２価の基であるメチレンジオキシ、エチレンジオキシ等であって、アリール上の隣接する２つの炭素原子に置換されるものを挙げることができる。これらが任意の位置に１以上置換されうる。置換アリール基の具体例としては、５－クロロ－２，３－ベンゾジオキソール－４－イルが挙げられる。
　「ヘテロアリール」としては、例えば、炭素数３～１０、酸素原子０～１、硫黄原子０～１、窒素原子０～２で構成されるものを挙げることができ、具体的には、例えば、２－ピリジル、２－フリル、１，３－チアゾール－２－イルを挙げることができる。「置換基を有していてもよいヘテロアリール」における置換基としては、上記「置換基を有していてもよいアリール」における置換基と同様のものが挙げられ、より具体的には、例えば、Ｎ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－１，３－チアゾール－５－カルボキサミド－２－イルが挙げられる。
　「アルキル」としては、例えば、炭素数１～４の直鎖状または分岐鎖状のアルキルを挙げることができ、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、プロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチルを挙げることができる。「置換基を有していてもよいアルキル」の置換基としては、例えば、水酸基、アルコキシ、ハロゲン原子等が挙げられる。
　「シクロアルキル」としては、例えば、炭素数３～８のシクロアルキルを挙げることができ、具体的には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルを挙げることができる。「置換基を有していてもよいシクロアルキル」における置換基としては、例えば、アルキル、ピペリジル、ピペラジニル、４－メチル－１－ピペラジニルを挙げることができる。これらが任意の位置に１以上置換されうる。
　「ヘテロシクロアルキル」としては、例えば、炭素数３～８のシクロアルキルの構成炭素原子の１以上が窒素、酸素または硫黄のようなヘテロ原子に置き換わったものを挙げることができる。具体的には、例えば、テトラヒドロフラニル、オキサニル、オキソラニル、モルホリニル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル、ピペラジニルを挙げることができる。「置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキル」の置換基としては、例えば、アルキルが挙げられ、当該アルキルは水酸基、ハロゲン原子等で置換されていてもよい。
　「ヘテロシクロアルキルオキシ」は、酸素原子の１つの結合手に上記ヘテロシクロアルキルが結合した基を表し、「置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキルオキシ」における置換基としては、例えば、アルキル、アルコキシを挙げることができる。
　「アルコキシ」としては、例えば、炭素数１～４の直鎖状または分岐鎖状のアルキルを挙げることができ、具体的には、メトキシ、エトキシ、プロポキシを挙げることができる。「置換基を有していてもよいアルコキシ」における置換基としては、例えば、４－メチル－１－ピペラジニルを挙げることができる。これらが任意の位置に１以上置換されうる。
　「ハロゲン」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を挙げることができる。
　より具体的なＳｒｃ化合物（１）としては、例えば、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９、サラカチニブ（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、ダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）を挙げることができる。これらは、いずれもＳｒｃ阻害作用を有することが知られている公知化合物であり、それぞれ下記のような構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　Ｓｒｃ化合物（１）には、立体異性体や光学異性体が存在しうる。
　また、Ｓｒｃ化合物（１）の医薬上許容される塩としては、医薬上許容されるものであれば特に制限されないが、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などの無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、安息香酸塩、フタル酸塩、アスコルビン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などの有機酸塩を挙げることができる。当該医薬上許容される塩には、水和物や溶媒和物も含まれる。これらの塩も含めて、以下、Ｓｒｃ化合物（１）ともいう。
　Ｓｒｃ化合物（１）およびその医薬上許容される塩は、それ自身公知の化合物を出発原料として、常法により製造することができる。また、Ｓｒｃ化合物（１）によっては、試薬メーカー等から購入することもできる。
　本発明治療剤は、例えば、用いるＳｒｃ阻害薬を、そのまま又は医薬上許容される無毒性かつ不活性な担体中に、０．０１～９９．５重量％の範囲内で、好ましくは０．５～９０重量％の範囲内で配合することによって製造することができる。
　上記担体として、固形、半固形又は液状の希釈剤、充填剤、その他の処方用の助剤を挙げることができる。これらを一種又は二種以上用いることができる。
　本発明治療剤の剤型としては、用いるＳｒｃ阻害薬などによって異なるが、例えば、固形又は液状の用量単位で、末剤、カプセル剤、錠剤、糖衣剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、トローチ剤等の経口投与製剤、注射剤、点滴製剤、坐剤等の非経口投与製剤のいずれの形態をもとることができる。徐放性製剤であってもよい。注射剤は、用時調製の注射用キットないし点滴用キットであってもよい。
　末剤は、Ｓｒｃ阻害薬を適当な細かさにすることにより製造することができる。
　散剤は、Ｓｒｃ阻害薬を適当な細かさにし、次いで同様に細かくした医薬用担体、例えば、澱粉、マンニトールのような可食性炭水化物と混合することにより製造することができる。任意に風味剤、保存剤、分散剤、着色剤、香料等を添加することができる。
　カプセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように顆粒化したものを、例えば、ゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の中へ充填することにより製造することができる。滑沢剤や流動化剤、例えば、コロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレングリコールを粉末状のものに混合し、その後充填操作を行うことにより製造することもできる。崩壊剤や可溶化剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムを添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。また、Ｓｒｃ阻害薬の微粉末を植物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることもできる。
　錠剤は、賦形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し、次いで崩壊剤又は滑沢剤を加えた後、打錠することにより製造することができる。
　粉末混合物は、適当に粉末化された物質を上述の希釈剤やベースと混合することにより製造することができる。必要に応じて、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール）、溶解遅延化剤（例えば、パラフィン）、再吸収剤（例えば、四級塩）、吸着剤（例えばベントナイト、カオリン）等を添加することができる。
　粉末混合物は、まず結合剤、例えば、シロップ、澱粉糊、アラビアゴム、セルロース溶液又は高分子物質溶液で湿らせ、攪拌混合し、これを乾燥、粉砕して顆粒とすることができる。このように粉末を顆粒化する代わりに、まず打錠機にかけた後、得られる不完全な形態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。このようにして作られる顆粒に、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイル等を添加することにより、互いに付着することを防ぐことができる。
　また、錠剤は、上述のように顆粒化やスラグ化の工程を経ることなく、Ｓｒｃ阻害薬を流動性の不活性担体と混合した後に直接打錠することによっても製造することができる。
　こうして製造された錠剤にフィルムコーティングや糖衣を施すことができる。シェラックの密閉被膜からなる透明又は半透明の保護被覆、糖や高分子材料の被覆及びワックスよりなる磨上被覆をも用いることができる。
　他の経口投与製剤、例えば、液剤、シロップ剤、トローチ剤、エリキシル剤もまたその一定量がＳｒｃ阻害薬の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。
　シロップ剤は、Ｓｒｃ阻害薬を適当な香味水溶液に溶解して製造することができる。エリキシル剤は、非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造することができる。
　懸濁剤は、Ｓｒｃ阻害薬等を非毒性担体中に分散させることにより製造することができる。必要に応じて、可溶化剤や乳化剤（例えば、エトキシ化されたイソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風味付与剤（例えば、ペパーミント油、サッカリン）等を添加することができる。
　必要であれば、経口投与のための用量単位処方をマイクロカプセル化することができる。当該処方はまた、被覆をしたり、高分子・ワックス等中に埋め込んだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。
　非経口投与製剤は、皮下・筋肉又は静脈内注射用とした液状用量単位形態、例えば、溶液や懸濁液の形態をとることができる。当該非経口投与製剤は、Ｓｒｃ阻害薬の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば、水性や油性の媒体に懸濁し又は溶解し、次いで当該懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造することができる。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加することができる。また、安定剤、保存剤、乳化剤等を添加することもできる。同様に点滴製剤とすることもできる。
　坐剤は、Ｓｒｃ阻害薬を低融点の水に可溶又は不溶の固体、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、半合成の油脂［例えば、ウイテプゾール（登録商標）］、高級エステル類（例えば、パルミチン酸ミリスチルエステル）又はそれらの混合物に溶解又は懸濁させて製造することができる。
　本発明治療剤におけるＳｒｃ阻害薬の投与量は、Ｓｒｃ阻害薬の種類、疾患ないし障害の種類、体重、年齢等の患者の状態、剤形、投与方法、投与経路、症状の程度等によって異なる。一般には成人（体重６０ｋｇ）に対して、Ｓｒｃ阻害薬の用量として、１日当たり０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内が適当であり、０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲内が好ましく、１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇの範囲内がより好ましい。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とするときもある。
　本発明治療剤の投与方法としては、例えば、経口投与、静脈内投与、門脈内投与、皮下投与、点滴投与、局所投与（例、経粘膜投与、経鼻投与、吸入投与、経皮投与）を挙げることができる。投与回数は、有効成分の種類や用量、剤形、患者の状態等によって異なるが、例えば、１日１回～数回又は１日～数日間の間隔で投与することができる。
　本発明治療剤は、運動ニューロン疾患を予防するため、あるいは緩和、改善するためなどに用いることもできる。それ故、本発明に係る「治療剤」には、「予防剤」や「改善剤」等としての概念も含まれる。
　また、本発明には、Ｓｒｃ阻害薬をヒトに投与することを含む、運動ニューロン疾患の治療方法（以下、「本発明治療方法」という。）も含まれる。
　本発明治療方法において、Ｓｒｃ治療薬は、用いるＳｒｃ治療薬の種類などによっても異なるが、適当な剤型に調製してヒトに投与することができる。その投与量ないし用法用量、投与方法などは、前記したものを挙げることができる。
　次に試験例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はそれら試験例に限定されるものではない。
［試験例１］脊髄・骨格筋におけるＳｒｃシグナル上昇の確認
（１）実験方法
　ＳＢＭＡのマウスモデルであるヒト変異ＡＲ（アンドロゲン受容体）トランスジェニックマウス（ＡＲ－９７Ｑ）と、ＡＬＳのマウスモデルである変異ＳＯＤ１トランスジェニックマウス（Ｇ９３Ａ）について、これらのモデルマウスの主として３つの病期（発症前、発症前期、発症後期）における脊髄と骨格筋とから抽出したタンパク質サンプルを用い、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ　Ｐｒｏ　Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ａｓｓａｙ（Ｂｉｏ－ｒａｄ社製）を行った。ＳＢＭＡマウスモデル（ＡＲ－９７Ｑ）は、「Ｋａｔｓｕｎｏ，ｅｔ　ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．２００２」の記載に基づき、ヒト変異ＡＲをＢＤＦ１マウスの受精卵にマイクロインジェクションすることにより作成した。ＳＯＤ１トランスジェニックマウス（Ｇ９３Ａ）は、Ｔｈｅ　Ｊａｃｋｓｏｎ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｎｏ．００２７２６）より購入した。抗体ビーズの種類は、ＧＡＰＤＨ対照酵素を含めて１８種類準備した。脊髄と骨格筋はマウスから採取後直ちにドライアイスで冷却したアセトンにより凍結し、サンプル調製やアッセイのプロトコールはメーカーのものに従った。全ての反応が終了した後、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００　ｘＰＯＮＥＴ（登録商標）３．１システム（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で蛍光強度を測定した。
（２）結果
　ＳＢＭＡマウスモデル（ＡＲ－９７Ｑ）の脊髄において、Ｓｒｃは、野生型マウスと比較して発症前（６週齢）から発症後期（１３週齢）まで一貫して有意差をもち上昇していた。またＳｒｃは骨格筋においても発症前にリン酸化が上昇していた。さらにＳｒｃの下流に存在するＳｔａｔ３も脊髄と骨格筋で発症前にリン酸化が有意に上昇していた。ＳＯＤ１マウス（Ｇ９３Ａ）の脊髄と骨格筋においても、コントロールと比較して有意ではないもののＳｒｃのリン酸化が１．２倍以上上昇していた。
（３）発症前にＳＢＭＡマウスモデルとＡＬＳマウスモデルの脊髄と骨格筋でＳｒｃのリン酸化が上昇しており、Ｓｒｃシグナルが両疾患に共通する早期病態シグナルである可能性が示された。
［試験例２］脊髄・骨格筋におけるＳｒｃリン酸化の検討
（１）方法
１．ウエスタンブロット
　６週齢、９週齢、１３週齢のＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）から採取し凍結した脊髄と骨格筋を、バッファー（５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ　８．０）、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、１％　Ｎｏｎｉｄｅｔ　Ｐ－４０、０．５％　ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、０．１％　ＳＤＳ、１ｍＭ　２－ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ、Ｈａｌｔ　Ｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｎｄ　Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ））を用いてホモジナイズした。その後超音波処理を行い、２５００×ｇで１５分間遠心した。上清を回収し、ＤＣＴＭ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓｓａｙ　ｒｅｇｅｎｔ（Ｂｉｏ－ｒａｄ社製）を用いてタンパク濃度を測定した。タンパク濃度を調整した上で試料用緩衝液（２ＭＥ＋）（Ｗａｋｏ社製）と混合し、９５℃で５分間ｄｅｎａｔｕｒｅした。サンプルを各々同量ずつゲル（ＳｕｐｅｒＳｅｐＴＭＡｃｅ，５－２０％，１７ｗｅｌｌ（Ｗａｋｏ社製））にアプライし、イージーセパレーターＴＭ（Ｗａｋｏ社製）で２００Ｖ、７０分間電気泳動を行った。その結果を図１（Ａ）（脊髄）、図２（Ａ）（骨格筋）に示す。
　その後、タンク式ブロッティング装置（Ｂｉｏ－ｒａｄ社製）によりＩｍｍｏｂｉｌｏｎ－Ｐ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ転写した。２％アルブミン溶液で１時間撹拌しブロッキングを行い、一次抗体としてｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｒｃ　Ｆａｍｉｌｙ（Ｔｙｒ４１６）抗体（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃２１２３、１：１０００）、Ｓｒｃ抗体（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃２１２３、１：１０００）、ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）抗体（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＭＡＢ３７４、１：２０００）を用いた。二次抗体はＥＣＬＴＭ　Ｒａｂｂｉｔ　ＩｇＧ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製、ＮＡ９３４０）もしくはＥＣＬＴＭ　Ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製、ＮＡ９３１０）を用い、ＥＣＬＴＭ　Ｐｒｉｍｅ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製、ＲＰＮ２２３２）によりシグナルを増強させ、ＬＡＳ－３０００　ｉｍａｇｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（富士フィルム社製）で検出した。その後ＩＭＡＧＥ　ＧＡＵＧＥ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｖｅｒｓｉｏｎ　４．２２　（富士フィルム社製）でｂａｎｄの定量を行い、ＳＰＳＳ　Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　２４（ＩＢＭ社製）で統計解析した。その結果を図１（Ｂ）（脊髄）、図２（Ｂ）（骨格筋）に示す。
２．免疫染色
　６週齢のＳＢＭＡモデルマウス（ＡＲ－９７Ｑ）から脊髄と骨格筋を採取後、１０％中性緩衝ホルマリン液で後固定しパラフィンで包埋した。脊髄の染色にはｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｒｃ抗体（ｓａｎｔａ　ｃｒｕｚ社製、ｓｃ－１０１８０２、１：５００）、骨格筋の染色にはｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｒｃ抗体（Ａｂｃａｍ社製、ａｂ４７４１１、１：１０００）を用いた。二次抗体はＤａｋｏ　Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋　Ｓｙｓｔｅｍ－　ＨＲＰ　Ｌａｂｅｌｌｅｄ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ａｎｔｉ－Ｒａｂｂｉｔ（Ｄａｋｏ社製、Ｋ４００３）を使用し、ＤＡＢ＋　Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（Ｄａｋｏ社製、Ｋ３４６８）で発色した。その結果を図１（Ｃ）（脊髄）、図２（Ｃ）（骨格筋）に示す。
（２）結果
　図１（Ａ）および図１（Ｂ）に示した通り、ウエスタンブロットによる脊髄の解析では、ＳＢＭＡマウスモデルの脊髄で６週齢、９週齢、１３週齢とも野生型マウスと比較してＳｒｃのリン酸化が上昇していた。なお、リン酸化タンパク量は、ウエスタンブロットの総タンパク量あたりのリン酸化タンパク量の比により評価した。
　また、図１（Ｃ）に示した通り、リン酸化Ｓｒｃの免疫染色では、６週齢のＳＢＭＡマウスモデル（ＡＲ－９７Ｑ）の脊髄ではコントロール（Ｗｔ）と比較して、運動ニューロンの細胞質にリン酸化Ｓｒｃの発現がより強かった。
　図２（Ａ）および図２（Ｂ）に示した通り、ウエスタンブロットによる骨格筋の解析では、６週齢、９週齢で野生型マウスと比較してＳｒｃのリン酸化が上昇し、１３週齢では低下していた。また、図２（Ｃ）に示した通り、リン酸化Ｓｒｃの免疫染色では、６週齢のＳＢＭＡマウスモデル（ＡＲ－９７Ｑ）の骨格筋ではコントロール（Ｗｔ）と比較して、骨格筋の細胞質にリン酸化Ｓｒｃの発現がより強かった。
（３）ウエスタンブロットと免疫染色の結果は、試験例１に係るＢｉｏ－ｐｌｅｘ　Ｐｒｏ　Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ａｓｓａｙの結果と同様であり、リン酸化ＳｒｃはＳＢＭＡマウスモデルの脊髄と骨格筋において発症前から上昇していることが確認された。
［試験例３］神経幹細胞および筋芽細胞におけるＳｒｃリン酸化の検討
（１）実験方法
　マウス神経幹細胞であるＮＳＣとマウス筋芽細胞であるＣ２Ｃ１２に、２４個もしくは９７個のＣＡＧ繰り返し配列を有するｆｕｌｌ　ｌｅｎｇｔｈ　アンドロゲン（ＡＲ）（ＡＲ－２４ＱまたはＡＲ－９７Ｑ）をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いてトランスフェクションした。ＡＲ－９７ＱはＳＢＭＡ細胞モデル、ＡＲ－２４Ｑはコントロール細胞モデルとして用いた。プロトコールはメーカーのものに従った。トランスフェクションの翌日に、各細胞の培養液中にＧ４１８　ｄｉｓｕｌｆａｔｅ　ｓａｌｔ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｉｇｍａ社製、Ｇ８１６８）が４００μｇ／ｍＬになるように添加し、５日～７日毎に継代を繰り返し、単一細胞のコロニーを複数ピックアップした。それぞれのコロニーをＤ－ＭＥＭで培養後、最終濃度１０ｎＭの５α－Ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＤＨＴ）（Ｓｉｇｍａ社製）を添加し、２４時間後に細胞を回収した。ウエスタンブロットによりｆｕｌｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ＡＲの発現量やＤＨＴに対する反応を確認して安定発現株を作成した。
　これらのＳＢＭＡ細胞モデルとコントロール細胞モデルを、ＮＳＣ３４は２．０×１０５個／ｍＬ、Ｃ２Ｃ１２は１．５×１０５個／ｍＬの濃度に調整し、１０％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地を用いて２４ウエルプレートに播種した。翌日にＮＳＣ３４は１％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地に、Ｃ２Ｃ１２は２％馬血清添加Ｄ－ＭＥＭ培地に交換し４８時間培養した。１０ｎＭのＤＨＴ（コントロールにはエタノールを使用した）を添加しさらに２４時間培養後、細胞を回収しウエスタンブロットを行った。一次抗体としてｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｒｃ　Ｆａｍｉｌｙ抗体（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃２１２３、１：１０００）、Ｓｒｃ抗体（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃２１２３、１：１０００）、ＧＡＰＤＨ抗体（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＭＡＢ３７４、１：２０００）を用いた。その結果を図３および図４に示す。
（２）結果
　図３および図４に示した通り、ＮＳＣ３４とＣ２Ｃ１２共に、コントロール細胞モデル（ＡＲ－２４Ｑ）と比較してＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）においてリン酸化Ｓｒｃの発現が上昇し、ＳＢＭＡ細胞モデル（ＡＲ－９７Ｑ）にＤＨＴを添加するとリン酸化Ｓｒｃはさらに上昇した。
（３）ＳＢＭＡ細胞モデルではコントロール細胞モデルと比較してリン酸化Ｓｒｃが上昇しており、ＳＢＭＡマウスモデルにおける変化（野生型マウスと比較してリン酸化Ｓｒｃが上昇）と同様であった。
［試験例４］ＳＢＭＡ細胞モデルにおけるＳｒｃ阻害薬の効果検証
（１）実験方法
　ＮＳＣ３４（ＡＲ－２４Ｑ、ＡＲ－９７Ｑ）は２．０×１０５個／ｍＬの濃度に、Ｃ２Ｃ１２（ＡＲ－２４Ｑ、ＡＲ－９７Ｑ）は１．５×１０５個／ｍＬの濃度に、それぞれ調整し、１０％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地を用いて２４ウエルプレートに播種した。翌日、ＮＳＣ３４は１％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地に、Ｃ２Ｃ１２は２％馬血清添加Ｄ－ＭＥＭ培地に交換し分化を４８時間行った。Ｓｒｃ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＳＫＩ）であるＳＫＩ－１（Ａｂｃａｍｓ社製、ａｂ１２０８３９）、ＰＰ２（Ｃａｙｍａｎ社製、１３１９８）、Ａ４１９２５９三塩酸塩（Ｔｏｃｒｉｓ社製、３９１４）、またはＳａｒａｃａｔｉｎｉｂ（ＣｈｅｍＳｃｅｎｅ社、３７９２３１－０４－６）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ社製）で溶解して０．１ｍＭに調整し、Ｄ－ＭＥＭ培地５００μＬに対して１μＬの薬剤を投与して、最終濃度０．２μＭになるようにＳＢＭＡ細胞モデルに投与した。コントロール細胞モデルとＳＢＭＡ細胞モデルを用いた対照群にはＤ－ＭＥＭ培地５００μＬに対してＤＭＳＯを１μＬ投与した。さらにＤＨＴを最終濃度が１０ｎＭになるように添加し、２４時間培養した。Ｃｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｉｎｇ　Ｋｉｔ－８（同仁科学研究所社製）を各ウエルに５０μＬ滴下混合し、４時間３７℃下で培養した後、マルチモードプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）により吸光度測定した。プロトコールはメーカーのものに従った。その結果を図５および図６に示す。
（２）結果
　図５、図６に示した通り、いずれのＳｒｃ阻害薬も、ＳＢＭＡ細胞モデル（神経・筋）の生存率を有意に改善した。従って、ＳＢＭＡ細胞モデルにおいて、Ｓｒｃシグナル阻害は細胞活性を改善させることが明らかである。
［試験例５］ＳＢＭＡ細胞モデルにおけるＳｒｃの一過性強制発現
（１）実験方法
　ＮＳＣ３４（ＡＲ－２４Ｑ、ＡＲ－９７Ｑ）は２．０×１０５個／ｍＬの濃度に、Ｃ２Ｃ１２（ＡＲ－２４Ｑ、ＡＲ－９７Ｑ）は１．５×１０５個／ｍＬの濃度に、それぞれ調整し、１０％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地を用いて２４ウエルプレートに播種した。翌日にｐｃＤＮＡ３　ｃ－ＳＲＣ（Ａｄｄｇｅｎｅ社製　＃４２２０６）をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いてトランスフェクションした。プロトコールはメーカーのものに従った。４時間後、ＮＳＣ３４は１％ＦＣＳ添加Ｄ－ＭＥＭ培地に、Ｃ２Ｃ１２は２％馬血清添加Ｄ－ＭＥＭ培地に交換した。２４時間分化後、ＤＨＴを最終濃度が１０ｎＭになるように添加し、さらに２４時間分化させた。そこでＣｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｉｎｇ　Ｋｉｔ－８（同仁科学研究所社製）を各ウエルに５０μＬ滴下混合し、４時間３７℃下で培養した後、マルチモードプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）にて吸光度を測定した。また同条件において細胞を回収してウエスタンブロットを行い、リン酸化Ｓｒｃの発現量を確認した。その結果を図７および図８に示す。
（２）結果
　図７、図８に示した通り、ＡＲ－２４ＱおよびＡＲ－９７Ｑにおいて、ＮＳＣ３４とＣ２Ｃ１２ともＳｒｃを一過性強制発現させると、Ｓｒｃとリン酸化Ｓｒｃの発現量は上昇し、細胞活性は有意に低下した。従って、ＳＢＭＡ細胞モデル（神経・筋）において、Ｓｒｃシグナル活性化は細胞死を引き起こすことが明らかである。
［試験例６］ＳＢＭＡマウスモデルにおけるＳｒｃ阻害薬の効果検証１
（１）実験方法
　Ｓｒｃ阻害薬の一つであるＡ４１９２５９三塩酸塩１０ｍｇを１５４０μＬの水に溶解し１０ｍＭに調整した。Ａ：５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙもしくはＢ：０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを一匹当たり３００μＬずつ腹腔内投与するようにさらに水で希釈した。６週齢のＳＢＭＡマウスモデルに対して一日おきに計３回腹腔内投与し、最終日の投与４時間後に解剖して脊髄と骨格筋を採取した。リン酸化ＳｒｃとＳｒｃの他に、生存シグナルの代表的分子であるｐ－ｐ４２ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃４３７０）、ｐ４２ＭＡＰＫ（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃４６９５）、ｐ－ｐ３８ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃４５１１）、ｐ３８ＭＡＰＫ（Ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、＃９２１２）の発現量もウエスタンブロットにより確認した。その結果を図９に示す。
（２）結果
　図９に示した通り、ＳＢＭＡマウスモデルの脊髄と骨格筋とも、Ｓｒｃ阻害薬であるＡ４１９２５９三塩酸塩の投与により、濃度依存的にリン酸化Ｓｒｃの発現量が低下した。一方、ｐ４２ＭＡＰＫ、ｐ３８ＭＡＰＫのリン酸化レベルと総タンパク量は変化しなかった。従って、Ａ４１９２５９三塩酸塩は、ＳＢＭＡモデルマウスの骨格筋だけでなく、脳血液関門を通過して脊髄にも到達しＳｒｃシグナルを阻害することが明らかである。
［試験例７］ＳＢＭＡマウスモデルにおけるＳｒｃ阻害薬の効果検証２
（１）実験方法
　Ａ４１９２５９三塩酸塩を６週齢のＳＢＭＡマウスモデルに対して０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙずつ３日に一回腹腔内投与し、対照群（溶媒である水を腹腔内投与、Ｎ＝１９）とＡ４１９２５９三塩酸塩投与群（Ｎ＝２１）で、体重・握力・Ｒｏｔａｒｏｄ試験・生存率を比較した。握力（Ｇｒｉｐ）は斉藤式マウス用握力測定装置（ＭＵＲＯＭＡＣＨＩ社製）を用いて測定した。運動機能（Ｒｏｔａｒｏｄ試験）は、Ｅｃｏｎｏｍｅｘ　ｒｏｔａｒｏｄ　（Ｃｏｌｏｍｂｕｓ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）を用いて、回転（１６／分）するロッド上に各マウスを３分間乗せ落下するまでの時間を測定した。体重、握力、運動機能については１３週齢においてＳＰＳＳ　Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　２４を用いてｔ検定を行った。また、各群のマウスの生存率をＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒを用いてデータ解析した。その結果を図１０に示す。
（２）結果
　図１０に示した通り、体重、握力、運動機能、生存率の各評価において、Ｓｒｃ阻害薬であるＡ４１９２５９三塩酸塩の投与により有意な改善効果を示した。従って、ＳＢＭＡマウスモデルにおいて、Ｓｒｃシグナル阻害は表現型を改善させることが明らかである。
［試験例８］ＳＢＭＡマウスモデルにおけるＳｒｃ阻害薬の効果検証３
（１）実験方法
　ＳＢＭＡマウスモデルに６週齢からＡ４１９２５９三塩酸塩を投与し、１３週齢で解剖を行った。薄切した脊髄のパラフィン切片を電子レンジで賦活化し、Ａｎｔｉ－Ｃｈｏｌｉｎｅ　Ａｃｅｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＣｈＡＴ）（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＡＢ１４４Ｐ、１：２０００）で免疫染色した。ＨＥ染色は骨格筋の凍結切片を準備し型通り行った。その結果を図１１に示す。
（２）結果
　図１１に示した通り、運動ニューロンサイズ（ＣｈＡＴ染色）、筋線維（ＨＥ染色）の大きさはＡ４１９２５９三塩酸塩の投与により改善した。従って、Ｓｒｃ阻害薬であるＡ４１９２５９三塩酸塩はＳＢＭＡモデルマウスの運動ニューロンと骨格筋の萎縮を改善させることが明らかである。
［試験例９］ＳＢＭＡマウスモデルにおけるＳｒｃ阻害薬の効果検証４
（１）実験方法
　ＳＢＭＡマウスモデルに６週齢からＡ４１９２５９三塩酸塩を投与し、１３週齢で解剖を行った。脊髄と骨格筋の薄切検体をギ酸で賦活化し、Ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｎｅ（１Ｃ２）（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＭＡＢ１５７４、１：２００００）で染色した。脊髄のポリグルタミン（１Ｃ２）陽性細胞については、各群３匹ずつ１０切片における前角の運動ニューロンを対象にして陽性細胞の割合を計算した。骨格筋については、各群３匹ずつ１０切片における５００線維以上の骨格筋の核を対象にして陽性細胞の割合を計算し、ＳＰＳＳ　Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　２４を用いてｔ検定を行った。その結果を図１２に示す。
（２）結果
　図１２に示した通り、１Ｃ２陽性細胞は、脊髄と骨格筋とも治療前後で変化はなかった。従って、Ｓｒｃ阻害薬であるＡ４１９２５９三塩酸塩の作用点はポリグルタミンの凝集を減らすことではなく、ポリグルタミン凝集の下流であると考えられる。
　本発明治療剤は、ＳＢＭＡやＡＬＳ、ＳＭＡなどの運動ニューロン疾患を治療など行う場合に有用であるから、例えば医薬品産業において利用可能性がある。

Claims (8)

  1. Ｓｒｃ阻害薬を有効成分として含有することを特徴とする、運動ニューロン疾患治療剤。
  2. 運動ニューロン疾患が、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ)である、請求項１に記載の治療剤。
  3. Ｓｒｃ阻害薬が、次の一般式（１）で表される化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項１または２に記載の治療剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     　式（１）中、Ｒ１は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、置換基を有していてもよいアリール、または置換基を有していてもよいヘテロアリールを表す。Ｒ２は、Ｈを表す。Ｒ３は、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルキルを表す。
    　ＸおよびＹは、ＸがＨを表し、Ｙが置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキルを表すか、またはＸとＹとが一緒になって－Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ５）－Ｃ（Ｒ６）＝Ｃ（Ｒ７）－、－Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ５）－Ｎ（Ｒ８）－、または－Ｃ（Ｒ４）＝Ｎ－Ｎ（Ｒ８）－を表す。Ｒ４は、Ｈ、置換基を有していてもよいアリール、または置換基を有していてもよいヘテロシクロアルキルオキシを表す。Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、同一または異なって、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルコキシを表す。Ｒ８は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、または置換基を有していてもよいシクロアルキルを表す。
  4. Ｓｒｃ阻害薬が、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９、サラカチニブ（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、もしくはダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、またはそれらの医薬上許容される塩である、請求項１～３のいずれか一項に記載の治療剤。
  5. Ｓｒｃ阻害薬をヒトに投与することを含む、運動ニューロン疾患の治療方法。
  6. 運動ニューロン疾患が、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または脊髄性筋萎縮症(ＳＭＡ)である、請求項５に記載の治療方法。
  7. Ｓｒｃ阻害薬が、前記一般式（１）で表される化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項５または６に記載の治療方法。
  8. Ｓｒｃ阻害薬が、ＳＫＩ－１、ＰＰ２、Ａ４１９２５９、サラカチニブ（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、もしくはダサチニブ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、またはそれらの医薬上許容される塩である、請求項５～７のいずれか一項に記載の治療方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020058072A1 (en) * 2018-09-18 2020-03-26 Société des Produits Nestlé S.A. Src inhibitor compounds for skeletal muscle modulation, methods and uses thereof
WO2022230851A1 (ja) * 2021-04-30 2022-11-03 国立大学法人東海国立大学機構 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015070071A2 (en) * 2013-11-08 2015-05-14 President And Fellows Of Harvard College Methods for promoting motor neuron survival

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015070071A2 (en) * 2013-11-08 2015-05-14 President And Fellows Of Harvard College Methods for promoting motor neuron survival

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BEAU, J. M. L. ET AL.: "Increased Expression of pp60c-src Protein-Tyrosine Kinase During Peripheral Nerve Regeneration", JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH, vol. 28, 1991, pages 299 - 309, XP055692695 *
IMAMURA, K. ET AL.: "The Src/c-Abl pathway is a potential therapeutic target in amyotrophic lateral sclerosis", SCIENCE TRANSLATIONAL MEDICINE, vol. 9, no. eaaf3962, May 2017 (2017-05-01), pages 1 - 10, XP055618416, DOI: 10.1126/scitranslmed.aaf3962 *
IMAMURA, KEIKO ET AL.: "Src/c-Abl pathway on ALS treatment", CLINICAL IMMUNOLOGY & ALLERGOLOGY, vol. 69, no. 3, 25 March 2018 (2018-03-25), pages 303 - 306, ISSN: 1881-1930 *
KATSUMATA, R. ET AL.: "c-Abl Inhibition Delays Motor Neuron Degeneration in the G93A Mouse , an Animal Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis", PLOS ONE, vol. 7, no. 9, e46185, 2012, pages 1 - 14, XP055370442 *
KIRIS, E. ET AL.: "Src Familiy Kinase Inhibitors Antagonize the Toxicity of Multiple Serotypes of Botulinum Neurotoxin in Human Embryonic Stem Cell -Derived Motor Neurons", NEUROTOXICITY RESEARCH, vol. 27, 2015, pages 384 - 398, XP035445550, DOI: 10.1007/s12640-015-9526-z *
MAKHORTOVA, N. R. ET AL.: "A screen for regulators of survival of motor neuron protein levels", NATURE CHEMICAL BIOLOGY, vol. 7, no. 8, 2011, pages 544 - 552, XP055161041, DOI: 10.1038/nchembio.595 *
TRIEU, V. N. ET AL.: "A Specific Inhibitor of Janus Kinase-3 Increases Survival in a Transgenic Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis", BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, vol. 267, 2000, pages 22 - 25, XP001018912, DOI: 10.1006/bbrc.1999.1905 *
vol. 33, 30 October 2017 (2017-10-30), pages 3 - 7 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020058072A1 (en) * 2018-09-18 2020-03-26 Société des Produits Nestlé S.A. Src inhibitor compounds for skeletal muscle modulation, methods and uses thereof
WO2022230851A1 (ja) * 2021-04-30 2022-11-03 国立大学法人東海国立大学機構 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤

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